Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Пектолитические и целлюлолитические ферменты гриба SEPTORIA NODORUM BERK и их возможная роль в патогенезе септориоза

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "Пектолитические и целлюлолитические ферменты гриба SEPTORIA NODORUM BERK и их возможная роль в патогенезе септориоза"

УДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУПКАМ

1АВНОЕ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННОЕ УПРАВЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО - ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФИТОПАТОЛОГИИ

На правах рукописи

Ахметов Ахат Ануарович

УДК 632.4: 582.28: 57Э.22/.24

ПЕКТОЛИТИЧЕСКИЕ И ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКИЕ

ФЕРМЕНТЫ ГРИБА вЕРТОША ловоким ВЕНК. ИХ ВОЗМОЖНАЯ РОЛЬ В ПАТОГЕНЕЗЕ СЕПТОРИОЗА

(06.01.11 — защита растений от вредителей и болезней)

Автореферат диссертации на соискание ученей степени кандидата биологических наук

Голицыне 199]

Работа выполнена в Научно-исследовательском сельскохозяйственно« институте Главагробиопрома при Госкомиссии Совета Министров СССР по продовольствии и закупкам.

Научный руководитель: кандидат биологических наук,

доцент Г. И. КОШЯЬСКИЯ

Официальные оппонента доктор биологических наук,

Е Е ЦЛЗЙН

кандидат биологических наук, А. А. САНИНА

Ведущее учреждение - Главный ботанический сад АН СССР

Зашита диссертации состоится ". 1991 г.

в /0 часов на в асе дании Специалив1фованного совета Всесош-ного научно-исследовательского института фитопатологии.

Стзыв на автореферат просим направлять в двух экземплярах по адресу: 143050, Мосговская область, Одинцовский район, п/о Большие Еязеш, ЕНИИФ, специализированный совет К. 120.66.01.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ЕШШФ.

.. ^ //

Автореферат разослан " о " ? / 1991 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

Я Е Яковлева

- í -

OEÜfiñ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Ео всем ;л:фз кэ-за болезней сельскохозяйственных культур теряется пржерко 600 млн.т продукции в год, иэ которых 135 млн. т приходится па основной источник питания - хлебные злаки (Jaras, 1S81). К числу спасти болезней зерновых относится септориоз, вызываем пзсоверЕэкпьаа грибам! га рода Ssptcria. Наиболее распрсстрапэшпш и вредоносным среди ншс является Septoria nodorum Bork., перазитарую-ппЯ на ппэнкде и другш: злаковых. При порагэнии растошй пгэ-шщы септорпсзсм потери урогэл в газксишстп от ycxoBiÄ достигает 25-40% (Васецкая и др., 1933, Mitterraior, Hoffmn, 1Q85)а в период эпифнтотий - до 55% (Jacobson, 1977).

Для ргзработ:ш научно-обоснованной с«стеш звгггтн растений от болезней, в том числз и от сэпторлоза, создания новых более зффэктквяых фунгицидов больше значение e'C-st изучение фганолого-бшхюляческих свойств не только растешй, но и самого возбудителя заболевания.

Из литературы известно, что детерютанта>ея патогошостя ряда бстаерий и грибов шгут служить фэрьганти (Lunisdsn. Bate ran, 1658; Lovrekovích ot al., 1S67), токсины (Нйкуле нко, Чкзяиков, 1987; Toxins..., 1S81), регуляторы роста, в частности яндолилуксусная кислота (йэсурэ, йз'яя, 1965; Уш:ав, 19S0). Ведущую роль среди них на начальных этапах патогенеза играют неполитические и целлшолитические ферменты, способствуйте проникновению возбудителя в растение и последувщэму распространению его в тканях хозяйка (Васильева и др., 1984; Hasija, Shavtáhury, 1980).

В ряде работ (Бородин, 1978; Гусева, 1980) показано существование корреляционных зависимостей концу шстивность» гид-ролаз и агрессивностью (вирулентностью) патогенов.

Известны отдельные работы, посвявзгннш изучению роли гид-ролаз и в патогенезе септориоза. Однако данные исследования проводились или на другом представителе рода септория, а именно Septoria trltlci (Onogur, 1977; 1978), или в них изучалась только часть ферментов из всего комплекса гидролаз, деградкру-вдих клеточные стенки растений (Шрескпкнн, Коваленко, 1988).

- г -

В связи с этим, изучение активности неполитических, цел-лвдолитичееких ферритов и ксилаиазы у изолятов гркба Septoria nodorum Bork, и их возможной роли в патогенезе септоркоза является актуальным и инэет как теоретическое, так и практическое значение.

Дель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение активности пектолнтических, цэллалолитических ферментов и ксиланззы у изоллтов гриба Saptoriа nodorum Berk, и их возможной роли в патогенезе септоркоза.

Исходя из напеченной цели, были поставлены следующие задачи:

1. Изучить дша&яку роста и споруляции гркба при выращивании его в чистой культуре.

2. Определить шстнвность внутри- и внеклеточные фэржнтов гркба в процессе роста его в чистой культуре.

3. Проследить изменения активности гидролаз в процессе прорастания спор.

4. Провести сравнительное изучение активности фериэнтов у изолятов гркба, различавшихся по зколого-географическому про-исяозяделию и патогенности.

5. Изучить иэшкение активности ферментов и их роль в систеые "растение-хозяин - патоген".

Нзучная новизна и практическая ценность работы. При изучении фитопатогенного гркба Septoria nodorum Berk, наш! впервые был выявлен ряд закономерностей.

Доведен систематический анализ роста гриба S. nodorum и его ферментативной акгиЕности в чистой культуре. Показано, что иаксюальиая активность ферментов полигалактуроназы, комплекса целлвлаз и ксиланазы приходится на экспоненциальную фазу роста гриба (5-7-е сутки). Переход гркба к продуцироЕашш пикноспор сопровождается сшизниэм активности ферментов.

Установлено, что гриб S. nodorum в процессе роста не только синтезирует, но и усиленно секретирует пектолитические, цэллюшлеткческне ферменты и ксилаказу в окружаяцую инкубационную среду. Обнаружена тесная прямая связь мекду патоген-костью различных изолятов гриба и активностью изученных фер-

ментов. Показано, что раствори ферментов, выделенных из мицелия гриба, способны вызывать на листьях повреждения, характерные для септориоза.

Установлено, что инфицирование растений пввницы септорио-зом приводит угв на ранних этапах к значительному усиленно в листьях активности пектолитических и целлвлолкткческих ферментов. йязлзна ползлгеелыгая роль конов Са+4, способных ингиби-ровать активность фэркзнтов, в повкгвнии устойчивости растений пшеницы к еепториозу.

На основе полученных данных разработаны "Рекомендации по направленному синтезу фунгицидов, предназначенных для борьбы с септсрногом". Результаты исследований иогут быть тшсзэ использованы для изучения природы иммунитета и в работах по созданию новых устойчивых к септоркозу сортов пзэницы.

Составлена "Штодика определения активности пектолитических, целлялолитичеасих ферментов и ксилзнааы в культуре фггго-патогенного гркба Soptoria nodorum Berk,¡отгорая мозэт использоваться специалистам:! в области молекулярной биологии и биохимии ш-шутштета растений. .

Апробация работы. Результаты исследований докладывались на научно-теоретических конференциях КИСХЙ (1981, 1S88), конференциях шлодых ученых во ВНШ'.З (1932, 1985), VIII конференции по споровет растениям Средней Азии и Казахстана (Ташкент, 1SS9), I и II Всесоюзном советцднгах по фазиодзго-биохшнчесшм основам гс.2<унитэта сельскохозяйственных растений к грибиш: болезням (Уфа, 1988, 19S0).

Публикации. По катериадаы диссертации опубликовано 6 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 176 страницах ьйзшнописного текста, включает 33 таблицы и 9 рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследований, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка цитируемой литературы и приложения. Список цитируемой литературы вкгшчает 188 работ, в том числе 120 иностранных.

- 4 -

И'ТЕЯШЫ И ШОт ИССЛЕДОВАНИЙ

Объектам исследований слугзгли полученные из лаборатории "Еюлогии септориальньпс грибов" КЮХИ пр!гродныэ гаоляты гркба Soptorla nodorum Bork., различакздэся по зколого-геогра$;Ечес-ютиу происхождении и патогешюсти.

Культуру rpitöa Еыращшали па гадкой и агаркзованной кар-тофельно-декстроаной среде с добавлением тоштного сока (200 г/л) и СаС03 (0,5 г/л). В опытах использовали такие синтетическую глициновую среду, в которую в качестве источников углерода вносили Д-глшозу, свекловичный пзкткн, ксилан га овса, Ka-соль кар0окс1с;этил5;еллшозы (б концентрации 20 г/л), клеточные стенка растед}1й пезшщц, вццелэшых по прописи Е. Onogur (1S78), или кативнув цедлджозу (2 г/л), Уицелий, очищзниый от сроды, и культуральяуо шдкость, обессоленную диализом против дистиллированной воды и сконцентрированную предварительно се-Сздзксом Г-15, а затем з дкал^зных трубках полиэт^онглззолеи КгрЗовакс 40, попользовали в анализах.

При определешш слтяпноогн ферментов в качестве субстратов для полетаЕихгуроназы (KS 3.2.1.15), mijzß-ß-1,4-глякаЕазы (пли Сх-целлнгазы, ES 3.2. 1.4) и кснланаза (BS 3.2.1.8) ис-польвовазк соответственно 1%-пыэ растворы пектина, Ь'а-КЩ и 2Z-m.¿ 1 раствор ¡юнлака. Сб активности этих ферментов судили по прззросту редуцирующих Сахаров в инкубационной сизой, определяема ьзтодои JSareдорна-Яенсеиа (Ьзтоды экспериментальной пжо-гогки, 1Q73). Субстратов длл эгао-^-1,4-глгканазы (или Q-цел-лалаэц, Ш 5.2.1.01) слугшло обезвосрнное хлопковое волокно (Родионова, Ткунова, 1967), для jj-глжозидазы (КФ 3.2.1.21) в качестве субстрата применяли 1,67-10~3 Li раствор п-шггрофенил-ß-Д-гдасгезпиранознда (Родионова и др., 1966). В первом случае активность измеряли по приросту глхкозы в реакционной скоси по иэтоду Л. Е Курзиной (igso). В случае ^-гдксозидазы активность определяли по интенсивности окраски нитрофенола, продукта фзр-изнтативной реакции. Активность ферментов выражали в пересчете на содержание водорастворимого белка (удельная) и на сухой вес (условная) взятой в анализ навески мицелия. Определение количества белка проводили по 0. ELowry et al. (1951).

Активность гидролитических фэрюптов опрэделш такса в

"покоящихся" спора" и через 20 часов послз прорастаягш в среде ТБ!{, содержаний 0,01% Твт,ша-20 а Са/К-фосСатаси буфэрэ рН 7,0 (h:-i»sh7arj et al., 1857) и Ю-4 И и-яонпдозкЗ спирт (Dur&le, Allen, 1971). Крокэ того, экзга.а7!г:еск?т> агсгкзноста определяли в лггстьях ппэющы, шжзгларозаняыс споровой суспеизязй гркба

Действие Фэркзиткнх растворов (еоджх э:-хтректоз га лия) на растения пгэзицы изучали на гшолтфоважas л:стеяя.

Опыты по ейишш CaClg на стзпонъ порагзния растений споровым нискулэ,е>м и ферментньаш ргствсрг-Л! проводили кж ка патентных, ток и на иэолщхшакных листьях.

Результаты исследований подвергали статистической обработке. Шчксленкз среднего арифметического значзнкя (II) и средней квадратичной ошибки (ы) проводили по формулам, описанным P. X Картзшэзьм (1971). Кжаекьиув существенную разность мвшу вариантам опытов (ЮР) определяли по Б. А. Доспехову (1973). Корреляционный анализ проводили, используя програьиу "Statistical Graphics System" (USA; 1S85-198S) для персонального кошгьютера IBM PC/AT.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЦДйПхЕ

Дйнзмика роста гриба Septoria nodorun Berk, а чистой культуре. Кекротрофный патоген S. nodorua в отличие от бштро-фов способен расти и развиваться на питательных средах в чистой культуре. Изучение шрфолого-культуральных н физколого-би-охкмических свойств гриба септорпя позволяет в качой-то мзрз моделировать процессы, происходящке в природе при развитии гриба на растениях. В данных исследованиях использовали изоля-ты 538 Б и 78 Д.

Проведенные исследования показали (рис.1), что наиболее интенсивный рост гриба происходит в первые 10 суток культивирования. В этот период биомасса достигает у обоих изолятов в среднем 0,80 г сухого вензэства После 10 суток культивирования рост гриба стабилизируется и остается практически ка одном уровне до 16 суток, после чего происходит снижение биокассы вплоть до конца опытов.

- б -

II, -Ю7

F;:c. 1. lüiSHSEKä хогарк&а концентрация ökoiscсы (I), спору-ллщш (ед./г сухого вецзства, II) и сог,ер:зн-ш белка (иг/г сухого Еецэства, III) у псолята 538 В гриба S. nodoma при вцраа&танни его в чистой культуре

Аналнз кривой изменения логар;ф.а концзнтрацни бпошсси показал сладуклдэо. В период с пнокуллця« часа к Штри споровой суспензией и до 10 суток культивирования накопление биомассы идет по логарифмической кривой. Б это вреш гриб обладает максимальной удельной старостью роста - 2,2% у изолята 538 Б к 2,0% ч-1 у изолята 78Д. С 10 по 16 сутки удельная скорость роста снижается до нуля, а затем принимает отрицательные значения.

Таким образом, при культивировании гркба Saptori а nodorum Berk, на плотной питательной среде рост его подчиняется закона;,? роста простой периодической культуры (Шрт, 1378). В развитии гриба S. nodorum иожно выделить пять фаз роста Лаг-фаза, или начальная фаза роста, сведена к минимуму, что характерно

для ряда грибов, в частности, бззидкзльшк (Бухало и др., 1978; Канич и др., 1986). Casa экспоненциального (логар::^г?-ческого) роста продолжается до 5 - 7 суток и шкет ьзгап^зль-иуг> удельную с:сорость роста. В конце этой фазы поступает фаза э£-:эдлзппя роста с после дтк^гы переходом после 10 сутет: е фазу стационарного роста, продолгзггзтэоя до 15 суто^ Шслэ пзэ гриб вступает в &~зу отмирания, СЕНзапщто с псчзртззшюм источников углеродного питания (отрицатольниэ значения скорости роста).

ПЬлучэкные показатели удельной скорости роста ( 2,0-2,2 % ч-1) характеризуй1 д&чшй гр:яз как гздлзпно растуцй! по сраз-нэшяэ с ба:ггер:ш!С1, дрогетми и плоскзвкгл

В ходе роста гр:йа S. nodorœi пзизнояпе споруляцкн у обеих иголятов нэсило однотипный характер. Шрг-ос появление спор было отмечено угз на третьи cyrizï. К пятым суткам роста их количество состазляло у изолята 523 Б ¡тргг йрно 16 ¡.«ли. спор/г сухого вещества, a у изолята 78 Л - 65 или. Затем происходило резксе усиление споруллрузг^й способности гриба с доститзнкеи 1{акск<уг'.а на 10 cyrra.

Таким образов. нез^ду спорообразованием у гр:гба S. nodorun и скоростью его роса-с суцэстпует отрицательная г-оррэляция, что отмечалось рядом исследователей eis культурах других кпсроорга-низ>лов, в частности У. Davos, J. H. Ii Thornlcy (цит. по: Пэрт, 1978) у Bacillus.

Показано, что периодов наиболее активного продуцирования белка у гриба септория являетоя згкпоненциалькая фаза развития (рис.1). Подобные данные были получены и в опытах с культурой базидиалыгах грибов (Соломхо и др., 1985; Капич и др., 1SS5).

Наряду с к.оли;естйенныш ï избиениями в содержании бел;-а происходит и его качественное преобразование. Злестрафорети-ческое изучение мицелиального белка позволило установить, что, во-первых, в период с 5 по 10-е сутки происходит уменьшение количества белковых полос: у изолята 533 Б с 14 до 13, а у изолята 78 Д - с 18 до 14, во-втормх, происходит появление белковых компонентов с новыми значениями Rf Таких зсн у ¡cas-дого из иэолятов было обнаругзно по 11. Одной из причин изменений в белковом спектре и обнаружения дополнительных кожо-

- в -

Е0Е70В в C00TB5S Селсз является, по-вздшэму, переход гр:йа к

ИЯЕВЕОй СЕОРУХЙЩШ.

Взь'&кошю активности пеигогвитичоскпж, цедиаогатичвскга &)Т)1:эгяов и кситаягды в процрсее роста rpnSa Soptoria nodarum Eork. в ч;:стсД гтугьтурэ. С процессе^: роста и сдоругящз: у культури гркба S. nodorua tsceo связаны кзюезеел езшеностй Фэр^зетов. В вяспонезцйзлсьную фззу, гаэвдув иаижагьнуо удздьнуо скорость роста, гриб наиболее фер^энтатизно активен. liascEyyu активности гаучепки гидрасаэ приходится, в основном, ш 5-7-е сутки (таЗл.1). Переход гркба к генеративной фазе сьоого развития (продуцирование спор) еопрэшздагтсй сишзпиеы ияшюетк gspsuTOB. В кослэдугцзи уьзеьезнкз количзстса спор посла 10 суток роста пзезт приводить к повторному увеличения

Таблица 1

Кз^зненко уеолькой шттности гадролаз гркЗа Soptoria nodorur;i Bsrk. прз: ецрзцзвааио его б чистой культуре

Саронг Еэграст культуры, сутки

ö 7 10 14

Кзолят 533 Б

Кэса-алактурои&за 2,14Ю, •<

Сх-цзллагаза Oj-цзштгаза, • 10 • ji-глшозкдаза ¡йилаказа

l,06f0,28 0,87+0,11 0,67±0,1С

1,03+0,Еб G,87+3,22 5,63+1,10 9,10+3,22

0,33+0,03 8,lli0,0S 5,40i0,98 4,53Ю, 96

0,24i0,08 6,73+0,11 3,48±0,29 5,7311,33

0,21+0,0£ 6,94+0,82 5,69+0,95 6.05+1.2E

езолят 78 Д

Пэлигалактуроназа Сх-цеялюлаза Cj-щдаполаза, -Ю3 ß-глвкозидааа Ксилаяаза

2,31+0,43 О,7410,23 6,03+3,20 3,60±0,03 8,0811,28

1,79+0,17 0,27±0,10 13,0214,30 3,67±0,15 3,2110,89

1,1410,19 0,19±0,03 7,75+1,42 3,6210,28 3,2410,78

1,04+0,1С 0,1510,0£ 14,76+1,6f 5,10dt0,3i 2,6510,61

- g _

активности энзимов, в частности js-глюкозидазы, Cj-целлюлазы -у обоих изолятов и ксиланазы - у 538 Б. Ifo-видимому, активность пекто- и целлвлолитических ферментов тесно связана с прорастанием спор. Об этом т говорит и тот факт, что молодой мицелий обладает более высокой знзиматической активностью.

Известно, что на синтез микроорганизмами ферментов и их активность большое влияние оказывает компонентный состав среды культивирования, в частности источники углеродного питания (Квеситадзе и др., 1988; Stewart et al., 1983). В связи с этим были поставлены опыты по изучения влияния состава среды культивирования на активность ферментов пектолитического и целдзо-лолитического комплексов гриба S. nodorum. Исследования показали (табл.2), что активность (а значит и синтез) полигалактуро-

Таблица 2

Влияние состава питательной среды на накопление биомассы, содержание белка и удельную активность гидролитических ферментов гриба Septoria nodorvm Berk. (М + м)

Шказатель Глициновая срела

ВДА + глюкоза + ксилан

Изолят 538 Б

Сухая биомасса, г 0,51 + 0,11 0,18 ± 0,04 0,21 i 0,02

Белок,мг/г сух. вещ. 19,70 + 0,72 29,24 ± 7,97 16,46 + 4,35

Шлигалактуроназа 0,63 ± 0,11 0,87 ± 0,45 1,04 ± 0,51

Сх-целлюлаза 0,52 ± 0,14 0.03 ± 0,03 0,37 + 0,32

Cj -целлюлаза, :103 1,05 ± 0,05 0,52 ± 0,03 0,80 + 0,36

р -глккозидаза 4,45 + 0,99 3,44 ± 0,23 10,62 t 3,82

Ксиланаза 5,18 t 1,65 10,02 f 1,99 32,95 ± 14,71

Изолят 78 Д

Сухая биомасса, г 0,49 + 0,01 0,14 + 0,01 0,14 i 0,01

Белок, мг/г сух. вещ 24,50 + 2,19 10,51 + 1,29 11,34 + 2,53

Шлигалактуроназа 0,94 + 0,23 3,36 t 0,71 4,36 ± 0,16

Сх-целлюлаза • Ю3 0,27 t 0,12 0,0 0,96 ± 0,49

Cj -целлшаза. 0,40 t 0,11 0,56 + 0,28 1,55 ± 0,34

р -глккозидаза 2,54 + 0,22 4,01 ± 0,83 7,37 ± 1,74

Ксиланаза 1,46 + 0,52 0,48 ± 0,48 20,08 + 5,74

казы, комплекса целлюлаз и ксиланазы у гриба Septoria nodorum копет проявляться и при выращивании его на средах, не содержащих специфических субстратов (пектин, Na-КЩ, целлюлоза, кси-лан). Подобный факт описан и для микроскопических грибов (Ло-банок,1977). Как было установлено, из перечисленных субстратов только ксилан является эффективным индуктором ксиланазы и в изныаей степени jj-глюкозидазы. В связи с чем только ксиланазу кокно, по-видимому, отнести к числу индуцибельных ферментов гриба S. nodorum.

Исходя из предположения, что гриб S. nodorum для успешного внедрения, и последующего распространения в тканях растения-хозяина может и должен, видимо, секрэтировать изучаемые гидролазы в окрулаюЕэе пространство, были проведены эксперименты с использованием гадкой картофельно-декстроэной среды, в которой периодически проверяли активность ферментов. Исследования показали (ркс. 2), что гриб S. nodorum в процессе роста не только синтезирует (судя по изменению активности), но и усиленно сек-рэткрует пектолитическке, цедлилолитические ферменты и ксиланазу в окружающую инкубационную среду.

Шксшлум активности внеклеточных ферментов приходится на вторые сутки культивирования, что, видимо, может быть связано с начальны;.! ростовым процессом септории, как было показано на Культурах других грибов: Trichoderma vir¡de (Volfova, Kysliko-va, 1981), родов Aspergillus и Gliocladium (Klappach et al. , 1984). Высокая активность ji-глюкозидаэы и на 10 сутки роста гриба кокет быть объяснена, по всей видимости, тем, что данный фермент гидролизует конечные продукты расицепления целлюлозы Сх- и Сj-глюканазами (Родионова, 1981).

. Механизм проникновения патогена в ткани растений является одним из наиболее вагаых аспектов проблемы взаимодействия растения-хозяина и микроорганизма. Как было показано на примере других патогенов, в данном процессе ватаую роль играет гидролазы, разрушающие растительные клеточные стенки (Reddi et al., 1981; Nagar et al., 1984). У гриба S. nodorum процесс проникновения занимает (в зависимости от внешней температуры) от 4 до 48 часов (Horsten, Fehrrnarm, 1980). Поэтому представляло интерес выяснить, как изменяется активность пектолитических и цел-

ед./мг белка

2-1

0.6-

1.6-

0

1 -

3

BS- 5-е

]- 2-е

ШШ- 10 сутки

Рис.2. Удельная активность внеклеточных ферментов полигалак-туроназы (1), Сх-целлюлазы (2), Cj-целлшазы (3, -10^), ji-глюкозидазы (4) и ксиланазы (5, -10) изолята 538 Б гриба Septoria nodorum Berk.

.^политических ферментов в процессе прорастания пикноспор гриба септория.

Для исследований были взяты два изолята гриба 5. nodorum, различающиеся по патогенности: 176 Е (средняя степень поражения 9 сортов пкеницы в полевых условиях - 47,9%) и 25 ДЖ (степень поражения - 23,7%).

В результате проведенных исследований установлено, что покоящиеся споры изолятов 176 Е и 25 ДК обладает одинаковой удельной активностью полигалактуроназы, Cj-целлголазы и ß-глюкозидазы. в то же время активность Сх-целлюлазы и ксиланазы у изолята 176 Е примерно в два раза была выше, чем у изолята 25 ДЖ. В процессе прорастания спор у изолята 176 Е повышается активность всех ферментов, особенно полигалактуроназы (в 2,3

раза) и -целлюлазы (в 2,8 раза), а у иэолята 25 ДЖ - только у полигалактуроназы (слабо) и Сх-целлюлазы.

. Наиболее интересным, на наш взгляд, является то, что прорастание пикноспор сопровождается усиленной секрецией белка и ферментов в среду инкубации (рис.3). Удельная активность пектолитических и целлюлолитических ферментов при этом возрастает в среде в несколько раз как у изолята 176 Е, так и у изо-лята 25 да Однако и в этом случае первый изолят несколько преобладает над вторым по увеличению активности ферментов кси-ланазы и С1 -целлшазы и более значительно по полигалактурона-зе. Активность ксиланазы в культуральной среде изолята 176 Е была в 2,2 раза выше, чем у изолята 25 да, у которого, в свою очередь, преобладает активность Сх-целлюлазы (в 2,8 раза).

CZ1-"покоящиеся ЕЯ-прорастаю- £223 - среда

споры" щие споры инкубации

Рис.3. Изменение удельной активности ферментов полигалактуроназы (1, >10), Сх-целлюлазы (2), Cj-целлюлазы (3, -103), ß - глюкозидазы С4, -10), ксиланазы (5, • 10) и содержания белка (6) в процессе прорастания спор изолята 176 Е гриба Septoria nodorum Berk.

- 13 -

Таким образом, в результате исследований установлено, что прорастание спор грзй5а S. nodorum сопровождается активным продуцированием пекголитических и цаллюлолнтических ферментов и усиленной (в несколько раз) секрецией их э 0Kp7?assqya среду. Данный процесс зависит от степени патогеяностн изолятов, что, по-видишму, шлет иметь особенно Оольгое значение во время прорастания спср на листьях растения-хозяина

Активность пвктодитнческшЕ, цсдлпаодлтических ферментов я ксиданазы у раздишгах изолятов гриба Saptoria nodorua Bark. В целях поиска возможной коррелятивной свясн аэадг патогеннсстья и.способностью возбудителя септорноза к синтезу гидролитических фермзнтов определял! активность политалактурокаэн, С^ - н Сй-целлтаазы, р -глзскоаидазы и ксиланааы у изолятов гриба S. nodorum, различапцдхся по кюлого-геогра^ическсиу проиехоя-денкэ и патогешюсти.

Наиболее патогенными в полевых усдозияг были кзоляты 101 Д (средняя степень поратшя растений 60,3%), 638 Б (48,82) и 175 S (47,9%). Напротив, изодяты 25 ДЗ и 143 Г поражала сорта гшэницы в среднем всего па 23,7 и 27,9% соответственно. Остальные кзоляты занимали промежуточное полопеяиэ, вызывая степень порагэния растений от 36,5 ( 78 Д) до 42,1% (83-43). Пато-генность изолятов определяли сотрудники лаборатории "Биологии септориальных грибов" (ЕИЗХИ) по проценту пораженной поверхности листьев девяти сортов районированной пшеницы. Учет проводили на 10-14 день после кнокулировэкия растений в фазу колошения споровой суспензией с концентрацией 4-10 ® спор/мл кз расчета 200 mJtâ посевов.

Вшеэ отмечалось, что наибольшей гидролитической актив-ностьо обладает 5-суточная культура, поэтов использовали мицелий данного возраста (табл.1).

Доведенные исследования показали, что количество белка и удельная активность ферментов у различных изолятов колеблэтся в довольно широких пределах (табл.3). Так, содержание белка в расчете на сухой вес мицелия изменялось в зависимости от изо-лята от 5,98 (101 Д) до 22,37 мг (25 ДЯ). Активность полига-лактуроназы изменялась в пределах от 0,63 (143 Г) до 2,71

Таблица 3

Удельная (ед./мг белка) активность пектолитических, целлзололитических ферментов и ксиланазы у 5-суточной культуры гриба Septoria nodorum Berk.

Содержание Активность ферментов:

йзолят белка,мг/г

сух. веса Полигалак- Cj -целлю- Сх-целжн j^-глюкози- Ксиланазы

туроназы лазы, -103 лазы дазы

538 Б 9,45+0,97 2,71+0,24 2,78+0,44 1,04+0,22 49,17±0,91 3,92±1,42

78 Д 16,33+1,56 2,48+0,54 l,16t0,23 1,43+0,51 24,60+1,75 6,59+3,41

83-6 12,б8±0,75 2,44i0,13 3,45*0,62 1,12+0,11 55,46t4,00 4,14+0,86

101 Д 5,98+0,08 1,86+0,38 3,55+0,01 0,59+0,16 61,18+2,67 9,19+1,53

83-43 14,13+1,77 1,82+0,39 2,02+0,24 0,4б±0,09 35,02+2,78 5,24+0,49

106 Ж 11,05+0,88 1,68+0,74 1,58±0,39 0,41+0,31 55,20+2,46 2,76+0,49

176 Е 17,82+1,96 1,57+0,64 2,36+0,20 0,77f0,22 36,52t3,39 4,89+0,80

а?-84 16,37+0,46 1,27+0,30 1,80+0,16 0,744.0,19 40,40+4,82 б,29±1,01

155 Е 19,07+0,49 0,97+0,52 0,85+0,10 0,11±0,03 22,90±0,96 2,86+0,51

25 ДЖ 22,37+0,40 0,9240,26 2,05+0,09 0,23±0,15 34,70+2,80 2,78+0,94

143 Г 19,90+1,92 0,63+0,26 l,63t0,28 0,57±0,34 24,02±2,54 5,37±0,80

(533 Б), С^цэлсшазы - от 0,85-Ю3 (155 Е) до 3,55 - 103 (101 Д), Сх-цзллалазы - от 0,11 (155 Е) до 1,43 (78 Я), ß-rsmoea-дезы - от 22,9 (155 Е) до 61,18 (101 Д) и ксиланазы - с? 2,76 (103 S) до 9,19 (101 Д) ед./ыг белка.

1м) данных, прэдстааленкых в табл. 3, видно, !!Т0 накбо£ЗЭ зжокой активностью всех наученных фермзатов обладает moxin; ICI Д, 533 Б и 83-6. Близок к гпк! п таггой тао.'-'ят, как 78 Д, хотя и уступает перзш в активности СА-цбллзс.-гзы и ß-г^хюэи-даза Схз&т шстишюеть фзрмэятоз отмечена у иэодзтоз 1Б5 Е и 143 Г. Шяижвнная актизкссть гюлэташктуроназы, Сх-цздяаяазы и ксиланазы сбяарряэка и з кудзтуре изолята 25 ДЕ.

Такям образом, праведоЕниэ'дагап® свидетельствуют о том, что прпроднкэ ЕЗОЖ7Н гркба S. ncdorun могут Снть дкф^ерешшро-заны по активности пегсолзггических, целммюлитических фер;..ея-тоз и шшназы. Устяпоалзго, что наиболее патогенные индагы 101 Дл 538 Б обладая? я более высокой фертантатизной актив-востьо, а слгСолатогекжу кзоляты 143 Г п £5 ДЗ эяачитаяьяо уступает кн и в активности беркэятов полигалакгурояазн, Cj--целлдлзсы м ^-глкжзнлазы ( тсбл. 1). Связь г:оглу патсгон-

Тгбляща 4

Патогеж-ость и активность фзр.'.:ентоз пзолятов гркба Soptcria

nodorun Berk.

1ЙСЛЯТ Патогекпость, средняя на 9 сортах, % Удельная активность ферментов:

полигалзк-туронгзы С рцеллю- ^ лазы, • 10 ß>~ Г ЛЕЙо-з ид азы

101 Д 50,8 1,86+0,38 3,55+0,01 61,18+2,67

538 Б 48,8 2,71+0,24 2,78+0,44 49,17+0,91

143 Г 27,9 0,63+0,26 1,63+0,28 24,02+2,54

25 ДЗ 23,7 0,92+0,26 2,05+0,09 34,70+2,80

*зна мевду патогекностью и активностями полигалактуроназы (r-0,67), Cj-целлияазы (г-0,66) и jy-глхкоаидазы (г-0,70). С другими ферментами (Сх-целлзолаэа и ксиланаза) патогенность коррелирует несколько меньше (соответственно г-0,34 и г-0,47).

Изучение Фррьюнтов пектолктического и целлвлолитического кошлексов в системе "растение-хозяин - патоген". Активность поктолитических и целлзололитических ферментов определяли в листьях псэницу Саратовская 29, инокулированпых изолятом 176 Б гриба S. nodorum. - Из данных, представленных на рис 4, видно, что заражение листьев пшеницы септориозом ужа на 3-й сутки приводило к резкому увеличению активности полягалакгуроназы, Сх-целлюлазы, Cj -целлшазы, ji-глшозидазы и шнее значительному усиленно активности ксиланазы. В дальнейшем активность ферментов практически не изменялась, за исключением Cj-цэллю-лазы, активность которой на 14-е сутки снижалась в несколько раа. В настоящее время трудно сказать, связано ли это усиление активности фериектов с реакцией растений на патоген, или является результатом роста и развития гриба в тканях растений. Иначе говоря, принадлежат ли ферменты, активность которых мы определяли, только растению-хозяину, или в изменении активности гидролаэ есть вклад обоих партнеров. Наиболее вероятно, видимо, последнее, так гак активность ферментов, как было показано, проявляется и в неинфицированкых листьях, и в прорастающих пикноспорах. Ясно одно, что уке на первых этапах взаимодействия возбудителя септориоза и растения пшеницы происходят значительные изменения в активности пектолитических и целлюло-литических ферментов, что, хотя и косвенно, говорит о их большой роли в процессе патогенеза септориоза.

По данным ряда исследователей, растворы гидролитических ферментов, полученных из культур фитопатогенов, могут вызывать те ко симптомы болезни, что и сами возбудители (Suresh et al., 1984; Coll тэг, Keen, 1986). Аналогичные результаты были получены и у гриба Ascochyta pisi, который вместе с грибом септо-рия относится к одному семейству Sphaeropsidaceae (Успенская, Решетникова, 1975). В связи с этим представляло интерес изучить возможность непосредственного действия ферментов гриба

5. псс1огип на растения.

Проведенные исследования показал:! (рис,Б), что ферьькткш растворы, внде^ниэ из шздэлая гркба Б. пойопна, при невесэзпп на листовую поверхность еьгзкпозт поравэши, сходиг» с сншзо-чамя габогезаюя раетмнй ссятор;юзо?£ Щ>а ревЕздвпаи фзркэпт-ных растворов прездгходвго сяшажге сгекэка Парагвая, ггншэгг-зкровашшз фзргаптн иэ скагнзалп язпянез га гпетья пшпагь

Ее езкгяйэно, что а водных зястрзлтах ш изгдозя гргйа 3. поНогии йогу? присутствовать квк кткшзга, те,'? и другие гпд-ролззн и тем по ьзкге роль некто-, вэгазгзгягптеюш Сзр'.-зптов и ксиланБзы (хотя бы в силу споцфзи гас действия) в образовог ейй не:тро.?св на лпсгьяп пгзпгз^ па ссповагпз? пол^'эншй дэнннх

ед./мг белка

С 7 14 3 7 14 3 7 14 3 7 14 3 7 14 сутки I I- контроль ЕЯ- опыт

Рис. 4. Изменение цельной активности ферментов пояигалактуро-нааы (1), Сх-целлюлазы (2), С^-целлвлазы (3, .103), р-глгоозидазы (4, -10) и кеиланазы (5, • 10) в листьях пшеницы Саратовская 29, пораженных септориозом

20 п

176 S

25 m

Разведен;« раствора фарментои:

£23 - I LT- - 1/2 CD - I/Ю CD - Споровый

инокулюм

Fue. 5. "Степень поратзгош" изолированных листьев тгошщь: Саратовская 29 под действием фер?х»ятпкх экстрактов из мицелия гркба Soptoria nodorum Вэгк.

очевидна. Есе это позволяет предполагать о преимудзстненно энзгаатическом пути проникновения гркба S. nodoruin в ткани рае-тешш-хозяина.

В ряде работ было показано, что, пршзняя те или инка ве-Еэства, К01ЕЮ индуцировать у растений устойчивость к заболеваниям. Так, инкубация колеоптилей ячьэкя в растворе 10 мМ Са(НС^>2 или СаС12 повышала их устойчивость к мучшктой росе (Bayles, Alst, 1987). Вырагзязание проростков тыквы и подсолнечника в культуре при недостатке кальция усиливало их восприимчивость к Sclerotinia sclerotiorum, причем обратно пропорционально содержанию кальция в питательном растворе (Chrominski et al., 1987). Шдобныэ данные были получены и для сои против гнили корней, вызываемой грибом Macrophomina phaseolina (Chakraborty et al., 1989).

- 19 -

Цроводэпкнз в этой свяэз ezsci опыты гак па цзйых рвотопя-ях, так и на кзсшровазшзг жстьяз хтсохш уотаговота. что обработка растений пссггщы р?.зтзорсм г.тс{.::с?йго ггэльцяя nprso-дп? к сБпгэшэо сгеязпд порапжя пезппцу спорта seohtessü П&кчом, в еавпсЕшля о? сорта, стэного» кщукц^л пэсзвянзеь по-разноцу (рпс.6). Е&кгсжапэы явлются отпосзтзлпо устойчз-зый к сопторпозу сорт Kaston, на вогсрои код дзйстаием CcOl£ происходило усиление порагзнпл.

CönaSoTia растенгй рсстпорси föClg приводит, как было установлено, к зкачигвльЕолу сжезяю я поврядагзго дэЯижяя Оерязктянх экстрактов ка кгох-фовзлшэ .тзхья рагетша сортов

.um 12т

1 2 3 4 б в

I I - контроль ЕП - опыт

1 - Кзрабглгг-сская S5; 2 - Сэратовскгя 29; 3 - Саратовская SS; 4 - Саратовская ¿6; 5 - Ульбкн:са 25; б - ¡'testen ,

Рис. 6. Влияние СаС12 ка степень пора:зния изолятсм 176 Е гриба Soptoria nodorum Berk, изолированных лгетьез пшеницы

ЕЕзшща (рис. 7). Та:?, на сорте Саратовская 23 степзнь порзхз-кка сшшалась в 1,2 (езолят 176 Е) и 1,1 раза (25 да), ка сор-\е Нзрабалщгскад 85 - соответственно на 23,1 и 33,02. Особен® гхупеолонсв ызевдрун^зз влжнйэ коков кйвьцйя на устойчивость проязяйжь ка сорте УльОпика 25: в 11,2 (175 Е) и 4,8 раза (25 ЛдЬ Ка сорте Каг&оп эффекта гагкОкрозанЕЯ действия гидродзз, зеттрагировакных ка ыкцелкя нзолята 176 Е, обнаружено не было, ^тэьатичэсккй анализ по:сгзал, что кезду иигкЗиру-5гда действием ионов кальция ка степень поракэяия, вызываемого инфицированием листьев споровым кнокулагои к обработкой их фэр^энтнкм экстргаагом, существует теснал связь. Коэффициенты торрзллщс! равны 0,69 и 0,26, соответственно для нзолятов 176 Е И 25 Е2.

ш

СИЗ - контроль Ев - опыт

1 - Карабалыкская 85; 2 - Саратовская 29; 3 - Саратовская 36; 4 - Саратовская 46; 5 - Ульбинка 25; 6 - КазЬоп

Рис. 7.

Влияние СаС12 на"степень поражения"раствором ферментов изолята 176 Е гриба БерЬоПа пс^огшп Вегк. изолированных листьев пшеницы

- 21 -

Анализ лхтературы показывает, что пологитегьпый Е$фэкг ионов кальция на устойчивость пиешщы к еепторкозу штат быть связан, во-первых, с увеличением еэсткссти клеточл:зх степс;:, поскольку предполагается, что дзухззлэятнкз катзояы, гггзпьи образом кальций, образуют поперечные связи кзсту полнгалакту-рсговкии цепоч*Е)я пектина, придавая тем сами» клеточкой стон-га езсткссть (Coli, Всппэг, 1956; Ordin et al., 1S57; Älbars-hom, Всппэг, 1959), что позволяет кы подвергаться шншйду псадэ£стз;аэ фэр1:ентоз (Chro^inski et al., 1037; Eoto, 1SS9). Л (или), еэ-вторых, путеи непосредственного кнгябярозажя слг-тйзностн гядрэлаа (Иэтлпцкий, Васильева, 1GS9; Kurien, Stalzis, 1979; './Шз, Ri-глу, 1С£С; Konno öt al. ,1084).

А Л *

Лркяедепжгз двнккэ поэзоляэг вскзчять, сто пвкгоеихаява-кгэ, цэллйлолячр©с:в!9 Сзр^элты и мсилаизза грг^За Scptoria по-dorun Berk, играет одну пэ ссгозннх релей и патогенезе септо-рлоза пгишда, Згог вквод оспоЕывается иа елэду5~пх полэгэняяж

1. В процессе роста в 'ехтой '{ультуре грмб Ssptoria nodorum Berk, синтезирует лаяние гидро^гэи. Повкгзнкой £ер;.;зн-тативной авткэность» обладает пологой расгуцдй гзщглнй, при si'oi! он усиленно сэкретирует их в окружи^» среду.

2. Прорастание пикноспор гриба с0п>020::~аэтся синтезом и секрэцкей гэдролаз з среду культивирования.

3. Гйлду актигксстыо фэрмектов к патогенностзэ кзолятов гриба септоркя существует прямая гавксишсть.

4. Заражение растений пиекицы септоряозом приводит к рэз-кону увеличению вкятпеети данных Сзрнэятсз.

5. Растворы ферментов гриба S. nodorum вьацЕзвт на изолированных листьях характерны» для возбудителя сиштош ееСолэ-вания. Величина порагэкия находится в прп;'оЯ зависимости от концентрации ферментов. Ийактивирозанннэ фер^эптн подоблкм действием не обладает.

6. Обработка растений раствором СаС^ приводит к сштанна степени поражения изолятамя гркба ка интакгннх растениях и У!«кьсает поврездзш©е влияние ф2р$5эятов иа кволяроватше листья.

- В2 -

шводы

1. Установлено, что рост гркйа Soptoria nodorum Bark, па плотной питательной срзде подчиняется закона« роста простой периодической культуры. Гйтвэ и седьмые сутки соответствует експопеясказыюй фазе роста, 10-е и 14.-е сутки - начал?- и окоачашш стационарной £ааа Кэ 7-е сутки приходится шкси-ьальное содгр&гях:;) белта, на 10-е - ка:йолызая споруляцкя, ш-шазальнгя - на Б-е сутки роста.

2. Ь^ксталькал активность фэрдосЗзз подкталактуронааы, коетлэ.чса цзллжаз и каиханазы грнба прлходстся на Б-7-e сутки, то есгь на экспоненциальную фазу, характеризуггдтсся нзкбо-лее высокой удельной скорость» роста патогена. Переход гркба к генеративной фазе своего развития сопровождается снивзккеи активности фзр:актов.

3. Шказако, что рост гркба S. nodorur, на синтетической ГЛ1ЩНН0В0Й сроде с использованием в качестве источника углерода глхкоза (20 г/л) сопровождается проявлением достаточно высокой активности полигалактуронааы, целлюлояигкчэских фериен-тов (аа исключением Сх-целлшазы) и ксилаказы. фи заыоне глшэзи пектияоц, На-КЩ, иативной цзллшозой или кышшом гриб растет только при использовании в качества источника уг-лзрода гаилака. Цри этом резко усиливается активностьyj-глйга-зидавы и особенно ксиланазы.

4. Прорасташю пккноспор гркба S. nodorutf сопровоащзется активным продуцированием пектолктичэских и целлалолзгтическж ферызнтов и усиленной секрецией их в окружающую . кнкубацконнув среду, Ланкьй процесс зависит от степени патогенности изолятоз и, по-видимому, цоазт юить особенно больше значение бо время прорастания спор на листьях растешш-хозяина.

б. Установлено, что наиболее патогенные изоллты 101 Д и 538 Б обладал? и более высокой активностью гидролитических фер&знтов, особенно полигадактуроназы и ^>-глшэзидазы, а сла-бопатогеннш изоляты 143 Г и 25 М значительно уступает км к в активности данных ферментов. Это дает основание предположить, что среди гидролаз некто- и целлзололитического комплексов ведущую роль в патогенезе септориоза играют полигалакгуроназа и

^-глякозида&а.

6. Зарад&ПЕэ растений птаапцы селториозом утл ка третьи сутки приводит -л ускленкэ б лдагьях активности ползгалэктуро-назы, 0к~, -долгнзаз, р -глаисзкдззи и мэяге значнтэльлс.чу увеличению активности ¡ссилгн'-зы.

7. Растворы фершятоз, зыдегашшк яв мвцвдпа гргЗа 3. пойогш?, при нзяеаепкп на ¿истсауэ позэргнссть зызувеяг по-ралзЕия, сходкыз с сиштошки Е&боловалкя растений еезторЕо-зои. Д )И Р28В8Д9НЯ2 ферУЗПТНЬЯ рЗСТВОрОЗ ПРОИСХОДИТ СШП31Ш8

степени поракэшя. Ияакгшшрэгапшгз фзр!анты но оказызато ваа-янкя на лггстья гтьэчгщн.

8. Обработка раегевпй псэнкци раствором глор:»того каль-цяя приводит к позкзэшзэ иг устойчивости к септоркозу. Снпгэ-пке степени поражения, зквквавшго гпокулзиои, 'яабгэдадз гак на янтактяых растениях, таг? я ка ягогкровавякх листьях. Шгя-б-фргрэ действие ионов ;сальцгл проявляется и з относзипя фэр-уэнтяыз ¿¡¡сстржгов.

ЕРЗДЯХиШИЯ

Получекккэ деянкз о рол! вкшлэкса я©кго.Епг:гаеск;Ес, лаголетлчесгенх ■^•эрз'зптоз и каклзпазы в патогепззе септорноза яспгоетвг нам швсазать сладуггкэ прэддмаэЕЖй

1. Гэдролатичесхке фзрмэкты, являясь детерчанаатеьи азтогенностк всвбуд!ггел>й сэпториоза, (лгут слукгть з качестве объекта действия при поиска новых фунгицидов. 5унгицид1гое дзйствнэ новых средств вагзгсы растений шгвт Сыть направлено па подавление синтеза данных фершктов, ингибированке га активности и, опосредованно, на упрочение неточных стекок растений.

2. В ответ па внедрение патогена растение вырабатывает стратегии за^ггы от него, составной частью которой является синтез вецзств, бдояирущп работу клячзвых в ргэвжм болезни ферментов. ГЬяск и изучение растительных ингибиторов активности и синтеза некто- и цэллзололятических фэр-'егггов позволят просадить ©»химический отбор исходного селекционного матерка-га для выведения устойчивых к септоргозу сортов пгэяица.

Список рсбот, опубликованных по тог/.з дкссертащш:

1. Ахизтов a.a., Кобыльсгагй Г. е Кзкененкэ шсгкеьосги по-лигалакяуроназы у гриба Soptoria nodorum Berk. в процессе роста его па плотной питательной среде // Тезисы докладов научно-теоретической конференции КйСХИ, ч. II. - пгт Гвардейский, 1981. - С. 25-26.

2. Кобыльский Г. IL , Ахьютов А. А. Гэдролстнчгсгаге феркгэкты &ггопатогешшго гриба Soptoria ncdorusi Bork. I. Рост, споруля-ция и содержание белка в культуре гриба // Вопросы задеты сельскохозяйственных растений и г квотных от болезней: Сб. йа-учшх трудов К-ЮХИ, Ч. I. - Ал>!а-Ата, 1839. - С. 61-68.

3. /штатов А. А., Кобшшсккй Г. И. Гидролитические Серпенты фитопатогенного гриба Septoria nodorum Bork. II. Активность полигалактуроназы, андо- и sitso-ji -1,4-глюканаз, ^-глшозидазы и ксиллнааы в 1сультуро гр«ба // Вопросы эая^гты сельскохозяйственных растений к кзшотньас от болезней: Сб. научных трудов т:ОХИ, 4.1. - Ажа-Ата, 1989. - С. 68-75.

4. Ахштов А. А., Кобыльский Г. К. Активность пектолитичее-ких и целлплолитических ферритов у различны:: изолятов гриба Septoria nodorum Berk. // Тезисы докладов YIII конференции по споровым растениям Средней Азии и Казахстана. - Ташкент, 1989. - С. 126.

5. Ахштов А. А., Кобыльский Г. IL Влияние источников углерода на активность гидролитических ферментов у фитопатогенного гриба Septoria nodorum Berk. // Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана. - Алма-Ата, 1989. - N 6. - С. 83-84.

6. Ахметов А. А., Кобыльский Г. К Изменение активности пектолитических и целлюлолитических ферментов в процессе прорастания пикноспор гриба Septoria nodorum Berk. // Скзиолого-биохимические и генетико-селекционные основы иммунитета сельскохозяйственных растений к грибным болезням: Тезисы докладов научно-практической конференции. - Уфа, 1990 (в печати).