Микробиоценоз кишечника у собак и его оптимизация с помощью нового биологически активного препарата "Эмбриоприм"

Гандрабурова, Надежда Ивановна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Микробиоценоз кишечника у собак и его оптимизация с помощью нового биологически активного препарата "Эмбриоприм"
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микробиоценоз кишечника у собак и его оптимизация с помощью нового биологически активного препарата "Эмбриоприм""

На правах рукописи

ГАНДРАБУРОВА НАДЕЖДА ИВАНОВНА

МИКРОБИОЦЕНОЗ КИШЕЧНИКА У СОБАК И ЕГО ОПТИМИЗАЦИЯ С ПОМОЩЬЮ НОВОГО БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ПРЕПАРАТА «ЭМБРИОПРИМ»

03.02.03 — микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

004697064

Ставрополь — 2010

004607064

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Ставропольский государственный университет» и Южном научном центре Российской академии наук.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Тимченко Людмила Дмитриевна.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Дмитриев Анатолий Федорович;

кандидат биологических наук Логвиненко Ольга Васильевиа.

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Кабардино-Балкарская

государственная сельскохозяйственная академия».

Защита диссертации состоится_^д __2010 г.

в -00 часов на заседании диссертационного совета ДМ 212.256.09 при Ставропольском государственном университете по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина, д. 1, корп. 2, комн. 506.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольского государственного университета.

Автореферат разослан_3 М-¿¿Л_2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета [Л ^^ОЛХ/Л^А^ Ржепаковский И.В

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Живой организм представляет собой единую экологическую систему с многочисленными микроорганизмами, эволюционно приспособившимися к колонизации слизистых оболочек соответствующих экологических ниш или биотопов и использующими их как среду обитания (Бондареикв В:М. и др., 2003).

2003). Однако многочисленные сообщения свидетельствуют о том, что экологическое неблагополучие, масштабное использование удобрений и ядохимикатов в аграрном секторе экономики, широкое распространение'антимикробных препаратов, нарушение схем их применения, глобальная урбанизация, сопровождающаяся многоплановым техногенным и антропогенным влиянием на состояние биоценозов, обусловили дестабилизацию микросимбйюценоза и иммунного гомеостаза практически всех живых организмов, а поддержание постоянства качественного и количественного состава микрофлоры в живом организме представляется сложной и, подчас, трудно разрешимой проблемой. Одним из конкретных проявлений нарушения микробиосимбиотических взаимоотношений в организме человека и животных является кишечный дисбакте-риоз (Тимченко Л.Д. и др., 2003; Бельмер C.B., 2004).

В последние годы проблемы дисбактериоза достаточно широко освещаются в медицинской литературе. Все чаще появляются сообщения на эту тему и в ветеринарии, раскрывающие, преимущественно, сущность лечебных мероприятий при дисбактериозах у сельскохозяйственных животных и птицы. Разрабатываются новые препараты на основе бактерий-антагонистов и их метаболитов, изучается их влияние на желудочно-кишечный тракт животных (Тараканов Б.В., 1993; Манухина А.И., 1999; РаицкаяВ-И, 2001; ОливаТ.В. и др.у2006;Мзликова А.Р. и др., 2007; и др.). Однако, выбор применяемых в ветеринарии препаратов пока еще не велик, а их эффективность очень вариабельна. В связи этим не снижается перспективность исследований по разработке новых бактериальных препаратов и схем лечения на основе рационального выбора бактериальных композиций и сочетания про-, пребиотического и иммуномодулирующего действия (Тараканов Б.В., Эрнст Л.К., 2002; Тимченко Л.Д. и др., 2003; Бондаренко В.М.,

2004). Необходимо отметить, что далеко не у всех видов животных определен экологический баланс между патогенными и условно-патогенными микроорганизмами кишечника, позволяющий дифференцировать состояние эубиоза и дисбиоза и обусловливающий достаточную эффективность коррекционных мероприятий.

продуктов питания хозяина, общее экологическое окружение, использование одинаковых антибактериальных препаратов при лечении, иногда общие заболевания и пр.). Поэтому причины, приводящие к нарушению микробиоценоза кишечника сходны, а собака может рассматриваться не только, как ценное декоративное и служебное животное, но и как биологическая модель для изучения механизма развития дисбактериоза и испытания новых биопрепаратов для коррекции микробиоценоза кишечника.

Анализ доступной литературы свидетельствует о малочисленности и спорности сведений о критериях эубиотического и дисбиотического состояния кишечника собак, об отсутствии морфо-функциональных и классификационных характеристик дисбактериоза, в том числе в конкретной причинно-следственной взаимосвязи с возрастом, условиями окружающей среды, содержания и кормления. Отсутствуют конкретные рекомендации по проведению коррекционных мероприятий при дисбактериозе с учетом этиопатогенетических особенностей его возникновения у данного вида животных. Вышеизложенное обусловливает своевременность и актуальность выбранного направления исследований.

Цель исследования: изучить характер микробиоценоза в норме, распространение, причины, клинические и морфофункциональные характеристики дисбиотических нарушений кишечника собак в условиях г. Ставрополя, а также оценить эффективность коррекционных мероприятий с использованием новой биологически активной кормовой добавки «Эмбриоприм».

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1). изучить состав микрофлоры кишечника и особенности ее сукцессии в постнатальном онтогенезе во взаимосвязи с морфофункциональными показателями орг анизма у здоровых собак различных возрастных групп при стабилизированном полнорационном кормлении;

2) проанализировать причины, способствующие нарушению кишечного микробиоценоза у собак в г. Ставрополе и выявить группы риска по дисбактериозу;

3) установить характер дисбактериоза в зависимости от количественного и видового составов микроорганизмов в кишечнике собак в группах риска и выявить его распространение у данного вида животных;

4) изучить системные морфо-функциональные проявления дисбактериоза у собак в зависимости от характера нарушений микробиоценоза;

5) разработать новый биологически активный препарат для коррекции микробиоценоза кишечника с выраженными антагонистическими свойствами, высокой резистентностью, биосовместимостью с резидентной микрофлорой и патогенетическим эффектом;

6) изучить эффективность влияния нового комплексного биологически активного препарата «Эмбриоприм» на состояние микробиоценоза, морфологические показатели кишечника, гематологические, биохимические и иммунологические показатели организма собаклри экспериментальном антибиотикас-социированном дисбактериозе. ...... .

Научная новизна исследования. Получены данные о нормальной микрофлоре кишечника здоровых собак различного возраста и закономерностях микробной сукцессии в постнатальном онтогенезе при полноценном кормлении.

На основании анализа факторов, способствующих развщщо дисбактериоза и микробиологических исследований, определены группы риска собак jio дисоакте-риозу и установлено его распространение среди этих животных дг,,Ставрополе.

На основании сопоставления микробиологических характеристик с этиологическими факторами и клинико-лабораторными показателями в различных группах риска, предложена классификация дисбактериоза у собак.

Изучены клинические и морфо-функциональные проявления дисбактериоза в соответствие с предложенной микробиологической классификацией.

Разработан и впервые применен на собаках с целью оптимизации микробиоценоза кишечника новый комплексный препарат этиопатогенетического действия. Подтверждена его высокая эффективность и биосовместимость с резидентной микрофлорой собак. Определены перспективы применения^

На щенках с экспериментальным антибиотикассоциированным дисбакте-риозом доказано системное положительное воздействие препарата на организм животных, что заключается в нормализации гематологических и биохимических показателей, а также в выраженном противовоспалительном, регенеринс-тимулируюшем, иммунотропиом воздействии на ткани кишечника.

Приоритетность выполненных исследований подтверждена патентом РФ «Способ приготовления кормовой добавки на основе эмбриональкых тканей и пробиотиков» JV» 230368, зарегистрирован в Государственном реестре изобретений РФ от 27 июля 2007 года.

Теоретическая и практическая значимость исследования. Результаты исследований расширяют спектр сведений о закономерностях симбиотических и антагонистических взаимоотношений в бактериальных сообществах кишечника собак в различных условиях жизни и являются дополнением в раздел общей микробиологии «Экология микроорганизмов».

Полученные сведения о качественном и количественном составе бактериального компонента микробиоценоза кишечника у собак в норме и при дисбактерио-зе могут быть использованы в диагностических и научных целях при испытании различных бактериальных препаратов и антибиотиков на этих животных.

Практическая значимость обусловлена разработкой нового поликомпонентного препарата этиопатогенетического действия, предназначенного для коррекции микробиоценоза у животных. Разработка подкреплена ТУ 9296-004-75056550-2006.

На собаках, как на биологической модели подтверждено отсутствие отрицательного побочного эффекта и выраженное положительное влияние препарата на организм на системном уровне. При исследовании гематологических, биохимических, а также гистологических показателей, дано экспериментальное обоснование целесообразности применения нового поликомпонентного препарата «Эмбриоприм» для коррекции микробиоценоза кишечника. Это может являться основанием для дальнейших доклинических и клинических испытаний с целью использования человеку в комплексной и монокоррекции дисбактериоза

Эффективность' применения препарата «Эмбриоприм» подтверждена на животных в участковой ветеринарной лечебнице № 2 г. Ставрополя и ветучаст-ке станицы Обильной Георгиевского района Ставропольского края.

Результаты исследования используются в научных целях и в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторных занятий по микробиологии на медико-биологб-химическом факультете Ставропольского государственного университета, в Ставропольском филиале Московского государственного гуманитарного университета им. М.А. Шолохова, Ставропольском государственном аграрном университете, Самарской государственной сельскохозяйственной академии.

Апробация работы. Материалы работы доложены и обсуждены на 50-й, 52-й и 53-и научных конференциях «Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе» (Ставрополь, 2005, 2007, 2008). На II международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы сельскохозяйственной науки и образования» (Самара, 2005), на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной хирургии» (Курган, 2006).

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Качественный состав бактерий — резидентов кишечного содержимого у здоровых собак, идентичен составу, свойственному большинству млекоиитаю-щихи человеку. Количественные соотношения между отдельными индигенны-ми, а также индигенными и транзиторными микроорганизмами и их возрастная сукцессия у данного вида животных имеют свои особенности и коррелятивно связаны с морфо-функциональными показателями, свидетельствующими о нормальном состоянии гомеостаза.

2. Нарушение микробиоценоза широко распространено в популяции собак, обитающих в г. Ставрополе. Установленные причины, состояния бактериоце-ноза и сопутствующие ему морфо-функциональные нарушения, позволяют выделить основные группы риска и классифицировать дисбактериоз у этих животных по этиологическому признаку, степени количественного и качественного нарушения микробиоценоза, характеру влияния микробиоты на организм хозяина и по течению.

3. Даны теоретическое и экспериментальное обоснования целесообразности этиопатогенетического подхода к разработке технологии нового препарата для коррекции микробиоценоза кишечника с включением в его состав бактериального и биостимулирующего компонента.

4. Микробиологические, гематологические, биохимические и гистолЬги-чёские исследования свидетельствуют о том, что новый комплексный биологически активный препарат «Эмбриоприм» на основе лактобактерий может быть использован в качестве эффективного средства для коррекции микробиоценоза кишечника при одновременном патогенетическом эффекте, направленном на устранение системных последствий дисбактериоза у животных.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 работ, в том числе одна из них — в периодическом издании из перечня ведущих рецензируемых

научных журналов, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки России для публикации основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени, получен один патент РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 188 страницах компьютерного набора и состоит из содержания, введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы, включающего 259 источников, в том, числе 53 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 15 таблицами, 28 микро- и макрофотографиями, 16 диаграммами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в период с 2003 по 2009 гг. на кафедре общей биологии, в проблемной научно-исследовательской лаборатории «Экспериментальной иммуноморфологии, иммунопатологии и иммунобиотехнологии» Ставропольского государственного университета, на базовой кафедре иммунологии и микробиологии Южного научного центра Российской академии наук при Ставропольском государственном университете.

Предметом исследований явился микробиоценоз кишечника 530 собак различных пород и возрастов в норме, при дисбактериозе и под влиянием нового бактериального препарата. Объектами исследований являлись фекалии, кровь, моча, кожные соскобы, патматериал от экспериментальных животных, бактериальный препарат «Эмбриоприм». На основании результатов анамнеза и клинического осмотра делали предварительное заключение 6 состоянии здоровья животных, KOTdpilx включали в основной эксперимент.

' Экспериментальная работа осуществлялась в три основных этапа,

Напервом этапе работы обследованы 130 здоровых собак различного возраста. Из них в процессе исследования формировали 6 рабочих подгрупп, сог ласно возрастной принадлежности: 30 новорожденных щенков от здоровых матерей; эти же щенки в возрасте 3-7 суток; эти же щенки в возрасте 20 суток; 30 щенков в возрасте 6 месяцев; 50 взрослых собак в возрасте от 1 года до 5 лет; 20 старых собак в возрасте от 8 до И лет. Для установления состояния микробиоценоза кишечника собак в каждой возрастной группе и определения закономерностей микробной сукцессии определяли количество бифидобактерий, яактобактерий, бактероидов, эшерихий, энтерококков. На основании полученных результатов судили об индигенности обнаруженных микроорганизмов. Оценивали также присутствие транзиторной и факультативной микрофлоры.

На втором этапе эксперимента осуществляли: анализ условий жизни и содержания собак в г. Ставрополе с целью установления причин, способствующих нарушению микробиоценоза их организма; выделение основных групп риска по дис-бакгериозу и изучение микробиоты их кишечника; классификацию дисбактериоза у собах на основе оценки качественных и количественных показателей микробиоценоза во взаимосвязи с морфофункционалышми показателями их организма.

С этими целями были обследованы 300 собак различных возрастных групп и пород. При наличии результатов серологических, гематологических, биохимических и микроскопических исследований, проводили бактериологическое исследование содержимого толстого Кишечника.

Третий этап работы заключался в разработке нового бактериального препарата и изучении на собаках возможности его использования для коррекции микробиоценоза кишечника.

Бактериологическое исследование фекалий проводили в соответствии с методическими рекомендациями М.О. Биргера (1982), М.А. Баймуратовой (2004), Е.З. Теппер (2004) и др. Полученные результаты указывали для всех микроорганизмов при необходимости сравнительного анализа в lg КОЕ/г, а также при определении границ нормативных показателей — в КОЕ/г — колониеобразующих единиц в 1 грамме исследуемого кала. Учитывая степени разведения, количество выросших колоний и величину посевной дозы, рассчитали Количество микроорганизмов в 1 г фекалий по формуле:

M =N х 10n+1 где M - количество выделенного микроорганизма, N — количество колоний, 1()п - разведение, из которого провели высев.

За норму принимали средние показатели бактериологического исследования фекалий здоровых собак различного возраста (контрольная группа).

Количество эритроцитов, содержание и морфологический состав лейкоцитов, у ровень гемоглобина, МСН и гематокрит определяли на гематологическом анализаторе (CD 1700) фирмы ABBOT (США, Япония). Биохимический анализ крови проводился на автоматическом биохимическом анализаторе ARCHITECT (с 8000) фирмы ABBOT (США, Япония), с помощью биотестов системы AEROSET. В процессе исследований определяли: количество общего белка, альбуминов, глобулинов, общего билирубина, мочевины, креатинина, глюкозы, холестерина, триглицеридов; ферментов (АсАТ, АлАТ, амилазы, ГГТ, ЩФ, ЛДГ, КФК); электролитов (К+, Na+, Cl-, Са2+, РЗ+),

Серологические исследования проводили по общепринятым методикам (Борисова В В., Антонов В.Г., 1987, Селиверстов В.В., 1999, и др.).

Гистологическое исследование проводили в соответствии с рекомендациями С.М. Сулейманова, П.А. Паршина, Ю.П. Жаровой (2000) и др. Изучение срезов проводили нод микроскопом при различных увеличениях (х 10, 40, 100, 400, 1000) с фиксацией обнаруженных изменений путем получения цифровых фотографий с помощью комплекса визуализации изображения на основе цифровой фотокамеры «01impus-5060» (Япония) и микроскопа «Микмед-2» (Россия).

Результаты экспериментов подвергали вариационно-статистической обработке в соответствие с принципами, изложенными в руководстве Г.Ф. Лакина (1990) на компьютере с использованием программы Primer of Biostatistics (Version 4.03).

Для сравнения варьирующих признаков, измеряемых в различных единицах {гематологические, биохимические показатели) использовали программу

Primer of Biostatistics с критериями расчета коррелятивной зависимости. При этом определяли линейную (прямую) корреляцию и коэффициенты корреляции.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Состав нормальной микрофлоры кишечника у здоровых собак различных возрастных групп, особенности микробной сукцессии их кишечника в постнатальном онтогенезе и их взаимосвязь

с лабораторно-клиническими показателями Бактериологическое исследование содержимого толстого кишечника позволило установить усредненные границы качественного и количественного состава микрофлоры и особенности ее возрастной сукцессии у здоровых животных (рис. 1).

12 ---

-Бифидобактерии -Бактероиды •■——Лактобактерии ——Эшерихии с норм.

■- "■ Эшерихии со сниж. -Эшер. лактозонег. -Энтерококки -Enterobacter

-Ktebsieila Hafflia -Proteus -Serratia

CJostrkJjum —— Ст аф. э пидерм. "«Д рож ж en од. грибы

Рис. 1. Динамика микробной сукцессии здоровых собак различного возраста

Установили, что до первого кормления у новорожденных щенков при бактериологическом исследовании фекалий микрофлора не обнаруживается. Первыми желудочно-кишечный тракт заселяют лактобактерии, энтерококки и полноценная кишечная палочка. Количество лактобактерий увеличивается быстро в течение первой недели жизни, и остается на высоком уровне до 8-11 лет, включительно. Число эшерихий с нормальной ферментативной активностью резко возрастает в течение первой недели жизни и незначительно уменьшается к 20 дню, к 6-месячному возрасту снова возрастает, к 1-5 годам достигает максимальных значений и закономерно уменьшается к старости. Содержание энтеро-

кокков стабилизируется к 6 месяцам и незначительно уменьшается 8-11 годам. Бифидобактерии и бактероиды появляются с 3-7-дневного возраста. В последующих возрастных группах количество бифидобактерий нарастает, незначительно понижается у старых. Количество бактероидов достоверно увеличивается до возраста 1-5 лет, содержится у старых собак не менее 10М08 КОЕ /г.

Качественное разнообразие и количественные показатели отдельных видов условно-патогенных микроорганизмов, обнаруженных нами в возрасте шести месяцев минимальны (< 103 КОЕ/г), увеличивается к 1 - 5 годам (10 - 104 КОЕ /г), расширяется спектр микроорганизмов к возрасту 8-11 лет (< Ш4 КОЕ /г), когда количество индигенной микрофлоры имеет тенденцию к уменьшению.

В целом, стабилизация облигатной микрофлоры у собак происходит в течение первых 20 дней после рождения. Число лактобактерий в кишечном микробиоценозе стабилизируется в первую очередь, и только на этом фоне позднее возрастает содержание бифидобактерий и бактероидов. Это подтверждает высокую антагонистическую активность, бифидогенную и пребиотическую роль метаболитов лактофлоры. При посеве на полужидкую среду МРС-агар наиболее интенсивный рост проявили представители видов Lactobacillus acidophilus и Lactobacillus plantarum (рис. 2).

Рис. 2. Lactobacillus acidophilus, обнаруженные в фекалиях здоровых собак 1-5-летнего возраста, посев на полужидкую среду МРС-агар

До 6 месяцев лактозопозитивная Escherichia coli является единственным представителем семейства. К 1 году жизни показатели индигенной микрофлоры достигают максимального уровня, на котором удерживаются практически до 5 лет. Бифидобактерии и бактероиды численно превалируют в кишечнике собак над другими микроорганизмами.

Установленные у здоровых собак невысокие титры отдельных видов условно-патогенных микроорганизмов Staphylococcus epidermidis, Serratia marc-escens, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, грибов рода Candida, ce-

мейств Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Proteus, или их ассоциаций, считаем допустимыми в составе кишечцого микробиоценоза. Их присутствие не отражается отрицательно на состоянии здоровья собак контрольной: группы, что подтверждают гематологические и биохимические исследования, i ,

Обращая внимание на частоту выделения микроорганизмов, можно отметить, что бифидобактерии, бактероиды, лактобактерии, лактозопозитивная кишечная палочка и энтерококки с возраста 20 суток выделяются у 100 % животных. Этот факт, в совокупности с динамикой, данных микроорганизмов, позволяет причислить их к облигатной микрофлоре. Незначительный процент животных, у которых выделяются условно-патргсцныр микроорганизмы и отсутствие отклонений в состоянии здоровья собак позволяет нам рассматривать их как факультативную и транзиторную микрофлору.

Для подтверждения нормального уровня здоровья животных и с целью уточнения его взаимосвязи с состоянием микробиоценоза, исследованы гематологи' ческие и биохимические показатели, которые у собак контрольной группы во все периоды жизни находятся в пределах возрастной нормы (при достоверности по каждому показателю не менее Р<0,05): Сопоставляя эти результаты с результатами бактериологического исследования содержимого толстого кишечника, мы выявили зависимость изученных физиологических показателей организма с содержанием представителей облигатной микрофлоры в различные возрастные периоды.

Установлено, что с возрастом изменяются большинство физиологических показателей. Например, повышается до максимальных границ нормы содер-жанияе мочевины, общего билирубина, холестерина, глюкозы, триглицеридов, ферментов АлАТ, АсАТ, ГГТ. Понижается до минимальных границ — уровень ионов калия, натрия, кальция. Это свидетельствует о напряженности: адаптационных резервов организма и снижении интенсивности обмена веществ.

Даже у здоровых животных проявляется тенденция к снижению всех показателей, отражающих уровень иммунной реактивности, в молодом возрасте и, особенно, к старости. Например, количество лейкоцитов максимальное у новорожденных резко снижается уже в течение первой недели жизни, затем достоверно растет до 6 месяцев, а к старости понижается до нижнего порога нормы. В возрасте 1-5 и 8-11 лет регистрируется высокий уровень содержания эозинофилов и базофилов, что может являться признаком сенсибилизации организма. Содержание общего белка, альбуминов и глобулинов понижается до минимальных показателей нормы к старости.

Выявленные закономерности коррелятивно взаимосвязаны с динамикой облигатных микроорганизмов, что свидетельствуют о регуляторной роли микрофлоры в реализации широкого спектра компенсаторно-приспособительных реакций организма, в том числе иммунных, метаболических. Учитывая отсутствие метаболических и гематологических нарушений у подопытных собак, можно считать, что установленный состав и количественные показатели кишечной микрофлоры являются нормативными для данного вида животных в соответствующем возрасте.

Причины, характер микробиоценоза, особенности проявления дисбактериоза собак и его распространение в г. Ставрополе

В соответствии с наличием предполагаемого неблагоприятного фактора собак условно разделили на 7 экспериментальных групп (табл. 1).

Результаты бактериологического исследования содержимого кишечника позволило определить отклонение показателей микробиоценоза от нормы, установленной нами ранее для различных-возрастных групп и провести анализ полученных результатов с целью уточнения степени критичности каждой из групп риска.

' - '•'• ' ' ■ ■ Таблица 1

' > Характеристика основных групп риска собак по дисбактериозу

X» группы '■' 1 ' 2 ' 3 4 5 6 7

Кол-но собак в группе 30 ■ 50 30 70 50 30 40

Возраст животных 3-7 сут. 21 сут.-2 мес. 4 мес.-1 год 1-8 лет 1-8 лет 1-5 лет 8-11 лет

Факторы риска : период НОВО-; рожден-носта начало прикормам пёрево на взрослый корм период интенсивных вакцинаций постин- фекци- онные состояния и носи-тельство, онкопа-тология ятро-генные воздействия кормовой дефицит, несбалансированное кормление старческий период

Опираясь на классификацию выраженности дисбиотических нарушений по бактериологическим признакам, принятую для человека и представленную четырьмя степенями, а, также учитывая идентичность состава микрофлоры, выделенной от собак, с микрофлорой человека, проведены клинико-лаборатор-ные аналогий с целью установления вероятности таких же четырех степеней дисбактериоза Для этих животных.

При 1 степени нарушения в целом по группе проявляются только повышенным или пониженным содержанием кишечной палочки с нормальной ферментативной активностью.

При 2 степени дисбактериоза к дисбалансу кишечной палочки добавляется незначительное (не более чем в 2 раза) снижение содержания бифидо- и лак-тофлоры. Обнаруживается кишечная палочка со сниженной ферментативной активностью (105"6 КОБ /г) и лактозонегативные (105"6 КОЕ /г) формы. Условно-патогенные микроорганизмы высеваются в количестве не более чем в 1,5 раза превышающем норму, но не в ассоциациях. Дисбактериоз 1 и 2 степени - дефицитный, латентный - чаще вызывается факторами неправильного кормления, вакцинациями, введением прикорма или переменой корма.

При дисбактериозе 3 степени регистрируется значительное снижение би-фидобактерий (до Ю5КОЕ /г), лактобактерий (до 10м КОЕ /г), бактероидов (до

104 КОЕ /г), среди кишечных палочек преобладают лактозонегативные и гемолитические. При этом нужно отметить, что уровень лактобакгерий понижается в последнюю очередь по сравнению с другими индигенными микроорганизмами. Значительно больше качественное и количественное содержание условно-патогенной микрофлоры, которая присутствует как в виде отдельных видов, так и в ассоциациях.

При 4-й степени количество индигегшой микрофлоры резко сокращается, вплоть до исчезновения отдельных видов, преобладают условно-патогатые и патогенные микроорганизмы в ассоциациях. Дисбактериоз 4-й степени определяли как патогенный. Такую степень мы обнаружили в первой, четвертой, пятой и седьмой группах риска.

Анализируя клшшко-лабораторные данные при дисбактериозе, можно сделать заключение об их качественной идентичности у собак, независимо от принадлежности к группе риска. Однако, степень их тяжести, особенности течения и количественные параметры, свидетельствующие о функциональных нарушениях, существенно различаются в зависимости от степени дисбактериоза, что еще раз подтверждает ведущую роль кишечной микрофлоры в поддержании гомеостаза организма. При этом наиболее постоянным и иитегративным признаком наличия дисбактериоза, независимо от возраста, уровня кормления, условий содержания, характера перенесенных патологий являются иммунодефицита, метаболические расстройства и дегенеративно-воспалительные изменения в различных органах и тканях, в той или иной степени выраженные, и сопровождающие дисбактериоз любой степени.

Доказано, что дисбактериоз широко распространен среди собак, обитающих в г. Ставрополе (до 88% от числа обследованных).

Результаты бактериологических и клинико-лабораторных исследований, а также их анализ позволяют предложить классификацию дисбактериоза толстого кишечника собак по ряду признаков: по этиологии (экологический, кормовой, ятрбгёнйый, возрастной, обусловленный болезнью, лекарственный, стресс-опосредованйьм, полизтиологичный); по степени количественного и качественного нарушений микробиоценоза (1-4 степень); по характер)' влияния микробиоты на организм хозяина (дефицитный и патогенный); по течению (манифестирующий и скрытый).

Этиопатогенетическое обоснование разработки н характеристика нового комплексного препарата «Эмбриоприм» для коррекции нарушений микробиоценоза

Результаты исследований на собаках явились основополагающим моментом при разработке нового препарата «Эмбриоприм». В связи с этиопатогенетичес-кими предпосылками, концептуальной основой его создания было обеспечение многофакторности и многоплановости, заключающихся в пролонгированном пробиотическом, пребиотическом, противовоспалительном, регенерирующем, иммуномодулирующем и метаболизмкоррегирующем эффекте.

Основными этапами разработки являлись:

1) теоретико-экспериментальное обоснование выбора микробного агента;

2) выбор и включение в состав препарата биологически активных, максимально безвредных^ субстанций, адекватных как по отношению к макро-, так и микроорганизму, обладающих одновременно пролонгирующим, пребиотическим, противовоспалительным, регенерирующим и иммунотропным действием; именно такие субстанции, по нашему мнению, должны обеспечить и временное депо питательных веществ, необходимых для выживания и дальнейшего размножения засеваемого микроорганизма, в неадекватных условиях пораженного кишечника;

3) экспериментальная отработка рациональной технологической схемы получения комплексного препарата;

4) контроль качества препарата;

. 5) разработка технической документации;

6) получение экспериментальных серий препарата;

7) экспериментальная апробация на собаках.

При выборе бактериального компонента препарата предпочтение было отдано ацидофильной палочке — Lactobacillus acidophilus ЕР 317\402 (авторское свидетельство СССР №163473 от 27.14.1964 г.), что обусловлено сравнительной легкостью ее культивирования, высокими антагонистическими и пробиотичес-кими свойствами и также синергизмом по отношению к нормальной микрофлоре кишечника. Благодаря биологическим особенностям и оптимальным условиям культивирования (плюс 37°С, рН 6,8-7,0), лактофлора, включенная в кормовую добавку «Эмбриоприм», наряду с активным положительным действием (пробиоти-ческим, пребиотическим, бактерицидным, иммуномодулирующим), устойчива к действию желудочного сока и является настолько дружественной макроорганизму, что может применяться неограниченно и без отрицательных последствий.

В составе препарата использована активированная эмбрионально-яичная масса полученная по модифицированной авторами технологии (рис. 3).

В качестве вспомогательного патогенетического средства в состав «Эмбри-оприма» добавляли измельченную скорлупу куриного яйца, кальций которой переводится в процессе взаимодействия с янтарной кислотой в активную, легко усвояемую форму. Янтарная кислота, благотворно воздействует на лакгобакте-рии (обеспечивает их активацию за счет оптимизации рН), оказывает подавляющее действие на патогенную микрофлору, положительно влияет на энергетический потенциал тканей макроорганизма.

Янтарная кислота является надежным консервантом препарата, обеспечивающим его стабилизацию, что очень важно в связи с невозможностью использования жестких методов стерилизации, которые ведут к денатурации белковых компонентов.

Декальцинированные остатки скорлупы выполняют функцию сорбента. Иммобилизация на нем действующих веществ «Эмбриоприма» обусловливает эффект пролонгации его в желудочно-кишечном тракте и способствует снижению разовых и курсовых дозировок препарата по сравнению с другими моно-пробиотиками, что подтверждено нами в процессе исследований, положенных в основу патентного поиска.

Otúop куриных яиц

IhQvjÓAIOlH ШЩ-

Отбор ШЩ НЛ ll3 Г Y тки пнку£лцш11 огп^дед^-miejcj-p оеня рлтвшил

»мбрПОНЛ. OÓpJÓOTKn

ОТООрОИНЫЗ яиц US с mm том.

Вырдщнвлине ктгппшг душд-

условиях ЛКТНБПрОБ.иШО-

го роста по ЭМ-Т?-Ш1>-1опт, с

ШП0ДЫ08ЛНИ9М Пр*ПДр-"»ТД

«Фитотсн*.

Зшиклящ uxtimp.

Овдучеияр toot

Стимуляция выработки в рлсте1ва1орг.\ш1ч?схш кислот. при помощи р-ктворд глюкозы, высокой к тр.ищн COí.п специального

ТМЯ№рЛТарного peJUDLV

Помещение куриных шщ г р явившимися шйриоиздш. «бор р-к тигельного сырья исо^д-ишеусловий Д.1Я выработкиóuoreistbLi спыуи-горов с помощью помещения» холодальнуы камеру.

Извлечешь курлнъп: яиц ц f4(Tm«Amrt> сырья »п

13Л0ДЯЛЬ«Уй1чЛ>П»рЫ. ОйрЛ-©огка cmtpTOE-bJM jvu iso* po>1 бола и оЗлэгчгш«* их УФ XlMXtV.ni.

Швлечкш*? tMÍ>piiom ii itu >>1?j? м «щысь rv, o5 ад о чек с ачждчтоитм 1ПМ?ДЧ?Ш{?М SH?tT¥ f ¡Uf-

тшелыаым сырьем в roMt>-retanai ope s пропорции 1:1.

Контроль 'качества полученного полуфабриката.

Добдвлешда к гюдучегаюму порошку jRio^tLibHoi высушенной ацидофильной тлочкн ^ctoTxirüJiis goidophüys '¿P3Í?4Ü2- 10:1.

ТШШ.ИП.1Ц1Ш. | Контроль качества.

Лпр|шит | (суодшшаюкшля) сушка. j 5 ? ítKPT } Гр 0 BnjfO

■ ' - - - - ■ ........ . ..

Рис. 3. Технология приготовления биологически активной кормовой добавки «Эмбриоприм»

Эти же исследования подтвердили, что рациональные технологические манипуляции в процессе получения, активизации и соединения компонентов «Эмбриоприма» в единый комплекс обеспечили их эффективное суммарное воздействие на живой организм, заключающееся в эффекте тканевой терапии, гидролизатотерапии, органотерапии, неспецифической протеинотерапии, а также бактерицидном действии и способности к нормализации обменных процессов и микрофлоры пищеварительного тракта животных, за достаточно короткие сроки.

«Эмбриоприм» представляет собой желтоватую или слегка оранжевую сухую, лиофильно высушенную термолабильную массу. Выпускается в герметично запаянных пакетах по 10, 20, 50 и 100 г.

Препарат представлен на ежегодной международной инновационной выставке «Мир Биотехнологий-2007» (г. Москва) и 35-й Международной выставке изобретений, новой техники и продукции «Женева-2007» (Швейцария), где отмечен дипломами и медалями разного достоинства.

Полученые результы открывают перспективы для его широкого использования в качестве средства рационального выбора как самостоятельно, так и в комплексной терапии у животных при различных патологиях, сопровождающихся нарушением кишечного микробиоценоза, что потребовало более детальной апробации с изучением его влияния не только на микробиоценоз кишечника, но и на различные звенья патогенеза при дисбактериозе.

Результаты углубленного изучения влияния нового биопрепарата «Эмбриоприм» на микробиоценоз кишечника и морфофункциональные показатели организма собак при экспериментальном дисбактериозе

С целью изучения эффективности препарата поэтапно были отобраны 40 условно здоровых собак различных пород в возрасте 2 месяца. Использование животных раннего возраста сводило к минимуму вероятность воздействия посторонних факторов и обеспечивало идентичность рациона кормления. Осуществляли выборочный убой 10 животных для патологоанатомической и гистологической оценки состояния кишечника (контроль). Оставшимся животным провели бактериологические, гематологические, биохимические исследования, затем на протяжении 10 дней применяли перорально антибиотик - доксицик-лина гидрохлорид в дозе 2 мг/кг один раз в сутки. Через пять дней после скармливания антибиотика все исследования провели повторно. Десять животных также подвергли усыплению для проведения морфологических исследований. Остальным 20 собакам на протяжении 20 дней применяли новый препарат «Эмбриоприм», с последующим контролем бактериологических, гематологических, биохимических, патологоанатомических и гистологических показателей кишечника. Все эксперименты на животных проводились в соответствии с правилами защиты позвоночных животных, используемых в научных целях (Руководства и рекомендации для Европейских независимых комитетов по воп-

росам этики, Брюссель, 1995, 1997; Рекомендации по этике, проводящим экспертизу биомедицинских исследований, Женева, 2000).

Полученные данные свидетельствуют, что до начала курса ангибиотикоте-рапии показатели микробиоценоза соответствовали установленной возрастной норме. Десятидневный курс доксициклина гидрохлорида вызвал у щенков дис-бактериоз второй-третьей степени. У 100% щенков после приема антибиотика существенно увеличилось содержание грибов рода Candida, при этом число колоний ца агаре Сабуро в чашках Петри достигало 100 и более. В то время как до приема антибиотика грибы рода Candida обнаруживались в значительно меньшем количестве (в среднем 15 колоний на чашке Петри) лишь у 13% животных.

У животных, при приведении бактериологического контроля эффективности применения эмбриоприма полученные результаты сравнивали с показателями микробиоценоза до и после приема антибиотиков. Из результатов, представленных в таблице 2 следует, что все основные представители индигешгой микрофлоры (бифидо-, лактобактерии, бактероиды) выделялись у 100% животных на всех этапах эксперимента. Однако, их количество после применения «Эмбриоприма» возросло не только по сравнению с периодом после применения антибиотика (соответственно в 2,5, 1,7 и 2,1 раза), но превысило на 0,11 lg КОЕ/г, 0,32 lg КОЕ/г и 0,39 Ig КОЕ/г соответственно и количественные показатели содержания этих микроорганизмов до начала эксперимента.

Применение препарата повлияло на спектр эшерихий в пользу кишечных палочек с нормальными ферментативными свойствами. Их кЬличество увеличилось в 1,8 раз по сравнению с периодом после применения антибиотика. Количество энтерококков повысилось в 1,9 раз по сравнению с периодом после выпаивания доксициклина гидрохлорида, и приблизилось к показателям до применения антибиотиков. Одним из важных результатов является выраженное уменьшение выделяемое™ грибов рода Candida —у 6 щенков из 20. После курса приема «Эмбриоприма» показатель содержания грибов рода Candida снизился до уровня перед приемом антибиотика. Качественные показателиусловно-пато-генных энтеробактерий (У ПЭ) после использования препарата такие же, как до начала эксперимента. В количественном отношении отмечены положительные тенденции, что связано с уменьшением числа животных, у которых выделен Enlerobacter на 47%, что на 17% меньше даже, чем до применения антибиотика. После приема эмбриоприма высеваются Staphylococcus epidermidis только у 2 (7%) щенков, а патогенные Staphylococcus aureus отсутствуют.

Анализируя таблицу 2, мы можем сделать вывод о том, что препарат «Эмб-риоприм» оказывает выраженное положительное влияние на облигатную микрофлору, что подтверждает его высокие симбиотические свойства, а так же выраженный антибиотический эффект по отношению к патогенной микрофлоре.

У этих же животных проведены биохимические и морфологические исследования крови. Эти показатели при дисбактериозе свидетельствуют о наличии метаболических и иммунных нарушений, тесно связанных с динамикой качественных и количественных изменений микрофлоры кишечника.

Таблица 2

Влияние препарата «Эибрвоярим» на бактериальные показатели микробиоценоза кишечника у шейков с экспериментальным антибйотикассоциированиым днсбактернозом

Микрофлора Время исследования кишечного содержимого щенков

до приема антибиотиков, п=30 через 5 сут. после курса доксицик-лина гидрохлорида, п=30 через 5 сут. после окончания курса приема «Эмбриоп-рима», п=20

1 Кол-во lg КОЕ/г Выделено, гол.(%) Кол-во lg КОЕ/г Выделено, гол.(%) Кол-во lg КОЕ/г Выделено, шл.(%)

Патогенные микробы семейства кишечных 0 0 0 0 0 0

Бифидобактерии 8,78±0,74** 30(100) 3,46±0,33 30(100) 8,89*0,65** 30(100)

Бактероиды 5,63±0,61** 30(100) 3,23±0,47 30(100) 5,95±0,57** 30(100)

Лактобактерии 8,95±0,49** 30(100) 4,52±0,51 30(100) 9,34±0,56** 30(100)

Эшерихии с норм. ферм, акт-ю со сниж. ферм, акг-ю лактозонегативные гемолитические 6,47±0,43** 0 0 0 30(100) 0 0 0 3,28±0,83 4,65±037 3,66±0,52 3,15±0,63 30(100) 30(100) 30(100) 19(63) 5,90±0,58** 0 0 0 30(100)

Энтерококки 6,83±0,56* 30(100) 3,18±1,23 30(100) 6,13±0,54* 30(100)

УПЭ Klebsiella Hafnia Enterobacter Proteus Serratia Clostridium 0 0 2,32±0,36* 0 0 0 0 0 21(70) 0 0 0 3,56±0,32 0 5,72±0,71 4,17±0,46 0 2ДШ.57 8(27) 30(100) 6(20) 7(23) 0 0 3,11±0Д8* 0 0 0 16(53)

Стафилококки aureus epidermidis 0 0 0 0 1,87±0,34 4,25±0,39 2(7) 5(17) 0 1,69±0,24** 2(7)

Дрожжеподобные грибы 0,84±0,23** 4(13) 6,22±0,81 30(100) 0,77±0,31** 6(20)

* (Р<0,05), ** (Р<0,005) - в сравнении с показателями после курса антибиоти-котерапии.

После применения препарата отмечена положительная динамика гематологических показателей: показатели абсолютного числа эритроцитов и лейкоцитов вернулись к исходному уровню, установленному до начала эксперимента,

содержание гемоглобина выше, чем до начала эксперимента. В лейкограмме: базофилы, молодые и юные формы нейтрофилов не регистрируются, количество эозинофилов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов снизилось, а лимфоцитов и моноцитов повысилось до показателей нормы

По результатам биохимического исследования можно отметить: количество общего белка, альбуминов, глобулинов выше, чем после антибиотикотерапии в среднем в 2 раза. Показатели содержания ионов увеличились до показателей нормы. Уровень мочевины уменьшился в 1,6 раз. Количество глюкозы и холестерина в сыворотке крови уменьшилось в среднем в 1,5 раза. Показатели содержания ГГТ, амилазы, общего билирубина, триглицеридов достоверно понизились. Отношение ЛДГ: АсАТ составило 1:4,4, коэффициент Ритиса составил 1,2.

Таким образом, отмечено положительное влияние препарата «Эмбриоприм» на динамику гематологических и биохимических показателей крови собак. :

Эффективность препарата подтверждена так же и на гистологическом уровне: У экспериментальных животных как в толстом, так и в тонком отделах кишечника при дисбактериозе выявлены различные патологические процессы, свидетельствующие о повреждении тканей, о морфологических признаках их, дисфункции (изменение секреторной активности клеток эпителия), а также об иммунных нарушениях, чаще проявляющихся в наличие местных признаков иммунодефицита.

После курса приема кормовой добавки в обоих отделах кишечника менее интенсивно выражены или полностью исчезли деструктивные процессы в эпителии.

В целом отмечено выраженное регенераторное, противовоспалительное действие на ткани кишечника, нормализация секреторной функции кишечного эпителия, активизация лимфоидных элементов, свидетельствующая о повышении иммунной реактивности. Полученные результаты свидетельствуют о взаимодополняющем действии всех компонентов препарата.

Благодаря рациональному сочетанию в препарате «Эмбриоприм» взаимодополняющих компонентов, препарат обладает высоким эффектом нормализации обменных процессов, показателей .общего и местного иммунитета, стимулирует энергетический обмен, оказывает противовоспалительное действие, 'способствует регенерации слизистой оболочки кишечника, нормализует кишечную микрофлору, т.е. имеет М!«н'«факториий характер.

ВЫВОДЫ

1. Бактериальная флора кишечника здоровых собак с первых суток жизни до шести месяцев представлена преимущественно индигенной микрофлорой: лакто-бактериями, бифидобактериями, бакт ероидами, кишечной палочкой с нормальной ферментативной активностью, энтерококками. Стабилизация качественного состава эубиотической фракции микробиоценозакишечниказдоровых собак происходит к 20 дням жизни. Число лактобактерий в кишечном микробиоценозе стабилизируется в первую очередь, и на этом фоне, позже, возрастает содержание лактозопо-зитивной кишечной палочки, бифидобактерий и бактероидов, что подтверждает высокую антагонистическую активность, бифидогенную и пребиотическую роль метаболитов лактофлоры. Количество всех индигенных микроорганизмов закономерно возрастает вплоть до 1-5 лет, достоверно снижаясь к старости.

Качественное разнообразие и количественные (не более 104 КОЕ /г) показатели факультативной и транзиторной микрофлоры (представители семейств Enterobacter, Staphylococcus epidermidis, Klebsiella, Hafnia, Proteus, Serratia Clostridium, грибы рода Candida), нарастают с шестимесячного возраста до старости.

, 2. Динамика гематологических и биохимических показателей тесно связана с уровнем индигенной микрофлоры. Отсутствие метаболических и гематологических нарушений у1 здоровых собак, позволяет считать, что установленный состав и количественные показатели кишечной микрофлоры являются нормативными для данного вида животных в соответствующем возрасте.

3. Выявлены основные причины нарушения микробиоценоза кишечника у собак и сопутствующие этому клинические признаки, что позволило определить 7 основных групп риска и классифицировать дисбактериоз у этого вида животных по этиологическому признаку, как экологический, кормовой, ятро-генный, возрастной, обусловленный болезнью, лекарственный, стресс-о'пЬсре-дованный и полиэтиологичный.

4. Нарушение микробиоценоза кишечника отмечено у 88% обследованных собак, обитающих в Ставрополе. Независимо от принадлежности к группе риска, по степени количественного и качественного нарушения микробиоценоза у собак, установлены 4 степени дисбактериоза.' Любая степень дисбактериоза сопровождается дисбалансом соотношения представителей индигенной микрофлоры. При этом содержание лактобактерий сохраняется на высоком уровне дольше, чем другие облигатные микроорганизмы. А четвертая степень дисбактериоза развивается у тех животных, у которых регистрируется дефицит или отсутствие лактобактерий.

Первая и вторая степень характеризуются только нарушением соотношения или недостатком одного или нескольких облигатных, при отсутствии или наличие отдельных условно-патогенных и патогенных микроорганизмов (Enterobacter, Staphylococcus epidermidis, Proteus, Klebsiella, Escherichia, coli лактозонегативные и со сниженной ферментацией, грибы рода Candida), что соответствует дефицитному дисбактериозу. При нарушении микробиоценоза третьей и четвертой степени, сопровождающихся наличием патогенных бактерий (Escherichia coli гемолитические, грибы рода Candida, Staphylococcus aureus, Klebsiella, Enterobacter, Streptococcus intermedius, Salmonella typhimurium, Clostridium perfringens) в ассоциациях и в количестве существенно (более чем в 2,5 раза при подсчете в lg КОЕ/г), превышающем норму, дисбактериоз считали патогенным.

5. Установленные у собак всех групп риска нарушения бактериоценоза кишечника любой степени сопровождаются качественно идентичными мор-фофункциональными изменениями, свидетельствующими о системных расстройствах в организме. Наиболее постоянными являются нарушения гемо-поэза и всех видов метаболизма, указывающие на патологию и дисфункцию желудочно-кишечного тракта, печени и желчевыводящих путей, а также иммунопатологические процессы. Степень тяжести функциональных нарушений

и количественные значения исследуемых показателей, свидетельствующие о них, существенно различаются в зависимости от степени дисбактериоза, что позволяет классифицировать его у собак как манифестирующий и скрытый, и еще раз подтверждает ведущую роль кишечной микрофлоры в поддержании гомеостаза организма.

6. Установленные закономерности взаимосвязи бактериоценоза кишечника и комплекса морфофункциональных показателей организма собак обусловили необходимость разработки нового препарата комплексного этиопатогенетического действия, предназначенного для коррекции микробиоценоза и целесообразность объединения в нем бактериального и биостимулирующих компонентов.

Экспериментальным путем доказано, что сочетание в новом биологически активном препарате «Эмбриоприм» высокорезистентного штамма Lactobacillus acidophilus EP 317/40, активированной по оригинальной технологии эмбрионально-яичной массы, янтарной кислоты и яичной скорлупы, обеспечивает его превосходство по пробиотическому, пребиотическому, антибактериальному и биостимулируюшему действию по сравнению с аналогами (БАД к корму «Стэмб-М1» и «Биобактон»), при их самостоятельном применении. Препарат биосовместим со всеми индигенными микроорганизмами, на что указывает оптимизация их соотношения. Установлен выраженный бифидогенный эффект (прирост числа бифидобактерий на 50%) и высокий антагонистический эффект по отношению к спонтанно выделенным условно-патогенным и патогенным микроорганизмам; Staphylococcus aureus, грибам рода Candida, Escherichia coli лактозонегативной, Proleus vulgaris. :

7. Применение комплексного препарата «Эмбриоприм» щенкам с экспериментальным антибиотикассоцированным дисбактериозом способствует повышению содержания и восстановлению баланса индигенных микроорганизмов при высоком антибиотическом эффекте по отношению ко (7-8) всем видам выделенной патогенной и условно-патогенной микрофлоры (грибов рода Candida, Enterobacter, Escherichia coli со сниженной ферментативной активностью и лактозонегативньш, Klebsiella, Proteus, Clostridium; Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli гемолитические).

8. На фоне нормализации микробиоценоза отмечена положительная динамика гематологических показателей (абсолютного числа эритроцитов и лейкоцитов, содержание гемоглобина, в лейкограмме количества базофилов, молодые и юные формы нейтрофилов, эозинофилы, палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы, лимфоцитов и моноцитов), всех видов метаболизма (количество общего белка, альбуминов, глобулинов, ионов К+, Na+, Саг+, Р1+, СЬ мочевины, глюкозы, холестерина, ГГТ, амилазы, общего билирубина, триглицеридов), а также выраженное регенераторное, противовоспалительное действие на ткани кишечника, нормализация секреторной функции кишечного эпителия, активизация общей и местной неспецифической резистентности и иммунной реактивности. Полученные результаты свидетельствуют о взаимодополняющем действии всех компонентов препарата.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Получерные данные о качественном и количественном составе бактериальных сообществ в кишечнике у здоровых собак и в группах риска могут быть использованы в качестве нормативных и диагностических критериев для оценки состояния микробиоценоза, прогнозирования последствий его нарушения и организации коррекционных мероприятий, а также в научных целях при испытаниях на этих животных бактериальных и других препаратов.

2. Патентная и техническая документация на препарат «Эмбриоприм» является основанием для его производственного выпуска и использования в качестве эффективного этиопатогенетического средства при дисбактериозах у животных.

3. Материалы диссертационной работы могут быть использованы, в научных целях, при составлении учебных и справочных пособий, чтении лекций, ведении лабораторно — прахтических.занятий по курсу микробиологии, биотехнологии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Тимченко, Л.Д. Микробиоценоз кишечника у собак / Л.Д. Тимченко, Н.И. Гандрабурова // Актуальные проблемы сельскохозяйственной науки и образования: Сб. науч. тр. II междунар. ааучно-практ. конф. - Самара: Изд-во СГСХА, 2005. - С. 29-30. .

2. Тимченко, Л.Д. Рациональные подходы к применению бактерийных биологических препаратов при дисбактериозе/ Л.Д. Тимченко, Н.И. Гандрабурова // Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе: Матер, регион. конф. / Сталроп. ГУ. - Ставрополь, 2005. - С. 280-282. г.тпг

3. Гандрабурова, Н.И. Результаты применения новой кормовой добавки «Эмбриоприм» комплексного пребиотического и пробиотического действия / Н.И. Гандрабурова//Актуальные вопросы ветеринарной хирургии: Матер, на-учно-практ. конф. (Курган, сентябрь 2006 г.) / ФГУ «Российский науч. центр «Восстановительная травматология и ортопедия» — Курган, 2006. — С. 105-107.

4. Тимченко, Л.Д. Качественный я количественный состав микроорганизмов кишечника белых лабораторных крыс / Л.Д. Тимченко, Н.Ю. Волкова, Н.И. Гандрабурова // Естествознание и гуманизм: Сб. научи, работ. - Томск: Изд-во СибГМУ, 2006. - Т. 3. -№ 1. - С. 93.

5. Гандрабурова, Н.И. Результаты исследования кишечной микрофлоры у собак I Н.И. Гандрабурова, Л.Д. Тимченко // Естествознание и гуманизм: Сб. научн. работ. - Томск: Изд-во СибГМУ, 2006. - Т. 3. - № 1. - С. 89.

6. Волкова, Н.Ю. Особенности микробной сукцессии кишечника крыс в норме и при экспериментальном дисбактериозе в постнаталыюм онтогенезе / Н.Ю. Волкова, Н.И. Гандрабурова, Л.Д. Тимченко // Экология человека: Матер. Всеросс. научно-пр. конф. (Архангельск, ноябрь 2006 г.). - Архангельск, 2006. — Приложение 4/2. - С. 69-71. '

7. Гандрабурова, Н.И. Новый препарат «Эмбриоприм» и результаты его применения для коррекции нарушений микробиоценоза кишечника у собак / Н.И. Гандрабурова // Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе:

Матер. 52 научно-метод. конф. «Университетская наука — региону». - Ставрополь: Изд-во СГУ, 2007. - С. 36-38.

8. Тимченко, Л.Д. Принципиальный подход к разработке технологии новой биологически активной кормовой добавки «Эмбриоприм» для животных / Л.Д. Тимченко, Н.И. Гандрабурова II Вестник Южного научного центра - 2007. — Т. 3. — № 4. -

9. Тимченко, Л.Д. Состояние микробиоценоза кишечника у собак в группах риска по дисбактериозу, анализ причин и его распространение в городе Ставрополе / Л.Д. Тимченко, Н.И. Гандрабурова, Н.И. Пенькова // Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе: Матер, регион, конф. / Ставроп.ГУ. — Ставрополь, 2008.-С. 175-179.

10. Патент № 2303368 РФ. Способ приготовления кормовой добавки на основе эмбриональных тканей и пробиотиков / Л.Д. Тимченко, И.В. Ржепаковский, В.Н.Вакулин,Н.И. Гандрабурова.-Приоритетот 19.12.2005; Опубл. 27.07.2007,-Бюл. №21.-4. 1.-С. 192-193.

С. 88-93.

Подписано в печать 30.04.10 Формат 60x84 1/16 Усл.печ.л. 1,2 Бумага офсетная Тираж 120 экз.

Уч.-изд.л. 1,09 Заказ 112

Отпечатано в Издательско-нолиграфическом комплексе Ставропольского государственного университета. 355009, Ставрополь, ул.Пушкина, 1.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гандрабурова, Надежда Ивановна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Микрофлора кишечника млекопитающих и ее функциональное значение.

1.2. Современные представления о причинах и механизмах нарушений состава и функций микробиоты кишечника.

1.3. Пути и методы оптимизации микробиоценоза кишечника.

Глава 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы исследования.

2.1.1. Условия проведения исследования. Общая характеристика экспериментального материала.

2.1.2. Микробиологические методы исследований.

2.1.3. Гематологические, серологические, биохимические и другие лабораторные методы исследований.

2.1.4. Методы гистологических исследований.

2.1.5. Методы статистической обработки результатов исследований.

2.2. Микробиота кишечника у собак в условиях урбанизации и пути ее оптимизации (результаты собственных исследований).

2.2.1. Состав нормальной микрофлоры кишечника у здоровых собак различных возрастных групп, особенности микробной сукцессии их кишечника в постнатальном онтогенезе и их взаимосвязь с лабораторно-клиническими показателями.

2.2.2. Причины, характер микробиоценоза, особенности проявления дисбактериоза собак и его распространение в г. Ставрополе.

2.2.3. Этиопатогенетическое обоснование разработки и характеристика нового комплексного препарата «Эмбриоприм» для коррекции нарушений микробиоценоза.

2.2.4. Результаты углубленного изучения влияния нового биопрепарата «Эмбриоприм» на микробиоценоз кишечника и морфо-фупкциональные показатели организма собак при экспериментальном дисбактериозе.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Микробиоценоз кишечника у собак и его оптимизация с помощью нового биологически активного препарата "Эмбриоприм""

Важнейшим биотопом организма млекопитающих, с разнообразной и многочисленной микрофлорой, оказывающей на организм разностороннее влияние, является желудочно-кишечный тракт. Микробиота пищеварительного тракта млекопитающих отличается относительной стабильностью (Лоранская И.Д., 2003). Однако многочисленные сообщения свидетельствуют о том, что экологическое неблагополучие, масштабное использование удобрений и ядохимикатов в аграрном секторе экономики, широкое распространение антимикробных препаратов, нарушение схем их применения, глобальная урбанизация, сопровождающаяся многоплановым техногенным и антропогенным влиянием на состояние биоценозов, обусловили дестабилизацию микросимбиоценоза и иммунного гомеостаза практически всех живых организмов, а поддержание постоянства качественного и количественного состава микрофлоры в живом организме представляется сложной и, подчас, трудно разрешимой проблемой. Одним из конкретных проявлений нарушения микробиосимбиотических взаимоотношений в организме человека и животных является кишечный дисбактериоз (Тимченко Л.Д. и др., 2003; Бельмер С.В., 2004).

В последние годы проблемы дисбактериоза достаточно широко освещаются в медицинской литературе. Все чаще появляются сообщения на эту тему и в ветеринарии, раскрывающие, преимущественно, сущность лечебных мероприятий при дисбактериозах у сельскохозяйственных животных и птицы. Разрабатываются новые препараты на основе бактерий-антагонистов и их метаболитов, изучается их влияние на желудочно-кишечный тракт животных (Тараканов Б.В., 1993; Ману-хина А.И., 1999; Раицкая В.И., 2001; Олива Т.В. и др., 2006; Маликова А.Р. и др., 2007; и др.). Однако, выбор применяемых в ветеринарии препаратов пока еще не велик, а их эффективность очень вариабельна. В связи с этим не снижается перспективность исследований по разработке новых бактериальных препаратов и схем лечения на основе рационального выбора бактериальных композиций и сочетания про-, пребиотического и иммуномодулирующего действия (Тараканов Б.В., Эрнст JI.K., 2002; Тимченко Л.Д. и др., 2003; Бондаренко В.М., 2004). Необходимо отметить, что далеко не у всех видов животных определен экологический баланс между патогенными и условно-патогенными микроорганизмами кишечника, позволяющий дифференцировать состояние эубиоза и дисбиоза и обусловливающий достаточную эффективность коррекционных мероприятий.

Существенный интерес представляет вопрос изучения микробного состава кишечника у собак, в том числе в условиях города, где их число ежегодно возрастает (Поярков А.Д. и др., 1992; Колесниченко Б.О., 1997; Кубышко О.В., 2000). 4 Условия содержания и кормления этих животных наиболее приближены к условиям жизни человека (проживание под одной крышей, кормление отходами продуктов питания хозяина, общее экологическое окружение, использование одинаковых антибактериальных препаратов при лечении, иногда общие заболевания и пр.). Поэтому причины, приводящие к нарушению микробиоценоза кишечника сходны, а собака может рассматриваться не только, как ценное декоративное и служебное животное, но и как биологическая модель для изучения механизма развития дисбактериоза и испытания новых биопрепаратов для коррекции микробиоценоза кишечника.

Цель исследования: изучить характер микробиоценоза в норме, распространение, причины, клинические и морфо-функциональные характеристики дисбио-тических нарушений кишечника собак в условиях г. Ставрополя, а также оценить эффективность коррекционных мероприятий с использованием новой биологически активной кормовой добавки «Эмбриоприм».

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1) изучить состав микрофлоры кишечника и особенности ее сукцессии в по-стнатальном онтогенезе во взаимосвязи с морфо-функциональными показателями организма у здоровых собак различных возрастных групп при стабилизированном полнорационном кормлении;

3) установить характер дисбактериоза в зависимости от количественного и видового составов микроорганизмов в кишечнике собак в группах риска, и выявить его распространение у данного вида животных;

4) изучить системные морфо-функциональные проявления дисбактериоза у собак в зависимости от характера^нарушений микробиоценоза;

5) разработать новый -биологически активный препарат для коррекции микробиоценоза кишечника с выраженными антагонистическими свойствами, высокой резистентностью, биосовместимостью с резидентной микрофлорой и; патогенетическим эффектом;

6) изучить эффективность влияния нового, комплексного; биологически активного препарата «Эмбриоприм» на состояние микробиоценоза,, морфологические показатели кишечника, гематологические, биохимические и иммунологические показатели организма, собак при экспериментальном антибиотикассоцииро-ванном дисбактсриозе.

Научная новизна исследования; Получены данные о нормальной микрофлоре кишечника; здоровых собак различного возраста и закономерностях микробной сукцессии в постнатальном онтогенезе при полноценном кормлении.

На основании анализа факторов, способствующих развитию дисбактериоза и микробиологических исследований, определены группы риска собак по дисбактериозу и установлено его распространение среди этих животных в г. Ставрополе.

На щенках с экспериментальным антибиотикассоциированным дисбактерио-зом доказано системное положительное воздействие препарата на организм животных, что заключается в нормализации гематологических и биохимических показателей, а также в выраженном противовоспалительном, регенеринстимули-рующем, иммунотропном воздействии на ткани кишечника.

Приоритетность выполненных исследований подтверждена патентом РФ «Способ приготовления кормовой добавки на основе эмбриональных тканей и пробиотиков» № 230368, зарегистрирован в Государственном реестре изобретений РФ от 27 июля 2007 года.

Эффективность применения препарата «Эмбриоприм» подтверждена на животных в участковой ветеринарной лечебнице № 2 г. Ставрополя и ветучастке станицы Обильной Георгиевского района Ставропольского края.

Результаты исследования используются в научных целях и в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторных занятий по микробиологии на медико-биолого-химическом факультете Ставропольского государственного университета, в Ставропольском филиале Московского государственного гуманитарного университета им. М.А. Шолохова, Ставропольском государственном аграрном университете, Самарской государственной сельскохозяйственной академии.

Апробация работы. Материалы работы доложены и обсуждены на 50-й, 52-й и 53-й научных конференциях. «Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе» (Ставрополь, 2005, 2007, 2008). На II международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы сельскохозяйственной науки и образования» (Самара, 2005), на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной хирургии» (Курган, 2006).

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Качественный состав бактерий — резидентов кишечного содержимого у здоровых собак идентичен составу, свойственному большинству млекопитающих и человеку. Количественные соотношения между отдельными индигенными, а также индигенными и транзиторными микроорганизмами и их возрастная сукцессия у данного вида животных имеют свои особенности и коррелятивно связаны с морфо-функциональными показателями, свидетельствующими о нормальном состоянии гомеостаза.

2. Нарушение микробиоценоза широко распространено в популяции собак, обитающих в г. Ставрополе. Установленные причины, состояния бактериоценоза и сопутствующие ему морфо-функциональные нарушения, позволяют выделить основные группы риска и классифицировать дисбактериоз у этих животных по этиологическому признаку, степени количественного и качественного нарушения микробиоценоза, характеру влияния микробиоты на организм хозяина и по течению.

4. Микробиологические, гематологические, биохимические и гистологические исследования свидетельствуют о том, что новый комплексный биологически активный препарат «Эмбриоприм» на основе лактобактерий может быть использован в качестве эффективного средства для коррекции микробиоценоза кишечника при одновременном патогенетическом эффекте; направленном на устранение системных последствий дисбактериоза у животных.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ, в том числе одна из них — в периодическом издании из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки России для публикации основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени, получен один патент РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 188 страницах компьютерного набора'и, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов-исследования, главы результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы, включающего 259 источников, в том числе 53 зарубежных авторов и приложений. Диссертация иллюстрирована 15 таблицами, 28 микро- и макрофотографиями, 16 диаграммами.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Гандрабурова, Надежда Ивановна

ВЫВОДЫ

1. Бактериальная флора кишечника здоровых собак с первых суток жизни до шести месяцев представлена преимущественно индигенной микрофлорой: лакто-бактериями, бифидобактериями, бактероидами, кишечной палочкой с нормальной ферментативной активностью, энтерококками. Стабилизация качественного состава эубиотической фракции микробиоценоза кишечника здоровых собак происходит к 20 дням жизни. Число лактобактерий в кишечном микробиоценозе стабилизируется в первую очередь, и на этом фоне, позже, возрастает содержание лак-тозопозитивной кишечной палочки, бифидобактерий и бактероидов, что подтверждает высокую антагонистическую активность, бифидогенную и пребиотическую роль метаболитов лактофлоры. Количество всех индигенных микроорганизмов закономерно возрастает вплоть до 1-5 лет, достоверно снижаясь к старости.

2. Динамика гематологических и биохимических показателей тесно связана с уровнем индигенной микрофлоры. Отсутствие метаболических и гематологических нарушений у здоровых собак, позволяет считать, что установленный состав и количественные показатели кишечной микрофлоры являются нормативными для данного вида животных в соответствующем возрасте.

3. Выявлены основные причины нарушения микробиоценоза кишечника у собак и сопутствующие этому клинические признаки, что позволило определить 7 основных групп риска и классифицировать дисбактериоз у этогр вида животных по этиологическому признаку, как экологический, кормовой, ятрогенный, возрастной, обусловленный болезнью, лекарственный, стресс-опосредованный и.поли-этиологичный.

4. Нарушение микробиоценоза кишечника отмечено у 88% обследованных собак, обитающих в Ставрополе. Независимо от принадлежности к группе риска, по степени количественного и качественного нарушения микробиоценоза у собак, установлены 4 степени дисбактериоза. Любая степень дисбактериоза сопровождается дисбалансом соотношения представителей индигенной микрофлоры. При этом содержание лактобактерий сохраняется на высоком уровне дольше, чем другие обли-гатные микроорганизмы. А четвертая степень дисбактериоза развивается у тех животных, у которых регистрируется дефицит или отсутствие лактобактерий.

Первая и вторая степень характеризуются только нарушением соотношения или недостатком одного или нескольких облигатных, при отсутствии или наличие отдельных условно-патогенных и патогенных микроорганизмов (Enterobacter, Staphylococcus epidermidis, Proteus, Klebsiella, Escherichia coli лактозонегативные и со сниженной ферментацией, грибы рода Candida), что соответствует дефицитному дисбактериозу. При нарушении микробиоценоза третьей и четвертой степени, сопровождающихся наличием патогенных бактерий (Escherichia coli гемолитические, грибы рода Candida, Staphylococcus aureus, Klebsiella, Enterobacter, Streptococcus intermedins, Salmonella typhimurium, Clostridium perfringens) в ассоциациях и в количестве существенно (более чем в 2,5 раза при подсчете в lg КОЕ/г), превышающем норму, дисбактериоз считали патогенным.

5. Установленные у собак всех групп риска нарушения бактериоценоза кишечника любой степени сопровождаются качественно идентичными морфо-функциональными изменениями, свидетельствующими о системных расстройствах в организме. Наиболее постоянными являются нарушения гемопоэза и всех видов метаболизма, указывающие на патологию и дисфункцию желудочно-кишечного тракта, печени и желчевыводящих путей, а также иммунопатологические процессы. Степень тяжести функциональных нарушений и количественные значения исследуемых показателей, свидетельствующие о них, существенно различаются в зависимости от степени дисбактериоза, что позволяет классифицировать его у собак как манифестирующий и скрытый, и еще раз подтверждает ведущую роль кишечной микрофлоры в поддержании гомеостаза организма.

Экспериментальным путем доказано, что сочетание в новом биологически активном препарате «Эмбриоприм» высокорезистентного штамма Lactobacillus acidophilus ЕР 317/40, активированной по оригинальной технологии эмбрионально-яичной массы, янтарной кислоты и яичной скорлупы, обеспечивает его превосходство по пробиотическому, пребиотическому, антибактериальному и биостимули-рующему действию по сравнению с аналогами (БАД к корму «Стэмб-М1» и «Био-бактон»), при их самостоятельном применении. Препарат биосовместим со всеми индигенными микроорганизмами, на что указывает оптимизация их соотношения. Установлен выраженный бифидогенный эффект (прирост числа бифидобактерий на 50%) и высокий антагонистический эффект по отношению к спонтанно выделенным условно-патогенным и патогенным микроорганизмам: Staphylococcus aureus, грибам рода Candida, Escherichia coli лактозонегативной, Proteus vulgaris.

7. Применение комплексного препарата «Эмбриоприм» щенкам с экспериментальным антибиотикассоциированным дисбактериозом способствует повышению содержания и восстановлению баланса индигенных микроорганизмов при высоком антибиотическом эффекте по отношению ко (7-8) всем видам выделенной патогенной и условно-патогенной микрофлоры (грибам рода Candida, Enterobacter, Escherichia coli со сниженной ферментативной активностью и лактозонега-тивным, Klebsiella, Proteus, Clostridium, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli гемолитическим).

8. На фоне нормализации микробиоценоза отмечена положительная динамика гематологических показателей (абсолютного числа эритроцитов и лейкоцитов, содержание гемоглобина, в лейкограмме количество базофилов, молодые и юные формы нейтрофилов, эозинофилы, палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофи-лы, лимфоцитов и моноцитов), всех видов метаболизма (количество общего белка, альбуминов, глобулинов, ионов К+, Na+, Са2+, Р3+, СГ , мочевины, глюкозы, холестерина, ГТТ, амилазы, общего билирубина, триглицеридов), а также выраженное регенераторное, противовоспалительное действие на ткани кишечника, нормализация секреторной функции кишечного эпителия, активизация общей и местной неспецифической резистентности и иммунной реактивности. Полученные результаты свидетельствуют о взаимодополняющем действии всех компонентов препарата.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Полученные данные о качественном и количественном составе бактериальных сообществ в кишечнике у здоровых собак и в группах риска могут быть использованы в качестве нормативных и диагностических критериев для оценки состояния микробиоценоза, прогнозирования последствий его нарушения и организации коррекционных мероприятий, а также в научных целях при испытаниях на этих животных бактериальных и других препаратов.

3. Материалы диссертационной работы могут быть использованы в научных целях, при составлении учебных и справочных пособий, чтении лекций, ведении лабораторно - практических занятий по курсу микробиологии, биотехнологии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гандрабурова, Надежда Ивановна, Ставрополь

1. Абрамов, Н. Дисбактериоз кишечника в клинике соматических заболеваний / Н. Абрамов, А. Мурашова // Врач. 1995. - № 11. - С. 18-19.

2. Алтухов, Н.М. Краткий справочник ветеринарного врача / Н.М. Алтухов, В.И. Афанасьев, Б.А. Башкиров и др. М.: Агропромиздат, 1990. - 573 с.

3. Андреева, А.В. Фармакологическая коррекция микробиоценоза матки коров при гнойно-катаральном эндометрите / А.В. Андреева // Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных: Сб. науч. тр. М., 2003. - С. 150-151.

4. Ардатская, М.Д. Дисбактериоз кишечника: современные аспекты изучения проблемы, принципы диагностики и лечения / М.Д. Ардатская, О.Н. Дубинин, О.Н. Минушкин // Терапевтический архив. 2001. — № 2. - С. 67-71.

5. Бабин, В.Н. Биохимические и молекулярные аспекты симбиоза человека и его микрофлоры / В.Н. Бабин, И.В. Домарадский, А.А. Дубинин, О.А. Кондракова // Журнал Росс. Хим. общества им. Д.И. Менделеева. 1994. - № 6. - С. 66-78.

6. Бабин, В.Н. Молекулярные аспекты симбиоза в системе хозяин-микрофлора / В.Н. Бабин, О.Н. Минушкин, А.А. Дубинин, И.В. Домарадский // Рос. журнал гастроэнтерол., гепатол. 1998. - Т. 8. - № 6. - С. 76-82.

7. Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника: Методические указания / сост. М.А. Баймуратова, В.Э. Воронина, К.С. Оспанов, М.Р. Маке-нова и др. Астана, 2004. - 30 с.

8. Барановский, А.Ю. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника / А.Ю. Барановский, Э.А. Кондрашина. СПб: Питер, 2000. - 67 с.

9. Барзашка-Попова, С.Н. Коррекция микрофлоры и местного иммунитета кишечника при дисбактериозах с помощью лактобацилл: автореф. дис. . канд. мед. наук / С.Н. Барзашка-Попова. М., 1990. - 24 с.

10. Белов, А.Д. Болезни собак: справочник / А.Д. Белов, Е.П. Данилов, И.И. Дикур и др. — М.: Агропромиздат, 1990. 368 с.

11. Бельмер, С.В. Антибиотик-ассоциированный дисбактериоз кишечника / С.В. Бельмер // Русский медицинский журнал. — 2004. Т. 12. - № 3. — С. 148-151.

12. Бельмер, С.В. Микрофлора пищеварительного тракта / С.В. Бельмер, А.В. Горелов, И.Н. Захарова и др.; под ред. А.И. Хавкина. М.: Фонд социальной педиатрии, 2006. - 416 с.

13. Беюл, Е.А. Дисбактериозы кишечника и их клиническое значение / Е.А. Беюл, И.Б. Куваева // Клиническая медицина. 1986. - № 11. - С. 37-44.

14. Билибин, А.Ф. Проблема дисбактериоза в клинике / А.Ф. Билибин // Терапевтический архив. 1967.-№ 11.-С. 21-28.

15. Билибин, А.Ф. Дисбактериоз, аутоинфекция и их значение в патологии и клинике человека / А.Ф. Билибин // Клиническая медицина. 1970. - Т. 48. - № 2. -С. 7-12.

16. Блохина, И.Н. Дисбактериозы / И.Н. Блохина, В.Г. Дорофейчук. Л.: Медицина, Ленингр. отд-ние, 1979. - 174 с.

17. Блохина, И.Н. Дисбактериоз и его профилактика / И.Н. Блохина // Педиатрия. 1981.-№ 10.-С. 6-9.

18. Богданова, Е.А. Сравнительное исследование пристеночной микрофлоры кишки человека в норме и патологии: дис. . канд. мед. наук / Е.А. Богданова. -М., 2004.-176 с.

19. Бойцев, П.Н. Принципы и способы индивидуального лечебно-профилактического воздействия на организм / П.Н. Бойцев. — М.: Талицы, 1995.- 160 с.

20. Бокарев, В.В. Коррекция дисбиотических нарушений кишечника с помощью пробиотиков: информационное письмо для врачей / В.В. Бокарев, М.И. Ершова. Хабаровск: Изд-во Хабар. ГТУ, 2002. - 27 с.

21. Болотовский, Г.В. Опыт практикующего врача по ведению пациентов с дис-бактериозом / Г.В. Болотовский // Индивидуальные подходы к проблеме дисбактериоза: тез. докл. науч.-практ. сем. 5 июня 2003 г. М., 2003. - С. 41-45. •

22. Болотовский, Г.В. Дисбактериоз: симптомы, лечение, профилактика / Г.В. Болотовский. — СПб.: Невский проспект, 2004. 153 с.

23. Бондаренко, В.М. Дисбактериоз / В.М. Бондаренко. М.: Медицина, 1994. -334 с.

24. Бондаренко, В.М. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры / В.М. Бондаренко, В.Г. Петровская // Вестник Российской академии медицинских наук. — 1997. № 3. — С. 7-10.

25. Бондаренко, В.М. Дисбактериозы кишечника у взрослых / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева, Т.В. Мацулевич. М.: КМК Scientific Press, 2003. - 220 с.

26. Бондаренко, В.М. Пребиотическое и противоинфекционное действие лактуло-зосодержащих препаратов / В.М. Бондаренко // Фарматека. 2004. - № 11. - С. 1-5.

27. Борисова, В.В. Лабораторные исследования в ветеринарии. Вирусные, риккет-сиозные и паразитарные болезни: справочник /В.В. Борисова, Б.И. Антонов, Л.П. Каменева; под ред. В.В. Борисова. — М.: Агропромиздат, 1987. — 240 с.

28. Булатов, А.С. Изыскание штамма микроба-антагониста в отношении сальмонелл / А.С. Булатов // Ветеринария. — 2003. № 5. - С. 26-29.

29. Бурмистрова, A.JI. Иммунный гомеостаз и микросимбиоценоз. Метаморфозы и пути развития воспалительных заболеваний кишечника: Монография / А.Л. Бурмистрова. — Челябинск: Челябинский дом печати, 1997. — 215 с.

30. Бурмистров, Е.Н. Клиническая лабораторная диагностика. Основные исследования и показатели / Е.Н. Бурмистров. — М.: Исслед. центр «Шанс», 2002. — 19 с.

31. Бухтилов, Ф.И. Развитие кишечной микрофлоры у новорожденных телят / Ф.И. Бухтилов, Г.И. Кошевая, Д.И. Ливанов, А.И. Смолин и др. // Ветеринария. 1981. - № 4. - С. 37-38.

32. Ванина, Н.Н. Морфология кишечника при ассоциативном течении аскаридоза и колибактериоза / Н.Н. Ванина // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: мат-лы междунар. науч.-практ. конф. 23-25 мая 2002 г.-Воронеж, 2002.-С. 158-159.

33. Воробьёв, А.А. Дисбактериозы — актуальная проблема медицины / А.А. Воробьёв, Н.А. Абрамов, В.М. Бондаренко, Б.А. Шендеров // Вестник Российской академии медицинских наук. — 1997. — № 3. С. 4-7.

34. Воробьёв, А.А. Исследование пристеночной микрофлоры кишечника крысы / А.А. Воробьёв, Ю.В. Несвижский, Е.А. Богданова и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2005. - № 3. - С. 61-65.

35. Воробьева, Л.И. Пропионовокислые бактерии в профилактике дисбактериоза / Л.И. Воробьева // Индивидуальные подходы к проблеме дисбактериоза: тез. докл. науч.-практ. семинара 5 июня 2003 г. М., 2003. - С. 14-19.

36. Воронцов, И.М. Болезни, связанные с пищевой сенсибилизацией у детей / И.М. Воронцов, О.А. Маталыгина. Л.: Медицина, 1986. - 272 с.

37. Воронин, Е.С. Практикум по клинической диагностике болезней животных: для студентов вузов по специальности «Ветеринария» / Е.С. Воронин, М.Ф. Васильев, Г.Л. Дугин. М.: КолосС, 2004. - 269с.

38. Горелов, А.В. Тактика комплексной терапии острых кишечных инфекций у детей / А.В. Горелов // Вопросы современной педиатрии. 2003. - № 3. - С. 1-4.

39. Гребенев, A.JI. Болезни кишечника (современные достижения в диагностике и терапии) / A.JI. Гребенев, Л.П. Мягкова. М.: Медицина, 1994. - 400 с.

40. Грязнева, Т.Н. Технология производства пробиотика «Биод-5» и его лечебно-профилактическая эффективность для разных видов животных: автореф. дис. . д-ра биол. наук / Т.Н. Грязнева. М., 2005. - 43 с.

41. Данилова, О.П. Нормальная микрофлора кишечника. Диагностика, профилактика и лечение дисбактериозов кишечника: пособие для врачей и студентов / О.П. Данилова. М., 1997. - 40 с.

42. Джупина, С.И. Этиология и профилактика массовых желудочно-кишечных болезней телят / С.И. Джупина // Актуальные проблемы болезней молодняка всовременных условиях: мат-лы междунар. науч.-практ. конф. 23-25 мая 2002 г. -Воронеж, 2002. С. 8-11.

43. Дзержинская, И.С. Питательные среды для выделения и культивирования микроорганизмов: учеб. пособие / И.С. Дзержинская. — Астрахань: Изд-во Астрах. ГТУ, 2008.-348 с.

44. Дмитриева, JI.A. Терапевтическая стоматология: учеб. пособие / JI.A. Дмитриева. М.: МЕДпресс-информ, 2003. - 896 с.

45. Драчева, JI.B. Пропионовокислые бактерии — аспект антиоксидантной активности / JI.B. Драчева // Мат-лы пятого съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (г. Москва, 2-4 декабря 2008 г.). М.: ИАЦ, 2008. - С. 54-55.

46. Емельяненко, П.А. Ветеринарная микробиология / П.А. Емельяненко, Г.В. Дунаев, Д.Г. Кудлай, С.Я. Любашенко. М.: Колос, 1982. - 304 с.

47. Ермаков, A.M. Разработка методов донозологической диагностики (клинико-экспериментальное исследование на примере гипотрофии и парвовироза): дис. . д-ра биол. наук / A.M. Ермаков. Новочеркасск, 2008. — 416 с.

48. Жуков, Н.А. Иммунологические аспекты кишечного дисбактериоза / Н.А. Жуков, А.И. Гусаров // Терапевтический архив. 1980. - № 2. - С. 82-86.

49. Зон, Г.А. Аутохтонная микрофлора птицы / Г.А. Зон // Птицеводство. 1992. -№6.-С. 20-22.

50. Ильясова, 3.3. Коррекция прополисом условно-патогенной микрофлоры кишечника телят / 3.3. Ильясова // Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных: сб. науч. тр. — М., 2003. -С. 73-74.

51. Интизаров, М.М. Микрофлора тела животных Электронный ресурс. / М.М. Интизаров // Ветеринарная медицина, [www.allvet.ru]. — 2008. URL: http://www.allvet.ru/articles/article58.php (дата обращения: 20.01.2008).

52. Информационно-методическое письмо ЦГСЭН в Ставропольском крае «Лабораторная диагностика дисбактериоза толстого кишечника»: утв. ФГУ ЦГСЭН в Ставропольском крае 30.09.03. Ставрополь, 2003. - 10 с.

53. Исаев, В.В. Профилактика желудочно-кишечных болезней телят / В.В. Исаев, О.В. Коробова, Т.Д. Хрисанфова // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: мат-лы междунар. науч.-практ. конф. 23-25 мая 2002 г. Воронеж, 2002. - С. 283-284.

54. Калмыкова, А.И. Системная реакция организма экспериментальных животных на длительный прием пробиотика / А.И. Калмыкова, Н.А. Пальчикова, Н.П. Бгатова, Ю.Г. Дружинина // Бюллетень СО РАМН. 2005. - № 3. - С. 97-101.

55. Калмыкова, А.И. Системные эффекты действия пробиотиков: дис. . д-ра биол. наук / А.И. Калмыкова. — Новосибирск, 2006. — 248 с.

56. Кетлинский, С.А. Роль Т-хелперов типов 1 и 2 в регуляции клеточного и гуморального иммунитета / С.А. Кетлинский // Иммунология. — 2002. — № 2. С. 77-80.

57. Кленова, И.Ф. Ветеринарные препараты в России: справочник / И.Ф. Кленова, Н.А. Яременко. М.: Сельхозиздат, 2001. - 544 с.

58. Колганова, Т.В. Корректирующее действие пробиотиков при экспериментальном дисбактериозе: автореф. дис. . канд. биол. наук / Т.В. Колганова. — М., 2003.- 18 с.

59. Колесниченко, Б.О. Мембранное пищеварение у собак: автореф. дис. . канд. вет. наук / Б.О. Колесниченко. СПб., 1997. - 19 с.

60. Колычев, Н.М. Ветеринарная микробиология и иммунология. 3-е изд., пере-раб. и доп. / Н.М. Колычев, Р.Г. Госманов. М.: КолосС, 2003. - 432 с.

61. Копанев, Ю.А. Дисбактериоз кишечника и дисбиотические реакции у детей / Ю.А. Копанев, В.А. Алешкин // Педиатрия. 2002. - № 6. - С. 100-103.

62. Коротченко, Н.В. Справочник специалиста ветеринарной лаборатории / Н.В. Коротченко, Ю.П. Смиян, А.П. Адаменко, В.М. Манченко и др.; под ред. Ю.П. Смияна. Киев: Урожай, 1987. — 368 с.

63. Коршунов, В.М. Изучение влияния энтерококков на нормализацию микрофлоры кишечника при экспериментальных дисбактериозах / В.М. Коршунов, Т. А. Логадырь, С.Н. Попова // Медицина. 1989. - № 9. - С. 3-6.

64. Коршунов, В.М. Рациональные подходы к проблеме коррекции микрофлоры кишечника / В.М. Коршунов, В.В. Смеянов, Б.А. Ефимов // Вестник Российской академии мед. наук. 1996. - № 2. - С. 60-65.

65. Коршунов, В.М. Качественный состав нормальной микрофлоры кишечника у лиц различных возрастных групп / В.М. Коршунов, JI.B. Поташник, Б.А. Ефимов и др. // Журнал микробиол. 2001. — № 2. — С. 57-61.

66. Краснов, В.В. Микрофлора кишечника и иммунитет: клиническая лекция / В.В. Краснов. Н. Новгород: Изд-во Нижегор. гос. мед. академии, 2003. - 45 с.

67. Красноголовец, В.Н. Дисбактериоз кишечника и его клиническое значение / В.Н. Красноголовец. -М.: Медицина, 1979. 190 с.

68. Красноголовец, В.Н. Дисбактериоз кишечника / В.Н. Красноголовец. — М.: Медицина, 1989. 206 с.

69. Крутько, В.Н. Старение: системный подход / В.Н. Крутько, А.А. Подколзин, В.И. Донцов // Профилактика старения. 1998. — № 1. — С. 5-12.

70. Кубышко, О.В. Настольная книга собаковода / О.В. Кубышко. Ростов н/Д: Феникс, 2000. - 448 с.

71. Кузнецова, Г.Г. О стадиях нарушения биоценоза кишечника при хронических колитах / Г.Г. Кузнецова // Современная медицина. 1972. - № 2. - С. 62-65.

72. Кузьмин, А.А. Антигельминтики в ветеринарной медицине / А.А. Кузьмин. -М.: Аквариум ЛТД, 2004. 144 с.

73. Лабораторная диагностика листериоза животных и людей: методич. рекомендации. -М., 1987.-56 с.

74. Лаздин, О.А. Микробиоценоз кишечника и его коррекция: пособие для врачей и студентов медицинских вузов / О.А. Лаздин, В.М. Червинец, Т.Д. Табакова. -Тверь, 1999.-60 с.

75. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М.: Высшая школа, 1990. - 352 с.

76. Лапинскайте, Р. Эффективность применения симбионтного эубиотика STF / Р. Лапинскайте, Й. Бабонас // Ветеринария. 2003. - № 3. - С. 22-26.

77. Леванова, В.А. Становление микрофлоры кишечника у детей первого года жизни / В.А. Леванова, В.А. Алешкин, А.А. Воробьев и др. // Журнал микробиол. 2001. - № 4. - С. 47-50.

78. Лобзин, Ю.В. Дисбактериоз или полезны ли антибиотики / Ю.В. Лобзин, С.М. Захаренко, К.П. Плотников. — СПб.: СпецЛит, 2002. — 77 с.

79. Лопатина, Т.К. Иммуномодулирующее действие препаратов — эубиотиков / Т.К. Лопатина, М.С. Бляхер, В.Н. Николаенко и др. // Вестник РАМН. 1997. -№3.-С. 30-34.

80. Лоранская, И.Д. Изменение микрофлоры кишечника у больных после холеци-стоэктомии, современная немедикаментозная коррекция / И.Д. Лоранская // Индивидуальные подходы к проблеме дисбактериоза: тезисы докл. науч.-практ. семинара. М., 2003.-С. 25-28.

81. Лянная, A.M. Эпидемиология, диагностика и профилактика кишечных, респираторных и природно-очаговых инфекций / A.M. Лянная, Г.И. Гончарова. Л., 1975.-167 с.

82. Майоров, А.И. Болезни собак: справочник / А.И. Майоров. М.: Колос, 2001. -472 с.

83. Манасян, А.В. Действие бактона и фталазола на кишечную микрофлору собак при гастроэнтерите / А.В. Манасян, Е.Г. Тирацуян // Ветеринария. 2003. - № 4.-С. 52-54.

84. Маргелис, Л. Роль симбиоза в эволюции клетки / Л. Маргелис. — М.: Мир, 1983.-352 с.

85. Мартыканова, Д.С. Изменения микробных сообществ в желудочно-кишечном тракте детей при дисбактериозах кишечника и их коррекция пробиотиками инитрофуранами: дис. . канд. биол. наук / Д.С. Мартыканова. Казань, 2006. -217 с.

86. Медведева, М.А. Клиническая ветеринарная лабораторная диагностика: справочник для ветеринарных врачей / М.А. Медведева. М.: ООО «Аквариум-Принт», 2008.-416 с.

87. Методические рекомендации. Лабораторная диагностика листериоза животных и людей. -М.: 1987.-38 с.

88. Методические указания по лабораторной диагностике хламидийных инфекций у животных / сост. В.В. Селиверстов / Департамент вет. Минсельхозпрода России.-М., 1999.-20 с.

89. Методические рекомендации по микробиологической диагностике дисбакте-риозов кишечника в лечебно-диагностических учреждениях армии и флота / сост. В.М. Добрынин, И.А. Добрынина, В.В. Калацуха, О.В. Хлопунова / Гл. военно-мед. упр. СПб., 1999. - 23 с.

90. Методические рекомендации. Программа восстановления микрофлоры (био-фитокоррекция) и профилактика дисбактериоза / сост. Л.В. Погорельская, И.П. Трякина / М-во здравоох. РФ, РМАПО. М., 2002. - 31 с.

91. ИЗ. Микельсаар, М.Э. Удельный вес бифидобактерий в содержимом и стенке кишечника / М.Э. Микельсаар, М.Э. Тюри, А.А. Ленцнер // Бифидобактерии, использование в клинике, медицинской промышленности, сельском хозяйстве: сб. науч. тр.-М., 1986.-С. 3-10.

92. Минушкин, О.Н. Дисбактериоз кишечника / О.Н. Минушкин, М.Д. Ардатская, В.Н. Бабин и др. // Российский медицинский журнал. — 1999. — № 3. — С. 40-44.

93. Мухина, Ю.Г. Диагностика и коррекция дисбактериоза у детей / Ю.Г. Мухина // Русский медицинский журнал. 1999. — Т. 7. - № 11. - С. 487-496.

94. Мухина, Ю.Г. Факторы, влияющие на формирование микрофлоры у детей раннего возраста / Ю.Г. Мухина, М.И. Дубровская // Индивидуальные подходы к проблеме дисбактериоза: тез. докл. научно-практ. семинара 5 июня 2003 г.-М., 2003.-С. 14-19.

95. Наставление по применению набора для диагностики токсоплазмоза животных в РДСК: утв. Деп. ветер-и Мин-ва с/х и продовольствия РФ от 4 декабря 1997 г. № 13-7-2/1107.-М., 1997.-9 с.

96. Наставление по диагностике бруцеллеза животных: утв. Деп. ветер-и Мин-ва с/х и продовольствия РФ от 27 марта 2000 г. № 13-7-2/1945. М., 2000. - 51 с.

97. Несвижский, Ю.В. Изучение изменчивости кишечного микробиоценоза человека в норме и при патологии / Ю.В. Несвижский // Вестник РАМН. 2003. -№ 1. — С. 49-53.

98. Нетрусов, А.И. Экология микроорганизмов / А.И. Нетрусов, Е.А. Бонч-Осмоловская, В.М. Горленко и др. М.: Изд. центр «Академия», 2004.-272 с.

99. Никитенко, М.В. Новая форма препарата «споробактерин жидкий» и изучение ее эффективности при лечении дисбактериозов кишечника: дис. . канд. мед. наук / М.В. Никитенко. Оренбург, 2004. - 130 с.

100. Никифоров, В.А. Медицинская микробиология: учеб. пособие / В.А. Никифоров, В.В. Шкарин. Н. Новгород: Изд-во Нижегор. мед. акад., 2000. - 248 с.

101. Николаева, К. Дисбактериоз: Лечение по психобактериологической методике / К. Николаева. СПб.: ВЕСЬ, 2002. - 181 с.

102. Николаева, Т.Н. Иммуностимулирующая и антиканцерогенная активность нормальной лактофлоры кишечника / Т.Н. Николаева, В.В. Зорина, В.М. Бон-даренко // Терапев. гастроэнтерология. 2004. - № 4. - С. 39-44.

103. Ниманд, Х.Г. Болезни собак. Практическое руководство для ветеринарных врачей / Х.Г. Ниманд, П.Ф. Сутер. М.: Аквариум, 1998. - 816 с.

104. Ногаллер, A.M. Аллергия и хронические заболевания органов пищеварения / A.M. Ногаллер. М., 1975.-167 с.

105. Овод, А.С. Комплексная профилактика диарей и респираторных болезней телят / А.С. Овод // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: мат-лы междунар. науч.-практ. конф. 23-25 мая 2002 г. Воронеж, 2002.-С. 461-462.

106. Овод, А.С. Направленное формирование бактериоценоза кишечника / А.С. Овод // Ветеринария. 2003. - № 2 - С. 23-26.

107. Овод, А.С. Профилактика дисбактериоза кишечника молодняка сельскохозяйственных животных / А.С. Овод // Вестник ветеринарии. 2005. - № 35. - С. 35-38.

108. Онищенко, Г.Г. Иммунобиологические препараты и перспективы их применения в инфектологии / Г.Г. Онищенко, В.А. Алешкин, С.С. Афанасьев и др. -М., 2002. 608 с.

109. ОСТ 91500.11.0004-2003. Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника / под рук. А.И. Вялкова. М.: Изд-во стандартов, 2003. - 174 с.

110. Очилова, Р.А. Биологические свойства штаммов К. pneumoniae и S. aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, при дисбактериозах кишечника у детей с бронхолегочной патологией: дис. . канд. биол. наук / Р.А. Очилова. -Уфа, 2004. 147 с.

111. Перетц, Л.Г. Значение нормальной флоры для организма человека / Л.Г. Пе-ретц.-М., 1955.-218 с.

112. Петраков, А.А. Количественное содержание бактероидов в кишечнике людей в норме и при дисбактериозах / А.А. Петраков, Ф.Л. Вильшанская, А.Ф. Гав-рилов // Микробиологический журнал. 1983. - Т. 45. - № 1. - С. 46- 50.

113. Петровская, В.Г. Микрофлора человека в норме и патологии / В.Г. Петровская, О.П. Марко. М., 1976. - 125 с.

114. Пивняк, И.Г. Методические рекомендации по изучению микрофлоры пищеварительного тракта животных / И.Г. Пивняк, Н.А. Лаврентьева. М., 1979. — 12 с.

115. Пинегин, Б.В. Дисбактериозы кишечника / Б.В. Пинегин, В.Н. Мальцев, В.М. Коршунов. -М.: Медицина, 1984. 143 с.

116. Поляк, М.С. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии / М.С. Поляк, В.И. Сухаревич, М.Э. Сухаревич. СПб.: ЭЛБИ, 2008. - 352 с.

117. Потиевский, Э.Г. Концепция экологического подхода к терапии кишечных инфекций / Э.Г. Потиевский, В.М. Бондаренко // Журнал микробиол. 1997. -№ 1.-С. 98-101.

118. Поярков, А.Д. О собаке / А.Д. Поярков, B.C. Варлаков, А.Н. Гражданкина, Н.Г. Овсянников и др. Москва - Ташкент: Фонд, 1992. - 233 с.

119. Проскуров, В.А. Классификация и клинические формы стафилококковых заболеваний / В.А. Проскуров // Воен.-мед. журнал. 1975. - № 3. — С. 51-53.

120. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных: сб. сан. и вет. правил. — М.: Инф.-изд. центр Госкомсанэпиднадзора России, 1996.-256 с.

121. Раицкая, В.И. Новые препараты для лечения желудочно-кишечных болезней телят / В.И. Раицкая // Ветеринария. 2001. - № 5. - С. 14-15.

122. Рекомендации Комитетам по этике, проводящим экспертизу биомедицинских исследовании. Женева, 2000.

123. Ржепаковский, И.В. Разработка биостимулятора эмбрионального и оценка его эффективности при иммунодефицитных состояниях у животных раннего возраста: дис. . канд. биол. наук / И.В. Ржепаковский. — Ставрополь, 2003. 163 с.

124. Руководства и рекомендации для Европейских независимых комитетов по вопросам этики // Европейский форум по качественной клинической практике. — Брюссель, 1995, 1997.

125. Савельева, И.С. Возможности гормональной реабилитации женщин после аборта. Современные методы диагностики и лечения урогенитального хлами-диоза / И.С. Савельева // Акушерство и гинекология. 2003. - № 3. - С. 43-46.

126. Самсыгина, Г.А. Особенности становления биоценоза кишечника и кишечный дисбактериоз /Г.А. Самсыгина // Лечащий врач. — 2003. — № 5. — С. 2-6.

127. Симпсон, Д.В. Клиническое питание собак и кошек: руководство для ветеринарного врача / Д.В. Симпсон, Р.С. Андерсон, П.Д. Маркуелл. М: Аквариум, 2000.-256 с.

128. Синельников, Б.М. Лактулоза — новый биоресурс для инноваций на юге России / Б.М. Синельников, А.Г. Храмцов, И.А. Евдокимов, С.А. Рябцева, А.В.

129. Серов // Мат. междунар. науч.-практ. конф. «Биоресурсы, биотехнологии, инновации Юга России» (Ставрополь-Пятигорск, 21-24 октября 2001 г.). Ставрополь: Изд-во СГУ, 2003. - Ч. 2. - С. 126-128.

130. Сорокин, В.В. Нормальная микрофлора кишечника животных / В.В. Сорокин. Кишинев, 1973. - 52 с.

131. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Изд. 3-е, перераб. и доп.; под ред. М.О. Биргера. М.: Медицина, 1982. -340 с.

132. Старченков, С.В. Болезни собак и кошек: учебное пособие / С.В. Старченков. -СПб.: Лань, 2001.-560 с.

133. Степаненко, И.П. Микробиология молока и молочных продуктов: учебник для ВУЗов / И.П. Степаненко. Сергиев Посад: ООО «Все для Вас-Подмосковье», 1999.-415 с.

134. Степаненко, И.П. Влияние пробиотического препарата стрептобифида-форте на иммуногенез и формирование кишечного микробиоценоза цыплят: авто-реф. дис. . канд. биол. наук / И.П. Степаненко. -М., 2001. 21 с.

135. Сулейманов, С.М. Методы морфологических исследований (методическое пособие) / С.М. Сулейманов, П.А. Паршин, Ю.П. Жарова. Воронеж, 2000. — 64 с.

136. Сухомлинов, К. Многоликий дисбактериоз / К. Сухомлинов // Семейный доктор. -2003. -№7.-С. 7-9.

137. Тараканов, В.В. Микробиологические процессы в рубце высокопродуктивных коров и эффективность использования корма при применении биопрепарата стрептофагина / В.В. Тараканов // Сельхоз. биология. 1993. - № 6. - С. 94-105.

138. Тараканов, Б.В. Перспективы создания новых пробиотиков на основе реком-бинантных штаммов бактерий, экспрессирующих эукариотические гены / Б.В. Тараканов, Л.К. Эрнст. М., 2002. - 71 с.

139. Теппер, Е.З. Практикум по микробиологии: учеб. пособие / Е.З. Теппер, В.К. Шильникова, Г.И. Переверзева. М.: Дрофа, 2004. - 256 с.

140. Тимербаева, Р.Х. Профилактика и лечение дисбактериозов лактосодержащими бактерийными препаратами: автореф. дис. . канд. мед. наук / Р.Х. Тимербаева.-Уфа, 2007.- 10 с.

141. Тимошко, М.А. Микрофлора пищеварительного тракта молодняка сельскохозяйственных животных / М.А. Тимошко. Кишинев: Штинца, 1990. — 122 с.

142. Тимченко, Л.Д. Основы микроскопической техники для биолога: учеб. пособие / Л.Д. Тимченко, В.Н. Вакулин. Ставрополь: Изд-во СГУ, 2005. - 164 с.

143. Ткаченко, Е.И. Питание, микробиоценоз и интеллект человека / Е.И. Ткаченко, Ю.П. Успенский. СПб.: СпецЛит, 2006. - 590 с.

144. Трачук, Т.Ю. Этапы микробной колонизации организма новорожденных / Т.Ю. Трачук, О.Т. Шраер // Рос. педиатрический журнал. — 1990. № 2. — С. 37-39.

145. Тутов, И.К. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов: учебн. пособие / И.К. Тутов, И.К. Ситьков. Ставрополь, 1997. - 253 с.

146. Уиллард, М.Д. Лабораторная диагностика в клинике мелких домашних животных / М.Д. Уиллард, Г. Тведтен, Г.Г. Торнвальд. — М.: Аквариум, 2004. -432 с.

147. Фадеева, И.В. Разработка нового пробиотического препарата на основе лактобактерий: дис. канд. биол. наук / И.В. Фадеева — Пермь, 2004. — 155 с.

148. Федотова, Т.А. Роль дисбактериоза кишечника в формировании иммунной недостаточности у детей / Т.А. Федотова, А.А. Михайленко, С.Ф. Сергеева, А.В. Кузнецова // Иммунология. 2001. - № 3. - С. 41-44.

149. Федюк, И.Д. Справочник болезней собак и кошек / И.Д. Федюк — Ростов-на-Дону: Феникс, 2004. 230 с.

150. Феклисова, Л.В. Отраслевой стандарт и протокол ведения больных с дисбак-териозом кишечника / Л.В. Феклисова // Индивидуальные подходы к проблеме дисбактериоза: тез. докл. науч.-практ. семинара 5 июня 2003 г. — М., 2003. — С. 3-7.

151. Фрейдлин, И.С. Паракринные и аутокринные механизмы цитокиновой имму-норегуляции / И.С. Фрейдлин // Иммунология. 2001. - № 5. — С. 4-7.

152. Фролькис, А.В. Заболевания кишечника / А.В. Фролькис. СПб.: Фолиант, 2003.-230 с.

153. Хайруллов, Р.Г. Применение пробиотика «Спас» для профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней: автореф. дис. . канд. биол. наук / Р.Г. Хайруллов. Казань, 2007. - 23 с.

154. Храмцов, А.Г. Кормовые добавки нового поколения из вторичного молочного сырья для юга России / А.Г. Храмцов, Н.М. Панова, С.А. Рябцева и др. // Мат. междунар. науч.-практ. конф. «Биоресурсы, биотехнологии, инновации Юга

155. России» (Ставрополь-Пятигорск, 21-24 октября 2001 г.). Ставрополь: Изд-во СГУ, 2003. - Ч. 2. - С. 226-228.

156. Чахова, О.В. Микробиологические и иммунологические основы гнотобиоло-гии / О.В. Чахова. — М., 1982.-183 с.

157. Черномордик, А.Б. Справочник по применению антибиотиков и других хи-миотерапевтических препаратов / А.Б. Черномордик. — Киев: Издат. объед-е «Вища школа», 1977. 360 с.

158. Черешнев, В.А., Морова А.А., Рямзина И.Н. Биологические законы и жизнеспособность человека (метод многофункциональной восстановительной терапии) / В.А. Черешнев, А.А. Морова, И.Н. Рямзина. — Россия Чехия, 2000. -168 с.

159. Черешнев, В.А. Физиология иммунной системы и экология / В.А. Черешнев, Н.Н. Кеворков, Б.А. Бахметьев, С.В. Ширшев // Иммунология. — 2001. — № 3. -С. 12-16.

160. Червинец, Ю.В. Антагонистическая активность пробиотических штаммов для заквасок прямого внесения / Ю.В. Червинец // Мат-лы пятого съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (г. Москва, 2-4 декабря 2008 г.). -М.: ИАЦ, 2008. С. 353-357.

161. Чистохина, Л.П. Иммунобиологическая характеристика препарата «Микро-стим» на основе метаболитов лактобактерий: автореф. дис. . канд. мед. наук / Л.П. Чистохина. Пермь, 2004. — 23 с.

162. Шендеров, Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Микрофлора человека и животных и ее функции / Б.А. Шендеров. — М.: Гранть, 1998.-Т. 1.-288 с.

163. Akselrod, S.M. Power spectrum analysis of heart rate fluctuations: a quantitative probe of beat to beat cardiovascular control / S.M. Akselrod, D.N. Gordon, F.A. Ubel et al. Science, 1981. - 213 p.

164. Backhed, F. The gut microbiota as an environmental factor that regulates fat storage / F. Backhed, H. Ding, T. Wang et al. // Proc. Nat. Acad. Scienses.- 2004. Vol. 101.-№ 11.-P. 15718-15723.

165. Barrett, S.P. Control of the spead of multi-resistant Grampositive organisms / S.P. Barrett // Curr. Anacsth. Crit. Care. 1999. - Vol. 10. - № 1. - P. 27-32.

166. Benoni, J. Antibiotic administration and oral bacterial therapie in infants / J. Benoni // Chemotherapia. 1984. - Vol. 3. - № 5. - P. 291-294.

167. Beritzoglou, E. Modulation of Clostridium perfringens intestinal colonization in infants delivered by caesarean section / E. Beritzoglou, M.B. Romond, C. Romond // Infection. 1989. - № 17. - P. 232-236.

168. Bhan, M.K. Quantitation and properties of fecal and upper small intestinal aerobic microflora in infant and young children with persistent diarrhea / M.K. Bhan, P. Raj, V. Khoshoo // J. pediat. Gastroent. Nutr. 1989. - Vol. 9. - № 1. - P. 40-45.

169. Chung, T.S. In vitro studies on reutenn syntesis by Lactobacillus reuten / T.S. Chung, L. Axelsson // Microb. Ecol. Health. Dis. 1989. - Vol. 2. - P. 137-144.

170. Corzo, G. Bile salt hydrolase activity of three strains of Lactobacillus acidophilus / G. Corzo, S.E. Gilliland // J. Dairy. 1999. - № 82. - P. 472-480.

171. Cordts, P.R. Could gut-liver function derangements cause chronic venous insufficiency? / P.R. Cordts, M.V. Kaminski, S. Raju et al. // Vase. Surg. 2001. - Vol. 35. - № 2. - P. 107-114.

172. Dahya, R.S. Hydrogen peroxide formation by laetobaeilli and its effects on Staphylococcus aureus / R.S. Dahya, M.L. Speck // J. Dairy Sei. 1986. - Vol. 51 - № 6. -P. 1568-1562.

173. Dai, D. Protective nutrients and bacterial colonization in the immature human gut / D. Dai, W.A. Walker // Adv. Pediatr. 1999. - № 46. - P. 353-382.

174. Davis, C. P. Bacterid association in the gastrointestinal tract of beagle dogs / C. P. Davis, D. Cleven, E. Balish // Appl. Environ. Microbiol. 1977. - Vol. 34. - № 2. -P. 194-206.

175. Doeschel, M.A. Antimicrobial substances from lactic acid bacteria for use as food preservatives / M.A. Doeschel // Food Thechnol. 1986. - Vol. 43. - P. 164-167.

176. Drossman, D.A. The Functional gastrointestinal Disorders. Diagnosis, Pathophysiology ad treatment / D.A. Drossman // A Multinational Consensus. — Boston, New-York, Toronto, London, 1994. 370 p.

177. Edwards, C.A. Intestinal flora daring the months of life: new perspectives / C.A. Edwards, A.M. Parrett // Brit. J. Nutr. 2002. - Vol. 88. - № 3. - P. 11-18.

178. Ericson, K.L. Probiotic immunomodulation in health and disease / K.L. Ericson, N.E. Hubbard // Brit. J. Nutr. 2000. - Vol. 130. - № 2. - P. 403-409.

179. Goldstone, R.T. Geriatrics and Gerontology / R.T. Goldstone // Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice, 1989. 202 p.

180. Goldin, B.R. Survival of Lactobacillus species (strain GG) in human gastrointestinal tract / B.R. Goldin, S. Gorbach, M. Saxelin et al. // Dig. Dis. Sci. 1992. - Vol. 37. -P. 121-128.

181. Gorbach, S. Intestinal microflora / S. Gorbach // Gastroenterology. 1972. - Vol. 60. - № 6. - P. 1110-1129.

182. Guarner, F. The colon as an organ: habitat of bacterial flora / F. Guarner // Nutr. Hosp. -2002. Vol. 17. - № 2. - P. 7-10.

183. Haenel, H. Intestinal flora in health and disease / H. Haenel, J. Bending // Progr. Food a. Nutr. Sci. - 1975. - Vol. 1. - P. 1-86.

184. Hentges, D.Y. Intestinal microflora in Health and Disease / D.J. Hentges. N.Y., 1983.-156 p.

185. Kazakova, H. Effect of monoassociation with probiotic strain Bifidobacterium bifi-dum on enterocyte brush-border enzymes in gnotobiotic mice / H. Kazakova, Z.

186. Rchakova, J. Kolinska // British Journal of Nutrition. 2002. - Vol. 88. - № 3. - P. 113-115.

187. Kim, W.J. Bacteriocins of lactic acid bacteria: their potential as food biopreservative / WJ. Kim // Food Rev. Intern. 1993. - № 9. - P. 299-313.

188. Koenen, M.E. Modulation of the immune response by probiotics in chicken / M.E. Koenen, S.H.N. Jeurissen, W.J.A. Boersma // British Journal of Nutrition. 2002. -Vol. 88. -№ 3. - P. 120-121.

189. Lewis, J.D.N. Development of an ELISA to detect Lactobacillus casei Shirota in human stool samples / J.D.N. Lewis, M. Greig, D.C.A. Candy et al. // British Journal of Nutrition. 2002. - Vol. 88. - № 3. - P. 113-114.

190. Lomnytska, V.B. The characteristics of pneumococcal contamination of the respira-toiy tract in healthy and sick children / V.B. Lomnytska // Microbiol. Z. 1995. -Vol. 57.-№ l.-P 59-63.

191. Macfarlane, G.T. Human colonic microbiota: ecology, physiology and metabolic potential of bacteria / G.T. Macfarlane, S. Macfarlane // Scand. J. Gastroenterol. -1997.-Vol. 32.-P. 3-9.

192. Mackie, R.I. Developmental microbal ecology of the neonatal gastrointestinal tract / R.I. Mackie, A. Sghir, H.R. Gaskins //Am. J. Clin. Nutr. 1999. -№ 69. - P. 10351045.

193. McCracken, V. The gastrointestinal ecosystem: a precarious alliance among apithe-lium, immunity and microbiota / V. McCracken, R.G. Lorenz // Cellular Microbiology. 2001. -№ 3. - P. 1-11.

194. Moore, W. Anaerobic bacteria of the gastrointestinal flora and their occurrence in clinical infections / W. Moore, E. Cato, L. Holdeman // J. Infect. Dis. 1969. - Vol. 119. -№6. — P6-8.

195. Nocek, J.E. Direet-fed microbal supplementation on the performanee of dairy cattle during the transition period / J.E. Nocek, W.P. Kautz, J.A.Z. Leedle // J. Dairy Sei. -2003.-№86.-P. 331-335.

196. Nord, C.E. The normal flora of the gastrointestinal tract / C.E. Nord, L. Kager // Neth. J Med. 1984. - № 27. - P. 249-252.

197. Orrhage, K. Factors controlling the bacterial colonisation of the intestine in breastfed infants / K. On-hage, C.E. Nord // Acta Paediatr. 1999. - № 43. - P. 47-57.

198. Pacha, J. Development of intestinal transport function in mammals / J. Pacha // Physiological reviews. 2000. - Vol. 80. - № 4. - P. 1633-1667.

199. Perdigon, G. Effect of perorally administred lactobacilli on activation in mice / G. Perdigon // Infect. Immun. 1986. - Vol. 53. - P. 404-410.

200. Perdigon, G. Behaviour of natural and heated yougurt in the immune system and preventive on enteric infections / G. Perdigon, S. Alvarez, M. Medici et al. // Mil-chwissenshaft. 1991. - Vol. 46. - № 7. - P. 411-416.

201. Rawls, J.F. Gnotobiotic zebrafish reveal evolutionarily conserved responses to the gut microbiota / J.F. Rawls, B.S. Samuel, J.I. Gordon // PNAS. 2004. - Vol. 101. -№ 13.-P. 4596-4601.

202. Reiter, B. Theantibiotic activity of the lactoperoxidase-thiocynate-hydrogen peroxid system in the calf abomasum / B. Reiter, V.M. Marschall, S.M. Philips // Res. Vet. Sci.- 1980. -Vol. 28.-P. 116-122.

203. Salyers, A.A. Permentation of mucin and plant polysacharids by strains of Bacteroides from human colon / A.A. Salyers, J.R. Vercellotti, S.E. West // Appl. Environ. Microbiol. 1977. - Vol. 33. - № 2. - P. 319-322.

204. Salyers, A.A. Energy sources of maijor intestinal fermentative anaerobes / A.A. Salyers // Am. J. Clin. Nutr. 1979. - Vol. 32. - № 1. - P. 158-163.

205. Savage, D.C. Microbial ecology of the gastrointestinal tract / D.C. Savage // Ann. Rev. Microbiol. 1977. - № 31. - P. 107-133.

206. Schneeman, B.O. Gastrointestinal physiology and functions / B.O. Schneeman // British Journal of Nutrition. 2002. - № 88. - P. 159-163.

207. Smith, H. W. The development of the flora of the alimentary tract in young animals / H.W. Smith //J. Pathol. Bacterid. 1965. - Vol. 90. - P. 495-513.

208. Stark, P.L. The microbial ecology of the large bowel of breast-fed and formula- fed infants during the first year of life / P.L. Stark, A. Lee // J. Med. Microbial. 1982. -Vol. 15.-№2.-P. 189-203.

209. Stephen, A. The microbial contribution to human faecal mass / A. Stephen, G. Cummings // J. Med. Microbial. 1980. -№ 13. - P. 45-51.

210. Tannock, G.W. Normal microflora. An introduction to microbes inhabiting the human body / G.W. Tannock. London: Chapman and Hall, 1995. - 135 p.

211. Tannock, G.W. Probiotics. A Critical Review / G.W. Tannock. Norfolk: Horizon. Sci. Press, 1999.-210 p.

212. Tassovats, B. Acute bacterial enterocolitis in infants. Trial treatment with Bacillus bifidus / B. Tassovats // Ann. Pediat. 1964. - № 11. - P. 291-297.

213. Yildirim, Z. Characterisation and antimicrobial spectrum of bifidocin B, a bacterio-cin produced by Bifidobacterium bifidum NCFB 1454 / Z. Yildirim, M.G. Johnson // J. Food Protect. 1998. - № 61. - P. 47-51.

214. Zivkovic, R. Probiotics or microbes against microbesl / R. Zivkovic // Acta Med. Croatica. 1999. - Vol. 53. - № 1. - P. 23-28.

Информация о работе

Гандрабурова, Надежда Ивановна
кандидата биологических наук
Ставрополь, 2010
ВАК 03.02.03

Диссертация

Микробиоценоз кишечника у собак и его оптимизация с помощью нового биологически активного препарата "Эмбриоприм" - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы