Микроэкологические изменения при экспериментальном дисбактериозе и роль бактерицидных систем клеток организма хозяина

Патрушева, Елена Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Микроэкологические изменения при экспериментальном дисбактериозе и роль бактерицидных систем клеток организма хозяина
ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Микроэкологические изменения при экспериментальном дисбактериозе и роль бактерицидных систем клеток организма хозяина"

рго оа

г 1 ¿яг глоз

На правах рукописи

ПАТРУШЕВА ЕЛЕНА ВИКТОРОВНА

МИКРОЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ДИСБАКТЕРИОЗЕ И РОЛЬ Б АКТЕ РIIЦИД ПЫХ СИСТЕМ КЛЕТОК ОРГАНИЗМА ХОЗЯИНА

03.00.16 — экология 03.00.07 — микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Волгоград 2000

Работа выполнена на кафедре биохимии и микробиологии Ростовского государственного университета и в Ростовском научно-исследовательском институте микробиологии и паразитологии МЗРФ.

Научные руководители: доктор медицинских наук,

Л.Н.Терновская кандидат биологических наук, доцент И.Б.Коган

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор С.А.Никитин кандидат медицинских наук, доцент А.Б.Покатилов

Ведущая организация: Ростовский государственный медицинский университет.

Защита диссертации состоится «22» июня 2000 г. в 10 час. 00 мин. на заседании Диссертационного Совета К 084.54.03 при Волгоградской медицинской академии, 400066, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Волгоградской медицинской академии

Автореферат разослан «_/£_» (уЫМиЗС 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук,

доцент Л.П.Сливина

30Ц -3,0

Общая характеристика работы Актуальность исследования. Микроэкологические нарушения эволю-иионно сложившегося равновесия между организмом и населяющей его микрофлорой, баланса пиугрибактсриальных ассоциаций, связанные с загрязнением окружающей среды, накоплением в ней ксенобиотиков разного действия и широким применением антибактериальных препаратов становятся все более актуальными (H.A. Амонов с соавт., 1989; С.А. Погорельская с соавт., 1991; Е.А. Лысова, 1994; Т.Н. Савченко, 1994; A.A. Воробьев с соавт., 1996).

Организм человека для населяющей его микрофлоры является средой обитания (Ю.В. Несвижский, 1997; О,В. Бухарин, 1999). Характер микробиоценозов, существующих в различных биотопах организма, определяется как реактивностью организма человека, так и взаимодействием микробов в биотопе. (А.Н. Парфенов, 1998; О.Н. Минушкин, 1999). Состояние микробного сообщества кишечника тесно связано с иммунологической реактивностью макроорганизма (A.A. Ленцнер с соавт., 1986; Ф.Ю. Гариб и др., 1991; JI.B. Морозова с соавт., 1992; Т.П. Шиманек с соавт., 1996; Т.К. Лопатина и др., 1997), взаимодействием факторов местной и общей неспецифической и специфической резистентности (Т.Ч. Лехатинова с соавт., 1992). Как отмечает В.Г.Лиходед с соавторами (1999), сниженный иммунитет может способствовать развитию микроэкологических изменений, в частности дисбактериозов с увеличением содержания в кишечнике энтеробактерий. Важная роль в защите слизистых оболочек принадлежит местному иммунитету (Я.С. Шварцман, Л.Б. Хазенсон, 1978; Okuyamaet el., 1995; Foitzik etal, 1999; Kayama et al, 2000).

В последние годы к вопросу микроэкологических нарушений микрофлоры организма человека обращались многие исследователи. Большое количество работ достаточно полно отражают изменения микрофлоры при различных состояниях организма (И.А. Бочков и др., 1991; В.М. Бондаренко и др, 1992; Е.М. Горская, 1994 и др.), биологические свойства условно-патогенных бактерий, выделяемых при дисбактериозах (С.С. Белокрысенко и др., 1992; В.П. Кузнецов и др., 1995; С.А. Калашникова, 1999), разрабатываются методы коррекции микрофлоры при этом состоянии (Г.И. Гончарова, 1987; A.A. Ленцнер, 1987; Х.Ф. Хергет и др., 1997), рекомендуются для практического использования новые эубиотические препараты (H.H. Мальцева и др., 1992).

Однако механизмы, обеспечивающие развитие микроэкологических изменений, увеличение численности условно-патогенных бактерий в биотопах

орагнизма человека, изменения их положения в структуре биоценозов остаются до сих пор неясными. Исследования особенностей микрофлоры кишечника при дисбактериозе, проведенное на большом количестве людей В.Г. Лихо дед с соавторами (1999). выявили независимость увеличения количества условно-патогенных бактерий кишечника от количественного состава бифидо- и лакто-бактерий и позволили высказать предположение, что на регуляцию численности условно-патогенных микробов влияют какие-то «интимные механизмы макроорганизма».

Цели и задачи. Целью настоящей работы явилось определение микроэкологических изменений при экспериментальном лекарственном дисбактериозе и выяснение роли бактерицидных систем клеток организма хозяина в изменении численности условно-патогенных энгеробактерий. Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

- Охарактеризовать микроэкологические изменения в кишечнике при

экспериментальном лекарственном дисбактериозе.

- Определить изменение активности кислородзависимых бактерицидных

систем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов в динамике экспериментального дисбактериоза.

- Выяснить наличие взаимосвязи микроэкологических нарушений в со-

ставе кишечной микрофлоры с активностью бактерицидных систем перитониальных макрофагов и эпителиоидных клеток кишечника.

- Изучить эффективность действия некоторых препаратов, коррегирую-

щих микроэкологические нарушения, на активность кислородзависимых бактерицидных клеток организма хозяина

Научная новизна.

- Впервые установлено, что развитие микроэкологических нарушений в

кишечнике тесно связано с активностью кислородзависимых бактерицидных систем непрофессиональных фагоцитов кишечной стенки. Снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем колоноцитов и энтероцитов приводит к значительному увеличению количества условно-патогенных энтеробактерий в составе микрофлоры.

- Впервые показано, что эубиотическис препараты обладают способностью стимулировать активность кислородзависимых бакте-

рицидных систем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов. Установлено, что стимуляция их активности сопровождается снижением численности условно-патогенных энтеробактерий. Эта способность наиболее выражена у лактобактерий «Наринэ» и бифидумбактерина.

Практическая значимость. Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательской работы Ростовского государственного университета «Биохимические механизмы индивидуальной устойчивости систем организма к действию экстремальных факторов. Разработка микрометодов диагностики прогноза и оценки эффективности коррекции» (Гос. per. № 01.9.20019876).

Полученные результаты позволили выявить, что одним из механизмов коррегирзтошего действия эубиотических препаратов является повышение активности кислородзависимых бактерицидных систем непрофессиональных и профессиональных фагоцитов, что позволяет использовать их в качестве профилактических средств в условиях неблагоприятного воздействия факторов окружающей среды.

Материалы диссертации включены в учебные программы и используются в лекционных и практических курсах кафедры биохимии и микробиологии для студентов, специализирующихся в области микробиологии, в Ростовском государственном университете.

Разработано и внедрено в практику учебно-методическое пособие для студентов: «Симбионтная микрофлора желудочно-кишечного тракта человека. Дисбактериоз и его коррекция».

Положения, выносимые на защиту:

- При экспериментальном лекарственном дисбактериозе, происходят существенные микроэкологические изменения как в составе полостной, так и в мукозной микрофлоре кишечника, связанные со значительным увеличением численности: лактозонегативных энтеробактерий, протеев, гемолитических эшерихий.

- Одним из механизмов, обусловливающих микро-экологические изменения, является снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем колоноцитов, энтероцитов кишечной стенки организма хозяина.

- Применение эубиотических препаратов для коррекции микроэкологя-ческих нарушений приводит к повышению активности кислородзависимых бактерицидных систем клеток организма хозяина.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на научных сессиях биолого-почвенного факультета РГУ (Ростов-на-Дону, 1998—2000 гг.). научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии», посвященной 90-леткю Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии (Ростов-на-Дону, 1999), научной конференции «Актуальные вопросы биологии и медицины», посвященной 30-летию кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Кабардино-Балкарского Государственного университета (Нальчик, 1999).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 работ, изданы методические рекомендации.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 147 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения и выводов. Список литературы включает 256 источников, в том числе 161 отечественных и 95 зарубежных. Работа иллюстрирована 24 таблицами и 27 рисунками.

Содержание работы

Материалы, методы н объем исследования. Объектами исследования служили беспородные белые мыши возрастом 10 —12 недель, весом 16 — 18 г, в количестве 480 шт. Мыши были получены из питомника РНИИМП.

Методы исследования:

Биологические. Экспериментальный дисбакгериоз воспроизводили на белых беспородных мышах, весом 16-18г.

Лекарственный дисбакгериоз вызывали введением гентамицина. Антибиотик вводили терапевтическими дозами (80 мкг/мл) в пересчете на массу животного, одноразово, внутрибрюшинно, в течение 5 суток. Гентамицин дозировали по ОД. ил. Котролыюй группе животных вводили физиологический раствор, в такой же дозировке. •

Микробиологические. Изменения симбиотического равновесия микрофлоры кишечника изучали, по методике, изложенной в информационно-методическом письме по микробиологическому исследованию на дисбакгериоз (ОблСЭС Ростовской области, 1985).

Для исследования мукозной микрофлоры, кишечник длинной 5 — 7 см трижды промывали фосфатно-солевым буферным раствором (рН 7,2) (ФБР), отрезок кишечника весом 1г гомогенизировали в ступке с кварцевым песком в

ФБР, переносили в физиологический раствор (рН 7,2-7,4). Характер микрофлоры определяли по той же методике (ОблСЭС Ростовской области, 1985).

Исследование популяции микроорганизмов, содержащихся в желчном пузыре и крови, у животных с дисбактериозом, проводили по методике, изложенной в практическом руководстве но микробиологическим и вирусологическим методам исследования под редакцией М.О.Биргера(198()).

Выделенные чистые культуры идентифицировали по морфологическим, тинкториальным, биохимическим, культуральным свойствам н соответствии с рекомендациями Берджи (1997).

У животных после введения антибиотика исследование микрофлоры проводили в динамике на 3, 9, 15 и 21 сутки после окончания введения гента-мицина.

Коррекцию микрофлоры кишечника при экспериментальном лекарственном дисбактериозе осуществляли эубиотическими препаратами: бифидумбакте-рином (производства РНИИМП), лактобактерином (производства ГНИИМ), БАЛБ «Нэрннэ» (производство предприятия «Биомед», г. Москва) «Vita balance — 3000» (Vita Max, CA USA).

Препараты вводили перорально, лечебными дозами в пересчете на массу животного в течение 14 дней. Состояние микробоценоза исследовали наЗ, 9, 15 и 21 сутки с момента начала коррекции микрофлоры кишечника, по методике изложенной ранее.

Биохимические. Перитониальные макрофаги выделяли из брюшной полости мышей по методу Дж. Уосли (1976), без предварительной стимуляции. Концентрацию клеток доводили до 1 ■ 106 /мл.

Энтероциты и колоноциты выделяли из соответствующих отделов кишечника по следующей методике: отрезки кишечника, длинной 5 см, трижды промывали ФБР (рН 7,2). Кишечник вскрывали продольно, с внутренней поверхности делали соскоб отшлифованным предметным стеклом, для отделения эпителиоидных клеток. Клетки переносили в ФБР (рН=7,2). Концентрацию клеток доводили до 1 ■ 106/мл. Состояние активности кислородзависимых бактерицидных систем перитониальных макрофагов и эпителиоидных клеток кишечника определяли при помощи IICT-теста (М.П. Грачева, 1984). Для этого использовали кристаллический нитросиний тетразолий фирмы "Chemapol" (Чехословакия).

Активность кислородзависимых бактерицидных систем исследовали в

динамике на 3, 9. 15 и 21 сутки после окончания введения гентамицина и на 3, 9, 15 и21 сутки с момента начала коррекции микрофлоры кишечника.

Методы оценки микробного состояния экосистемы. Для экологической опенки микробиоценоза кишечника использовали индексы флористической значимости (М.Г1. Натксвичайте-Иванаускене, 1985), определили типологию доминант в структуре сообществ (Одум Ю., 1987), видовое разнообразие и равномерность распределения особей в популяции (М. Бигон с соавт.. 1989).

Статистические методы. Полученные данные обрабатывали при помощью пакета статистических программ «81а1ата(1к» с использованием корреляционного (параметрического) анализа. Вычисляли коэффициент корреляции (г) и уровень значимости (Р). Значения Р > 0,05 считали недостоверными. Рас-счет достоверности разницы двух наблюдаемых частот с вероятностью 95% производили при помощи критерия Сгьюдента (Г.Ф. Лакин, 1990).

Результаты исследования н их обсуждение.

Первым этапом исследования являлось выявление микроэкологических изменений в кишечнике мышей, получавших антибиотики. Характер микрофлоры животных, получавших гентамицин, сопоставляли с характером микрофлоры животных, не получавших антибиотический препарат. Проведенный анализ полученных данных позволил заключить, что при введении антибиотика происходят существенные изменения микроэкологии кишечника, которые соответствуют дисбакгериозу III типа по классификации В.М. Бондаренко (1998). Эти изменения касались как представителей транзиторной, так и резидентной микрофлоры. В составе транзиторной микрофлоры отмечалось значительное нарастание условно-патогенных энтеробактерий в 1,7 раза (1=2,9), протеев в 5 раз (1>2). Не менее выраженные изменения отмечались в составе резидентной микрофлоры, особенно в группе факультативно-анаэробных микроорганизмов представленных эшерихиями. В первые дни развития дисбакгериоза численность эшерихий увеличивалась в среднем в 1,3 раза (1=4,4). В их популяции практически не обнаруживались эшерихии с нормальной ферментативной активностью, но увеличивалось содержание эшерихий со сниженной ферментативной активностью до ^ 7,4+1,2 (против 4,5+0,5 в контрольной группе животных). В большом количестве выявлялись гемолитические эшерихии — ^4,9±0,5, что превышало показатели наличия подобных микроорганизмов у животных контрольной группы практически на 5 порядков. Меньшие измене-

иия отмечались среди анаэробных представителей резидентной микрофлоры -бифидо- и лактобактерий. Количество этих микроорганизмов после проведенной антибиотикотерапии снижалось незначительно. Так содержание бифидо-бактерий у животных, получавших гентамицин, составляло в среднем 7.4±0,б против ^ 8,3+0.2 у животных контрольной группы. Несколько в большей степени изменялось количество лактобактсрий 6,3±0,5 у получавших геитамицин против ^ 8.6±0,7 в контрольной группе, 1=2,7).

6,2±0,5). Меньшая численность, чем в полостной флоре была характерна и для эшерихий 4,5±0,6 против 7,1 ±0,3 в полостной). Однако, в их популяции присутствовали эшерихии со сниженной ферментативной активностью 2,07+0,6). Из мукозной микрофлоры высевались лактозонегативные энтеро-бактерии 2,7±0,5). Ни у одного из животных не были обнаружены гемолитические эшерихии, протеи. Сопоставление общего количества микроорганизмов в мукозном содержимом показало явное преобладание бифидо- и лактобактерии над факультативно-анаэробными представителями. Количество последних на 1 г ткани кишечника не превышало 4 тогда как количество бифидо- и лактобактерий в совокупности достигало 9 ^ КОЕ/г.

В результате введения гентамицина отмечались существенные изменения и в микробиоценозе мукозной флоры кишечника.. Количество бифидобактерий отчетливо уменьшилось с ^ 9,6±0,8 до ^ 5,4±0,2 (1=5,1). В меньшей степени эти изменения касались представителей лактобактерий (^ 6,2+0,5 против ^ 5,8+0,2). В мукозном биоценозе возрастало количество факультативно-

анаэробных представителей — лактозонегативных энтеробактерий в 1,7 роза (t=2,l) эшерихий со сниженной ферментативной активностью - в 1,6 раза. Высевались протей и грибы рода Candida.

Таким образом, антибиотикотерапия приводила к существенным микроэкологическим изменениям, в основном за счет увеличения численности условно-патогенных микроорганизмов.

На модели экспериментального дисбактериоза у мышей, мы проследили за характером измененией полостной и мукозной микрофлоры в динамике развития дисбактериоза. Наблюдения продолжались 21 день.

Проведенные исследования количественного состава микрофлоры полостного и мукозного биотонов, свидетельствовали, что самые ранние изменения отмечались в составе эшерихий. Уже на третий день они высевались в большом количестве из полостного сообщества (lg 9,3 ±0,4 против lg 7,1+0,3 у контрольных животных). С девятого дня начинала нарастать численность эшерихий со сниженной ферментативной активностью и к окончанию срока наблюдения в полостном сообществе все эшерихии были представлены последними. Также уже на третий день возрастало содержанке протеев. Их количество увеличивалось в 5 раз в полостном и в 3 раза в мукозном биотопах, достигая значений lg 6,0±0,2 и lg 3,0±0,1 соответственно, оставаясь на таком высоком уровне до окончания исследования. Подобным образом изменялась численность гемолитических эшерихий. Их количество начинало возрастать в полостном биотопе уже на 3-й день наблюдения (lg 4,9+0,5), а в мукозном на 15-й (lg 2,2+0,5). Количество лактозонегативных энтеробактерий увеличивалось с 3-го дня исследования в полостном биотопе до lg 6,1±0,8, и в мукозном — до lg 4,6 ±0,8 и в средне за весь период наблюдения составило 6,3 lg в полостном биотопе и 3,7 ig в мукозном биотопе, что превышало численность таковых у контрольных животных на протяжении всего эксперимента.

Условно-патогенные энтеробактерии высевались из желчного пузыря с 3-го дня исследования, из крови - с 15-го. При этом у контрольных животных из желчных протоков и крови бактерии не выявлялись. Обнаружение условно-патогенных микроорганизмов вне кишечного тракта свидетельствовало об их транслокации из кишечника, что характерно для дисбактериоза III — IV типа по классификации В.М. Бондаренко (1998).

Для установления основных закономерностей микроэкологических изменений в кишечном биоценозе был проведен анализ полученных материалов с

использованием экологических методов оценки микробною очага. При оценке экологической значимости групп в сообществе установлено, что наиболее значимыми в микробиоценозах выступали бифидо- и лактобактерии, и их присутствие в составе полостной и мукозной микрофлоры является опрделяюшим. При исследование состава микрофлоры у контрольных животных установлены типологии доминант микробиоценоза. Доминантными видами выступали представители резидентной анаэробной и факультативно-анаэробной флоры — бифидо- и лактобактерии с индексом доминирования 31,7% и 33,7% в полостном и 71% и 28,9% в мукозном сообществах соответственно. В полостном биотопе к числу доминантных видов относились также эшерихии — 26,3%. Стафилококки и энтерококки оценивались как редковстречающиеся виды в полостном сообществе, с индексом доминирования 3,8%; 3,5% соответственно, тогда как значимость этих бактерий для мукозного биотопа не была существенна. Индекс доминирования лактозоцегативных энтеробактерий и эшерихий со сниженной ферментативной активностью в полостном микробиоценозе не достигал 1%, а в м}козном — для этих бактерий не определялся ввиду их невысокой численности Экологические параметры индекса разнообразия Шеннона (Н) и равномерность распределения видов в сообществе (У) свидетельствовали, что эти показатели были низкими в мукозном сообществе Н=0,67 и Y=0,32 и высокими в полостном — 11=1,37 и Y=0,70. Низкие показатели распределения видов в мукозном сообществе могли зависить от того, что при оценке характера микрофлоры данного биотопа мы не учитывали всего разнообразия микробов обитающих в этом биоценозе (облигатные анаэробы), а исследовали лишь бифидо-бактернн и факультативно-анаэробные, в основном условно-патогенные энте-робактерии. Это было связано как с несовершенством микробиологической техники выделения всех видов анаэробов, так и с поставленными задачами исследования.

Структура биоценоза кишечника при дисбактриозе выглядела иначе. Сохранялось доминирующее положение за бифидобактериями в полостном и мукозном сообществах (17,8% и 43,3% соответственно), лактобактериями — в мукозном (20,8%), эшерихиями — в полостном (31,1%). Доминирующим видом в полостном сообществе становились эшерихии со сниженной ферментативной активностью (29,6%). В разряд субдоминаптных попадали представители лактобактерий в полостном сообществе (11,4%), лактозонегативные эн-теробактерии (11,2%) и энтерококки (12,1%) — в мукозном. Становился выше

индекс доминирования у лактозонегативных энтеробактернй в по.юстном со-общесгве(7.6%) и в мукозном биотопе (1,6%). Из-за возрастания значимости микроорганизмов, роль которых в микробиоценозе у контрольных животных была несущественна, значительно возросли параметры индекса разнообразия Шеннона — 1,58 и 1,57; равномерности распределения видов — 0,81 и 0,81 в полостном и мукозном сообществах соответственно. Таким образом наблюдалась сукцессия в сообществе полостной и мукозной микрофлоры при изменении условий обитания (введение антибиотика). Для микроэкологических нарушений характерным является увеличение численности условно-патогенных энтеробактернй и приобретение ими субдоминантного положения.

При дисбакгериозе отмечается не только увеличение численности условно-патогенных микроорганизмов, по и изменение их свойств. Отмечено (С.С. Белокрысенко, 1993; В.П. Кузнецов и др., 1995; О.В. Бухарин, А.В. Валышев, 1997), что условно-патогенные бактерии при микроэкологических нарушениях приобретают факторы патогенности, персистенции. Их биологическая активность возрастает и по характеру воздействия на организм человека они приближаются к патогенным микробам, в частности, приобретают способность инактивировать такие факторы неспецифической резистентности как лизоцим и интерферон (С.А. Калашникова, 1999). Выраженные персистентные характеристики условно-патогенных микробов могут свидетельствовать об их потенциальной способности проникать в клетки организма хозяина и размножаться в них. О подобной возможности указывают исследования М.В. Войно-Ясенецкого (1981); Э.П. Галеевой (1984); Л.А.Зарифуллиной (1986). Г.П. Рузаль с соавторами (1985) такое паразитирование бактерий внутри эпителиальных клеток рассматривают как «непрофессиональный фагоцитоз». По мнению В.Г. Петровской и Б.И. Маракуши (1987), инвазия патогена в эпителиальную клетку зависит как от активности возбудителя, так и клеток хозяина.

Поэтому следующим этапом исследования явилось изучение активности кислородзависимых бактерицидных систем (КЗБС) как профессиональных фагоцитов (перитониапьных макрофагов), так и непрофессиональных фагоцитов (эпителиоидных клеток кишечника) у мышей, в динамике экспериментального лекарственного дисбакгериоза.

Проведенные исследования показали, что активность КЗБС у животных не получавших антибиотика сравнительно высока. Показатели активности КЗБС в перитониальных макрофагах интактных животных составили 123±2,8

Ел., энтероцитов и колоноцитов 149+2.5 Ед., 157±3,0 Ел. соответственно. После введения антибиотика происходило значительное снижение активности кисло-родзависимых бактерицидных системах. Так показатели активности КЗБС энтероцитов, колоноцитов составили 21±1,4 Ед. и 20,5+1,6 Ед. соответственно, псриюииальных макрофагов — 15+2,3 Ед. В среднем этот показатель снижался в 7,6 раз. Наиболее выраженное снижение активности бактерицидных систем отмечалось в перитошшльных макрофагах (в 8,2 раза), несколько меньше в эн-тсроцитах и колоноцитах (в 7,1 и 7,6 раза соответственно). Вероятно, это связано с более тесным контактом антибиотика с перитониальными макрофагами при пнугрибрюшиниом способе его введения.

Результаты анализа изменения активности клслородзависимых бактерицидных систем в динамике развития экспериментального дисбактериоза показали, что наиболее низкие показатели активности КЗБС во всех изучаемых клетках отмечались в первые дни после отмены антибиотика (до 21 ± 1,4 Ед. в энтероцитах, 20,5 ± 1,6 Ед. в колоноцитах и до 15 ± 2,3 Ед. в перито-ниальных макрофагах). К 9-м суткам после отмены антибиотика активность КЗБС несколько возрастала — в среднем в 3,0 раза, и оставалась практически на таком уровне до конца срока наблюдения. Однако активность бактерицидкых систем всех изучаемых типов клеток не достигала уровня величин кот-рольных животных. Отмеченные изменения позволяли говорить о схожих процессах в клетках, обеспечивающих как общую, так и местную иммунную защиту.

Представляло определенный интерес сопоставить данные об изменении активное™ КЗБС и микроэкологических нарушений в полостном биоценозе кишечника Проведенный анализ показал, что снижение активности КЗБС как профессиональных так и непрофессиональных фагоцитов сопровождалось увеличением численности условно-патогенных энтеробактерий, гемолитических эшерихий и протеев в составе кишечной микрофлоры. Наиболее четко эта зависимость просматривалась в отношении таких микроорганизмов как лактозо-иегативные энтеробактерии (рис. 1) и гемолитические эшерихии (рис. 2).

здоровые животные

_Время наблюдения (сутки)______

—6— Активность КЗБС энтероцитсв —О— Активность КЗБС колоноцитов —О—Активность КЗБС перитониальных макрофагов —X— Численность лактозонегативных энтеробактерий

Рис. 1. Активность КЗБС профессиональных и непрофессиональных фагоцитов и численность лактозонегативных энтсробактернн при экспериментальном дис-бактериозе

здоровые животные

Время наблюдения (сутки) —й—Активность КЗБС эктероцктов —О—Активность КЗБС юлоноцитов —С—Активность КЗБС перитониальных макрофатов —X— Численность гемолитических эшерихий

Рис. 2. Активность КЗБС профессиональных и непрофессиональных фагоцитов и численность гемолитических эшерихий при экспериментальном дисбактерио-зе

Самые низкие значения активности КЗБС соответствовали наиболее высоким показателям численности условно-патогенных энтсробактерий, гемолитических эшерихий, протеев. Состояние активности КЗБС мало отразилось на количестве бифидо- и лактобактерий. Только наиболее низкие показатели активности КЗБС профессиональных (15±2,3 Ед.) и непрофессиональных (энте-

роциты — 21± 1,4 Ед. и колоноциты — 20,5±1,6 Ед.) фагоцитов совпадали с незначительным снижением численности этих микробов (бифидобактерий до ^ 7,4±0,6 и лактобактерий до 6,3+0,5).

Аналогичный анализ сопоставление активности КЗБС и численности микрофлоры был проведен для мукозного биоценоза. Было установлено, что максимальное снижение активности КЗБС энителиоидных клеток кишечника и перитониальных макрофагов в среднем (до 18,8 +2,8 Ед.) сопровождалось увеличением количества лактозонегативных энтеробактерий (до ^ 4,6+0,8), протеев (до ^ 3.0+0,1). В отличие от полосгного сообщества снижение активности КЗБС сопровождалось снижением численности облигатной микрофлоры (лак-то- и бифидобактерий). При этом отмечалось существенное снижение бифидобактерий до ^ 5,4+0,2 в 1,8 раза (1=5,2) в сравнении с контрольными животными.

Таким образом выявляется четко выраженная коррелятивная связь между состоянием активности КЗБС энтерошггов, колоноцитов и перитониальных макрофагов и численностью условно-патогснных микроорганизмов, гемолитических эшерихий и протеев. Обнаружение этой закономерности позволяет думать, что активность КЗБС клеток макроорганизма является одним из механизмов, приводящих к изменению численности лактозонегативных энтеробактерий, протеев, гемолитических эшерихий в микробном очаге. Именно снижение бактериальной активности клеток может быть фактором способствующем увеличению их численности.

В настоящее время основным средством коррекции микроэкологических нарушений в кишечном биоценозе являются эубиотические препараты. Их использование представляет вид «заместительной терапии» (А.А. Воробьев и др., 1997). Однако отмечено, что эубиотические препараты обладают способностью оказывать иммуностимулирующее действие (Н.Н. Мальцева с соавт., 1992; Т.К. Лапатина и др., 1997; И.М. Федорова с соавт., 1997).

Целью дальнейшего исследования явилось выяснение влияния некоторых эубиотических препаратов на изменение активности кислородзависимых бактерицидных систем эшггелиоидных клеток кишечника и перитониальных макрофагов в процессе коррекции микроэкологических нарушений кишечника при экспериментальном дисбактериозе. Проведенные исследования показали, что под влиянием эубиотических препаратов всех видов происходило повыше-

нис активности кислородзависимых бактерицидных систем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов (рис 3,4).

Сопоставление показателей активности КЗБС перитониапьных макрофагов эпителиоидных клеток кишечника выявило, что наиболее высокие показатели активности КЗБС регистрировались в колоноцитах и энтероцитах, чем в макрофагах.

санации время наблюдения (сутки) —д—Активность КЗ ВС при приеме бифидумбактерина —В—Активность КЗБС при приеме лактобактерина —•—Активность КЗБС при приеме "Vita balance-ЗООО" —#—Активность КЗБС при приеме "Нарииэ" —X—Контрольныэ живот ные

Рис. 3. Сравнительный анализ изменения активности кислородзависимых бактерицидных систем эпителиоидных клеток кишечника при коррекции дисбактериоза разными эубиотиками.

О -j--1-1--V-—--1

дисбиоз 3 9 15,отмена 21

санэцж

время наблюдения (сутки)

—тк— Активность КЗБС при приеме бифидумбактерина —■—Активность КЗБС при приеме пактобактерика —•— Активность КЗБС при приеме "Vita balance-ЗООО"

Активность КЗБС при приеме "Наринэ" —X— Контрольные животные

Рис. 4. Сравнительный анализ изменения активности кислородзависимых бактерицидных систем перитониапьных макрофагов при коррекции дис-бактериоза разными эубиотиками.

Это могло указывать на активное повышение местных факторов неспецифической защиты организма при использовании эубиотических препаратов. Значительнее всего активирующее действие выражено у лактобактерий «Наринэ». Использование этого препарата приводило к увеличению активности бактерицидных систем энтероцитов и колоноцитов (150±6.2 Ед.) до показателей активности кислородзависимых бактерицидных систем у контрольных животных (153±2,7 Ед.) и даже несколько превышало их на 9-ый и 15-ый день наблюдения — 163±2,6 Ед. и 195±4,8 Ед. соответствен по. Такая же закономерность отмечалась и в перитониальных макрофагах, когда их активность (109±3,5 Ед.) практически достигала уровня контрольных животных (123±2,8 Ед.). Несколько ниже было стимулирующее действие бифидумбактерина. Показатели активности КЗБС под влиянием бифидумбактерина не достигали значений контрольных животных, но были более стабильны. Средние значения активности КЗБС в эпителиоидных клетках кишечника составили 109±4,6 Ед. и в перитониальных макрофагах — 75,5±3,7 Ед. против 153±2,7 Ед. и 123±2,8 Ед. соответственно, у контрольных животных. Еще менее выраженным активирующим действием обладали комплексные препараты из лактобактерий: коммерческий лак-тобактерин и «Vita baIance-3000». Средние показатели активности КЗБС энтероцитов и колоноцитов составили 92,5±3,3 Ед., перитониальных макрофагов — 78,5±3,9 Ед. в случае приема лактобактерина и при использовании «Vita baIance-3000» 106,3±3,3 Ед. и 72,6±3,9 Ед. соответственно.

Для всех видов изучаемых клеток организма хозяина было характерным некоторое снижение активности КЗБС, наступающее после отмены эубиотических препаратов. Это действие было менее выражено при использовании бифидумбактерина (снижение к 21 дню до 108±1,2 Ед. в эпителиоидных клетках и до 82,6±3,9 Ед. в макрофагах), «Наринэ» (энтероциты, колоноциты в среднем до 97,1±0,9 Ед. и в макрофагах до 62±3,0 Ед.) и более четко регистрировалось при использовании препаратов лактобактерина и «Vita balance-3000» (в среднем до 82,3±2,3 Ед. в эпителиоидных клетках кишечника и до 60,5±1,7 Ед. в макрофагах). Однако ни в одном случае снижение показателей активности КЗБС не достигало значений этих показателей у животных с дисбактериозом, и превышало их в 1,5 раза в эпителиоидных клетках кишечника и 1,4 раза в перитониальных макрофагах на 21 день наблюдения. Подобное снижение активности КЗБС, наступающее после отмены препаратов, могло быть свидетельством их слабой приживляемоети в кишечнике, что указывает на необходимость раз-

работки новых более рациональных схем применения и новых форм эубиоти-ков, способных обеспечивать их более длительную эффективность.

Обнаруженные изменения активности кислородзанисимых систем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов в процессе коррекции дис-бактсриоза эубиотиками, засгавли более внимательно проследить за микроэкологическими сдвигами в микрофлоре кишечника, происходящие при этом.

Сопоставление изменений в микроэкологии кишечника, наблюдаемые при коррекции дисбактериоза эубиотическими препаратами и активности КЗБС профессиональных и непрофессиональных фагоцитов позволили установить, что повышение активности КЗБС всех видов клеток приводило к снижению численности условно-патогенных энтеробактерий, гемолитических эшерихий, протеев. Проведенный корреляционный анализ активности КЗБС колоноцитов и энтероцитов показал наличие более тесной обратной зависимости между активностью КЗБС колоноцитов и численностью всех видов условно-патогенных микроорганизмов (г=-0,79 для колоноцитов против г=-0,77 в случае энтероцитов). Наиболее высокие показатели активности КЗБС колоноцитов соответствовали низким показателям численности условно-патогенных энтеробактерий, протеев, гемолитических эшерихий.

О наличии тесной связи показателей активности КЗБС непрофессиональных фагоцитов и количеством условно-патогенных микроорганизмов свидетельствовали и различия в коррегирующем действии различных препаратов. Более высокая способность к активации КЗБС препаратами «Наринэ» и бифи-думбактерином обеспечивало более эффективное снижение численности всех видов условно-патогенных микроорганизмов по сравнению с комплексными препаратами лактобактерий. Особенно четко это видно на изменении численности популяций гемолитических эшерихий при использовании разных препаратов. Показатели активности КЗБС колоноцитов, отмечаемые при использовании «Наринэ» (96,3±3,1 Ед.) и бифидумбактерина (109±4,4 Ед.) на 21 день наблюдения, обеспечивали подавление их популяций, тогда как достоверно (t>2) более низкие значения активности КЗБС колоноцитов, регистрируемые при приеме лактобактерина (87 ±2,9 Ед.) и «Vita balance-3000» (78,3+5,6 Ед.), не сдерживали развитие популяции гемолитических эшерихий и их численность к 21 дню увеличивалась (рис. 5, 6).

Время наблюдения (сутки) X—Ахтивносгь КЗБС попоиомигов — — Ч*сп»»сгь геиогжгжеаскк эиЕрюмй |

Рис. 5. Состояние активности КЗБС катоноцитов и численность гемолитических эшернхвй : а) при использовании бифндумбактернна, б) при использовании «Наринэ».

Время наблкэдения (сутки) [—X—Активность КЗБС колоноцитов — —Численность гемолитически< зшерихий

дисбиоз 15 21

Время наблюдения (сутки) j—X —Активность ЮБС колоноцитов •— — Численность гемолитических зшерихий |

Рис. 6. Состояние активности КЗБС колоноцитов и численность гемолитических зшерихий : а) при использовании "Vita balance-3000", б) при использовании лак-тобактсрина.

Проведенный анализ микробного состояния экосистемы при коррекции микрофлоры эубиотическими препаратами свидетельствовал, что применение «Наринэ» и бифидумбактерина способствовало нормализации структуры биотопа кишечника. Восстанавливалось доминирующее положение лактобактерий. Эшерихии со сниженной ферментативной активностью в отличии от дисбиоз-Hoio состояния, где они были доминирующими, практически не определялись (индекс доминирования не достигал 1%). Лактозонегативные энтеробактерии, относимые к редковстрсчающимся при дисбактериозе (индекс доминирования 7,6%), также практически не выявлялись (D = 0,09 для бифидумбактерина и D = 0,001 для «Наринэ»). Подобным эффектом не обладали лактобактерин и «Vita balance-3000». Восстановление доминирующих видов не сопровождалось нормализацией показателей, характеризующих стабильность сообщества. Помимо этого оставались высокие показатели индекса доминирования эшерихий со сниженной ферментативной активностью (9,9% в случае использования лакто-баюерина и 2,4% — «Vita balance-3000»).

Сопоставление результатов оценки микробного состояния микроэкологических нарушений при лекарственном дисбактериозе и показателей активности кислородзависимых систем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов позволяет считать, что одной из возможных причин возникновения микроэкологических нарушений, обусловливающих увеличение численности условно-патогенных микроорганизмов в микробиоценозах кишечника, является снижение активности КЗБС клеток организма хозяина, наступающие под действием ксенобиотиков, в частности антибиотических препаратов. В процессе коррекции дисбактериоза эубиотичсские препараты стимулируют активность КЗБС эпителиоцитов кишечника и перитониальных макрофагов, а повышение их активности сопровождается снижением численности условно-патогенных энтеробактерий. Эта способность лучше выражена у лактобактерий «Наринэ».

Выводы

1. При лекарственном дисбактериозе, обусловленным введением антибиотика, происходят существенные микроэкологические нарушения в биоценозах кишечника, характеризующиеся увеличением численности условно-патогенных энтеробактерий, протеев, гемолитических эшерихий.

2. В динамике развития экспериментального дисбактериоза отмечается

выраженное снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем профессиональных фагоцитов и эпителиоидных клеток кишечника.

3. Установлена четко выраженная зависимость между состоянием активности кислородзависимых бактерицидных сисгем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов и количеством условно-патогенных микроорганизмов в биоценозах кишечника. Снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем сопровождается увеличением численности условно-патогенных энтеробактерий, гемолитических эшерихий, протеев.

4. Эубиотические препараты (бифидумбактерин, лактобактерии «Нари-нэ», коммерческий лактобактерин и «Vita balance-30000») обладают способностью повышать активность кислородзависимых бактерицидных систем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов. Наиболее четко э та способность выражена у лактобактерии «Наринэ».

5. Активность кислородзависимых бактерицидных систем является одним из факторов, регулирующих численность условно-патогенных микроорганизмов при микроэкологичеекпх нарушениях в микрофлоре кишечника, обусловленных введением антибиотиков.

Публикации

1.Терновская Л.Н., Патрушева Е.В., Голошва Е.В., Алешукина A.B. Состояние бактерицидных кислородзависимых систем колоноцитов и энтероци-тов при экспериментальном дисбактериозе «Гомеосгаз и инфекционный процесс» // Тез. Всес. конф.- Саратов, 1998- С.45.

2.Патрушева Е.В., Алешукина A.B., Терновская Л.Н. Состояние кислородзависимых бактерицидных систем клеток кишечника и макрофагов при экспериментальном дисбактериозе и его коррекции препаратом «Наринэ» //Тез. на-уч.-практ. конф. «Актуальные вопросы инфекционной патологии», Ростов-на-Дону, 1999, октябрь.-С.23.

3.Патрушева Е.В., Алешукина A.B., Голошва Е.В., Морозова Н.Е., Терновская Л.Н. Изменение аутофлоры мышей при экспериментальном дисбактериозе и коррекции иммунобиологическими препаратами // Материалы науч. конф. «Актуальные вопросы биологии и медицины», Нальчик, 1999, сентябрь,- С. 87.

4.Патрушева E.1?. Активность перитониальных макрофагов мышей при экспериментальном диебактериозе // Науч. конф. аспирантов и соискателей РГУ: Тез. докл.- Ростов-на-Дон\. 1999,- С.5.

5.Патрушева К.В. Влияние эубиотических препаратов па активность фагоцитирующих клеток ири экспериментальном диебактериозе // Деп. в ВИНИТИ № 178 —В99 от 22.01.1999.

6.Патрушева К.В. Состояние микробоценоза кишечника и кислородзази-симых бактерицидных систем у мышей при лечении дисбактериоза препаратом «Vita balance 3000» // Науч. конф. аспирантов и соискателей РГУ: Из-во Ростовского госуниверситета, 1999. - С. 23.

7. Патрушева П.В., Алешукина A.B., Голошва Б.В. Симбионтная микрофлора ЖКТ человека. Дисбактсриоз и его коррекция. Методич. рекомендации. Росгов-на-Дону, 21 с.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Патрушева, Елена Викторовна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Экологическая система кишечника и ее роль в обеспечении гомеостаза огранизма хозяина.

1.2. Микроэкологические нарушения и условия, способствующие их возникновению.

ГЛАВА 2 Материалы и методы.

2 Л. Объекты исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Биологические.

2.2.2. Микробиологические.

2.2.3. Биохимические.

2.2.4. Оценка микробного сотояния экосистемы.

2.2.5. Статистические.

ГЛАВА 3 Характеристика микроэкологических изменений в кишечной микрофлоре и состояние активности кислородзависимых бактерицидных систем при лекарственном дисбактериозе у мышей.

3.1. Микроэкологические изменения в микрофлоре кишечника мышей при экспериментальном дисбактериозе.

3.2. Экологическая оценка микрофлоры кишечника при экспериментальном дисбактериозе.

3.3. Изучение активности кислородзависимых бактерицидных систем эпителиоидных клеток кишечника и перитониальных макрофагов при экспериментальном дисбактериозе.

ГЛАВА 4 Микроэкологические изменения в кишечнике и активность кислородзависимых систем непрофессиональных фагоцитов кишечника и макрофагов при коррекции экспериментального дисбактериоза эубиотическими препаратами.

4.1. Активность кислородзависимых бактерицидных систем непрофессиональных фагоцитов кишечника и перитониальных макрофагов при коррекции экспериментального дисбактериоза мышей эубиотическими препаратами.

4.2. Микроэкологические изменения в кишечнике мышей при коррекции экспериментального дисбактериоза эубиотическими препаратами.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Микроэкологические изменения при экспериментальном дисбактериозе и роль бактерицидных систем клеток организма хозяина"

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Микроэкологические нарушения эволюционно сложившегося равновесия между организмом и населяющей его микрофлорой, баланса внутрибактериальных ассоциаций, связанные с загрязнением окружающей среды, накоплением в ней ксенобиотиков разного действия и широким применением антибактериальных препаратов становятся все более актуальными (H.A. Аманов с соавт., 1989; С.А. Погорельская с соавт., 1991; Е.А. Лысова, 1994; Т.Н. Савченко, 1994; A.A. Воробьев с соавт., 1996).

Организм человека для населяющей его микрофлоры является средой обитания (Ю.В. Несвижский и др., 1997; О.В. Бухарин, 1997). Характер микробиоценозов, существующих в различных биотопах организма, определяется как реактивностью организма человека, так и взаимодействием микробов в биотопе. (А.И. Парфенов, 1998; О.Н. Минушкин с соавт., 1999). Состояние микробного сообщества кишечника тесно связано с иммунологической реактивностью макроорганизма (A.A. Ленцнер с соавт., 1986; Т.П. Шиманек с соавт., 1996; Т.К. Лопатина и др., 1997; А.Р. Златкина, 2000; А.И. Парфенов с соавт., 2000), взаимодействием факторов местной и общей неспецифической и специфической резистентности (Т.Ч. Лехатинова с соавт., 1992). Как отмечает В.Г. Лиходед с соавторами (1999), сниженный иммунитет может способствовать развитию микроэкологических изменений, в частности дисбактериозов с увеличенным содержанием в кишечнике энтеробактерий. Важная роль в защите слизистых оболочек принадлежит местному иммунитету (Я.С. Шварцман, Л.Б. Хазенсон, 1978; S. Okuyama et al., 1995; Т. Foitzik et al., 1999).

В последние годы к вопросу микроэкологических нарушений микрофлоры организма человека обращались многие исследователи. Большое количество работ достаточно полно отражает изменения микрофлоры при различных состояниях организма (В.М. Бондаренко и др, 1992; Е.М. Горская и др., 1994), биологические свойства условно-патогенных бактерий, выделяемых при дисбактериозах (С.С. Белокрысенко и др., 1992; В.П. Кузнецов и др., 1995; С. А. Калашникова, 1999), разрабатываются методы коррекции микрофлоры при этом состоянии (Г.И. Гончарова с соавт., 1987; A.A. Ленцнер, 1987; Х.Ф. Хергет и др., 1997), рекомендуются для практического использования новые эубиотические препараты (H.H. Мальцева и др., 1992).

Однако механизмы, обеспечивающие развитие микроэкологических изменений, увеличение численности условно-патогенных бактерий в биотопах организма человека, изменения их положения в структуре биоценозов остаются до сих пор неясными. Исследования особенностей микрофлоры кишечника при дисбактериозе, проведенные на большом количестве людей В.Г.

Лиходедом с соавторами (1999), выявили независимость увеличения количества условно-патогенных бактерий кишечника от количественного состава бифидо- и лактобактерий и позволили высказать предположение, что на регуляцию численности условно-патогенных микробов влияют какие-то "интимные механизмы макроорганизма".

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ. Целью настоящей работы явилось определение микроэкологических изменений при экспериментальном лекарственном дисбактериозе и выяснение роли бактерицидных систем клеток организма хозяина в изменении численности условно-патогенных энтеробактерий. Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

- Охарактеризовать микроэкологические изменения в кишечнике при экспериментальном лекарственном дисбактериозе.

Определить изменение активности кислородзависимых бактерицидных систем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов в динамике экспериментального дисбактериоза.

- Выяснить наличие взаимосвязи микроэкологических нарушений в составе кишечной микрофлоры с активностью бактерицидных систем перитонеальных макрофагов и эпителиоидных клеток кишечника.

- Изучить эффективность действия некоторых препаратов, коррегирующих микроэкологические нарушения, на активность кислородзависимых бактерицидных клеток организма хозяина.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

- Впервые установлено, что развитие микроэкологических нарушений в кишечнике тесно связано с активностью кислородзависимых бактерицидных систем непрофессиональных фагоцитов кишечной стенки. Снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем колоноцитов и энтероцитов приводит к значительному увеличению количества условно-патогенных энтеробактерий в составе микрофлоры.

- Впервые показано, что эубиотические препараты обладают способностью стимулировать активность кислородзависимых бактерицидных систем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов. Установлено, что стимуляция их активности сопровождается снижением численности условно-патогенных энтеробактерий. Эта способность наиболее выражена у лактобактерий препарата "Наринэ" и бифиду мбактерина.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательской работы Ростовского государственного университета «Биохимические механизмы индивидуальной устойчивости систем организма к действию экстремальных факторов. Разработка микрометодов диагностики прогноза и оценки эффективности коррекции» (Гос. per. № 01.9.20019876).

Полученные результаты позволили выявить, что одним из механизмов коррегирующего действия эубиотических препаратов является повышение активности кислородзависимых бактерицидных систем непрофессиональных и профессиональных фагоцитов, что позволяет использовать их в качестве профилактических средств в условиях неблагоприятного воздействия факторов окружающей среды.

Материалы диссертации включены в учебные программы и используются в лекционных и практических курсах кафедры биохимии и микробиологии для студентов, специализирующихся в области микробиологии в Ростовском государственном университете.

Разработано и внедрено в практику учебно-методическое пособие для студентов «Симбионтная микрофлора желудочно-кишечного тракта человека. Дисбактериоз и его коррекция».

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертационной работы доложены на научных сессиях биолого-почвенного факультета РГУ (Ростов-на-Дону, 1998—2000 гг.), научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии», посвященной 90-летию Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии (Ростов-на-Дону, 1999), научной конференции «Актуальные вопросы биологии и медицины», посвященной 30-летию кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Кабардино-Балкарского Государственного университета (Нальчик, 1999). 8

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 6 работ, изданы методические рекомендации для студентов Ростовского государственного университета биолого-почвенного факультета, специализирующихся в области микробиологии.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 143 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения и выводов. Список литературы включает 258 источников, в том числе 167 отечественных и 91 зарубежных. Работа иллюстрирована 23 таблицами и 26 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Патрушева, Елена Викторовна

ВЫВОДЫ

2. В динамике развития экспериментального дисбактериоза отмечается выраженное снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем профессиональных фагоцитов и эпителиоидных клеток кишечника.

3. Установлена четко выраженная зависимость между состоянием активности кислородзависимых бактерицидных систем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов и количеством условно-патогенных микроорганизмов в биоценозах кишечника. Снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем сопровождается увеличением численности условно-патогенных энтеробактерий, гемолитических эшерихий, протеев.

4. Эубиотические препараты (бифидумбактерин, лактобактерии «Наринэ», коммерческий лактобактерин и «Vita balance-3000 ">>) обладают способностью повышать активность кислородзависимых бактерицидных систем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов. Наиболее четко эта способность выражена у лактобактерий «Наринэ».

5. Активность кислородзависимых бактерицидных систем является одним из факторов, регулирующих численность условно-патогенных микроорганизмов при микроэкологических нарушениях в микрофлоре кишечника, обусловленных введением антибиотиков.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Организм человека и населяющая его микрофлора представляет собой единую экологическую систему, сложившуюся в процессе длительной эволюции. Для болыпенства микробов, составляющих нормальную микрофлору организма человека, организм хозяина является средой постоянного обитания, которая используется им как "физическое окружение, с возможным получением пищевых ресурсов" (О.В. Бухарин, 1997). С другой стороны микроорганизмы, населяющие организм человека, выполняют множественные функции, сохраняющие гомеостаз организма -хозяина (И.Б. Куваева и др., 1991; 1993; Б.А. Шендеров, 1998). Полученные в последние годы научные данные о роли нормальной микрофлоры позволили заключить, что совокупность населяющих организм человека микробов представляет собой экстракорпоральный орган, оказывающий серьезное влияние на функционирование других органов и систем (Б.А. Шендеров, 199&). Качественный и количественный состав микробиоценозов различных полостей организма человека весьма разнообразен и определяется условиями существования, складывающимися в данном биотопе. Состав микрофлоры в определенной степени зависит от состояния реактивности организма человека, факторов местной и общей резистености, как специфической, так и неспецифической и их взаимодействия. Известно, что существенные изменения в составе микробных популяций в микробиоценозах, изменение свойств микробов могут происходить при воздействии экологически неблагоприятных факторов, накоплением в окружающей среде различных ксенобиотиков, нерациональным использованием антибактериальных средств. Тем не менее, недостаточно хорошо изучень-механизмы, обеспечивающие микроэкологические нарушения.

Первым этапом исследования являлось выявление микроэкологических изменений в кишечнике мышей, получавших антибиотики. Характер микрофлоры животных, получавших гентамицин, сопоставляли с характером микрофлоры животных, не получавших антибиотический препарат. Проведенный анализ полученных данных позволил заключить, что при введении антибиотика происходят существенные изменения микроэкологии кишечника, которые соответствуют дисбактериозу III типа по классификации В.М. Бондаренко с соавт. (1998). Эти изменения касались как представителей транзиторной, так и резидентной микрофлоры. В составе транзиторной микрофлоры отмечалось значительное нарастание условно-патогенных энтеробактерий в 1,7 раза (1=2,9), протеев в 5 раз 0>2). Не менее выраженные изменения отмечались в составе резидентной микрофлоры, особенно в группе факультативно-анаэробных микроорганизмов представленных эшерихиями. В первые дни развития дисбактериоза численность эшерихий увеличивалась в среднем в 1,3 раза (1=4,4). В их популяции практически не обнаруживались эшерихии с нормальной ферментативной активностью, но увеличивалось содержание эшерихий со сниженной ферментативной активностью до ^ 7,4+1,2 (против ^ 4,5+0,5 в контрольной группе животных). В большом количестве выявлялись гемолитические эшерихии — ^ 4,9+0,5, что превышало показатели наличия подобных микроорганизмов у животных контрольной группы практически на 5 порядков. Меньшие изменения отмечались среди анаэробных представителей резидентной микрофлоры - бифидо- и лактобактерий. Количество этих микроорганизмов после проведенной антибиотикотерапии снижалось незначительно. Так содержание бифидобактерий у животных, получавших гентамицин, составляло в среднем ^ 7,4±0,6 против ^ 8,3±0,2 у животных контрольной группы. Несколько в большей степени изменялось количество лактобактерий

6,3+0,5 у получавших гентамицин против 8,6±0,7 в контрольной группе, 1=2,7).

Для более полной характеристики микроэкологических изменений в кишечной микрофлоре при антибиотикотерапии было исследовано состояние не только полостной, но и мукозной микрофлоры кишечника. Сопоставление количественного состава мукозной и полостной микрофлоры по нахождению представителей факультативно-анаэробных и анаэробных микроорганизмов в контрольной группе животных не выявило существенных различий в спектре выделяемых микроорганизмов. И в мукозной, и в полостной флоре присутствовали эшерихии, бифидо- и лактобактерии, стафилококки и энтерокки. Бифидобактерии из мукозной микрофлоры высевались постоянно и в несколько большем количестве, чем из полостной 9,6+0,8 и ^ 8,3+0,2 соответственно), что свидетельствовало об их привалировании в составе мукозного биоценоза. Также постоянно, но в несколько меньшем количестве в мукозной флоре, чем в полостной у контрольных животных присутствовали лактобактерии 6,2+0,5). Меньшая численность, чем в полостной флоре была характерна и для эшерихий 4,5+0,6 против ^ 7,1 ±0,3 в полостной). Однако в их популяции присутствовали эшерихии со сниженной ферментативной активностью 2,07+0,6). Из мукозной микрофлоры высевались лактозонегативные энтеробактерии 2,7±0,5). Ни у одного из животных не были обнаружены гемолитические эшерихии, протеи. Сопоставление общего количества микроорганизмов в мукозном содержимом показало явное преобладание бифидо- и лактобактерий над факультативно-анаэробными представителями. Количество последних на 1 г ткани кишечника не превышало 4 тогда как количество бифидо- и лактобактерий в совокупности достигало 9 ^ КОЕ/г.

В результате введения гентамицина отмечались существенные изменения и в микробиоценозе мукозной флоры кишечника. Количество бифидобактерий отчетливо уменьшилось с lg 9,6±0,8 до lg 5,4±0,2 (t=5,l). В меньшей степени эти изменения касались представителей лактобактерий (lg 6,2±0,5 против lg 5,8±0,2). В мукозном биоценозе возрастало количество факультативно-анаэробных представителей — лактозонегативных энтеробактерий в 1,7 раза (t=2,l) эшерихий со сниженной ферментативной активностью - в 1,6 раза. Высевались протеи и грибы рода Candida.

Проведенные исследования количественного состава микрофлоры полостного и мукозного биотопов свидетельствовали, что самые ранние изменения отмечались в составе эшерихий. Уже на третий день они высевались в большом количестве из полостного сообщества (lg 9,3 ±0,4 против lg 7,1±0,3 у контрольных животных). С девятого дня начинала нарастать численность эшерихий со сниженной ферментативной активностью и к окончанию срока наблюдения в полостном сообществе все эшерихии были представлены последними. Также уже на третий день возрастало содержание протеев. Их количество увеличивалось в 5 раз в полостном и в 3 раза в мукозном биотопах, достигая значений lg 6,0±0,2 и lg 3,0±0,1 соответственно, оставалось на таком высоком уровне до окончания исследования. Подобным образом изменялась численность гемолитических эшерихий. Их количество начинало возрастать в полостном биотопе уже на 3-й день наблюдения 4,9±0,5), а в мукозном на 15-й (1^ 2,2±0,5). Количество лактозонегативных энтеробактерий увеличивалось с 3-го дня исследования в полостном биотопе до ^ 6,1 ±0,8, и в мукозном — до ^ 4,6 ±0,8 и в среднем за весь период наблюдения составило 6,3 ^ в полостном биотопе и 3,7 в мукозном биотопе, что превышало численность таковых у контрольных животных на протяжении всего эксперимента.

Условно-патогенные энтеробактерии высевались из желчного пузыря с 3-го дня исследования, из крови - с 15-го. При этом у контрольных животных из желчнго пузыря и крови бактерии не выявлялись. Обнаружение условно-патогенных микроорганизмов вне кишечного тракта свидетельствовало об их транслокации из кишечника, что характерно для дисбактериоза III — IV типа по классификации В.М. Бондаренко с соавторами (1998).

Для установления основных закономерностей микроэкологических изменений в кишечном биоценозе был проведен анализ полученных материалов с использованием экологических методов оценки микробного очага. При исследовании состава микрофлоры у контрольных животных отмечено, что доминантными видами выступали представители резидентной анаэробной флоры — бифидо- и лактобактерии с индексом доминирования 31,7% и 33,7% в полостном и 71% и 28,9% в мукозном сообществах соответственно. В полостном биотопе к числу доминантных видов относились также эшерихии — 26,3%. Стафилококки и энтерококки относились к редковстречающимся видам в полостном сообществе с индексом доминирования 3,8%; 3,5% соответственно. Тогда как значимость этих бактерий для мукозного биотопа не была существенна. Индекс доминирования лактозонегативных энтеробактерий и эшерихий со сниженной ферментативной активностью в полостном микробиоценозе не достигал 1%, а в мукозном — для этих бактерий не определялся ввиду их невысокой численности. Экологические параметры, характеризующие стабильность сообщества (индекс разнообразия Шеннона и равномерность распределения видов в сообществе) свидетельствовали, что эти показатели были низкими в мукозном сообществе Н=0,67 и У=0,32 и высокими в полостном — Н=1,37 и У=0,70. Как правило, сообщества с невысокими данными характеристиками менее стабильны, чем сообщества с большим количеством видов, участвующих в формировании экологического биотопа. Видовое разнообразие в тонких локусах, по мнению Ю. Одума (1986), при воздействии повреждающих факторов увеличивается в гораздо больших размерах по сравнению с более стабильными экосистемами. Таким образом, чем выше индекс разнообразия, и, следовательно, равномернее распределение видов в сообществе, тем стабильнее микроценоз (М. Бигон с соавт., 1989).

Структура биоценоза кишечника при дисбактериозе выглядела иначе. Сохранялось, хотя и снижался индекс доминирования, доминирующее положение за бифидобактериями в полостном и мукозном сообществах (17,8% и 43,3% соответственно), лактобактериями — в мукозном (20,8%), эшерихиями — в полостном (31,1%). Доминирующим видом в полостном сообществе становились эшерихии со сниженной ферментативной активностью (29,6%). В разряд субдоминантных попадали представители лактобактерий в полостном сообществе (11,4%), лактозонегативные энтеробактерии (11,2%) и энтерококки (12,1%) — в мукозном. Становился выше индекс доминирования у лактозонегативных энтеробактерий в полостном сообществе(7,6%) и в мукозном биотопе (1,6%). Из-за возрастания значимости микроорганизмов, роль которых в микробиоценозе у контрольных животных была несущественна, значительно возросли параметры индекса разнообразия Шеннона — 1,58 и 1,57; равномерности распределения видов — 0,81 и 0,81 в полостном и мукозном сообществах соответственно. Таким образом наблюдалась сукцессия в сообществе полостной и мукозной микрофлоры при изменении условий обитания (введение антибиотика), а именно смена доминантных видов. Для микроэкологических нарушений характерным является увеличение численности условно-патогенных энтеробактерий, приобретение ими субдоминантного положения.

При дисбактериозе отмечается не только увеличение численности условно-патогенных микроорганизмов, но и изменение их свойств. Отмечено (G.C. Белокрысенко и др., 1992; В.П. Кузнецов и др., 1995; О.В. Бухарин и др., 1996; A.B. Валышев и др., 1996), что условно-патогенные бактерии при микроэкологических нарушениях приобретают факторы патогенности, персистенции. Их биологическая активность возрастает и по характеру воздействия на организм человека они приближаются к патогенным микробам, в частности, приобретают способность инактивировать такие факторы неспецифической резистентности как лизоцим и интерферон (С.А. Калашникова, 1999). Выраженные персистентные характеристики условно-патогенных микробов могут свидетельствовать об их потенциальной способности проникать в клетки организма хозяина и размножаться в них. О подобной возможности указывают исследования М.В. Войно-Ясенецкого (1981); Э.Л. Галеевой (1984); JI.A. Зарифуллиной (1986). Г.П. Рузаль с соавторами (1985) такое паразитирование бактерий внутри эпителиальных клеток рассматривают как "непрофессиональный фагоцитоз". По мнению В.Г. Петровской и Б.И. Маракуши (1987), инвазия патогена в эпителиальную клетку зависит как от активности возбудителя, так и клеток хозяина.

Поэтому следующим этапом исследования явилось изучение активности КЗБС как профессиональных фагоцитов (перитонеальных макрофагов), так и непрофессиональных фагоцитов (эпителиоидных клеток кишечника) у мышей, в динамике экспериментального лекарственного дисбактериоза.

Проведенные исследования показали, что активность КЗБС у животных не получавших антибиотика сравнительно высока. Показатели активности КЗБС в перитонеальных макрофагах интактных животных составили 123+2,8 Ед., энтероцитов и колоноцитов 149±2,5 Ед., 157±3,0 Ед. соответственно. После введения антибиотика происходило значительное снижение активности кислородзависимых бактерицидных систем. Так показатели активности КЗБС энтероцитов, колоноцитов составили 21±1,4 Ед. и 20,5±1,6 Ед. соответственно, перитонеальных макрофагов — 15+2,3 Ед. В среднем этот показатель снижался в 7,6 раз. Наиболее выраженное снижение активности бактерицидных систем отмечалось в перитонеальных макрофагах (в 8,2 раза), несколько меньше в энтероцитах и колоноцитах (в 7,1 и 7,6 раза соответственно). Вероятно, это связано с более тесным контактом антибиотика с перитонеальными макрофагами при внутрибрюшинном способе его введения.

Результаты анализа изменения активности кислородзависимых бактерицидных систем в динамике развития экспериментального дисбактериоза показали, что наиболее низкие показатели активности КЗБС во всех изучаемых клетках отмечались в первые дни после отмены антибиотика (до 21 + 1,4 Ед. в энтероцитах, 20,5 ±1,6 Ед. в колоноцитах и до 15 + 2,3 Ед. в перитонеальных макрофагах). К 9-м суткам после отмены антибиотика активность КЗБС несколько возрастала — в среднем в 3,0 раза и оставалась практически на таком уровне до конца срока наблюдения. Однако активность бактерицидных систем всех изучаемых типов клеток не достигала уровня величин контрольных животных. Отмеченные изменения позволяли говорить о схожих процессах в клетках, обеспечивающих как общую, так и местную иммунную защиту.

Представляло определенный интерес сопоставить данные об изменении активности КЗБС и микроэкологических нарушениях в биоценозе кишечника.

Проведенный анализ показал, что снижение активности КЗБС как профессиональных так и непрофессиональных фагоцитов сопровождалось увеличением численности условно-патогенных энтеробактерий, гемолитических эшерихий и протеев в составе кишечной микрофлоры. Наиболее четко эта зависимость просматривалась в отношении таких микроорганизмов как лактозонегативные энтеробактерии и гемолитические эшерихии.

Наиболее высокие значения активности КЗБС соответствовали наиболее высоким показателям численности условно-патогенных энтеробактерий, гемолитических эшерихий, протеев. Состояние активности КЗБС мало отразилось на количестве бифидо- и лактобактерий. Только наиболее низкие показатели активности КЗБС профессиональных (15±2,3 Ед.) и непрофессиональных (энтероциты — 21±1,4 Ед. и колоноциты — 20,5+1,6 Ед.) фагоцитов совпадали с незначительным сниженим численности этих микробов ( бифидобактерий до lg 7,4±0,6 и лактобактерий до lg 6,3+0,5).

Таким образом выявляется четко выраженная коррелятивная связь между состоянием активности КЗБС энтероцитов, колоноцитов и перитонеальных макрофагов и численностью условно-патогенных микроорганизмов, гемолитических эшерихий и протеев. Обнаружение этой закономерности позволяет думать, что активность КЗБС клеток макроорганизма является одним из механизмов, приводящих к изменению численности лактозонегативных энтеробактерий, протеев, гемолитических эшерихий в микробном очаге. Именно снижение активности бактерицидных систем клеток может быть фактором способствующим увеличению численности условно-патогенных микроорганизмов.

В настоящее время основным средством коррекции микроэкологических нарушений в кишечном биоценозе являются эубиотические препараты. Их использование представляет вид «заместительной терапии» (A.A. Воробьев и др., 1997). Однако отмечено, что эубиотические препараты обладают способностью оказывать иммуностимулирующее действие (H.H. Мальцева с соавт., 1993; Т.К. Лопатина и др., 1997).

Целью дальнейшего исследования явилось выяснение влияния некоторых эубиотических препаратов на изменение активности кислородзависимых бактерицидных систем эпителиоидных клеток кишечника и перитонеальных макрофагов в процессе коррекции микроэкологических нарушений кишечника при экспериментальном дисбактериозе. Проведенные исследования показали, что под влиянием эубиотических препаратов всех видов происходит повышение активности кислородзависимых бактерицидных систем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов.

Сопоставление показателей активности КЗБС перитонеальных макрофагов и эпителиоидных клеток кишечника выявило, что наиболее высокие показатели активности КЗБС регистрировались в колоноцитах и энтероцитах, чем в макрофагах. Это могло указывать на активное повышение местных факторов неспецифической защиты организма при использовании эубиотических препаратов. Значительнее всего активирующее действие выражено у лактобактерий «Наринэ». Использование этого препарата приводило к увеличению активности бактерицидных систем энтероцитов и колоноцитов (150±6,2 Ед.) до показателей активности кислородзависимых бактерицидных систем у контрольных животных (153±2,7 Ед.) и даже несколько превышало их на 9-ый и 15-ый день наблюдения — 163±2,6 Ед. и 195±4,8 Ед. соответственно. Такая же закономерность отмечалась и в перитонеальных макрофагах, когда их активность (109±3,5 Ед.) практически достигала уровня контрольных животных (123±2,8 Ед.). Несколько ниже было стимулирующее действие бифидумбактерина. Показатели активности КЗБС подх влиянием бифидумбактерина не достигали значений контрольных животных, но были более стабильны. Средние значения активности КЗБС в эпителиоидных клетках кишечника составили 109±4,6 Ед. и в перитонеальных макрофагах — 75,5±3,7 Ед. против 153±2,7 Ед. и 123±2,8 Ед. соответственно у контрольных животных. Еще менее выраженным активирующим действием обладали комплексные препараты из лактобактерий: коммерческий лактобактерин и «Vita balance-3000». Средние показатели активности КЗБС энтероцитов и колоноцитов составили 92,5±3,3 Ед., перитонеальных макрофагов — 78,5±3,9 Ед. в случае приема лактобактерина и при использовании «Vita balance-3000» 106,3±3,3 Ед. и 72,6±3,9 Ед. соответственно.

Для всех видов изучаемых клеток организма хозяина было характерным некоторое снижение активности КЗБС, наступающее после отмены эубиотических препаратов. Это действие было менее выражено при использовании бифидумбактерина (снижение к 21 дню до 108±1,2 Ед. в эпителиоидных клетках и до 82,6±3,9 Ед. в макрофагах), «Наринэ» (энтероциты, колоноциты в среднем до 97,1 ±0,9 Ед. и в макрофагах до 62±3,0 Ед.) и более четко регистрировалось при использовании препаратов лактобактерина и «Vita balance-3000» (в среднем до 82,3±2,3 Ед. в эпителиоидных клетках кишечника и до 60,5±1,7 Ед. в макрофагах). Однако ни в одном случае снижение показателей активности КЗБС не достигало значений этих показателей у животных с дисбактериозом и превышало их в 1,5 раза в эпителиоидных клетках кишечника и 1,4 раза в перитонеальных макрофагах на 21 день наблюдения. Подобное снижение активности КЗБС, наступающее после отмены препаратов, могло быть свидетельством их слабой приживляемости в кишечнике, что указывает на необходимость разработки новых более рациональных схем применения и новых форм эубиотиков, способных обеспечивать их более длительную эффективность.

Обнаружение изменений активности кислородзависимых систем профессиональных и непрофессиональных фагоцитов в процессе коррекции дисбактериоза эубиотиками заставляют более внимательно проследить за микроэкологическими сдвигами в микрофлоре кишечника, происходящие при этом.

Сопоставление изменений в микроэкологии кишечника, наблюдаемые при коррекции дисбактериоза эубиотическими препаратами, и активности КЗБС профессиональных и непрофессиональных фагоцитов позволили установить, что повышение активности КЗБС всех видов клеток приводило к снижению численности условно-патогенных энтеробактерий, гемолитических эшерихий, протеев. Проведенный корреляционный анализ активности КЗБС колоноцитов и энтероцитов показал наличие более тесной обратной зависимости между активностью КЗБС колоноцитов и численностью всех видов условно-патогенных микроорганизмов (г=-0,79 для колоноцитов против г=-0,77 в случае энтероцитов). Наиболее высокие показатели активности КЗБС колоноцитов соответствовали низким показателям численности условно-патогенных энтеробактерий, протеев, гемолитических эшерихий.

О наличии тесной связи показателей активности КЗБС непрофессиональных фагоцитов и количеством условно-патогенных микроорганизмов свидетельствуют и различия в коррегирующем действии различных препаратов. Более высокая способность к активации КЗБС препаратами «Наринэ» и бифидумбактерином обеспечивает более эффективное снижение численности всех видов условно-патогенных микроорганизмов по сравнению с комплексными препаратами лактобактерий. Особенно четко это видно на изменении численности популяций гемолитических эшерихий при использовании разных препартов. Показатели активности КЗБС колоноцитов, отмечаемые при использовании «Наринэ» (96,3±3,1 Ед.) и бифидумбактерина (109+4,4 Ед.) на 21 день наблюдения, обеспечивают подавление их популяций, тогда как достоверно (t>2) более низкие значения активности КЗБС колоноцитов, регистрируемые при приеме «Vita balance-3000» (78,3±5,6 Ед.), и энтероцитов, при использовании лактобактерина (66,6±4,4 Ед.) не сдерживают развитие популяции гемолитических эшерихий и их численность к 21 дню увеличивается.

Проведенный анализ микробного состояния экосистемы при коррекции микрофлоры эубиотическими препаратами свидетельствовал, что применение «Наринэ» и бифидумбактерина способствовало нормализации структуры биотопа кишечника. Восстанавливалось доминирующее положение лактобактерий. Эшерихии со сниженной ферментативной активностью в отличии от дисбиозного состояния, где они были доминирующими, практически не определялись (индекс доминирования не достигал 1%). Лактозонегативные энтеробактерии, относимые к редковстречающимся при дисбактериозе (индекс доминирования 7,6%), также практически не выявлялись (D = 0,09 для бифидумбактерина и D = 0,001 для «Наринэ»). Подобным эффектом не обладали лактобактерин и «Vita balance-3000». Восстановление доминирующих видов не сопровождалось нормализацией показателей, характеризующих стабильность сообщества. Помимо этого оставались высокие показатели индекса доминирования эшерихий со сниженной ферментативной активностью (9,9% в случае использования лактобактерина и 2,4% — «Vita balance-3000»).

113

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Патрушева, Елена Викторовна, Волгоград

1. Алмагамбетов К.Х., Горская Е.М., Бондаренко В.М. Транслокация кишечной микрофлоры и ее механизмы // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1991.- №10.- С.74-78.

2. Аманов H.A., Гариб Ф.Ю., Умаров Я.А. Микробная экология кишечника и ее изменения под влиянием иммунодепрессантов // Антибиотики и химиотер.-1989.-Т.34, №6.- С.453-457.

3. Амбарцумян А.Д., Дехцунян K.M., Атопек С.Я. Изучение антагонизма между госпитальными штаммами Staphylococcus aureus и молочно-кислыми бактериями in vitro и использование последних в качестве санирующего средства // Журн. микробиол.-1983, №8.-С.36-38.

4. Ануфриева Р.Г. Влияние рифампицина на колонизационную резистентность толстого кишечника./Колонизационная резистентность и химиотеропевтические антибактериальные препараты, Всесоюзный семинар, 28 29 июня 1988, Москва.ч.1.-С.28 - 30.

5. Анциаури Н.Э., Ганьковская Л.В., Шуйкина Э.Я. и др. Генерация активных форм кислорода макрофагами мышей: влияние генотипа, иммуноцитокинов и инфецирования.// ЖМЭИ.- 1994, №2.- С.84-89.

6. Бабак О.Я. Синдром раздраженной толстой кишки. Перспективы улучшения каяества жизни. // Врачеб. дело.-1997.-№2.-С. 9-14.

7. Бабин В.Н., Домародский И.В., Дубинин A.B., Кондракова O.A. Биохимические и молекулярные аспекты симбиозачеловека и его микрофлоры.//Рос.хим.журнал.-1994.-№6.-С.66 77.

8. Байбеков И.М., Мавлян -Ходтаев Р.Ш., Ирсолиев Х.И. Взаимодействие индигенных пристеночных микроорганизмов с клетками слизистой оболочки пищеварительного тракта. // Архив, патологии.- 1992, Т. 54, №5.- С. 18-24.

9. Бевз Н.И., Буданова Е.В., Пашков Е.П. и др. Микрофлора кишечника у больных воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области // ЖМЭИ.-1994.-№4.-С.22-24.

10. Беюл Е.А., Екисенина Н.И. Хронические энтериты и колиты. -М.: Медицина, 1975. 238с.

11. Беюл Е.А., Куваева И.Б. Дисбактериозы кишечника и их клиническое значение // Клин. мед. 1986.- №11С.37-44.

12. Бигон М., Харпер Дж., Таунсенд К. Экология. Особи, популяции и сообщества: В 2-х томах. Т.2.: Пер. с англ. М.: Мир, 1989. - 477с.

13. М.Блохина И.Н., Дорофейчук В.Г. Дисбактериозы. J1 Медицина.- 1979.-175с.

14. Блюгер А.Ф., Векслер Х.М., Новицкий И.Н. Клиническая иммунология кишечных инфекций. Рига: Звайгзне, 1980. -212с.

15. Бокова А.Г., Козлова Т.Г., Маккавеева Л.Ф. Диагностика и лечение дисбактериоза кишечника у детей.//Методические рекомендации. М., 1990. с.16.

16. Бондаренко В.М., Боев Б.В., Лыкова Е.А., Воробьев А.А. Дисбактериозы желудочно-кишечного тракта // Росс, журнал гастроэнтерологии, гепатол. и коликтопроктол.- 1998.- №1.-С.66-70.

17. Бондаренко В.М., Горская Е.М. // Медицинские аспекты микробной экологии,- 1992.- Вып. 6.- С. 23-26.

18. Бондаренко В.М., Петровская В.Г. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры // Вестн. РАМН.- 1997.-№3.- С.7-9.

19. Бондаренко В.М., Учайкин В.Ф., Мурашова А.О., Абрамова Н.А. Дисбактериоз. Современные возможности профилактики и лечения. Москва, 1995. с.132.

20. Боссарт В., Попова-Барзашка С., Тарабрина Н.П., Коршунов В.М. Определение антагонистической активности лактобактерий Солко (Lactobacillus acidophilus Lat 11/83) при использовании гнотобиологической техники. // Журн. микробиол.- 1990.- №9.- С.3-6.

21. Боссарт В., Попова-Барзашка С., Тарабрина Н.П., Коршунов В.М. Изучение влияния препарата из лактобактерий "Солко" на выживаемость и микрофлору кишечника у облученных животных. //Журн. микробиол.- 1990.- №11.- С.6-9.

22. Боссарт В., Попова-Барзашка С., Тарабрина Н.П., Коршунов

23. B.М. Влияние лактобактерий "Солко" (Lactobacillus acidophilus) на выживаемость и микрофлору мышей при сальмонеллезной инфекции. // Журн. микробиол.- 1990.- №7,1. C.14-15.

24. Бухарин О.В. Персистенция бактерий // Актовая речь. Оренбург, 1992.-32 с.

25. Бухарин О.В., Литвин В.Ю. Патогенные бактерии в природных экосистемах. Екатеринбург.-1997.-269 с.

26. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я. Бактерионосительство. Екатеринбург: УрО РАН, 1996. с. 196.

27. Ван- дер-Ваай Д. Пищеварительный тракт как главный эндогенный источник бактериальных и грибковых инфекций // Антибиотики и химиотер.- 1992.- Т.37.- №6.- С.36-41.

28. Васильева Л.И. Микробные биоценозы новорожденных в условиях нормы и септических заболеваний // Дис. д-ра мед. наук.- Ростов-на-Дону.-1990.-284с.

29. Войно-Ясенецкий М.В. Биология и патология инфекционных процессов. Л.: Медицина.- 1981.- 208 с.

30. Волоснякова И.В., Шендеров Б.А. Холистеринмодулирующая активность лактобациллы и продуктов питания направленного действия in vitro и in vivo/ Всероссийская научно-практическая конф. "Дисбиозы и эубиотики", Тез. докл. М. 1996.

31. Воробьев A.A., Абрамов H.A., Бондаренко В.М. // Дисбактериозы и эубиотики: Тезисы докладов Всерос. науч.-практ. конф.-М., 1996.-С.42.

32. Воробьев A.A., Абрамов H.A., Бондаренко В.Н., Шендеров Б.А. Дисбактериозы — актуальная прблема медицины // Вестн. РАМН.- 1997.- №3.-С.4-7.

33. Воробьев A.A., Иноземцева JI.O., Несвижский Ю.В. Значение патологического процесса в формировании изменчивости микробиологического фенотипа кишечника человека // Бюл. эксперим. биологии и медицины.- 1997.- Том 123.- №2.- С. 176180.

34. Галеева Э.Л. Цитопатогенное действие нейссерий на клеточной культуре и использование его для характеристики нейссерий: Автреф. Дисс. канд. мед. наук. М., 1984, 23с.

35. Гистология/ Под ред. В.Г. Елисеева, Ю.И. Афанасьева, H.A. Юриной. 3-е изд. М.: Медицина, 1983. - 592с.

36. Гончарова Г.И. Бифидофлора человека и необходимость ее оптимизации. В сб. науч. тр.: Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве -М., 1986- 208с.

37. Гончарова Г.И., Дорофейчук В.Г., Смолянская А.З. Микробная экология кишечника в норме и при патологии // Антибиотики и химиотер.- 1989.- №6.- С.462-468.

38. Гончарова Г.И., Семенова Л.П. и др. Бифидофлора человека, ее нормализующие и защитные функции // Антибиотики и мед. биотехнология.- 1987.- №3.- С. 179-183.

39. Гончарова Е.Л. Фекальная и кожная микрофлора детей, больных СПИД и некоторыми СПИД- маркирующими инфекциями. Автореф. дисс. канд. мед. наук. Ростов-на Дону.-1994.-21с.

40. Горская Е.М. и др. Связывание лактобацилл с некоторыми растворимыми белками и пектинами // ЖМЭИ.-1994.-№1.-С.42-47.

41. Горская Е.М., Зайцева Л.Г., Бондаренко В.М., Васильева В.И., Корниенко О.Ю., Мазанкова Л.Н. Регуляция амбеном кишечной микрофлоры и функциональной активности макрофагов в эксперименте. //ЖМЭИ.-1995.-№1.-с.87 90.

42. Горская Е.М., Лизько H.H., Ленцнер A.A., Бондаренко В.М., Соколова К.Я., Лихачева А.Ю. Биологическая характеристика штаммов лактобацилл, перспективных в качестве эубиотика.//ЖМЭИ.-1992.-№3.-с. 17 20.

43. Грачева М.П. Определение бактерицидной силыальвеолярных макрофагов с помощью НСТ-теста. // ЖМЭИ.1984,№2.- С.87-88.

44. Гришина И.А., Далина А.М., Яковлев В.П. Влияние антибиотиков на адгезию микроорганизмов // Антибиотики и химиотер.- 1990.- Т.ЗЗ.- №3.- С.50-53.

45. Громов Б.В., Павленко Г.В. Экология бактерий: Учеб. пособие.- JL: Издательство Ленинградского университета, 1989.- 248с.

46. Гуськова Т.А., Пушкина Т.В., Радкевич Т.П. Возможность развития дисбактериоза при использовании лекарственных средств различных фармакологических групп. // Химико-фармакологический журнал.- 1997.-№7.-С.10-11 .

47. Гуторова А.Д., Молочаева И.С. Кишечный дисбактериоз как диагностический показатель.- Таллин, 1985.- С. 153-154.

48. Джиджешвили Л.Ш., Коринтели В.И., Мейпариани А.Н. и др. Роль лизосом в процессе развития стафилококковой инфекции фибробластов. //Журн. микробиол. 1985,- №5.- С.13-16.

49. Добротина H.A., Ежова Г.Т., Казацкая Ж.М. и др. Сравнительная характеристика биологической и иммуномодулирующей активности некоторых ферментных препаратов микробного происхождения // Биол. науки.- 1992.-№2.- С.90-96.

50. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках: Учебник.- М.: Из-во МГУ,1994.-С.59.

51. Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул.- М., 1985.- 236 с.

52. Езепчук Ю.В. Функциональные критерии патогенности микроорганизмов // Журн. микробиол.- 1988.-№5.-С.113-116.

53. Зайцева Л.Г., Васильева Е.И. К механизму комбинированного воздействия иммуномодуляторов на фагоцитарные клетки. // ЖМЭИ.- 1994, №4.- С.73-77.

54. Зайцева Л.Г., Васильева Е.И., Горская Е.М. Функциональная активность макрофагов при экспериментальных дисбактериозах кишечника крыс.//ЖМЭИ.-1991.-№8.-С.68 71.

55. Златкина А.Р. Синдром раздраженного кишечника. // Рос. журн. гастроэнтерологии. 2000. - № 1. - С.13-18.

56. Изачик Ю.А., Корсунский A.A., Миху И .Я. Дисбактериоз кишечника.// Мед.помощь.-1993.-№2.-С.58 60.

57. Калашникова С.А. Функциональная система "лизоцим-антилизоцим" в формировании микробиоценоза кишечникачеловека: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Волгоград.- 1999.-23с.

58. Карки Т.В., Ленцнер Х.П., Ленцнер A.A. Количественный состав лактофлоры и методика его определения.// ЖМЭИ.-1994, №4.-С. 16-18.

59. Кафарская Л.И., Гладько И.А., Ефимов Б.А. и др. Изучение влияния кисломолочного бифидумбактерина на микрофлору кишечника у летчиков-испытателей// ЖМЭИ. 1992. - №4. -С.12.

60. Кафарская Л.И., Ефимов Б.А., Гладько И.А., Тарабрина Н.П., Фонская Р.Д., Коршунов В.М. Изучение состояния микрофлоры кишечника у лиц, находящихся в контакте с различными антимикробными препаратами.//ЖМЭИ.-1992,-№9.-с.25 27.

61. Кашкин К.П., Караева З.О. Иммунная реактивность организма и антибиотическая терапия./Л., Медицина, 1984.-191с.

62. Квасников Е.И. Место и значение молочнокислых бактерий в биосфере/ Микробиол. журн. 1992. - Т.54. - №5. - С.39.

63. Клемпарская И.Н. Некоторые итоги метода изучения видового состава микробов аутофлоры как показателей состояния реактивности организма.- В кн.: Аутофлора здорового и больного организма. Материалы научн. конф.-Таллин, 1978.-С.З-7.

64. Коваленко И.К., Немеровская А.П. Бактериоцины молочнокислых бактерий. /Микроорганизмы в сельском хозяйстве, Пущино.- 1992.- 935 с.

65. Константинов Н.Ю., Тюрин М.В., Воропаев Е.А и др. Бактерии рода Eubacterium и их участие в стероидном обмене //Журн. микробиол.- 1994.- №2.- С.114-119.

66. Коршунов В.M. Прблема регуляции микрофлоры кишечника./Журн.микробиол.-1995.-№3.-С.48 55.

67. Коршунов В.М., Карупета М.М., Пинегин Б.В. Иммуномодулирующий эффект анаэробных представителей микрофлоры кишечника // Механизмы иммуностимуляции.-Киев.- 1985.- С.114-115.

68. Коршунов В.М., Пинегин Б.В. Новые подходы к проблеме регуляции микрофлоры кишечника // Вест. акад. мед. наук -М., Медицина, 1985. С.66-73.

69. Кузиков А.Н., Бондаренко В.М., Лыкова Е.А. и др. Особенности казеинолитической активности содержимого толстой кишки при дисбиотическом состоянии. // Журн. Микробиол.- 1998.- № 1.- С. 80-83.

70. Костюкова Н.Н. Начальный этап инфекционного процесса — колонизация и пути ее предотвращения // Журн. микроб. -1989.-№9.- С.103-110.

71. Кравцова Е.О. Колонизация микроорганизмами слизистой оболочки полости рта людей, живущих в неблагоприятной экологической обстановке: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Волгоград.- 1995.- 22с.

72. Крамарь B.C., Крамарь Л.В., Чижикова Т.С. и др. Колонизационная резистентность пищеварительного тракта.: Методические рекомендации для врачей.- Волгоград, 1992.-18с.

73. Крамарь B.C., Крамарь О.Г., Савченко Т.Н. Пространственная структура экологических групп в кожном микробиоценозе здоровых людей г. Волгограда // Тез. докл. 49 науч. сессии.- Волгоград, 1994.-С.22.

74. Крамарь B.C., Перов Ю.А., Крамарь O.P. Дисбактериоз. Причины возникновения, лечение и профилактика.- Ростов-на-Дону, 1988.-25с.

75. Крамарь Л.В., Загороднева Е.А., Кюнрикова И.Е., Никешина Н.В. Дисбактериоз кишечника, пути его коррекции./ Учебн. пособие для студентов и врачей, Волгоград. -1999. 50с.

76. Краскина H.A. и др. Иммунный статус и микрофлора кишечника у больных полиартритом инфекционно-аллергической природы в процессе лечения бифидумбактерином // Иммунология.- 1996.- №4.- С.52-54.

77. Красноголовец В.Н. Дисбактериоз кишечника, М.: Медицина, 1989. 143с.

78. Куваева И.Б., Веселова О.Л., Кузнецова Г.Г. Микроэкологическая система пищеварительного тракта при пищевой аллергии у детей // Проблем, иммунол. и аллергол. в дет. гастроэнтерологии.- Н.Новгород.- 1991.- СЛ02-109.

79. Куваева И.Б., Кузнецова Г.Г. Антагонистическая активнсоть микробных популяций защитной флоры и ее связи с характеристикой микробиоценоза и факторами питания // Вопросы питания 1993.- №3. -С.46-50.

80. Куваева И.Б., Ладодо К.С. Микроэкологические и иммунные нарушения у детей: диетическая коррекция.-М.: Медицина, 1991.-240с.

81. Кузнецов В.П., Беляев Д.Л., Бабаянц A.A. и др. //Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. Челябинск, 1995.-С. 66-67.

82. Кульбер А.Я. Молекулярная иммунология.- М.: Высшая школа, 1985.- 287с.

83. Кульбер А.Я. Регуляция иммуного ответа.- М.: Медицина, 1986.- 224с.

84. Лакин Ю.В. Биометрия. М.: Высш. шк. - 1990. - С.37-39.

85. Лапчинская A.B., Заславская П.А., Шендеров Б.А., Навашин С.М. Влияние цефалексина на колонизационную резистентность толстой кишки экспериментальных животных.// Антибиотики и химиотерапия.- 1989, №2.- С.48-51.

86. Лапчинская A.B., Шендеров Б.А., Чахава О.В. и др. Изменение микрофлоры толстой кишки крыс при оральном введении цефалексина и эритромицина.// Антибиотики и мед. биотехнология.- 1987, №3.- С.85-87.

87. Лапшина Г.Н., Федорова Е.Р. и др. Дисбактериоз кишечника у детей // Казанский мед. журнал.- 1993.- №6.- С.441-443.

88. ЮО.Ленцнер A.A., Ленцнер Х.П. и др. Лактофлора и колонизационная резистентность // Антибиотики и мед. биотехнология.- 1987.-№3.-С.173-177.

89. Лехатинова Т.Ч., Николаев С.М., Шендеров Б. А. // Медицинские аспекты микробной экологии.- М., 1992.- Вып. 6.-С.90-92.

90. Ю2.Лизько H.H. Дисбактериозы экстремальных состояний // Антибиотики и мед. биотехнология.-1987.-№3.-С.184 186.

91. Лиходед В.Г., Каверина К.Г., Кочурко Л.И., Лобова Е.А. Микробиологическая характеристика дисбактериозов кишечника у детей и взрослых в г. Москве. // Журнал, микробиол.- 1999,- № 4.- С.- 65-67.

92. Ю5.Лиходед В.Г., Чхаидзе И.Г. Развитие кишечного дисбактериоза у новорожденных при дефиците антител к Re-гликолипиду // ЖМЭИ.- 1998.- №4.- С.67-68.

93. Юб.Логинов А.С., Царегородцева Т.М., Зотина М.М. Имунная система и болезни органов пищеварения. М.: Медицина. -1986.- 255с.

94. Лопатина Т.К., Бляхер М.С., Николаенко В.Н. и др. Иммуномодулирующее действие препаратов-эубиотиков // Вест. Рос. Акад. мед. наук.- М., Медицина.- 1997, №3.- С.30-34.

95. Ю8.Лысова Е.А. Причины и лечение микроэкологических нарушений пищеварительной системы // Антибиотики и химиотер.- 1994.- Т.39.- №7.- С.57-60.

96. Ю9.Ляшенко В.А., Дрожанников В.А., Молотковская И.М. Механизмы активации иммунокомпетентных клеток. М.: Медицина, 1988.- 239с.

97. Ю.Мазанкова Л.Н., Запруднов A.M. Микроэкология кишечникау детей в норме и при патологии.//Рос.мед.вести.-1996.-№1.-С.34 43.

98. Ш.Максимов В.И., Родоман В.Е. Кислотность кишечника как защитный фактор организма хозяина. // Журн. микробиол.-1998.-№4.-С. 96-101.

99. Малыгина Н.Б. Функциональная морфология слизистой оболочки кишечника в норме и при некоторых острых кишечных инфекционных заболеваниях. Автореф. дис. док. мед. наук., М., 1978.- 30с.

100. З.Мальцева Н.Н., Смеянов В.В. Сравнительная характеристика иммуномодулирующей активнсоти различных штаммов Lactobacillus acidophilus "Solco".// Журн. микробиол.- 1993, №3.- С.81-84.

101. Мальцева Н.Н., Шкарупета М.М., Пинегин Б.В., Коршунов В.М. Иммуномодулирующие свойства некоторых микробов —представителей нормальной микрофлоры кишечника // Антибиотики и химиотер.- 1992.- №12.- С.41-43.

102. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Изд-во Наука, Сиб. отд. - Новосибирск. - 1983. -254с.

103. Методические рекомендации "Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника", М.: 1977.- 25 с.

104. И7.Минушкин О.Н., Ардатская М.Д. Бабин В.Н. и др. Дисбактериоз кишечника // Рос. мед. журнал.- 1999, №3.- С.40-44.

105. Митрохин С.Д. Биохимическая активность микробных популяций пищеварительного тракта и влияние на нее антибактериальных препаратов // Антибиотики и химиотерапия.- 1991.- №8.- С.46-50.

106. Наткевичайте-Иванаускене М.П. Колличественные соотношения встречаемости и константности групп видов в растительных сообществах// Науч. докл. высш. шк. биол. науки. 1985. - №8. - С.63-68.

107. Несвижский Ю.В., Воробьев A.A., Белоносов С.С. и др. Анализ простых межмикробных взаимоотношений в микробиоценозе толстой кишки человека. // Вестн. РАМН.-1997.- №3.- С.23-26.

108. Овод В.В., Вершигора А.Е. Адгезивность бактерий: обзор //Успехи совр. биол.- 1982.- Т.94, выпуск 2.- С.213-225.122.0дум Ю. Экология / Пер. с англ.- М.: Мир, 1986.- 376с.

109. Определитель бактерий Берджи. Под редакцией Дж. Хоулта и др. Девятое издание. В 2 томах. М.: Мир, 1997.124,Осипова Г.И., Швалко А.Д., Захарова Е.А. Взаимосвязь клинического течения дизентерии, вызванной шигеллой

110. Флекснера с состоянием микробиоценоза кишечника // Тез. докл. "Дисбактериозы и эубиотики". Всерос. научно- практ. конференция. М., 26-28 марта 1996.- С.24-25.

111. Парфенов А.И., Богомолов П.О., Луфт В.М. и др. Морфофункциональные изменения и микробиоценоз тонкой кишки у больных язвенным колитом. // Рос. журн. гастроэнтерологии. 2000. - № 1. - С.55-61.

112. Парфенов А.И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз // Рос. мед. журнал.- 1998.- Том 6.- №18.- С. 1170-1173.

113. Петровская В.Г., Маракуша Б.И. Ранние этапы инфекционного процесса (достижения и проблемы) // Журн. микробиол.-1987, №10.- С. 107-116.

114. Погорельская С. А., Мокеева Н.В., Макарова И.Б. Высеваемость грибов p. Candida со слизистой носоглотки у контактирующих с продуктами производства микробного белка // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.- 1991, №3.- С.24-26.

115. Подопригора Г.И., Шендеров Б.А. Гнотобиология сегодня. // Антибиотики и химиотер.- 1993.- Т.38, №12.- С.50-56.

116. Покровский В.И., Гордиенко С.П., Литвинова В.И. Иммунология инфекционного процесса./Руководство для врачей М., 1994.- 306с.

117. Поликарпов H.A., Бевз Н.И., Викторов А.Н. и др. О некоторых биологических свойствах бифидобактерий //ЖМЭИ.- 1992.-№4.- С. 6-8.

118. Панчишина М.В., Олейник С.Ф. Дисбактериоз кишечника.-Киев.- Здоров'я, 1983.- 120 с.

119. Рузаль Г.П., Галеева О.П., Газизова Г.Р. Взаимодействие Neisseria meningitidis с культурой клеток поцитоморфологическим наблюдениям. // Журн. микробиол. -1985.-№9.-С.46-49.

120. Рысакова E.H. и др., Вопросы краевой инфекционной патологии, Тюмень.- 1973.- С.99-102 .

121. Савченко Т.Н. Особенности микробной колонизации кожи детей в экологически неблагоприятных условиях: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Волгоград.- 1994.- 23с.

122. Смолянская А.З. Дисбактериозы — инфекционные процессы смешанной этиологии. В кн.: Антибиотики и микроэкология человека и животных. М., 1988. - 37с.

123. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследований/ под редакцией Биргер М.О. Зе изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1982. - 464с.

124. Степанчук Ю.Б., Шендеров Б. А. Роль микрофлоры кишечника в метаболизме оксалатов // Журн. микробиол. -1992.-№5-6.-С.58-61.

125. Сытник С.И. Пространственная структура и иеррархия экологических групп в кожном микробиоценозе молочных желез. // Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол.- 1991.-№3.-С. 21-24.

126. Тамм А.О., Сийгур К.Х., Микельсаар М.Э. Влияние антибиотиков на кишечную микрофлору и продукцию метаболитов // Антибиотики и химиотер.- 1989.- Т.34.- №6.-С.409-414.

127. Тартаковский И.С., Белый Ю.Ф., Прозоровский C.B. Механизмы внутрифогацитарного паразитизма легионелл и других бактерий. //Журн. микробиол. 1989.- №12.- С.93-100.

128. Трапезов Е.В., Леонтьева Н.И., Бондаренко В.М. и др. Микробная экология пищеварительного тракта у больных острыми кишечными инфекциями // Журн. микробиол.- 1992.-№3.- С.25-29.

129. Трапезов Е.В., Урдабаев Ж.К., Бондаренко A.M. и др. Формирование микробиоценоза кишечника у новорожденных в норме и при антибиотикотерапии // Журн. микробиол.- 1990.-№10.- С.48-53.

130. Уваров В.Д., Шепелев А.П., Поляков В.М. Индукция Са2+-зависимого хемилюминисцентного ответа перитониальных макрофагов бактериальным липополисахаридом.// Вопросы мед. химии, 1993, Т.39.- №2.- С.58-61.

131. Уосли Дж., Джон Р. Новые методы культуры животных тканей/ под ред. проф. Ю.М. Оленева.- Изд-во "Мир", М.:.-1976.- С.175-179.

132. Федянин Ю.П., Сретенская Д.А. и др. Кишечный дисбактериоз при вирусных гепатитах // Казанский мед. журнал.- 1993.- №4,- С.307-309.

133. Федянин Ю.П., Чернявская Л.В. и др. Микрофлора кишечника при неспецифическом язвенном колите // Казанский мед. журнал.- 1997.- №3.- С.202-203.

134. Хазенсон Л.Б., Чайка H.A. Иммунологические основы диагностики и эпидемиологического анализа кишечных инфекций.- Л.: "Медицина".- 1987. 110с.

135. Хергет Х.Ф., Летцель X., Петров P.O. (г.Гиссен, Германия). Комплексная терапия дисбактериозов .//Эпидемиология и инфекционные болезни.-1997.-№6.-С.51 55.

136. Цой А.Г, Сапаров A.C., Тимофеева И.К. и др. Иммуномодулирующее действие лактобактерий на цитотоксичность естественных клеток киллеров и продукцию интерферона. //ЖМЭИ.- 1994, №6.- С. 112-113.

137. Чахава О.В. Гнотобиология о микрофлоре организма хозяина и антибиотикотерапия.// Антибиотики и медиц. биотехнол.- 1987.- Т.32, №3.- С.170-173.

138. Чернышова Л.И. Естественная и направленная микробная колонизация./ / Вопросы охраны материнства и детства.- 1988, №6.-С. 16-20.

139. Шварцман Я.С., Хазенсон Л.Б. Местный имунитет. Л.: Медицина, Ленинградское отд. - 1978. - 222с.

140. Шевелева Н.Е. Антимикробные свойства блокаторов HI рецепторов гистамина. Автореф. дисс. канд. биол. наук, Москва, 1991.-23с.

141. Шендеров Б.А. Антимикробные препараты и нормальная микрофлора. Проблемы и возможные пути их решения // Антибиотики и химиотерапия.- 1988.- №12,- С.921-926.

142. Шендеров Б. А. Колонизационная резистентность и антимикробные препараты.- В кн.: Антибиотики и колонизационная резистентность./ Под ред. Б.А. Шендерова.-М.,1990.

143. Шендеров Б.А. Микрофлора человека и животных и ее функции. / в кн. Медицинская микробная экология и функциональное питание.-Т.1.-М.; Грантъ.-1998. 302с.

144. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержани и здоровья человека.// Журн. гастроэнтерол., гепатологии, колопроктологии.-1998.-№1 .-С.61 65.

145. Шендеров Б. А. Нормальная микрофлора и некоторые вопросы микроэкологической токсикологии .//Антибиотики и мед.биотехнология.-1987.-№3.-С.164 170.

146. Шиманек Т.П., Подледнев В. И., Сурков В. И. и др. // Дисбактериозы и эубиотики: Тезисы докладов Всерос. науч.-практ. конф.-М., 1996.-С.40.

147. Шкарупета Н.М., Мальцева H.H., Коршунов В.Н., Пинегин Б.В. Изучение иммуномодулирующего действия нормальной микрофлоры кишечника // Иммунология.- 1989.- №2.- С.26-30.

148. Шувалова Е.П., Осипова Г.И., Кроткова М.Р. Актуальные вопросы дизентерии и дисбактериоза. // Эпидемиология и инфекционные болезни.-1997.-№1.-С.44 48.

149. Эссель А.Е., Скляренко Л.Г., Васильева Л.И., Соболева Е.М. Общие вопросы клинического дисбиоза у взрослых. Тбилиси, 1985. С.20.

150. Ainley С., Cason J., Slavin В.М., et al. The influence of zinc ststus and malnutrition on immunological fanction in Crons diasease. //Gastroenterology.-1991,-Vol. 100,-P. 1616-1625.

151. Alam M. Modulation of Gastrointestinal cell kinetics and endocrine cell populations by the microflora and endogenous prostaglandins. An experimental study in germfree and conventional rats// Thesis. Stockholm, Sweden.- 1995. P.39.

152. Archer G.L. Coagulose negotive staphylococcus// Microbiol., Washington.- 1996,- 131 p.

153. Axelsson L., Holch A. The genes involved in production of and immunity to Sakocin A, a bacteriocin from Lactobacillus sock Lb 706. //J. of Bacteriology, Apr.- 1995,-P.2125-2137.

154. Barefoot S.J., Chen J., Hughes J.A. et al. Identification and purification of a protein that induces production of the L. acidophilus bacteriocin.//Appl. and Environ. Microbiol.- 1994,- 60, № 10,- P.3522-3528.

155. Bellami W., Takase M., Yamauchi K. Identification of the bacterial domain of lactoferrin// Biochem. Biophys. Acta.-1992.-Vol. 1121, № 1-2.-P. 130-136.

156. Belosevic M., Davis C.E., Maltzer M.S. Regulation of activated macrophage antimicrobial activities.// J. Immunol.- 1988. Vol. 141,- P. 800-806.

157. Benno Y., Mitsuocka T. Development of intestinal microphlora in humans and animals.// Bifidobact. Microflora.- 1986,- Vol.5. P. 114117.

158. Bemet M.F., Brassart D., Neeser J.R. et al. Nonspecific enhancement of host defenses against infection. 11 Gut .- 1994,- Vol. 35, № 4,- P. 483-489.

159. Bezirtzoglou E., Norin E., Chen J. et al. Influence of roxitromycin on mucin degradation in rats//Microecol. Therapy.-1995.-Vol. 25. P.212-217.

160. Bjornhage G. Transport of woter and food particles through the avian ceca and colon.// J. Exper. Zool.- 1989,- Supplo.3. P.35-38.

161. Borriello S.P., Barclay F.S. Asin vitro model of colonisation resistance to Clostridium difficile infection.// J. Med. Microbiol.- 1986.-Vol.21. P.91-95.

162. Braby-Smith F.M., Roller S.D. Production of antimicrobial compaunds by lactic acid bacteria.// 5-th Eur. cong. on Biotechnol.-1990,- P.302-305.

163. Cebra J.J. Influences of micrbiota on intestinal immune sistem development// Am. J. Clin. Nutr.- 1999,- Vol. 69,- P. 10465-10515.

164. Chauviere G., Coconnier M.H. et al. The development of the bacterial flora in the gastrointestinal tract of mice. // J. General Microbiology.-1992,-№ 138.-P. 1689-1696.

165. Coconnier M.H., Bernet M.F. et al. Effect of preparation of the small intestine on microflora and postoperative wound infection. II FEMS Microbiology Letters.- 1993,- Vol. 110, № 3,- P. 299-305.

166. Coconnier M.H., Bernet M.F., Chauviere G. et al. Acetaminophen absorption and metabolism in celiac disease and Crohn's disease. // J. of Diarrhoel Dis. Research.- 1993,- Vol. 11, № 4,- P. 235-242.

167. Conway P.L. Lactibacilli: fact and biction. In: The regulatory and protective role of the normal microflora. ( Ed. Crubbe, Midvedt, Norin) Millan Press.- 1989. P.67.

168. Cunningham-Rundles S., Lin D.N. Nutrition and the immune system of the gut / Nutrition.-1998, № 14,-Jul-Aug.- P. 7-8.

169. Derian C.K., Sontulli R.J., Rao P.E. et al. Inhibition of chemotactic peptide indused neutrophil adhesion to voscular endotelium by cAMP modulators.//J. Immunol.- 1995,- 154, № 1,- P.308-317.

170. Elitsur Y, Liu X, Dosescu J, Moshier J. A. FK-506 and cyclosporine A (CsA) immunomodulation of the human gut mucosal immune system//Dig Dis Sci.-1999.-Vol 40.-P. 1934-1940.

171. Farthing MJG. Bacterial overgrowth of the small intestine., Gastroenterology, Misiewicz G (ed) // New York, 1993. P. 45.

172. Ferrandes M.D., De la Fuente M. Effects of age, sex and physical exercise on the phagocytic process of myrine peritoneal macrophages. //Acta Physiol Scand.- 1999,-Vol. 166,-P. 147-153.

173. Finegold S.P., Mathisen C.E., George W.L.// In.: Human Intestinal Microflora in Heaeht and Disease (ad. D.S.Hentges), Acad. Press, №4,- 1983. -P.28.

174. Foitzik T., Kruschewski M., Kroesen A.I. et al. Does glutamine reduce bacterial translocation? A study in two animal modeis with impaired gut barrier// International. J. of Colorectal Disease Abstract.-1999,- Vol. 14,- P. 143-149.

175. Frank J.F. Mechanisms of pathogen ingibition by lactic acid bacteria.-In: 7 Intern Sem. lactic acid bacteria and human health. Seoul, Republic of Korea, 1991. P.25-28.

176. Freter R. Interdependence of mechanisms that control bacteria colonization of the large intestinale// Microecology and Therapy.-1989,- Vol. 14,-P. 89-96.

177. Fukushima K.M., Sasaki I., Ogawa H., et al. Colonization of microflora in mice: mucosal defense against luminal bacteria. // J. of Gastroenterology, Abstr.- 1999.- Vol. 34,- P.54-60.

178. Gebbers Jan-Olaf, Laissue J. A. Functional morphology of the mucosal barrier.//Microecol. and Therapy.- 1984 Vol. 14. - P.71-80.

179. Goldin B.R. In situ bacterial metabolism and colon mutagens. // Ann. Rev. Microbiol.-1986,- Vol. 40. P. 1140-1147.

180. Guihot G., Blachier F. Histidine and histamine metabolism in rat enterocytes//Mol Cell Biochem.-1997.- Vol. 175,- P.143-148.

181. Hadden J.W. Immunopharmacology, immunomodulation and immunotherapy. //J.A.M.A.- 1987,- Vol.258.- P.3005-3010.

182. Hanging J., Kang Bai., et al. // Abstr. XII intern. Sympos. Gnotobiol., Honolulu, June 23-28,- 1996.- P. 28-30.

183. Hentges D. Human intestinal'microflora in health and disease. // New York, Academic Press, 1983. P. 10-12.

184. Hentges D. The protective function of the indiginous intestinal flora. //Pediatr. Infect. Dis.- 1996,- Vol. 5,- Suppl.l. P.757-761.

185. Hentges D., Que J., Casey S., Stein A. The influence of streptomycin on colonization resistance in mice. / Microecology and Therapy.- 1984,-Vol.14.-P. 53-62.

186. Hentges D.J., March W.W., Petschow P.W. Influence of infant diets on the ecology of the intestinal tract of human flora-associated mice //J. Pediatr. Gastoenteral. Nutr.-1992,- Vol. 14, №2,- P. 146-152.

187. Hill M.J., Hudson M.J., Borriello S.P. Factors controlling the intestinal flora.//Eur. J. Chemother. Antibiot.- 1982.- Vol. 2. P.31-37.

188. Hilton E., Isenberg H.D., et al. Conditions for immunosupression by Rifampicin. // Annals of Internal Medcine.- 1992,- Vol.116, 5,- P. 353357.

189. Hilton E., Rindos P., et al. Evaluation of gastrointestinal microflora in necrotizing enterocolitis. // J. Clin. Microbiol.- 1995,- Vol.33, № 5,- P. 1433.

190. Husebye E., Shar V., Huverstad T. et al. Abnormal intestinal motor patterns explain enteric colonization with gram-negative bacilli in late radiation enteropathy.// Gastroenterology. 1995, Oct.- P. 109-113.

191. Husebye E., Skar V., et al. Abnormal intestinal motor patterns explain enteric colonization with gram-negative bacilli in later radiation enteropathy. // Gastroenterology.- 1995,- Vol. 109, № 10,- P. 10781089.

192. Kaiserlian D., Etchart N. Entry sites for oral vaccines and drugs: A role for M cells, enterocytes and dendritic cells? // Semin Immunol.-1999,-Vol. 11.-P. 217-224.

193. Katsuro Yagawa et al. Biophasic affects of muramyldipeptide or lypopolysacchoride on superoxide anion-generating activiti of macrophages. // Infection and Immunity.- 1984, Jul.- Vol.45.- P.82-86.

194. Kauama S., Mitsuama M., Sato N. Overgrogrowth and translocation of Escherichia coli from intesine during prolonged enteral feeding in rats. H J. of Gastroenterology. Abstr. 2000,- Vol. 35,- P.15-19.

195. Kirjavainen P.V., Ouwekand A.C., Isolauri E., Salminen S. The ability of probiotic bacteria to bind to human intestinal mucus. / FEMC Microbiol. Lett.- 1998., Oct.- P. 167-169.

196. Kitazawa H., Matsumura K., Itoh T. et.al. Interferon induction murine peritoneal macrophage by stimulation with Lactobacillus acidophilus //Microbiol. Immunol/- 1992,- Vol. 36, № 3. P.41-47.

197. Klaenhammer T.R. Bacteriocins of lactic asid bacteria. // Biochim.1998,- Vol. 70, № 3,- P. 337-349.

198. Kong S. E., Heel K., McCauley R., Hall J. The role of enterocytes in gut dysfunction. // Pathol Res Pract-1998.-Vol 194.-P.741-751.

199. Krueger W.A., Ruckdeschel G., Unertl K. Enterobacteriaceae by intravenous ciprofloxacin is not inhibited by concomitant sucralfate a microbiological and pharmacokinetic study in patients. // Infectin, Abstr.- 1999,- Vol. 27,- P. 335-340.

200. Kullik I., Storr G. Transcriptional regulators of the oxidative stress response in prokaryotes and eukaryotes.// Redox. Report.- 1994, № 1,-P.23-29.

201. Kumar C.R. Trace element regulation of immunity and infection//!. Amer. Cool. Nutr.-1985.- Vol.4, № 1. P.27-30.

202. Kwon O-C., Ohhubo T., Yamamura N., Suzuki Y. Comparative morphological study of anterior pituitary gennfree and specific pathogen-free rats. // J. Gennfree Life Gnotobiol.-1992.-Vol. 22, № 1. -P. 142-148.

203. Luck A.J., Thomas M.L., Roediger W.E. Lacolization of the nonpalpable colonic lesion with intraoperative// Surge En dose.-Abstr.1999, May.- Vol. 13,- P.526-527.

204. Mackowiak P.A. The normal microbial flora. // New Engl. J. Medicine.- 1982,- Vol.307. P. 1110-1117.

205. Midtvedt T. Intestinal microflora associated characteristics. II Microecol. Therapy, 1986.- Vol.16. P.98-105.

206. Midtvedt T. Microflora-associated characteristics (MACs) and germ free animal characteristics (GACs) in man and animal. // Microecol. Therapy, 1985,- Vol.15. P.83-90.

207. Molnar J., Szalay K., Hever A. et al. The effect of phenothiazines on the antibiotic resistant bacteria and multidrug resistant tumor cells. //Abstr. 3rd sintific meeting Europ. Soc. Chemotherapy. Paris, May 1820,1995. P.28.

208. Mutai M., Kawai Y. Factors influencing bacterial colonisation.- In: Recent advances in Germfree Research (eds. Sasaki S. et al.), Tokai Univer. Press, 1981.-P.41.

209. Nagy E. Investigation of factors which may have an infiience on the vaginal ecisystem. // Abstract Book. XIX Intern. Congress Microb. Ecology Disease., Rome, September 18-21,- 1994. P.39.

210. Noaber P., Mikelsaar R., Salminen S., Mikelsaar M. Bacterial translocation intestinal microflora and morphological chenges of intestinal mucosa in experimental models of Clostridium difficile infection/ J. Med. Microbiol.- 1998,- Jul.- P.47-54.

211. Perdigun G., Vintici E., Alvarez S. at el. Study of the possible mechanismis involved in the mucosal immune system activation by lactic acid bacteria// J. Dairy Sci.- 1999, Jun.- Vol. 82,- P. 1108-1114.

212. Perdue M.N., McKay D.M. Integrative immunophysiology in the intestinal mucosa / Am. J. Physiol.- 1994, Aug.- P. 267.

213. Riedl-Seifert R.J., van Aubel A. Orale stimulation des immunsistems dermukosa. // Fortschr. Med.-1990.-Vol. 108, № 3. P.396-401.

214. Ross L.F., Shaffer G.P. Fermentation of carbohydrates under aerobic and anaerobic conditions by intestinal flora from infans. // J. Clin. Microbiol.-1989.-Vol 27, № 11. P. 116-119.

215. Rumessen J.J. Hydrogen and methane breath tests for evaluation of resistant carbohydrates. //Eur. J. Clin. Nutr.-1992.-Vol. 46, suppl 2. -P. 69-7 5.

216. Salminen S, Isolauri E., Salminen E. Clinical uses of probiotics for stabilizing the gut mucosal barrier: sucsessful strains and future challendges. //Antonie Van Leeuwenhoek.-1996.-Vol. 70. -P. 347-358.

217. Salminen S., Bouleu C., Boutron-Ruault M.C. et al. Functional food science and gastrointestinal physiology and function / Br. J. Nutr, 1998.-Aug.-P.80-81.

218. Salminen S., Salminen E. Lactulose, lactic acid bacteria, intestinal microecology and mucosal protection / Scand. J. Gastroenterol.-1997,-volume 222. P. 196-199.

219. Saltzman J.R., Russell R.M. Nutritional consequences of intestinal bacterial overgrowth. // Compr. Ter.- 1994,- Vol. 20.- P. 523-530.

220. Savage D.C. The normal human microflora composition.- In: The regulatory and protective role of thenormal microflora (eds. Gaibb R. et al.). M-Stocton Press, New Yore, 1989. P. 101.

221. Savage D.C. The normal human microflora composition.- In: The regulatory and protective role of the normal microflora (eds. Grubb R. et al.) M-Stocton Press, New York, 1989. P. 104.

222. Schepach W., et al. The conribution of the large intestine to blood acetate in man. // Clin. Sci.-1991,- Vol.80.

223. Simon G.L., Gorbach S.L. Intestinal flora in Health and Disease. //Gastroenterology.- 1984,- Vol. 86. P.75-82.

224. Strocchi A., Levitt M. Maintaining in testinal H2 balance: credit the colonic bacteria. // Gastroenterology.- 1992,- Vol.102. P. 113-120.

225. Tlaskalov-Hogenov H., Farru-Castany M. at el. The gut as a lymphoepithelial organ: the role of intestinal epithelial cells in mucosal immunity / Folia Microbiol.- 1995.-vol.40.-Issue 44. P.49-54.

226. Torihashi S., Ozaki H. et al. Resident macrophages activated by lipopolisaccharide suppress muscle tension and initiate inflammatory response in the gastrointestinal muscle layer.// Histochemistry and Cell Biology, Abstr. 2000,- Vol. 113. -P.-73-80.

227. Uchida K. Bile acid metabolism and intestinal bacteria// J. Germfree lifgnotobiol.-1992.-Vol.22, № 1. P.19-25.

228. Van der Waaij D. Evidence of immunoregulation of the composition of intestinal microflora and its practical consequences. // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dias.- 1988,- Vol.7.-P. 103-106.

229. Van der Waaij D. The immunoregulation of the intestinal flora: experimental investigation on the development and the composition of

Информация о работе

Патрушева, Елена Викторовна
кандидата биологических наук
Волгоград, 2000
ВАК 03.00.16

Диссертация

Микроэкологические изменения при экспериментальном дисбактериозе и роль бактерицидных систем клеток организма хозяина - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Микроэкологические изменения при экспериментальном дисбактериозе и роль бактерицидных систем клеток организма хозяина - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы