Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Патогенетическое значение оксида азота при геморрагической лихорадке с почечным синдромом

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Патогенетическое значение оксида азота при геморрагической лихорадке с почечным синдромом"

На правах рукописи

ГАЛИЕВА АЙГУЛЬ ТАГИРОВНА

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОКСИДА АЗОТА ПРИ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКЕ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ

03.00.04-биохимия

14.00.05 - внутренние болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Уфа-2004

Я

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации»

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Феликс Хусаинович Камилов доктор медицинских наук, профессор Дина Халимовна Хунафина

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук, профессор Валерий Евгеньевич Высокогорский доктор медицинских наук, профессор Раиса Мугатасимовна Фазлыева

Ведущая организация - Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации»

заседании диссертационного совета Д 208. 006. 03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации» по адресу: 450000, г.Уфа, ул. Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного . учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации».

Автореферат разослан 3 февраля 2004г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук,

Защита диссертации состоится

марта 2004 г. в

часов на

профессор

Гульчагра Ханифовна Мирсаева

2004-4

20301 з

Актуальность проблемы

Среди природноочаговых заболеваний геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) занимает особое место в связи с тяжестью поражения многих органов и систем, развитием опасных для жизни осложнений (Б.З. Сиротин, 1994; P.M.. Фазлыева, Д.Х. Хунафина, Ф.Х. Камилов, 1995; Г.Х. Мирсаева, P.M. Фазлыева, Ф.Х. Камилов, Д.Х. Хунафина, 2000). Название, предложенное М.П. Чумаковым (1979) для обозначения острой зоонозной вирусной природно-очаговой инфекции, отражает основной характер действия хантавируса, включающего поражение сосудистой стенки и последующих нарушений системы гемостаза. Частота различных проявлений поражения сосудистой стенки составляет от 67,5% (А.И. Зеленский, 1979) до 91,3% (Б.З. Сиротин, 1994). Геморрагический синдром является также наиболее ярким и частым признаком болезни и может быть одной из причин летального исхода (Б.З. Сиротин, 1994; 1995).

В интенсивности проявлений васкулярных нарушений имеет значение степень повреждения эндотелия и повышения проницаемости сосудов (Ю.Л. Федорченко, 1989; И.М. Давидович, 1993), изменения в системе внутрисосудистого свертывания крови и микроциркуляции, активация перекисного окисления липидов, кининовой системы и иммунохимические сдвиги (Б.З. Сиротин, 1981; Г.Х. Мирсаева, 1992; P.M. Фазлыева, Д.Х. Хунафина, Ф.Х. Камилов, 1995), приводящие к развитию ведущего синдрома ГЛПС - диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови.

В последние годы возрос интерес к проблеме иммунопатологии, что обусловлено установлением важной роли нарушений иммунной системы в патогенезе значительного числа болезней человека.

При ГЛПС установлены изменения следующих иммунологических показателей: содержания иммуноглобулинов А, М, G, Е (Г.И.Астахова и др., 1986; Г.Ф.Амирова, 1994; ОААлексеев, 1998), активности Т-клеточного звена иммунитета и субпопуляции лимфоцитов CD3, CD4, CD8, CD72, CD 16, CD95 (Б.Ш. Янбаев, 1997; Д.А. Валишин, 2000), цитокинов ИЛ-1(3, 2, 4, 6, 8, 10, 13, ИФНа, у, ФНОа (М. Linderholm, 1996; О.А.Алексеев, 1998; Д.А.Валишин, 2000; Г.Р.Абдулова, 2000). Среди инициальных повреждающих сосудистую стенку факторов в литературе обсуждается значение иммунных комплексов (Р.М. Фазлыева, 1988; X. Ли и др., 1991).

Защита организма от инфекционных агентов в значительной мере связана с макрофагами, которые могут действовать как самостоятельно, так и в совокупности с другими клетками иммунной системы, обладающими способностью секретировать цитокины. Одним из важнейших эффектов активации клеток макрофагального звена и изменений цитокинового статуса является продукция оксида азота (NO).

Установлено участие данной молекулы в генезе вазодилатации, гипоагрегации тромбоцитов, цитостатической/цитотоксической активности макрофагов, апоптозной гибели клеток (Н.А. Виноградов, 1997; В.П. Реутов, 1998; Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков, В.П. Реутов, 2000; И.В. Зотову Д.А. Затейщиков, Б.А. Сидоренко, 2002).

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ I БИБЛИОТЕКА ! СПетервт Q у {

Таким образом, возможность участия молекулы оксида азота в патогенетических механизмах развития основных синдромов ГЛПС несомненна, что определяет необходимость изучения роли этой молекулы в указанных процессах с целью дальнейшего понимания патогенеза заболевания.

Цель исследования

Определить значение оксида азота в патогенетических механизмах развития основных проявлений ГЛПС в зависимости от характера течения заболевания.

Задачи исследования

1. Оценить динамику содержания; конечных стабильных метаболитов оксида азота — нитрит/нитратов в крови больных ГЛПС в зависимости от тяжести течения и периода заболевания.

2. Изучить динамику изменения артериального давления у больных по периодам заболевания, и провести корреляционный анализ с уровнем конечных стабильных метаболитов оксида азота.

3. Провести корреляционный анализ связи уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота и показателей сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза по периодам заболевания в зависимости от формы тяжести ГЛПС.

4. Определить состояние цитокинового профиля провоспалительного и противовоспалительного действия по периодам заболевания, провести корреляционный анализ связи уровня оксида азота и ИЛ-1р\ ФНОа; оксида азота и противовоспалительного цитокина ИЛ-4.

5. Определить функциональную активность фагоцитарного звена хемилюминесцентным методом и провести корреляционный анализ с уровнем конечных стабильных метаболитов оксида азота по периодам заболевания различной формой тяжести ГЛПС.

6. Провести корреляционный анализ уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота и рецептора Fas, ассоциированного с экспрессией CD95-субпопуляций лимфоцитов, индуцирующего апоптоз.

7. Оценить содержание гормонов АКТГ и кортизола по периодам заболевания ГЛПС при различной форме тяжести и провести корреляционный анализ связи уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота и кортизола.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Важным патогенетическим звеном развития геморрагической лихорадки с почечным синдромом, способным быть причиной проявлений основных клинических синдромов заболевания, является усиление продукции оксида азота. Наличие статистически значимой обратной корреляционной взаимосвязи между конечными стабильными метаболитами оксида азота в крови больных ГЛПС и артериальным давлением, особенно при осложненном течении заболевания, свидетельствует о значении оксида азота в патогенезе вазодилатации и развитии инфекционно-токсического шока.

2. Обнаружение прямой корреляционной связи между уровнями конечных стабильных метаболитов оксида азота в крови и фактором Виллебранда, и обратной связи с АДФ-индуцированной агрегацией тромбоцитов указывает на участие оксида азота в патогенезе геморрагического синдрома при ГЛПС.

3. Повышение уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота при ГЛПС указывает на активацию неспецифической защиты организма, что подтверждается обнаружением прямой корреляционной взаимосвязи между уровнями конечных стабильных метаболитов оксида азота в крови и провоспалительными (ИЛ-1(3, ФНОа), противовоспалительным (ИЛ-4) цитокинами, интенсивностью хемилюминесценции крови, СБ95+ субпопуляцией лимфоцитов.

4. Наличие прямой корреляционной связи между уровнями кортизола и конечными стабильными метаболитами оксида азота в крови больных ГЛПС указывает на контролирующую роль стресс-лимитирующего гормона в отношении чрезмерной продукции последнего.

Научная новизна. Впервые представлены материалы, характеризующие изменения уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота в крови в зависимости от периода и тяжести течения ГЛПС. Показано значительное повышение их содержания на высоте разгара заболевания при неосложненных формах, некоторая депрессия уровня метаболитов при осложненном течении на фоне базисной терапии, с последующим повышением к периоду восстановления диуреза.

Впервые - при ГЛПС показана особенности взаимосвязи между содержанием в крови конечных стабильных метаболитов оксида азота и изменением артериального давления,, цитокинового профиля, патологией системы гемостаза, уровнем СБ95+ субпопуляции лимфоцитов, ассоциированного с апоптозом, и кортизола. Определена роль оксида азота в формировании клинических проявлений ГЛПС, в генезе геморрагического синдрома и развитии осложнений.

Подана заявка на изобретение №2003138278/14 с приоритетом от

25.12.03. под названием «Способ оценки тяжести течения геморрагической лихорадки с почечным синдромом».

Теоретическое и практическое значение. Вскрыты закономерности изменений уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота в крови, позволяющих оценить патогенетическое значение N0 в развитии сосудистых и геморрагических проявлений ГЛПС, эффективности неспецифической защиты организма.

Выяснение патогенетической роли N0 в развитии осложнений является основанием для предложения определения уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота в крови с целью прогнозирования течения ГЛПС.

Получено удостоверение на рационализаторское предложение №2709 от

06.01.04. под названием «Способ диагностики осложненного течения геморрагической лихорадки с почечным синдромом».

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены в виде докладов на конференции молодых ученых БГМУ (Уфа, 2002; Уфа, 2003 гг.), на заседаниях Республиканского научного общества инфекционистов (Уфа, 2002г.), Всероссийской научно-практической конференции «Роль социальных, гигиенических и биологических факторов в становлении возрастных особенностей здоровья населения» (Пенза, 2003 г.), ГУ Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Медицина - здоровье -XXI век» (Днепропетровск,. 2003 г.), межрегиональной конференции биохимиков Урала, Западной Сибири и Поволжья (Оренбург, 2003г.), совместном заседании кафедр биологической и биоорганической химии, инфекционных болезней с эпидемиологией, лабораторной диагностики Института последипломного образования БГМУ и секции медицинской химии Башкирского отделения Всероссийского биохимического общества при РАН (Уфа, 2004 г.).

Внедрение результатов исследования. Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс кафедр биологической и биоорганической химии, инфекционных болезней с эпидемиологией, инфекционных болезней с курсом дерматовенерологии Института последипломного образования Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации», лабораторной диагностики Института последипломного образования Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет ' Министерства здравоохранения Российской Федерации»; в работу диагностических отделений № 8 и 10 Муниципального учреждения г. Уфы «Инфекционная клиническая больница №4» (МУ г. Уфы КИБ№4).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 11 научных работ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 136 страницах

машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, оцисания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований с их обсуждением, выводов и списка литературы, содержащего 190 наименований, из них 71 работа зарубежных авторов. Материал проиллюстрирован 17 таблицами, 15 рисунками и 2 выписками из историй болезни.

Материалы и методы исследования

Работа основана на результатах исследования 110 больных ГЛПС, находившихся на стационарном лечении в МУ г.Уфы КИБ №4 в период с июля 2002 по октябрь 2003 гг. Диагноз ГЛПС верифицирован методом флюоресцирующих антител, отмечено четырехкратное нарастание титров. Возраст пациентов колебался от 18 до 63 лет, мужчины составили 90,9% (100 человек), женщины - 9,1% (10 человек). Больных с сопутствующей патологией в исследование не включали.

При определении периода болезни пользовались классификацией Б.З. Сиротина (1987). Исследования проводились в динамике по периодам заболевания.

Группу контроля составили 18 практически здоровых людей, сопоставимых по возрасту и полу с группой исследуемых пациентов.

Обследуемые были разделены на три группы в зависимости от тяжести и наличия, осложнений. Среднетяжелая форма болезни выявлена у 56 (50,9%) больных, тяжелая — 32 (29,1%). В отдельную группу мы выделили больных тяжелой формой с осложненным течением - 22- (20%). Наблюдались следующие осложнения: инфекционно-токсический шок I-II степени у 18 больных (81,8%), острая почечная недостаточность с переводом на гемодиализ - 9 (40,9%), синдром диссеминированного свертывания крови - 5 (22,7%), острая дыхательная недостаточность - 2 (2,9%).

Помимо общеклинических методов обследования, для решения поставленных задач применяли следующие методы исследования: уровень оксида азота в крови определяли по методу Н.Л. Емченко с соавт.(1994), путем регистрации конечных стабильных его метаболитов нитритов/нитратов после восстановления губчатым кадмием по реакции Грисса в Центральной научно-исследовательской лаборатории Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации» (зав. лабораторией к.м.н., с.н.с. Д.В. Пахомов); параметры сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза — содержание фактора Виллебранда и адгезивно-агрегационную активность тромбоцитов, используя в качестве индукторов агрегации АДФ и ристомицин с применением тест-наборов НПО «Ренам» (г. Москва) на агрегометрах «Tromlit-ЮОЗ» и «Biola 230LA»" в лаборатории свертывания крови Республиканской клинической больнице им. Г.Г. Куватова совместно с к.м.н. М.М. Фазлыевым. Цитокиновый профиль (ИЛ-1(3, ФНОа, ИЛ-6, ИЛ-2, ГМ-КСФ, ИЛ-4) - твердофазным иммуноферментным методом с использованием коммерческих тест-систем ТОО «Протеиновый контур» (г. Санкт-Петербург) в Исследовательском центре «Лаборатория» (руководитель - профессор А.Р. Мавзютов). Активность фагоцитарного звена — методом хемилюминесценции, путем регистрации спонтанной и индуцированной люминолзависимой хемилюминесценции цельной крови на хемилюминомере «ХЛ - 003». CD95 - субпопуляцию лимфоцитов, экспрессирующих ассоциированный с апоптозом мембранный Apo/Fas-1 гликопротеин - непрямым иммунофлюоресцентным методом с использованием моноклональных антител серии «LT 95» (г.Москва) в Центре иммуноаллергологии с отделением клинической иммунологии на базе Республиканской детской клинической больницы (зав. отделением профессор P.M. Хайруллина). Уровень кортизола и АКТГ — с использованием тест-наборов для радиоиммунологического исследования «Cortisol Ria Kit» фирмы «Immunotech» (Греция) и «Elsa-AKTH» фирмы «CIS bio international» (Франция) в ЦНИЛ БГМУ (зав. лабораторией к.м.н., с.н.с. Д.В. Пахомов).

Математическая обработка полученных результатов проводилась с применением программы для статистической обработки «Жс^аЬ, которая включала описательную статистику, определение критерия Стьюдента и коэффициента Манна-Уитни, линейный корреляционный анализ и определение коэффициента ранговой корреляции Спирмена. Результаты собственных исследований

Индукция индуцибельной синтазы оксида азота ^N08) при вирусных инфекциях хорошо известный феномен (X. Маеда, Т. Акаике, 1998), поэтому вполне правомочно утверждать, что при ГЛПС возможно повышение уровня оксида азота.

Нами обнаружена активная продукция конечных стабильных метаболитов нитритов/нитратов оксида азота ^0Х)В крови, зависимая от периода и тяжести течения заболевания (табл. 1.). Увеличение продукции оксида азота указывает на реактивность иммунного ответа при воспалительном процессе. В то время как ее снижение, по данным литературы (И.Ю. Малышев, Е.Б. Манухина, 1998; 2000), наблюдается при чрезмерном и повреждающем воздействии факторов агрессии. Такое относительное снижение уровня оксида азота наблюдалось в олигурическом периоде при осложненном течении ГЛПС, что позволило выделить таких больных в отдельную группу. Необходимо отметить, что различий в уровне N0x в зависимости от вида осложнений обнаружено не было. Это, вероятно, можно объяснить тем, что характерные осложнения в разгаре заболевания ГЛПС, как правило, возникают параллельно, и выраженность отдельных синдрохмов. зависит от индивидуальной = реактивности организма.

Таблица 1.

Уровень N0x (мкмоль/л) в крови больных при различных _формах тяжести течения ГЛПС_

Тяжесть течения Контрольная группа (п=15) Периоды

олигури-ческий полиури-ческий реконвалесцен-ции

Средне-тяжелая (п=56) 20,6±2,8 70,5±3,4*» 55,4±3,0». 36,7±2,7*«

Тяжелая (п=32) 112,3±4,7.« •II 90,7±7,0«. е. 52,1±4,1... II

Ослож. течение (п=22) 104,5±6,4... 96,7±3,4». 65,3±5,9«.

Примечание: *(')-р < 0,05; **(") - р <0,01; ***("') - р < 0,001 (*-достоверност1 сравнении с группой контроля;'- различных формах тяжести течения ГЛПС).

Так, в олигурическом периоде среднетяжелой формы ГЛПС средний уровень N0x составил 70,5±3,4 мкмоль/л, тяжелдй - 112,3+4,7 мкмоль/л,

осложненном течении - 104,5+6,4 мкмоль/л, то есть соответственно в 3,4; 5,5; 5,1 раза выше контрольных значений (20,6+2,8 мкмоль/л).

В полиурическом периоде заболевания уровень КОх несколько снижался, достигая при среднетяжелой форме — 55,4+3,0 мкмоль/л (в 2,7 раза выше, чем у здоровых), при тяжелой форме - 90,7+7,0 мкмоль/л (в 4,4 раза выше, чем у здоровых), осложненном течении — 96,7+3,4 мкмоль/л (в 4,7 раза выше, чем у здоровых).

В периоде реконвалесценции отмечалось дальнейшее снижение содержания КОх, однако оно оставалось статистически значимо выше контрольных значений, что свидетельствует о незавершенности патологического процесса в организме даже в периоде клинического выздоровления.

Гиперпродукция оксида азота через стимуляцию гуанилатциклазы может определять избыточную вазодилатацию и угнетение вазоконстрикции, что является важным звеном в патогенезе острой гипотензии при инфекционно-токсическом шоке. Действительно, при изучении линейной корреляционной зависимости между уровнями конечных стабильных метаболитов оксида азота и артериальным давлением при ГЛПС определялась статистически значимая обратная средней силы связь во все периоды ГЛПС: при среднетяжелой форме в олигурическом периоде г = -0,5 (р<0,01), в полиурическом - г = -0,3 (р<0,001), реконвалесценции — г = -0,4 (р<0,05); при тяжелой форме ГЛПС соответственно г = -0,6 (р<0,01),.-0,3 (р>0,05) и -0,3 (р>0,05). Тяжелая форма с осложненным течением заболевания характеризовалась коэффициентом корреляции г = -0,5 (р<0,05) в олигурическом периоде, -0,6 (р<0,01) в полиурическом и -0,3 (р>0,05) в реконвалесценцию.

В" раннюю фазу инфекционно-токсического шока выброс N0 связан с воздействием циркулирующих факторов и источником его продукции являются эндотелиальные клетки, позже происходит индукция 1К08 гладкомышечных клеток сосудов и макрофагов, что сопряжено со вторым, более продолжительным, этапом синтеза N0 (А.Ю. Вальков, 2000).

Параллельно уровню КОх нарастает содержание маркера повреждения эндотелия - фактора Виллебранда (р<0,001) (рис.1.), что подтверждается наличием прямой корреляционной зависимости между этими показателями, особенно значимой при тяжелой форме заболевания (г = 0,6+0,3; р<0,05). При осложненном течении между данными показателями корреляционная связь во все периоды была недостоверной (г = 0,4+0,4; р>0,05), что, вероятно, обусловлено выраженностью эндотелиальной дисфункции и угнетением синтеза оксида азота или, наоборот, значительным потреблением оксида азота в очагах повреждения органов и тканей и, как следствие, относительным снижением его уровня в циркулирующей крови.

NO-зависимая активация цГМФ определяет также гипоагрегационное состояние крови в олигурическом периоде, особенно выраженное при тяжелой форме и развитии осложнений заболевания. К периодам полиурии и реконвалесценции наблюдалось постепенное восстановление агрегационного потенциала тромбоцитов (рис.2.).

Между содержанием NOx и интенсивностью АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов была обнаружена обратная связь, зависимая от периода и тяжести течения, что определяет роль оксида азота в возникновении геморрагических синдромов при ГЛПС. При среднетяжелой форме до периода полиурии выявлялась средней силы обратная линейная корреляционная зависимость (г = -0,6±0,2; р<0,01), при тяжелой форме - сильная обратная зависимость также до политического периода (г = -0,8±0,16; р<0,01), при

присоединении осложнений — обратная связь средней силы определялась до периода реконвалесценци'и (г = -0,7±0,2; р<0,05).

Нами установлена прямая сильная взаимозависимость уровней конечных стабильных метаболитов оксида азотав крови и провоспалительных цитокинов. Эти результаты не противоречат сведениям о том, что данные цитокины являются основными индукторами экспрессии индуцибельной NO-синтазы в организме при воспалительных заболеваниях (М. Baggiolini, 1992; К.П. Кашкин, 1998; А. Ройт, 2000). Повышение уровня провоспалительных цитокинов и N0 на высоте разгара ГЛПС, указывает на компенсаторную активацию клеточного звена иммунитета. При среднетяжелой форме (табл. 2.) в олигурическом периоде определялось повышение (в 5,7 раза, р<0,05) и

ФНОа (в 14,2 раза, р<0,01). Тогда как уровни других провоспалительных цитокинов - ИЛ-6 и ИЛ-2 оказались умеренно повышенными (соответственно в 1,4 (р<0,05) и 1,8 раза (р>0,05). Уровень гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) в сравнении с группой здоровых лиц определялся статистически незначимым во все периоды заболевания (р>0,05). Наоборот, уровень противовоспалительного цитокина ИЛ-4 оказался наиболее значительным к полиурическому периоду (р<0,001) (в сравнении с олигурическим периодом выше в 1,7 раза). К периоду реконвалесценции ИЛ-4 снижалось, но оставалось статистически достоверно выше значений контрольной группы (р<0,05).

Таблица 2.

Цитокиновый профиль при среднетяжелой форме ГЛПС (п=7)

Показатель Пкг/мл Контрольная группа . п=15 Периоды

Олигуричес-кий полиуричес-кий Реконвалесценции

ИЛ-1Р 35,9±7,2 205,8±33,2.. 167,6±22,7... 43,7±2,3

ФНОа 14,7±1,4 208,9±28,6.. 82,4±9,3». 39,8±1,4«.

ИЛ-6 29,1±0,9 39,8+3,2. 37,2+2,3- 29,0±1,8

ИЛ-2 4,0±0,1 7,3±1,0 7,3±0,8 4,6±0,4

ГМ-КСФ 2,3+0,3 2,1+0,2. 2,7±0,2 2,3±0,1

ИЛ-4 8,3±1,1 17,6+1,3. 30,5±1,5.» 19,0±2,1»

Примечание: • - р<0,05; »» -р<0,01; »»» - р<0,001 (достоверность различия, сравниваемая с контрольной группой - коффициент Манна-Уитни).

Более выраженные сдвиги цитокинового профиля определяли при тяжелой форме, хотя характер динамики изменений про- и противовоспалительного цитокинов сохранялся (таб. 3).

Таблица 3.

Цитокиновый профиль при тяжелой форме ГЛПС (п=6)

Показа тель пкг/мл Контрольная группа п=15 Периоды

олигурический полиуриче-ский реконвалесценции

ИЛ-10 35,9±7,2 323,7±40,6.» » 233,9±27,5«. 57,4±6,7

ФНОа 14,7±1,4 319,3 ±49,2**» 129,6+13,2»** 1 47,7±5,5.«

ИЛ-6 29,1 ±0,9 39,2±2,3» 35,1±3,3 29,6±2,2

ИЛ-2 4,0±0,1 9,4±0,5 5,1 ±0,2 5,7±0,3

ГМ-КСФ 2,3±0,3 з,о±о,з. 2,5±0,2 2,3+0,2

ИЛ-4 8,3±1,1 19,2±2,9. 35,2±1,7— 18,1 ±1,8

Примечание: *(') - р < 0,05; **(") - р < 0,01; ♦**("') - р < 0,0' (достоверность различия в сравнении с группой контроля и со среднетяжел« формой - коэффициент Манна-Уитни).

Осложненное течение заболевания характеризовалось также статистически достоверным повышением основных провоспалительных цитокинов — ИЛ-1р в 11 раз, ФНОа в 23,7 раза на высоте олигурии (табл. 4.). Более высокие показатели определялись и в отношении ИЛ-6 (р<0,01) и ИЛ-2 (р<0,05). ГМ-КСФ также как и при неосложненном течении, не отмечал тенденции к повышению (р>0,05). Отсутствие повышения ГМ-КСФ (р>0,05) можно объяснить тем, что при ГЛПС преобладает картина реакций гиперчувствительности немедленного типа, что выражается в отсутствии лимфоцитарно-макрофагальных инфильтратов в органах мишенях (В.А. Иванис, 2003). Высокая продукция оксида азота также может оказывать антипролиферативное действие (Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков, В.П. Реутов, 2000). Содержание противовоспалительного цитокина ИЛ-4 максимально нарастало к периоду полиурии и к реконвалесценции оставалось более высоким как в сравнении с контролем (р<0,01), так и с неосложненным течением тяжелой формой ГЛПС (р<0,05). Между ИЛ-4 и КОх при среднетяжелой форме ГЛПС определялась прямая сильная связь (коэффициент Спирмена) в олигурическом периоде (0,8; р=0,05); при тяжелой форме - в периоде полиурии (0,6; р=0,05); при осложненном течении — одинаково в периодах полиурии и реконвалесценции (0,8; р>0,05), что, вероятно, связано с максимальной продукцией цитокина к концу заболевания и участием его в комплексе

процессов, приводящих к ограничению очагов воспаления. ИЛ-4 также контролирует переключение 1Ъ-1 клеточного ответа иммунной системы на 1Ъ-2 - гуморального, то есть способствует выработке противовирусных антител к концу периода полиурии и реконвалесценции.

Таблица 4.

Цитокиновый профиль при осложненном течении ГЛПС

Показатель пкг/мл Контрольная группа, п=15 Периоды '

олигуриче-ский,п=7 полиурический, п=6 реконвалесцен-ции, п=6

ИЛ-1Р 35,9±7,2 396,0±22,0«. I 272,8±18,8... 82,1±11,4«

ФНОа 14,7+1,4 347,9±36,5** 1 163,4±26,9». 54,6±7,8*.

ИЛ-6 29,1±0,9 43,5±4,0« 34,1±3,2 28,8+1,1

ИЛ-2 4,0+0,1 12,1+1,4. 9,7+2,2« 7,7+0,9

ГМ-КСФ 2,3±0,3 2,2±0,3 2,4±0,2 2,3±0,2

ИЛ-4 8,3±1,1 18,7+1,9« 32,6±2,3»»»-. 30,5+2,6« »

Примечание: *(') - р < 0,05; **(") - р < 0,01; ***("') - р < 0,001 (»-достоверно в сравнении с группой контроля; '-с тяжелой формой ГЛПС - коэффици Манна-Уитни).

Продукция оксида азота наравне с активными формами кислорода отражает при воспалительном процессе цитостатические/цитотоксические свойства фагоцитов. Установлено, что величина пика хемилюминесценции зависит от фагоцитарной активности клеток. При этом светосумма свечения за время измерения является интегральным показателем генерации активных форм кислорода фагоцитирующими клетками, интенсивность которой резко увеличивается в присутствии люминола. Кроме того, используя добавление в исследуюмую пробу индукторов фагоцитоза (в нашем случае, пирогенал), удается получить представление о возможностях фагоцитов при дополнительной индукции. При всех вариантах тяжести течения ГЛПС наблюдалось повышение люминолзависимой спонтанной светосуммы в цельной крови, с последующим снижением к периоду реконвалесценции (табл. 5.). На высоте разгара заболевания определена прямая сильная связь корреляционной зависимости между N0 и спонтанной светосуммой цельной крови (0,9±0,2; р<0,01), что указывает на параллельное повышение радикалов в ходе реализации иммунных реакций иммунокомпетентными клетками.

Осложненное течение заболевания характеризовалось некоторым относительным снижением как спонтанной, так и индуцированной люминолзависимой светосуммы в крови больных в сравнении с неосложненной формой, что, вероятно, объясняется массивным выходом продуктов деструкции тканей и ингибированием хемилюминесценции.

Коэффициент индекса индукции - отношение индуцированной пирогеналом светосуммы к спонтанной, который отражает возможности фагоцитов при дополнительной индукции, в сравнении с группой здоровых лиц определялся ниже у больных ГЛПС во все периоды заболевания при всех формах тяжести, что, вероятно, свидетельствует о перенапряжении и истощении функциональных резервов фагоцитарного звена иммунитета, особенно при осложненном течении заболевания.

Оксид азота реализует свой цитотоксический эффект также и через активацию процесса запрограммированной клеточной гибели в клетках. Результаты наших исследований свидетельствуют о повышении процентного содержания рецептора Fas (CD95+), ассоциированного с процессом апоптоза в клетках, зависимого от периода и формы тяжести течения ГЛПС (табл. 5). Результаты наших исследований согласуются с данными других авторов, исследовавших уровень С095-субпопуляций лимфоцитов в абсолютных значениях (Д.А. Валишин, 1999). При тяжелой форме ГЛПС процесс запрограммированной клеточной гибели значительно активировался только к периоду полиурии (р<0,001). Осложненное течение характеризовалось отсутствием тенденции увеличения CD95+ на высоте разгара заболевания и статистически значимым снижением его по сравнению с группой больных тяжелой формой (р<0,001; рк0,05). Значительное повышение CD95+ у данной группы больных отмечалось только к периоду реконвалесценции, что свидетельствует об активации процессов элиминации поврежденных клеток. При всех формах тяжести течения ГЛПС обнаруживалась прямая корреляционная связь между уровнями NOx и CD95+ (г = 0,8+0,2; р<0,01).

Основную роль в активации запрограммированной гибели клеток необходимо отвести пероксинитриту (ONOO-), вероятность образования которого при гиперпродукции оксида азота и активных кислородных радикалов на фоне воспалительного процесса максимальна (X. Маеда, Т. Акаике, 1998). Пероксинитрит подавляет ферменты дыхательной цепи путем нитрозилирования металлов переменной валентности, приводит к падению трансмембранного потенциала в митохондриях, что является одним из признаков инициации, апоптоза в клетках (Б. Меньшикова, Н.К. Зенков, В.П. Реутов, 2000). Имеются данные и о прямой активации открытия «гигантской поры» в митохондриях оксидом азота, приводящий к выходу цитохрома С в цитозоль и запуску каспазного каскада (А.А. Недоспасов, 1998; S. Salvoli et al., 2000).

Таблица 5.

Уровень СО 95+ и показатели хемилюминесцентной активности крови у больных _при различных формах тяжести ГЛПС_

Контроль п=12 Олигурический период Полиурический период Реконвалесценция

Ср. тяжести п=12 Тяжелая п=12 Осложнениями п=9 Ср. тяжести п=12 Тяжелая п=12 Осложнен иями п=9 Ср. тяжести п=12 Тяжелая п=12 Осложне ниями п=9

С095 + (%) 5,8±0,4 14,0± 2,6« 10,3± 1,1« 7,2±0,7 » 15,0 ± 0,9«. 13,2± 0,6«. 10,1±1,2 6,2±0,8 7,3 ±0,6 13,4±1,2 II

Спонт Свето сумма (Усл.ед. «мин) 51,9+ 15,7 291,8± 56,2« 479,6+ 32,6«. 1 411,9± 37,6.« 194,9+ 19,3«. 334,5± 13,6«. III 287,8+ 22,1«. 69,9± 7,2 101,4± 16,9 223,9± 28,2«. »1

Инду ЦИр. Свето сумма (Усл.ед. *мин) 174,4± 37,9 376,7± 35,1« 531,3± 39,9«. 1 446,6+ 48,6« 356,1± 25,2« 418,1 + 18,2«. 317,5± 17,9« «1 207,7± 18,7 182,7± 23,7 325,6± 35,1. It

Инд. индук ЦИИ 5,5±0,9 1,7± 0,3« 1,1± 0,04«. 1,1± 0,1« 1,9± 0,2« 1,3± 0,03«. о М± 0,1« 3,1+ 0,3. 1,9± 0,2« 1 1,5± 0,1«

Примечание: *(') - р<0,05; *♦(") - р<0,01; **♦('") - р<0,001 (^-достоверность в сравнении с группой контроля; ' - с различными формами тяжести течения ГЛПС).

При инфекционных заболеваниях, наряду с иммунной системой, в адаптации к меняющимся условиям среды участвует также нейроэндокринная система. При этом эти две системы теснейшим образом взаимосвязаны друг с другом. Учитывая данный факт, нами исследовалось у больных ГЛПС также содержание таких стрессорных гормонов как АКТГ и кортизол.

При всех формах тяжести ГЛПС на высоте разгара заболевания определялось повышение уровней данных гормонов (р<0,001) (табл. 6, 7, 8.).

Таблица 6.

Содержание АКТГ и кортизола в сыворотке крови больных среднетяжелой формой ГЛПС (п=12)

Показатель Контроль п=7 Периоды

олигуриче-ский полиурический реконвалесцен-ции

АКТГ п кг/мл 16,3±1,9 40,2±2,5.» 28,9±1,9«. 20,4±2,6

Кортизол нмоль/л 239,3±23,4 588,6±51,8»" 477,6±49,2« 403,0±35,5«

Примечание: ♦ - р<0,05; •• -р<0,01; ••• - р<0,001 (достоверность, сравниваемая контрольной группой).

Обнаружена прямая корреляционная связь между содержанием N0 и кортизолом во все периоды заболевания (г = 0,8±0,2; р<0,01).

Таблица 7.

Содержание АКТГ и кортизола в сыворотке крови больных

Показатель Контроль п=7 Периоды

олигурический • полиурический реконвалесцен ции

АКТГ пкг/мл 16,3±1,9 67,4±5,6.« м 49,5+5,6». •1 39,4±3,8... II

Кортизол • нмоль/л 239,3±23,4 . 607,8±28,1... 490,0118,5.« 381,8±23,7«.

Примечание: * (') - р<0,05; •• (")-р<0,01; •«• ("')- р<0,001 (*-достоверност! сравниваемая с контрольной группой;' - со среднетяжелой формой ГЛПС).

При осложненном течении ГЛПС наблюдалось некоторое снижение уровней кортизола и АКТГ относительно неосложненных форм тяжести течения заболевания достоверно до периода полиурии (рк0,01). При этом

сильная корреляционная связь уровней N0 и кортизола сохранялась во все исследуемые периоды (г = 0,8±0,3; р<0,01).

Таблица 8.

Показатель Контроль п=7 Периоды

олигуриче-ский полиуриче-ский Реконвалесцен ции

АКТГ пкг/л 16,3±1,9 44,2+3,6.» I« 46,1+4,2«. 50,4±3,9... • • f

Кортизол нмоль/л 239,3±. 23,4 343,5±27,1. III 395,1±20,04... Ii 370,5+17,8»

Примечание: •(') - р<0,05; (")-р<0,01; •«» ("')- р<0,001 (достоверност: сравниваемая с контрольной группой; '-с тяжелой формой ГЛПС).

Повышение уровня кортизола как основного стресс-лимитирующего гормона можно интерпретировать, в данном случае, как компенсаторный механизм. С одной стороны, оксид азота, являясь также одним из факторов стресс-лимитирующей системы (И.Ю. Малышев, Е.Б. Манухина, 1998), способствует синтезу кортизола, с другой, синтез кортизола ингибирует чрезмерную активность индуцибельной NO-синтазы и ограничивает цитотоксический эффект NO (H.A. Виноградов, 1997).

Таким образом, комплекс проведенных, исследований позволяет рассматривать повышение N0 при ГЛПС как элемент неспецифической защиты организма. При этом чрезмерная продукция оксида азота способствует неадекватности иммунного ответа, вызывая срыв компенсаторных возможностей организма. На основании полученных данных и литературных сведений нами представлена схема участия оксида азота в патогенезе геморрагической лихорадки с почечным синдромом (рис.3.).

Если вазодилатация, вызванная оксидом азота при неосложненном течении ГЛПС необходима для улучшения микроциркуляции в органах-мишенях, то в последующем продолжающаяся гиперпродукция N0 с образованием высокотоксичных метаболитов (пероксинитритов) усиливает гипоксию в тканях, усугубляя эндотелиальную дисфункцию и, как следствие, повышение проницаемости сосудистой стенки. Активация оксидом азота циклооксигеназы, перекисного окисления липидов способствует также повышению проницаемости сосудистой стенки во всех органах, в том числе и в почках, что может быть одним из патогенетических механизмов развития острой почечной недостаточности (ОПН). Учитывая, что эндотелий является одним из основных продуцентов оксида азота, то значительное его повреждение при осложненном течении может приводить к снижению уровня

Рис.3. Схема участия N0 в патогенезе геморрагической лихорадки с почечным синдромом Примечание:- активизирующий эффект, —......... ингибирующий эффект

нитрит-иона.

Условия, при которых защитное действие N0 переходит в повреждающее, недостаточно ясны. Возможно, это связано с накоплением продуктов взаимодействия N0 и супероксидных радикалов, тиолов и металлов переменной валентности и нарушением физиологического уровня функционирования цикла оксида азота.

В.П. Реутов (1994; 1998; 2000) объясняет противоречивые эффекты N0 существованием в организме цикла оксида азота. Превращение N0 в другие азотсодержащие соединения

осуществляется в ходе окислительно-восстановительных реакций, протекающих в виде метаболического цикла. Такой механизм циклической организации высокореакционных соединений обеспечивает эффективную регуляцию содержания оксида азота.

Таким образом, успешное решение проблемы окислительного стресса возможно на основе последующих углубленных исследований молекулярных механизмов активации реактивных форм кислорода, что, несомненно, может способствовать разработке селективных препаратов, воздействующих на генерацию оксида азота при ГЛПС.

Выводы

1. Многократное повышение в крови конечных стабильных метаболитов оксида азота в олигурическом периоде, зависящее от тяжести течения ГЛПС, является важным патогенетическим звеном развития основных клинических синдромов заболевания. К периодам полиурии и реконвалесценции наблюдается постепенное понижение уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота, что совпадает с клиническим выздоровлением больных ГЛПС.

2. Наличие статистически значимой обратной корреляционной взаимосвязи между уровнями конечных стабильных метаболитов оксида азота в крови и артериального давления на высоте разгара заболевания ГЛПС свидетельствует о значении оксида азота в генезе инфекционно-токсического шока.

3. Наличие между уровнем конечных стабильных метаболитов оксида азота в крови больных обратной корреляционной связи с АДФ-индуцировашюй агрегацией тромбоцитов, и прямой зависимости с уровнем фактора Виллебранда по периодам заболевания характеризует участие оксида азота в механизмах активации сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза и проявлений эндотелиальной дисфункции сосудов при ГЛПС.

4. Цитокиновый статус больных зависит от тяжести течения ГЛПС и характеризуется в олигурическом периоде резким увеличением уровней основных провоспалительных цитокинов (ИЛ-1р, ФНОа), тогда как уровень противовоспалительного цитокина ИЛ-4 повышается к периоду полиурии. Между уровнем данных цитокинов и конечных метаболитов оксида азота выявляется прямая сильная корреляционная связь.

5. У больных ГЛПС наблюдается повышение интенсивности хемилюминесценции крови, зависящее от тяжести течения заболевания и

имеющее прямую корреляционную связь с усилением продукции оксида азота. Одновременно во все периоды заболевания отмечается снижение индекса индукции (отношение индуцированной . к спонтанной светосумме хемилюминесценции), наиболее выраженное при осложненном течении ГЛПС.

6. К периоду полиурии среднетяжелой и тяжелой форм ГЛПС отмечается увеличение процентного содержания рецептора Fas (CD95+), ассоциированного с процессом апоптоза, при осложненном течении - повышение CD95+ определяется в периоде реконвалесценции. Наличие прямой корреляционной связи между уровнями конечных стабильных метаболитов оксида азота и CD95+ при всех формах течения ГЛПС указывает на индуцирующую роль оксида азота на процесс запрограммированной клеточной гибели.

7. Повышение уровней АКТГ и кортизола на высоте разгара заболевания при неосложненных формах ГЛПС указывает на значительную роль нейроэндокринной регуляции для поддержания гомеостаза организма. При осложненном течении заболевания относительное снижение уровней данных гормонов в олигурическом и полиурическом периодах по сравнению с неосложненными формами ГЛПС определяет выраженность степени поражения и срыв компенсаторных возможностей организма. При ГЛПС выявляется прямая корреляционная зависимость между уровнями кортизола и конечными стабильными метаболитами оксида азота, что указывает на взаимовлияние данных показателей.

Практические рекомендации

1 .Определение уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота в крови больных может быть рекомендовано как дополнительный лабораторный тест для определения степени тяжести и эффективности терапии ГЛПС.

2.Снижение содержания CD95+ субпопуляций лимфоцитов в крови больных с осложненным течением на высоте разгара заболевания может быть рекомендовано как один из способов диагностики осложненного течения ГЛПС.

Список работ, опубликованных по теме диссертации 1 .Д.Х. Хунафина Случай геморрагической лихорадки с почечным синдромом / Д.Х. Хунафина, Ф.Х. Камилов, А.Т. Галиева, Л.Р. Шайхуллина // Материалы Всеросс. науч.-практ. конференции III терапевтического форума. - Тюмень, 2002. - С. 103.

2.Ф.Х. Камилов Оксид азота и продукты перекисного окисления липидов при геморрагической лихорадке с почечным синдромом / Ф.Х. Камилов, Д.Х. Хунафина, Л. Р. Шайхуллина, А.Т. Галиева, Ф.М Хусаинова // Сборник статей юбилейной конф. «Актуальные проблемы инфекционной патологии». - Москва, 2002. - С.36-39.

3.Галиева А.Т. Активные формы кислорода при геморрагической лихорадке с поччным синдромом / А.Т. Галиева, Л.Р. Шайхуллина, И.Г. Кулагина //

Спец. Выпуск жур. «Здравоохранение Башкортостана», «БГМУ - 70 лет». -Уфа, 2002. - №3. - С.53-56.

4.Камилов Ф.Х. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом: некоторые вопросы патогенеза / Ф.Х. Камилов, Д.Х. Хунафина, А.Т. Галиева, Л.Р. Шайхуллина // Сб. матер. Всеросс. научно-практ. конф. «Новые медицинские технологии в охране здоровых, в. диагностике, лечении и реабилитации больных». - Пенза, 2003. - С.39-41.

5.Камилов Ф.Х. Изменение уровня оксида азота, субпопуляционного состава лейкоцитов и провоспалительных цитокинов у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / Ф.Х. Камилов, Д.Х. Хунафина, А.Т. Галиева, Л.Р. Шайхуллина // Сб. матер. Всеросс. научно-практ. конф. «Новые медицинские технологии в охране здоровых, в диагностике, лечении и реабилитации больных». - Пенза, 2003. - С.41-43.

6.Галиева А.Т. Уровень экспрессии рецепторов СБ и цитокинов у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / А.Т. Галиева, Л.Шайхуллина // Тезисы 1У Международ, науч.конф. судентов и молодых ученых «Медицина-здоровье-ХХ1 век». - Днепропетровск, 2003. - С. 171.

7. Камилов Ф.Х. Изменения уровня конечных метаболитов оксида азота (N02^03), глюкокортикоидов и продуктов перекисного окисления липидов у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / Ф.Х. Камилов, Д.Х. Хунафина, Л.Р. Шайхуллина, А.Т. Галиева // Мат. Научно-практ. конф. с международ. участием «Хантавирусы, геморрагическая лихорадка с почечным синдромом». - Владивосток, 2003. -С.21-24.

8.Камилов Ф.Х. Функциональное состояние иммунной системы при геморрагической лихорадке с почечным синдромом / Ф.Х. Камилов, Д.Х. Хунафина, Л.Р. Шайхуллина.ю А.Т. Галиева // Мат. Научно-практ. конф. с международ, участием «Хантавирусы, геморрагическая лихорадка с почечным синдромом». - Владивосток, 2003. - С.25-28.

9.Камилов Ф.Х. Оксид азота в механизмах развития геморрагической лихорадки с почечным синдромом / Ф.Х. Камилов, Д.Х. Хунафина, А.Т. Галиева, В.Ф. Шайхмиева // Дальневосточный мед. журнал с мат. регион, науч. конф. с международ, участием «Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом: современное состяние проблемы». - Хабаровск, 2003.-№3.-С.55-57.

10.Галиева А.Т. Оксид азота в патогенезе геморрагической лихорадки с почечным синдромом / А.Т. Галиева, И.Г. Кулагина // Мат.межрегион.конф.биохимиков Урала, Западной Сибири и Приволжья

«Биохимия: от исследования молекулярных механизмов - до внедрения в клин, практику». - Оренбург, 2003. - С.424-428.

П.Камилов Ф.Х. СБ95-субпопуляция лимфоцитов при геморрагической лихорадке с почечным синдромом / Ф.Х, Камилов, Д.Х, Хунафина, А.Т. Галиева, Л.Р. Шайхуллина // Сб. науч. трудов к конф. ученых Респ. Башкортостан «Научный прорыв - 2003». - Уфа, 2003. - С.26-27.

П.Камилов Ф.Х. Люминолзависимая хемилюминесценция цельной крови у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / Ф.Х. Камилов, Д.Х, Хунафина, Л.Р. Шайхуллина, А.Т. Галиева // Сб. науч. трудов к конф. ученых Респ. Башкортостан «Научный прорыв - 2003». - Уфа, 2003. -С.26-27.

Галиева Айгуль Тагировна

Патогенетическое значение оксида азота при геморрагической лихорадке с почечным синдромом

Автореферат на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Отпечатано фирмой ООО «МДМ-АРК», г. Уфа, ул. Аксакова, 58, тел.: 51-73-55 тираж 100 шт. 2004 г.

i-240 9

РНБ Русский фонд

2004-4 20301

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Галиева, Айгуль Тагировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Современные аспекты патогенеза ГЛПС.

1.2 Функциональная роль оксида азота в организме человека.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Общая характеристика больных ГЛПС.

2.2 Методы исследования.

2.2.1 Метод определения оксида азота в крови больных ГЛПС.

2.2.2 Методы исследования сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза.

2.2.3 Определение глюкокортикоидных гормонов.

2.2.4 Определение некоторых показателей иммунитета.

2.2.5 Методы статистической обработки.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1 Уровень конечных стабильных метаболитов N0 при ГЛПС.

3.2 Параметры сосудисто-томбоцитарного звена гемостаза у больных ГЛПС.

3.3 Щтокиновый профиль при ГЛПС.

3.4 Характеристика функциональной активности фагоцитов у больных ГЛПС

3.5 Оксид азота и апоптоз.

3.6 Содержание АКТГ и кортизола в сыворотке крови больных ГЛПС.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Патогенетическое значение оксида азота при геморрагической лихорадке с почечным синдромом"

Актульность проблемы. Среди природно-очаговых заболеваний геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) занимает особое место в связи с тяжестью поражения многих органов и систем, развитием опасных для жизни осложнений (Р.Ф.Абдурашитов, 1982; Е.А.Ткаченко, 1991; Б.З.Сиротин, 1994; P.Kulzer, 1994; P.M. Фазлыева, Д.Х. Хунафина, Ф.Х. Камилов, 1995; Г.Х.Мирсаева, P.M. Фазлыева, Ф.Х. Камилов, Д.Х. Хунафина, 2000). На территории Среднего Поволжья и Приуралья находятся активные природные очаги ГЛПС, и по праву его эпицентром можно считать Республику Башкортостан (РБ), где регистрируется до 40-60 % от заболеваемости по Российской Федерации.

Высокий уровень заболеваемости и длительная временная нетрудоспособность больных ГЛПС наносят существенный экономический ущерб народному хозяйству региона. В 1998 г. в РБ принята Республиканская целевая противоэпидемическая программа «Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом: эпидемиология, разработка средств и методов профилактики, ранней диагностики и лечения», в рамках которой проводятся многосторонние исследования по уточнению механизмов патогенеза, разработка эффективных средств терапии и специфической профилактики - генноинженерной вакцины.

Название «геморрагическая лихорадка с почечным синдромом» (ГЛПС), предложенное М.П. Чумаковым (1979) для обозначения острой зоонозной вирусной природно-очаговой инфекции, отражает основной характер действия хантавируса, включающего поражение сосудистой стенки и последующих нарушений системы гемостаза. Частота различных проявлений поражения сосудистой стенки составляет от 67,5% (А.И. Зеленский, 1979) до 91,3% (Б.З. Сиротин, 1994). Геморрагический синдром является так же наиболее ярким и частым патологоанатомическим признаком болезни и может быть одной из причин летального исхода (Б.З. Сиротин, 1994; 1995).

В интенсивности проявлений васкулярных нарушений имеет значение степень повреждения эндотелия и повышения проницаемости сосудов (Ю.Л. Федорченко, 1989; И.М. Давидович, 1993), изменения в системе внутрисосудистого свертывания крови и микроциркуляции, активация перекисного окисления липидов, кининовой системы и иммунохимические сдвиги (Б.З. Сиротин, 1981; Г.Х. Мирсаева, 1992; P.M. Фазлыева, Д.Х. Хунафина, Ф.Х. Камилов, 1995), приводящие к развитию ведущего синдрома ГЛПС - диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови.

В последние годы возрос интерес к проблеме иммунопатологии, что обусловлено установлением важнейшей роли этих нарушений в патогенезе абсолютного большинства болезней человека.

При ГЛПС установлены изменения следующих иммунологических показателей - содержания иммуноглобулинов А, М, G, Е (Г.И.Астахова и др., 1986; Г.Ф.Амирова, 1994; О.А.Алексеев, 1998); активности Т-клеточного звена иммунитета и субпопуляции лимфоцитов CD3, CD4, CD8, CD72, CD 16, CD95 (Б.Ш. Янбаев, 1997; Д.А. Валишин, 2000); цитокинов: ИЛ-1(3, 2, 4, 6, 8, 10, 13, ИФНа, ИНФу, ФНОа (М. Linderholm, 1996; О.А.Алексеев, 1998; Д.А.Валишин, 2000; Г.Р.Абдулова, 2000). Среди инициальных повреждающих сосудистую стенку факторов в литературе обсуждается значение иммунных комплексов (X. Ли и др., 1991; P.M. Фазлыева, 1988).

В настоящее время известно, что защита организма от инфекционных агентов в значительной мере связана с макрофагами, которые могут действовать как самостоятельно, так и в совокупности с другими клетками иммунной системы, обладающими, наряду с другими физиологическими эффектами, способностью секретировать цитокины. Одним из важнейших эффектов активации клеток макрофагального звена и изменений цитокинового статуса является продукция оксида азота, активно изучаемого в последние годы исследователями различных специальностей.

Доказано участие данной молекулы в генезе вазодилатации, гипоагрегации тромбоцитов, цитостатической/цитотоксической активности макрофагов, апоптозной гибели клеток (Н.А. Виноградов, 1997; В.П. Реутов, 1998; Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков, В.П. Реутов, 2000; И.В. Зотова, Д.А. Затейщиков, Б.А. Сидоренко, 2002).

Таким образом, влияние молекулы оксида азота на патогенетические механизмы развития основных синдромов ГЛПС несомненно, что определяет необходимость изучения роли этой молекулы в указанных процессах с целью дальнейшего понимания патогенеза заболевания.

Цель исследования. Определить значение оксида азота в патогенетических механизмах развития основных проявлений ГЛПС в зависимости от характера течения заболевания. Задачи исследования:

1. Оценить динамику содержания конечных стабильных метаболитов оксида азота - нитрит/нитратов в крови больных ГЛПС в зависимости от формы и периода заболевания.

2. Изучить динамику изменения артериального давления у больных по периодам заболевания, и провести корреляционный анализ с уровнем конечных стабильных метаболитов оксида азота.

3. Провести корреляционный анализ связи уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота и показателями сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза по периодам заболевания в зависимости от формы тяжести.

4. Определить состояние цитокинового профиля провоспалительного и противовоспалительного действия по периодам заболевания, провести корреляционный анализ связи уровня оксида азота и ИЛ-ip, ФНОа; оксида азота и противовоспалительного цитокина ИЛ-4.

5. Определить функциональную активность фагоцитарного звена хемилюминесцентным методом и провести корреляционный анализ с уровнем конечных стабильных метаболитов оксида азота по периодам заболевания при различных формах тяжести ГЛПС.

6. Провести корреляционный анализ уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота и рецептора Fas, ассоциированного с экспрессией CD95-субпопуляций лимфоцитов, индуцирующего апоптоз.

7. Оценить содержание гормонов АКТГ и кортизола по периодам заболевания ГЛПС при различных формах тяжести и провести корреляционный анализ связи уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота и кортизола. Научная новизна. Впервые представлены материалы, характеризующие изменения уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота в зависимости от периода и тяжести течения ГЛПС. Показано значительное повышение их содержания на высоте разгара заболевания при неосложненных формах, некоторая депрессия уровня метаболитов при осложненном течении на фоне базисной терапии, с последующим повышением к периоду восстановления диуреза.

Впервые при ГЛПС показана особенность взаимосвязи между уровнем конечных стабильных метаболитов оксида азота и изменением артериального давления, системой гемостаза, цитокинового профиля; показателем CD95+ субпопуляции лимфоцитов, ассоциированного с апоптозом, и кортизолом. Определена роль оксида азота в формировании клинических проявлений ГЛПС, в генезе геморрагического синдрома и развитии осложнений.

Теоретическое и практическое значение работы. Вскрыты закономерности изменений уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота в крови, позволяющих оценить патогенетическое значение NO в развитии сосудистых и геморрагических проявлений ГЛПС, состоянии неспецифической иммунореактивности организма.

Выяснение патогенетической роли N0 в развитии осложнений является основанием для предложения определения уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота с целью прогнозирования течения ГЛПС.

Подана заявка № 2003138278/14 на изобретение под названием «Способ оценки тяжести течения геморрагической лихорадки с почечным синдромом» с приоритетом от 25.12.03г. и получено удостоверение ГОУ ВПО «БГМУ МЗ РФ» на рационализаторское предложение № 2709 от 06.01.04г. под названием «Способ ранней диагностики тяжелой формы с осложненным течением геморрагической лихорадки с почечным синдромом по уровню процентного содержания CD95 субпопуляции лимфоцитов».

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены в виде докладов на конференции молодых ученых БГМУ (Уфа, 2002 г.; Уфа, 2003 г.), на заседаниях Республиканского научного общества инфекционистов (Уфа, 2002 г.), Всероссийской научно-практической конференции «Роль социальных, гигиенических и биологических факторов в становлении возрастных особенностей здоровья населения» (Пенза, 2003 г.), IY Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Медицина - здоровье - XXI век» (Днепропетровск, 2003 г.), межрегиональной конференции биохимиков Урала, Западной Сибири и Поволжья (Оренбург, 2003 г.), совместном заседании кафедр биологической и биоорганической химии, инфекционных болезней с эпидемиологией, лабораторной диагностики Института последипломного образования БГМУ и секции медицинской химии Башкирского отделения Всероссийского биохимического общества РАН (Уфа, 2004 г.).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 11 научных работ.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Галиева, Айгуль Тагировна

ВЫВОДЫ

1. Важным патогенетическим звеном развития геморрагической лихорадки с почечным синдромом, способным быть причиной проявлений основных клинических синдромов заболевания, является усиление продукции конечных стабильных метаболитов оксида азота в крови в олигоурическом периоде, зависящее от тяжести течения ГЛПС. К периодам полиурии и реконвалесценции наблюдается постепенное понижение уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота, что совпадает с клиническим выздоровлением больных ГЛПС.

2. Наличие статистически значимой обратной корреляционной связи между уровнем NO и артериальным давлением на высоте разгара заболевания свидетельствует о значении оксида азота в генезе вазодилатации и при развитии инфекционно-токсического шока у больных ГЛПС - гипотензии.

3. Снижение АДФ-индуцированной и повышение ристомицин-зависимой агрегации тромбоцитов, увеличение содержания фактора Виллебранда, наиболее выраженные при тяжелой форме и осложненном течении болезни и наличие между уровнем конечных стабильных метаболитов оксида азота в крови больных обратной корреляционной связи с АДФ- индуцированной агрегацией тромбоцитов, и прямой зависимости с уровнем фактора Виллебранда по периодам заболевания характеризует участие оксида азота в механизмах активации сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза и проявлении эндотелиальной дисфункции сосудов при ГЛПС.

4. Цитокиновый статус больных зависит от тяжести течения ГЛПС и характеризуется в олигоурическом периоде резким увеличением уровней ФНОа и ИЛ-1(3, статистически значимым повышением - ИЛ-6 и ИЛ-4; в полиурическом периоде - некоторым снижением содержания ФНОа и ИЛ-1(3, дальнейшим повышением ИЛ-4; в периоде рекоивалесценции -снижением как ФНОа и ИЛ-1(3, так и ИЛ-4. Концентрации ИЛ-2 и гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора не претерпевают существенных колебаний. Между уровнем провоспалительных цитокинов (ФНОа, ИЛ-1(3), противовоспалительного цитокина ИЛ-4 и содержанием оксида азота выявляется прямая сильная корреляционная связь.

5. При различных формах ГЛПС наблюдается повышение интенсивности хемилюминесценции крови, зависящее от тяжести заболевания и имеющее прямую корреляционную связь с усилением продукции оксида азота. Одновременно во все периоды заболевания отмечается снижение индекса индукции (отношение индуцированной к спонтанной светосумме хемилюминесценции), наиболее выраженное при осложненном течении ГЛПС.

6. Повышение процентного содержания рецептора Fas (CD95+), ассоциированного с процессом апоптоза, к периоду полиурии среднетяжелой и тяжелой форм ГЛПС, указывает на активацию процесса запрограммированной клеточной гибели клеток. При осложненном течении максимум повышения CD95+ определяется в периоде рекоивалесценции. Наличие прямой корреляционной связи между NO и CD95+ при всех формах течения ГЛПС указывает на индуцирующую роль оксида азота на процесс запрограммированной клеточной гибели клеток.

7. Увеличение продукции оксида азота при ГЛПС является проявлением активации неспецифической защиты организма и необходимым элементом в элиминации вируса и поврежденных им клеток в организме. При осложненном течении ГЛПС незначительное снижение оксида азота в сравнении с тяжелой формой определяется состоянием срыва компенсаторных возможностей неспецифической защиты организма. Повышение уровня кортизола и АКТГ на высоте разгара заболевания при неосложненных формах ГЛПС указывает на значительную роль нейроэндокринной регуляции для поддержания гомеостаза организма, при этом при осложненном течении отсутствие тенденции к повышению уровней данных гормонов определяет выраженность степени поражения и срыв компенсаторных возможностей организма. При ГЛПС выявляется прямая корреляционная зависимость между уровнями кортизола и NO, что указывает на взаимовлияние данных показателей.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Определение уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота может быть рекомендовано с диагностической целью для определения степени тяжести и эффективности терапии ГЛПС

2. Определение снижения содержания CD95 субпопуляции лимфоцитов на высоте разгара заболевания может быть рекомендовано как один из способов ранней диагностики осложненного течения ГЛПС

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Галиева, Айгуль Тагировна, Уфа

1. Абдулова Г.Р. Клинико-лабораторная эффективность применения йодантипирина в комплексном лечении больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / Г.Р. Абдулова // Автореф. дисс. канд. мед. наук. -Казань, 2000. 29с.

2. Агапов Е.Г. Влияние оксида азота на функционирование гломерулярного мезангиума и его значение в патогенезе гломерулонефрита / Е.Г. Агапов, В.Н. Лучанинова // Нефрология. 2002. - №1. - С.23-28.

3. Амирова Г.Ф. Особенности течения геморрагической лихорадки с почечным синдромом на фоне лечения плацентарным альбумином и специфическим иммуноглобулином / Г.Ф. Амирова // Автореф. дисс. канд. мед. наук. -Челябинск, 1994. 20с.

4. Андрианова О.Л. Гормональные нарушения у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / О.Л. Андрианова // Автореф. дисс. канд. мед. наук. Уфа, 1998. - 23с.

5. Ахматова Н.К. Роль апоптоза лимфоцитов периферической крови в механизмах развития геморрагической лихорадки с почечным синдромом / Н.К. Ахматова // Автореф. дисс. канд. мед. наук. Уфа, 2003. - 26с.

6. Бабушкина Ф.А. Системная эндотоксинемия и нарушения гемостаза, их терапевтическая коррекция при геморрагической лихорадке с почечным синдромом / Ф.А. Бабушкина // Автореф. дисс. канд. мед. наук. Казань, 2002. -28с.

7. Бандурко Л.П. Изменения микроциркуляции при геморрагической лихорадке с почечным синдромом / Л.П. Бандурко // Автореф. дисс. канд. мед. наук. -Владивосток, 1980. 22с.

8. Башкирев Т.А. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом. Эпидемиология, клиника, дифференциальная диагностика, лечение, наблюдение за переболевшими / Т.А. Башкирев // Метод, рекомендации. Казань, 1991. -С.28-37.

9. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы / З.С. Баркаган // М.: Медицина, 1998. С.356-433.

10. Баркаган З.С. Основы диагностики нарушений гемостаза / З.С. Баркаган, А.П. Мамот // М.: Ньюдиамед-АО, 1999. 217с.

11. Белобородова Э.И. Клиническая эффективность комбинированной терапии реафероном и йодантипирином при хроническом HCV- и HBV-гепатите / Э.И. Белобородова, М.А. Внушинская, М.И. Рачковский // Клин, медицина. 2002. -№4. - С.52-54.

12. Бокарев И.Н. Постоянное и диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови / И.Н. Бокарев // Клин, медицина. 2000. - №3. - С.37-41.

13. Брюне Б. Апоптотическая гибель клеток и оксид азота: механизмы активации и антагонистические сигнальные пути / Б. Брюне, К. Сандау, А. фон Кнетен // Биохимия. 1998. - 63, №7. - С.966-975.

14. Быстровский В.Ф. Функциональное состояние эндокринной системы у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом: (Вопросы патогенеза, клиники и лечения) / В.Ф. Быстровский // Автореф. дисс. д-ра мед. наук. Спб., 1996. - 34с.

15. Богомолов Б.П. Дифференциальная диагностика инфекционных болезней, протекающих с геморрагическим синдромом / Б.П. Богомолов // Терап. архив. -1998. №4. - С.63-68.

16. Валишин Д. А. Гормонально-иммунологический статус у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / Д.А. Валишин // Автореф. дисс. д-ра мед. наук. Москва, 1999. - 31с.

17. Валишин Д.А. Динамика цитокинов у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / Д.А. Валишин, Г.В. Сахаутдинова, С.В. Сибиряк // Здравоохранение Башкортостана. 1996.- №6. - С.37-39.

18. Ванин А.Ф. Оксид азота в биологии: история, состояние и перспективы исследований / А.Ф. Ванин // Биохимия. 1998. - 63, №7. - С.867-869.

19. Васильков А.Ю. Медиаторы воспаления в патогенезе инфекционно-токсического шока менингококковой этиологии / А.Ю. Васильков, Л.С. Ходасевич // Архив патологии. 2000.- 62, №2. - С.52-57.

20. Виноградов Н.А. Изменение синтеза оксида азота, содержания адренокортикотропного гормона и кортизола в крови при вирусном гепатите В / Н.А. Виноградов // Клин, медицина. 2001. -№11.- С.47-51.

21. Виноградов Н.А. Многоликая окись азота / Н.А. Виноградов // Росс. журн. гастроэнтер., гепат., колопроктологии 1997. - №2. - С.6-10.

22. Витковский Ю.А. Влияние ИЛ-1 на свертываемость крови и фибринолиз / Ю.А. Витковский, Б.И. Кузник // Гематология и трансфузиология. 1999. - 44, №2. - С.27-30.

23. Волин М.С. Механизмы передачи сигнала оксидант оксид азота в сосудистой ткани / М.С. Волин, К.А. Дэвидсон, П.М. Камински, Р.П. Фэйнгерш, К.М. Мохаззаб-Х. // Биохимия. - 1998. - 63, №7. - С.958-965.

24. Волкова М.А. Основные представления об интерферонах / М.А. Волкова // Гематол. и трансфузиология. 1999. - 44, №4. - С.32-36.

25. Гермаш Е.И. Патогенетическая терапия больных с тяжелой формой геморрагической лихорадки и острой почечной недостаточностью / Е.И. Гермаш, B.C. Тимохов, Ш.З. Загидуллин // Терап. архив. 1997. - №11. - С.26-30.

26. Гермаш Е.И. Клиническое течение и патогенетическая терапия тяжелой формы геморрагической лихорадки с почечным синдромом / Е.И. Гермаш // Автореф. дисс. канд. мед. наук. Уфа, 1998. - 24с.

27. Голиков П.П. Генерация оксида азота лейкоцитами и тромбоцитами периферической крови при ранениях груди и живота / П.П. Голиков, Н.Ю. Николаева, Е.В. Клычникова // Вестник РАМН. 2003. - №4. - С23-27.

28. Горрен А.К.Ф. Универсальная и комплексная энзимология синтазы оксида азота / А.К.Ф. Горрен, Б. Майер // Биохимия. 1998. - 63, №7. - С.870-880.

29. Давидович И.М. Морфология и агрегационные свойства эритроцитов у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / И.М. Давидович // Терап. архив. 1989. - №2. - С.70-72.

30. Давидович И.М. О состоянии тромбоцитарного звена гемостаза у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / И.М. Давидович // Терап. архив. 1990. - №5. - С.68-71.

31. Давидович И.М. Некоторые плазменные маркеры повреждения сосудистого эндотелия у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / И.М. Давидович, Т.А. Паршина // Гематология и трансфузиология. 1994. - 39,35. С.41-42.

32. Деконенко А.Е. Генетическая дифференциация хантавирусов с помощью полимеразной цепной реакции и секвенирования / А.Е. Деконенко, Е.А. Ткаченко // Вопросы вирусологии. 1996. - №1. - С.24-27.

33. Елисеев В.А. Нитроксидергические аспекты фармакологической регуляции гемодинамики при сальмонеллезе / В.А. Елисеев // Автореф. дисс. канд. мед. наук. Челябинск, 2000. - 23с.

34. Емченко H.JI. Универсальный метод определения нитратов в биосредах организма / H.JI. Емченко, О.И. Цыганенко, Т.В. Ковалевская // Клин, лаборат. диагностика. 1994. - №6. - С. 19-20.

35. Ершов Ф.И. Индукторы интерферона новое поколение иммуномодуляторов / Ф.И. Ершов, Э.Б. Тазулахова // Иммунология. - 1999. -№5. - С.52-56.

36. Зозуля Ю.А. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита при патологии головного мозга / Ю.А. Зозуля, В.А. Барабой, Д.А. Суковой // М.: Знание-М. 2000. - С.

37. Зотова И.В. Синтез оксида азота и развитие атеросклероза / И.В. Зотова, Д.А. Затейщиков, Б.А. Сидоренко // Кардиология. 2002. - №4. - С.58-65.

38. Ибрагимов О.Б. Определение активности фактора Виллебранда при помощи лазерного анализатора агрегации тромбоцитов / О.Б. Ибрагимов, А.П. Цибулькин // Клин. лаб. диагностика. 1998. - №3. - С. 13-15.

39. Ивашкин В.Т. Система цитокинов у больных хроническим вирусным гепатитом С при лечении интерфероном-а / В.Т. Ивашкин, С.Н. Маммаев, Е.А. Лукина // Терап. архив. 2002. - №2. - С.37-41.

40. Исламова А.А. Состояние оксидантно-антиоксидантной системы и ее коррекция в комплексном лечении больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / А.А. Исламова // Автореф. дис. канд. мед. наук. Уфа, 1999.-22с.

41. Камилов Ф.Х. Биохимия гормонов и механизмы гормональной регуляции обмена веществ / Ф.Х. Камилов, Э.Г. Давлетов // Уфа, 1997.- 251с.

42. Кашкин К.П. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность (лекция) / К.П. Кашкин // Клин. лаб. диагностика. -№11.- С.21-32.

43. Ковальский Г.С. Опыт лечения инфекционно-токсического шока у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / Г.С. Ковальский, Т.В. Ковальская // Клин, медицина. 1986. - №11. - С.55-59.

44. Ковальчук Л.В. Роль оксида азота в иммунопатогенезе стафилококковых инфекций / Л.В. Ковальчук, З.Ф. Хараева // Иммунология. 2003. - №3. - С. 186189.

45. Крашутский В.В. ДВС-синдром в клинической медицине / В.В. Крашутский // Клин, медицина. -1998. №3. - С.8-14.

46. Ли Х.В. Выявление хантавирусной инфекции и контроль над ними / Х.В. Ли // Хантавирусы и хантавирусные заболевания: Материалы, посвященные к 70-тилетию изучения ГЛПС на Дальнем Востоке. Владивосток, 2003. - С.42-55.

47. Лобзин Ю.В. Современные концепции и приоритеты терапии инфекционных больных / Ю.В. Лобзин // Эпидемиол. и инфекционные болезни. 1999. - №6. - С.50-55.

48. Маев В. Роль цитокинов в патогенезе неспецифического язвенного колита / В. Маев, С.С. Григорян, М.Г. Гаджиева, Н.И. Овчинникова // Клин, медицина. -2002.-№1.-С.23-26.

49. Маеда X. Оксид азота и кислородные радикалы при инфекции, воспалении и раке / X. Маеда, Т. Акаике // Биохимия. 1998. - 63, №7. - С. 1007-1019.

50. Мазур Н.А. Дисфункция эндотелия, монооксид азота и ишемическая болезнь сердца / Н.А. Мазур // Терап. архив. 2003. - №3. - С.84-86.

51. Малкоч В.Ф. Физиологическая роль оксида азота в организме (часть 1) / В.Ф. Малкоч, В.Г. Майданник, Э.Г. Курбанова // Нефрология и диализ. 2000. -2, №1-2. - С.69-75.

52. Малышев И.Ю. Стресс, адаптация и оксид азота / И.Ю. Малышев, Е.Б. Манухина // Биохимия. 1998. - 63, №7. - С.992-1006.

53. Малышев И.Ю. Особенности синтеза оксида азота у больных инфарктом миокарда / И.Ю. Малышев // Клин, медицина. 2000. - №3. - С.19-23.

54. Маркин В.А. Вирусные геморрагические лихорадки: проблемы и размышления / В.А. Маркин, А.А. Махлай, Н.Д. Ющук //Эпидемиол. и инфекционные, болезни. 1999. - №6. - С.4-7.

55. Марков Х.М. Окись азота в физиологии и патологии почек / Х.М. Марков // Вестник РАМН. 1996. - №7. - С.73-78.

56. Меныцикова Е.Б. Оксид азота и NO-синтазы в организме млекопитающих при различных функциональных состояниях / Е.Б. Меныцикова, Н.К. Зенков, В.П. Реутов // Биохимия. 2000. - 65, №4. - С.485-503.

57. Мирсаева Г.Х. Коррекция внутрисосудистого свертывания крови в комплексном лечении геморрагической лихорадки с почечным синдромом / Г.Х. Мирсаева // Автореф. дисс. канд. мед. наук. Уфа, 1992. - 20с.

58. Мирсаева Г.Х. Патогенез и лечение геморрагической лихорадки с почечным синдромом / Г.Х. Мирсаева, P.M. Фазлыева, Ф.Х. Камилов, Д.Х. Хунафина // Уфа, 2000.- 234с.

59. Могила Т.В. Диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом (клинико-лабораторное исследование) / Т.В. Могила // Автореф. дисс. канд. мед. наук. -Хабаровск, 1981. 21с.

60. Насонов E.JI. Маркеры активации эндотелия (тромбомодулин, антиген фактора Виллебранда и ангиотензинпревращающий фермент): клиническоезначение / E.JI. Насонов, А.А. Баранов, Н.П. Шилкина // Клин, медицина. -1998. №11. - С.4-7.

61. Насонов Е.Л. Нарушения иммунитета при аутоиммунных заболеваниях / Е.Л. Насонов // Росс. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктологии. 1999. -№7. - С.43-47.

62. Невзорова В.А. Роль окиси азота в регуляции легочных функций / В.А. Невзорова, М.В. Зуга, Б.И. Гельцер // Терап. архив. 1997. - №3. - С.68-73.

63. Недоспасов А.А. Биогенный N0 в конкурентных отношениях / А.А. Недоспасов // Биохимия. 1998. - 63, №7. - С.881-904.

64. Новиков Д.К. Противовирусный иммунитет / Д.К. Новиков // Иммунопатология, аллергология и инфектология. 2002. - №1. - С.5-15.

65. Новикова Л.Б. Церебральные нарушения у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / Л.Б. Новикова // Уфа, 2001. 251с.

66. Носик Н.Н. Цитокины при вирусных инфекциях / Н.Н. Носик // Вопросы вирусологии. 2000. - №1. - С.4-10.

67. Нургалеева Р.Г. Эпидемиологический анализ заболеваемости ГЛПС в Республике Башкортостан в 1997 году / Р.Г. Нургалеева, Е.А. Ткаченко, А.Г. Степаненко // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиологии. 1999. - №6. -С.45-49.

68. Онищенко Г.Г. Распространение вирусных природно-очаговых инфекций в Российской Федерации и меры по их профилактике / Г.Г. Онищенко // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2000. - №4. - С.4-8.

69. Паунова С.С. Тромбоцитарный оксид азота у детей с болезнями почек / С.С. Паунова, А.Г. Кучеренко, Х.М. Марков // Педиатрия. 2000. - №1. - С.7-10.

70. Петренко Ю.М. Новые источники окиси азота, их возможная физиологическая роль и значение / Ю.М. Петренко, Д.А. Шашурин, В.Ю. Титов // Экспер. и клин, фармакология. 2001. - №2. - С.72-79.

71. Полякова A.M. Нарушения системы гемостаза у больных инфекционными болезнями / A.M. Полякова, А.В. Кравченко, О.С. Астрина // Эпидемиол. и инфекционные болезни. 1999. - №2. - С.57-59.

72. Проскуряков С.Я. Оксид азота в механизмах патогенеза внутриклеточных инфекций / С.Я. Проскуряков, С.И. Бикетов, А.И. Иванников, В.Г. Скворцов // Иммунология. 2000. - №4. - С.9-18.

73. Ратникова Л.И. Значение оксида азота в повреждении гепатоцитов при патологии печени / Л.И. Ратникова, И.В. Мельников // Эпидемиол. и инфекционные болезни. 2002. - №6. - С.50-54.

74. Реутов В.П. Циклические превращения оксида азота в организме млекопитающих / В.П. Реутов, Е.Г. Сорокина, В.Е. Охотин, Н.С. Косицын // Москва, 1998. 156с.

75. Реутов В.П. Биохимическое предопределение NO-синтазной и нитритредуктазной компонент цикла оксида азота / В.П. Реутов // Биохимия. -1999. 64, №5. - С.634-651.

76. Реутов В.П. Цикл оксида азота в организме млекопитающих и принцип цикличности / В.П. Реутов // Биохимия. 2002. - 67, №3. - С.353-377.

77. Рощупкин В.И. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом / В.И. Рощупкин, А.А. Суздальцев // Саратов, 1990. 102с.

78. Северин Е.С. Биохимические основы патологических процессов / Е.С. Северин // Москва, 2000. С.266-294.

79. Северина И.С. Растворимая гуанилатциклаза в молекулярном механизме физиологических эффектов оксида азота / И.С. Северина // Биохимия. 1998. -63, №7. - С.939-947.

80. Сидельников Ю.Н. Клинико-патогенетическое и прогностическое значение нарушений нейрогуморальной регуляции при геморрагической лихорадке с почечным синдромом / Ю.Н. Сидельников // Автореф. дисс. д-ра мед. наук. -СПб., 1998. 34с.

81. Сидельников Ю.Н. Гематологические изменения при геморрагической лихорадке с почечным синдромом и их прогностическое значение / Ю.Н. Сидельников, А.Ю. Мартыненко // Гематология и трансфузиология. 2000. -45, №1. - С.15-19.

82. Сидельников Ю.Н. Роль некоторых веществ в изменениях проницаемости кровеносных сосудов у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / Ю.Н. Сидельников, Г.Г. Обухова // Терап. архив. 1990. - №6. -С.66-68.

83. Сиротин Б.З. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом / Б.З. Сиротин // Хабаровск, 1994. 300с.

84. Сиротин Б.З. Вопросы патогенеза и патогенетической терапии геморрагической лихорадки с почечным синдромом / Б.З. Сиротин, Ю.Л. Федорченко, И.М. Давидович // Терап. архив. 1995. - №11. - С.30-33.

85. Сиротин Б.З. Патология гипофиза при геморрагической лихорадке с почечным синдромом / Б.З. Сиротин // Нефрология. 2002. - №1. - С.29-34.

86. Сиротин Б.З. Состояние калликреин-кининовой, свертывающей и фибринолитической систем у больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / Б.З. Сиротин, Г.Г. Обухова, Т.В. Могила // Терап. архив. 1981. - №9. - С.84-87.

87. Степаненко А.Г. Особенности эпидемиологического процесса при геморрагической лихорадке с почечным синдромом в Республике Башкортостан / А.Г. Степаненко, Р.Г. Нургалеева, Н.М. Мустафин // Здравоохранение РБ. -1999.-№2-3.-С.49-55.

88. Стокле Ж.-К. Гиперпродукция оксида азота в патофизиологии кровеносных сосудов / Ж.-К. Стокле, Б. Мюлле, Р. Андрианцитохайна, А. Клещев // Биохимия.- 1998. 63, №7. - С.976-983.

89. Суздальцев А.А. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (современные критерии оценки тяжести течения, эффективности лечения и прогноза) / А.А. Суздальцев // Автореф. дисс. д-ра мед. наук. СПб., 1992. -19с.

90. Суздальцев А.А. Иммунопатологические механизмы при геморрагической лихорадке с почечным синдромом / А.А. Суздальцев, Л.Н. Еланская, Л.Н. Новомлинцева // Актуальные вопросы природно-очаговых инфекций. Горький, 1988. - С.110-114.

91. Ткаченко Е.А. Специфическая лабораторная диагностика, этиология и распространение геморрагической лихорадки с почечным синдромом / Е.А. Ткаченко // Автореф. дисс. д-ра мед. наук. М., 1988. - 32с.

92. Ткаченко Е.А. Современное ссостояние проблемы ГЛПС / Е.А. Ткаченко, Р.А. Слонова, Л.И. Иванов // Природно-очаговые болезни человека. Омск, 2001. -С.22-32.

93. Ткаченко Е.А. Хантавирусы и хантавирусные вакцины / Е.А. Ткаченко, А.Е. Деконенко, Т.К. Дзагуров // Хантавирусы и хантавирусные вакцины: Материалы, посвященные к 70-тилетию изучения ГЛПС на Дальнем Востоке. -Владивосток, 2003. С.56-78.

94. Турпаев К.Т. Активные формы кислорода и регуляция экспрессии генов / К.Т. Турпаев // Биохимия. 2002. - 67, №3. - С.339-353.

95. Тэйлор Б.С. Индуцибельная синтаза оксида азота в печени: регуляция и функции / Б.С. Тэйлор, Л.Х. Аларсон, Т.Р. Биллиар // Биохимия. 1998. - 63, №7. - С.905-923.

96. Фазлыева P.M. Тромбогеморрагический синдром при геморрагическом васкулите и острой почечной недостаточности / P.M. Фазлыева // Автореф. дисс. д-ра мед. наук. М., 1988. - 44с.

97. Фазлыева P.M. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом в Республике Башкортостан / P.M. Фазлыева, Д.Х. Хунафина, Ф.Х. Камилов // Уфа, 1995. 343с.

98. Фархутдинов P.P. Хемилюминесцентные методы исследования свободно-радикального окисления в биологии и медицине / P.P. Фархутдинов, В.А. Лиховских // Уфа, 1995. с.

99. Федорченко Ю.Л. Сосудистая проницаемость, микроциркуляция и биологически активные вещества у больных геморрагической лихорадкой спочечным синдромом / Ю.Л. Федорченко, Б.З. Сиротин, Е.Н. Рожковская // Терап. архив. 1990. - №5. - С.71-74.

100. Фрейдлин И.С. Ключевая позиция макрофагов в цитокиновой регуляторной сети / И.С. Фрейдлин // Иммунология. 1995. - №3. - С.44-48.

101. Хаитов P.M. Современные представления о защите организма от инфекции / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2000. - №1. - С.61-64.

102. Хмельницкий O.K. Эндокринная система и иммунитет / O.K. Хмельницкий, А.Ш. Зайчик, Ю.Н. Зубжицкий // Архив патологии. 1983. - №11. - С.82-89.

103. Хунафина Д.Х. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом: (Клинико-патогенетические аспекты) / Д.Х. Хунафина // Автореф. дисс. д-ра мед. наук. СПб., 1995. - 31с.

104. Чукавина А.И. К патогенезу геморрагической лихорадки с почечным синдромом / А.И. Чукавина, А.И. Мотырева, Г.К. Кустарников // Сов. медицина. №9. - С.52-54.

105. Шардин С.А. Пол, возраст и болезни / С.А. Шардин // Екатеринбург, 1994. -174с.

106. Шичкин В.Г. Патогенетическое значение цитокинов и перспективы цитокиновой/антицитокиновой терапии / В.Г. Шичкин // Иммунология. 1998. -№2. - С.10-14.

107. Янбаев Б.Ш. Комплексная клинико-иммунологическая характеристика больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом / Б.Ш. Янбаев // Автореф. дисс. канд. мед. наук. Уфа, 1997. - 25с.

108. Ярилин А.А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии / А.А. Ярилин // Иммунология. 1997. - №5. - С.7-14.

109. Bachmann S. Nitric oxide in the kidney synthesis, localization, and function / S. Bachmann, P. Mundel // Am. J. Kidney Dis. 1994. - Vol. 24. - P. 112-129.

110. Battinelli E. Nitric oxide induces apoptosis in megakaryocyte cell lines / E. Battinelli, J. Loscalzo // Blood. 2000. - Vol. 95. - P. 3451-3459.

111. Busse R. Induction of nitric oxide synthase by cytokines in vascular smooth muscle cells / R. Busse, A. Mulsch // FEBS Lett. 1990. - Vol. 275. - P.87-90.

112. Cabrera C. The role of nitric oxide in the central control of blood pressure / C. Cabrera, D. Bohr // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. - Vol. 206. - P.77-81.

113. Charbit M. Nitric oxide and the renin angiotensin system contributions to blood pressure in the young rat / M. Charbit, I. Blazy, J. Gogusev // Pediatr. Nephrol. -1997.-Vol. 11, №5. -P.617-622.

114. Culotta E. NO news is good news / E. Culotta, D.E. Koshland // Science. -1992. Vol. 258. - P.1862-1865.

115. Davis I.C. Elevated Generation of Reactive Oxygen/Nitrogen Species in Hantavirus Cardiopulmonary Syndrome / I.C. Davis, A.Y. Zayac, K.B. Nolte // J. Virol. 2002. - Vol. 76, №16. - P.8347-8359.

116. Dimmeler S. Activation of nitric oxide synthase in endothelial cells by Akt-dependent phosphorylation / S. Dimmeler, I. Fleming, R. Busse // Nature. 1999. -Vol. 399. -P.601-605.

117. Forstermann U. Nitric oxide synthase isozymes, characterization, purification, molecular cloning and function / U. Forstermann, E.I. Closs, J.S. Pollock // Hypertension. 1994. - Vol. 23. - P. 1121 -1131.

118. Fridman A. Nitric oxide from molecular biology to clinical nephrology / A. Fridman, T. Brewer, L. Feld // Pediatr. Nephrol. 1998. - Vol. 12, №6. - P.504-511.

119. Furchgott R.F. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of vascular smooth muscle by acetylcholine / R.F. Furchgott, J.W. Zawadzki // Nature. -1980. Vol. 286. -P.373-376.

120. Garthwaite J. Nitric oxide signalling in the central nervous system / J. Garthwaite, C.L. Boulton // Ann. Rev. Physiol. 1995. - Vol. 57. - P.683-706.

121. Grinder J.R. Interplay of VIP and nitric oxide in regulation of the descending relaxation phase of peristalsis / J.R. Grinder // Amer. J. Physiol. 1993. - Vol. 264. -P.G334-G340.

122. Groc L. Nitric oxide synthase inhibition during development: effect on apoptotic death of dopamine neurons / L. Groc, H.T. Jackson, H. Jiang, L. Bezin // Brain Res. Dev. Brain Res. -2002. Vol. 138(2). - P. 147-53.

123. Guzik T.J. Vascular superoxide production by NAD(P)H oxidase / T.J. Guzik, N.E.J. West, E. Black // Circular Res. 2000. - Vol. 86. - P.E85-E90.

124. Hibbs J.D. Evidence for cytokine-inducible nitric oxide synthesis from L-arginine in patients receiving interleukin-2 therapy / J.D. Hibbs, C. Westenfelder, R. Taintor // J. Clin. Invest. 1992. - Vol. 89. - P.867-877.

125. Hunley Т.Е. Nitric oxide and endothelin in pathophysiological settings / Т.Е. Hunley, S. Iwasaki, T. Homma, V. Kon // Pediatr. Nephrol. 1995. - Vol. 9, №2. -P.235-244.

126. Ignarro J. Biosynthesis and metabolism of endothelium-derived nitric oxide / J. Ignarro // Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1990. - Vol. 30. - P.535-560.

127. Kanerva M. Pathogenesis of Puumala and other hantavirus infections / M. Kanerva, J. Mustonen, A. Vaheri // Rev. Med. Virol. 1998.- Vol. 8. - P.67-87.

128. Keith M. Channon Nitric oxide synthase in atherosclerosis and vascular injury / M. Channon Keith, Qian HuSheng, S.E. George // Thromb Vase. Biol. 2000. - Vol. 20. - P.l873-1881.

129. Klingstrom J. Wild type Puumala hantavirus infection induces cytokines, C-reactive protein, creatinine and nitric oxide in cynomolgus macagues / J. Klingstrom, A. Plyusnin, A. Vaheri, F. Lundkvist // J. Virol. 2002. - Vol. 76, №1. - P.444-449.

130. Kobzik L. Nitric oxide in skeletal muscle / L. Kobzik, M.B. Reid, D.S. Bredt, J.S. Stamler // Nature. 1994. - Vol. 372. - P.546-549.

131. Kotake Y. / Y. Kotake, H. Sang, T. Miyajima // Biochim. Biophis. Acta. 1998. -Vol. 1448, №1. -P.77-84.

132. Krakauer T. Serum leves of tumor necrosis factor- alpha, interleukin-1 and interleukin-6 in hemorrahig fever with renal syndrome / T. Krakauer, J.W. Leduc, H. Krakauer // Viral-Immunol. 1995. - Vol. 8(2). - P.75-9.

133. Konturek S. Role of nitric oxide in the digestive systems / S. Konturek, P. Konturek // Digestion. 1995. - Vol. 56. - P. 1-13.

134. Koshland D.E. Molekule of the Jear (editorial) / D.E. Koshland // Science. -1992.-Vol. 258.-P.1861.

135. Lee M. Effect of overepression of BCL-2 on cellular oxidative damage, nitric oxide production, antioxidant defenses and the proteasome / M. Lee, D.H. Hgun, K.A. Marschall // Free radical biology et medicine. 2001. - Vol. 31(12). - P.1550-9.

136. Lepoivre M. Inactivation of ribonucleotide reductase by nitric oxide / M. Lepoivre, F. Fieschi, J. Coves // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1991. - Vol. 179. -P.442-448.

137. Li H. Nitric oxide in the pathogenesis of vascular disease / H. Li, U. Forstermann // J. Pathol. 2000. - Vol. 190(3). - P.244-254.

138. Liauder L. Biology of nitric oxide signaling / L. Liauder, F.G. Soriano, C. Szabo // Crit. Care Med. 2000. - Vol. 95. - P.37-52.

139. Liversidge J. Nitric oxide mediates apoptosis thvough formation on peroxynitrite and Fas/Fas-ligand interactions in experimehtal autoimmune uvertes / J. Liversidge, A. Dick // Amer. J. Path. 2002. - Vol. 160(3). - P.905-16.

140. Liu Y.F. Characteristics of immunocomplex in autopsy tissues of hemorrhagic fever with renal syndrome / Y.F. Liu, S.J. Yang, P.S. Yan // Clin. Med. J. Engl.-1994. -Vol. 107, №6. P.444-449.

141. Liu Y.H. Hantavirus infection with marked sinus bradycardia / Y.H. Liu, J.H. Huang, P.R. Hsueh // Emerg. Infect. Dis. 2002. - Vol. 8, №6. - P.23-27.

142. Lowenstein C.J. Nitric oxide: a physiologic messengers / C.J. Lowenstein, J.L. Dinerman, S.H. Snyder // Ann. Intern. Med. 1994. - Vol. 120. - P.227-237.

143. Miller J.I. 12/ly-lipooxygenase translocation enharces site-specific actin polymerization in macrophages phagocytosing apoptotic cells / J.I. Miller, M.K. Chang, C.P. Funk// J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276(22). - P.19431-9.

144. Miyazaki H. Endogenous nitric oxide synthase inhibitor / H. Miyazaki, H. Matsuoka, J.P. Cooke // Circulation. 1999. - Vol. 99. - P. 1141-1146.

145. Moncada S. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology / S. Moncada, R.M.J. Palmer, E.A. Higgs // Pharmacol. Rev. 1991. - Vol. 43. - P. 109142.

146. Moncada S. Mechanisms of disease: the L-arginine-nitric oxide pathway / S. Moncada, A. Higgs // New Engl. J. Med. 1993. - Vol. 329. - P.2002-2012.

147. Murray J. Nitric oxide: mediator of nonadrenergic noncholinergic responses of opossum oesophegeal muscle / J. Murray, C. Du, A. Ledlow // Amer. J. Physiol. -1991.-Vol. 261.-P.401-406.

148. Nagata S. Apoptosis by death factors / S. Nagata // Cell. 1997. - Vol. 88. -P.355-365.

149. Nakaki T. Physiological and clinical significance of NO (nitric oxide)- a review / T. Nakaki // Keio. J. Med. 1994. - Vol. 43. - P. 15-26.

150. Nathan C. Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells / C. Nathan // FASEB J. 1992. - Vol. 6. - P.3051-3064.

151. Nathan С. Nitric oxide synthases: roles, tolls and controls / C. Nathan, Q. Xie // Cell. 1994. - Vol. 79. - P.915-918.

152. Nussler A.K. Stimulation of the nitric oxide synthase pathway in human hepatocytes by cytokines and endotoxin / A.K. Nussler, M. Di Silvio, T.R. Billiar // J. Exp. Med. 1992. - Vol. 176. - P.261-264.

153. Palmer R.M.J. Ninric oxide release accounts for the biological activity of endothelium-derived relaxing factor / R.M.J. Palmer, A.G. Ferrige, S. Moncada // Nature. 1987. - Vol. 327. - P.534-536.

154. Peters C.I. Spectrum of hantavirus infectium: Hemorrhagic fever with renal syndrome and hantavirus pulmonary syndrome / S.I. Peters, L.S. Сагу, H. Levy // Amm. Rev. Med. 1999. - Vol. 50. - P.531-545/

155. Pepper C.B. Nitric oxide: from laboratory to bedside / C.B. Pepper, A.M. Shah // Spectrum Int. 1996. - Vol. 36. - P.20-23.

156. Plyusnin A. Hantaviruses: genome structure, expression and evolution / A. Plyusnin, O. Vapalahti, A. Vaheri // J. Gen. Virol. 1996. - Vol. 77. - P.2677-2687.

157. Radomsky M.W. An L-arginine/nitric oxide pathway present in human platelets regulates aggregation / M.W. Radomsky, R.M. Palmer, S. Moncada // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. - Vol. 87. - P.5193-5197.

158. Rand M.J. Nitric oxide as a neurotransmitter in peripheral nerves: nature of transmitter and mechanism of trasmission / M.J. Rand, C.G. Li // Ann. Rev. Pharmacol. 1995. - Vol. 57. -P.659-682.

159. Rees D.D. Characterization of three inhibitors of endothelial nitric oxide synthase in vitro and in vivo / D.D. Rees, R.M.J. Palmer, R.Schulz // Br. J. Pharmacol. 1990. - Vol. 101. - P.746-752.

160. Sigmon D.H. Degree of renal artery stenosis alters nitric oxide regulation of renal hemodynamics / D.H. Sigmon, W.H. Beierwaltes // J. Am. Soc. Nephrol. -1994. Vol. 5. - P.1369-1377.

161. Solhaug M.J. Nitric oxide in the developing kidney / M.J. Solhaug, L.D. Ballevre, J.-P. Guignard // Pediatr. Nephrol. 1996. - Vol. 104. - P.529-539.

162. Snyder S.H. Janus faces of nitric oxide / S.H. Snyder // Nature. 1993. - Vol. 364.-P.577.

163. Stoos B.A. Endothelial-derived nitric oxide sodium transport by affecting apical membrane channels in cultured collecting duct cells / B.A. Stoos, O.A. Carretero, J.L. Garvin // J. Am. Soc. Nephrol. 1994. - Vol. 4. - P. 1855-1860.

164. Thang P.G. Fatty acid oxidation and signality apoptosis / P.G. Thang, E. La, J. Kern // Biol. Chem. 2002. - Vol. 383, №3-4. - P.425-442.

165. Tyurina Y.Y. Phosphatidylserine peroxidation during apoptosis. A signaling pathwary for phagocyte clearance / Y.Y. Tyurine, V.A. Tyurin, S.X. Liu // Subcellular biochemistry. 2002. - Vol. 36. - P.79-96.

166. Umans J.G. Nitric oxide in the regulation of blood flow and arterial pressure / G.J. Umans, R. Levi // Ann. Rev. Physiol. 1995. - Vol. 57. - P.771-790.

167. Vilira H.L. The adenine nucleotide translocator: a target of nitric oxide, peroxynitrite and 4-hydroxynonenal / H.L. Vieira, A.S. Belzacg, P. Haouzi // Oncogene. -2001. Vol. 19,№32. -P.4305-4316.

168. Wang Y. Nitric oxide synthases: Biochemical and molecular regulation / Y. Wang, P.A. Marsden // Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 1995. - Vol. 4. - P. 12-22.

169. Webb J.L. Effect of adhesion on inducible nitric oxide synthase (iNOS) production in purified human neutrophilis / J.L. Webb, J.M. Polak, A.T. Evans // Clin. Exp. Immunol. 2001. - Vol. 123. - P.42-48.

170. Wink D.A. DNA deaminating ability and genotoxicity of nitric oxide and its progenitors / D.A. Wink, K.S. Kasprzak, C.M. Maragos // Science. 1991. - Vol. 254. -P.1001-1003.

171. Yashina L.N. Genetic diversities of hantaviruses ascociated with hemorrhagic fever with renal syndrome in the far east of Russia / L.N. Yashina, N.P. Pastrshev, L.J. Jvanov // Virus. Res. 2000. - Vol. 70. - P.31-44.

172. Zhang J. Nitric oxide in the nervous system / J. Zhang, S.H. Snyder // Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1995. - Vol. 35. -P.213-233.

173. Zhang H. Catravas Nitric oxide differentialle regulares induction of type II nitric oxide synthase in rat vascular smooth muscle cells versus macrophages / H. Zhang, C. Snead, D. John // Arterioscler Thromb Vase. Biol. 2001. - Vol. 21. - P.529-535.

174. Zhang W. Involvement of caspases in 4-hydroxyalcenal induced apoptosis in human leukemic cells / W. Zhang, Q. He, L.L. Chan // Free Rad. Biol. Med. - 2001. -Vol. 30, №6. - P.699-706.