Изменение колонизационной резистентности кишечника при дисбактериозах, обусловленных антибиотиками широкого спектра действия

Голошва, Елена Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изменение колонизационной резистентности кишечника при дисбактериозах, обусловленных антибиотиками широкого спектра действия
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Изменение колонизационной резистентности кишечника при дисбактериозах, обусловленных антибиотиками широкого спектра действия"

На правахрукописи

Голошва Елена Владимировна

Изменение колонизационной резистентности кишечника при дисбактериозах, обусловленных антибиотиками широкого спектра действия.

03.00.07. - Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ростов-на-Дону 2005

Работа выполнена в Федеральном Государственном Учреждении «Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека» (ФГУ РНИИМП)

Научный руководитель: доктор медицинских наук, доцент

Терновская Лариса Николаевна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Васильева Лариса Ивановна

кандидат биологических наук, доцент Полякова Анна Владимировна

Ведущая организация:

Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт

оО

я Л 2005г. в &

Защита состоится 2005г. В Г" часов на заседании

диссертационного совета КР 208.082.03 при Ростовском государственном медицинском университете (344022 г.Ростов-на-Дону, Нахичеванский пер., 29).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского государственного медицинского университета

Автореферат разослан

2005г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, доцент Гасретова Татьяна Дмитриевна

Общая характеристика работы.

Актуальность исследования. Дисбактериозы остаются актуальной проблемой здравоохранения. Микроэкологические изменения в микрофлоре кишечника регистрируются практически у 90% населения нашей страны (А.А. Воробьев с соавт., 1997). Накопленные знания позволяют считать микрофлору организма человека экстракорпоральным органом, выполняющим многообразные функции по поддержанию нормального гомеостаза (Б.А. Шендеров, 1998). Изменения в составе нормальной микрофлоры ведут к развитию процессов, сказывающихся на состоянии здоровья людей (И.Н. Блохина, 1979; Н.Н. Лизько, 1987; Е.М Горская с соавт., 1992; А.А. Ленцнер, 1996; О.В. Бухарин, 1996; Б.А. Шендеров, 1996, 1998; В.М. Бондаренко с соавт., 2003).

Одной из важнейших функций нормальной микрофлоры является обеспечение колонизационной резистентности. Под колонизационной резистентностью понимают совокупность механизмов, придающих стабильность нормальной микрофлоре, предотвращающих заселение организма хозяина посторонними микроорганизмами (Б.А. Шендеров, 1988; О.В. Бухарин с соавт., 1996; АА. Воробьев с соавт, 1997; В.М. Бондареню с соавт., 2003). Снижение колонизационной резистентности, обусловленное различными причинами, приводит к значительному снижению противоинфекшюнной защиты организма, увеличению численности условно-патогенных микробов, их транслокации из мест первичной локализации с возможным развитием воспалительных заболеваний (В.Г. Петровская, 1982; К.Х. Алмагамбетов с соавт., 1991; В.М. Бондаренко 1996,2003; ОВ. Бухарин, 1999).

Колонизационная резистентность определяется множеством факторов, среди которых важное место занимают адгезивная и антагонистическая активности микробов, составляющих нормальную микрофлору, конкуренция за факторы питания и другие (Ю.В. Езепчук, 1985; В.И. Брилис, 1988; О.В. Бухарин, 1999). По мнению А.А. Воробьева с соавторами (1997), колонизационная резистентность зависит от количества и качества нормальной микрофлоры и условий ее обитания. Колонизационная резистентность также является одним из механизмов местного иммунитета и определяется состоянием иммунной системы. Однако до сих пор нет ясности в вопросе, что является первичным звеном в отношениях нормальной микрофлоры и иммунной системы. Возможно, что изменения в составе нормальной микрофлоры ведут к нарушению иммунного статуса, или, наоборот, изменения в состоянии иммунитета, наступающие под действием различных факторов, приводят к изменению в составе микробиоценозов (АА. Воробьев с соавт., 1997).

2000; В.М. Бондаренко с соавт., 2003) прослежены изменения показателей общего иммунитета при дисбактериозе, обусловленном антибиотическими препаратами. В то же время, существует мнение (О.Н. Мииушкин с соавт., 1999), что дисбактериоз является процессом, протекающим непосредственно на эпителиальных поверхностях слизистых оболочек, в частности, кишечника.

Поэтому представляло интерес проследить за изменением характера нормальной микрофлоры кишечника в зависимости от активности некоторых показателей местного иммунитета, что позволило бы выявить особенности колонизационной резистентности кишечника при дисбактериозе, обусловленном введением антибиотиков широкого спектра действия.

Цели и задачи. Целью работы явилось изучение некоторых особенностей колонизационной резистентности при дисбактериозах кишечника, обусловленных антибиотическими препаратами. Для реализации цели предстояло решить следующие задачи:

1. Изучить количественный и качественный состав микрофлоры кишечника взрослых людей с дисбактерюзом, обусловленным введением антибиотических препаратов.

2. Исследовать биологические свойства представителей резидентной микрофлоры у людей с дисбактерюзом.

3. Выявить микроэкологические изменения характера микрофлоры кишечника мышей в динамике экспериментального дисбактериоза, обусловленного разными антибиотиками широкого спектра действия.

4. Проследить за изменением биологических свойств микроорганизмов, представителей резидентной флоры, при экспериментальном дисбактериозе, обусловленном антибиотиками.

5. Определить изменение некоторых показателей неспецифической резистентности организма в динамике экспериментального дисбактериоза, обусловленного приемом антибиотика.

6. Сопоставить изменения факторов неспецифической резистентности организма с характером микроэкологических нарушений.

Научная новизна:

• Впервые проведено комплексное исследование изменений микрофлоры кишечника при лекарственном дисбактериозе у людей и экспериментальных животных, получавших антибиотики, одновременно с изучением состояния местной неспецифической резистентности. Установлена тождественность микроэкологических изменений в микрофлоре кишечника людей и экспериментальных животных. Установлена синхронность изменений полостной и мукозной флоры.

• Впервые у представителей нормальной резидентной микрофлоры исследованы биологические свойства, определяющие их участие в поддержании колонизационной

резистентности. Выявлены изменения не только состава популяции эшерихий и лактобактерий, но и значительное снижение их антагонистической активности, адгезии, повышение персистентных характеристик, что свидетельствует об утрате ими функций в поддержании колонизационной резистентности.

• Впервые произведено исследование факторов неспецифической защиты организма на местном уровне. Выявлено, что под действием различных антибиотиков отмечается значительное снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем, прежде всего, в местных эпителиоидных клетках кишечника по сравнению с перитонеальными макрофагами. Снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем предшествует изменениям в микробиоценозах.

Практическая значимость. Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии по теме «Отношение паразит-хозяин в биотопах кишечника при лекарственном дисбактерюзе» в рамках договора № 034/201/003 (2001-2005 гг.).

Полученные результаты позволили установить, что одним из механизмов, способствующих развитию микроэкологических изменений в кишечнике, является снижение активности местных факторов неспецифической защиты, в частности, активности кислородзависимых систем колоноцитов и энтероцитов.

Проведенные исследования служат теоретическим обоснованием использования препаратов пробиотического действия («Наринэ») для профилактики изменении активности местной неспецифической защиты организма (кислородзависмых бактерицидных систем), что может служить основой разработки новых методов профилактики дисбактериоза.

Материалы диссертации включены в учебные программы и используются в лекционных и практических курсах кафедры биохимии и микробиологии Ростовского Государственного Университета для студентов, специализирующихся по микробиологии, а также Факультета Усовершенствования Врачей Ростовского Государственного Медицинского Университета по курсу микробиологии.

Разработано и внедрено в практику учебно-методическое пособие для студентов биолого-почвенного факультета РГУ «Симбионтная микрофлора желудочно-кишечного тракта человека. Дисбактериоз и его коррекция».

Получен патент на изобретение «Питательная среда для выделения лактобактерий» (№ 2202609 от 20.04.2003г.).

Оформлен и представлен на согласование в ГИСК им. Л.А. Тарасевича Экспериментально-производственный регламент на питательную среду для выделения и культивирования бифидобактерий, жидкую (ГТ-среда). Получено разрешение Комитета медицинских иммунобиологических препаратов на внедрение в практику без проведения Гос.

испытаний питательной среды для выделения и культивирования бифидобактсрий, жидкой (ГТ-среда) (Выписка из протокола № 6 от 14.06.2001 г.).

Материалы диссертационной работы использованы при подготовке аналитического обзора «Новые подходы к коррекции и профилактике дисбактериозов», получившего положительную оценку Департамента организации медицинской помощи населению и профилактики неинфекционных заболеваний Минздрава России и рекомендованного для использования практическими врачами.

Положения, выносимые на защиту:

• При дисбактерюзе кишечника, обусловленном введением антибиотиков, как у людей, так и в эксперименте на животных, происходят значительные изменения в составе кишечных микробиоценозов. Изменения полостной и мукозной микрофлоры носят синхронный характер и проявляются в изменениях количественного состава и характера популяций эшерихий и лактобактерий, где нарастает численность эшерихий со сниженной ферментативной активностью, гемолитических эшерихий, лактобактерий со сниженной кислотообразующей активностью.

• При дисбактерюзе, обусловленном антибиотиками широкого спектра действия, изменяются биологические свойства таких представителей нормальной резидентной флоры, как эшерихий и лактобактерий: существенно снижается их антагонистическая и адгезивная активности, что свидетельствует об утрате ими функции поддержания колонизационной резистентности.

• Под действием антибиотиков существенно изменяются показатели местной неспецифической защиты: снижается активность кислородзависимых бактерицидных систем местных непрофессиональных фагоцитов. Снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем предшествует изменениям в составе нормальной микрофлоры. Максимум снижения активности кислородзависимых бактерицидных систем коррелирует с повышением в нормальной микрофлоре количества эшерихий со сниженной ферментативной активностью и условно-патогенных микроорганизмов. Использование «Наринэ» в качестве средства, стимулирующего активность кислородзависимых бактерицидных систем, приводит к уменьшению в кишечной микрофлоре количества эшерихий со сниженной ферментативной активностью и условно-патогенных бактерий.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии», посвященной 90-летию Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии (1999), научной конференции «Актуальные вопросы биологии и медицины», посвященной 30-летию кафедры

микробиологии, вирусологии, и иммунологии Кабардино-Балкарского Государственного Университета (г. Нальчик, 1999).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 20 работ, изданы методические рекомендации, получен патент на питательную среду, оформлен экспериментально-производственный регламент, подготовлена рукопись аналитичгского обзора.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 179 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, заключения и выводов. Список литературы включает 263 источника, в том числе, отечественных 180 и зарубежных 83. Работа иллюстрирована 40 таблицами и 23 рисунками.

Содержание работы.

Материалы, методы и объем исследования. Для выполнения работы были отобраны 600 человек с дисбактериозом кишечника, обусловленным приемом антибиотиков широкого спектра действия и 64 практически здоровых человека, не получавших антибиотики в течение последних двух лет.

При воспроизведении экспериментального дисбактериоза использовано 400 белых беспородных мышей-самцов весом 16-18г., у которых исследован характер полостной и мукозной микрофлоры.

Биологические свойства представителей резидентной флоры исследованы у 300 штаммов эшерихий, 143 штаммов лактобактерий, выделенных от людей с дисбактергозом, 65 штаммов эшерихий, 137 штаммов лактобактерий, полученных от условно-здоровых людей и 96 штаммов эшерихий, 100 штаммов лактобактерий, изолированных от мышей.

Методы исследования:

Микробиологическиеметоды.

Состав микрофлоры кишечника изучали в соответствии с методическими рекомендациями «Бактериологическая диагностика дисбактершза кишечника» (Москва, 1991).

Для исследования мукозной микрофлоры отрезок кишечника длиной 5-7 см трижды промывали фосфатно-солевым буферным раствором (рН 7,2), отрезок кишечника весом 1 г гомогенизировал в ступке с кварцевым песком в ФБР, переносили в физиологический раствор (рН 7,2-7,4). Характер микрофлоры определяли по той же методике (Москва, 1991).

Выделенные чистые культуры идентифицировали по морфологическим, тинкториальным, биохимическим, культуральным свойствам в соответствии с рекомендациями Берджи (1997).

Определение антилизоцимной и антиинтерцидной активностей у выделенных штаммов осуществлялось по методикам О.В. Бухарина с соавторами (1984, 1997) с использованием

типовых штаммов Micrococcus lysodeikticus шт.2665 (ГИСК им. Тарасевича) и Corynebacterium xerosis пгг.181 (ГИСК им. Тарасевича).

Антагонистическую активность штаммов микроорганизмов, выделенных от людей с дисбактериозом кишечника и экспериментальных животных, изучали методом отсроченного антагонизма (P. Fredericq, 1957) с использованием типовых штаммов (Shigella sonnei, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus).

Определение лизоцимной активности исследуемых штаммов производилось по методике О.В. Бухарина с соавторами (1985) с использованием суточной культуры Micrococcus lysodeikticus шт.2665 (ГИСК им. Тарасевича).

Изучение адгезивной активности исследуемых штаммов производилось в соответствии с методикой В.И. Брилис с соавторами (1986).

Биохимические методы.

Определение количества лизоцима в копрофильтратах проводилось в соответствии с методическими рекомендациями «Применение сигнального способа диагностики дизентерии по определению количества лизоцима в копрофильтратах» (Оренбург, 1979).

Для определения активности кислородзависимых бактерицидных систем фагоцитирующих клеток перитонеальные макрофаги выделяли из брюшной полости мышей по методу Дж. Уосли (1976), без предварительной стимуляции. Концентрацию клеток доводили до 1 х 106 /мл. Энтероциты и колоноциты выделяли из соответствующих отделов кишечника по следующей методике: отрезки кишечника длиной 5 см, трижды промывали стерильным 0,85% раствором хлорида натрия. Кишечник вскрывали продольно, с внутренней поверхности делался соскоб отшлифованным предметным стеклом для отделения клеток кишечного эпителия. Клетки переносили в фосфатно-буферный раствор (ФБР) (рН 7,2). Концентрацию клеток доводили до 1 х 106/мл.

Состояние кислородзависимых бактерицидных систем перитонеальных макрофагов и эпителиоидных клеток кишечника определяли при помощи НСТ-теста (Н.П. Грачева, 1984). Использовали следующие реактивы: фосфатный буфер (рН 7,2), кристаллический нитросиний тетразолий (НСТ) фирмы «Chemapol» (Чехия), раствор 1 нормальный раствор соляной кислоты, диметилсульфоксид (ДМСО). Для проведения спонтанной реакции восстановления НСТ культуру клеток в количестве 1 х 106 /мл инкубировали с 0,2% раствором НСТ в течение 1 часа при 37 ± 1°С. После инкубации осадок промывали в 1-нормальной НС1. Для растворения осадка использовали ДМСО. Объем исследуемого образца доводили до 3 мл ФБР. Оптическую плотность формазана в образцах определяли на ФЭК в кюветах размером 1x1 см при л=492 нм. Контролем служил раствор ДМСО с ФБР (рН 7,2). Показатели оптической плотности умножали на 1000 и получали количество формазана на 1 х Ю6 клеток, выраженное в единицах оптической плотности (Ед).

Активность КЗБС изучали в динамике, начиная с 3 суток после окончания введения антибиотика.

Биологические методы.

Экспериментальный дисбактерисв воспроизводился на белых беспородных мышах-самцах весом 16-18 г. Лекарственный дисбактериоз вызывали введением антибиотиков (гентамицина, цефазолина, ципрофлоксацина). Антибиотики вводили терапевтическими дозами (80 мкг/мл) в пересчете на массу животного в объеме 0,2 мл, внутрибрюшинго в течение 5 суток. Контрольной группе мышей вводили 0,85% раствор хлорида натрия в том же объеме.

Статистическиеметоды.

Обработка результатов проводилась средствами MS Excel методом вариационной статистики с вычислением критериев «X ± m», «t», «р» и по общепринятым методикам (И.А. Овсиевич, 1986; Ю.И.Иванов, О.Н. Погорелюк, 1990).

Результаты исследования и их обсуждение.

Так как колонизационная резистентность определяется составом нормальной микрофлоры (А.А. Воробьев с соавт., 1997), первым этапом исследования явилось изучение характера микроэкологических нарушений в составе микрофлоры кишечника людей, получавших антибиотические препараты широкого спектра действия.

Анализ полученных данных позволил заключить, что применение антибиотических препаратов приводит к существенным изменениям в составе микробиоценоза кишечника. При этом в результате антибиотикотерапии изменяется состав постоянных представителей, как анаэробной, так и факультативно-анаэробной микрофлоры. Достоверно снижается количество бифидобактерий (lg 6,2 ± 0,5 КОЕ/г по сравнению с lg 8,4 ± 0,6 КОЕ/г в группе лиц не получавших антибиотики, t = 2,75; р < 0,01). Отмечаются изменения в составе популяции эшерихий и лактобактерий: увеличивается содержание эшерихий со сниженной ферментативной активностью (lg 4,2 ± 0,4 КОЕ/г против lg 1,6 ± 0,4 КОЕ/г в группе лиц, не получавших антибиотики), гемолитических эшерихий (lg l,03±0,8 против lg 0,3±0,03 КОЕ/г соответственно), лактобактерий со сниженной кислотообразующей способностью (в 3,6 раза по сравнению с людьми, не получавшими антибиотики).

В кишечной микрофлоре людей, получавших антибиотики, по сравнению с условно-здоровыми людьми, увеличивается количество условно-патогенных бактерий: лактозонегативных энтеробактерий (lg 2,45 ± 0,35 против lg 1,4 ± 0,3 КОЕ/г), бактерий рода Proteus (lg 1,3 ± 0,06 против lg 0,3 ± 0,03 КОЕ/г), гемолитических кокковых форм (lg 1,0 ± 0,05 против lg 0,5 ± 0,02 КОЕ/г), золотистых стафилококков (lg0,5 ± 0,01 против lg 0,3 ± 0,03 КОЕ/г), грибов рода Candida (lg 0,95 ± 0,06 против lg 0,7 ± 0,08 КОЕ/г)

В группе лиц, получавших антибиотики, достоверно чаще по сравнению с группой условно-здоровых людей встречаются случаи низкого содержания представителей резидентной микрофлоры. Особенно четко это выражено в популяциях эшерихий и лактобактерий. Случаи содержания эшерихий ниже 107 в группе лиц, получавших антибиотики, выявлены в 55,3 + 2,0 % случаев, тогда как в группе условно-здоровых лиц - в 17,2 ± 4,7% = 6,6; р<0,001). Сниженное содержание лактобактерий обнаружено в 69,5 ± 1,9% случаев против 42,2 ± 6,2% ^ = 4,3; р < 0,01). Сниженное количество бифидо- и лактобактерий сочеталось со снижением количества эшерихий с нормальной ферментативной активностью, что является характерной особенностью дисбиотических расстройств.

Анализ содержания в составе кишечной микрофлоры количества эшерихий со сниженной ферментативной активностью и гемолитических эшерихий в зависимости от количества присутствующих в кишечном микробиоценозе бифидо- и лактобактерий обнаружил отсутствие какой-либо связи. Гемолитические эшерихий и эшерихий со сниженной ферментативной активностью обнаруживались с одинаковой частотой как у людей с содержанием бифидо- и лактобактерий в пределах нормы, так и при их сниженном количестве (70,1 ± 2,7% и 66,7 ± 5,9% соответственно, t < 2; р > 0,05).

Не удалось выявить какой-либо зависимости между содержанием бифидо- и лактобактерий в нормальном и сниженном количестве в составе микрофлоры и повышением численности лактозонегативных энтеробактерий. Видимо, как полагает В Г. Лиходед с соавторами (1999), увеличение содержания в микробиоценозах гемолитических эшерихий и лактозонегативных энтеробактерий, определяется какими-то другими механизмами.

Так как в популяции эшерихий у людей, получавших антибиотики, существенно увеличивается количество эшерихий со сниженной ферментативной активностью, были изучены основные биологические свойства этих бактерий: антагонистическая, адгезивная активности, наличие персистентных характеристик. Обнаружено, что эшерихий со сниженной ферментативной активностью, по сравнению с эшерихиями с нормальной ферментативной активностью, обладают сниженной антагонистической, адгезивной, антилизоцимной активностью.

Антагонистическая активность эшерихий со сниженной ферментативной активностью сохраняется в отношении патогенных энтеробактерий. 75,3 ± 3,5% штаммов имели низкую, 24,6 ± 3,5% - среднюю и высокую степень активности в отношении шигелл; среди эшерихий с нормальной ферментативной активностью - 68,0 ± 6,6% и 32,0 ± 6,6% соответственно < 2; р > 0,05). Существенно снижается антагонистическая активность по отношению к условно-патогенным энтеробактериям, имеющим большое значение при дисбактериозах кишечника. Так в отношении клебсиелл 90,0 ± 2,4%, в отношении двух видов протеев 98,7 ± 0,9% и 100%

штаммов эшерихий со сниженной ферментативной активностью обладали низкой степенью

антагонистической активности (в случае эшерихий с нормальной ферментативной активностью

- 64,0 ± 6,7%, 86,0 ± 4,9% и 76,0 ± 6,0 %; I, = 3,7; р, < 0,001; г2 = 4, р2 < 0,001; 13 = 2,5; р3 < 0,05

соответственно). В отношении протеев не выявлялись высокоактивные штаммы эшерихий со сниженной ферментативной активностью.

Низкий уровень среднего показателя адгезии обнаруживался у 56,0 ± 7,0% эшерихий со сниженной ферментативной активностью против 38,0 ± 6,8% эшерихий с нормальной активностью (1 = 2; р < 0,05). Среднеадгезивных и высокоадгезивных эшерихий со сниженной ферментативной активностью было зафиксировано соответственно 34,0 ± 6,7% и 10,0 ± 4,2% соответственно против 44,0 ± 7,0% и 18,0 ± 5,4% штаммов с нормальной ферментативной активностью (1 = 3; р < 0,01).

Изменения биологических свойств эшерихий со сниженной ферментативной активностью свидетельствует об утрате ими своей роли в обеспечении колонизационной резистентности.

Изучение лактобактерий, выделенных от людей, получавших антибиотики, показало, что существенно меняется их видовой состав. Так снижается число видов в популяции (у условно-здоровых- 14, у получавших антибиотики - 9), снижается численность ЬЪ.аадорЬйш (с 12,0% в группе условно-здоровых до 1,4% в группе лиц, получавших антибиотики), появляются виды более свойственные другим отделам, в частности ЬЪ^Нуапш (12,0% против 1,0% у условно-здоровых людей), возрастает роль ЬЪ.Ъи^апсш (1,4% против 1,0% соответственно).

Как известно, антагонистическая активность лактобактерий в отношении патогенной и условно-патогенной флоры складывается из их способности синтезировать биологически активные вещества. Изучение лизоцимной активности лактобактерий показало, что у людей, получавших антибиотики, достоверно реже обнаруживались штаммы, способные к синтезу лизоцима: 24,5 ± 4,3% против 37,6 ± 4,6% у условно-здоровых людей (1 = 2,1; р < 0,05).

Использование разработанной питательной среды для выделения лактобактерий позволило выявить неоднородность популяции лактобактерий по признаку кислотообразования. У людей, получавших антибиотики, увеличивается количество лактобактерий со сниженной кислотообразующей активностью (51,4 ± 3,8% против 14,1 ± 4,3% в группе условно-здоровых людей, 1 = 6,7; р < 0,001).

Большинство штаммов лактобактерий, выделенных от людей, получавших антибиотики, обладало низкой степенью антагонистической активности в отношении шигелл (55,5 ± 4,4% против 9,0 ± 2,8% в группе условно-здоровых лиц, 1 = 9,3; р < 0,001), клебсиелл (77,4 ± 3,7% против 35,0+ 4,8%, 1= 7,1; р < 0,001), двух видов протеев (76,6 + 3,7% и 75,8+ 3,8% против 21,0 ± 4,0% и 18,0 ± 3,8%, 1| = 10,3; р, < 0,001; 12 = 10,9; рг< 0,001 соответственно). В груше лиц,

получавших антибиотики, не обнаруживалось высокоактивных штаммов в отношении клебсиелл и протеев.

Полученные данные об изменении биологических свойств лактобактерий свидетельствуют о частичной утрате ими способности к поддержанию колонизационной резистентности.

Обнаружение существенных качественных и количественных изменений в составе микробиоценозов кишечника людей, получавших антибиотики, и изменений биологических свойств основных представителей резидентной микрофлоры послужило основанием для проведения второго этапа исследования - экспериментального - воспроизведения дисбактериоза, обусловленного антибиотиками широкого спектра действия. Использование экспериментальной биологической модели позволило проследить не только за изменениями в составе полостной, но и пристеночной микрофлоры, а также показателей местной неспецифической резистентности организма.

Характер микрофлоры животных, получавших антибиотики, был сопоставлен с характером микрофлоры животных, не получавших антибиотики Анализ полученных данных свидетельствует, что введение терапевтических доз антибиотиков привело к изменению характера полостного микробиоценоза.

Обращает на себя внимание, что количество бифидобактерий в результате антибиотикотерапии снизилось незначительно (^ 7,7 ± 0,2 КОЕ/г против ^ 8,0 ± 0,6 КОЕ/г в группе контрольных животных), в то время как снижение количества лактобактерий было более выраженным (^ 6,3 ± 0,2 против ^ 7,1 ± 0,5 КОЕ/г соответственно, t = 1,6; р > 0,05). В составе полостной микрофлоры мышей достоверно снизилось количество эшерихий (^ 5,4 ± 0,3 против ^ 7,4 ± 0,4 в группе интактных животных, t = 4; р < 0,001). Существенно возросло количество условно-патогенных микроорганизмов, в том числе, лактозонегативных энтеробактерий (^ 2,5 ± 0,2 против ^ 1,9 ± 0,6 КОЕ/г в контроле), бактерий рода Pгoteus (^ 2,8 ± 0,1 против ^ 2,1 ± 0,1 КОЕ/г), гемолитических форм в основном за счет кокковых видов (^ 2,3 + 0,1 против ^ 0,4 ± 0,07 КОЕ/г), стафилококков, в том числе, золотистых (^ 1,6 ± 0,2 против ^ 1,0 ± 0,3 КОЕ/г).

В результате антибиотикотерапии произошли изменения в составе мукозной микрофлоры. Мало изменилось количество бифидо- и лактобактерий, ассоциированных с поверхностью крипт. В составе эшерихий произошло значительное увеличение их количества (^ 4,5 ± 0,2 против ^ 2,2 ±0,1 КОЕ/г в контрольной группе мышей), главным образом за счет эшерихий со сниженной ферментативной активностью, доля которых в популяции достигла 90%. В мукозной микрофлоре мышей, подвергшихся антибиотикотерапии, резко увеличилось содержание условно-патогенных бактерий. Количество гемолитических кокковых форм выросло в 18 раз (с ^ 0,2 ± 0,01 в контрольной группе до ^ 3,6 ± 0,1 КОЕ/г у мышей с

лекарственным дисбактериозом), лакгозонегативных энтеробактерий - в 3,6 раза (с lg 1,2 ±0,1 до lg 4,3 ± 0,1 КОЕ/г соответственно), бактерий рода Proteus - в 9,25 раза (с lg 0,4 ± 0,02 до lg 3,7 ± 0,2 КОЕ/г соответственно), стафилококков, в том числе, золотистых и грибов рода Candida.

Поскольку мукозная микрофлора вносит основной вклад в обеспечение колонизационной резистентности (ОБ. Чахава, 1982; Б.В. Пинегин с соавт., 1984; Д. Ван-дер-Ваай, 1992; M.J. Orrhage et al., 1994), изменение ее состава служит свидетельством нарушения колонизационной резистентности кишечника.

Использование различных антибиотиков для создания экспериментального лекарственного дисбактероза позволило сопоставить характер изменений в микробиоценозах кишечника. Было обнаружено, что при сохранении основных тенденций, характеризующих нарушения состава кишечной микрофлоры, степень выраженности этих нарушений зависела от выбранного антибиотика. Отмечено, что из трех использованных антибиотиков наибольшее действие на состав микрофлоры оказывал гентамицин, в меньшей степени цефазолин, наиболее щадящим было действие ципрофлоксацина

Был прослежен характер изменений состава кишечной микрофлоры мышей в динамике экспериментального лекарственного дисбакгериоза.

Проведенные исследования количественного состава полостной и мукозной микрофлоры показали, что бифидо- и лактобактерии подвергались незначительным изменениям. Численность их популяций на протяжении всего срока наблюдений в среднем оставалась на уровне значений контрольной группы.

В динамике дисбактериоза обнаруживались значительные изменения количества эшерихий. Так, наблюдавшееся на 3-5 сутки некоторое увеличение общего количества эшерихий (lg 7,8 ±0,1 против lg 7,4 ± 0,4 КОЕ/г у контрольных животных) в полостном микробиоценозе, сменялось резким падением их количества после 5-х суток (на 10-е сутки - lg 6,0 ± 0,2 КОЕ/г, к концу срока наблюдения - lg 4,0 ± 0,3 КОЕ/г). С 5-х суток наблюдений начинался рост численности эшерихий со сниженной ферментативной активностью. К 17-му дню их доля в популяции кишечных палочек приближалась к 100%.

В мукозной микрофлоре, начиная с 3-5 суток наблюдений, зафиксирован рост общего количества эшерихий и одновременное увеличение доли эшерихий со сниженной ферментативной активностью в структуре популяции, достигающей к 17-му дню 100%.

Численность условно-патогенных бактерий, как в полостном, так и мукозном микробиоценозе, увеличивалась уже к 5-м суткам наблюдений, в несколько раз превышая значения контрольной группы мышей. К концу срока наблюдений обнаруживалась тенденция к снижению количества условно-патогенных микроорганизмов, особенно четко выраженная в полостном биотопе.

Таким образом, изменения, отмеченные при экспериментальном дисбактериозе у животных, в определенной степени соответствуют изменениям, отмеченным в микробиоценозе кишечника людей, получавших антибиотики: изменяется структура популяции эшерихий в сторону нарастания численности эшерихий со сниженной ферментативной активностью; нарастает количество и частота высева условно-патогенных микроорганизмов, в частности, лактозонегативных энтеробактерий, протеев, стафилококков, гемолитических кокковых форм; несколько снижается количество лактобактерий. Изменения в составе полостной и мукозной микрофлоры носят в основном синхронный характер.

Изучение биологических свойств эшерихий со сниженной ферментативной активностью, преобладающих в кишечнике мышей с экспериментальным лекарственным дисбактериозом, показало, что степень их антагонистической и адгезивной активности была низкой. Большинство штаммов обладало низкой антагонистической активностью в отношении РтгаШБ (66,7 ± 4,8%), Р.уи^агк (63,6 ± 4,9%), 8.аигеш (62,5 ± 4,9%). В отношении шигелл и клебсиелл 42,7 ± 5,0% и 45,8 ± 5,1% штаммов были низко активными. Высокая степень антагонистической активности среди всех изученных штаммов встречалась в единичных случаях (2,1 ± 1,4 - 9,4 ± 3,0%). 90,0 ± 4,2% выделенных от мышей эшерихий со сниженной ферментативной активностью имели низкий уровень среднего показателя адгезии. Высокоадгезивных штаммов не обнаруживалось.

В то же время для эшерихий со сниженной ферментативной активностью, выделенных из кишечника мышей, была характерна высокая частота встречаемости антилизоцимного признака (98,4 ± 1,1% исследованных штаммов). Степень выраженности способности к инактивации лизоцима была также высока и приближалась к уровню условно-патогенных энтеробактерий (5,6 мкг лизоцима/мл среды и 5,4 мкг/мл соответственно). Данное обстоятельство свидетельствует о нарастании патогенных свойств в популяции эшерихий, вегетирующих в кишечнике мышей с экспериментальным лекарственным дисбактериозом, и утрате ими места нормальных эубионтов.

В ходе изучения биологических свойств лактобактерий, выделенных от мышей в

динамике экспериментального лекарственного дисбактериоза, было отмечено снижение их

колонизирующей способности. Способностью к синтезу лизоцима в незначительной степени

обладали только 15,0 ± 3,5% лактобактерий. Большинство изученных штаммов обладало низкой

антагонистической активностью в отношении К1.рпеитоПа (75,0 ± 4,3%), Р.ш^аПБ (72,0 ±

4,5%), Р.тгаЫ& (70,0 ± 4,6%), 8.ашеш (87,0 ± 3,4%). В отношении шигелл 49,0 ± 5,0%

штаммов лактобактерий были низко активными Высокая антагонистическая активность в

отношении указанных штаммов встречалась в единичных случаях (1,0 ± 0,9 - 5,0 ± 2,0%).

Подавляющее большинство штаммов лактобактерий, выделенных от мышей, были

неадгезивными (84,0± 5,2% по СПА и 64,0± 6,8% по НАМ)

Так как существенную роль в поддержании колонизационной резистентное™ организма играет местный иммунитет (Г.И. Подопригора, 1990), представляло интерес выяснить, как изменяется активность показателей местной неспецифической резистентности в динамике экспериментального дисбактгриоза. К числу местных неспецифических факторов противоинфекционной зашиты относится фагоцитарная активность местных макрофагов, а также антибактериальные и антивирусные субстанции (лизоцим, интерферон) (Я. С. Шварцман, Л Б. Хазенсон, 1978; ЛБ. Хазенсон, 1984).

Считается, что снижение содержания лизоцима ведет к ослаблению колонизационной резистентности слизистой оболочки кишечника (Э.Г. Щербакова с соавт., 1999,2000), поэтому была изучена частота встречаемости различных концентраций лизоцима в копрофильтратах людей, получавших и не получавших антибиотики.

Анализ полученных данных показал, что в копрофильтратах лиц, получавших антибиотики, достоверно чаще обнаруживались высокие концентрации лизоцима (79,3 ± 1,2% против 31,2 ± 5,8% в группе условно-здоровых лиц, 1 = 8,2; р < 0,001). Однако О.В. Бухарин с соавторами (1979) указывали, что высокий уровень лизоцима в копрофильтрагах сопровождается параллельным снижением лизоцима в слизистой дистального отдела толстой кишки и свидетельствует о наличии воспалительного процесса в слизистой.

Так как содержание лизоцима в кишечнике складывается из лизоцима, секретируемого слизистой оболочкой, и микробного лизоцима (О.В. Бухарин с соавт.. 1985), была проанализирована зависимость между содержанием лизоцима в копрофильтратах и изменениями в составе микрофлоры кишечника людей, получавших антибиотики.

Установлена четкая зависимость между содержанием лизоцима в копрофильтратах и содержанием бифидо- и лактобактерий в составе кишечной микрофлоры людей с дсбактериозом, обусловленным антибиотическими препаратами. Снижение содержания бифидо- и лактобактерий сопровождалось достоверным снижением частоты обнаружения лизоцима в копрофильтратах (1 = 2,1; р < 0,05). Количественные значения лизоцима в копрофильтратах таких людей были также ниже, чем у людей с нормальным содержанием бифидо- и лактофлоры (2,45 мкг/мл и 3,25 мкг/мл соответственно).

Не обнаружено достоверных отличий (1 = 0,4; р > 0,05) в частоте выявления и количестве лизоцима в копрофильтратах в зависимости от преобладания в составе кишечной микрофлоры людей с лекарственным дисбактериозом эшерихий с нормальной либо сниженной ферментативной активностью.

Наличие в составе микрофлоры кишечника высоких количеств условно-патогенных микроорганизмов, для которых лизоцим служит фактором межмикробного взаимодействия, сопровождалось частым обнаружением высоких концентраций лизоцима в копрофильтратах. Тем не менее, не обнаружено достоверного различия в частоте обнаружения высоких

концентраций лизоцима в копрофильтратах и увеличением количества лактозонегативных энтеробактерий в кишечной микрофлоре.

Изучение содержания лизоцима в копрофильтратах мышей в динамике экспериментального дисбактериоза показало, что в результате введения антибиотиков у мышей происходило нарастание частоты обнаружения и количества лизоцима в копрофильтратах. В случае применения гентамицина частота обнаружения лизоцима увеличилась с 46,0 ± 9,7% у контрольных животных до 67,0 ± 5,0% у опытных животных, 1 = 1,9; р > 0,05, цефазолина - до 83,3 ± 5,4%, 1 = 3,3; р < 0,01, ципрофлоксацина - до 97,9 ± 2,1%, 1 = 5,2; р < 0,001. Средние значения лизоцима в копрофильтратах превысили уровень контрольной группы мышей (1,23 мкг/мл) в случае гентамицина в среднем в 1,6 раза, цефазолина - в 1,7 раза, ципрофлоксацина -более чем в 4,3 раза. Сопоставление содержания лизоцима в копрофильтратах с характером микрофлоры кишечника экспериментальных животных показало наличие зависимости между существенным увеличением количества гемолитических кокковых форм (стафилококки, в том числе золотистые) и нарастанием количества лизоцима

Складывается впечатление, что содержание лизоцима в копрофильтратах людей с дисбактериозом, обусловленным антибиотиками и экспериментальных животных, зависит от состояния слизистой оболочки кишечника, что согласуется с точкой зрения В М Бондаренко с соавторами (2003) об измененном морфологическом статусе слизистой оболочки толстого кишечника при дисбакгериозе.

Развитие микроэкологических нарушений при дисбактсриозах кишечника связывают с изменениями в системе местного противоинфекционного иммунитета, одним из важных звеньев которого является фагоцитарная реакция, осуществляемая профессиональными и непрофессиональными фагоцитами (К.П. Кашкин, З.О. Караев, 1984) ОН. Минушкин с соавторами (1999), В.М. Бондаренко с соавторами (2003) предлагают рассматривать развитие микроэюлогических нарушений как патологический процесс, протекающий непосредственно на поверхности эпителиоидных клеток кишечника - энтерощпах и колоноцитах. Однако механизмы, обусловливающие снижение местного иммунитета и его связь с изменениями характера микрофлоры при дисбактериозах не до конца ясны.

Так как исход фагоцитарной реакции определяется состоянием бактерицидных систем фагоцитирующих клеток, была исследована активность кислородзависимых бактерицидных систем в непрофессиональных фагоцитах кишечника (энтероцитах и колоноцитах) и перитонеальных макрофагах в динамике экспериментального дисбактериоза, обусловленного антибиотиками широкого спектра действия.

Было выявлено, что активность кислородзависимых бактерицидных систем (КЗБС) эпителиоидных клеток кишечника интактных мышей определялась на сравнительно высоком

уровне (142,3 ± 11,4 Ед. в энтероцитах, 156,5 ± 12,6 Ед. в колоноцитах), превышая значения активности КЗБС перитонеальных макрофагов (117,8 ± 9,4 Ед.).

Все взятые в опыт антибиотики значительно снижали активность КЗБС, но в разной степени. Наиболее значительно активность КЗБС снижалась под действием цефазолина: в колоноцитах - в 4,4 раза, энтероцитах - в 3,6 раза, перитонеальных макрофагах - в 3,2 раза. Более умеренно снижалась активность под действием гентамицина' в колоноцитах- в 2,14 раза, энтероцитах - 1,9 раза, перитонеальных макрофагах - 1,7 раза. Самое низкое снижение активности кислородзависимых . бактерицидных систем отмечалось при введении ципрофлоксацина: в колоноцитах - в 2 раза, в энтероцитах и перитонеальных макрофагах - в 1,4 раза.

Была изучена динамика изменений активности КЗБС при экспериментальном дисбактериозе, обусловленном гентамицином. Анализ полученных результатов показал, что падение активности КЗБС во всех исследованных клетках происходит с одинаковой закономерностью: наиболее четко снижалась активность КЗБС колоноцитов, в меньшей степени энтероцитов и перитонеальных макрофагах. Достоверное снижение активности КЗБС фиксировалось уже на 3-5 сутки после отмены антибиотика: в колоноцитах она падала до 46,0 ± 3,06 Ед., энтероцитах - 62,0 ± 5,5 Ед., перитонеальных макрофагах - до 45,0 ± 2,8 Ед ^ = 6,9; р < 0,001 во всех случаях). Начиная с 10-х суток после отмены гентамицина активность КЗБС фагоцитирующих клеток несколько повышалась, но и к концу срока наблюдений (31 сутки) оставалась в несколько раз ниже (колоноцитов - в 3 раза, энтероцитов - в 2 раза, перитонеальных макрофагов - в 2,3 раза) показателей контрольной группы мышей.

Сопоставление результатов изучения активности КЗБС фагоцитов в динамике экспериментального дисбактерита, обусловленного цефазолином и ципрофлоксацином, позволило выявить наличие той же закономерности, что и при введении гентамицина: активность КЗБС снижается более значительно в колоноцитах, чем энтероцитах, снижение активности отмечается с 3 дня после отмены антибиотиков, максимум падения активности приходится на 3-10 сутки. В отличие от гентамицина активность КЗБС при введении цефазолина и ципрофлоксацина восстанавливалась более быстро и приближалась к показателям контрольной группы животных уже к 18 дню наблюдений.

Так как активность кислородзависимых бактерицидных систем отражает состояние местного иммунитета, представляло интерес сопоставить данные об изменении активности КЗБС и микроэкологических нарушениях в микробиоценозах кишечника.

Была обнаружена прямая четко выраженная зависимость между изменениями активности КЗБС непрофессиональных фагоцитов кишечника и изменениями характера кишечной микрофлоры. Снижение активности КЗБС приводит к увеличению содержания

эшерихий со сниженной ферментативной активностью, лактозонегативных энтеробактерий, протеев, гемолитических кокшвых форм.

Наиболее низкие значения активности КЗБС сочетались со снижением количества нормальных эубионтов в микрофлоре кишечника (бифидобактерий до ^ 6,0 ± 0,4, лактобактернй до lg 6,0 ± 0,3, эшерихий до lg 4,5 ± 0,4) и нарастанием в популяции эшерихий штаммов со сниженной ферментативной активностью, которые с 17-х суток и до конца срока наблюдений составляли более 90% популяции.

Падение активности КЗБС фагоцитирующих клеток на 3-5 сутки после отмены антибиотика сочеталось с достоверным увеличением количества условно-патогенных микроорганизмов. На протяжении практически всего срока наблюдения низким значениям активности КЗБС соответствовали высокие количества лактозонегативных энтеробактерий, протеев, стафилококков, в том числе золотистых, гемолитических кокковых форм. Отмеченная к концу эксперимента тенденция к росту активности КЗБС колоноцитов и энтероцитов сочеталась с уменьшением численности условно-патогенных бактерий, высеваемых из кишечника мышей.

В настоящее время основным средством коррекции микроэкологических сдвигов в кишечном биоценозе являются эубиотические препараты, одним из свойств которых является иммуномоделирующая активность (В.М. Коршунов с соавт., 1997,1999; Е.В. Патрушева, 2000; И.Б. Куваева, 2001; ВА. Доценко, 2001; А.А. Воробьев, 2002). Поэтому была проведена коррекция экспериментального лекарственного дисбактериэза кисломолочным препаратом «Наринэ», представляющим собой штамм ацидофильных лактобактерий (АД Амбарцумян, 1983;Г.Б. Гукасян с соавт., 2002).

Проведенные исследования показали, что под влиянием препарата «Наринэ» наблюдалось достоверное повышение активности фагоцитирующих клеток. При сопоставлении показателей активности КЗБС эпителиоидных клеток кишечника и перитонеальных макрофагов обнаружено, что более выраженный подъем активности наблюдался в колоноцитах и энтероцитах, чем в макрофагах. Так активность колоноцитов при коррекции «Наринэ» выросла в среднем в 2,5 - 2,8 раза, энтероцитов - в 2,4-3 раза, пертонеальных макрофагов - в 2 раза.

Сопоставление характера микрофлоры кишечника животных, получавших «Наринэ», и изменений активности КЗБС фагоцитов при коррекции дисбактериоза позволило установить, что повышение активности КЗБС профессиональных и непрофессиональных фагоцитов приводит к снижению численности лакточонегативных энтеробактерий, протеев и гемолитических форм.

Полученные результаты позволяют считать, что активность кислородзависимых бактерицидных систем эпителиоидных клеток кишечника и перитонеальных макрофагов

является одним из факторов, способствующих изменению характера микрофлоры кишечника при дисбактергозе, обусловленном применением антибиотических препаратов.

Сопоставление результатов проведенных исследований позволило заключить, что при дисбактериозе, обусловленном применением антибиотических препаратов, наблюдается снижение колонизационной резистентности кишечника, связанное с нарушением защитной функции нормальной микрофлоры и нарушением механизмов местной неспецифической резистентности организма.

Выводы.

1. При дисбактераэзе кишечника, обусловленном применением антибиотиков широкого спектра действия, происходят значительные изменения в составе кишечной микрофлоры, снижение показателей местной неснецифической защиты, что свидетельствует о нарушении колонизационной резистентности.

2. Изменение состава кишечной микрофлоры характеризуется уменьшением количества постоянных (резидентных) представителей микрофлоры (бифидобактерий, лактобактерий, эшерихий), увеличением частоты находок и количества эшерихий со сниженной ферментативной активностью, гемолитических эшерихий, изменением видового состава лактобактерий в сторону уменьшения содержания Lactobacillus acidophilus, нарастанием количества лактобактерий со сниженной кислотообразующей активностью.

3. Эшерихий со сниженной ферментативной активностью и лактобакгериии, выделенные как от людей, получавших антибиотики, так и от животных с экспериментальным лекарственным дисбактериозом,' обладают низкой антагонистической активностью в отношении условно-патогенных бактерий (протеи, клебсиеллы), низкой адгезивной активностью, а также приобретают персистентные характеристики, что указывает на увеличение их агрессивности, и снижение их роли в поддержании колонизационной резистентности кишечника.

4. Обнаружено что содержание лизоцима в копрофильтратах людей, получавших антибиотики широкого спектра действия, зависит от количества бифидо- и лактобактерий в составе кишечной микрофлоры: снижение содержания данных эубионтов сопровождается достоверным снижением частоты обнаружения и количества лизоцима в копрофильтратах.

5. Установлено, что при экспериментальном дисбактериозе, обусловленном использованием антибиотиков широкого спектра действия, происходит снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем профессиональных (перитонеальные макрофаги) и непрофессиональных (энтероциты и колоноциты) фагоцитов, наиболее значительное в колоноцитах и энтероцитах по сравнению с перитонеальными макрофагами, что указывает на преимущественное снижение местной неспецифичесюй резистентности.

6. Выявлена четко выраженная зависимость характера изменений микрофлоры кишечника от состояния активности кислородзависимых бактерицидных систем колоноцитов и энтероцитов: наибольшему снижению активности кислородзависимых бактерицидных систем соответствует максимальное количество эшерихий со сниженной ферментативной активностью, гемолитических эшерихий и условно-патогенных микроорганизмов в составе микрофдоры.

7. Использование "Нарине" с целью коррекции микрофлоры приводит к повышению активности кислородзависимых бактерицидных систем местных фагоцитов и снижению количества условно-патогенных микроорганизмов.

Публикации.

1) Алешукина А.В., Голошва Е.В. Адгезивная активность эритроцитов мышей в динамике экспериментального дисбактгриоза. // Сб. «Актуальные вопросы биологии и медицины». - Нальчик, 1999.- С. 6.

2) Голошва Е.В., Алешукина А.В., Терновская Л.Н. Антагонистическая и адгезивная активности лактобактерий, выделенных от людей с дисбактериозом кишечника. // Сб. «Актуальные вопросы биологии и медицины». - Нальчик, 1999.- С. 34-36.

3) Голошва Е.В., Терновская Л.Н., Алешукина А.В. Некоторые особенности состава микрофлоры кишечника при дисбактериозах у взрослых людей. // Сб. «Актуальные вопросы биологии и медицины». - Нальчик, 1999.- С. 36-37.

4) Патрушева Е.В., Алешукина А.В., Голошва Е.В., Морозова Н.Е., Терновская Л.Н. Изменения аутофлоры мышей при экспериментальном дисбактериозе и коррекции иммунобиологическими препаратами. // Сб. «Актуальные вопросы биологии и медицины». -Нальчик, 1999.-С. 87-89.

5) Голошва Е.В., Алешукина А.В., Терновская Л.Н. Адгезивная активность эшерихий, выделенных от людей с дисбактериозом кишечника. // Сб. «Актуальные вопросы инфекционной патологии». - Ростов-на-Дону, 1999.-С. 19.

6) Голошва Е.В., Терновская Л.Н., Алешукина А.В. Персистентные характеристики эшерихий, выделенных от людей с дисбактериозом кишечника// Сб. «Актуальные вопросы инфекционной патологии». - Ростов-на-Дону, 1999. - С. 20.

7) Терновская Л.Н., Голошва Е.В., Алешукина А В. Антагонистическая активность эшерихий, выделенных от людей с дисбактериозом кишечника. // Сб. «Актуальные вопросы инфекционной патологии». - Ростов-на-Дону, 1999. - С. 21.

8) Алешукина А.В., Патрушева Е.В., Голошва Е.В., Черкашина Н.Е. Персистентные характеристики условно-патогенных энтеробактерий, выделенных из различных эпитопов при экспериментальном дисбактериозе кишечника // Материалы Конф. «Современные проблемы эпидемиологии, диагностики и лечения инфекционных и аллергических заболеваний». -Казань, 2000.-С. 12-13.

9) Алешукина А.В., Патрушева Е.В., Голошва Е.В., Морозова Н.Е., Терновская Л.Н. Показатели аутосенсибилизации при экспериментальном дисбактериозе и его коррекции иммунобиологическими препаратами // Материалы Конф. «Актуальные вопросы разработки, производства, и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов». - Уфа, 2000.-С. 209-211.

10) Голошва Е.В., Алешукина А.В., Терновская Л.Н. Влияние иммунобиологических препаратов на персистентные характеристики представителей нормальной микрофлоры при дисбактериоэе у людей. // Материалы Конф. «Актуальные вопросы разработки, производства, и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов». - Уфа, 2000. - С. 211-213.

11) Алешукина А.В., Патрушева Е.В., Голошва Е.В. Симбионтная микрофлора желудочно-кишечного тракта человека. Дисбактериоз и его коррекция. Методические рекомендации. - Ростов-на-Дону: Изд-во РГУ, 2000. - 22с.

12) Алешукина А.В., Голошва Е.В., Тришина АА., Гапон М.Н. Модификация среды для выделения лактобактерий. // Сб. «Новые технологии в медицине». - Саратов, 2001. - С. 19-20.

13) Алешукина А.В., Голошва Е.В., Тришина АА., Терновская Л.Н. и др. Питательная среда для выращивашя и дифференциации лактобактерий. // Материалы 3-й Международной научно-практ. Конф. «Актуальные вопросы разработки и производства диагностических питательных сред и тест-систем». - Махачкала, 2001. - С. 19-20.

14) Голошва Е.В., Алешукина А.В. Роль кислородзависимых бактерицидных систем фагоцитов в поддержании колонизационной резистентности организма // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов - М., 2002. -С. 160-161.

15) Голошва ЕВ., Алешукина А.В., Терновская ЛН. Персистентные характеристики энтеробактерий, выделенных в динамике экспериментального дисбакгериоза. // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов - М., 2002. -С. 161-162.

16) Терновская Л.Н., Алешукина А.В., Патрушева Е.В., Голошва Е.В. Влияние эубиотических препаратов на активность кислородзависимых бактерицидных систем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов. // Материалы Международной научно-практ. Конф. «Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования». - М, 2002. - С. 29.

17) Голошва Е.В. Влияние антибиотиков на активность кислородзависимых бактерицидных систем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов. // Материалы 68-й итоговой научной конференции сотрудников КГМУ.-Курск, 2002.—ЧЛ, С 80-81.

18) Алешукина А.В., Голошва Е.В. Колонизирующая способность лактобактерий, выделенных от людей с дисбактерисвом кишечника. // Журн. Известия ВУЗов, СевероКавказский регион. - 2003, № 1. - С. 97-99.

19) Голошва Е.В. Микроэкологические нарушения в составе нормальной микрофлоры кишечника у людей с лекарственным дисбактериозом. // Журн. Известия ВУЗов, СевероКавказский регион. - 2003, № 2. - С. 87-89.

20) Терновская Л.Н., Алешукина А.В., Голошва Е.В., Черкашина Н.Е., Калинина Т.Э., Гапон М.Н. Патент на изобретение «Питательная среда для выделения лактобактерий» № 2202609 от 20.04.2003 г.

Подписано в печать 15.03.2005 г.

Объем 1.0 п.л. Формат 60 х 84 / 16 Печать офсетная. Бумага офсетная Заказ № 777 Тираж 100 экз. Отпечатано в РЦИО, Б. Садовая, 55 тел. 240-81-24

2 2 MAP 2005

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Голошва, Елена Владимировна

СОДЕРЖАНИЕ С.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Обзор литературы.

1.1. Нормальная микрофлора кишечника, ее состав и функции.

1.2. Местный иммунитет пищеварительной системы.

1.3. Дисбактериоз кишечника.

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Методы исследования. t 2.2.1. Микробиологические методы.

2.2.2. Биохимические методы.

2.2.3. Биологические методы.

2.2.4. Статистические методы.

ГЛАВА 3. Характеристика микрофлоры кишечника людей, получавших антибиотики.

3.1. Качественный и количественный состав микрофлоры кишечника взрослых людей, получавших антибиотические препараты.

3.2. Характеристика эшерихий, выделенных от людей, получавших антибиотики.

3.2.1. Состав популяции эшерихий, выделенных от людей, получавших антибиотики.

3.2.2. Биологические свойства эшерихий со сниженной ферментативной активностью, выделенных от людей, получавших антибиотики.

3.3. Характеристика лактобактерий, выделенных от людей получавших антибиотики.

3.3.1. Состав популяции лактобактерий, выделенных от людей с дисбактериозом.

3.3.2. Биологические свойства лактобактерий, выделенных от людей с дисбактериозом.

ГЛАВА 4. Характеристика микрофлоры кишечника мышей с экспериментальным лекарственным дисбактериозом, обусловленным антибиотиками широкого спектра действия.

4.1 Характер изменений микрофлоры кишечника мышей при экспериментальном лекарственном дисбактериозе.

4.2. Биологические свойства эшерихий со сниженной ферментативной активностью, выделенных из кишечника мышей в динамике экспериментального лекарственного дисбактериоза.

4.3. Биологические свойства лактобактерий, выделенных из кишечника мышей в динамике экспериментального лекарственного дисбактериоза.

ГЛАВА 5. Изменения местного иммунитета при лекарственном дисбактериозе.

5.1. Изменения содержания лизоцима в копрофильтратах людей при дисбактериозе, обусловленном применением антибиотических препаратов.

5.2. Изменение содержания лизоцима в копрофильтратах мышей в динамике экспериментального лекарственного дисбактериоза.

5.3. Изменение активности кислородзависимых бактерицидных систем непрофессиональных фагоцитов кишечника в динамике экспериментального дисбактериоза.

5.4. Коррекция активности кислородзависимых бактерицидных систем непрофессиональных фагоцитов кишечника препаратом «Наринэ».

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изменение колонизационной резистентности кишечника при дисбактериозах, обусловленных антибиотиками широкого спектра действия"

Актуальность исследования. Организм человека с населяющей его микрофлорой составляет единую экологическую систему — макроорганизм-микрофлора, при превышении компенсаторных возможностей которой возникают микроэкологические нарушения. В поддержании динамического равновесия между микрофлорой и макроорганизмом важная роль принадлежит макроорганизму, контролирующему с помощью разнообразных факторов состав микрофлоры (В.И. Вершинина, 1981; М.М. Шкарупета, 1990; J.P. Grill et al., 1995). С другой стороны, достигнутые в последние десятилетия успехи в изучении нормальной микрофлоры, позволили сформулировать положение, что нормальная микрофлора организма человека является своеобразным «экстракорпоральным органом, регулирующим биохимические реакции и физиологические функции макроорганизма в естественных условиях его обитания» (Б. А. Шендеров, 1998). Нормальная микрофлора выполняет множество функций, поддерживающих постоянство внутренней среды макроорганизма (Б.А. Шендеров, 1998; О.Н. Минушкин с соавт., 1999). Изменения в микробиоценозах служат предвестником отклонений в физиологическом состоянии макроорганизма (И.Н. Блохина, В.Г. Дорофейчук, 1979).

Одной из важнейших функций нормальной микрофлоры является поддержание в кооперации с организмом хозяина колонизационной резистентности макроорганизма, обеспечивающей его противоинфекционную защиту. Снижение колонизационной резистентности ведет к увеличению содержания условно-патогенных микроорганизмов в полостях организма, сообщающихся с внешней средой, развитию эндогенных инфекций, суперинфекций различных локализаций (В.М. Бондаренко с соавт., 1987; А.А. Ленцнер, Х.П. Ленцнер, 1986, 1988; Н.Н. Костюкова, 1989; К.Х. Алмагамбетов с соавт., 1991; А.В. Вальппев с соавт., 1997; Ю.В. Езепчук, 1998; К. Orrhage et al., 2000). Считается, что уровень и состояние колонизационной резистентности зависят от количественного и качественного состава микрофлоры в биоценозах и условий ее обитания (А.А. Воробьев с соавт., 1997; В.М. Бондаренко с соавт.,

2003). Качественные и количественные изменения типичного для данного микробиоценоза состава микрофлоры определяется как дисбактериоз данного отдела (А.Ф. Билибин, 1975; В.Г. Петровская, О.П Марко, 1976; Б.В. Пинегин с соавт., 1984; В.Н. Красноголовец, 1989; ЕМ. Горская с соавт., 1994; В.М. Коршунов с соавт., 1994, 1997, 1999; А.А. Воробьев, Б.А. Шендеров с соавт., 1996,1997; В.Г. Лиходед с соавт., 1999; И.Б. Куваева, 2001: D. Hentegens, 1996). Причины возникновения дисбактериозов многочисленны и разнообразны (Т.А. Логадырь, 1990; О.Г. Крамарь, 1997; О.Н. Минушкин с соанг., 1999; Л.В. Крамарь с соавт., 2002; В.М. Бондаренко с соавт., 2003). Одной из ведущих причин, приводящих к развитию дисбактериозов кишечника, является широкое, не всегда обоснованное и рациональное использование антибиотиков (Б.А. Шендеров, 1988; Л.И. Кафарская с соавт., 1991; А.Ю. Барановский, Э.А. Кондрашина, 2000; В.М. Бондаренко с соавт., 2003; N. Lambert-Zechowsky et al., 1985). По данным отечественных исследователей дисбактериозы кишечника регистрируются у 65-90% населения страны.

В доступной литературе достаточно полно отражены вопросы изменения характера микрофлоры при дисбактериозах (И.А. Бочков с соавт., 1991; В.Г. Акимкин с соавт., 1996; Б.А. Ефимов с соавт., 1996; В.М. Коршунов с соавт., 2001; Н. Haenel, 1975; S.L. Gorbach, 1985), изучены биологические свойства условно-патогенных микробов, колонизирующих кишечник людей с дисбактериозом (И.Б. Куваева, Г.Г.Кузнецова, 1993; С.А. Калашникова, 1999; Н.В. Королева, 2001; Е.В. Кудря, 2002; Л.А. Леванова с соавт., 2002), описаны многочисленные изменения органов и систем (С.И. Сытник, 1988, 1994; Д.Г. Кулинич с соавт., 1992; А.А. Воробьев с соавт., 1996; Б.А. Шендеров, 1996; А.В. Валышев с соавт., 1997; И.Б. Куваева, 2001; Ю.В. Несвижский, 2003), видов обмена у людей с дисбактериозом (И.Б. Куваева, 1976; С.Д. Митрохин, 1989; С.Д. Митрохин, Б.А. Шендеров, 1991), разработана тактика восстановления микрофлоры у людей с дисбактериозом (А.А. Ленцнер с соавт., 1987; Е.А. Беюл с соавт., 1992; Б.А. Ефимов, 1993; Л.Н. Мазанкова, 1998; И.Е. Кюнкрикова, 2000; И.Б. Куваева, 2001; В.М. Бондаренко с соавт., 2003; R. Fuller, 1989; P.L. Conway et al., 1994).

Однако практически отсутствуют данные о механизмах развития дисбактериоза, нет единого мнения о связи дисбактериоза с иммунитетом. В частности, не до конца ясно, что первично в этом процессе — нарушения ли микрофлоры ведут к развитию иммунодефицитов, либо микроэкологические сдвиги в биоценозах развиваются вследствие неблагоприятного воздействия внешних факторов на систему защиты организма, особенно на местном уровне. Не до конца выяснены механизмы, влияющие на развитие микроэкологических изменений, увеличение численности условно-патогенных бактерий в биотопах организма.

Поскольку изменения количественного и качественного состава микрофлоры, определяющие уровень и состояние колонизационной резистентности, могут зависеть от действия конкретных факторов (в частности, от действия антибиотических препаратов) целью работы явилось изучение некоторых особенностей колонизационной резистентности при дисбактериозах кишечника, обусловленных антибиотическими препаратами. Для реализации цели предстояло решить следующие задачи:

1. Изучить количественный и качественный состав микрофлоры кишечника взрослых людей с дисбактериозом, обусловленным введением антибиотических препаратов.

2. Исследовать биологические свойства представителей резидентной микрофлоры у людей с дисбактериозом.

Научная новизна:

• Установлено, что при дисбактериозе, обусловленном приемом антибиотиков, как у взрослых людей, так и в эксперименте, отмечаются наиболее выраженные изменения со стороны таких представителей резидентной микрофлоры, как эшерихии и лактобактерии.

• Впервые установлено, что антибиотики широкого спектра действия существенно снижают активность кислородзависимых бактерицидных систем местных непрофессиональных фагоцитов (энтероцитов и колоноцитов). Наиболее значительное снижение активности отмечено в колоноцитах.

• Выявлено, что увеличение численности в микробной популяции эшерихий со сниженной ферментативной активностью и условно-патогенных бактерий зависит от активности кислородзависимых бактерицидных систем местных непрофессиональных фагоцитов (энтероцитов и колоноцитов).

Практическая значимость. Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии по теме «Отношение паразит-хозяин в биоценозах кишечника при лекарственном дисбактериозе» в рамках договора № 034/201/003 (2001-2005 гг.).

Полученные результаты позволили установить, что одним из механизмов, способствующих развитию микроэкологических изменений в кишечнике, может быть снижение активности местных факторов неспецифической защиты, в частности, активности кислородзависимых систем колоноцитов и энтероцитов.

Использование лактосодержащих продуктов функционального питания, в частности, кисло-молочного «Наринэ» может явиться средством профилактики дисбактериозов при проведении антибиотикотерапии препаратами широкого спектра действия.

Получен патент на изобретение «Питательная среда для выделения лактобактерий» (№ 2202609 от 20.04.2003 г.).

Оформлен и представлен на согласование в ГИСК им. JI.A. Тарасевича Экспериментально-производственный регламент на питательную среду для выделения и культивирования бифидобактерий, жидкую (ГТ-среда).

Получено разрешение Комитета медицинских иммунобиологических препаратов на внедрение в практику без проведения Гос. испытаний питательной среды для выделения и культивирования бифидобактерий, жидкой (ГТ-среда) (Выписка из протокола № 6 от 14.06.2001 г.).

Материалы диссертации использованы при подготовке Аналитического обзора «Новые подходы к коррекции и профилактике дисбакгериозов», направленного в Департамент организации и развития медицинской помощи населению МЗ РФ.

Положения, выносимые на защиту:

• При дисбактериозе кишечника, обусловленном введением антибиотиков, как у людей, так и в эксперименте на животных, происходят значительные изменения в составе кишечных микробиоценозов. Изменения полостной и мукозной микрофлоры носят синхронный характер и выражаются в основном в изменениях количественного состава и характера популяций эшерихий и лактобактерий, где нарастает численность эшерихий со сниженной ферментативной активностью, гемолитических эшерихий, лактобактерий со сниженной кислотообразующей активностью.

• При дисбактериозе, обусловленном антибиотиками широкого спектра действия, изменяются биологические свойства представителей нормальной резидентной флоры. Существенно снижаются антагонистическая и адгезивная активности эшерихий и лактобактерий, что свидетельствует об утрате ими функции поддержания колонизационной резистентности.

• Под действием антибиотиков значительно изменяются показатели местной неспецифической резистентности: снижается активность кислородзависимых бактерицидных систем местных непрофессиональных фагоцитов. Снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем предшествует изменениям в составе нормальной микрофлоры. Максимум снижения активности кислородзависимых бактерицидных систем коррелирует с повышением в составе нормальной микрофлоры количества эшерихий со сниженной ферментативной активностью и условно-патогенных микроорганизмов, особенно протея и гемолитических эшерихий. Использование «Наринэ» стимулирует активность кислородзависимых бактерицидных систем, приводит к уменьшению в кишечной микрофлоре количества эшерихий со сниженной ферментативной активностью и условно-патогенных бактерий.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 26 работ, изданы методические рекомендации, оформлен патент на питательную среду, оформлен экспериментально-производственный регламент.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 179 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 3 глав собственных исследований, заключения и выводов. Список литературы включает 266 источников, в том числе, отечественных 180 и зарубежных 86. Работа иллюстрирована 40 таблицами и 23 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Голошва, Елена Владимировна

Выводы.

1. При дисбактериозе кишечника, обусловленном применением антибиотиков широкого спектра действия, происходят значительные изменения в составе кишечной микрофлоры, снижение показателей местной неспецифической защиты, что свидетельствует о нарушении колонизационной резистентности.

2. Изменение состава кишечной микрофлоры характеризуется уменьшением количества постоянных (резидентных) представителей микрофлоры (бифидобактерий, лактобактерий, эшерихий), увеличением частоты находок и количества эшерихий со сниженной ферментативной активностью, гемолитических эшерихий, изменением видового состава лактобактерий в сторону значительного уменьшения содержания Lactobacillus acidophilus, нарастанием количества лактобактерий со сниженной кислотообразующей активностью.

3. Эшерихии со сниженной ферментативной активностью и лактобактерии, выделенные, как от людей, получавших антибиотики, так и от животных с экспериментальным лекарственным дисбактериозом, обладают низкой антагонистической активностью в отношении условно-патогенных бактерий (протеи, клебсиеллы), низкой адгезивной активностью, а также приобретают персистентные характеристики, что свидетельствует об увеличении их агрессивности и снижении их роли в поддержании колонизационной резистентности кишечника.

4. Обнаружена четко выраженная зависимость между содержанием лизоцима в копрофильтратах людей, получавших антибиотики широкого спектра действия, и количеством бифидо- и лактобактерий в составе кишечной микрофлоры: снижение содержания данных эубионтов сопровождается достоверным снижением частоты обнаружения лизоцима в копрофильтратах.

5. Установлено, что при экспериментальном дисбактериозе, обусловленном использованием антибиотиков широкого спектра действия, происходит существенное изменение активности кислородзависимых бактерицидных систем профессиональных (перитонеальные макрофаги) и непрофессиональных (энтероциты и колоноциты) фагоцитов. Наиболее значительное снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем регистрируется в колоноцитах и энтероцитах по сравнению с перитонеальными макрофагами, что указывает на снижение местной неспецифинеской резистентности.

6. Выявлена четко выраженная зависимость характера изменений микрофлоры кишечника от состояния активности кислородзависимых бактерицидных систем колоноцитов и энтероцитов: наибольшему снижению активности кислородзависимых бактерицидных систем соответствует максимальное количество эшерихий со сниженной ферментативной активностью и условно-патогенных микроорганизмов в составе микрофлоры.

7. Использование «Наринэ» с целью коррекции микрофлоры приводит. к повышению активности кислородзависимых бактерицидных систем местных фагоцитов и снижению количества условно-патогенных микроорганизмов.

155

Заключение.

Дисбактериозы остаются актуальной проблемой здравоохранения. Микроэкологические изменения в микрофлоре кишечника регистрируются практически у 90% населения нашей страны (А.А. Воробьев с соавт., 1997). Накопленные знания позволяют считать микрофлору организма человека экстракорпоральным органом, выполняющим многообразные функции по поддержанию нормального гомеостаза (Б.А. Шендеров, 1998). Изменения в составе нормальной микрофлоры ведут к развитию процессов, сказывающихся на состоянии здоровья людей (И.Н. Блохина, 1979; Н.Н. Лизько, 1987; Е.М. Горская с соавт., 1992; А.А. Ленцнер, 1996; О.В. Бухарин, 1996; Б.А. Шендеров, 1996, 1998; В.М. Бондаренко с соавт., 2003).

Одной из важнейших функций нормальной микрофлоры является обеспечение колонизационной резистентности. Под колонизационной резистентностью понимают совокупность механизмов, придающих стабильность нормальной микрофлоре, предотвращающих заселение организма хозяина посторонними микроорганизмами (Б.А. Шендеров, 1988; О.В. Бухарин с соавт., 1996; А.А. Воробьев с соавт., 1997; В.М. Бондаренко с соавт., 2003). Снижение колонизационной резистентности, обусловленное различными причинами, приводит к значительному снижению противоинфекционной защиты организма, увеличению численности условно-патогенных микробов, их транслокации из мест первичной локализации с возможным развитием воспалительных заболеваний (В.Г. Петровская, 1982; К.Х. Алмагамбетов с соавт., 1991; В.М. Бондаренко 1996, 2003; О.В. Бухарин, 1999).

Развитию дисбактериоза кишечника способствуют многие факторы, среди которых значительное место занимает нерациональное применение антибиотических препаратов. В доступной литературе последних лет (Е.М. Горская с соавт., 1995; А.Ю. Барановский с соавт., 2000; В.М. Бондаренко с соавт., 2003) прослежены изменения показателей общего иммунитета при дисбактериозе, обусловленном антибиотическими препаратами. В то же время, существует мнение (О.Н. Минушкин с соавт., 1999), что дисбактериоз является процессом, протекающим непосредственно на эпителиальных поверхностях слизистых оболочек, в частности, кишечника.

Так как колонизационная резистентность определяется составом нормальной микрофлоры (А.А. Воробьев с соавт., 1997), первым этапом исследования явилось изучение характера микроэкологических нарушений в составе микрофлоры кишечника людей, получавших короткие курсы антибиотических препаратов широкого спектра действия.

Анализ полученных данных позволил заключить, что применение антибиотических препаратов приводит к существенным изменениям в составе микробиоценоза кишечника. При этом в результате антибиотикотерапии изменяется состав постоянных представителей, как анаэробной, так и факультативно-анаэробной микрофлоры. Достоверно снижается количество бифидобактерий (lg 6,2 ± 0,5 КОЕ/г по сравнению с lg 8,4 ± 0,6 КОЕ/г в группе лиц не получавших антибиотики, t = 2,75). Отмечаются изменения в составе популяции эшерихий и лактобактерий: увеличивается содержание эшерихий со сниженной ферментативной активностью (lg 4,2 ± 0,4 КОЕ/г против lg 1,6 ± 0,4 КОЕ/г в группе лиц, не получавших антибиотики), гемолитических эшерихий (lg 1,03±0,8 против lg 0,3±0,03 КОЕ/г соответственно), лактобактерий со сниженной кислотообразующей способностью (в 3,6 раза по сравнению с людьми, не получавшими антибиотики).

В группе лиц, получавших антибиотики, достоверно чаще по сравнению с группой условно-здоровых людей встречаются случаи низкого содержания представителей резидентной микрофлоры. Особенно четко это выражено в популяциях эшерихий и лактобактерий. Случаи содержания эшерихий ниже 10 в группе лиц, получавших антибиотики, выявлены в 55,3 ± 2,0 % случаев, тогда как в группе условно-здоровых лиц - в 17,2 ± 4,7% (t = 6,6). Сниженное содержание лактобактерий обнаружено в 69,5 ± 1,9% случаев против 42,2 ± 6,2% (t = 4,3). Сниженное количество бифидо- и лактобактерий сочеталось со снижением количества эшерихий с нормальной ферментативной активностью, что является характерной особенностью дисбиотических расстройств.

Анализ содержания в составе кишечной микрофлоры количества эшерихий со сниженной ферментативной активностью и гемолитических эшерихий в зависимости от количества присутствующих в кишечном микробиоценозе бифидо- и лактобактерий обнаружил отсутствие какой-либо связи. Гемолитические эшерихии и эшерихии со сниженной ферментативной активностью обнаруживались с одинаковой частотой как у людей с содержанием бифидо- и лактобактерий в пределах нормы, так и при их сниженном количестве (70,1 ± 2,7% и 66,7 ± 5,9% соответственно, t < 2).

Не удалось выявить какой-либо зависимости между содержанием бифидо- и лактобактерий в нормальном и сниженном количестве в составе микрофлоры и повышением численности лактозонегативных энтеробактерий. Видимо, как полагает В.Г. Лиходед с соавторами (1999), увеличение содержания в микробиоценозах гемолитических эшерихий и лактозонегативных энтеробактерий, определяется какими-то другими механизмами.

Так как в популяции эшерихий у людей, получавших антибиотики, существенно увеличивается количество эшерихий со сниженной ферментативной активностью, были изучены основные биологические свойства этих бактерий: антагонистическая, адгезивная активности, наличие персистентных характеристик. Обнаружено, что эшерихии со сниженной ферментативной активностью, по сравнению с эшерихиями с нормальной ферментативной активностью, обладают сниженной антагонистической, адгезивной, антилизоцимной активностью.

Антагонистическая активность эшерихий со сниженной ферментативной активностью сохраняется в отношении патогенных энтеробактерий: 75,3 ± 3,5% штаммов имели низкую, 24,6 ± 3,5% - среднюю и высокую степень активности в отношении шигелл; среди эшерихий с нормальной ферментативной активностью - 68,0 ± 6,6% и 32,0 ± 6,6% соответственно, t < 2. Существенно снижается антагонистическая активность по отношению к условно-патогенным энтеробактериям, имеющим большое значение при дисбактериозах кишечника. Так в отношении клебсиелл 90,0 ±

2,4%, в отношении двух видов протеев 98,7 ± 0,9% и 100% штаммов эшерихий со сниженной ферментативной активностью обладали низкой степенью антагонистической активности (в случае эшерихий с нормальной ферментативной активностью - 64,0 ± 6,7%, 86,0 ± 4,9% и 76,0 ± 6,0 %; t = 3,7, t = 4, t = 2,5 соответственно). В отношении протеев не выявлялись высокоактивные штаммы эшерихий со сниженной ферментативной активностью.

Низкий уровень среднего показателя адгезии обнаруживался у 56,0 ± 7,0% эшерихий со сниженной ферментативной активностью против 38,0 ± 6,8% эшерихий с нормальной активностью (t = 2). Среднеадгезивных и высокоадгезивных эшерихий со сниженной ферментативной активностью было зафиксировано соответственно 34,0 ± 6,7% и 10,0 ± 4,2% соответственно против 44,0 ± 7,0 и 18,0 ± 5,4% штаммов с нормальной ферментативной активностью.

Изменения биологических свойств эшерихий со сниженной ферментативной активностью может свидетельствовать об утрате ими своей роли в обеспечении колонизационной резистентности.

Изучение состава популяции лактобактерий, выделенных от людей, получавших антибиотики, показало, что существенно меняется их видовой состав. Так снижается число видов в популяции (у условно-здоровых - 14, у получавших антибиотики - 9), снижается численность L.acidophilus (с 12,0% в группе условно-здоровых до 1,4% в группе лиц, получавших антибиотики), появляются виды более свойственные другим отделам, в частности L.salivarius (12,0% против 1,0% у условно-здоровых людей), возрастает роль L.bulgaricus (1,4% против 1,0% соответственно).

Использование разработанной нами питательной среды для выделения лактобактерий (патент № 22002609 от 20.04.2003 г.) позволило выявить неоднородность популяции лактобактерий по признаку кислотообразования. У людей, получавших антибиотики, увеличивается количество лактобактерий со сниженной кислотообразующей активностью (51,4 ± 3,8% против 14,1 ± 4,3% в группе условно-здоровых людей, t = 6,7).

Большинство штаммов лактобактерий, выделенных от людей, получавших антибиотики, обладало низкой степенью антагонистической активности в отношении шигелл (55,5 ± 4,4% против 9,0 ± 2,8% в группе условно-здоровых лиц, t = 9,3), клебсиелл (77,4 ± 3,7% против 35,0 ± 4,8%, t = 7,1), двух видов протеев (76,6 ± 3,7% и 75,8 ± 3,8% против 21,0 ± 4,0% и 18,0 ± 3,8%, t = 10,3 и t = 10,9 соответственно). В группе лиц, получавших антибиотики, не обнаруживалось высокоактивных штаммов в отношении клебсиелл и протеев.

Полученные данные об изменении биологических свойств лактобактерий также свидетельствуют о частичной утрате ими способности к поддержанию колонизационной резистентности.

Обнаружение существенных качественных и количественных изменений в составе микробиоценозов кишечника людей, получавших антибиотики, и изменений биологических свойств основных представителей резидентной микрофлоры послужило основанием для проведения второго этапа исследования — экспериментального — воспроизведения дисбактериоза, обусловленного антибиотиками широкого спектра действия. Использование экспериментальной биологической модели позволило проследить не только за изменениями в составе полостной, но и пристеночной микрофлоры, а также показателей местной неспецифической резистентности организма.

Характер микрофлоры животных, получавших антибиотики, был сопоставлен с характером микрофлоры животных, не получавших антибиотики. Анализ полученных данных свидетельствует, что введение терапевтических доз антибиотиков привело к изменению характера полостного микробиоценоза.

Обращает на себя внимание, что количество бифидобактерий в результате антибиотикотерапии снизилось незначительно (lg 7,7 ± 0,2 КОЕ/г против lg 8,0 ± 0,6 КОЕ/г в группе контрольных животных), в то время как снижение количества лактобактерий было более выраженным (lg 6,3 ± 0,2 против lg 7,1 ± 0,5 КОЕ/г соответственно, t = 1,6). В составе полостной микрофлоры мышей достоверно снизилось количество эшерихий (lg 5,4 ± 0,3 против lg 7,4 ± 0,4 в группе интактных животных, t = 4). Существенно возросло количество условно-патогенных микроорганизмов, в том числе, лактозонегативных энтеробактерий (lg 2,5 ± 0,2 против lg 1,9 ± 0,6 КОЕ/г в контроле), бактерий рода Proteus (lg 2,8 ±0,1 против lg 2,1 ± 0,1 КОЕ/г), гемолитических форм в основном за счет кокковых видов (lg 2,3 ±0,1 против lg 0,4 ± 0,07 КОЕ/г), стафилококков, в том числе, золотистых (lg 1,6 ± 0,2 против lg 1,0 ± 0,3 КОЕ/г).

В результате антибиотикотерапии произошли изменения в составе мукозной микрофлоры. Мало изменилось количество бифидо- и лактобактерий, ассоциированных с поверхностью крипт. В составе эшерихий отмечено значительное увеличение их количества (lg 4,5 ± 0,2 против lg 2,2 ± 0,1 КОЕ/г в контрольной группе мышей), главным образом за счет эшерихий со сниженной ферментативной активностью, доля которых в популяции достигла 90%. В мукозной микрофлоре мышей, подвергшихся антибиотикотерапии, резко увеличилось содержание условно-патогенных бактерий. Количество гемолитических кокковых форм выросло в 18 раз (с lg 0,2 ±0,01 в контрольной группе до lg 3,6 ± 0,1 КОЕ/г у мышей с лекарственным дисбактериозом), лактозонегативных энтеробактерий - в 3,6 раза (с lg 1,2 ± 0,1 до lg 4,3 ±0,1 КОЕ/г соответственно), бактерий рода Proteus - в 9,25 раза (с lg 0,4 ± 0,02 до lg 3,7 ± 0,2 КОЕ/г соответственно), стафилококков, в том числе золотистых, и грибов рода Candida.

Поскольку мукозная микрофлора вносит основной вклад в обеспечение колонизационной резистентности (О.В. Чахава, 1982; Б.В. Пинегин с соавт., 1984; Д. Ван-дер-Ваай, 1992; M.J. Orrhage et al., 1994), изменение ее состава служит свидетельством нарушения колонизационной резистентности кишечника.

Использование различных антибиотиков для создания экспериментального лекарственного дисбактероза позволило сопоставить характер изменений в микробиоценозах кишечнка. Было обнаружено, что при сохранении основных тенденций, характеризующих нарушения состава кишечной микрофлоры, степень выраженности этих нарушений зависела от выбранного антибиотка. Отмечено, что из трех использованных антибиотиков наибольшее действие на состав микрофлоры оказывал гентамицин, в меньшей степени цефазолин, наиболее щадящим было действие ципрофлоксацина.

Был прослежен характер изменений состава кишечной микрофлоры мышей в динамике экспериментального лекарственного дисбактериоза.

Проведенные исследования количественного состава полостной и мукозной микрофлоры показали, что бифидо- и лактобактерии подвергались наименьшим изменениям. Численность их популяций на протяжении всего срока наблюдений практически мало отличалось от уровня значений контрольной группы.

Изучение биологических свойств эшерихий со сниженной ферментативной активностью, преобладающих в кишечнике мышей с экспериментальным лекарственным дисбактериозом, показало, что степень их антагонистической и адгезивной активности была низкой. Большинство штаммов обладало низкой антагонистической активностью в отношении P.mirabilis (66,7 ± 4,8%), P.vulgaris (63,6 ± 4,9%), S.aureus (62,5 ± 4,9%). В отношении шигелл и клебсиелл 42,7 ± 5,0% и 45,8 ± 5,1% штаммов были низко активными. Высокая степень антагонистческой активности среди всех изученных штаммов встречалась в единичных случаях (2,1 ± 1,4 — 9,4 ± 3,0%). 90,0 ± 4,2% выделенных от мышей эшерихий со сниженной ферментативной активностью имели низкий уровень среднего показателя адгезии. Высокоадгезивных штаммов не обнаруживалось.

В то же время для эшерихий со сниженной ферментативной активностью, выделенных из кишечника мышей, была характерна высокая частота встречаемости антилизоцимного признака (98,4 ± 1,1% исследованных штаммов). Степень выраженности способности к инактивации лизоцима была также высока и приближалась к уровню условно-патогенных энтеробактерий (5,6 мкг лизоцима/ мл среды и 5,4 мкг/мл соответственно). Данное обстоятельство свидетельствует о нарастании патогенных свойств в популяции эшерихий, вегетирующих в кишечнике мышей с экспериментальным лекарственным дисбактериозом, и утрате ими места нормальных эубионтов.

В ходе изучения биологических свойств лактобактерий, выделенных от мышей в динамике экспериментального лекарственного дисбактериоза, было отмечено снижение их колонизирующей способности. Способностью к синтезу лизоцима в незначительной степени обладали только 15,0 ± 3,5% лактобактерий. Большинство изученных штаммов обнаружило низкую антагонистическую активность в отношении Kl.pneumoniae (75,0 ± 4,3%), P.vulgaris (72,0 ± 4,5%), P.mirabilis (70,0 ± 4,6%), S.aureus (87,0 ± 3,4%), а также в отношении шигелл (49,0 ± 5,0%). Высокая антагонистическая активность в отношении указанных штаммов встречалась в единичных случаях (1,0 ± 0,9 - 5,0 ± 2,0%). Подавляющее большинство штаммов лактобактерий, выделенных от мышей, были неадгезивными (84,0 ± 5,2% по СПА и 64,0 ± 6,8% по ИАМ).

Так как существенную роль в поддержании колонизационной резистентности организма играет местный иммунитет (Г.И. Подопригора, 1990), представляло интерес выяснить, как изменяется активность показателей местной неспецифической резистентности в динамике экспериментального дисбактериоза. К числу местных неспецифических факторов противоинфекционной защиты относится фагоцитарная активность местных макрофагов, а также антибактериальные и антивирусные субстанции (лизоцим, интерферон) (Я.С. Шварцман, Л.Б. Хазенсон, 1978; Л.Б. Хазенсон, 1984).

Считается, что снижение содержания лизоцима ведет к ослаблению колонизационной резистентности слизистой оболочки кишечника (Э.Г. Щербакова с соавт., 1999, 2000), поэтому была изучена частота встречаемости различных концентраций лизоцима в копрофильтратах людей, получавших и не получавших антибиотики.

Анализ полученных данных показал, что в копрофильтратах лиц, получавших антибиотики, достоверно чаще обнаруживались высокое содержание лизоцима (79,3 ± 1,2% против 31,2 ± 5,8% в группе условно-здоровых лиц, t = 8,2), что может свидетельствовать о наличии воспалительного процесса в слизистой (О.В. Бухарин с соавт., 1979).

Так как содержание лизоцима в кишечнике складывается из лизоцима, секретируемого слизистой оболочкой, и микробного лизоцима (О.В. Бухарин с соавт., 1985), была проанализирована зависимость между содержанием лизоцима в копрофильтратах и изменениями в составе микрофлоры кишечника людей, получавших антибиотики.

Установлена четкая зависимость между содержанием лизоцима в копрофильтратах и содержанием бифидо- и лактобактерий в составе кишечной микрофлоры людей с дсбактериозом, обусловленным антибиотическими препаратами. Снижение содержания бифидо- и лактобактерий сопровождалось достоверным снижением частоты обнаружения лизоцима в копрофильтратах (t = 2,1). Количественные значения лизоцима в копрофильтратах таких людей были также ниже, чем у людей с нормальным содержанием бифидо- и лактофлоры (2,45 мкг/мл и 3,25 мкг/мл соответственно).

Не обнаружено достоверных отличий (t = 0,4) в частоте выявления и количестве лизоцима в копрофильтратах в зависимости от преобладания в составе кишечной микрофлоры людей с лекарственным дисбактериозом эшерихий с нормальной либо сниженной ферментативной активностью.

Складывается впечатление, что содержание лизоцима в копрофильтратах людей с дисбактериозом, обусловленным антибиотиками, зависит как от состава кишечной микрофлоры, так и от состояния слизистой оболочки кишечника, что согласуется с точкой зрения В.М. Бондаренко с соавторами (2003) о измененном морфологическом статусе слизистой оболочки толстого кишечника при дисбактериозе.

Изучение содержания лизоцима в копрофильтратах мышей в динамике экспериментального дисбактериоза также показалоналичие определенной зависимости между характером изменений состава микрофлоры кишечника и количеством лизоцима в копрофильтратах. Достоверное увеличение количества высеваемых из кишечника условно-патогенных микроорганизмов, в особенности стафилококков, сопровождалось повышением концентрации лизоцима в копрофильтратах.

О.Н. Минущкин с соавторами (1999), В.М. Бондаренко с соавторами (2003) предлагают рассматривать развитие микроэкологических нарушений как патологический процесс, протекающий непосредственно на поверхности эпителиоидных клеток кишечника — энтероцитах и колоноцитах. Однако механизмы, обусловливающие снижение местной неспецифической резистентности, в частности, изменение фагоцитарной активности местных непрофессиональных фагоцитов и связь этихпроцессов с измененимем характера микрофлоры при дисбактериозах,вызванных антибиотиками, не до конца ясны.

Известно, что исход фагоцитарной реакции определяется состоянием бактерицидных систем фагоцитирующих клеток, поэтому была исследована активность кислородзависимых бактерицидных систем непрофессиональных фагоцитов кишечника (энтероцитов и колоноцитов) и перитонеальных макрофагов в динамике экспериментального дисбактериоза, обусловленного антибиотиками широкого спектра действия.

Порведенные исследования показали, что активность кислородзависимых бактерицидных систем (КЗБС) эпителиоидных клеток кишечника интактных мышей определялась на сравнительно высоком уровне (142,3 ±11,4 Ед. в энтероцитах, 156,5 ± 12,6 Ед. в колоноцитах), превышая значения активности КЗБС перитонеальных макрофагов (117,8 ± 9,4 Ед.).

Все взятые в опыт антибиотики значительно снижали активность КЗБС, но в разной степени. Наиболее значительно активность КЗБС снижалась под действием цефазолина: в колоноцитах - в 4,4 раза, энтероцитах — в 3,6 раза, перитонеальных макрофагах — в 3,2 раза. Более умеренно снижалась активность под действием гентамицина: в колоноцитах - в 2,14 раза, энтероцитах - 1,9 раза, перитонеальных макрофагах — 1,7 раза. Самое низкое снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем отмечалось при введении ципрофлоксацина: в колоноцитах — в 2 раза, в энтероцитах и перитонеальных макрофагах - в 1,4 раза.

Была изучена динамика изменений активности КЗБС при экспериментальном дисбактериозе, обусловленном гентамицином. Анализ полученных результатов показал, что падение активности КЗБС во всех исследованных клетках происходит с одинаковой закономерностью: наиболее четко снижалась активность КЗБС колоноцитов, в меньшей степени энтероцитов и перитонеальных макрофагов. Снижение активности КЗБС фиксировалось уже на 3-5 сутки после отмены антибиотика: в колоноцитах она падала до 46,0 ± 3,06 Ед., энтероцитах - 62,0 ± 5,5 Ед., перитонеальных макрофагах — до 45,0 ± 2,8 Ед. Начиная с 10-х суток после отмены гентамицина активность КЗБС фагоцитирующих клеток несколько повышалась, но и к концу срока наблюдений (31 сутки) оставалась в несколько раз ниже (в колоноцитах — в 3 раза, энтероцитах — в 2 раза, перитонеальных макрофагах - в 2,3 раза) показателей контрольной группы мышей.

Сопоставление результатов изучения активности КЗБС непрофессиональных фагоцитов в динамике экспериментального дисбактериоза, обусловленного цефазолином и ципрофлоксацином, позволило выявить наличие той же закономерности, что и при введении гентамицина: активность КЗБС снижается более значительно в колоноцитах, чем энтероцитах, снижение активности отмечается с 3 дня после отмены антибиотиков, максимум падения активности приходится на 3-10 сутки. В отличие от гентамицина активность КЗБС при введении цефазолина и ципрофлоксацина восстанавливалась более быстро и приближалась к показателям контрольной группы животных уже к 18 дню наблюдений.

Так как активность кислородзависимых бактерицидных систем в определенной степени влияет на состояние местного иммунитета, представляло интерес сопоставить данные об изменении активности КЗБС и микроэкологических нарушениях в микробиоценозах кишечника.

Наиболее низкие значения активности КЗБС сочетались со снижением количества нормальных эубионтов в микрофлоре кишечника (бифидобактерий до lg 6,0 ± 0,4, лактобактерий до lg 6,0 ± 0,3, эшерихий до lg 4,5 ± 0,4) и нарастанием в популяции эшерихий штаммов со сниженной, ферментативной активностью, которые с 17-х суток и до конца срока наблюдений составляли более 90% популяции. Падение активности КЗБС фагоцитирующих клеток на 3-5 сутки после отмены антибиотика сочеталось также с достоверным увеличением количества условно-патогенных микроорганизмов. На протяжении практически всего срока наблюдений низким значениям активности КЗБС соответствовали высокие количества лактозонегативных энтеробактерий, протеев, стафилококков, в том числе золотистых, гемолитических кокковых форм. Наблюдавшаяся к концу эксперимента тенденция к росту активности КЗБС колоноцитов и энтероцитов сочеталась с уменьшением численности условно-патогенных бактерий, высеваемых из кишечника мышей.

В настоящее время одним из основных средств коррекции микроэкологических сдвигов в кишечном биоценозе являются эубиотические препараты, содержащие лактобактерии, обладающие иммуномодулирующим действием (В.М. Коршунов с соавт., 1999; Е.В. Патрушева, 2000; И.Б. Куваева, 2001; В.А. Доценко, 2001; А.А. Воробьев, 2002). Поэтому была проведена коррекция экспериментального лекарственного дисбактериоза кисломолочным препаратом «Наринэ», представляющим собой ацидофильный штамм лактобактерий (А.Д. Амбарцумян, 1983; Г.Б. Гукасян с соавт., 2002).

Проведенные исследования показали, что под влиянием препарата «Наринэ» наблюдалось достоверное повышение активности фагоцитирующих клеток. При сопоставлении показателей активности КЗБС эпителиоидных клеток кишечника и перитонеальных макрофагов обнаружено, что более выраженный подъем активности наблюдался в большей степени в колоноцитах и энтероцитах, чем в макрофагах. Так активность колоноцитов при коррекции «Наринэ» выросла в среднем в 2,5 -2,8 раза, энтероцитов — в 2,4—3 раза, пертонеальных макрофагов — в 2 раза.

Сопоставление характера микрофлоры кишечника животных, получавших «Наринэ», и изменений активности КЗБС фагоцитов при коррекции дисбактериоза позволило установить, что повышение активности КЗБС профессиональных и непрофессиональных фагоцитов приводит к снижению численности лактозонегативных энтеробактерий, протеев и гемолитических форм.

Полученные результаты позволяют считать, что активность кислородзависимых бактерицидных систем эпителиоидных клеток кишечника может быть одним из факторов, способствующих изменению характера микрофлоры кишечника при дисбактериозе, обусловленном применением антибиотических препаратов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Голошва, Елена Владимировна, Ростов-на-Дону

1. Адо А.Д. Общая аллергология. — М.: Медицина, 1970. — 543с.

2. Амбарцумян А.Д. Эпидемиологическая эффективность молочнокислых бактерий «Наринэ» в профилактике носительства госпитальных штаммов золотистых стафилококков.//Дис. .канд.мед.наук. — М., 1983.- 138с.

3. Амбарцумян К.Ф., Саркисян Б.Г. Полостная и пристеночная микрофлора кишечника при синдроме раздраженной толстой кишки.//Биол.журн.Армении. 1989. - № 11. - С.1032-1034.

4. Алмагамбетов К.Х., Бондаренко В.М. Моделирование транслокации кишечной микрофлоры на конвенциональных животных // Журн.микробиол. 1991. -№ 8. -С.15-17.

5. Алмагамбетов К.Х., Горская Е.М., Бондаренко В.М. Транслокация кишечной микрофлоры и ее механизмы // Журн.микробиол. 1991. -№10. - С.74-79.

6. Алмагамбетов К.Х., Бондаренко В.М., Горская Е.М. Характеристика колонизационной резистентности кишечника конвенциональных животных, перенесших клиническую смерть // Журн.микробиол. — 1992. -№ 7-8. -С.8-11.

7. Байбеков И.М., Мавлян-Ходжаев Р.Ш., Ирсолиев Х.И. Взаимодействие индигенных пристеночных микроорганизмов с клетками слизистой оболочки пищеварительного тракта.//Архив патологии. — 1992. — Т.54. -№5.-С. 18-24.

8. Баранов А.А., Дорофейчук В.Г. Лизоцим: теория и практика. Москва -Нижний Новгород, 1999. 126с.

9. Барановский А.Ю., Кондрашина Э.А. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника. СПб: Питер, 2000. - 224с.

10. Беюл Е.А., Будаговская В.Н., Высоцкий В.Г. и др. Справочник по диетологии / Под ред. М.А. Самсонова, А.А. Покровского. — М.: Медицина, 1992. 464 с.

11. Беюл Е.А., Куваева И.Б. Дисбактериозы кишечника и их клиническое значение.// Клиническая медицина. 1986.- № 11. - С. 37-44.

12. Беляков В.Д. Саморегуляция паразитарных систем. JL: Медицина, 1987.-43с.

13. Беляков И.М. Иммунная система слизистых // Иммунология. 1997. -№4.-С.7-13.

14. Блохина И.Н., Дорофейчук В.Г. Дисбактериозы. JL: Медицина, 1979.

15. Блохина И.Н. Дисбактериоз и его профилактика // Педиатрия 1981. -№10.

16. Блюгер А.Ф., Векслер Х.М., Новицкий И.Н. Клиническая иммунология кишечных инфекций. Рига: «Звайгзне», 1980. - 212с.

17. Бозиев В.Б. Антилизоцимная активность энтеробактерий. Дис. .канд.мед.наук. Ростов-на-Дону, 1995. — 130с.

18. Бондаренко В.М., Боев Б.Г., Лыкова Е.А., Воробьев А. А. Дисбактериозы желудочно-кишечного тракта // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. — 1998. № 8(1). - С. 66-70.

19. Бондаренко В.М., Мавзютов А.Р., и др. Секретируемые факторы патогенности энтеробактерий // Журн.микробиол. 2002. - №1. - С. 8490.

20. Бондаренко В.М., Грачева Н.М., Мацулевич Т.В. Дисбактериозы кишечника у взрослых. М.:, КМК 2003. - 224с.

21. Бондаренко В.М., Петровская В.Г. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры // Вестник РАМН 1997. - №3. - С.7-10.

22. Бочков И.А., Овчарова Н.М. Бактериальная колонизация и сукцессия у новорожденных детей в аспекте проблемы госпитальной инфекции // Журн.микробиол. 1991. - №8. - С.71-75.

23. Брилис В.И. Адгезивные свойства лактобацилл. Автореф. дисс. .канд.мед.наук. М., 1983, 19с.

24. Брилис В.И., Брилене Т.А., Ленцнер Х.П., Ленцнер А.А. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов.//Лаб.дело. — 1986.0 №4.-С. 210-212.

25. Брудастов Ю.А. Антикомплементарная активность бактерий.// В сб.:Персистенция бактерий. Куйбышев: КМИ, 1990. С. 100-107.

26. Бурмистрова А.Л. Метаморфозы и пути развития воспалительных заболеваний кишечника. — Челябинск, 1997. 216с.

27. Бурмистрова А.Л., Суслова Т.А., Голикова А.К. Коррекция дисбактериоза кишечника с использованием анти-НЬА-сывороток // Сборник трудов 1-й Национальной конференции РААКИ. Москва, 28* 31 января 1997. С.452.

28. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. М.:Медицина.-1999.-364C.

29. Бухарин О.В., Валышев А.В., Елагина Н.Н. Антилизоцимная активность анаэробных бактерий фекальной микрофлоры человека.//Журн.микробиол. 2000. - № 5. - С.20-22.

30. Бухарин О.В., Валышев А.В., Перунова Н.Б. и др. Бактериально-грибковые ассоциации кишечника в условиях колонизации дрожжеподобными грибами рода Candida // Журн.микробиол. — 2002. -№5.-С. 45-48.

31. Бухарин О.В., Валышев А.В., Челпаченко О.Е. и др. Колициногенная активность кишечной микрофлоры как показатель дисбиотического состояния желудочно-кишечного тракта // Журн.микробиол. — 2002. -№4.-С. 55-57.

32. Бухарин О.В., Васильев Н.В., Усвяцов Б.Я. Лизоцим микроорганизмов. -Томск, 1985.-214с.

33. Бухарин О.В., Волков А.Н., Скачков М.В. и др. Применение сигнального способа диагностики острой дезентерии по определению количества лизоцима в копрофильтратах. Методические рекомендации. -Оренбург, 1979.-8с.

34. Бухарин О.В., Литвин В.Ю. Патогенные бактерии в природных t экосистемах. Екатеринбург: УРО РАН, 1997. 277с.

35. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я. Бактерионосительство (медико-биологический аспект). Екатеринбург: УРО РАН, 1996. -207с.

36. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Чернова О. Л. Патогенетические особенности формирования бактерионосительства // Журн.микробиол. -1996.-№2.-С. 98-101.

37. Валышев А.В., Зыкова Л.С., Коннова М.Е. Скрининговая диагностика дисбиоза кишечника.// Журн.микробиол. 1994. - № 8-9. - С.24-25.

38. Валышев А.В., Гильмутдинова Ф.Г., Фомичева С.В. Факторыперсистенции энтеробактерий фекальной флоры при дисбиозе кишечника // Журн.микробиол. 1996. - № 3. - С.96-98.

39. Валышев А.В., Гильмутдинова Ф.Г., Третьяков А.А. и др. Роль персистирующей условно-патогенной микрофлоры кишечника при дисбиозе в возникновении гепатобилиарной системы // Журн.микробиол. 1997. - № 4. - С. 87-88.

40. Ван-дер-Ваай Д. Пищеварительный тракт как главный эндогенный источник бактериальных и грибковых инфекций. Важность поддержания колонизационной резистентности // Антибиотики и химиотерапия. 1992. - Т. 37. - №6. - С. 36-41.

41. Вахитов Т.Я., Добролеж О.В., Петров JI.H. и др. Сравнительное изучение действия экзометаболитов Escherichia coli М-17 и фруктоолигосахаридов на рост и антагонистическую активность лактобацилл // Журн.микробиол. 2001. - №3. - С. 80-83.

42. Вершигора А.Е., Позур В.К. Иммунобиологическая активность пептидогликана клеточных стенок грамположительных бактерий.//Успехи современной биологии. 1986. - Т. 102, №6. - С. 344-360.

43. Воеводин Д.А., Розанова Г.Н., Стенина М.А. и др. Роль дисбактериоза в формировании хронической неинфекционной патологии у детей // Журн.микробиол. 2001. - № 6. - С. 88-93.

44. Войно-Ясенецкий М.В. Биология и патология инфекционных процессов. JL: Медицина, 1981. 208с.

45. Волчегорский И.А., Долгушин И.И., Колесников O.JL, Цейликман В.Э. Роль иммунной системы в выборе адаптационной стратегии организма. Челябинск, 1988.

46. Воробьев А.А. Иммуномодуляторы: принципы классификации и стратегия применения в медицине // Вестн. РАМН. 2002. - № 4. - С. 3-6.

47. Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М., Шендеров Б.А. Дисбактериозы актуальная проблема медицины // Вестн. РАМН. -1997. -№3.- С. 4-7.

48. Воробьев А.А., Борисова Е.В., Моложавая О.С. и др. Иммуносупрессивное действие патогенных грамотрицательных бактерий // Вестн. РАМН. 2001. - №2. - С. 21-25.

49. Воробьев А.А., Быков А.С., Бойченко М.Н. и др. Исследования по микроэкологии человека на кафедре микробиологии с вирусологией и иммунологией // Вестн. РАМН. 2001. - №1. - С. 27-31.

50. Воробьев А.А., Иноземцева JI.O., Несвижский Ю.В. и др. Особенности микрофлоры толстого кишечника при инфекционном эндокардите // Журн.микробиол. 1996. - № 1. - С. 70-74.

51. Воробьев А.А., Лыкова Е.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции // Журн.микробиол. — 1999. -№ 6.-С. 102-105. ;

52. Воробьев А.А., Несвижский Ю.В. Микрофлора человека и иммунитет: единство и противоположность // Сборник трудов «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологиии и иммунофармакологии». Москва. Россия. 1997. - С. 137-141.

53. Воробьев А.А., Несвижский Ю.В., Зуденков А.Е. и др. Сравнительное изучение пристеночной и просветной микрофлоры толстой кишки в эксперименте на мышах.//Журн.микробиол. 2001. - №1. -С.62-67.

54. Гизатулина С.С., Биргер М.О., Кулинич Л.И., Фиш Н.Г. и др. Способ оценки состояния микрофлоры кишечника человека по количеству адгезивно-активных бактерий и типу адгезинов // Журн.микробиол. -1991.- № 4. С.21-23.

55. Головко Г.Н., Авдеева И.А., Свидерская Н.С. Уровень иммуноглобулинов у больных хроническим колитом, осложненным дисбактериозом толстой кишки.// Сб. тр. Актуальные вопросы гастроэнтерологии. М., 1991 — С.71-74.

56. Горелов А.В. Роль естественных механизмов резистентности организма в возникновении, развитии и предотвращении кишечных инфекций // Рос. педиатрический журнал. 1998. - №2. — С.58-60.

57. Горская Е.М. Механизмы развития микроэкологических нарушений в кишечнике и новые подходы к их коррекции. Автореф. дис.д-ра мед.наук. М., 1994.

58. Горская Е.М., Зайцева Л.Г., Бондаренко В.М. и др. Регуляция амбеном кишечной микрофлоры и функциональной активности макрофагов в эксперименте.// Журн.микробиол. 1995. - № 1. — С.87-90.

59. Горская Е.М., Ленцнер Х.П., Ленцнер А.А., Горелов А.В. и др. Адгезивные свойства бактерий кишечного происхождения // Журн. микробиол. 1991. - № 10. - С.5-7.

60. Гриценко В.А., Бухарин О.В. Экологические и медицинские аспекты симбиоза Escherichia coli и человека. // Журн.микробиол. 2000. - №3. -С.92-99.

61. Гукасян Г.Б., Акопян Л.Г., Чарян Л.М., Алексанян Ю.Т. Антибиотические свойства Lactobacillus acidophilus «Наринэ» и пути их повышения // Журн.микробиол. 2002. - № 5. - С. 63-65.

62. Далин М.В., Фиш Н.Г. Адгезины микроорганизмов.//Итоги науки и техники. ВИНИТИ, Микробиология. 1985. - Т. 16.- С.3-107.

63. Диагностика, профилактика и лечение дисбактериозов кишечника / Метод.рекоменд. М., 1991.

64. Домарадский И.В. Некоторые проблемы адаптации патогенных бактерий к окружающей среде. // Журн.микробиол. 1997. - № 4. - С. 31-35.

65. Доценко В.А. Лечебно-профилактическое питание // Вопр.питания. — 2001.-№ 1.-С.21-25.

66. Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул. М.: Медицина, 1985.-235с.

67. Езепчук Ю.В. Функциональные критерии патогенности микроорганизмов.// Журн.микробиол. — 1998. -№ 5. — С. 113-116.

68. Ефимов Б.А. Дисбактериозы кишечника и их коррекция кисломолочными продуктами, приготовленными с использованием индигенных микроорганизмов. Дис. .канд.мед.наук. М., 1993. — 128с.

69. Ефимов Б.А., Коршунов В.М. Диагностика, профилактика и лечение дисбактерозов кишечника: Метод.рекомендации. — М., 1991. — 15с.

70. Ефимов Б.А., Кафарская Л.И., Коршунов В.М. Современные методы оценки качественных и количественных показателей микрофлоры кишечника и влагалища // Журн.микробиол. 2002. - № 4. - С. 72-78.

71. Жуков Н.А., Гусаров А.И. Иммунологические аспекты кишечного дисбактериоза // Терапевтический архив. 1980. - Т.52.- №2. - С.82-86.

72. Иванов Ю.И., Погорелюк О.Н. Обработка результатов медикобиологических исследований на микрокалькуляторах. М., 1990.-224с.

73. Калашникова С.А. Функциональная система «Лизоцим-антилизоцим» в формировании микробиоценоза кишечника человека. Дис. .канд.мед.наук.— Волгоград, 1999.— 144с.

74. Кашкин К.П., Караев 3.0. Иммунная реактивность организма и антибиотическая терапия. Л., 1984.

75. Кафарская Л.И., Ефимов Б.А., Коршунов В.М. и др. Изучение состояния микрофлоры кишечника у лиц, находящихся в контакте с различными антимикробными препаратами // Журн.микробиол. — 1991. № 9. — С.25-27.

76. Клемпарская И.Н., Шальнова Г.А. Аутофлора как индикатор радиационного поражения организма. М., 1966. - 207с.

77. Клемпарская И.Н. Некоторые итоги применения метода изучения видового состава микробов аутофлоры как показателя состояния реактивности организма. В кн.: Аутофлора здорового и больного организма. Материалы науч. конф. — Таллин, 1978. — С.3-7.

78. Клиническая иммунология и аллергология. Зт. Пер. с нем. Под ред. Иегера Л. М.; «Медицина», 1986.

79. Ковальчук В.К. Структурный аспект микроэкологии пристеночной зоны толстой кишки // Журн.микробиол. 1982. - №2. - С. 41-48.

80. Королева Н.В. Особенности микробной колонизации слизистых оболочек полости рта при красном плоском лишае. Автореф. дис.канд.мед.наук. Волгоград, 2001.

81. Коршунов В.М., Володин Н.Н., Ефимов Б.А. и др. Нормальная микрофлора кишечника. Диагностика, профилактика и лечение дисбактериозов кишечника. Пос. для врачей и студентов. М., МЗ РФ, 1997.

82. Коршунов В.М., Володин Н.Н., Ефимов Б.А. и др. Микроэкология желудочно-кишечного тракта. Коррекция микрофлоры при дисбактериозах кишечника. Уч.пособие. М., МЗ РФ, 1999.

83. Коршунов В.М., Иванова Н.П. и др. Нормальная микрофлора кишечника, дисбактериозы и их лечение. Методические разработки. М., 1994. 12с.

84. Коршунов В.М., Поташник JI.B., Ефимов Б.А., Коршунова О.В. и др.

85. Качественный состав нормальной микрофлоры кишечника у лицразличных возрастных групп // Журн.микробиол. 2001. - № 2. — С. 5762.

86. Костюк О.П., Чернышова Л.И., Волоха А.П. Физиологические и терапевтические свойства лактобактерий // Педиатрия 1998. - № 1. — С.71-75.

87. Костюкова Н.Н. Начальный этап инфекционного процесса: колонизация и пути ее предотвращения. //Журн.микробиол. 1989. - №9. — С. 103-110.

88. Крамарь B.C., Крамарь Л.В., Чижикова Т.С. и др. Колонизационная резистентность пищеварительного тракта: Методические рекомендации для врачей. Волгоград, 1992. - 18с.

89. Крамарь B.C., Крамарь О.Г. Особенности микробиоценоза кишечника здоровых людей, проживающих в условиях экологически неблагополучной обстановки. //Тр. межвуз. научно-практ.конф. «Экология и охрана окружающей среды». Волгоград, 1994. С.36-37.

90. Крамарь Л.В. Микроэкология кишечника здоровых людей в условиях техногенного воздействия крупного промышленного города // Вестн. РАМН. 2002. - №8. - С. 37-40.

91. Краткий определитель бактерий Берги / Под ред. Дж. Хоулта. М.; Мир, 1980.-485с.

92. Куваева И.Б. Микроэкологическая система и ее значение в оценке эффективности биологически активных добавок и продуктов с пробиотическими свойствами // Вопр.питания. — 2001. №3. - С. 3-5.

93. Куваева И. Б. Обмен веществ организма и кишечная микрофлора. — М.,: Медицина, 1976. 240 с.

94. Куваева И.Б. Влияние алиментарного фактора на микробную экологию желудочно-кишечного тракта // Дисбактериозы и эубиотики: Тез.докл.Всерос.науч.-практ.конф. — 1996. — С. 17.

95. Куваева И.Б., Ладодо К.С. Микроэкологические и иммунные нарушения у детей: диетическая коррекция. М.,: Медицина, 1991. — 240 с.

96. Куваева И.Б., Кузнецова Г.Г. Антагонистическая активность микробных популяций защитной флоры и ее связь с характеристикой микробиоценоза и факторами питания. // Вопр.питания. — 1993. № 3. — С.3-8.

97. Кудлай Д.Г., Лиходед В.Г. Бактериоциногения. Л., Медицина, 1966.

98. Кудря Е.В. Биологические свойства микроорганизмов, колонизирующих желчный пузырь при остром и хроническом калькулярном холецистите. Автореф. дисс. .канд.мед.наук. — Ростов-на-Дону, 2002. 19с.

99. Кулинич Д.Г., Абатуров A.E., Герасименко O.H. и др. Взаимосвязь состояния иммунитета и микробиоценоза кишечника у детей раннего возраста, больных острыми заболеваниями органов дыхания // Журн.микробиол. 1992. - № 5-6. - С. 27-29.

100. Куяров А.В., Воробьев А.А., Несвижский Ю.В. Микробиологический аспект сбалансированного питания // Вопр.питания. 2001. - №3. — С. 6-8.

101. Кюнкрикова И.Е. Биокоррекция микрофлоры кишечника в комплексной терапии и профилактике дисбактериоза. Автореф. дисс. . .канд.мед.наук. Волгоград, 2000. — 20с.

102. Леванова Л.А., Алешкин В.А., Воробьев А.А. и др. Возрастные особенности микробиоценоза кишечника у жителей г. Кемерово // Журн.микробиол. 2001. - №3. - С. 72-75.

103. Леванова Л.А., Алешкин В.А., Воробьев А.А. и др. Особенности биологических свойств условно-патогенных бактерий, определяющих характер дисбиотических нарушений в составе нормальной микрофлоры толстой кишки // Журн.микробиол. 2002. - № 5. — С. 4853.

104. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.П. Актуальные проблемы микроэкологии человека //Аутофлора человека в норме и патологии и ее коррекция. -Горький, 1988.-С. 10-14.

105. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.П., Микельсаар М.Э. и др. Лактофлора и колонизационная резистентность // Антибиотики и мед.биотехнология. — 1987. №3. - С. 173-179.

106. Лившиц М.С., Брусина Е.Б. Госпитальные инфекции: проблемы и пути решения // Журн.микробиол. 1992. - № 1. - С.22-25.

107. Лизько Н.Н. Дисбактериозы экстремальных состояний // Антибиотики и мед.биотехнология. — 1987. № 3. - С.184-186.

108. Литвин В.Ю. Случайный паразитизм микроорганизмов // Журн.микробиол. 1992. - № 1. - С.52-55.

109. Литвин В.Ю., Пушкарева В.И. Факторы патогенности бактерий: функции в окружающей среде //Журн.микробиол. 1994. -Приложение. - С.83-87.

110. Лиходед В.Г., Каверина К.Г., Кочурко Л.И. и др. Микробиологическая характеристика дисбактериозов кишечника у детей и взрослых // Журн.микробиол. 1999. - № 4. - С.65-67.

111. Логадырь Т.А. Коррекция микрофлоры кишечника при дисбактериозах кишечника различной этиологии с помощью энтерококков. Дис. .канд.мед.наук. — М., 1990. — 157с.

112. Логинов А.С., Царегородцева Т.М., Зотина М.М. Иммунная система и болезни органов пищеварения. М.; Медицина, 1986. -256с.

113. Лыкова Е.А., Воробьев А.А., Боковой А.Г., Мурашова А.О. Нарушения интерферонового статуса у детей с острой респираторной инфекцией и его коррекция бифидумбактерином-форте // Журн.микробиол. 2001. -№2.-С.65-67.

114. Мазанкова Л.Н. Пробиотики // Фарматерапия в детской гастроэнтерологии / Под ред. A.M. Запруднова. — М., 1998. — С. 111-127.

115. Мартынов А.И., Пинегин Б.В., Коршунов В.М. Принципы деконтаминации тонкого кишечника бактериальными препаратами при антибиотиковом дисбактериозе в эксперименте // Журн.микробиол. — 1982.-№4.-С. 50-56.

116. Матюшина С.Б. Роль факторов персистенции стафилококков при бактерионосительстве. Автореф.к.б.н. Оренбург, 1996.

117. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Новосибирск, 1983.

118. Маянский А.Н. Дисбактериоз: иллюзии и реальность // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. — 2000. -№2, Т.2. — С.61-64.

119. Микельсаар М.Э., Ленцнер А.А., Гольянова Л.А. Методика определения количественного состава микрофлоры кала // Лаб.дело -1972. №1. -С.41-45.

120. Микробиологическая диагностика дисбактериозов кишечника. / Пособие для врачей и студентов. М., 1997.

121. Минушкин О.Н., Ардатская М.Д., Бабин В.Н., Домарадский И.В., Дубинин А.В. Дисбактериоз кишечника.// Рос.мед.журнал. 1999.- № 3.-С.40-45.

122. Митрохин С.Д., Иванов А.Л. Значимость отдельных карбоновых кислот фекалий в диагностике дисбактериоза.// Журн.микробиол. — 1995. №4. -С.99-101.

123. Немцева Н.В. Взаимодействие E.coli, обладающих антилизоцимным признаком, с инфузориями //Журн.микробиол. 1997. - №4. -С. 123126.

124. Несвижский Ю.В., Воробьев А.А. и др. Анализ межмикробных взаимоотношений в биоценозе толстой кишки // Материалы YII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. Москва. 1997. - С.272-273.

125. Несвижский Ю.В. Изучение изменчивости кишечного микробиоценоза человека в норме и патологии.// Вестн. РАМН 2003. - №1. - С.49-53.

126. Нобл У.К. Микробиология кожи человека. М., 1986.

127. Обгольц А.А. Механизмы персистирования бактерий // Журн.микробиол. 1992. - №4. - С. 70-72.

128. Отраслевой стандарт «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника». Москва, 2003.

129. Парфенов А.И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз. // Рус.мед.журн. 1999. - Т.6. - №18. - С.1170-1173.

130. Парфенов А.И., Калоев Ю.К., Сафонова С.А. и др. Дисбактериоз кишечника.// Московский мед.журнал. 1998. - № 1. — С. 12-17.

131. Патент на изобретение № 2202609 «Питательная среда для выделения лактобактерий». — Москва, 2003.

132. Патрушева Е.В. Микроэкологические изменения при экспериментальном дисбактериозе и роль бактерицидных систем клеток организма хозяина. Дис. . .канд.биол.наук. — Волгоград, 2000. — 130с.

133. Перетц Л.Г. Значение нормальной микрофлоры для организма человека. М.: Медгиз, 1955. — 435с.

134. Персистенция микроорганизмов / Сборник научных трудов под ред. О.В. Бухарина. Куйбышев, 1987. 156с.

135. Петровская В.Г., Марко О.П. Микрофлора человека в норме и патологии. М.: Медицина, 1976.

136. Петровская В.Г. Общие закономерности взаимодействия в системе паразит-хозяин и проблема смешанных инфекций // Журн.микробиол. — 1982. № 8.-С.24-31.

137. Петровская В.Г., Бондаренко В.М. Общие принципы генетического контроля патогенности бактерий // Журн.микробиол. — 1994. № 3. — С.106-110.

138. Пинегин Б.В., Мальцев В.Н., Коршунов В.М. Дисбактериозы кишечника. М., Медицина, 1984. - 144 с.

139. Подопригора Г.И. Иммунные и неспецифические механизмы колонизационной резистентности // Антибиотики и колонизационная резистентность: М., 1990. Вып. 19. - С. 16-25.

140. Потиевский Э.Г., Бондаренко В.М. Концепция экологического подхода к терапии кишечных инфекций // Журн.микробиол. 1997. - № 2. - С. 98-101.

141. Ройт А. Основы иммунологии. М., 1991.

142. Рябиченко Е.В., Бондаренко В.М., Рябиченко В.В. Роль активных форм кислорода, генерируемых фагоцитами, в патогенезе заболеваний. //Журн.микробиол. 2000. - № 4.- С.65-71.

143. Савицкая К.И., Воробьев А.А., Швецова Е.Ф. Современные представления о роли и составе кишечной микрофлоры у здоровых взрослых людей.//Вестн.РАМН. 2002.- № 2. - С.50-53.

144. Саргисян В.П. Состояние аутомикрофлоры как интегральный показатель неспецифической резистентности организма: Автореф. дисс.к.м.н.-Минск, 1988-29с.

145. Сомов Г.П., Варнашевич Т.Н. // Журн.микробиол. 1992. - №4. - С. 6266.

146. Сохин А.А. Парадокс инфекционного иммунитета // Журн.микробиол. 1988. - №4. - С.73-79.

147. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследований / Под ред. Биргер М.О. 3-е изд., перераб. И доп. -М.:Медицина, 1982. - 464с.

148. Стебенева С.А., Лизько Н.Н., Виха Г.В. Секреторный иммуноглобулин А показатель нарушений микрофлоры желудочно-кишечного тракта. // Биотехнология. - 1998. - № 5. - С.85-87.

149. Страчунский Л.С., Козлов С.Н. Современная антимикробная химиотерапия. Руководство для врачей — М.: Боргес, 2002. — 436 с.

150. Сытник С.И. Микробиоценоз кожи молочных желез и его биологическая коррекция.// Дис. .д-ра мед.наук. Тернополь, 1989. -459с.

151. Таболин В.А., Бельмор С.В., Гасилина Т.А. и др. Рациональная терапия дисбактериоза кишечника у детей: Метод.рекомендации. — М., 1998.

152. Терновская Л.Н. Носительство золотистых стафилококков. Автореф. д.м.н. — Москва, 1986.

153. Тимаков, В.Д., Каган Г.Я. L-формы бактерий семейства Mycoplasmataceae и проблема микробного персистирования //Журн.микробиол. 1977. - № 4. - С. 3-11.

154. Тюрин М.В., Шендеров Б.А. Влияние химиопрепаратов на биологические свойства кишечных лактобацилл экспериментальных животных // Журн.микробиол. 1991. - № 6. - С.6-9.

155. Учитель И.Я. Макрофаги в иммунитете. М.,: Медицина, 1978. 200 с.

156. Федотова Т.А. Иммунная недостаточность у детей, роль дисбактериоза кишечника. Автореф. дисс.к.м.н. Москва, 1999.

157. Фрейдлин Н.С. Система мононуклеарных фагоцитов. М.: «Медицина», 1984.-272с.

158. Хазенсон Л.Б. Факторы и генез местной устойчивости организма к инфекции. Ленинград, 1984. — 35с.

159. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. М.; Изд-во ВНИРО, 1995. 219с.

160. Хергет Х.Ф., Летцель X., Петров P.O. Комплексная терапия дисбиозов.//Эпидемиология и инфекционные болезни. 1997. - № 6. — С.51-55.

161. Хуцишвили М.Б., Рапопорт С.И. Свободнорадикальные процессы и их роль в патогенезе некоторых заболеваний органов пищеварения. //Клиническая медицина. 2002. - №10. - С. 10-16.

162. Цой И.Г., Сапаров А.С., Тимофеева И.К. и др. Иммуностимулирующее действие лактобактерий на цитотоксичность естественных киллерных клеток и продукцию интерферона. // Журн.микробиол. 1994. - № 6. -С.112-113.

163. Чахава О.В. Гнотобиология. М. 1972.

164. Черкасский Б.Л. От теории эпидемического процесса к теории «саморегуляции» паразитарных систем.//Журн.микробиол. 1988. - № 11. —С.105-110.

165. Чернова О.JI. Антилизоцимная активность стафилококков при бактерионосительстве. В Сб. Персистенция микроорганизмов. — Куйбышев, 1987. С.22-30.

166. Шендеров Б.А. Антимикробные препараты и нормальная микрофлора. Проблемы и возможные пути их решения. //Антибиотики и химиотерапия. 1988. -Т. 33. - № 12. - С.921-926.

167. Шендеров Б.А. Роль анаэробных неспорообразующих бактерий в поддержании здоровья человека // Вестн. РАМН. 1996. - № 2. — С. 811.

168. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. М., 1998.

169. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека.//Рос.Журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1998. - № 1. - С.61-65.

170. Шендеров Б.А., Манвелова М.А. Функциональное питание и пробиотики : микробиологические аспекты. Москва, 1997. — С. 24.

171. Шендеров Б.А., Манвелова М.А., Степанчук Ю.Б. Пробиотики и функциональное питание // Антибиотики и химиотер. 1997. — Т. 42, №7.-С. 30-34.

172. Шкарупета М.М. Влияние представителей нормальной микрофлоры и их компонентов на антиинфекционную резистентность. Автореф. дис.канд.мед.наук. Москва. 1990. -29с.

173. Щербакова Э.Г., Щербаков И.Т., Грачева Н.М. и др. Морфофункциональное состояние слизистой оболочки толстой кишки при действии иммунокорректоров и эубиотиков. // Сб. Успехи теоретической и клинической медицины, вып 3, М.: РМА ПО, 1999. — С.40-42.

174. Щербакова Э.Г., Баранов А.А., Дорофейчук В.Г. и др. Бифилиз в комплексном лечении и профилактике дисбактериоза кишечника. Пособие для врачей. Москва, 2000. 44с.

175. Эссель А.Е., Скляренко Г.Г., Васильева Л.И., Соболева Е.М. Общие вопросы кишечного дисбиоза у взрослых. Тбилиси, 1985.

176. Яблочков А.Л. Выделение и характеристика антилизоцимного фактора Klebsiella pneumonia //Журн.микробиол. 1989. - № 3. - С.11-14.

177. AminofF М., Tahvanainen Е., Grasbeck R. et al. Selective intestinal malabsorption of vitamin B12 displays recessive mendelian inheritance: assignment of a locus to chromosome 10 by linkage // Am. J. Hum. Genet. — 1995 Oct., 57(4). P. 824-831.

178. Babior B.M.// Blood. 1984.- V.64. - P.959-966.

179. Barriga C., Pedrera I., Rodriguez A.B. Comparative study of the effect of teicoplanin and vancomycin upon the phagocytic process of peritoneal macrophages // Rev. Esp. Fisiol. 1996 Dec., 52 (4). - P.215-222.

180. Berg R.D. Mechanism, confining indigenous bacteria to the gastrointestinal tract // Am. J. Clin. Nutr. 1980. - V.33. - P. 2472-2484.

181. Bottcher M.F., Nordin E.K., Sandin A. et al. Microflora-assosiated characteristics in faeces from allergic and nonallergic infants. // Clin.Exp.Allergy. -2000.30(11). -P.l 560-1590.

182. Braun O., Hein W. The physiologic of bifidobacteria and fecal lysozyme in the breast infant. A contribution of microecology of the intestin // Clin.Pediatr. 1995. - V. 207, N. 1. - P.4-7.

183. Bukovsky M., Mlynarchik D., Ondrackova V. Immunomodulatory activity of amphiphilic antimicrobials on mouse macrophages // Int. J. Immunopharmacol. 1996, Jun-Jul.- 18(6-7). - P. 423-426.

184. Burn G. Postmortem bacteriology. // J.infect. Dis., 1934, v.54.p.395-400.

185. Childers N.K., Bruce M.G., McGhee J.R. Molecular mechanisms of immunoglobulin A defense I I Ann. Rev. Microbiol. 1989. - № 43. - P. 503-536.

186. Conway P.L. Lactobacilli: fact and fiction. In: The regulatory and protective role of the normal microflora / Ed. Grubbe, Midvedt, Norin. MacMillan Press. 1989.

187. Companozzi A. et al. Syndrome dell intestino infetto // Pediatr.-Med.-Chir. -1995. Dec. - 17(6). - P.493-497.

188. Costerton J.W., Marris T.J., Cheng K.S. Bacterial Adhesion / Eds. D.C. Savage, M. Fletcher. 1985. - P. 3-43.

189. Cross M.L., Slobbe L.J., Buchman G.S., Griffin J.F. In vitro responses of corvine macrophages to bacterial stimulants // Vet. Immunol. Immunopathol. 1996, Oct. - 53 (3-4). - P.249-256.

190. Cuffini A.M., De Renzi G., Tullio V. et al. Potentiation of human polymorphonuclear leukocyte phagocytosis and intracellular bactericidal activity by amoxycillin/ clavulanic acid // Drags Exp. Clin. Res. 1996. — 22(1). — P.9-15.

191. Dick W. Lysozyme: basic facts and diagnostic importance // Fortschr.Med. — 1982. V.100, N.26. - P. 1230-1234.

192. Dick W., Braun O.H., Nagel W. Lysozyme in children with acute and chronic inflammatory intestinal diseases //Pediatr.Padol. 1985. — V.20, N.2. — P.143-150.

193. During K., Porsch P., Mahn A., Brikmann O. The non-enzymatic microbial activity of lysozyme //FEMS. Lett. 1999. - V. 449, N.2-3. - P.92-100.

194. Eddie D.S., Schulkind M.L., Robbins J.B. The isolation and biologic activities of purified secretory IgA and IgG antisalmonella typhimurium

195. О» antibodies from rabbit intestinal fluid and colostrums.// J.Immunol. -1971.—V. 106, N.l. — P.l 81-190.

196. Edminston C.E., Goheen M. Colonic microbial ecology: recovery of anaerobic mucosal and mucin population //Abstr.Ann.MeIt.Amer. Soc.Microb. 1987. - P. 196.

197. Edwards J. Guarding against adverse drag events // Am. J. Nurs. -1997, May. 97(5). - P.26-30, quiz 31.

198. Fishman M. // Infect.contr. 1986. -V. 7., N.3. - P.181-184.

199. Fredericq P.Colicins // Ann.Rev.Microbiol. 1957. - V.l 1.- P.7-22.

200. Freter R. Interdependence of mechanisms that control bacteria colonization of the large intestinale. // Microecology and Therapy. 1989. - V.14. -P.89-96.

201. Fujihashi K., Kono Y., Kiyono H. Effects of IL6 on В cells in mucosal immune response and inflammation // Res. Immunol. 1992, Sept., № 143(7).-P. 744-749.

202. Fuller R. Probiotics in man and animals // J.Appl.Bacteriol. 1989. -V.66, N.5. -P.365-378.

203. Gillihand S.E. Health and nutritional benefits from lactic acid bacteria //FEMS Microbiol. Rev. 1990. -V. 7. -N. 1-2. -P.l75-188.

204. Gober L. Suppression of the intracellular growth of Shigella flexneri in cell cultures by interferon preparations and polynosinic-polycitidylic acid. //Infect. Immunol. 1972. - V.5, N.3. - P.370-376.

205. Gorbach S.L. Function of the normal microflora. // ScandJ.Infect.Dis. — 1986. N.49.-P.17-23.

206. Gorbach S.L., Barcha M., Giuliano M. Colonization resistentance of the human intestinal microflora: testing the hypothesis in normal volunteers // Eur.J.Clin.Microbiol. 1988. -N.l. -P.98-102.

207. Gordon J.H. , Dubos R. Observation on the normal gastrointestinal flora of the mouse.- //Ann.N.J.Acad.Sci., 1971, v.176, p.30-39, 64-66.

208. Guo W., Magnotti L.J., Din J. et al. Influence of gut microflora on mesenteric lymph cytokine production in rats with hemorrhagic shock. // J. Trauma. 2002,52 (6). - P.l 178-1185.

209. Haenel H. Human normal and abnormal gastrointestinal flora // Amer. J. Clin. Nutrit. 1975. - V.l. - P. 21-64.

210. Hashimoto J. Oxygen radial production by peritoneal macrophages and Kupfer cells elicited with Lactobacillus casei II Infect. Imm. — 1984. № 44. - P.66-67.

211. Henderson В., Poole S., Wilson M. Bacterial modulins: a novel class of virulence factors which cause host tissue pathology by inducing cytokine synthesis. // Microbiol. Rev. 1996, 60(2). - P.316-341.

212. Henteges D. The protective function of indigenous intestinal flora. // Pediatr. Infect. Dis. 1996. - V.5. Supple 1. - P.17-20.

213. Hentges D.J. Human intestinal microflora in Health and Disease. New York, Academic Press, 1983.

214. Hentges D.J., Marsh W.W., Petschow B.W. Influence of infant diets on the ecology of the intestinal tract of human flora-associated mice. // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 1992. -V.l 4. N.2. - P. 146-152.

215. Hilton E., Isenberg H.D. et al.// Annals of Internal Medicine. 1992. - Vol. 116, № 5. - P.353-357.

216. Hill M.G. Microbial Metabolism in the Digestive Tract. N.Y., 1983.

217. Hill M.G., Drasar B.S. The normal colonie bacterial flora // Gut. 1975. -V.l6.-№4.-P. 318-323.

218. Ho M. Induction and inducers of interferon. In: Interferon. V. 1. General and applied aspects/ Ed. A. Billiau, Elsevier Science publishers В. V. 1984. — P.79-124.

219. Hoges J.R., Wright R. Normal immune responses in the gut and liver// Clin.Sci. 1982. - V.63, N.4. - P.339-347.

220. Husebye E., Skar V., Hoverstad Т., Melby K. Fasting hypochlorhydria with gram positive gastric flora is highly prevalent in healthy old people. // Gut. — 1992, 33(10).-P.1331-1337.

221. Husebye E., Scar V., Hoverstad T. Abnormal intestinal motor patterns explain enteric colonization with gram-negative bacilli in late radiation enteropathy. // Gastroenterol. 1995. - V. 109, № 4. - P.1078-1089.

222. Ikeda N., Saito Y. Variation in concentration of bacterial metabolites, moisture, pH and bacterial composition between and within individuals in faeces healthy adults // J. Appl. Bacteriol. 1994. - V.77, № 2. - P.185-194.

223. Jonsson G., Midtvedi A.C., Norman A. et al. Intestinal microbial bile acid transformation in healthy infants// J. Pediatr. Gastroenterol.Nutr. — 1995, May. 20(4). - P.394-402.

224. Kanazawa K., Konishi F., Mitsuoka T. et al. Factors inducing the development of sigmoid colon cancer. Bacteriological and biochemical studies.// Cancer. 1996. - Apr. 15. - P. 1701-1706.

225. Kawai J., Saito Т., Uemura J., Iton T. // Biosci. Biotechnol. Biochem. — 1997.-V 61,No l.-P. 179-182.

226. Kennedy M.J., Volz P.A. Ecology of Candida albicans gut colonization: inhibition of Candida adhesion, colonization and dissemination from the gastrointestinal tract by bacterial antagonism //Infect.Immun.- 1985. V.49. — N.3. — P.654-663.

227. Kitazawa H., Matsumara K., Itoh Т., Gamaguchi T. Interferon induction in murine peritoneal macrophage by stimulation with Lactobacillus acidophilus. //Int.Microbiol.Immunol. 1992. - N.36. - P.311-315.

228. Kiyono H., Bienenstock J., McGhee J.R., H.B. Ernst. The mucosal immune system: features of inductive and effector sites to consider in mucosal immunization and vaccine development // Reg. Immunol., 1992, Mar-Apr. 4(2). — P.54-62.

229. Knocke M., Bernhardt H. Microokologie des Menschen Microflora bei Gesunder und Kranken //Berlin. 1985. - S.79-102/

230. Knocke M., Bernchardt H. Gastrointestinale Microflora.// Med. Actuall. -1988. V. 14. - N.2. - P.77-79.

231. Ко E.J., Gog J.S., Lee B.J. et al. Bifidobacterium bifidum exhibits a lypopolysaccharide-like mitogenic activity for murene В lymphocytes. // J.Daiiy Sci. 1999. - 82(9). - P. 1869-1876.

232. Kuitunen M., Savilahti E. Mucosal IgA, mucosal cows milk antibodies, serum cows milk antibodies and gastrointestinal permeability in infants. // Pediatr. Allergy Immunol. 1995, Feb., №6 (1). -P.30-35.

233. Kumar C.R. Trace element regulation of immunity and infection // J. Amer.Cool.Nutr. 1985. - V.4, N. 1.

234. Lambert-Zechovsky N., Bingen E., Guihaire E. et al. Antibiotiques and flora intestinal // Vie. Med. 1985. -V.66. - № special. - P. 10-16.

235. Lefrancois L. Intraepithelial lymphocytes of the intestinal mucosa: curiouser and curiouser// Semin. Immunol. 1991, Mar., 3(2). -P.99-108.

236. Lidbeck A., Edlund C., Gustafsson J.U. et al. Impact of Lactobacillus on the normal intestinal microflora after administration of two antimicrobial agents// Infection. 1988. - V.16, № 6. - P. 329-336.

237. Lievin V., Peiffer I., Hudault S. et al. Bifidobacterium strains from resident infant human gastrointestinal microflora exert antimicrobial activity.// Gut. — 2000. — N.47. P. 646-652.

238. Lindgren S.E., Dobrogosz W.J. Antagonistic activities of lactic acid bacteria in food and feed fermentation //FEMS Microbiol.Rev. 1990. - V. 7, N.l-2. -P.149-163.

239. Luckey T.D. Bicentennial overview of intestinal microecology // Amer. J. Clin. Nutrit. 1977. - V.30. - № 11. - P.1753-1761.

240. Macfarlane G.T. Contribution of the microflora to proteolysis in the human large intestine // J.Appl.Bacteriol. 1988. - V.64. - P.37-46.

241. Macfarlane G.T. Protein degradation by human intestinal bacteria // J.Gen.Microbiol. 1996. - V.132. - P.1647-1656.

242. Marshall N.E., Ziegler H.K. Role of lipopolysaccharide in induction of IgA expression, during infection with gram-negative bacteria // Infect. Immun. — 1989, May. 57(5). -P.1556-1560.

243. McGhee J.R., Kiyono H. Mucosal immunity to vaccines: current concepts for vaccine development and immune response analysis // Adv. Exp. Med. Biol.-1992.-327.-P.3-12.

244. McGhee J.R., Mestecky J., Dertzbaugh M.T. et al. The mucosal immune system: from fundamental concepts to vaccine development // Vaccine. — 1992.- 10(2).-P. 75-88.

245. McGhee J.R., Mestecky J., Elson C.O., Kiyono H. Regulation of IgA synthesis and immune response by T cells and interleukins// J. Clin. Immun. 1989, May. - 9(3). - P.175-199.

246. Mitsuoka T. Bacterial flora of the large intestine // Nippon. Rinsho. 1988, Mar.-46(3).-P. 725-734.

247. Mitsuoka T. Intestinal flora and host.// Asian.Med.J. 1988. -N.31(7). -P.400-409.

248. Moreau M.C. Intestinal flora, probiotics and effects on the intestinal IgA immune response. // Arch.Pediatr. 2000. - 7(suppl.2). - P. 247-248.

249. Nord C.E., Kager L. The normal flora of gastrointestinal tract. //Neth. J. Med. 1998. - V. 27, № 7. - P. 249-252.

250. Orrhage K., Nord C.E. Factors controlling the bacterial colonization of the intestine in breastfed infants. // Act. Paediatr. 1999. - V.88, № 430. -P.47-57.

251. Otto H., Gebbers J., Laissue J. et al. Zur funktionellen bedentung des intestinalen immunsystems. // Z. Gastroent. 1982, Bd.20, №3. - S.245-256.

252. Park B.H., Fikrig S.M., Smithvick E.M. Infection and nitroblue tetrazolium reduction by neutrophils // Lancet. 1968. - № 2. - P. 532-534.

253. Peach S.L., Tabagchali S. Some studies of bacterial flora associated with the mucosa of the gastrointestinal tract // Nahrung. — 1984 V.28, № 6-7. — P.627-634.

254. Rolf F. Mechanisms of bacterial colonization of the mucosal surfaces of the gut. //Virulence Mech. Bact.Pathol. 1988. -N.4. - P.45-60.

255. Sakata H., Fujita K., Yoshioka H. The effect of antimicrobial agents on fecal flora of of children // Antimicrob. Agents Chemother. 1986. - V.29. - № 2. — P.225-229.

256. Savage D.C. Microbial ecology in gastrointestinal tract // Ann. Rev. Microbiol. 1977. - №3. - P. 393-397.

257. Savage D.C. Microorganisms associated with epitelial surfaces and stability of the indigenous gastrointestinal microflora // Nahrung. — 1987. — V.31, № 5-6. -P.383-390.

258. Stefanova Z., Nikolova N., Dimov T. et al. Effect of oxygen on phagocytosis and hydrogen peroxide production // Pharmazil. — 1997, May. 52(5). - P. 409-410.

259. Takao S., Smith E.H., Wang D. et al. Role of reactive oxygen metabolites in murine peritoneal macrophage phagosytosis and phagocitic killing // Am. J. Physiol. 1996, Oct. - 271(4Ptl). - P.1278-1284.

260. Tannock G.W. The normal microflora: new concepts in health promotion // Microbiol. Sci. 1988. -N.l. -P.4-8.

261. Van der Waaj D., De Vries-Hospers H.G., Welling G.W. The influence of antibiotics on gut colonization // J. Antimicrob. Chemother. 1986. - V.l8. -P.155-158.

262. Xu-Amano J., Beagly K.W., Mega J. et al. Induction of T-helper cells and cytokines for mucosal IgA responses. // Adv. Exp. Med. Biol. — 1992, № 327.— P. 107-117.

Информация о работе

Голошва, Елена Владимировна
кандидата биологических наук
Ростов-на-Дону, 2005
ВАК 03.00.07

Диссертация

Изменение колонизационной резистентности кишечника при дисбактериозах, обусловленных антибиотиками широкого спектра действия - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Изменение колонизационной резистентности кишечника при дисбактериозах, обусловленных антибиотиками широкого спектра действия - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы