Особенности клонального микроразмножения in vitro и ускорение селекции новых ремонтантных форм малины

Сковородников, Дмитрий Николаевич

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Особенности клонального микроразмножения in vitro и ускорение селекции новых ремонтантных форм малины
ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Особенности клонального микроразмножения in vitro и ускорение селекции новых ремонтантных форм малины"

На правах рукописи

СКОВОРОДНИКОВ Дмитрий Николаевич

ОСОБЕННОСТИ КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ IN VITRO И УСКОРЕНИЕ СЕЛЕКЦИИ НОВЫХ РЕМОНТАНТНЫХ ФОРМ МАЛИНЫ

Специальность 06.01.05. - селекция и семеноводство, 03.00.12. - физиология и биохимия растений

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

Брянск - 2004

Работа выполнена в межкафедральной лаборатории биотехнологии Брянской государственной сельскохозяйственной академии и на селекционном участке Кокинского опорного пункта Всероссийского селекционно-технологического института садоводства и питомниководства в 2000-2003 гг.

Научные руководители - заслуженный деятель науки РФ,

член-корреспондент РАСХН, доктор сельскохозяйственных наук, профессор И.В. КАЗАКОВ,

доктор биологических наук, профессор В.В. ЗАЯКИН

Официальные оппоненты - доктор сельскохозяйственных наук

М.В. Каныиина кандидат биологических наук, доцент В.А. Попов

Ведущая организация - Брянский государственный университет

им. академика И.Г. Петровского.

Защита диссертации состоится^ января 2004 г. в ff на заседании диссертационного совета Д 220. 005. 01 в Брянской государственной сельскохозяйственной академии по адресу: 243365, Брянская обл., Выгоничский район, п. Кокино, Брянская ГСХА, корпус 1, зал заседаний.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Брянской ГСХА. Автореферат разослан J_ декабря 2003 г.

Просим принять участие в работе Совета или прислать свой отзыв в 2-х экземплярах, заверенных гербовой печатью.

Учёный секретарь диссертационного совета, доктор сельскохозяйственных

наук, доцент А.И. Артюхов

£oosr-A

/ ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. На Кокинском опорном пункте ВСТИСП (Брянская область) с начала 70-х годов прошлого века ведется интенсивная работа по созданию ремонтантных сортов малины, формирующих основной урожай в конце лета — начале осени на однолетних побегах. Актуальной проблемой при создании таких сортов является оптимизация селекционного процесса. Ряд ремонтантных сортообразцов малины сложного межвидового происхождения отличается низкими коэффициентами размножения, а отдельные из них вовсе не образуют корневой поросли (И.В. Казаков, 2001). Эта биологическая особенность затрудняет размножение таких генотипов традиционными способами и, таким образом, значительно удлиняет период от выделения гибридов в элиту до передачи в сортоиспытание. Кроме того, ограничивается объем скрещиваний при использовании их в качестве родительских форм. Эти препятствия в значительной мере можно преодолеть путем использования метода клонального микроразмножения (В.В. Вовк, 2000). Данная работа является продолжением исследований по оптимизации клонального микроразмножения новых межвидовых ремонтантных форм малины для ускорения селекционного процесса.

Для межвидовых ремонтантных форм малины остаются неизученными вопросы регенерации из листовых эксплантов, что представляет определенный интерес для получения генетического разнообразия форм с использованием клеточной селекции, генетической инженерии и других биотехнологических методов.

В настоящее время в лаборатории биотехнологии БГСХА накоплено в пробирочной культуре около 100 селекционно-ценных генотипов ремонтантной малины, которые нуждаются в совершенствовании методологических подходов для выяснения наиболее эффективных способов их длительного хранения in vitro.

Крайне мало информации о поведении размноженных в культуре in vitro растений малины в полевых условиях и практически отсутствуют такие сведения о ремонтантных сортах межвидового происхождения.

Решение затронутых выше проблем является актуальным и имеет важное теоретическое и практическое значение для ускорения селекции ремонтантной малины.

Цель исследования. Целью проводимых исследований являлось изучение особенностей клонального микроразмножения новых ремонтантных форм малины, поведения размноженных in vitro растений в полевых условиях и оптимизация условий адвентивного органогенеза для ускорения селекционного процесса и внедрения новых сортов в производство.

Задачи исследований:

• Оптимизировать условия осеннего введения в культуру in vitro ремонтантных образцов малины;

3 РОС национальная]

БИБЛИОТЕКА I С. Петербург }

• Изучить поведение новых генотипов на всех этапах клонального микроразмножения;

• Определить эффективные способы длительного хранения растений в культуре in vitro;

• Оптимизировать условия адвентивного органогенеза и изучить регенерационную способность листовых эксплантов различных форм ремонтантной малины;

• Оценить в полевых условиях полученные in vitro растения ремонтантной малины и сравнить их с растениями, размноженными традиционным способом.

Научная новизна исследований и практическая значимость работы. В результате проведенной работы показана возможность осеннего введения в культуру in vitro межвидовых ремонтантных сортов и форм малины с использованием в качестве источника экспланта фрагментов почек, изолированных от побегов замещения. Изучены факторы, влияющие на приживаемость и регенерационную способность эксплантов.

Изучено поведение в культуре in vitro новых ремонтантных гибридов на всех этапах клонального микроразмножения с использованием различных типов регуляторов роста.

Оптимизированы условия адвентивного органогенеза из листовых эксплантов для новых генотипов ремонтантной малины и изучена их реге-нерационная способность.

Показано увеличение генеративной и вегетативной продуктивности у размноженных in vitro растений ремонтантных сортов малины в сравнении с растениями, полученными традиционным способом.

Реализаиия результатов исследований. Растения малины, полученные в лаборатории биотехнологии in vitro, использованы для закладки маточников ремонтантных форм малины на участке Кокинского опорного пункта ВСТИСП. Всего передано для высадки в почву 4325 растений малины 41 генотипа.

В результате проведенной работы подготовлены для передачи в госсортоиспытание три новых сортообразца ремонтантной малины Бриллиантовая, Элегантная и Надежная.

Апробаиия работы. Материалы диссертации были представлены на Международных научно-практических конференциях: «Молодые учёные - возрождению сельского хозяйства России в XXI веке» (Брянск, 2000); «Молодые учёные - возрождению сельского хозяйства в XXI веке» (Санкт-Петербург, 2001). «Использование достижений современной биологической науки при разработке технологий в агрономии, зоотехнии и ветеринарии» (Брянск, 2002); V съезде общества физиологов растений России «Физиология растений - основа фи-тобиотехнологии» (Пенза, 2003)

Публикаиии. По теме диссертации опубликовано 5 работ.

Объём и структура диссертаиии. Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста и состоит из 3 глав, выводов и рекомендаций для практической селекции списка использованной литературы. Работа содержит 36 таблиц и 13 рисунков. Список использованной литературы включает 220 наименований, в том числе 154 на иностранных языках.

Место проведения, материал и методика исследований.

Исследования проводились в 2000-2003 годах в лаборатории биотехнологии Брянской ГСХА и на селекционных участках малины Кокин-ского опорного пункта Всероссийского селекционно-технологического института садоводства и питомниководства (ВСТИСП). Объектом исследования являлись образцы ремонтантной малины сложного межвидового происхождения, полученные под руководством доктора с.-х. наук И.В. Казакова.

Питательные среды готовились на основе минеральной части среды Мурасиге-Скуга (T.Murashige & F.Skoog, 1962), с увеличенной в 3 раза концентрацией хелата железа.

Стерилизацию материала проводили в асептических условиях с помощью 0,1% раствора сулемы в течение 3-5 минут.

На этапе введения в культуру в качестве источника цитокинина вводили тидиазурон (TDZ) в концентрации 0,05-0,1 мг/л.

Для размножения малины применяли цитокинины 6-БАП в концентрации 2 мг/л и TDZ в концентрации 0.05, 0.1 и 0.2 мг/л.

В качестве индукторов ризогенеза применяли ИУК или ИМК. Использовали различные способы воздействия: введение ауксинов непосредственно в питательную среду в концентрации 0,5-0,75 мг/л; кратковременная обработка в течение нескольких секунд в водном растворе ауксина в концентрации 1000 мг/л с последующей посадкой их на среды без гормонов или в субстрат, минуя стадию укоренения в пробирке.

В опытах по регенерации изучали влияние различных концентраций TDZ (0,025-2 мг/л) и темновой инкубации на адвентивный органогенез ремонтантных образцов малины с использованием питательной среды МС.

При изучении оптимальных условий хранения пробирочных растений в культуре in vitro в качестве цитокинина во всех вариантах использовали 6-БАП в концентрации 1мг/л. Из осмотических ингибиторов было изучено влияние маннита (1-3%)и сахарозы (3-9%) в различных соотношениях, из регуляторов роста - ССС и АБК в концентрациях 0,25, 1 г/л и 5, 20 мг/л соответственно. В качестве контроля использовали среду без ингибиторов роста.

При оценке полученных форм ремонтантной малины в полевых условиях учитывали элементы продуктивности растений и их порослеобра-зовательную способность, которые сравнивали с растениями, размноженными традиционным способом.

Опыты, проводили в трехкратной повторности. Полученные данные после статистической обработки представили в виде М±ш, где М - математическое ожидание, а m-стандартная ошибка среднего (Б.А. Доспехов, 1974).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Оптимизация осеннего введения в культуру in vitro ремонтантных форм малины Введение в культуру межвидовых ремонтантных форм малины может ограничиваться тем, что ряд ценных отборов сложного межвидового происхождения, включающих геноплазму малины красной, черной, боярышниколистной, душистой, замечательной и поленики, отличается очень низким коэффициентом размножения в полевых условиях, а отдельные генотипы совсем не образуют корневой поросли.

На Кокинском опорном пункте ВСТИСП селекция ремонтантной малины ведется в направлении создания сортов, реализующих основную часть своей продуктивности осенью на однолетних побегах, что позволяет ежегодно после заморозков срезать всю надземную часть куста. В связи с этим после проведения селекционной оценки сеянцев (конец августа - начало сентября) для введения в культуру in vitro можно использовать почти все нераспустившиеся почки на побегах замещения, которые на этом этапе развития дифференцированы по цветочному типу.

Успешная реализация такого подхода, то есть введение образцов в культуру осенью вместо весны будущего года, может почти на год ускорить размножение перспективных форм, а значит и создание новых сортов малины.

Для определения возможности использования почек, изолированных от однолетних побегов замещения, для введения в культуру in vitro были использованы размноженные сорта ремонтантной малины - Геракл, Бриллиантовая и Надежная.

Через месяц культивирования на питательной среде с TDZ (0.1 мг/л) стопроцентной приживаемостью отличались экспланты всех сортов, выделенные из почек побегов размножения (поросли) (табл. 1).

Использование эксплантов, изолированных от побегов замещения при введении в культуру in vitro, также дает высокий выход выживших эксплантов. Наибольший процент приживаемости был отмечен у сортов Бриллиантовая и Геракл (100 и 97,1% соответственно), несколько ниже у сорта На-дежная(90%).

Лучшая приживаемость эксплантов, взятых от побегов размножения, может быть связана с большей регенерационной способностью молодых тканей у почек, сформировавшихся на побегах размножения, которые у малины образуются в течение всего периода вегетации, вплоть до заморозков (Е.И. Ярославцев, 1979).

Таблица 1

Приживаемость эксплантов, изолированных от побегов замещения и размножения

№ п.п. Тип побегов Количество изолированных эксплантов, шт. % выживших эксплантов через 1 месяц Количество образовавших ся побегов на экс плант, шт.

Геракл

1 Побеги размножения 38 100 1,9±0,4

Побеги замещения 34 97,1 1,9±0,1

Бриллиантовая

2 Побеги размножения 23 100 1,7±0,2

Побеги замещения 21 100 2,5±0,5

Надежная

3 Побеги размножения 40 100 1,1 ±0,2

Побеги замещения 36 90,0 1,7±0,6

Другим объяснением может быть то, что используемые для изолирования почки от побегов возобновления находятся в нижней части побега, а у малины наименее развитые почки находятся в нижней и верхней части побега (В.Л. Витковский, 1984).

Преимущество использования эксплантов с плодоносящих побегов замещения заключается еще и в том. что при густой посадке сеянцев или сильном разрастании растений малины нередко возникает вопрос о принадлежности поросли к тому или иному генотипу, тогда как во время плодоношения отличительные признаки нужной формы легко можно определить по плодам. Возможность использования эксплантов с плодоносящих побегов позволяет размножить элитные сеянцы уже в первый год их плодоношения, когда, как правило, они еще не образуют поросли.

Местоположение почек на побеге оказывало влияние на количество инфицированных эксплантов и на их приживаемость в первые дни культивирования (рис 1.).

Так, наибольшее количество инфицированных эксплантов было отмечено у фрагментов почек, расположенных в основании побега (46% инфицированных эксплантов), а лучшей приживаемостью обладали верхние почки.

о о я

о а.

t ^ 5? -й И

« Й 3 S

я ч

Л К

о л &

1-0 И

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

1 II

Порядок расположения почек на побеге ^ % выживших эксплаитов □ % инфицированных эксплантов

Рис 1. Приживаемость и инфицированность фрагментов почек сорта Бабье лето - 2 в зависимости от их расположения на побеге

После 1 месяца культивирования фрагментов почек с однолетних побегов замещения на среде с TDZ прослеживалась тенденция увеличения количества образовавшихся побегов от основания до первого латерала (табл. 2). Максимальное количество побегов отмечено у эксплантов 11 порядка (2,7 шт.).

После перенесения эксплантов на среду размножения (ВАР 2 мг/л) было отмечено пропорциональное увеличение, почти в два раза, количества образовавшихся побегов с сохранением той же закономерности - повышенной способности к регенерации верхних почек. Такую зависимость можно объяснить как морфологической неоднородностью почек, так и их различным физиологическим состоянием.

При введении в культуру in vitro лучшей приживаемостью характеризовались крупные экспланты (1-4 мм), представляющие собой фрагменты почек без кроющих чешуй и пары зачатков настоящих листочков. В качестве источника цитокинина на этом этапе эффективнее оказался TDZ в концентрации 0,1 мг/л.

Таблица 2

Регенерационная способность эксплантов в зависимости от расположения

почек на побеге

Порядок расположения почек на побеге Количество побегов на эксплант, шт.

1 пассаж (TDZ 0,1 мг/л) 2 пассаж (ВАР 2мг/л)

1 1,0±0,5 1,4±0,5

3 0,8±0,2 2,3+1,1

5 0,9+0,3 1,6±0,7

7 1,3±0,5 2,2±0,1

9 1,8±0,2 3,6±0,6

11 2,7±0,2 4,5±0,7

При введении в культуру in vitro ремонтантных форм малины наиболее трудным этапом оказалась адаптация эксплантов к среде размножения. После перенесения эксплантов, представляющих собой конгломераты маленьких побегов с инициальной среды (TDZ 0,1 мг/л) на среду размножения (6-БАП 2 мг/л), наблюдалась гибель тех трасплантов, у которых имелись признаки витрификации. Улучшить приживаемость эксплантов удалось с помощью культивирования в течение первых недель после их перенесения на среду с 6-БАП при низкой интенсивности освещения (275-300 лк). По-видимому, при ярком освещении происходит отмирание витрифицированных под действием TDZ тканей. Недостаток света замедляет этот процесс и дает возможность для образования и роста нормальных побегов.

Размножение новых ремонтантных форм малины в культуре in vitro Эффективность размножения растений in vitro во многом зависит от индивидуальной генотипической реакции растений на включаемые в питательную среду гормоны.

У представленных для размножения в 1999-2000 гг. ремонтантных образцов малины при их культивировании на 6-БАП коэффициент размножения варьировал от 1,7 до 13,1, в среднем по двум годам он составил 4,1. Существенно отличались растения по высоте побега и количеству образовавшихся листьев.

Из 18 генотипов выделились трудноразмножаемые формы - 15-220-2 и 16-67-1, у которых коэффициент размножения составил соответственно 1,7 и 1,9. При использовании стандартных методов культивирования эти генотипы даже за 2 года не удалось размножить до количества 50 растений. Использование простого черенкования (по междоузлиям) не дало положительных результатов - жизнеспособными оставались только верхушки

растений, базальные черенки не образовывали дополнительных побегов и со временем усыхали. Трудность размножения таких генотипов обусловлена тем, что наряду с низкими коэффициентами размножения эти генотипы имеют укороченные побеги с малым количеством междоузлий.

Частично решить проблему размножения таких генотипов можно за счет повторного введения в культуру in vitro дополнительного количества материала после первичной оценки. Такой подход даст возможность передать ценные формы ремонтантной малины в количестве, необходимом для конкурсного испытания. Однако нужно заметить, что трудноразмножаемые генотипы ремонтантной малины отличаются слабой приживаемостью и регенерационной способностью на этапе введения в культуру in vitro, что еще более усложняет их размножение.

Генотипы, выделенные в 2001 году также отличались по коэффициенту размножения, высоте растений и количеству образовавшихся листьев. Коэффициент размножения варьировал от 1,4 и 1,5 у генотипов 5-Б-87-2 и 21-76-1 соответственно до 8,7 у генотипа 6-43-5. На среде с 6-БАП высота растений у некоторых форм достигала 36 мм (18-183-1); самым слабым ростом характеризовался генотип 21-76-1 (1,5), который отличался плохой способностью к образованию пазушных побегов.

При изучении особенностей динамики размножения гибридов ремонтантной малины (отборы 2002 г.) только у генотипов 9-35-10, 7-254-1, 1-98-10 и 32-Х наблюдалось существенное увеличение коэффициента размножения во втором пассаже. Использование в качестве цитокинина TDZ в третьем пассаже эффективнее стимулировали размножение только для генотипов 7-254-1 и 21-232-2, но при этом значительная часть растений имела признаки витрификации (табл. 3).

Таблица 3

Влияние типа цитокининов на размножение

ремонтантных образцов малины_

№ п.п. Генотип Коэффициент размножения * Высота растений *, мм

6-БАП 2 мг/л TDZ 0,1 мг/л 6-БАП 2 мг/л TDZ 0,1 мг/л

1 9-35-10 3,3±0,3 4,2±0,6 25,2±2,7 11,9+1,0

2 7-254-1 3,0±0,7 7,0±0,8 10,2±0,8 7,3±0,1

3 18-65-10 2,5±0,2 2,8±0,7 14,0±1,3 10,2±0,9

4 21-232-2 2,5±0,1 4,2±0,5 16,5±2,4 8,6+1,2

5 1-98-10 2,2±0,2 1,5±0,4 22,8±3,4 13,6±2,3

* - третий пассаж

Отрицательное действие JDZ при клональном микроразмножении малины проявлялось в слабом росте пазушных побегов (табл. 3). Так, у всех изученных генотипов высота образовавшихся побегов на среде с 6-БАП (2 мг/л) существенно превышала этот показатель при культивировании растений на среде с ТЭг.

Укоренение и адаптация пробирочных растений ремонтантной малины к нестерильным условиям

В экспериментах были использованы оптимальные концентрации ауксинов (ИУК, ИМК), подобранные ранее для ремонтантных форм малины (В.В. Вовк, 2000). Учитывался тот факт, что тип используемого ауксина и способ его применения зависят от генотипических особенностей растений.

При определении оптимального типа ауксина при его добавлении в среду на 6 ремонтантных формах малины была отмечена сортоспецифичность. Для генотипов 4-43-2, 2-21-20 большее количество образовавшихся корней наблюдалось в варианте с использованием ауксина ИУК, для генотипа № 24 - в присутствии ИМК, для генотипов 2-85-1, 3-125-1 и 3-2-1 существенных отличий обнаружено не было. Причем для генотипов 2-85-1 и 4-43-2 длина корней была больше при использовании ИУК, для остальных - достоверных отличий не было.

При сравнении способов обработки ауксинами по количеству образовавшихся корней на одно растение выделился вариант с использованием импульсной обработки микрочеренков в растворе ИМК (1000 мг/л) и дальнейшем их культивированием на безгормональной среде. У всех шести испытанных генотипов при данном способе применения ауксина образовывалось существенно большее количество корней на побеге, чем при введении ауксинов непосредственно в питательную среду. Этот эффект проявлялся с начала ризогенеза и до окончания опыта. При этом наблюдалась тенденция к увеличению длины корней, кроме генотипа 2-85-1, у которого при большом количестве корней их средняя длина несколько уменьшилась.

При сравнении двух способов укоренения - в песке и на питательной среде, более высокий процент укоренения, за исключением двух генотипов (2-85-1 и 4-43-2), был отмечен в варианте с непосредственной посадкой микрочеренков в песок (от 40% у генотипа 3-2-1 до 100% у генотипа №24) (табл. 4).

После высадки пробирочные растения уступали в развитии растениям, укорененным непосредственно в песке, что связано с более продолжительной адаптацией, вследствие повреждения корней при пересадке в песок.

Таблица 4

Укоренение ремонтантных форм малины в зависимости от способа

обработки и типа ауксина

Количество укорененных растений, %

В песке На питательной среде

№ п./п. Генотип ИМК обмакива-ние1000 мг/л ИМК обмакива-ние 1000 мг/л ИМК 0,5 мг/л ИУК 0,75 мг/л

1 2-85-1 41,38 88,6±7,4 72,9± 18,6 85,7±10,2

2 3-125-1 84 68,3±1,9 24,6±4,9 50,0±5,1

3 3-2-1 40 39,0±9,2 13,9±6,1 15,3±3,2

4 №24 100 73,9±7,1 57,5±7,3 37,5±8,7

5 4-43-2 40,48 77,5±7,4 48,8±15,4 63,9±4,2

6 2-21-20 75 40,0±4,7 12,8±5,5 39,2±13,1

В зависимости от способа обработки и типа ауксина на питательной среде, в варианте с импульсной обработкой процент укорененных растений был либо достоверно выше, либо не уступал вариантам с постоянным присутствием ауксинов в среде (табл. 4). При сравнении влияния ИУК и ИМК также наблюдалась сортоспецифичность в реакции укоренения.

При соблюдении таких условий культивирования, как использование простерилизованного субстрата, оттитрованного до уровня рН 6,0-7,0, создание высокой влажности воздуха в первые недели культивирования, оптимальный температурный режим, своевременный полив и подкормка растений разбавленным раствором МС, можно обеспечить высокую приживаемость и дальнейшее развитие растений малины на этапе адаптации к нестерильным условия.

Из всех этапов клонального микроразмножения для ремонтантных образцов малины процесс адаптации пробирочных растений имел наименее четко выраженную генотипическую зависимость.

Оптимизация адвентивного органогенеза и регенераиионная способность межвидовых ремонтантных форм малины in vitro

Предварительный эксперимент для определения оптимальных концентраций TDZ по регенерации адвентивных побегов малины был проведен на листовых эксплантах ремонтантной формы 1-125-1. В исследуемом диапазоне концентраций TDZ 0,2-3 мг/л, только в варианте с добавлением 3 мг/л TDZ не было отмечено регенерационных процессов. При использовании TDZ от 2 мг/л и ниже, наблюдалось образование адвентивных побегов.

В следующем опыте, проведенном на сорте Бабье лето - 2 диапазон концентраций TDZ был смещен в меньшую сторону. Динамика регенерации адвентивных побегов на листовых дисках малины представлена на рис. 2

Интервал в днях

TDZ 0,025 ■ TDZ0.05 й TDZ0.1 X TDZ0.2 Ж TDZ 0,5 —•—TDZ1

Рис. 2 Динамика регенерации листовых дисков малины Бабье лето - 2 при различной концентрации TDZ

Через 2,5 недели культивирования на листовых эксплантах при концентрации 7DZ 0.1, 0.2, 0.5, 1 мг/л было отмечено начало стеблевого морфогенеза. После 26 дней инкубации увеличения числа образовавшихся регенерантов не происходило, за исключением варианта ТЪЪ 0.5 мг/л. При концентрации TDZ 0.5 и 1.0 мг/л регенерировавшие побеги имели морфологические нарушения. Наибольшая частота регенерации была отмечена в варианте 0.2 мг/л и составила 46.7 %.

После 7 недель культивирования регенераты отсекали от листовой пластинки и помещали на среду размножения (6-БАП 2 мг/л). Приживаемость

растений, снятых с меньших концентраций TDZ, была выше и составила 90.9%, 30.0% и 12.5% соответственно на средах с 0.1, 0.2, 0.5 мг/л TDZ.

Плохая приживаемость растений образовавшихся на средах с TDZ на среде с БАП может быть связана с явлением витрификации, которое наблюдается в присутствии TDZ. Гибель растений после их перенесения на 6-БАП может быть также связана с разной природой тидиазурона и 6-БАП, первый из которых относится к классу дифенилмочевины, а второй к производному аденина. Такое явление прослеживалось нами на этапе введения в культуру in vitro, при этом выживаемость образовавшихся растений при переносе на 6-БАП повышалась при их культивировании при низкой интенсивности света. Вероятно, такой прием может быть полезен при адаптации регенерантов, полученных из листовых дисков.

Положительное влияние на регенерационные процессы оказывала темновая инкубации эксплантов в течение 10 дней в полной темноте в начале культивирования.

При изучении регенерационной способности некоторых генотипов ремонтантной малины было выявлено, что все изученные формы были способны к образованию адвентивных побегов на листовых эксплантах, однако частота регенерации и количество образовавшихся побегов на эксплант существенно зависели от используемого генотипа (табл. 5).

Таблица 5

Частота регенерации некоторых генотипов ремонтантной малины

№ п.п. Генотип Частота регенерации, %

TDZ 0.05 мг/л TDZ0.1 мг/л TDZ 0.2 мг/л TDZ 0.5 мг/л

1. 19-99-1 13,3±4,1 16,7±4,1 0 0

2. 17-60-1 13,3±8,2 6,7±4,1 0 0

3. №24 16,7±4,1 3,3±4,1 0 0

4. - -4-43-2— 0- -3,3±4,1 - 0 0

5. 2-205-1А 0 4,5±2,8 8,3±2,8 -

6. 2-85-1 3,3±4,1 6,7±4,1 0 -

7. 21-232-2 - 68,5±8,8 46,7±8,3 -

8. 9-35-10 - 25,9±9,2 - -

9. 1-98-10 - 6,7±4,1 - -

10. 18-65-10 - 3,3±4,1 - -

В исследованном диапазоне концентраций TDZ (0,05-0,5 мг/л) наибольшая частота регенерации адвентивных побегов наблюдалась при добавлении в питательную среду 0,1 мг/л ТОХ. Поэтому для некоторых генотипов регенерационная способность была изучена только при этой концентрации цитокинина.

Среди ремонтантных форм малины выделились генотипы, обладающие как низкой органогенной способностью (18-65-4, 1-98-10, 17-60-1) с частотой регенерации 3,3-6,7 %, так и высокой (21-232-2) - 68,5%.

У изученных гибридов малины количество образовавшихся побегов на эксплант варьировало от 1 до 4 в зависимости от генотипа, причем не было отмечено четкой взаимосвязи между этим показателем и частотой регенерации побегов.

На процесс морфогенеза большое влияние оказывал тип используемого экспланта. При использовании в качестве источника эксплантов черешков, частота регенерации у них варьировала от 0 до 16,7 %. Среди изученных генотипов большей частотой регенерации обладали листовые экспланты, чем черешки.

Влияние регуляторов роста, осмотических ингибиторов и низкой температуры на хранение in vitro ремонтантной малины

В зависимости от использованного способа ингибирования роста растений, по-разному шел процесс образования и роста пазушных побегов (табл. 6). В контрольном варианте, после заполнения культивируемого сосуда, растения начинали постепенно погибать.

Таблица 6

Эффективность использования различных ингибиторов роста при длительном хранении in vitro ремонтантной формы 11-63-1

Вариант Количество побегов на эксплант, шт. (2 мес.) Высота побегов, мм (2 мес.) Приживаемость, %

2 мес. 7 мес. 12 мес.

Контроль (без ингибиторов) 3,63±0,40 11,74±0,47 90,0 70,0 0

Манит 3% (без сахарозы) 1,14±0,01 6,34±0,77 73,3 0 0

Манит 3% 5,60±1,14 17,25±0,63 82,8 76,7 10,0

ССС 1 г/л 1,61±0,25 7,85±1,28 92,0 0 0

ССС 0,25 г/л 3,27±1,28 16,01±0,51 70,0 0 0

АБК 20 мг/л 1,00±0,00 6,97±0,39 53,8 0 0

АБК 5 мг/л 1,25±0,18 8,69±1,05 42,8 0 0

Холод (+4 °С) 1,93±0,12 9,60±0,33 90,0 90,0 85,0

Наиболее отрицательное действие на рост пробирочных растений оказал гормональный ингибитор роста - абцизовая кислота. При введении в питательную среду АБК растения не образовывали пазушных побегов и со временем усыхали.

ССС в концентрации 1мг/л также сильно ингибировал рост и размножение растений. При концентрации 0,25 мг/л ССС не оказывал угнетающего влияния на развитие пробирочных растений малины. При таком содержании регулятора роста в среде, происходило образование дополнительных побегов и их рост.

В варианте с удалением из состава среды сахарозы, очень сильно угнеталось развитие пазушных побегов. Совместное сочетание 3% сахарозы и 3% маннита оказало положительное влияние на рост и развитие ремонтантных образцов малины.

В первые недели культивирования наибольшая гибель материала была отмечена в вариантах с использованием гормонального ингибитора роста - абцизовой кислоты. Большая часть растений погибла уже на второй месяц культивирования. Отрицательный эффект на выживаемость оказало и использование ССС.

Хорошие результаты, в сравнении с контролем, удалось получить при использовании в качестве осмотического ингибитора 3% маннита. Через 7 месяцев культивирования осталось 76,7% выживших растений.

Лучший результат при хранении in vitro был получен при культивировании пробирочных растений в условиях пониженной температуры. Показатель выживаемости через 12 месяцев в этом варианте составил 85%. Культивирование растений при пониженных температурах способствует вытягиванию черешков и их этиолированию, что связано с отсутствием освещения при хранении. Возможно, при небольшой интенсивности света результаты при хранении можно было бы улучшить.

Оиенка размноженных in vitro растений ремонтантной малины в полевых условиях Продуктивность изученных сортов ремонтантной малины зависела как от использованного генотипа, так и от способа размножения. Растения, полученные in vitro, превосходили растения размноженные порослью по следующим компонентам продуктивности: количеству образовавшихся побегов, числу латералов, общему количеству генеративных органов и зрелых ягод.

Независимо от происхождения, большей продуктивностью характеризовались растения сорта Бабье лето - 2, для которого потенциальная продуктивность при традиционном и микроклональном способе размножения составила 1568 и 2142 г соответственно. Для сорта Геракл эти показатели составили 1260 и 2066 г.

При оценке влияния различных способов размножения на побегооб-разовательную способность растений ремонтантной малины в полевых условиях было обнаружено, что полученные in vitro растения обладают существенно большей способностью образовывать корневую поросль в сравнении с растениями, размноженными традиционным способом (табл. 7).

У размноженных in vitro растений сорта Геракл за 2 года исследований было отмечено также существенное увеличение количества образовавшихся побегов замещения и тенденция к их увеличению для сорта Бабье лето - 2 (табл. 7).

Таблица 7

Побегообразовательная способность растений ремонтантной малины полученных in vitro и традиционным способом

Сорт Растения, размноженные традиционным способом Растения размноженные in vitro

Побеги замещения, шт. Корневая поросль, шт. Потенциальная продуктивность, г Побеги замещения, шт. Корневая поросль, шт. Потенциальная продуктивность, г

2001 г.

Бабье лето-2 4,0±0,4 1,0±0,2 - 4,5±0,4 3,2±1,3 -

Геракл 3,7±0,2 0,6±0,3 - 4,2±0,5 1,9±0,7 -

2002 г.

Бабье лето-2 4,1±0,5 0,7±0,3 1568 4,6±0,3 1,5±0,3 2142

Геракл 4,4±0,3 0,7±0,2 1260 6,4±0,8 2,9±0,3 2066

Применительно к сортам ремонтантной малины, характеризующихся низкой порослеобразовательной способностью, это свойство последействия условий in vitro имеет большое значение при закладке маточников этой культуры. Наблюдения селекционеров за ростом размноженных in vitro растений за 10 лет использования метода клонального микроразмножения показали, что со временем (4-5 лет) явление увеличение вегетативной и генеративной продуктивности у ремонтантной малины затухает.

При оценке размноженных in vitro растений в полевых условиях не было обнаружено, каких либо мутантных форм, отличающихся от исходных сортов и гибридов.

ВЫВОДЫ

1. Для осуществления осеннего введения в культуру in vitro (после селекционной оценки) в качестве источника эксплантов можно использовать почки, изолированные от побегов замещения.

2. Для увеличения выживаемости, регенерационной способности и уменьшения инфицированности эксплантов предпочтение должно отдаваться

верхним нераспустившимся почкам, изолированным без нескольких кроющих чешуй. Для лучшей приживаемости эксплантов после перенесения с TDZ на 6-БАП, необходимо культивировать их при слабой интенсивности света (около 300 лк).

3. На этапе собственно размножения проявляется генотипическое разнообразие ремонтантных форм малины в способности к образованию дополнительных побегов. Растения проявляли разную чувствительность по отношению к TDZ, после культивирования образовывались укороченные витрифицированные побеги.

4. На этапе укоренения представленные образцы малины отличались способностью к ризогенезу при использовании различных типов ауксинов. После проведения импульсной обработки микрочеренков в концентрированном растворе ИМК (1000 мг/л) генотипические особенности сглаживались.

5. Установлено, что оптимальными условиями адвентивного органогенеза из листовых эксплантов ремонтантной малины является использование питательной среды МС с добавлением 0,1 мг/л TDZ и предварительной инкубацией эксплантов в темноте в течение 10 дней.

6. Исследованные генотипы отличались по частоте регенерации и количеству образовавшихся побегов на эксплант; большим органогенным потенциалом характеризовались листовые экспланты, по сравнению с черешками.

7. Применение низких положительных температур (+4 °С) дает возможность длительного хранения пробирочных растений малины (более одного года). Перспективным способом хранения при пониженных температурах является культивирование растений на питательной среде МС с добавлением 3% маннита.

8. В полевых условиях полученные in vitro растения малины превосходили растения размноженные традиционным способом по продуктивности и количеству образовавшихся побегов. У высаженных генотипов не было отмечено появления мутантных форм, отличающихся от исходных сортов и гибридов.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ

1. Дня осеннего введения в культуру in vitro межвидовых ремонтантных форм малины, при отсутствии поросли, в качестве источника эксплантов можно использовать почки, изолированные осенью от побегов замещения. Предпочтение должно отдаваться крупным эксплантам изолированных с верхних нераспустившихся почек.

2. Для адвентивного органогенеза ремонтантных форм малины следует культивировать изолированные листовые экспланты на питательной среде МС с добавлением в качестве источника цитокинина TDZ в концентра-

ции 0,1 мг/л. Для увеличения частоты регенерации рекомендуется использовать в начале культивирования темновую инкубацию эксплантов в течение 10 дней в полной темноте.

3. При длительном беспересадочном культивировании побегов малины in vitro (около 1 года) предпочтение должно отдаваться методам депонирования с использованием пониженных температур (+4°С).

4. При закладке маточников ремонтантной малины рекомендуется использовать растения, полученные в культуре in vitro для увеличения коэффициента их вегетативного размножения и повышения качества посадочного материала.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Соболев В.В., Сковородников Д.Н., Шматова А.Г., Заякин В.В. Подбор оптимальных сред для размножения различных генотипов ремонтантной малины // Материалы Международной научно-практической конференции молодых ученых: «Молодые ученые - возрождению сельского хозяйства России в XXI веке». - Брянск, 2000. - С. 69-71.

2. Сковородников Д.Н., Бъядовский И.А., Заякин В.В., Нам И .Я. Изучение влияния TDZ и темноты на регенерацию растений из листовых эксплантов межвидового ремонтантного сорта Бабье лето-2. // Материалы Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Молодые учёные - возрождению сельского хозяйства в XXI веке». - Санкт-Петербург, 2001. - С. 68-72.

3. Сковородников Д.Н., Бъядовский И.А., Заякин В.В., Нам И.Я. Осеннее введение ремонтантных образцов малины в культуру in vitro // Материалы Международной научно-практической конференции «Использование достижений современной биологической науки при разработке технологий в агрономии, зоотехнии и ветеринарии». - Брянск, 2002. - С. 54-55.

4. Сковородников Д.Н., Соболева А.Г., Заякин В.В., Нам И.Я. Разработка системы регенерации адвентивных побегов применительно к ремонтантной малине // Материалы Международной научно-практической конференции «Использование достижений современной биологической науки при разработке технологий в агрономии, зоотехнии и ветеринарии». -Брянск, 2002.-С. 55-56.

5. Сковородников Д.Н., Заякин В.В., Нам И.Я. Клональное микроразмножение и длительное хранение in vitro ремонтантных форм малины // Материалы V съезда общества физиологов растений России. «Физиология растений - основа фитобиотехнологии». - Пенза, 2003. - С. 522-523.

2.0&15 "2• в f i

6. Сковородников Д.Н., Нам И.Я., Казаков И.В., Заякин В.В. Особенности начального этапа клонального микроразмножения ремонтантной малины in vitro // Сельскохозяйственная биология. 2004. № 1. (в печати).

7. Сковородников Д.Н. Оценка размноженных in vitro растений ремонтантной малины в полевых условиях // Межвузовская научно-практическая конференция молодых ученых. - Брянск. 2003. (в печати)

8. Сковородников Д.Н., Озеровский А. Длительное хранение пробирочных растений ремонтантной малины в культуре in vitro // Межвузовская научно-практическая конференция молодых ученых. -Брянск. 2003. (в печати)

Объем 1 п. л.

Формат 60 x 841/16

Тираж 100

Редакционно-издательской отдел Брянской ГСХА

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Сковородников, Дмитрий Николаевич

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ В СЕЛЕКЦИИ ПЛОДОВО-ЯГОДНЫХ РАСТЕНИЙ.

1.1. Клональное микроразмножение растений in vitro.

1.2. Регенерация плодово-ягодных растений в культуре in vitro.

1.3. Генотипическая и фенотипическая стабильность растений полученных in vitro.

1.4. Хранение тканей и органов растений в культуре in vitro.

ГЛАВА II. ЦЕЛЬ, ЗАДАЧИ, ОБЪЕКТЫ, МЕТОДИКА И УСЛОВИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Цель и задачи исследований.

2.2. Место проведения и объекты исследований.

2.3. Методика исследований.

2.4. Климатические и почвенно-агротехнические условия проведения исследований.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. ВВЕДЕНИЕ НОВЫХ ГЕНОТИПОВ РЕМОНТАНТНОЙ МАЛИНЫ В КУЛЬТУРУ IN VITRO.

3.1.1. Изучение возможности использования почек изолированных от побегов замещения при введении в культуру in vitro.

3.1.2. Влияние размера экспланта на результат введения межвидовых ремонтантных форм малины в культуру in vitro.

3.1.3. Влияние месторасположения почек на однолетних побегах замещения ремонтантной малины на жизнеспособность и развитие эксплантов.

3.1.4. Оптимизация состава питательной среды при осеннем введении в культуру in vitro.

3.1.5. Генотипические особенности ремонтантной малины при введении в культуру in vitro.

3.1.6. Влияние интенсивности на приживаемость эксплантов ремонтантной малины на этапе адаптации к среде с БАП.

3.2. РАЗМНОЖЕНИЕ НОВЫХ РЕМОНТАНТНЫХ ФОРМ МАЛИНЫ В КУЛЬТУРЕ IN VITRO.

3.3. УКОРЕНЕНИЕ И АДАПТАЦИЯ К НЕСТЕРИЛЬНЫМ УСЛОВИЯМ РЕМОНТАНТНЫХ ФОРМ МАЛИНЫ РАЗМНОЖЕННЫХ В КУЛЬТУРЕ IN VITRO.

3.3.1. Укоренение ремонтантных форм малины in vitro.

3.3.2. Адаптация пробирочных растений ремонтантной малины к нестерильным условиям.

3.4. РЕГЕНЕРАЦИОННАЯ ОЦЕНКА МЕЖВИДОВЫХ РЕМОНТАНТНЫХ ФОРМ МАЛИНЫ IN VITRO.

3.5. ВЛИЯНИЕ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТА, ОСМОТИЧЕСКИХ ИНГИБИТОРОВ И НИЗКОЙ ТЕМПЕРАТУРЫ НА ХРАНЕНИЕ IN VITRO РЕМОНТАНТНОЙ МАЛИНЫ.

3.6. ОЦЕНКА РАЗМНОЖЕННЫХ IN VITRO РАСТЕНИЙ РЕМОНТАНТНОЙ МАЛИНЫ В ПОЛЕВЫХ УСЛОВИЯХ.

3.7. ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЕТОДА КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ ДЛЯ УСКОРЕНИЯ СЕЛЕКЦИИ РЕМОНТАНТНЫХ ФОРМ МАЛИНЫ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Особенности клонального микроразмножения in vitro и ускорение селекции новых ремонтантных форм малины"

Обнадеживающей альтернативой традиционной технологии возделывания малины является принципиально новая низкозатратная и экологически безопасная технология с использованием ремонтантных сортов, формирующих основной урожай в конце лета — начале осени на однолетних побегах. Эти сорта способны эффективно использовать благоприятные факторы внешней щ среды и избегать экологических стрессов за счет однолетнего цикла формирования урожая и особой технологии. Суть этой технологии в том, что после уборки урожая и наступления устойчивых осенних заморозков, надземную часть растений скашивают косилкой (КИР-1,5 Б) или срезают секатором. С весны следующего года отрастают новые побеги, которые во второй половине лета - начале осени плодоносят, а затем после замерзания почвы их снова ^ скашивают. Возделывание ремонтантных сортов малины по типу однолетней культуры снимает проблему зимостойкости стеблей, а их удаление с плантации после скашивания позволяет избавиться от основных болезней и вредителей без применения пестицидов. Использование в производстве сортов ремонтантного типа с неполегающими под тяжестью урожая стеблями создает возможность максимальной механизации по уходу за насаждениями, вютю-ф чая машинную уборку урожая. При этом отпадает необходимость в устройстве дорогостоящей шпалеры, подвязке стеблей к проволоке и их поштучной вырезке после плодоношения (И.В. Казаков, 2000).

Выращивание сортов ремонтантного типа, наряду с обычными сортами дает возможность создать в условиях средней полосы России конвейер поступления свежих ягод малины в течение 2,5-3 месяцев, начиная с конца июня и ^ до наступления осенних заморозков. При этом реализация ягодной продукции ремонтантных сортов в «несезонное» для малины время по более высоким, чем летом ценам стимулирует расширение насаждений малины во всех категориях хозяйств (И.В. Казаков, 2000).

На Кокинском опорном пункте ВСТИСП (Брянская область) с начала 70-х годов прошлого века ведется интенсивная работа по созданию ремонтантных сортов малины, формирующих основной урожай в конце лета — начале осени на однолетних побегах.

Актуальной проблемой при создании таких сортов является оптимизация селекционного процесса. Ряд ремонтантных сортообразцов малины сложного межвидового происхождения отличается низкими коэффициентами размножения, а отдельные из них вовсе не образуют корневой поросли (И.В. Казаков, 2001). Эта биологическая особенность затрудняет размножение таких генотипов традиционными способами и, таким образом, значительно удлиняет период от выделения гибридов в элиту до передачи в сортоиспытание. Кроме того, ограничивается объем скрещиваний при использовании их в качестве родительских форм. Эти препятствия в значительной мере можно преодолеть путем использования метода клонального микроразмножения (В.В. Вовк, 2000). Данная работа является продолжением исследований по оптимизации клонального микроразмножения новых межвидовых ремонтантных форм малины для ускорения селекционного процесса.

Научная новизна. В результате проведенной работы показана возможность осеннего введения в культуру in vitro межвидовых ремонтантных сортов и форм малины с использованием в качестве источника экспланта фрагментов почек, изолированных от побегов замещения. Изучены факторы, влияющие на приживаемость и регенерационную способность эксплантов.

Оптимизированы условия адвентивного органогенеза из листовых эксплантов для новых генотипов ремонтантной малины и изучена их регенера-ционная способность.

Реализация результатов исследований. Растения малины, полученные в лаборатории биотехнологии in vitro, использованы для закладки маточников ремонтантных форм малины на участке Кокинского опорного пункта ВСТИСП. Всего передано для высадки в почву 4325 растений малины 41 генотипа.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на Международных научно-практических конференциях: «Молодые учёные — возрождению сельского хозяйства в XXI веке» (Брянск, 2000); «Молодые учёные — возрождению сельского хозяйства в XXI веке» (Санкт-Петербург, 2001). «Использование достижений современной биологической науки при разработке технологий в агрономии, зоотехнии и ветеринарии» (Брянск, 2002); V съезде общества физиологов растений России «Физиология растений — основа фитобио-технологии» (Пенза, 2003)

По теме диссертации опубликовано 5 работ.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 133 страницах машинописного текста и состоит из 3 глав, выводов и рекомендаций для практической селекции, списка использованной литературы. Работа содержит 36 таблиц и 13 рисунков. Список использованной литературы включает 220 наименований, в том числе 154 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Сковородников, Дмитрий Николаевич

110 выводы

2. Для увеличения выживаемости, регенерационной способности и уменьшения инфицированности эксплантов предпочтение должно отдаваться верхним нераспустившимся почкам, изолированным без нескольких кроющих чешуй. Для лучшей приживаемости эксплантов после перенесения с TDZ на 6-БАП, необходимо культивировать их при слабой интенсивности света (около 300 лк).

4. На этапе укоренения представленные образцы малины отличались в способности к ризогенезу при использовании различных типов ауксинов. После проведения импульсной обработки микрочеренков в концентрированном растворе ИМК (1000 мг/л) генотипические особенности сглаживались.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ

1. Для осеннего введения в культуру in vitro межвидовых ремонтантных форм малины, при отсутствии поросли, в качестве источника эксплантов можно использовать почки, изолированные осенью от побегов замещения. Предпочтение должно отдаваться крупным эксплантам изолированных с верхних нераспустившихся почек.

2. Для адвентивного органогенеза ремонтантных форм малины культивировать изолированные листовые экспланты на питательной среде МС с добавлением в качестве источника цитокинина TDZ в концентрации 0,1 мг/л. Для увеличения частоты регенерации использовать в начале культивирования темновую инкубацию эксплантов в течение 10 дней в полной темноте.

4. При закладке маточников ремонтной малины рекомендуется использовать растения, размноженные in vitro, для увеличения их способности к вегетативному размножению.

112

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Сковородников, Дмитрий Николаевич, Брянск

1. Алексеенко Л.В. Особенности размножения нейтральнодневных и ремонтантных сортов земляники in vitro // Автореф. дисс. канд. с.-х. наук. М., 1998. 20 с.

2. Альшевцева Л.И. К вопросу микроразмножения черной смородины // Достижения науки в практику / Тез. докл. конф. (27-29 апреля). М., 1990. С. 122-123.

3. Бленда В.Ф., Радилова Л.Д. Клональное микроразмножение подвоев косточковых культур//Садоводство и виноградарство. 1991. N3. С. 21-24.

4. Бургутин А.Б., Бутенко Р.Г., Катаева Н.В., Голодрига П.Я. Быстрое клональное размножение виноградного растения // Сельскохозяйственная биология. 1983. №5. С. 48-50.

5. Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнология на их основе: Учеб. Пособие. М: ФБК-ПРЕСС. 1999. 160 с.

6. Бутенко Р.Г. Использование культуры тканей растений в сельскохозяйственной науке и практике // Сельскохозяйственная биология. 1979. Т. 14. №3. С. 306-315.

7. Бутенко Р.Г. Клеточные и молекулярные аспекты морфогенеза растений in vitro //1 Чайляхян. чтение. Пущино: Пущинский НЦ, 1994. С. 7-26.

8. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений.- М., 1964.

9. Бутенко Р.Г. Состояние и перспективы изучения морфогенеза растений // В сб. Всесоюз. об-во физиологов раст. 1990. Вып. 8. С. 5-8.

10. Бутенко Р.Г. Физиология клеточных культур. Состояние и перспективы. // Физиология растений. 1978. № 25. Т.5. С. 1009-1024.

11. Бутенко Р.Г. Экспериментальный морфогенез и дифференциация в культуре клеток растений. М., 1975. С. 48-65.

12. Вовк В.В. Оптимизация селекционного процесса и ускоренное размножение межвидовых ремонтантных форм малины методом in vitro // Дисс. . канд. с.-х. наук. Брянск., 2000. 20 с.

13. Волохов М.М. Совершенствование родительских форм малины ремонтантного типа на основе межвидовой гибридизации // Дисс. . канд. с.-х. наук. Брянск., 2003. 20 с.

14. Высоцкая О.Н. Длительное хранение in vitro коллекции растений земляники // Физиология растений. 1994. т. 41. № 6 с. 935-931.

15. Высоцкий В.А. Особенности клонального микроразмножения некоторых форм ремонтантной малины // Плодоводство и ягодоводство России / Сб. научных трудов ВСТИСП. М., 1996. Т.З. С. 90-95.

16. Высоцкий В.А. Клональное микроразмножение плодовых растений и декоративных кустарников // Микроразмножение и оздоровление растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве / Сб. научных трудов НИИ им. И.В. Мичурина. Мичуринск. 1989. с. 3-8.

17. Высоцкий В.А. Культура изолированных тканей и органов плодовых растений: оздоровление и микроклональное размножение // Сельскохозяйственная биология. 1983. №7. С. 42-47.

18. Высоцкий В.А. О генетической стабильности при клональном микроразмножении плодовых и ягодных культур // Сельскохозяйственная биология. 1995. № 5. С. 57-63.

19. Высоцкий В.А. Опыт клонального микроразмножения ирги // Плодоводство и ягодоводство России / Сб. трудов ВСТИСП. М. 1995. Т.2. С. 123127.

20. Высоцкий В.А., Олешко Е.В. Совершенствование питательной среды для микроклонального размножения вишни // Агротехника и сортоизучение плодовых культур / Сб. научных трудов НИЗИСНП.- М., 1985. С. 72-76.

21. Высоцкий В.А., Упадышев М.Т., Соломонова Ф.Н. Особенности регенерации растений изолированными пыльниками и листовыми дискамиягодных культур in vitro // Сельскохозяйственная биология. 1998. №3. С. 4450.

22. Горьковцева Е.А., Юлдашев О.Х. Микроклональное размножение ценных сортов винограда // Садоводство и виноградарство. 1991. № 11. С. 1720.

23. Деменко В.И., Трушечкин В.Г. Размножение вишни методом in vitro // Сельскохозяйственная биология. 1983. № 7. С. 51-53.

24. Джонс О.П. Размножение хозяйственно важных древесных растений in vitro // В кн.: Биотехнология сельскохозяйственных растений. М., 1987. С. 134-152.

25. Дорошенко Н.П. Биотехнологические методы в селекции винограда // Использование биотехнологических методов для решения генетико-селекционных проблем / Сб. докл. и сообщений XVIII Мичуринских чтений 27-29 октября 1997 г. Мичуринск. 1998. С. 42-46.

26. Дорошенко Н.П., Кострикин И.А. Микроклональное размножение столового винограда сорта Агат Донской // Садоводство и виноградарство. 1989. №3. С. 40.

27. Заузолкова Н.П. Микроразмножение алычи // Проблемы интенсификации современного садоводства / Тез. докл. конф. Мичуринск, 1990. С. 165166.

28. Казаков И.В. Малина и ежевика. Москва, «Фолио», 2001. 256 С.

29. Карпова О.В. Адаптация пробирочных растений ягодных культур и последействие криосохранения // Автореф. дисс. канд. с.-х. наук. М., 2001. 22 с.

30. Катаева Н.В., Аветисова В.А. Клональное размножение растений вкультуре ткани // В сб.: Культура клеток растений. М. 1981. С. 137-149.

31. Корнацкий С.А. Особенности клонального микроразмножения сливы в системе производства оздоровленного посадочного материала // Автореф. дисс. канд. с.-х. наук. М., 1991. 22 с.

32. Крылова Е.М., Давыдова Ю.В., Аветисов В.А. Разработка методов регенерации малины в культуре in vitro // Молодые ученые — возрождению сельского хозяйства России в XXI веке. / Всероссийская научно-практическая конференция. Брянск. 1999. С. 13.

33. Леонтьева-Орлова Л.Ф. Совершенствование метода клонального микроразмножения смородины и оценка размножения в нестерильных условиях // Автореф. дисс. канд. с.-х. наук. М., 1991. 22 с.

34. Михальчик Л.С. Ускоренное выращивание посадочного материала яблони для интенсивных насаждений Нечерноземной зоны РСФСР // Автореф. дисс. канд. с.-х. наук. М., 1990. 23 с.

35. Мохаммед А.И. Микроразмножение, длительное депонирование и криосохранение in vitro малины красной // Автореф. дисс. канд. биол. наук. М., 1998. 17 с.

36. Огольцова Т.П., Джигадло М.И. Апробация сортов земляники при микроклональном размножении // Садоводство и виноградарство. 1988. № И. С. 26-29.

37. Олешко Е.В. Особенности клонального микроразмножения подвоев и сортов вишни. М., 1985. С. 25-28.

38. Острейко С.А. Роль естественного отбора в онтогенезе растений (основы цитоютональной теории онтогенеза) // Физиология растений. 1985. Т. 32, N. 3. С. 585-604.

39. Острейко С.А., Дроздовский И.М. О полифункциональности регуляторов роста и развития растений // Сельскохозяйственная биология. 1981. Т. 7. №. 5. С. 702-711.

40. Попов А.С., Волкова Л.А., Черняк Н.Д. Криобанк клеток и тканей растений: программа замораживания и некоторые методы подготовки и рекультивирования // Культура клеток растений и биотехнология. М.: Наука. 1986. С. 219-222.

41. Соловых Н.В., Расторгуев С.Л. Применение тканевых культур в селекции плодовых растений // Молодые ученые садоводству России / Тез. докл. совещ. 20-21 июня 1995 г. М., 1995. С. 9-12.

42. Тиссера Б. Эмбриогенез, органогенез и регенерация растений // В кн.: Биотехнология растений: культура клеток. М., 1989. С. 97-127.

43. Трофимец Л.Н., Волкова Т.В., Миренкова Н.Н. Метод культуры тканей в картофелеводстве // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений / Научные труды ВАСХНИЛ. М., 1979. С. 123-128.

44. Трушечкин В.Г., Высоцкий В.А., Леонтьев-Орлов О.А. Размножение клоновых подвоев яблони методом культуры тканей // Сельскохозяйственнаябиология. 1992. №4. С. 455-457.

45. Туровская Н.И. Микроклональное размножение груши // Садоводство и виноградарство. 1987. №6. С. 22-24.

46. Туровская Н.И., Стрыгина О.В. Микроклональное размножение малины // Садоводство и виноградарство. 1990. № 8. С. 26-29.

47. Туровская Н.И., Стрыгина О.В. Формирование адвентивных почек на эксплантах малины // Сортоизучение и селекция плодовых и ягодных культур. / В сб. научных трудов НИИ им. И.В. Мичурина. Мичуринск. 1992. с. 8284.

48. Тюленев В.М., Нафталиев П.М., Осипова П.В., Расторгуев C.JI. Способ укоренения побегов яблони in vitro // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. И.В. Мичурина. 1990. Вып. 48. С. 34-36.

49. Тюленев В.М., Расторгуев С.Л., Туровский И.И. Получение растений регенерантов из изолированных тканей земляники // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. И.В. Мичурина. 1991. Вып. 50. С. 21-27.

50. Уизерс Л.А. Криосохранение и хранение генофонда // В кн.: Биотехнология растений: культура клеток. М., 1989. С. 204-233.

51. Упадышев М.Т. Клональное микроразмножение и особенности регенерации растений ежевики и малины черной in vitro // Дисс. . канд. с.-х. наук. М., 1992.211 с.

52. Упадышев М.Т. Клональное микроразмножение некоторых нетрадиционных культур рода Rubus // Ягодоводство в Нечерноземье. М., 1993. С. 10-18.

53. Упадышев М.Т. Клональное микроразмножение нетрадиционных плодовых и ягодных культур // Молодые ученые садоводству России / Тез. докл. совещ. 20-21 июня 1995 г. М., 1995. С. 165-167.

54. Фролова Л.Д. Оптимизация технологии микроклонального размножения вишни и оценка влияния ионов тяжелых металлов в культуре in vitro // Дисс. канд. с.-х. наук. Орел. 2003. 20 с.

55. Хамукова Ф.Н. Регенерация растений земляники и малины из эксплантов различного происхождения // Автореф. дисс. канд. с.-х. наук. М., 1994. 22 с.

56. Хапова С.А. Условия культивирования in vitro и последующая продуктивность растений земляники // Автореф. дисс. канд. с.-х. наук. М., 1997. 23 с.

57. Хасси Г. Размножение сельскохозяйственных культур in vitro // В кн.: Биотехнология сельскохозяйственных растений. М., 1987. С. 105-133.

58. Хеншоу Г.Г., Дж.Ф. О'Хара, Методы in vitro для сохранения и использования мирового генофонда растений // В кн.: Биотехнология сельскохозяйственных растений. М., 1987. С. 205-224.

59. Шевелуха B.C., Калашникова Е.А., Дягтерев С.В. и др. Сельскохозяйственная биотехнология М.: Высшая школа, 1998. С. 416.

60. Щелкунова С.Е., Попов Ю.Г. Получение свободных от вируса растений малины путем культуры изолированных апексов // Физиология растений. 1970. Т. 17, № 3. С.618-622.

61. Юсуфов А.Г. Регенерация высших растений М.,1981. С. 176.

62. Abdu-Qaoud Н., Skirvin R.M. & Chevreau In vitro separation of chimeral pears into their component genotypes // Euphytica. 1990. V.48. P. 189-196.

63. Anderson H. M. Roting of tissue cultured rhododendrons // The Inter. Plant. Prop. Soc. 1978. V.28. P. 135-139.

64. Anderson W.C. Tissue culture propagation of red and black raspberry, Rubus idaeus and Rubus occidentalis.il Acta Horticulture. 1980. V.l 12. P. 13-20.

65. Antonelli M., Druart Ph. The use of a 2.4-D pretreatment to induce leaf regeneration on Prunus canescens. Absract 20. International symposium in vitro culture and horticultural breeding, Cesena, Italy. Int. Soc. Hortic. Sci. Publishers.

66. Baker B.S. & Bhatia S.K. Factors affecting adventitious shoot regeneration from leaf explants of quince (Cydonia oblonga) II Plant Cell. Tiss. Org. Cult. 1993. V.35. P. 273-277.

67. Baneijee N. And E. de Langhe A tissue culture technique for rapid clonal propagation and storage under minimal growth conditions of Musa (Banana and plantain) // Plant Cell Rpt. 1985. V.4. P. 351-354.

68. Barg R., Umiel N., Effects of sugar concentration on growth, greening and shoot formation from callus culture from 4 genetic lines of tobacco // Pflanzen-physiol. 1977.- 81. S. 161-166.

69. Beauchesne G. Appearance of plants not true to type during in vitro plant propagation/ In: E.D. Earle (Ed.). Variability in plants regenerated from tissue cul-tres, Praeger Publishers, New York. 1985. pp. 268-273.

70. Billings S.G., Chin C.K. & Jelenkovic G. Regeneration of blueberry plantlets from leaf segments // Hort. Science 1988. V.23. P. 763-766.

71. Boulay M. Multiplication et clonage rapide du Sequoia sempervirens par la culture In vitro. In Annales de Recherches Sylvicoles, AFOCEL. Etudes et Re-cherches. 1979. V 6. N. 12. Micropropagation d'Arbres Forestiers. P. 49-56.

72. Boxus P. Comportement du draisier issu de micropropagation in vitro. // Agricontact. 1986. V. 176 P. 1-6.

73. Broertjes C., van Harten A.M. Application of Mutation Breeding Methods in the Improvement of Vegetatively Propagated Crops. Amsterdam: Elsevier Scientific Publishing Co, 1978. P. 171-180.

74. Broome O.C., Zimmerman R.H. In vitro propagation of blackberry // Hort. Sci. 1978. V.13. № 2. P. 151-153.

75. Carbanne F., Martin-Tanquy J. & Martin C. Phenolamines associees a l'induction florale et a l'etat reproducteur // Physiotogie Vegetale. 1977. V. 15. P. 429-443.

76. Cassells A.C. & Morrish F.M. Growth measurement of Begonia rex Putz 'Lucille Closon' as a consequence cell ontogeny, callus ageing, recycled axenic leaves and callus // Scientia Hort. 1985. V.27. P. 113-121.

77. Chaturvedi H.C., Mitra G.C. Clonal propagation of citrus from somatic callus cultures // Hort. Sci. 1974. V.9. P. 2.

78. Chevreau E., Skirvin R.M., Abu-Qaoud H.A., Korban S.S., and Sullivan J.G. Adventitious shoot regeneration from leaf tissue of three pear (Pyrus sp.) cul-tivars in vitro // Plant Cell Reports. 1989. V.7. P. 688-691.

79. Cousineau J.C . & Donnelly D.J. Adventitious shoot regeneration from leaf explants of tissue cultured and greenhouse-grown raspberry Plant Cell. Tiss. Org. Cult. 1991. V.27. P.249-255.

80. D'Amato F. Chromosome number variation in cultured cells and regenerated plants. In: T.A. Thorpe (Ed.) Frontiers of plant tissue culture, International Association of Plant Tissue Culture, U. of Calgary, Canada. 1978. pp. 278-295.

81. D'Amato F. Cytogenetics of differentiation in tissue and cell cultures // In Applied and Fundamental Aspects of Plant Cell, Tissue and Organ Culture, ed. J. Renert & Y.P.S. Bajaj. 1977. Berlin, Heidelberg and New York: Springer-Verlag. P. 343-57.

82. D'Amato F. Nuclear cytology of tissue culture. In: Proceedings International Symposium on Plant Tissue and Cell Culture Applications to Crop Improvement, Czech. Sci, Prague. 1984. pp. 295-303.

83. Damiano C., Faedi W., Cobianchi D. Prove di stolonizzazione in vivaoio e osservazioni argonomiche su piante di fragola otteenute da colture in vitro // Frutticolture. 1980 V.42. № 1. P. 51-60.

84. Dekkers A.J., Rao A.N. and Goh C.J. In vitro storage of multiple shoot cultures of gingers at ambient temperatures of 24-29C // Scientia Hort. 1991. V.47 P. 157-167.

85. Dolcet-Sanjuan R., Мок D.W.C. & Мок M.C. Plantlet regeneration from cultured of Cydonia oblonga L. (quince) // Plant Cell Rep. 1991. V. 10. P. 240-242.

86. Dolezel J. & Novak E.J. Effect of plant tissue culture media on the frequency of somatic mutation in Tradescantia stamen hairs // Z. Pflanzenphysiol. 1984. V. 144. S. 51-58.

87. Dolezel J., Lucretti S. & Novak F.J. The influence of 2.4-dichlorphenoxyacetic acid on cell cycle kinetics and sisterchromatid exchange frequency in garlic (Allium sativun) meristem cell // Biologia Plantarum (Prague). 1987. V. 29. P. 253-257.

88. Donnelly D.J., Vidaver W.E. (b) Pigment content and gas exchange of red raspberry in vitro and ex vitro // J. Amer. Soc. Hortic. Sci. 1984. V. 109. P. 177181.

89. Donnelly D.J., Vidaver W.E. (a) Leaf anatomy of red raspberry transferred from culture to soil // J. Amer. Soc. Hortic. Sci. 1984. V. 109. P. 172-176.

90. Dorion N., Regnard J.L., Serpette I., Bigot C. Effects of temperature and hypoxic atmosphere on preservation and further development of in vitro shoot of peach ('Armking') and peach x almond hybrid ('GF 677') // Scientia Hort. 1994. V.57 P. 201-213.

91. Drew R.A. Tissue culture in horticultural crops // Seed nurcerytrader.-1980. V. 78, №4. P. 22-25.

92. Druart P. In vitro germplasm preservation technique for fruit trees // In: Schafer-Menuhr A. (ed.). In vitro techniques. Propagation and long term storage. Martinus NijhofF, Dordrecht, Netherlands. 1985. P. 167-171.

93. Elobeidy A. & Korban S.S. The effect if thidiazuron on shoot regeneration from apple leaf discs // Hort. Science. 1988. V.23. P. 755.

94. Fasolo F., Zimmerman R.H. & Fordham I. Adventitious shoot formation on excised leaves of in vitro grown shoot of apple cultivars // Plant Cell. Tiss. Org. Cult. 1989. V.16. P. 75-87.

95. Fasolo F., Zimmerman R.H. & Fordham I. Adventitious shoot formation on excised leaves of in vitro cultured apple cultivars // Hort. Science. 1988. V.23. P. 676.

96. Faure O., Diemer F., Moja S. & Jullien F. Mannitol and thidiazuron in vitro shoot regeneration from spearmint and peppermint leaf disk // Plant Cell. Tiss. Org. Cult. 1998. V.55 P. 209-212.

97. Fiola J.A., Hassan M.A., Swartz H.J., Bors R.H. & McNicols R. Effect of thidiazuron, light fluence rates and kanamycin on in vitro shoot organogenesisfrom excised Rubus cotyledons and leaves // Plant Cell. Tiss. Org. Cult. 1990. V.20. P. 223-228.

98. Fiola J.A., Swartz H.J. Somatic embryogenesis, organogenesis and proliferation in vitro from Rubus embryos // Acta. Hortic. 1986. V.183. P. 91-96.

99. Fonnesbech A. & Fonnesbech M. In vitro propagation of Monstera deli-ciosa // Hort. Science. 1980. V.15. P. 740-741.

100. Franclet A. Rejeunissement des arbres adultes en vue de leur propagation vegetative. In Annales de Recherches Syluicoles, AFOCEL. Etudes et Recherches., Micropropagation d'Arbres Forestiers. 1979. V.6. №. 12. P. 3-18.

101. Fraser D.J., Harvey C.F. Somatic embryogenesis from anther-derived callus in two Actinidia species // Sci. Hortic. 1986. V.26 P. 335-346.

102. Fridborg G., Pedersen M., Landstrom L. & Eriksson T. The effect of activated charcoal on tissue cultures: adsorption of metabolites inhibiting morphogenesis // Physiologia Plantarum. 1978. V. 43. P. 104-106.

103. Gamborg L., Eveleighd E. Culture methods and detection of glucanases in cultures of wheat and barley // Can. J. Biochem. 1968. V.46. № 5. P. 417-421.

104. Ghosh A. & Gadgil V.N. Shift in ploidy level of callus tissue: A function of growth substances // Indian J. Exp. Biol. 1979. V. 17. P. 562-564.

105. Gingas V.M. & Stokes B.D. Rubus plant regenerated via asexual embryogenesis // Hort Science. 1993. V.28. P. 58.

106. Gould A.R. Control of the cell cycle in cultured plant cells // C.R.C. Critical Rev. Plant Sci. 1984. V. 1. P. 315-344.

107. Graham J., Iasi L. & Millam S. Genotype-specific regeneration from a number of Rubus cultivars // Plant Cell Org. Cult. 1997. V.48. P. 167-173.

108. Gray D.J. & Benton C.M. In vitro micropropagation and plant establishment of muscadine grape cultivars (Vitis rotundifolia) II Plant Cell Org. Cult. 1991. V.27. P. 7-14.

109. Gray D.J., Mortensen J.A. Initiation and maintenance of long term somatic embryogenesis from anthers and ovaries of Vitis longii 'Microsperma' // Plant Cell. Tiss. Org. Cult. 1987. V.9 P. 73-80.

110. Grout B.W.W. & Crisp P. The origin and nature of shoots propagated from cauliflower roots // J. Hort. Sci. 1980. V.55 P. 65-70.

111. Gunning J. And Lagerstedt H.B. Long-term techniques for in vitro plant germplasm //Proc. Intl. Plant Prop. Soc. 1985. p. 199-205

112. Haccius B. Question of unicellular origin of nonzygotic embryos in callus cultures//Phytomorphology. 1978. V.28. P. 74-81.

113. Hae-Boong Jeong, Ssang-Hee Ha and Kwang-Yoon Kang. In vitro preservation method of culturing shoot tip at low temperature in strawberry // RDA. J. Agri. Sci. 1996. V.38. № 1. P.284-289.

114. Hammerschlag F.A., Bauchan G., Scorza R. Regeneration of peach plants from callus derived from immature embryos // Theor. Appl. Genet. 1985. V.70 P. 248-251.

115. Hartmann H.T. & Kester D.E. Plant Propagation. Principles and Practices. Prentice Hall. 1975.

116. Hassan M.A., Swartz H.J. Inamine G. & Mullineaux P. Agrobacterium tumefacienns-mediated transformation of several Rubus genotype on shoot organogenesis and recovery of transformed plants // Plant Cell. Tiss. Org. Cult. 1993. V.33 P. 9-17.

117. Hess Ch.E. Phenolic compounds as stimulators of root initiation // Plant Physiology. 1965. Supplement XIV. V.40.-P. 4.

118. Howard B.H., Jones O.P., Uasek J. Growth characteristics of apparently rejuvenated plum shoots // J. Hortic. Sci. 1989. V.69. № 2. P. 157-162.

119. Huetteman C.A. & Preece J.E. Thidiazuron: a potent cytokinin for woody plant tissue culture. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 1993, 33: 105119.

120. Hussey G. Plantlet regeneration from callus and parent tissue in Omithogalum thyrsoides // Journal of Experimental Botany. 1976. V. 27. P. 375382.

121. Hussey G. Totipotency in tissue explants and callus of some members of the Liliaceae, Iridaceae and Amaryllidaceae // J. Exp. Bot. 1975. V.26. № 91 P. 253-260.

122. James D. J. The role of auxins phloroglucinol in adventitious root formation in Rubus and Fragaria grown in vitro // J. Hort. Sci. 1979. V.54, №4. P. 273277.

123. James D.J., Knight V.H. and Thurbon I.J. Micropropagation of red raspberry and the influence of phloroglucinol // Scientia Horticulture. 1980. V.12. P. 3313-319.

124. James D.J., Passey A.J. & Rugini E. Factors affecting high frequency plant regeneration from apple leaf tissues cultured in vitro // J. Plant Physiol. 1988. V.132.P. 148-154.

125. James D.J., Passey A.J. and Malhotra S.B. Organogenesis in callus derived from stem and leaf tissues of apple and cherry rootstocks // Plant Cell. Tiss. Org. Cult. 1984. V.3. P. 333-341.

126. Jarret R.L. and Gawel N. Chemical and environmental growth regulation of sweet potato (Ipomoea batatas (L) Lam.) in vitro // Plant Cell Tiss. Org. Cult. 1991. V. 25 P. 153-159.

127. Jones O.P., Pontikis C.A., Hopgood M.E. Shoot and root development in vitro // Rep. East Mailing Res. Stn. 1977. P. 176-178.

128. Jones O.P., Pontikis C.A. & Hopgood M.E. Propagation in vitro of five apple scion cultivars //Journal of Horticultural Science. 1979. V.54, №.2. P. 155158.

129. Jones O.P., Waller В .J., Beech M.D. The production of strawberry plants from callus cultures // Plant Cell Tiss. Org. Cult. 1988. №.12. P. 235-241.

130. Jones O.P., Waller B.J., Beech M.D. The production of strawberry plants from callus cultures//Plant Cell Tiss. Org. Cult. 1988. №. 12. P. 235-241.

131. Karp A. Can genetic instability be controlled in plant tissue cultures? // Intl. Assoc. Plant Tiss. Cult. Newsletter. 1989. V.58. P. 2-11.

132. Karp A. Somaclonal variation as a tool for crop improvement // Euphytica. 1995. V.85. P. 295-302.

133. Karp A. The role of growth regulators in somaclones variation // British Society for Plant Growth Regulation Annual Bulletin. No. 2. May 1992. P. 1-9.

134. Kotkas K. Preservation techniques of potato genetic resources in vitro // Beltrage zur Zuchtungsforschung. 1998. P. 94-103.

135. Kouider M., Korban S.S., Skirvin R.M., Joung H. The relationship of apple embiyos and their cotyledons to maturity, dormancy, and the potential to form shoots in vitro //J. Am. Soc. Hortic. Sci. 1985. V.l 10. P. 93-96.

136. Kouider M., Skirvin R.M., Korban S.S., Widholm J.M. and Hauptmann R. Adventitious shoot formation from Red Delicious apple cotyledons in vitro II J. Hort. Sci. 1984. V.59. P. 295-302.

137. Larkin P.J. & Scowcrofit W.R. Somaclonal variation a novel source of variability from cell culture for plant improvement // Theor. Appl. Genet. 1981. V.60. P. 197-214.

138. Larkin P.M. and Scowcroft W.R. Somaclonal variation a novel source of variability from cell culture for plant improvement // Theor. Appl. Genet. 1981. V. 60 P. 197-214.

139. Le C.L. Influence of temperature on in vitro root initiation and development of apple rootstock M26 // Hort. Sci.- 1985. V.20, №3. P. 451-452.

140. Leblay C., Chevreau E. & Raboin L.M. Adventitious shoot regeneration from in vitro leaves of several pear cultivars (Pyrus communis L.) // Plant Cell. Tiss. Org. Cult. 1991. V.25. P. 99-105.

141. Lee E.C.M., Fossard R.A. Regeneration of strawberry plants from tissue cultures // Comb. Proc. (Intern. Plant Propagators Soc. Miltown, N.-Y.) 1975. V. 25. P. 277-285.

142. Lee Y.B., Kim Y.R. Shoot formation in tissue culture of petiole and leaf Blade segments of strawberry. Stud. Inst. Hortlc. Kyoto Univ., 1979, № 9. P. 7882.

143. Liu J.R., Sink K.C. and Dennis F.G. Plant regeneration from apple seedling explants and callus culture // Plant Cell. Tiss. Org. Cult. 1983. V.2 P. 293-304.

144. Liu Z.R., Sanford J.C. Plant regeneration by organogenesis from strawberry leaf and runner tissue // Hort. Sci. 1988. V.23. P. 1057-1059.

145. Lowe K.C., Davey M.R. and Power J.B. Plant tissue culture: past, present and future // Plant Tissue Culture and Biotechnology. 1996. V.2. № 4. P. 173186.

146. Maheswaran G. & Williams E.G. Uniformity of plants regenerated by direct somatic embryogenesis from zygotic embryos of Trifolium repens II Annals of Botany. 1987. V.59. P. 93-97.

147. Mante S., Scorza R. & Cordts J.M. Plant regeneration from cotyledons of Prunus persica, Primus domestica and Prunus cerasus II Plant Cell. Tiss. Org. Cult. 1989. V.19. P. 1-11.

148. Maretzki A., Thom M., Nickell L.G. Influence of osmotic potential on the growth and chemical composition of sugar cane cell cultures // Hawaii Plant Rec. 1972. V.58. P. 183-199.

149. Marino G., Rosati P. and Sagrati F. Storage of in vitro cultures of Prunus rootstock // Plant Cell Tissue Organ Cult. 1985. V.5. P. 73-78.

150. Matsuta N. & Hirabayashi T. Embryogenic cell lines from somatic embryos of grape (Vitis vivifera L.) II Plant Cell Rep. 1989. V.7 P. 684-687.

151. Matthews V.H. & Rangan T.S. Multiple plantlets in lateral bud and leaf explant in vitro cultures of pineapple // Scientia Horticuliurae. 1979. V 11. P. 31928.

152. McNicol RJ. & Graham J. In vitro regeneration from leaf and stem segments // Plant Cell Tiss. Org. Cult. 1990. V.21. P. 45-50.

153. Meins F. Heritable variation in plant cell culture // Ann. Rev. Plant Physiol. 1983. V.34. P. 327-346.

154. Millan-Mendoza В. and Graham J. Organogenesis and micropropagation in red raspberry using forchlorfenuron (CPPU) // Journal of Horticulture Science & Biotechnology. 1999. V.74. № 4. P. 219-223.

155. Millan-Mendoza B. Regeneration of Rubus in vitro using forchlorfenuron (CPPU) I I Rev. Fac. Agron. (LUZ). 1998. V.15. P. 242-248.

156. Monette P.L. Cold storage of kiwifruit shoot in vitro // Hort. Science. 1986. V.21.P. 1203-1205.

157. Moriguchi T. And Yamaki S. Prolonged storage of grape nodal culture using a low concentration of ammonium nitrate // Hort. Science. 1989. V.24. P. 372-373.

158. Murashige T. & Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioas-says with tobacco tissue cultures // Physiologia Plantarum. 1962. V.15. №.13. P. 473-497.

159. Murashige T. Manipulation of organ culture in plant tissue cultures. Botanical Bulletin Academia Sinica. 1977. V.18. P. 1-24.

160. Murashige T. Manipulation of organ culture in plant tissue cultures // Botanical Bulletin Academia Sinica. 1977. V.18. P. 1-24.

161. Murashige T. Plant cell and organ cultures as horticultural practices // Acta Hort. 1977. V.78. P. 17-30.

162. Murashige T. The impact of plant tissue culture on agriculture // In Frontiers of Plant Tissue Culture 1978, ed T.A. Thorpe. Calgari: The Bookstore, University of Calgary. P. 15-26.

163. Navatel I.C., Varachaud G. Confronto agronomico di fragola provenienti da piante madzi micropropagate a confronto con materiale. // Inform, agr. (Verona). -1986 V.42. № 6. P.79-82.

164. Nehra N.S., Chibbar R.N., Kartha K.K., Datla R.S.S., Crosby W.L., and Stushnoff C. Agrobacterium-mediated transformation of strawberry plants calli and recovery of transgenic plants // Plant Cell Rep. 19906. V.9. P. 10-13.

165. Nehra N.S., Stushnoff С. And Kartha K.K. Regeneration of plants from immature leaf-derived callus of strawberry (Fragaria X Ananassa) II Plant Science. 1990a. V.66. P. 119-126.

166. Nehra S.N., Karha K.K., Stushnoff C. & Giles K.L. Effect of in vitro propagation methods on field performance of two strawberry cultivars // Euphytica. 1994. V.76. P. 107-115.

167. Niemirowicz-Szezytt K., Ciupka В., Malepszy S. Polyploidsfrom Fragaria vesca L. meristems, induced by colchicine in the in vitro culture // Bull. Pol. Acad. Sci. Biol. Sci. 1984. V.32. P. 57-63.

168. Niemirrowicz-Szezytt K., Malepszy S. Micropropagaion from the meristems and young leaves of Fragaria. // Bull. Pol. Acad. Sci. Biol. Sci.- 1980. V. 28. P. 335-340.

169. Nyman M. and Wallin A. Plant regeneration strawberry {Fragaria X Ananassa) mesophyll protoplasts I I J. Plant Physiol. 1988. V. 133. P. 375-377.

170. Owens у de Novoa C. & Conner A.J. Comparison of in vitro shoot regeneration protocols from Rubus leaf explants // N. Z. J. Crop Hort. Sci. 1992. V. 20. P. 471-476.

171. Patat-Ochatt E.M., Ochatt S.J., Power J.B. Plant regeneration from protoplasts of apple rootstocks and scion varieties (Malus X domestica Borkh.) I I J. Plant Physiol. 1988. V.133. P. 460-465.

172. Petrevica L., Heimanis P. Effect of in vitro propagation on field behavior of two strawberry cultivars // Siuolaikines sodininkystes pasiekimai ir pletros kryp-tys, Babtai. 1997. S. 212-215.

173. Pierik R.L.M. In vitro culture of higher plants. Dordrecht etc.; Nijhoff.,1987.V.5. 344 p.

174. Pohlheim F., Frahm C. Zur stabilitat chimarischer Fragaria x ananassa in vitro о ex vitro // Vortr. Fur Planzenzuchung, Bonn. 1992. H.22. S. 385-386.

175. Preece J.E. & Imel M.R. Plant regeneration from leaf explants of Phodo-denron 'P.J.M. Hybrids' I I Scientia Hort. 1991. V.48. P. 159-170.

176. Reed B.M. Application of gas-permeable bags for in vitro cold storage of strawberry germplasm // Plant Cell Rpt. 1991. V. 10. P. 431 -434.

177. Reed B.M. Cold storage of strawberries in vitro: A comparison of three sorage system // Fruit Var. J. 1992. V.46. P.98-102.

178. Reed B.M. Improved survival of in vitro-stored Rubus germplasm // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1993. V.l 18. № 6. P. 890-895.

179. Rubluo A., Kartha K.K., Mroginski L.A. & Dyck J. Plant regeneration from plant pea leaflets cultured in vitro and genetic stability of regenerants // J. Plant Phusiol. 1984. V.l 17. P. 119-130.

180. Rubos A.C., Pryke J.A. Morphogenesis in embryonic tissue cultures of apple //J. Hort. Sci. 1984. V.59. P. 469-475.

181. Sarwar M. The effect of different media and culture techniques oh planting efficiency of strawberry mesophyll cells in culture // Physiol. Plant. 1984. V.60.-P. 57-60.

182. Schimmelpfend H. Himbeerpflanzer aus Gewebekulturen Erfahzungen bei der Weiterkultur und im praktischen Anbau.- Obstbau (Bonn). 1983. Jg 8. №7. S. 321-324.

183. Schuerman P.L., Dandekar A.M. Transformation of temperate woody crops: progress and potentials // Scientia Horticulturae. 1993. V.55. P. 101-124.

184. Skirvin R.M. Natural and induced variation in tissue culture // Euphytica. 1978. V.27. P. 241-66.

185. Skoog F. Aspects of growth factor interaction in morphogenesis of tobacco tissue cultures // Les cultures de tissus de plantes. Paris, 1971. P. 115.

186. Skoog F., Miller C.O. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro // Sympos. Soc. Exp. Biol. 1957. V.l 1. № 2. P. 118.

187. Snir J. Micropropagation of red raspberry // Scientia Horticulture. 1981. V.14. P. 139-143.

188. Spiegel-Roy P. & J. Kohba Application of tissue culture for plant improvement. In: W. Barz, E. Reinhard & M.H. Zenk (Eds.). Plant tissue culture and its bio-technological application. Springer-Verlag, New York. 1977. P. 404-413.

189. Stamp J.A., Colby S.M. & Meredith C.P. Direct shoot organogenesis and plant regeneration from leaves of grape (Vitis spp) // Plant Cell. Tiss. Org. Cult. V.22. P. 127-133.

190. Swartz, H.J., Bors R., Mohamed F. & Naess S.K. The effect of in vitro pretreatments on subsequent shoot organogenesis from excised Rubus and Malus leaves // Plant Cell. Tiss. Org. Cult. 1990. V.21. P. 179-184.

191. Swartz H.J., Galetta G.J., Zimmerman R.H. Field performance and phe-notypic stability of tissue culture-propagated strawberries // J. Am. Hortic.Sci. 1981. V.l06. P. 667-675.

192. Vasil V. & Vasil I.K. The ontogeny of somatic embryos of Pennisetum americanum (L.) K. Schum.l. in cultured immature embryos // Bot. Gaz. 1982. V.143.P. 454-465.

193. Villalobos V.M., Thorpe T.A. Micropropagation: conceptos, metodolo-gia у pesultados // Cultivo de tejidos en la agriculture: fundamrntos у aplicaciones. CI AT (Centra Internacional de Agricultura Tropical). Cali, Colombia. 1991. p. 127-142.

194. Waldlaw C.W. Organization and evolution in Plants. L., 1965.

195. Walkey D.G.A. Production of apple plantlets from axillary bud meris-tems // Plant Sci. 1972. V. 52. P. 6.

196. Wallin A. and Johansson L. Plant regeneration from leaf mesophyll protoplasts of in vitro cultured shoots of a columnar apple // J. Plant Physiol. 1989. V.135.P. 565-570.

197. Wanas W.H., Callow J.A., Withers L.A. Growth limitation for the conservation of pear genotypes // In: Withers L.A. and Alderman P.G. (eds.). Plant tissue culture and its agricultural applications. Butterworths. London. 1986.

198. Wareing P.F. Phase chende and vegetative propagation // Improving vegetatively propagated crops. Academic Press Limited., 1987.- P. 263-270.

199. Wareing P.F., Phillips I.D.J. The control of growth and differentiation in Plants. Oxford-New-York, 1978.

200. Welander M. & Maheswaran G. Shoot regeneration from leaf explants of dwarfing apple rootstocks // J. Plant Physiol. 1992. V.140. P. 223-228.

201. Welander M. Plant regeneration from leaf and stem segments of shoots raised in vitro from mature apple trees //J. Plant Physiol. 1988. V.132. P. 738-744.

202. Wellander M. In vitro culture of red raspberry (Rubus idaeus) for mass propagation // Journal of Horticulture Science. 1985. V.60. P. 493-499.

203. Wilkins C.P., Newbury H.J. and Dodds J.H. Tissue culture conservation of fruit trees // FAO/IBPGR Plant Genet/ Resources Nwsl. 1989. V. 73/74 P. 9-20.

204. Winright H., Flegmann A.W. The micropropagation of gooseberry (Ribes uva — crispa L.). 2. In vitro proliferation and in vivo establishment // J. Hortic. Sc. 1985. V. 60. № 4. P. 485-491.

205. Wooi K.C., Wong C.H.Y. & Corley R.H.V. Genetic stability of oil palm callus cultures. In: A. Fujiwara (Ed.). Plant tissue culture. The Japanese Association for Plant Tissue Culture. 1982. Tokyo, pp. 794-750.

206. Yeoman M.M. Plant cell culture technology. / Ed. by Yeoman M.M. — Oxford etc.: Blackwell. 1986. -XII, 375 p.

207. Yepes L.M. & Aldwincle H.S. Factors that affect leaf regeneration efficiency in apple, and effect of antibiotics in morphogenesis // Plant Cell Tiss. Org. Cult. 1994. V.37. P. 257-269.

208. Zimmerman R., Fordham J. Simplified method for rooting apple cultivars in vitro // J. Am. Soc. Hortic. Sci. 1985. V.l 10. №1. P. 34-38.

Информация о работе

Сковородников, Дмитрий Николаевич
кандидата сельскохозяйственных наук
Брянск, 2004
ВАК 06.01.05

Диссертация

Особенности клонального микроразмножения in vitro и ускорение селекции новых ремонтантных форм малины - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы