Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Новый ген семейства ион-транспортирущих АТФаз

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Новый ген семейства ион-транспортирущих АТФаз"

" й О э В '

АКАДЕМИЯ НАУК СССР ИНСТИТУТ БИООРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ ИМ. Н.М. ШЕМЯКИНА

на правах рукописи

Свердлов Владимир Евгеньевич

УДК 677.361*3:577.112.6

Новый ген семейства ион-транспортирувдих АТФаз

Специальность 03.00.03. Молекулярная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 1991

Работа выполнена в Ордена Трудового Красного Знамени

Институте Оиоорганической химии им. М.М. Шемякина АН ССОР

»

Научный руководитель: доктор химических наук Модянов H.H. Официальные оппоненты:

член-корреспондент АН СССР Антонов В.К. доктор биологических наук Рубцов П.Н. Ведущая организация: Институт общей генетики АН СССР

защита состоится Iе! bUOns в ^ часов

на заседании специализированного совета Д 002.35.01 при Институте биоорганической химии им. М.М. Шемякина АН СССР rio адресу: II787I, ГСП-7, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая 16/10.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института Оиоорганической химии им. М.М. Шемякина АН СССР

Автореферат разослан "/•)-" 1991г.

Ученый секретарь Специализированного совета, кандидат химических наук

В.А. Несмеянов

ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

-¡Актуальность проблемы. Выяснение молекулярных основ

■Цп Л I

Функционирования систем . активного транспорта веществ через меточные мембраны является одной из фундаментальных задач ;овременной молекулярной биологии. Центральная роль в энергозависимом переносе • ионов против градиента их электрохимического потенциала через клеточную мембрану принадлежит юннйм АТФазам различной специфичности. Эти ферменты образуют

Золыпое семейство, куда входят На+, н+,к+-, Са+-, и некоторые

{

другие АТФазы. Одним из наиболее изученных ионных насосов является Яа,К-АТФаза. ?

Этот ферментобнаруженный в плазматической мембране практически всех животных клеток, вносит существенный вклад в поддержание ионного и осмотического гомеосгаза внутриклеточной среды, создание электрохимического потенциала на мембране, необходимого как для осуществления активного транспорта, так и для проведения потенциала действия. Молекула фермента состоит из двух субъединиц-каталитической а и гликозилировонной р с неизвестной функцией. Наиболее близка к На.к-АГФазэ по своей структурнрй организации и функциональным свойствам Н,К-АТФаза слизистой желудка.

В настоящее время известно, что в геноме человека существует семейство генов, кодирующих каталитические субъединицы АТФаз, относящихся к этой группе. Было показано, что три гена кодируют изоформн о-субьедишцы на.к-АТФазн (а1, а2, и аЗ),. один ген кодирует кптзлитичяпкую субъединицу Н.К-АТФазы. Эти генн блипки по структурной организации и имеют примерно равную длину. Функционален!* отятуо другнг двух генов, обозначенных как АТР1АЫ и ЛТР1Л1)2 "то огтпптся неизвестным. В связи с этим изучение

I

структуры и функции этих генов является актуальной задачей предоставляет возможности обнаружения как новых изофс Ка.К-АТФазц, так и АТФаз другой специфичности.

Цель работы. Настоящая работа является частью комплекснс структурно-функционального исследования систем активнс транспорта через биологические мембраны, проводимого в Инстит5 биоорганической химии им. М.М. Шемякина АН СССР. Целью.работы бь клонирование, картирование и частичная характеризация ге АТР1АЫ. В связи с этим в данной работе были поставлены следукж задачи:

1 Поиск в человеческом геномном банке серии перекрывающга клонов, охватывающих собой целый ген.

2 Рестриктное и гибридизационное картирование этих клонов.

3 Анализ' экспресии гена АТР1АЫ на уровне мГНК.

Научная новизна и практическая ценность работы. В результе проделанной работы в человеческом геномном банке была найде серия перекрывающихся клонов, охватывающих собой весь исследуо^ ген, составлена рестриктная карта участка 13 хромосомы размером тыс. п.о. Показана экспрессия гена на уровне мРНК в мозге и почк человека. Определена нуклеотидная последовательность части экзон и экзон-интронных границ. Проведено сравнение имеющей нуклеотидной и выведенной из ноп амшюкиолотн последовательностей данного гена с известными изоформами субъединиц на,К- и н,К-АТФаз. В результате показано, что семейст генов Иа,К- и н.К-АТФаз может быть разбито на три подгрупп

которые состоят из генов, кодирующих каталитические субъвдини

>

Нл.к-АТФаз, гена, кодирующего каталитическую сутшдшшпу ц,к-А1Ф И гвна АТР1А1Л •

Зъем работы. Диссертационная работа изложена на страницах лнописного текста и состоит из введения, обзора литературы, уждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка лруемой литературы ( ссылок).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ I ПОИСК И КАРТИРОВАНИЕ ГЕНА АТР1А1Л

/

встоящая работа проводилась после того, как в нашем институте а' установлена полная первичная структура кДНК а-субъединицы К-АТФазы почек свиньи, фрагменты которой использовались в эстве гибридизационных проб для картирования гена. При ридизации банка геномной ДНК человека с ДНК-зондами ,на К-АТФазу почек свиньи было найдено несколько клонов, являющихся гментами родственных генов. В нашей работе мы исследовали уктуру и транскрипционную активность одного из этих генов, гмент которого был найден в человеческом геномном банке в виде ового клона А^из.2• Его рестриктная карта и фрагмент нокислотной последовательности;., кодируемой одним его экзоном ведены на рис.1. При сравнении рестриктной карты и нокислотной 'последовательности с .соответствующими ледователностями известных изоформ АТФаз, принадлежащих к тому семейству видно, что фаг зиз.2 является фрагментом нового гена, дальнейшем этот ген оказался идентичным гену атр1а1л, тированным на 13 хромосома человека (Уапн-Репв еъ а1.198э).

J.2

9

эк30н al vtlsltakrmakkhclvknleavetlgstsiicsdktgtlitqhrmtvahlwfdnq

ai -C-T-------R------------------T------------------M-----

az -c-T-------R------------------т------------------м-----

аз -c-tv------r------------------т------------------м-----

hk -c-------l-s—v--------------v----------------s------h

РИС1 Рестриктная карта фага Хзн 3.2. Отмечен фрагмент, содержащий 9 экзон, Ниже приведена аминокислотная последовательность, кодируемая 9. экзоном в сравнении с соответствующими последовательностями каталитических субъединиц На,к~ и Н,К-ЛТФэп.

I.I ПРОВЕДЕНИЕ "ПРОГУЛОК ПО ХРОМОСОМЕ" С целью картирования целого гена нами была осуществлена серия последовательных скринингов геномных человеческих банков, общая стратегия которых описывается термином "хромосомный волкинг" или "прогулка по хромосоме". Геномные банки были получены в нашей лаборатории A.B. Гришиным и М.Ю. Орловой.

Методология "прогулок по хромосоме" заключается к последовательных скринингах банков на наиболее в данный момент удаленные' фрагменты из раскартировошшх ранее клонов. Поскольку изначально но была известна ориентация гена относительно фагового клона, "прогулка по хромосоме" проводилась одновременно п orte

4

и.

Рис 2. Рестршстная корта участка генома, кодируящая »тмь«. Внизу показана соответствующая карта, опубликованная Лингрелом. Фрпгмянтн клопов, используем)!'; в качестве зондов для '.чсринингов бгткон отмечены толстой линией.

стороны. Так, на фрагмент "I" из ДНК фага SW3.2 были найдены клон sw13-2 и SW5-1 (рис2); на фрагмент "2" из ДНК фага SW13-2 был найдены клоны- swn и SW9; на фрагмент ДНК фага SW3.2 непосредственно прилегающий к 9 экзону был найден фаг SW21; н фрагмент "3" из ДНК этого фага были найдены клоны SW34, swze swn-i и на фрагмент "4", содержащий О.бтыс.п.о., содержащий 2 ЭКЗОН бЫЛИ найдены КЛОНЫ SW36, SW49, SW14 И SW39-

Таким образом в результате серии последовательных шаге "волкинга" были найдены и раскартированы 12 перекрываюкшхе фаговых клонов, которые охватывали участок xpoMocoN протяженностью 66 тыс.п. о. При этом оказалось, что исхода фаговый клон, \sw3.2 был перестроен в процессе конструирована банка ва фрагменте 4,6 тыс.п.о., после 9 экзона, и следовательнс его рестриктная карта не полностью отражает рестриктную карч самого гена ATP1AL1 • Однако скрининги других банков, полученш позднее, позволили составить правильную рестриктную карту reí ATP1AL1 •

1.2 АНАЛИЗ РЕСТРИКГНОИ КАРТЫ ГЕНА atp1al1 Таким образом, в результате серии скринингов было найдено : перекрывающихся клонов, которые охватывают участок хромосо! протяженностью около 65ьь- Все эти клоны были раскартированы i двум рестриктазам - eooRI и Hindlli- Большое количество найдена независимых клонов гарантирует правильность картирования позволяет избежать ошибок, которые могут возникнуть в с луч попадания артефактных клонов. Гибридизационный анализ этих клон с пробами из кДНК а- субъединицы позволил установить примерн границы гена и найти в фаговых клонах и отсеквенировать р экзонов. Так, в EcoRi-Фрагменте 2,6 тыс.п.о. из ДНК фага бнз

6

или найдены 5 и 6 экзоны; в ecoRI-фрагменте 2,6 тыс.п.о. из ДНК ara swii-i был найден 15 экзон, и в Hindiи-фрагменте 0,6тыс.п.о. ыл найден 20 экзон. Поскольку полная экзон-интронная структура сследуемого гена пока не известна, здесь и далее при обозначении кзонов будет использоваться нумерация, аналогичная таковой а.к-АТФаз. Определение нуклеотидной последовательности 6 экзона оказало полное совпадение с 6 экзоном гена оф. который был публикован Лингрелом (shuli and Lingrel,l987) в виде фрагмента ена, содержащего два экзона - 6 и 7. Таким образом, оказалось, то клоны XtiKosH3.2 и CCD являются фрагментами одного и того же ена. !

Стратегия "прогулок по хромосоме", расположение найденных клонов

рестриктная карта всего гена, а также сравнение ее с рестриктной артой фрагмента гена ав Лингрела приведены на рис.2. При равнении двух рестриктных карт были найдены два несовпадения.. У ас отсутствуют два фрагмента 2,2 и 0,G kb, которые отмечены в арте Лингрела между 2,9 и 12,3 kb, гибридизующимися с кДНК. В равильности нашей карты убеждают результаты картирования ескольких независимых клонов из этой области,, ,в особенности, лонов A.SW26 и A.sw34, которые имеют очень простую карту в этой бласти и наглядно показывают отсутствие промежуточных фрагментов же при электрофорезе простых рестриктов.

Кроме того, при картировании нами использовался метод частичных зацеплений с введением метки в один из концов молекулы ДНК. Этот етод заключается в расщеплении молекулы ДНК рестриктазами твким бразом, чтобы в среднем на одну молекулу ДНК приходился один асщепленный сайт. После электрофоретического разделения такой астично расщепленной ДНК и блот-гибридизации ее с зондом,

7

комплементарному одному из концов молекулы становится возможным непосредственно "считывать" порядок рестриктных сайтов от конца молекулы. При этом разрешающая способность электрофореза позволяет различить сайты, расстояние мелуцг которыми менее 0,1иъ. На рио.З. приведет автографы на которых видно отсутствие фрагментов 2,2 и 0,6 кЬ.

Таким образом, в качестве первого этапа работы было проведено кпртиропание участка хромосомы, предположительно охватывающего целый исследуемый ген и определена нуклеотидная последовательность акаонов, найденных по гибридизации с пробами из кДНК а субъединицы ма,к-АТФвзы свиньи. Определение нуклеотидлой последовательности проводилось совместно с М.Б. Костимой.

А В

14)0. 3 А .Кпртированио Д11К фаговых клонов методом частично расщеплений. отмочен участок, покпзнващий отсутствие: дополнительных рестриктных сайтов. В. Фотография простого рустрккта ДНК фага г>и21. обозначают eoc.pi , ни.мп " Бил.

Остальные экзонн не удалось найти по гибридизации с кДНК а-субъединицы Na.K-АТФазы. По- видимому, это можно объяснить недостаточным уровнем гомологии имеющейся у нас пробы с остальной частью гена.

2 ИЗУЧЕНИЕ ГРАНСКРИПВДОННОИ АКТИВНОСТИ ГЕНА ATP1AL1

На следующем этапе работы была изучена транскрипционная активность исследуемого гена. Предварительные попытки обнаружить наличие мРНК, соответствующей гену atpiali во фракции polya+ РНК, выделенных из разных тканей методом блот-гибридизации с олигонуклеотидннм зондом, соответствующим фрагменту 9 экзона, на дали положительного результата. Возможно это объясняется малым количеством ГНК в тканях, т.о. низким уровнем экспрессии данного

1'ОНП.

В настоящее врямя хорошо разработан метод детекции малых количеств FHK или ДНК, основанный на ферментативной амплификации исходной последовательности с фланкирующих ее праймеров in vitro -метод полиморфной цепной реакции (FCR). Поскольку ужа имелось достаточно информации о нуклеотидной последовательности исследуемого гена фланкирующие праймерн были выбраны и синтезированы на основании дашшх о структуре " G и 7 экзонов. С ними была проведена амплификация (pcr) на мГНК, выделенной из разных тканей человека (мозг, почки, печень и опухоль почки рис 4). Синтез зондов про годился в ФИБХ, г.Нуюино Черновым И.П. Эксперименты по пмнлтфикащш проводились совместно с К.Е. Патрухинчм.

Поскольку гср лр.пяптпл крайне чувствительным методом, основные , артофактн, которые могут возникнуть при ее проводешги - это

одновременная амплификация других последовательностей за счет гомологичных участков. Поэтому праймеры для рев выбирались с таким рассчетом, чтобы они имели наименьшую гомологию с известными изоформами На,к- и н,к-ЛТФаз.' Результаты амплификации показали наличие мРНК, соответствующей гену атр1аы в почке и мозге.

Специфичность амплификации оздована на специфичности выбранных зондов р подтверждалась отсутствием полосы амплификации в отрицательном контроле в качестве которого были использованы ДНК фагов, содержащие фрагменты генов а1, а2, и аЗ, соответствующие тому же району (6-7 экзон). Для доказательства специфичности рев была определена нуклеотидная последовательность амллифицировашюй ДНК, которая полностью совпала со структурой исследуемого гена.

Таким образом, с помощью специфической амплификации мРНК гена АТР1Ай1, была доказана его транскрипционная активность.

| г J 5а/

рис.4 pcR-анализ наличия транскриптов atpali в поли(А ) riffi, выделенных из разных тканей. Дорожки 3,4,5,6- соответствуют мозгу, почкам, печени и раку почки. Дорожка 2- человеческий геномный клон Х5Н21. Дорожки I и 7- маркеры мол.веса (ДНК фх174, рестрицированная HincII И PBR322-Haelll).

— Ы «rt t# <A rr

P'f Ш' TJV : : :

1 щ. 1

iij'v ■ ' ' <i i1 klib

1:' " , :

i 1 -i

i fe ■ - i'/'H: ; . ■ ■ ii ■i:1 vv

У".!' .'i i " ■ ■ ■'( , .,: .......-.[.l;-^ Ш» £ мг«1 btohШ tt t

Рнс5. Тост на специфичность амплификации. 1нг ДНК фагов, несущих последовательности 6 и 7 экзонов пяти генов а-субъединиц. были взяты в 25 циклов амплификации. Дорожки 1,2,3,4 и 5 соответствуют PCR С ДНК \sw2icren atpall), fa!S9-l(atpal) , cosRC16-10(atpa2), ^KS8. I(atpa3) И ASAK35(atpal2). Дорожка 6- PCR С Миг pGC35 (плазмида, несущая полноразмерную al кДНК). Дорожка 7- ДНК расщепленная peti-

3 Сравнительно-структурный анализ кодирующей части АТР1АЫ с генами родственных АТФаз Определение нуклеотидных последовательностей экзонов АТР1АЫ • соответствующих 5,6,9 и 20 экзонам генов а-субъединиц на.К-АТФаз позволило провести сравнительный анализ исследуемого гена и его гипотетического белкового продукта с соответствующими областями всех известных изоформ каталитической субъединицы родственных АТФаз. При этом были выявлены те же особенности, которые были обнаружены при сопоставлении каталитических субъединиц различных ион-транспортирующих АТФаз, принадлежащих к этому семейству, а имогаю: участки гена, кодирующие функционально важные докеры, наиболее консервативны, в то время, как другие участки могут

II

проявлять достаточно сильные различия между собой.

Из сравнения нуклеотидных последовательностей экзонов следует, что atpiali равноудален как от генов, кодирующих разные изоформы каталитических суСъединиц на.к-АТФаз, так и от гена Н,К-АТФазы (таОГ,2). При этом средний уровень гомологии - 60-70% по ДНК и 70-75% по белку - ниже, чем уровни гомологий для известных изоформ Na,К-АТФцзы, которые составляюг более 80% для ДНК и 80-90% для белка. Хотя можно отметить экзон (9), уровень гомологии которого соответствует уровню гомологии между изоформами Na,к- АТФазы, что не удивительно, поскольку известно, что 9 экзон кодирует участок молекулы, который входит в активный центр АТФазы. В этом участке находится остаток аспарагиновой аминокислоты, который фосфорилируется в процессе работы фермента, что характерно для всех йон-транспортируодих АТФаз этого семейства.

Степень гомологии" atpiali со сравниваемыми АТФазами хотя и несколько ниже, чем между известными изоформами, тем не менее вполне достаточна для того, чтобы можно было предположить, что гипотетический белковый продукт atpiali представляет собой еще одну изоформу каталитической субъединицы либо ка.к-. либо н,к-АТФазы. Однако, более детальный анализ не позволяет сделать такой вывод. На . рисВА представлено сравнение аминокислотных последовательностей, кодируемых 6,6 и 20 экзонами генов человек? для al, a2 и a3 изоформ Na,к-АТФазы, а также н,к-АТФазы с atpiali. Сравнение показывает, что al. a2 и a3 последовательное™ представляют одну группу с гомологией около 90%. в то время, кт atpiali и н.к-АТФаза - другую, с уровнем гомологии 57-69% не сравнению с al. Следовательно, ATF1AL1 по-видимому не принадлежит к группе на.к-АТФаз.

Таблица!

Сравнение экзонов аграН с родственными АТФазами.

( гомология в %)

экзонн I <31 02 аз Н,К-АТФазв

А1Л

Б 64.9 66.6 66.6 62.2

6 67.4 . 71.1 64.4 63.7

9 79.1 83.3 82.1 74.4

20 63.4 62.1 65.6 58.2

среднее 60.7 71.1 70.1 67.4

Таблица2

Сравнение атрлы с родственными АТФазвми по белку ( гомология в %)

экзонн аь1

С11

0.2

аз

Н,К-АТФаза

б 65.8 65.8 65.8 Б5.3

6 64.4 64.4 57.8 64.4

9 89.1 89.1 87.3 ' 85.5

20 66.0 65.0 67.5 64.3

среднее 73.9 75.2 70.9 67.7

С другой сторони, ш считаем также маловероятным, что АТР1АМ гредставляет собой новую изоформу н,к-ЛТФазы, поскольку попарное равнение аминокислотных последовательностей, кодируемых Б,6 и 20 ^зонами покпзнвпот гомолоптю около РОЖ (рис 6В). Такой уровень 'омологии существенно ниже, чем между тремя генами а-субъединиц

В пользу того, что АТР1АЫ' не принадлежит Ш1 к группе генов Иа.К-, ни к генам Н,К- АТФаз свидетельствует также полученные в данной работе частичные данные об экзон-интронной структуре гена АТР1АГ.1 - Гак, экзон-интронная -граница на 3' конце 20 экзона у АТР1АЫ аналогична гену н,к- АТФазы. В этой области у гена н.к-АТФазы по сравнению с на.к-. АТФазами имеется вставка кодона, кодирующего фенилаланин. Такой же фенилаланин имеется у атр1а1л, но нет у иа.к,- АТФаз, которые таким образом имеют делецию одной аминокислоты в этой области. О другой стороны, атр1АЫ, имеет интрон между 6 и 7 экзонами, который есть у На,к-АТФаз, но отсутствует у н,К- АТФазы. Экзон-интронная граница была показана при определении нуклеотидной последовательности шестого экзона гена атр ia.il.

В

«то ьнвтипцжптгоиминкгатго юн

лт*ш ьп0тлллг1утоегтосдсмс(м*гс1*пгго

Д1Г141 ьчгвкУшттегтоиишшгатч ж

АТПЛИ *УМвТИ1*«11тГвТТ0КАи«а1М«Гяи|Г9 МЪ

ЛГ*Ш ОАЬУ|1МОККМа|ХАСГГУУООиУЕУКОвМ1ГиьаП1Ы»ОСК 1МЧ

аг*1А» о*1«ии||)Ц|1ипу«о»|,т1оом11'М»и|и*мг1 т дmдJ ом>У1а«оСЕпч<гяАсс«¥тои.»С11явм«гкм.1111*ме1 •»%

ДГРШ1 9*1.« ! июи 1р*С«>УУвО(УКУКОвЬ<«1ГАв1 11МОСГ »44 а.к-Ат»«*« оА1Уи«м1Га!ммд|ууомуеакооьау»л*1* 1)«А<70СС мъ

АТ*1А\ тт*о>к1УкгтткГг>в!У1пгомы>с«1с>т1«м|угоооп-1 1М\

ТГЖО*Х*ГЖГГС»Т1ГГвй1 УУГфЧЫ. 1 (СКГ«1Я*УГ00вЯ'К »»%

ти) то1М1пт«т11тд«ш.| (стиигоот-! т

АТПА11, пминм^кгпцифимыитинщдош т

■,мтм пм»г<«укгт«т11ис01и«игт11мгодо(11 и%

Рис 6 Попарное сравнение аминокислотной ' последовательности АТРАЫ» выведенной из структуры экзонов с соответствующими областями изоформ Иа.к- и н,к- АТФаз. Процент гомологии показан справа. А. Гомология аминокислотных

последовательностей членов семейства Ыа.к- АТФаз по сравнению с н.к-. В. Сравнение аминокислотных последовательностей атраы и н,к-АТФазы.

Для подтверждения наличия интрона нами была определена нуклеотидная последовательность фрагмента ДНК, представляющего собой продукт амплификации геномного клона \sw21 с использованием праймеров из 6 и 7 экзонов (рис 7). Таким образом, результаты определений нуклеотидной последовательности позволя> т предположить, что гипотетический белковый продукт гена дтР1АЫ не принадлежит ни к На.К-, ни к Н,К-АТФазам и эволюционно находится между ними, поскольку с одной стороны его структура напоминает структуру Иа,К- (наличие интрона между 6 и 7 экзонами), с другой -Н,К-АТФвзн (совпадение 3* границ 20 экзона). В то же время, до получения информации по полной структуре этого гена, а также более подробного изучения экспрессии, ого функциональный статус остается на полностью ясннм. .

АСАТТСССАаААОААСАССАТСССТТСАСАССАССТССТваТСаСССАСАТТаТССАааТСАААО GAGGAGACCAGATCCCTGCAGACATCAGGGГGCTGTCTTCTCAGGGGTGTCGGstaacgвgaaвta

tccacceeaagвэccatgttccaaacetgctggctctggggtctttcccaвcatcagtataagagg

caggcaatgagвtataccoaвctвtaaccaccttcaacatttвtt.ctagGTGGATAACTCATCTCI

САСааШЗАО1СГ5АСССССй0Л

Рис.7.Нуклеотидный сиквенс, показывающий наличие интрона между 6 и 7 гжзонями а I. р 1 о 11 • Последовательность интрона дана маленькими буквами, подчеркнуты нрайморн, с которых шла амплификация на

геномном фаговом клоне

выводы

1. В человеческом геномном банке найдены и раскартированы клоны, охватывающие новый ген из семейства ион-транспортарукщих АТФаз. ' В общей сложности построена рестриктная карта участка 13 хромосомы длиной 65тыс.п.о.

2. Показана экспрессия гена аичаы на уровне мРНК в почке и мозге человека.

3. Определена нуклеогидаая последовательность Б экзонов и экзон-интронннх. границ. Проведено сравнение нуклеотидных к выведенных из ' них . аминокислотных • последовательносте! гипотетического белкового продукта с известными изоформаю На,к- и н,к-АТФаз. При этом . показано, что ген АТР1АЫ эволщионно удален как от на.к-, так и от н.к-АТФаз, и, вероятн« кодирует новую ион-транспортирующую АТФазу.