Одновременный количественный анализ бактериальных и растительных биотоксинов на гидрогелевых микрочипах

Филиппова, Марина Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Одновременный количественный анализ бактериальных и растительных биотоксинов на гидрогелевых микрочипах
ВАК РФ 03.01.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Одновременный количественный анализ бактериальных и растительных биотоксинов на гидрогелевых микрочипах"

па правах рукописи

Филиппова Марина Александровна

ОДНОВРЕМЕННЫЙ КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ БАКТЕРИАЛЬНЫХ И РАСТИТЕЛЬНЫХ БИОТОКСИНОВ НА ГИДРОГЕЛЕВЫХ МИКРОЧИПАХ

03.01.03 - Молекулярная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

1 О НОЯ 2011

Москва 2011

005001551

Работа выполнена в Лаборатории биологических микрочипов Учреждения Российской Академии Наук Института молекулярной биологии им. В. А. Энгельгардта РАН.

Научный руководитель: кандидат химических наук

А.Ю. Рубина

Официальные оппоненты: доктор химических наук

Т. В. Д ем ид кипа, доктор химических наук С. А. Еремин

Ведущая организация:

Всероссийский научный центр Молекулярной Диагностики и Лечения

Защита диссертации состоится ¿¿/- // „&?/У г. в часов на заседании

Диссертационного совета Д 002.235.01 при Учреждении Российской Академии Наук Институте молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН по адресу 119991 г. Москва, В-334, ул. Вавилова, д. 32.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской Академии Наук Института молекулярной биологии им. В. А. Энгельгардта РАН

Автореферат разослан Л ^ сИл)//^

Ученый секретарь диссертационного Совета кандидат химических наук

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

В настоящее время известны многие биологические токсины белковой природы, обладающие сильным отравляющим действием на человеческий организм. Для обнаружения белковых токсинов широко используются иммунологические методы, в частности, иммуноферментный анализ. Недостатком стандартного иммуноферментного анализа является то, что в отдельном образце можно анализировать только один антиген, поэтому этот метод крайне нерационален, если необходимо определить в образце несколько десятков токсинов, как, например, при анализе продуктов питания и питьевой воды. Поэтому особый интерес представляет разработка универсального многопараметрического метода анализа, позволяющего одновременно идентифицировать в образце присутствие различных биотоксинов. Создать такой метод возможно с помощью технологии биологических микрочипов.

В данной работе предложен метод, позволяющий проводить одновременное количественное определение пятнадцати биотоксинов различного происхождения при помощи гидрогелевых биочипов. В качестве объектов исследования были выбраны: летальный фактор (LF) и протективный антиген (РА) сибиреязвенного токсина, холерный (CHT) и дифтерийный (DFT) токсины, рицин (Rie), термолабильный токсин из Е. coli (LT), семь типов стафилококковых энтеротоксинов (SEA, SEB, SEC1, SED, SEE, SEI, SEG) и два типа ботулинических нейротоксинов (BNTA, BNTE).

Также была продемонстрирована возможность проведения одновременного экспресс-анализа пятнадцати белковых биотоксинов в формате «один биочип - один образец» без построения калибровочных кривых, а значит, без использования растворов, содержащий биотоксины. Это удобно для проведения анализа в полевых условиях, так как сокращается время проведения анализа и снимаются дополнительные требования к месту проведения анализа и персоналу.

Отравление пищевыми продуктами, содержащими энтеротоксины стафилококков, широко распространено и находится на втором месте после

отравлений, вызываемых сальмонельными инфекциями. Поэтому в качестве практического приложения в данной работе был создан прототип тест-системы для одновременного количественного определения энтеротоксинов стафилококка А, В, CI, D, Е, G и I в различных пищевых продуктах.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью диссертационной работы являлась разработка метода одновременного количественного анализа панели белковых биотоксинов бактериального и растительного происхождения на биологическом микрочипе.

В связи с этим необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать метод одновременного количественного определения следующих пятнадцати биотоксинов: летальный фактор и протективный антиген сибиреязвенного токсина, холерный и дифтерийный токсины, рицин, термолабильный токсин из Е. coli, семь типов стафилококковых энтеротоксинов (SEA, SEB, SEC1, SED, SEE, SEI, SEG) и два типа ботулинических нейротоксинов (BNTA, BNTE) - на основе биологического микрочипа.

2. Разработать метод экспресс-анализа пятнадцати биотоксинов на биологическом микрочипе формате «один биочип - один образец».

3. Создать в качестве практического приложения разработанных методов прототип тест-системы для одновременного количественного определения стафилококковых энтеротоксинов типов А, В, CI, D, Е, Gh I в пищевых продуктах.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

В представленной работе впервые показана возможность одновременного количественного анализа пятнадцати белковых токсинов различного происхождения на биочипах. Проведена оценка аналитических характеристик метода и показано, что они удовлетворяют требованиям, предъявляемым к традиционным иммуноаналитическим системам.

Для разработки экспресс-варианта одновременного анализа пятнадцати токсинов предложена конструкция биочипа, позволяющая проводить многопараметрический экспресс-анализ в формате «один биочип - один образец».

Разработанный метод анализа был применен для создания прототипа тест-системы, предназначенной для одновременного количественного определения семи типов стафилококковых энтеротоксинов А, В, С1, Б, Е, О, I в образце. Метод был апробирован на анализе энтеротоксинов в образцах различных пищевых продуктов и показано, что одновременный количественный анализ, проводимый на биочипе, позволяет адекватно определять содержание энтеротоксинов.

АППРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты данной работы докладывались на XX Зимней международной молодежной научной школе "Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии» (11-15 февраля 2008, г.Москва), на Международной научно-технической конференции «Наукоемкие химические технологии-2008» (2008, г. Волгоград), на IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (2008, г. Новосибирск). Также были представлены на 52-ой научной конференции МФТИ (2009, г. Долгопрудный), на Международной научной конференции по биоорганической химии, биотехнологии и бионанотехнологии, посвященной 75-летию со дня рождения академика Ю. А. Овчинникова (2009, г. Москва-Пущино), на 14-ой Международной пущинской школе-конференции молодых ученых (2010, г. Пущино) и на VII Всероссийской научно-практической конференции «Молекулярная диагностика -2010» (2010, г. Москва).

ПУБЛИКАЦИИ

По результатам диссертации опубликовано 13 печатных работ, из которых 6 статей в журналах, входящих в перечень периодических изданий, рекомендованных ВАК, и 7 тезисов докладов.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация состоит из введения, трех глав (обзор литературы, материалы и методы, результаты и обсуждение), выводов и списка цитированной литературы. Работа изложена на ^¿страницах машинописного текста, содержит

Р рисунков и У. таблиц. Библиография включает

наименования.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Одновременный количественный анализ пятнадцати биотоксинов

В качестве объектов исследования были выбраны пятнадцать биотоксинов бактериального и растительного происхождения, которые необходимо определять для обеспечения безопасности здоровья человека, при мониторинге состояния окружающей среды, воды, почвы, а также при производстве пищевых продуктов, особенно продуктов для детского питания. Были выбраны следующие биотоксины: летальный фактор и протективный антиген сибиреязвенного токсина, холерный и дифтерийный токсины, рицин, термолабильный токсин из Е. coli, семь типов стафилококковых энтеротоксинов (SEA, SEB, SEC1, SED, SEE, SEI, SEG) и два типа ботулинических нейротоксинов (BNTA, BNTE).

Для разработки одновременного анализа пятнадцати токсинов был выбран метод «сэндвич»-иммуноанализа в формате биологического микрочипа (биочипа). Биочипы - массивы гелевых ячеек, содержащих молекулярные зонды, нанесенные на различные подложки (стекло, пластик, металл). В работе были использованы трехмерные гидрогелевые биочипы, изготовленные по технологии сополимеризационной иммобилизации, разработанной в ИМБ РАН, позволяющей создавать биочипы, содержащие различные по своей природе молекулярные зонды: белки, олигосахариды, ДНК, РНК и др. После завершения процесса полимеризации каждый иммобилизованный зонд ковалентно закреплен в структуре геля и равномерно распределен в гелевой ячейке биочипа.

В данной работе были сконструированы биочипы с иммобилизованными белками, для которых был подобран оптимальный состав полимеризационной смеси, обеспечивающий достаточную для диффузии исследуемых белков пористость геля, что позволяет проводить на биочипе иммунологические реакции различных типов. При производстве биочипа после завершения полимеризации и отмывки от непрореагировавших гелеобразующих компонентов проводилась обработка блокирующим раствором, уменьшающим неспецифические взаимодействия, в результате чего биочип был полностью готов к проведению анализа.

1.1. Подбор пар антител для одновременного анализа пятнадцати биотоксинов

При одновременном анализе большого числа аналитов основной проблемой является выбор пары специфических антител к каждому белку, которые бы не обладали перекрестной реактивностью, как с другими определяемыми белками, так и с антителами против них. Формат биочипа дает возможность проанализировать большое количество моноклональных антител и подобрать оптимальную пару. Методика выбора пары для каждого токсина была следующей: создавался биочип, на котором были иммобилизованы все имеющиеся антитела против данного токсина. Так же для каждого из антител получали конъюгат с биотином. Далее на полученных биочипах проводили «сэндвич»-иммуноанализ данного токсина, используя в качестве проявляющих каждое из биотинилированных антител. Получали калибровочные кривые для всех пар антител. Из них выбирали кривую, обладающую максимально выраженным линейным участком и имеющую максимальное соотношение сигнал/шум. Пример выбора пары антител для SEE приведен на рисунке 1.

Из приведенного рисунка видно, что наилучшая пара моноклональных антител для анализа SEE (1) SEE-8 - SEE-7biot.

C(SEE), нг/мл

Рис. 1. Калибровочные кривые для подбора оптимальной пары моноклональных антител против стафилококкового энтеротоксина Е. В анализе использовали проявляющие антитела SEE-7-biot. Иммобилизованные на биочипе антитела: 1) Ab SEE-8; 2) Ab SEE-12; 3) Ab SEE-14; 4) Ab SEE-5; 5) Ab SEE-1 ; 6) Ab SEE-9; 7) Ab SEE-2, 8)Ab SEE-10; 9) Ab SEE-15; 10) Ab SEE-17.

1.2. Проверка специфичности выбранных пар антител

Каждую выбранную пару антител проверяли на специфичность, то есть на отсутствие перекрестной неспецифической реактивности по отношению к другим токсинам и/или антителам к ним. Проверка специфичности выбранных пар антител для SEE приведена на рисунке 2.

Оценку специфичности антител проводили в два этапа:

1. На биочипе с иммобилизованными антителами против пятнадцати токсинов (LF, РА, Rie, DFT, CHT, LT, SEA, SEB, SEC1, SED, SEE, SEI, SEG, BNTA, BNTE) проводили «сэндвич»-анализ смеси четьфнадцати токсинов (LF, РА, Ríe, DFT, CHT, LT, SEA, SEB, SEC1, SED, SEE, SEI, SEG, BNTA, BNTE), не содержащей стафилококкового энтеротоксина Е, со смесью проявляющих антител против данных четырнадцати токсинов (рис. 2А) и проверяли

отсутствие неспецифических взаимодействий иммобилизованных на биочипе антител SEE-8.

1 2

• • • • • • • #

• • • • « • • ♦

• * • • • * • •

• • • • • • • «

• • • •

• * * • • • • •

• ♦ • • • • • *

• • • #

9 1

10 2

11 3

12 4

13 5

14 6

15 7

16 я

: ■Щ , ' '

11 12

А Б

Рис. 2. Проверка специфичности пары антител к SEE. На биочипе иммобилизованы антитела: 1) Ab LF; 2) АЬ РА; 3) Ab Rie; 4) Ab DFT; 5) Ab CHT; 6) Ab LT; 7) Ab BNTA; 8) Ab BNTE, 9) Ab SEA; 10) Ab SEB; 11 ) Ab SEC1 ; 12) Ab SED; 13) Ab SEE; 14) Ab SEG; 15) Ab SEI; 16) гель, не содержащий иммобилизованных белков.

Флуоресцентные изображения биочипов после проведения «сэндвич»-иммуноанализа:

А — смесь четырнадцати токсинов: LF (62.5 нг/мл), РА (62.5 нг/мл), Rie (35 нг/мл), DFT (125 нг/мл), СНТ (50 нг/мл), LT (100 нг/мл), BNTA (125 нг/мл), BNTE (125 нг/мл), (SEA (75 нг/мл), SEB (50 нг/мл), SEC1 (60 нг/мл), SED (50 нг/мл), SE1 (140 нг/мл), SEG (50 нг/мл) с проявкой смесью биотинилированных антител против данных четырнадцати токсинов.

Б — смесь пятнадцати токсинов: LF (62.5 нг/мл), РА (62.5 нг/мл), Rie (35 нг/мл), DFT (125 нг/мл), С.НТ (50 нг/мл), LT(100 нг/мл), BNTA (125 нг/мл), BNTE (125 нг/мл), (SEA (75 нг/мл), SEB (50 нг/мл), SEC1 (60 нг/мл), SED (50 нг/мл), S ЕЕ (25 нг/мл), S El (140 нг/мл), SEG (50 нг/мл) с проявляющими антителами SEE-7-biot.

2. Так же проводили «сэндвич»-анализ смеси пятнадцати токсинов с индивидуальными проявляющими антителами против стафилококкового энтеротоксина Е - SEE-7 biot (рис. 2Б). Проверяли отсутствие неспецифических взаимодействий проявляющих антител SEE-7 biot по отношению к остальным токсинам.

Аналогичным образом проверяли отсутствие неспецифических взаимодействий для всех пар антител. При наличии неспецифических сигналов

заменяли пару антител и вновь проверяли специфичность выбранных пар антител.

Выбранные пары моноклональных антител представлены в таблице 1.

Таблица 1. Моноклональные антитела, выбранные для одновременного анализ а пятнадцати биотоксинов_

№ Антиген Антитела

для иммобилизации ироявля биотинили| ющие юванные

название конц. (мг/мл) название конц. (мкг/мл)

1 и 4в4 0.3 4ЕЗ.З 3.5

2 ^РА ПА1 2.5 РА241 22

3 Я ¡с Я10Е5Э4 0.3 Я2Е4 13

4 СНТ СНТ в9 1.5 СНТН2 19

5 ЭРТ ЭРТ нз 1.8 ОРТ 13.5

6 ЭЕА 8ЕА-11 0.6 8ЕА-6' 14

7 8ЕВ 8223 0.8 8588 4

8 БЕС1 8ЕС1-7 0.9 8ЕС1-4 10

9 БЕЭ 8ЕЭ-8 0.65 8ЕБ-5 11

10 БЕЕ 8ЕЕ-8 0.4 8ЕЕ-7 7

11 БЕ1 8Е1-17А 1.4 8Е1-46 0.8

12 вЕв 8ЕС-59 1.5 8ЕО-46 5

13 ЬТ ЬТ-8 0.6 ЬТ-6 14

14 ВЖА Г1ЖТА9Т~ 0.3 ВЖА-4 14

15 ВЖЕ ВЖЕ 2Е5 0.3 ВЖЕ-ЗЕ9 7.5

1.3. Разработка одновременного анализа пятнадцати биотоксинов

Для проведения одновременного количественного анализа пятнадцати биотоксинов был создан биочип с иммобилизованными антителами против всех токсинов (рис. 3). Каждое антитело было иммобилизовано в четырех одинаковых гелевых ячейках. При анализе полученных данных интенсивность флуоресценции рассчитывали как медианный сигнал от четырех одинаковых гелевых ячеек. На биочипе также находились гелевые элементы, не

содержащие иммобилизованных белков, флуоресцентные сигналы от которых

использовались для контроля неспецифических взаимодействий.

Рис. 3. Биочип для

иммуноанализа пятнадцати

биотоксинов. Биочип содержит гелевые элементы, диаметром 120 мкм и объемом 0.1 нл (по четыре одинаковых элемента в ряду) с иммобилизованными моноклональными антителами против 15-ти биотоксинов.

Для проведения одновременного количественного определения 15-ти биотоксинов нами был разработан протокол «сэндвич»-иммуноанализа с флуоресцентной регистрацией сигнала, в котором стадии инкубации с антигеном и вторичными антителами были объединены в одну (одностадийный), при проведении которого раствор биотинилированных антител добавляют к анализируемому образцу и наносят на биочип. Нами были подобраны такие условия проведения реакции (время и температура инкубации, соотношение образец/проявляющая смесь), при которых для каждого биотоксина получали максимальное соотношение сигнал/шум.

Для определения концентрации неизвестного токсина в образце методом иммуноанализа на биочипе необходимо построение калибровочной кривой, графика зависимости величины флуоресцентного сигнала от гелевых элементов, содержащих иммобилизованные антитела, от концентрации соответствующего антигена в калибровочной пробе. Для одновременного анализа пятнадцати биотоксинов были приготовлены калибровочные пробы, содержащие пятнадцать антигенов в различных концентрациях. Нулевая калибровочная проба не содержала антигенов. В качестве проявляющих антител использовали смесь биотинилированных антител против всех биотоксинов. Таким образом, после постановки одного анализа получали одновременно пятнадцать калибровочных кривых.

АЬ и " __ АЪ вЕА

АЪР.А \bSKLS

АЬИс [ * ~ » » -«, АЬЯЕС1

\Ы)1 1 " ' ' " \l.sri)

аьснт л *, „ *;АЬ8ЕЕ

АЫ 1 - - АЬ 810

АЬВШ\ :/: ; Щ №8Е

АЬВШТ rc.ii,

Анализ проводили, добавляя к 30 мкл анализируемого образца или калибровочной пробы 30 мкл смеси проявляющих антител. Полученный раствор инкубировали на биочипе 17 ч. Далее после процедуры отмывки биочипы проявляли флуоресцентно меченым (Су5) стрептавидином, повторно отмывали и регистрировали флуоресцентные сигналы.

Флуоресцентные измерения проводили с использованием портативного флуоресцентного анализатора биочипов с возбуждением при помощи лазера (ИМБ, Москва) с использованием фильтров 650/670 нм (возбуждение/регистрация). Расчет интенсивности флуоресцентного сигнала от каждой ячейки биочипа и определение концентраций всех токсинов проводили с помощью специального программного обеспечения ImaGel Research (ИМБ, Москва).

Типичные калибровочные кривые для определения биотоксинов, полученные на биочипах, показаны на рис. 4.

1.4. Аналитические характеристики количественного иммуноанализа пятнадцати биотоксинов на биочипах

Для оценки воспроизводимости анализа была проведена серия экспериментов на 60-ти биочипах (по 10 калибровочных кривых для каждого биотоксина) (рис. 4). Коэффициент вариации для различных концентраций определяемых, антигенов не превышал 15%.

Аналитическую чувствительность (табл. 2), наименьшую определяемую концентрацию каждого биотоксина, рассчитывали как концентрацию, соответствующую значению флуоресценции, превышающему не менее чем на два стандартных отклонения флуоресцентный сигнал десятикратно измеренной нулевой калибровочной пробы.

5 6

$ о

4 -

л-

........♦

50 100

С(ЬГ), нг/мл

»0

3 2«

£■ 10

№ 100 С(РА), нг/мл

С(Ккг), ш мл

20 40

С(СНТ).иг;мл

= 12 "

Л15

6 + Л

С(Б*'Т),иггмл

'—I 0

100 о

100 200 С(Ь.Т),нг мл

з - у

в 20 -я

а ю

100 200 С( В\'ТА),НГМЛ

О 100 200

С(ПМЕ),нг..чл

С(8ЕА), нг/мл

О 50 100 О

С(5Е1!),ш»и

Ч 20

М'

н о

50 100 О

С(8ЕС1).игмл

л-*

50 100

С(К1::1)), нг/мл

О 50 100 О 150 300 О 100 200

С^£Е>, НГ/МЛ С(КЕ1),нг.мл С(5ЕС),нг/мл

Рнс. 4. Калибровочные кривые, полученные в одновременном одностадийном «сэндвич»-иммуноанализе пятнадцати биотоксинов. Каждая точка калибровочной кривой - среднее значение из измерений, полученных на десяти биочипах.

Таблица 2. Аналитическая чувствительность для пятнадцати биотоксинов при одновременном анализе на биочипах.__

Аналитическая Динамический

№ Антиген чувствительность, нг/мл диапазон*, нг/мл

1 LF 1.8 1.8-125

2 РА 1.3 1.3-125

3 Ric 1.8 1.8-70

4 СНТ 0.5 0.5-50

5 DFT 2.0 2.0-95

6 SEA 2.3 2.3-150

7 SEB 1.5 1.5-100

8 SEC1 2.0 2.0-125

9 SED 3.0 3.0-100

10 SEE 0.9 0.9-100

И SEI 2.0 2.0-300

12 SEG 5.0 5.0-200

13 LT 10.0 10.0-200

14 BNTA 2.0 2.0-250

15 BNTE 8.0 8.0-250

♦Динамический диапазон - рабочий диапазон концентраций, в котором калибровочная кривая линейна.

1.5. Применение зеркальных подложек для сокращения времени одновременного анализа пятнадцати биотоксинов на биочипах

При определении биотоксинов важным параметром является время анализа. Ранее нами было показано, что одним из способов значительного сокращения времени иммуноанализа на гидрогелевом биочипе без потери его чувствительности является использование отражающих зеркальных подложек.

В ходе разработки экспресс-метода определения биотоксинов были изготовлены биочипы на подложках с золотым напылением фирмы Nunc (США) и биочипы на прозрачных стеклянных подложках. На всех биочипах был проведен одностадийный «сэндвич»-анализ пятнадцати биотоксинов. Протокол анализа для биочипов на отражающих подложках отличался временем инкубации, которое было значительно сокращено. В качестве

примера на рисунке 5 представлены калибровочные кривые для БЕО, полученные на двух типах подложек. Как видно из представленных данных, калибровочные кривые практически одинаковы, т.е. использование отражающих металлизированных подложек позволяет сократить время иммуноанализа биотоксинов более чем в восемь раз без потери чувствительности, что делает возможным проведение одновременного количественного экспресс-анализа нескольких биотоксинов в образце.

С(8еО), ш/лал

Рис. 5. Калибровочные кривые «сэндвич»-иммуноанализа БЕС, полученные на биочипах, изготовленных на подложках с золотым напылением (1) (время иммуноанализа составляло 2 ч) и на стеклянных подложках (2) (время иммуноанализа составляло 17 ч).

2. Экспресс-анализ биотоксинов в формате «один биочип - один образец»

Для проведения анализа пятнадцати биотоксинов в полевых условиях требуется максимально упрощенная процедура тестирования образцов. Для этого мы предложили использовать внутреннюю калибровочную кривую, позволяющую избежать стадии построения калибровочных кривых и дать возможность проводить анализ в формате «один биочип - один образец». Данный подход ранее был описан для двухстадийного «сэндвич»-

иммуноанализа простата-специфического антигена (ПСА). Для определения концентрации двух форм ПСА в образце в одном анализе в состав биочипа, помимо гелевых ячеек с иммобилизованными антителами, были введены калибровочные ячейки, для получения индивидуального калибровочного графика на каждом биочипе (внутренняя калибровочная кривая).

В данном случае аналогичный подход был реализован для анализа пятнадцати биотоксинов: в конструкцию биочипа были введены ячейки, содержащие флуоресцентно меченный нейтральный белок (бычий сывороточный альбумин), иммобилизованный в возрастающих концентрациях (рис. 6).

1: 2 i з\

7 Г 81 9: 1» 11 12|

Внутренняя калибровочная кривая

50 100 150 200 С(бнотокеив), hi /мл

Рис. 6. Биочип для полуколичественного анализа биотоксинов. Биочип содержит ячейки с иммобилизованными антителами против: 1) LF, 2) РА, 3) Ric, 4) CHT, 5) DFT, 6) SEA, 7) SEB, 8) SEC1, 9) SED, 10) SEG, 11) SEE, 12) SEI, 13) LT, 14) BNTA, 15) BNTE. СО - гель, не содержащий иммобилизованных белков. Ячейки С1-С8 содержат БСА-Су5 в возрастающих концентрациях А и В - флуоресцентные изображения, полученные с использованием анализатора биочипов. Гелевые элементы биочипа для построения внутренней калибровочной кривой выделены в рамке. С - пример определения концентрации биотоксина с помощью внутренней калибровочной кривой.

Для проведения количественного анализа на биочипе с внутренней калибровочной кривой флуоресцентные сигналы, полученные от ячеек с иммобилизованным флуоресцентно меченым белком, сопоставляли с сигналами от гелевых ячеек с иммобилизованными антителами против каждого

их анализируемых биотоксинов для каждой его концентрации в наборе калибровочных проб. Таким образом, каждой калибровочной ячейке входящей в состав внутренней калибровочной кривой присваивали значение «эффективной» концентрации, соответствующей флуоресцентному сигналу, полученному при анализе данного биотоксина в соответствующей калибровочной пробе. Определение «эффективных» концентраций проводили один раз для каждой партии биочипов (100 шт. и более), и эти данные использовали при проведении анализа на каждом биочипе этой партии.

Коэффициент вариации для различных концентраций определяемых антигенов не превышал 30%. Данный метод предлагается использовать как полуколичественный, для определения уровня содержания биотоксина в пробе. Диапазоны определяемых концентраций (высокие/средние/низкие) представлены в таблице 3.

Таблица 3. Диапазоны концентраций биотоксинов, получаемые при проведении экспресс-анализа в формате «один биочип - один анализ».

№ Антиген Диапазон концентраций, нг/мл

низкие средние высокие

1 и 2-30 30-100 г >100

2 РА 2-25 25-60 >60

3 Шс 2-4 4-18 >18

4 СНТ 1-4 4-10 >10

5 ББТ 2-35 35-80 >80

6 БЕА 3-60 60-130 >130

7 БЕВ 2-20 20-40 >40

8 БЕСЛ 2-35 35-75 >75

9 БЕБ 3-50 50-100 >100

10 8ЕЕ 1-4 4-15 >15

11 БЕ1 2-37 37-150 >150

12 ЗЕв 5-50 50-100 >100

13 ЬТ 10-100 100-155 >155

14 ВОТА 2-30 30-90 >90

15 ВЫТЕ 8-50 50-140 >140

3. Практическое применение — разработка прототипа тест-системы для одновременного анализа семи типов стафилококковых энтеротоксинов на биочипе

Стафилококки в процессе роста могут продуцировать набор токсинов, наиболее опасными из которых являются энтеротоксины. Пищевые продукты, содержащие энтеротоксины стафилококков (SEs), вызывают сильнейшие отравления. При таких пищевых отравлениях возможны различные осложнения, включая развитие аутоиммунных заболеваний: ревматоидный артрит, атопический дерматит, и аллергии разного рода. Также SEs вовлечены в синдром токсического шока.

SEs являются небольшими белками с молекулярными массами от 27 до 30 кДа и относятся к семейству суперантигенов. Наиболее распространенными являются энтеротоксины А-Е, они являются наиболее частой причиной пищевых отравлений. Энтеротоксины G и I могут быть не только причиной пищевых отравлений, но также вызывать токсический синдром. Для энтеротоксина А необходимый минимальный уровень определения составляет 200 нг/100 г продукта. При анализе интоксикации детей предел обнаружения в биологических жидкостях и продуктах питания должен быть еще ниже. Необходимо также учитывать потенциальную возможность использования энтеротоксинов в качестве биологического оружия. Все эти данные делают актуальным создание высокочувствительных и специфичных методов обнаружения и мониторинга всех известных SEs.

3.1. Биочип для одновременного анализа семи энтеротоксинов стафилококка

Для создания биочипа для проведения одновременного количественного анализа семи энтеротоксинов стафилококка были отобраны пары моноклональных антител, взаимодействующие строго специфично, по схеме, описанной выше. Биочипы для одновременного количественного анализа стафилококковых энтеротоксинов А, В, Cl, D, Е, G, I содержали два массива ячеек. В левой части биочипа иммобилизованы антитела против семи

определяемых энтеротоксинов, в правой части иммобилизованы семь антигенов - энтеротоксинов (рис. 7). Каждый белок иммобилизован в четырех одинаковых гелевых элементах биочипа для повышения воспроизводимости получаемых данных. На биочипе также находятся гелевые ячейки, не содержащие иммобилизованных белков, флуоресцентные сигналы от которых используются для контроля неспецифической сорбции.

Рис. 7. Изображение биочипа для иммуноанализа семи стафилококковых энтеротоксинов. Биочип содержит гелевые элементы диаметром 120 мкм и объемом 0.1 нл (по четыре одинаковых элемента в ряду) с иммобилизованными моноклональными антителами против семи стафилококковых энтеротоксинов (левая часть биочипа), а также с иммобилизованными энтеротоксинами (правая часть биочипа).

При проведении «сэндвич»-анализа на биочипе происходит образование тройных комплексов, иммобилизованное антитело-антиген-проявляющее антитело и одновременно взаимодействие иммобилизованных антигенов с проявляющими антителами с образованием бинарных комплексов (антиген-антитело). Для определения концентраций энтеротоксинов в образце мы использовали сигналы от ячеек, содержащих иммобилизованные антитела. Сигналы от иммобилизованных антигенов использовали в качестве положительного контроля для оценки работоспособности смеси проявляющих антител, а также для выявления хук-эффекта при проведении одностадийного анализа. Данный эффект может возникать в иммунодиагностических системах, основанных на одностадийном «сэндвич»-анализе, при высоких концентрациях аналита в пробе. При этом зависимость величины регистрируемого сигнала от концентрации аналита становится обратно пропорциональной. Ранее нами была продемонстрирована возможность выявлять хук-эффект непосредственно при

проведении анализа на биочипе. Данный подход был применен нами также в настоящей работе при создании биочипа для экспресс-анализа семи энтеротоксинов.

3.2, Методика проведения анализа

Для повышения чувствительности анализа в качестве метода был применен двустадийный «сэндвич»-иммуноанализ, при котором образец и проявляющие антитела инкубируют последовательно, а в качестве проявляющей системы используют конъюгат антител с биотином, с последующей обработкой флуоресцентно меченым стрептавидином.

Концентрации энтеротоксинов в образце рассчитывали по калибровочным кривым, которые получали на биочипах, проводя иммуноанализ калибровочных проб аналогично тому, как это описано выше для биочипа на 15 биотоксинов. Для одновременного анализа семи типов стафилококковых энтеротоксинов были приготовлены калибровочные пробы, содержащие семь антигенов в различных концентрациях. Нулевая калибровочная проба не содержала энтеротоксинов. В качестве проявляющих антител использовали смесь биотинилированных антител против всех энтеротоксинов и при постановке анализа получали одновременно семь калибровочных кривых.

3.3. Аналитические характеристики одновременного количественного иммуноанализа семи типов энтеротоксинов на биочипах

Для оценки воспроизводимости и аналитической чувствительности метода была проведена серия экспериментов и получено по десять калибровочных кривых для каждого энтеротоксина в одновременном анализе на биочипах. Типичные калибровочные кривые показаны на рис. 8. Коэффициент вариации для различных концентраций определяемых энтеротоксинов не превышал 15%.

Аналитическую чувствительность, наименьшую определяемую концентрацию каждого из семи энтеротоксинов в одновременном анализе на биочипе, рассчитывали, как описано выше. Были полученные следующие значения аналитической чувствительности: SEA - 0.3 нг/мл, SEB - 0.5 нг/мл, SEC1 - 0.1 нг/мл, SED - 0.4 нг/мл, SEE - 0.05 нг/мл, SEG - 0.4 нг/мл, и для

SEI - 0.5 нг/мл. Полученные на биочипах значения аналитической чувствительности соответствует значениям предела обнаружения для коммерческой тест-системы RIDASCREEN® SET А, В, С, D, Е, для индивидуального определения энтеротоксинов А, В, С, D и Е (0.2-0.7 нг/мл).

25 -

S 25

= 20

оГ f 15 У«*

г ¡о О. 9 1 sJ j м F 0.4

-1-г

0 20 40 60 80 10» 120 С (SED), нг/мл

25 50 75 Ш С (SEE), я/нл

25 50 75 100 125 С (SEC1), ж/мл

50 100 150 200 С (SEG), нг/мл

0 100 200 С (SH), иг «л

Рис. 8. Калибровочные кривые, полученные в одновременном двухстадийном «сэндвич»-иммуноанализе семи типов стафилококковых энтеротоксинов с использованием биотин-стрептавидиновой системы. Каждая точка калибровочной кривой - среднее значение из измерений, полученных на десяти биочипах. На врезках приведена область низких концентраций. Пунктирной линией обозначен флуоресцентный сигнал, на два стандартных отклонения превышающий многократно измеренный сигнал от нулевой пробы. Концентрацию антигена, соответствующую этому сигналу, принимали за значение аналитической чувствительности.

3.4. Анализ стафилококковых энтеротоксинов в биологических средах

Разработанный метод анализа на биочипах апробировали на образцах биологических сред. Смесь семи энтеротоксинов добавляли в различных концентрациях в буферный раствор, молоко, сливки, творог и кашу для детского питания, содержащую сухое молоко, и после проведения пробоподготовки анализировали на биочипах согласно разработанному протоколу. Контрольные образцы пищевых продуктов, в которые не были добавлены энтеротоксины, также анализировались. Выбор молока и продуктов, на основе молока в качестве образцов для анализа основан на литературных данных о возможном наличии в молочных продуктах энтеротоксинов, появляющихся, как правило, вследствие использования молока от животных больных маститами. Наличие энтеротоксинов в детском питании представляет не просто угрозу здоровью, но может быть причиной синдрома внезапной детской смертности в случае использования для вскармливания детей, не имеющих собственных антител к энтеротоксинам стафилококков.

Для всех энтеротоксинов калибровочные кривые, полученные на биочипах во всех пяти средах, имели одинаковый характер (рис. 9).

20 30 С(ЯЕЕ), нг/мл

Рис.9. Калибровочные кривые, полученные при иммуноанализе на биочипах проб стафилококковых энтеротоксинов в пяти биологических средах: ]) буферный раствор; 2) молоко; 3) сливки; 4) детское питание; 5) творог.

Идентичность калибровочных кривых, полученных в различных биологических средах, и калибровочной кривой, полученной с использованием калибраторов, приготовленных на буферном растворе, позволяет сделать вывод о возможности использования разработанного протокола анализа для определения семи типов энтеротоксинов в образцах данных пищевых продуктов.

В результате анализа пищевых продуктов, содержащих семь энтеротоксинов в различных концентрациях, и контрольных образцов продуктов, не содержащих энтеротоксинов, не было получено ни ложноположительных, ни ложноотрицательных результатов. Для всех энтеротоксинов во всех пищевых продуктах минимальная достоверно определяемая концентрация не превышала для SEA - 0.5 нг/мл, SEB -0.6 нг/мл, SEC1 - 0.4 нг/мл, SED - 0.7 нг/мл, SEE - 0.05 нг/мл, SEG - 1.1 нг/мл и для SEI - 0.8 нг/мл.

Таким образом, нами было показано, что разработанный метод одновременного количественного анализа энтеротоксинов на биочипах позволяет адекватно определять их содержание в различных пищевых продуктах.

ВЫВОДЫ

1. На основе биологического микрочипа разработан метод одновременного количественного анализа пятнадцати белковых биотоксинов бактериального и растительного происхождения: летального фактора и протективного антигена сибиреязвенного токсина, холерного и дифтерийного токсинов, рицина, термолабильного токсина из Е. coli, семи типов стафилококковых энтеротоксинов (SEA, SEB, SEC1, SED, SEE, SEI, SEG) и двух типов ботулинических нейротоксинов (BNTA, BNTE).

2. Проведена оценка аналитических характеристик метода и показано, что коэффициент вариации определяемых концентраций исследуемых биотоксинов на биочипе не превышает 15%. Аналитическая чувствительность для пятнадцати биотоксинов находилась в пределах от 0.5 до 10 нг/мл в зависимости от биотоксина.

3. С использованием отражающих подложек разработаны конструкция биочипа и метод проведения полуколичественного экспресс-анализа пятнадцати биотоксинов в формате «один биочип - один образец».

4. Создан прототип тест-системы, позволяющей проводить одновременное количественное определение семи наиболее распространенных типов стафилококковых энтеротоксинов А, В, С1, О, Е, О, I в образцах пищевых продуктов на биологическом микрочипе. Аналитическая чувствительность метода составила от 0.05 до 0.5 нг/мл в зависимости от типа стафилококкового энтеротоксина.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи

1. Е В. Коновалова, E.H. Савватеева, Е.И. Дементьева, М.А. Филиппова, А.Ю. Турыгин, Т.В. Осипова, Т.П. Рябых, А.Ю. Рубина, A.C. Заседателев. «Разработка биочипа для количественного определения двух форм простата-специфического антигена с использованием внутренней калибровочной кривой», Мол. биология, 2007, Т. 41, №4, 734-738.

2. Е.Э. Петрова, Р.Л. Комалева, O.E. Лахтина, Л.В. Самохвалова, H.A. Калинина, Н С. Шошина, А.Ю. Рубина, М.А. Филиппова, Ю.В. Вертиев, Т.П. Валякина, Е.В. Гришин. «Получение и характеристика моноклональных антител к холерному токсину», Биорг. химия, 2009, Т. 35, № 3, 357-367

3. Т.П. Валякина, O.E. Лахтина, Р.Л. Комалева, М.А. Симонова, Л.В. Самохвалова, Н.С. Шошина, H.A. Калинина, А.Ю. Рубина, М.А. Филиппова, Ю.В. Вертиев, Е.В. Гришин. «Получение и характеристика моноклональных антител к дифтерийному токсину», Биорг. химия, 2009, Т. 35, № 5, 618-628.

4. Ж.И. Зубцова, М.А. Филиппова, E.H. Савватеева, Д А. Зубцов, В.Р. Чечёткин, Е.В. Гришин, A.C. Заседателев, А.Ю. Рубина «Усиление сигнала флуоресценции на гелевых биочипах с зеркальной поверхностью и оптимизация процедуры иммуноанализа». ДАН, 2009, Т. 427, № 1,118-121.

5. A.Yu. Rubina, M.A. Filippova, G.U. Feizkhanova, A O. Shepeliakovskaya, E.I.Sidina, Kh.M. Boziev, A.G. Laman, Yu.V. Vcrtiev, A.S. Zasedatelev, E.V. Grishin. "Simultaneous detection of seven staphylococcal enterotoxins: development of hydrogel biochips for analytical and practical application", Anal. Chem., 2010, V. 82, 8881-8889.

6. M.A. Филиппова, Г.У. Фейзханова, Ж.И. Зубцова, А.А. Стомахин, А.Ю. Рубина, Е.В. Гришин «Биочип для многопараметрического экспресс-анализа биотоксинов», ДАН, 2011, Т. 436, №4,553-558.

Тезисы

1. М.А. Филиппова, Ж.И. Зубцова, А.Ю. Рубина, В.А. Несмеянов. «Одновременный количественный анализ бактериальных и растительных биотоксинов на гидрогелевых микрочипах». XX Зимняя международная молодежная научная школа "Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии», г. Москва, 2008.

2. М.А. Филиппова, Ж.И. Зубцова, А.Ю. Рубина, В.А. Несмеянов, Е.В. Гришин. «Биочип для детекции биотоксинов». IV съезд Российского общества биохимиков и молекулярных биологов. Россия, Новосибирск, 2008.

3. М.А. Филиппова, Ж.И. Зубцова, А.Ю. Рубина, В.А. Несмеянов «Биосенсоры для детекции белковых токсинов». XII Международная научно-техническая конференция «Наукоемкие химические технологии-2008», г. Волгоград, 2008.

4. ГУ.Фейзханова, М.А.Филиппова, А.Ю. Рубина. «Одновременный иммуноанализ семи типов стафилококковых энтеротоксинов и антител к ним в сыворотке крови человека на биологическом микрочипе», 52-я научная конференция МФТИ, Долгопрудный, 2009

5. Г У. Фейзханова, М.А. Филиппова., А.Ю.Рубина. «Одновременный иммуноанализ семи типов стафилококковых энтеротоксинов на биологическом микрочипе». Международная научная конференция по биоорганической химии, биотехнологии и бионанотехнологии, посвященная 75-летию со дня рождения академика Ю.' А. Овчинникова, г. Москва-Пущино, 2009.

6. Г.У .Фейзханова, М.А.Филиппова, А.Ю. Рубина. «Гидрогелевый биочип для одновременного иммуноанализа стафилококковых энтеротоксинов», 14-я Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых, Пущино, 2010

7. М.А. Филиппова, А.Ю. Рубина, Г.У. Фейзханова, А.О. Шепеляковская, Е.И. Сидина, Х.М. Бозиев, А.Г. Ламан, Ф.А. Бровко, Ю.В. Вертиев, А.С. Заседателев, Е.В. Гришин. «Метод одновременного количественного иммунохимического анализа семи энтеротоксинов стафилококков на гидрогелевом биочипе». VII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Молекулярная диагностика -2010», г. Москва, 2010.

Подписано в печать 07.10.2011 г. Формат А5 (148,5x210 мм). Бумага офсетная. Гарнитура "Тайме". Печать трафаретная (ризограф). Заказ 174. Тираж 100 экз. Отпечатано в типографии "Геликон" 105203, Москва, 12-я Парковая ул., д.5 (499) 753-00-46 www.helicongroup.ru

Содержание диссертации, кандидата химических наук, Филиппова, Марина Александровна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Определение индивидуальных токсинов.

1.1.1. Дифтерийный токсин.

1.1.2. Холерный токсин.

1.1.3. Сибирская язва.

1.1.4. Рицин.

1.1.5. Ботулинические нейротоксины.

1.1.6. Стафилококковые энтеротоксины.

1.2. Биосенсоры для одновременного определения нескольких токсинов в образце.

1.2.1. Анализ токсинов и токсоидов.

1.2.2. Определение токсинов, используя клеточные рецепторы.

1.2.3. Токсины в клинических жидкостях.

1.2.4. Токсины в образцах окружающей среды.

1.2.5. Токсины в продуктах питания.

1.3. Биологические микрочипы.

1.3.1. Применение микрочипов.

1.3.2. Изготовление микрочипов.

1.3.2.1. Методы иммобилизации белков на микрочипах.

1.3.2.2.Методы нанесения зондов.

1.3.3.Микрочипы на основе гидрогелей.

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2.1 Приборы и реактивы.

2.2. Изготовление биочипов.

2.3. Приготовление проявляющей смеси антител.

2.3.1.Получение конъюгатов антител с биотином.

2.3.2. Получение конъюгатов антител с флуоресцентным красителем

2.4. Приготовление калибровочных проб.

2.4.1. Калибровочные пробы для одновременного анализа пятнадцати биотоксинов.

2.4.2. Калибровочные пробы для одновременного анализа для семи стафилококковых энтеротоксинов.

2.5. Одновременный анализ биотоксинов на биочипах.

2.5.1. «Сэндвич»-иммуноанализ биотоксинов с использованием стрептавидин-биотинового комплекса.

2.5.2 «Сэндвич»-иммуноанализ биотоксинов с использованием флуоресцентно меченых антител.

2.5.3.Определение стафилококковых энтеротоксинов в пищевых продуктах.

2.5.4. Экспресс анализ биотоксинов на биочипах, изготовленных на металлизированной подложке.

2.6. Флуоресцентные измерения.

2.7. Обработка результатов анализа.•.

2.8. Аналитические характеристики системы.

2.8.1 .Воспроизводимость анализа.

2.8.2. Аналитическая чувствительность.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Одновременный количественный анализ пятнадцати биотоксинов.

3.1.1. Подбор пар антител для одновременного анализа пятнадцати биотоксинов.

3.1.2. Проверка специфичности выбранных пар антител.

3.1.3. Разработка одновременного анализа пятнадцати биотоксинов.

3.1.4. Аналитические характеристики количественного иммуноанализа пятнадцати биотоксинов на биочипах.

3.1.5. Применение зеркальных подложек для сокращения времени одновременного анализа пятнадцати биотоксинов на биочипах.

3.2. Экспресс-анализ биотоксинов в формате «один биочип - один образец».

3.3. Практическое применение - разработка прототипа тест-системы для одновременного анализа семи типов стафилококковых энтеротоксинов на биочипе.

3.3.1. Биочип для одновременного анализа семи энтеротоксинов стафилококка.

3.3.2. Методика проведения анализа.

3.3.3. Аналитические характеристики одновременного количественного иммуноанализа семи типов энтеротоксинов на биочипах.

3.3.4. Анализ стафилококковых энтеротоксинов в биологических средах.

ВЫВОДЫ.

БЛАГОДАРНОСТИ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Одновременный количественный анализ бактериальных и растительных биотоксинов на гидрогелевых микрочипах"

В настоящее время известны многие биологические токсины белковой природы, обладающие сильным действием на человеческий организм. Для обнаружения белковых токсинов широко используются иммунологические методы, в частности, иммуноферментный анализ. Недостатком стандартного иммуноферментного анализа является то, что в отдельном образце можно анализировать только один антиген, поэтому этот метод крайне нерационален, если необходимо определить в образце несколько десятков токсинов, как, например, при анализе продуктов питания и питьевой воды. Поэтому особый интерес представляет разработка универсального многопараметрического метода анализа, позволяющего одновременно; идентифицировать в образце присутствие различных биотоксинов. Создать такой метод возможно с помощью технологии биологических микрочипов.

В. данной- работе предложен метод, позволяющий проводить одновременное количественное определение пятнадцати биотоксинов различного происхождения при помощи гидрогелевых биочипов. В качестве объектов исследования были выбраны: летальный фактор и протективный антиген сибиреязвенного токсина; холерный и дифтерийный-токсины, рицин, термолабильный токсин из Е. coli, семь типов стафилококковых энтеротоксинов (SEA, SEB, SEC1, SED, SEE, SEI, SEG) и два типа' ботулинических нейротоксинов (BNTA, BNTE).

Также была продемонстрирована возможность проведения одновременного экспресс-анализа пятнадцати белковых биотоксинов в формате «один биочип - один образец» без построения калибровочных кривых, а значит, без использования растворов, содержащий биотоксины. Это удобно для проведения анализа в полевых условиях, так как сокращается время проведения анализа, и снимаются дополнительные требования к месту проведения анализа и персоналу.

Отравление пищевыми продуктами, содержащими энтеротоксины стафилококков, широко распространено и находится на втором месте после отравлений, вызываемых сальмонеллезными инфекциями. Поэтому в качестве практического приложения в данной работе был создан прототип тест-системы для одновременного количественного определения энтеротоксинов стафилококка типов. А, В, CI, D, Е, G и I в различных пищевых продуктах

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Филиппова, Марина Александровна

выводы

4. Создан прототип тест-системы, позволяющей проводить одновременное количественное определение семи ' наиболее распространенных типов стафилококковых энтеротоксинов А, В, CI, D, Е, G, I в образцах пищевых продуктов на биологическом микрочипе. Аналитическая чувствительность метода составила от 0.05 до 0.5 нг/мл в зависимости от типа стафилококкового энтеротоксина.

БЛАГОДАРНОСТИ

Выражаю глубокую благодарность моему научному руководителю Рубиной Алле Юрьевне за всестороннюю помощь и интеллектуальную поддержку, оказанные при выполнении и написании этой работы. Я искренне признательна Заседателеву Александру Сергеевичу, Гришину Евгению Васильевичу, Вертиеву Юрию Викторовичу, Бровко Федору Александровичу, Аббасовой Светлане Георгиевне, Свешникову Петру Георгиевичу за критическое обсуждение экспериментов и их результатов; Бутвиловской Веронике, Фейзхановой Гузель, Стомахину Андрею, Савватеевой Елене, Цыбульской Марии, Поплетаевой Софье за помощь, моральную поддержку, теплое и дружеское отношение. Также выражаю признательность Дементьевой Екатерине за сотрудничество. Выражаю благодарность Юрасову Роману за разработку специальных компьютерных программ. Выражаю признательность Панькову Сергею Васильевичу, Крейндлину Эдуарду Яковлевичу, Гужову Владилену Павловичу, Моисеевой Ольге, Сомовой Ольге, Грачевой Маше, Юрасову Дмитрию и всей группе производства микрочипов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата химических наук, Филиппова, Марина Александровна, Москва

1. Federation of American Scientist Spesial weapons primer ttp://www.fas.org/nuke/intro/bw/agent.htm

2. Balaban N, Rasooly A. Staphylococcal enterotoxins. Int J Food Microbiol. 2000, Vol. 61(1), pp.1-10.

3. Efstratiou A, George RC. Microbiology and epidemiology of diphtheria. Rev Med Microbiol 1996, Vol! 7, pp. 31-42.

4. Sharma N.C., Banavaliker J.N., Ranjan R., Kumar R. Bacteriological & epidemiological characteristics of diphtheria cases in & around Delhi -a retrospective study. Indian J. Med. Res. 2007. V. 126, pp. 545-552.

5. Galazlca A.M., Robertson S.E., Oblapenko G.P. Resurgence of diphtheria. J. Epidemiol 1995. Vol. 11, pp. 95-105.

6. Holmes R.K. Biology and molecular epidemiology of diphtheria toxin and the tox gene. J. Infect. Diseases. 2000. Vol. 181 (Suppl. 1), pp. 56-67.

7. Pappenheimer A.M. Diphtheria toxin. Annu. Rev. Biochem. 1977. Vol. 46, pp. 69-94.

8. Choe S., Bennett M.J., Fujii G., Curmi P.M.G. The crystal structure of diphtheria toxin. Nature 1992. Vol. 357, pp. 216-222.

9. Engler K.H., Glushkevich Т., Mazurova I.K., George R.C. A modified Elek test for detection of toxigenic corynebacteria in the diagnostic laboratory. J. Clin. Microbiol. 1997. Vol. 35, pp. 495^198. .

10. Супотницкий M.B. Микроорганизмы, токсины и эпидемии. М.: Вузовская книга, 2000. С. 376.

11. Инструкция по применению эритроцитарного дифтерийного антительного диагностикума для определения токсина в РГНА.Утв. МЗ СССР от 17.12.1991 г.

12. Jalgaonkar S.V., Saoji A.M. Coagglutination for rapid testing of toxin producing Corynebacterium diphtheriae. Indian J. Med. Res. 1993. Vol. 97, pp. 35-36.

13. Toma S., Sisvath L., Iwanaga M. Reversed passive latex agglutination assay for detection of toxigenic Corynebacterium diphtheriae. J. Clin. Microbiol. 1997. Vol. 35. pp. 3147-3149.

14. Hallas G., Harrison T.G., Samuel D., Colman G. Detection of diphtheria toxin in culture supernates of Corynebacterium diphtheriae and C. ulcerans by immunoassay with monoclonal antibody. J. Med. Microbiol. 1990. Vol. 32, pp. 247-253.

15. Nielsen PB, Koch C, Friis H, Heron I, Prag J, Schmidt J. Double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for rapid detection of toxin-producing Corynebacterium diphtheriae. J. Clin. Microbiol. 1987. Vol. 25, pp. 1280-1284

16. Pietrzak J., Muehlestein S., Gasser M. Sandwich-dot immunobinding assay (Sandwich-DIA), a new immunological method for the detection of diphtheria toxin. Zbl. Bakt. 1990. Vol. 274, pp. 61-69.

17. Wreghitt T.G., Morgan-Capner P. ELISA in the clinical microbiology laboratory. Cambridge: Cambridge University Press, 1991. P. 312

18. Тиц Н.У. Энциклопедия клинических лабораторных тестов. М.: Лабинформ,Д997.С. 942.

19. Engler К.Н., Efstratiou A. Rapid enzyme immunoassay for determination of toxigenicity among clinical isolates of corynebacteria. J. Clin. Microbiol. 2000. Vol. 38, pp. 1385-1389.

20. Государственный реестр лекарственных средств. Том I (по состоянию на 1 января 2006, Часть 2. Приложения 1-4).

21. Свиридов В.В., Зайцев Е.М., Дельвиг А.А., Мазурова И.К., Семенов Б.Ф. // Мол. ген. микробиол. вирус. 1986. Т. 1. С. 30-35

22. Любавина И.А., Валякина Т.И., Гришин Е.В. Иммунохроматографический экспресс-анализ дифтерийного токсина с использованием моноклональных антител, меченных коллоидным золотом. Биорг. Хим. 2011, Том. 37(3), стр. 366-373.

23. Zhang RG, Scott DL, Westbrook ML, Nance S, Spangler BD, Shipley GG, Westbrook EM. The three-dimensional crystal structure of cholera toxin. J Mol Biol. 1995 Vol. 251(4), pp. 563-573.

24. Scarlatos A.,Welt B.A., Cooper B.Y., Archer D., Demarse Т., Chau K.V. Methods for detecting botulinum toxin with applicability to screening foods against biological terrorist attacks. 2005. J. Food Sci. Vol'. 70, pp. 121-130.

25. U.S. Food, Drug Administration. Rapid Methods for Detecting Foodborne Pathogens. Bacteriological Analytical Manual. 2001

26. European Food Safety Authority (EFSA). The EFSA J. 2007. Vol. 130, pp. 4352.

27. Kurazono H, Yamasaki S, Takeda Y. Detection of bacterial protein toxins by a bead-ELISA. Nippon Rinsho. 1995, Vol. 53(9); pp. 2296-2300.

28. Labib M, Hedstrom M, Amin M, Mattiasson B. A capacitive immunosensor for detection of cholera toxin. Anal Chirn Acta. 2009. Vol. 634(2), pp. 255-261.

29. Fisher MI, Tjarnhage T. Structure and activity of lipid membrane biosensor surfaces studied with atomic force microscopy and a resonant mirror. Biosens Bioelectron. 2000. Vol. 15(9-10), pp. 463-471.

30. Alfonta L, Willner I, Throckmorton DJ, Singh AK. Electrochemical and quartz crystal microbalance detection of the cholera toxin employing horseradishperoxidase and GMl-functionalized liposomes. Anal Chem. 2001 Vol: 73(21), pp. 5287-5295.

31. Liebau M, Hildebrand A, Neubert RH. Bioadhesion of supramolecular structures at supported planar bilayers as studied by the quartz crystal microbalance. Eur Biophys J. 2001. Vol. 30(1), pp. 42-52.

32. Ligler FS, Taitt CR, Shriver-Lake LC, Sapsford KE, Shubin Y, Golden JP Array biosensor for detection of toxins. Anal Bioanal Chem. 2003 Vol. 377(3), pp. 469-477.

33. Lônnroth I, Holmgren J. Subunit structure of cholera toxin. J Gen Microbiol. 1973. Vol. 76(2), pp. 417-427.

34. Fishman PH, Moss J, Osborne JC. Interaction of choleragen with' the oligosaccharide of ganglioside GM1: evidence for multiple oligosaccharide binding sites. Jr. Biochemistry. 1978. Vol 17(4), pp.711-716.

35. Chen H, Zheng Y, Jiang JH, Wu HL, Shen GL, Yu RQ. An ultrasensitive chemiluminescence biosensor for cholera toxin based on ganglioside-functionalized supported lipid membrane and liposome. Biosens Bioelectron. 2008. Vol. 24(4), pp.684-689.

36. Bunyakul N, Edwards KA, Promptmas C, Baeumner AJ Cholera toxin subuniti

37. B detection in microfluidic devices Anal Bioanal Chem. 2009. Vol. 393(1), pp. 177-186.

38. Inglesby T., Henderson D., Bartlett J. Anthrax as a biological weapon: medical and public health management. JAMA. 1999. Vol. 281, pp. 1735-1745.

39. Cieslak T., Eitzen E. Clinical and Epidemiologic Principles of Anthrax. Emerg Infect Dis. 1999. Vol. 5, pp. 552-555.

40. Bhatnagar R., Batra S. Anthrax toxin. Crit. Rev. Microbiol. 2001. Vol. 27, pp. 167-200.

41. Bradley K., Mogridge J., Mourez M., Collier R.J., Young J.A. Identification of the cellular receptor for anthrax toxin. Nature. 2001. Vol. 414, pp. 225-229.

42. Ahuja N., Kumar P., Bhatnagar R. Hydrophobic residues Phe552, Phe554, Ile562, Leu566, and Ile574 are required for oligomerization of anthrax protective antigen.Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. Vol. 287, pp. 542-549.

43. Lin C., Kao Y., Liu. W., Huang HH, Chen КС, Wang TM, Lin HC. Cytotoxic effects of anthrax lethal toxin on macrophage-like cell line j774a.l. Curr Microbiol. 1996. Vol. 33, pp. 224-227.

44. Pannifer A., Wong T., Schwarzenbacher' R.,. Renatus M;, Petosa C., Bienkowska J., Lacy D, Collier R, Park S.,. Leppla S., Hanna P., Liddington R. Crystal structure of the anthrax lethal factor. Nature. 2001. Vol; 414, pp. 229-233.

45. Farrar W. Anthrax: virulence and vaccines. Ann. Intern. Med. 1994. Vol. 121, pp. 379-380.

46. Turnbull P., Kramer J. Bacillus. In: Balows A., Hausler W.J.Jr., Herrmann K.L., et all. Manual of Clinical Microbiology, 5th ed. Washington, DC, American Society for Microbiology. 1991. pp. 296-303

47. Vignali D. A. Multiplexed particle-based flow cytometric assays. J.Immunol. Methods. 2000. Vol. 243, pp. 243-255.

48. Park HY, Go HY, Kalme S, Mane RS, Han SH, Yoon MY. Protective Antigen Detection Using Horizontally Stacked Hexagonal ZnO Platelets. Anal Chem. 2009. Vol. 81(11), pp. 4280-4284.

49. Tang S, Moayeri M, Chen Z, Harma H, Zhao J, Hu H, Purcell RH, Leppla SH, Hewlett IK Detection of anthrax toxin by an ultrasensitive immunoassay using europium nanoparticles. Clin Vaccine Immunol. 2009. Vol. 16(3), pp. 408-413.

50. Boyer AE, Quinn CP, Woolfitt AR, Pirkle JL, McWilliams LG, Stamey KL, Bagarozzi DA, Hart JC Jr, Barr JR. Detection and quantification of anthrax lethal factor in serum by mass spectrometry. Anal Chem. 2007. Vol. 79(22), pp. 84638470

51. Sidell FR, Takafuji ET, Franz DR, eds. Medical aspects of chemical and biological warfare. Washington, DC, Department of the Army, Office of The Surgeon General and Borden Institute, 1997.

52. Poli MA, Rivera VR, Hewetson JF, Merrill GA. Detection of ricin by colorimetric and chemiluminescence ELISA. Toxicon. 1994. Vol. 32(11), pp. 1371-1377.

53. Narang U, Anderson GP, Ligler FS, Burans J. Fiber optic-based biosensor for ricin. Biosens Bioelectron. 1997. Vol. 12(9-10), pp. 937-945.

54. Shyu RH, Shyu HF, Liu HW, Tang SS. Colloidal gold-based immunochromatographic assay for detection of ricin. Toxicon. 2002. Vol. 40(3), pp. 255-258.

55. Garber EA, O'Brien TW. Detection of ricin in food using electrochemiluminescence-based technology. J AOAC Int. 2008. Vol. 91(2), pp. 376-382.

56. Marvaud J.C., Raffestin S., Popoff M.R. Botulism: the agent, mode of action of the botulinum neurotoxins, forms of acquisition, treatment and prevention. C R Biol. 2002. Vol. 325(8), pp. 863-878.

57. Bossi P., Bricaire F. Botulism toxin, bioterrorist weapon. Presse Med. 2003. Vol. 32(10), pp. 463-465.

58. Oguma K., Fujinaga Y., Inoue K. Structure and function of Clostridium botulinum toxins. Microbiol Immunol. 1995. Vol. 39(3), pp. 161-168.

59. Simpson L.L. Identification of the major steps in botulinum toxin action. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2004. Vol. 44, pp. 167-193.

60. Dong M., Yeh F., Tepp W.H., Dean C., Johnson E.A., Janz R, Chapman ER. SV2 is the protein receptor for botulinum neurotoxin A. Science. 2006. Vol. 312(5773), pp. 592-596

61. Fischer A., Montal M. Single molecule detection of intermediates during botulinum neurotoxin translocation across membranes. Proc Natl Acad Sei USA. 2007. Vol. 104(25), pp. 10447-10452.

62. Deshpande S.S., Sheridan R.E., Adler M. A study of zinc-dependent metalloendopeptidase inhibitors as pharmacological antagonists in botulinum neurotoxin poisoning. Toxicon. 1995. Vol. 33(4), pp. 551-557.

63. Schiavo G., Rossetto O, Catsicas S, Polverino de Laureto P, DasGupta BR, Benfenati F, Montecucco C. Identification of the nerve terminal targets^ of botulinum neurotoxin serotypes A, D, and E. J Biol Chem. 1993. Vol. 268(32), pp. 23784-23787.

64. Chen F., Kuziemko G., Amersdorfer P., Wong C, Marks J, Stevens R. Antibody mapping to domains of botulinum neurotoxin serotype A in the complexed and uncomplexed forms. Infect Immun. 1997. Vol: 65(5), pp. 1626-1630.

65. Вертиев Ю.В. Супертоксические комплексы ботулинических токсинов. Журн. микробиол. эпидемиол. ижмунобиол. 1999. Том 5, с. 40-47.

66. Nordic Committee on Food Analysis. Botulinum toxin. Detection- in foods, blood and other test materials. Method no. 79, 2nd ed. Nordic Committee on Food Analysis, Espoo, Finland. 1991.

67. Solomon H. M., Lilly T. Clostridium botulinum. In R. I. Merker (ed.), Bacteriological analytical manual online, revision A. Center for Food Safety and Applied Nutrition, Food and Drug Administration, Md. 2001.

68. Smith L.D.S., Sugiyama H. Botulism. The organism, its toxins, the disease. Charles C. Thomas, Springfield, 111. 1988.

69. Liu W., Montana V., Chapman E., Mohideen U, Parpura V. Botulinum toxin type В micromechanosensor. Proc Natl Acad Sci USA. 2003. Vol. 100(23), pp. 13621-13625.

70. Ma EL, Zhou В., Kim Y., Janda K.D. A cyclic peptide-polymer probe for the detection of Clostridium botulinum neurotoxin serotype A. Toxicon. 2006. Vol. 47(8), pp. 901-908.

71. Centers for Disease Control. C. botulinum monovalent and polyvalent antitoxins. U.S. Department of Health, Education, and Welfare, CDC, Atlanta, Ga. 1987.

72. Capek P., Dickerson T. Sensing the Deadliest Toxin: Technologies for Botulinum Neurotoxin Detection. Toxins. 2010. Vol. 2, pp. 24-53.

73. Аббасова С.Г., Руденко H.B., Гороховатский А.Ю., Капралова М.В., Виноградова И.Д., Вертиев Ю.В., Несмеянов В.А., Гришин Е.В. Моноклоальные антитела к ботулиническим нейротоксинам А, В, Е и F. Биоорг.Хим. 2011. Том 37, №3, с. 344-353.

74. Sharma S.K., Whiting R.C. Methods for detection of Clostridium botulinum toxin in foods. J. Food Prot. 2005. Vol. 68, pp. 1256-1263:

75. Ekong T. Immunological detection of botulinum neurotoxins. Anaerobe. 2000. Vol. 6, pp. 125-127.

76. Ashton A.C., Crowther J.S., Dolly J.O. A sensitive and useful radioimmunoassay for neurotoxin and its haemagglutinin complex from Clostridium botulinum. Toxicon. 1985. Vol. 23, pp. 235-246.

77. Boroff D.A., Shu-Chen G. Radioimmunoassay for type A toxin of Clostridium botulinum. Appl. Microbiol. 1973. Vol. 25, pp. 545-549.

78. Ferreira J.L., Hamdy M.K., Zapatka F.A., Hebert. W.O. Immunodiffusion method for detection of type A Clostridium botulinum. Appl. Environ. Microbiol. 1981. Vol. 42, pp. 1057-1061.

79. Miller C.A., Anderson A.W. Rapid detection and quantitative estimation of type E botulinum toxin by electroimmunodiffusion. Infect. Immun. 1971. Vol. 4, pp. 126-129.

80. Johnson H. M., Brenner K., Angelotti R., Hall H.E. Serological studies of types A, B, and E botulinum toxins by passive hemagglutination and bentonite fluctuation. J. Bacteriol. 1966. Vol. 91, pp. 964-974.

81. Dezfulian M., Bartlett J.G. Detection of Clostridium botulinum type A toxin by enzyme-linked immunosorbent assay with antibodies produced in immunologically tolerant animals. J. Clin. Microbiol. 1984. Vol. 19, pp. 645-648.

82. Notermans S., Dufrenne J., M. van Schothorst. Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Clostridium botulinum toxin type A. Jpn. J. Med. Sei. Biol. 1978. Vol. 31, pp. 81-85.

83. Rodriguez A., Dezfulian M. Rapid identification of Clostridium botulinum and botulinal toxin in food. Folia Microbiol 1997. Vol. 42, pp. 149-151.

84. Potter M.D., Meng J., Kimsey P. An ELISA for detection of botulinal toxin types A, B, and E in inoculated food samples. J. Food Prot. 1993. Vol. 56, pp. 856-861.

85. Ferreira J.L., Crawford R. G. Detection of type A botulinal toxin-producing organisms subcultured from cheese using an amplified ELISA system. J. Rapid Methods Aut. Mic. 1998. Vol. 6, pp. 289-296.

86. Ferreira JL, Eliasberg SJ, Harrison MA, Edmonds P. Detection of preformed type A botulinal toxin in hash brown potatoes by using the mouse bioassay and a modified ELISA test. J. AOACInt. Vol. 84, pp. 1460-1464.

87. Ekong T.A.N., McLellan K., Sesardic D. Immunological detection of C.botulinum toxin type'A in therapeutic preparations. J.Immunol. Methods. 1995. Vol. 180, pp. 181-191.

88. Poli M.A., Rivera V.R., Neal D. Development of sensitive colorimetric capture ELISAs for Clostridium botulinum neurotoxin serotypes E and F. Toxicon. 2002. Vol. 40, pp. 797-802.

89. Szilagyi M., Rivera V.R., Neal D:, Merrill G.A., Poli M.A. Development of sensitive colorimetric capture ELISAs for Clostridium botulinum neurotoxin serotypes A and B. Toxicon. 2000. Vol. 38, pp. 381-389.

90. Ferreira JL, Eliasberg SJ, Edmonds P, Harrison MA. Comparison of the mouse bioassay and enzyme-linked immunosorbent assay procedures for the detection of type A botulinal toxin in food. J. Food Prot. 2004. Vol. 67, pp. 203-206.

91. Ferreira JL., Eliasberg SJ, Harrison MA, Edmonds P. Detection of preformed type A botulinal toxin in hash brown potatoes by using the mouse bioassay and a modified ELISA test. J. AO AC Int. 2001. Vol. 84, pp. 1460-1464.

92. Ferreira JL., Maslanka S., Johnson E., Goodnough M. Detection of botulinal neurotoxins A, B, E, and F by amplified enzyme-linked immunosorbent assay: collaborative study. J. AOACInt. 2003. Vol. 86, pp. 314-331.

93. Ferreira J.L., Crawford RG. Detection of type A botulinal toxin-producing organisms subcultured from cheese using* an amplified ELISA system. J. Rapid Methods Aut. Mic. 1998. Vol. 6, pp. 289-296.

94. Del Torre M., Stecchini M. L., Peck M. W. Investigation of the ability of proteolytic Clostridium botulinum to multiply and produce toxin in fresh Italian pasta. J. Food Prot. 1998. Vol. 61, pp. 988-993.

95. Cadieux B.,.Blanchfield B, Smith JP., Austin JW. A rapid chemiluminescent slot blot immunoassay for the detection and quantification of Clostridium botulinum neurotoxin type E, in cultures. Int. J: Food Microbiol. 2005. Vol. 101, pp. 9-16.

96. Guglielmo-Viret V., O. Attre'e, V. Blanco-Gros, P. Thullier. Comparison of electrochemiluminescence assay and' ELISA- for the detection of Clostridium botulinum type B neurotoxin. J. Immunol. Methods. 2005. Vol. 301, pp.' 164-172

97. Sharma S.K., Eblen B.S., Bull R.L., Burr D.H., Whiting R. C. Evaluation of lateral-flow Clostridium botulinum neurotoxin detection kits for food analysis. Appl. Environ. Microbiol. 2005. Vol. 71, pp. 3935-3941.

98. Ahn-Yoon S., De Cory T., Durst R.A. Ganglioside-liposome immunoassay for the detection of botulinum toxin. Anal. Bioanal. Chem. 2004. Vol. 378, pp. 68-75.

99. Hallis B., James B.A.F., Shone C.C. Development of novel assays for botulinum type A and B neurotoxins based on their endopeptidase activities. J. Clin. Microbiol. 1996. Vol. 34, pp. 1934-1938.

100. Schimdt J.J., Stafford R.G, Millard C.B. High-throughput assays for botulinum neurotoxin proteolytic activity: serotypes A, B, D, and F. Anal. Biochem. 2001. Vol. 296; pp. 130-137.

101. Ekong* T.A.N., Feavers I.M., Sesardic D. Recombinant SNAP-25 is an effective substrate for Clostridium botulinum type A toxin endopeptidase activity in vitro. Microbiology. 1997. Vol. 143, pp. 3337-3347.

102. Ekong T., Austin J.W., Smith J.P., Dufresne I., Brett M., Abstr. Interagency Botulism Res. Coord. Committee Meet., Orlando, Fla. 1999, p. 36.

103. Ferracci G., Miquelis R., Kozaki S., Seagar M., Leveque C. Synaptic vesicle chips to assay botulinum neurotoxins. Biochem. J. 2005. Vol. 391, pp. 659- 666.

104. Wictome M., Newton K.A., Jameson K., Dunnigan P., Clarke S., Gaze J., Tauk A., Foster K.A., Shone C.C. Development of in vitro assays for the detection of botulinum toxins in foods. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1999. Vol. 24, pp. 319-323.

105. Baird-Parker A.C. The staphylococci: An Introduction. J.Appl. bacterial Symp. Suppl. 1990. pp. 15-85.

106. Bergdoll M.S. Staphylococcal food poisoning. In Foodborne Diseases. D.O. Cliver (Ed.) Academic Press, Inc. San Diego, CA. 1990, pp. 86-106

107. Genigeorgis C.A. Present state of knowledge on staphylococcal intoxication. Int. J. Food Microbiol. 1989, Vol. 9, pp. 327-360.

108. Зёккони А., Кальвинхо JL, Фокс Jl. Инфицирование молочной железы коров стафилококком. Молочная промышленность. 2007, Том 2, с. 22-24.

109. YarwoodJ.M., Schlievert P.M. Toxin Production. Staphylococcus aureus Infection and Disease, edited by Honeyman A.L., Friedman H., Bendinelli M. Kluwer Academic/Plenum Publisher, New York, 2001, pp.- 93-115

110. Thomas D., Ghou S., Dauwalder O:, Lina G. Diversity in Staphylococcus aureus Enterotoxins In Marone G. Ed. Superantigens and superallergens. Chem. Immunol. Allergy Basel, Kargel. 2007, Vol. 93, pp. 24-41.

111. Александров B.H., Емельянов В.И. Отравляющие вещества: Учебное пособие. Москва: Воениздат, 1990, 271 с.132'Fraser J. Hight-affinity binding of staphylococcal enterotoxins A and В to HLA-DR. Nature 1989, Vol. 339, pp. 221-223.

112. Kappler J., Kotzin B., Herron L. Gelfand EW, Bigler RD, Boylston A, Carrel S, Posnett DN, Choi Y, Marrack P. Vp-specific stimulation of human T cells by staphylococcal toxins. Science. 1989, Vol. 244, pp. 811-813.

113. Marrack P., Kappler J. The staphylococcal Enterotoxins and Relatives. Science. 1990, Vol. 248, pp. 705-711.

114. Bavari S., Ulrich R. Staphilococcal enterotoxin A and toxic shock syndrome toxin compete with CD4 for human major histocompatibility complex class II biniding: Infect. Immun. 1995, Vol. 63(2), pp. 423-429:

115. Stiles B., Bavari^ S., Krakauer T., Ulrich R. Toxicity of staphylococcal enterotoxins potentiated^by lipopolysacharide: Major histocompatibility complex . class II molecule dependency and cytokine release. Infect. Immuni 1993; Vol. 61, pp. 5333-5338

116. Scheuber P., Denzlinger C., Wilker D., Beck G:, Keppler D., Hammer D. Cysteinyl leukotrienes as mediators ■ of staphylococcal enterotoxin B in a monkey. Eur. J. Clin. Invest. 1987, Vol;. 117, pp.455-459j

117. Notermans S., Boot R., Tatini S.R. Selection of monoclonal antibodies for detection of staphylococcal enterotoxin in heat processed foods. Int. J. Food Microbiol. 1987, Vol. 5, pp. 49-55

118. Evenson M.L., Hinds M.W., Bernstein R.S., Bergdoll M.S. Esmation of human dose of staphylococcal enterotoxins- A from a large outbreak ofstaphylococcal food poisoning involving chocolate milk. Int J Food Microbiol. 1988, Vol. 7, pp. 311-316.

119. Dangerfield H.G. Effects of enterotoxins after ingestion by humans. Presented at the 73rd Annual Meeting of the American Society for Microbiology. 1973, May 6-11, Miami Beach, FL.

120. Casman E.P., Bennett R.W. Culture medium for the production of staphylococcal enterotoxin A. J. Bacteriol. 1963. Vol. 86, pp: 18-23.

121. Casman EP, Bennett RW, Dorsey AE, Stone JE. The micro-slide gel double diffusion test for the detection and assay of staphylococcal enterotoxins. Health Lab Sci. 1969. Vol. 6(4), pp. 185-98.

122. Association of Official Analytical Chemists. Official- Methods of Analysis, 15th ed. AO AC, Gaithersburg, MD, 1990

123. Freed R.C., Evenson M.L., Reiser R.F., Bergdoll M.S. Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of staphylococcal enterotoxins in foods. Appl. Environ. Microbiol. 1982, Vol. 44, pp. 1349-1355

124. Kuo J.K.S., Silverman GJ. Application of enzyme-linked immunosorbent assay for detection of staphylococcal enterotoxins in> foods. J. Food Prot. 1980, Vol. 43, pp. 404-407

125. Notermans S., Veijans H.L., Bol J., Van Schothorst M. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for determination of St. aureus enterotoxin type B. Health Lab. Sci. 1978, Vol. 15, pp. 28-31

126. Stiffler-Rosenberg G., Fey H. Simple assay for staphylococcal enterotoxins A, B, and C: modification of enzyme-linked immunosorbent assay. J. Clin. Microbiol. 1978, Vol. 8, pp. 473-479

127. Chen SuiYi, Wong A.C.L. Current perspectives on detection of staphylococcal enterotoxins. J. Fd. Prot. 1997, Vol. 60, pp. 195-202

128. Bennett R.W., Matthews R.N. 1995. Evaluation of polyvalent ELISA's for the identification of staphylococcal enterotoxin in foods. AOAC International Abstracts 1995, Vol. 17-B-016.

129. Rasooly L, Noel R, Shah D; Rasooly A. In vitro assay of St. aureus enterotoxin activity in food. Appl. Environ. Microbiol. 1997, Vol. 63, pp. 2361-65

130. Anderson J.E., Beelman R.R., Doores S. Persistence of serological and biological activities of staphylococcal enterotoxin A in canned mushrooms. J. Fd. Prot. 1996, Vol. 59, pp. 1292-1299

131. Bennett R.W., Berry M.R., Jr. Serological reactivity and in vivo toxicity of St. aureus enterotoxins A and D in selected canned foods. J. Food Sei. 1987, Vol.-52, pp. 416-418.

132. Natesan M., Cooper M., Tran J., Rivera V., Poli M. Quantitative Detection of Staphylococcal Enterotoxin B by Resonant Acoustic Profiling Anal. Chem., 2009, Vol. 81 (10), pp 3896-3902

133. Boyle T, Njoroge JM, Jones RL Jr, Principato M. Detection of staphylococcal enterotoxin' B in milk and milk products using immunodiagnostic lateral flow devices. JAOACInt. 2010, Vol. 93(2), pp. 569-567

134. Yang M, Kostov Y, Bruck HA, Rasooly A. Gold nanoparticle-based enhanced chemiluminescence immunosensor for detection of Staphylococcal Enterotoxin B (SEB) in food. Int J Food Microbiol. 2009, Vol. 133(3), pp. 265-271'

135. Thurman EM, Aga DS. Detection of pesticides and pesticide metabolites using the cross reactivity of enzyme immunoassays./ AOAC Int. 2001, Vol. 84(1), pp. 162-167

136. Sadik OA, Van Emon JM. Applications of electrochemical immunosensors to environmental monitoring. Biosens Bioelectron. 1996, Vol. 11(8), i-xi.

137. Schneider RJ.Environmental immunoassays. Anal. Bioanal. Chem. 2003, Vol. l,pp. 44-46

138. Trucksess MW, Pohland AE. Methods and method evaluation for mycotoxins. Mol Biotechnol. 2002, Vol. 22(3), pp. 287-292

139. Abel AP, Weller MG, Duveneck GL, Ehrat M, Widmer HM. Fiber-optic evanescent wave biosensor for the detection of oligonucleotides. Anal Chem. 1996, Vol. 68(17), pp. 2905-2912

140. Plowman TE, Durstchi JD, Wang HK, Christensen DA, Herron JN, Reichert WM- Multiple-analyte fluoroimmunoassay using an integrated optical waveguide sensor. Anal Chem. 1999, Vol. 1;71(19), pp. 4344-4352

141. Brecht A. Multianalyte bioanalytical devices: scientific potential and business requirements. Anal Bioanal Chem. 2005, Vol. 381(5), pp. 1025-1026.

142. Taitt CR, Anderson GP, Ligler FS. Evanescent wave fluorescence biosensors. Biosens Bioelectron. 2005, Vol. 120(12), pp. 2470-2487

143. Silzel JW, Cercek B, Dodson C, Tsay T, Obremski RJ. Mass-sensing, multianalyte microarray immunoassay with imaging detection: Clin Chem. 1998, Vol. 44(9), pp. 2036-2043

144. Wadkins RM, Golden JP; Pritsiolas LM, Ligler FS. Detection of multiple toxic agents using a planar array immunosensor. Biosens Bioelectron. 1998, Vol. 13(3-4), pp. 407-415

145. Plowman TE, Durstchi JD; Wang HK, Christensen DA, Herron JN, Reichert WM. Multiple-analyte fluoroimmunoassay using an integrated optical waveguide sensor. Anal Chem. 1999, Vol. 71(19), pp. 4344-4352

146. Rowe CA, Tender LM, Feldstein MJ, Golden JP, Scruggs SB, MacCraith BD, Cras JJ, Ligler FS. Array biosensor for simultaneous identification of bacterial, viral, and protein analytes. Anal Chem. 1999, Vol. 71(17), pp. 3846-3852

147. Bernard A, Michel B, Delamarche E. Micromosaic immunoassays. Anal Chem. 2001, Vol. 73(1), pp. 8-12

148. Taitt CR, Anderson GP, Lingerfelt BM, Feldstein MJ, Ligler FS. Nine-analyte detection using an array-based biosensor. Anal Chem. 2002, Vol. 74(23), pp. 61146120

149. Rowe CA, Scruggs SB, Feldstein MJ, Golden JP, Ligler FS. An array immunosensor for simultaneous detection of clinical analytes. Anal Chem. 1999, 15, Vol. 71(2), pp. 433-439. Erratum in: Anal Chem. 2003, Vol. 75(5), pp. 1225

150. Sapsford KE, Charles PT, Patterson CH Jr, Ligler FS. Demonstration of four immunoassay formats using the array biosensor. Anal Chem. 2002, Vol. 74(5), pp. 1061-1068

151. Rowe-Taitt CA, Golden JP, Feldstein MJ, Cras JJ, Hoffman KE, Ligler FS. Array biosensor for detection of biohazards. Biosens Bioelectron. 2000, Vol. 14(10-11), pp. 785-794

152. Rubina A.Yu., Dyukova V.I., Dementieva E.I., Stomakhin A.A., Nesmeyanov V.A., Grishin E.V., Zasedatelev A.S. Quantitative immunoassay of biotoxins on hydrogel-based protein microchips. Anal. Biochem. 2005,' Vol. 340- pp. 317-329;

153. Rogers KR, Valdes JJ, Eldefrawi ME. Acetylcholine receptor fiber-optic, evanescent fluoroscnsor. Anal Biochem. 1989, Vol. 182(2), pp. 353-359

154. Song X, Swanson BI. Direct, ultrasensitive, and selective optical detection of protein toxins using multivalent interactions. Anal Chem: J999j> Vol. 71(11), pp. 2097-2107 ' '

155. Villatte F, Schulze: H, Schmid RD, Bachmann TT. A disposable acetylcholinesterase-based electrode biosensor to detect anatoxin-a(s) in water. Anal BioanalChem. 2002, Vol. 372(2), pp. 322-326

156. Peng T, Cheng Q, Stevens RC. Amperometric detection of Escherichiaxoli heat-labile enterotoxin by redox diacetylenic vesicles on a sol-gel thin-film electrode. Anal Chem. 2000, Vol. 72(7), pp. 1611-1617

157. Stenger DA, Gross GW, Keefer EW, Shaffer KM, Andreadis JD, Ma W, Pancrazio JJ. Detection of physiologically active compounds using cell-based biosensors. Trends Biotechnol. 2001, Vol. 19(8), pp. 304-309

158. Fisher MI, Tjarnhage T. Structure and activity of lipid membrane biosensor surfaces studied with atomic force microscopy and a resonant mirror. Biosens Bioelectron. 2000, Vol. 15(9-10), pp. 463-471

159. Alfonta L, Willner I, Throckmorton DJ, Singh AK. Electrochemical and quartz crystal microbalance detection of the cholera toxin employing horseradish peroxidase and GMl-functionalized liposomes. Anal Chem. 2001, Vol. 73(21), pp. 5287-5295

160. Liebau M, Hildebrand A, Neubert RH. Bioadhesion of supramolecular structures at supported planar bilayers as studied by the quartz crystal microbalance. Eur Biophys J. 2001, Vol. 30(1), pp. 42-52

161. Singh AK, Harrison SH, Schoeniger JS. Gangliosides as receptors for biological toxins: development of sensitive fluoroimmunoassays using ganglioside-bearing liposomes. Anal Chem. 2000, Vol'. 72(24), pp. 6019-6024

162. Vabulas R, Bittlingmaier R, Heeg K, Wagner H, Miethke T. Rapid clearance of the bacterial superantigen staphylococcal enterotoxin B in vivo. Infect Immun.1996, Vol. 64(11), pp. 4567-4573

163. Humphreys H, Keane CT, Hone R, Pomeroy H, Russell RJ, Arbuthnott JP, Coleman DC. Enterotoxin production by Staphylococcus aureus isolates from cases of septicaemia and fromhealthy carriers. J Med Microbiol. 1989, Vol. 28(3), pp. 163-172

164. Soto A, Saldias ME, Oviedo P, Fernandez M. Prevalence of Staphylococcus aureus among food handlers from a metropolitan university in Chile. Rev Med Chil. 1996, Vol. 124(9), pp. 1142-1146

165. Ulrich RG, Sidell S, Taylor TJ. Staphylococcal enterotoxin B and related pyrogenic toxins. In, Medical Aspects of Chemical and Biological Warfare. Chapter 31, Falls Church, VA, Office of Surgeon General, Dept of the Army,1997, pp. 621-630.

166. Tempelman LA, King KD, Anderson GP, Ligler FS. Quantitating staphylococcal enterotoxin B in diverse media using a portable fiber-optic biosensor. Anal Biochem. 1996, Vol. 233(1), pp. 50-57

167. Rucker VC, Havenstrite KL, Herr AE. Antibody microarrays for native toxin detection. Anal Biochem. 2005 Vol. 339(2), pp. 262-270.

168. Sapsford KE, Taitt CR, Loo N, Ligler FS. Biosensor Detection of Botulinum Toxoid A and Staphylococcal Enterotoxin B in Food. Appl. Envir. Microbiol. 2005, Vol. 71(9), pp. 5590-5592

169. Rowe CA, Tender LM, Feldstein MJ, Golden JP, Scruggs SB, MacCraith BD, Cras JJ, Ligler FS. Array biosensor for simultaneous identification of bacterial, viral, and protein analytes. Anal Chem■ 1999, Vol. 71(17), pp. 3846-3852

170. Panneerseelan L, Muriana PM. An immunomagnetic PCR signal amplification assay for sensitive detection of Staphylococcus aureus enterotoxins in foods. J Food Prot. 2009, Vol. 72(12), pp. 2538-2546

171. Lian W, Wu D, Lim DV, Jin S. Sensitive detection of multiplex toxins using antibody microarray. Anal Biochem. 2010 Jun 15, Vol. 401(2), pp. 271-279.

172. Shriver-Lake L, Shubin Y, Ligler F. Detection of staphylococcal enterotoxin B in spiked food samples. J Food Prot. 2003, Vol. 66(10), pp. 1851-1856

173. Livshits M.A., Mirzabekov A.D. Theoretical analysis of the kinetics of DNA hybridization with gel-immobilized oligonucleotides. Biophys. J. 1996, Vol. 71, pp. 2795-2801

174. Kramer S., Joos T.O., Templin M.F. Protein microarrays. Curr Protoc Protein Sei. 2005, Vol. 23, pp. 23-25.

175. Gamby J., Abid J.P, Tribollet B:, Girault H.H. Nanomosaic Network for the Detection of Proteins Without Direct Electrical Contact. Small 2008, Vol. 4(6), pp. 802-809.

176. Mitchell P. A perspective on protein microarrays. Nature Biotechnology. 2002, Vol. 20, pp. 225-229.

177. Templin MF, Stoll D, Schrenk M, Traub PC, Vohringer CF, Joos TO. Protein microarray technology. TRENDS in Biotechnology. 2002, Vol. 20, pp. 160-166.

178. MacBeath G. Protein microarrays and proteomics. Nature genetics supplement. 2002, Vol. 32, pp. 526-532.

179. Lai S.P., Cristopherson R.I., dos Remedios S.G. Antibody arrays: an embryonic but rapidly growing technology. Drug Discovery Today. 2002, Vol. 7, pp. 143-149.

180. Abbot A. Betting on tomorrow's chips. Nature. 2002, Vol. 415, pp. 112-114.

181. Mirzabekov A. D., Alexander Kolchinsky. Emerging array-based technologies in proteomics. Current Opinion in Chemical Biology. 2001, Vol. 6, pp. 70-75.

182. Rubina AY, Kolchinsky A, Makarov AA, Zasedatelev AS.,. Why 3-D? Gel-based microarrays in proteomics. Proteomics. Feb 2008; Vol. 8(4), pp.4 817-831.

183. Angenendt P, Glokler J, Murphy D, Lehrach H, Cahill D.J.,. Toward optimized microarrays: a comparison of current microarray support material. Anal. Biochem. 2002, Vol. 309, pp. 253-260.

184. Service R.F. Searching for Recipes for protein chips. Science. 2001, Vol. 294, pp. 2080-2082.

185. Beier M, Hoheisel J.D. Versatile derivatization of solid support media for covalent bonding on DNA-microchips. Nucleic Acids Res. 1999, Vol. 27, pp. 1970-1977

186. Kodadek Т. Protein microarrays: prospects and problems. Chemistry & Biology. 2001, Vol. 8, pp. 105-115.

187. Uetz P, Giot L, Cadney G, Mansfield ТА, Judson RS, Knight JR, Lockshon D, Narayan V, Srinivasan M, Pochart P. A comprehensive analysis of protein-protein interactions in Saccharomyces serevisiae. Nature. 2000, Vol. 403, pp. 623-627.

188. Heng Zhu, Klemic JF, Chang S, Berton P, Casamayor A, Klemic KG, Smith D, Gerstein M, Reed MA, Snyder M. Analysis of yeast protein kinases using protein chips. Nat Genet. 2000, Vol. 26, pp. 283-289.

189. Moreno-Bondi M. C., Alarie J. P., Vo-Dinh Т. Multi-analyte analysis system using an antibody-based biochip. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2002 Vol. 375(1), pp. 120-124.

190. Haab B.B., Duhman M.J., Brown P.O. Protein microarrays for highly parallel detection and quantitation of specific protein and antibodies in complex solutions. Genom Biology. 2001, Vol. 2(2), pp. research0004.1-0004*. 13

191. Wiesner A. Detection of tumor markers with ProteinChip technology. Curr Pharm Biotechnol. 2004, Vol. 5(1), pp. 45-67.

192. Heyries KA, Loughran MG, Hoffmann D, Homsy A, Blum LJ, Marquette CA. Microfluidic biochip for chemiluminescent detection of allergen-specific antibodies. Biosens Bioelectron. 2008, Vol. 23(12), pp. 1812-1818

193. Harwanegg C, Hutter S, Hiller R. Allergen microarrays for the diagnosis of specific IgE against components of cow's milk and hen's egg in a multiplex biochip-based immunoassay. Methods MolBiol. 2007, Vol. 385, pp. 145-157.

194. Man A, Alessandri C, Bernardi ML, Ferrara R, Scala E, Zennaro D. Micro arrayed allergen molecules for the diagnosis of allergic diseases. Curr Allergy Asthma Rep. 2010, 10(5): 357-364.

195. Avseenko NV, Morozova TY, Ataullakhanov FI, Morozov VN. Immunoassay with multicomponent protein microarrays fabricated by electrospray deposition. Anal Chem. 2002, Vol. 74, 5, pp. 927-933.

196. Chen CS, Zhu H. Protein microarrays. Biotechniques. 2006, Vol. 40(4), pp. 423, 425, 427.

197. Kingsmore S.F. Multiplexed protein measurement: technologies and applications of protein and antibody arrays. Nat Rev Drug Discov. 2006, Vol. 5, 4, pp. 310-320.

198. Elam JH, Nygren H, Stenberg- M. Covalent coupling of polysaccharides to silicon and silicon rubber surfaces. JBiomed Mater Res. 1984, Vol. 18(8), pp. 953959

199. Mansur HS, Orefice RL, Vasconcelos WL, Lobato ZP, Machado LJ. Biomaterial with chemically engineered surface for protein immobilization. J Mater Sci Mater Med. 2005, Vol. 16(4), pp. 333-340.

200. Angenendt P. Progress in protein and antibody microarray technology. Drug Discov Today. 2005, Vol. 10(7), pp. 503-511.

201. Brockman A, Orlando R. New immobilization chemistry for probe affinity mass spectrometry. Rapid. Commun. Mass Spectrum. 1996, Vol. 10, pp. 1688-92.

202. Frei E, Levy A, Gowland P, Noll M. Efficient transfer of small DNA fragments from Polyacrylamide gels to diazo or nitrocellulose paper and hybridization. Methods Enzymol. 1983, Vol. 100; pp. 309-326.

203. Alwine JC, Kemp'DJ, Stark GR. Method for detection of specific RNAs in agarose gels by transfer to diazobenzyloxymethyl-paper and hybridization with DNA probes. Proc Natl Acad Sei USA. 1977, Vol. 74(12), pp. 5350-5354.

204. Scott JE, Hughes EW, Shuttleworth A. An 'affinity.' method for preparing polypeptides enriched in the collagen-associated Ehrlich chromogen. J Biochem (Tokyo). 1983, Vol. 93(3), pp. 921-925.

205. Matsuura K, Akasaka T, Hibino M, Kobayashi K. Facile synthesis of stable and lectin-recognizable DNA-carbohydrate conjugates via , diazo coupling. Bioconjug Chem. 2000, Vol. 11(2), pp. 202-211.

206. Hermanson G.T. Bioconjugate Techniques. Acad. Press: San Diego. 1996

207. Falsey JR, Renil M, Park S, Li S, Lam KS. Peptide and small molecule microarray for high throughput cell adhesion* and' functional assays. Bioconjug Chem. 2001, Vol. 12(3), pp. 346-353.

208. Zhang G, Zhou Y, Wu X, Yuan J, Ren S. Covalent attachment of DNA to glass supports using a new silane coupling agent and chemiluminescent detection. J Tongji Med Univ. 2000, Vol. 20(2), pp. 89-91.

209. Хохлова ТД, Гаркавенко JIT, Никитин ЮС. Адсорбция белков и ДНК на дегидроксилированных и алюминированных силохромах. Прикл. Биохим. Микробиол. 1991, Т. 27(5), стр. 720-724.

210. Lueking A., Horn М., Eickhov Н., Bussow К., Lehrach Н., Walter G. Protein microarrays for gene expression and antibody screening. Anal. Biochem. 1999, Vol. 270; pp. 103-111.

211. Macbeth G., Schreiber S.L. Printing proteins as microarrays for high-throughput function determination. Science. 2000, Vol. 289, pp. 1760-1763.

212. Newman J.D., Turner A.P.F.,. Ink-jet printing for the fabrication of amperometric glucose biosensors. Anal. Chim. Acta. 1992, Vol. 262, pp. 13-17.

213. Blanchard A.P., Kaiser R.J., Hood L.E. High-density oligonucleotide arrays. Biosensors&Bioelectronics. 1996, Vol. 11, pp. 687-690.

214. Moerman R., Frank J., Marijnissen J.C.M., van Dedem G.W.K. Picoliter dispensing in wells of a micro-array by means of electrospraying. Journal of Aerosol Science. 1999, Vol. 30, pp. 551-552.

215. Moerman R, Frank J, Marijnissen J, Schalkhammer T., van Dedem G.W.K. Miniaturized electrospraying as a technique for the production of reproducible micrometer-sized protein spots. Anal Chem. 2001, Vol. 73, pp. 2183-2189.

216. Morozov V.N., Morozova T.Ya. Electrospray deposition as a method for mass fabrication of mono- and multi-component microarrays of biological and biologically active substance. Anal. Chem. 1999, Vol. 71, pp. 3110-3117

217. Lahiri J., Ostuni E., Whitesides G.M. Patterning ligands on reactive SAMs microcontact printing. Langmuir. 1999, Vol. 15, pp. 2055-2060.

218. Arenkov P., A. Kukhtin, A. Gemmel, S. Voloshchuk, V. Chupeeva, A. Mirzabekov. Protein microchips: use for immunoassay and enzymatic reactions. Analytical Biochemistry. 2000, Vol. 278, pp. 123-131.

219. Rubina A, Pan'kov SV, Ivanov SM, Dement'eva EI, Mirzabekov AD. Protein microchips. Dokl Biochem Biophys. 2001, Vol. 381, pp. 419-422.

220. Мирзабеков А.Д., Рубина А.Ю., Паньков С.В., Чернов Б.К. Способ иммобилизации олигонуклеотидов, содержащих непредельные группы, в полимерных гелях при формировании микрочипа. Патент N 2175972. 20 Ноябрь 2001, Т. Б.И. 2001, N 25.

221. Мирзабеков А. Д., Рубина А.Ю., Паньков С.В. Способ полимеризационной иммобилизации биологических макромолекул и композиция для его осуществления. Патент РФ № 2216547, дата приоритета 16.10.2001.

222. Vasiliskov A., Timofeev E.N., Surzhikov S.A., Drobyshev A.L., Shick V.V., Mirzabekov A.D. Fabrication of microarray of gel-ommobilized compounds on a chip by co-polymerization. BioTechniques. 1999, Vol. 27, pp. 592-606.

223. Drobyshev A., Mologina N., Shick V., Pobedimskaya D., Yershov G., Mirzabekov A. Sequence analysis by hybridization with oligonucleotide microchip: identification of beta-thalassemia mutations. Gene. 1997, Vol. 188, pp. 45-52

224. Dubiley S., Kirillov Eu., Mirzabekov A. Polymorphism analysis and gene detection by minisequencing on an array of gel-immobilized primers. Nucl. Acids Res. 1999, Vol. 27(18), p. 27

225. Tillib S., Strizhkov В., Mirzabekov A. Integration of multiple PCR amplification and DNA mutation analyses by using oligonucleotide microchip. Analyt. Biochem. 2001, Vol. 292, pp. 155-160.

226. Krylov AS, Zasedateleva OA, Prokopenko DV, Rouviere-Yaniv J, Mirzabekov AD. Massive parallel analysis of the binding specificity of HU protein with ss and ds DNA on generic oligonucleotide microchips. Nucl. Acids Res. 2001, Vol. 29, pp. 2654-2660.

227. Timofeev E., Mirzabekov A. Binding specificity and stability of duplexes formed by modified oligonucleotides with a 4,096-hexanucleotide microarray. Nucl. Acids Res. 2000, Vol. 29(12), pp. 2626-2634

228. Nasedkina T., Domer P., Zharinov V., Hoberg J., Lysov Yu., Mirzabekov A. Identification of chromosomal translocation in leukemias by hybridization with oligonucleotide microarrays. Haematologica. 2002, Vol. 87(4), pp. 363-372

229. Dyukova V.I., Dementieva E.I., Zubtsov D.A., Galanina O.E., Bovin N.V., Rubina A.Yu. Hydrogel glycan microarrays. Anal. Biochem. 2005, Vol. 347, pp. 94-105.

230. Barsky V., Perov A., Tokalov S., Chudinov A., Kreindlin E., Sharonov A., Kotova E., Mirzabekov A. Fluorescence data analysis on gel-based biochips. J. Biomol., Screening. 2002, Vol. 7, pp. 247-257.

231. Rasooly L, Rose NR, Shah DB, Rasooly A. In vitro assay of Staphylococcus aureus enterotoxin A activity in food. Appl Environ Microbiol. 1991, Vol. 63(6), pp. 2361-2365.

232. Chen LJ, Liu ZS, Dong BQ, Yang K, Li Q, Jin BQ. Establishment of chemiluminescence immunoassay for detecting Staphylococcal enterotoxin В and С1. Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi. 2006, Vol. 22(5), pp. 668-669.

233. Аббасова С.Г., Руденко H.B., Гороховатский А.Ю., Капралова М.В., Виноградова И.Д., Вертиев Ю.В., Несмеянов В.А., Гришин Е.В.

234. Моноклоальные антитела к ботулиническим нейротоксинам А, В, Е и F. Биоогр. Хим. 2011, Т. 37, №3, стр. 344-353.

235. Bacarese-Hamilton Т., Mezzasoma L., Ardizzoni A.,. Bistoni F, Crisanti A., Serodiagnosis of infectious diseases with antigen microarrays, J. Appl. Microbiol. 2004, Vol. 96, pp. 10-17.

236. Derzelle S, Dilasser F, Duquenne M, Deperrois V. Differential temporal expression of the staphylococcal enterotoxins genes during cell growth. Food Microbiol. 2009, Vol. 26(8), pp. 896-904.

237. Le Louir Y., Baron F., Gautier M. Staphylococcus aureus and food poisoning. Genet. Mol. Res. 2003, Vol. 2, pp. 63-76.

238. Bunning V.K., Lindsay J.A., Archer D.L. Chronic health effects of microbial foodborne disease. World Health Stat. Q. 1997. Vol. 50, pp. 51-56.

239. Breuer K., Wittmann M., Bosche В., Kapp A., Werfel T. Severe atopic dermatitis is associated with sensitization to staphylococcal enterotoxin В (SEB). Allergy 2000. Vol. 55, pp. 551-555.

240. Herz U., Bunikowski R., Mielke M., Renz H. Contribution of bacterial superantigens to atopic dermatitis. Int. Arch. Allergy Immunol. 1999. Vol. 118, pp. 240-241.

241. Jarraud S., Cozon G., Vandenesch F., Bes M., Etienne J-., Lina G. Involvement of enterotoxin G and I in staphylococcal toxic shock syndrome and staphylococcal scarlet fever. J. Clin. Microbiol 1999. Vol. 37, pp. 2446-2449.

242. Mitchel D., Levitt D.G., Schlievert P.M., Ohlendorf D.H. Structural evidence for the evolution of pyrogenic toxin superantigens. J.Mol. Evol. 2000, Vol. 51, pp. 520-531.

243. Poli M.A., Rivera V.R., Neal D. Sensitive and specific colorimetric ELISAs for Staphylococcus aureus enterotoxins A and B in urine and buffer. Toxicon. 2002, Vol. 40, pp. 1723-1726.

244. Fey H, Pfister H, Riiegg O. Comparative evaluation of different enzyme-linked immunosorbent assay systems for the detection of staphylococcal enterotoxins A, B, C, and D. J Clin Microbiol. 1984, Vol. 19(1), pp. 34-38.

245. Stiffler-Rosenberg G., Fey H. Simple assay for staphylococcal enterotoxins A, B, and C: modification of enzyme-linked immunosorbent assay. J. Clin. Microbiol. 1978, Vol. 8, pp. 473-479.

Информация о работе

Филиппова, Марина Александровна
кандидата химических наук
Москва, 2011
ВАК 03.01.03

Диссертация

Одновременный количественный анализ бактериальных и растительных биотоксинов на гидрогелевых микрочипах - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы