Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности ферментативных нарушений в периферических нервах и в зоне денервации при ишемических и травматических поражениях седалищного нерва

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Особенности ферментативных нарушений в периферических нервах и в зоне денервации при ишемических и травматических поражениях седалищного нерва"

о-л

ад

АКАДЕМИЯ НАУК БЕЛАРУСИ ИНСТИТУТ РАДИОБИОЛОГИИ

УДК 616.833.58-001-092.9 : 577.15

ГРИБОЕДОВА Татьяна Васильевна

Особенности ферментативных нарушений в периферических нервах и в зоне денервации при ишемических и травматических поражениях седалищного нерва

03.00.04 — биохимия

Автореферат

диссертации па соискание ученой степени кандидата биологических наук

Минск — 1996

Работа выполнена в Белорусском научно-исследовательском институте неврологии, нейрохирургии и физиотерапии МЗ РБ

Научные руководители:

Оппонирующая организация — Институт биохимии АН Беларуси

сов на заседании совета Д 01.35.01 по защите диссертаций в Институте радиобиологии АН Беларуси по адресу: 220600, г. Минск, ул. Жодипская, 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института радиобиологии АН Беларуси.

доктор биологических наук Петровский Г. Г.; доктор медицинских наук, академик АН РБ, члеп-корр. АМН России, профессор Антонов И. П.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Стожаров А. Н.

доктор медицинских наук, профессор Висмонт Ф. И.

Защита состоится

Автореферат разослан

Ученый секретарь совета по защите диссертаций кандидат биологических наук

Ходосовская

скцая xapm^cthu работы

Актуальность проблема;. Среди патогенетически! неханизмов развития заболелануй периферической нервноЗ системы (ПНС) различной этиологии внимание исследователей привлекают механизыы формирования нейропатологического синдрома, вклэтвщегс развитие локального и системного дегенеративного процесса, степень которого в значительной иере определяется разбалансом ферментативных реакций, обслуживают! жизненно ввхные метаболические процессы, такие как энергообеспечение клетка (гликолиз, китохондриальное дыхание а фосфоралнрованле), обмен пуриксвых метаболитов (адениновые п пиршшдиновые соединения) Г Волкова О.Б. ,1971 ; Григорьеве U.S.,1982; Зуйенко ГТ.М. в др., 1950; Иванов Я.И. а др., 1977; Северин С.Е., 1963; Телепнева В.Й., 1975; Еевес Г.Р., 1966 з.

Развивашиеся вследствие поражения пнс

структурно-функциональные перестройки как в сякой нервной системе, так а в области денервации обусловлены нарушением функционирования обсирногс класса ферментов из группы протеаз - катепсинов, нейтральных в кзлыдей-заваскных тканевых протгаз, регулирующих механизмы образования в распада большой группы биологически активных .регуляторов, участвующих в функционировании каллюереин-кнниновой , осиоидной систем в т.п. t Будкяков В.В., 1974: Верекеенхо К.Н., 1888; Гсмазков О.А., 1993; Ильин B.C., 1972; Локзнина Л.Л.,1994; Орехович В.Н. в др., 1984; Чернух A.M., 1976 ].

Тем не менее, несмотря на довольно обширный фактический материал о ферментативных нарушениях в тканях про денервации, до настоящего времени довольно трудно выделить единую точку зрения на роль этих процессов при поражения ПНС. Трудности в обобщении фактического материала связаны с одной стороны с полизтаологичностыо вариантов поражения ПНС а сложностью генеза заболевания, с другой стороны - отсутствием системных комплексных исследований, выполненных на различных моделях поражения ПНС в едином методологическом югоче. Все это затрудняет формирование стройной концепции патогенетической терапии поражений периферических нервов (ПК).

В фундаментальном аспекте биотический анализ динамики энтаыолопгческих процессов в пораженных тканях в формирование иеханизиа развития нейродистрофвческого процесса позволит оценить особенности метаболизме ПН ь" сравнению с центральной нервной системой, а также выявить специфику обменных процессов в тканях с

нарушенной иннервацией. В конечной итоге, выявление ключевых ферментативных звеньев, цграие^х вавную роль в развитии заболеваний ПНС, исследование в эксперименте возможностей эффективной метаболической коррекции uz tn vivo , мешет оказаться весьма перспективный ::рправленяеи в поиске патогенетической терапии при лечении заболеваний ПНС.

Сшэь_роботы ^ крушшил научны^ программами^ темами .

Диссертационная работа выполнена о райках проблею! 26.03 (номер госрегистрацин теса - 1994347 от 07.02.1994 г. "Заболевания периферической нервной системы", составной частьв которой является тема "Экспериментальное изучение типовых патологических реакций при поражении нервов различного генезс, объективизация тявести состояния и изыскание способов патогенетической терапии", которая выполнялась в Белорусской НЖ неврологии, нейрохирургии в физиотерапии.

Цель работы. Изучить в эксперименте на различных моделях поражения ПНС особенности ферментативных карувеннй в системе гликолиза,' состоянии аденилатдезаминирувдзй активности, а такте динамике тканевых катепсинов , нейтральных с сывороточных протеаз и оценить возможность н эффективность фармакологической коррекции указанных групп ферментов фармакологическими препаратами с различном механизме« действия.

В связи с этап предполагалось ресекие слЕдусцих задач:

- изучать дднамику- активности ряда ферментов гликалитнческой систем (гексокиназы, лактатдегидрогеназы) в специфической дегидрогеназа. цикла Кребса - НДДФ-излцитратдегидрогеназы в тканях хавотных при порагешш ПН нервов различной этиологии;

- оценить состояние протеолатических ферментов различных классов о выявить законо^рностп их активации в тканях и крови животных в различные срока после травматического, нсемического а токсического повревдения ПН;

- исследовать состояние аденалатдезаминирующей активности в скелетных мышцах кроликов с поражением ПНС различной этиологии и выявить динамику и особенности этой метаболической реаклии на ровреадение ПН;

- оценить в эксперименте влияние некоторых лекарственных препаратов с различный фармакологическим действием на состояние а данаинку активности ферментов гликолитической, протеолитической а аденилатдезаминирупцей систем в тканях а крови животных в условиях моделирования различных вариантов поражения ПН.

Научная новизна работы

1. Установлено, что при травматической повреждении ПН наблюдается нарушение ферментативного баланса гликолитической системы белых и красных мышц, при этой изменения наблюдаются как в области денервацаи, так и на контралатеральной конечности.

2. Активация кислых и нейтральных протеаз в скелетной мускулатуре , пораженном ПН и сыворотке крови является, характерной метаболической реакцией организма животного в ответ на повреждение ПНС. 3 дистальном участке поврежденного нерва уровень активации кислых протеаз в ответ на поражение нерва выражен в большей степени, чем в проксимальном, что может свидетельствовать о наличии механизма регуляции активности этой группы ферментов, связанной, по-видимому, с аксональным транспортом биорегуляторов * от тела нейронов к терминальным структурам.

3. При поражении ПН наблюдается угнетение аденилатдезаминирующей активности, степень которого определяется характером поражения нервного ствола, связана с длительностью денервационного периода а может быть существенно скоррегированя с помощью ряда фармакологических препаратов.

4. Полное ала частичное прекращение иннервации одной конечности не ограничивается развитием локального нейродастрофического поражения тканей . Нарушение односторонней афферентной регуляции наряду с системными нарушениями нервно-регуляторных механизмов приводит к функциональной дезинтеграции сегментарных образований в спинном мозге, что сопровождается функционально-метаболическими расстройствами в интактной области симметричной конечности животного, объективно проявляющимися в изменении активности ферментов гликолитической, протеолитической и аденилатдезаминирующей систем.

5. Фармакологические комплексы, включающие препараты сосудистого, аналитического а дегидратирующего действия могут существенно изменять активность m vivo ферментов гликолитической,. протеолитической и аденилатдезаминирующей систем, оказывая в ряде случаев эф^кт нормализации патологических уровней всех изученных групп тканевых ферментов, вызванных повреждением ПН.

Практическое значение^ работы

I.Полученные п работе данные по фармакологической коррекции патологических уровней фермент."ивной активности в гликолитическоЯ, протеолитическуД и адонилатдезаминирупцей системах спидетрльствуют о

целесообразности вхлдоения препаратов аналгетичесхого, вазорегулирувдего в дегвдратврул&го действия г терапевтические комплексы, которые едедует применять ори поражении ПНС травматического в ишемичесхого генеза в использовать щи выработке эффективных способов медикаментозной терапии заболеваний нервной системы.

2. Показано, что повывение уровня протеолипгчесхсв активности в крови мохет служить критерием степени развития невропатологического процесса в посттравматическоы периоде в являться объективное характеристикой формирования иейрсдастрофечесхого процессе. Это мохет быть использовано в лабораторю-клинической практике для формирования экспертной оценки степени выраженности патологического процесса, а также для выявления стадий дегенеративно-регенераторного процесса в ПНС. >

На защиту выносятся следувере положения : ..-/.*

I. ' Характерное метаболической , чертой травматических и токсических-поражений ПНС является нарушение ферментативных процессов в гликшштпческой, протеохнтической в аденилатдвзамшшрупцей системах в ПН и мышечной ткана на стороне поражения в в морфологически идентичных структурах антакткой конечности. Эти нарушения охватывают-ключевые метаболические рвенья, лежат в основе развития структурно-функциональных перестроек в ПН в в значительной мере обуславливает клиническую картину при заболеваниях ПНС различной этиологии. ' . « -

. 2. Метаболическая коррекция патологических уровней ферментативных наруиеннй ж ' системе гликолиза, тканевого и сывороточного протеолиза, * а также в механизмах эндогенного аденозиндезаминирования может быть достигнута с помощью препаратов аналгетического, вазорегулирухцего в дегидратиружщего действия, применение которых патогенетически обосновано.

Личный вклад соискателя . Материал, диссертации собран, обработан и проанализирован лично автором при консультативной помощи руководителей.

Апробация материалов диссертации и публикации.По теме диссертации опубликовано 14 работ в сборниках научных трудов по вопросам заболеваний периферической нервной системы, журналах "Здравоохранение", "Патологическая физиология и экспериментальная терапия". Основные материалы доложены на Научных сессиях НИИ неврологии, нейрохирургии и физиотерапии в 1992,199",1994 и 1995 г.г.

о

Структура диссертация. Работа изложена на 97 страницах нашнопасного текста, содержат _ 7 иллюстраций а 17- таблиц, экспериментальный материал представлен в 3 главах . Список литературы включает 196 источников, из которых 70 на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследовайия. Работе проведена на беспородных половозрелых кроликах обоего пола (273 от) и лабораторных крысах (34 от).

Моделирование поражений нервного ствола осуществляли: путем односторонней перерезки садаливдого нерва (СН) в верхней трети бедра в месте выхода нерва аз грусевидного отверстия с одномоментным спгеаниеы(нейроргк£ая). Хроническое с давление нерва кролика нзлогениеи плотней садковой лигатуры в верхней трети СН . Полную гдакаи конечности создавали налогекпем лигатуры на правую и левую подвздосные артерии, а частичную ивяшп - наложением лигатуры на бедренную артерст. Оперативные виепательствз на ихвотных проводили под гексеналовыи яархозоа а доза 60-60 иг/кг.

В соответствуете цзллм эксперимента срока посла операции еявотных забивала, быстро извлекали ткана икроножной" илщы (Ш), СН, , головного мозга. йз тканей готегяхз гоиогёнаты общепринятыми препаративнша иетодакз.

¡¿етоды исследования фе^янтатавных реакций. Кислые протеазы (КП) в тканях оценивали по интенсивности гидролиза гемоглобина с применение« реактива Фолана гСопреы. изтоды в биохишя,1977], актирность нейтральных протеаз (Ш) определяли по иетоду Кунитца (Биоиш. иетода кссл. в клинике, 1968]. Активность аденилатдезаманазы (АДА) (КЭ 3.5.4.6.) исследовала спектрофотоиетрзчесгаш методой ¡Соврем, метода в биохтк!и,1977]. Активность лактатдегидрогеназы (ЛДГ) ОПреДеЛЯЛИ ПО ЦеТОДИКе с феНЗЗШГОУ СЫаррг^песЬк С. е.а.. 1966], гексокиназы (ГК) - спектрофотоцетрическп с Саакян Я.П., Плесков В.П., 1977;, НАДФ-изоцитратдегидрогеназы (НАДФ-ИДГ) по цетоду г ¡«т г. р.,)..!''«]. Содержание а соотношение изоферментоп ЛДГ определяли 1жтодом диск-электрофореза в полиакралашдноы гела с последующей денситсиетрией г:. <-1-- -¿т.

Содержание белка определяли биуретовыа способса сСкоупс Р., 1985".-Результаты ис;слелорания_ н их обсуждрние I.Ферыентативные нарушения в тканях животных при травме нервных

о* *одов

Нарушение иннервации иытечной тклнн вызывает з ней ряд сложных

патофизиологически!, морфологически! в биохимических изменений. Ферментативные сдвиги в данервировании! тканях возникает не разных стадиях дистрофического процесса в обнаружены практически на всех направления! шзне деятельности клетка (энергетика,

структурно-пластические процессы, регуляторный аппарат и др.) Уы исследовали активность ряда ферментов, функционирование которых способствует формированию метаболического ацидоза, являющегося в свою очередь фактором активации кятепсинов в гидролиз.

На подели нейрорафии СН с последующим сшваниеи установлено, что через 7-10 сут после операции активность ГК в денервированной конечности снижается на 41X. Активности ДОГ в НАДФ-ИДГ в мышцах оперированной конечности практически не отличались от контрольных величин. Через 30-40 сут после нейрорафии активность ЛДГ в ГК в оперированной конечности возрастает в 2,6 раза, а НАДФ-ИДГ - в 3,3 раза. В интактной конечности наблюдалось повышение актвности ЛДГ 'и НАДФ-ИДГ приблизительно в 1,5 рвза, при неизменной активности ГК. Следовательно, в поздние сроки (30-40 сут) после нейрорафии происходят уже существенные изменения активности изученных ферментов и в оперированной в в интактной конечностях.

Установлено, что денервация / шшцы приводит к изменению в ткани спектра изоферментов ЛДГ," что свидетельствует как о перестройках в работе белоксинтетического аппарата так в о переводе на новый метаболический уровень гликолнтиче ского пути энергоснабжения мывцы.

Таким образом, нарушение иннервации одной конечности не ограничивается локальными сдвигами ферментативных процессов на стороне поражения. Изменения наиболее выражены в денервированной мышце и обусловливаются, вероятно, нарушением афферентной регуляции и приводят к функциональной дезинтеграции сегментарных образований спинного мозга. Последняя в свою очередь вызывает наруление неврогенной регуляции обменных процессов в ИЫ неоперированной конечности.

После денервации ферментативный дисбаланс наиболее выражен со стороны протеолитических систем . Ыы определяли активность протеаз в тканях после нейрорафии СН. Установлено, что повреждение нерва у кролика вызывает наиболее сильную активацию КП в дистальном от места травмы участке нерва (повышение активности достигает 5005 по сравнению с интвктной тканью животного). К 30 сут после нейрорафии активность ферментов в СН несколько снижается. " мышечной ткани

о

такзе наблюдается рост активности КП, пропей сна увеличена больпе к 30 сут после травки, иояно откетять, что начальный период денервации характеризуется также некоторым повысенаеи активности .ферментов в сыворотке крова.

Пзютшния активности протеолатачеекдх фер^ентга в начальные срока посла хронического сдавленна СИ прэдетгвлег-ты в табл.1.

Таблица 3;

Активность кзелих протеаз (ют субстрата/ст белка) в тканях кролика пра зссшрессга седалзцного нерва ( X - э

: Тхзнь | Кснтоагь Посттравматический период

• | ( п=в > г 1-е сутки (п=Ю)| 3-й сутки (п=10)|

|Свдал!Е31ый нерв 24,40 - 5,50 47,04 ± 5,56 * 51,48 ± 6,11 * !

¡Вкронспная кыица 30,62 - 5,27 26,33 ± 5,20 . 31,93 ± 6,62 |

¡Сшгорстка кроет 5,57 - 0,52 4,63 - 0,32 4,70 ± 1,64 }

*- Рэзлтчод достоверна по отнееэнзз к шггактноЗ ткаш

Ездно, что а гсиогсизгах П1 п сыворотка ■ гфопз кролика . интенсивность протеаз в этот пнрзод наблэдзней остается без азиененза. Однако в нервной ствола щ гадги значителыюз повышение активности КП. , начиная уге с первых суток посттраваатического периода.

Значительный рост активности протеаз в ПН при хошресспи (прячем активация ферментов в дисталькоц отрезке нерва выге, чем в проксимальном) наблюдался через 10 сут после операция п достигал 300 % по отнозешт к интактноиу нерву. Через 30 сут после хронического едявления ПН протеолятичесхая активность в возрастала почти в 6 раз, в СН (проксимальная часть от игста славленая ) активность протеаз увеличивалась в 2 раза, в дпетальной часта нерва - в 4 раза. Спустя 3 нес в пораженном нервз сохранялась высокая активность ферментов, однако в дистальном конце его протеолиз подал, что может, быть связано с прорастанием аксонов а частичным восстановлением процессов нервно-трофического обеспечения иетабоднзыа .

Определение активности КП после нейрорефап СН показало, что через 30 сут после операции протеолитическая активность в ЕМ и СН по сравнении с ннтактней конечностью также возрастала в 9 раз. Спустя 60 суток после нейрорафии атгвность ферментов в ИМ была выше нормы в 3 раза, а в СН - в 4 раза. Следовательно, нейрорафия СН

сопровождается быстрый нарастанием активности КП в денервированных тканях.

Динамика протеолпгической активности в тканях кролика при ишеиическои поранении конечности представлена в табл. 2. В мышечной ткани при этой патологов прослеживается устойчивая тенденция к нарастаншо средних величин активности. Частичная ишемия продолжительностью 2 недела приводила к достоверному увеличению активности протеаз в ИМ. В (Ж изменений ферментативной активности не наблюдалось.

Рассматривая совокупность полученных результатов биохимических исследований, можно видеть, что усиление протеолитической активности в тканях при денервации является характерной метаболической характеристикой дегенеративно -деструктивного постденервационного процесса.

.Таблаца'2

Активность кислых протеаз (ыкг субстрата/иг белка) в тканях кролика при шпешческих поражениях конечности- ( X - э- )

Условия' эксперимента Число ■ .—......I-....... Икроножная Седалищный

животных imm^n нерв

Контроль : 8 6,75 ± 1,74 26,15 1 8,88

Полная ишемия (I ч) '8 9,25 - 2,08 28,81 ± 6,55

Полная ишемия <3 ч) • 4 7 11,17 ± 5,13 28,38 ± 6,41

Частичная'ишемия 12 14,95 - 2,03* 38,30 - 6,92

■ (2 недели).

* - Различия достоверны fio отношение к интактной ткани

Максимальная активность, протеаз в нервном стволе при его сдавленш отмечена х 10-14 рут наблюдения. Лишь незначительное повышение активности в сыворотке крова к 14 сут денервации является, вероятно.следствием наступления периода угасания протеолиза в крови, так как болевой синдром, вызванный повреждением начинает ослабевать.

Считается, что при сдавлеши нерва играет роль смещение перехватов Ранвье, ведущее к демиелинизации волокон вблизи перехвата. После того как в месте ущемления развилось валлеровское перерождение, проксимально от этого уровня возникают трофические изменения в аксонах, которые сопровождаются вторичной демиелинизацией а дегенерацией затухающего ретроградного типа [Proteases,19793. Ш полагаем,. что значительную роль в этих

У

процессах кграет активный ограниченный протеолиз, который приводит к структурным нарушениям в невральных оболочках и запускает каскад биохимических процессов, ведущих в конечном итоге к демиелинизации волокон.

Нами проведено исследование активности . АДА • после травматического повреждения нервного' ствола. Физиологическая роль АДА до конца еще не ясна, хотя имеющиеся экспериментальные данные дают основание полагать, что функция фермента связана с сокращением мышц. Высказано предположение, что в мышце АДА участвует в цикле пуриновых нуклеотидов, метаболическая роль которого состоит, в частности, в стабилизации "энергетического, заряда" и продукции аммиака. Известно, что относительные концентрации адениновых нуклеотидов в клетке имеет большое значение в регуляции обменных процессов а.г?..1997].

Уы изучали зависимость активности АДА . от продолжительности денервационного периода. Установлено, что после травмы нерва происходит быстрое снижение уровня АДА в скелетной мышце, причем дянаиика снижения активности; нарастает с .увеличением продолжительности денервационного периода. Выявленное' угнетение активности АДА о денервированной ыыпцо, по-видимому, отражает один из основных 1кхашзыов перевода энергетического метаболизма на анаэробный путь, поскольку снижение количества , инозиновых компонентов в тканях с неадекватным нервным контролем способствует нарушение баланса в адениловой системе и, как следствие, ведет к перестройке энергетики клетки.

Для более полной картины в динамике фермента была изучена активность АДА на модели кошрессии СИ (табл. 3).

Таблица 3

Активность аденилатдезаминазы (мкмоль АМФ мин/мг белка) в икроножной мышце кролика при травме седалищного нерва (X ± г>-)

Характер Посттрав- Число Интактная Оперированная

повреждения матический период(сут) животных конечность конечность

Хроническое 14 6 2,55 4 0,13 1,87 ^ 0,38

сдавление 30 6 1,98 4 0,45 '0,96 - 0,25 *

Нейрорафмя 30 ч 1,94 4 0,36 0,34 ± 0,06 *

___________________ 60 в__________ 3,06 * 0,21 0,66 - 0,13

Достоверность различим по отноюннс к интактной ткани

Установлено,что ута через 2 недели после хронического сдавленна СН активность АДА начинала снижаться в составила в этот период 73 X по сравнении с внтактной конечностью. Увеличение сроков коипрессии до 30 сут приводило к уменьшена» активности ферьазнта на 50 X. Б

двух сериях экспериментов через 30 в 60 суток после нейроря$ие СН были получены следующие результаты : через 30 сут после оперативного вмешательства активность АДА в ПК достоверно снзхена в составила 16 X от контрольной величины. Спустя 60 сут она уменьшалась в 5 раз.

7вким образом, острая травка нервного ствола на всех изученных моделях вызывала существенное взшзненве активности ¿ДА в Ш. Про других вариантах поражения нервного ствола (после создания частичной ишеиии конечности) определена активность АДА в ЕИ в СН кролика. Результаты исследований представлены на pic. I.

15

10

m- о

П

1.0

0,5

•

Ti

ь 0

иытрв нерв

Рис. I. Активность аденнлатдезаминазы ( А, мкЫ/мын мг белка)

в икроножной мышце в седалищном нерве кролика после

частичной ишемии конечности продолжительностью 14 с/т:

а - интактная конечность, б - опытная конечность Видно, что активность фермента в ИЫ интактной конечности в 20 раз

выше, чем в СН. Однако, если через 2 кед после оперативного

вмешательства активность АДА в мышечной ткани составляет 90 % по

сравнении с внтактной, то в СН в это ге срокп citopocri дезаьгииаровакия пуринов при щпгютескса порзгзнзз скитается е большей степени, чей в отечной.

?кеньпензе кхлщентрзшгл ¿1*3, производимое АДА иетсет способствовать создании "правплыви" стносителыых кснцеггграшгЗ ATO, АДФ, AL'3. Дезаюнаровоккз пур*пювих нуклэотндных компонентом клетки ссяров езда е тся наксаленпеи шюзтювых нуклеотпдоз. для которых установлена способность поддгзрглпззть уроЕзнь ATí в ьатачшх клетка! COevous И.О., 19871, усаЛПВЗТЬ действие зденозгнэ 3Í3 гладкошппечные клетка сосудов скелэткоЗ .цускуЛзтурм. С другой стороны, контроль распада адгкезанз я его фосфорплнровши производных является факторш . регуляции -ватейгзх фврнпгг^э анаэробного превратная углеводов (фосфорзяазы а {¡осфофрукгогзхал} споддубная З.А., 1992; Passonneair Y.V.. ,19623.' ,

• 2.Цотабо*ичесзше последствия нарусзнЕй ' СерггактатазноЗ активности в тканях посла травга .. ПНС п уутп шс

фармзхологячесхой корре?;цгэ Пра обосновании выбора препзратез дяч хоче;гзл гнвоткух с поразянаяиа ПН ш исходила аз nsoâxâstssscni воз.^й5от23Я на pssisera, патогенетическое значение »торах дзетвт-зчкэ ояределано . 3 sî c-j аспекте наиболее вкфорыатявжы язлает-са азучйгйз де^сталя m vivo терапевтических канцектрацнй того злз ячегэ ^ркхшюппесхю-о средства на ферментный спектр тханз.

Наш изучено действие *вр»с£яггйческм козгиггшаз, coo&s нейрорафиа срохса 60 сут! цатохреа С,sits-siroí,оСг <дзл (I) п дяззхс, гакглерон, дюядрол, никотиновая лнаштэ (2). Фзрхзкслаг^згскпе средства, входядае s указанные комплекса испе.ГлгтЕгея пра лечении заболеваний ПНС. Препараты вводили Bayîpajtccs'ssî в еяерзрозаннув пли здсрсвую конечность в течение 30 сут. Покззятго, через 30

сут посла оперативного вмеватедьствг аггазкость п; С-i.-* .достоверно снижена, ДДГ понижается по сравнешэ с Н2сперзрозаш:с4 яскечкостью, а НАДФ-ЩЦ* повышается в 2 раза. Роста вве-лп^л '-~0™рсвя;шнм зшвоташ комплексов I а 2, наблюдали позааннао актазкеет:-* ЛДГ s 3,4 раза по сравнению с контрольной конс-таостьгя. ■ Активность П£ после ■лечезкя комплексом также была достоверно пошшгнз .Такгз сп;эчеко повышение активности НАДФ-ИДГ в денервированной кСйачнсстп после леченая комплексами i п 2 .Установлено, что в пнтактной ikzv уровень фермента повышен в близок к уровню, поЛученнсцу песле

30-дневной, денервации. Такйм образом, нарушение иннервации приводило к уменьшению активности ЛДГ и ГК и увеличению НДДФ-ИДГ. Комплексы фармакологических веществ однонаправленно изменяют активность, всех вышеуказанных ферментов в денервированной мыице.

Была исследована активность ЛДГ иНАДФ-ИДГ, а также определено содержание и соотношение изоферментов ЛДГ после нейрорафии в скелетной мышце и нерве кроликов посредством диск-электрофореза в ПААГ. В состав терапевтических комплексов били включены в разных сочетаниях следующие фармакологические препараты: анальгин, аминазин, витамин Bg, К3 или менадион и кислород. Активность ЛДГ после проведения терапии возрастает, также увеличена активность НАДФ-ИДГ в ИМ и CH. В изоферментном спектре ЛДГ СИ по- сравнению с таковым HU не определяется один из изоферментов, который по предварительным данным, представляет собой ЛДГ5 . В нерве, таким образом, представлены "аэробная" и промежуточные-формы изофермектов ЛДГ, что ближе к отношениям,' типичным для интенсивно давящих тканей, например, головного мозга. Применяемые комплексы не вызывали существенного изменения ' соотношения изоферментов ЛДГ нерва и приводили лишь к некоторому перераспределению в изоферментном спектре мышцы.

При лечении животных комплексами обзздан-анальгпн а обзидан, исследовали активность ПС, ДДГ в НАДФ-ИДГ в гомогенатах ИМ.. Установлено, что через 30-40 сут после нейрорафиа изменяется активность всех изученных ферментов в денервированной мышце. Активность ГК и ЛДГ повышена в 2,6 раза, НДДФ-ЙДГ -в 3,3 раза. В интактной конечности наблюдалась увеличение активности ЛДГ и НАДФ-ИДГ приблизительно в 1,5 раза, активность ГК при это^ не изменялась. В интактной конечности активности ЛДГ, ГК и НАДФ-ИДГ остаются на уровне контрольных величин. В денервированной конечности после проведения курса лечения мы отмечали снижение активности НАДФ-ИДГ, ГК и ЛДГ. Лечение комплексом обзидан>анальгин приводило к достоверному снижению активностей ЛДГ и НАДФ-ИДГ в оперированной конечности, при этом активность ГК не изменялась.

По-видимому, . стимуляция НАДФ-ИДГ-реакции в денервированной мышце отражает интенсификацию биосинтетических процессов, обеспечиваемых фондами НАДФН, в генерации которых принимает участие •НАДФ-ИДГ. Изменение активности ЛДГ на этом фоне ведет к более быстрому снижению метаболического ацидоза и вовлечению промежуточных субстратов в окислительные превращения в цикле Кребса. Лечение

KomreKccjí обзадан-анальггн а обзпданом нормализует активности ЛДГ НАДФ-ИДГ в интактной хонечности, в оперированной отмечается снижение активностей ЛДГ и НАД&-ЯДГ (обзидан+англьгпн) п НЛДФ-ПДГ (обзидан).

Исследована активность КП после сдавлеиия СН я -коррекции протеолиза пнгибатороц протеолптаческоЗ активности гордоксс:.;. Показано, что введение гсрдскса приводит к нормализация активное::: КП в проксимальной конце нервного ствола, в остальной участке поврежденного нерва протеолаз снпзается в 2 раза.

При определенна актпвностл НП после сдавлешя СН н введения ингибитора протеолатнческсй ехтавкоста контрякала; Установлено, что активность НП в гомогенатах Ш п СН нормализуется. После лечения животных после нейрорафзя СН прспаратса наиацпт, э такте ко'.шлексси, включающим наыацит, лазикс, сер:дзон п ваташи Е, установлено, что во всех сериях опытов в сперзрованноЗ конечности" актзвноуть 1Ш остается более высокой в тканях пораженной конечности-, чем в интактной. Гак после нейрорафиа а курсового леченая кроликов, наиацятси, активность протеаз составила 5С0 5 э I-J, в СН сна была еыея нериа з 2,4 раза. Введение выетухазанного коаплэкез праводало к увеличению активности протеаз в И и СН приблизительно в 3,5 раза.Однако добавление в комплекс препаратов лагакса я сгрс^спа-споссбстауе? <5ожс<г сильному снивекшэ активности в псравешсЗ конзчноста. Пеетатычг яктшзация протеолазз является оажюаг этзкоа в íssxmsisira разутая постденервацаонпых дегенератшзно-дзсгрсфзчесйях лэругялий з области денерващш с Иванов H.H. я согвт.,19773, •:srn.o полагать, что установленное выраженное скЕггше скорссгл сротеслазэ при комплексном лечения гпвотннх является пмсзптелыгУ!! фактора« в тактике терапии декервацаонного сандро^з. В то ^з ерзая; учитывая зцидоэ-коррзгярутщуп способность наиацата in vivo, агздуат признать полезкш Еклпчекпе его в схеиы ко!Шле:ияюго лс*:з:пя трзЕмцтическнх nopaseicifi ПН.

После создания частичной аокзчпо-тп у ггролгосов ü

лечения верапашалоа, взтаканагл Bp С а лагзхсс:; установлено,

что активность КП в ИЫ п СН по сравлеишэ с питактио^/лэ^юстьв не неняется. Активность НП в гогюгенгтах IM слпгхгетсл до контрольна величин. В гсиогенатах СН паблэдзется уиэтгыгзкяе зктпвноста з 2 по ерзвнэшш с пнтактней :сснечпсс7ьз. •. Тз:шц сбрзгсн, превздеш-о курсового лечения верапагалсу, ваташнаиа Bj , "С и лазп::сс^ способствовало нормализации активности КП и НП п применение стсгч фарнэкологнческого комплекса целесообразно при терайпп ЕЕеютас::::;с

порахзний ПНС.

Установлено, что прианенне ингибиторов протеаз повшляст эффективность лечения трофачссхах нарушений: уизньааетса число случаев появления тропических язв, облггчзется клиническое течеше пзтслогического процесса п в ряде случзев идет ускоренное заживление трсфтческих язв , тскш образец , целесообразно попользовать .ингибиторы протеолнтичесхой активности дхя коррекции локальных нейродастро^ий. Денервсция кнгц ссоровоядается ызыгненаем в ней спектра иэоферыгнтов ЛДГ и активности ЛДГ, ГК а К4Д®-НДГ. которое иоает быть скоррегпровано коиокекс&из фзриахологпчеекпх препаратов, • включаввдх обзндан, анальгин, наигцат, лазакс, сершон.

Таким образоа, воздействуя на ацвдоз-фор1арупгзе феризнтше систеш исазю предотвратить, чрезмерное зекиелгше тканей и очаге данервацаа б, соответственно, акти^ацаэ протеолвтических ферыгнтов.

ВЫВОДЫ

1. Патобиохи^цчгские иэхшшз^н поражений периферической, нервной ссстеыы травистнческой, Е^ашческоЗ н токсической этиологии бклзчяэт в себя ряд фэр^Еэктатщшых нарусэкий как в облсстп декзрхзоцЕи тек п в аналогична тканях контраяатерольней ентектксй конечности. Прекрацэние нервного контроля за ткакех^д! изтйболазгззу дезорганизует равновесие во внутриклеточной састеаз гликолиза, проводит к быстрой, активации протеолитических фер^нтов в зона поражения в резко угнетает механизм ферментативного дезгшнпрованая пуриновах изтаболитов в скелетной иуезеуяотуре.

2. Характерной особенностью постденервационного иетвболазиа скелетной мускулатура является быстрое нзианенпе обгцей активности в изофериентного спектра лактатдегидрогеназы, гексокнназы в НАДг-изоцатратдагидрогеназа. НаруЕзние функций лактатдегидрогеназы в пораженных мышцах, степень которого связана с длительностью посттравиатического периода, является существенным фактором фориироваиия внутриклеточного ацидоза, возникающего в области денервации скелетной мускулатуры пра повреждении периферического нерва.

3. При поражении периферических нервных стволов наблюдается угнетение аденилатдезаминазной активности степень которого определяется характером поражения нервного ствола и связана ■ с длительностью денервационного периода.

4. Быстрое нарастание активности кислых и нейтральных протеаз в

скелетной мускулвтуре, поряженном периферической нервном строл;.-сыворотке крови является характерной нетайоличесхой реакцш Л организма животного в ответ на травматическое а ишемическое повреждение периферического нерва. В дистальнои участке поврежденного нерва уровень вктаваша кислых протеаз в ответ на поражение нервз выражен в большей степени, чем в проксимальном, что указывает на наличие механизма нервной регуляции активности этой группы ферментов.

5.Метаболическая коррекция патологических уровней ферментативных нарувениЗ в системе гликолиза, тканевого и сывороточного протеолиза, а также в механизмах эндогенного аденозиндезаииннрования может быть достигнута с применением фармакологических препаратов аналгетического, ввзорегулируицего и дегидратирующего действия.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ:

1. К проблеме экспериментального изучения патофизиологических а метаболических изменений при патологии -периферической нервной системы. Экспериментальная комплексная терапия при острой травме периферических нервов / И.П.Антонов, Э.П.Тгтовец, Т.В.Грибоедова и др. // Периферическая нервная система.- Ыинск:Наук£ и техника, 1982.-Вып.5.- С. 5-21.

2.К проблеме экспериментального изучения пзтзйхззаологячесгац в метаболических изменений пра патология ПНС. Экспериментально!' исследование некоторых аспектов патогенеза и ' xovmse-сснсй терапия / И.П.Антонов, З.П.Титовец, Т.В.ГрвОеедсга " др.// Периферическая нервная система.- Минск:Наука в юаша, 1933.- Ei-n. С.- С.5-17.

3.Багрова Т.А., Грибоедова Т.В. !»гкрошфхуля?ги кислорода а иетаболизм периферического нерва пра Tpüiuie// Диагностика а хирургическое лечение опухолей и сосудистнх заболеваний головного мозга.-Ы., 1983.-С.13-15.

•С.Багрова Т.А., Грибоедова Т.В., Влвспх П.А. 'Гшфсцирхуляция кислорода в мышцах при травматическси повреяденяи г^далиг.ного нерва // Периферическая нервная система.- 5<анск:Изуяз л тэхкакя, 1993.-Был. 6.- С. 17-22.

5.К проблеме экспериментального изучения патоку.'.:-:-.; г-п; •:

метаболических изменений при оатологна периферической к^рр;:' " системы. Вопросы патогенеза трофических нарушений при острсЛ тра: нервного ствола и эффективность комплексного "лечения . " эксперименте /И.П.Антонов, З.П.Титовец, Т.В.Грибоедова и ;*". Периферическая нервная система."-1&шск:Наука а техника,*": *.-. • ■

7.-С.5-22. . -

6. Короткевыч Е.А., Нечипуренхо Н.Я., Багрова Т.А., Грибоедова Т.В. .Коыкин В.В. Патофизиологические сдвиги в нервно-мытечнои аппарате после перерезка нерва в неврооластичесхих операций в эксперименте // Здравоохранение Белоруссии.-1984.-J» 7.- С. 59-62.

7.Нечипуренко H.I., Короткевзч Е.А., Багрова Т.А..Грибоедова Т.В., Коакш В.В. Экспериментальное изучение некоторых патофизиологических в метаболически карувеннй про кейрорафин в нейропластнке // Патологическая физиология в зксперешентальяая терапия .-1985.-Я I.-C. 50-54.

8. Нечнпурекко H.H., Грибоедова Т.В. Состояние некоторых ферментов углеводного обигна, калачной в шровшшградной кислот пра нейродистрофической процессе в зксперз^нте // Перафераческая нервная система.- &жсх:Шзукэ в твхзажа, ISS8.- Bun. IIС. II-16.

9. Ограниченный протголиэ пра дгндрплщга. в его роль в форсфоваНиа ткышшх ваззактсшсд пептидов / Г.Г.Петровский, Т.Е.Грибоедова,И•В.Плнтш в др. // Пвргфгрзчаспаа нервная система.-&£шск: Наука в техника, 1539.- Е^п.12.- С. 25-32.

10. Багрова Т.А., Грибогдоас Т.В. Дннл1ака кислородного обиана в тр&шатическа похзресдсшаа кгрzizix стволах // Пер!2$ераческая нервная систеыа.- 1йшск:Нвука в техкаса, ISS0.- Вал.13.- С. 6-16.

11. Петревскца Г.Г., Грибоедова Т.В. Динашка аденилатдезаишшрухЕузй активности в таанях кавотных пра травме периферических нервов // Периферическая нервная система.-Ыинск:Науко ц техника,I992.-Вип. 14.- С. 43-48.

12. Петровский Г.Г., Грибоедова Т.В. Некоторые ферментативные нарушения в нервных стволах в периферических тканях h при травматических порагекадх периферической нервной система // Перифсрнчес1сля нервная система.- 1£шск:Наука и техника, 1992.- Вып. 15.- С. 52-57.

13. Грибоедова Т.В., Петровский Г.Г. Некоторые аспекты фармакологической коррекции протеазной и аденнлетдезаииназной активности в денервированных тканях i:pсилка при травыс периферических нервов // Периферическая нервная систеиа,- (¿.(иск: Наука в техника,1993.- Вып. 16.- С. 36-42.

Н.Грибоедова Т.В. Изменения активности кислых аротеаз и адекилатдезаминазы при поражении периферических кеовов различного

F E 3 D H E

ГРИБОЕДОВА ТАТЬЯНА ВАСИЛЬЕВНА

Особенности ферментативных нарушение в периферических нервах г; в зоне денервации пра ивешческих а травматических поразениях седалищного нерва

Ключевые слова: кролик, !дшца, периферический нерв, сыворотка крови, травма, пшеьая, активность ферритов, лечение.

В эксперименте на кроликах, на различных' коделях порахензя периферической нервной системы, изучены особенности ферментативных нарушений в системе гликолиза, состоянии -аденилатдезашниругсцга активности, динамике тканевых катепсинов и оценена возможность а эффективность коррекции указанных групп ' ферментов в организма фармакологическими препаратами с различным механизмом действия.

Установлено, что пра травматическом повреждении периферического нерва наблюдается нарушение ферментативного баланса гликолитнческой системы белых и красных мывд, пра этон изменения наблгдаются как в области денервации, так а в тханях кшггралзтерзльной конечности. Активвция кислых и нейтральных проте^з р с?се леткой мускулатуре, периферическом нерве а сыворотке крсгз zzizxez-сз' азрактернсй метаболической реакцией организма звеютеюго в отрет на повреждение ПНС. Выявленные наруоения фераентатавио2 ахтапмсгз в оргаш!знз лежат в основе развития структурно-фугта^с.члльь'и перестроек в резнях периферического нерва и мипц п в пначзтельнсЗ каре обуславливает клиническую картину формирования невропатологического сш5дрона пра заболеваниях ПНС различной этиологии. Фармакологические комплексы, включавдие препараты сосудистого, анзлгетического, дегидратируемого действия, ингибиторы протеолитичесзсса активноетп ?тагут существенно изменять активность ш vivo ферие'ггоо глнк&янтяческой, протестатической а адениллтдезаканзруюа^а систем.

Полученные в работе данные по фгрмаколоигтсшссй коррекции патологических уровней ферментатшигсЗ зхтаггостз ' г -:,;™ег? л ь с тв у ют о целесообразности включения препаратов анзлгетического, ввзорегулирукцего и дегндратирухезго действия в терапевтические комплексы, которые следует применять при поражения ПНС травматического и ишемического генеза. Область " применения биохимия нервной системы, клиническая диагностика, фармакотерапия.

Рэзшэ

Грыбаедава Таццяна Ваоигьеуна

Тэиа дысертащл: АсабЛ1васц1 ферментатыуных парушзнняу у периферийных нерва! л у зоне дзнервацьа пры инзшчных i трауыатычных пашкодханнях сядал1шчнага нерва

Ключавыя слови: трус, мышца, перыферычны нерв, сывараткз крывл, траума, 1ШЗМ1Я, актыунасць ферментау, лячзнне.

У вопытах на трусах, з рознымх иадзлян1 парушзння перыферычнай нервовай сютэмы, даследаваны асабЛ1васц1 ферментатыуных парушзнняу у cictsms ГЛ1КОЛ1ЗУ, стане адэн^латдззам^назнай актаунасцх, дынаылщ тканкавых катзпсгнау i вызначана магчымасць * зфектыунасць карзкцы* гэтых груп фермента? фармахалапчнымг сродкам* з розным механизмам дзеяння.•

Вынайдзена, вто пры трауматычным парушэнн}■ перыферычнага нерву наз^рапцца змяненнх ферментатыунага балансу у гл1калпгычн8й сютэме белых i руховых мышц. Пры гэтым змянеши каз^рапцца як у вобласцi дэкервацыь, так i у тханках непашкодханай канечнасцх. Ахтывацыя пратзаз у мышцах, перыферычным нерве * сываратке крывх з'яуляецца характэрнай метабалхчнай рзакцыяй аргатзму хывел^н пры парушзюи перыферычнай нервовай с1стзмы. Выяуленыя парушэнн! ферментатыунай актыунасщ у арган»зме знаходзяцца у аснове развщця структурна-функцыянальных перабудоу у перыферычным нерве i у значнай ступенх абумоул1ваиць ктн^чную карц1ну фарм1равання нейрапаталапчцага синдрому пры захворваннях перыферычнай нервовай сютэмы рознай этыялоги. Фармакалапчныя комплексы, hkih укличасць рзчывы сасудзютага, аналгетычнага i вбязводжваючага дзея}шл, iHTi6iTapu пратэал1тычнай актыунасц! могуць значка мяняць актыунасць ni vivo ферментау гл!кал1тычнай, пратэал1тычнай i адзн1лэтдззам1н1рувчай састзм,

Атрыманыя у работе звестк! аб фармакалах^чнай карэкцш паталапчных узроуняу ферментатыунай актыукаец! сведчаць аб мэтазгоднасц: уключзння сродкау аналгетычнага, вазарзгулюючага i абязводкваючага дзеяння у тзрапеутычныя комплексы, як.я неабюдна викарисгоуваць пры парушэнн' перыфирычнага нерву траумэтычнага ¡ ^móui4Hara генэзу. Вобласць прымянення - 6tflüMifl нзрвовай с^стзмы, кл1н>чная диягностыка, фармвкатзрап!я.

3 и m г л f- v

Gr i t'O y lov -i VasiI jevnj

T su^jtLt о * ijin^frtditic^: M £{n » у V» : t i v s t ► ■ . ^

¡h-rir-t.^r a i п^г'л-«, pna ihr* aenerv-it ion 2 on ^ j ♦ * vr ,c uc, íl .'J -i .т, с f.- "

1 е> we-г ci л ; r»4t3bxí., mu%c le*, [i." OrTvc», ble" 1

.i it«,Í С? — « i ? J. rf , . I y -Г ¿ et) Vit y, tr Pel tr.t/П t. .

i)I ,Lt.l Л il у^й ас t U- i t / changes» ¿u.K-T' y 2 «» t ** e*« : "

: •» t ^ i '.Ivn h«jv ? «*tudi<?d L.". ipN-- ^

trau"1!» . n ^ # t >t>i t - T f ï e» pf t г. itf.r.f.y fjf van ou ъ drut^b to # nor »*> » i i . рп ¡»с tb i » m ^ t í u »-»stifoeit'-'ü.

IL Ь .it i í \ .u id í.S** î {'t»r 1 (iNtf «J I гч?г vi» - t r au.".a L'jov • i*** t. bi< í i vn 2 i i tor br»ti£t« in »«ri i t »? re d tmj se ie^ bo t h J м • ; « '

* ^ ' «'С. Ki с. ü'trdldt^rrtí 1 V USSUH. Г f ; I . 4 1 о ' '.I !

i» tf a i t s in ► r-«»r . j ■r -« \ « -

n * t y p К l wftÄbüi 1С rt»ac it^ го'Г| »гк; tw :чт ip j .

fld-iirt'ití , T Г Г' y t • i ' •• T' » * ' ï rf.4 . r• * •

.. - t 1 Г-. в". «r ph{ I f ufic * l C-f. 1 С '■•^'■^■•ï, ; /> t f ¡ r î ; - Г»i 4 •

I gn : f If. лп t 1 *' cnntf lî»utp to ♦.?>•=» VC î c»f.»'4f-'-. f . t-" rf4-r»t! ¿I

! f > r зпр 1 «j * e *» l oc 1 ud 1 HQ vdscJi Ijt^r », •.</■«.! •

proteolytic йс 11 vi t / lt'hjhit;..", <± / o= - «-> - r - «.

1 ' J » < . »' i V t * .-*c t 1 / 1 t / of '7 î V L a i y t i w «*f tfJ -¿r -J ts'-t • i - * Í t • - ,

J ^ t Í» J % o* r> i <» 't fj .

' " •= î. Il t ci L f *'<! ci.ïtu t.tfrt* rti.•L.'-'t.vi <" :r L. i' • t

p/'e: ti *.- ;r . npr u/ifi<j t^.e 4" к / «ícHvüv î ^ v.' *

t r 1 .Т'»»П t of t f»P pf-r If-fl??''^! ПНГ VOlJ i ■» i S t firn " 1 * Г • 4Í l • »

i-,:tpflic 1 . T S** apjil li. rft ion - Üioc 1 r y or ' v < ' -C/U

ci irt i с *» 1 d i - g; tic % , pr чг лнч ut M-г лру .