Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Окислительный стресс, его мониторинг и критерии оценки антиокислительной активности лекарственных препаратов и БАД
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Окислительный стресс, его мониторинг и критерии оценки антиокислительной активности лекарственных препаратов и БАД"

на правах рукописи

ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ СТРЕСС, ЕГО МОНИТОРИНГ И КРИТЕРИИ ОЦЕНКИ АНТИОКИСЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ

ПРЕПАРАТОВ И БАД

03.00.04 - биохимия 14.00.16 — патологическая физиология

I

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

*

Ростов-на-Дону - 2005

Работа выполнена в Кубанской государственной медицинской академии и Российском университете дружбы народов.

Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор Быков Илья Михайлович, доктор медицинских наук Орлова Светлана Валерьевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Микашинович Зоя Ивановна, доктор медицинских наук, профессор Каде Азамат Халидович доктор медицинских наук, профессор Бородулин Владимир Борисович,

Ведущая организация: Научно-исследовательский институт биомедицинской химии РАМН

Защита состоится « 2005 г. в час. Оо мин.

на заседании диссертационного совета Д 208.082.01 при Ростовском государственном медицинском университете (344022, г. Ростов-на-Дону, Нахичеванский пер., д. 29)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского государственного медицинского университета

Автореферат разослан « & » 2005

Ученый секретарь диссертационного совета профессор

Н.Я. Корганов

Актуальность темы. Окислительный стресс (ОС) - многокомпонентный процесс, включающий совокупность структурно-функциональных модификаций биополимеров, биомембран, метаболических сдвигов на уровне клеток, тканей и организма в целом, индуцированных высоким уровнем активных форм кислорода (АФК), свободных радикалов, а также мембрано- и цитотоксических продуктов перекисного окисления биомолекул [Владимиров Ю.А. и др., 1991; Агаджанова JIM, 1998; Мокацян Р.Г, 1998; Дубинина Е.Е., 1998; Балаболкин М.И, 2000; Pinkus R., Weiner L.M., Daniel V, 1995; Halliwell В.. Gutteridge J.M.C., 1999; Szweda-Lewandowska Z et al, 2003; Bagis S. et al„ 2003.]. В организме функционирует многоуровневая система специфической и неспецифической антиоксидаитной зашиты (АОЗ), которая обеспечивает поддержание генерируемых оксидантов на физиологическом уровне [Зайцев В.Г., Закревский В.И., 1998; Дубинина Е.Е., 1998; Зинчук В.В., Борисюк М. В., 1999; Wendel А., 1988; Bast Л., Наепеп G. R. M. M., Doelman С. J А., 1991; Finkel Т, 2003]. ОС реализуется в результате дисбаланса между активностью реакций образования АФК, свободных радикалов, перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антирадикальных процессов, напрямую зависимых от состояния системы АОЗ. ОС характерен дня большинства критических состояний и болезней человека, включая кардиоваскулярные заболевания, диабет, атеросклероз, ожоговую болезнь, нейродегенеративные болезни, гипоксические и токсические повреждения органов и тканей, иммунодефицит, острый респираторный дистресс-синдром, острую и хроническую почечную недостаточность, гинекологические заболевания и т.д. [Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., 1972; Агаджанова JI.M., 1998; Мокацян Р.Г., 1998; Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., 2000; Halliwell В., Gutteridge J.M.C., 1999].

Важной составной частью развития и течения ОС является токсемия, которая характеризует синдром эндогенной интоксикации (СЭИ) или эндотоксикоз (ЭТ). СЭИ одной стороны формируется за счет избыточного образования токсичных продуктов перекисного окисления различных биомолекул в условиях ОС, а с другой стороны токсемия вызывает значительный дисбаланс в системе про-/антиоксидаяты и способствует манифестации признаков ОС. Таким образом, формируются порочные патологические круги, которые вызывают дестабилизацию и срыв всех защитных механизмов и систем -человеческого организма при различных заболеваниях. В условиях токсемии и ОС наибольшему повреждающему действию АФК и других цито- и мембранотоксичных соединений подвержены эритроциты в силу особенностей своего метаболизма и количественного представительства в крови.

Разработка методов диагностики, изучения механизмов развития и коррекции ОС при развитии критических патологических состояний и хронических заболеваний представляется важнейшей задачей современной науки. Исследования в этом направлении способствовали широкому внедрению в клиническую практику биоантиоксидантов, т.к. коррекция с их помощью ОС повышает резистентность биомембран, клеток, тканей и организма в целом, способствует восстановлению гомеостаза и благоприятному исходу заболеваний. Вместе с тем известно, что применение биоантиоксидантов должно быть обоснованным и строго дозированным, так как в зависимости от используемой дозы они проявляют антиоксидантный

или прооксидантный эффект Щорожко А.И.. Бродский A.B., Афанасьев И Б, 1988; Дубинина Е.Е., 2001; Квинн П.Дж„ 2004; Halliwell В., Gutteridge J.M.C, 1990, Hinds T.R, Vincenzi F.F., 1996; Buettner G.R., Jurkiewicz B.A., 2000.]. В этом аспекте поиск биомаркеров ОС, создание модельных тест-систем оценки антиокислительной активности (АОА) фармпрепаратов и биологически активных добавок (БАД) остаются существенной проблемой современной биохимии и фармации. Исследования в этом направлении пошли по пути все большего расширения фронта методических подходов, увеличения числа мучаемых патологий и выявления разнообразных параметров ОС, отражающих состояние того или иного звена системы про-/антиоксиданты при развитии патологического процесса.

В настоящее время все большее распространение получают способы интегральной оценки уровня ОС и СЭИ по как можно большему числу параметров, определяемых в различных биологических средах, наиболее объективно характеризующих эти типовые патологические состояния [Чаленко В.В., Кутушев ФХ, 1990; Ковалев Г И. и др., 1995; Голиков П.П. и др., 2000; Туманян С.В. и др., 2004; Пасечник И.Н, 2004; Harris В.Н., Gelfand J.А., 1995; Werdan К, Pilz G., 1996]. Многие из известных методов отличаются несовершенством, не могут иметь универсального назначения, так как порой включают параметры и про- и антиоксидантного звена антиоксидантной системы (АОС), изменения которых при критических состояниях и хронических заболеваниях носят разнонаправленный характер (отдельные ферменты АОС, низкомолекулярные антиоксиданты) и при неправильном их использовании в расчетных формулах могут исказить действительную картину ОС.

Комплексный подход к изучению на метаболическом уровне состояния отдельных компонентов крови (эритроциты, плазма крови, цельная кровь) у больных с явлениями эндотоксинемии и ОС различного генеза, основанный на выявлении и уточнении характера дисбаланса в системах образования и обезвреживания активных кислородных метаболитов, позволит не только ответить на важные вопросы патогенетической роли ОС, но и даст возможность разработать новые способы диагностики, оценки уровня ОС и СЭИ.

Моделирование ОС в лабораторных условиях и определение ингибирующего действия реакций свободнорадикального окисления (СРО) различными антиоксидантными препаратами позволит разработать эффективные тест-системы для оценки их общей АОА, что позволит подбирать эффективные схемы лечения и профилактики осложнений при различных заболеваниях, связанных с развитием ОС.

Учитывая все вышеизложенное, целью настоящего исследования явилась разработка оптимальных диагностических алгоритмов тестирования окислительного стресса и эндогоксикоза и эффективных методов изучения антиокислительной активности и емкости лекарственных средств и биологически активных добавок, позволяющих проводить мониторинг типовых патологических состояний и проводимой терапии.

Из поставленной цели вытекают следующие задачи: 1. Определить из комплехса различных показателей системы про-/антиоксиданты крови наиболее информативные параметры оценки уровня ОС и ЭТ, наиболее объективно их характеризующие.

2. Разработать эффективные, доступные, легко воспроизводимые способы интегральной ( оценки выраженности ОС и ЭИ.

3. Апробировать предложенные способы оценки ОС и ЭТ в клинике при обследовании терапевтических и реанимационных больных и дать их сравнительный анализ.

4. Провести ранжирование больных с хроническими заболеваниями и критическими t состояниями по уровню ЭТ и ОС на основании выделенных количественных критериев

оценки степени тяжести ОС и ЭТ.

5. Разработать модельные тест-системы исследования АОА и антиоксидантной емкости фармпрепаратов и БАД in vitro.

«

6. Разработать методики количественной оценки АОА различных фармацевтических и парафармацевтических средств, выражаемой в условных единицах.

7. Апробировать работоспособность предложенных тест-систем в условиях ОС, моделируемого in vitro физическими и химическими индукторами СРО.

Научная новизна работы

• Впервые, на различных моделях окислительного стресса, вызванного критическими состояниями различного генеза и хроническими заболеваниями, проведен сравнительный анализ состояния основных компонентов АОЗ и уровня свободнорадикальных и перскисных процессов в организме больного на различных этапах острого и хронического патологического процесса.

• Разработан и апробирован новый способ диагностики ОС организма человека, основанный на расчете коэффициента окислительной модификации биомолекул эритроцитов - КОМБэр (патент № 2236008,2003).

• Предложенный и апробированный антиоксидантный коэффициент КАТ/СОД позволяет осуществлять мониторинг баланса в системе про-/антиоксиданты при развитии критических состояний и при длительном течении хронических заболеваний. Его динамическое снижение в ходе болезни свидетельствует о прогрессировании патологии.

• Модифицирован и апробирован на практике интегральный коэффициент оценки уровня эндогенной интоксикации - ИЭИ, определение которого производится с учетом

* показателей, характеризующих ОС.

• На основании сравнительного анализа КОМБэр и ИЭИ получены новые данные по корреляционным взаимоотношениям между степенью токсемии и интенсивностью

* реакций СРО в условиях ОС и ЭТ.

• Разработан новый способ тестирования АОА лечебных и профилактических антиоксидантных средств (патент № 2182706,2001).

• Предложен новый способ сравнительной характеристики АОА различных фармпрепаратов и БАД и выражения ее в унифицированных единицах активности (убихиноновая единица).

Научно-практическая значимость работы

Полученные результаты по исследованию различных параметров системы про-/антиоксиданты крови (эритроциты, плазма) у различных категорий больных с острыми и хроническими заболеваниями свидетельствуют о ключевой роли в диагностике уровня ОС определения в клетках и внеклеточной жидкости суммарного количества продуктов окислительной модификации биомолекул (ОМБ) липидной, белковой, углеводной и нуклеотидной природы и об избирательном применении биофизических методов тестирования ОС с использованием хемилюминесцентного анализа и определения отдельных ферментов АОС у больных с хронической почечной недостаточностью. Работа расширяет представление о патогенезе ОС, фундаментальных изменениях в клетках, протекающих при его развитии, и свидетельствует о важной роли изучения структурных и метаболических изменений в эритроцитах при диагностике «мембранно-клеточных» нарушений любого генеза. Введение интегральных коэффициентов тестирования общепатологических состояний, таких, как ОС и эндогенная интоксикация (ЭИ), позволит: 1) оптимизировать процесс ранней диагностики ОС и ЭИ; 2) определять степени выраженности патобиохимических проявлений ОС и ЭИ в условиях любой патологии; 3) назначать своевременную эффективную антиоксидантную терапию, которая сократит время пребывания больного в стационаре, снизит частоту осложнений основного заболевания.

Практическое использование полученных результатов По материалам диссертации опубликовано 44 научные работы. Получены патенты на изобретение: 1) «Способ диагностики антиокислительной активности лечебных и профилактических антиоксидантных средств» (патент № 2182706, 2001, Павлюченко И.И., Басов A.A., Федосов С.Р.); 2) «Способ диагностики окислительного стресса организма человека» (патент № 2236008,2003, Павлюченко И.И., Басов A.A., Федосов С.Р.).

Результаты исследования используются в учебном процессе на кафедрах биохимии, патофизиологии, хирургических и внутренних болезней лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов Кубанской государственной медицинской академии и кафедре клинической нутрициологии ФПКМР Российского университета Дружбы народов. В практическом здравоохранении - в отделениях реанимации и интенсивной терапии, в эндокринологических, нефрологических и ожоговых отделениях лечебных учреждений г. Краснодара и Краснодарского края.

Внедрение результатов исследований в практику Разработанные методы диагностики ОС и ЭИ нашли применение в клинике внутренних и хирургических болезней и используются в Краевой клинической больнице № 1 г. Краснодара в отделениях реанимации, травматологии, нефрологии; в Городской больнице № 2 и 3 г. Краснодара в отделениях эндокринологии и урологии; в Краснодарском краевом центре нефрорлогии искусственной почки и трансплантации. По материалам диссертации опубликовано 44 печатные работы, получено 2 авторских свидетельства на изобретение.

Основные положения диссертации были изложены на 6-м Всероссийском съезде анестезиологов и реаниматологов (Москва, 1998 год), 7-м Всероссийском съезде анестезиологов и реаниматологов (Санкт-Петербург, 2000 год), на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Физиологические науки -клинической гастроэнтерологии» (Ессентуки, 2001 год), Международной конференции «Сахаровские чтения» 2001 года: экологические проблемы XXI века» (Минск, 2001 год), Национальной научно-практической конференции с международным участием «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека» (Смоленск, 2001 год), 6-й международной конференции «Экология и здоровье человека. Математические модели и информационные технологии» (Краснодар, 2001 год), на Всероссийской конференции: «Проблемы медицинской этимологии, современные технологии лабораторной диагностики нового столетия» и Международном симпозиуме: «Пиридоксальфосфат-зависимые ферменты: структура, молекулярная патология и медицина» (Москва, 2002 год), Международной научно-практической конференции: Современные технологии фитонутрициологии в акушерстве, гинекологии и педиатрии» (Москва, 2003 год), Международной конференции: «Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health» (Смоленск, 2003 год), III Всемирном конгрессе по клинической патологии и реабилитации в медицине (Паттайя, Таиланд, 2005), П Российской конференции по иммунотерапии иммунореабилитологии (Москва, Россия, 2005).

Объем и структура диссертации

Работа состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов исследования, шести глав обсуждения полученных результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Текст диссертации изложен на 316 страницах компьютерного текста, иллюстрирован 6 рисунками, 52 графическими диаграммами и включает 16 таблиц. Список литературы содержит 325 источников отечественной литературы и 122 -иностранных авторов.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Продукты перекисного окисления являются важными компонентами, определяющими токсичность биологических сред, и оценку уровня ЭИ необходимо проводить с учетом их количества.

2. Определять степень ОС и ранжировать больных по его уровню возможно, используя оригинальный коэффициент окислительной модификации биомолекул эритроцитов -КОМБэр. Показатель КОМБэр более 7,0 ОЕА отражает декомпенсированный ОС и характерен для больных с полиорганной дисфункцией.

3. Снижение показателя КАТ/СОД в динамике заболевания отражает прогрессирование патологии и нарастание явлений ОС.

4. Моделирование ОС in vitro в диагностических тест-системах является надежным способом тестирования антиоксидантной активности фармпрепаратов и БАД. Тиолсодержащие лечебные и профилактические средства обладают наибольшей антиоксидантной емкостью.

5. Универсальная (убихиноновая) единица, отражающая общую АОА, является важной характеристикой для стандартизации лечебных и профилактических антиоксидантных средств.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы я методы исследования

Материалом для анализа послужили данные, полученные при изучении различных показателей крови больных с эндотоксинемией различного генеза, сопровождающейся избыточным накопленнием прооксидантных факторов и поэтому являющейся патофизиологической моделью ОС Изучены различные показатели системы про-/антиоксиданты у 143 больных (группа № I) с острыми патологическими состояниями, относящимися к категории критических: ожоговая болезнь с индексом Франка (ИФ) 1-П-П1, острая почечная недостаточность (ОПН), декомпенсированный кетоацидоз, развившийся как острое осложнение сахарного диабета (СД), и 147 больных с хроническими заболеваниями (группа № 2): СД 1 и 2 типов, хроническая почечная недостаточность (ХПН) 1-П и Щ степени. Распределение больных по нозологиям представлено в таблице № 1. Контрольную группу составили 63 практически здоровых донора, сопоставимых по полу и возрасту с наблюдаемыми больными (18-68 лет, средний возраст - 43,2 ±1,6 года.).

Объектом исследования являлась венозная кровь, стабилизированная гепарином. Определение необходимых параметров в эритроцитах и плазме осуществляли в первые сутки нахождения больных в стационаре.

Таблица №1.

Количество и средний возраст обследованных больных по нозологиям

Нозология Количество больных, человек, (%) Средний возраст, лет

Ожоговые больные ИФ I (<30 %) 32(31,4%) 36,3 + 1,5

Ожоговые больные ИФ II (30-60%) 42(41,2%)

Ожоговые больные ИФ III (61-120%) 28 (27,4 %)

Больные с ОПН 19(21,1 %) 41,1 +3,6

Больные с ХПН 1-П 24 (26,7 %)

Больные с ХПН III 47 (52,2 %)

Больные СД 1 типа 34 (34,7 %) 34,4 ±1,3

Больные СД2типа 42(42,9%) 56,7 ± 1,8

Больные СД с кетоацидозом 22 (22,4 %) 29,6 ±1,2

По ИФ больные с ожоговой болезнью были разделены на 3 группы:

1. ИФ I - нетяжелые ожоги - благоприятный прогноз исхода болезни.

2. ИФ П - тяжелые ожоги - относительно благоприятный прогноз исхода болезни.

3. ИФ III - обширные и критические ожоги - сомнительный и неблагоприятный прогноз исхода болезни.

Состояние системы АОЗ организма оценивали по активности основных и вспомогательных ферментов АРЗ эритроцитов - катал азы (КАТ) интактных и гечолизированных эритроцитов, супероксиддисмутазы (СОД), глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ), сукцинатдегидрогеназы (СДГ), а также по основному неферментному компоненту АОС - по уровню восстановленных тиоловых групп эритроцитов.

В цельной крови исследовали активность КАТ в интактных эритроцитах и их гемолизате по методу Крайнева С.И. [Крайнев С.И, 1967]. Для определения активности СОД использовали методику №$ЬПшш N. ее а1. (1972) в модификации П.Г. Сторожука и А.П. Сторожука [Сторожук ПГ„ Сторожук А П, 1998]. Определение активности Г-6-ФДГ проводили спектрофотометрическим способом по методике Л.Г. Мотульского и И.М. Кемпель [Мотулъский ЛГ., Кемпель ИМ, 1969]. ФАД-дегидрогеназную активность оценивали по активности фермента СДГ, которую определяли по методу Куна и Абуда [Кип Е„ АЬоос! б., 1979] в модификации П.Г. Сторожука [Сторожук П.Г, 1990]. Количество свободных вН-групп определяли по методике Т.И. Романчук, А.А. Рубиной [Романчук Л.А., Рубина Х.М., 1961] в модификации С.П. Корочанской [Корочанская С.П., 1968].

Состояние прооксидантной системы оценивали по исходному количеству продуктов ОМБ в плазме крови без экспериментальной индукции перекисных процессов, а в эритроцитах - до и после предварительной химической индукции. Уровень процессов СРО в плазме крови оценивали по интенсивности быстрой вспышки хемилюминесценции (БВХЛ).

Для определения базального и индуцированного количества продуктов ОМБ эритроцитов использовалась методика Стальной И.Д., Гаришвили Т.Г. [Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г, 1977], особенностью проводимых исследований являлось обнаружение общего количества продуктов ОМБ эритроцитов - белковой, липидной углеводной природы, так как в методике не проводилась экстракция окислительно-модифицированных продуктов липидной природы. Тиобарбитуровое число эритроцитов (ТБЧэр.) рассчитывают по формуле и выражают в оптических единицах, ОЕ:

ТБЧэр. = 1эр.-450 + 1эр.-532 ОЕ, где

1эр.-450 и 1эр -532 - оптическая плотность раствора, измеренная при длине волны 450 и 532 нм соответственно (где длина волны 450 нм соответствует максимуму оптической плотности промежуточных продуктов перекисного окисления - диеновые конъюгаты и др., а длина волны 532 нм - максимуму оптической плотности конечных продуктов перекисного окисления - малоновый диальдегид и др.), в оптических единицах (ОЕ).

ТБЧэр.Ш = 1эр.1п<М50 + 1эр.1п(1-532 ОЕ, где

top.Ind-450 и 1эр.1п<1-532 - оптическая плотность раствора, в котором проводилась предварительная химическая индукция перекисного окисления Fe2*, измеренная при длине волны 450 и 532 им соответственно, в оптических единицах.

Для определения базального количества продуктов ОМБ в плазме использовалась методика В.Н. Ушкаловой [Ушкалова В.Н. и др., 1993].

1 ) ТБЧпл. „ = 1плазмы„ (450 + 532) ОЕ, где

ТБЧпл. о- ТБЧ плазмы опытной пробы.

1плазмы - оптическая плотность опыта, измеренная при длине волны 450 и 532 нм;

2) ТБЧпл. « = 1плазмык (450 + 532) ОЕ, где

ТБЧпл. « - ТБЧ плазмы контрольной пробы.

(плазмы - оптическая плотность контроля, измеренная при длине волны 450 и 532 нм;

3) ТБЧпл. = (ТБЧпл. „ +ТБЧпл.*)/2, ОЕ.

ТБЧ общее представляет собой суммарное количество продуктов ОМБ эритроцитов и плазмы крови и рассчитывается по формуле:

ТБЧ общ = ТБЧэр. +ТБЧэр. Ind + ТБЧпл., ОЕ, где ТБЧэр. -тиобарбитуровое число эритроцитов, ОЕ,

ТБЧэр Ind - тиобарбитуровое число эритроцитов после индукции перекисного окисления, ОЕ, ТБЧпл. - тиобарбитуровое число плазмы крови, ОЕ.

Интенсивность СРП плазмы крови оценивали по БВХЛ с помощью люминотестера LT-01 ("Horos", Joint Venture Soviet-Swedish Company), на основе методики НИИБИ г. Ростова-на-Дону.

ЭИ оценивали по уровню молекул средней и низкой молекулярной массы (МСиНМ) в эритроцитах и плазме крови, а также по сорбционной способности эритроцитов (ССЭ). Определение количества МСиНМ эритроцитов и плазмы проводили в УФ области спектра (в интервале от 238 до 306 нм с шагом длины волны 4 нм), с последующим расчетом площади фигуры, очерченной полученной кривой, на основании методики М.Я. Малаховой [Оболенский C.B. Малахова M Я, Ершов АЛ, 1991]. Определение уровня ЭИ по ССЭ проводили с использованием метиленового синего по методике A.A. Тогайбаева [ТогайбаевА А. и др., 1988] в собственной модификации [Павлюченко И.И. и др., 1999].

Так как многие исследуемые показатели зависят от количества эритроцитов, этот •

показатель также определялся и учитывался при анализе данных. Количество эритроцитов в цельной крови определяли фотоколориметрически по методу Ресселя [Рессель Л К, Тодоров И., 1961].

АОА фармпрепаратов и БАД оценивали in vitro по степени ингибирования перекисного окисления биосубстратов в авторских тест-системах после однократной и пролонгированной индукции перекисных процессов, а также по их способности ингибировать процессы СРО и снижать БВХЛ на фоне однократной инициации реакций СРО в люминол-зависимой тест-системе. В авторских тест-системах изучалась антиокислительная емкость фармпрепаратов и БАД по способности ингибировать СРП, предварительно индуцированные путем внесения в тест-систему, содержащую водно-спиртово-масляную смесь, Fe2+ и перекиси водорода или при

внесении Fe2+ и постоянного, в течение определенного времени, облучения реакционной смеси УФО с использованием излучателя КФ-4М [Павлюченко И.И. и др., 2001]. АОА выражали в убихиноновых единицах (Q-ЕД). В качестве субстратов окисления выступали мицеллоподобные структуры, сформированные на основе кукурузного масла. Хемилюминесцентный метод оценки АОА фармпрепаратов и БАД основан яа их способности ингибировать реакции СТО в тест-системах с плазмой и люминолом, снижая в той или иной мере БВХЛ при их внесении в реакционную смесь. Данный способ определения АОА (выражаемую в %-ING) фармпрепаратов и БАД был разработан на основе методики НИИБ г. Ростова-на-Дону.

Статистическую обработку проводили с использованием компьютерной техники. Математические методы использовали для расчета интегральных коэффициентов -КОМБэр и ИЭИ.

КОМБэр = (ТБЧэр. +ТБЧэр. Ind) • (Ед-sh-rp. - E,-sh-rp.) • 100, где Ед-sh-rp. - показатель среднего количества тиоловых групп гемолизата у здоровых людей, выраженный в оптических единицах, ОЕ, равный 0,174±0,004 ОЕ.

E,-sh-rp. - количество тиоловых групп гемолизата обследуемого человека, выраженное в

оптических единицах, ОЕ,

100 - расчетный коэффициент,

В физиологических условиях рассчитанный интегральный КОМБэр. равен нулю или находится в интервале от -1,0 до +1,0 (КОМБэр. =0 + 1,0 ОЕА) - данный показатель характерен для практически здоровых людей в условиях баланса в системе про-/антиоксиданты, что определяет отсутствие окислительного стресса.

Показатели эндогенной интоксикации - ККД и ИЭИ рассчитываются по формулам: ККД - Г(МСиНМ-эг) • МСиНМ-пл) + (ТБЧэр + ТБЧэр Indi • ТБЧплП

[(МСиНМ-эр + МСиНМ-пл) ((ТБЧэр + ТВЧэр Ind) + ТБЧпл)], где

ККД - коэффициент катаболической деструкции в единицах молекулярной деградации, ЕМД,

ИЭИ = [(ЮОД • 100) / ККДд ] - 100, где ИЭИ - индекс эндогенной интоксикации, выраженный в процентах гиперкатаболизма, % ГК, ККД1 - коэффициент катаболической деструкции обследуемой категории больных, выраженный в единицах катаболической деструкции,

ККДд - коэффициент катаболической деструкции контрольной группы, выраженный в единицах катаболической деструкции, 100 - условные коэффициенты.

В работе была использована следующая аппаратура и оборудование: спектрофотометр (СФ-46), фотоэлектроколориметр (ФЭК-56М), микрофотоколориметр (МКМФ-1), люминотестер (ЛТ-01), УФ-излучатель КФ-4М, термостаты, аналитические весы, химические реактивы и лабораторная посуда, электронные часы, компьютерная техника.

/

Результаты собственных исследований ^

Неконтролируемые процессы СРО, наряду с другими реакциями гиперкатаболизма при тех или иных заболеваниях, способствуют развитию и/или прогрессированию ЭТ и развитию СЭИ, который, как и ОС, относится к типовым патологическим процессам В свою очередь ЭТ нарушает течение естественных биохимических процессов, прежде всего энергообеспечения, и способствует усилению реакций СРО и пероксидации в различных биообъектах, что приводит к замыканию «порочных патологических циклов» и формированию полиорганнной дисфункции Для получения наиболее объективной картины тяжести заболевания, механизмов её развития и стадии течения необходимо выяснить корреляционные взаимосвязи между СЭЙ и ОС, их уровнем и выраженностью патобиохимических нарушений. Адекватная оценка тяжести СЭИ, как и ОС, возможна при изучении маркеров этих состояний в различных биологических средах

I

человеческого организма, так как имеются клеточные и внеклеточные, системные и локальные уровни защиты организма от эндо- и экзотоксинов, в связи с чем характер распределения эндотоксинов между клетками крови и плазмой становится важным параметром определения степени ЭТ и стадии патологического процесса [Чаленко В. В, Кутушев Ф. X., 1990; Оболенский СВ.идр, 1991; Малахова М.Я., 1995; Карпищенко А И. и др., 1997, 2001].

Накопление различных продуктов в тканях и биологических жидкостях организма в условиях ОС и ЭИ связано с процессами цитолиза, то есть нарушения целостности клеточных мембран. Одним из ведущих патогенетических факторов развития цитолиза являются неконтролируемые реакции перекисного окисления белково-липидных комплексов мембранных структур, генерированных различными АФК. При этом внутриклеточные компоненты оказываются во внеклеточной среде, а на мембранах клеток и в самих клетках отмечается избыток внеклеточных веществ. Такие патобиохимические процессы затрагивают, прежде всего, эритроциты в силу их многочисленности и большой общей суммарной площади их мембран [Федорова З.Д. и др., 1989; Эстрин В.В и др., 1993 ]. При этом изменяется сорбционная способность эритроцитов (ССЭ) и их количество, в связи с чем изучение сорбционной способности эритроцитов, как и определение их количества, может служить важным фактором оценки ЭТ и ОС. Во многих исследованиях установлено, что при патологии острого и хронического генеза, связанной с эндотоксинемией, резко повышается ССЭ [ТогайбаевАА и др., 1988.].

В собственных исследованиях установлено, что у всех категорий обследуемых больных также имеет место повышение ССЭ, что свидетельствует об ЭТ, и максимальные значения этого показателя отмечены у больных с ожоговой болезнью ИФ III и у больных с декомпенсированным кетоацидозом (рис. 1), которые относятся к категории крайне тяжелых больных с установленными клиническими данными полиорганной дисфункции. Изменение ССЭ у них достаточно объективно отражает тяжесть патологического процесса. Наиболее высокий показатель ССЭ у больных 2-й группы выявлен у больных СД 1 типа. Эта категория больных имеет длительное течение заболевания, с явлениями стойкой гипергликемии, проявляющейся разнообразными осложнениями (ангиопатия, нефропатия, ретинопатия) [Дедов ИИ. и др., 2003]. Гликозилирование белков вызывает их конформационные перестройки, что

отражается на их структуре и функциях. Гликозилирование структурных элементов клеточных мембран эритроцитов, интенсификация полиолового пути окисления глюкозы и усиление реакций СРО при СД изменяет их физико-химические характеристики и выражается в увеличении избирательной проницаемости для различных веществ.

ССЭ,

соп.ипп.

Примечание. р<0,05 во всех случаях. Ш Сорбционная способность эритроцитов

Рис. 1. Изменение сорбционной способности эритроцитов у больных 1-й и 2-й группы.

Одним из распространенных и доступных способов диагностики СЭИ, который отражает наличие ЭТ, является метод определения уровня МСиНМ в различных тканях и биологических жидкостях организма. МСиНМ - это вещества различной химической природы, с молекулярной массой не более 5-10 кДа, образующиеся постоянно в организме в результате катаболических процессов. Уровень этих продуктов зависит от интенсивности образования и выведения (преимущественно почками) их из организма. Для комплексной характеристики тяжести клинической картины болезни и выраженности СЭИ проведено сравнительное изучение МСиНМ у обследуемых больных, входящих в 1-ю и 2-ю группы.

По уровню МСиНМ в плазме и эритроцитах подтверждено, что ЭТ различной степени тяжести имеется у всех категорий обследуемых больных, но этот показатель не всегда точно отражает тяжесть патологического процесса, особенно у больных с хронической патологией (рис. 2 и 3). Наибольшие значения ЭИ выявлены у наиболее тяжелых больных: больных СД с декомпенсированным кетоацидозом, с ОПН, с обширной ожоговой травмой. Из них наиболее выраженные признаки ЭИ наблюдаются у больных с ожоговой болезнью, что объясняется

значительным повреждением тканевых структур и проникновением в кровь продуктов их распада, и, одновременно, нарушением выделительной функции почек, которые уже на ранней стадии болезни вовлекаются в патологический процесс. Хотя у больных СД уровень МСиНМ не очень высок, это не отражает метаболического благополучия, так как структурно-функциональные изменения в органах и тканях, характерные для диабета, обусловлены, в первую очередь, гипергликсмисй, а накопление продуктов «извращенного» метаболизма, составляющих пул МСиНМ крови, происходит на более отдаленных стадиях заболевания или при развитии тяжелых осложнений.

ж о

Примечание. * - р<0,05.

Н МСиНМ в эритроцитах Рис. 2. КоличествоМСиНМ в эритроцитах у больных 1-й и 2-й группы.

У больных с ХПН уровень МСиНМ достаточно точно отражает стадию заболевания, степень вовлеченности в патологический процесс почек и их остаточную фильтрационную способность и является одним из критериев назначения методов эфферентной терапии. Одновременное определение МСиНМ в эритроцитах и плазме позволяет более объективно установить стадию ЭТ. Стойкие изменения в эритроцитах наблюдаются на более поздних стадиях патологического процесса, при переходе его в терминальную стадию. Обязательным условием проведения эффективных детоксикациоиных мероприятий является многоплановая коррекция метаболизма, в том числе с использованием в комплексе лечебных мероприятий антиоксидантов различных групп с учетом хелаторных свойств некоторых их представителей.

Оценивая разные методы тестирования ЭТ (МСиНМ и ССЭ), необходимо отметить, что: 1) не прослеживается четкой корреляции между показателями двух методов у обследуемых

больных и 2) ни один из этих методов индивидуально не может объективно и точно отразить степень тяжести заболевания, нарушений гомеостаза и выраженности ЭТ.

25

МСиНМпл.,

ед. пл.

20

10

15

0

5

и и

Примечание. р<0,05 во всех случаях. ■ МСиНМ в плазме Рис. 3. Количество МСиНМ в плазме у больных 1-й и 2-й группы.

До настоящего времени не до конца изученными остаются тонкие патофизиологические механизмы взаимосвязи неконтролируемых реакций СРО, перекисного окисления биомолекул и ЭТ при различных патологических состояниях, развитие СЭИ у которых предопределено сдвигами метаболизма в сторону катаболизма, наличием депрессии иммунной системы, нарушением функции детоксикационных и выделительных систем организма.

Много вопросов поднимается вокруг маркеров интоксикации. Для экспресс-диагностики ОС и интенсивности реакций СРО в различных биологических средах применяются не только биохимические, но и биофизические методы. Одним- из достаточно доступных, не дорогостоящих, легко воспроизводимых методов диагностики СРО является метод регистрации быстрой вспышки хемилюминесценции (БВХЛ), величина которой определяется интенсивностью реакций СРО и количеством накапливающихся при этом свободнорадикальных продуктов в обследуемом объекте (в случае плазма крови). Уровень продуктов СРО в свою очередь определяется антирадикальной емкостью системы АРЗ в местах их генерации и в организме в целом. Изучив показатели БВХЛ у больных с ОПН, СД с декомпенсированным кетоацидозом, ожоговой болезнью было установлено, что в условиях острой патологии, при развитии критических состояний они значительно выше контрольных и достаточно закономерно отражают тяжесть патологического процесса и интенсивность воздействующего повреждающего агента. У больных с хроническими заболеваниями, входящих во 2-ю обследуемую группу, выявлены существенные особенности течения и проявления СРП в крови (рис. 4).

Примечание. * - р<0,05.

В БВХЛ

Рис. 4. Интенсивность БВХЛ у больных 1-й и 2-й группы.

Показатели БВХЛ у больных 2-й группы, хотя и превышали контрольные показатели, были существенно ниже аналогичных показателей больных 1-й группы. Так, у больных СД 1 типа БВХЛ превышала показатели контрольной группы в 6,6 раза, у больных СД 2 типа - в 4,3 раза (р<0,05), у больных с ХПН 1-П - в 1,2 раза (р>0,05), а у больных с ХПН 1П, в отличие от всех других групп, выявлено практически двукратное снижение БВХЛ относительно данных контрольной группы (р<0,05).

У больных с хроническими заболеваниями, получающих в процессе лечебно-профилактических мероприятий базисное лечение, с включением в том числе и антиоксидантов, картина СРП в плазме крови не адекватна аналогичным процессам в клетках. При этом данные ХЛ анализа не отражают фактическое состояние системы про-/антиоксиданты, а у некоторых нозологических групп хронических больных, как, например, у больных с ХПН Ш, получающих диализную терапию, могут дать заведомо ложноотрицательные результаты, отражающие отсутствие ОС. Невысокие или даже сниженные показатели БВХЛ у больных с ХПН объясняются накоплением в плазме крови этих больных большого количества низкомолекулярных соединений с антиоксидантными свойствами (мочевина, мочевая кислота, ураты, креатинин и другие), которые в водной среде гасят реакции СРО, связывают радикальные продукты. Низкие показатели ХЛ также могут быть обусловлены истощением биосубстратов, подвергающихся окислительной модификации (анемия, быстрое старение клеток, изменение липидного спектра биомембран). У больных СД очень высокие

значения БВХЛ объясняются тем, что в условиях хронической гипергликемии стимулятором реакций СРО и участником ОМБ, помимо других типовых факторов, является глюкоза и ее дериваты [Воейков В Л., 2003].

Для объективной характеристики ОС изучение состояния прооксидантной системы необходимо проводить в комплексе с использованием различных маркеров ОС, и, прежде всего, ТБК-активных продуктов, образующихся в результате окислительной модификации различных биомолекул (жиров, белков и углеводов), способных в определенных условиях давать окрашенные продукты при взаимодействии с тиобарбитуровой кислотой [Панкин В.З. и др., 1975; Gray G.J., 1978.]. Количество ТБК-активных веществ выражали в виде ТБЧ эритроцитов и плазмы, при этом в эритроцитах определение ТБЧ проводили сразу после забора крови (базальный уровень ТБЧ) и после индукции in vitro перекисных процессов с помощью УФО, пероксида водорода и ионов железа, как основных инициаторов перекисного окисления in vivo.

ТБЧэр., ТБЧэр-Ind, ОЕ

0 ТБЧэр ИТЧэр.1па Рис. 5. КоличествоТБК-активных продуктов в эритроцитах с индукцией и без индукции у больных 1-й и 2-й группы.

Проведенными исследованиями установлено, что показатели ТБЧэр., ТБЧэр.М, ТБЧ плазмы, а также ТБЧ общее (рис. 5, б и 7), изменяясь в целом достаточно закономерно, отражая мембранодеструктивные процессы, протекающие у той или иной группы больных на различных этапах заболевания, в отрыве от показателей антиоксидантного звена не дают исчерпывающей информации о состоянии баланса системы про-/антиоксиданты и выраженности ОС. Так как существует тесная зависимость между активностью основных факторов АОС и уровнем процессов перекисного окисления различных биосубстратов, для полноценной характеристики состояния баланса в системе про-/антиоксиданты и, следовательно, выраженности ОС

X О

Примечание. * - р<0,05.

необходимы знания по изменению показателей обоих звеньев эгой системы. Изучение состояния системы АОЗ необходимо проводить с учетом ее ферментных и неферментных компонентов.

ТБЧнл., ОЕ

Примечание. * - р<0,05. ЁЯТБЧпл.

Рис. 6. КоличествоТБК-активных продуктов в плазме крови у больных 1-й и 2-й группы.

ТБЧобщ, ОЕ

5 *

Примечание. * - р<0,05. Ш ТБЧобщ

Рис. 7. КоличествоТБК-активных продуктов в крови у больных 1-й и 2-й группы.

Изучение отдельно взятых ферментных или неферментных компонентов АОС или оценка каждого из ее звеньев в отрыве от других может приводить к получению выводов, не соответствующих истинной картине ОС, выраженности патологического процесса и возможных его осложнений.

Для решения вопроса о выявлении ведущего звена или звеньев в развитии ОС при различных острых и хронических заболеваниях были проведены исследования различных параметров системы АОЗ эритроцитов, как универсальной клеточной системы, у больных 1-й и 2-й группы. В работе представлены результаты исследований, полученные при определении активности основных ферментов АРЗ - СОД, КАТ и вспомогательных ферментов - Г-6-ФДГ и СДГ эритроцитов. Данные, полученные при исследовании эритроцитов крови больных 1-й группы, отражают состояние клеточного ферментного звена АОС в начальной стадии формирования острого патологического процесса, а у больных 2-й группы - динамику этих же показателей АОС на фоне хронического заболевания. Одновременно у этих же больных определялся уровень сульфгидрильных групп эритроцитов как ключевого неферментного компонента АОС и количество самих эритроцитов, которое зависит от метаболических процессов, протекающих в самих клетках, и уровня токсичности биологических сред. Объединяющим звеном изучаемых патологий является СЭИ, проявляющийся эндотоксинемией, которая имеет смешанный продукционно-ретинционный характер, т.к. у всех обследуемых больных отмечается состояние гиперкатаболизма и нарушение выделительной функции почек.

В эритроцитах уже на ранних стадиях развития ЭТ и ОС происходят значительные изменения активности ферментов АОС и, как следствие, состояние их клеточных мембран, что проявляется в повышении проницаемости и увеличении сорбционной способности для низкомолекулярных веществ. Подтверждением снижения функциональной активности эритроцитов и их жизнеспособности у всех категорий обследованных больных, у которых выявлены характерные признаки ОС и ЭИ, является снижение их количества, особенно у больных 1-й группы (рис. 14).

Необходимо отметить, что развитие многих критических состояний, сопровождается резко выраженным гемолизом и анемией, вызванной лавинообразным увеличением в крови концентрации гемотоксинов и неспособностью защитных систем организма к адекватной реакции (ожоговая травма). Прежде всего, это связано с усиленной генерацией АФК [Дубинина Е.Е., 2001] и интенсификацией реакций СРО, что приводит к превалированию прооксидантных факторов над мобилизационными ресурсами АОС эритроцитов. У больных СД и ХПН 1-П степень анемии невысока за счет долговременной адаптации системы АОЗ организма, но и у этих больных высок риск прогрессирования анемии и перехода ее в более тяжелую стадию за счет углубления имеющегося ОС. Наглядно это прослеживается у больных СД, при осложнении декомпенсированным кетоацидозом, и у больных с ХПН 1П, у которых количество эритроцитов снижается до уровня наиболее тяжелых больных с ожоговой болезнью В комплекс мероприятий для коррекции анемии обязательно должны входить комбинированные антиоксидантные средства, обладающие мембранопротекторным действием.

При исследовании АОС эритроцитов установлено, что изменения активности основных (КАТ, СОД) и вспомогательных (Г-6-ФДГ, СДГ) ферментов АРЗ, носят разнонаправленный, разновыраженный характер, как у больных, относящихся к различным нозологическим группам, так и у больных с одной и той же нозологической формой заболевания (рис, 8, 9, 10 и 11). Одним из ключевых ферментов АОЗ эритроцитов и других клеток организма является фермент СОД, который формирует первую линию АРЗ Определение активности СОД эритроцитов является основой оценки антиоксидантного статуса организма на клеточном уровне. При исследовании этого показателя выявлены отклонения активности СОД от показателей контрольной группы (рис 8). У больных с ХПН 1-11 выявлено повышение активности СОД на 22,5% (р<0,05) относительно контрольной группы В ходе прогрессирования болезни и, особенно, при переходе заболевания в терминальную фазу активность СОД значительно возрастает, что установлено у больных с хронической патологией почек. Так, у больных с ХПН III активность СОД на 48,2 % (р<0,05) выше показателя контрольной группой и на 16,5% выше, чем у больных с ХПН 1-П. Повышение активности СОД у больных с острой патологией отмечено при развитии критических состояний, таких как ОПН

- на 32,9 % (р<0,05), у больных с ожоговой болезнью с ИФ II - на 8,6 % (р<0,05), ИФ 1П - на

22.0 % (р<0,05) Повышение активности фермента в условиях острой патологии расценивается как адаптационный механизм системы АОС в ответ на гиперпродукцию АФК и усиление СРП. У больных СД с длительным стажем заболевания отмечено снижение активности СОД. Так, активность СОД у больных СД 1 типа была снижена на 45,7 % (р<0,05) и у больных СД 2 типа

- на 40,4 % (р<0,05), что вероятно связано с гликозилированием этого фермента и нарушением его синтеза при дефиците инсулина. Еще более значительное снижение активности СОД установлено у больных СД с декомпенсированным кетоацидозом - на 46,5 % (р<0,05), что необходимо расценивать как крайне неблагоприятный признак в развитии декомпенсации системы АОЗ организма. В целом, как повышение, так и понижение активности СОД у различных категорий больных означает расбалансированность АОС, при этом повышение активности СОД может стать причиной избыточного образования перекиси водорода, а низкая активность может привести к накоплению супероксидного анион-радикала.

При изучении активности КАТ у тех же категорий больных установлено, что изменения ее активности имеют некоторые особенности. КАТэр у больных с ХПН, несмотря на длительность и тяжесть заболевания, оказалась пониженной незначительно Даже у больных с крайне тяжелой формой заболевания - терминальной ХПН снижение активности КАТ было на

11.1 % (р<0,05) по отношению к данным контрольной группы. У больных СД и явлениями нефропатии, протекающей не столь тяжело, как у больных с ХПН III, выявлено повышение активности КАТэр примерно в равной степени независимо от типа СД. У больных СД 1 типа КАТэр была повышена на 33,3 % (р<0,05), у больных СД 2 типа - на 35,2% (р<0,05, по отношению к показателям контрольной группы) У больных 1-й группы с острой патологией активность КАТэр изменялась разнонаправленно Так, у больных с ожоговой травмой при нетяжелых (ИФ I) и тяжелых ожогах (ИФ II) активность КАТэр была достоверно повышенной -на 32,2% и 49,4% соответственно (р<0,05). У крайне тяжелых больных с ожоговой болезнью

(ИФ III) отмечалось наиболее выраженное увеличение активности КАТэр на 65,6% (р<0,05). Из всех обследуемых больных 1-й группы только у больных с ОПН наблюдалось снижение активности КАТэр на 14,8 % (р<0,05).

Похожие по направленности изменения данные были выявлены при анализе результатов активности КАТгем (рис. 9), которая отражает активность внутриклеточной и мембранной фракций КАТ, в отличие от вышеописанных данных, которые отражают состояние только мембранной фракции фермента. У больных с ХПН 1-И активность КАТгем была статистически незначимо понижена, в то время как у больных с ХПН III активность фермента была снижена существенно - на 22,5 % (р<0,05). Не было также выявлено статистически значимых (р>0,05) изменений активности КАТгем у больных СД 1 и 2 типов, что свидетельствует о более высокой толерантности внутриклеточных защитных механизмов к повреждающим факторам и большей емкости внутриклеточных компонентов АОС. У всех групп больных с ожоговой травмой было выявлено значительное увеличение активности КАТгем, которая у них была повышена уже в первые сутки болезни в пределах 69,7% - 99,8% (р<0,05). Это, в основном, связано с ранним развитием травматического гемолитического синдрома и быстрым включением в действие внутриклеточных адаптационных защитных систем и механизмов, направленных на восстановление баланса в системе про-/антиоксиданты. У больных СД при развитии декомпенсированного кетоацидоза, в отличие от тяжелых ожоговых больных, наблюдалось снижение активности КАТгем на 23,6 % (р<0,05). У больных с ОПН наблюдалось снижение активности КАТгем на 19,6 % (р<0,05), что свидетельствует о различиях в механизмах ответной реакции системы АОЗ организма на повреждающий фактор в условиях ОС при развитии критических состояний.

СДГ является рудиментарным ферментом эритроцитов, роль которого в зрелых эритроцитах, лишенных митохондрий, до настоящего времени точно не определена. Исследование СДГ отражает общую ФАД-дегидрогеназную активность эритроцитов. При исследовании СДГ эритроцитов у больных 1-й и 2-й групп было выявлено снижение ее активности у всех категорий обследуемых больных относительно показателей контрольной группы (рис. 10), минимально у больных с ХПН 1-П - на 13,7 % (р<0,05) и максимально у больных с ожоговой болезнью при ИФ III - на 63,5% (р<0,05).

Главным поставщиком восстановительных эквивалентов в эритроцитах для поддержания необходимого уровня низкомолекулярных антиоксидантов является пентозофосфатный путь окисления глюкозы, ключевым ферментом которого является Г-6-ФДГ. Изменение ее активности тесно связано с количеством восстановленных тиоловых групп в эритроцитах, а также активностью глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы, принимающих участие в метаболизме глутатиона. Именно с падением активности Г-6-ФДГ связывают склонность эритроцитов к лизису. Учитывая это, в настоящей работе изучение активности Г-6-ФДГ эритроцитов было проведено у больных с острой и хронической патологией 1-й и 2-й групп наряду с активностью КАТ и СОД (рис. 11).

250-fl

СОД, мкмоль НСТ/10л9Эр/мин

« и

Примечание. р<0,05 вов сех случаях.

□ активность СОД эритроцитов Рис. 8. Активность супероксиддисмутазы эритроцитов у больных 1-й и 2-й группы.

КАТ тем, ммоль Н202 /Ю^Эр/мин

ег о

Примечание. * - р<0,05. В активность каталазы гемолизированных эритроцитов

Рис. 9. Активность каталазы гемолизированных эритроцитов у больных 1-й и 2-й группы.

ФАД, мкмоль НСТ/1 О^Эр/мин

04

IIIIII18IIIIIIIIIII

I i

С N

- э

ч « I и и я

i

S

I

5

Примечание. * - р<0,05.

И ФАД-дегидрогеназная активность Рис. 10. ФАД-дегидрогеназная активность эритроцитов у больных 1-й и 2-й группы.

Г-6-ФДГ, мкмоль НАДФН/Ю^Эр/ мин

7006005004003002001000-

ш fl fl~

inim ii i 11111111 ii

В р I

«S - |

ч ч §

и и я

X S

8 i

5 И Í

5 *

Примечание. * - р<0,05.

■ активность Г-6-ФД эритроцитов Рис. 11. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы эритроцитов у больных 1-й и 2-й группы.

У больных с ХПН консервативного характера наблюдается незначительное снижение активности фермента, по мерс прогрессирования болезни происходит дальнейшее снижение

активности Г-6-ФДГ, и при переходе в терминальную фазу ХПН отмечается статистически значимое снижение активности этого фермента. Наиболее низкие значения активности Г-6-ФДГ из всех категорий обследуемых больных отмечены именно при ХПН 1П, что, по-видимому, связано с глубокими расстройствами метаболизма эритроцитов в результате нарушения процессов нормального их синтеза и созревания в связи с дефицитом эритропоэтина, образование которого ограничено у больных с ХПН из-за резкого уменьшения количества функционирующих нефронов. Достоверное различие (на 10,2%, р<0,05) активности Г-6-ФДГ наблюдается между больными с ХПН III и ХПН I-II. Активность Г-6-ФДГ у больных СД 1 типа была повышенной на 26,0 % (р>0,05), у больных СД 2 типа - на 35,1 % (р<0,05). У больных с ожоговой травмой повышение активности Г-6-ФДГ составило от 15,4% (р<0,05) при ИФ I до 37,3 % (р<0,05) при ИФ III. Наибольшее повышение активности Г-6-ФДГ относительно показателей контрольной группы выявлено у больных СД с декомпеисированным кетоацидозом на 199,5 % (р<0,05). В этой группе больных отмечен значительный разброс показателей активности Г-6-ФДГ. У больных с ОПН, в отличие от других категорий больных 1-й группы, наблюдалось снижение активности Г-6-ФДГ (в среднем на 14,3 % (р<0,05)).

Незначительные и не всегда однонаправленные изменения активности ферментов АОС эритроцитов, определяемые в различных лабораториях у больных с острыми и хроническими заболеваниями, не являются достаточным критерием окончательной диагностики ОС и свидетельствует либо о невысокой диагностической значимости избирательного изучения отдельных ферментов АОС либо о невысокой чувствительности применяемых методов [.Плужников H.H. и др., 2000], что было подтверждено в ходе работы.

Наиболее чувствительным звеном АОС, изменяющимся однонаправленно и закономерно в сторону понижения при различных заболеваниях, является уровень белково-пептидных SH-групп эритроцитов (рис. 12). Как видно из данных, представленных на графике, у всех обследованных категорий больных 1-й и 2-й группы значительно снижено количество сульфгидрильных групп эритроцитов. Разница в показателях SH-групп между крайне тяжелыми больными и больными средней степени тяжести составляет два раза и более, что закономерно отражает степень метаболических нарушений в организме больного, уровень прооксидантной нагрузки и выраженность ОС Основной причиной снижения белково-пепетидных SH-групп в клетках и биологических жидкостях в условиях патологии является их окислительная модификация, о чем свидетельствует одновременное увеличение дисульфидных группировок {Герасимов A.M., Фурцева Л.И, 1986\.

Количество SH-гр., ммоль/л

3

Примечание. р<0,05 во всех случаях BSH-группы

Рис. 12. Содержание восстановленных тиолов эритроцитов у больных 1-й и 2-й группы.

Проведя разноплановые исследования по изучению уровня ЭТ, токсичности сред и системы про-/антиоксиданты, убедившись в недостаточно высокой диагностической ценности отдельных изучаемых параметров для объективной характеристики СЭИ и ОС, в работе был применен оригинальный интегральный подход для оценки уровня ЭТ с использованием модифицированного показателя - индекса эндогенной интоксикации (ИЭИ), который рассчитывается на основе коэффициента катаболической деструкции (ККД) [Дынько ЮВ, Павлюченко ИИ, 2004] Для объективной характеристики уровня ОС применен авторский оригинальный расчетный коэффициент - коэффициент окислительной модификации эритроцитов (КОМБэр., патент на изобретение, Павлюченко ИИ, Басов A.A., Федосов С.Р., 2003), отражающий наличие и выраженность дисбаланса в системе про-/антиоксиданты на клеточном уровне, что крайне важно для назначения эффективной дозированной антиоксидантной терапии. При расчете ИЭИ и КОМБэр. используются показатели, отражающие вклад реакций СРО в формирование эндотоксинемии и ОС при различных заболеваниях (ТБК-активные продукты), при этом для расчета КОМБэр. также используется показатель, который наиболее закономерно отражает состояние А ОС эритроцитов - SH-группы. Для выяснения взаимосвязи и взаимозависимости возникновения и течения ЭТ и ОС проведен корреляционный анализ показателей КОМБэр., ИЭИ и количества эритроцитов в крови больных при развитии критических состояний и при длительном течении хронических заболеваний. Кроме того, для сравнительной, более объективной оценки состояния АОС

эритроцитов в условиях ЭТ и ОС и выявления закономерностей изменения активности ферментов 1-й и 2-й линии защиты относительно друг друга проведен анализ взаимозависимого функционирования ферментов СОД и КАТ у обследуемых категорий больных (рис. 13). Такой интегративный подход анализа активности ферментов рассматривается рядом авторов как один из способов контроля сбалансированности работы системы АОЗ и важный прогностический фактор перехода системы АОЗ в стадию дезадаптации [Сукоян Г.В. и др., 2001; Warner A. el al.,

Проведенные исследования и расчеты выявили разновыраженные и разнонаправленные изменения анализируемого коэффициента у больных, относящихся к различным нозологическим группам. При этом установлены определенные закономерности изменения соотношения КАТ/СОД в эритроцитах больных одной и той же нозологической группы, в зависимости от тяжести патологического состояния, несмотря на неравнозначные изменения активности каждого из ферментов в этих группах, причем зачастую разнонаправленные. Так, у больных с патологией почек активность каталазы снижается по мере прогрессирования болезни или при развитии острых осложнений, активность СОД, наоборот, при этом повышается, а показатель КАТ/СОД имеет тенденцию к снижению согласно тяжести патологического процесса у больных как с ХПН, так и ОПН. В то же время у больных с СД и ожоговой болезнью соотношение было повышено. Рассматривая показатели соотношения КАТ/СОД эритроцитов у различных категорий обследуемых больных по нозологиям, необходимо отметить, что среди больных, страдающих СД, самое низкое значение этого показателя выявлено у тех больных, у

1995].

КАТ/СОД х 100, у.е.

6" 5 4 3 2 1

В активность КАТ / активность СОД

Рис. 13. Соотношение активности КАТ / СОД у больных 1-й и 2-й группы.

которых СД осложнился декомпенсированным кетоацидозом, среди больных с заболеваниями почек - у больных с ХПН Ш, а среди больных с ожоговой травмой - у больных с ИФ III.

На основании полученных данных можно сделать заключение, что показатель КАТ/СОД является одним из главных критериев для оценки степени дисбаланса в ферментном звене АОЗ и важным прогностическим фактором в течении болезни. Исходя из вышеописанного, необходимо также отметить, что определение показателя КАТ/СОД в условиях многопрофильного лечебно-профилактического учреждения может рассматриваться как один из главных и наиболее объективных параметров, используемых для мониторинга состояния системы про-/антиоксиданты в рамках комплексной оценки ОС у больных с различной патологией и контроля за проводимой терапией. Особенно актуально такое наблюдение в амбулаторных условиях, как один из критериев для повторных госпитализаций в стационар больных с хроническими заболеваниями, при выявлении прогрессивного снижения показателя КАТ/СОД.

Интегральные показатели уровня ОС и ЭТ, полученные при исследовании крови больных 1-й и 2-й группы представлены на рис. 14. Сравнивая всех обследованных больных по ИЭИ, их можно разделить на три группы: I степень ЭИ: до 40 % ГК - средней тяжести ЭИ (больные СД 1 и 2 типа), II степень ЭИ: от 40 % ГК до 70 % ГК - тяжелый синдром ЭИ (больные с ОПН в 1-е сутки заболевания, больные с ожоговой болезнью ИФ I, больные с ХПН 1-П), III степень ЭИ: более 70 % ГК - крайне тяжелый синдром ЭИ (больные СД с декомпенсированным кетоацидозом, больные с ОПН на 4-е сутки и с ХПН III, больные с ожоговой болезнью с ИФ II и ИФ 1П). Данная градация ЭИ достаточно объективно отражает тяжесть клинической картины заболевания и выраженность структурно-метаболических нарушений в организме больного на той или иной стадии болезни и может быть использована в клинической практике для мониторинга тяжести состояния больных и эффективности проводимой терапии. Особенно это важно при контроле за эффективностью применяемых экстракорпоральных методов лечения у больных с острым или хроническим ЭТ.

Определение эндотоксинемии в динамике с помощью ИЭИ позволит осуществлять раннюю диагностику перехода компенсированного состояния у хронических больных в стадию декомпенсации или тяжелых осложнений. Эффективность мониторинга ЭТ при хронических заболеваниях и развитии его осложнений наглядно прослеживается у больных СД при развитии декомпенсированного кетоацидоза, когда показатель ИЭИ возрастает практически в 2 раза по отношению к компенсированному состоянию СД. У обследованных больных с декомпенсированным кетоацидозом такие изменения наблюдались на фоне абсолютной инсулиновой недостаточности, высокого уровня гипергликемии, выраженных нарушений КЩС, водно-электролитного обмена, подтвержденных клинико-лабораторными данными, что свидетельствует о том, что ИЭИ объективно и точно отражает тяжесть клинической картины заболевания в целом на всех этапах болезни. Динамика нарастания явлений острого ЭТ прослеживается у больных с ОПН в 1-е и 4-е сутки, разница ИЭИ у которых составила 1,7 раза в сторону увеличения к 4-м суткам. Динамика перехода консервативной стадии ХПН в терминальную фазу отчетливо прослеживается при сравнении ИЭИ у больных с ХПН I-П и

ХПН III, у которых последний был выше в 1,8 раза, что свидетельствует о нарастании эндотоксинемии в результате вторичной аутоагрессии. Прогрессированис ЭТ, характеризующиеся увеличением ИЭИ, подтверждено у этих больных и другими клинико-лабораторными данными и, прежде всего, изменением скорости клубочковой фильтрации, которая определялась по уровню креатинина (более 710 мкмоль/л) и была значительно снижена. Степень снижения клубочковой фильтрации соответствовала уровню ЭТ, определенному по ИЭИ. Массивность и степень агрессивности повреждающего фактора можно проследить по изменению уровня ЭИ у больных с ожоговой болезнью с различной степенью ожоговой травмы. Разница показателя ИЭИ у больных с ИФ III составляет по сравнению с больными с ИФ 11-1,4 раза, с ИФ 1-2,1 раза.

Проведя градацию больных 1-й и 2-й группы используя интегральный показатель токсичности сред, было решено осуществить ранжирование этих же групп больных по уровню ОС. Используя полученные параметры КОМБэр у больных 1-й и 2-й группы по степени его выраженности, можно выделить три уровня ОС: 1-я степень - компенсированный ОС (КОМБэр до 3,0 ОБА, наблюдается при интенсивных физических и эмоциональных нагрузках и определенных физиологических состояниях); 2-я степень - субкомпенсированный ОС (КОМБэр от 3,0 до 7,0 ОБА - СД 1 и 2 типов, ХПН I-II, ожоговая болезнь с ИФ I); 3-я степень -декомпенсированный ОС (КОМБэр более 7,0 ОБА - СД с декомпенсированным кетоацидозом, ОПН, ХПН III, ожоговая болезнь с ИФ II и ИФ III). ОС 3-й степени, как правило, сопровождается ПОН, что наблюдалось у больных с ожоговой болезнью, у большинства из которых отмечен острый респираторный дистресс-синдром, почечно-печеночная недостаточность, синдром диссемннированного внутрисосудистого свертывания, подтвержденные клинико-лабораторными данными. У данной категории больных самые высокие показатели летальных исходов (более 50 %).

Исходя из полученных данных, необходимо отметить, что с помощью КОМБэр можно контролировать динамику развития ОС не только в ходе формирования критических состояний с присоединением острого ЭТ, вызванного различными факторами, но и в условиях хронического и затяжного ЭТ при хронических заболеваниях. Так, у больных с ИФ III показатель КОМБэр в 1,7 раза превышает аналогичный показатель больных с ИФ П и в 2,8 раза - показатель больных с ИФ I, что объективно и закономерно отражает возрастающую прооксидантную нагрузку на организм больного и ограниченные возможности системы А ОС при экстремальной интенсификации реакций СРО. У больных с ОПН разница между КОМБэр в 1-е и 4-е стуки составляет всего 0,4 ОБА, что свидетельствует о ранних сроках выхода ОС (практически в 1-е сутки заболевания) на свои максимальные значения при формировании критических состояний и доминирующую роль патологических реакций острого ОС в формировании ЭИ и ПОН. У больных СД при осложнении декомпенсированным кетоацидозом КОМБэр в 1,2-1,5 раза был выше, чем у больных СД 1 и 2 типов без кетоацидоза. Менее выраженная манифестация проявлений ОС при переходе хронического заболевания в критическое состояние свидетельствует об дезадаптации защитных систем и механизмов организма и одновременно об истощении наиболее доступных субстратов перекисного

окисления (изменение белково-липидного спектра биомембран и транспортных комплексов), продукты деградации которых являются основными маркерами ОС.

Суммируя полученные данные по изменению интегральных показателей ЭТ и ОС в динамике острого и хронического патологического процесса, можно отметить максимальные уровни прироста КОМБэр в пределах 2,3 - 2,8 раза (относительно показателей контрольной группы) у различных категорий больных с критическими состояниями и хроническими заболеваниями, тяжелой формой течения, что достаточно точно отражает степень вовлеченности в патологический процесс различных органов и систем. При развитии ПОН его показатели, как правило, максимальные, что характерно для больных с ожоговой болезнью ИФ II и 1П. Показатель КОМБэр более 15,0 ОБА, который был отмечен у ряда больных с ожоговой болезнью, является отражением крайней дезадаптации системы АОЗ, и риск летального исхода заболевания у таких больных крайне высок (больные с ожоговой болезнью ИФ III).

Для характеристики взаимосвязи ЭТ и ОС важным представляется проведение сравнительного анализа развития этих двух типовых патологических синдромов и определение корреляционных взаимоотношений между их выраженностью. Между анализируемыми интегральными показателями имеется положительная корреляционная взаимосвязь, г иэи/ комвэр = +0,84 (р<0,002), причем гораздо более существенная, чем при сравнении отдельных показателей, характеризующих ЭИ и ОС. На фоне такой общей положительной корреляции интегральных показателей у всех групп обследованных больных необходимо отметить некоторые установленные особенности взаимоотношений процессов СРО и ЭИ у больных 1-й группы с критическими состояниями, у которых интенсификация СРП и развитие ОС идет с некоторым опережением формирования СЭИ, в отличие от больных 2-й группы с хроническими заболеваниями, у которых проявления ОС и ЭТ либо выражены в равной степени, либо превалируют признаки ЭТ. При сравнении КОМБэр и ИЭИ выявлена высокая положительная корреляция этих показателей как у больных 1 -й группы (г = +0,93; р<0,05), так и 2-й обследуемой группы (г = +0,89; р<0,05). При этом корреляционная взаимосвязь становится более выраженной по мере генерализации патологического процесса: у больных с ЭИ 1-П степени (сахарный диабет 1 и 2 типов, ОПН в 1 -е сутки, ХПН I-II, ожоговая болезнь с ИФ I) Г(комБзр/иэи) = +0,72 (р>0,05), а у больных с ЭИ III степени (больные СД с .некомпенсированным кетоацидозом, ХПН Ш, ожоговая болезнь с ИФ II-III) г цсомвэр/иэи) = +0,88 (р<0,05), что указывает на существенную роль патобиохимических реакций ОС в развитии и прогрессировали патологического процесса, связанного с повреждением клеточных мембран, субклеточных структур, и в развитии дисфункции различных органов, прежде всего паренхиматозных (в данном случае почек).

В проведенных исследованиях было установлено, что метаболические нарушения, развивающиеся при критических состояниях и хронических заболеваниях, выраженно влияют на состояние и стабильность клеточных мембран, на их осмотическую и перекисную устойчивость и в конце концов способствуют повышенному цитолизу. В подтверждение этого у всех категорий больных с критическими состояниями выявлено увеличение уровня ССЭ и снижение количества эритроцитов Вклад ЭТ и ОС в развитие анемии можно оценить,

сопоставляя показатели количества эритроцитов в группах больных, ранжированных по ИЭИ, с показателями самого ИЭИ. Между ИЭИ, КОМБэр и количеством эритроцитов у всех обследованных больных установлена достоверная отрицательная корреляция: г комкэр/эр = -0,91 (р<0,01) и г иэи/эр = -0,92 (р<0,01) (рис. 14).

I

О ы

18 16 14 12 10

||б Г4

• 11 • А

■» я и,

120 100 80 60 40 20

-4 0

К

г?

к" о 8

II Индекс эндогенной интоксикации

О Коэффициент окислительной модификации биомолекул эритроцитов • эритроциты

Рис. 14. Показатели ИЭИ, КОМБэр и эритроцитов у больных 1-й и 2-й группы.

Показатели корреляции подтверждают ведущую роль перекисных процессов в развитии синдрома ЭИ и повреждении мембран, прежде всего эритроцитов. Причем, у больных в критических состояниях корреляционные зависимости примерно одинаковы как для интегральных показателей ОС (г комь^рор = -0,97; р<0,01), так и для показателей ЭИ (г иэи/эр = -0,97; р<0,01) и они более выражены по сравнению с показателями у больных с хроническими заболеваниями, у которых более значительная отрицательная корреляция отмечается между показателем ЭИ и количеством эритроцитов (г иэи/эр = -0,92; р<0,05), чем между ними и уровнем ОС (г комвзр/эр = -0,87; р=0,05).

Таким образом, при использовании интегральных показателей ОС и ЭИ расширяются представления о механизмах развития анемии в условиях токсемии и избытка АФК, что дает возможность определять ведущий фактор повреждения клеточных мембран при различных критических состояниях и хронических заболеваниях и позволяет проводить эффективную

медикаментозную коррекцию анемии с применением различных мемраностабилизирующих медикаментозных средств, в том числе и антиоксидантов.

Изменения показателей системы про-/антиоксиданты у обследуемых больных представлены в виде сводных таблиц 2, 3,4, 5, б и 7 (по нозологическим формам).

Таблица №2.

Показатели состояния ферментного и неферментного звеньев системы АРЗ у больных с ХПН и ОПН

Показатель \ Категория Контроль М + ш, п = 63 чел. ОПН (1 сутки) М±ш, п = 19 чел. ХПН I-II М±т, п = 24 чел. ХПН 1П М±т, N = 47 чел.

КАТэр., ммоль Н202/109 эр/мин 5,4 ±0,1 4,6 ± 0,2 * 5,1 ± 0,2 4.8 ±0,1 *

КАТгем, ммоль Н202/109 эр/мин 42,3 + 0,8 34,0 ±2,1 * 40,1 ± 1,9 32,8 ±1,2*

СОД, мкмоль НСТ/109 эр/мин 155,1 ± 1,8 206,1 ± 7,0 * 190,8 ±6,2* 229,8 ± 6,4 *

Г-6-ФДГ, мкмоль НАДФН /10® эр/мин 210,0 ±2,4 179,9 ±1,93* 198,1 ± 1,9 * 177,8 ±5,1 *

СДГ, мкмоль НСТ/10' эр/мин 136,7 ±3,2 106,4 ±4,7 * 118,1 ±1,9* 101,6 ±7,2*

БН-гр., ммоль/л 21,80 ±0,47 11,78 ±1,20* 18,21 ±0,65* 11,55 ±1,97*

Примечание. * - р < 0,05 по сравнению с контрольной группой

Таблица №3.

Показатели уровня ЭИ и состояния системы про-/антиокснданты у больных с ХПН и ОПН

Показатель \ Категория Контроль М±ш, п = 63 чел. ОПН (1 сутки) М±т, п = 19 чел. ОПН (4 сутки) М ± т, п = 19 чел. ХПН1-П М±т, п-24 чел. ХПН III М ± т, п = 47 чел.

Эритроциты, млрд/мл 4,50 ±0,10 3,10 ±0,10* 3,10 ±0,10* 4,20 ±0,11 2,80 ± 0,09 *

МсиНМэр., ед.пл. 11,9 ±0,7 11,9 + 0,2 16,7 ±0,2* 12,5 ±0,2 15,9 ±0,2*

МсиНМпл., ед. пл. 6,7 ± 0,4 13,5 ±0,3* 14,2 ±0,1 * 15,4 ±0,2* 20,7 ± 0,5 *

ККД.ЕМД 4,46 6,52 7,94 7,12 9,30

ИЭИ, % ГК 0,0 +46,1 +78,1 +59,5 +1б83

ССЭ, соп.ипИ 252,5 ± 7,6 426,5 ± 9,0 * 430,3 ± 6,7 * 372,0 ±4,8* 379,5 ±7,1 *

ТБЧ общ, ОЕ 1,15 ±0,03 1,17 ±0,02 1,35 ±0,01 * 1,22 ±0,01 1,48 ±0,02*

ТБЧ пл, ОЕ 0,248 ± 0,005 0,239 ±0,005 0,370±0,006 * 0,281 ±0,007 * 0,439±0,008 *

КОМБэрч ОБА 0,0 8,1 8,5 4,0 9,3

БВХЛ, усл. ед. 0,296 ±0,028 2,200±0,159* 2,207±0,123 * 0,365 ± 0,014 0,150±0,010*

Примечание. * - р < 0,05 по сравнению с контрольной группой

Таблица № 4.

Показатели состояния ферментного и неферментного звеньев системы ЛРЗ у больных с ожоговой травмой

Показатель \ Категория Контроль М±т, л = 63 чел. ИФI М±т, п = 32 чел. ИФН М±т, п = 42 чел. ИФШ М + т, п = 28 чел.

КАТэр., ммоль Н2О2/Ю9 эр/мин 5,4 ±0,1 7,1 ±0,1 8,1 ±0,1 8,9 ± 0,1

КАТгем, ммоль Н2О2 /10' эр/мин 42,3 ± 0,8 79,7 ± 0,2 85,4 ± 0,2 71,8 ±0,2

СОД, мкмоль НСТ/109 эр/мин 155,1 ±1,8 140,4 ± 1,7 168,4 ±1,9 189,2 ±2,7

Г-6-ФД1, мкмоль НАДФН /10® эр/мин 210,0 ±2,4 243,2 ±0,7 269,7 ± 0,6 288,4 ± 1,0

СДГ, мкмоль НСТ/10® эр/мин 136,7 ± 3,2 98,5 ± ОД 68,7 ± 0,3 49,9 ± 0,3

8Н-гр., ммоль/л 21,80 ± 0,47 16,70 ±0,02 13,24 ± 1,20 8,02 ± 0,02

Примечание, р < 0,05 во всех случаях по сравнению с контрольной группой

Таблица № 5.

Показатели уровня ЭИ и состояния системы про-/антиоксиданты у больных с ожоговой травмой

Показатель \ Контроль ИФ I ИФИ ИФШ

Категория М±т, М±т, М±т, М±т,

п = 63 чел. п = 32 чел. п = 42 чел. п = 28 чел.

Эритроциты, 4,50 ±0,10 3,70 ±0,07 * 3,15 ±0,05* 2,60 ±0,09*

млрд/мл

МсиНМэр., 11,9 ±0,7 14,9 ± 0,3 » 17,5 ±0,3* 21,0 ±0,4*

ед.пл.

МсиНМпл., 6,7 ±0,4 11,5 ±0,2* 13,4 ±0,2* 15,2 ±0,3 *

ед. Пл.

ККД.ЕМД 4,46 6,70 7,82 9,09

ИЭИ,%ГК 0,0 +50,3 +75,3 +103,7

ССЭ, соп.ипй 252,5 ±7,6 383,7 ± 7,9 * 437,0 ±9,7* 539,6 ± 6,0 *

ТБЧ общ, ОЕ 1,15 ±0,03 1,33 ±0,03* 1,50 ±0,02* 1,70 ±0,03*

ТБЧ пл, ОЕ 0,248 ± 0,005 0,264 ±0,005 0,280 ± 0,004 * 0,332 ± 0,009 *

КОМБэр., ОЕА 0,0 5,8 9,8 16,3

БВХЛ, усл. ед. 0,296 ± 0,028 1,200 ±0,075* 1,950 ±0,087* 3,300 ± 0,337 *

Примечание. * - р < 0,05 по сравнению с контрольной группой

Таблица №6.

Показатели состояния ферментного и неферментного звеньев системы АРЗ у больных сахарным диабетом

Показатель \ Категория Контроль М±ш, п = 63 чел. СД 1 типа М±ш, п = 34 чел. СД 2 типа М ± т, п = 42 чел. Кетоацидоз М±ш, п = 22 чел.

КАТэр., ммоль H2O2/IO9 эр/мин 5,4 ±0,1 7,2 ± 0,6 * 7,3 ±0,4* 5,7 ±0,5

КАТгем, ммоль Н202 /10® эр/мин 42,3 ±0,8 41,4 + 3,3 42,9 ±4,1 32,3 ± 2,7 *

СОД, мкмоль HCT/109 эр/мин 155,1 ± 1,8 84,2 ± 8,9 * f 92,5 + 7,9* 83,0 ±12,9*

Г-6-ФДГ, мкмоль НАДФН /109 эр/мин 210,0 ±2,4 264,5 ±36,6 , 283,8 ± 25,9 * 628,9 ±163,2*

СДГ, мкмоль НСТ/109 эр/мин 136,7 ± ЗД ± 6,9 .* / 117,8 ± 14,8 78,6 + 8,4*

SH-rp., моль/л 21,80 ±0,47 15,78 ±^'01 * / 16,94 ±0,91 * 14,51 ±1,14*

Примечание. * - р < 0,05 по сравнению с контрольной группой

Таблица № 7.

Показатели уровня ЭИ и состояния системы про-/аятиоксиданты у различных категорий больных сахарным диабетом

Показатель \ Категория Контроль М ± т, п = 63 чел. СД 1 типа М±т, п = 34 чел. СД 2типа М±ш, п = 42 чел. Кетоацидоз М±ш, п = 22 чел.

Эритроциты, млрд/мл 4,50 ±0,10 4,10 + 0,17 4,20 ±0,15 3,60 ±0,12*

МСиНМ эр., 11,9 ±0,7 12,7 ±0,7 12,2 ±0,7 .14,8 ± 0,8 *

ед. пл.

МСиНМ пл., 6,7 ± 0,4 10,5 ±0,6* 11,1 ±1,0* 14,5 ±0,9*

ед. пл.

ККД.ЕМД 4,46 6,09 6,07 7,62

иэи, % гк 0,0 +36,4 +36,1 +70,8

ССЭ, con.unit 252,5 ± 7,6 453,3 ± 15,3 * 396,3 ± 12,3 * 482,8 ± 38,4 *

ТБЧ общ, ОЕ 1,15 ±0,03 1,49 ±0,11 * 1,28 ±0,09 1,49 ±0,03*

ТБЧ пл, ОЕ 0,248 ± 0,005 0,517 ± 0,006* 0,362 ± 0,037 * 0,401 ±0,077*

КОМБэр., ОЕА 0,0 6,0 4,8 7,2

БВХЛ, усл. ед. 0,296 ±0,028 1,960 ± 0,096* 1,270 ± 0,089 * 3,100 ± 0,286*

Примечание. - р < 0,05 по сравнению с контрольной группой

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА С.Петер*лп 9) W мг

Проблема лечения многих заболеваний связана с восстановлением нарушенных функций систем специфической и неспецифической защиты организма, в том числе и системы АОЗ. Широкая реклама современных антиоксидантных (АО) средств выдвигает задачи по совершенствованию имеющихся и разработке новых эффективных и относительно простых способов определения антиоксидантной активности (АОА) вновь разрабатываемых и уже выпускаемых фармацевтической промышленностью фармпрепаратов и БАД с выражением ее в условных (универсальных) единицах. Это важно и для тех медикаментозных средств, у которых АО эффект является основным, и для тех, у которых он является сопутствующим другим лечебным свойствам (противовоспалительным, иммуномоделирующим, цитостатическим, гепатопротекторным и т.д.) [НасыровХМ., 1987].

Актуальной проблемой является сравнительное изучение АОА фармпрепаратов и БАД в соответствующих тест-системах с применением различных методов регистрации АОА еще до использования в клинической практике. Одним из подходов к изучению АОА постоянно растущего перечня природных и получаемых искусственным путем антиоксидантных средств является их апробация in vitro в специально создаваемых тест-системах с искусственной индукцией СРП в них. Инициирование СРП проводится с помощью различных факторов химической и физической природы, как индивидуально, так и путем комбенированной индукции, что моделирует аналогичные условия, возникающие в организме человека при некоторых физиологических и многих патологических состояниях (например, гемолиз с высвобождением ионов Fe2+ и лучевая терапия при онкологических заболеваниях). Оценка АОА в этих случаях производится по способности тормозить образование и накопление промежуточных и конечных продуктов окислительной модификации определенных биосубстратов (вносимых в реакционную среду заранее) в соответствующих тест-системах. Достаточно распространенным является способ изучения АО свойств препаратов in vitro с помощью хемшцоминесцентных методов [Любицкий ОБ, Клебанов Г И., 2001; Страутина Е.П. и др., 2001], в том числе с помощью люминол-НгОг зависимой хемилюминесценции.

В работе проведены исследования АОА фармпрепаратов и БАД, которые широко используются в комплексном лечении острых и хронических заболеваний с использованием известных и авторских тест-систем [патент № 2182706, 2001, Павлюченко И.И, Басов A.A., Федосов С.Р.]. В ходе исследования АОА фармпрепаратов в авторской тест-системе [Павлюченко ИИ. и др., 2001], содержащей комплекс ненасыщенных жирных кислот, псрекисное окисление которых инициировалось физическими (УФО) и химическими (FeSOi) индукторами СРП (тест-система 1) установлено, что наибольший АО эффект выявлен при добавлении в тест-систему препаратов липоевой кислоты (рис. 15). Другие тестируемые препараты проявили разновыражениый АО эффект, наименее выраженный у диабетона.

В ходе исследования АОА фармпрепаратов в авторской тест-системе с применением химических (перекись водорода и сульфат железа (II) - система Фентона №Q> / Fe24)) индукторов СРП (тест-система 2) установлено, что максимальный ингибируюший эффект в отношении СРП наблюдался также при использовании препаратов липоевой кислоты (рис. 16).

диабетон Но,6

эспа-липон

берлитион

тиоктацид НИИ

глутатион формула в

пикногенол ■10,8

нейроксиген 1,41

бета-каротин НО,7

Эстер Си с

убихинон ■■И

0 1 2 3 4 5 6 7

■ Лнтиоксидавтная активность АОА, (2-ЕД

Рис. 15. Антиоксидантная активность фармпрепаратов и БАД в тест-системе с УФО.

диабетон эспа-липон берлитион тиоктацид глутатион формула пикногенол нейроксиген бета-каротин Эстер Си убихинон

■4,31 |4,4|

13,91

14,51

1 1,5 2 2,5 3 3,5 ■ Антиоксидантная активность

4,5

АОА, (2-ЕД

Рис. 16. Антиоксидантная активность фармпрепаратов и БАД в тест-системе с перекисью водорода.

При изучении способности фармпрепаратов и БАД влиять на процессы СРП в системе люминол—Н2О2 зависимой хемилюминесценции, содержащей плазму крови и исследуемый препарат, индукция СРП в которой осуществляется с помощью перекиси водорода (тест-

система 3), установлено, что максимальным ингибирующим СРП эффектом в этой тест-системе обладают так же препараты липоевой кислоты (рис. 17).

диабетон эспа-липон берлитион тиоктацид глутатион формула пнкногенол нейроксиген бета-каротин Эстер Си убихинон

70 80 90 %-тё БВХЛ, %.

I %-т§ БВХЛ

Рис. 17. Ангиоксидантная активность фармпрепаратов и Б АД в тест-системе с перекисью водорода.

Проведенные комплексные исследования фармпрепаратов и Б АД, относящих к разным классам АО (согласно представленной классификации), показали значительный разброс их АОА, как между отдельными классами, так и внутри одного класса антиоксидантов. Проведенный сравнительный анализ результатов АОА по группам препаратов и Б АД, полученных в каждой из тест-систем, выявил корреляционные взаимоотношения АОА между вН-содержащими (тиоктацид, берлитион, эспа-липон, глутатион формула - группа А) и иными (убихинон, бета-каротин, нейроксиген, пикногенол, Эстер Си - группа Б) веществами.

Так коэффициенты корреляции АОА протестированных соединений в тест-системах, для группы А составили: г1А1ССТНаяив(1у(2)= + 0,93 (р=0,05); г2Атест<ЯстПИ(1у(з)= + 0,81 (р>0,05); г3*^. аюю1»<2у(3)= + 0,97 (р<0,05).

Для группы Б коэффициенты корреляции АОА составили: Г тест-система (р>0,05); 1гБИстчЯсге«.(1У(Э)= + 0,32 (р>0,05); г1Б™с«яиси,(2Мз)= - 0,14.

Полученные коэффициенты свидетельствуют о высокой и стабильной АОА тиолсодержащих препаратов (группа А) к различным индукторам СРО, которую они продемонстрировали во всех тест-системах, что указывает на универсальный характер их АО свойств и позволяет достаточно точно прогнозировать их лечебно-профилактический эффект.

В группе Б, помимо более низких значений АОА, выявлена менее выраженная (как прямая, так и обратная) корреляционная зависимость АОА тестируемых препаратов по

сравнению с группой А, что указывает на ограниченный и строго индивидуальный АО эффект этих препаратов.

Исходя из полученных результатов, при разработке и внедрении в клинику препаратов, аналогичных представленным в группе Б, для подтверждения их АО свойств требуется более направленная их апробация в различных модельных тест-системах с использованием как физических, так и химических инициаторов СРП Для стандартизации антиоксидантов прямого действия целесообразно использовать унифицированную классификацию для них исходя из механизма их действия с последующей цифровой маркировкой и указанием антиокислительной активности в универсальных единицах (убихиноновые единицы).

ВЫВОДЫ

1. Проведенные многоплановые исследования состояния системы про-/антиоксиданты, включающие анализ ХЛ, ферментных и неферментных показателей системы АОЗ эритроцитов и уровня прооксидантов в эритроцитах и плазме крови различных категорий больных, позволили отобрать наиболее информативные параметры, изменения которых достоверно свидетельствуют о наличии ОС. Это уровень сульфгидрильных групп, ТБК-активных продуктов эритроцитов и степень эндотоксинемии, определяемая по ИЭИ.

2. КОМБэр и ИЭИ являются объективными и достоверными критериями оценки уровня ОС и ЭИ, и как следствие тяжести патологического процесса, позволяющими осуществлять мониторинг проводимой терапии и характера развития заболевания.

3. При острых критических патологических состояниях и хронических заболеваниях с явлениями полиорганной дисфункции (при ожоговой болезни, декомпенсированном кегоацидозе, О ПН, ХПН) регистрируется ОС, выраженность которого на ранних этапах формирования ПОН имеет достоверную положительную корреляцию с уровнем ЭИ.

4. ОС, оцениваемый в 6-9 ОЕА, свидетельствует о сохранении определенных резервов адаптационных защитных механизмов организма человека, а ОС с уровнем в 9 и более ОЕА позволяет судить о значительном их истощении, что можно расценивать как неблагоприятный прогностический признак.

5. Определение соотношения КАТ/СОД эритроцитов является объективным и достоверным маркером дисбаланса в системе про-/антиоксиданты. Снижение этого показателя в динамике течения патологического процесса отражает дальнейшее нарушение метаболических процессов в организме больного и прогрессирование заболевания.

6. Модельные опыты in vitro с использованием физических и химических индукторов СРО в тест-системах, содержащих природные субстраты окисления, показали, что антиоксидантные медикаментозные средства и БАД являются модераторами баланса в системе про-/антиоксиданты крови.

7. Разработан новый способ оценки АОА фармпрепаратов и БАД по их способности ингибировать или прерывать индуцированные в модельных тест-системах процессы ПОЛ.

8. Наиболее высокий антиоксидантный эффект выявлен у тиолсодержащих медикаментозных средств и БАД, что подтверждено в разных тест-системах.

9. Предложена стандартная (убихиноновая) единица оценки антиоксидантной емкости лечебных и профилактических антиоксидантных средств, что важно для совершенствования технологий приготовления Б АД и осуществления контроля за их производством и хранением.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Павлюченко И.И., Еремина Т.В. Резистентность плазматических мембран эритроцитов и активность глюкозо-б-фосфатдегидрогеназы и каталазы при ожоговой болезни // Int. J. immunorehabilitation. - 1997. - № 4. - P. 129.

2. Сторожук П.Г., Павлюченко И.И., Блинова Т.В., Дынько Ю.В. Показатели антиоксидантной системы эритроцитов у хирургических больных с сопутствующим синдромом эндогенной интоксикации // Вестн. интенсив, терапии. - 1998. - Прил. к журн. № 4,- С.14-15.

3. Сторожук П.Г., Павлюченко И.И., Еремина Т.В., Конько Н.П., Бирюкова Н.В. Активность каталазы, резистентность плазматических мембран, уровень SH-групп эритроцитов в различные периоды ожоговой болезни, осложненной гастродуоденальной патологией // Вестн. интенсив, терапии. - 1998. - Прил. к журн. «Анестезия и интенсивная терапия в хирургической гастроэнтерологии», - С. 15-16.

4. Сторожук П.Г., Павлюченко И.И., Блинова Т.В., Дынько Ю.В. Динамика некоторых показателей антиоксидантной системы эритроцитов при гемодиализе. // 6-й Всерос. съезд анестезиологов и реаниматологов «Постоянная заместительная почечная терапия и антикоагуляция в лечении критических состояний». Сб. материалов. -М., 1998. -С.51.

5. Павлюченко И.И., Гуменюк С.Е., Павленко С.Г., Еремина Т.В., Потемин С.Н. Антиоксидантная система эритроцитов при различных методах непрямого электрохимического окисления крови // Intern. J. immunorehabilitation. - 1998. - № 8. - P. 153.

6. Скляр В. А., Быков И.М., Павлюченко И.И. Экспериментальное подтверждение концепции о наличии в эритроцитах биологического комплекса катапаза - гемоглобин // Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии : тр. науч. конф. - СПб., 1998 - С.353 - 357.

7. Сторожук П.Г., Павлюченко И.И., Блинова Т.В., Дынько Ю.В., Павлюченко Е.В. Мониторинг некоторых показателей антиоксидантной системы эритроцитов при интенсивной терапии полиорганной недостаточности с экстракорпоральными методами детоксикации // Вестн. интенсив, терапии. - 1999. - С. 166-167.

8. Павлюченко И.И., Дынько Ю.В., Патемии С.Н., Басов A.A., Павлюченко Е.В. Способ диагностики эндогенной интоксикации при абдоминальной патологии // Вестн. интенсив, терапии, - 1999. - С.164-165.

9. Павлюченко И.И., Павлюченко Е В. Особая роль неблагоприятных факторов внешней среды и условий жизни в развитии эндотоксикоза и способы его диагностики // Экология. Право. Образование: материалы конф. - Краснодар, 1999. - С. 57.

10. Потемин С.Н., Гурджиян Д.Д, Гуменюк С.Е., Павлюченко И И., Ссмернин А.Н., Павлова Л И., Басов A.A. Кологенная интоксикация при синдроме колостаза // Кубан. науч. мед. вестн. - 1999. - № 8,- С. 22-23.

11. Павлюченко И.И., Цыганок С.С., Павлюченко ЕВ. Исследование свободнорадикального окисления и гемодинамики у больных с красным плоским лишаем в констелляции с вегетовисцеральными нарушениями при лечении физическими факторами в амбулаторных условиях // Кубан. науч. мед. вестн. - Спец. вып. - 2000. - С. 83-85.

12. Павлюченко И.И., Басов A.A., Федосов С.Р., Павлюченко Е.В. Влияние процессов перекисного окисления на здоровье и продолжительность активной деятельности человека // Здравоохранение. Медицина. Здоровье: материалы конф. - Краснодар, 2000. - С. 68-70.

13. Павлюченко И.И., Дынько ЮВ., Басов A.A., Федосов С.Р., Павлюченко Е.В. Антиоксидантные и прооксидантные системы организма и их роль в развитии патологии // Экология. Медицина. Образование материалы конф.- Краснодар, 2000. -. С. 91-92.

14. Павлюченко И.И., Дынько Ю.В., Басов A.A., Федосов С.Р., Павлюченко Е.В. Применение антиоксидантов в лечении больных с дисбалансом про/антиоксидантных систем // Экология. Медицина. Образование: материалы конф.- Краснодар, 2000. - С. 123-124.

15. Павлюченко И.И., Дынько Ю.В., Дынько И.Ф. Экспресс-метод оценки эффективности эфферентной терапии // Тез. докл. 7-го Всерос. съезда анестезиологов и реаниматологов. -СПб., 2000,- С. 210.

16. Павлюченко И.И., Басов A.A., Федосов С.Р. Оценка эндотоксикоза различными методами у некоторых категорий больных // Тез. 28 науч. конф. студентов и молодых ученых вузов Юга России. - Краснодар, 2001.- С. 102-103.

17. Сторожук П.Г., Павлюченко И.И., Блинова Т.В., Куринная В.П. Показатели антиокислительной системы эритроцитов у больных с различной формой почечной недостаточности // Кубан. науч. мед. вестн. - 2001. - № 1(55). - С. 41-44.

18. Сторожук П.Г., Павлюченко И.И., Еремина Т.В., Куринный H.A. Состояние антиокислительной системы эритроцитов при ожоговой болезни в период ссптикотокссмии // Кубан. науч. мед. вестн. - 2001. - № 1(55). - С. 45-47.

19. Павлюченко И.И., Быков И.М., Гуменюк С.Е. Состояние основных компонентов прооксидантно-антиоксидантной системы у хирургических больных с перитонитом // Intern. J. immunorehabilitation. - 2001. - V. 3, № 3. - Р.87-92.

20. Павлюченко И.И., Белоножкин С.Л., Федосов С.Р., Белоножкина ЕС. Сравнительная характеристика антиоксидантных свойств фармпрепаратов и биодобавок // Материалы Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием «Физиологические науки - клинической гастроэнтерологии». - Краснодар, 2001. - С. 122.

21. Павлюченко И.И., Павленко С.Г., Басов A.A., Павлюченко ЕВ. Состояние процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) у реанимационных больных // Материалы Всерос. науч.- практ. конф. с междунар. участием «Физиологические науки - клинической гастроэнтерологии». - Краснодар, 2001 -С. 122-123.

22. Павлюченко И.И., Басов A.A., Федосов С.Р., Павлюченко Е.В. Стратегия превентивной защиты организма человека на макромолекулярном уровне // Сахарове кие чтения 2001 года: экологические проблемы XXI века: материалы конф. - Минск, 2001. - С. 179-180.

23. Павлюченко И.И., Белоножкина Е.С., Павлюченко Е.В., Басов A.A., Федосов С.Р. Антиоксидантные свойства некоторых пищевых веществ и фармпрепаратов // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека- сб. тр. национальной науч-практ. конф. с международным участием - Смоленск, 2001.-С. 13-14.

24. Павлюченко И.И., Белоножкина Е.С., Павлюченко Е.В. Антиоксидантные свойства фармпрепаратов производных липоевой кислоты // Экология и здоровье человека. Экологическое образование. Математические модели и информационные технологии: тез. -Краснодар, 2001. - С. 77.

25. Павлюченко И.И., Дынько Ю.В., Павлюченко Е.В. Некоторые показатели антиоксидантной системы у реанимационных больных с грибной интоксикацией // Экология и здоровье человека Экологическое образование. Математические модели и информационные технологии: тез. - Краснодар, 2001. - С. 78.

26. Павлюченко И.И., Павлюченко Е.В., Басов А А., Федосов С.Р. Состояние системы антиоксидантной защиты у больных с грибной интоксикацией и механизмы коррекции ее нарушений // Шестая междунар. конф. «Экология и здоровье человека. Экологическое образование. Математические модели и информационные технологии»: сб. науч. тр. -Краснодар;Криница, 2001.-С.57-61.

27. Павлюченко И.И., Дынько Ю.В., Басов A.A., Федосов С.Р, Нагорнин М.Ю., Павлюченко Е.В. Сорбционная способность эритроцитов и ПОЛ у различных категорий больных с синдромом эндогенной интоксикации // Вопросы анестезиологии и интенсивной терапии : материалы юбил. науч. сессии. - Краснодар, 2001,- С.56-60.

28. Павлюченко И.И., Гонтмахер Ю.В., Павлюченко Е.В. Активность ферментов антирадикальной защиты эритроцитов у больных сахарным диабетом // Проблемы медицинской энзимологии, современные технологии лабораторной диагностики нового столетия: тр. конф. - М., 2002.. - С. 169.

29. Казарян Р.В., Павленко С.Г., Евглевский A.A., Павлюченко И.И., Кунделегов А.Г., Завалишин A.B. Иммунологические эффекты препарата бета-каротина (каролин) // Intern. J. immunorehabilitation. - 2002. - № 1. - С. 74.

30. Басов A.A., Павлюченко И.И., Федосов С.Р. Некоторые аспекты разработки программного обеспечения для экспериментальной биохимической лаборатории // Вестн. новых мед. технологий. - 2002. Т. 9, № 2. - С. 87-88.

31. Павлюченко И.И., Басов A.A., Павлюченко Е.В., Федосов С.Р. Диагностика окислительного стресса у различных категорий острых и хронических больных с применением биохимических и биофизических методов // Материалы регионал. науч.-практ. конф. врачей хирургич. профиля «Актуальные проблемы современной хирургии». - Нальчик, 2002. - С. 101-102.

32 Потемин С.Н., Гуменюк С.Е., Ханферян Р.А., Каушанский В.Б., Гурджиян М.Д., Павлюченко И И., Соляр М.Н., Сулейманова Н.А. Оценка эндогенной интоксикации и показатели цитокинов ФНО-а и интерлейкина - 1 а при синдроме хронического колостаза // Кубан. науч. мед. вестн. - 2002. - № 2-3 (59-60.) - С.71-74.

33. Павлюченко И.И., Дынько Ю.В., Басов А.А., Федосов С.Р. Интегральные показатели эндогенной интоксикации и окислительного стресса у больных с почечной недостаточностью // Нефрология и диализ. - 2003, - Т..5, № 1, прил. 1 - С. 28-32.

34 Павлюченко И.И., Орлова С.В., Васильев А В , Басов А.А , Сравнительная характеристика антиоксидантных свойств некоторых пищевых веществ, биологически активных добавок и фармпрепаратов // Материалы междунар. науч -практ. конф. «Современные технологии фитонутрициологии в акушерстве, гинекологии и педиатрии». - М., 2003. - С. 310-317.

35. Basov А.А, Pavluchenko I.I, Fedosov S R. Inhibition of peroxide oxidation in authors testsystems by the different medicines // Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health: nmtern confer. Russia. - Smolensk, 2003. - P. 8-9

36. Pavluchenko 11., Pavlenko S G., Pavluchcnco E.V , Basov A.A. Change of parameters of lipides exchange and peroxide oxidation for patients with endocrinology pathology // Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health: intern, confer. Russia - Smolensk, 2003. - P 89-90

37. Басов A.A., Павлюченко И.И., Плаксин A.M., Федосов С.Р. Использование аналогово-цифрового преобразователя в составе системы сбора и обработки информации с хемилюминитестером LT-1 // Вести, новых мед. технологий. - 2003. - Т. 10, № 4 - С. 67-68.

38. Павлюченко И.И., Басов А.А., Орлова С.В., Быков И.М. Изменение активности ферментов антирадикальной защиты как прогностический критерий развития и прогрессирования сахарного диабета // Intern. J. immunorehabilitatio. - 2004. - V. 6, N 1. - С. 14-19.

39. Дынько ЮВ., Павлюченко И.И., Басов А.А. Динамика показателей окислительного стресса и эндогенной интоксикации у нефрологических больных до и после гемодиализа // Вестн. интенсив, терапии.- 2004. - № 5. - С. 93-96.

40. Павлюченко И.И., Дынько Ю.В., Басов А.А. Показатели эндогенной интоксикации и окислительного стресса у больных с сахарным диабетом на фоне декомпецсированного кетоацидоза // Вестн. интенсив, терапии - 2004. - № 5. - С. 116-120.

41. Павлюченко И.И., Басов А.А., Быков И.М., Орлова С.В, Интегральные методы оценки уровня эндогенной интоксикации и перекисного окисления биомолекул при острых и хронических заболеваниях // Аллергология и иммунология. - 2004. - Т. 5, № 4. - С. 551-554.

42. Pavluchenko I.I., Basov А.А., Bykov I.M., Orlova S.V. Change of the level of thiol groups in the patients with diabetes mellitus and possibility of its correction by the SH-containmg biologically-active additives (glutathione formula) // Intern. J. immunorehabilitation. - 2005. - V. 7, N 1. - P.51.

43. Павлюченко И.И., Басов A.A., Есауленко E.E., Быков И.М., Орлова С.В. Хемшпоминесцентный анализ как способ мониторинга окислительного стресса у больных с сахарным диабетом и гипотиреозом // Аллергология и иммунология. - 2005. - Т. 6, № 2. - С. 290.

44. Быков И.М., Есауленко Е.Е, Павлюченко И.И Перспективы использования различных продуктов детского питания у хирургических больных с патологией органов пищеварения // Аллергология и иммунология. - 2005. - Т. 6, № 2. - С. 174.

Список патентов на изобретение

1. Павлюченхо И.И., Басов А А, Федосов С.Р. Способ диагностики антиокислительной активности лечебных и профилактических антиоксидантных средств: патент на изобретение № 2182706. - Заяал. 15.01.2001; опубл. 20.05.2002. -Б.14

2. Павлюченко И.И., Басов A.A., Федосов С.Р. Способ диагностики окислительного стресса организма человека Патент на изобретение № 2236008 - Заявл 28.07.2003; опубл. 10.09.2004-Б.25.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Схема № 1. Методы тестирования состояния АОС и СРП

Активность СОД

эритроцитов

Активность КАТ

ивтакгиых эритроцитов

Активность КАТ

гемолизированных эритроцитов

Соотношение активности

КАТ/СОД

Активность I -6-ФДГ

эритроцитов

Активность СДГ

эритроцитов

Количество общих

SH-rpynn эритроцитов

ТБЧ эритроцитов батальное (I ЬЧэр}

t

ТБЧ пл<имы

ÜJJdjlhHOC

(ТБЧпл)

ТБЧ суммарное »ритроцнтой (1'ЬЧэр + ТБЧ эр Ind)

Интегральный коэффициент ОС -КОМ Бэр

I

п

Патент на изобретение № 2236008

ТБЧ эритроцитов индуцированное (ТБЧэр Ind)

ТБЧ общее крови (ТБЧэр-ТБЧтр lad +ТЬЧпл)

Люмкнол-зависнмая хсмилюмгшссцениия

КОМБэр. = (ТБЧэр. +ТБЧэр. Ind) • (Ea-sh-rp. - E,-sh-rp.) • 100

f

Схема № 2 Методы диагностики ЭИ

ККД= МСиНМ-эр » МСиНМ-пл + ГГБЧэр + ТБЧэр 1тП« ТБЧпл (МСиНМ-эр + МСиНМ-пл) [(ТБЧэр + ТБЧэр 1п<1) + ТБЧпл]

ИЭИ = (МВД • 100 / ККДд) -100

Схема № 3. Методы т естирования АО А фармпрепаратов и БАД

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АОА - антиокислительная активность АОЗ - ангиоксидантная защита АОС - антиоксидантная система АРЗ - антирадикальная защита АФК - активные формы кислорода БАД - биологически активные добавки, биологически активная добавка БВХЛ - быстрая вспышка хемилюминесценции

Г-6-ФДГ - 1люкозо-6-фосфатдегидрогсназа

ГП - глутатионпероксидаза

ИФ - индекс Франка

ИЭИ- индекс эндогенной интоксикации

КАТ - каталаза

ККД - коэффициент катаболической деструкции

КОМБэр - коэффициент окислительной модификации биомолекул эритроцитов МСиНМ - молекулы средней и низкой массы

ОМБ - окислительная модификация биомолекул

ОПН - острая почечная недостаточность

ОС - окислительный стресс

ПОЛ - перскисное окисление липидов

ПОН - полиорганная недостаточность

СД - сахарный диабет

СДГ - сукцинатдегидрогеназа

СОД - супероксиддисмутаза

СРО - свободнорадикальное окисление

СРП - свободнорадикальные процессы

ССЭ - сорбционная способность

эритроцитов

СЭИ - синдром эндогенной интоксикации

ТБК - тиобарбитуровая кислота

ТБЧ - тиобарбитуровое число

УФО - ультрафиолетовое облучение

ХЛ - хемилюминесценция

ХГТН - хроническая почечная

недостаточность

ЭИ - эндогенная интоксикация

ЭТ - эндотоксикоз

ПАВЛЮЧЕНКО Иван Иванович

ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ СТРЕСС, ЕГО МОНИТОРИНГ И КРИТЕРИИ ОЦЕНКИ АНТИОКИСЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ И БАД

Автореферат

Подписано в печать 18 02 2005 т. Формат бумаги 60x84 1/16 Бумага офсетная Гарнитура шрифта «Тип Тайме» Рнзографня Уса печ л 2,1 Тираж 100 экз Заказ 19

Гигиеническое заключение № 23 КК 02.543 П 000728 02 02 от 06 02 2002 г

Отпечатано с оригинал-макета заказчика на федеральном государственном унитарном предприятии «Издательство «Советская Кубань» 350000, г Краснодар, ул. Рашпилевская, 106

У

Р-3 073

РНБ Русский фонд

2006-4 10796

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Павлюченко, Иван Иванович

Введение

Глава 1. Проблемы окислительного стресса и эндогенной интоксикации в клинической практике, мониторинг и способы антиоксидантной коррекции (литературный обзор)

1.1.Проблемы эндогенной интоксикации (ЭИ) в клинической практике, взаимосвязь с процессами свободнорадикального окисления, методы диагностики

1.2.0кислительный стресс (ОС) — понятие, патофизиологические и физиологические аспекты

1.3.Цитотоксические эффекты активных форм кислорода

1 АФизиологические эффекты активных форм кислорода

1 .б.Антиоксидантная система организма

1.5.1 .Факторы неферментной антиоксидантной защиты

1.5.2.Ферментное звено антиоксидантной системы

1.6.Показатели прооксидантного звена при различных патологических состояниях

1.7.Интегральные методы диагностики окислительного стресса

1.8.Антиоксидантные средства коррекции окислительного стресса — литературные данные. Современные подходы к изучению антиоксидантной активности фармпрепаратов и биодобавок

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Клиническая характеристика больных

2.2. Методы исследования

2.2.1. Методика количественной оценки содержания эритроцитов в исследуемом образце крови

2.2.2. Методика определения активности каталазы эритроцитов

2.2.3. Методика определения активности суперокисддисмутазы эритроцитов

2.2.4. Методика определения активности глкжозо-6-фосфатдегидрогеназы эритроцитов

2.2.5. Методика определения активности ФАД-дегидрогеназной активности эритроцитов

2.2.6. Методика определения количества SH-групп эритроцитов

2.2.7. Методика количественного определения продуктов окислительной модификации биомолекул эритроцитов

2.2.7.1. Определение базального количества продуктов окислительной модификации биомолекул эритроцитов

2.2.7.2. Определение индуцированного количества продуктов окислительной модификации биомолекул эритроцитов^

2.2.8. Методика количественного определения продуктов окислительной модификации в плазме

2.2.8.1. Методика определения общего количества продуктов окислительной модификации в эритроцитах и в плазме крови

2.2.9. Методика оценки уровня эндогенной интоксикации по изменению сорбционной способности эритроцитов (ССЭ)

2.2.10. Методика оценки уровня эндогенной интоксикации по 1 количеству молекул средней и низкой массы (МСиНМ) в эритроцитах и плазме крови

2.2.11. Расчет коэффициента окислительной модификации биомолекул эритроцитов

2.2.12. Интегральный показатель уровня эндогенной интоксикации

2.2.13. Методика оценки интенсивности свободнорадикальных процессов в плазме с помощью индуцированной люминол-зависимой хемилюминесценции

2.2.14. Определение антиоксидантной активности (АОА) фармпрепаратов и биологически активных добавок (БАД) в авторских тест-системах

2.2.14.1. Методика определения АОА фармпрепаратов и

БАД in vitro с помощью однократной индукции перекисного окисления

2.2.14.2. Методика определения АОА фармпрепаратов и

БАД in vitro с помощью пролонгированной индукции перекисного окисления

2.2.15. Методика определения АОА фармпрепаратов и БАД in vitro в тест-системах с плазмой при помощи индуцированной люминол-зависимой хемилюминесценции

2.3. Статистическая обработка полученных результатов

Глава 3. Показатели эндогенной интоксикации у реанимационных больных (1-я группа) при критических состояниях и у терапевтических больных (2-я группа) с хроническими заболеваниями

3.1.Изменение сорбционной способности эритроцитов у обследуемых больных 1-й и 2-й группы

3.2.Изменения количества молекул средней и низкой массы эритроцитов у обследуемых больных 1-й и 2-й группы

3.3. Изменения количества молекул средней и низкой массы в плазме крови у обследуемых больных 1-й и 2-й группы

Глава 4. Изменения прооксидантного уровня крови у различных категорий реанимационных и терапевтических больных при эндотоксинемии

4.1 .Интенсивность люминол-зависимой хемилюминесценции плазмы крови у обследуемых больных 1-й и 2-й группы

4.2.Изменение уровня ТБК-активных продуктов крови у обследуемых больных 1-й и 2-й группы

Глава 5. Изменение показателей системы антиоксидантной защиты эритроцитов в условиях эндотоксинемии у реанимационных и терапевтических больных

5.1.Количественная оценка эритроцитов у обследуемых больных 1-й и 2-й группы

5.2.Изменение активности супероксиддисмутазы у обследуемых больных 1-й и 2-й группы

5.3.Изменение активности каталазы у обследуемых больных

1-й и 2-й группы

5.4. Изменение ФАД-дегидрогеназной активности эритроцитов у обследуемых больных 1-й и 2-й группы

5.5. Изменение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы у обследуемых больных 1-й и 2-й группы

5.6. Уровень общих SH-групп эритроцитов и динамика их изменений у обследуемых больных 1-й и 2-й группы

Глава 6. Интегральная оценка эндогенной интоксикации и окислительного стресса у реанимационных больных при критических состояниях и терапевтических больных с хроническими заболеваниями

6.1.Интегральные показатели ЭИ - индекс эндогенной интоксикации (ИЭИ) и коэффициент катаболической деструкции (ККД) у обследуемых больных 1-й и 2-й группы

6.2.0ценка уровня ОС с применением интегрального показателя — коэффициента окислительной модификации биомолекул у обследуемых больных 1-й и 2-й группы

Глава 7. Сравнительная характеристика показателей окислительного стресса и эндогенной интоксикации у реанимационных и терапевтических больных

7.1 .Сравнительная характеристика показателя каталаза/супероксиддисмутаза эритроцитов в условиях эндотоксинемии у обследуемых больных 1-й и 2-й группы;

7.2.Сравнительная характеристика показателя количества

SH-групп у обследуемых больных 1-й и 2-й группы

7.3. Сравнительная интегральная оценка уровня ЭИ и выраженности

ОС и их корреляции у обследуемых больных 1-й и 2-й группы

7.4. Корреляционные взаимоотношения степени анемии и интегральных показателей окислительного стресса и эндогенной интоксикации у обследованных больных 1-й и 2-й группы

Глава 8. Оценка антиоксидантной активности фармпрепаратов и биологически активных добавок

8.1.Исследование антиоксидантной активности фармпрепаратов и биологически активных добавок в авторской тест-системе с ультрафиолетовым облучением

8.2. Исследование антиоксидантной активности фармпрепаратов и биологически активных добавок в авторской тест-системе с перекисью водорода

8.3. Исследование антиоксидантной активности фармпрепаратов и биологически активных добавок с помощью люминол-зависимой хемилюминесценции

Введение Диссертация по биологии, на тему "Окислительный стресс, его мониторинг и критерии оценки антиокислительной активности лекарственных препаратов и БАД"

Окислительный стресс - многокомпонентный процесс, включающий совокупность структурно-функциональных модификаций биополимеров, биомембран, метаболических сдвигов на уровне клеток, тканей и организма в целом, индуцированных высоким уровнем активных форм кислорода (АФК), свободных радикалов, а также мембрано- и цитотоксических продуктов перекисного окисления биомолекул [Владимиров Ю.А. и др., 1991; Агаджанова Л.М., 1998; Мокацян Р.Г., 1998; Дубинина Е.Е., 1998; Бсшаболкин М.И., 2000; Pinkus R., Weiner L.M., Daniel V., 1995; Halliwell В., Gutteridge J.M.C., 1999; Sz\veda-Le\vando\vska Z. et al., 2003; Bagis S. et al., 2003.]. В организме функционирует многоуровневая система специфической и неспецифической антиоксидантной защиты (АОЗ), которая обеспечивает поддержание генерируемых оксидантов на физиологическом уровне [Зайцев В.Г., Закревский В.К, 1998; Дубинина Е.Е., 1998; Зинчук В.В., Борисюк М. В., 1999; Wendel А., 1988; Bast А., Haenen G. R. М. М., Doelman С. J. А., 1991; Finkel Т, 2003]. ОС реализуется в результате дисбаланса между активностью реакций образования АФК, свободных радикалов, ПОЛ и антирадикальных процессов, напрямую зависимых от состояния системы АОЗ. ОС характерен для большинства критических состояний и болезней человека, включая кардиоваскулярные заболевания, диабет, атеросклероз, ожоговую болезнь, нейродегенеративные 1 болезни, гипоксические и токсические повреждения органов и тканей, иммунодефицит, острый респираторный дистресс синдром, острую и хроническую почечную недостаточность, гинекологические заболевания и т.д. [Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., 1972; Агаджанова Л.М., 1998; Мокацян Р.Г., 1998; Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., 2000; Halliwell В., Gutteridge J.M.C., 1999]. Важной составной частью развития и течения этих патологических состояний и болезней является токсемия, которая характеризует синдром эндогенной интоксикации (СЭИ). СЭИ с одной стороны формируется за счет избыточного образования токсичных продуктов перекисного окисления различных биомолекул в условиях ОС, а с другой стороны токсемия вызывает значительный дисбаланс в системе про-/антиоксиданты и способствует манифестации признаков ОС. Таким образом, формируются порочные патологические круги, которые вызывают дестабилизацию и срыв всех защитных механизмов и систем человеческого организма при различных заболеваниях. В условиях токсемии и ОС наибольшему повреждающему действию АФК и других цито- и мембранотоксичных соединений подвержены эритроциты в силу особенностей своего метаболизма и количественного представительства в крови.

Разработка методов диагностики, изучения механизмов развития и коррекции ОС при развитии критических патологических состояний и хронических заболеваний представляется важнейшей задачей современной науки. Исследования в этом направлении способствовали широкому внедрению в клиническую практику биоантиоксидантов, т.к. коррекция с их помощью ОС повышает резистентность биомембран, клеток, тканей и организма в целом, способствует восстановлению гомеостаза и благоприятному исходу заболеваний. Вместе с тем известно, что применение биоантиоксидантов должно быть обоснованным и строго дозированным, так как в зависимости от используемой дозы они проявляют антиоксидантный или прооксидантный эффект Щорожко А.И. Бродский А.В., Афанасьев КБ., 1988; Дубинина Е.Е., 2001; Квинн П.Дж., 2004; Halliwell В., Guttericlge J.M.C., 1990; Hinds T.R., Vincenzi F.F., 1996; Buettner G.R., Jurkiewicz B.A., 2000.]. В этом аспекте поиск биомаркеров ОС, создание модельных тест-систем оценки АОА фармпрепаратов и БАД остаются существенной проблемой современной биохимии и фармации. Исследования в этом направлении пошли по пути все большего расширения фронта методических подходов, увеличения числа изучаемых патологий и выявления разнообразных параметров ОС, отражающих состояние того или иного звена системы про-/антиоксиданты при развитии патологического процесса.

В настоящее время все большее распространение получают способы интегральной оценки уровня ОС и СЭИ по как можно большему числу показателей, характеризующих эти синдромы, которые изучаются в различных биологических средах [Чаленко В.В., Кутушев Ф.Х., 1990; Ковалев Г.И. и др., 1995; Голиков ПЛ. и др., 2000; Туманян С. В. и др., 2004; Пасечник И.Н., 2004; Harris В.Н., Gelfand J.A., 1995; Werdan К, Pilz G., 1996]. Многие из известных методов отличаются несовершенством, не могут иметь универсального назначения, так как порой включают параметры и про- и антиоксидантного звена АОС, изменения которых при критических состояниях или хронических заболеваниях носят разнонаправленный характер (отдельные ферменты АОС, низкомолекулярные антиоксиданты) и при не правильном их использовании в расчетных формулах могут исказить действительную картину ОС.

Комплексный подход к изучению на метаболическом уровне состояния отдельных компонентов крови (эритроциты, плазма крови, цельная кровь) у больных с явлениями эндотоксинемии и ОС различного генеза, основанный на выявлении и уточнении характера дисбаланса в системах образования и обезвреживания активных кислородных метаболитов, позволит ответить не только на важные вопросы патогенетической роли ОС, но и даст возможность разработать новые способы диагностики и оценки уровня и степени тяжести ОС и СЭИ.

Моделирование ОС в лабораторных условиях и определение ингибирующего действия реакций СРО различными антиоксидантными препаратами позволит разработать эффективные тест-системы для оценки их общей АОА, что позволит подбирать эффективные схемы лечения и профилактики осложнений при различных заболеваниях, связанных с развитием ОС.

Учитывая все вышеизложенное, целыо настоящего исследования явилась разработка оптимальных диагностических алгоритмов тестирования окислительного стресса и эндотоксикоза и эффективных методов изучения антиокислительной активности и емкости лекарственных средств и биологически активных добавок, позволяющих проводить мониторинг типовых патологических состояний и проводимой терапии.

Из поставленной цели вытекают следующие задачи:

1. Определить из комплекса различных показателей системы про-/антиоксиданты крови, наиболее информативные параметры оценки уровня ОС и ЭТ, наиболее объективно их характеризующие.

2. Разработать эффективные, доступные, легко воспроизводимые способы интегральной оценки выраженности ОС и ЭИ.

3. Апробировать предложенные способы оценки ОС и ЭТ в клинике при обследовании терапевтических и реанимационных больных и дать их сравнительный анализ.

4. Провести ранжирование больных с хроническими заболеваниями и критическими состояниями по уровню ЭТ и ОС на основании выделенных количественных критериев оценки степени тяжести ОС и ЭТ.

5. Разработать модельные тест-системы исследования АОА и антиоксидантной емкости фармпрепаратов и БАД in vitro.

6. Разработать методики количественной оценки АОА различных фармацевтических и парафармацевтических средств, выражаемой в условных единицах.

7. Апробировать работоспособность предложенных тест-систем в условиях ОС, моделируемого in vitro физическими и химическими индукторами СРО.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ.

• Впервые, на различных моделях окислительного стресса, вызванного критическими состояниями различного генеза и хроническими заболеваниями, проведен сравнительный анализ состояния основных компонентов АОЗ и уровня свободнорадикальных и перекисных процессов в организме больного на различных этапах острого и хронического патологического процесса.

• Разработан и апробирован новый способ диагностики ОС организма человека, основанный на расчете коэффициента окислительной модификации биомолекул эритроцитов - КОМБэр (патент № 2236008, 2003).

• Предложенный и апробированный антиоксидантный коэффициент КАТ/СОД позволяет осуществлять мониторинг баланса в системе про-/антиоксиданты при развитии критических состояний и при длительном течении хронических заболеваний. Его динамическое снижение в ходе болезни свидетельствует о прогрессировании патологии.

• Модифицирован и апробирован на практике интегральный коэффициент оценки уровня эндогенной интоксикации - МЭИ, определение которого производится с учетом показателей, характеризующих ОС.

• На основании сравнительного анализа КОМБэр. и ИЭИ получены новые данные по корреляционным взаимоотношениям между степенью токсемии и интенсивностью реакций СРО в условиях ОС и ЭТ.

• Разработан новый способ тестирования АОА лечебных и профилактических антиоксидантных средств (патент № 2182706, 2001).

• Предложен новый способ сравнительной характеристики АОА различных фармпрепаратов и БАД и выражения ее в унифицированных единицах активности (убихиноновая единица).

На защиту выносятся следующие положения:

1. Продукты перекисного окисления являются важными компонентами, определяющими токсичность биологических сред, и оценку уровня ЭИ необходимо проводить с учетом их количества.

2. Определять степень ОС и ранжировать больных по его уровню возможно, используя оригинальный коэффициент окислительной модификации биомолекул эритроцитов - КОМБэр. Показатель КОМБэр более 7,0 ОЕА отражает декомпенсированный ОС и характерен для больных с полиорганной дисфункцией.

3. Снижение показателя КАТ/СОД в динамике заболевания отражает прогрессировать патологии и нарастание явлений ОС.

4. Моделирование ОС in vitro в диагностических тест-системах является надежным способом тестирования антиоксидантной активности фармпрепаратов и биологически активных добавок (БАД). Тиолсодержащие лечебные и профилактические средства обладают наибольшей антиоксидантной емкостью.

5. Универсальная (убихиноновая) единица, отражающая общую АОА, является важной характеристикой для стандартизации лечебных и профилактических антиоксидантных средств.

Научно-практическая значимость работы.

Полученные результаты по исследованию различных параметров системы про-/антиоксиданты крови (эритроциты, плазма) у различных категорий больных с острыми и хроническими заболеваниями свидетельствуют о ключевой роли в диагностике уровня ОС определения в клетках и внеклеточной жидкости суммарного количества продуктов ОМБ липидной, белковой, углеводной и нуклеотидной природы и об избирательном применении биофизических методов тестирования ОС с использованием хемилюминесцентного анализа и определения отдельных ферментов АОС у больных с хронической почечной недостаточностью. Работа расширяет представление о патогенезе ОС, фундаментальных изменениях в клетках, протекающих при его развитии, и свидетельствует о важной роли изучения структурных и метаболических изменений в эритроцитах при диагностике «мембранно-клеточных» нарушений любого генеза. Введение интегральных коэффициентов тестирования общепатологических состояний, таких как, ОС и ЭИ, позволит: 1) оптимизировать процесс ранней диагностики ОС и ЭИ; 2) определять степени выраженности патобиохимических проявлений ОС и ЭИ в условиях любой патологии; 3) назначать своевременную эффективную антиоксидантную терапию, которая сократит время пребывания больного в стационаре, снизит частоту осложнений основного заболевания.

Практическое использование полученных результатов.

По материалам диссертации опубликовано 43 научные работы. Получены патенты на изобретение: 1) «Способ диагностики антиокислительной активности лечебных и профилактических антиоксидантных средств» (патент № 2182706, 2001, Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р.); 2) «Способ диагностики окислительного стресса организма человека» (патент № 2236008, 2003, Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р.).

Результаты исследования используются в учебном процессе на кафедрах биохимии, патофизиологии, хирургических и внутренних болезней лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов Кубанской государственной медицинской академии и кафедре нутрициологии Российского университета Дружбы народов. В практическом здравоохранении - в отделениях реанимации и интенсивной терапии, в эндокринологических, нефрологических и ожоговых отделениях лечебных учреждений г. Краснодара и Краснодарского края.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Павлюченко, Иван Иванович

ВЫВОДЫ

1. Проведенные многоплановые исследования состояния системы про-/антиоксиданты, включающие анализ XJI, ферментных и неферментных показателей системы АОЗ эритроцитов и уровня прооксидантов в эритроцитах и плазме крови различных категорий больных, позволили отобрать наиболее информативные параметры, изменения которых достоверно свидетельствуют о наличии ОС. Это уровень сульфгидрильных групп, ТБК-активных продуктов эритроцитов и степень эндотоксинемии, определяемая по ИЭИ.

2. КОМБэр. и ИЭИ являются объективными и достоверными критериями оценки уровня ОС и ЭИ, и как следствие тяжести патологического процесса, позволяющими осуществлять мониторинг проводимой терапии и характера развития заболевания.

3. При острых критических патологических состояниях и хронических заболеваниях с явлениями полиорганной дисфункции (при ожоговой болезни, декомпенсированном кетоацидозе, ОПН, ХПН) регистрируется ОС, выраженность которого на ранних этапах формирования ПОН имеет достоверную положительную корреляцию с уровнем ЭИ.

4. ОС, оцениваемый в 6-9 ОБА, свидетельствует о сохранении определенных резервов адаптационных защитных механизмов организма человека, а ОС с уровнем в 9 и более ОБА позволяет судить о значительном их истощении, что можно расценивать как неблагоприятный прогностический признак.

5. Определение соотношения КАТ/СОД эритроцитов является объективным и достоверным маркером дисбаланса в системе про-/антиоксиданты. Снижение этого показателя в динамике течения патологического процесса отражает дальнейшее нарушение метаболических процессов в организме больного и прогрессирование заболевания.

6. Модельные опыты in vitro с использованием физических и химических индукторов СРО в тест-системах, содержащих природные субстраты окисления, показали, что антиоксидантные медикаментозные средства и БАД являются модераторами баланса в системе про-/антиоксиданты крови.

7. Разработан новый способ оценки АОА фармпрепаратов и БАД по их способности ингибировать или прерывать индуцированные в модельных тест-системах процессы ПОЛ.

8. Наиболее высокий антиоксидантный эффект выявлен у тиолсодержащих медикаментозных средств и БАД, что подтверждено в разных тест-системах.

9. Предложена стандартная (убихиноновая) единица оценки антиоксидантной емкости лечебных и профилактических антиоксидантных средств, что важно для совершенствования технологий приготовления БАД и осуществления контроля за их производством и хранением.

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Павлюченко, Иван Иванович, Ростов-на-Дону

1. Агаджанов М. И. Роль липидной пероксидации и некоторых антиоксидантов в патогенезе ожоговой болезни и влияние а-токоферола на ее течение // Журн. эксперим. и клинич. медицины. -1977.-Т. 17, №5.-С. 68-78.

2. Агаджанов М.И., Барсегян JT.A., Григорян B.C., Казарян Ш.А. Сравнительное действие ряда фенольных антиоксидантов на содержание гидроперекисей в тканях белых крыс // Журн. эксперим. и клинич. медицины. 1985. - Т.25, №6. - С. 522-525.

3. Агаджанова JT.M. Перекисное окисление липидов, антиоксидантная система при нормальной беременности и беременности с фактором риска //Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии : тр. науч. конф. СПб., 1998. - Т. 2. - С. 444 - 448.

4. Альдебель М.М., Кириллова Н.В. Окислительное повреждение белков при экспериментальном гломерулонефрите // Нефрология. 2002. -Т.6, № 2. - С.73-76.

5. Аметов А.С., Мамедова И.Н. Лечение а-липоевой кислотой (Берлитионом) периферической вегетативной недостаточности у пациентов с сахарным диабетом 2 типа // Клинич. фармакология и терапия. 2003. - Т. 12, № 2. - С. 74-80.

6. Аминева Н.В., Сальцева М.Т., Занозина О.В., Батюкова О.Г., Боровков Н.Н. Коагуляционные признаки эндотелиального стресса у больных сахарным диабетом типа 2 в сочетании с артериальнойгипертензией // Проблемы эндокринологии. -2002. Т.48, № 4. -С.27-30.

7. Ананенко А.А., Спектор Е.Б., Политова JI.H., Березовский М.Е. Проблемы мембранной патологии в педиатрии // Сб. науч. тр. / Под ред. Вельтищева Ю.Е., Клембовского А.И. М., 1984. - С. 173-179.

8. Ананенко А.А., Спектор Е.Б., Политова JI.H., Березовский М.Е. Проблемы мембранной патологии в педиатрии // Сб. науч. тр. / Под ред. Вельтищева Ю.Е., Клембовского А.И. М., 1984. - С. 162-172.

9. Андреев А.А., Картавенко В.И., Голиков П.П., Давыдов Б.В., Николаев Н.Ю. Динамика компонентов перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы у больных с тяжелой сочетанной травмой // Вопр. мед. химии. 1998. - № 5. - С. 485-493.

10. Андреюк Г.М., Киселев П.А. Инициирование перекисного окисления липидов в результате превращения гемоглобина в гемихром под действием свободных жирных кислот // Биохимия. 1988. - Т. 53, № 6.-С. 1017-1024.

11. Артемчик В.Д., Курченко В.П., Метелица Д.И. Пероксидазная активность каталазы по отношению к ароматическим аминам //Биохимия. 1985. - Т. 50, № 5. - С. 826-832.

12. Архипенко Ю.В., Сазонтова Т.Г. Роль про- и антиоксидантных факторов при адаптации к различным видам гипоксии // Кислород и свободные радикалы: материалы междунар. симп. Гродно, 1996. -С.7-8.

13. Арчаков А.И., Згода В.Г., Карузина И.И. Окислительная модификация цитохрома Р450 и других макромолекул в процессе их обновления // Вопр. мед. химии. -1998. Т.44, № 1. — С. 3-27.

14. Арчаков А.И., Мохосоев И.М. Модификация белков активным кислородом и их распад // Биохимия. 1989. - Т. 54, №2. - С. 179186.

15. Афанасьев И.Б. Анион-радикал кислорода *00" в химических и биологических процессах // Успехи химии. 1979. - Т.48, №6. - С. 977-1014.

16. Багдасарян Г .Г. Исследование влияния препарата «Витажен» на содержание супероксид-продуцирующего липопротеина (супрола) в крови спортсменов // Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии : тр. науч. конф. СПб., 1998. - Т. 2. - С. 269273.

17. Балоболкин М.И., Клебанова Е.М. Роль окислительного стресса в патогенезе сосудистых осложнений диабета (лекция) // Проблемы эндокринологии. 2000. - Т. 46, № 6 . - С. 29 - 34.

18. Беккер Г. Введение в электронную теорию органических реакций. -М.: Мир, 1977.-658 с.

19. Бенина Н.Ф., Чеганова М.И. Активность окислительно-восстановительных ферментов у больных с хроническими воспалительными заболеваниями легких в зависимости от степени гипоксемии // Клинич. медицина. 1974. - № 3. - С.26-28.

20. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия: учебник. 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1998. - 704 с.

21. Блюменфельд JT.A., Пурмаль А.П. Железопорфирины // Ферменты. -М., 1964.-С. 215-236.

22. Болдырев А.А. Введение в биомембранологию. М.: Изд-во МГУ, 1990.- 208 с.

23. Болдырев А.А. Роль активных форм кислорода в жизнедеятельности нейрона // Успехи физиол. наук.-2003. Т.34, № 3. - С.21-34.

24. Бышевский А.Ш., Терсенов О.А. Биохимия для врача. -Екатеринбург: Изд-во «Уральский рабочий», 1994. 384 с.

25. Васильев А.В., Шимановская Н.П., Хачатуров В.Р., Мальцев Г.Ю. Исследование влияния БАД «Селенес» на состояние антиоксидантной системы у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями // Биомедицинская химия. 2003. - Т.49, № 3. - С. 291-296.

26. Вахрушева Т.В., Захарова Е.Н., Черниг О., Панасенко О.М. Влияние хондроитинсульфатов и дестрансульфатов на окисление фосфатидилхолиновых липосом // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека : материалы конф. — Смоленск, 2001.-С.110-112.

27. Верболович В.П., Подгорный Ю.К., Подгорная JI.M. Показатели резистентности эритроцитов человека к окислительному стрессу // Вопр. мед. химии. 1989. - № 5. - С.35-39.

28. Виноградов А.Д., Гаврикова Э.В., Головешкина В.Г. Кинетические и структурные характеристики компонентов сукцинатдегидрогеназы, реагирующих с естественными и искусственными акцепторами электронов //Биохимия. 1976. - Т. 41, №7. - С. 1155-1168.

29. Вихриев Б.С., Бурмистров В.М. Ожоги: рук. для врачей. JL: Медицина, 1986.-271 с.

30. Владимиров Г.Е. О некоторых сторонах обмена гемоглобина // Вопр. мед. химии. 1957. - № 3. - С.332-339.

31. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И. Определение и номенклатура свободных радикалов // Итоги науки и техники.-М.,1991. С. 33-34.

32. Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и азота: значение для диагностики профилактики и терапии // Биохимия. 2004. -Т.69, вып. 1. - С. 5-7.

33. Владимиров Ю.А. Роль нарушений свойств липидного слоя мембран в развитии патологических процессов // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1989. - № 4.- С.7-19.

34. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран // Биофизика. 1987. - Т. 32, №5. - С. 830-844.

35. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах // Соросовский образоват. журн. 2000. - № 12. - С.13-19.

36. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестн. РАМН. 1998 . - № 7. - С. 43-51.

37. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биомембранах. М.: Наука, 1972. - 252 с.

38. Власов А.П., Подеров В.Н., Сардаев В.А., Трофимов В.А. Механиз антиоксидантного действия аэроионов кислорода // Вестн. новых мед. технологий. 1997. - Т. 4, № 4. - С.57.

39. Воейков B.J1. Регуляторные функции активных форм кислорода в крови и в водных модельных системах : автореф. дис. . д-ра биол. наук.-М., 2003.-48 с.

40. Волчегорский И. А., Вальдман Б. Н., Скобелева Н. А., Лифшиц Р. И., Зурочка А. В. Модулирующее действие среднемолекулярных пептидов на течение ожоговой болезни в эксперименте // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1992. - №1. — С. 31-35.

41. Волчегорский И. А., Костин Ю. К., Скобелева Н. А., Цейликман В. Э., Лифшиц Р. И. «Средние молекулы» как эндогенные модуляторы стресса // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1994. - №4. — С. 23-26.

42. Волчегорский И. А., Налимов А. Г., Яровинский Б. Г., Лифшиц Р. И. Сопоставление различных подходов к определению продуктов перекисного окисления липидов в гептан-изопропанольных экстрактах крови // Вопр. мед. химии. 1989. —Т. 35, вып. 1. - С. 127-131.

43. Воскресенский О.Н., Жутаев И.А., Бобырев В.Н., Безуглый Ю.В. Антиоксидантная система, онтогенез и старение (обзор) // Вопр. мед. химии . 1982. - № 1. - С. 14-27.

44. Воскресенский О.Н., Туманов В.А. Ангиопротекторы. Киев: Здоров'я, 1982.- 120 с.

45. Габитова ДМ., Фархутдинов P.P., Рыжикова М.А. Свободнорадикальный статус крови больных бронхиальной астмой // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека : материалы конф. Смоленск, 2001. - С. 142-143.

46. Габитова Д.М., Фархутдинов P.P., Фаизова Э.Р., Петрова Э.В. Свободнорадикальный статус крови больных с острым инфарктом миокарда // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека : материалы конф.- Смоленск, 2001. С. 113-114.

47. Габитова Д.М., Фархутдинов P.P., Ягафарова Д.Э. Оценка процессов свободнорадикального окисления у больных ишемической болезнью сердца // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека : материалы конф Смоленск, 2001. - С. 112-113.

48. Галактионова Л.П, Молчанов А.В., Ельчанинова С.А., Варшавский Б.Я. Состояние перекисного окисления у больных с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки // Клинич. лаб. диагностика. 1998. - № 6. - С. 10-14.

49. Герасимов A.M., Фурцева Л.Н. Биохимическая диагностика в травматологии и ортопедии. М.: Медицина, 1986. - 236 с.

50. Голиков П.П., Смирнов С.В., Матвеев С.Б. и др. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная система при ингаляционной травме // Клинич. лаб. диагностика. № 11. — 2000. - С. 42 - 43.

51. Гомазков О.А. Окислительный стресс на молекулярном, клеточном и органном уровнях//Биохимия.-2003.-Т.68, вып. 7. С. 1005-1006.

52. Гомбоева С.Б., Гесслер Н.Н., Шумаев К.Б., Хомич Т.И., Мойсеенок А.Г., Быховский В.Я. Некоторые природные и синтетические антиоксиданты как стабилизаторы превращения p-каротина в витамин А // Биохимия. 1998. - Т.63, вып. 2. - С.224-229.

53. Гончаренко М.С., Латинова A.M. Метод перекисного окисления липидов //Лаб. дело. 1985. - № 1. - С.60-61.

54. Горжейши Я. Основы клинической биохимии. Прага: Гос. изд-во мед. лит., 1967. - 680 с.

55. Горошинская И.А. Роль моноаминооксидазы в механизме нарушений метаболизма при гипоксии // Фармакологическая коррекция гипоксических состояний: материалы конф. Гродно, 1991. - С. 412413.

56. Горошинская И.А., Ананян А.А., Броновицкая З.Г., Шугалей B.C. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в сыворотке крови крыс при гипероксии, гипоксии и холодовом воздействии // Вопр. мед. химии. 1984. - Т.30, №1. - С.60-63.

57. Григлевски Р.Е. Участие свободных радикалов в преображениях эндотелиального простациклина и окиси азота // Новости фармации и медицины. 1997. - № 1-2. - С.2-8.

58. Гринштейн Ю.И., Лундина Т.А., Кнубовец Т.Л., Сибельдина Л.А., Седов К.Р. Свободно-радикальное окисление и канальцевые дисфункции у больных с хронической почечной недостаточностью // Терапевт, арх. 1991. - Т.63, №6. - С.62-64.

59. Груздева К.Н., Антифьева Б.А., Елисеева В.П., Мусихина С.В. Фосфолипидный состав, перекисное окисление и активность некоторых ферментов органоидов гепатоцитов при алкогольной интоусикации // Вопр. мед. химии. 1980. - Т. 26, № 2. - С.165-169.

60. Гусев В.А., Брусов О.С., Панченко Л.Ф. Супероксиддисмутаза -радиобиологическое значение и возможности (обзор) // Вопр. мед. химии. 1980. - № 3. - С.291-300.

61. Гуськова Р.А., Виленчик М.М., Кольтовер В.Н. Роль свободных супероксидных радикалов в старении биологических объектов // Биофизика. 1980.-Т.25, № 1.-С. 102-105.

62. Давыденкова Е.Ф., Шафран М.Г. Атеросклероз и процесс перекисного окисления липидов // Вестн. АМН СССР. 1989. - №3. -С. 10-18.

63. Давыдов В.В., Божков А.И. Метаболизм эндогенных альдегидов: участие в реализации повреждающего действия оксидативного стресса и его возрастные аспекты // Биомедицинская химия. — 2003. -Т. 49, № 4. С.374-387.

64. Дедов И.И., Балоболкин М.И., Мамаева Г.Г., Клебанова Е.М., Креминская В.М. Сахарный диабет: ангиопатии и окислительный стресс: пособие для врачей. М., 2003. - 86 с.

65. Денисенко П.П., Сафонова А.Ф., Усатенко М.С., Петрова М.А., Бурмистров С.О. Влияние антигипоксантов на активность ферментов при токсическом отеке легких // Фармакологическая коррекция гипоксических состояний: материалы конф. Гродно, 1991. — С. 1213.

66. Дубинина Е.Е. Антиоксидантная система плазмы крови // Укр. биохим. журн. 1992. -Т.64, № 2. - С.З - 15.

67. Дубинина Е.Е. Биологическая роль супероксидного анион-радикала и супероксиддисмутазы в тканях организма //Успехи современ. биологии. 1989. - Т. 108, вып. 1 (4). - С. 3-18.

68. Дубинина Е.Е. Некоторые особенности функционирования ферментативной антиоксидантной защиты плазмы крови человека // Биохимия. 1993. - Т. 58, № 2.- С.268-273.

69. Дубинина Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса//Вопр. мед. химии.— 2001.-Т. 47, № 6. С.561-581.

70. Дубинина Е.Е., Бурмистров С.О., Ходов Д.А., Поротов И.Г. Окислительная модификация белков сыворотки крови человека,метод ее определения // Вопр. мед. химии. 1995. - Т. 41, №1. - С. 24-26.

71. Дубинина Е.Е., Ефимова Л.Ф., Софронова Л.Н., Геронимус А.Л. Сравнительный анализ активности супероксиддисмутазы и каталазы эритроцитов и цельной крови у новорожденных детей при хронической гипоксии // Лаб. дело. 1988. - №8. - С. 16.

72. Дынько Ю.В., Павлюченко И.И., Басов А.А. Динамика показателей окислительного стресса и эндогенной интоксикации у нефрологических больных до и после гемодиализа // Вестн. интенсив, терапии. 2004. - № 5. - С. 93-96.

73. Епишин А.В., Рудяк Г.И. Применение антиоксидантов у больных с хроническими заболеваниями гепатобилиарной системы (обзор лит.) // Врачеб. дело. 1990. - № 4. - С.24-27.

74. Еремина Т.В. Показатели антиоксидантной системы эритроцитов при ожоговой травме : автореф. дис. . канд.биол.наук. — Ростов н/Д, 1999.-24 с.

75. Ерюхин И.А., Шашков Б.В. Эндотоксикоз в хирургической практике. СПб.: Логос, 1995. - 304с.

76. Ефимов А.С, Науменко В.Г. Перекисное окисление липидов в эритроцитах больных сахарным диабетом с диабетическими ангиопатиями // Проблемы эндокринологии. 1985. - Т. 31, № 1. — С.6-9.

77. Жаров В. Н., Филиппов И. К., Баканов М. И., Кошель И. В. Динамика показателей перекисного окисления липидов в эритроцитах прилечении детей с приобретенной тяжелой апластической анемией // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1994-Т. 117, №1.- С.36-38.

78. Журавлев А.И. Развитие идей Б.Н. Тарусова о роли цепных процессов в биологии // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М.: Наука, 1982. - С. 3-36.

79. Журавлев А.И., Журавлева А.И. Сверхслабое свечение сыворотки крови и его значение в комплексной диагностике. М.: Медицина, 1975.- 128 с.

80. Заец Т. Л., Сологуб В. К. Патология биологических мембран при термических ожогах // Ожоговая болезнь: тез. докл. конф. Киев, 1984.-С. 25.

81. Зайцев В.Г., Закревский В.И. Защита клеток от экзогенных и эндогенных активных форм кислорода: методологические подходы к изучению. // Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии : тр. науч. конф.- СПб., 1998. Т. 2. - С.401 -405.

82. Зайцев В.Г., Островский О.В., Закревский В.И. Связь между химическим строением и мишенью действия как основа классификации антидотов прямого действия // Эксперим. и клинич. фармакология. 2003. - Т. 66, № 4. - С.66-70.

83. Захарова Н. Б., Хвостова Н. В., Шведова Р. Ф. Значение повреждения белкового и липидного состава эритроцитарных мембран в развитии снижения текучих свойств при экстремальных состояниях // Вопр. мед. химии. 1991.-Т. 37, №1.-С. 53-56.

84. Збровская И.А., Банникова М.В. Антиоксидантная система организма, ее значение в метаболизме. Клинические аспекты // Вестн. РАН 1995. - №6 - С. 53-59.

85. Звягинцева Ю. Г. Антиоксидантная система эритроцитов у больных неаллергической бронхиальной астмой и ее изменения при медикаментозной коррекции : дис. . канд. мед. наук. Краснодар, 1996.- 164 с.

86. Зинчук В. В., Борисюк М. В. Роль кислородсвязывающих свойств крови в поддержании прооксидантно-антиоксидантного равновесия организма // Успехи физиол. наук. 1999. - № 3. - с.38-49.

87. Игуменов B.JI., Шаронов Б.Я., Пасечник В.А. Агрегация мембранных белков клеток Е. coli при действии синглетного кислорода // Биохимия. 1988. - Т. 53, № 6. - С. 925-930.

88. Кагава Я. Биомембраны. М.: Высшая школа, 1985. - 304 с.

89. Каленикова Е.И., Городецкая Е.А., Мурашев А.Н., Рууге Э.К., Медведев О.С. Роль свободных радикалов кислорода в повышенной чувствительности гипертрофированного миокарда крыс к ишемии // Биохимия. 2004. - Т. 69, вып. 3. - С.386-392.

90. Калмыкова Ю. А., Бубнова В. И., Свечникова JL В., Черногубова Е. А., Шепелев А. П. Мембраны эритроцитов и антиоксидантная обеспеченность при экспериментальном остром панкреатите // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1992. - № 3. - С. 27-29.

91. Кальнова Н.Ю., Пальмина Н.П. Изменение фосфолипидного состава и антиокислительной активности липидов эритроцитов при опухолях молочной железы и их радиационном лечении // Биохимия. 1980. -Т. 45,№9.-С. 1646-1653.

92. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике. В 2 т. - Минск: Беларусь, 2000. - Т.2. -С.462.

93. Карпищенко А.И. Справочник «Медицинская лабораторная диагностика (программы и алгоритмы)». — СПб.: Интермедика, 1997. -304 с.

94. Карпищенко А.И. Справочник «Медицинская лабораторная диагностика (программы и алгоритмы)». СПб.: Интермедика, 2001. - 544 с.

95. ИЗ. Квинн П.Дж. Соответствует ли распределение а-токоферола в мембранах его предполагаемым функциям? // Биохимия. 2004. - Т. 69, вып. 1.- С. 74-84. 114. Кияшко А. А. Нарушения гомеостаза и их коррекция у обожженных. -Киев, 1980.- 126 с.

96. Ковалев Г.И., Томников A.M., Музлаев Г.Г. Взаимосвязь эндогенной интоксикации и иммунодепрессии в патогенезе черепно мозговой травмы // Журн. невропатологии и психиатрии. - 1995. —Т. 95, № 6. — С.4-5.

97. Ковалишин Я.Ф., Николаев В.Г., Баран Е.Я и др. Использование средних молекул плазмы крови больных с уремией с помощью жидкостной хроматографией высокого давления и тонкослойной хроматографии // Вопр. мед. химии. — 1988. Т.34, вып. 6. — С.23 -26.

98. Коган А.Х., Сыркин A.JL, Дриницина С.В., Коканова И.В. Антиоксидантная защита сердца коэнзимом Q10 при стабильной стенокардии напряжении // Патол. физиология и эксперим. терапия. — 1999. № 4. - С. 16-19.

99. Коган А.Х., Грачев С.В., Елисеева С.В., Болевич С. Свойство углекислого газа ингибировать генерацию супероксидного анион-радикала клетками и его биомедицинское значение // Вопр. мед. химии. 1996. - Т. 42, №3. - С. 193-202.

100. Коган В.Е., Орлов О.Н., Прилипко JUL Проблема анализа эндогенных продуктов ПОЛ. М.: ВИНИТИ, серия биофизика, 1986.- 197 с.

101. Кожевников Ю.Н. О перекисном окислении липидов в норме и при патологии // Вопр. мед. химии. 1985. - № 5. - С.2-7.

102. Колибаба С.С., Фищенко А.Я., Желиба Н.Д. Содержание сульфгидрильных групп и аскорбиновой кислоты в крови больных калькулезным холециститом // Врачеб. дело. 1983. - №6. — С. 84-86.

103. Кольман Я., Рем К.-Г. Наглядная биохимия / Пер. с нем. М.: Мир, 2000.-469 с.

104. Комов В.П., Иванова Е.Ю. Гормональная регуляция оборота супероксиддисмутазы в печени крыс // Вопр. мед. химии. 1983. -Т.29, №5. - С.79-82.

105. Комов В.П., Рахманова Т.Ф. О молекулярной гетерогенности каталазы в эритроцитах человека // Биохимия. 1974. - Т. 39, № 6. -С.1128-1131.

106. Конвай В. Д., Лукошин А. В., Смирнова В. Д. О возможных механизмах перекисного окисления липидов печени крыс и восстановительном периоде после механической асфиксии // Вопр. мед. химии. 1982. - Т.28, №4. - С. 42-46.

107. Кондратьев Я.Ю., Носиков В.В., Дедов И.И. Полиморфные генетические маркеры и сосудистые осложнения сахарного диабета // Проблемы эндокринологии. 1998. - Т. 44, № 1. - С.43-51.

108. Королев В.А., Петров А.В., Борисенко С.Н., Молдован К.И. Микрометод определения гликозилированного гемоглобина // Клинич. лаб. диагностика. — 1993. — № 2. — С 28-30.

109. Королев В.А., Петров А.В., Коврига И.А., Петрова А.А. Применение электрофоретических методов для определения модифицированных белков у больных сахарным диабетом // Клинич. лаб. диагностика. — 1998. —№7. —С. 15-17.

110. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы //Лаб. дело. 1988.- №1.- С. 16.

111. Корочанская С.П. Сравнительная характеристика методов определения сульфгидрильных групп // Лаб. дело. 1968. - № 12. -С. 755 - 756.

112. Косенко Е.А., Каминский А.Ю., Каминский Ю.Г. Активность антиокислительных ферментов в печени и мозге снижается в ранние сроки диабета, и это снижение зависит от функционирования NMDA-рецепторов // Вопр. мед. химии. 1999. - Т. 45, вып. 4. - С.304-308.

113. Костюшов В.В. Особенности тиолселективного механизма взаимодействия IN VITRO белков сыворотки крови с адреналином у больных ИБС // Патол. физиология и эксперим. терапия. 2002. - №1. - С.20-23.

114. Котгон Ф., Уилкинсон Дж. Основы неорганической химии. М.: Мир, 1979.-677 с.

115. Котеров А.Н. Ингибирование металлотионеином Fe -индуцированного перекисного окисления липидов в липопротеинах яичного желтка// Биохимия. 1997. -Т.62, вып. 2. - С. 164-166.

116. Крайнев С.И. Методика параллельного определения каталазной активности интактных эритроцитов, активности и каталитической емкости гемолизата в одном объеме крови // Лаб. дело. 1967.- №9. -С.562 - 563.

117. Кривохижина Л.В., Солодовникова О.А., Потапкина Н.Н. Динамика активности церулоплазмина и концентрации меди в плазме под влиянием гемодиализной терапии у больных с хронической почечной недостаточностью // Нефрология. 2003. - Т. 7, № 2. - С. 72-75.

118. Крыжановский Г.Н. Дизрегуляционная патология. М.: Медицина, 2002. - 362 с.

119. Крыжановский Г.Н. Некоторые общебиологические закономерности и базовые механизмы развития патологических процессов // Арх. патологии. 2001. - № 6. - С. 44-49.

120. Кузин М. И., Сологуб В. К., Юденич В. В. Ожоговая болезнь. М.: Медицина, 1982. - 160 с.

121. Кузьменко Д.И., Лаптев Б.И. Оценка резерва липидов сыворотки крови для перекисного окисления в динамике окислительного стресса у крыс // Вопр. мед. химии. 1999. - №1. - С. 47-52.

122. Кулинский В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита // Соросовский образовател. журн. 1999. - №1. - С.2-8.

123. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Биологическая роль глутатиона // Успехи современ. биологии. 1990. - Т. 110, вып. 1(4). - С. 20-33.

124. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Обмен глутатиона // Успехи биол. химии. 1990. Т. 31. - С. 157-179.

125. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Структура, свойства, биологическая роль и регуляция глутатионпероксидазы // Успехи современ. биологии. -1993.-Т. 113, вып. 1.-С.107-122.

126. Ланкии В.З., Тихазе А.К., Коновалова Г.Г., КЪзаченко А.И. Концентрационная инверсия антиоксидантного действия р-каротина. // Свободные радикалы и болезни человека: материалы конф. — Смоленск, 1999. С.66-67.

127. Ланкин В.З, Гуревич С.М., Бурлакова Е.Б. Изучение аскорбатзависимого переокисления липидов тканей при помощи теста с 2-тиобарбитуровой кислотой // Биоантиоксилители: тр. Моск. о-ва испытателей природы. М., 1975. - Т. 52. - С. 73-78.

128. Ланкин В.З. Антиоксидантные ферменты // 3 Всесоюз. конф. «Биоантиоксиданты»: тез. докл. М., 1989. - Т. 2. - С. 33.

129. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Свободнорадикальные процессы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы // Кардиология. 2000. - Т.40, № 7. - С.48-61.

130. Леонтьева Г.Ф., Гончарова Л.Л., Дубровина ТЛ. Тиолдисульфидная система как один из элементов компенсаторных механизмов при гриппе // Вестн. АМН СССР. 1991. - №4. - С. 40-44.

131. Литвиненко Л.А. Влияние гипергликемии на состояние антиокислительной защиты эритроцитов у детей с сахарным диабетом и in vitro // Проблемы эндокринологии. — 1991. Т. 37, № 3. - С.6-8.

132. Лифшиц Р.И. Метаболические основы острой ожоговой токсемии. — Омск, 1977.- 130 с.

133. Лукаш А.И., Внуков В.В., Кучеренко А.О., Ананян А.А., Милютина Н.П., Прокофьев В.Н. Свободнорадикальные процессы в слюне людей при эмоциональном стрессе // Физиология человека. 1997. -Т. 23,№6.-С. 106-109.

134. Лукьянова Л.Д., Балмуханов Б.С., Уголев А.Т. Кислородзависимые процессы в клетке и ее функциональное состояние. М.: Наука, 1982. -301 с.

135. Лю Б.Н., Ефимов М.Л. Антиоксидантная система клетки и канцерогенез // Успехи современ. биологии. 1976. - Т.82, №2. -С.236-251.

136. Любицкий О.Б., Клебанов Г.И. Применение метода хемилюминесценции для определения антиоксидантной активности пищевых и биологически активных добавок // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека: материалы конф. — Смоленск, 2001. С.11-12.

137. Ляйфер А.И., Солун М.Н. Система перекисное окисление липидов -антиоксидантная защита и роль ее нарушений в патогенезе сахарного диабета и ангиопатий // Проблемы эндокринологии. — 1993. № 1. -С.57-59.

138. Макаревич О.П., Голиков П.П. Активность супероксиддисмутазы крови в острый период различных заболеваний // Лаб. дело. — 1983. -№6. С. 24-27.

139. Макаренко Е.В., Козловский И.В. Антиоксидантная система эритроцитов при хронических заболеваниях печени // Терапевт, арх. 1989.-Т. 61, №9.-С. 115-118.

140. Макашев Ж.К., Утешев А.Б., Журнист А.Г., Соловьев Б.Н. Биохимические сдвиги у больных с хронической почечной недостаточностью при гемодиализе // Клинич. лаб. диагностика. — 1997. № 7. - С.51.

141. Максименко А.В., Тищенко Е.Г. Ковалентная модификация субъединиц супероксиддисмутазы хондроитинсульфатом // Биохимия. 1997. - Т. 62, вып. 10. - С. 1359-1363.

142. Максименко А.В., Тищенко Е.Г. Модификация каталазы хондроитинсульфато. // Биохимия. 1997. - Т. 62, вып. 10. — С. 13641368.

143. Максименко А.В., Тищенко Е.Г., Голубых В Л. Антитромботическое действие производных каталазы и хондроитинсульфата при артериальном поражении у крыс // Вопр. мед. химии. — 1998. Т. 44, вып. 4. - С.362-368.

144. Малахова М.Я. Метод диагностики эндогенной интоксикации: пособие для врачей. СПб.: Изд. СПбМА последипломного образования, 1995. - 34 с.

145. Мальцев Г.Ю., Васильев А.В. Антиоксидантный индекс эритроцитов в мониторинге лечебного питания // Вопр. питания. — 1999. № 2. -С. 41-43.

146. Маринов Б.Д., Обидин А.Б., Гуляева Н.В. Изменение активности суперксиддисмутазы под действием доноров и акцепторов электронов // Биохимия. 1987. - Т.52, №5. - С.846-849.

147. Маркосян К.А., Налбандян P.M. О роли меди в цитохромоксидазе // Биохимия. 1978.- Т.43,№ 7.- С.1143-1149.

148. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека: в 2 т. / Пер. с англ. М.: Мир, 1993. - 799 с.

149. Матюшин Б.Н., Логинов А.С. Активные формы кислорода: цитотоксическое действие и методические подходы к лабораторномуконтролю при поражении печени (обзор литературы) // Клинич. лаб. диагностика. 1996. - № 4. - С.51-53.

150. Матюшин Б.Н., Логинов А.С., Ткачев В.Д. Определение супероксиддисмутазной активности в материале пункционной биопсии печени при ее хроническом поражении // Лаб. дело. 1991. - № 7. — С. 16-19.

151. Матюшин Б.Н., Логинов А.С., Якимчук Г.Н. Оценка холестаза по отношению супероксиддисмутаза/церулоплазмин при гепатобилиарной патологии // Клинич. лаб. диагностика. — 1992. № 9-10. - С. 11-13.

152. Матюшин Б.Н., Логинов А.С., Якинчук Г.Н., Ткачев В.Д. Активность антиоксидантных ферментов крови при хронических поражениях печени // Вопр. мед. химии. 1995. - Т.41, №4. - С.54-56.

153. Меншикова Е.Б., Зенков Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов // Успехи современ. биологии. 1993. - Т. 113, №4. - С.442-455.

154. Меньшиков В.В. Руководство по клинической лабораторной диагностике. М.: Медицина, 1982. - 567 с.

155. Метелица Д.И. Активация кислорода ферментными системами. М.: Наука, 1982.-256 с.

156. Мецлер Д. Биохимия, химические реакции в живой клетке: в 2 т. -М.: Мир, 1980.-Т.2.-606 с.

157. Микаелян Н.П., Максина А.Г., Петрухин В.А., Князев Ю.А., Федорова М.В. Окислительный стресс у беременных, больных сахарным диабетом // Проблемы эндокринологии. 2002. - Т.48, № 5. -С.33-36.

158. Микашинович З.И., Черногубова Е.А. Современные возможности клинической биохимии // Тр. 3-й межвуз. междунар. конф. молодых ученых, специалистов и студентов «Обмен веществ при адаптации и повреждении». Ростов н/Д, 2004. - С.44-45.

159. Мирхайдаров А.Р. Исследование хемилюминесценции крови и мочи у больных в критических состояниях // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека: материалы конф. Смоленск, 2001. - С.212-214.

160. Мокацян Р.Г. Антиоксидантная коррекция окислительного стресса при гинекологических заболеваниях // Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии : тр. науч. конф.- СПб., 1998.-Т. 2.-С.448-452.

161. Мотульский J1. Г., Кемпель И. М. Спектрофотометрический метод определения активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах // Биохимические методы исследования в клинике. М., 1969. -С.154 - 156.

162. Муфазалов А.Ф., Фархутдинов P.P., Юлдашев B.JI. Оценка процессов свободнорадик ального окисления у лиц злоупотребляющих психоактивными препаратами // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека: материалы конф. Смоленск, 2001. - С.200-201.

163. Мхитарян В.Г., Агаджанов М.И., Геворкян Д.М., Микаелян Э.М. Ферментные механизмы антирадикальной защиты клетки при экстремальных состояниях // Вестн. АМН СССР. 1982. - №9. - С. 15-19.

164. Насыров Х.М. Антиоксидантные свойства противовоспалительных средств // Фармакология и токсикология. 1987. - Т.50, №6. - С. 113116.

165. Нелаева А.А., Бышевский А.Ш. Трошина И.А., Журавлева Т.Д. Перекисное окисление липидов и гемостаз у больных инсулинзависимым сахарным диабетом // Проблемы эндокринологии. 1998. - Т. 44, № 5. - С. 10-14.

166. Нефедова Т. В., Кубатиева А.А. Изменение резистентности мембран эритроцитов при развитии эндотоксинового шока // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1991. - №4. - С. 20-22.

167. Николаев А.Я. Биологическая химия: учебник. — М.: ООО «Мед. информ. агентство», 1998. 496 с.

168. Николаев Ю.А., Милованов Ю.С. Лечение почечной недостаточност : рук. для врачей. М.: ООО «Мед. информ. агентство», 1999. —363 с.

169. Николайчик В.В., Моин В.М., Кирковский В.В., Мазур Л.И., Лобачева Г.А., Бычко Г.Н., Бараташвили Г.Г. Способ определения "средних молекул". // Лаб. дело. 1991. - № 10. - С. 13 - 18.

170. Николайчик В.В., Федулов А.Г., Бычко Г.Н. Влияние пептидов на осмотическую устойчивость эритроцитов // 3 Всесоюз. межунив. конф. физ.-хим. биологии: тр. науч. конф. Тбилиси, 1982. — Т.2. -С.364 - 365.

171. Оболенский С.В., Малахова М.Я., Ершов А.Л. Диагностика стадий эндогенной интоксикации и дифференцированное применение методов эфферентной терапии // Вестн. хирургии. 1991. - №3. -С.95-100.

172. Оганесян Э.Т., Доркина Е.Г., Хочава М.Р., Тускаев В.А., Мальцев Ю.А. Использование квантово-химических методов для обоснования антирадикального (ОН*) действия полигидроксихалконов // Химико-фармацевт. журн. -2002. Т.36, № 12. - С.21-25.

173. Однопозов А.К., Лифшиц Р.И., Горкин В.З. Активность сывороточных аминоксигеназ и у-глутамилтранспептидазы при ожоговой болезни // Вопр. мед. химии. 1988. - №2. - С. 68-72.

174. Озереденко В.Г., Федорова Л.П., Рысалиева З.К., Ибраимкулов С.Д., Курганский О.В. Антиоксидантная защитная система в условиях высокогорья // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1991. - №1. -С. 37-39.

175. Орехович В.Н. Современные методы в биохимии. М.: Медицина, 1977.-293 с.

176. Осипов А.Н., Азизова О.А., Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и их роль в организме // Успехи биол. химии. 1990. -Т.31.-С. 180-208.

177. Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р. Способ диагностики антиокислительной активности лечебных и профилактических антиоксидантных средств: патент на изобретение № 2182706. -Заявл. 15.01.2001; Опубл. 20.05.2002. -Б. 14.

178. Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р. Способ диагностики окислительного стресса организма человека. Патент на изобретение № 2236008. Заявл. 28.07.2003; Опубл. 10.09.2004 -Б.25.

179. Павлюченко И.И., Дынько Ю.В., Патемин С.Н., Басов А.А., Павлюченко Е.В. Способ диагностики эндогенной интоксикации при абдоминальной патологии // Вестн. интенсив, терапии. 1999. - № 56, разд. 4.-С. 164 -165.

180. Пасечник И.Н. Окислительный стресс и критические состояния у хирургических больных // Вести, интенсив, терапии. 2004. - № 3. -С.27-30.

181. Пасечник И.Н., Азизов Ю.М., Кулабухов В.В. Влияние окислительного стресса на белки плазмы крови у больных в критических состояниях // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека : материалы конф.—Смоленск, 2001. С.218-219.

182. Пересецкая О.В. Состояние процессов перекисного окисления липидов у детей и подростков, больных инсулинзависимым сахарным диабетом // Свободные радикалы и болезни человека : материалы конф. Смоленск, 1999.- С.156-158.

183. Пескин А.В. Взаимодействие активного кислорода с ДНК // Биохимия. 1997. - Т. 62, вып. 12. - С.1571-1578.

184. Петрович Ю.А., Гуткин Д.В. Глутатионпероксидаза в системе антиоксидантной защиты мембран // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1981. - №5. - С.76-78.

185. Петухов В.И., Кумерова А.О., Леце А.Г., Силова А.А., Шнестере А.П., Крищуна М.А., Миронова Н.А. Эритремия: активность антиоксидантных ферментов эритроцитов, связь с дефицитом железа // Терапевт, арх. 1997. - Т. 69, №4. - С. 57-61.

186. Пидэмский Е.Л., Тульбович Г.А., Голенева А.Ф., Кошмякова Н.В. Перекисное окисление липидов при асептическом воспалении и воздействии флоголитиков и антиоксидантов // Патол. физиология и эксперим. терапия. — 1990. № 1. - С. 19-21.

187. Плужников Н.Н., Тяптин А.А., Лупачев Ю.А., Земляной А.В., Варлашова М.Б., Торкунов П.А., Новоселова Н.Ю. Состояние антиокислительной системы крови и легких крыс при токсическом отеке легких // Вопр. мед. химии. 2000. - Т. 46, вып. 6. - С.664-673.

188. Поберезкина Н.Б., Осинская Л.Ф. Биологическая роль супероксиддисмутазы // Укр. биохим. журн. 1989. - Т.61, №2. - С. 14-27.

189. Подопригорова В.Г., Янковая Т.Н., Хибин Л.С. Хемилюминесцентные тесты в диагностике цитолитического синдрома при хронических диффузных заболеваниях печени // Свободные радикалы и болезни человека : материалы конф — Смоленск, 1999.- С.141-143.

190. Поликар А., Бесси М. Элементы патологии клетки. М.: Мир, 1970. -348с.

191. Помойнецкий В. Д., Кубатиева А. А. Ферменты клеточной защиты и методы их исследования. М.: Медицина, 1986. — 225 с.

192. Починюк Т.В., Тараховская М.Л. Антиоксидантные свойства унитиола и возможность их использования в терапии заболеваний гепатобилиарной системы у детей // Фармакология и токсикология. -1985.-№2.-С.92-98.

193. Прозоровская Н.Н., Русина И.Ф., Лупинович В.Л., Бекетова Н.А., Сорокин И.В., Ипатова О.М., Левачев М.М. Антиоксидантная активность льняного масла // Вопр. питания. 2003. - Т.72, № 2. -С.13-18.

194. Промыслов М.Ш., Демчук М.Л. Модификация метода определения суммарной антиоксидантной активности сыворотки крови // Вопр. мед. химии. 1990- Т. 36. № 4 - С. 90-92.

195. Пшенникова М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в развитии патологии // Патол. физиология и эксперим. терапия. 2000. - № 2. - С.24-31.

196. Пшенникова М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в развитии патологии (продолжение) // Патол. физиология и эксперим. терапия. 2000. - № 3. - С.20-26.

197. Резников А. И., Бондаренко С. И. Состояние алкогольокисляющих ферментов при острых интоксикациях этиловым алкоголем // Некоторые вопросы медицинской и прикладной энзимологии : сб. науч. тр. Краснодар, 1990. - С. 67-70.

198. Рессель JI. К., Тодоров И. Клинические лабораторные исследования в педиатрии. София, 1961.-259 с.

199. Романчук Л.А., Рубина Х.М. Спектрофотометрический метод определения сульфгидрильных групп крови // Вопр. мед. химии. 1961.- Вып. 6. С. 652.

200. Рудько И.А., Балашова Т.С., Кубатиев А.А., Ермоленко В.М. Состояние прооксидантной и антиоксидантной систем эритроцита у больных с хронической почечной недостаточностью // Терапевт, арх. -Т. 67, №8.- 1995.- С.7-9.

201. Рыбачков В.В., Малафеева Э.В. Природа и механизмы действия эндогенной интоксикации // Клиника и лечение эндоинтоксикации при острых хирургических заболеваниях. Ярославль, 1986. — С.5-43.

202. Рябинин В. Е., Лифшиц Р. И. Состояние и возможные механизмы нарушений кислородзависимых процессов при ожоговой болезни (обзор) // Вопр. мед. химии. 1990. - Т. 36, вып. 1. - С. 7-12.

203. Рябинин В.Е., Лифшиц Р.И., Чарная Л.Ф., Вальдман Б.М., Ефименко Г.П. Функциональное состояние митохондрий в период ранней ожоговой токсемии и при воздействии среднемо-лекулярных пептидов крови // Вопр. мед. химии. 1984. - Т. 30, №3. - С. 113-116.

204. Рябинин В.Е., Палимов А.Г., Лифшиц Р.И. Влияние термической травмы и средне молекулярных пептидов на хемолюминисценцию плазмы крови // Вопр. мед. химии. - 1988. - Т.43. вып.6. — С.60-64.

205. Рябов С.И., Бондаренко Б.Б. О классификации хронической почечной недостаточности // Клинич. медицина. 1975. - №10. - С.100-103.

206. Рязанцев Н.В., Новицкий В.В., Рязанцев В.П., Бычков А.В. Влияние ожоговой травмы на эритроциты // Гематология и трансфузиология. -2002.-Т.47, № 1. С.25-29.

207. Рязанцева Н.В., Новицкий В.В. Типовые нарушения молекулярной организации мембраны эритроцита при соматической и психической патологии // Успехи физиол. наук. 2004. - Т. 35, № 1. - С. 53-65.

208. Саакян М.А. Биохимическая оценка опухолевых заболеваний толстой кишки, осложненной перитонито // Клинич. лаб. диагностика. 1992. - Т.7, №8. - С.43-45.

209. Салихова Н.Н., Ахмеджанов Р.И., Мухамадиева Ш.Г. Количественный метод определения среднемолекулярных пептидов в сыворотке крови больных с хронической почечной недостаточностью // Лаб. дело. 1989. - Т.З. - С.48-52.

210. Санина O.JI. Берлинских Н.К. Биологическая роль церулоплазмина и возможности его клинического применения (обзор литературы) // Вопр. мед. химии. 1986. - №5. — С.7-14.

211. Сахипов Р.Г., Фархутдинов P.P. Клинико-экспериментальное исследование хемилюминесценции биологического материала при уролитиазе и литотрипсии // Свободные радикалы и болезни человека : материалы конф. Смоленск, 1999. - С. 190-191.

212. Северин Е.С. Биохимия: учебник для вузов. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003.- 784с.

213. Сергиенко В.И., Беляков Н.А., Фархутдинов P.P., Владимиров В.Г. Сверхслабое свечение сыворотки крови как диагностический критерий тяжести шокового синдрома // Физиология и патология сердца и сосудов: тр. ин-та. М., 1977. - С.57-59.

214. Сергиенко В.Ю., Кочетыгов Н.И., Агаджанов М.И., Симонян М.А. Применение супероксиддисмутазы при инфузионной терапии геморрагического шока в эксперименте // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1992. - №1. - С. 29-31.

215. Серов В.В. От целлюлярной патологии Вирхова до молекулярной патологии сегодняшного дня // Арх. патологии. 2001. - № 1. - С.3-5.

216. Серов В.В., Пауков B.C. Ультраструктурная патология. М.: Медицина, 1975. - 432 с.

217. Сигал B.JI. Количественные оценки деформационных характеристик мембран биологических клеток при фильтровании // Клинич. лаб. диагностика. 1993. -№ 4.-С. 19-22.

218. Симонян М.А., Геворкян Д.М., Мхитарян В.Г. Количественное изменение Си-, Zn-супероксидцисмутазы, выделенных из печени крыс при аллоксановом диабете // Бюл. эксперим. биологии и медицины, 1987.-Т. 53, №3. - С. 306-308.

219. Скляр В.А. Изменение активности ферментов антиокислительной системы крови под влиянием наркотических анальгетиков // Некоторые вопросы медицинской и прикладной энзимологии : сб. науч. тр. Краснодар, 1988. - С. 28-39.

220. Скляр В.А., Сивак В.В. Состояние антиокислителыюй системы эритроцитов в крови больных псориазом и нейродермитом // Некоторые вопросы медицинской и прикладной энзимологии : сб. науч. тр. Краснодар, 1990. - С. 46-54.

221. Скрипченко Н.Д., Шарафетдинов Х.Х., Плотникова О.А., Мещерякова В.А., Мальцев Г.Ю. Влияние диеты, обогащенной селеном, на активность перекисного окисления липидов у больных сахарным диабетом 2 типа // Вопр питания. 2003. - Т.72, № 1. -С.14-17.

222. Скулачев В.П. Возможная роль активных форм кислорода в защите от вирусных инфекций // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 12. - С. 1691-1694.

223. Слесаренко С. В. Анемия при ожоговой болезни и возможности ее коррекции // Вестн. хирургии. 1997. - Т. 156, №4. - С. 37-41.

224. Смирнова О.М., Горелышева В.А., Дедов И.И. Особенности дебюта сахарного диабета типа 1 развитие ремиссии // Проблемы эндокринологии. - 2000. - № 2. - С. 14-16.

225. Соболева М. К., Шарапов В. И., Грек О. Р. Жирные кислоты липидной фракции эритроцитарных мембран и интенсивность реакций перекисного окисления липидов при дефиците железа // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1994. - Т. 117, №6. - С. 600602.

226. Соболева М.К., Шарапов В.И. Жирнокислотный состав и функциональное состояние эритроцитарных мембран у больных сепсисом Н Вопр. мед. химии. — 1993.-Т.39, №5.-С. 19-21.

227. Соколовский В.В., Кузьмина B.C., Москадынова Г.А., Петрова Н.Н. Спектрофотометрическое определение тиолов в сыворотке крови // Клинич. лаб. диагностика. 1997. - №11. - С. 20-21.

228. Соколовский В.В. Тиоловые антиоксиданты в молекулярных механизмах неспецифической реакции организма на экспериментальное воздействие // Вопр. мед. химии. 1988.- Т.34, №6. - С. 2-11.

229. Спас В.В., Павлович С.А., Степуро И.И., Дорохин К.М., Чайковская Н.А., Соколовская С.Н., Мельниченко E.JI. Методы оценки синдрома эндогенной интоксикации и эффективности эфферентной терапии // Эфферент.терапия. 1998. - Т.4, № 1. - С.50-53.

230. Спектр Е.Б., Ананенко А.А., Политова J1.H. Определение общей антиокислительной активности плазмы крови и ликвора // Лаб. дело.- 1984.-№ 1.-С. 26-28.

231. Ставская В.В. Современные представления об инфекционных нефропатиях // Нефрология. 1997. - Т1, №4. - С.22-30.

232. Стариков А.В., Нестеренко Е.П., Карабанова Л.Л. Состояние внутриклеточного метаболизма при интенсивной терапии тяжелого хирургического эндотоксикоза // Анестезиология и реаниматология.- 1992. № 3. - С.46-48.

233. Степаненко Б.Н. Химия и биохимия углеводов (полисахариды). М.: Высш. школа, 1978. - 256 с.

234. Сторожук П.Г., Сторожук А.П. Клиническое значение определения активности супероксиддисмутазы в эритроцитах при анастезиологическом обеспечении оперируемых гастеро-энтерологических больных // Вестн. интенсив, терапии. 1998. - №4. -С.15- 17.

235. Сторожук П.Г., Сторожук А.П. Образование и устранение реактивных оксигенных радикалов в эритроцитах и их биологическая роль (с учетом интенсивной терапии) // Вестн. интенсив, терапии. — 1998. № 4. - С. 17-21.

236. Страйер J1. Биохимия : в 3-х томах. М.: Мир, 1984. - Т. 1. - 227 с.

237. Тарусов Б.Н. Физико-химические механизмы биологического действия тонизирующих излучений // Успехи современ. биологии. -1957.-Т. 144, №2. С.171-185.

238. Терехин Г.В., Елькин А.И., Яворский А.Н., Фесюк А.Ф. Эффективность антигипоксантов при острой интоксикации фосфорорганическими средствами // Фармакологическая коррекция гипоксических состояний : материалы конф. Гродно, 1991. - С.337.

239. Терехина Н. А., Петрович Ю. А. Свободно-радикальное окисление и антиоксидантная система (теория, клиническое применение, методы). -Пермь, 1992.-35 с.

240. Тихазе А.К., Ланкин В.З., Жарова Е.А., Колычева С.В. Триметазидин как антиоксидант непрямого действия // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -2000. Т. 130, № 10. - С.395-398.

241. Ткачук В.А. Клиническая биохимия. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. -360 с.

242. Тогайбаев А.А., Кургузкин А.В., Рикун И.В., Карибжанова P.M. Способ диагностики эндогенной интоксикации // Лаб. дело. 1988. -№9.-С. 22-24.

243. Трушина Н.Э., Мустафина O.K., Кулакова С.Н. Влияние полиненасыщенных жирных кислот рациона на функциональную активность фагоцитов у крыс // Вопр. питания. 2003. - Т. 72, № 4. -С. 9-11.

244. Трянкина С.А., Колобова О.И., Варшавский Б.Я. Роль перекисного окисления в патогенезе варикозного расширения вен // Клинич. лаб. диагностикою 2003. - № 6. - С. 19-20.

245. Тугушева Ф.А., Куликова А.И., Зубина И.М. Особенности перекисного окисления липидов крови больных хроническим гломерулонефритом в стадии нарушения функции почек на фоне нефротического синдрома // Вопр. мед. химии. Т. 39. - № 3. - С. 1821.

246. Тугушева Ф.А., Куликова А.И., Зубина И.М., Козлов В.В. Взаимосвязь показателей, характеризующих липидный метаболизм, с про- и антиоксидантными факторами крови больных на гемодиализе: сообщ. I//Нефрология. 1999.-Т.З,№2.-С.41-51.

247. Туманян С.В., Марисов Р.Г., Мирзоянц C.JL, Сидько Д.В. Современные аспекты инфузионной терапии у больных с диабетической гипергликемической и кетоацидотической комой // Вестн. интенсив, терапии. 2004. - № 5. - С. 132-136.

248. Усманова Г.Я., Фархутдинов P.P. Роль оксидативного стресса в эритроцитах при анемиях // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека : материалы конф Смоленск, 2001. - С.282-284.

249. Ушкалова В.Н., Иоанидис Н.В., Кадочникова Г.Д., Деева З.М. Контроль перекисного окисления липидов. — Новосибирск: изд-во Новосиб. ун-та, 1993. 182 с.

250. Фархутдинов P.P., Лиховских В.А. Хемилюминесцентные методы исследования в медицине // Свободные радикалы и болезни человека : материалы конф. Смоленск, 1999. - С. 18-19.

251. Фархутдинова Л.В. Состояние процессов генерации АФК клетками крови и микроциркуляции у детей с заболеваниями респираторноготракта // Свободные радикалы и болезни человека : материалы конф. -Смоленск, 1999.- С.162-163.

252. Федорова З.Д., Абдулкадыров К.М., Бессмельцев С.С., Котовщикова М.А. Изменение некоторых реологических свойств эритроцитов при ряде заболеваний системы крови // Гематология и трансфузиология — 1989. № 2. - С. 12-17.

253. Федоровский Н.М., Сергиенко И.И., Шилов В.Н., Фомин П.В., Груздев В.Е. Методы детоксикации гипохлоритом Na // Анестезиология и реаниматология. 1997. - № 4.- С. 38-40.

254. Филин В.И., Костюченко A.JL, Цибин Ю.Н. Современные представления об острой эндогенной интоксикации // Форсированный диурез в хирургической клинике. JT.,1976. - С.3-21.

255. Флеров М.А., Смирнова Н.Н., Светлова З.В. Перекисное окисление белков плазмы крови больных сахарным диабетом типа 1 // Клинич. эндокринология. 2003. - Т. 49, № 4. - С.3-4.

256. Фролов В. М., Ричнев В. Е., Журавлева Н. В., Баскаков И. Н. Исследование уровня сульфгидрильных групп в крови больных рожей в качестве теста, характеризующего вероятность развития рецидива // Лаб. дело. 1986. - №2. - С. 98.

257. Хамадьянова А.У., Фархутдинов P.P. Влияние лекарственных препаратов, используемых в гинекологии, на процессы свободнорадикального окисления // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека : материалы конф. Смоленск, 2001. - С.255-257.

258. Хамадьянова А.У., Фархутдинов P.P., Хамадьянов У.Р. Хемилюминесценция крови у больных с обострением хронического сальпигоофорита // Свободные радикалы и болезни человека : материалы конф. Смоленск, 1999.- С.173-175.

259. Хочачка П., Сомеро Дж. Биохимическая адаптация. М.: Мир, 1988. -568 с.

260. Хрущева Ю.В., Мальцев Г.Ю., Попова Ю.П., Васильев А.В. Оценка эффективности биологически активных добавок к пище в диетотерапии больных с сахарным диабетом 2 типа с сопутствующим ожирением // Вопр. питания. 2002. - Т. 71, № 6. -С. 38-42.

261. Цыганоква Г.М., Подопригорова В.Г., Фаращук Н.Ф. Взаимосвязь процессов гидратации и перекисного гимеостаза в крови при экспериментальном гепатите // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека : материалы конф. -Смоленск, 2001. С.165-167.

262. Чаленко В.В. Возможные причины повышения концентрации молекул средней массы при патологии // Патол. Физиология и эксперим. терапия. 1991. - №4. - С. 13-14.

263. Чаленко В.В., Кутушев Ф.Х. Эндогенная интоксикация в хирургии // Вестн. хирургии. 1990. -№.4. - С.3-8.

264. Чевари С., Андял Т., Штрентер Я. Определение антиоксидантных параметров крови и их диагностическое значение в пожилом возрасте //Лаб. дело. 1991. - № 10. - С. 9-13.

265. Черногубова Е.А. Нарушения антиоксидантной системы крови и их коррекция при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки : автореф. дис. . канд. биол. наук. Ростов н/Д, 1998. - 28 с.

266. Шаронов Б.П., Чурилова Н.В. Окисление супероксиддисмутазы гипохлоритом. Появление изомеров, обладающих каталитической активностью // ДАН СССР. 1990.- Т.314, №6. - С. 1500-1502.

267. Шейман Д.А. Патофизиология почек. М.: Медицина. - 1997. - 156158.

268. Шепилова Ж.И., Балякин С.О. Диагностическое значение определения средних молекул при некоторых деструктивных патологических процессах // Лаб. дело. 1984. - №9. - С.546.

269. Шерстнев М.П., Пирязев А.П., Азизова О.А., Владимиров Ю.А., Лопухин Ю.М. Хемилюминесцентная оценка свободнорадикального статуса у больных атеросклерозом // Свободные радикалы и болезни человека : материалы конф. Смоленск, 1999. - С. 109-111.

270. Шинкаренко Н.В. Химическая основа поведения синглетного кислорода в организме человека // Вопр. мед. химии. 1986. - Т.32, №5.-С. 140-144.

271. Шкестерс А.П., Леце А.Г., Кумерова А.О. Показатели метаболизма железа и антиоксидантная защита крови у здоровых и больных после терапии селеном // Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии : тр. науч. конф. СПб., 1998. - С.432 -435.

272. Шоно Н.И., Рабинович С.Э., Платонова Л.В., Дюжева Т.Г., Гальперин Э.И. Исследование SH-групп альдозоредуктазы из эритроцитов больных сахарным диабетом // Вопр. биол., мед. и фармацевт, химии. 2000. - №4. - с.30-34.

273. Шувалова Е.П., Антонова Т.В., Барановская В.Б. Значение систем антиоксидантной защиты крови в адаптации к инфекционному процессу при вирусном гепатите В // Терапевт, арх. 1991. - Т. 63, №11. - С.47-49.

274. Шугаев А.И., Зиневич В.П. Эндогенная интоксикация при остром панкреатите // Вести, хирургии. — 1989. №3. - С.126-130.

275. Эмануэль Н.М., Липчина Л.П. Лейкоз у мышей и особенности его развития при воздействии ингибиторов цепных окислительных процессов//ДАН СССР. 1958.-Т.121, №1. - С. 141-144.

276. Эстрин В.В., Муравьева О.В., Комаров А.Ф. Влияние гемосорбции и ультрафиолетового облучения крови на морфологические свойства эритроцитов при сепсисе у новорожденных // Анестезиология и реаниматология. 1993. - № 2. — С.40-43.

277. Янковский О.Ю., Слепенков С.В. Редокс-факторы как модуляторы клеточных функций // Вестн. СПбГУ. 1995. - Сер.З, вып.З, №17. -С.78-84.

278. Abou Seif М. A. Blood antioxidant status and urine sulfate and thiocyanate levels in smokers // J. Biochem. Toxicol. 1996. - V. 11, N3. -P. 133-138.

279. Ahnia B. S., Kiran U. Correlation between superoxide and catalase in red blood cells in different animals // Curr. sol. 1978. -V. 47, N5. -P. 544545.

280. Armstrong D.A., Buchanan J.D. Reaction of O2", H2O2 and other oxidants with sulfhydryl enzymes // Photochem. Photobiol. 1978.- V.28, № 45. -P.743-755.

281. Aruoma O.I., Halliwell B. Action of hypochlorous acid on the antioxidant protective enzymes superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase // Biochem. J. 1987.- V.248, №.3. - P.973-976.

282. Bagis S., Tamer L., Sahin G., Bilgin R., Guler H., Ercan В., Erdogan C. Free radicals and antioxidants in primary fibromyalgia: an oxidative stress disorder ? // Pheumatol. Int. 2003. - N 12. - P.234-235.

283. Banerjee Т., Kuypers F.A. Reactive oxygen species and phosphatidylserine in murine sickle red cells // Br. J. Haematol. 2004. -V. 124, N3.-P.391-402.

284. Bast A., Haenen R.M.M. Cytochrome P450 and vitamin E free radical reductase: formation of and protection against free radicals // Free Radicals, Lipoproteins, and Membrane Lipids / Ed. by A.C. dePaulet e.a.,-N .Y.: Plenum Press, 1990. P.359-370.

285. Bast A., Haenen G.R.M.M., Doelman C.J.A. Oxidants and antioxidants: State of the art. // Amer. J. Med. 1991. - V.91, suppl. 3C. - P. 25-135.

286. Beck-Speier J., Leuschel L., Luippold G., Maier K.L. Proteins released from stimulated neitrophils contain very high levels of oxidized methionine // FEBS Lett. -1988. V.227, № 1. - P.l-4.

287. Berckman R., Flohe L. The pathogenetic role of superoxide dismutaze // Bull. Eur. Physiopathol. Respirat. 1981. -N914.- P.275-285.

288. Bernheim F. Biochemical implications of pro-oxidants and antioxidants // Radiation Res. 1963. - V.3. - P. 17-32.

289. Biasioli S., Schiavon R., De Fanti E., Cavalcant G., Giavarina D. The role erythrocytes in the deperoxidative prosesses in people on hemodialysis // ASAIO J. 1996. - V.42, N5. - P.890-894.

290. Blane D.R., Heal N.D., Treby D.A. Protection again hydrogen peroxide in synovial fluid from rheumathoid patients // Clin.Sci. 1981 - V.61, N4. -P. 483-486.

291. Boran M., Kucukaksu C., Balk M., Cetin S. Red cell lipid peroxidation and antioxidant system in haemodialysed patients: influence of recombinant human erytropoietin treatmen .// Inter. Urol. Nephrol. -1998.-V.30, N4.- P. 507-512.

292. Boveris A., Chance B. The mitochondrial generation of hydrogen peroxide. General properteis and effects of hyperbaric oxygen // Biochem. J. 1973. - V. 134, N 3. - P.707-716.

293. Buxton G.V., Greenstock C.L., Helman W.P., Ross A.B. Critical review of rate constants for reactions of hydrated electrons, hydrogen atoms and hydroxyl radicals (ЮН/Ю") in aqueous solutions // J. Phys. Chem. Ref. Data.- 1990.-V.17.- P.513-886.

294. Cantoni O., Fumo M., Cattabeni F. Role of metal ions in oxidant cell injury // Biol. Trace. Elem. Res. 1989. - N21. - P. 277-281.

295. Capel I.D., Antioxidant defence in hipoxic region of tumor // Med. Biol. — 1981.- V.62,N2.-P. 119-120.

296. Chaudiere J. Some chemical and biochemical constraints of oxidative stress in living cells // Free Radical Damage and its Control. -Amsterdam.: Elsevier, 1994. P.25-66.

297. Crevat A., Hassid M., Fournier N. et al. Uremic middle molecules glucose metabolism // Kidney Jntern.- 1982. V.21, N. 1. - P.122.

298. Cristol J.P., Bosc J.Y., Badiou S., Leblanc M., Lorko R., Descops В., Canaud B. Erytropoietin and oxidative stress in hamodialysis : beneficial effect of vitamin E supplementation // Nephrol. Dial.Transplant. 1977. -V.12, N11. -P.2312-2317.

299. Csermely P., Sander P., Radies L., Somogyi J. Zinc forms complexes with higher kinetical stability than calcium, 5F-BAPTA as a good example // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1989. V.65, № 2. - P.838-844.

300. Cutler R.G. Genetic stability and oxidative stress: common mechanisms in aging and cancer // Free Radicals and Aging. Basel .: Birkhauser Verlag, 1992. - P.31-46.

301. Davies K.J.A., Delsignore M.E. Protein damage and degradation by oxygen radicals. III. Modification of secondary and tertiary structure // J. Biol. Chem. 1987. - V.262, № 20.- P.9908-9913.

302. Davies K.J.A., Delsignore M.E., Lin S.W. Protein damage and degradation by oxygen radicals. II. Modification of ammo acids // J. Biol. Chem. 1987. - V.262, № 20. -P.9902-9907.

303. Diplock A.T. Antioxidants and free radical scavengers // Free Radical Damage and its Control. Amsterdam a.: Elsevier, 1994. - P.l 13-130.

304. Dizdaroglu M., Olinski R., Nackerdien Z. DNA base damage and DNA-protein crosslinks in chromatin of gamma-irradiated or H202-treated cultured human cells // Free Radical Res. Commun.- 1992.- V. 16, suppl. 1.- P. 19-20.

305. Drummen G.P., Gadella B.M., Post J.A., Brouwers J.F. Mass spectrometric characterization of the oxidation of the fluorescent lipid peroxidation reporter molecule Cll-BODIPY (581/591) // Free Radiac. Biol. Med 2004. - V. 36, N 12. - P. 1635-1644.

306. Eiselt J., Racek J., Holecek V., Jerabek Z., Opatrny K. Lipid peroxidation and the antioxidant system in bicarbonate hemodialysis and acetate-free biofiltration.// Vnitr. Lek. 1995.- V.41, N4. - P.235-239.

307. Finkel T. Oxidant signals and oxidative stress // Curr. Opin. Cell. Biol.-2003.- V. 15, N 2. P.247-253.

308. Fliss H., Menard M. Hypochlorous acid-induced mobilization of zinc from metalloproteins //Arch. Biochem. Biophys. 1991. - V.287, № 1. - P.l 75179.

309. Fontanellas A., Coronel F., Santos J., Herrero J. Heme biosynthesis in uremic patients on CAPD or hemodialysis // Kidney Int. 1994. - V.45, N1. -P.220-223.

310. Fraga C.C., Shigenaga M.K., Park J.W., Degan P., Ames B.N. Oxidative damage to DNA during aging: 8-hydroxy-2-deoxyguanosme in rat organ and urine // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. - V.87. - P.4533-4537.

311. Fridovich I. The biology of oxiden radicals. The superoxide radical is an agent of oxigen toxity; superoxide dismutase provide an important defence // Science.- 1978. V.201, N 4359. - P. 875-880.

312. Fridovich J. Superoxide dismutases // Adv. Enzymolog. 1986. - N58.- P 61-97.

313. Gray G.J. Measurement of lipid oxidation: a review // J. Amer. Chem. Soc.- 1978.-V. 55.- P.539-546.

314. Grieger M., Schulz St. Bestimmung der Superoxiddismutase (SOD) in der Erythrozyten deim Glucose-6-Phosphatdehydrogenase — Mangel. // Folia Haematol. (DDR). 1983. -V. 110, N3.- P. 427-436.

315. Guarnieri C., Ferrari R., Visioli O. Et al. Effect of a-tocopherol on hypoxic perfused and reoxygenated rabbit heart muscle // J. Mol. Cell. Cardiol. 1978. - V.10, № 10. -P.893-906.

316. Gurer Orhan H., Sabir H.U., Ozgunes H. Correlation between clinical indicators of lead poisoning and oxidative stress parameters in controls and lead-exposed workers // Toxicology. 2004. - V. 195, N 2-3. -P.147-154.

317. Gutteridge J.M.C., Wilkins S. Copper salt-dependent hydroxyl radical formation. Damage to proteins acting as antioxidants // Biochim. Biophys. Acta. 1983. - V.758. - P.38-41.

318. Haglung U. Toxic factors in shock. // Z. med.laborator. Diag. 1985. -Vol.26, N4.-P.183 - 187.

319. Halliwell B. and Gutteridge J.M.C. Free Radicals in Biology and Medicine. Oxford: Clarendon Press, 1999.

320. Halliwell B. Free Radicals in the Brain. Aging. // Nuerological and Mental Disorders.-Berlin: Springer-Verlag, 1992. P.21-40.

321. Halliwell В. The biological significance of oxygen-derived species // Structure, Energetics and Reactivity in Chemistry (SEARCH) Series. Volume 3: Active Oxygen in Biochemistry. London.: Blackie Academic and Professional, 1995. - P.313-335.

322. Halliwell В., Gutteriodge J.H., Oxigen toxity, oxigen radicals, transition metals and desease // Biochem.J. 1984. - V.219, N1. - P. 1-14.

323. Halliwell В., Aruoma O.I., Wasil M., Gutteridge J.M.C. The resistents of transferrin and ceruloplasmin to oxidative damage // Biochem. J. 1988. -V.256.-P.311-312.

324. Harris B.H., Gelfand J.A. The immune response to trauma. // Semin. Pediatr. Surg. 1995. - V.4, N.2. - P.77 - 82.

325. Harris E.D. Regulation of antioxidant enzymes // FASEB. J. 1992. - V. 6, № 9. - P.2675-2683.

326. Hassan H. M. Biosynthesis and regulation of superoxide dismutases // Free Radical. Biol, and Med. 1988. - N5.- P. 377-385.

327. Hassan H.M. Biosynthesis and regulation of superoxide dismutases // Free Radical. Biol. Med. 1988. - N5.- P. 377-385.

328. Heinecke J.W. Oxidative stress new approaches to diagnosis and prognosis in atherosclerosis // Am. J. Cardiol., 2003. - V. 91, N ЗА. -P. 12A-16A.

329. Hodgson E.K., Fridovich J. The interaction of bovine erythrocyte superoxide dismutase with hydrogen peroxide: inactivation of the enzyme // Biochemistry. 1975. - V. 14, N24. - P. 5294-5299.

330. Hulea S. A., Olinescu R., Nita S., Crocnan D., Kummerow F. A. Cigarette smoking causes biochemical changes in blood that are suggestive ofoxidative stress: a case-control study // J. Environ. Pathol. Toxicol. Oncol.- 1995.-V. 14, N3-4.-P. 173-180.

331. Imadaya A., Terasawa K., Tosa H., Okamoto M., Toriizuka K. Erythrocyte antioxidant enzymes are reduced in patients with rheumatoid arthritis//J. Rheumatol. 1988.-V. 15, N11.-P. 1628-1631.

332. Janero D.R. Malondialdegide and thiobarbituric acid-reactivity as diagnostic indices of lipid peroxidation and peroxidative tissue injury // Free Radical Biol. Med. 1990. - V.9. - P.515-540.

333. Jenkinson S. C. Free radical effects on lung metabolism // Clin. Chest Med.- 1989.-V. 10,N1.-P. 37-47.

334. Kilfer C.R., Snyder L.M. Oxidation and erythrocyte senescence // Curr Opin Hematol. 2000. - V.7.- P.l 13-116.

335. Koenig J.S., Ficher M., Bulant E., Tiran В., Elmadfa I., Druml W. Antioxidant status in patient on chronic hemodialysis therapy, impact of pariental selenium supplementation // Wien.Klin.Wochenschr. 1997. -V.109, N1.-P.13-19.

336. Kohn H.I., Liversedge M. On a new aerobic metabolite whose production by brain is inhibited by apomorphine, emetine, ergotanine, epinephrine and menadione. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1944. - N.82. - P.292-300.

337. Koppenol W.H. Chemistry of iron and copper in radical reactions // Free Radical Damage and its Control. Amsterdam .: Elsevier, 1994. - P.3-24.

338. Koze K., Dogan P., Gunduz Z., Pusunsel R., Utas C. Oxidative stress in hemodialyzed patients and the long term effect of dializer reuze practice // Clin.Biochem. 1997. - V.30, N8. - P.601-606.

339. Kumari S., Menon P. Changes in levels of lipid peroxides and ac tivities of superoxide dismutase and catalase in isoproternol induced myocardial infarction in rats // Indian. J. Exp, Biol. 1987. - V. 25, N6. - P. 419-423.

340. Kun E., Abood G. Colorimetric estimation of succinic dehydrogenase by tripheniltetrasolium chloride // Science. 1979. - V. 44, N2. - P.1527-1529.

341. Lander H.M., Milbank A.J., Taurus J.M., Hajjar D.P., Hempstead B.L., Schwartz G.D., Kraemer R.T, Mirza U.A., Chait B.T., Burk S.C., Quilliam L.A. Regulation of cell signalling // Nature.-1996. V.382, № 6581.- P.380-381.

342. Laval J. Role of DNA repair enzymes in the cellular resistance to oxidative stress // Pathol. Biol. 1996.- V.44, № 1.- P. 14-44.

343. Leff J. A., Burton L. K., Berger E. M., Anderson В. O., Wilke C. P., Repine J. E. Increased serum catalase activity in rats subjected to thermal skin injury // Inflammation. 1993. - V. 17, N 2. - P. 199-204.

344. Lindberg R. В., Latta R. L. Phage typing of Pseudomonas aeruginosa, Clinical epidemiologic considerations // J. Infect. Dis. 1974. - V. 130, N5. - P. 533-538.

345. Lovstad K.A. Iron ion induced haemolysis: effect of ceruloplasmin, albumin and ascorbat (vit. C) // Int. J. Biochem. 1988. - V.15, № 8.-P. 1067-1071.

346. Mabuchi H., Nakahashi H. Medium sized peptides in the blood of patients with uremia // Nephrol. - 1983. - V.33, N.4. - P.232 - 237.

347. Marini F., Rodin S., Tenchini P. et al. L'altra faccia dell'ossigeno // Chir. Ital. 1985. - V. 37, № 5. p. 517-524.

348. Marklund S.L. Properties of extracellular superoxide dismutase from human // Biochem. J. 1984. - V.220, N. 1. - P.269-272.

349. Mayers L.S., Free-radical damages of nucleic acids and their components: the direct absorption of energy // Free Radicals in Biol. 1980- V.95, N.4.-P.114.

350. McCord I.M., Fridovich I. Superoxide dismutase // J.Biol. Chem. 1969.- V.244, N2. P.6049-6053.

351. McCord J.M. Superoxide radical: controversies, contradictions, and paradoxes // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1995. - V. 209, № 2. - P. 112117.

352. McCord T.M., Fridovich I. Superoxidedismutase and its function for erythrocuprein. //J. Biol. Chem. 1969. -N244. - P. 6049-6055.

353. Michelson A.M., Puget K., Durosay P. Et al. Superoxide dismutase level in human erythrocytes. // Biochem. Med. Aspects of Active Oxygen. -Kyoto: Univ Pare Press., 1977. P.247-260.

354. Miquel J., de Juan E., Sevila I. Oxygen-induced mitochondrial damage and aging // Free Radicals and Aging. Basel .: Birkhauser Verlag, 1992.- P.45-57.

355. Mohora M., Mircescn G., Cirjan C., Mihailescu I., Girneata L., Ursea N., Dinu V. Effect of hemodialysis on lipid peroxidation and antioxidant system in patient with chronic renal failure // Rom. J. Intern.Med. 1995.- V.33, N3-4. P.237-242.

356. Moore P.B., Dedman J.R. Calcium binding proteins and cellular regulation // Life Sci. 1982. - V.31, № 26. - P.2937-2946.

357. Niki E., Noguchi N., Gotoh N. Dynamics of lipid peroxidation and its inhibition by antioxidants // Biochem. Soc. Transactions. 1992. -V.21. -P.313-317.

358. Ozcan M.E., Gulec M., Ozerol E., Polat R., Akyol O. Antioxidant enzyme activities and oxidative stress in affective disorders // Int. Clin. Psychopharmacol. 2004. - V. 19, N 2. - P 89-95.

359. Packer L., Cadenas E. Handbook of Synthetic Antioxidants. New York: Marcel Dekker, 1996.

360. Papas A.M. Lipid-Soluble Antioxidants: Biochemistry and Clinical Application Basel; Birkhauser Verlag, 1992.-P.123 - 149.

361. Parsons B.J. Chemical aspects of free radical reactions in connective tissue // Free Radical Damage and its Control. Amsterdam a.: Elsevier, 1994.-P.281-300.

362. Paull J.L., Sail N.D., Soni T. Poignet J.L., Lindenbaum A., Man N.K., Moatti N., Raichard D. Lipid peroxidation abnormalities in hemodialized patients // Nephron. 1993. - V.64, N1. - P. 106-109.

363. Perrin-Nadif R., Dusch M., Koch C., Schmitt P., Mur J. M. Catalase and superoxide dismutase activities as biomarkers of oxidative stress in workers exposed to mercury vapo. // J. Toxicol. Environ. Health. 1996. -V. 48, N2.-P. 107-119.

364. Prakash M, Upadhya S, Prabhu R. Protein thiol oxidation and lipid peroxidation in patients with uremia. // Scand J Clin Lab Invest. 2004. -V. 64, N 6. - P.599-604.

365. Rhee K.S. Minimization of further lipid peroxidation it the distillation 2-thiobarbituric acid test of fish and meat // J. Food Sci. 1978. - V. 43, P. 1776-1778.

366. Rokicki W., Strzalkowski A., Klapcinska В., Danch A., Sobzak A. Antioxidant status in newborns and infants suferring from congenital heart defects // Wiad Lek. 2003. - V. 56, N 8. - P.337-340.

367. Ross E.A., Koo L.C., Moderly J. B. Low whole blood and erythrocyte levels of glutathione in hemodialysis and peritoneal dialysis patients // Am.J.Kidney Dis. 1997. - V.30, N4. - P.489-494.

368. Salo D.C., Pacifici R.E., Lin S.W., Giulivi C., Davies K.J.A. Superoxide dismutase undergoes proteolysis and fragmentation following oxidative modification and inactivation // J. Biol. Chem. 1990. -V.265, № 20. -P.l 1919-11927.

369. Sarkar S., Yadav P., Bhatnagar D. Cadmium-induced lipid peroxi-dation and the antioxidant system in rat erythrocytes: the role of antioxidants // Trace Elem. Med. Biol. 1997. - V. 11, N1 - P. 8-13.

370. Sharonov B.P., Govorova N.Yu., Lyzlova S.N. Serum protein degradation by hypochlorite // Biochem. Internat. 1989. - V. 19, № 1. - P.27-35.

371. Simms H.H., D'Amico R. Polymorphonuclear leukocyte dysregulation during the systemic inflammatory response syndrome. // Blood. — 1994. -V. 83. N.5. - P.1398 - 1407.

372. Sinet P.M., Ceballos-Picot I. Free Radicals in the Brain. // Aging, Nuerological and Mental Disorders. Berlin: Springer-Verlag, 1992. -P.91-98.

373. Siu G.M., Draper H.H. Metabolism of malonaldehyde in vitro // Lipids. -1982.- V. 17, № 5. P.349-355.

374. Sjostrom K., Craro J.D. Adaptation to oxigen by preenposure to hypoxia : activity of of mangani superoxide dismutase // Bull. Eur.Physiopath. respirat. 1981. -N17. - P.l 11-116.

375. Sles H. Oxidative stress from basic research. //Amer. J. Med. - 1991. -N91.-P. 531 - 538.

376. Small N., Messiah A., Edouard A. et al. Role of systemic inflammatory response syndrome and infection in the occurrence of early multiple organ dysfunction syndrome following severe trauma // Intens. Care. Med. -1995. V.21, N.10. — P.813 - 816.

377. Spiteller G. Enzymic lipid peroxidation a consequence of cell injury // Free Radical Biol. Med. - 1996. - V.21, № 7. - P.1003-1009.

378. Stadtman E.R. Role of oxidized amino acids in protein breakdown and stabilny // Meth. Enzymol. 1995. - V.258. - P.379-393.

379. Stern A. Oxidative stress, Cell Activation and Viral Infection. Basel: Birkhauser Verlag, 1994. - P.35-42.

380. Szweda-Lewandowska Z., Krokosz A., Gonciarz M., Zajeczkowska W., Puchala M. Damage to human erythrocytes by radiation-generated НО» radicals: molecular changes in erythrocyte membranes // Free Radic. Res. 2003.-V. 37, N 10.-P.l 137-1143.

381. Tamura H., Kitta K., Shibamoto T. Formation of reactive aldehydes from fatty acids in a Fe /H202 oxidative system // J. Agric. Food Chem. 1991. -V.39. - P.439-442.

382. Tappel A.L. Measurement of and protection from in vivo lipid peroxidation. // Free Radicals in Biol. 1980. -N.4. - P.2-47.

383. The Role of Antioxidants in Diabetes Mellitus. Oxygen Radicals and Antioxidants in Diabetes / Eds. F.A. Gries, K. Wessel. — Frankfurt am Main, 1993.

384. Trznadel K., Lucidk M., Pawlicki L., Kendzora J. Superoxide anion generation and lipid peroxidation process during hemodialysis with reused cuprophan dialyzers.// Free Radic.Biol.Med. 1990. - V.8, N5. - P.429-432.

385. Turi S., Nemeth I., Varga I., Bodrogi Т., Matrovics B. The effect of erytropoietin on the cellular defence mechanism of red blood in children with chronic renal failure.// Pediatr.Nephrol. 1992. - V.6, N6. - P.536-541.

386. Venkataraman S., Schafer F.Q., Buettner G.R., Detection of lipid radicals using EPR// Antioxid. Redox Signal. 2004.- V. 6, N 3. - P.631-638.

387. Vogt W., Hesse D. Activation of the fifth component of human complement by oxygen-derived free radicals, a methionioe oxidizing agents: a comparison // Immunobiol. 1992. - V.184, № 4-5. - P.384-391.

388. Warner A., Bencosme A., Healy D., Verme C. Prognostic Role of Antioxidant Enzymes in Sepsis: Preliminary Assessment. Clin. Chem. -1995.- V. 41, № 6, P. 867-871.

389. Wendel A. Enzymes acting against reactive oxygen // Enzymes Tools and Targets. Hannover, 1988. - P. 161-167.

390. Werdan K, Pilz G. Supplemental immune globulins in sepsis: a critical appraisal // Clin. Exp. Immunol. 1996. - V.104, suppl.l. - P.83 - 90.

391. Wolff S. P., Dean R. T. Glucose autoxidation and protein modification: the potential role of "autoxidative lycosylation" in diabetes mellitus // Biochem J. 1987. - N.245. - P.243-250.

392. Yoshikada K., Kuriuata K. Superoxide dismutase requires ascorbate for activation cerebral soluble guanulate cyclase.// Biochem. And Biophys. Res.Communs. 1981. - V.101, N3. - P. 927-1005.

Информация о работе
  • Павлюченко, Иван Иванович
  • доктора медицинских наук
  • Ростов-на-Дону, 2005
  • ВАК 03.00.04
Диссертация
Окислительный стресс, его мониторинг и критерии оценки антиокислительной активности лекарственных препаратов и БАД - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно
Автореферат
Окислительный стресс, его мониторинг и критерии оценки антиокислительной активности лекарственных препаратов и БАД - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации