Особенности распространения вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, молекулярно-биологические свойства изолятов вируса

Кунгурцева, Ольга Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Особенности распространения вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, молекулярно-биологические свойства изолятов вируса
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Особенности распространения вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, молекулярно-биологические свойства изолятов вируса"

На правах рукописи

00461'¿03 г.

Кунгурцева Ольга Владимировна

ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ-БОЛЕЗНИ СЛИЗИСТЫХ ОБОЛОЧЕК КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 1 НОЯ 2010

Новосибирск - 2010

004612032

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии.

доктор биологических наук, профессор Глотова Татьяна Ивановна

доктор биологических наук Аликин Юрий Серафимович,

кандидат ветеринарных наук, доцент Строганова Ирина Яковлевна

ГНУ Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии

Защита состоится « 17_» ноября 2010 г. в « часов на за-

седании диссертационного совета Д.006.045.01. при Государственном научном учреждении Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская область, Новосибирский район, п. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ, а/я 8, тел/факс (383) 348-44-62.

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

С диссертацией можно ознакомиться в Сибирской научной сельскохозяйственной библиотеке Россельхозакадемии.

Автореферат разослан 2010 :

Ученый секретарь диссертационного совета ~~ Г.М. Стеблева

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Вирусная диарея-болезнь слизистых оболочек (ВД-БС) - контагиозное заболевание, вызываемое PHK-содержащим вирусом, распространенное во всем мире в популяции крупного рогатого скота (КРС).

Возбудитель болезни относится к роду Pestivirus семейства Flaviviridae и существует в виде двух биотипов: цитопатогенного и нецитопатогенного, а также - двух генотипов (С. Pellerin et al., 1994; J.F. Ridpath et al., 1994).

Штаммы первого генотипа, включающего 11 субгенотипов, распространены во всем мире (S. Vilcek et al., 2001). Второй генотип вируса ВД-БС КРС представлен двумя субгенотипами и выделяется от больных животных значительно реже (J.F. Ridpath et al., 2005). Кроме отличий на генетическом уровне у вируса выявлены некоторые антигенные различия, которые значительно выше в пределах одного генотипа, чем между генотипами (М. Nagai et al., 2001; L. Jones et al., 2001; R.W. Fulton et al., 2005).

Возбудитель может отрицательно воздействовать на все стадии производства животноводческой продукции (С.И. Жидков и соавт., 1994, 1995; К.П. Юров и соавт., 2003; М.И. Гулюкин и соавт., 2007), но наиболее характерными и экономически значимыми последствиями этой инфекции для индустрии скотоводства являются репродуктивные проблемы и болезни респираторного тракта.

С эпизоотологической точки зрения наиболее опасными являются острые (транзитные) формы инфекции, а также персистентная. Кроме того, вирус способен вызывать иммунотолерантные эмбриональные инфекции, что приводит к рождению персистентно инфицированных (ПИ) телят, служащих постоянным источником и резервуаром возбудителя инфекции в популяции КРС.

По данным зарубежных авторов наибольшее эпизоотологиче-ское значение имеет нецитопатогенный биотип вируса, т.к. только он способен преодолевать трансплацентарный барьер и вызывать персистентную форму инфекции (J. Brownlie et al., 1989; S.R. Bolin, 1992; D. Deregt, K.G. Loewen, 1995; B. Charleston et al., 2001). Значение его раньше несколько недооценивалось.

Известно, что животные, переболевшие ВД-БС КРС в острой форме, приобретают пожизненный иммунитет к инфицирующему

штамму вируса, однако полностью или частично восприимчивы к инфицированию штаммами других генетических групп (R.W. Fulton, 2003, 2005). Поэтому большое значение в возникновении клинических признаков инфекции имеет факт смешивания животных из различных источников на конкретной территории.

В настоящее время в России возрастает удельный вес хозяйств по производству молока. В некоторые из них осуществляется завоз КРС из других стран или регионов России, часто сопровождающийся концентрацией животных на ограниченных территориях. Это приводит к обмену инфекционными агентами, имеющими различия на генетическом и антигенном уровне, к которым нет иммунитета у местных и импортных животных, а также - инфицирование вновь поступивших вирусом ВД-БС КРС других субгенотипов, стационарно персистирующим в хозяйстве. В результате возникают клинические проявления болезни.

Одной из главных проблем серологической диагностики является недостаточная стандартизация методик и антигенная вариабельность вируса (J.T. Saliki, E.J. Dubovi, 2004).

Учитывая особенности современного ведения животноводства, предполагающие повышение продуктивности, концентрации на Ограниченных территориях, а также - импорт животных, важным является изучение особенностей распространения вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота в этих условиях, молекулярно-биологических свойств вируса.

Цель и задачи исследования. Цель работы - изучить особенности распространения и клинического проявления вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, получить изоляты вируса и изучить их молекулярно-биологические свойства.

Для достижения указанной цели поставлены следующие задачи:

1. Изучить особенности распространения вирусной диареи-болезни слизистых оболочек на территории Сибири среди импортного и местного крупного рогатого скота, а также одомашненных оленей и маралов.

2. Выявить генетическую вариабельность изолятов вируса, относящихся к различным биотипам, выделенных от импортного и местного скота, а также - установить их связь с клиническими формами проявления болезни.

3. Определить влияние антигенной вариабельности вируса на результаты серологических исследований.

Научная новизна работы.

1. Подтверждено распространение вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота среди популяций животных на территории Сибири.

2. Проведено выделение и генетическое типирование полевых цитопатогенных и нецитопатогенных изолятов вируса, определен спектр их субгенотипов и роль в возникновении респираторных болезней телят и гинекологической патологии коров. Впервые на территории России от местного крупного рогатого скота выделен неци-топатогенный изолят вируса второго генотипа.

3. Изучено влияние антигенной вариабельности вируса ВД-БС КРС на уровне субгенотипов на результаты серологических исследований.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований представляют теоретическую и практическую ценность, так как дают возможность расширения научных знаний относительно роли нецитопатогенного биотипа вируса ВД-БС КРС 1-го и 2-го генотипов в возникновении респираторных болезней телят и гинекологической патологии коров.

Данные по генетической и антигенной гетерогенности его популяции необходимо учитывать при разработке диагностических тест-систем и при проведении диагностических исследований. Они могут быть использованы при дальнейшем изучении молекулярной эпизоотологии ВД-БС КРС с целью совершенствования специальных профилактических мероприятий.

Разработаны рекомендации «Диагностика вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота», рассмотренные и утвержденные подсекцией «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россель-хозакадемии (протокол № 3 от 30.10.07).

ной медицины», Новосибирск, 2010; международной научно-практической конференции «Инновационные подходы в ветеринарии, биологии и экологии», Троицк, 2010; VI международной конференции молодых ученых, посвященной 40-летию СО Россельхо-закадемии «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых», Краснообск, 2010.

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 3 статьи в рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ («Сибирский вестник сельскохозяйственной науки», «Ветеринария» и «Ветеринарная патология»).

Внедрение результатов исследования. Результаты научных исследований использованы при составлении рекомендаций «Диагностика вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота», рассмотренных и утвержденных подсекцией «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 3 от 29.09.08).

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы, приложений, иллюстрирована 5 рисунками и 16 таблицами. Список литературы представлен 225 источниками, в том числе 145 зарубежными.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения распространения ВД-БС КРС на территории Сибири среди импортированного и местного крупного рогатого скота, одомашненных северных оленей и маралов.

2. Данные по изучению биологических свойств и генетической вариабельности изолятов вируса, выделенных от животных с разными клиническими формами болезни, а также влияния антигенной вариабельности вируса на результаты серологических исследований.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в 2007-2010 гг. в лаборатории биотехнологии -диагностическом центре ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии, в хозяй-

ствах Новосибирской, Тюменской, Омской, Кемеровской, Иркутской областей, Красноярского края и Республики Казахстан.

При оценке эпизоотической ситуации использовали результаты собственных серологических и вирусологических исследований, проведенных согласно стандарту МЭБ (OIE Manual, Manual of Stan-darts// Chapter 2.3.5. 2000) и наставлению по применению набора для диагностики ВД-БС КРС методом ПЦР (ГНУ ИЭВСиДВ Россельхо-закадемии, Свидетельство о государственной регистрации лекарственного средства для животных, учетная серия 35-1-8.9, регистрационный № ПВР - 1-8.9/02498). Реакцию нейтрализации ставили микрометодом.

Провели анализ 154 экспертиз вирусологических (1275 проб) и серологических (1302 пробы) исследований. Пробы биоматериала отбирали от импортного и местного скота различных половозрастных групп из 57 хозяйств молочного направления, где не проводилась специфическая профилактика данной болезни.

Сопоставляемые хозяйства, несмотря на сходство целого ряда элементов в технологии производства молока и мяса, имели существенные различия в системе содержания, кормления, эксплуатации, а также отличались по ряду других хозяйственных признаков. В связи с этим они были разделены на три группы. Первая группа включала 7 крупных молочных комплексов, куда осуществлялся ввоз импортного скота из различных стран, концентрация и молочная продуктивность животных были высокими (интенсивный способ ведения животноводства: 1200-3000 дойных коров со среднегодовой молочной продуктивностью выше 7000 л). Вторая группа: 6 крупных молочных хозяйств аналогичного профиля со среднегодовой продуктивностью от 4000 до 7000 л, куда не было ввода животных, поступающих по импорту. Третья насчитывала 44 закрытых хозяйства, где концентрация и продуктивность животных были относительно невысокими (200-400 дойных коров с продуктивностью не выше 3000-4000 л), куда новые животные не вводились в течение нескольких лет.

Кроме этого исследовали 140 проб сыворотки крови от одомашненных северных оленей и маралов.

Для серологических исследований отбирали от животных пробы сыворотки крови однократно, а для проведения ретроспективной диагностики ВД-БС КРС - двукратно с интервалом 21—30 дней.

В работе использовали цитопатогенный штамм ВК-1(ВИЭВ) вируса ВД-БС КРС.

Выделение, пассирование, титрование й наработку изолятов вируса проводили в первично - трипсинизированной культуре клеток тестикул бычка (ТБ), и двух перевиваемых линиях: коронарных сосудов теленка (КСТ) и почек теленка (MDBK), полученных из коллекции ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко.

Идентификацию выделенных ЦП-агентов проводили в реакции нейтрализации микрометодом при помощи моноспецифической сыворотки к референтному штамму вируса. Параллельно вирус титровали с нормальной сывороткой. Индекс нейтрализации, равный 2 lg ТЦД 50/смз и выше, свидетельствовал о принадлежности изолята к вирусу ВД-БС КРС.

Моноспецифические гипериммунные сыворотки к выделенным изолятам и референтному штамму ВК-1 получали путем гипериммунизации кроликов по схеме (B.C. Авилов и соавт., 1979).

Идентификацию НЦП изолятов проводили после пяти «слепых» пассажей в культуре клеток ТБ путем исследования культуральной жидкости в ОТ-ПЦР.

Вирусную РНК выделяли с использованием TriReagent согласно методике производителя («Sigma», Германия). Набор специфических олигонуклеотидов для проведения ПЦР и секвенирования участков 5' нетранслируемой области (5' UTR), генов Npr0 и Е2 вируса ВД-БС КРС разрабатывали на основании известных последовательностей генов, полученных из банков данных GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov) с помощью программ Amplify 1.0 («Accelrys Inc.», США), BioEdit 7.0.1 (Ibis Therapeutics, a division of Isis Pharmaceuticals, Inc.), Primer premier 5.0 (Premier Biosoft International).

Проводили ПЦР на фрагмент 5'-UTR: F-BV-111 (CGA AAA GAG GCT AGC CAT GC), R1_BV (CAA CTC CAT GTG CCA TGT A), F1_BV (GCC CTT AGT AGG ACT AGC), R-BV-365 (GTG CCA TGT ACA GCA GAG ATT), на фрагмент гена Npro: F-BV-384 (AAT CTC TGC TGT ACA TGG CA), R-BV-1289 (АСА GAT TTT CTC TGG CCA GAT), F2_BV (TGT АСА TGG CAC ATG GAG TT), a также - на фрагмент гена Е2: F3JBV (TAA GAC CAG ATT GGT GGC), R-BV-3434 (YAG GTC AAA CCA RTA TTG), F-BV-227S (AYT GGT GGC CWT ATG AGA С). Праймеры использовали в следующих сочетаниях: ВД-БС КРС 5' UTR: I амплификация F_BV_ 111-R1JBV, II амплификация F1_BV- R_BV_365; ВД КРС Npr0:1 амплификация F_BV_3 84-R_B V_1289, II амплификация F2_BV-R_BV_1289; ВД КРС E2:1 амплификация F3_BV-R_BV_3434, II амплификация F_BV_2275- R_BV_3434. Праймеры для II амплифика-

ции, использовали для секвенироваиия. Синтез олигонуклеотидных праймеров произведён в ЗАО «Стинол» (Москва).

