Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Оценка эффективности региональной программы внешней оценки качества детекции антител к вирусу иммунодефицита человека

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Оценка эффективности региональной программы внешней оценки качества детекции антител к вирусу иммунодефицита человека"

На правах рукописи

Кудрявцева Елена Николаевна

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ РЕГИОНАЛЬНОЙ ПРОГРАММЫ ВНЕШНЕЙ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА ДЕТЕКЦИИ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА.

03.00.06 - вирусология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

0У3447012

Москва-2008

Работа выполнена в ФГУН Государственном научно-исследовательском институте стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л А Тарасевича Роспотребнадзора (ФГУН ГИСК им Л.А. Тарасевича) и ГУ Московский областной научно-исследовательский клинический институт им М Ф Владимирского (МОНИКИ им М Ф. Владимирского)

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Воробьева Мая Сергеевна Кузин Станислав Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Шалунова Нина Васильевна

доктор биологических наук Бобкова Марина Ридовна

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования «Российская Медицинская Академия последипломного образования» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ.

Защита диссертации состоится 2008 года в ^ часов на заседании

диссертационного совета Д 001020 01 в ГУ НИИ вирусологии им ДИ Ивановского РАМН (адрес- 123098, Москва, ул Гамалеи, 16)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ вирусологии им Д.И. Ивановского РАМН

Автореферат разослан « с9 2008 года

Ученый секретарь диссертационного совета

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Заражение вирусом иммунодефицита человека 1-го типа (ВИЧ-1) неизбежно приводит к развитию синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД) - заболевания иммунной системы, сопровождающегося развитием оппортунистических инфекций и неопластических образований, которое заканчивается летальным исходом В настоящее время распространение ВИЧ типа 1 в мире и Российской Федерации приобрело характер эпидемии, и отсутствие мер специфической профилактики делает борьбу с этой инфекцией весьма затруднительной (J Esparza, 2000, A F Bobkov et al, 2004, В В Покровский с соавт, 1992,1997,1998, Г Г Онищенко, 2001,2003)

В основе предотвращения новых случаев инфицирования лежат мероприятия, направленные на разрыв механизма передачи возбудителя Достоверное и точное выявление инфицированных лиц - одно из главных условий конечного успеха противоэпидемической работы (О А Дунаевский с соавт, 2002; Ю С Кривошеин, 2002; Ю В Мартынов с соавт, 2002)

В России с 1987 года проводится обязательный скрининг доноров и групп риска на наличие анти-ВИЧ, регламентированный нормативными документами МЗ и CP РФ В последние годы с этой целью используют тест-системы, предназначенные для одновременного выявления антигенов ВИЧ и антител к нему, что позволяет диагностировать ВИЧ-инфекцию на более ранних стадиях В качестве отборочного теста используется иммуноферментный анализ Для обеспечения и повышения достоверности получаемых результатов необходимо участие клинико-диагностических лабораторий различного уровня в системах внешней оценки качества (ВОК) лабораторных исследований Системы ВОК позволяют отслеживать состояние внешних и внутренних факторов, влияющих на качество выполняемых исследований (А В. Мошкин, В В Долгов, 2004)

В мировой практике широко распространены системы ВОК, основной целью которых, как определило совещание экспертов ВОЗ (Брюссель, 1979), является обеспечение сравнимости результатов исследований, полученных в разных лабораториях Сегодня разработаны специальные руководства, и во всех развитых странах действуют программы ВОК, В нашей стране также проведена необходимая организационная и теоретическая работа, в результате которой издан приказ МЗ РФ № 117 от 03 05 95 о внедрении федеральной системы внешней оценки качества (ФСВОК), одним из разделов которой является определение маркеров вирусных инфекций, таких как ВИЧ, гепатиты В и С (Е Н Гаранина, 1997, В В Меньшиков, 2000, В.Н Малахов с соавт, 2002, О В Исаева, 2004) Полученная к настоящему времени с помощью ФСВОК информация позволяет оценить качество лабораторных исследований, выполняемых в медицинских учреждениях различного профиля (ОВ. Исаева с соавт, 1996, 2001, 2003, МИ Михайлов с соавт, 2002)

Вместе с тем, по нашему мнению, необходима такая система контроля качества исследований, которая давала бы возможность региональным органам управления медицинской службой оперативно реагировать на

выявляемые недостатки в работе областных и районных лабораторий. Это делает актуальным разработку региональных программ ВОК в дополнение к действующей ФСВОК. Сегодня в ряде регионов России уже действуют такие программы и специалистами констатирована их высокая эффективность (Р С Тленкопачев с соавт, 2003; ВН Болехан с соавт, 2004; А И Жердева с соавт, 2004; С Н Кузин с соавт, 2007, Н В Садикова, 2007), однако этот опыт имеет ограниченный характер Организация и внедрение региональных программ ВОК лабораторных исследований по детекции маркеров инфекционных заболеваний, особенно социально-значимых, таких как ВИЧ-инфекция, на территориях с напряженной эпидемиологической ситуацией, важная и актуальная задача

Изложенное выше послужило основанием для разработки и внедрения региональной программы внешней оценки качества лабораторных исследований по детекции анти-ВИЧ в практику лабораторной службы Московской области.

Цель и задачи исследования

Цель работы - разработка и оценка эффективности региональной программы внешней оценки качества лабораторных исследований по детекции анти-ВИЧ в сети скрининговых лабораторий Московской области.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи

1. Сформировать организационно-методическую структуру региональной программы ВОК лабораторных исследований по детекции анти-ВИЧ в системе лабораторной службы Московской области

2 Разработать и аттестовать панели образцов сывороток крови, содержащих и не содержащих анти-ВИЧ, для выполнения контрольных исследований в рамках реализации программы ВОК

3. Оценить эффективность региональной программы внешней оценки качества детекции анти-ВИЧ

4. Определить рейтинги лабораторий-участниц ВОК по показателям правильности, рассчитанным по результатам контрольных исследований с образцами, содержащими и не содержащими аналит

Научная новизна

- впервые показана эффективность применения региональной программы ВОК лабораторных исследований для улучшения качества работы скрининговых лабораторий Московской области по серодиагностике ВИЧ. Показана перспективность дальнейшего применения региональной программы ВОК для постоянного мониторинга работы лабораторий;

- впервые реализована региональная программа внешней оценки качества детекции анти-ВИЧ в сети скрининговых лабораторий, что позволило существенно улучшить качество серологической диагностики ВИЧ-инфекции - удельный вес лабораторий, правильно определивших контрольные образцы, содержащие анти-ВИЧ, увеличился с 16,6% -42,8% в 1-П циклах до 83,9% - 93,1% - в V-VI циклах ВОК,

- определены критерии отбора и аттестации контрольных материалов для формирования панелей сывороток крови, содержащих и не содержащих

анти-ВИЧ, применяемых при рутинных постановках в рамках региональной программы ВОК,

- впервые применена статистическая модель для формирования рейтинговых групп лабораторий - участниц региональной программы ВОК детекции анти-ВИЧ как по итогам всех выполненных циклов, так и в отдельные интервалы по критерию правильности определения контрольных образцов, содержащих и не содержащих аналит

Положения, выносимые на защиту

1. Разработаны подходы по формированию организационной структуры региональной программы ВОК лабораторных исследований для сети скрининговых лаборатории по диагностике ВИЧ-инфекции.

2 Сформулированы принципы отбора контрольных материалов для формирования специальных панелей — требования к их получению, аттестации, комплектованию панелей и мероприятий по их применению

3 Определены параметры, по которым оценивается качество лабораторных исследований в скрининговых лабораториях Московской области в период реализации разработанной и внедренной в практику региональной программы ВОК

а) показатели правильности определения наличия или отсутствия анти-ВИЧ в образцах контрольной панели,

б) отдельные категории ошибок, совершенных техническим персоналом скрининговых лабораторий при выполнении контрольных постановок в рамках реализации региональной программы ВОК

4 Определены рейтинги скрининговых лабораторий Московской области по выбранным параметрам с использованием методов вариационной статистики

5 Установлена высокая эффективность организационно-методических мероприятий, реализуемых в ходе выполнения региональной программы ВОК для улучшения качества работы скрининговых лабораторий, как при ее реализации, так и на перспективу

Практическая значимость

Сформирована организационная структура региональной программы внешней оценки качества детекции анти-ВИЧ в сети скрининговых лабораторий, а также разработана нормативная база и учетные документы, обеспечивающие ее реализацию

Выявлена структура и частота ошибок, совершаемых сотрудниками лабораторий-участниц ВОК в ходе выполнения серологических исследований по определению анти-ВИЧ в ИФА

Показано, что адресные организационно-методические мероприятия, основанные на анализе совершаемых ошибок в скрининговых лабораториях при выполнении серологических исследований, позволяют существенно повысить достоверность получаемых результатов

Показана возможность определения текущих и итоговых рейтинговых позиций лабораторий-участниц и используемых иммуноферментных тест-

систем по отдельным критериям в рамках разработанной региональной программы ВОК.

Улучшение качества серологической диагностики в рамках скрининговых исследований на наличие анти-ВИЧ в результате внедрения региональной программы ВОК повысило достоверность информационной базы информационно-аналитической подсистемы эпидемиологического надзора

Внедрение полученных результатов

Разработаны и внедрены.

- пакет прикладных программ для учета больных и автоматизации протоколов для государственной отчетности по ВИЧ инфицированным (СПИД-ЛАБОРАТОРИЯ) Свидетельство № 2002610932 от 13 июня 2002 года;

- пакет прикладных программ «Региональная программа внешней оценки качества». Свидетельство № 2005610695 от 23 марта 2005 года

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на- конференциях «Национальные дни лабораторной медицины России» (Москва, 2000-2003 годы); XI, XII международных конференциях «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Украина, Крым, Гурзуф, 2003, 2004 годы), 1-й Всероссийской конференции по вакцинологии «Медицинские, иммунобиологические препараты для профилактики, диагностики и лечения актуальных инфекций» (Москва, 2004); «Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции, СПИД-ассоциированных заболеваний и инфекций, передающихся половым путем» (Московская область, 2004 год), «Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов В и С, СПИД-ассоциированных заболеваний» (Московская область, 2006 год)

Апробация диссертации состоялась 8 апреля 2008 года на заседании Ученого совета ФГУН Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им Л А Тарасевича Роспотребнадзора РФ.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 работ, в том числе 4 в журналах, рекомендованных ВАК РФ

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и указателя литературы, состоящего из 157 работ, из них 92 отечественных и 65 зарубежных авторов, а также двух приложений. Диссертация изложена на 153 страницах, включает 35 таблиц и 7 рисунков.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследования

Работа выполнена в период с 2000 по 2006 годы в головной лаборатории диагностики СПИД МОНИКИ им М Ф. Владимирского Минздрава Московской области За этот период было осуществлено шесть

циклов ВОК Каждый цикл включал в себя формирование и аттестацию контрольной панели, подготовку пакета документов для каждой скрининговой лаборатории, рассылку панелей и документов, проведение контрольных исследований в режиме рутинной постановки, сбор полученных результатов, их обработка с помощью пакета специальных программ, выдача предварительных и заключительных результатов, выдача сертификатов соответствия за правильные результаты контрольных исследований

Для реализации комплекса мероприятий по внедрению региональной программы ВОК детекции анти-ВИЧ в сети скрининговых лабораторий Московской области на базе головной лаборатории разработана и аттестована специальная контрольная панель, состоящая из 10 образцов сывороток крови, содержащих и не содержащих анти-ВИЧ Семь образцов содержали анти-ВИЧ Эти образцы были разведены в различных пропорциях с использованием плазмы донора крови, предварительно проверенной на наличие маркеров ВИЧ-инфекции и гепатитов В и С, для достижения различной концентрации антител к ВИЧ-1, 2 в каждом образце Аттестация образцов проведена с использованием тест-систем, применяемых в скрининговых лабораториях в рутинной практике В результате аттестации каждая сыворотка контрольной панели имела фиксированное значение величины оптической плотности (ОП) и R (отношение величины оптической плотности образца к величине отсечения (cut off), что определяло их распределение по концентрациям антител к ВИЧ 2 образца с высокой концентрацией анти-ВИЧ-1,2 (ОП от 3,0 до 4,5; R>10), 3 - со средней (ОП от 0,7 до 1,1; R от 2,0 до 9,9) и 2 - с низкой концентрацией (ОП менее 0,4, R менее 2,0). Еще 3 образца не содержали анти-ВИЧ

Ратификацию аттестации контрольных панелей осуществляли в ГИСК им JTA Тарасевича МЗ и CP РФ на базе лаборатории стандартизации и контроля препаратов против арбовирусных инфекций, риккетсиозов и СПИДа (руководитель - профессор, д м н М С Воробьева) При ратификации проводили повторное исследование сывороток контрольной панели на аттестованных наборах иммуноферментных тест-систем, разрешенных к применению на территории РФ Все сыворотки контрольных панелей исследовали также методом иммунноблоттинга для подтверждения наличия или отсутствия в них антител к ВИЧ

Всего проведено шесть контрольных циклов Для каждого цикла комплектовали отдельную контрольную панель из 10 образцов В скрининговые лаборатории контрольные образцы поступали в зашифрованном виде Каждому образцу присваивали два кода - буквенный и цифровой. Каждый код, используемый для зашифровки контрольных образцов, имел несколько вариантов и не применялся повторно Комплектование панели для каждой лаборатории производили методом случайного подбора образцов

Для правильного выполнения контрольных исследований разработана специальная инструкция (пояснительная записка) по работе с панелью и набор документов, которые по итогам работы заполняли сотрудники

скрининговых лабораторий В рамках реализации программы ВОК контрольные панели доставляли в скрининговые лаборатории курьером в сумке-холодильнике После поступления в течение 3-5 дней в лаборатории осуществляли контрольные исследования в режиме рутинной постановки В ряде случаев эти исследования выполняли разные операторы Для каждой тест-системы и каждого оператора, выполнявшего исследования, заполнялись специальные формы Заполненные формы с протоколами контрольных и рутинных исследований (сетка-трафарет и данные с величинами ОП) направляли в головную лабораторию МОНИКИ им М Ф Владимирского для анализа работы скрининговых лабораторий

Для каждого цикла ВОК (то есть один раз в год) готовили новую серию контрольной панели, в которой сыворотки отбирали по величине R таким образом, чтобы R сыворотки новой серии панели соответствовала R аналогичной сыворотки предыдущей серии контрольной панели Для формирования контрольной панели отбирали сыворотки крови пациентов или доноров и исследовали в различных иммуноферментных тест-системах, применяемых для диагностики ВИЧ-инфекции на территории Московской области Для приготовления каждого контрольного образца, содержащего анти-ВИЧ, смешивали несколько образцов с близкой ОП (пулировали) с целью достижения необходимого объема Далее разводили полученный пул донорской сывороткой, не содержащей анти-ВИЧ, HbsAg, анти-ВГС и антител к Т Pallidum, до достижения необходимых величин ОП и R

Отобранные для включения в контрольную панель сыворотки должны были отвечать соответствующим физико-химическим свойствам быть прозрачными, без гемолиза и бактериального пророста, светло-желтого цвета, не содержать посторонних включений и осадка Объем каждой сыворотки должен был быть достаточным для получения аликвот, в количестве, необходимом для проведения контрольного цикла в каждой клинико-диагностической лаборатории Московской области Аттестованные сыворотки разливали в пластиковые пробирки по 1,5 мл, хранили и транспортировали при температуре от 2°С до 8°С Сыворотки не инактивировали, не добавляли консервантов и стабилизаторов, то есть сыворотки контрольных панелей по своему составу и состоянию были максимально приближены к качеству сывороток, поступающих в скрининговые лаборатории на исследования Срок годности сывороток контрольных панелей соответствовал сроку, допустимому для сыворотки крови человека при ее постоянном хранении при температуре от 2°С до 8°С, то есть не более двух месяцев За этот срок контрольные панели должны быть полностью использованы Общий тираж каждой серии контрольной панели составлял не менее 45 экземпляров

Всего в региональной программе ВОК детекции анти-ВИЧ участвовали 33 лаборатории Московской области, в том числе во всех шести циклах ВОК - 18 лабораторий, в пяти циклах ВОК - 6, в четырех - 2, в трех - 3, в двух - 2 и в одном цикле ВОК - еще 2 лаборатории

В ходе реализации региональной программы ВОК в скрининговых лабораториях использованы иммуноферментные тест-системы (ИФТС) отечественных и зарубежных изготовителей Всего использованы 13 ИФТС. «Пептоскрин-2» и «Амеркард Анти-ВИЧ-1/2К» (ООО «Амеркард», Россия), «ВИЧ-1, ВИЧ-2-ИФА-Авиценна» (МЦ «Авиценна», Россия), «Рекомбинант ВИЧ-1, 2 ДСМ» (ЗАО «МБС», Россия), «РекомбиБест анти-ВИЧ-1+2» и «Комби-Бест Анти-ВИЧ-1+2» (ЗАО «Вектор-Бест», Россия), «Скрин-ВИЧ» (ЗАО «ПКБ им И И Мечникова», Россия), «ЭКОлаб-тест-ВИЧ 1, 2» (ЗАО «ЭКОлаб», Россия), «ИФА-АНТИ-ВИЧ-УНИФ» и «ИФА ДС ВИЧ АГ/АТ» (НПО «Диагностические системы», Россия), «ДС-Джен-скрин Плюс ВИЧ Аг/Ат» (ООО «БиоРад», США), «Вироностика Аг/Ат» (фирма «БиоМерье», Голландия), «Мюрекс ВИЧ АГ/АТ» (фирма «Мюрекс», США)

Для обработки полученных от каждой лаборатории результатов контрольных исследований использован специально разработанный пакет программ «Региональная программа внешней оценки качества» (свидетельство № 2005610695 от 23 марта 2005 года) Данные программы позволяют анализировать а) ОП каждого образца контрольной панели с расчетом коэффициента позитивности, б) правильность расчета величины cut off, в) сравнение величин ОП контрольных образцов, полученных в лаборатории, с паспортными данными, г) соответствие величин ОП для К+ и К- с паспортом для данной серии тест-системы, д) ошибки каждого оператора (соответствие регламенту постановки, технические ошибки, совершенные при контрольных постановках)

Для статистической обработки полученных результатов, определения рейтинговых позиций лабораторий - участниц ВОК и ИФТС, применяемых в лабораториях Московской области, использовали общепринятые методы вариационной статистики Для определения достоверности различий между сравниваемыми величинами использовали t-критерий Стъюдента

Организационная структура региональной программы внешней оценки качества серологических исследований по определению антител к ВИЧ в сети скрининговых лабораторий Московской области

С целью получения достоверной информации о качестве выполняемых исследований на наличие анти-ВИЧ в сети скрининговых лабораторий Московской области была разработана и внедрена начиная с 2000 года региональная программа внешней оценки качества детекции анти-ВИЧ Разработчиком этой программы ВОК и далее референс-лабораторией выступила головная лаборатория диагностики СПИД и вирусных гепатитов МОНИКИ им М Ф. Владимирского

Основу разработанной региональной программы ВОК составляют, в первую очередь, мероприятия по проведению контрольных циклов в скрининговых лабораториях Московской области с периодичностью один раз в год Для проведения контрольного цикла каждая скрининговая лаборатория Московской области получает контрольные панели сывороток крови, состоящие из 10 предварительно аттестованных образцов, содержащих и не

содержащих антитела к ВИЧ. Каждая сыворотка контрольной панели для каждой лаборатории имеет определенный закодированный номер и индекс

Базовыми элементами разработанной региональной программы ВОК являлись следующие мероприятия:

а) проведение обучающих семинаров с заведующими скрининговыми лабораториями и медицинским персоналом на базе референс-лаборатории по системе ВОК на этапе, предшествующем выполнению исследований в рамках контрольных циклов, а также семинаров по анализу полученных результатов контрольных исследований и разбором выявленных ошибок и погрешностей, проводимых после каждого контрольного цикла,

б) отбор и аттестация образцов сывороток крови для формирования контрольных панелей,

в) рассылка контрольных панелей в скрининговые лаборатории Московской области с обеспечением условий доставки, гарантирующих сохранность сывороток в специальных пакетах,

г) выполнение контрольных исследований в скрининговых лабораториях, заполнение специальных учетных форм, куда вносятся результаты контрольных постановок, и направление полученных результатов в референс-лабораторию в виде специально разработанного протокола,

д) анализ и обобщение полученных результатов контрольных постановок в скрининговых лабораториях в референс-лаборатории,

е) разработка рекомендаций по устранению выявленных ошибок

Организационную структуру разработанной программы ВОК детекции

антител к ВИЧ-1, 2 в сети скрининговых лабораторий Московской области составляли, референс-лаборатория на базе МОНИКИ им М Ф Владимирского, лаборатория стандартизации и контроля препаратов против арбовирусных инфекций, риккетсиозов и СПИДа ГИСК им Л А Тарасевича Роспотребнадзора, а также 33 скрининговые лаборатории различных районных центров Московской области

Функции референс-лаборатории в рамках исполнения региональной системы ВОК следующие-

а) разработка стратегии и общей схемы реализации региональной системы внешней оценки качества детекции антител к ВИЧ-1,2,

б) проведение обучающих семинаров с руководящим и медицинским персоналом скрининговых лабораторий,

в) разработка инструкций по использованию контрольных панелей и анкеты для оформления результатов контрольных постановок в скрининговой лаборатории;

г) отбор и аттестация образцов сывороток крови для формирования контрольных панелей образцов, содержащих и не содержащих антитела к ВИЧ-1,2;

д) формирование и тиражирование контрольных панелей,

е) рассылка контрольных панелей и соответствующей документации в скрининговые лаборатории Московской области;

ж) анализ и обобщение результатов контрольных постановок, выполненных в скрининговых лабораториях, а также ошибок, выявленных при выполнении контрольных заданий цикла,

з) направление результатов по проведенным контрольным исследованиям в каждую скрининговую лабораторию по каждой тест-системе с указанием аттестационных значений для контрольных образцов и значений, полученных при постановках,

и) проведение семинаров с руководителями скрининговых лабораторий по итогам контрольных циклов,

к) выдача сертификатов качества лабораторных исследований лабораториям-участницам ВОК при условии правильного решения контрольных задач и свидетельства об участии в программе ВОК при наличии ошибок в контрольных постановках

Функции лаборатории стандартизации и контроля препаратов против арбовирусных инфекций, риккетсиозов и СПИДа ГИСК им Л А Тарасевича Роспотребнадзора

а) дополнительная аттестация сывороток, входящих в контрольные панели, содержащих и не содержащих антитела к ВИЧ, и выдача паспортов на эти панели,

б) обобщение результатов контрольных исследований совместно с референс-лабораторией,

в) проведение заключительных семинаров по итогам циклов ВОК совместно с референс-лабораторией.

Для реализации данной региональной программы ВОК были разработаны специальные учетные формы, включающие пояснительную записку, бланк для внесения предварительных результатов внешней оценки качества по обнаружению антител к ВИЧ, форму № 1 «Результаты исследований по обнаружению антител к вирусу иммунодефицита человека (анти-ВИЧ)», а также форму № 2 «Сравнение результатов контрольных исследований с референсными данными» По результатам проведенных контрольных исследований каждая скрининговая лаборатория получает сертификат об участии в программе ВОК (при правильном решении контрольных заданий) или заключение об участии в данном цикле (при наличии ошибок в исследованиях)

Принципы формирования и аттестация контрольных панелей сывороток, содержащих и не содержащих антитела к ВИЧ, для реализации региональной программы внешней оценки качества

Формирование контрольных панелей - исключительно важный этап в реализации любой системы ВОК Ключевой элемент при отборе образцов для панели - аттестация с использованием различных иммуноферментных тест-систем, с помощью которых в клинико-диагностических лабораториях выполняются скрининговые исследования поступающих на анализ образцов сывороток крови человека

Для использования в региональной программе ВОК определения антител к ВИЧ в Московской области референс-лабораторией подготовлены

контрольные панели, состоящие из 10 образцов сывороток, в том числе 7 образцов содержащих и 3 образца, не содержащие антитела к ВИЧ-1, 2 Концентрации антител к ВИЧ в образцах, составляющих контрольные панели, существенно различались Так, из семи образцов, содержащих антитела к ВИЧ, в четырех случаях имела место высокая концентрация (величины Я превышали 10), в двух - средняя (Я - от 2,0 до 9,9) и еще в одном образце - низкая (величина Я менее 2,0) В качестве примера приведена структура контрольной панели, содержащей и не содержащей антитела к ВИЧ, основанная на результатах аттестации референс-лаборатории, для пятого цикла ВОК (таблица 1)

Таблица 1

Аттестация контрольной панели для ВОК выявления антител к вирусу иммунодефицита человека, выполненная в референс-лаборатории МОНИКИ (на примере панели для 5 цикла ВОК)

Ж' пи Концентрация ' анти-ВЙЧ Данные аттестация в референс-лаборатории > Оптич. плотн.

анти- HBsAg ан1ги- иммуноблоттинг , к

ВИЧ вге env gag pol

1 - отр отр отр отр отр отр 0,55 0,128

2 - отр отр отр отр отр отр 0,15 0,022

3 - отр отр пол отр отр отр 0,23 0,035

4 высокая пол пол пол пол пол пол 38,4 4,500

5 средняя пол отр пол отр пол отр 4,30 0,772

6 высокая пол отр отр отр пол отр 21,3 3,142

7 низкая пол отр отр отр пол отр 1,80 0,324

8 высокая пол отр отр отр пол отр 12,7 1,879

9 высокая пол отр отр отр пол отр 20,7 3,056

10 средняя пол отр отр пол пол отр 9,9 1,162

Сыворотки контрольных панелей для всех циклов также аттестовали на содержание антител к гепатиту С и HBsAg Присутствие этих маркеров не исключало образцы из контрольных панелей Такая структура контрольных панелей для ВОК по выявлению антител к ВИЧ использована во всех циклах Для аттестации панелей, содержащих и не содержащих антитела к ВИЧ, в референс-лаборатории использовали иммуноферментные тест-системы для выявления антител к ВИЧ 1 и 2 типов или тест - системы для одновременного выявления антител к ВИЧ-1, 2 и антигена р24 ВИЧ «Genelavia Ab» (1 и 2 циклы ВОК) и «Genscreen Plus HIV Ag-Ab» (с 3 по 6 циклы ВОК) производства фирмы «Био Рад» (США), а также иммуноблоттинг «Нью Лав Блот 1» производства фирмы «Био Рад» (США) Дополнительную аттестацию контрольных панелей (ратификацию), содержащих и не содержащих анти-ВИЧ, сформированных в референс-лаборатории, выполнили также в лаборатории ГИСК им JIA Тарасевича с помощью девяти иммуноферментных тест-систем и двух подтверждающих тестов (иммуноблоттинг) Всего дополнительно аттестованы панели для

первых четырех циклов ВОК По результатам дополнительных аттестаций выданы паспорта и приложение с результатами

Оценка эффективности региональной программы внешней оценки качества серологических исследований по выявлению антител к ВИЧ в скрининговых лабораториях Московской области

Реализация разработанной региональной программы ВОК для Московской области начата в 2000 году В общей сложности были проведены шесть контрольных циклов ВОК по выявлению антител к ВИЧ

Качество работы лабораторий оценивали по следующим показателям а) правильность выявления антител к ВИЧ в сыворотках контрольной панели, содержащих антитела к ВИЧ-1, 2, б) правильность определения отсутствия антител к ВИЧ-1, 2 в сыворотках контрольной панели, не содержащих антитела к ВИЧ-1, 2, в) наличие ошибок, совершенных персоналом лабораторий при выполнении исследований

В таблице 2 приведены обобщенные результаты исследований сывороток контрольной панели в скрининговых лабораториях Московской области за 6 циклов ВОК по критериям правильности выявления антител к ВИЧ в сыворотках, содержащих и не содержащих антитела к ВИЧ-1, 2

Таблица 2

Динамика показателей правильности выявления антител к ВИЧ в сыворотках контрольной панели, содержащих и не содержащих антитела к ВИЧ-1, 2, в лабораториях Московской области по

Образцы панели | I цикл II цикл III ЦИКЛ I IV цикл V цикл VI цикл

Содержащие антитела к ВИЧ-1,2 80,8% 92,4% 92,2% 94,0% 99,3% 98,1%

Не содержащие антитела к ВИЧ-1,2 96,8% 92,7% 85,4% 93,1% 98,3% 97,8%

В общей сложности в ходе реализации региональной программы ВОК за все 6 циклов выполнено 3199 контрольных исследований с образцами, содержащими антитела к ВИЧ-1, 2 В 2987 случаях (93,4%±0,4%) получены положительные результаты Важно отметить динамику показателя правильности выявления анти-ВИЧ-1, 2 в контрольных образцах, содержащих антитела к ВИЧ-1, 2, от цикла к циклу Полученные данные свидетельствуют об отчетливо выраженном повышении качества серологических исследований по детекции антител к ВИЧ-1, 2 в лабораториях Московской области По итогам первого цикла ВОК средний показатель правильности выявления антител к ВИЧ в сыворотках контрольной панели, содержащих антитела к ВИЧ-1, 2, составил 80,8% (минимальный за весь период реализации программы ВОК) Уже во втором цикле этот показатель вырос до 92,4% Различия этих показателей статистически достоверны Ц>2, при р<0,05) В третьем и четвертом циклах ВОК были зафиксированы близкие результаты - 92,2% и 94,0% соответственно Необходимо отметить, что количество лабораторий -

участниц ВОК постоянно увеличивалось - с 21 в первом цикле до 28 и 29 в третьем и четвертом Также увеличивалось и общее количество исследований с контрольными образцами, содержащими антитела к ВИЧ-1, 2, - с 280 в первом цикле ВОК до 917 - в четвертом. Такое увеличение происходило за счет использования большего количества ИФТС и увеличения общего количества постановок ИФА в лабораториях-участницах ВОК В пятом и шестом циклах ВОК зарегистрированы наиболее высокие показатели правильности выявления антител к ВИЧ в сыворотках контрольной панели, содержащих антитела к ВИЧ-1, 2 - 99,3% и 98,1% соответственно Следует отметить также максимальное количество лабораторий - участниц - 29 (пятый цикл) и 31 (шестой цикл) Наличие статистически значимых различий между показателями правильности выявления антител к ВИЧ в сыворотках контрольной панели, содержащих антитела к ВИЧ-1, 2, четвертого и пятого цикла 0>2, при р<0,05) дает основание констатировать дальнейшее повышение качества исследований на наличие антител к ВИЧ-1, 2 в сети скрининговых лабораторий Московской области

Важным показателем, характеризующим качество серологических исследований, является доля «ложноположительных» результатов В рамках настоящей программы ВОК оценивали этот показатель с помощью контрольных образцов, не содержащих антитела к ВИЧ-1, 2, включенных в контрольную панель В результате выявлено наличие двух разнонаправленных тенденций В течение трех циклов показатель правильности определения отсутствия антител к ВИЧ в сыворотках контрольной панели, не содержащих антитела к ВИЧ-1, 2, стабильно снижался с 96,8% (в первом цикле ВОК) до 85,4% (в третьем цикле ВОК) Эти различия статистически достоверны (Р>2; при р<0,05) Следует огметить, что в рамках именно этих же циклов зарегистрировано статистически значимое улучшение качества исследований в скрининговых лабораториях по критерию правильности выявления антител к ВИЧ в сыворотках контрольной панели, содержащих антитела к ВИЧ-1, 2. Продолжение реализации региональной программы ВОК, осуществление организационно-методических мероприятий, разработанных головной лабораторией, позволило существенно улучшить работу лабораторий, что отразилось и на показателе правильности определения отсутствия антител к ВИЧ в сыворотках контрольной панели, не содержащих антитела к ВИЧ-1, 2 С 3 по 5 цикл отмечено его стабильное и достоверное повышение с 85,4% до 98,3% (£>2; при р<0,05) со стабилизацией в 6 цикле на уровне в 97,8% (таблица 2)

Важным критерием, позволяющим оценить эффективность программы ВОК, является увеличение от цикла к циклу удельного веса лабораторий, получивших правильные результаты в контрольных постановках сразу по двум критериям - правильности выявления антител к ВИЧ в сыворотках контрольной панели, содержащих антитела к ВИЧ-1, 2, и правильности определения отсутствия анти-ВИЧ-1, 2 в сыворотках контрольной панели, не содержащих анти-ВИЧ-1,2 (таблица 3)

Можно констатировать, что удельный вес лабораторий, показавших

Таблица 3

Динамика удельного веса лабораторий, показавших правильные результаты по критерию правильности выявления антител к ВИЧ при контрольных постановках с панелями, содержащими и не содержащими анти-ВИЧ за 6 циклов ВОК детекции анти-ВИЧ_

Циклы ВОК 1цикл II цикл III цикл IV цикл V цикл VI цикл

Абсолютное количество/ удельный вес лабораторий 5/ 23,8% 7/ 16,7% 61 21,4% 8/ 27,6% 27/ 93,1% 26/ 83,9%

абсолютно точный результат по критерию правильности выявления всех сывороток контрольной панели, содержащих и не содержащих антитела к ВИЧ-1, 2, в течение четырех циклов сохранялся на невысоком уровне -16,7%-27,6% При этом качество исследований в скрининговых лабораториях Московской области, как было отмечено выше, стабильно повышалось Лишь в пятом цикле ВОК зафиксировано значительное увеличение количества и удельного веса лабораторий, правильно определяющих все сыворотки контрольной панели В шестом цикле ВОК отмечена стабилизация работы лабораторий на достигнутом уровне

Таким образом, можно отметить высокую эффективность внедрения в практику здравоохранения Московской области региональной программы внешней оценки качества выявления антител к ВИЧ С ее помощью удалось существенно улучшить качество серологической диагностики ВИЧ-инфекции При этом необходимо подчеркнуть, что улучшение качества серологических исследований, зафиксированное в результате реализации программы ВОК, не позволило достичь необходимых 100% правильности выявления антител к ВИЧ в сыворотках контрольной панели, содержащих антитела к ВИЧ-1,2, и правильности определения отсутствия антител к ВИЧ-1, 2 в сыворотках контрольной панели, не содержащих антитела к ВИЧ-1, 2 Полученные результаты позволяют констатировать, что региональная программа ВОК лабораторных исследований - эффективная мера по повышению качества работы лабораторий и должна функционировать на постоянной основе в качестве инструмента надзора за правильностью проводимых скрининговых исследований в диагностических лабораториях

Характеристика ошибок, допущенных скрининговыми лабораториями Московской области, выявленных в рамках региональной программы ВОК

Обобщение полученных материалов I-VI циклов ВОК выявления антител к ВИЧ-1,2 позволило выделить отдельные категории ошибок-

A) ошибки в результатах исследований контрольных образцов, содержащих и не содержащих антитела к ВИЧ-1, 2,

Б) ошибки при оформлении протоколов исследований и других документов, выявленные при анализе протоколов исследований контрольной панели текущего цикла ВОК,

B) невыполнение или нарушение требований инструкции изготовителей по проведению постановки реакции,

Г) нарушения и погрешности при выполнении исследований, выявленные при анализе протоколов контрольных исследований

Для оценки динамики ошибок категорий Б, В и Г был выбран показатель ц, отражающий отношение общего количества ошибок каждой категории на 100 контрольных постановок (таблица 4)

Таблица 4

Динамика удельного веса ошибок категорий Б, В и Г, выявленных по итогам реализации шести циклов программы ВОК детекции анти-ВИЧ в Московской области (в показателях на 100 постановок)_

№ цикла Участвовало лабораторий/ Ошибки Ошибки Ошибки

количество контрольных категории Б категории В категории Г

постановок абс. и абс. ц абс. и

I 21/40 (9 ИФТС) 11 27,5 6 15,0 6 15,0

II 24/94 (12 ИФТС) 28 29,8 88 93,6 45 47,9

III 28/73 (9 ИФТС) 20 27,4 10 13,7 1 1,4

IV 29/131 (7 ИФТС) 13 9,9 70 53,4 3 23

V 29/58 (6 ИФТС) 30 51,7 39 67,2 1 1,7

VI 31/61 (8 ИФТС) 39 63,9 62 102,4 3 4,9

Обращает на себя внимание то, что во всех циклах ВОК отмечено наличие ошибок всех трех категорий, причем частота ошибок категорий Б и В лишь возрастала Такое положение свидетельствует, с одной стороны, о недостаточной квалификации медицинского персонала лабораторий-участниц ВОК, с другой - о возможной перегруженности сотрудников лабораторий, выполняющих рутинные исследования в режиме потока Можно отметить снижающуюся частоту ошибок категории Г, свидетельствующую об ошибках персонала при проведении ИФА-исследований, выявленных при анализе протоколов Это свидетельствует о том, что сотрудники лабораторий более тщательно стали подходить к проведению исследований. Вместе с тем, очевидно, что постоянное наличие ошибок в проведении исследований, их возрастающая частота, свидетельствуют о невозможности с помощью программы ВОК в условиях рутинных постановок с применением ручных технологий достичь полной реализации диагностических возможностей современных ИФТС Очевидно, что одним из средств повышения качества исследований является переход на автоматический режим постановок с минимизаций ручного труда

Таким образом, было выявлено значительное количество ошибок, несмотря на административные и организационно-методические мероприятия В основном ошибки связаны с недостаточной внимательностью персонала, выполняющего постановку ИФА К числу таких ошибок относились неправильное заполнение и подготовка протоколов исследований, использование при учете результатов несоответствующей длины волны на спектрофотометре, появление фона на планшетах-иммуносорбентах, учет результатов при невыполненных условиях учета, указанных в инструкциях, неправильный расчет ОП крит и т д

Формирование рейтингов лабораторий - участниц региональной программы ВОК детекции анти-ВИЧ по критериям правильности определения образцов контрольной панели

С целью определения рейтингов лабораторий-участниц программы ВОК по итогам шести циклов были рассчитаны показатели правильности для 26 лабораторий, которые участвовали в 4 и более циклах Кроме того, для установления динамики качества исследований по детекции анти-ВИЧ в этих лабораториях определены показатели правильности в двух интервалах - с I по III и с IV по VI циклы ВОК Итоговые рейтинговые позиции скрининговых лабораторий Московской области по критерию правильности определяли посредством сравнения данных лабораторий со средним показателем правильности для этих 26 лабораторий Часть лабораторий участвовали не более чем в трех циклах ВОК и не вошли в систему определения рейтингов (таблица 5)

Таблица 5

Показатели правильности лабораторий-участниц региональной программы ВОК детекции антн-ВИЧ в интервалах 1-Ш, IV-VI циклов и по итогам шести циклов.___

№ Лаборатории I-III циклы IV-VI циклы I-VI циклы

1* 2** % 1* 2** % 1* 2** %

1 МОНИКИ 126 126 100 91 91 100 217 217 100

2 г. Балашихи 78 91 85,7 70 70 100 148 161 91,9

3 г Воскресенска 53 63 84,1 46 63 73,0 99 126 78,6

4 г Волокспамска 26 28 92,9 63 63 100 89 91 97,8

5 г Долгопрудного 54 63 85,7 63 63 100 117 126 92,9

6 г Длины 26 28 92,9 42 42 100 68 70 97,1

7 г Егорьевска 38 42 90,5 63 63 100 101 105 96,2

8 г Жуковского 44 49 89,8 52 56 92,9 96 105 91,2

9 г. Истры 32 35 91,4 63 63 100 95 98 96,9

10 г Красногорска 56 63 88,9 63 63 100 119 126 94,4

11 г. Коломны 37 42 88,1 63 63 100 100 105 95,2

12 г Люберцы 35 42 83,3 56 56 100 91 98 92,9

13 г. Мытищи 45 49 91,8 56 56 100 101 105 96,2

14 Областной СПК 71 77 92,2 40 42 95,2 111 119 93,3

15 г. Ногинска 50 56 893 63 63 100 113 119 95,0

16 г Лпкнно-Дулево 25 28 89,3 42 42 100 67 70 95,7

17 г Подольска 61 70 87,1 54 63 85,7 115 133 86,5

18 г Орехово-Зуево 28 28 100 57 63 90,5 85 91 93,4

19 г Одинцово 47 49 95,9 63 63 100 110 112 98,2

20 г. Серпухова 48 63 76,2 49 49 100 97 112 86,6

21 г. Сергиева Посада 50 63 79,4 56 56 100 106 119 89,1

22 г Сер Пруды 32 35 91,4 63 63 100 95 98 96,9

23 г. Фрязиио 48 56 85,7 56 56 100 104 112 92,9

24 г Чехова 55 56 98,2 42 49 85,7 97 105 92,4

25 г. Щелково 62 63 98,4 55 56 98,2 117 119 98,3

26 г Раменскос 18 21 85,7 63 63 100 81 84 96,4

* - определены как положительные образцы, содержащие анти-ВИЧ

** - всего исследовано образцов контрольных панелей, содержащих анти-ВИЧ. Полученные значения правильности 26 лабораторий были сведены в вариационный ряд и рассчитано значение среднего квадратичного

отклонения (о), составившее 4,6% для данной выборки Далее лаборатории были объединены в рейтинговые группы по следующим значениям показателя правильности, определенного за шесть циклов ВОК группа А (высокое качество исследований) - показатели правильности в интервале от Хср+1с до Хср+2о (выше 98,0%), группа Б (качество исследований выше среднего) - показатели правильности в интервале от Хер до Хср.+1о (от 93,3% до 97,9%), группа В (качество исследований ниже среднего) -показатели правильности в интервале от Хер до Хер -1а (от 88,7% до 93,2%), группа Г (низкое качество исследований) - показатели правильности в интервале от Хер -1о до Хер -2а (от 84,0% до 88,7%)

Рейтинговые позиции лабораторий - участниц ВОК детекции анти-ВИЧ представлены в таблице 6

Таблица 6

Распределение лабораторий - участниц региональной программы ВОК в Московской области по рейтинговым группам по критерию правильности определения анти-ВИЧ_

Рейтинговые группы Лаборатории

Группа А - высокое качество исследований А-1 - головная лаборатория МОНИКИ (100%) А-2 - г Одинцово (983%) А-3 - г. Щелково (98,2%)

Группа Б - качество исследований выше среднего Б-1 - г Дубны (97,8%) Б-2 - г Волоколамска (97,8%) Б-3 - г. Истры (96,9%) Б-4 - г. Серебряные Пруды (96,9%) Б-5 - г. Раченское (96,4%) Б-6 - г Мытищи (96,2%) Б-7 - г. Егорьевска (96,2%) Б-8 -1 Ликино-Дулево (95,7%) Б-9- г Коломны (95,2%) Б-10 - г Ногинска (95,0%) Б-11 - г. Красногорска (94,4%) Б-12 - г. Орехово-Зуево (93,4%) Б-13 - областной СПК (93,3%)

Группа В - качество исследований ниже среднего В-1 - г. Фрязнно (92,9%) В-2 - г Долгопрудного (92,9%) В-3 - г. Люберцы (92,9%) В-4-г Чехова (92,4%) В-5 - г Балашихи (91,9%) В-6 - г. Жуковского (91,2%) В-7-г Сергиева Посада (89,1%)

Группа Г - низкое качество исследований Г-1 - г Серпухова (86,6%) Г-2 - г. Подольска (86,5%)

Лидерами по качеству исследований является группа из трех лабораторий, чьи показатели правильности превышали 98,0% - головная лаборатория МОНИКИ, а также лаборатории гг. Одинцово и Щелково В соответствии с выработанными критериями определения рейтингов эти лаборатории лучшие в Московской области по качеству определения анти-ВИЧ Вместе с тем абсолютный результат показан лишь головной лабораторией МОНИКИ В лабораториях гг Одинцово и Щелково

контрольные образцы, содержащие анти-ВИЧ, были выявлены в 98,3% и 98,2% соответственно При этом в лаборатории г Одинцово зафиксирована положительная динамика качества исследований - в 1-Ш циклах ВОК показатель правильности составил 95,9%, тогда как в 1У-У1 циклах показан абсолютный результат (таблица 5) В лаборатории г Щелково в каждом интервале зафиксирован высокий, но не абсолютный результат -98,4% (1-Ш циклы ВОК) и 98,2% (1У-У1 циклы ВОК)

Группу Б (качество исследований выше среднего) составили 13 лабораторий Московской области, показатели правильности которых находятся в интервале от 93,3% до 97,9% Анализ этих показателей в интервалах 1-Ш и IV-VI циклы ВОК показал, что в большинстве случаев в этих лабораториях отмечена положительная тенденция В 11 из 13 лабораторий группы Б в ГУ-ЛЯ циклах ВОК показан абсолютный результат при определении образцов контрольной панели, содержащих анти-ВИЧ. Еще в двух лабораториях (г Орехово-Зуево и областной СПК) показатели правильности в IV—VI циклах ВОК составили 90,5% и 95,2% При этом следует отметить, что показатели правильности лаборатории г Орехово-Зуево резко снизились в IV—VI циклах ВОК (таблица 5), тогда как в 1-Ш циклах ВОК зафиксирован абсолютный результат. По-видимому, в работе этой лаборатории появились серьезные нарушения, которые требуют детального анализа Вызывают тревогу стабильно невысокие показатели правильности лаборатории областной СПК. Ее итоговый показатель точно соответствует средней величине всех 26 лабораторий В группе Б (качество исследований выше среднего) она занимает последнее рейтинговое место В I—П1 и IV-VI циклах ВОК ни разу не было показано абсолютного результата при исследованиях контрольных образцов, содержащих анти-ВИЧ -показатели чувствительности составляли соответственно 92,2% и 95,2%

В группу В (качество исследований ниже среднего) включены семь лабораторий Их показатели правильности исследований находятся в интервале от 88,6% до 93,2% Важно отметить преобладающую позитивную тенденцию в динамике качества исследований в этой группе лабораторий - в пяти из семи лабораторий в 1У-У1 циклах ВОК зафиксирован абсолютный результат при контрольных исследованиях образцов, содержащих анти-ВИЧ Еще две лаборатории группы В (гг Чехова и Жуковского) в последние три цикла ВОК показали посредственные результаты исследований. Так, показатели правильности в 1У-У1 циклах ВОК в лабораториях гг Чехова и Жуковского составили 85,7% и 92,9% соответственно (таблица 5). Следует отметить значительность снижения качества исследований в лаборатории г Чехова, составившее 12,5% при начальном высоком качестве исследований (98,2% в 1-Ш циклах ВОК) В лаборатории г Жуковского качество исследований оставалось на стабильно невысоком уровне без тенденции к улучшению, что требует дополнительного подробного анализа со стороны контролирующих органов

Группу Г (низкое качество исследований) представляют две лаборатории — гг Подольска и Серпухова. Их показатели правильности

исследований по итогам всех циклов ВОК располагаются в интервале от 83,9% до 88,5% Следует отметить, что проведенная планомерная работа по улучшению качества исследований в лаборатории г Серпухова дала результаты В 1У-У1 циклах ВОК эта лаборатория правильно определила все контрольные образцы, содержащие анти-ВИЧ В лаборатории г. Подольска подобные меры были неэффективны и ее показатели правильности были стабильно низкими - 87,1% и 85,7% в 1-Ш и 1У-У1 циклах ВОК соответственно

В таблице 6 приведены рейтинги 25 лабораторий Московской области Еще одна лаборатория (г. Воскресенска) по своим показателям правильности не могла быть отнесена в какую-либо группу, так как они составили лишь 78,6% При этом ее показатели правильности снизились в 1У-У1 циклах ВОК по сравнению с 1-Ш циклами - с 84,1% до 73,0%. Очевидно, что в этой лаборатории мер организационно-методического характера недостаточно для приведения в соответствие качества выполняемых исследований

Определение рейтингов иммунофермеитных тест-систем для выявления анти-ВИЧ в рамках региональной программы ВОК в Московской области

Важной задачей курирующих органов здравоохранения, которая может быть решена в рамках ВОК, является отбор диагностических тестов, наиболее адекватных для выполнения рутинных скрининговых исследований В настоящей программе ВОК использованы в общей сложности 9 ИФТС, с помощью которых определяли анти-ВИЧ Не все ИФТС применяли в каждом цикле ВОК Для определения рейтинга тест-систем были отобраны лишь те ИФТС, которые использованы в четырех и более циклах Полученные результаты по критерию правильности определения антител к ВИЧ в контрольных образцах, содержащих анти-ВИЧ, для таких ИФТС по итогам реализации шести циклов ВОК представлены в таблице 7

Таблица 7

Частота правильного определения контрольных образцов, содержащих анти-ВИЧ, с помощью различных иммунофермеитных тест-систсм за шесть циклов региональной программы ВОК

Название тест-систем Общее количество исследований Определены как положительные % m

«Комби-Бест Аити-ВИЧ-1+2» 791 757 95,7 ±0,7%

«Амеркард Анти-ВИЧ-1/2К» 315 293 93,0 ±1,4%

«Вироностика Аг/Ат» 168 163 97,0 ±1,3%

«ДС-Джеп-скрин Плюс ВИЧ Аг/Ат» 798 196 99,7 ±0,2%

«ЭКОлаб-тест-ВИЧ 1,2» 119 101 84,9 ±3,3%

«ИФА-АНТИ-ВИЧ-УНИФ» 105 99 94,3 ±2,3%

«Пептоскрнн-2» 609 516 84,7 ±1,5%

В таблице 7 приведен удельный вес правильно определенных контрольных образцов с анти-ВИЧ различными иммуноферментными тест-

системами Максимальная точность исследований зафиксирована при работе с ИФТС «ДС-Джен-скрин Плюс ВИЧ Аг/Ат» - 99,7%±0,2% правильно определенных контрольных образцов, содержащих анти-ВИЧ, за все 6 циклов ВОК Вторая позиция у ИФТС «Вироностика Аг/Ат» с помощью которой точно определены 97,0%±1,3% контрольных образцов У трех иммуноферментных тест-систем, занявших 3, 4 и 5 позиции по критерию чувствительности, удельный вес правильно определенных контрольных образцов, содержащих анти-ВИЧ, составлял 95,7%±0,7% (ИФТС «Комби-Бест Анти-ВИЧ-1+2») 94,3%±2,3% («ИФА-АНТИ-ВИЧ-УНИФ») и 93,0%±1,4% («Амеркард Анти-ВИЧ-1/2К») Еще две ИФТС - «ЭКОлаб-тест-ВИЧ 1, 2» и «Пептоскрин - 2» по итогам шести циклов ВОК показали при работе с образцами, содержащими анти-ВИЧ, чувствительность менее 85%

Важное значение для оценки работы лабораторий имеет определение динамики изменения качества исследований с помощью различных ИФТС С этой целью были рассчитаны интервальные суммарные показатели чувствительности для каждой тест-системы относительно контрольных образцов, содержащих анти-ВИЧ в двух интервалах с I по III и с IV по VI циклы ВОК (таблица 8)

Таблица 8

Частота правильного определения контрольных образцов, содержащих анти-ВИЧ, с помощью различных иммуноферментных тест-систем в 1-Ш и 1У-У1 циклах региональной программы ВОК_

Название тест-систем I—III цикл IV-VI цикл

% m % Ш

«Комби-Бест Анти-ВИЧ-1+2» 88,2 ±3,0% 97,0 ±0,7%

«Амеркард Анти-ВИЧ-1/2К» 90,9 ±33% 93,7 ±1,6%

«Вироностика Аг/Ат» 95,8 ±1,8% 100

«ДС-Джен-скрин Плюс ВИЧ Аг/Ат» 100 99,6 ±03%

«ЭКОлаб-тест-ВИЧ 1,2» 81,6 ±5,5% 87,1 ±4,0%

«ИФА-АНТИ-ВИЧ-УНИФ» 100 85,7 ±5,4%

«Пептоскрш1-2» 80,5 ±2,0% 93,1 ±1,8%

Следует отметить, что в большинстве случаев частота определения положительных контрольных образцов, содержащих анти-ВИЧ, в интервале ГУ-У1 цикл ВОК превосходит показатели первого интервала. Исключения имели место дважды - при исследованиях с ИФТС «ДС-Джен-скрин Плюс ВИЧ Аг/Ат» и «ИФА-АНТИ-ВИЧ-УНИФ» Важно констатировать, что в трех первых циклах ВОК показатели чувствительности этих ИФТС были абсолютными В дальнейшей работе с этими ИФТС были отмечены ошибки при определении аналита в этих образцах При этом в ИФТС «ДС-Джен-скрин Плюс ВИЧ Аг/Ат» такие ошибки были единичными (всего 2 на 452 контрольных исследования за три последних

цикла) и итоговый показатель чувствительности во втором интервале составил 99,6%±0,3%, что можно рассматривать как свидетельство высокого качества исследований Несколько иная ситуация сложилась при работе с ИФТС «ИФА-АНТИ-ВИЧ-УНИФ» Показатель чувствительности в 1У-У1

цикле снизился значительно (на 14,3%), составив в итоге 85,7%±5,4% В результате общий показатель чувствительности за 6 циклов при работе с ИФТС «ИФА-АНТИ-ВИЧ-УНИФ» составил лишь 94,3%±2,3%

Важным для оценки качества исследований с помощью различных ИФТС является также такой показатель, как удельный вес ошибок при определении контрольных образцов, не содержащих анти-ВИЧ (таблица 9)

Таблица 9

Частота правильного определения отсутствия анти-ВИЧ в контрольных образцах, не содержащих анти-ВИЧ, с помощью различных иммуноферментных тест-систем

Название тест-систем Общее количество исследований Определены как положительные % ш

«Комби-Бест Анти-ВИЧ-1+2» 339 334 98,5 ±0,7%

«Лмсркард Анти-ВИЧ-1/2К» 135 127 94,1 ±2,0%

«Вирояостика Аг/Ат» 72 68 94,4 ±2,7%

«ДС-Джен-скрии Плюс ВИЧ Аг/Ат» 324 342 94,7 ±1,2%

«ЭКОлаб-тест-ВИЧ 1,2» 51 49 96,1 ±2,7%

«ИФА-АНТИ-ВИЧ-УНИФ» 45 44 97,8 ±2,2%

«Пептоскрин-2» 262 212 81,2 ±2,4%

Средний показатель правильности определения контрольных образцов, не содержащих анти-ВИЧ, за шесть циклов ВОК составил 95,8%±0,6% Из семи ИФТС, использованных в четырех и более циклах ВОК, показатели, превышающие средний уровень, зафиксированы для трех тест-систем Максимальная точность результатов исследований контрольных образцов, не содержащих анти-ВИЧ, отмечена при работе с ИФТС «Комби-Бест Анти-ВИЧ-1+2» -98,5%±0,7%

Итоговые рейтинги используемых ИФТС в рамках региональной программы ВОК детекции анти-ВИЧ приведены в таблице 10

Таблица 10

Рейтинговые позиции иммуноферментных тест-систем по критериям правильности определения контрольных образцов,

содержащих и не содержащих анти-ВИЧ, по итогам шести циклов ВОК

Рейтингов ые позиции Правильно определенные контрольные образцы с анти-ВИЧ Правильно определенные контрольные образцы, не содержащие анти-ВИЧ

I «ДС-Джен-скрпн Плюс ВИЧ Аг/Ат» «Комби-Бест Анти-ВИЧ-1+2»

II «Вироностнка Аг/Ат» «ИФА-АНТИ-ВИЧ-УНИФ»

га «Комби-Бест Анти-ВИЧ-1+2» «ЭКОлаб-тест-ВИЧ 1,2»

IV «ИФА-АНТИ-ВИЧ-УНИФ» «ДС-Джен-скрин Плюс ВИЧ Аг/Ат»

V «Амеркард Анти-ВИЧ-1/2К» «Вироиостика Аг/Ат»

VI «ЭКОлаб-тест-ВИЧ 1,2» «Амеркард Анти-ВИЧ-1/2К»

УП «Пептоскрин 2» «Пептоскрип 2»

Определение рейтинговых позиций различных иммуноферментных тест-систем позволяет курирующим органам здравоохранения делать обоснованный выбор диагностикумов для скрининговых исследований

ВЫВОДЫ

1 Впервые на региональном уровне разработана и внедрена в практику здравоохранения программа внешней оценки качества исследований по определению антител к ВИЧ в сети скрининговых лабораторий

2. Впервые разработана, аттестована и ратифицирована контрольная панель сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела к ВИЧ, которая явилась базовым материалом региональной программы ВОК

3. Для региональной программы ВОК разработан пакет нормативных документов, позволяющий определить правильность выполненных исследований, провести анализ ошибок, допускаемых лабораториями при скрининге, и определить рейтинги лабораторий по качеству выполняемых исследований

4. Реализация региональной программы ВОК показала существенное улучшение качества серологической диагностики ВИЧ-инфекции

правильность определения образцов контрольной панели, содержащих анти-ВИЧ, выросла с 80,8% в I цикле до 97,8% в VI цикле ВОК (1>2, р<0,05),

- удельный вес скрининговых лабораторий, показавших правильные результаты по критерию правильности выявления антител к ВИЧ при контрольных постановках с панелями, содержащими анти-ВИЧ, вырос за шесть циклов ВОК с 42,8% до 90,3%

5 В ходе реализации региональной программы ВОК установлено наличие ошибок при выполнении серологических исследований персоналом скрининговых лабораторий, причем по категориям «Б» и «В» имел место рост их удельного веса с первого по шестой циклы ВОК с 27,5 до 63,9 и с 15,0 до 102,4 на 100 постановок соответственно

6. Региональная программа ВОК позволяет определять иммуноферментные тест-системы с наиболее высокими показателями правильности определения образцов контрольной панели, содержащих и не содержащих анти-ВИЧ, с целью отбора тестов с максимально высокой диагностической значимостью для выполнения скрининговых исследований

7 Установлено, что реализация региональной программы внешней оценки качества обнаружения анти-ВИЧ позволяет повысить достоверность и объективность результатов скрининговых исследований, что улучшает качество информационной базы диагностической подсистемы эпидемиологического надзора за ВИЧ-инфекцией

Список опубликованных работ

1 Кудрявцева Е Н, Лобанова О А , Донская О В Роль скрининговых и подтверждающих исследований при диагностике ВИЧ-инфекции И Клиническая лабораторная диагностика -2000 -№10 - с 3

2 Кудрявцева Е Н, Лобанова О А , Донская О В Сравнительное исследование иммуноферментных систем для обнаружения антител к вирусу иммунодефицита человека.//Тезисы докладов конференции «Биомедприбор-2000» -2000 -с 261-264

3 Кудрявцева Е Н , Лобанова О А , Донская О В Результаты внешнего контроля качества по определению антител к ВИЧ в лабораториях диагностики СПИД Московской области.//Клиническая лабораторная диагностика -2001 -№9 -с 27

4 Кудрявцева Е В , Донская О В , Лобанова О А, Корабелышков А А, Корабельникова МИ База данных для учета серопозитивных на антитела к ВИЧII Клиническая лабораторная диагностика -2001 -№10 - с 16

5 Кудрявцева Е Н, Лобанова О А, Донская О В , Корабельникова М И, Корабельников А А Пакет прикладных программ для учета больных и автоматизация протоколов для государственной отчетности по ВИЧ инфицированным (СПИД-лаборатория) // Официальный бюллетень Российского агентства по патентам и товарным знакам -2002 -№3(40) -ч2 -с 288-289

6 Кудрявцева Е Н, Царегородцев Д В Стратегия успешной автоматизации // Лаборатория -2002 -№4 -с 20-21

7, Кудрявцева Е Н, Лобанова О А Автоматизация иммуноферментного анализа в скрининговой лаборатории// В кн «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» - Гурзуф, 2003 - с 272

8 Кудрявцева Е Н, Лобанова О А Внедрение региональной программы внешней оценки качества по выявлению антител к ВИЧ в лабораториях диагностики СПИД ЛПУ Московской области // В кн «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» -Гурзуф, 2004 - с 175

9 Кудрявцева Е Н, Лобанова О А Региональная программа внешней оценки качества по выявлению маркеров к ВИЧ-инфекции, вирусным гепатитам В и С в лабораториях диагностики СПИД ЛПУ Московской области // В кн «Медицинские иммунобиологические препараты для профилактики, диагностики и лечения актуальных инфекций» - «Вакцинология 04» - Москва, 2004 - с 38

10 Кудрявцева ЕН, Лобанова ОА, Корабельникова МИ Пакет прикладных программ «Региональная программа внешней оценки качества».// Официальный бюллетень Российского агентства по патентам и товарным знакам - 2005 - № 2 (51) -

11 Кудрявцева Е Н, Лобанова О А Внедрение региональной программы внешней оценки качества по выявлению антител к ВИЧ в лабораториях диагностики СПИД ЛПУ Московской области//Лабораторная медицина -2005 - №7 -с 103-105

12 Кудрявцева Е Н, Лобанова О А, Воробьева М С , Кузин С Н Характеристика ошибок, допущенных скрининговычи лабораториями Московской области в рамках региональной программы ВОК детекции анти-ВИЧ // В кп «Вестник Российской военно-медицинской академии» -2008 -№2(22) - Часть I -с 183

13 Баранова Е Н, Шарипова И Н, Кудрявцева Е Н , Лобанова О А, Пузырев В Ф , Рябинина С А, Бурков А Н, Обрядина А П, Уланова Т И Разработка и оценка нового теста для верификации исследований на маркеры ВИЧ-инфекцииУ/ Клиническая лабораторная диагностика -2008 -№3 -с 40-41

14 Кудрявцева Е Н , Лобанова О А, Воробьева М С , Кузин С Н Опыт применения региональной программы внешней оценки качества серологических исследований на наличие анти-ВИЧ в сети скрининговых лабораторий Московской области // Альманах клинической медицины ГУ МОНИКИ им М Ф Владимирского -2008 -№18 -с 3-9

ч 1 -с 161

Заказ № 315. Объем 1 п.л. Тираж 100 экз.

Отпечатано в ООО «Петроруш». г. Москва, ул. Палиха-2а, тел. 250-92-06 www.postator.ru