Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Оптимизация селекционного процесса и ускоренное размножение межвидовых ремонтантных форм малины методом in vitro
ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство
Автореферат диссертации по теме "Оптимизация селекционного процесса и ускоренное размножение межвидовых ремонтантных форм малины методом in vitro"
' На правах рукописи
Вовк .
Владимир Владимирович
ОПТИМИЗАЦИЯ СЕЛЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА И УСКОРЕННОЕ РАЗМНОЖЕНИЕ МЕЖВИДОВЫХ РЕМОНТАНТНЫХ ФОРМ МАЛИНЫ МЕТОДОМ in vitro
Специальность 06.01.05 - селекция и семеноводство
Автореферат диссертации на соискание ученой степени, кандидата сельскохозяйственных наук
Брянск- 2000
• , Работа выполнеиз в мсжкафсдральиой лаборатории биотехнологии Брянской государственной сельскохозяйственной академии и Коки иском опорком пункте Всеросийского селекционно-технологического института садоводства и питомниководсгва в 1997-1999 гг.
Научный, руководители- заслуженный деятель науки РФ,
член-корреспондент. РАСХН, доктор сельскохозяйственных наук, профессор И.В.Казаков;
доктор биологических наук, профессор В.В.Заякин
Официальные оппоненты - доктор сельскохозяйственных наук
8-А.Высоцкий - г , *
кандидат сельскохозяйственных'наук •* * '. ■■ А.А.Астахов •
Ведущее предприятие - Всероссийский научно-исследовательский
институт генетики н селекции плодовых растений имени И. В. Мичурина
Зашита диссертации состоится февраля 2000 года в_часов ка
заседании диссертационного совета Д, 120,38.01 в Брянской государственной сельскохозяйственной академии по адресу: 243365. Брянская обл., Выгоннч-скнй район, с. Кокино, Брянская ГСХА, корпус 1.
С диссертацией можно ознакомиться в библ^^хг Г ГСХА Автореферат разослан*^" января 2000 года-/ Просим принять участие в работе совета илч прислан» стзыв в двух экземплярах, заверенных печатью
Ученый секретарь диссертационного совета, доктор с. - х. наук, профессор йЖ^и-^Де
Н.М. Кувшинов
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.
■ Аютктъностъ темы. В последние десятилетия отечественные и зарубежные селекционеры интенсивно работают над созданием сортов малины ремонтантного типа, формирующих основной урожай в конце лета - начале осени на однолетних побегах.
' I ■■"■ ■ Сорта ремонтантной малины способны эффективно использовать благоприятные факторы внешней среды и избегать экологических стрессов за счет однолетнего цикла формирования урожая н особой технологии их возделывания (И.В.Казаков и др., 1994). . '
Наряду с ценными технологическими свойствами многие сорта к формы, обладающие высокой степенью ремонтантное™ (зона плодоношения может достигать 100 % от длины побега), имеют трудности с размножением. Так, рад ценных отборов сложного межвидового происхождения, включающих геноплазму малины красной, черной, боярышииколистной,-душистой, -замечательной и поленики, отличается очень низким коэффициентом размножения, а отдельные генотипы совсем не образуют корневой поросли (И.В, Казаков, 1994,1995). •
Эта биологическая особенность выделенных форм ограничивает количество и объем комбинаций скрещивания, а также затрудняет размножение этих генотипов и, таким образом, значительно удлиняет селекционный период от выделения гибрида в элиту до передачи его в сортоиспытание. -
Решить' проблему размножения генетически ценного материала н ускорить селекционный процесс возможно, применяя метод клепального мяк-роразмноженкя. Этот метод широко используется .на многих плодовых и ягодных культурах, в том числе н на малине, для получения большого количества - высококачественного посадочного материала . за короткое время (В.А.Высоцкий, 1989). Ранее был разработан метод клонального микрораз-мкоження малины (В.АВысоцкиЙ, 1984; О.В.Стрыпша, 1939), однако экс-планты многих образцов ремонтантной малины сложного межвидового происхождения на средах с предлагаемым в литературе составом развиваются плохо. Таким образом/усовершенствование метода клонального мнкрораз-множеиия актуально для ускорения селекции ремонтантной малины. • " . - Нель и задачи и^^д^ваний. Целью настоящей работы было: усовершенствование метода клонального микро размножения для ускорения селекционного процесса и внедрения, новых сортообразцов и сортов в производство. . ;■- .• • -; - - Для этого необходимо было решить следующие задачи:
1. Определить оптимальные сроки выделения меристем малины.
2. 0:I7KiiK3i.*pCSSTb ГОрМ&тЛЬИЫЙ COCTS3 шггзтелинлх срсл its начальном этапе культивирования эксплаетов. ,.vt. \ 3. Изучить возможность культивирования.in vitro цветочных зачат* V-I ков ремонтантных форм,малины с.использованием цитоккнннов различНОЙ природы. ..Ч - % г ■ ,?
4. Установить оптимальный состав питательных срсл для получе-■ * ния максимального коэффициента размножения для некоторых образцов
- ремонтантной малины. • . . . ,.: .. .V: ... \ •
- 5. Изучить влияние цитокннинов разного типа на коэффициент размножения in vitro. .-.:..
.6. Подобрать оптимальные способы обработки н концентрации аук-аднов для индукции ризогеиеза, .о ■. ■ ■ .>--■;
' ■ 7. Изучить влияние различных факторов на адаптацию пробирочных растений после переноса в почвенный субстрат, н добиться удовле-. творительного выхода растений, пригодных для высадки в поле, ■ • ^■ = 8. Изучить влияние сроков переноса проверочных растений в нем: стерильные условияна Приживаемость. * .г. .
9. Выясикгь возможные связи между полевыми характеристиками
- исследованных генотипов и их поведением в культуре in vitro. r
: Научная ноет на и практическая значимость работы, В результате проведенной работы получены:результаты,-подтверждающие отсутствие у ремонтантных форм малины зависимости между основными хозяйственными показателями и повелением в культуре in vitro. Таким образом, установлено, что можно успешно размножать in vitro образцы с различным. сочетанием хозяйственно-ценных признаков. . ; ■
Обнаружено положительное действие производ ных днфен илмочевины на развитие меристем, цветочных зачатков и коэффициент, размножения ремонтантной малины. - :т- , Л ,- ^ . . : - ; - :
• Впервые в качестве эксплакгов для ьаеяеннх в культуру, in vitro ремонтантных образцов магенны успешно использовались цветочные зачаткм. I.:. " « г.: Установлено, что для успешной адаптации пробирочных растений к нестерильным условиям рН субстрата не должен бьпь выше 7,0. Адаптация растений значительно улучшается в осенне-зимний период. - -* >
Выявлено генотипнческое разнообразие поведения различных образцов ремонтантной малины в условиях культуры ia vitro, которое проявлялось в различной способности к адаптации меристем; укоренении растений,' а также в различных коэффициентах размножения. и '.z.
Разработанндо система^ прнеыоа.кяонадьного-микроразмножения ремонтантных форм малины ■ позволяет значительно ускорить селекционный
процесс и сократить время до передачи сорта ремонтантной малины в производство с 10-12 легло 5-6 лет.
Применение производных днфенилмочевины обеспечивает выживаемость и хорошее развитие меристем минимальных размеров, что может иметь значение при оздоровлении растительного материала.
¿рробация работы. Основные результаты исследований докладывались на заседаниях кафедры пдодоовошевсдства БГСХА <1997 - 1999 гг.), XVIII Мичуринских чтениях (Мичуринск, 1997), XI международной научно-производственной конференции "Ахроэкологические аспекты системы земледелия юго-западной части нечерноземной зоны Российской Федерации1* (Брянск, 1997), 50-оЙ научной конференции студентов и аспирантов "Проблемы и перспективы развития АПК в условиях рыночных отношений* (Мичуринск, 1998), международной научно-прахтнческой конференции "Актуальные проблемы экологии на рубеже третьего тысячелетия и пути их решения4 (Брянск, 1999), Всероссийской научно-практической конференции "Молодые ученые - возрождению сельского хозяйства России в XXI веке" (Брянск, 1999). Диссертация рассмотрена и рекомендована к защите расти* ренньш заседанием кафедры плодоовошеводства и кафедры кормопроизводства, селекции и семеноводства Брянской госсельхозакадсмни (2000 г.).
Публикации результату исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ.'
Реалигачия ретулътатж исследований. Растения малины, полученные в лаборатории биотехнологии in vitro, использованы для закладхн маточников ремонтантных форм малины на селекционном участке Кокинского опорного пункта ВСТИСП. Всего передано для высадки в почву 9279 растений малины 61 генотипа. Некоторые из них уже используются для дальнейшей селекции.
В результате проведенной работы подготовлены для передачи в гос-сортоиспытанкя новые сорта ремонтантной малины Бабье лето-2 и Геракл.
Объем и структура диссертации. Диссертация нзлг>ж£на на 127 страницах машинописного текста и состоит из введения, 3 глгл выводов и рекомендаций для практической селекции, s 1 приложения. Работа содержит 19 таблиц и 15 рисунков. Список использованной литературы включает 277 наименований, в том числе 147 на иностранных языках.
Место rtptfftfetiufí, материал и методика исследований. Исследования проводились в 1997 • 1999 годах в лаборатории биотехнологии Брянской ГСХА. Объектом исследования являлись образцы ремонтантной малины сложного межвидового происхождения, полученные на Кокннском опорном пункте Всероссийского селекционно-технологического института садоводст-
ва к питомниководсгва (ВСТИСП) под руководством доктора с.-х. наук И.В.Казакова: .
Стерилизация материала, приготовление питательных сред, выделение, поездка эксплантов и их культивирование осуществлялись с помощью стандартных приемов (В. А.ВысоцкнЙ, 1984; О.В.Стрыгнка, 19$$)
, Эксгошггы (апексы или зачаткк цветков размером 0,2-0,7 мм) выделяли нз почек побегов замещения. Стерилизацию проводили с помощью 0,1%' раствора сулемы .
В среду для культивирования меристем н цветочных зачатков добавляли аскорбиновую (2 мг/л) н гибберелловую (0,5 мг/л) кислот. В качестве цктокниинов структурного рада днфенилмочевнны использовали N-(4-пиридШ1)-М-фенилмочевину (4-PU) (0,1-1,0 мг/л) и тндиазурок (TDZ) (0,050,5 мг/л), их эффективность сравнивали с ютгокнннном пуринового ряда 6-бензиламннопурнном (6-БАП) (0,2-1,0 мг/л).
В эксперименте с меристемами н цветочными зачатками учитывали количество эксплантов, выживших через определенный промежуток времени.
Дня размножения малины применяли среды, содержащие один из ци-токияннов в различной концентрации: 6-БАП (1-4 мг/л), TDZ (0,025-0,2 мг/л) или 4-ПМ (0,1*0,4 мг/л). ...
Учитывали количество дополнительно образовавшихся побегов без ' учета черенкования.
В качестве индукторов рнзогенеза применяли ИУК или ИМК. Использовали различные способы воздействия: введение ауксинов непосредственно в питательную среду в концентрации 0,5-0,75 мг/л; кратковременную обработку в течение нескольких секунд в водном растворе ауксина в концентрации 1000 мг/л с последующей посадкой их на среды без гормонов или в субстрат, минуя стадию укоренения в пробирке.
Опыты, проводили втрсххратнойповторностн. Полученные данные после статистической обработки представили в виде Mim, где М • математическое ожидание, а m-ставдартная ошибка среднего (Б. А.Доспехов, 1974)/ Корреляционный анализ проводили с помощью ЭВМ.
; РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ .
Для успешного введения в культуру и последующего микроразмножения принципиальное значение имеет гормональный состав питательных сред, ; выбор типа и размера исходных эксплантов, а также сроков их выделения.
• fapfrf&Twufi^пф^лъъхых .срокоб выд&.'гения ?ксплакт&€. В хода работы проводилось выделение меристем в разные сроки: ю покоящихся почек в феврале, ю пазушных почек побегов возобновления в мае - августе. -
: Проведенные исследования показали, что при вычленении эксплантов из спящих почек отмечалось большое количество апексов подмороженных, содержащих внутритканевую инфекцию, а тахже дифференцированных как генеративные. Поэтому выход жизнеспособных меристем был очень мал.'
■ ■ - Апексы, выделенные из побегов замещения в начале и в конце мая, не различались по степени дифференцнровки. Лишь"у отдельных образцов'в верхней части побега отмечалось появление цветочных почек, не пригодных ДЛЯ введения В культуру in-vitro. " ■ -*•■ '■'■>"' ■
Возможно выделение эксплантов из почек отставших по развитию по* бегов и в августе, но таких побегов, как правило, бывает очень'ограниченное ■ количество.' — "■' - ■" — ■
Таким образомг«шнм®и>иыми сроками выделения меристем является - период, когда дифференциация почек еще не произошла, при этом длина побегов возобновления составляет 5-20 см. (май-начало нюня). -*'■'■'.' -
Оптилгщация {орчональпого состава питательных сред Аля ««еде-HUajtoebtx генотипов ремонтантной молимы в культуру bt vitro. ■ 1
Были проведены опыты по уточнению оптимальной концентрации 6-БАГ1 и определению эффективности добавок-других фнтогормонов в среду для культивирования меристем. В таблице 1 представлены результаты одного ИЗ таких опытов^' / ■ ■-Г.-.-И ■■.■.. - : -
<.. -..-s ■ . ■.; • ■ ,' • • - . - '..' ' Таблица 1 - Рост меристем малины борта Гусар под влиянием различных - " л ■■'■.-. ■ *- • сочетаний цнтокинина н гиббереллнна • J■
• ■" к ■ варианта ; Концентрация гормона, мг/л' " . Развитие мернстем через 2 месяца, (%),
б-БАП гк, % апексов ," " ' >з мм ' апексов >1,5 мм
... I 0,2 - 10±14< . 45±22 ■■
■> 2 ■ . ■ 0.2 0,5 • 42±12 . л -7а±32:-
. • 3 . ■ 0,2 . -1.0 - . . - • 28±2» ' '*' 80±11 ' :
■■■ ■ 4 • 0.5 : 1 ■ •• 7±i; > • <Я±!0
■ 5 ■ - 0.5 ; ' '0,5 * 59±!2 " '•" 84±23 - ■
6 ■ 0.5 4,0- • Зб±10 " ' 65111......
, ,v Анализируя получснныр данные, можно сказать, что имеется довольно четкая тсадснцияГ что кон центра ция б-БАП 0,5 мг/л является более; эффективной, чем ОД МГ/л. . Л .'< _ :"„.. -.:, ,; С!: •vü • ." . •
Добавка в срсяугиббереллина в обеих концентрацвдх (0,5 и 1,0 мг/л) приводила к резкому увеличению количества больших эксплантов (> З мм) и к менее выраженному увеличению суммарного количества больших,и средних ЭКСПЛаКГОВ(> 1,5 ММ). ■ , , ; ; ■ г-,-; ч.;
< . В других опытах было установлено, .что повышение концентрации 6-;БАП ведет к гнбели.меристем, а добавление » среду ИУК не дает положительного эффекта. Поэтому» можно сделать.вывод о том. что оптимальным вариантом гормонального состава сред для культивирования меристем является вариант 5 таблицы 1 (6-БАП 0,5 мг/л + ГК 0,5 мг/л). - v . ^Прн массовом введении в культуру in vitro образцов ремонтантной малины выделились генотипы с хорошей приживаемостью меристем, средней с способностью к адаптации и формы, меристемы которых погибают на средах . с 6-БАП даже с оптимизированным гормональным балансом. Образцы последнего типа могут, составлять почти половину испытуемых форм, поэтому дальнейший поиск способов культивирования таких образцов необходим для эффективного применения метода клоиального микроразмвоження в селекции ремонта/ггной малины. , ■.'.■•'.-'■.-;-
. > Применение имтокинино* ряда дисЬеншуночевины на стадии «леденив образно« ремонтантной малины » культуру in vitro.- Из литературных источников известно о повышенной активности цитокинина ряда дифе-инлмочевнны - тндиаэурона (TDZ), по сравнению с производными аденина для индукции развития адаенгнвных почек в культуре листовых эксплантов малины (JA. Fióla et at,-1990), яблонн (CP.Fdman el al, 1983; RK. Van Nieuwe et aI,I98ó;~S.Y.Wang et al, 1986), а'также для регенерации побегоаиз почек малнны (В.А.Высоцкнй.-' 1998). Тндказурон и родственное ему соединение -;>^-{4-тфндил)-Ы-4<ннлмочевина (4-PU) применялось нами ранее дяя регене-; рации растений нз листовых'дисков малины'(В.В.Вовк и др.,-1997).
i-------Использование 4-PU в питательных средах дяя, культивирования мери-;
сгем практически всех образцов ремонтантной малины дало положительные результаты. В присутствии 4-Ри(0,5мг/л) гибели эксплантов практически не происходило, более того меристемы быстро трогались в рост, и через 2 месяца < образовывались хорошо развитыс побеги готовые к дальнейшему размноже-нмоГВ некоторых пробирках при этом образовывались целые конгломераты' побегов.,Эффективность дейепмсв,4-PU можно проиллюстрировать напри-: мере образца 3-125-1 (рис. I)." экелланты которого погибали на среде с б- '
БАЛ. Применение производных днфениямочевины позволяет успешно куль* тнвироватъ меристемы всех исследованных образцов ремонтантной малины.
DptMt кулътнвироганхя, тдвлп
Ркс.1. Приживаемость меристем элитной формы 3-125-1 ка срсдахс 6-БАПи4-Ри: В4-И),0,5 мг/jt, 06-EAILO,5wr/ii , ;
На средах с 4-PU и TDZ выживают н хорошо развиваются меристемы ■ минимальных размеров, которые обычно гибнут в первую очередь к культивируются с большим трудом, даже для образцов, чьи меристемы легче всего адаптируются в культуре in vitro на стандартных средах.1
Серьезной проблемой ка начальном этапе культивирования является ранняя днфференцировка пазушных меристем и образование цветочных почек. Как правило, такие почки turn отдельные зачатки цветков на питательных средах с 6-БАП полностью погибают. Поэтому, период возможного выделе-' ння эксплантов у самых скороспелых форм с быстрой днфференцнровкой * цветочных почек, резко сокращается, делая их введение г культуру вообще проблематичным.
Вместе с тем известно, что у некоторых растений, например у ремонтантной земляники, в качестве первичных эксплантов возможно использование цветочных зачатков (Л.В.Алехссенко, 1998). Однако подобная информация для малины отсутствует.
D результате проведенных нами опытов било установлено, что 4-PU н TDZ активно стимулируют, развитие побегов из цветочных зачатков ремонтантной малины при практически полном отсутствии действия б-БАП- Опт-
малькая концентрация 4-PU » среде приближается к 1 мг/л, a TDZ - к 0,05 мг/л(рис.2). . . : . ■* .
У; , : Тип цитокинима
: Рис.. 2. Эффективность разных типов цигокннтгов при регенерации вегетативных побегов из цветочных зачатков малины образца 44-302-1;
И 0,05 иг/л; В 0,1 мг/л; Н0.2 мг/л; О 0,5 мг/л; □ 1,0 мг/л
- Таким образом, применение производных днфекнлмочевкны позволяет -полностью решить проблему введения в культуру in vitro новых форм рсмон- -такгной малины за счет повышения надежности культивирования меристем, а также путем использования цветочных зачатков. При этом снижают/и ограничения ПО Времени выделения первичных ЭКСШШСТОВ. , ' v.,*:'.
Оптилштаиия питательных сред на э^папе çoôcftteeHHp рагмнорее-fшя фор.чшрем$нгпантной малины in vitra Так как традиционные условия размножения подходят далеко не для всех ремонтантных образцов, возникла ' необходимость оптимизации питательных сред на этой этапе.
Эффективность'размножения во многой завиогг от индивидуальной -ген оптической реакции на включаемью'в питательную среду гормоны, а также концентрацию минеральной части питательной среды н сахарозы. ;..
влияние ¿Уо&амепия в питательную срсоу ауксинов и futvebémuna. Дм некоторых косточховых культур активизации развития дополнительных побегов!удается добиться благодаря совместному применению в ■ средах " для .. размножения цктокининов с ауксинами (В.Ф.Блснда, Л.ДРіадялова, 1991). Имеются данные, о положительном действии ауксинов , при размножении ремонтантной малины (В.А.Высоцкнй. 1996),
. Иногда кроме цитокининов н ауксинов в питательную среду для стимулирования роста, и вьггягнванил сформировавшихся побегов добавляют гнбберелловую кислоту (ПО (СЛ.Щелхунова, Ю.Г,Попов, 1970; В.М.Тюлснсв и др., 1990): В тоже время, есть сообщения и о негативном влиянии ГК на коэффициент размножения у отдельных культур (яблоня, груша) (Н.ИЛ>ровская, 1994). ,
Для оценки влияния на размножение ремонтантной малины ауксинов и гнббереллинов проведен опыт на образце 50-253-1 (Геракл). Как показано в таблице 2, максимальный коэффициент; размножения для эксплантов с удаленной верхушкой наблюдается на среде, содержащей 2,5 мг/л б-БАГЦ для трансплаитов с верхушкой • на среде с 1,5 мг/л цнтохнннна. Результаты опыта свидетельствуют о том, что применяемые фитогормоны в изучаемых концентрациях не полностью снимают апикальное доминирование. Поэтому, для получения большего коэффициента размножения следует использовать' экс-платы не содержащие верхнюю часть.
■ Таблица 2
■ Коэффициент размножения ремонтантной малины образца 50-253-1 і (Геракл) гіод влиянием различных комбинаций гормонов в среде
Концентрация гормона, (мг/л) Дополнительных побегов на эксплант. пп\
б-БАП ГК ИУК эксплант без вер- , хушки эксплант с верхушкой
1,0 " - - 1,5±0.16 1.1*0.11
1.5 - - 3,0±0,74 3.2±0.54
2.0 - - 3,0±0.59 1.3±0.18
2.5 • - - 3,6±0.63 -1.9±0.41 ■
2.0 0.25 ■ 0.05 2,3*0.45 1.8±0.34 -
2.0 0.50 0.05 2,5±0.42 1,9±0,41
2.0 0,25 0,10 1,8±0.21 ■ 1,8±0,43 -V
Добавление ГК н ИУК не приводит к увеличению коэффициента размножения. Однако, применение ГК в концентрации 0,5 мг/л иногда повышает1 выход пригодных для черенкования побегов. ГК в концентрации 1,0 мг/л вызывает чрезмерное удлинение побегов и их угоньшение. ■■■■<■■■
И
"-'; - Влияние конпертраиии минеральной основы и сахарозы на Э(М>ек-ти«ностъ ыпмножения. Применяемая нами минеральная основа среди Му-раснге-Скуга относится к самым концентрированным и богатым азотом средам, н некоторые культуры лучше развиваются при ее разбавлении (Ю.Г.Попов, В.Г.Трушечхинч 1972;Р.Оохихе!а1,1977). .. .
Для оцекхн влияния разбавления минеральной основы или уменьшения концентрации сахарозы па эффективность размножения ремонтантных ферм малины был проведен специальный опыт,
' Как видно из данных, представленных в таблице 3 понижение концентрации минеральной части среды приводит к уменьшению коэффициентов размножения. Это говори! о нецелесообразности уменьшения концентрации минеральных компонентов среды на данном этапе. ■■-■■■
" ■ Таблица 3 Влияние сред различного состава на эффективность размножения ___ремонтантных форм малини_
Вариант Дополнительных побегов на эксплаит, шт.
М±ш 1 % М±ш ! %
Геракл Бабье лето-2
6-БАП 8,38±1,58 100 5Ь68±1.09 100
MS/2* 5,00±0,82 59.7 3,27±0,43 57.6
сахароза/2** 8.80±1,30 105.0 4,55±0,88 80.1
Прииечіяне. • - раЛ»мсннв ИКИвр4ЛЫ10Й основи среды Мур*сиге-С*уг* ядам, ** -уы<яипснни в дм до* па ермненкю с обычной гоицентради» с»х»р(»ы, т.*. Во їсех »»риаитм опыт» грисугствугг стдортная концентраци* 6-БАП 1 нг/л.
Снижение уровня сахарозы в среде не ведет к существенным изменениям в размножении, т.е. концентрация сахарозы в среде не является лимитирующим фактором и се можно уменьшать. і ' ' • ' і'
Нспояыо*аные иитокинннов ряда дифенилмочевины Аля Oft -it*fW-заиин условий размножения ремонтантных форм малины. Одним ;о путей увеличения коэффициента размножения является поиск новых эффективных препаратов для стимуляции побегообразования у культивируемых экс-плантов,
. Известно, что TDZ в концентрации в два раза меньшей б-БАП, оказался высоко эффективным, при размножении земляники (Л.В.Алексеенко, 1998). Возможность использования препарата TDZ для хлонального мнкроразмножения показана на примере яблони (K.Nienwkirk, et ai, 19&7), ежевики,'малины черной и красной (МХУпадышев, 1991; М.Т.Упадышев, В.А.Высоцкий,
1УУ2; Б.А.Высоцкий, 199$),.В тоже время для размножения (лдсльных форм ремонтантной малиныТОг »„концентрации 0.01-0,1мг/л ис дал существенного положительного эффекта (В.Д.Высошо«й,1996).- -...л. ■ .- Изучение действия различных концентраций TDZ и 4-Р1) на эффекта в -. ность размножения ремонтантных образцов малины показало, что оба вещества на много эффективнее стимулировали размножение, .чем 6-БАП (табл. 4,5), Оптимальная концентрация Т02 и 4-Ри. в питательной среде для размножения составляет 0,1 мг/л и 0,4 мг/л, соответственно. При этом скорость размножения больше чем в 5 раз превышает стандартный вариант (2 мг/л 6-■ БАЛ). Дальнейшее повышение концентрации этих двух препаратов нецелесообразно, так как при этом начинают проявляться морфологические нарушения у размножаемых побегов. -
,■'■..■■..■.--■■:.' \ .»>"•■ ■.■*■: : ■■■'■ Таблица 4
Эффективность размножения под действием различных ' . - концентраций Т&2, и 4-Р11 на примере ремоетшпой формы
Вариант Дополнительных побегов на экспллнт, тт.
. М±ш . ■ ■ ■ • % •.>■ .
. 6-БАП, 2 мг/л 4,11 ±0,90 ■ ; ■ 100'
ТОг, 0,025 мг/л 3,2<Н0,40 77,9.- ■
' тог, 0,05 мг/л " 11,334:1.17 '275,7 ••
тог, о, 1 мг/л * • |6,40±1,18 399,0
4-ри.0,1 мг/л 4,7810,62 ' • ' 116,3 .
4-РО, 0,2 мг/л ; 7,8б±1,58' ..... 191,2 \. ^
4-Ри, 0.4 мг/л 14.00±2,32 " 340.0
' . "■ '. ' таблица¡5
Влияние сред различного состава на эффективность ; , размножения ремонтантных форм 47-Ж-4 и 5-185-2 .''"' "'
*______ Вариант Дополнительных побегов на эксплант, шт. ^ ,, ■ .
47-Х-4 5-185-2
. . М±ш • — М±ш V-- %
6-БАП, 2 мг/л . 1,75±0,20 - .100 - • 1,00*0,00 100
6-БАП, 1 мг/л • | 1.50*0,29 85,7 . - -- 1,00*0,00 100
• 6-БАП, 4 мг/ ; .. 2,31*0,35 т 132.0 1.14*0.15 .114 -
^ ТОХ, 0,1 мтЛг - • 8,67*2,01 ■ ^ . 495,4 - 1.00*0,00. ' 1 100
< Т0г, 0,2 мг/л -'9,57*2,31 ■■ ,! 546.7 1,16*0.14 -1 '-116 .
4-Р1), 0,2 мт/л 4.88*2,33 278.9 1.21*0.18 -121 .
Следует отметить;* что положительный'результат в улучшении размножения ремонтантных генотипов получен не во всех случаях. Из нескольких десятков размноженных дами элитных отборов выделились2 (5-185-2 к
- 4-202-1), экспланты которых при культивировании на средах с 6-БАП, 4-PU и
- TDZ в различных концентрациях не образовывали дополнительных побегов. Для размножения этих генотипов в культуре in vitro мы применяли черенкование. ■>■■,--.'-■■■ • . • • '• ' '• -- " • ' ■■■ 'i ■ ■■ ' ' • - ■■■■■' 6 целом полученные результаты позволяют заключить, что цитокинв-
- ны структурного ряда дифеннлмочевнны проявляют более высокую степень стимуляции некоторых процессов,; причем в меньших концентрациях, rio сравнению с цктокининами - производными адеинна.1 " *■ - "■'■
Укоренение пробирочных плетений. Для эффективного укоренения пробирочных растений большое значение имеет правильный выбор стимулятора корнеобразованил, его концентрации и способа обработки ■ .;
•На этапе укоренения побегов четко проявляется генотипнческое различие образцов, как в скорости, так н в способности к укоренению. В целом, как оказалось, ремонтантная малина не отличается от сортов обычного типа, но проявляет очень широкий спектр вариаций по данному признаку вследствие сложной гибридной природы. Так, например, побеги генотипа П -220-2 на-дежзго укореняется на среде с ИУК (0,75 мг/л) (рис. 3), которая также подхо-. дат для многих образцов ремонтантной малины' В тоже время некоторые, формы укореняются с большим' трудом. Например, для сортообразца Геракл па средах с ИУК не удается добиться степени укоренения свыше 30-40%. При использовании в качестве стимулятора корнеобразования ИМ К эффективность укоренения повышается до 81% (рис. 4). . ; -- - В литературе имеются данные о высокой эффективности обработки микропобегов в течение нескольких секунд в концентрированном растворе ауксина с последующим культивированием на питательной среде без гормонов (В.Г.Трушечкян и др., 1992) или непосредственно в подходящем почвенном субстралге (H.M.Andersoñ; 1978; D.W.Laive, 1979; CÀ.Wcbsler, O.v.Jons,
1991). • ; ■'■*;■' * ;.......
.:.. В результате проведенных опытов было установлено, что для ремонтантных форм малины, кратковременная обработка базальной части микропо-бегов-в растворе ИМК (1-1,5 г/л) на много эффективнее стимулирует корне-образовакне, чем непосредственное введение ауксина (ИМК 0.5 мг/л) в пита-тельнуюсреду. Так для побегов сорта Геракл (рис.- 3)'при введении ауксина в среду (ИМК,_ 0,5. мг/л) укоре няемость была : 81%^ а .после кратковременной обработки в расгворе ИМК - 100%. При этом скорость ризогенеза тгетапо-высилась. Г -i.,' \ • ".
I « I-г-
б 9 15 23 Вр*мя укоренения. Они.
Рве. укоргиснка
побегов обриц* речоаттюЯ мишни 11.220-2 в оди&имостн от концентрации ИУК;
~ — 0,2 мг/л:. '"■'Ю-1 0.5 мг/л;
— А- * 0,7) мг/л;
- - ОН—1,0 иг/л;
■ ■ • и мг/л
0 2 3 4 5«
Время культивирован ия, недели
Рис. 4. Динамике укоренения ■ побегов реионмктиоВ-м*лкны сорте Гердкл под действием рилнчмьск способов индукции ркюгенем:, * * кр»тковременн»* . обр*болсг.
Хорошие результаты были получены при укоренении микропобегов непосредственно в субстрате, минуя стадию укоренения в пробирке. Дня индукции рнзогенеза применяли ИМК в концентрации 1 г/л в течение I с.
¿¿апцюция укорененных растений к почве. Этот этап оказывает большое влияние на выход'готовых к переносу в поле растений • гибель в отдельных случаях может достигать 100%. Критическими факторами могут быть: состав почвы, физические условия и наличие патогенов.
Проведенные нами опыты по перенесению пробирочных растений в почву показали, что на'этом этапе большое значение имеет уровень рН субстрата. Прн рН выше 7 начинается все возрастающая гибель растений (табл.6). Пробирочные растения культивируются на кислой среде (рН 5,8), и прн переносе в субстрат со слабо щелочной реакцией возникает физиологический стресс, ослабляющий иммунитет растения и открывающий ворота инфекция.
Таблица 6
Приживаемость растений формы 8-242-1 (Бабье лето-2)
в зависимости от уровня >11 субстрата
Вариант опыта рН субстрата Выживших растений %
1 8.20 0
2 8,25 • 0
3 7,75 50
4 7,40 90
5 6,10 97
После введения в лаборатории контроля за рН субстрата прекратились неожиданные катастрофические выпады пересаживаемых растений.
Применение фунгицидов не имеет решающего значения, хотя и приводит к некоторому увеличению выхода готовых растений.
Установлено, что оптимальным временем для переноса растений в почвенный субстрат является время с сентября по март включительно. В весен не-л сгний период выпад растений значительно увеличивается, предположительно из-за повышения температуры выше ->-23 "С
Эффективность применения клокального микроразмножения в процессе селекции ремонтантной малини. Для определения возможной связи между отдельными хозяйственно-биологическими показателями и поведением в культуре in vitro ремонтантных образцов малины был проведен многофакторный хорреляционный анализ. В результате было установлено.
■по сутссгвуст связь s kiss отрицательней средней зависимости (коэффициент корреляции -0,545) между количеством побегов замещения и степенью ремонтантностн. Этот факт может быть отражением, замененной селекционерами зависимости - сорта с повышенной ремонтантностью имеют, как правило, более низкие коэффициенты размножения в полевых условиях. • :
- С : точки , зрения эффективности применения клоналъкого. микрорзз-множения для ускорения селекции ремонтантных форм, малины наиболее важным результатом проведенного анализа является констатация отсутствия существенной связи между параметрами, характеризующими поведение различных образцов ремонтантной малины в культуре in vitro, н нх основными хозяйственно-биологическими показателями такими, как степень ремонтантності», крупность ягод или количество побегов замещения. Это означает, что отсутствуют принципиальные ограничения для введення в культуру in vitro и ускоренного размножения образцов, которые выделяются по этим показателям в ту ИЛИ другую сторону. . ч .. " ■
С другой стороны наличие выраженной вариабельности поведения в культуре in vitro разных генотипов свидетельствует о значительных различиях в эффективности применения клонального микроразмножёння для этих образцов. Эти различия становятся еще более значительными, из-за наличия положительной средней завнсимости между коэффициентами размножения образцов ремонтантной хіалины in. vitro н их укорсняемостью (коэффициент корреляции. 0,644),; Однако поскольку; связь' этих показателей. не слишком тесная, можно найти образцы (б-х-жнб-185-I), которые имеют самые низкие коэффициенты размножения,,но отличаются хорошей укорсняемостью. Выбрать образцы с плохой укорсняемостью.; ко повышенными коэффициентами размножения не удается. г-:
Таким образом, формы с низкими коэффициентами размножения имеют тенденцию к плохому укоренению. Это еще больше осложняет кх клонального микроразмножение. Тем не менее, результаты, полученные в нашей работе, позволяют утверждать, что даже для образцов^ которые практически не образуют дополнительных побегов и размножаются только путем простого черенкования или плохо укореняются, применение метода клонального микроразмножения дает возможность значительно ускорить селекционный процесс н уже через год размножения in vitro заложить питомники по схеме конкурсного сортоиспытания.- . .7 : : ' . ■ Ч V',: ' vp , • ■
* л,* ~ " *
.-■■-ВЫВОДЫ;-. • . . .
1. Установлена высокая эффективность применения метода (тонального мнкроразмножекня для ускорения селекции ремонтантных форм малины и их размножения. Время выведения нового сорта сокращается в среднем на 56 лет. Оптимизация метода позволяет применить его практически ко всем образцам ремонтантной малины. ■*■ = ■-■;
2. Установлено, что оптимальными сроками выделения меристем ма* лины является период со средины мая до начала июня, когда длина побегов возобновления составляет 5-20 см, а дифференциация цветочных почек еще не произошла. " ■" ' . - * .. - ■
3. При культивированин меристем на средах с цитокннннамн пурнно-вого ряда (б-БАП) применение ГК (0,5 мг/л) позволяет повысить приживаемость и стимулировать развитие меристем,-
4. Применение производных днфенилмочевины (4-PU и TDZ) повыша-■■ ет степень адаптации меристем ремонтантной малины в условиях in vitro до
100%. В присутствии 4-PU, выживают и хорошо развиваются меристемы минимальных размеров. . Это может иметь особое значение при освобождении - растительного материала от вирусной ннфсхцнн.
5. Применение цнтокннннов структурного ряда днфенилмочевины позволяет использовать в качестве эксплантов цветочные зачатки, которые погибают в присутствии б-БАП. Это значительно расширяет возможности введения новых генотипов й культуру in vitro. . ■■• --
" б.' Добавление ИУК, разбавление минеральной ссксвы среды, снижение уровня сахарозы не ведет к существенны»! изменениям коэффициента размножения. Применение ГК (0,5 мг/л) может увеличить выход эксплантов за счет удлинения укороченных междоузлий. -
■ 7. Цитокиннны структурного рада днфенилмочевины девствуют в несколько раз эффективнее б-БАП (производное аденина) на стадии размножения. Рекомендуемые концентрации: для 4-PU - 0,4 мг/л, для TDZ -0.1 иг/л, а для6-БАП-2мг/л. ° ■■'-
' 8, Кратковременная обработка базальной части микропобегов в концентрированном растворе ауксина (ИМК 1-1,5 г/л) и последующее культивирование на безгормональной среде эффективнее стимулирует корнеобразованно, чем непосредственное введение ауксина в среду (0,5 мг/л). При этом . массовое укоренение пробирочных растений большинства генотипов ремонтантной малины можно- проводить непосредственно в почвенном субстрате, минуя стадию укоренения на питательных средах.
9. Установлено, что при адаптации укорененных растений малины к
почвенному субстрату большое значение имеет уровень рН, Высокая приживаемость наблюдается, если этот показатель не превышает 7,0. -
10. Оптимальным сроком для переноса растений в почвенный субстрат является период с сентября по март включительно. В весенне-летний период выпад растений значительно увеличивается, предположительно из-за повышения температуры (выше +25 °С). - >
11. Выявлено гскотнпнческое разнообразие поведения различных образное малины в условиях культивирования in vitro, которое проявлялось в различной степени н скорости адаптации меристем, способности к размножению и укоренению.
12. Не обнаружено корреляции хозяйственно-биологических показателей различных форм ремонтантной малины с параметрами их поведения в культуре in vitro, поэтому образцы с любым сочетанием хозяйственно-ценных признаков не имеют заведомых ограничений для применения к ним метола клонального мнхроразмножения
- ... РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ
1. Усовершенствованную нами систему приемов для клонального микроразмножения ремонтантных форм малины рекомендуется использовать на этапе первичного размножения гибридных сеянцев для ускорения селекционного процесса, а наиболее ценных, с высокими коэффициентами размножения in vitro, для закладки питомников размножения и даже для производства посадочного материала.
2. При клональном мнкроразмноженни ремонтантных форм малины рекомендуется в качестве первичных экспяантов использовать апикальные и пазушные почки побегов замещения до прохождения дифференциации цветочных почек (май - начало июня). _
3. Культивирование первичных эксплантов можно проводить на оптимизированной среде, содержащей б-БАП 0,5 мг/л и ГК 0,5-1,0 мг/л.
4. Для повышения степени приживаемости меристем, а также при использовании в качестве эксплантов цветочных зачатков рекомендуется использовать цнтокиннны структурного ряда дифенилмочевины (TDZ - 0,054), 11 мг/л, 4-PU г 0,2-1,0 мг/л).
5. На этапе размножения выход побегов на один эксплант можно уве- ' личить с помощью применения TOZ и 4-PU в концентрация 0J мг/л и 0,4 мг/л соответственно.
6. Для укоренения побегов ремонтантной малины использование ИМК является более эффективным, чем ИУК при добавлении их в питательную среду. Для большинства образцов ремонтантной малины максимальная ско-
рост* к степень укоренения достигаются при обработке концентрированным раствором ИМК (1-1,5 г/л) с последующим выращиванием на безгормональной среде или непосредственно в стерильном почвенном субстрате; ...
■ 7, При переносе.укорененных пробирочных растений в почвенный субстрат необходимо следить, чтобы pH не превышало 7,0.
В связи с генетическпм разнообразием условия культивирования для отдельных форм необходимо подбирать индивидуально.
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Вовк В.В., Заякин В.В., Нам ИЛ, Казаков И.В, Клошльное мнхро-размножение ремонтантных форм малины и подходы к разработке системы трансформации малины // Материалы межвузовской научно-практической конференции. - Брянск, 1997.-С 94-96.
2. Заякнн В.В., Нам ИЛ., Вовк В.В., Казаков И.В. Оптимизация метода клонального мккроразмножения для ускоренной селекции ремонтантных форм МАЛШ // Сб. докладов 18 Мичуринских чтений. - Мичуринск, 1998.- С. 16-19.
3. Вовк B.B. Применение N-N-фекпл (4-пнрнднл) мочевины на начальных этапах культивирования первичных экеллактов ремонтантной малины // Тезисы докладов 50 научной конференции студентов и аспирантов 16-17 апреля 1998 г. Мичуринск, 1998.-С. 120-121,
4. Нам И.Я, Заякнн В В., Вовк В., Казаков И.В. Оптимизация метода клонального мккроразмножения для ускоренной селекции межвидовых ре* монтантных форм малины // Сельскохозяйственная биология. - J998.-N 3.- С 51-55. -
5. Вовк B.B,, Заякнн B.C., Нам ИЛ, Казахов И.В. Использование цкто-кннннов ряда дифеннлмочевнны при микроклональном размножении ремонтантной малины Ц Сельскохозяйственная биология. - 1999.-N 5,- С. 52-56.
6. Заякнн В.В., Вовк В.В., Нам И.Я, Казаков И.В. Повышение эффективности клонального м нхрораз и ноже ння ремонтантной малины при использовании цитокннннов ряда дифеннлмочевнны // Сб. докладов и сообщений международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы экологии на рубеже третьего тысячелетия и пути их решения". - Брянск, 1999. -Часть 2,-С. 304-308. ' . ., .. •
■ 7. Заякин ВВ.; Вовк В.В;, Нам И.Я, Казаков И.В. Генопшические раз- * лнчнл в реакции образцов ремонтантной малины на шпокинины различного типа в культуре in vitro // Тезиси- докладов всероссийской научно-практической конференции "Молодое ученые - возрождению сельского хозяйства России в ХХГ. - Брянск, 2000,- С. 5. ... ; ■
_Тираж 100 экз. Обуем I п. л_
Ротапринт Брянской государственной сельскохозяйственной жадемии
Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Вовк, Владимир Владимирович
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА I. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ, ПРОБЛЕМЫ И
ПЕРСПЕКТИВЫ КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ
ПЛОДОВЫХ И ЯГОДНЫХ РАСТЕНИЙ.
ГЛАВА II. ЗАДАЧИ, МЕСТО ПРОВЕДЕНИЯ, МЕТОДИКА И
ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
2.1. Цель и задачи исследований.
2.2. Место проведения и объекты исследований.
2.3. Методика исследований.
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1 Введение новых генотипов ремонтантной малины в культуру in vitro.
3.1.1. Определение оптимальных сроков выделения исходных эксплантов.
3.1.2. Оптимизация гормонального состава питательных сред для введения новых генотипов в культуру in vitro.
3.1.3. Разработка методов применения цитокининов ряда дифенилмочевины на стадии введения различных генотипов ремонтантной малины в культуру in vitro.
3.2. Оптимизация питательных сред на этапе собственно размножения ремонтантной малины in vitro.
3.2.1. Влияние добавления в питательную среду ауксинов и гиббереллина.
3.2.2. Влияние концентрации минеральной основы и сахарозы на эффективность размножения.
3.2.3 Использование цитокининов ряда дифенилмочевины для оптимизации условий размножения ремонтантных форм малины
3.3. Укоренение пробирочных растений.
3.3.1. Выбор ауксина и подбор оптимальной концентрации.
3.3.2. Влияние способа обработки ауксинами на укоренение побегов ремонтантной малины.
3.4. Адаптация укорененных растений к почве.
3.5.Эффективность применения кпонального микроразмножения в процессе селекции ремонтантной малины.
ВЫВОДЫ.
РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ
Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Оптимизация селекционного процесса и ускоренное размножение межвидовых ремонтантных форм малины методом in vitro"
В последние десятилетия отечественные и зарубежные селекционеры интенсивно работают над созданием сортов малины ремонтантного типа, формирующих основной урожай в конце лета - начале осени на однолетних побегах. В результате уже созданы ценные сорта и формы, среди них американские сорта Сентябрьская, Херитейдж, Амити, Редвинг, Ватсон, Августред, английский - Оттом Близ, швейцарские - Роми и Зева Хербстернт, болгарский сорт Люлин и другие (И.В.Казаков, 1995). К сожалению, для полного созревания урожая большинству зарубежных сортов требуется безморозный период 150160 дней и сумма активных температур не менее 3000 °С. В условиях Брянской области - сумма активных температур 2100-2300°С, и потенциальная урожайность этих сортов малины реализуется лишь на 1520%, поэтому они не представляют практического интереса для возделывания.
Активная работа по созданию сортов малины ремонтантного типа проводится на Кокинском опорном пункте ВСТИСП (Брянская обл.), где собрана многочисленная коллекция ремонтантных сортов и форм. Здесь создан самый крупный в стране гибридный фонд и в 70-х годах получены первые отечественные ремонтантные сорта Бабье лето и Журавлик. Ежегодно из тысяч сеянцев, полученных из семян от межвидовой и внутривидовой гибридизации малины, отбирается лишь незначительный процент гибридов, которые используются для дальнейшего изучения и размножения. Это те генотипы, которые выделились по каким-либо хозяйственно-ценным признакам: по размеру, вкусовым качествам и плотности ягод, по устойчивости к болезням и вредителям, по срокам плодоношения и дружности созревания урожая, по возможности механизированной уборки урожая, по типу формирования куста и высоте побегов. Таким образом, отобрано более 200 форм, превосходящих по ряду хозяйственно-биологических признаков ремонтантный сорт Бабье лето. Лучшие из этих образцов заслуживают интенсивного использования в селекции, а некоторые -внедрения в производство.
Сорта и элитные формы ремонтантной малины способны эффективно использовать благоприятные факторы внешней среды и избегать экологических стрессов за счет однолетнего цикла формирования урожая и особой технологии их возделывания (И.В.Казаков и др., 1994). Суть этой технологии заключается в том, что после уборки урожая и наступления устойчивых осенних заморозков надземную часть растений скашивают. С весны следующего года отрастают новые побеги, которые во второй половине лета - начале осени плодоносят, затем после замерзания почвы их снова скашивают.
Возделывание ремонтантных сортов малины по типу однолетней культуры снимает проблему зимостойкости стеблей, а их удаление после скашивания позволяет избавиться от основных болезней и вредителей без применения химических средств защиты. Выращивание ремонтантных сортов в дополнение к сортам обычного типа (неремонтантным) дает возможность продлить период потребления свежих ягод малины на 1,5-2 месяца, а реализация ягодной продукции в «несезонное» для малины время по более высоким, чем летом, ценам стимулирует расширение насаждений малины во всех категориях хозяйств.
Наряду с ценными технологическими свойствами многие сорта и формы, обладающие высокой степенью ремонтантности (зона плодоношения может достигать 100 % от длины побега), имеют трудности с размножением. Так, ряд ценных отборов сложного межвидового происхождения, включающих геноплазму малины красной, черной, боя-рышниколистной, душистой, замечательной и поленики, отличается очень низким коэффициентом размножения, а отдельные генотипы совсем не образуют корневой поросли (И.В.Казаков, 1994,1995).
Возможно, это свойство связано с ремонтантностью на генетическом уровне или является следствием физиологических особенностей ремонтантных форм, у которых метаболизм всего растения направлен' на формирование урожая на побегах текущего года, и основной объем ассимилятов потребляется молодыми растущими побегами и развивающимися плодоэлементами, поэтому формирование корневых отпрысков резко замедляется; в результате вегетативное размножение ремонтантных форм намного ниже, чем у обычных гибридов.
Эта биологическая особенность выделенных форм ограничивает количество и объем комбинаций скрещивания, затрудняет размножение этих генотипов и, таким образом, значительно удлиняет период от выделения гибрида в элиту до передачи его в сортоиспытание.
Решить проблему размножения генетически ценного материала и ускорить селекционный процесс возможно, применяя метод клональ-ного микроразмножения. Этот метод широко используется на многих плодовых и ягодных культурах, в том числе и на малине, для получения большого количества высококачественного посадочного материала за короткое время (В.А.Высоцкий, 1989).
В настоящее время разработан метод микроклонального размножения малины (В.А.Высоцкий, 1984; О.В.Стрыгина, 1989), однако экс-планты многих образцов ремонтантной малины сложного межвидового происхождения на средах с предлагаемым в литературе составом развиваются плохо. Поэтому появилась объективная необходимость усовершенствовать метод клонального микроразмножения применительно к ремонтантным формам малины.
Таким образом, тема данной работы является актуальной для ускорения селекционного процесса применительно к ремонтантным формам малины.
В связи с этим перед нами была поставлена цель: усовершенствовать метод клонального микроразмножения для ускорения селекционного процесса и внедрения, новых сортообразцов и сортов в производство.
При выполнении данной работы исходили из того, что такое биологическое свойство ремонтантной малины, как низкая побегообразо-вательная способность в полевых условиях может быть не связана с ее поведением в культуре in vitro. Отсутствие такой связи позволит широко использовать метод клонального микроразмножения в ускорении селекционного процесса ремонтантных форм малины.
Для этого необходимо было установить оптимальные сроки выделения эксплантов для введения в культуру in vitro, определить состав питательных сред на различных этапах клонального микроразмножения, подобрать условия необходимые для адаптации пробирочных растений к почвенным условиям, а также выяснить возможные связи между полевыми характеристиками исследованных генотипов и их поведением в культуре in vitro.
Научная новизна. Продемонстрирована независимость поведения образцов ремонтантной малины в культуре in vitro от их основных хозяйственно-биологических показателей.
Обнаружено положительное действие производных дифенилмо-чевины на развитие меристем, цветочных зачатков и коэффициент размножения ремонтантной малины.
Впервые в качестве эксплантов для введения в культуру in vitro ремонтантных образцов малины успешно использовались цветочные зачатки.
Установлено, что для успешной адаптации пробирочных растений к нестерильным условиям рН субстрата не должен быть выше 7,0. Адаптация растений значительно улучшается в осенне-зимний период.
Выявлено генотипическое разнообразие поведения различных образцов ремонтантной малины в условиях культуры in vitro, которое проявлялось в различной степени и способности адаптации меристем, укоренении растений, а также в различных коэффициентах размножения.
Разработанная система приемов клонального микроразмножения ремонтантных форм малины позволяет значительно ускорить селекционный процесс и сократить время до передачи сорта ремонтантной малины в производство с 10-12 лет до 5-6 лет.
Растения малины, полученные в лаборатории биотехнологии in vitro, использованы для закладки маточников ремонтантных форм малины на селекционном участке Кокинского опорного пункта ВТИСП. Всего передано для высадки в почву 9279 растений малины 61 нового генотипа. Некоторые из них уже используются для дальнейшей селекции.
В результате проведенной работы подготовлены для передачи в госсортоиспытание новые сорта ремонтантной малины Бабье лето-2 и Геракл.
Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Вовк, Владимир Владимирович
выводы
1. Установлена высокая эффективность применения метода кло-нального микроразмножения для ускорения селекции ремонтантных форм малины и их размножения. Время выведения нового сорта сокращается в среднем на 5-6 лет. Оптимизация метода позволяет применить его практически ко всем образцам ремонтантной малины.
2. Установлено, что оптимальными сроками выделения меристем малины является период со средины мая до начала июня, когда длина побегов возобновления составляет 5-20 см, а дифференциация цветочных почек еще не произошла.
3. При культивировании меристем на средах с цитокининами пу-ринового ряда (6-БАП) применение ГК (0,5 мг/л) позволяет повысить приживаемость и стимулировать развитие меристем.
4. Применение производных дифенилмочевины (4-PU и TDZ) повышает степень адаптации меристем ремонтантной малины в условиях in vitro до 100%. В присутствии 4-PU, выживают и хорошо развиваются меристемы минимальных размеров. Это может иметь особое значение при освобождении растительного материала от вирусной инфекции.
5. Применение цитокининов структурного ряда дифенилмочевины позволяет использовать в качестве эксплантов цветочные зачатки, которые погибают в присутствии 6-БАП. Это значительно расширяет возможности введения новых генотипов в культуру in vitro.
6. Добавление ИУК, разбавление минеральной основы среды, снижение уровня сахарозы не ведет к существенным изменениям коэффициента размножения. Применение ГК (0,5 мг/л) может увеличить выход эксплантов за счет удлинения укороченных междоузлий.
7. Цитокинины структурного ряда дифенилмочевины действуют в несколько раз эффективнее 6-БАП (производное аденина) на стадии
УУ размножения. Рекомендуемые концентрации: для 4-PU - 0,4 мг/л, для TDZ - 0,1 мг/л, а для 6-БАП - 2 мг/л.
8. Кратковременная обработка базальной части микропобегов в концентрированном растворе ауксина (ИМК 1-1,5 г/л) и последующее культивирование на безгормональной среде эффективнее стимулирует корнеобразование, чем непосредственное введение ауксина в среду (0,5 мг/л). При этом массовое укоренение пробирочных растений большинства генотипов ремонтантной малины можно проводить непосредственно в почвенном субстрате, минуя стадию укоренения на питательных средах.
9. Установлено, что при адаптации укорененных растений малины к почвенному субстрату большое значение имеет уровень рН. Высокая приживаемость наблюдается, если этот показатель не превышает 7,0.
10. Оптимальным сроком для переноса растений в почвенный субстрат является период с сентября по март, включительно. В весенне-летний период выпад растений значительно увеличивается, предположительно из-за повышения температуры (выше +25 °С).
11. Выявлено генотипическое разнообразие поведения различных образцов малины в условиях культивирования in vitro, которое проявлялось в различной степени и скорости адаптации меристем, способности к размножению и укоренению.
12. Не обнаружено корреляции хозяйственно-биологических показателей различных форм ремонтантной малины с параметрами их поведения в культуре in vitro, поэтому образцы с любым сочетанием хозяйственно-ценных признаков не имеют заведомых ограничений для применения к ним метода кпонального микроразмножения
РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ
1. Усовершенствованную нами систему приемов для клонального микроразмножения ремонтантных форм малины рекомендуется исiuu пользовать на этапе первичного размножения гибридных сеянцев для ускорения селекционного процесса, а наиболее ценных, с высокими коэффициентами размножения in vitro, для закладки питомников размножения и даже для производства посадочного материала.
2. При клональном микроразмножении ремонтантных форм малины рекомендуется в качестве первичных эксплантов использовать апикальные и пазушные почки побегов замещения до прохождения дифференциации цветочных почек (май - начало июня).
3. Культивирование первичных эксплантов можно проводить на оптимизированной среде, содержащей 6-БАП 0,5 мг/л и ГК 0,5-1,0 мг/л.
4. Для повышения степени приживаемости меристем, а также при использовании в качестве эксплантов цветочных зачатков рекомендуется использовать цитокинины структурного ряда дифенилмочевины (TDZ - 0,05-0,1 мг/л, 4-PU - 0,2-1,0 мг/л).
5. На этапе размножения выход побегов на один эксплант можно увеличить с помощью применения TDZ и 4-PU в концентрации 0,1 мг/л и 0,4 мг/л соответственно.
6. Для укоренения побегов ремонтантной малины использование ИМК является более эффективным, чем ИУК при добавлении их в питательную среду. Для большинства образцов ремонтантной малины максимальная скорость и степень укоренения достигаются при обработке концентрированным раствором ИМК (1-1,5 г/л) с последующим выращиванием на безгормональной среде или непосредственно в стерильном почвенном субстрате.
7. При переносе укорененных пробирочных растений в почвенный субстрат необходимо следить, чтобы рН не превышало 7,0.
В связи с генетическим разнообразием условия культивирования для отдельных форм необходимо подбирать индивидуально.
Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Вовк, Владимир Владимирович, Брянск
1. Аветисов В.А., Мелик-Саркисов О.С. Генетические особенности морфогенеза в каллусных культурах различных сортов картофеля// Сельскохозяйственная биология 1985,- N 3.- С. 67-70.
2. Алексеенко Л.В. Особенности размножения нейтральнодневных и ремонтантных сортов земляники in vitro // Автореф. дисс. . канд. с.-х. наук,-М., 1998,-20 с.
3. Альшевцева Л.И. Роль среды и регуляторов роста при микроразмножении черной смородины // Микроразмножение и оздоровление растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве / Сб. научных трудов НИИ им. И.В. Мичурина,-Мичуринск, 1989,-С. 25-31.
4. Альшевцева Л.И. К вопросу микроразмножения черной смородины // Достижения науки в практику / Тез. докл. конф. (27-29 апреля).-М., 1990,-С. 122, 123.
5. Белошапкина О.О., Высоцкнй В.А., Хайбулина Л.М.Влияние ингибиторов вирусов на частоту появления эмбриональных летадей у Arabidopsis thaliana // В сб.: Проблемы интенсификации плодоводства. М., 1987: 48-52.
6. Бленда В.Ф., Радилова Л.Д. Клональное микроразмножение подвоев косточковых культур // Садоводство и виноградарство,- 1991. N3.-C. 21-24.
7. Бленда В.Ф. Адаптация подвоев косточковых культур, полученных из изолированных меристем // Садоводство и виноградарство. 1996,- N3,- С. 18-19.
8. Богуш Л.Ю., Чернец A.M., Бородин И.Н., Ларионов М.Т. Метод термотерапии для получения здоровых плодовых саженцев // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии,- 1986.- N 1,- С. 56.
9. Борзых Г.Т., Борзых И.Т., Тихонова Ю.Б. Выращивание безвирусного посадочного материала малины во ВНИИС им. Мичурина // Сб. науч. тр. ВНИИС,- 1986,- Вып. 47,- С. 44-46.
10. Будаговский A.B. Лазерная биотехника, возможности и задачи // Проблемы интенсификации садоводства / Тез. докл. конф. (3-4-марта 1989 г.).- Мичуринск, 1989,- С. 180-182.
11. Бургутин А.Б., Бутенко Р.Г., Катаева Н.В., Голодрига П.Я. Быстрое клональное размножение виноградного растения // Сельскохозяйственная биология,- 1983,- N 5,- С. 48-50 .
12. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений,- М., 1964.
13. Бутенко Р.Г. Использование культуры тканей растений в сельскохозяйственной науке и практике // Сельскохозяйственная биология.-1979,-Т.14, N3.-C. 306-315.
14. Вердеревская Т.Д., Маринеску В.Г. Вирусные и микоплазменныезаболевания плодовых культур и винограда.- Кишинев., "Штиинца". 1985.-311 с.
15. Винклер Г.Н., Бутенко Р.Г. Применение черенкования при выращивании безвирусных растений картофеля методом культуры меристемы // Физиология растений.- 1970.- Т. 17, N 4.- С.851-853.
16. Вовк В.В., Заякин В.В., Нам И.Я., Казаков И.В. Клональное микроразмножение ремонтантных форм малины и подходы к разработке системы трансформации малины // Материалы межвузовской научно-практической конференции Брянск, 1997.- С. 94-96.
17. Высоцкий В.А., Попов Ю.Г., Трушечкин В.Г. Регенерация изолированных меристематических верхушек древесных растений // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы / Сб. научных трудов НИЗИСНП,- М., 1976,- Т.9.- С. 89-100.
18. Высоцкий В.А. Действие некоторых регуляторов роста на изолированные меристематические верхушкм черной смородины // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы / Сб. научных трудов НИЗИСНП. М., 1979.-Т.9.-С. 101-107.
19. Высоцкий В.А. Культура изолированных тканей и органов плодовых растений: оздоровление и микроклональное размножение // Сельскохозяйственная биология,- 1983,- N 7,- С. 42-47.
20. Высоцкий В.А. Усовершенствование способов получения растений малины из изолированных меристематических верхушек // Ягодоводство в Нечерноземье / Сб. научных трудов ВСТИСП,- М., 1984.- С.3.8.
21. Высоцкий В.А., Алехно Г.Д. Клональное размножение роз // Декоративное садоводство в России / Сб. научных трудов НИЗИСНП. М., 1985,-С. 59-67.
22. Высоцкий В.А., Олешко Е.В. Совершенствование питательной среды для микроклонального размножения вишни // Агротехника и сортоизучение плодовых культур / Сб. научных трудов НИЗИСНП.- М., 1985,-С. 72-76.
23. Высоцкий В.А. Использование методов культуры изолированных тканей и органов для оздоровления и ускоренного размножения плодовых и ягодных растений // Селекция плодовых и ягодных культур. Новосибирск, 1989,- С. 132-138.
24. Высоцкий В.А. (а) О генетической стабильности при клональном микроразмножении плодовых и ягодных культур // Сельскохозяйственная биология,- 1995,- N 5,- С. 57-63.
25. Высоцкий В.А. (б) Опыт клонального микроразмножения ирги // Плодоводство и ягодоводство России / Сб. трудов ВСТИСП,- М.,1995.-Т.2.-С. 123-127.
26. Высоцкий В.А. Особенности клонального микроразмножения не-которх форм ремонтантной малины // Плодоводство и ягодоводство России / Сб. научных трудов ВСТИСП,- М., 1996,- Т.З.- С. 90-95.
27. Высоцкий В.А. Биотехнологические методы в системе производства оздоровленного посадочного материала и селекции плодовых и ягодных растений // Дисс. на на соиск. ученой степени доктора с.-х. наук,- М., 1998,- 321 с.
28. Говорова Г.Ф. Биотехнология в селекции земляники на устойчи вость к болезням // Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии / Тез. докл. н. конф,- М.,1996,-С. 16.
29. Головин С.Е. Корневые гнили малины в питомниках, причины возникновения и борьба с ними. // Плодоводство и ягодоводство России / Сб. трудов ВСТИСП,- М., 1986,- Т.2.- С. С. 30-38.
30. Голодрига П.Я., Зленко В.А., Бутенко Р.Г. и др. Ускоренное размножение ценных генотипов винограда // Садоводство и виноградарство,-1982,-N 3,-С. 24-27.
31. Голодрига П.Я., Зленко В.А., Рыфф И.И, Бутенко Р.Г. и др. Технология ускоренного размножения сортов винограда с применением культуры изолированной ткани // Сельскохозяйственная биология. 1985,- N З.-С. 62-65.
32. Горьковцева Е.А., Юлдашев О.Х. Микроклональное размножение ценных сортов винограда // Садоводство и виноградарство,- 1991. N 11.- С. 17-20.
33. Деменко В.И., Трушечкин В.Г. Размножение вишни методом in vitro // Сельскохозяйственная биология,- 1983,- N 7,- С. 51-53.
34. Джигажпо Е.Н., Джигажпо М.И., Тюленев В.М., Курсаков Г.А. и др. Биотехнология в селекции // Программа и методика селекции плодовых, ягодных и орехоплодных культур,- Орел, 1995,- С. 111-132.
35. Джонс О.П. Размножение хозяйственно важных древесных растений in vitro // В кн.: Биотехнология сельскохозяйственных растений.-М., 1987,-С. 134-152.
36. Долгих В.А. Продуктивность земляники, выращенной из апексов // Садоводство и виноградарство,- 1988,- N 7,- С. 24-25.
37. Дорошенко Н.П., Кострикин И.А. Микроклональное размножение столового винограда сорта Агат Донской // Садоводство и виноградарство,-1989,-N 3,-С.-40.
38. Дорошенко Н.П. Биотехнологические методы в селекции винограда // Использование биотехнологических методов для решения гене-тико-селекционных проблем / Сб. докл. и сообщений XVIII Мичуринских чтений 27-29 октября 1997 г.- Мичуринск, 1998.- С. 42-46.
39. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта,- М.: Колос, 1979. 416 с.
40. Евсеева Р.П., Кудрявкин B.C. Дедифференциация и рост тканей яблони в искусственной культуре в связи с вопросами морозостойкости // Достижения науки в практику / Тез. докл. конф. (27-29 апреля).-М., 1990,-С. 78-80.
41. Жукова Н.В., Тюленев В.М. Влияние искусственной культуры на прохождение термотерапии в связи с получением оздоровленного посадочного материала земляники // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. И.В. Мичурина,- 1990,- Вып. 49,- С. 11-13.
42. Заузолкова Н.П. Микроразмножение алычи // Проблемы интенсификации современного садоводства / Тез. докл. конф.- Мичуринск, 1990.-С. 165-166.
43. Казаков И.В. Малина и ежевика. М., 1994.—С.
44. Казаков И.В., Рожнов Н.И., Евдокименко С.Н. Совершенствование исходных форм малины ремонтантного типа // Генетика и наследование важнейших хозяйственных признаков плодовых растений. Мичуринск,- 1994,- С. 64-69.
45. Казаков И.В. Проблемы и перспективы создания сортов малиныремонтантного типа // Селекционно-генетические проблемы развития садоводства в средней полосе европейской части России. Мичуринск,- 1995,- С. 26-29.
46. Капица О.С., Андреева Э.Н. Оздоровление растений картофеля от У- вируса с помощью культуры меристем // Тр. V Всес. совещ. по вирусн. болезням,- Киев, 1966,- С. 176-180.
47. Каплан И.Б., Малышенко С.И., Шакулова Э.Р., Дубинина E.H., Тальянский М.Э. Индукция PS-белков и приобретенной противовирусной устойчивости под влиянием кинетина в растениях табака // Физиология растений,- 1988,- Т. 35, N. 5,- С. 849-856.
48. Катаева Н.В., Аветисова В.А. Клональное размножение растений в культуре ткани // В сб.: Культура клеток растений.- М., 1981,- С. 137149.
49. Катаева Н.В., Бутенко Р.Г. Принципы микроклонального размножения растений на примере герберы. // Изв. АН СССР, сер. биол. 1982,- 1.-С. 126-129.
50. Катаева Н.В. Особенности клонального микроразмножения труд-ноукореняемых сортов яблони // Сельскохозяйственная биология. 1984,-N4,-С. 18-22.
51. Клоконос Н.П., Соловьева И.И. Размножение малины методом культуры ткани // Вестник с.-х. науки Казахстана,- 1986,- N 9,- С. 4447.
52. Кореннов A.A., Рыбников А.П., Стрельникова H.A. Действие электромагнитного поля низких частот на рост и развитие растений // Молодые ученые садоводству России / Тез. докл. совещ. 20-21 июня 1995 г.-М., 1995,- С. 201-202.
53. Коронацкий С.А. Особенности клонального микроразмножения сливы в системе производства оздоровленного посадочного материала//Автореф. дисс. . канд. с.-х. наук,-М., 1991.-22 с.
54. Коротаева М.С., Попов Ю.Г., Трушечкин В.Г., Ярославцев Е.И. О регенерации стеблевых верхушек малины // Биологические науки. 1975,-N 10,-С. 133-136.
55. Короткое Н.И. Способы размножения красной малины // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. Мичурина,- 1990,- N. 48.- С. 37-42.
56. Лапинская М.П. Диагностика НЕПО-вирусов у смородины с помощью иммуноферментного анализа // Молодые ученые садоводству России /Тез. докл. совещ. 20-21 июня 1995 г.-М., 1995,-С. 142-145.
57. Леонтьева-Орлова Л.Ф. Совершенствование метода клонального микроразмножения смородины и оценка размножения в нестерильных условиях//Автореф. дисс. . канд. с.-х. наук,- М., 1991.-22 с.
58. Лукьянова Е.А. Изучение возможности использования бактери альных рибонуклеаз для хемотерапии в культуре in vitro // Молодые ученые садоводству России / Тез. докл. совещ. 20-21 июня 1995 г,-М., 1995,-С. 117-119.
59. Михальчик Л.С. Ускоренное выращивание посадочного материала яблони для интенсивных насаждений Нечерноземной зоны РСФСР //Автореф. дисс. . канд. с.-х. наук.- М., 1990.- 23 с.
60. Михальчик Л.С. Маркетинговые аспекты выращивания высококачественного посадочного материала рябины сладкой // Плодоводство и ягодоводство России / Сб. трудов ВСТИСП,- М., 1995,- Т.2.- С. 133141.
61. Муратова С.А., Долгов С.В. Agrobacterium опосредованная трансформация листовых дисков сливы (Prunus domestica) // Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии / Тез. докл. н. конф.- М., 1996,- С. 52.
62. Муромцев Г.С., Бутенко Р.Г., Тихоненко Т.И., Прокофьев М.И. Основы сельскохозяйственной биотехнологии. Москва, ВО "Агропромиз-дат", 1990.
63. Негреев В.Н. Влияние активированного угля на образование каллусов из неоплодотворенных семяпочек яблони и вишнево-черемуховых гибридов // Достижения науки в практику / Тез. докл. конф. (27-29 апреля).- М., 1990,- С. 121,122.
64. Огольцова Т.П., Джигадло М.И. Апробация сортов земляники при микроклональном размножении // Садоводство и виноградарство. 1988.-М 11,-С. 26-29.
65. Олешко Е.В. Особенности клонального микроразмножения подвоев и сортов вишни,- М., 1985.
66. Осипова Л.В. Разработка методики получения растений регене-рантов из каллусов вишни // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. И.В. Мичурина,- 1991,- Вып. 50,-С. 28-34.
67. Острейко С.А., Дроздовский И.М. О полифункциональности регуляторов роста и развития растений // Сельскохозяйственная биология." 1981,-Т. 7,- N. 5,- С. 702-711.
68. Острейко С.А. Роль естественного отбора в онтогенезе растений (основы цитоклональной теории онтогенеза) // Физиология растений.1985,-Т. 32, N. 3,- С. 585-604.
69. Полевой В.В. Роль ауксина в системах регуляции у растений,- М.,1986.
70. Поликарпова Ф.Я., Яковлева В.А. Влияние предварительной подготовки маточных растений и физиологически активных веществ на зеленое черенкование клоновых подвоев яблони // Плодоводство нечерноземной полосы / Сб. научных трудов НИЗИСНП. М., 1984,- С.28.35.
71. Попов Г.Д. Влияние регуляторов роста и углеводов на каллусооб-разование у яблони // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. И.В. Мичурина.-1990.-Вып. 49,-С. 18-21.
72. Попов Ю.Г., Трушечкин В.Г. Получение растений земляники методом культуры изолированных верхушек побега // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы / Сб. научных трудов НИЗИСНП. М., 1972.-Т.4.-С. 184-193.
73. Попов Ю.Г. Культура in vitro меристематических верхушек стебля как метод оздоровления и размножения растений // Биологические науки,- 1976,-N6,-С. 13-24.
74. Попов Ю.Г., Высоцкий В.А. Культура стеблевых верхушек in vitro как метод ускоренного размножения плодовых и ягодных растений // Вестник с.-х. науки,- 1978,- N 4,- С. 124-127.
75. Попов Ю.Г. Оздоровление и размножение плодовых и ягодных растений методом культуры меристематических верхушек // Метод, указания,- М., 1979.
76. Портная Л.Я., Абраменко Н.М. Химиотерапия земляники, пораженной комплексом вирусов, в культуре ин витро // Проблемы интенсификации садоводства / Тез. докл. конф.-Мичуринск, 1989,-С. 203204.
77. Привалов Г.Ф. Модифицирующее действие ауксина на индуцированную мутационную изменчивость растений M1 Acer negundo L // Генетика,- 1980,- Т.16, N 12,- С. 2176-2185.
78. Приходько Ю.Н. Получение и микрокпональное размножение безвирусных клонов крыжевника // Молодые ученые садоводству России / Тез. докл. совещ. 20-21 июня 1995 г.- М., 1995,- С. 150-154.
79. Руденко И.С. Отдаленная гибридизация и полиплоидия у плодовых растений. Кишинев, 1978,- С. 35-43.
80. Рязанова И.А., Негрук В.И., Жуков О.С. Введение чужеродной информации в растительные клетки // Бюллетень науч. информ. ЦГЛ им. Мичурина,- 1990,- N. 48,- С. 49-52.
81. Савздорг Э.Э., Бакун В.К., Ефименко Д.И., Самосудов В.Н. Оздоровление и размножение земляники в питомниководческом комплексе // Садоводство,- 1983,- N 7,- С. 17-19.
82. Семина Н.П. Диагностика латентных вирусов яблони с помощью иммуноферментного анализа // Микроразмножение и оздоровление растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве / Сб. научных трудов НИИ им. И.В. Мичурина,-Мичуринск, 1989.-С. 17-21.
83. Семина Н.П., Цуканова Е.М. Производство безвирусного посадочного материала в Центрально-Черноземной зоне России // Молодые ученые садоводству России / Тез. докл. совещ. 20-21 июня 1995 г.-М., 1995,-С. 115-117.
84. Соловых Н.В., Расторгуев C.J1 Применение тканевых культур в селекции плодовых растений // Молодые ученые садоводству России / Тез. докл. совещ. 20-21 июня 1995 г.- М., 1995,- С. 9-12.
85. Стрыгина О.В. Микроразмножение малины. ВНИИС им.
86. И.В.Мичурина // В сб. Микроразмножение и оздоровление растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве,- Мичуринск, 1989,- С. 32-37.
87. Стрыгина О.В. Размножение новых сортов малины методом культуры тканей // Достижения науки в практику / Тез. докл. конф. (27-29 апреля).-М., 1990.-С. 123,124.
88. Суркова О.Ю., Приходько Ю.Н. (а) Эффективность различных методов оздоровления смородины от вирозов // Плодоводство и ягодо-водство России / Сб. научных трудов ВСТИСП,- М., 1995,- Т.2.- С. 193198.
89. Суркова О.Ю., Приходько Ю.Н. (б) Вирусные болезни смородины в Европейской части России и совершенствование мер борьбы с ними // Молодые ученые садоводству России / Тез. докл. совещ. 20-21 июня 1995 г.- М., 1995,- С. 145-148.
90. Томилин A.A., Упадышев М.Т. К вопросу об эффективности оздоровления растений малины красной от вируса мозаики резухи с использованием метода культуры меристем // Ягодоводство в Нечерноземье/ Сб. научных трудов ВСТИСП,- М., 1993,-С. 25-29.
91. Трофимец Л.Н., Волкова Т.В., Миренкова H.H. Метод культуры тканей в картофелеводстве // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений / Научные труды ВАСХНИЛ,- М., 1979,- С. 123-128.
92. Трушечкин В.Г., Высоцкий В.А. Предпосылки для микрокпонально-го размножения подвоев и скелетообразователей груши // Плодоводство нечерноземной полосы / Сб. научных трудов НИЗИСНП. М.,1976.- С. 8-14.
93. Трушечкин В.Г., Высоцкий В.А., Леонтьев-Орлов O.A. Размножение клоновых подвоев яблони методом культуры тканей // Сельскохозяйственная биология,- 1992,- N 4,- С. 455-457.
94. Тулаева Н.И., Стыцко С.А., Белякова З.Н., Хорошко Р.Н. и др. Микроклональное размножение винограда на ионитных субстратах // Садоводство и виноградарство,- 1990,- N 2,- С. 14-16.
95. Туровская Н.И. Микроклональное размножение груши // Садоводство и виноградарство,- 1987,- N 6,- С. 22-24.
96. Туровская Н.И., Альшевцева Л.И., Звягина Т.С. Микроклональное размножение новых сортов черной смородины // В сб.: Селекция и сортоизучение ягодных культур,- Мичуринск, 1987,- С. 88-92.
97. Туровская Н.И. Размножение плодовых и ягодных культур зелеными черенками,- Мичуринск, 1988.- 21 с.
98. Туровская Н.И. Регулирование процесса ризогенеза при микроразмножении яблони // Микроразмножение и оздоровление растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве / Сб. научных трудов НИИ им. И.В. Мичурина,- Мичуринск, 1989,- С. 8-13.
99. Туровская Н.И., Стрыгина О.В. Микроклональное размножение малины // Садоводство и виноградарство,- 1990,- N 8,- С. 26-29.
100. Туровская Н.И. Микроклональное размножение яблони и груши in vitro // Садоводство и виноградарство,- 1994,- N 1,- С. 10-12.
101. Тюленев В.М., Нафталиев П.М., Осипова П.В., Расторгуев С.Л. Способ укоренения побегов яблони in vitro // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. И.В. Мичурина,- 1990,- Вып. 48,- С. 34-36.
102. Тюленев В.М., Расторгуев С.Л., Туровский И.И. Получение растений регенерантов из изолированных тканей земляники // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. И.В. Мичурина,- 1991,- Вып. 50,- С. 21-27.
103. Упадышев М.Т., Высоцкий В.А. Размножение ежевики и малины черной методом культуры тканей // Садоводство и виноградарство. 1991,- N6,- С. 24-27.
104. Упадышев М.Т. Клональное микроразмножение и особенности регенерации растений ежевики и малины черной in vitro //Дисс. . канд. с.-х. наук,- М., 1992,- 211 с.
105. Упадышев М.Т., Высоцкий В.А. Совершенствование процесса клонального микроразмножения ежевики и малины черной // Совершенствование технологии выращивания ягодных культур в Нечерноземье. М., 1992,- С. 42-53.
106. Упадышев М.Т. Клональное микроразмножение некоторых нетрадиционных культур рода Rubus // Ягодоводство в Нечерноземье. М., 1993,-С. 10-18.
107. Упадышев М.Т. Клональное микроразмножение нетрадиционных плодовых и ягодных культур // Молодые ученые садоводству России /Тез. докл. совещ. 20-21 июня 1995 г.- М., 1995,- С. 165-167.
108. Упадышев М.Т., Высоцкий В.А. Регенерационная способность эксплантов рода Rubus в зависимости от длительности культивирования in vitro // Сельскохозяйственная биология.- 1995,- N 1,- С. 85-88.
109. Фаулер М.В. Экономические аспекты промышленного культивирования клеток растений // В кн.: Биотехнология сельскохозяйственных растений,- М., 1987,- С. 9-43.
110. Хапова С.А. Влияние условий культивирования на клональное микроразмножение земляники и процессы ее адаптации к нестерильным условиям // Молодые ученые садоводству России / Тез. докл.совещ. 20-21 июня 1995 г.- М., 1995.- С. 156-158.
111. Хапова С.А. Условия культивирования in vitro и последующая продуктивность растений земляники //Автореф. дисс. канд. с.-х. наук,-М., 1997.-23 с.
112. Хасси Г. Размножение сельскохозяйственных культур in vitro // В кн.: Биотехнология сельскохозяйственных растений,- М., 1987,- С. 105133.
113. Цубера Л.В. Хемотерапия вирусов плодовых и ягодных растений в комбинации с культурой изолированных апексов // Автореф. дисс. . канд. с.-х. наук,- М., 1998,- 22 с.
114. Чернец A.M. Получение безвирусных клонов косточковых пород // Микроразмножение и оздоровление растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве / Сб. научных трудов НИИ им. И.В. Мичурина, Мичуринск,1989.-С. 21-22.
115. Шамина З.Б. Генетическая изменчивость растительных клеток in vitro // Докл. II Всеросийской конференции "Культура клеток растений", М., 1967,-С. 80-93.
116. Шевелуха B.C., Калашникова Е.А., Дягтерев C.B. и др. Сельскохозяйственная биотехнология М.: Высшая школа, 1998.
117. Щелкунова С.Е., Попов Ю.Г. Получение свободных от вируса растений малины путем культуры изолированных апексов // Физиология растений,- 1970,- Т.17, N 3,- С.618-622.
118. Шинкарева И.К., Шамина З.Б., Сарычев Ю.Ф. и др. Анеуплоидия в семенном потомстве регенерантов, полученных в культуре ткани табака // Генетика 1973,- N 9,- 2.
119. Юсуфов А.Г. Регенерация высших растений М.,1981.
120. Abbot A.J., Whiteley Е. Culture of Mallus tissues in vitro multiplication of apple plant from isolated shoot apices // Sei. Hort. -1976.-V. 4, N 1,- P. 183-189.
121. Abbot A.J. Propagating temperate woody species in tissue cultures // Sei. Hort.- 1977.-V. 28,-P 4.
122. Anderson H. M. Roting of tissue cultured rhododendrous // The Inter. Plant. Prop. Soc.- 1978,- V 28,- P. 135-139.
123. Anderson H. M., Abbott A. J. & Wiltshire S. Micro-propagation of strawberry plants in vitro effect of growth regulators on incidence of multiapex abnormality. Scientia Horticulturae.- 1882.- V.16.- P. 331-341.
124. Anderson W.C. Etiolation as an aid to rooting // Comb. Proc./lntern. Plant Propagators Soc.- 1982,-V. 31,- P. 138-141.
125. Baumann G. Möglichkeiten und Grenzen der Virusfrei-machung von Himbeeren durch Gewebekcultur// Obstbau.- Bonn, 1981,- Jg. 6, N. 3,- S. 88-89.
126. Ben-Jaacov J., Langhans R.W. Rapid multiplication of Chrysanthemum plants by stem-tip proliferation. Hort Science.- 1972. V 7,- P. 289-90.
127. Boulay M. Multiplication et clonage rapide du Sequoia sempervirens par la culture In vitro. In Annales de Recherches Sylvicoles, AFOCEL. Etudes et Recherches.- 1979- V 6, N. 12. Micropropagation dArbres Forestiers.- P. 49-56.
128. Boxus P. The production of strawberry plants by in vitro micropropagation. Journal of Horticultural Science.- 1974. V.49.- N 3.- P. 209-210.
129. Boxus P., Quoirin M., Laine J.M. Large scale propagation of strawberry plant from tissue culture // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. Springer-Verlag.- Berlin, Heidelberg, New York, 1977.- P. 130-143.
130. Boxus P., Damiano G., Brasseur E. Stlawberry. Handbook of Plant Ceel Culture. Crop Species.- 1984- V 3.-P. 453-486.
131. Broertjes C. Mutation breeding of vegetatively propagated crops. In: 5th Congr. Eur. Assoc. Plant breeding Res., EUCARPIA, Milan. 1968.-P. 139-165.
132. Broertjes C., Haccius B.& Weidlich S. Adventi tious bud formation on isolated leaves and its significance for mutation breeding // Euphytica.-1968,-V 17-P. 321-44.
133. Broertjes C. Use in Plant breeding of acute, chronic of fractionated doses of X-rays or fast neutrons as illustated wth leaves of Sentpaulia. Aric. Res. Rep. 776, 1972, Wageningen, V. 77 -P. 1-74.
134. Broertjes C., van Harten A.M. Application of Mutation Breeding Methods in the Improvement of Vegetatively Propagated Crops. Amsterdam: Elsevier Scientific Publishing Co, 1978.
135. Broertjes C. Indused variability in plant breedidg Centre Agrie. Publ.Doc., Wageningen, 1982.
136. Broome O.C., Zimmerman R.H. In vitro propagation of bleckberry // Hort. Sci.- 1978,-V. 13, N2,- P. 151-153.
137. Button J. International exchange of disease-free citrus clones by means of tissue culture. Outlook in Agriculture.- 1987.-V. 8,- P. 155-9.
138. Campbell R. A. & Durzan D.J. Induction of multiple buds and needles in tissue cultures of Picea glauca. Canadian Journal of Botany.- 1976.- V. 53,- P. 1652-7.
139. Carbanne F., Martin-Tanquy J. & Martin C. Phenolamines associees a I'induction florale et a I'etat reproducteur. Physiotogie Vegetale.- 1977.- V. 15,- P. 429-43.
140. Chaleff R.S. Induction, mointenance and differentiatio of rice callus cultures on ammonium as sole nitrogen source // Plant Cell Tiss. Org. Cult.-1983.-N. 2,- P. 29-38.
141. Chaturvedî H.C., Mitra G.C. Clonal propagation of citrus from somatic callus cultures // Hort. Sei.- 1974,- V. 9,- P. 2.
142. Christe C.B. Rapid propagation of Aspeus and silver poplars using tissue culture techniques // The Inter. Plant Prop.- 1978,- V. 28,- P 225260.
143. Constantin M.J., Henke R R. & Mansur M.A. Effect of activated charcoal on callus growth and shoot organogenesis in tobacco. In Vitro.-1977.-V. 13.-P. 293-6.
144. Converse R.H. Virus deseases of smoll fruits corvallis // Oregon, 1987,227 p.
145. Corley R.H.V., Wong C.Y. & Wool K.C. Early results from the first oil palm clone trials. Oil Palm in Agriculture in the Eighties. PORIM Conference, Kuala Lumpur, June 1981,- P. 1-27.
146. D'Amato F. Cytogenetics of differentiation in tissue and cell cultures // In Applied and Fundamental Aspects of Plant Cell, Tissue and Organ Culture, ed. J. Renert & Y.P.S. Bajaj.-1977.- P. 343-57. Berlin, Heidelberg and New York: Springer-Verlag.
147. Damiano C., Faedi W., Cobianchi D. Prove di stolonizzazione in vivaoio e osservazioni argonomiche su piante di fragola otteenute da colture in vitro. Frutticolture -1980 V. 42, N 1,- P. 51-60.
148. David A., David H. Manifestations de diverses potentiolites organogenes d'organes on de fragments d'organes de Pin martime (Pinus pinaster Sol) ed culture in vitro // C.r. Acad. Sei.- 1977,- V. 284,- P. 627630.
149. Debergh P., Harbaoui Y. & Lemeur R. Mass propagation of globe artichoke (Cynara scolymus): Evaluation of different hypotheses to overcome vitrification with special reference to water potential. Physiologia Plantarum.-1981,-V. 53.-P. 181-7.
150. Debergh P. C. & Maene L.J. A scheme for commercial propagation of ornamental plants by tissue culture. Scientia Horticulturae.- 1981,- V.14.-P/ 335-45.
151. Donnelly D.J., Vidaver W.E. (a) Leaf anatomy of red raspberry transferred from culture to soil. J. Amer. Soc. Hortic. Sei.- 1984,- V. 109,- P. 172-176.
152. Donnelly D.J., Vidaver W.E. (b) Pigment content and gas exchange of red raspberry in vitro and ex vitro. J. Amer. Soc. Hortic. Sei.- 1984,- V. 109,- P. 177-181.
153. Drew R.A. Tissue culture in horticultural crops // Seed nurcerytrader.-1980,-V. 78, N4,-P. 22-25.
154. Eichholtz D.A. & Robitaille H.A. Asexual apple embryos in nitre. Compact Fruit Tree.- 1980,-V.13.-P. 142-144.
155. Feucht W., Schmid P.P.S., Schimmelpteng H. e.a. Large-scale trial of raspberries propagated in vitro: 0,68 % of off types and enzyme pattern of atypical fruits. Erwerbsobstbau.- 1985,-V. 27.-P. 167-169.
156. Felman C.P., Read P.E., Hosier M.A. Effects of thidiazuron and CPPU on meristem formation and shoot proliferation. Hort. Sei.- 1983.- V. 22, N. 6,-P. 1197-1200.
157. Finne A. Micropropagation of Rubus spp. // Agr. Sei. in Filand.- 1986.-V. 58, N4,-P. 193-196.
158. Fonnesbech A. & Fonnesbech M. In vitro propagation of Monstera deliciosa. Hort. Science.- 1980,- 15,- P. 740-1.
159. Fossard R.A., Bourne R.A. Reducing tissue culture costs for commercial propagation. Tissue culture for horticultural purposes // Acta Hort.- 1977. -V. 78.-P. 37-44.
160. Franclet A. Rejeunissement des arbres adultes en vue de leur propagation vegetative. In Annales de Recherches Syluicoles, AFOCEL. Etudes et Recherches., Micropropagation d'Arbres Forestiers.- 1979.- V.6, N. 12,- P. 3-18.
161. Fridborg G., Pedersen M., Landstrom L. & Eriksson T. The effect of activated charcoal on tissue cultures: adsorption of metabolites inhibiting morphogenesis. Physiologia Plantarum.- 1978,-V. 43.- P. 104-6.
162. Garland P. & Stolz L.P. Micropropagation of Pissaldi Plum. Annals of Botany.- 1981.- V.48.- P. 387-90.
163. Haberlandt G. Kultinversuche mit isollerten pflanzellen // Sber. Acad. Wiss. Wien, 1902.- 111,- S. 69-92.
164. Hackett W.P. & Anderson J.M. Aseptic multiplication and maintenance of differentiated carnation shoots derived from shoot apices. Proceedings of the American Society for Horticultural Science.- 1967,- V.90.- P. 365-9.
165. Hartmann H.T. & Kester D.E. Plant Propagation. Principles and Practices. Prentice Hall.- 1975.
166. Hess Ch.E. Phenolic compounds as stimulators of root initiation // Plant Physiology.- 1965,-V 40.-P. 4, Supplement XIV.
167. Holdgate D.P. Propagation of ornamentals by tissue culture. In Applied and Fundamental Aspects of Plant Cell, Tissue and Organ Culture, ed. J. Reinert & Y. P. S. Bajaj, 1977.-P. 18-43. Berlin, Heidelberg and New York: Springer-Verlag.
168. Hollings M., Stone O. Techniques and problems in the production of virus-tested planting material // Sci. Hort., 1968,- N 20,- P. 57-72.
169. Howard B.H. & Oehl V.H. Improved establishment of in vitro propagated plum micropropagules following treatment with GA3 or prior chilling. Journal of Horticultural Science.- 1981,-V. 56.-P. 1-7.
170. Howard B.H., Jones O.P., Vasec J. (a) Long-term improvement in the rooting of plum cutting following apparent rejuvenation // Hort. Sci.- 1989.-V 64, N2.-P. 147-154.
171. Howard B.H., Jones O.P., Vasec J. (b) Growth characteristics of apparenyly rejuvenated plum shoots // Hort. Sci.- 1989,- V. 64, N 2.- P. 157-162.
172. Howard D. Grimes, Tomas K. Hodges The inorganic NO2": NH+ ratio influences plant regeneration and auxin sensitivity in primary callus derived from immature embryous of indica rice (Orysa sativa L.) // Plant Physyology.- 1990,-V. 136,- P. 362-367.
173. Hunter C.S. In vitro culture of Cinchona ledgeriana L. Journal of Horticultural Science.- 1979.-V 54.-P. 111-114.
174. Hussey G. Plantlet regeneration from callus and parent tissue in Omithogalum thyrsoides. Journal of Experimental Botany.-1976.-V 27.-P. 375-82.
175. Hussey G. In vitro propagation of Gladiolus by precocious axillary shoot formation. Scientia Horticuliurae.- 1977.-V.19, N 6.-P. 287-96.
176. Hussey G. In vitro propagation of the onion Allium cepa by axillary and adventitious shoot proliferation // Scientia Horticulturae.-1978.-V.9.-P. 22736.
177. Hussey G. (a). Propagation of some members of the Liliaceae, Iridaceae and Amaryllidaceae by tissue culture. In Petaloid Monocotyledons, ed. C. D. Brickell, D. F. Cutler & M. Gregory,. London and New York: Academic Press, 1980,- P. 33-42.
178. Hussey G. (b). In vitro propagation. In Tissue Culture for Plant Pathologists, 1980 ed. D. S. Ingrain & J. P. Helgeson, pp. 51-61. London: Blackwell Scientific Publications.
179. Hussey G. & Stacey N.J. In vitro propagation of potato (Solanum tuberosum L.)//Annals of Botany.- 1981,-V.48.-P. 787-96.
180. Huth W. Kultur von Himbupflanzen aus apicalen Meristem //Gartenwissenhehaft, 1979.-Jg.44, N 2.-S. 553-555.
181. Jones O.P., Hopgood M.E., O'Farrel D. Propagation in vitro of M. 26 apple rootstocks//J. Hort. Sei.- 1977.-V.52.-P. 235-238.
182. Jones, O. P. & Hopgood, M. E. The successful propagation in vitro of two rootstocks of Prunus: the plum rootstock Pixy (P. insititia) and the cherry rootstock F I2/I (P. avium). // Journal of Horticultural Science.-1979.-V.54, N1.-P. 63-66.
183. James D. J., Newton B. Auxin: citokinin interactions in the in vitro micropropagation of strawberry plant//Acta Hort.- 1977.-V.78.-P. 321-331.
184. James D. J. The role of auxins phloroglucinol in adventions root formation in Rubus and Fragaria groun in vitro // J. Hort. Sei.- 1979.-V.54, N4.-P. 273-277.
185. James D.J. & Thurbon I.J. Phenolic compounds and other factors controlling rhizogenesis in vitro of the apple rootstocks M. 9 and M. 26. Zeitschrift far Pflanzenphysiologie.-1981,-V. 105.-P. 11-20.
186. Jones O.P. Effect of phloridzin and phloroglucinol on apple shoots // Nature.- 1976,- V.262.-P. 392-393.
187. Jones O.P. & Hatfield, S. G. S. Root initiation in apple shoots cultured in vitro with auxins and phenolic compounds. Journal of Horticultural Science.- 1976,-V.51.- P. 495-9.
188. Jones O.P., Hopgood M.E., O'Farrel D. Propagation in vitro of fruit trees. Rep. East Mailing Res. Stn., 1976.-P. 79.
189. Jones O.P., Pontikis C.A., Hopgood M.E. Shoot and root development in vitro. Rep. East Mailing Res. Stn., 1977.-P. 176-178.
190. Jones O.P., Hopgood M.E. & Marks T.R. Morpho genetic substances in xylem sap. Report of East Mailing Research Station for 1980,- 1981.-P. 142-3.
191. Jones O.P., Marks T.R. & Waller B.J. Propagation in vitro // Report of East Mailing Research Station for 1981,- 1982,- 159 p.
192. Jones O.P., Pontikis C.A. & Hopgood M.E. Propagation in vitro of five apple scion cultivars. ournai of Horticultural Science.- 1979,- V.54, N 2,- P. 155-158.
193. Jones O.P., Waller B.J., Beech M.D. The production of strawberry plants from callus cultures // Plant Cell Tiss. Org. Cult.-1988.- N. 12,- P. 235-241.
194. Kamada H., Harada H. Stadies on nitrogen metabolism during somatic embryogenesis in carrot. Utilization of a-alanine as a nitrogen source // Plant Science Lettes.- 1984,- V. 33,- N7.-P. 7-13.
195. Kester D. The relationship of juvenility to plant propagation. The International Plant Propagators' Society, Combined Proceedings.- 1976.-26,-P. 71-84.
196. Krikorian A.D. & Bberquan D.L. Plant cell and tissue cultures: the role of Haberlandt. Botanical Reviews.- 1969,- V 35.-P. 59-88.
197. Krikorian A. D., Konn R.P. Micropropagation of daylilies through aseptic culture techniques // Hemerocallis Jornal.-1979.- 33,- P. 44-61.1.ne D.W. Regeneration of pear plants from shoot meristem-tips. Plant Science Letters.-1979.- V.16.-P. 337-342.
198. Matthews V.H. & Rangan T.S. Multiple plantlets in lateral bud and leaf expiant in vitro cultures of pineapple. Scientia Horticuliurae.-1979.- V 11.-P. 319-28.
199. McCown B. & Amos. R. Initial trials with commercial micropropagation of birch selections. The International Plant Propagators' Socieity, Combined Proceedings.- 1979.-V29. P. 387-93.
200. Morel G., Martin C. // Compt. Acad. Sci.- 1952.-V. 235.-P. 1324.
201. Morini S. Ingagini preliminari sulla micropropagazione del melo // Riv. Ortoflorofruttic.- Ital.- 1980,- V.64, N 1.
202. Mosella-Chancel L., Macheix J.J. & Jonard R. Les conditions du microbouturage irt ultra du Pecher (Prunus persica Batsch): influencecombinées des substances de croissance et de divers composes phenoliques. Physiologie Vegetate.- 1980.-V 18.-P. 597-608.
203. Murashige T. & Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures // Physiologia Plantarum.- 1962.-V. 15, N. 13,-P. 473-497.
204. Murashige T., Jones J.B. Cell and organ culture methods in disease therapy // Acta Hort.- 1974.-V. 36.-P. 207-221.
205. Murashige T., Serpa M. & Jones J.B. Clonal multiplication of Gerbera through tissue culture. // HortScience.- 1974,- V 9,- P. 175-80.
206. Murashige T. Manipulation of organ culture in plant tissue cultures. Botanical Bulletin Academia Sinica.- 1977,-V.18.- P. 1-24.
207. Murashige T. Plant cell and organ cultures as horticultural practices // Acta Hort.- 1977,- V 78,- P. 17-30.
208. Murashige T. The impact of plant tissue culture on agriculture // In Frontiers of Plant Tissue Culture 1978, ed T.A. Thorpe .- P. 15-26. Calgari: The Bookstore, University of Calgary.
209. Natavel L.M. L'utilisation des culture in vitro pour la multiplication de quelques especes legumieres et fruitieres. Comptes Rendus des Seances de l'Academie d'Agriculture de France.-1980, numéro special no. 8.-P. 68196.
210. Nemeth G. Induction of Rooting. In: Biotechnology in Agriculture and Forestry 1. Springer-Verlag Berlin. Heidelberg, New-York, Tokyo, 1986:.- P .49-64.
211. Nehra N.S., Stushnoff C., Kartha K.K. Regeneration of plants from immature leaf-derived callus of strawberry (Fragaria x ananassa) // Plant Sciense Limerick.- 1990,-V.- 66,.- N 1,- P. 119-126.
212. Nickell L.G. Crop improvement in sugar cane: studies using in vitro methods. Crop Science.- 1977,- V. 17,- P. 717-19.
213. Niemirrowicz-Szezytt K., Malepszy S. Micropropagaion from the meristems and young leaves of Fragaria. Bull. Pol. Acad. Sei. Biol. Sci.-1980,-V. 28,-P. 335-340.
214. Niemirowicz-Szezytt K., Ciupka B., Malepszy S. Polyploidsfrom Fragaria vesoa L. meristems, induced by colchicine in the in vitro culture. Bull. Pol. Acad. Sei. Biol. Sei.- 1984,-V 32.-P. 57-63.
215. Nienwkirk K., vanFordham J., Zimmerman R.H. Tidiazuron stimulation of apple shoot proliferation in vitro // Hort. Sei.- 1987,- V. 21,- P. 516-518.
216. Nishi S., Ohsawa K. Mass production method of virus-free strawberry plants through meristem callus. JARQ.- 1973.-V. 7.-N 3.
217. Novae F.J., Juvova Z. Clonal propagation of grepevine through in vitro axillary bud culture // Sei. Hort.-1983.-V 18,- N 3.-P. 231-240.
218. Peterson R.L. The initiation and development of root buds. In The Development and Function of Roots, d. J. G. Torrey & D. T. Clarkson, New York and London: Academic Press Ltd, 1975. -P. 125-161
219. Phillips I.D.J. Apical dominance. Annual Review of Plant Physiology.-1975.- V.26.-P. 341 -67.
220. Rabechault H. & Martin J. Multiplication vegetative du palmier a buile (Elaeis guineensis Jacq.). a l'aide de culture de tissus foliaires. Comptes Rendus des Seances de l'Acaderllie de Paris, 1976.-T. 283. serie D. 17357.
221. Rosati P., Gaggioli D., Giunchi L. Genetic stability of micropropagated loganberry plants. J. Horticultural Sei.- 1986.-V. 61, N1.-P. 33-41.
222. Rover A., Hendtrich C.M., Feucht W. In vitro Kulturen von Himbeer Triebspitzen under dem Aspekt der Virusfreiheit // Erwerbsobstbau.-1979,-Jg. 21, N2.-S. 28-30.
223. Sarwar M. The effect of different media and culture technicques oh planting efficiency of strawberry mesophyll cells in culture. Physiol. Plant.-1984.-V. 60.-P. 57-60.
224. Schimmelpfend H. Himbeerpflanzer aus Gewebekulturen Erfahzungen bei der Weiterkultur und im praktischen Anbau.- Obstbau (Bonn), 1983.-Jg 8, N7,- S. 321-324.
225. Schuster G. Der Einflub von Zytokininen und Verbindungenmit Zytokininaloger Wirkung auf die Vermehrung von Planzeviren und mogluche praktische Anwendungen // Potsdam. Forsch.- 1983.-N.35,- S. 127-142.
226. Sinnott, E. W. Cell and Psyche. The Biology of Purpose. Chapel Hill: University of North Carolina Press, 1950.
227. Sinnott, E. W. Plant Morphogenesis. New York: MeGraw Hill, 1960.
228. Skirvin R.M. Natural and induced variation in tissue culture. Euphytica.- 1978,- V.27.- P. 241-66.
229. Slivinski J.H., Preece J.E., Myers O. In vitro propagation of thornless bleck berries utilizing singl node explants // Plant propagator.- 1984,- V. 30, N 1.-P. 4-5.
230. Sobczykiewicz D. Preliminary note on mass production of raspberry plant through placing unrooted plants obteined from meristem culture directly in the soil // Fruit Sci. Reports.- Skierniewice, Poland.- 1980.- V.7.-N 1.
231. Sommer H.E. & Brown C.L. Plantlet formation in pine tissue cultures. American journal of Botany.- 1974.-V.61, supplement, page 11.
232. Sondahl M.R. & Sharp W.R.). Researchin Coffea spp. and application of tissue culture methods. In Plant Cell and Tissue Culture, ed. W. R. Sharp, P. 0. Larsen, E. F. Paddock & V. Rahavan,. Ohio State University Press, 1977.-P. 527-584
233. Snir I. Red raspberry (Rubus idaeus). Biotechnology in Agriculture and Forestry 6. Crops II, 1988.-N 6.-P. 124-141.
234. Speigel-Roy P. & Kochba J. Mutation breeding in citrus. In Induced Muiations in Vegetativety Propagated Plants.- 1973,- P. 91-103. Vienna: International Atomic Energy Agency.
235. Sriskandarajah S., Mullins M. G.& Nair Y. Induction of adventitious rooting In vitro in dufficult-to-propagate cultivars of apple. Plant Science Letters.- 1982.-V.24, N 1,- P. 1-9.
236. Sunderland N. Nuclear cytology. In Plant Tissue and Cell Culture, ed. H. E. Street, 1977,- P. 177-205. London: Blackwell Scientific Publications.
237. Swartz H.J., Galetta G.J., Zimmerman R.H. Field performance and phenotypic stability of tissue culture-propagated strawberries. J. Am. Hortic.Sci.-1981 .-V. 106.-P. 667-675.
238. Tazawa M., Renert J. Extracellular and intracellular chemical environment in relation to embryogenesis in vitro // Protplasma.- 1969.-68,-P. 157-173.
239. Walkey D.G.A. Production of apple plantlets from axillary bud meristems // Plant Sci.- 1972.-V. 52.-P. 6.
240. Walkey D.G.A. Production of virus-free plants by tissue culture. In Tissue Culture Methods for Plant Pathologists, ed. D. S. Ingrain & J. P. Helgeson, 1980,- P. 109-17. London: Blackwell Scientific Publications.
241. Wang S.Y., Steffens G.L., Faust M. Breaking bud dormancy in apple with a plant bioregulator, thidiazuron // Phytochemistry. 1986.-V. 25.- P. 311-317.
242. Wareing P.F. Phase chende and vegetative propagation // Improving vegetatively propagated crops. Academic Press Limited., 1987,- P. 263270.
243. Weatherhead, M. A., Burdon, J. & Henshaw, G. G. Some effects of activated charcoal as an additive to plant tissue culture media. Zeitschrift fur Pflanzenphysiologie.-1978.-V. 89.-P. 141-7.
244. Webster C.A., Jons O.P. Micropropagation of some cold-hardy dwarfing rootstocks for apple//Hort. Sci.-1991.-V. 66, N 1.-P. 1-6.
245. Welander M. & Huntrieser I. The rooting ability of shoots raised In vitro from the apple rootstock A2 in juvenile and in adult growth phase. Physiologia Plantarum.- 1981.-V. 53,- P. 301-306.
246. Welander M. In vitro of culture of raspberry (R. ideus) for mass propagation // Hort. Sci.- 1985,- V. 60, N 4,- P. 493-499.
247. Wetherell D.F., Dougall D.K. Sources of nitrogen supporting growth and embryogenesis in cultured wild carrot tissue // Physiol. Plant.- 1976.-V.37.- P. 97-103.130
248. Winton L.L. Morphogenesis in clonal propagation of woody plants. In Frontiers of Plant Tissue Culture, ed. T. A. Thorpe. 1978,- P. 419-426. Calgary: Calgary University.
249. Zimmerman R., Fordham J. Simplified method for rooting apple cultiwars in vitro//J. Am. Soc. Hortic. Sci.- 1985.-V. 110,- N. 1,- P. 34-38.
250. Van Nieuwe R.K., Zimmerman R.H., Fordham J. Thidiazuron stimulation of apple shoot proliferation in vitro. Hort. Sci.- 1986.- V. 21, N. 3.-P. 516-518.
251. Von Arnold S. & Eriksson T. Induction of adventitious buds on embryos of Norway spruce grown in vitro. Physiologia Plantarum.- 1978,-V. 44,- P. 283-7.
-
Вовк, Владимир Владимирович
-
кандидата сельскохозяйственных наук
-
Брянск, 2000
-
ВАК 06.01.05
- Хозяйственно-биологическая и селекционная оценка межвидовых ремонтантных форм малины в условиях Брянской области
- ОСОБЕННОСТИ КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ IN VITRO И УСКОРЕНИЕ СЕЛЕКЦИИ НОВЫХ РЕМОНТАНТНЫХ ФОРМ МАЛИНЫ
- Биологический потенциал ремонтантных форм малины и селекционные возможности его использования
- Особенности клонального микроразмножения in vitro и ускорение селекции новых ремонтантных форм малины
- Микроклональное размножение селекционных форм ремонтантной малины с использованием новых регуляторов роста