Реакционная смесь для проведения ОТ-ПЦР в конечным объёмом 25 мкл содержала: 5 мкл РНК, 10 пМ каждого праймера, 0,25 мМ каждого dNTP, 25 ед. ММЬУ(АМУ)-ревертазы, 1,25 ед. Taq-полимеразы, 10 мМ трис-HCl (рН 9,0), 50 мМ КС1, 1,5 мМ MgCb, 0,1% тритон Х-100. Для первой амплификации использовали следующий температурный режим: 5-UTR: 50 -50 мин; 94° -5 мин (1 цикл); 94* -20 с; 56 - 20 с; 72° - 20 с (30 циклов), Npro: 50° -50 мин; 94° - 5 мин (1 цикл); 94° -20 с; 58" - 20 с; 72° - 60с (30 циклов), Е2: 50° - 50 мин; 94° - 5 мин (1 цикл); 94° -20 с; 53° - 20 с; 72° -1 мин 20 с (30 циклов).

Электрофорез ДНК в агарозном геле проводили, используя трис-ацетатный буфер (рН 8,5), содержащий 04-05 мкг/мкл этидия бромида. Гели анализировали, используя ультрафиолетовый трансиллюминатор (к-254 нм).

Выделение ДНК-фрагментов из геля проводили с помощью набора реагентов фирмы «GE Healthcare» (Великобритания) согласно методике производителя.

Секвенирование фрагментов проводили во Всероссийском НИИ Экспериментальной Ветеринарии им. Я.Р. Коваленко Россельхоза-кадемии на автоматическом секвенаторе ABI Prism 3130 («Applied Biosystems», США) в соответствии с рекомендациями производителя. Анализ нуклеотидных последовательностей проводили с помощью пакетов программ BioEdit (version 7.0.0. Copyright © 19972004) и Lasergene (version 7.1.0. (44) Copyright © 1993-2006).

Сравнительный филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей проводили при помощи данных, опубликованных в GenBank.

Статистическую обработку данных осуществляли с использованием пакета программ для статистической обработки Microsoft Office Excel, 2003 по общепринятым методам описательной статистики (И.П. Ашмарин, 1974). Достоверность результатов определяли по критерию Стьюдента. Результаты считали достоверными при уровне значимости Р < 0,05.

Автор выражает благодарность зав. лабораторией молекулярной диагностики Института вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, доктору биол. наук А.Д. Забережному, зав. лабораторией биотехнологии - диагностическим центром ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии, доктору ветеринарных наук, профессору А.Г. Глотову, старшему на-

учному сотруднику, кандидату ветеринар, наук A.B. Нефедченко за помощь в выполнении некоторых разделов диссертации.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Распространение вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота на территории Сибири

В период с 2007 по 2010 гг. для оценки распространения ВД-БС КРС в молочных хозяйствах Западной и Восточной Сибири были проведены серологические и вирусологические исследования проб биоматериала от животных разных возрастных групп в лаборатории биотехнологии - диагностическом центре ГНУ ИЭВС и ДВ Рос-сельхозакадемии и проанализированы их результаты.

Известно, что на характер эпизоотической ситуации при данной болезни влияет ряд факторов: концентрация животных на ограниченных территориях и повышение молочной продуктивности коров; мутации и рекомбинации в геноме вируса; наличие персистентно инфицированных животных, а также - с острыми формами инфекции; частота ввода новых животных-вирусоносителей, инфицированных различными генотипами или субгенотипами вируса.

В результате проведенных исследований установили, что болезнь распространена среди животных во всех обследованных хозяйствах. Вируснейтрализующие антитела к вирусу выявляли в 57,89-89,19% проб от общего числа исследованных. Средние значения титров вируснейтрализующих антител составляли 3,05±0,18 -4,3±0,63 lg2.

Установлено, что 34,66% животных, переболевших респираторными и гинекологическими заболеваниями, реагировали серокон-версией к вирусу ВД-БС КРС, что свидетельствует о его роли в возникновении и развитии данных патологий.

Полученные результаты исследований свидетельствуют также о том, что инфицированность животных (84,86%), а также частота се-роконверсии к вирусу выше в хозяйствах, куда осуществлялся завоз скота из других стран, и происходило смешивание животных, полученных из разных источников. Это сопровождалось проявлением клинических признаков различных форм болезни у животных разных возрастных групп.

В крупных молочных комплексах без импорта серопозитивность животных была также высокой и составила 67,78%, установлена се-

реконверсия. В этих хозяйствах также выявляли циркуляцию вируса и проявление разных форм ВД-БС КРС.

В мелких товарных хозяйствах, где не было ввода животных, серопозитивность составляла 35,91%. Циркуляция вируса "в этих хозяйствах меньше, чем в крупных, заболевание у животных протекало субклинически.

Возникновение и поддержание очагов ВД-БС КРС обуславливается вводом животных, смешиванием их с местными, что сопровождается обменом субгенотипами вируса. Характер эпизоотической ситуации и патогенез болезни во многом зависят от генетической и антигенной изменчивости вируса, обусловленной мутациями в составе генома.

В больших молочных стадах происходит постоянный ввод ремонтных телок, поэтому значительно возрастает риск ввода в них животных-вирусоносителей. Неконтролируемая диссеминация патогенных вирусов во внешней среде приводит к вовлечению в эпизоотический процесс новых животных, не имеющих иммунитета к ним. При этом разрыва эпизоотической цепи не происходит и эпизоотический процесс практически непрерывен, что приводит к возникновению новых очагов инфекции.

. Серопозитивность к вирусу ВД-БС КРС и сероконверсию устанавливали чаще у телок предслучного возраста и первотелок, инфицированных вирусом впервые, в крупных молочных комплексах с импортом скота и без него.

Также были проанализированы результаты исследований методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) проб биоматериала, отобранных от животных разных возрастных групп. Всего исследовано 1275 проб биоматериала от вынужденно убитых, павших животных и абортплодов.

Геном вируса ВД-БС КРС выявляли в 667 пробах, что составило в среднем по хозяйствам 52,31% от общего числа исследованных проб биоматериала. Наибольшее количество (78,09%) положительных проб выявляли в молочных комплексах с наличием импортного скота, а в таких же комплексах без импорта - 65,5% положительных проб. В закрытых средних и мелких товарных хозяйствах без импорта скота выявление положительных проб составляло 48,54%.

Результаты исследований свидетельствуют о широком распространении вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота на территории Сибири, особенно в хозяйствах с интенсивным ведением животноводства, где осуществляли ввоз им-

портного скота, с высокой продуктивностью и концентрацией животных на ограниченных территориях.

При исследовании проб сыворотки крови от северных оленей и маралов разных возрастных групп выявлено 41,27% и 85,71% соответственно со средними титрами вируснейтрализующих антител 2,0±0,23 -2,21±0,13

Наши результаты согласуются с данными зарубежных исследователей о циркуляции вируса ВД-БС КРС в популяции данных видов животных,

2.2.2.Выделение и характеристика изолятов вируса вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота от больных животных

Сведения о выделении и характеристиках изолятов вируса ВД-БС КРС в России фрагментарны. Выделенные в прошлом изоля-ты вируса ВД-БС КРС относились, в основном, к цитопатогенному биотипу первого генотипа и были охарактеризованы ранее (С.А. Жидков и соавт., 1995; Т.И. Глотова и соавт,, 2005).

Методом ПЦР исследовали 1275 проб биоматериала от телят до 6-месячного возраста, нетелей, коров и быков-производителей, полученных из хозяйств с различной степенью инфицированности вирусом ВД-БС КРС. Вирус удалось выделить в культуре клеток из 38,12% проб биоматериала от телят, в то время как методом ПЦР его РНК выявляли в 52,31%.

В культуре клеток КСТ на 3-5 сутки инкубирования при 37°С к 3-5 пассажам цитопатогенные изоляты вируса ВД-БС КРС вызывали ЦПД и накапливались в титрах от 4,75 до 6,5 lg ТЦД5о/сМз- Цито-патический эффект вируса ВД-БС КРС выражался в появлении мелкоочаговой, мелкозернистой дегенерации и округлении клеток, истончении и разрыве клеточного монослоя и отслоении клеток. В некоторых случаях наблюдали вакуолизацию цитоплазмы пораженных клеток. Конечная картина ЦПД выражалась в гибели клеток, отслоении в культуральную жидкость и наличии на поверхности их роста отдельных тяжей и фрагментов.

Размножение нецитопатогенных изолятов вируса ВД-БС КРС не сопровождалось видимыми морфологическими изменениями клеток и не вызывало деструкцию монослоя культуры клеток.

Всего было получено 25 изолятов (7 цитопатогенных и 18 нецитопатогенных) вируса. Они были выделены из проб биоматериала, полученного от животных преимущественно с респираторной и гени-

тальной клиническими формами болезни, а также от персистентно инфицированных. От животных с респираторной формой инфекции выделено 3 цитопатогенных изолята: Кремлевский, К-9 и К-5; с гени-тальной - 4, обозначенных: И4, СВ-4, Т-1 и 11/07. Максимальное количество нецитопатогенных изолятов вируса получено от животных с респираторной формой болезни (7), обозначенных: Солгон, Бизон, Ирмень 01/06, 1140, Бон, Солгон -1 и К-3, генитальной (6): Т-2, РА, Благодатский, Ирмень 05/07, Т-3 и Кремль. Кроме того, 5 нецитопатогенных изолятов вируса (Маяк, С-1, Ембаевский, Бор и Раменский) получены от персистентно инфицированных животных, у которых не отмечали видимых клинических проявлений ВД-БС КРС.

При изучении физико-биологических свойств изолятов вируса установили, что все они оказались чувствительными к хлороформу, эфиру, трипсину и нагреванию до 50°С, не обладали гемагглютини-рующими и гемадсорбирующими свойствами в отношении эритроцитов морской свинки и мыши.

Антигенные свойства цитопатогенных изолятов изучали в перекрестной реакции нейтрализации с постоянной дозой сыворотки (разведение 1:10) и десятикратными разведениями вируса в трехкратной повторности.

Гипериммунная сыворотка к референтному штамму ВК-1 вируса ВД-БС КРС нейтрализовала все исследованные изоляты вируса. Высокие индексы нейтрализации были получены также при перекрестной реакции нейтрализации между выделенными изолятами вируса.

Полученные результаты исследований свидетельствуют о том, что референтный штамм и выделенные полевые изоляты вируса являются близкородственными: степень их родства находится в диапазоне от 85,65 до 92,72%.

Таким образом, изоляты вируса ВД-БС КРС, полученные от животных различных половозрастных групп, обладали характерными для представителей рода Pestivirus антигенными свойствами. Изоляты вируса: Т-1, СВ-4, И-4, Кремлевский, К-5, 11/07, К-9 проявляли выраженное цитопатическое действие в отношении чувствительных первично-трипсинизированной ТБ и перевиваемых культур клеток КСТ и MDBK, что позволило отнести их к первому биотипу вируса. Нецитопатогенные изоляты вируса: Т-2, Бизон, Маяк, С-1, Солгон, Ембаевский, РА, Ирмень 01/06, Бор, Благодатский, Бон, 1140, К-3, Ирмень 05/07, Солгон-1, Раменский, Т-3, Кремль не вызывали видимых деструктивных изменений в монослое перевиваемых культур

клеток, что позволило их отнести ко второму биотипу вируса ВД-БС КРС.

2,2.3.Типизация и филогенетический анализ изолятов вируса вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота

Известно, что первый генотип вируса распространен повсеместно. Штаммы второго генотипа циркулируют преимущественно в США и Канаде, а в Европе, Азии и Южной Америке регистрируют лишь спорадические случаи вызванной им инфекции.

Хотя оба генотипа вызывают болезнь, но клинически тяжелая, сверхострая инфекция ВД-БС КРС вызывается только нецитопато-генным вирусом типа 2 (С. Ре11епп е! а1., 1994; ШсфаЙ! е1 а1„ 2005). Однако некоторые авторы приводят доказательства связи между генотипом вируса и клиническими симптомами, которые он вызывает. От телят с респираторными и желудочно-кишечными болезнями чаще выделяются нецитопатогенные изоляты вируса первого генотипа. Известно, что изоляты вируса ВД-БС КРС второго генотипа выделяются от животных с признаками сильной тромбоцито-пении и геморрагического синдрома, но не все из них способны вызывать данную патологию. Высказывается предположение, что в природе существуют и авирулентные изоляты второго генотипа, преобладающие над вирулентными (С. Нашегв е1 а1,, 2000; ХТ. ваШн, ЕЛ. ОиЬоу1, 2004).

Генотипирование полученных изолятов вируса проводили методом ПЦР при помощи тест-системы, разработанной в лаборатории биотехнологии - диагностический центр ГНУ ИЭВСиДВ Россельхо-закадемии, предназначенной для выявления РНК вируса ВД-БС КРС и последующего типирования на 1 и 2 генотипы, а также - субгенотипы 1а и 1Ь.

Результаты исследований представлены в таблице 1, из которой видно, что к субгенотипу 1а принадлежат 6 изолятов вируса ВД-БС КРС (Т-1, СВ-4, Маяк, С-1, Ембаевский, Т-2), а к субгенотипу 1Ь -8 изолятов вируса (И-4, Солгон, РА, Кремлевский, Ирмень 01/06, Бор, Бон, 1140).

Количество выделенных изолятов было больше от животных из крупных хозяйств молочного направления, особенно с наличием импортных животных. Однако их количество и генетическая принадлежность были сходными с таковыми, выделенными от животных из крупных закрытых хозяйств.

В дальнейшем провели генотипирование трех нецитопатоген-ных изолятов вируса ВД-БС КРС (Бизон, Бор и Благодатский). Данная работа выполнена совместно с мл. науч. сотр. А.Г. Южаковым во Всероссийском НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко Россельхозакадемии.

Таблица 1 - Генотипирование изолятов вируса ВД-БС КРС, выделенных от животных при вспышках респираторных болезней и гинекологической патологии корой методом ОТ-ПЦР

№ п/п Наименование изолята Биотип Клиническая форма болезни/источник выделения Генотип, субгенотип

1 Кремлевский ЦП Респираторная, теленок / селезенка 1Ь

2 И-4 ЦП Генитальная / влагалищные выделения 1Ь

3 СВ-4 ЦП Бык-производитель / сперма 1а

4 Т-1 ЦП Бык-производитель / сперма 1а

5 Т-2 НЦП Бык-производитель / сперма 1а

6 Маяк НЦП ПИ теленок / кровь 1а

7 С-1 НЦП ПИ теленок / кровь 1а

8 Солгон НЦП Респираторная, теленок / легкие 1Ь

9 Ембаевский НЦП ПИ телка / сыворотка крови 1а

10 РА НЦП Аборт-плод / селезенка 1Ь

11 Ирмень 01/06 НЦП Респираторная, теленок / легкие 1Ь

12 Бор НЦП ПИ нетель / сыворотка крови 1Ь

13 Бон НЦП Респираторная, теленок / селезенка 1Ь

14 1140 НЦП Респираторная, теленок / селезенка 1Ь

15 Бизон НЦП Респираторная, теленок / легкие ы

16 Благодатский НЦП Аборт-плод / лимфатический узел 2

Секвенирование и компьютерный анализ последовательности участка 5'-нетранслируемой области показало, что согласно классификации Б. УМсек е1 а1. (1994), предполагающей наличие у вируса первого генотипа 11 субгенотипов, наши изоляты относятся: Бизон -к генотипу 1, субгенотипу 1(1, Бор - к генотипу 1, субгенотипу 1Ь, а изолят Благодатский - ко второму генотипу вируса. Анализ участков генов Ирга и Е2 подтвердил полученные данные.

Изолят Бизон был выделен нами из легких теленка с признаками острого респираторного заболевания из хозяйства, куда не вводились новые животные, включая поступающих по импорту. Изолят Бор был выделен от персистентно инфицированной нетели, поступившей по импорту, у которой не регистрировали клинических при-

знаков болезни. У этих двух изолятов установлена принадлежность к первому генотипу вируса ВД-БС КРС.

Большое значение представляет факт выделения изолята второго генотипа от местного скота. Изолят Благодатский был выделен из лимфоидных органов абортированного плода и мертворожденного теленка при наличии субклиничеекой формы инфекции у коров-матерей.

Результаты исследований свидетельствуют о преобладании неци-топатогенного биотипа вируса над цитопатогенным. Субгенотип Ib выявляется чаще при вспышках респираторных болезней, а 1а - патологии воспроизводства и от персистентно инфицированных животных.

Выделение изолята вируса ВД-БС КРС из лимфоидных органов абортированного плода и мертворожденного теленка при наличии субклиничеекой формы инфекции у коров-матерей и последующее определение его принадлежности ко второму генотипу свидетельствуют об его участии в патологии органов воспроизводства крупного рогатого скота.

2.2.4. Влияние антигенной вариабельности изолятов вируса в пределах субгенотипов па результаты серологических исследований

В реакции нейтрализации в культуре клеток с использованием в качестве антигенов изолятов двух субгенотипов 1 генотипа вируса (1а и Ib) ВД-БС КРС исследовали пробы сыворотки крови от крупного рогатого скота различных половозрастных групп. Пробы для исследований отбирали от местного скота из стад, куда не вводились новые животные, и от животных, поступающих по импорту.

При изучении распространения субгенотипов вируса ВД-БС КРС исследовали пробы сыворотки крови, отобранные от животных однократно. Высчитывали средний процент проб, содержащих антитела к вирусам 1а и Ib, от числа поступивших из хозяйств с наличием или отсутствием вспышек гинекологических или респираторных болезней. С целью установления сероконверсии к вирусу, свидетельствующей об активной вирусной инфекции, исследовали парные пробы сыворотки крови телят, нетелей и коров, отобранные с интервалом 30 дней. Всего исследовали 337 проб сыворотки крови, в том числе 40 парных.

Анализ эпизоотической ситуации показал, что в хозяйствах, куда не поступал импортный скот, болезнь проявлялась в субклинической, реже в острой форме у телят и нетелей. В основном наблюдалась умеренная инфекция, сопровождающаяся отказом от корма, угнетением,

повышением температуры тела. Чаще заболевание протекало в респираторной форме ассоциативно е другими инфекциями.

ВируснеШрализующие антитела к вирусу субгенотипа 1а выявляли у животных всех возрастов в средних титрах 2,09±0,36 - 4,65±0,26 1&; к субгенотипу 1Ь - 2,75±0,26 - 4,32±0,17 1&. Серопозитивность животных различных возрастных групп к субгенотипу 1а варьировала от 62,5 до 93,81%, к субгенотипу 1Ь - от 64,52 до 100%. Разница между титрами В НА к двум субгенотипам не была достоверной (Р > 0,05).

У нетелей и у телят 1-3 мес. возраста уровень ВНА к вирусу 1Ь был выше, чем к штамму 1а на 1,35±0,21 1§2 и 1,24±0,26 соответственно (разница достоверна, Р < 0,05). Разброс титров антител у нетелей находился в пределах 1:4-1:128 к субгенотипу 1Ь и 1:2-1:16-к 1а; у телят в возрасте 1-3 мес. - 1:4-1:64 к субгенотипу 1Ь и 1:4-1:32 - к субгенотипу 1а.

У телят в возрасте 3-6 мес. и у быков титры антител к штамму 1а были выше, чем к штамму 1Ь на 0,34±0,11 (разница не достоверна, Р > 0,05) и на 0,79 ± 0,14 ^2 (разница достоверна, Р < 0,05), соответственно. У телят в возрасте 3-6 мес. титры антител к двум субгенотипам находились в пределах 1:2-1:32, а у быков - 1:4-1:128 к 1Ь и 1:8-1:128 к 1а.

Результаты ретроспективных серологических исследований в этих хозяйствах показали, что в некоторых из них частота серокон-версии у телят и нетелей к штамму 1Ь составляла 27,27% при уровне инфицированности стада 89,19%, а к субгенотипу 1а - 80% при том же уровне инфицированности. Разброс титров антител находился в пределах 1:4-1:128 к субгенотипу 1Ь и 1:2-1:32 к 1а.

При исследовании парных проб сыворотки крови от телок случного возраста, полученных из молочно-товарного хозяйства Новосибирской области, вируснейтрализующие антитела к обоим субгенотипам вируса выявляли в 93,04% исследованных проб в титрах 1:21:256, а сероконверсию - только к субгенотипу 1Ь у 45% животных.

Иная ситуация складывалась в хозяйствах при поступлении импортного скота. В них регистрировались острые вспышки инфекции, сопровождающиеся лихорадкой, отказом от корма, снижением молочной продуктивности, абортами, врожденными уродствами плода и болезнями молодняка в постнатальный период.

У телят в возрасте от 3 до 8 месяцев, полученных от импортных нетелей, ВНА к субгенотипу 1а выявляли в 6,67% случаев в титрах 1,67±0,27^2; а к субгенотипу 1Ь - у 13,33% из них в титрах 1,25±0,22 1§2 (разница не достоверна, Р > 0,05). Показатели инфици-

рованности этой возрастной группы животных статистически различались, однако средние титры специфических антител находились на приблизительно одинаковом уровне. Это говорит о том, что острые вспышки ВД-БС КРС стали следствием отсутствия иммунитета у телят к обоим субгенотипам вируса.

При исследовании 90 проб сыворотки крови от импортных нетелей в возрасте 16-18 месяцев удалось установить значительные различия в количестве серопозитивных животных к обоим субгенотипам вируса и значениях титров ВНА к ним (разница достоверна, Р < 0,05 ). Так, ВНА к субгенотипу 1а выявили у 95,56% животных в высоких титрах (3,83±0,15); тогда как к субгенотипу 1Ь только у 13,33% животных в титрах 2,17±0,23. Разброс титров антител находился в пределах 1:2-1:16 к субгенотипу 1Ь и 1:2-1:128 - к 1а. Из полученных данных можно сделать вывод о том, что источником возбудителя инфекции в данном случае послужили животные, завезенные из других стран и инфицированные вирусом субгенотипа 1а.

При исследовании парных проб сыворотки крови от импортных нетелей и телят, полученных от них, вируснейтрализующие антитела к субгенотипу 1Ь вируса ВД-БС КРС выявили в 13,33% проб в титрах 1: 2-1: 16, к субгенотипу 1а - в 82,86% проб в титрах 1: 21:128, а сероконверсию - только к субгенотипу 1Ь. Частота ее составила 66,67%.

Анализируя полученные данные, можно утверждать, что в серологических реакциях выявляются антигенные различия между субгенотипами первого генотипа вируса ВД-БС КРС. Эти различия особенно выражены при исследовании проб сыворотки крови от импортных нетелей, завезенных в хозяйства Сибири из Германии (табл. 2).

Таблица 2 - Антигенные различия между субгенотипами 1а и 1Ь при исследовании проб сыворотки крови от импортных нетелей при помощи реакции нейтрализации в культуре клеток

№ п/п Количество исследованных животных Возрастная группа Значения вируснейтра-лизующих антител к субгенотипу lb/количество положительных проб Значения вируснейт-рализующих антител к субгенотипу 1 а/количество положительных проб

1 4 16 месяцев 0/0 (0%) 1:4-1:32/4 (100%)

2 19 17 месяцев 1:4-1:8/3 (15,79%) 1:4-1:128/18 (94,74%)

3 68 18 месяцев 1:2-1: 16/9 (13,23%) 1:2-1:64/65 (95.59%)

Из данных таблицы видно, что животные имеют иммунный ответ к вирусу субгенотипа 1а в 94,74-100% с высоким уровнем ви-руснейтрализующих антител 1:2-1:128. Но к субгенотипу 1Ь вирус-нейтрализующие антитела были выявлены и лишь в 13,25-15,79% в невысоких титрах 1:2-1:16, а у нетелей в возрасте 16 месяцев вообще не выявили положительных проб.

Таким образом, между субгенотипами вируса внутри одного генотипа существуют антигенные различия, выявляемые в реакции нейтрализации в культуре клеток.

На территории Сибири циркулируют изоляты обоих субгенотипов вируса. В хозяйствах, куда не поступал импортный скот, серо-конверсию у телок случного возраста к вирусу субгенотипа 1Ь установили в 45% случаев, У телят и нетелей к 1 Ь в 27,27%, а к 1а - в 80; одновременно к двум - в 50,76% случаев. При исследовании проб от импортных нетелей и телят, полученных от них, серокон-версию к вирусу субгенотипа 1Ь выявляли в 66,67% случаев.

Естественный иммунитет после контакта животных с вирусом одного субгенотипа не обеспечивает полной их защиты от суперинфицирования антигенно различающимся субгенотипом. Ввод в стадо, неблагополучное по ВД-БС КРС, импортных животных, иммунных к субгенотипу вируса 1а, но с отсутствием иммунитета к вирусу 1Ь, провоцировал острые вспышки инфекции.

В настоящее время в большинстве диагностических лабораторий в качестве антигена для серологических реакций используют штамм ВК-1, относящийся к субгенотипу 1Ь первого генотипа вируса ВД-БС КРС. Анализируя полученные данные можно говорить о том, что в связи с существованием антигенных различий между субгенотипами вируса не всегда можно с полной достоверностью оценить уровень инфицированное™, а также напряженности иммунитета у животных к вирусу в реакции нейтрализации с использованием в качестве антигена вируса одного субгенотипа.

3. ВЫВОДЫ

вает постоянный риск возникновения вспышек болезни. На характер эпизоотической ситуации и проявления клинических признаков болезни влияет интенсификация молочного животноводства, концентрация животных на ограниченных территориях, а также ввод новых животных в стадо, особенно поступающих по импорту.

Вирус циркулирует в популяции одомашненных северных оленей и маралов, Серопозитивность их составила 41,27 и 85,71% соответственно.

2. Частота выявления и выделения вируса в крупных хозяйствах выше, чем в средних и мелких, составляет 65,5-78,09% и сопровождается сероконверсией. В средних и мелких закрытых хозяйствах также отмечается циркуляция вируса, но на более низком уровне. Частота выделения вируса в таких хозяйствах составляет 48,54% при отсутствии сероконверсии.

3. Наибольшее распространение среди крупного рогатого скота в Сибири имеет нецитопатогенный биотип вируса. Цитопатоген-ный и нецитопатогенный биотип вируса играют важную роль в развитии респираторной и генитальной патологии у животных. Выделение 5 нецитопатогенных изолятов от персистентно инфицированных животных без видимых клинических проявлений болезни, подтверждает роль вируса второго биотипа в формировании постоянных источников и резервуаров возбудителя инфекции в популяции КРС.

4. Изоляты вируса ВД-БС КРС характеризуются генетической гетерогенностью. Выявлены представители первого, субгенотипов la, Ib и Id, а также - второго генотипов вируса. Изоляты вируса Ib выявляли чаще при вспышках респираторных болезней, а 1 а - при патологии воспроизводства и от персистентно инфицированных животных. Наиболее восприимчивой категорией животных являются телята до 6 месяцев, телки и нетели.

5. Изолят Благодатский, выделенный из лимфоидных органов абортированного плода и мертворожденного теленка при наличии субклинической формы инфекции у коров-матерей, относится ко второму генотипу вируса ВД-БС КРС, что свидетельствует об его участии в патологии органов воспроизводства.

6. Установлены антигенные различия между субгенотипами 1а и Ib вируса ВД-БС КРС. В хозяйствах, куда не поступал импортный скот, сероконверсию у телок случного возраста к вирусу субгенотипа Ib установили в 45% случаев. У телят и нетелей к 1 b в 27,27%, а к 1а - в 80; одновременно к двум - в 50,76% случаев. Иммунитет,

обусловленный вирусом одного субгенотипа, не защищает животных от инфицирования вирусом антигенно различающегося субгенотипа.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Полученные результаты могут использоваться при планировании противоэпизоотических мероприятий, предусматривающих, в том числе, комплексные диагностические исследования с целью расшифровки этиологической структуры конкретной вспышки респираторных и гинекологических болезней и выяснения этиологической роли каждого инфекционного агента, особенно нецитопатоген-ного биотипа вируса ВД-БС КРС.

Для типирования нецитопатогенных изолятов вируса необходимо использовать ОТ-ПЦР. При планировании и проведении диагностических и противоэпизоотических мероприятий против ВД-БС КРС целесообразно учитывать существование генетической и антигенной изменчивости вируса.

Результаты исследований, отраженные в рекомендациях «Диагностика вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота», рассмотренных и утвержденных подсекцией «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 3 от 29.09.08) внедрены в практику ветеринарных диагностических лабораторий (Тюменская областная ветеринарная лаборатория, Новосибирская межобластная ветеринарная лаборатория).

Материалы по изучению распространения ВД-БС КРС, молеку-лярно-генетических свойств изолятов вируса используются в учебном процессе в программе подготовки студентов по курсам «Вирусология», «Эпизоотология» по специальности «Ветеринария» в ФГОУ ВПО «Новосибирский Государственный аграрный университет» и ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины».

5. СПИСОК РАБОТ,

ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Глотов, А.Г. Этиологическая структура массовых респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота в хозяйствах, занимающихся производством молока / А.Г. Глотов, Т.И. Глотова, А.В. Не-

федченко, C.B. Котеиева, H,Р. Будулоа, O.B. Кунгурцева // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2008. - Л1» 3(183), - С. 72-78.

2. Южаков, А,Г. Типизация и филогенетический анализ нецитопа-тогенных изолятов вируса вирусиой диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота / А.Г. Южаков, Г.И. Устинова, А.Г. Глотов, Т.И. Глотова, A.B. Нефедченко, О.В. Кунгурцева, А.Д, Заберсж-ный, Т.И. Алипер // Ветеринария. - 2009. - № 6. - С. 29-32.

3. Кунгурцева, О-В. Влияние антигенной вариабельности вируса вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота на результаты серологической диагностики / О.В. Кунгурцева, Т.И, Глотова, А.Г. Глотов // Ветеринарная патология. - 2010. -ЛЬ 1(32). - С 20-24.

4. Глотов, А.Г. Выявление нештшатогенных изолятов вируса вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота / А.Г. Глотов, Т.И. Глотова, A.B. Нефедченко, О.В. Кунгурцева // Состояние и перспективы диагностики инфекционных болезней животных: специальный выпуск: материалы междунар. конф. - Астана, 2008. - С. 156-161.

5. Кунгурцева, О.В. Распространение вируса вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота среди парнокопытных животных / О.В. Кунгурцева, Т.И. Глотова, А.Г. Глотов // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы II Сибирского ветеринарного конгресса (25-26 февраля 2010). - Новосибирск, 2010. - С. 341-342.

6. Кунгурцева, О.В. Экологические аспекты распространения вируса вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота / О.В. Кунгурцева, Т.И. Глотова И Инновационные подходы в ветеринарии, биологии и экологии: материалы междунар. науч.-практ. конф. (Троицк, 17 марта, 2010).-Троицк, 2010.-С. 151-154.

7. Кунгурцева, О.В. Циркуляция антигенных вариантов вируса вирусной диареи-болезни слизистых крупного рогатого скота на территории Сибири / О.В. Кунгурцева, Т.И. Глотова // Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых: тр. IV междунар. науч. конф. молодых ученых (пос. Краснообск 22-23 апреля 2010). - Новосибирск, 2010.-С. 78-81.

Подписано в печать 30.09.2010 г. Формат 60x84 '/16. Объем 1 усл. п. л. Заказ № 109. Тираж 100 экз.

Отпечатано в ИИЦ ГНУ СибНСХБ Россельхозакадемии 630501, Новосибирская обл., пос. Краснообск

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кунгурцева, Ольга Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Особенности распространения и клинического проявления вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота.

1.1.1. Характеристика возбудителя.

1.1.2. Пути и способы передачи вируса вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота.

1.1.3. Основные клинические формы проявления вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота.

1.2. Современные методы диагностики вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота.

1.2.1. Особенности выделения вируса в различных культурах клеток.

1.2.2. Серологические методы диагностики вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота.

1.2.3. Молекулярно-генетические методы диагностики вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота.

1.2.3.1. Разработка и использование метода молекулярных зондов.

1.2.3.2. Метод полимеразной цепной реакции.

1.2.3.3. Генотипирование и филогенетический анализ.

1.3. Родственные связи вируса вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота с представителями рода Рау^гаУш'.

1.4. Имуносупрессивное действие и особенности интерферон-индуцирующей активности цитопатогенных и нецитопатогенных изолятов вируса вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Особенности распространения вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, молекулярно-биологические свойства изолятов вируса"

Актуальность темы. Вирусная диарея-болезнь слизистых оболочек (ВД-БС) - контагиозное заболевание, вызываемое РНК-содержащим вирусом, распространенное во всем мире в популяции крупного рогатого скота (КРС).

Возбудитель болезни относится к роду Pestivirus семейства Flaviviri-dae и существует в виде двух биотипов: цитопатогенного и нецитопатоген-ного, а также - двух генотипов (С. Pellerin et al., 1994; J.F. Ridpath et al., 1994).

По данным зарубежных авторов наибольшее эпизоотологическое значение имеет нецитопатогенный биотип вируса, т.к. только он способен преодолевать трансплацентарный барьер и вызывать персистентную форму инфекции (J. Brownlie et al., 1989; S.R. Bolin, 1992; D.Deregt, K.G. Loewen, 1995; B. Charleston et al., 2001). Значение его раньше несколько недооценивалось.

Известно, что животные, переболевшие ВД-БС КРС в острой форме, приобретают пожизненный иммунитет к инфицирующему штамму вируса, однако полностью или частично восприимчивы к инфицированию штаммами других генетических групп (R.W. Fulton, 2003; 2005). Поэтому большое значение в возникновении клинических признаков инфекции имеет факт смешивания животных из различных источников на конкретной территории.

Одной из главных проблем серологической диагностики является недостаточная стандартизация методик и антигенная вариабельность вируса (J.T. Saliki, Е.J. Dubovi, 2004).

Учитывая особенности современного ведения животноводства, предполагающие повышение продуктивности, концентрации на ограниченных территориях, а также - импорт животных, важным является изучение особенностей распространения вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота в этих условиях, молекулярно-биологических свойств вируса.

Для достижения указанной цели поставлены следующие задачи:

2. Выявить генетическую вариабельность изолятов вируса, относящихся к различным биотипам, выделенных от импортного и местного скота, а также — установить их связь с клиническими формами проявления болезни.

3. Определить влияние антигенной вариабельности вируса на результаты серологических исследований.

Научная новизна работы.

2. Проведено выделение и генетическое типирование полевых цито-патогенных и нецитопатогенных изолятов вируса, определен спектр их субгенотипов и роль в возникновении респираторных болезней телят и гинекологической патологии коров. Впервые на территории России от местного крупного рогатого скота выделен нецитопатогенный изолят вируса второго генотипа.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований представляют теоретическую и практическую ценность, так как дают возможность расширения научных знаний относительно роли не-цитопатогенного биотипа вируса ВД-БС КРС 1-го и 2-го генотипов в возникновении респираторных болезней телят и гинекологической патологии коров.

Разработаны рекомендации «Диагностика вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота», рассмотренные и утвержденные подсекцией «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 3 от 30.10.07).

Апробация полученных результатов. Материалы исследований доложены на: международной конференции «Состояние и перспективы диагностики инфекционных болезней животных», Астана, 2008; международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения А.Х. Саркисова «Современные средства и методы диагностики, профилактики и лечения инфекционных, протозойных и микотических болезней сельскохозяйственных и промысловых животных, рыб и пчел», Москва, 2009; II Сибирском ветеринарном конгрессе «Актуальные вопросы ветеринарной медицины», Новосибирск, 2010; международной научно^ практической конференции «Инновационные подходы в ветеринарии] биологии и экологии», Троицк, 2010; VI международной конференции мо1 лодых ученых, посвященной 40-летию СО Россельхозакадемии «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых», Краснообск, 2010.

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Кунгурцева, Ольга Владимировна

4. ВЫВОДЫ

1. Вирусная диарея-болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота широко распространена в Сибири и носит энзоотический характер. Серопозитивность животных составляла от 35,91% в средних и мелких, до 67,78% в крупных закрытых стадах. В крупных хозяйствах с импортом животных - достигала 84,86% при постоянной циркуляции вируса за счет транзитной инфекции у нетелей и телят, что обеспечивает постоянный риск возникновения вспышек болезни. На характер эпизоотической ситуации и проявления клинических признаков болезни влияет интенсификация молочного животноводства, концентрация животных на ограниченных территориях, а также ввод новых животных в стадо, особенно поступающих по импорту.

Вирус циркулирует в популяции одомашненных северных оленей и маралов. Серопозитивность их составила 41,27 и 85,71% соответственно.

2. Частота выявления и выделения вируса в крупных хозяйствах выше, чем в средних и мелких, составляет 65,5 - 78,09% и сопровождается сероконверсией. В средних и мелких закрытых хозяйствах также отмечается циркуляция вируса, но на более низком уровне. Частота выделения вируса в таких хозяйствах составляет 48,54% при отсутствии сероконверсии.

3. Наибольшее распространение среди крупного рогатого скота в Сибири имеет нецитопатогенный биотип вируса. Цитопатогенный и нецитопатогенный биотип вируса играют важную роль в развитии респираторной и генитальной патологии у животных. Выделение 5 нецитопатогенных изолятов от персистентно инфицированных животных без видимых клинических проявлений болезни, подтверждает роль вируса второго биотипа в формировании постоянных источников и резервуаров возбудителя инфекции в популяции КРС.

4. Изоляты вируса ВД-БС КРС характеризуются генетической гетерогенностью. Выявлены представители первого, субгенотипов 1а, 1Ь и 1с1, а также - второго генотипов вируса. Изоляты вируса 1Ь выявляли чаще при вспышках респираторных болезней, а 1а - патологии воспроизводства и от персистентно инфицированных животных. Наиболее восприимчивой категорией животных являются телята до 6-месяцев, телки и нетели.

6. Установлены антигенные различия между субгенотипами 1а и 1Ь вируса ВД-БС КРС. В хозяйствах, куда не поступал импортный скот, сероконверсию у телок случного возраста к вирусу субгенотипа 1Ь установили в 45% случаев, у телят и нетелей в 27,27; к 1а - в 80(у телят и нетелей); одновременно к двум - в 50,76% случаев. Иммунитет, обусловленный вирусом одного субгенотипа, не защищает животных от инфицирования вирусом антигенно различающегося субгенотипа.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Полученные результаты могут использоваться при планировании противоэпизоотических мероприятий, предусматривающих, в том числе, комплексные диагностические исследования с целью расшифровки этиологической структуры конкретной вспышки респираторных и гинекологических болезней и выяснения этиологической роли каждого инфекционного агента, особенно нецитопатогенного биотипа вируса ВД-БС КРС.

Результаты исследований, отраженные- в рекомендациях «Диагностика вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота», рассмотренных и утвержденных подсекцией «Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 3 от 29.09.08) внедрены в практику ветеринарных диагностических лабораторий (Тюменская областная ветеринарная лаборатория,' Новосибирская межобластная ветеринарная лаборатория).

Материалы по изучению распространения ВД-БС КРС, молекулярно-генетических свойств изолятов вируса используются в учебном процессе в программе подготовки студентов по курсам «Вирусология», «Эпизоотология» по специальности «Ветеринария» в ФГОУ ВПО «Новосибирский Государственный аграрный университет» и ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины».

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Кунгурцева, Ольга Владимировна, Новосибирск

1. Афонюшкин, В.Н. Разработка и применение ДНК зонда для выявления геномной РНК вируса вирусной диареи крупного рогатого скота: автореф. дис. . канд. биол. наук/В.Н. Афонюшкин. - Новосибирск, 2002. - 18 с.

2. Ашмарин, И.П. Быстрые методы статистической обработки и планирования экспериментов / И.П. Ашмарин, H.H. Васильев, В.А. Амбросов; Л.: Изд-во Ленингр. ун-та. —1974. 76 с.

3. Басова, Н.Ю. Респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота инфекционной этиологии в условиях Северного Кавказа: автореф. дис. д-ра. ветеринар, наук / Н.Ю. Басова. — Краснодар, 2002. — 42 с.

4. Басова, Н.Ю. Иммунологическая реактивность и ее коррекция при респираторных болезнях телят / Н.Ю. Басова, А.Г. Шипицын // Ветеринария. -2005.-№12. С.19-20.

5. Бектемиров, А.Т. Гибридизация нуклеиновых кислот как средство быстрой вирусологической диагностики. Отчёт о рабочей консультации ВОЗ, Москва, 23 25 января. - 1985/ А.Т. Бектемиров // Вопросы вирусологии. -1988. -№1. - С. 110-117.

6. Бучнев, К.Н. Вирусное заболевание крупного рогатого скота с поражением слизистых оболочек /К.Н. Бучнев// Вестник с-х науки Казахстана.-1967.-№7.-С. 11 15.

7. Вазир, Я. Антигенные свойства экспериментальной ассоциированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота / Я. Вазир, И.В. Третьякова, Е.И. Ярыгина, Р.В. Белоусова // Ветеринария. 2008. - №4. - С. 23 - 26.

8. Верховская, А.Е. Особенности диагностики и профилактики вирусной диареи крупного рогатого скота / А.Е. Верховская, В.А. Сергеев, Т.И. Алипер // Ветеринария. 2009. - № 8. - С. 3 - 7.

9. Вишняков, И.Ф. К вопросу о персистенции вирусов / И.Ф.Вишняков, В.В. Куриннов, С.Ж. Цыбанов // Состояние, проблемы и перспективы развития ветеринарной науки России: материалы научной сессии Россельхозакадемии. — 1999. — №1. С. 228.

10. Воронин, Е.С. Инфекционные болезни животных: учеб. пособие / Е.С. Воронин, Б.Ф. Бессарабов, A.A. Вашутин; отв. ред. A.A. Сидорчук. Москва: КолосС, 2007. - 671 с.

11. Выделение и характеристика изолятов вируса вирусной диареи -болезни слизистых крупного рогатого скота / А.Г. Глотов и др. // Вопросы Вирусологии. 2006. -№1. - С. 41 - 45.

12. Высокопоясный, А.И. Респираторные болезни телят на Кубани / А.И. Высокопоясный, Н.Ю. Басова, А.Г. Шахов, А.Г. Шипицын // Ветеринария. -2000.-№2.-С.8 -11.

13. Глотов, А.Г. Респираторные болезни телят вирусно-бактериальной этиологии / А.Г. Глотов, Т.И. Глотова; Рос. акад. с.-х. наук. Сиб. отд-ние, ГНУ ИЭВСиДВ. Новосибирск: Агрос, 2008. - 258 с.

14. Гоппе, В. А. Этиологическое значение вирусов инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи-болезни слизистых в возникновении респираторных болезней телят: автореф. дис. . канд. ветеринар, наук / В.А. Гоппе. Новосибирск, 2005. — 19 с.

15. Гуненков, В.В. Вирусные и хламидозойные респираторные и кишечные инфекции крупного рогатого скота / В.В. Гуненков, В.А. Халенев, В.Н. Сюрин // Животноводство и ветеринария. 1975. -№8. - С. 5 - 13.

16. Гулюкин, М.И. Система ветеринарно-санитарных, профилактических и лечебных мероприятий против инфекционных болезней крупного рогатого скота в хозяйствах российской Федерации / М.И. Гулюкин и др.; ГНУ ВИЭВ, ФГУ «Центр ветеринарии». Москва, 2007. - С. 14.

17. Диагностика вирусных болезней животных: справочник / В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В. Фомина; Агропромиздат. — Москва, 1991. 528 с.

18. Ершов, Ф.И. Интерферон и его индукторы / Ф.И. Ершов, A.C. Новохатский // Медицина. Москва, 1980. — 176 с.

19. Ершов, Ф.И. Микро-метод для изучения индукторов интерферона in vitro / Ф.И. Ершов, A.M. Сайиткулов // Вопросы вирусологии. — 1984. № 6. -С. 756-757.

20. Ершов Ф.И. Интерфероны (к 40-летию открытия) / Ф.И.Ершов // Вопросы вирусологии. 1998. - №5. - С. 247 - 252.

21. Жидков, С.А. Изучение этиологии респираторных заболеваний телят / С. А. Жидков // Тезисы докладов IV Всесоюзной ветеринарной вирусологической конференции. 1976. - №2. - С. 34 - 40.

22. Жидков, С.А. Вирусная диарея болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота (характеристика возбудителя, диагностика и специфическая профилактика): автореф. дис. . д-ра ветеринар, наук / С.А. Жидков. - Москва, 1994,- 44 с.

23. Жидков, С.А. Роль вирусной диареи в этиологии респираторных и желудочно-кишечных болезней телят / С.А. Жидков, А.И. Лебедев, М.М. Гоголев, Г.Ф. Коромыслов // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 1995. -№3. — С. 50 - 53.

24. Зайцев, Ю.Н. Особенности проявления ассоциированных инфекций телят, обусловленных вирусами вирусной диареи, инфекционного ринотрахеита и бактериями рода Pasteurella: автореф. дис. . канд. ветеринар, наук / Ю.Н. Зайцев. Новосибирск. - 2007. - 17 с.

25. Зудилина, З.Ф. Выделение вируса диареи крупного рогатого скота / З.Ф. Зудилина // Бюллетень Всесоюзного ордена Ленина института экспериментальной ветеринарии. 1972. - № 14. - С. 39 - 40.

26. Иванова, И.П. Инфицированность стад крупного рогатого скота в хозяйствах Минской области / И.П. Иванова, П.А. Красочко // Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных: материалы между нар. конф. Минск, 2000. - С. 105 - 106.

27. Иксанов, Р.Г. Этиопатогенез острых желудочно-кишечных болезней новорожденных телят в Якутской АССР / Р.Г Иксанов, М.П. Неустроев // Болезни домашних и диких животных Крайнего севера: материалы науч. практ. конф. - Новосибирск, 1987. - С. 18-21.

28. Индукторы интерферона / М.Г. Романцов и др. // Иммунология. -1998.-№6. -С. 43 -44.

29. Кетлинский, С.А. Цитокины мононуклеарных фагоцитов регуляции реакции воспаления и иммунитета / С.А. Кетлинский, Н.И. Калинина // Иммунология. 1995. - №3. - С. 30 - 44.

30. Ким, Т.Г. Изучение условий поддерживания и хранения вируса диареи КРС / Т.Г. Ким, A.B. Борисова, В.В. Борисов // Материалы науч.-практ. конф. по вопросам ветеринарной вирусологии и биотехнологии. — Владимир, 1987. -С. 23.

31. Крюков, H.H. Вирусные респираторные болезни крупного рогатого скота / H.H. Крюков, З.Ф. Зудилина, С.И. Евдокимов / Ветеринария. 1976. - №6. - С. 111 - 113.

32. Крюков, H.H. Микробный пейзаж и иммунологическая реактивность у телят, выращиваемых в условиях промышленной технологии / H.H. Крюков,

33. A.Т. Семенюта, Э.А. Шегидевич // Труды ВИЭВ. 1984. - №60. - С. 15 - 23.

34. Кузнецов, В.П. Интерфероны как средство иммуномодуляции /

35. B.П. Кузнецов // Иммунология. 1987. - № 4. - С. 30 - 34.

36. Литвин, В.П. Инфекционные и инвазионные болезни телят / В.П. Литвин, А.И. Поживил. Киев: Наукова Думка, 1991. - 208 с.

37. Макаревич, В.Г. Чувствительность культур клеток к вирусу диареи крупного рогатого скота / В.Г. Макаревич, В.П. Назаров // Актуальные вопросы вет. вирусологии, изд. MB А. 1967. - №.2. - С. 45 - 49.

38. Макаревич, В.Г. Изучение вируса диареи крупного рогатого скота / В.Г. Макаревич, В.П. Назаров // Ветеринария. 1971. - № 14. - С. 38 - 39.

39. Макаримов, A.C. Специфическая профилактика вирусных заболеваний крупного рогатого скота в Республике Удмуртия / A.C. Макаримов, Г.Н. Бурдов, О.В. Сергеев, В.А. Сергеев//Ветеринария.-2008.-№10.-С. 12-18.

40. Матвеева, И.Н. ИФА в диагностике вирусной диареи болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота / И.Н. Матвеева// Ветеринария. -2007.-№6.-С. 55 -57.

41. Особенности респираторных инфекций телят / В.А. Мищенко и др. // Ветеринария. -2000. №9. - С. 5 - 6.

42. Особенности иммунодефицитов у крупного рогатого скота /

43. B.А. Мищенко и др. // Ветеринария. 2006. - №11. - С. 17 - 20.

44. Острые респираторные вирусные инфекции крупного рогатого скота в Свердловской области / О.Г. Петрова и др. // Ветеринария. — 2002. №2. -С. 11 - 15.

45. Петрова, О.Г. Острые респираторные вирусные инфекции крупного рогатого скота в племенных хозяйствах среднего Урала и оптимизация системы противоэпизоотических мероприятий: автореф. дис. д-ра ветеринар, наук / О.Г. Петрова. — Москва, 2002. 47 с.

46. Петрова, О.Г. Профилактика острых респираторных заболеваний крупного рогатого скота: методические рекомендации / О.Г. Петрова и др. Екатеринбург, 2005. - 48 с.

47. Применение ПНР для диагностики вирусной диареи болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота / А.Г. Глотов и др. // Ветеринария. - 2007. - №12. - С. 27-29.

48. Природа, этиологическая структура, патогенез, диагностика массовых желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят и меры борьбы с ними / Э.А. Шегидевич и др. // Труды ВИЭВ. 2003. - №73. - С. 15 - 22.

49. Семенихин, В.И. Выявление вируса болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота с помощью полимеразной цепной реакции /

50. B.И. Семенихин, В.М. Чекишев, С.Ф. Орешкова, С.А. Юрик // Зоогигиена, профилактика и терапия болезней сельскохозяйственных и мелких домашних животных: материалы науч.-практ. конф. (Краснообск, 20 октября 1998г.). Новосибирск, 1999. - С. 34 - 35.

51. Сисягин, П.Н. Профилактика вирусных респираторных болезней телят / П.Н. Сисягин, и др.. // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: междунар. науч.-практ. конф. (Воронеж, 25 сентября 2002). Воронеж, 2002. - С. 38 - 39.

52. Сулейманов, С.М. Этиология, классификация, патогенез и патологическая морфология респираторных болезней телят /

53. C.М. Сулейманов // Диагностика, патогенез, патоморфология и профилактика болезней сельскохозяйственных животных: материалы науч.-практ. конф. -Воронеж, 1993.-С. 7- 8.

54. Сухарев, О.И. Диссеминация и персистирование вирусов ИРТ, ПГ-3, ВД-БС в организме телят при экспериментальном заражении / О.И. Сухарев, Н.Р. Гладченко // Биол. препараты против инфекц. бол. жив-х. -1981. С. 87 - 92.

55. Сюрин, В.Н. Вирусная диарея болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота / В.Н.Сюрин, Г.А. Халенев, В.В. Гуненков; Типография Московской ордена Трудового Красного Знамени ветеринарной академии имени К.И. Скрябина. - Москва, 1977. - 24 с.

56. Сюрин, В.Н. Проблемы патогенности вирусов и молекулярные основы рациональной терапии вирусных инфекций / В.Н. Сюрин // Актуальные проблемы ветеринарной медицины в России: Сб. науч. трудов СО РАСХН.- Новосибирск, 1998. С. 400 - 407.

57. Сюрин, В.Н. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина; Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности. Москва, 1998. — 928 с.

58. Усов, С.М. Иммунологические аспекты терапии и профилактики инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота: автореф. дис. . канд. ветеринар, наук / С.М. Усов. Минск, 1998. - 21 с.

59. Федоров, Ю.Н. Иммунологический фактор, как причина желудочно-кишечных заболеваний у телят / Ю.Н. Федоров; матер, круглого стола отд. ветерин. медиц. РАСХН. Москва, 2000. - С. 36 - 37.

60. Федоров, Ю.Н. Иммунокоррекция: применение и механизм действия иммуномодулирующих препаратов / Ю.Н. Федоров // Ветеринария. 2005.- № 2. С. 3 - 6.

61. Федоров, Ю.Н. Иммунный статус и инфекционные болезни новорожденных телят и поросят / Ю.Н. Федоров // Ветеринария. 2006. -№11. - С. 3 - 5.

62. Шульпин, М.И. Индикация вируса диареи крупного рогатого скота, генотипирование и филогенетический анализ изолятов, выявленных на территории Российской Федерации / М.И. Шульпин, П.К. Аянот, В.А. Мищенко // Вопросы вирусологии. — 2003. — №5. — С. 41 46.

63. Шульпин, М.И. Выявление возбудителя вирусной диареи КРС с помощью полимеразной цепной реакции и генотипирование изолятов, циркулирующих на территории Российской Федерации: автореф. дис. . канд. биол. наук / М.И. Шульпин. Владимир, 2004. - 26 с.

64. Этиопатогенез респираторных заболеваний крупного рогатого скота / В.А. Мищенко и др. // Ветеринарный консультант. 2008. - №11.- С. 3 - 5.

65. Юров, К.П. Профилактика инфекционных болезней телят / К.П. Юров, А.Ф. Шуляк // Болезни сельскохозяйственных животных вирусной и других этиологий и меры борьбы с ними: материалы науч.-практ. конф. Иркутск, 2001. - С. 9 - 10.

66. Юров, К.П. Распространение инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота в различных регионах России / К.П. Юров, А.Ф. Шуляк, О.Г. Петрова, О.В. Майджи // Труды ВИЭВ. 2003. - №73. - С. 15 - 22.

67. Adler, В. Macrophages infected with cytopathic bovine viral diarrhea virus release a factor(s) capable of priming uninfected macrophages for activationinduced apoptosis / B. Adler et al. // J. Virol. 1997. - Vol.71. - P.3255 - 3258.

68. Atluru, D. In vitro inhibition of 5-lipoxygenase metabolite, leukotriene B4, in bovine mononuclear cells by bovine viral diarrhea virus / D. Atluru, et al.// Vet. Immunol. Immunopathol. 1992. - Vol.31. - P. 49 - 59.

69. Bachofen, C. Co-existence of genetically and antigenically diverse bovine viral diarrhoea viruses in an endemic situation / C.Bachofen et al. // Veterinary microbiology. 2008. - Vol.131. - P. 93 - 102.

70. Baker, J.C. Bovine viral diarrhea virus, a rewiew / J.C. Baker // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1987. - Vol.10. - P. 1449 - 1458.

71. Baker, J.C. The clinical manifestations of bovine viral diarrhea infection/ J.C. Baker // Vet Clin. North Am Food Anim. 1995. - Vol.11. - P.425 - 445.

72. Baule, C. Genetic heterogeneity of bovine viral diarrhea virus isolated in South Africa / C. Baule, M. van Vuuren, J.P. Lowings, S. Belak // Virus Res. 1997. - Vol. 52. - P. 205 - 220.

73. Baul, C. Pathogenesis of primary respiratory disease induced by isolates from a new genetic cluster of bovine viral diarrhea virus type I / C. Baul, G. Kulcsar, K. Belak et al. // J. Clin. Microbiol. 2001. - Vol.39. - P. 146 - 153.

74. Becher, P. Genetic diversity of pestivirus, Identification of novel groups and implications for classification / P. Becher et al. // Virology. 1999. - Vol. 262. -P. 64-71.

75. Bolin, S.R. Effects of bovine viral DV on percentage and absolute numbers of circulating B and T-lymphocytes in cattle / S.R. Bolin, R.C. Cutlip //

76. J. Vet. Res. 1985. - Vol.46. - P. 884 - 886.

77. Bolin, S.R. Differences in virulence between two non cytopathic bovine viral diarrhea viruses in calves / S.R. Bolin, JF. Ridpath // Am. J. Vet. Res. 1992. - Vol.53. - P. 2157 - 2163.

78. Bolin, S.R. Control of bovine viral diarrhea infection by use of vaccination / S.R. Bolin // Vet. Clin. North. Am Food. Anim. Pract. 1995. - Vol.11. - P. 615 - 625.

79. Bolin, S.R. The pathogenesis of mucosal disease / S.R. Bolin // Vet. Clin. N Amer-Food Anim. Pract. 1995. - Vol.1. - P.489 - 500.

80. Brogen, K.A. Polymicrobial Diseases / K.A. Brogen, J.M. Guthmiller // ASM Press. 2002. - 328 p.

81. Brown, D.L. Efficient strategies for genomic searching using the affected-pedigree-member method of linkage analysis / D.L. Brown, M.B. Gorin, D.E. Weeks // Am. J. Hum. Genet. 1994. - Vol.54. - P. 544 - 552.

82. Brownlie, J. Experimental infection of cattle in early pregnancy with a cytopathic strain of bovine virus diarrhea virus / J. Brownlie, M.C. Clarke, C.J. Howard // Researchin Veterinary Science. 1989. - Vol.46. - P. 307 - 311.

83. Brownlie, J. The patogénesis of bovine virus diarrhoea virus infections / J. Brownlie // Rev. Scientifique Technique, Int. Office Epizooties. 1990. - Vol.9 -P. 43-59.

84. Brownlie, J. The pathways for bovine virus diarrhea virus biotypes in the pathogenesis of disease / J. Brownlie // Arch. Virol. 1991. - Vol.3. - P.79 - 99.

85. Brownlie, J. Expression of non-cytopathogenic bovine viral diarrhea virus (BVDV) in oocytes and follicles of persistently infected cattle / J. Brownlie, J.P. Booth, D.A. Stevens // Veter. Rec. 1997. - Vol. 141. - P. 3335 - 3337.

86. Bruschke, C.J. Distribution of bovine virus diarrhoea virus in tissues and white blood cells of cattle during acute infection / C.J. Bruschke,

87. K. Weerdmeester, J.T.Van Oirschot, P.A. Van Rijn // Vet. Microb. 1998. - Vol. 64.-P. 23 -32.

88. Carlsson, U. Border disease in sheep caused by transmission of virus from cattle persistently infected with bovine virus diarrhoea virus / U. Carlsson // Veterinary Record. 1991. - Vol.128. - P. 145 - 147.

89. Carlsson, U. Border disease virus transmitted to sheep and cattle by a persistently infected ewe: epidemiology and control / U. Carlsson, K. Belak //Acta Veterinaria Scandinavica. 1994. - Vol. 35 - P. 79 - 88.

90. Clayton, L. Testing and Management Strategies for Effective Beef and Dairy Herd BVDV Biosecurity Programs / L. Clayton, D. Kelling, M. Dale // The Bovine Practitioner. 2000. - Vol.34. - P. 13 - 22.

91. Clayton, L. Evolution of bovine viral diarrhea virus vaccines / L. Clayton, D. Kelling // PhD Vet. Clin. Food Anim. 2004. - Vol. 20. - P. 125 - 129.

92. Collen, T. T-cell responses to bovine Viral diarrhea virus in cattle / T. Collen, W. Morrison // Virus Res. 2000. - Vol.67. - P. 67 - 80.

93. Corapi, W.V. Monoclonal antibody analyses of cytopathic and noncytopathic viruses from fatal bovine viral diarrhea virus infections / W.V.Corapi, R.O. Donis, E.J.Dubovi // Journal of Virology 1988. - Vol. 62 -P. 2823 -2827.

94. Corapi, W.V. Characterization of a panel of monoclonal antibodies and their use in the study of the antigenic diversity of bovine viral diarrhea virus / W.V. Corapi, R.O. Donis, E.J. Dubovi // Am. J. Vet. Res. 1990. - Vol. 51. -P. 1388 - 1394.

95. Deregt, D. A short Incubation Serum Neutralization Test for Bovine Viral Diarrhea Virus / D. Deregt, S. Smithson, G. Kozub // Can. J. Vet. Res. 1992. -Vol. 56.-P. 161 -164.

96. Deregt, D. Bovine viral diarrhea virus: biotypes and disease / D. Deregt, K.G. Loewen // Can. Vet. J. 1995. - Vol. 36 (6). - P. 71 - 78.

97. Deregt, D. A comparison of polymerase chain reaction with and without RNA extraction and virus isolation for detection of bovine viral diarrhea virus in young calves / D. Deregt et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 2002. - Vol.14 (5) -P. 433-437.

98. Dialo, A. Veterinärmedizin und Molecularbiologie: Moglikheiten und Grenzen der Virusdetektion / A. Dialo // Schweiz. Arch. Tierheikl. 1991. -Vol.133. - P. 48-59.

99. Done, J.T. Bovine virus diarrhoea-mucosal disease virus: pathogenicity for the fetal calf following maternal infection / J.T. Done, S. Terlecki, J.W. Harkness et al. // Richardson Veterinary Record. — 1980. — Vol.106 -P. 473 479.

100. Donis, R.O. Bovine viral diarrhea virus and their anligcmc analysis / R. Donis, W. Corapi, E. Dubovi // Arch. Virol. 1991. - Vol. 3. -P. 29 - 40.

101. Donis, R.O. Molecular biology of bovine viral diarrhea virus and its interactions with the host / R.O. Donis // Veterinary Clinics of North America. Food Animal Practice. 1995 - Vol.11. - P. 393 - 423.

102. Dubovi, E.J. Genetic diversity of BVD virus / E.J. Dubovi // Comp. Immun. Microbiol. Infect. Dis. 1992. - Vol.15 - P. 155-162.

103. Edwards, S. The diagnosis of bovine virus diarrhea-mucosal disease in cattle // Rev. sei. tech. Off. int. Epiz. 1990. - Vol. 9. - P.l 15 - 130.

104. Entrican, G. A double monoclonal antibody ELISA for detecting pestivirus antigen in the blood of viraemic cattle and sheep / G. Entrican, A. Dand, P.F. Nettleton // Vet. Microbiol. 1995. - Vol.43 (1) - P.65-74.

105. Finke, J. An improved strategy and a useful housekeeping gene for RNAanalysis from formalin-fixed, paraffin-embedded tissues by PCR / J. Finke et al. // Biotechniques. 1993. - Vol.14. - P.448 - 453.

106. Flores, E.F. Phylogenetic analysis of Brazilian bovine viral diarrhea virus type 2 (BVDV-2) isolates: evidence for a subgenotype within BVDV-2 / E.F. Flores, J.F. Ridpath, R. Weiblen et al. // Virus Res. 2002. - Vol.87. -P. 51-60.

107. Fray, M.D. The effects of bovine viral diarrhoea virus on cattle reproduction in relation to disease control / M.D. Fray, D.J. Paton, S. Alenius // Animal Reproduction Science. 2000. - Vol.61 - P. 615 - 627.

108. Fredriksen, B. Level and duration of serum antibodies in cattle infected experimentally and naturally with bovine virus diarrhoea virus / B. Fredriksen, T. Sandvik, T. Leken, S.A. Odegaard // Veterinary Record. -1999.-Vol.144.-P. 111-114.

109. Fulton, R.W. Bovine viral diarrhea virus antigenic diversity: impact on disease and vaccination programmes / R.W. Fulton, J.F Ridpath, A.W. Confer et al. // Biologicals. 2003. - Vol.31 - P. 89 - 95.

110. Fulton, R.W. Bovine viral diarrhea virus (BVDV) subgenotypes in diagnostic laboratory accessions: distribution of BVDVla, lb, and 2a subgenotypes. / R.W. Fulton, J.F. Ridpath, S. Ore et al. // Veterinary microbiology. 2005. - Vol. 30. - P. 35 - 40.

111. Carman, S. Severe acute bovine viral diarrhea in Ontario, 1993-1995 / S. Carman, T. van Dreumel, J. Ridpath et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 1998. -Vol.10.-P. 27-35.

112. Gibson, C.D. Immune response of the bovine fetus to several antigens /C.D. Gibson, R. Zemjanis // Am. J. Vet. Res. 1973. - Vol. 34. -P. 1277 - 1280.

113. Gilbert, S.A. Typing of Bovine Viral Diarrhea Viruses Directly from Blood of Persistently Infected Cattle by Multiplex PCR / S.A. Gilbert, K.M. Burton, S.E. Prins, D. Deregt //J. of clinical microbiology. 1999. -Vol. 37. -P. 2020-2023.

114. Graham, D.A. Evaluation of the suitability of a commercial bovine viral diarrhoea virus antigen capture ELISA for diagnostic testing / D.A. Graham, I.E. McLaren, A.German // Vet. J. 1998. - Vol.156 (2) - P. 149 - 154.

115. Graham, D.A. Pestiviral infections in sheep and pigs in Northern Ireland / D.A. Graham, V. Calvert, A. German, S .J. McCullough // Veterinary Record. -2001.-Vol.148.-P. 69 -72.

116. Grandvaux, N. The interferon antiviral responseifrom viral invasion to evasion / N. Grandvaux et al. // Curr Opin Infect Dis. 2002. - Vol.15 (3). -P. 259 - 267.

117. Grassmann, C.W. Genetic analysis of the pestivirus nonstructural coding region: defects in the NS5A unit can be complemented in trans. / C.W. Grassmann, O. Isken, N. Tautz, S.E. Behrens // Journal of Virology. 2001. - Vol.75 -P. 7791 - 802.

118. Grooms, D.L. Screening of neonatal calves for persistent infection with bovine viral diarrhea virus by immunohistochemistry on skin biopsy samples / D.L. Grooms, E.D. Keilen // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2002. - Vol.9 (4) -P. 898 - 900.

119. Gunn, H.M. Role of fomites and flies in the transmission of bovine viral diarrhea virus / H.M. Gunn // Veterinary Record. 1993. - Vol.132 - P.584 - 585.

120. Haines, D.M. Monoclonal antibody-based immunohistochemical detection of bovine viral diarrhea virus in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues /

121. D.M. Haines, E.G. Clark, E.J. Dubovi // Vet. Pathol. 1992. - Vol.29 (1) -P. 27-32.

122. Hamers, C. Persistently infected cattle stabilise bovine viral diarrhea virus leading to herd specific strains / C. Hamers, C. Lecomte, G. Kulcsar // Veterinary Microbiology. 1998. - Vol.61 - P. 177-182.

123. Hames, B.D. Nucleic acids gibridization / B.D. Hames, S.J.Higgins // Practical aproach. IRL press. Oxford, 1985. - P.89 - 97.

124. Haraswa, R. Comparative analysis of the 5' non-coding region of Pestivirus RNA detected from live virus vaccines / R. Haraswa // Vet. Med. Sci. — 1994.-Vol.56. -P. 961 964.

125. Houe, H. Age distribution of animals persistently infected with bovine virus diarrhea virus in twenty-two Danish dairy herds / H. Houe // Canadian Journal of Veterinary Research. 1992. - Vol.56. - P. 194 - 198.

126. Howard, C.J. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antibodies to bovine viral diarrhoea virus (BVDV) in cattle sera / C.J. Howard, M.C. Clarke, J. Brownlie // Vet. Microbiol. 1985. - Vol. 10. -P. 359 -369.

127. Howard, C.J. Immunological responses to bovine viral diarrhea virus infection / C.J. Howard // Rev. Sci. Et tech.: off int. Epizoot. 1990. - Vol.1. -P. 95-103.

128. Immunization against viruses / B. Murphy R. C'hanock; P. editors B.N. Fields, D Knipe; 4th edition, Raen Press, Virology. New York, 2001. - 435 p.

129. Innis, M.A. PCR protocols, a guide to methods and applycatoin / M.A. Innis, D.H. Gelfand, J.J. Sninscy, T.J. White // Academic press. California, 1982.-346 p.

130. Iwane, K. Epidemiological Analysis Based on Phylogenetic Tree of Bovine Viral Diarrhea Viruses isolated from Cattle in Tochigi prefecture, Japan / K. Iwane, K. Fukai, K. Tajima // J. Japan Veter. Med. Assn. 2009. - Vol. 62. -P. 371 -375.

131. Jensen, J. Effect of infection by bovine viral diarrhea virus (BVDV) invitro on interleukin-1 activity of bovine monocytes / J. Jensen, R.D. Schultz // Vet. Immunol. Immunopathol. 1991. - Vol.29. -P.251 - 265.

132. Jones, L. Comparison of neutralizing antibodies to type la, lb, and 2 bovine viral diarrhea virus from experimentally infected and vaccinated cattle / L. Jones, H. Van Campen, Z.C. Xu et al. // Bovine Practitioner. — 2001. —Vol. 35. -P. 137-140.

133. Jubb, K.V.P. Pathology of Domestic Animals / K.V.P. Jubb // 1st. ed. New York: Academic Pr. 1963. - Vol. 2. - P. 12 - 21.

134. Ketelsen, A.T. Depression of bovine monocyte chemotactic responses by bovine viral diarrhea virus / A.T. Ketelsen, D.W. Johnson, C.C. Muscoplat // Infect. Immun. 1979. - Vol.25. -P.565 - 568.

135. Kirkland, P.D. Factor influencing the development of persistent infection of cattle with Pestivirus / P.D. Kirkland, M.R. McGowan, S.G. Mackintosh // Second Symposium on Pestiviruses. France, Lyon, 1993. - P. 117 - 121.

136. Kommisrud, E. Bovine virus diarrhoea virus in semen from acutely infected bulls / E. Kommisrud, T. Vatn, J.R. Lang-Ree, T. Loken // Acta Veterinaria Scandinavica. 1996. - Vol. 37. - P. 41 - 47.

137. Kummerer, B.M. The genetic basis for cytopathogenicity of pestiviruses / B.M.Kummerer, N. Tautz, P. Becher et al. // Veterinary Microbiology. 2000. - Vol. 77.-P. 117 - 128.

138. Lang-Ree, J.R. Transmission of bovine viral diarrhoea virus by rectal examination / J.R. Lang-Ree, T. Vatn, E. Kommisrud, T. Loken // Veterinary Record. 1994. - Vol.135 -P.412 - 413.

139. Larsson, B. Natural infection with bovine virus diarrhea virus in a dairy herd a spectrum of symptoms including early reproductive failure and retained placenta / B. Larsson, R. Niskanen, S. Alenius // Animal Reproduction

140. Science. 1994. - Vol.36 - P. 37 - 48.

141. Larsson, M. Interactions of viruses with dendritic cells / M. Larsson, J-F. Fonteneau, A. Lee, N. Bhardwaj // Dendritic cells; P. eds M.T. Lotze, A.W. Thomson; Academic. Press. Inc., London. San Diego, 2001. -P. 505 - 522.

142. Leken, T. Ruminant pestivirus infections in animals other than cattle and sheep / T. Leken // Veterinary Clinics of North America. Food Animal Practice. -1995.-Vol.ll.-P. 597-614.

143. Lindberg, A.L.E. Principles for eradication of bovine viral diarrhea virus (BVDV) infections in cattle populations / A.L.E. Lindberg, S. Alenius // Veterinary Microbiology. 1999. - Vol.64. - P. 197 - 222.

144. Lindberg, A.L.E. Bovine viral diarrhea virus infections and its control. A review / A.L.E. Lindberg // Veterinary Quarterly. 2003. - Vol. 5 - P. 1-16.

145. Lui, L. Virus recovery and full-length sequence analysis of atypical bovine pestivirus Th/04KhonKaen / L. Lui, J. Kampa, S. Belak, C. Baul // Veterinary Microbiology. 2009. - Vol. 138. - P. 62 - 68.

146. Luzzago, C. Distribution pattern of bovine viral diarrhoea virus strains in intensive cattle herds in Italy / C. Luzzago, V. Bronzo, G. Ruffo et al. // Veterinary Microbiology. 2001. - Vol. 83 - P. 265 - 274.

147. Mann, G.E. The regulation of interferon-tau production and uterine hormone receptors during early pregnancy' /G.E. Mann, G.E. Lamming, R.S. Robinson, D.C. Wathes // J. Reprod. Fertil. Suppl. 1999. - Vol.54. -P. 317-328.

148. Mars, M.H. Airborne transmission of BHV1, BRSV, and BVDV among cattle is possible under experimental conditions / M.H. Mars, C.J. Bruschke, J.T. van Oirschot // Veterinary Microbiology. 1999. - Vol. 66. - P. 197 - 207.

149. Meyers, G. Molecular characterization of pestiviruses /G. Meyers, H-J. Thiel // Adv Virus Res. 1996. - Vol. 47. - P. 53 - 118.

150. Meyling, A. Transmission of bovine virus diarrhoea virus (BVDV) by artificial insemination (AI) with semen from a persistently-infected bull / A. Meyling, A.M. Jensen // Veterinary Microbiology. 1988. - Vol.17 - P.97 - 105.

151. Minami, F. Reactivity and prevalence of neutralizing antibodies against Japanese strains of bovine viral diarrhea virus subgenotypes / F. Minami, M. Nagai, M. Ito et al. // Comp. Immunol. Microbiol. Infect Dis. 2009. - P. 920 - 3101

152. Moennig, V. The pestiviruses / V. Moennig, P.G.W Plagemann // Adv. Virus Res. 1992. - Vol.41 - P.53 - 98.

153. Moennig, V. Pathogenesis of inlraulerine infections with bovine viral diarrhea virus / V. Moennig, B. Liess // Vet. din North Am Anim. Prac. 1995. -Vol.11-P. 477-487.

154. Moerman, A. Clinical consequences of a bovine virus diarrhoea virus infection in a dairy herd: a longitudinal study / A. Moerman, P.J. Straver, M.C. de Jong et al. // Veterinary Quarterly. 1994. - Vol.16 - P. 115 - 119.

155. Muscoplat, C.C. Surface immunoglobulin of circulation lymphocytes in chronic bovine diarrhea: Abnormalities in cell populations and cell function / C.C. Muscoplat, D.W. Johnson, E. Teuscher// Am. J. Vet. Res. 1973. - Vol. 34. -P.1101 - 1123.

156. Nagai, M. Genomic and serological diversity of bovine viral diarrhea virus in Japan / M. Nagai, T. Ito, S. Sugita et al. // Archives of virology. -2001. -Vol.146 (4).-P. 685-696.

157. Nettleton, P.F. Pestivirus infections in ruminants other than cattle / P.F. Nettleton // Revue Scientifique et Technique, Office International des Epizootics. 1990. - Vol. 9 - P. 131 - 150.

158. Neyts, J. Infections with Flaviviridae / J. Neyts, P. Leyssen, E. De Clercq // Verhandelingen van de Koninklijke Academie voor Geneeskunde in Belgie. — 1999. Vol.61 (6)-P.661 - 697.

159. Niskanen, R. Failure to spread bovine virus diarrhea virus infection from-P.92- 109.

160. Paton, D.J. Identification of herd-specific bovine viral diarrhoea virus isolates from infected cattle and sheep / D.J. Paton, U. Carlsson, J.P. Lowings et al. // Veterinary Microbiology. 1995. - Vol. 43 - P. 283 - 294.

161. Pauli, U. Veterinärmedizin und molecularbiologie: Möglichkeiten und Grenzen der Virusdetektion / U. Pauli, R.Zanoni, C. Hertig, E. Peterhans // Schweiz. Arch. Tierheilk. 1991. - Vol.133. -P. 35 - 42.

162. Pellerin, C. Identification of a new group of bovine viral diarrhea virus strains associated with severe outbreaks and high mortalities / C. Pellerin, J. van den Hurk, J. Lecomte, P. Tussen // Virology. -1994. Vol.203. -P.260 - 268.

163. Peterhans, E. BVDV and innate immunity/ E. Peterhans, T.W. Jungi, M. Schweizer//J. Biologicals. -2003. Vol.31 (2). - P. 107-112.

164. Pfeffer, M. A universal "one-tube" RT-PCR protocol for amplifying isolates of bovine viral diarrhoea virus / M. Pfeffer, M.V. Freyburg, O.R. Kaaden, M. Beer // Vet. Res. Commun. 2000. - Vol.24 (7). - P. 491 - 503.

165. Potgieter, L.N. Bovine respiratory tract disease caused by bovine viral diarrhea virus / L.N. Potgieter // Vet. Clin. N. Amer-Food Anim. Pract. 1997. -Vol.13.-P. 471 -481.

166. Rhodes, S. Cytokine responses of ('1)4 "I cells in response to bovine viral diarrhoea virus in cattle / S. Rhodes, J. Coeksedge, R. Collins // Gen. Virol. 1999. - Vol.80. - P. 1673 - 1679.

167. Ridpath, J.F. Segregation of bovine viral diarrhea virus into genotypes / J.F. Ridpath, S.R. Bolin, E.J. Dubovi // Virology. 1994. - Vol.205. - P. 66 - 74.

168. Niskanen, R. Lack of virus transmission from bovine viral diarrhoea virus infected calves to susceptible peers / R. Niskanen, A.L.E. Lindberg, B. Larsson, S. Alenius // Acta Veterinaria Scandinavica. 2000. - Vol. 41 - P.93 - 99.

169. Niskanen, R. Transmission of bovine virus diarrhoea virus by unhygienic vaccination procedures, ambient air and by contaminated pens / R. Niskanen,

170. A.L.E. Lindberg // Veterinary Journal. 2003. - Vol.165 - P. 251 - 259.

171. Njaa, B.L. Diagnosis of persistent bovine viral diarrhea virus infection by immunohistochemical staining of formalin-fixed skin biopsyspecimens //

172. B.L. Njaa, E.G. Clark, E. J. Janzen et al. // Vet. Diagn. Invest. 2000.- Vol.12 (5) -P.393 -399.

173. Odeon, A.C. Experimental infection of calves with bovine viral diarrhea virus genotype II (NY-93) / A.C. Odeon, C.L. Kelling, D.J. Marshall et al. // Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. — 1999. Vol. 11. — P. 221 - 228.

174. Ohmann, H. Demonstration of bovine viral diarrhea virus in peripheral blood mononuclear cells of persistently infected, clinically normal cattle / H. Ohmann, F. Ronsholt, B. Bloch // Gen. Virol. 1987. - Vol.68 - P.1971 - 1972.

175. Olafson, P. An apparently new transmissible disease of cattle / P. Olafson,

176. A.D. MacCallum, F.H. Fox // Cornell Veterinarian. 1946. - Vol.36 - P.205 - 213.

177. Pardu, M.L. Nucleic acid hybridization: a practical approach/ M.L. Pardu,

178. B.D. Hames, S.J. Higgins // IRL Press. 1985. - P.179 - 202.

179. Paton, D.J. Infection of pigs and cattle with bovine viral diarrhoea virus on a farm in England / D.J. Paton, V. Simpson, S.H. Done // Veterinary Record.- 1992. Vol. 131.-P. 185 - 188.

180. Paton, D.J. A proposed division of the pestivirus genus using monoclonal antibodies, supported by cross-neutralisation assays and genetic sequencing / D.J. Paton, J.J. Sands, J.P. Lowings et al. // Vet. Res. 1995. - Vol.26.

181. Ridpath, J.F. Practical significance of heterogeneity among BVDV strains: impact of biotype and genotype on U.S. control programs / J.F. Ridpath // Prev. Vet. Med.-2005.-Vol.15. -P. 17-30.

182. Rinaldo, C.R. Fetal and Adult Bovine Interferon Production during Bovine Viral Diarrhea Virus Infection / C.R. Rinaldo et al. // Infection and Immunity. 1976. - Vol.14. - P. 660 - 666.

183. Rong, L. Compatibility of plasmids encoding bovine viral diarrhea virus type 1 and type 2 E2 in a single DNA vaccine formulation/ L. Rong, A.Lorne, S. Babiuk et al. // Vaccine. 2007. - Vol. 25. - P. 5994 - 6006.

184. Rossmanith W. Improvedantigen and nucleic acid detection in a bovine virus diarrhoea eradication program/ W. Rossmanith, S. Vilcek, H. Wenzl et al. // Vet. Microbiol. -2001. Vol.81 (3). P. 207-218.

185. Roth, J.A. Effects of bovine viral diarrhea virus infection on bovine polymorphonuclear leukocyte function / J.A. Roth, M.L. Kaeberle, R.W. Griffith // Am. J. Vet. Res. 1981. - Vol.42. - P. 244 - 250.

186. Roth, J.A. Lymphocyte blastogenesis and neutrophil function in cattle persistently infected with bovine viral diarrhea virus / J.A. Roth, S.R. Bolin, D.E. Frank // Am. J. Vet. Res. 1986. - Vol.47. - P.l 139 -1141.

187. Saliki, J.T. Evaluation of a new sandwich ELISA kit that uses serum for detection of cattle persistently infected with BVD virus/ J.T. Saliki, R. Huchzermeier, E.J. Dubovi // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2000. - Vol.916.-P. 358-363.

188. Saliki, J.T. Laboratory diagnosis of bovine viral diarrhea virus infections / T. Saliki, E.J. Dubovi // Vet. Clin. Food Anim. 2004. - Vol.20. - P. 69-83.

189. Sausker, E.A. Seroprevalence of OHV-2, BVDV, BHV-1, and BRSV in ranch-raised bison (Bison bison) / E.A. Sausker, N.W. Dyer // J. of Vet. Diagn.1.vest. 2002. - Vol.14. - P.68 - 70.

190. Schweizer, M. Oxidative stress in cells infected with bovine viral diarrhea virus: a crucial step in the induction of apoptosis/ M. Schweizer, E. Peterhans// J. Gen Virol. 1999. - Vol.80. - P.l 147 - 1155.

191. Sentsui, H. Anti-Viral effect of interferon-alpha on Bovine Viral Diarrhea Virus / H. Sentsui et al.// J. Vet Med Sci. 1998. -Vol.60 (12). - P. 1329 - 1333.

192. Shukla, D.D. Evaluation of complete genome sequences and sequences of individual gene products for the classification of hepatitis-C viruses / D.D. Shukla, P.A. Hoyne, CW. Ward //Archives ofVirology.-1995.-Vol. 140.-P. 1747-1761.

193. Skidmore, S.J. Interferonassay as a viral diagnostic test / S.J. Skidmore // J.Virol. Methods.-1987.-Vol.16 (1-2).-P. 155 158.

194. Sockett, D. Bovine Viral Diarrhea Virus: A 50 Year Review / D. Sockett, D. Bolin, J. Ridpath, S. Bolin // Cornell University College of Veterinary Medicine. New York, 1996. - 207 p.

195. Some, C. Prevalence of antibodies to bovine viral diarrhea virus in Namibian wildlife / C. Soine, G. Uatanaua, K.R. Depner // Tropical Animal Health and Production. 1992. - Vol. 24. - P. 125 - 126.

196. Splichal, I. Ontogeny of interferon alpha secreting cells in the porcine fetal hematopoietic organs / I. Splichal, M. Bonneau, B. Charley // Immunol Lett. 1994. -Vol.43. - P. 203 - 208.

197. Taylor, S.K. Serologic survey for infectious pathogens in free-ranging American bison / S.K. Taylor, V.M. Lane, D.L. Hunter et al.// J. of Wildlife Diseases. 1997. - Vol. 33. - P. 308 - 311.

198. Van Reeth, K. Macrophages and respiratory viruses / K. Van Reeth, B.Adair//Pathol. Biol. 1997.-Vol.45.-P. 184- 192.

199. Viet, A.F. Influence de la structuration du troupeau en lots sur propagation duvirus de la Diarrhée Virale Bovine (BVDV) en élevage bovin laitier / A.F. Viet, C. Fourichon, H. Seegers, C. Jacob // Revue Méd. Vét. 2004. - Vol.155. -P. 132 -140.

200. Vilcek, S. Genetic clustering of bovine viral diarrhoea viruses in cattle farms: genetic identification and analysis of viruses directly from cattle sera / S. Vilcek, S. Alenius, D.J. Paton et al. // Veterinary Journal. Vol.1999. - Vol.158.-P.33-38.

201. Vilcek, S. Typing of pestiviruses from eland in Zimbabwe / S. Vilcek, D.J. Paton, L.W. Rowe, E.C. Anderson // J. of Wild. Dis. 2000. - Vol. 36. - P. 165 - 168.

202. Vilcek, S. Bovine viral diarrhea virus genotype 1 can be separated into at least eleven genetic groups / S. Vilcek, D.J. Paton, B. Durkovic et al. // Arch. Virol. 2001. - Vol.146. - P. 99 - 115.

203. Vilcek, S. Genetic diversity of international bovine viral diarrhea virus (BVDV) isolates: identification of a new BVDV-1 genetic group/ S. Vilcek et al.// Vet. Res. -2004. Vol.35. - P. 609 - 615.

204. Welsh, M.D. Effect of BVD virus infection on alveolar macrophage functions / M.D. Welsh, B.M. Adair, J.C. Foster // Vet. Immunol. Immunopathol. -1995. Vol.46. - P. 195 - 210.

205. Wengler, G. Family Flaviviridae / G. Wengler; P.eds. R.I.B. Francki, C.M. Fauquet, D.L. Knudson, F. Brown; Classification and Nomenclature of Viruses; 5th Rep Int Committee on Taxonomy of Viruses. Berlin: SpringerVerlag, 1991.-P. 223 -233.

206. Wolfmeyer, A. Genomic (5'UTR) and serological differences among German BVDV field isolates / A. Wolfineyer, G. Wolf, M. Beer et al. // Arch. Virol. 1997. - Vol. 142. - P. 2049-2057.

Информация о работе

Кунгурцева, Ольга Владимировна
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2010
ВАК 06.02.02

Диссертация

Особенности распространения вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота, молекулярно-биологические свойства изолятов вируса - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы