Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Перекисное окисление липидов в патогенезе опухолевой болезни

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Перекисное окисление липидов в патогенезе опухолевой болезни"

го ол

lía правах рукописи

ФРАНЦПЯНЦ Елена Михайлошт

ПЕРЕКИСНОЕ ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ ОПУХОЛЕВОЙ БОЛЕЗНИ

03.00.04 - биологическая химия 14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат дпессртатш на соискание ученой степени доктора биологических наук

Ростов-на-Дону 1997

Работа выполнена в Ростовском научно-исследовательском онкологическом институте.

Научный консультант : члеп-корр. РАМН Сидоренко Ю.С.

Официальные оппоненты :

1. Гулпеип II.IJ., д.б.и., профессор, заведующая лабораторией (функциональной биохимии Института высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН.

2. ¡Мепд/керпикш! A.M., д.б.н., профессор кафедры физиологии Ростовского государственного педагогического университета.

3. Опснипнков В.Г., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой патологической физиологии Ростовского государственного медицинского университета.

4. Ведущая организация — НИИ онкологии им. проф. М.И. Петрова МЗ РФ, Санкт-Петербург

Зашита диссертации состоится "¿ß" иЮНЛ 1997 года и \р часов на заседании Специализированного совета Д. 063.52.08 Ростовского государственного университета (Ростоп-на-Дону, 344006, Большая Садовая, 105).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского государственного университета.

Автореферат разослан jytcuS. 1997 года.

Учении секретарь Диссертационного совета доктор Gmwioi нчсских паук Ц D.Il.lCnpoii

Актуальность проблемы. Гипотеза о том, что канцерогенное д с метине различных агентов сопряжено с образованием свободных радикалов, которые, действуя на важнейшие компоненты клетки, вызывают развшпе патологического процесса, была высказана сразу несколькими исследователями. Возникла, так называемая, свободнорадлкалыш теория канцерогенеза, получившая позже свое экспериментальное подтверждение.

Один авторы отстаивали химическую природу возникновения свободных радикалов : канцероген адсорбируется на клетке я вызывает процессы спарениости электронов (Пюльман А., Пюльман Б., 1957); другие предполагали физическую природу возникновения реактивных частиц (Хеддоу, 1947); третьи считали, что взаимодействие канцерогена с клеткой носит (физико-химически» характер и обусловливает образование комплекса с переносом заряда, в результате чего оба компонента переходят в свободнорадн-кальное состояние (Сен-Дьерди, 1971, Иенсен (1950) и Горди (1953), они же при этом полагали, что свободные радикалы действуют непосредственно на геном клетки и вызывают мутации, приводящие к мапигнизации.

В этом плане особого внимания заслуживают работы Я.М.Эмануэля (1965, 1974), который, основываясь на кинетических закономерностях опухолевого роста, выдвинул гипотезу о том, что свободные радикалы играют важную роль не только в первичном процессе перерождения клеток, т.е. при канцерогенезе, но и в дальнейшем при опухолевом росте. В дальнейшем эта проблема нашла свое отражение в многочисленных работах Бурлако-вой Е.Б., Алесенко A.B., Пальминои Н.П.

Свободнорадикальная теория канцерогенеза вызвала широкий интерес к изучению антиоксидантов как веществ, регулирующих активность радикалов в соответствии с интенсивностью этих реакций. Однако, изучение антиоксидантов проводили, в основном, п малппшзироианных клетках и в тканях опухолей. Были установлены закономерности изменений содержания антиоксидантов в тканях опухоли и в органах животных-опухоленосителей.

Е.А.Нейфахом (1963) на основании изучения периода индукции окисления ненасыщенных жирных кислот в присутствии гомогенатов раковых тканей была высказана мысль о "перекачивании" антиоксидантов из органов животных-опухоленосителей п растущую опухоль. Эта теория впоеледс:ини получила свое развитие в работах ряда других авторов (Иванов И.И., Тарусой Б.И., 1970; Козлов Ю.П., 1975 и др., ). Так была высказана интересная гипотеза, заключающаяся в том, что в ходе свободнораднкальиых реакции образуются депрессоры клеточного размножения, а индуцирование опухо-. лен как с помощью канцерогенных химических веществ, так и при воздействии облучения протекает со стадийными изменениями антпокислительпой активности липидов.

Несомненный интерес представляют и работы О.Варбурга, согласно которым первопричина рака - в нарушении тканевого дыхания. В клетке имеются две системы энергообеспечения: первая - окисление кислородом с

помощью определенных ферментов, локализованных п митохондриях, вторая - превращение глюкозы. Второй путь оволгацноппо более древний, а первый - энергетически более выгодный. В присутствии кислорода клетки многоклеточных организмов используют дня своего энергообеспечения, в основном, тканевое дыхание, только в отсутствие кислорода получение энергии идет за счет гликолиза. Исследуя большое количество злокачественных новообразований , О.Варбург пришел к выводу, что в опухоли основной путь энергообеспечения - гликолиз, даже когда в ее клетках достаточно кислорода. Он сделал вывод, что в результате длительного гликолиза происходит необратимая перестройка клеточных процессов, приводящая к нерегулируемому росту, т.е. к свойству, характеризующему опухолевую клетку (Белоусова А.К., 1965).

Таким образом, бесспорно доказано, что процессы пероксидацни и, особенно, системы антиокислителыюй защиты организма совершенно определенным образом изменяются при образовании и росте злокачественных опухолей, и представляется перспективным использование параметров этих факторов для определения направленности патологического процесса, в том числе и под влиянием различных противоопухолевых воздействий. Между тем, до сих пор нет цельного представления о характере перестройки процессов пероксидацни при злокачественной патологии, а явная стадийность изменений в системе перекисного окисления липидов (ПОЛ) - антиок-сиданты в динамике канцерогенеза создаст определенные трудности для эффективного применения антиокислителей в качестве противоопухолевых средств.

С нашей точки зрения, "перекисная " теория развития злокачественного процесса нуждается в некоторой детализации, а возможно, и в несколько иной трактовке.

Целью настоящего исследования явилось комплексное изучение свободно-радикальных процессов и особенностей функционирования анти-окнслитсльпых систем организма в условиях злокачественного роста и определение их роли в патогенезе опухолевой болезни.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить состояние некоторых показателей активности процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в динамике химического канцерогенеза.

2. Изучить влияние экспериментальной противоопухолевой терапии препаратом антиоксидаптного действия на рост перевивных опухолей и активность свободно-радикальных процессов.

3. Исследовать показатели антиокпелительных систем крови в динамике физиологической беременности, как модели естественного пролнфера-тивного процесса.

4. Обосновать возможность разработки способов биохимической ди-

агностики рецидивов и метастазов рака различной локализации.

5. Разработать способ дифференциальной оценки патологических состояний печени при злокачественных новообразованиях.

6. Исследовать возможности использования показателен активности шппоксидашиых снегом крови для оценки эффективности специфического лечения онкологических больных.

7. Обоснован необходимость использования препаратов антнокси-дантного действия в онкологической клинике.

Положения, выносимые на защиту:

1. Необходимым условием развития и роста злокачественной опухоли является перестройка свободно-радикальных процессов в организме, сопровождающаяся подавлением активности ферментов антнрадикальной защиты и снижением содержания неферментативных антиокендантов.

2. Падение уровня содержания витаминов А и Е, сопровождающееся выходом в гуморальную среду железозпвисимых, органотропных, обладающих неферментатншюй СОД-активноетыо РФ-белков, является звеном "метаболической иммунодепрессии", обеспечивающей программу функционирования иммунной системы, направленную на охрану "чужого в своем".

3. Обратная перестройка свободно-радикальных процессов, направленная на нормализацию метаболизма, с элиминацией из сыворотки крови РФ-белков, является универсальным механизмом реализации клинического эффекта при противоопухолевых воздействиях.

4. Перестройка свободно-радикальных процессов при опухолевой болезни влечет за собой перестройку в других звеньях метаболизма, изучение которых открывает новый подход к созданию способов ранней диагностики рака различной локализации до его клинических проявлений.

Научная новизна и практическая значимость работы. Результатом настоящей работы явилась разработка новой гипотезы участия антиокендантов в формировании опухолевой болезни.

Впервые на модели химического канцерогенеза изучен комплекс показателей активности свободно-радикальных процессов в крови и немалиг-низирующихся тканях от момента контакта организма животного с канцерогеном до момента выхода опухоли, т.е. проанализирована роль "биохимической среды" в возникновении опухолевого процесса. Установлено, что, начиная с первой недели химического канцерогенеза, происходит постепенная перестройка свободно-радикальных процессов : подавление естественного каскада антиокислителей с выходом в гуморальную среду белков - "ловушек" супероксиданионрадикалов, названных РФ-белками.

Впервые сравнительный анализ динамики химического канцерогенеза, как модели злокачественной пролиферации, и беременности, как естественного пролиферативного процесса, позволил выявить необходимое звено в цепи реакций , определяющих развитие "метаболической толерантности" иммунной системы, обеспечивающей "охрану чужого в своем".

Впервые у курабельных больных II и Ш стадий, имеющих различные локализации злокачественных опухолей, в сыворотке и форменных элементах крови были обнаружены пики РФ-белков па фойе сниженного уровня показателей естественных антиокислительных систем, т.е. показано наличие той же "биохимической среды", что и при химическом канцерогенезе у экспериментальных животных. Впервые определена характеристика найденных нами РФ-белков как желсзозависимых, органоспеапфичсских, антптелопо-добных, обладающих нсферментативпои СОД - активностью.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты наших исследований дополняют и конкретизируют существующие представления о характере изменений свободно-радикальных процессов и участия их в инициальном характере цепи реакций, приводящих к развитию опухолевой болезни. Экспериментальная и клиническая терапия препаратами , обладающими аитнокендаитными свойствами, подтвердила патогенетическое значение найденных перестроек в возникновении злокачественного роста. Выдвинутая нами гипотеза защищена патентом Российской федерации как "Способ исследования возникновения злокачественного процесса в организме" (N2021612).

На основании гипотезы предложен для онкологической клиники "Способ диагностики рецидивов и метастазов рака" (N 93002347/14), позволяющий за 3-36 месяцев не только предсказать появление продолженного роста злокачественной опухоли, но н показать в каком органе это произойдет.

Доказательством основных положении представленного патогенеза явилась разработка способа дифференциальной диагностики патологического процесса в печени, основанного на экспрессии под действием сыворотки крови больных маркерного эмбрионального белка ("Способ диагностики метастазов в печени" N4208833/14), При этом было установлено, что индуцирующий фактор, так же как л РФ-белки, принадлежит к суперсемейству патологических иммуноглобулинов.

Показано, что соотношение содержания как неферментативных, так и ферментативных компонентов антнокислительной защиты организма может быть использовано для создания способов вспомогательной лабораторной диагностики злокачественных поражений органов в начальной стадии процесса ("Способ прогнозирования заболеваний раком вульвы" N 5063097 (043511)/14), а также критериев эффективности проведенного противоопухолевого лечения ("Способ определения эффективности противоопухолевой терапии" N 2021620).

Использование патогенетически значимых параметров перестройки свободно-радикальных процессов, выявленных в нашей работе, открывает новый .методологический подход к созданию не только способов диагностики злокачественного процесса в организме, обнаруживаемого еще до манифестации его клинических проявлений, но и для оценки эффективности сие-

пифического лечения, выявления механизмов действия различных противоопухолевых мероприятий и, наконец, открывает перспективу для патогенетически обоснованных подходов к созданию новых путей воздействия на опухолевую болезнь.

Апробации работы. Основные положения диссертации были представлены на научной конференции "Механизмы интеграции биологических систем" (Ростов-на-Дону, 1988), Всероссийском съезде анестезиологов и реаниматологов (Москва, 1988), Всесоюзной конференции "Биоантноксидант" (1989), Всесоюзной конференции по интенсивным методам лечения (Калинин, 1989), Всесоюзном симпозиуме "Биохимия опухолевой клетки" (Минск, 1990), Всесоюзном симпозиуме "Метастазирование злокачественных опухолеп"(Киев, 1991), Международном симпозиуме "Современные тенденции в вирусологии и иммунологии опухолен"(Москва, 1994), Всероссийском симпозиуме "Скрининг и новые подходы к лечению начального гинекологического рака" (Новгород, 1994), 2-м дальневосточном международном симпозиуме "Multimodalyty Treatment of Сапсег"(Владивосток, 1994), IV Всероссийском съезде онкологов (Ростов-на-Дону, 1995), 5-м международном конгрессе "Hormones and Cancer"(Quebek, 1995), I съезде онкологов СНГ (Москва, 1996), 2-ом биохимическом съезде(Москва, 1997).

Публикации. Результаты исследований, рассмотренных в диссертации, изложены в 1 монографии, 24 статьях в научных изданиях и 18 тезисах докладов. Кроме того по теме диссертационной работы имеется 10 авторских свидетельств и патентов Российской Федерации.

Структура работы. Диссертация изложена на 260стр. машинописного текста, содержит 27 таблиц, 52 рисунка и состоит из введения, обзора литературы, 10 глав собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. В тексте содержатся 179 ссылок на отечественные и 191 - на зарубежные источники.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Экспериментальная часть исследования была выполнена в осенне-зимний период на 715 самцах белых беспородных крыс и 420 самцах крыс линии Вистар массой 150-180 г. Иидукция опухолей воспроизводилась путем введения канцерогена - 3, 4-бензпирена, либо введения суспензии клеток саркомы С-45 или аспитной опухоли Эрлиха.

Материалами исследования были сыворотка и лнзаты крови, гомоге-наты печени и легких, клетки опухоли, полученные от экспериментальных животных.

Экспериментальную терапию препаратом антиоксидантного действия П-3 начинали проводить при объеме опухоли (С-45) около 0, 5 см (500 мг). Препарат вводили per os в виде водной суспензии в дозах и режиме, которые

по полученным памп ранее результатам вызывали регрессию опухоли в 3050 % случаев, а именно: ежедневное в течение двух дней кормление П-3 в дозе 675 мг/кг, затем двухдневный перерыв. Всего проводилось три таких цикла. Животных забивали на 10-11 сутки после последнего введения препарата. К этому сроку по нашим предварительным данным отчетливо проявлялось влияние П-3 на опухолевый процесс. Показателями эффекта противоопухолевой терапии служили процент торможения роста и вес опухоли.

Обследуемая группа больных состояла из 614 больных злокачественными новообразованиями различной локализации, 168 больных с фоновыми заболеваниями различной этиологии (т.н. "группы риска"), 49 больных с доброкачественными опухолями различной локализации, 37 больных с соматическими заболеваниями неопухолеиой природы, 40 женщин в различные сроки беременности и 85 здоровых доноров Ростовской областной станции переливания крови.

Объектами исследования служили: плазма, эритроциты, лимфоциты и непфофилы периферической крови, а также аспираты, полученные при ва-куумэкстракшш полости матки после так называемых "миниабортов".

Применяемые биохимические методы: - содержание ТБК-активных продуктов (Iliroshi Ohkavva, 1979) и конъюгированных соединений (Костюк В.А. и др., 1984); - интенсивность образования перекисей ненасыщенных жирных кислот в оболочках эритроцитов (Беписович В.И., Идельсон Л.И., 1973); - уровень сульфгидрильных групп (общих, белковых, небелковых) по Фаломееву В.Ф., 1981; - содержание витаминов А и Е (Черняускене Р.Ч. и др., 1984); - активность супероксиддисмутазы (Fried R., 1975) и ее изофер-ментов (Beauchamp С., Fridovich I., 1971); - суммарная пероксидазная активность (Покровский A.A., 1969 в модификации Внукова В.В., 1979); - активность глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы (Hosoda, Nakamura, 1970; Гаврилова А.Д., Хмара М.Ф., 1986); - активность глутатионтрансфера-зы (Псптюк A.A. и др., 1987); - активность гамма-глугамилтранспептидазы (по унифицированной методике с использованием стандартных наборов Lacheina); - активность каталазы (Королкж М.А. и др., 1988); - гемоглобино-литическая активность (Диигл Дж., 1980); - определение белка по Лоури; ингибиторный анализ с помощью азида, цианида, диэтилдитнокарбамата (VVerfs E.D., Gold M.N., 1986), аити-Р-реагента (Кульберг А.Я., и соавт., 1988), специфическая окраска па железо с использованием желтой и крас-нон кровяной соли (Пирс Э., 1956).

Статистический анализ. При обработке результатов вычисляли значение средней величины и стандартную ошибку показателя средней. Достоверность разницы между значениями определяли по методу Стыолента и Пилкоксона-Мапна-Уитни.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ II ОБСУЖДЕНИЕ.

На модели химического канцерогенеза от момента контакта канцерогена - 3, 4-бен'Зпиренл с организмом животного до момента "выхода" опухоли мы проследили изменение активности процессов перекнсиого окисления липндов (ПОЛ) н крови и тканях органов, в которых в дальнейшем опухоль не возникала. Т.е. мы проанализировали, какая" биохимическая среда" способствовала возникновению опухолевого процесса.

Было установлено, что начальные этапы канцерогенеза (1-2 недели) сопровождаются резким снижением содержания витаминов Е и А в мембранах эритроцитов и тканях немалипшзнрованных органов -печени и легких (рис. 1,2). В этой связи отмечено падение переюгсноП резистентности эрит-роцнтарных мембран, определяемое по накоплению МДА под действием заданных концентраций перекиси водорода (рис.4). В указанные сроки найдено экстремальное возрастание с последующим падением активности глу-татионзависимых ферментов, прогрессивное падение активности каталазы в плазме и эритроцитах крови экспериментальных животных. Изменения активности этих ферментов в печени и легких в зги сроки исследования не обнаружено (рис.5,6). При этом, начиная с 1 недели химического канцерогенеза, резко возрастала суммарная пероксидазная активность сыворотки крови (СНА), характеризующая стрессорное состояние организма, которая сохраняла постоянную тенденцию к повышению во все последующие сроки исследования.

В I - 2 недели химического канцерогенеза наряду с резкими колебаниями в системе антиокислительной зашиты крови экспериментальных животных не выявлено каких либо отклонений в содержании продуктов ПОЛ (рис.3,4) - диеновых соединений и МДА, а также уровня сульфгидрильных групп, определяющих структурноконформационные свойства клеточных мембран (Торчинский Ю.М., 1977; Mitchell, Russo, 1987). На 3-5 недели химического канцерогенеза отмечено дальнейшее снижение уровня витаминов А к Е в крови, печени и легких крыс (рис.1, 2, 4), что сопровождалось прогрессивным падением перекисной резистентности мембран эритроцитов, как модели общебиологнческих мембран (Makoto et al., 1985). При этом реакция со стороны глутатионзависимых ферментов в печени и легких была аналогична найденной ранее (1-2 неделя) в эритроцитах, т.е. экстремальное возрастание с последующим падением (рис.5,6). Начиная с этого срока наблюдалось снижение в указанных органах и активности каталазы. Т.е. изменения в антиокислительных системах крови и немалипшзнрованных органах были идентичны, но в печени и легких они отмечались в более поздние сроки исследования. Наряду с этим, на 3-5 недели химического канцерогенеза отмечено накопление первичных и вторичных продуктов переокисления -диеновых соединений п МДА в оболочках эритроцитов (рис.4), что может свидетельствовать о начинающихся перестройках в биомембранах. Об этом свидетельствует и найденное в эти сроки исследования увеличение уровня общих и белковых сульфгидрильных групп (рие.З).

мг/100 мл

1 3 5 1 9 1214 17 21 23 Имели ка|щг|)0гснс1п

— Печень

— Лггкне

1 5 12 17 22-2.1 Недели канцерогене™

Рис.1. Содержание витамина Е в крови и органах крыс в динамике химического канцерогенеза.

Интактные крысы: плазма - 18,0 мг/100 мл; эритроциты -35,4 мг/100 мл; печень - 6,3 мг/гтк.; легкие - 3,5 мг/г тк.

Примечание. Все результаты отличаются от соответствующих показателен у ннтактных животных при р<0,05.

О.05

13 5 19 12 14 17 1!

Недели канцерогене!»

15 12 17 22-23 Педели кэнперо! снега

Рис.2. Содержание витамина Л в крови и органах крыс в динамике химического канцерогенеза.

Интактные крысы: плазма - 0,22 ед./мл; эритроциты - 0,4 ед./мл; печень - 8,7 ед./г тк.; легкие - 6,5 ед./г тк.

Примечание. Все результаты отличаются от соответствующих показателей у интактных животных при р<0,05."

мкм'ХШ/ млсуспсшин

^ , Суи».-.|»ги;\рилкя1.1е гр> пш.!

¿¿ТТсМкокме

ИЦубслкуиы? '*ГЦ \\ "Г » . у Ч\

3 5 7 5 1! К П 19 Нежели канцерогенна

Рие.З. Содержание судьфгидрнльных групп п суспензии эритроцитов в динамике химического канцерогенеза.

Интактные крысы: общие - 26,1 мкмоль/мл суспензии; небелковые - 4,6 мкмоль/мл суспензии; белковые 21,5 мкмоль/мл суспензии.

Примечание. * - результаты отличаются от соответствующих показателей у интактных животных при р<0,05.

Рис.4. Показатели процессов ПОЛ мембран эритроцитов крыс в динамике химического канцерогенеза.

Интактные крысы: диеновые конъюгачи - 0,8 ед./мл; мамоновыи диальдегид - 6,5 имоль/мд; перекпеная резистентность -75,9 нмоль МДА/мл.

Примечание. * - результаты отличаются от соответствующих показате леи у интактных животных при р<0,05

Все дальнейшие сроки наблюдения, вплоть до 17 недели химического канцерогенеза, характеризовались постепенным подавлением активности ферментов антиоксидантнои защиты и продолжающимся снижением содержания тиаминов Е и Л в крови и немалигнизированпых органах экспериментальных животных (рис. 1,2). Это сопровождалось постепенным позрас-

Недсли канцерогенеза

Рис.5. Активность глутатинон-Б-трансферазы крови, печени и легких в динамике химического канцерогенеза.

Интактпые крысы: эритроциты - 0,3 (мкмоль/мл/мин); печень - 7,3 (ммоль/г/мии); легкие 1,4 (ммоль/г/мин)

Примечание. * - результаты отличаются от соответствующих показате лей у интактных животных при р<0,05.

танием уровня продуктов ПОЛ в биомембранах и падением их перекисиой резистентности. Изменения в содержании сульфгидрильных групп, а именно возрастание их уровня до 17 недели химического канцерогенеза и резкое падение к моменту выхода опухоли (рис.3), согласуются с данными литературы (Квакнна Е.Б., 1972; НаппцЬп 3.Б., 1971) и позволяют в эксперименте прогнозировать срок выхода индуцированных сарком.

Рис.6. Активность глутатинонпероксидазы крови, печени и легких в дпиамике химического канцерогенеза.

Интактные крысы: эритроциты - 36,0 (мкмоль/мл/мнм); печень -4,6 (ммоль/г/мин); легкие - 3,4(ммоль/г/мин).

Примечание. * - результаты отличаются от соответствующих показате лей у интактпых животных при р<0,05.

В предопухолевый период канцерогенеза (17-22 неделя) содержание витаминов Е и А было сниженным по сравнению с ннтактными животными в плазме в 4 и 2, 2 раза, в эритроцитах - в 7, 7 и 4 раза соответственно. Отмечено также резкое снижение этих витаминов в печени - в 20 и 14 раз и легких - в 7 и 13 раз соответственно (рис. 1,2). В этот же срок исследования найдено глубокое подавление активности всех антиокислительиых ферментов в изученных тканях и органах (рис. 5,6). При этом содержание МДА и диеновых соединений в исследуемых образцах в среднем лить в 2 раза превышало уровень их у интактных крыс.

Очевидно, что собственно "выход" опухоли происходит на фоне подавления обеих антиокислительиых систем организма и выраженных струк-

турно-функциональных изменений в клеточных мембранах.

Однако, на наш взгляд особое значение для развития злокачественного процесса имеют начальные этапы канцерогенеза. Анализируя их, следует выделить первичность достоверного падения уровня витаминов Е и А в мембранах клеток различных тканей организма и дискоордннацшо в физиологическом равновесии антиокислители - продукты ПОЛ, не затрагивающую перпопачалыю их конформационные и функциональные свойства. Установленный нами факт "потери" компонентов системы антиокпелтельной зашиты биологических мембран на ранних этапах химического канцерогенеза является новым звеном в цегш реакций, приводящих к возникновению злокачественной опухоли. До сих пор считалось, что уменьшение содержания витаминов Е и А в организме происходит за счет "перекачивания" их в растущую опухоль для быстрого деления ее клеток и увеличения массы (Ненфах Б.А. и др., 1978). Хотя позже рядом авторов было отмечено, что несмотря на заманчивость и простоту такого предположения нельзя ограничивать существующую тесную связь и взаимное влияние опухоли и организма-хозяина примитивной формой витаминного паразптпроваиия, не учитывая роль печени как эффективного конкурента опухоли в отношении использования витаминов (Суколипский В.Н. и др., 1988; В_]теЬое А. е1 а!., 1987). С этих позиций интересен найденный нами факг наибольшего падения уровня витаминов Е и А именно в печени животных уже в 1 неделю после индукции химического канцерогенеза, что, скорее всего, свидетельствует о глубоком нарушении процесса депонирования этих веществ в организме, в котором еще нет опухоли.

Известно также, что витамины Е и А являются веществами, структурно связанными с биомембранами и поддерживающими ее конформацию (Владимиров Ю.В., Арчаков А.И., 1972; КоЬауаэЫ с1 а1„ 1985; №к|\ 1987). С другой стороны, описаны их свойства как противоопухолевых агентов (Морозкина Т.С. и др., 1987, 199!; Горожанская Э.Г. и др., 1990; МсгепЬсгд е( а1., 1987; Ра1огга, Кппяку, 1991 и др.). Показано и участие этих витаминов в стимулировании противоопухолевого иммунитета (Плешгшй К.Д. и др., 1988; ВспсЛсИ е{ а1., 1983). Потеря, таким образом, этих важных для организма веществ может, с одной стороны, привести к нарушению работы иммунной системы, которал перестает распознавать трансформированные клетки, с другой - модифицировать мембраны и изменять чувствительность их рецепторов к действию медиаторов центральной регуляции.

Реакцию со стороны антиокислительных ферментов, наблюдаемую в ранние сроки химического канцерогенеза сначала в кропи, а затем с отста-

вампом па один срок его течения и в органах, ответственных за процессы детокепканпи в организме - печени и легких, мы склонны рассматривать как проявление стреееорнон реакции на канцерогенную интоксикацию. Тем более, что eme одной функцией глутагионзаписнмых ашиоксидантных ферментов является их участие в системе дешкеикаини ксенобиотиков и, в ча-стносш, бен ширена (Пешток A.A. и др., 1987; Beckeli, ¡¡ayes, 1987; Recio, lisie, 1987).

В процессе исследования мы обратили внимание на некоторое, на наш взгляд, несоответствие между уровнем акгнвности обеих антпокнелн-тельных систем и степенью накопления продуктов ПОЛ в клеточных мембранах в ранние сроки химического канцерогенеза. В этой связи возникло предположение о существовании в организме животных с индуцированным злокачественным процессом альтернативного пути антиокислительной зашиты, позволяющего, несмотря на выраженное угнетение физиологических ашиоксидантных систем, поддерживать клеточный гомеостаз и функционирование организма в целом.

В плане развития высказанного предположения в динамике химического канцерогенеза нами было проведено элек-грофоретическое исследование в крови, гомогенатах печени и легких изоферментного спектра СОЛ, как центрального звена ферментативной антнокислительной защиты, находящегося а жидкой части клетки.

До сих пор считалось, что в эритроцитах млекопитающих и человека содержится лить одна изоформа СОД - медь-цинк зависимый изофермент (Beaucliamp, Fridovich, 1971), определяемый в системе хлороформ-этанол. Изменив смесь для выявления активности СОД на среду с содержанием детергента тритона Х-100, мы обнаружили присутствие в эритроцитах двух фракций инактивации супероксиданион радикала. Путем иншбиториого анализа с помошыо азида, цианида, дпэтилдитиокарбамата натрия и анти-Р-реагента, представляющего собой aiiniсыворотку к эпимембранным участкам клеточных рецепторов, фракции были идентифицированы.

Установлено, что один пик дисмутнрующей активности принадлежал медь-шнж-содержащей изоформе СОД, а другой - ннгибировался только с помошыо анти-Р-реагента. Этот пик мы расценили, как особую изоформу Р-белков - продуктов катаболического распада клеточных рецепторов (Кульберг А.Я., 1986). Кинетический анализ найденной фракции показал, что она носит "сорбционный" характер дисмутацин (рис.7).

Для доказательства связи электрофоретического пика СОД-активностн найденной изоформы с клеточными рецепторами, мы с помо-

щыо диск-электрофореза изучали лизаты и супсрнатанг культуральной жид-косги натшшых и подвергнутых термическому воздействию клеток крови с параллельным проведением указанного выше ингибнторного анализа. Лизаты эршроцитов исследовали, применяя традиционный реагент и смесь, содержащую тритон Х-100. Найдено, что этанольные экстракты имели одну полосу СОД-активности, которая соответствовала медь-ципк-содсржащей пзоформе фермента. Лизаты, полученные с помощью детергента, имели два пика дисмутирующей активности - медь-ципк-содержащую СОД и обнаруженную нами изоформу Р-белков, при этом в супернатапте культуральной жидкости нативных эритроцитов выявлялась одна полоса ферментативной СОД (рнс.8). После термического воздействия в обоих видах лизатов эритроцитов наблюдалось по одной полосе дисмутазной активности, тогда как в кулыуральпон жидкости их стало две. По форетнческнм характеристикам дополнительная фракция, появившаяся в культуральной жидкости клеток, подвергнутых термическому воздействию, совпадала с фракцией "тритоиового" лизата иативных эритроцитов, исчезнувшей после него. С помощью ингибнторного анализа было показано, что после термического воздействия в культуральную среду переходит фракция изоформы Р-белков.

V

Рис.7. Злекгрофоретический спектр СОД-акгивноети "тритоновых" лизатов крови крыс в динамике химического канцерогенеза: Ф.1 - ннтактные животные; Ф.2 -5-я педеля химического канцерогенеза; Ф.З - 22-я неделя химического канцерогенеза

Ф.1

л V

Ф.2

Ф.5

Рис.8. Фореграммы эритроцитариых лизатов и супернатанта среды инкубации эритроцитов: Ф.1 - хлороформ-эгаиольиый лизат эритроцитов; Ф.2 - "тритоновый" лп-зат эритроцитов; Ф.З - супернатант интактных эритроцитов; Ф.4 - супернатант эритроцитов, подвергнутых термическому воздействию; Ф.5 - совмещение форе-грамм супернатанта эритроцитов, подвергнутых термическому воздействию, и хлороформ-этанольного лизата эритроцитов.

Итак, стало очевидно сбрасывание эпимембранных клеточных образований в культуральную среду после температурного воздействия. Полученный нами факт согласуется с данными литературы о высокой лабильности рецепторного аппарата клетки, способности "сбрасывать" эппмембранные участки клеточных рецепторов в ответ на патологическое воздействие (Кульберг А.Я., 1986). Таким образом было установлено, что в эритроцитах интактных животных, наряду с медь-цннк-содержащим ферментом СОД, присутствует особая изоформа Р - белков, способная днсмутировать супер-окспданион радикал по "сорбционному" типу, т.е. но типу, присущему более древним формам жизни.

Ф.1 Ф.2 Ф.З Ф.4

белков сыворотки крови крыс в динамике химического канцерогенеза: Ф.1 - интактные крысы; Ф.2 - 1-я неделя химического канцерогенеза; Ф.З - 14-я неделя химического канцерогенеза; Ф.4 - 22-я неделя химического канцерогенеза

При элекзрофоретическом исследования сыворотки крови интактиых животных нам не удалось выявить каких либо пиков СОД - активности (рис.9). Однако начиная с первой недели химического канцерогенеза мы обнаружили фракцию Р-белков в сыворотке крови животных, которая выявлялась во все последующие сроки исследования вплоть до "выхода" опухоли. Окраска голевых столбиков специфическими реагентами позволила установить в зоне их локализации большое содержание двухвалентного железа, что позволило нам назвать обнаруженную фракцию дисмутирующей активности РФ-белками, в отличие от Р-белков, описанных А.Я. Кульбергом . Мы считаем, что обнаруженные нами РФ-белки сбрасываются в сыворотку крови сначала с эритроцитов, а позже с мембран клеток и других органов и тканей. Проведенный кинетический анализ также показал "псевдодисмутазный" характер описываемой фракции сыворотки крови, которая выступает в качестве "ловушки" анион-радикала, т.е. в целом, РФ-белкн, найденные в сыворотке крови, были идентичны изоформе белка, обнаруженного при шеддниге эритроцитов и клеток опухоли. Указанные белки определялись в сыворотке крови экспериментальных животных вплоть до "выхода" опухоли на 21-22 неделе.

В динамике химического канцерогенеза наблюдались характерные сдвиги в электрофоретическом спектре гемолизатов и гомогенатов печени и легких (рис.7, 10, 11). В лизатах эритроцитов, начиная с 5-й недели канцерогенеза, отмечалось увеличение пика СОД-активности РФ-белкоп и резкое уменьшение пика СОД-активности медь-цинк-зависимого фермента. Аналогичные качественные изменения отмечались в печени и легких начиная с 9-й недели химического канцерогенеза. Проведенный кинетический аначнз подтвердил "псевдодисмутазный " характер пиков активности РФ-белков в указанных органах. В этот же срок происходила "замена" инактивации су-пероксиданион радикалов в нейтрофилах и лимфоцитах крови крыс. Пай-

лепная перегруппировка дисмутируюшен активности сохранялась по псе последующие сроки, вплоть до "лыхода" опухоли. Ф.1 Ф.2

Рис. 10. Электрофоретическии спектр СОД-цк пшностн печени крыс в динамике химического канцерогенеза: Ф. 1 - ни-такгные животные; Ф.2 - 9-я неделя химического канцерогенеза; Ф 1 - 22-я неделя химического канцерогенеза

Ф.1

Ф.2

Ф.?.

У

Рис. 11. Электрофоретическии спектр СОД-акти вноети легких крыс в динамике химического канцерогенеза: Ф.1 - нн-тактные животные; Ф.2 - 9-я неделя канцерогенеза; Ф.З - 22-я нелсля химического канцерогенеза

Изучение РФ-белков позволило нам сравнить их с железопорфирино-выми пигментами, филогенетически наиболее древними соединениями, которые предшествовали появлению ферментативного способа утилизации активных форм кислорода (Коржуев П.Л., 1949).

Мы провели идентификацию РФ-бед нов с помощью ионнообменнон хроматографии и установили их принадлежность к суперсемеиству натоло-

гнческнх иммуноглобулинов. К этому же семейству относятся и обнаруженные А.Я. Кульбергом Р-белки.

Итак, опухоль еще не появилась, а "биохимическая среда" для ее развития уже подготовлена, а именно: подавлен естественный каскад антиокислителей, и в организме мощно работает "ловушка" свободнорадикаль-ных форм кислорода, подменившая истинную ферментативную активность. Такая форма утилизации метаболитов кислорода характерна для древних эволюционных форм жизни. Следовательно, с нашей точки зрения, в процессе канцерогенеза организм перестраивается на эволюционно более древний путь метаболизма: он весь "молодеет до древности" и на этом фоне происходит "выход" злокачественной опухоли.

Для проверки предположения о снижении активности обеих апти-окислптсльиых систем организма , как патогенетического фактора развития опухолевой болезни, совершенно логичной представилась попытка воздействия па звенья перестроенной "биохимической среды" антиокендантами с целью предотвращения развития опухоли или замедления се роста.

Среди изученных ашиокендамгов особое место занимают соединения селена, активирующие пероксидазные реакции и обладающие, согласно большому фактическому материалу, антибластомным действием (Гусейнова P.A. и др., 1986; Бабенко Г.Н. и др., 1986; Hemgesberg, 1987; Potzsch, Schracuw, 1987 и др.). Мы использовали селенорганическое соединение П-3, обладающее выраженным антиоксидантным действием примерно на два порядка большим, нежели витамин Е (Поляков В.М. и др., 1984).

После экспериментальной терапии у 60% животных была отмечена частичная или полная регрессия перевивной опухоли С-45. Полученная достоверная разница в уровнях активности обеих антиокнелительных систем крови крыс, оставшихся резистентными к введению противоопухолевого препарата, и животных с выраженным противоопухолевым действием ог применения П-3 позволило заключить, что опухолевый рост и неэффективная противоопухолевая терапия снижают активность антиокнелительных ферментов, а также содержание витаминов Е и А в мембранах форменных элементов крови, и это является патогенетическим моментов развития опухолевой болезни. Анализ проведенных исследований показал, что у животных с развивающейся С-45 наблюдается выраженная активация процессов ПОЛ, проявляющаяся в накоплении продуктов переокисления в мембранах эритроцитов, снижении активности ферментативной и иеферменташвной антиокнелительных систем в организме и нарушении структурной организации клеточных мембран. При эффективной терапии антиокендантами про-

тнвоопухолевого действия подобных изменений в системе ПОЛ, а следовательно и структурно-функциональной организации мембран клеток организма, огмечено не было.

При электрофоретическом изучении СОД-акгивностп гемолизатов и сыворотки крови в динамике экспериментальной терапии результаты согласовались, в целом, с полученными при химическом канцерогенезе. Так, через 7 дней после перевивки С-45 в сыворотке крови животных была зарегистрирована СОД-активность РФ-белков, подтвержденная с помощью инги-бпторного анализа, которая сохранялась вплоть до гибели крыс. Такие же пики СОД-активности выявлялись и в сыворотке крови животных, оставшихся резистентными к противоопухолевой терапии, в то время как у крыс с выраженным терапевтическим эффектом от применения П-3 РФ-белки в сыворотке крови не обнаруживались.

В этот же срок исследования в эритроцитах крыс с С-45 и животных , оставшихся резистентными к введению 11-3, отмечено преобладание продуктов катаболического распада клеточных рецепторов над истинным медь-цннк-завиеимым ферментом. Подобная картина наблюдалась начиная с 5 недели химического канцерогенеза. У животных с эффектом от противоопухолевой терапии аналогичных изменений зарегистрировано не было.

Таким образом, изучение терапевтического эффекта от применения препарата противоопухолевого действия и состояния свободно-радикальных процессов подтверждают определяющую роль "биохимической среды" с обязательным выходом в гуморальную среду продуктов катаболического распада клеточных рецепторов, обладающих ложной СОД-активиостыо, для развития опухолевого процесса и патогенетическое значение мембранных перестроек при злокачественном росте.

Выдвинутая нами гипотеза нашла свое применение как "Способ исследования возникновения злокачественного процесса в организме" (патент N 2021612//Б. и.И 19, 1994).

Полученные в эксперименте результаты позволили нам выработать ряд информативных тестов, адекватно отражающих течение опухолевой болезни и эффективность лечебных мероприятий, для апробации в онкологической клинике.

Было найдено, что вне зависимости от локализации и гистоструктуры злокачественной опухоли в крови больных имели место определенные изменения в работе антиоксидантных систем, аналогичные обнаруженным нами в эксперименте.

Так, до начала лечения у больных имелись выраженные изменения в

работе ферментативной антиокислительной системы, проявляющиеся в изменении активности некоторых ферментов и их соотношения , характеризующего работ)- физиологического антнокислитсльного каскада. Найдено, что активность СОД в л i патах крови была на 34,5% ниже, чем у здоровых доноров, тогда как в лимфоцитах больных активность ферментов превышала показатели у здоровых людей в 2,1 раза. В нейтрофнлах крови больных активность СОД не отличалась от показателен у здоровых лиц. Активность катал азы в плазме и эритроцитах больных достоверно не отличалась от доноров, тогда как в лимфоцитах и нейтрофнлах периферической крови она была выше в 2,2 раза и на 61% соответственно. Суммарная пероксидазная активность плазмы крови больных раком шейки матки превышала показатель у здоровых лиц в 2, 8 раза. В лимфоцитах, напротив, она была практически в 2 раза ниже. Не найдено достоверных отличий СПА нейтрофнлов здоровых и больных людей.

Для характеристики эффективности работы каскада антиокислптсль-ных ферментов мы сочли целесообразным ввести коэффициент отношения активности СОД к суммарной пероксидазной активности (СОД/СПА) в клетках крови люден. При изучении коэффициента было найдено, что в лимфоцитах периферической крови больных раком шейки матки этот показатель составил 29,9±1, 6 против 9, 1±0, 7 у здоровых лиц.

В плазме, эритроцитах, лимфоцитах и нейтрофнлах крови больных раком шейки матки было значительно снижено содержание витаминов: витамина А - на 65,5, 55,3%, в I 7, 5 раза ив 10, 5 раза соответственно; витамина Е - на 70, 0 ; 76, 5%, в 10 раз и 22 раза соответственно по сравнению со здоровыми донорами. При этом коэффициент соотношения витаминов E/A у больных раком шейки матки в плазме и эритроцитах составлял 1, 4+0, 2 и 1,6±0,2 и не отличался от показателей у здоровых лиц. Это указывает, по-видимому, на сохранность адаптационных механизмов поддержания гомео-стаза организма больных. Вместе с тем в лимфоцитах и нейтрофнлах крови больных раком шейки матки коэффициент E/A составлял 2,0±0,1 и 2,5±0,3, что в 2 и 5 раз соответственно превышало показатели у здоровых доноров. Это свидетельствует, с одной стороны, об изменении биологической функции мембран клеток белой крови, так как известно, что витамины Е и А определяют структуру и свойства мембран, в том числе их способность к окислению (Галкина С.П., 1984), с другой стороны - об изменении иммунологической реактивности и детоксикационных свойств клеток, поскольку имеются сведения о влиянии витаминов на иммунную систему организма (Лидак М.Ю., Плещпыи К.Д., 1984; Bcndich et al., .1983).

Полученные нами результаты согласуются с данными литературы о снижении активности как ферментативной, так и пеферментатнвпой анти-окиелнтельных систем в организме онкологических больных с различной локализацией опухолевого процесса (Морозкииа 'Г.С. и др., 1987; Жданов И.Г. и др., 1988; Сидоренко 10.С. и др., 1990).

Анализируя наши результаты, можно заключить, что исходно в организме больных со злокачественными опухолями выражен дисбаланс в фер-меитапннюн и неферментатпвной антиокислительных системах, что приводит к перенапряжению их работы, нарушению утилизации активных форм кислорода и перекисей липидов и нарушению структурной организации клеточных мембран.

При электрофоретическом исследовании сыворотки кропи больных раком различной локализации было установлено, что у больных со П-Ш стадией процесса обнаруживалось от одного до трех пиков СОД-активноети. Учитывая результаты, полученные нами при изучении химического канцерогенеза по выявлению РФ-белков и сыворотке крови экспериментальных животных при развитии индуцированных и перевивных сарком, мы предположили, что в сыворотке крови больных злокачественными новообразованиями при электрофоретическом исследовании также выявляется СОД-актпвность РФ-белков. ;

Ингнбиторный анализ, проведенный с помощью азида, цианида, ди-этилдитиокарбамата и анти-Р-реагеита показал, что СОД -активность сыворотки крови больных раком принадлежит продуктам катаболического распада клеточных рецепторов. Кинетический анализ полученных явлении определил, что СОД-активность сыворотки крови больных злокачественными новообразованиями носит "псевдоднсмутазный" характер, так как имеет место лишь сорбция белками анион-радикалов, а не ферментативная утилизация активных форм кислорода. Подобная каталитическая активность сыворотки крови не выявлялась у практически здоровых людей и больных хроническими воспалительцо-пролнферативными заболеваниями и доброкачественными опухолями.

Далее представлялось интересным выяснить, каймя фракция сыворотки крови обусловливает проявление каталитической активности. Для этою мы провели хроматографию сыворотки крови больных со злокачественными новообразованиями различной локализации с ДЭАЭ-целлюлозон. Фракционирование производили в увеличивающемся градиенте №С1. Полученные таким образом фракции, исследовали затем с помощью диск-электрофореза с последующей соответствующей окраской для выявления супероксиддис-

мутазной активности, а также с использованием анти-Р-реагента и специфических ингибиторов истинного фермента. В результате проведенной работы было установлено, что проявление неферментативной СОД-активности сыворотки крови больных связано с фракцией патологических иммуноглобулинов. Как установили ранее Кульберг А.Я. и соавт.(1988) с фракцией lg G связаны Р-белки - продукты кагаболического распада клеточных рецепторов, СОД-активность которых выявлялась в системе ксантин-ксантиноксидаза и ингибировалась с помощью анти-Р-реагента. Этот факт, по-видимому, служит доказательством того, найденные нами при электро-форетическом исследовании РФ-белки являются изоформой Р-белков, специфически появляющейся при возникновении и развитии злокачественного процесса в организме.

В литературе имеются также данные, согласно которым эффективно катализировать супероксидзависимые процессы в модельных системах могут некоторые иммунологические факторы - иммунные комплексы и антитела, причем каталитические свойства иммунных комплексов существенно отличаются для иммуноглобулинов и антигенов, взятых отдельно (Петясв И.М. и др., 1984; Скачек A.B., Петяев И.М., 1985).

Для проверки предположения о связи найденных нами РФ-белков с иммунологическими факторами мы истощали сыворотку крови онкологических больных антигенами лиофилизнрованных тканей различных органов.

Было найдено, что после инкубации сыворотки крови больных злокачественными новообразованиями с антигенами различных тканей СОД-активность РФ-белков исчезала в образцах, содержащих ткань именно тех органов, в которых имел место опухолевый процесс. После радикального лечения больных, выписанных из стационара в III клинической группе, т.е. с первичным клиническим выздоровлением, пики СОД-активности РФ-белков в сыворотке крови отсутствовали. Однако, при возникновении у больных рецидива заболевания или наличии первично неизлеченной опухоли в сыворотке крови обнаруживались отчетливые пики СОД-активности РФ-белков, истощаемые аналогичными тканями.

Возможность истощения РФ-бел ков сыворотки крови антигенами заинтересованных в злокачественном процессе тканей, т.е. их органоспсци-фичность. указывает на связь найденных белков с иммунологическими факторами, а точнее на их антнтелоиодобие.

В свете этого логичное предположение о причастности РФ-белков к созданию в организме больных иммунологической толерантности, когда иммунная система действует по принципу охраны "чужого в своем"

Сроки беременности, недели

Сроки беременности, недели

Рис.12. Содержание витаминов Л и Е в плазме и форменных элементах крови жешпин л различные сроки физиологической беременности (% по отношению к показателям доноров).

(Васильев Н.В., 1982), привело к исследованию нами параметров "биохимической среды" при развитии естественного пролиферативного процесса, каким является беременность.

Было установлено, что начиная с 7 дней задержки менструации в крови беременных отмечается резкое падение витамина Е в плазме, эритроцитах и нейтрофилах периферической крови (рис. 12а). Исключение составляло только содержание витамина Е в лимфоцитах. Уровень витамина А резко снижался во всех исследуемых образцах (рис.126).

Расчет соотношения витаминов E/A в первые дни беременности показал его увеличение в лимфоцитах и нейтрофилах крови беременных женщин в 5 и 2 раза соответственно.

В эгог же срок исследования найдено увеличение активности СОД эритроцитов на 12%. При этом амивиоеть СОД неГпрофнлов и лимфоцитов, а так же активность катал азы во всех неследуемых образцах оставалась в пределах показателей у небеременных женщин (рис. 13,14).

Сроки беременности, недели

Рис.13. Активность каталазы в плазме и форменных элементах крови женщин в различные сроки физиологической беременности. (% по отношению к показателям доноров).

Сроки беременности, неделн

Рис.14. Активность супероксиддисмутазы в плазме и форменных элементах крови женщин в различные сроки физиологической беременности. (% по отношению к показателям доноров).

Кроме того, в этот же срок в сыворотке крови женщин начинала определяться СОД-активность, которая, как показал проведенный ингибитор-ный анализ, была обусловлена продуктами катаболического распада клеточных рецепторов - РФ-белками, идентичными таковым, выявляемым, начиная с первой недели химического канцерогенеза. При истощении сыво-роп<и крови беременных женщин антигенами различных тканей было обнаружено, что найденные РФ-белки имеют тропность кднтигенам ткани матки (рис.15).

. Как известно, процессы эмбрио- и онкогенеза характеризуются рядом сходных этапов развития, начиная с воздействия на клетку инициирующего фактора. Этот первый период заканчивается образованием бластоцисты и онкосфероида, содержащих "критическую массу" клеток. Характерно, что формирование бластописты происходит в полости матки, где бластоциста не контактирует с материнской кровыо и не может быть распознана иммуно-компетентными клетками (Винницкий В.Б. и др., 1990). При этом имплантация бластоцисты в слизистую матки происходит между 4 и 11 сутками от момента оплодотворения.

Обнаруженные нами биохимические изменения, а именно, резкое па-

денпе содержания в плазме н форменных элементах крови женщин в ранние сроки после оплодотворения витаминов А и Е с нарушением коэффициента их соотношения и выход и гуморальную среду железозависимых, антитело-подобных РФ-белков, обладающих определенной оргаиогропностыо (к матке), аналогичны изменениям происходящим в ранние сроки (1-2 педеля) химического канцерогенеза.

Рис. 15. Электрофоретический спектр сыворотки крови и аспиратой, полученных из полости матки женщин в различные сроки физиологической беременности: Ф.1 - форе-грамма сыворотки крови женщин от 1 до 13 педель беременности (усредненная из 30 наблюдений): Ф. 1а - то же после истощения антигенами магки здорового донора; Ф.2 - электрофоретический спектр аспиратов из полости матки при физиологической беременности сроком от 1 до 13 недель; Ф.2а - тоже после ннгнбиторного анализа с помощью 10"5М диэтилдитиокарбамата натрия; Ф.З - фореграмма сыворотки крови крыс на 1-й неделе химического канцерогенеза, индуцированного 3,4-бензпиреном; Ф.За -то же после ннгнбиторного анализа с помощью 10"5М диэтилдитиокарбамата натрия.

Вероятнее всего предположить, что "сигнал", вызывающий перестройку в перекисном метаболизме организма, которая сопутствует или определяет те особенности, за счет которых чужеродные для организма клетки - оикосфероид и бластоциста - ие уничтожаются иммунологическим надзором, а, напротив, активно пролнфернруют и охраняются организмом, по-

ступает из трансформированной инициирующим фактором клетки. Пытаясь подтвердить высказанное предположение, мы провели элекгрофоретическое изучение аеппратов, полученных из полости матки при вакуумэкстракции. Аспираты неоднократно тщательно отмывали от крови, что позволило полностью исключить попадание в материал сывороточных (материнских) РФ-белков. Применяя вышеописанную процедуру ингибиторного анализа, нам удалось показать наличие в аспираниопном материале РФ-белков, идентичных таковым из сыворотки крови беременных женщин.

В сроки физиологической беременности 6-16 недель в крови женщин имела место реакция со стороны антиокислительных ферментов, подобная той, которая отмечалась на 3-5 неделе химического канцерогенеза. Вместе с тем, в отличие от онкогенеза, в эти сроки физиологической беременности уровень витаминов А и Е в плазме н форменных элементах крови прогрессивно нарастал (рис.12) и происходила нормализация коэффициента их соотношения.

Рис.16. Типичные фореграммы сывороток крови: Ф. 1 - форе-грамма сыворотки крови женщин при 14-16 неделях физиологической беременности; Ф.1а - то же после истощения ее антигенами матки здорового донора; Ф.2 - фо-реграмма сыворотки крови больных раком тела матки II-III стадии; Ф.2а - то же после истощения ее антигенами матки здорового донора; Ф.З - фореграмма сыворотки крови при сроке беременности 33-34 недели; Ф.За - то же после истощения ее антигенами матки

На фоне описанных изменений п антиокислительных системах крови беременных женщин при сроке 14-16 недель наблюдалось исчезновение тропности РФ-белков сыворотки крови к антигенам матки, тогда как уро-

Ф.1а

Ф.2а

Ф.За

вень СОД-акшшюсти РФ-белков был выражен значительно (рис.16) Полученные в Э1п сроки резулыаш ни 1с|юсны тем, что и 11-16 недель физиологической беременности происходит полное созревание плаценты, т.е. заканчивается процесс ее роста и инвазии в стенку матки Возникает вопрос, не являются ли РФ-белки факторами, обеспечивающими эти процессы?

Начиная со срока физло/лм«ческой беременности 21 неделя, выявлялись четкие различия и функционировании антиокислшельных систем организма при , так сказать, "доброкачес шейном" и злокачестеином пролнфе-ратишшх процессах. 13 отличие 01 химического канцерогенеза вторая половина беременности характериюьалась несколько повышенной или нормальной активностью ангиокиелнтельных ферменгов и продолжающимся постепенным увеличением уровни витаминов А и Е в крови жеишин (рис. 12-14). Различия проявлялись и в величине коэффициента соотношения витаминов, который в эти сроки беременности практически не отличался от показателя у доноров.

Полученные нами результаты показали, что терминальная стадия развития злокачественной опухоли характеризуется отсутствием РФ-белков в сыворо1кс крови , крайне низким содержанием витаминов А и Е и резко сниженной активностью антиокислигельных ферментов в крови онкологических больных. При развитии же филюло! ической беременности исчезновение РФ-бежон и/ сииордгкн крови женщин происходило в сроки 33-34 недели на фоне нормальной активности обеих антиокислительных систем крови.

Таким образом, найденное нами сходство "биохимической среды" ранних этапов химического канцерогене та и начальных сроков физиологической беременности дало основание считать, что выход в гуморальную среду железозависимых, антителоподобных, органоспенифических . РФ-белков,- обладающих неферментатнвной СОД-активностью, на фоне резко сниженного уровня содержания витаминов А и Е в крови является немаловажным звеном "метаболической иммуноденрессии", позволяющей осуществлять программу функционирования иммунной системы организма, направленную на охрану "чужого в своем". Существующие различия в реакции ферментативной аигиокислительиои системы лишь доказывают, что процессы онко- и эмбриогенеза сходны, но не идентичны. Физиологическая беременность завершается практически полным восстановлением функциональной активности антиокиеллтелышх систем организма и элиминацией из гуморальной среды РФ-белков, что вероятно, является сигналом переключения функционирования иммунной системы на программу отторжения "чужого ог своего". А при злокачественном росте никогда не наступает такого метаболического равновесия, когда антиокислительные системы функционируют в пределах физиологической нормы, а из сыворотки крови исчезают органоспецифическле РФ-белки, предварительно утратившие троп-ноегь к органу-мишени.

Исходя (п положений выдвинутой нами гипотезы развития злокачественного процесса, мы предприняли попытку разработать патогенетически обоснованные методы ранней диагностики злокачественных новообразований различных локализаций, их рецидивов и метастазов.

При изучении органоспецифичности РФ-белков мы обратили внимание на интересный факт, что РФ-белки из сыворотки крови больных раком истощались не только антигенами тех органов, в которых находился первичный очаг злокачественной опухоли, но и тех, в которых выявлялись метастазы, подтвержденные методами спепдиагностики. В свете этого, мы поставили цель до появления клинических признаков выявить рецидивы и метастазы рака различной гистоструюуры и локализации с указанием конкретного органа, в котором возможно возникнет или уже имеет место (но клинически не диагносцирован) патологический процесс.

Результатом проведенного исследования явилась разработка "Способа диагностики рецидивов и метастазов" (Ы 93002347/14), чувствительность, специфичность и эффективность которого составили 87%, 94% и 83% соответственно.

Полученные нами результаты эксперимента по изменению перекис-ного метаболизма и, особенно снижения содержания витаминов А и Е, в процессе развития опухолевой болезни было интересно подтвердить или опровергнуть именно на такой визуальной локализации как рак вульвы, развившийся из фоновых дистрофических состояний, в качестве клинической модели ранних этапов канцерогенеза. При анализе показателей активности антиокислительных систем крови мы обратили внимание на коэффициент соотношения витаминов А и Е в плазме и эритроцитах, понимая, что увеличение коэффициента отражает развитие опухолевого процесса. Изучаемый коэффициент в группе больных раком вульвы достоверно отличался от показателей у здоровых лиц. Среди больных лейкоплакией только у 6 человек из 26 обследованных этот показатель был таким же как и у больных раком вульвы, тогда как у остальных он не отличался от такового у здоровых лиц. При тщательном обследовании указанного контингента больных с повышенным значением коэффициента Е1А у всех выявились признаки различной степени' дисплазнн клеток и был поставлен диагноз "рак вульвы".

После радикальной операции или эффективного противоопухолевого лечения была отмечена нормализация показателя в крови больных, а при неэффективном лечении или генерализации процесса коэффициент Е/А вновь возрастал до первоначальных величин.

Проанализированные клинико-лаборпторные показатели согласуются с результатам!! экспериментов по химическому канцерогенезу и опухолевому росту и доказывают патогенетическую значимость нарушений в неферментативном звене антпокпелителыюй зашиты, влекущие за собой серьез-

ные перестройки в клеточных мембранах на ранних стадиях злокачественного процесса у человека. Это легло в основу "Способа диагностики предраковых состоянии вульвы" (N 5063097/14). А изучение ферментативной ан-тиоксидантноп системы у больных раком вульвы позволило нам предложить "Способ выбора xKMtioiepannn при опухолях вульвы" (N 1798692).

Убедительным доказательством основных положений представленно-" го патогенеза явилась р;ирабо1ка способа дпишостпки злокачест венных поражений печени, основанного на экспрессии под дейспшем сыворотки крови больных маркерного эмбрионального белка - гамма - глутамплтранс-пептидазы в ткаии печенп ("Способ диагностики метастазов в печени", N2027997). Предпосылкой для создания этого способа было гипотетическое предположение о том, что найденная нами перестройка перекисного метаболизма при опухолевой болезни должна повлечь за собой перестройку и в других звеньях метаболизма организма, который начнет вырабатывать эмбриональные белки, обнаруживаемые в сыворотке крови больных раком различной локализации.

Наиболее перспективным для поставленной цели мы сочли фермент гамма-глутамшпранспепгидазу (ГГТ), который интересен тем, что резкая активация его деятельности наступает в период эмбрионального развития и при радикальных его перестройках. Так, в ходе изучения канцерогенеза было зарегистрировано выраженное возрастание активности фермента в формирующихся опухолях, количественно совпадающее с активностью его в соответствующих эмбриональных тканях (Чернов Н.Н., Березов Т.Т., 1987; Taniegnchi Naoyuki et al., 1983). Исследователями было выдвинуто предположение, что канцерогены дерепрессируют эмбриональный фермент ГГТ, который представляет собой онкофетальный белок (Cameron et al., 1978; Fischer, 1986).

Мы предположили, что в сыворотке крови больных с опухолевым поражением печени присутствует некий белковый фактор, который может явиться индуктором активности ГГТ в печени по аналогии с канцерогенами, резко повышающими активность фермента на ранних стадиях гепато-канцерогенеза. Тогда инкубация сыворотки крови таких больных с гомоге-натом печени здоровых млекопитающих должна повлечь за собой выраженное возрастание акгивности ГГТ в гомогенате. Соответственно, этого не должно происходить, если сыворотка будет взята у люден, не страдающих опухолевым или метастатическим поражением печени.

Результаты исследования активности ГГТ с помощью предлагаемого способа представлены на рис. 17. Из всех обследованных групп только в первой, т.е. при наличии верифицированного злокачественного поражения печени активность исследуемого фермента достоверно превышала контрольные значения.

Kojnoitcmo болнтых

ГЕПЛТОГ1А И МЕТАСТАЗЫ В ПЕЧЕНИ

ЭЛОКАЧГСТВЕНКИЕ ОПУХОЛИ ПРИ , ОТСУТСТВИИ ПЕТАСГАЯО* 1» пгчгнк '

1

...

ДОБГОКЛЧТХТВТМ>Ш?: ОПУХОПИ, НО НК В ПЕЧЕНИ

холециститы, механкчвсяня

ЖЕЛТУХА

ГЕМАИГИОНМ, ЭХИНОКОККИ

ОСТРЫЕ И ХРОНИЧЕСКИЕ ПАЛКГЕЛТИТЫ

ОСТРЫЕ И ХГОИНУЕСККЕ ГЕПАТИТЫ

ОГомог«нат гт«ч«ни хорош (контроль)

И

19 13 30 21

10

30

40

Активность

О Недельная система (гомог*нат печени ropo*« +• шжоротк* больного) - огшт

ГГТ, ед./л

Достоверное«!, оглнчми по отномвнню к контролю:

Рис. 17. Изменение активности фермента ГГТ в модельной системе у больных с различными формами печеночной патологии.

Ценность любого метола исследования характеризуется чувствительностью, специфичностью и эффективностью, которые для предложенного метода составили 90, 8%, 97, 9% и 94, 7% соответственно. Для выяснения природы сывороточного фактора, ответственного за дерепрессию ГГТ в ткани печени здорового млекопитающего, мы провели хроматографию сывороток крови больных со злокачественным поражением печени первичной или вторичной природы на колонке с ДЭДЭ-цсллюлозой. Полученные после хроматографии фракция нсследовати затем предложенным способом, используя их вместо сыворотки крови. В результате такой постановки опыта удалось показать, что фактор, вызывающий индукцию эмбрионального фермента в интактной ткани, принадлежит к суперсемейству патологических иммуноглобулинов.

Таким образом, стало очевидно, что сыворотка крови больных со злокачественными поражениями печени несет информацию о перестройке метаболизма пораженного органа на эмбриональный путь и способна передавать эту информацию при контакте с тканью интактпой печени, экспрес-сируя маркерный фермент ГГТ. При этом сыворотка крови больных со злокачественными новообразованиями, не затрагивающими ткань печени,

свойствами jKciipcccnpouaib эмбриональный детерминированный с гепато-цнтами белок не обладает.

Скорее всего, такой методологический подход позволит моделировать экспрессию эмбриональных маркерных ферментов при любой локализации рака с условием-использовании и опыте ткани заишересоцанного органа.

Мы считаем, что использование ншогепетически значимых параметров перестройки свободно-радикальных процессов, выявленных в нашей paooie, открывает новый подход к созданию не только способов диагностики злокачественного процесса в организме, обнаруживаемого еще до манифестации клинических проявлений опухоли, но и для оценки эффективности специфического лечения, выявления механизмов действия различных противоопухолевых мероприятий и, наконец, открывает перспективу для патогенетически обоснованных подходов к созданию новых путей воздействия на опухолевую болезнь.

Используя информативный блок показателей, мы смогли найти метаболическое обоснование понятия "III клиническая группа" для онкологических больных, понять механизм реализации клинически выраженного противоопухолевого эффекта после различных видов специфической терапии. Стало очевидным, что существуют универсальные механизмы возникновения опухолевой болезни, являющиеся фоном для развития специфических признаков, присущих опухолям различной локализации, гистосгрукгуры и генеза. "

Для выяснения механизмов реализации противоопухолевого эффекта, а также доказательства патогенетической значимости РФ-белков для онко-патологии, мы провели электрофоретическое исследование плазмы и форменных элементов крови, а также показателей обеих систем антноксидант-ной защиты организма больных раком шейки матки в динамике противоопухолевой терапии.

В качестве основного метода лечения использовали сочетанную лучевую терапию с традиционным чередованием доз внутриполостного и дистанционного облучения (1 группа). Учитывая распространенность процесса, больным назначалась предлучевая подготовка: в лимфопути нижних конечностей вводили либо смеси ударных доз цитостатиков (2 группа), либо ФАО-препарат, обладающий СОД-активностыо (3 группа). На этапах пред-лучевой подготовки и в группе больных с чисто лучевым лечением идентично оценивались данные клинической регрессии первичной опухоли, морфологические критерии и показатели перекисного метаболизма.

В 1 группе больных исследования проводили до начала лечения, после дозы наружного облучения 10 Гр, 20 Гр, 40 Гр и по окончанию лечения. Во 2 и 3 группах исследования проводили до начала лечения после 1 и 2 введения ударных доз щпостатнкоь (ОНХТ) или ФАО с интервалом 7-10 дней и по окончанию лечения.

Анализ изучения некоторых звеньев антпокислнтельных систем доказал прямую корреляцию между проявлением клинического противоопухолевого эффекта и состоянием проницаемости и эластичности клеточных мембран организма. Гипсрстабилнзацпя клеточных мембран до начала лечения обусловливала отсутствие клинического эффекта ог специфического лечения. При достижении клинического эффекта у больных 2 и 3 группы, а также у больных I i руины после дозы облучения 20Грбылп обнаружены изменения показателен неферментатнвноп и ферментативной аптнокнелитель-ных систем в сторону нормализации с восстановлением коэффициентов соотношения витаминов E/A и естественного каскада антиоксидантных ферментов.

Учитывая предыдущие результаты, логично было ожидать, что в процессе эффективного противоопухолевого лечения (впе зависимости от вида применяемой специфической терагшп) должны будут произойти обратные перестройки в псрекисном метаболизме, направленные на нормализацию обменных процессов, с элиминацией из сыворотки крови РФ-белков и восстановлением приоритета ферментативной формы утилизации супероксида-нпон радикала в крови больных.

Было установлено, что в 1 группе больных характер фореграмм исследованных образцов не отличался от фона на протяжение всего исследованного срока: в плазме, лимфоцитах и нейтрофилах крови постоянно обнаруживалась СОД-активность РФ-белков. ---—

В плазме крови больных 2 группы после второго эндолимфатического введения цитостатиков СОД-активность РФ-белков исчезала, заменяясь на активность истинной СОД. Однако эффект был нестойким, и, в дальнейшем, уже через месяц, утех больных, которые прожили менее 5 лет, вновь проявлялась СОД-активпость РФ-белков. В лимфоцитах и нейтрофилах больных 2 группы СОД-активность РФ-белков так же заменялась на истинную ферментативную активность, которая сохранялась в течение срока исследования.

В группе больных с эффективным эндолимфатическим введением ФАО после второго введения РФ-белки стойко исчезали нз плазмы крови. В лимфоцитах и нейтрофилах периферической крови этих больных ложная СОД-активность заметалась на истинную ферментативную уже после первого введения препарата и сохранялась на протяжении всего срока исследования.

При анализе полученных результатов прежде всего обращает на себя внимание различие в реакции со стороны организма, а точнее его перекис-ного обмена, в зависимости от инипиирмошет клинический эффект агента. Вероятно, причину этого следует искан, в механизме повреждающего опухоль действия каждого нз них.

Так, ионизирующее излучение, используемое в чистом виде в случаях лучевого лечения больных раком, является мерой локального физико-химического воздействия на опухолевые клетки. Уменьшение размеров опу-

.5(1

холн, как показывают морфологические исследования, при лучевом лечении с перифокалыю развивающейся лнмфопднои плазмоклеточной инфильтрацией и склеротическими изменениями, связано с выраженными некробио-тическнми и некротическими изменениями. Влияние лучевого воздействия на организм больного в целом связано прежде всего с активацией свободно-радикальных реакций, которые принято рассматривать как молекулярный -компонент стресс-реакции - общего неснецифического снмптомокомплекса, присущего самым различным формам патологии, в том числе и облучению (Барабой В.Л., Чеботарев Е.Е., 1986). В нашем исследовании доза облучения в 40 Гр приводила к выраженной дискоординации в системе ферментативных и неферментативных антноксидантов и пх истощению, что присуще тяжелому и продолжительному стресс-воздействию. Па таком фоне трудно ожидать в короткие сроки перестройки иерекнсного метаболизма и исчезновения СОД-активностн РФ-белков.

Лечебный механизм действия смесей цитостатиков, введенных в лнмфопути, на первичный очаг опухоли недостаточно ясен. Считается, что в патогенезе опухолевого процесса компоненты лимфатической системы играю! большую роль, а биохимические процессы, развивающиеся в опухоли, с помощью лимфы распространяются па весь организм. Информация, которую лимфоциты памяти, находящиеся в лимфе, посредством лимфопепти-дов передают через кровь к органам и системам организма, зависит от воздействия, оказываемого на них (Антоиенко Т.В., 1985). В случае ЭГ1ХТ таким стрессорным воздействием являются химиопрепарагы, введенные непосредственно в лимфатические сосуды и имеющие выраженную тропиость к незрелым иролиферирующнм клеткам. Логично предположить, что в случае эффективного взаимодействия химиопрепаратов с мембранами лимфоцитов лимфы происходит перестройка "биохимической среды" под действием сигналов- низкомолекулярных лимфопептидов, и лимфондная система наряду с ее основной иммунологической функцией принимает тем самым участие в обеспечении общей резистентности организма. Вместе с тем, появление в конце лечения вновь пиков СОД-активности РФ-белков указывает, вероятно, на недостаточную силу, а скорее всего, недостаточную специфичность агента, вызывающего перестройку межсистемных взаимодействий. А возможно, это влияние последующей за ЭПХТ лучевой терапии.

Создается впечатление, что эти недостатки нивелируются при эндо-лимфатическом применении препарата ФАО. Однако, и в этом случае непременным условием его эффективного действия является нормальная проницаемость и эластичность клеточных мембран организма больных. Возможно, механизм-реализации противоопухолевого эффекта при эндолимфа-тическом введении ФАО аналогичен таковому при ЭПХТ, а возможно и другое: ФАО, являясь белковым ферментативным препаратом, обладающим СОД-активностыо, при введении в лнмфопути захватывается лимфоцитами, которые осуществляют свою основную иммунологическую функцию по

нейтрализации чужеродного белка. Однако, "традициоиион" нейтрализации не происходит, а возникает своеобразный симбиоз эндо- и экзогенного ферментов. Проникновение в цитоплазму препарата, представляющего собой истинный фермент, может в конкуренции за субстрат подавить неферментативную СОД-актшшость. Учитывая, что сам ФАО получают, выращивая на эмбриональных тканях, можно предположить его повышенную тропность именно к незрелым клеткам, а вслед за этим лимфоциты с приобретенной ферментативной формой утилизации супсроксиланнон радикала начинают вырабатывать нпзкомолскулярные пептиды, являющиеся основным системно-антисистемным механизмом регуляции функции клеток всего организма.

Во всяком случае, каким бы ни был механизм влияния противоопухолевой терапии на организм больных, очевидно одно, что реализация клинического эффекта сопровождается перестройкой перекисного метаболизма, пусть иногда и' временно, как в случае ЭПХТ, на ферментативный путь утилизации активных форм кислорода. Огсутстпие обратной перестройки свободно-радикальных процессов в крови больных, оставшихся резистентными к проводимому противоопухолевому лечению, доказывает патогенетическую роль появления РФ-белков при онкопатологии.

Наряду с биохимическим подтверждением перестройки свободно-радикальных процессов организма с нефермептатнвного на ферментативный путь в случае эффективного противоопухолевого лечения, мы получили также и морфологические подтверждения нашей гипотезы. На этапах лечения больных нам удалось показать возможность цитодифференннровки опухолей в зависимости от выраженности клинического эффекта, т.е. было найдено, что опухолевые клетки не просто гибнут, а вначале стареют, проходя процесс цитодифференннровки от способной к делению клетки, до зрелой, гибнущей. Наиболее ярко выраженные изменения в цитодифференцировке опухолевой ткани отмечены нами при использовании в предлучевой подготовке препарата ФЛО, что согласуется с биохимическими исследованиями, показавшими в этом случае более быструю и стойкую перестройку перекисного метаболизма, способствующую раз питию зрелых клеточных форм. Нашел свое морфологическое подтверждение н факт возврата РФ-белков в плазме крови больных после подключения к ЭПХТ лучевой терапии: опухоль, начавшая регрессировать в ходе предлучевой подготовки хнмиопрепа-ратамн, после перехода к лучевому воздействию вновь морфологически "омолаживалась".

Очевидно, что анализ "биохимической среды" позволяет предложить новые подходы к диагностике, лечению и прогнозу эффективности специфической терапии. Использование препаратов, обладающих СОД-актнвностыо, корригирующих антиоксидантные системы организма и способствующих "созреванию" клеток, может повысить эффективность противоопухолевого лечения в целом.

вьшоды.

]. Химический канцерогенез начиная с 1-й недели воздействия 3, 4-бензпирепа сопровождается стойким угнетением звеньев нефсрменгативнон анпюкислшельной системы, выражающимся и падении уровня витаминов Е и А в плазме, эритроцитах и немалштшзированпых органах.

2. В крови на 1-ю педелю химического канцерогенеза, а в печени и легких на 5 педелю происходит экстремальное возрастание аитиокислитсльиых глутапюпзавнеимых ферментов и СПА, как ответ па канцерогенную интоксикацию. Значимое подавление активности аптиоксидантных ферментов в крови имеет место начиная с 3-й педели, а в печени и легких - с 7-й недели химического канцерогенеза вплоть до выхода опухоли.

3. В плазме крови с 1 и недели канцерогенеза появляется нефермента-тивпая супероксндднс.мутазная активность, обусловленная продуктами ка-таболпческого распада клеточных рецепторов - РФ-белками. В эритроцитах с 5-й недели, а в печени и легких с 9-й недели химического канцерогенеза начинается преобладание дисмутазпой активности РФ-белк^в над истинной ферментативной СОД.

4. Патогенетическая значимость найденных перестроек свободно-радикальных процессов при химическом канцерогенезе подтверждена экспериментальной терапией селенорганическим препаратом П-3 на модели опухолевого роста саркомы-45.

5. Выявление дисмутазпой активности сыворотки крови, регистрируемой на фойе подавления активности ферментативной и неферментативной анттюкпслителышх систем, позволило разработать новый способ определения возникновения злокачественного процесса в организме.

6. В крови больных злокачественными новообразованиями начиная с ранних стадий обнаружено синхронное падение уровня неферментативных антиоксидантов, подавление активности антиокислительных ферментов с обязательным выходом в гуморальную среду специфических железосодержащих РФ-белков, обладающих неферментативной супероксиддисмутазной активностью , способной конкурировать за субстрат (супероксиданион радикал) с СОД. РФ-белки функционируют вне каскада естественных антиоксидантов, относятся к суперсемейству патологических иммуноглобулинов и проявляют антителоподобные свойства, а именно органотропность.

7. Сравнительный анализ динамики злокачественного роста и беременности, как естественного пролиферативного процесса, определил перестройку свободно-радикальных процессов как необходимое звено в цепи реакций, вызывающих толерантность иммунной системы, которая обеспечивает охрану "чужого в своем".

8. Сыворотка крови больных со злокачественным поражением печени обладает способностью активировать в ткани здоровой печени онкофеталь-ный фермент гамма-глутамшгфанспептпдазу.

9. Обратная перестройка свободно-радикальных реакций, направленная

на нормализацию обменных процессов, с элиминацией из сыворотки крови РФ-белков и восстановлением приоритета ферментативной формы утилизации супероксндаиион радикала является универсальным механизмом реализации клинического эффекта при противоопухолевых воздействиях.

10. На основании изучения свободно-радикальных процессов разработаны новые способы ранней диагностики рака различной локализации и выбора оптимальной противоопухолевой химиотерапии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Функциональные аспекты адаптации организма онкологических больных при аутолимфохимиотерапии. - В кн.: Механизмы интеграции биологических систем. Проблема адаптации. Тезисы докл. обл. научно-практ. конференции молодых ученых. 8-10 июня 1988, Ростов-на-Дону, с. 82-83 (в соавторстве с Нормантовичем В.А.).

2. Опыт применения аугогемохимиотерапии для лечения распространенного рака яичников. - В кн.: Организация онкологической помощи населению на основе эпидемиологических исследований. М., 1988, сб. статей под редакцией Сидоренко Ю.С., с. 131-134 (В соавторстве с Долматовой O.K., Голотиной Л.Ю.).

3. Влияние гинербарической окспгепашш на течение пред- и после операционного периодов у онкологических больных. - В кн.: Третий Всероссийский съезд анестезиологов-реаниматологов. М„ 1988, с. 134-136 (в соавторстве с Николаевой Е.Е., Чубухчиепым Г.Б., Архангельской A.B., Добреньким A.B.).

4. Сравнительная оценка эпидуральной анестезии и нейролептаналгезии у онкологических больных. - Анестезиология и реаниматология, 1988, N 1, с. 47-49 (в соавторстве со Ждановым И.Г., Поляковым В.М.).

5. Антиоксндантиын статус у онкологических больных в процессе лечения гипербарической оксигенанией. - Тезисы докл. Ш Всесоюзной конференции "Биоантиоксидант", 27-29 июня 1989. М., 1989, т.2, с. 1-2 (в соавторстве с Николаевой Е.Е.).

6. Состояние процессов пероксидации липидов при лечении саркомы-45 антиоксидантом противоопухолевого действия. - Изв. Сев.-Кав. НЦ ВШ. Деп. в ВИНИТИ N 6014-1389 (в соавторстве с Крыловой М.Н., Архангельской A.B., Дорофеепко А.И., Кащиенко Ю.В.).

7. Применение ГБО в комплексном лечении больных раком легкого. - В кн.: Новые методы интенсивной терапии в лечении онкологических больных. Л., 1989 (в соавторстве с Чубухчиевым Г.Б., Николаевой Е.Е., Агар-ковой Г.А.). ~

8. Применение ГБО в комплексном лечении больных раком легкого. - В

кн.: Всесоюзная конференция по интенсивным методам лечения. Калинин, 1989 (в соавторстве с Чубухчневым Г.П., Николаевой НЕ., Карташо-вым С.З.).

9. Показатели процессов иерекиспого окисления лииндов у больных распространенным раком яичников при химиок'рапии. - В кн.: Нефаднци-онные методы диагностики и лечения онкологических больных. М, 1990, с. 112-116 (в соавторстве с Сидоренко Ю С., Долматовой O.K., Архангельской A.B.).

10. Применение гипербарической окенгенации при оперативном лечении рака легкого. - В кн.: Метаболическая реанимация (регуляция обменных процессов в клинической реаниматологии). Саратов, 1990, с. 67-72 (в соавторстве с Чубухчневым Г.Б., Николаевой Е.Е., Картаиювым С.З., Агарко-вой Г.А.).

11. Некоторые ферменты лимфоцитов и лейкоцитов в лабораторной диагностике рака легкого. - В кн.: Всесоюзный симпозиум "Биохимия опухолевой клетки". Тезисы докл. Минск,- 1990, с. 56-57 (в соавторстве с Крыловой М.Н., Карташовым С.З.).

12. ПрименеГшеТипербарической оксигенацни при оперативном лечении рака легкого. - В кн.: Нетрадиционные методы диагностики и лечения онкологических больных. М., 1990, е. 28-32 (в соавюрстве с Чубухчневым Г.Б., Николаевой Е.Е., Агарковой Г.А.).

13. Применение антиокеидантов при лечении онкологических больных. -В кн.: Метаболическая реанимация (регуляция обменных процессов в клинической реаниматологии). Саратов, 1990, с. 79-81 (в соавторстве со Ждановым И.Г.).

14. Применение антиокеидантов у онкологических больных. - В кн.: Некоторые вопросы современного обезболивания (диссоциативная анестезия рефлексо- и электрофарманестезня, регионарная анестезия, анестезия в амбулаторной практике). Тезисы докл. 3-й республ. научно-практич. конф. анестезиологов н реаниматологов, 26 октября 1990, Кишинев, 1990, с. 2829 (в соавторстве со Ждановым И.Г.).

15. О влиянии гипербарической оксигенацни на некоторые показатели перекисного окисления липидов в крови у больных раком легкого. - Анестезиология и реаниматология, 1991, N4, с. 67-68 (в соавторстве с Николаевой Е.Е. и Чубухчневым Г.Б.).

16. Электрофоретическая множественность супероксиддисмутазы крови и органов крыс при химическом канцерогенезе. - В сб.: Современные проблемы экспериментальной и клинической онкологии, М., 1991, с.43-46 (в соавторстве с Архангельской A.B., Крыловой М.Н., Шматко В.А.).

17. Возможности индивидуального подбора химиопрепаратов для лечения больных аецитнон формой рака яичников. - В сб.: Современные проблемы экспериментальной и клинической онкологии, М,, 1991, с. 130-132 (в соавторстве с Голотинои Л.Ю. и Долматовой O.K.).

18. Некоторые показатели антнокислительиой системы организма у больных раком пульпы в зависимости от наличия метастазов. - В кн.: Мета-стазирование злокачественных" опухолей: новые подходы. Материалы II Всесоюзного сими. 22-24 октября 1991 г., Киев, 1991, с. 1 Об ( в соавторстве с Сидоренко Ю.С. и Неродо Г.Л.),

19. Состояние процессов псрекисиого окисления липндов в динамике химического канцерогенеза. - В кн.: Лекарственный компонент в лечении онкологических больных, М., 1992, с. 19-25 (в соавторстве с Крыловой М.Ы., Вайнер О.М., Ткачевой Г.Н.).

20. Каталитические свойства сыворотки крови больных злокачественными новообразованиями. - В кн.: Лекарственный компонент в лечении онкологических больных, М., 1992, с. 162-169 (в соавторстве с Шматко В.А., Карташевым С.З., Зииьковичем С.А., Розенко Л.Я.).

21. Применение ретинола в комплексном лечении больных раком вульвы. - В кн.: Способы и механизмы повышения противоопухолевой защиты в онкологии, М., .1Q93, с. 170-176 (в соавторстве с Сидоренко Ю.С., Неродо Г.А., Ткачевой Г.Н., Серебряковой Л.А.).

22. Сравнительная характеристика некоторых звеньев перекисного метаболизма при эмбрио- и оикогеиезе. - В кн.: Способы и механизмы повышения противоопухолевой защиты в онкологии, М., 1993, с. 70-81 (в соавторстве с Сидоренко Ю.С., Розенко Л.Я., Туманян Е.Э., Смирновой Л.А., Ткачевой Г.П., Ткаченко Е.В.).

23. Применение теста определения супероксиддисмутазы в крови при лечении рака легкого. - Методические рекомендации. Ростов-на-Дону, 1993, И с. (в соавторстве с Карташовым С.З., Крыловой М.Н., Шматко В.А., Поляковым В.М.).

24. Новый метод диагностики опухолевых поражений печени. - В кн.: Пути повышения выживаемости в онкологии. М., 1994, с. 53-59 (В соавторстве с Крыловой М.Н., ЗаГшинером Б.М., Холодным М.Д.).

25. Возможности использования антиокислительных систем крови больных раком легкого для раннего выявления рецидивов и метастазов. - В кн.: Пути повышения выживаемости в онкологии, М., 1994, с. 59-64 (в соавторстве с Ткачевой Г.Н., Зииьковичем С.А.).

26. Состояние антиокислительных систем крови больных распространенным раком шейки матки в динамике лучевой терапии. - В кн.: Пути повышения выживаемости в онкологии. М., 1994, с. 64-72 (в соавторстве с Розенко Л.Я., Клейнер Б.И., Колесниковой В.А., Ткаченко Е.В., Касьян Е.М.).

27. Состояние процессов перекисного окисления липидов крови у больных фоновыми и злокачественными заболеваниями вульвы. - В кн.: Пути повышения выживаемости в онкологии. М., 1994, с. 72-78 (в соавторстве с Сидоренко Ю.С., Неродо Г.А., Мусиенко Н.В.).

28. Препарат вирусного происхождения в комплексной терапии рака

4 I

шейки матки. - В кн.: Современные тенденции в вирусологии и иммунологии опухолей. Тезисы докл. международного симпозиума, 16-20 мая 1994. М., 1994 (в соавторстве с Сидоренко Ю.С., Вагнер В.П., Розенко Л.Я.).

29. Содержание витаминов А и Е в крови больных раком вульвы. - В кн.: Материалы Российского симпозиума с международным участием "Скрининг и новые подходы к деченшо начального гинекологического рака". Новгород,

' 1994. С.-Петербург, 1994 (в соавторстве с Сидоренко Ю.С., Неродо Г.А.).

30. New method of diagnostics of cancer ressurences and metastasis. - The 2nd Far-eastern international simposium "Multimodality treatment of cancer". Vladivostok, 1994, p. 18 (with Sidorenko Y.S., Rosenko L.Y., Nerodo G.A.).

31. Vitamin A in complex treatment of vulvar cancer patients. - The 2nd Far-eastem international simposium "Multimodality treatment of cancer". Vladivostok, 1994, p. 38 (with Sidorenko Y.S., Nerodo G.A.).

32. Состояние антнокиелнтельных систем крови больных распространенным раком шейки матки в динамике эндолнмфатической полихимиотерапии. - В кн.: Разработка проблем'онкологии в эксперименте и клинике. М., 1995, с. 51-59 (в соавторстве с Розенко Л.Я., Колесниковой В.А., Тка-ченко Е.В., Касьян Е.М., Крыловой М.Н., Бражниковой Е.И.).

33. Использование ауто- и гомолимфохимиатерапни в консервативном лечении больных раком легкого. - В кн.: Проблемы современной онкологии, тезисы докл. IV Всероссийского съезда онкологов. Ростов-на-Дону, 1995, т.2, с. 387-389 (в соавторстве с Сидоренко Ю.С., Карташовым С.З., Бор-дюшковым Ю.Н., Словесновой В.Г., Лазутиным Ю.Н.).

34. Необходимость коррекции состояния антиокнелительных систем крови в динамике лучевой терапии больных раком шейки ..ттки. - В кн.: Проблемы современной онкологии, тезисы докл. IV Всероссийского съезда онкологов. Ростов-на-Дону, 1995, т.2, с. 208-210 (в соавторстве с Розенко Л.Я., Рубцовым В.Р.).

35. Индивидуальный подбор химиопрепаратов при лечении больных ас-цитной формой рака яичников. - В кн.: Проблемы современной онкологии, тезисы докл. IV Всероссийского съезда онкологов. Ростов-на-Дону, 1995, т. 2, с. 308-309 (в соавторстве с Голотинон Л.Ю., Долматовой O.K.).

36. Vitamin A in complex treatment in vulvar cancer patients. - Fifth Internationa! congress Hormones and cancer Program and Abstracts. Quebec City, September 16-20, 1995, 78, p. 95 (with Nerodo G.A., Sidorenko Yu.S.).

37. Blood concentration of vitamins A and E in vulvar cancer patients. - Fifth International congress Hormones and cancer Program and Abstracts. Quebec City, September 16-20, 1995, 160, p. 154 (with Sidorenko Yu.S., Nerodo G.A.).

38. СОД-активность РФ-белков крови как показатель перестройки пере-кненого метаболизма организма больных в реализации противоопухолевого эффекта. - В кн.: Разработка проблем онкологии в эксперименте и клинике. М., 1995, с. 60-73 (в соавторстве с Сидоренко Ю.С., Розенко Л.Я., Ткачевой Г.Н., Ткаченко Е.В.).

39. Состояние антиокнслнтельинх систем крови больных раком шейки МЛ1КИ при эндолимфатическом ввслении препарата аитиоксидаптного действия. - В кн.: Разработка проблем онкологии в эксперименте и клинике. М., 1995, с. 156-162 ( в соавторстве с Сидоренко Ю.С., Розепко Л.Я., Ткаченко Е.В.).

40. Перекиспое окисление липидов в патогенезе опухолевой болезни. Ростов-на-Дону, 1995, 176 с. (в соавторстве с Сидоренко Ю.С., Розенко Л.Я.).

41. Изменения антиокислительного статуса крови крыс в первые дни индуцированного химического канцерогенеза. - Российский онкологический журнал, 1996, N2, с. 29-33 (в соавторстве с Ткаченко Е.В., Касьян Е.М., Крыловой М.Н.).

42. Особенности функционирования антпокислительной защиты организма в условиях злокачественного роста. - В кн.: 1 съезд онкологов СНГ. М„ 1996, ч.1, с. 71 ( в соавторстве с Сидоренко Ю.С., Розенко Л.Я.).

ИЗОБРЕТЕНИЯ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Способ диагностики злокачественных новообразований головного мозга. Авторское свидетельство N 1478820, зарегистрировано в Государственном реестре изобретений СССР 8.1.1989 (в соавторстве с Мартиросяном В.В., Вилковым Г.А., Сагертьянцем Э.В.).

2. Способ определения чувствительности к терапии больных раком яичников Ш-IV стадий. Авторское свидетельство N 1718650, зарегистрировано в Государственном реестре изобретений СССР 8.11.1991 , Бюллетень информации N 9, 1992 (в соавторстве с Долматовой O.K., Архангельской A.B.).

3. Способ выбора химиотерапии при опухолях вульвы. Патент N 1798692, зарегистрировано в Государственном реестре изобретений 13.9.1993, Бюллетень информации N 8, 1993 (в соавторстве с Неродо Г.А.).

4. Способ выбора химиотерапии при опухолях легких. Авторское свидетельство N 1798691, зарегистрировано в Государственном реестре изобретений СССР 8.10.1992, Бюллетень информации N 8, 1993 (в соавторстве с Карташовым С.З., Поляковым В.М.).

5. Способ лечения рака легкого. Авторское свидетельство N 1806744, Бюллетень информации N 13, 1993 (в соавторстве с Чубухчиевым Г.Б., Зиньков1гчем С.А., Карташовым С.З., Розенко Л.Я.).

6. Способ определения противоопухолевой терапии. Патент N 2021620, зарегистрировано в Государственном реестре изобретений 15.10.1994, Бюллетень информации N 19, 1994 (в соавторстве с Розенко Л.Я.).

7. Способ исследования возникновения злокачественного процесса в организме. Патент N 2021612, зарегистрировано в Государственном реестре изобретений 15.10.1994, Бюллетень информации N 19, 1994 ( в соавторстве с Сидоренко Ю.С., Розенко ЛЯ.)

8. Способ диагностики предраковых состояний вульвы. Заявка

N 5063097/14. Приоритет от 25.09.1992. Решение о выдаче патента от 28.06.1995 (в соавторстве с Неродо Г.А.).

9. Способ диагностики метастазов в печени. Патент N 2027997, зарегистрировано в Государственном реестре изобретении 27.1.1995, Бюллетень информации N 3, 1995 (в соавторстве с Крыловой М.Н.).

10. Способ диагностики рецидивов и метастазов рака. Заявка N 93002347/14. Приоритет от 13.01.1993. Решение о выдаче патента ог ■23.02.1996 (в соавторстве с Сидоренко Ю.С., Розенко Л.Я., Зннькови-чем С.А., Ткачевой Г.Н.).

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ

ДДК - диэтилдитиокарбамат натрия КС - конъюгированные соединения МДА - малоновый диальдегид ПААГ - полиакриламиднын гель ПРЭ - перекнсная резистентность эритроцитов С - 45 - перевивная саркома - 45 СОД - Сунероксиддисмутаза ' СПА - суммарная пероксидазная активность ТБК - тнобарбитуровая кислота УЗИ - ультразвуковое исследование ЭПХТ - эндолимфатическая полихимнотерапня БН - сульфгидрильные группы