Новые гидроксиламинсодержащие аналоги агматина и биогенных полиаминов

Симонян, Алина Руслановна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Новые гидроксиламинсодержащие аналоги агматина и биогенных полиаминов
ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Новые гидроксиламинсодержащие аналоги агматина и биогенных полиаминов"

На правах рукописи

СИМОНЯН Алина Руслановна

НОВЫЕ ГИДРОКСИЛАМИНСОДЕРЖАЩИЕ АНАЛОГИ АГМАТИНА И БИОГЕННЫХ ПОЛИАМИНОВ

03.00.03 - Молекулярная биология 02.00.10 - Биоорганическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва 2008

003454289

Работа выполнена в Лаборатории молекулярных основ действия физиологически активных соединений Учреждения Российской академии наук Институте молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Научный руководитель: кандидат химических наук А.Р. Хомутов Официальные оппоненты: доктор химических наук А. А. Формановский

доктор химических наук Т.В. Демидкина

Ведущая организация: Научно-исследовательский институт физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова

1 г 12.-^

Защита диссертации состоится « » 2008 г. в ' часов на заседании

диссертационного Совета Д 002.235.01 по присуждению ученой степени доктора наук в Институте молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта по адресу: 119991, Москва, ул. Вавилова, д. 32.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИМБ им. В.А. Энгельгардта РАН (119991, Москва, ул. Вавилова, д. 32)

Автореферат разослан « ^ » Ко Я^'у Л 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета кандидат химических наук

Список использовании* сокращений:

AdoMet - S-аденозилметионин; AdoMetDC -тУ-аденозилметиониндекарбоксилаза; Agm - агматин (1-1уанидино-4-аминобутая); AO-Agm - 1-аминоокси-З-гуанидинопропан;

AOSpm - аминооксиспермин (1-аминоокси-3,8-диаза-11 -аминоундекан); АРА - 1-аминоохси-З-аминопропан; ArgDC - аргининдекарбоксилаза;

BAOSpm - бмс-аминооксиспермин (1,10-диаминоокси-3,8-диазадекан); Вое - отрш-бутилоксикарбонил; Cbz - бензилоксикарбонил;

dcAdoMet - декарбоксилированный S-аденозилметйонин;

DMF - диметилформамид;

DTT - дитиотрейтол;

GAPA- 1-гуанидиноокси-З-аминопропан;

NGPG- 1-гуанидиноокси-З-гуанидинопропан;

Ns - орто-нитрофенилсульфонил;

ODC - орнитиндекарбоксилаза;

oxa-Spm - окса-спермин (1,12-диамино-4,9-диаза-5-оксадодекан);

РАО - полиаминоксидаза;

PLP - пиридоксаль-5-фосфат;

Put - путресцин (1,4-диаминобутан);

SAG - солюсурьмин (динатриевая соль комплекса Sb5+ и глюконовой кислоты);

SMO - сперминоксидаза;

Spd - спермидин (1,8-диамино-4-азаоктан);

Spm - спермин (1,12-диамияо-4,9-диазадодекан);

SSAT - спермидин/спермин-V-ацетилтрансфераза;

ТОТ - тетрагидрофуран.

Актуальность проблемы. Биогенные полиамины спермин, спермидин и их предшественник путресцин присутствуют в значительных количествах в животных клетках всех типов и необходимы для их нормального роста. При физиологическом значении pH полиамины существуют в форме поликатионов. Спермидин и спермин взаимодействуют с ДНК, РНК и нуклеопротеидами, служат регуляторами активности топоизомераз, рестриктаз, а также ферментов биосинтеза ДНК и РНК, а спермидин, являясь единстаенным донором аминобутильной группы в дезоксипшузинсинтазной реакции, необходим для посттрансляционной модификации фактора инициации трансляции eIF-5A, присутствующего у всех эукариот. Кроме того, полиамины участвуют в регуляции транспорта Са2+ митохондриями, являются модуляторами NMDA рецептора и эффекторами транспорта К+. Разнообразие и жизненная важность клеточных функций позволяют рассматривать спермин и спермидин в качестве низкомолекулярных регуляторов клеточного метаболизма.

Продуктивным подходом к выяснению роли и функций полиаминов и ашатина в клетке является изучение биохимических эффектов их аналогов. Соответственно, направленное создание новых биологически активных производных полиаминов, исследование их взаимодействий с ферментами метаболизма спермидина и спермина, а также эффектов этих соединений in vitro и in vivo представляется весьма актуальным.

Целью работы является создание оригинальных биологически активных гидроксиламинсодержащих аналогов спермина и ашатина, пригодных для изучения клеточных функций полиаминов и ферментов их метаболизма. Соответственно были поставлены следующие задачи: разработать удобные способы получения аминоокси- и окса-аналогов спермина; создать на их основе ингибиторы спермин/спермидин N1-ацетилтрансферазы, представляющие собой стабильные аналоги промежуточного бисубстратного комплекса ферментатиной реакции; разработать новый удобный метод гуанидшшрования аминооксигруппы; создать набор оригинальных гидроксиламинсодержащих аналогов атаатина и изучить их взаимодействие с Leishmania donovani.

Научная новизна. Разработаны удобные схемы синтеза аминоокси- и окса-аналогов спермина, позволяющие получать эти соединения с высокими выходами из доступных исходных веществ. Получен набор новых ингибиторов спермин/спермидин N1 -ацетилтрансферазны, хорошо моделирующих промежуточный бисубстратный комплекс, возникающий в ходе ферментативного ацетилирования спермидина. Предложен новый метод гуанидшшрования аминооксигруппы, позволяющий с высокими выходами получать функционально-замещенные алкоксигуанидины, что привело к

набору неизвестных ранее аминооксианалогов агматина. Показано, что 1-гуанидиноокси-3-аминопропан, активно проникая в Leishmania donovani, эффективно подавляет размножение этого паразита.

Практическая ценность работы. Разработан общий метод синтеза функционально-замещенных алкоксигуанидинов, который позволяет получать эти неизвестные, или малодоступные ранее, соединения с практически количественными выходами. Синтезированный по этому методу 1-гуанидиноокси-З-аминопропан эффективно ингибирует размножение Leishmania donovani, в том числе формы, резистентные к сурьмасодержащим препаратам, что открывает новые возможности для практической полиаминотерапии лейпшаниоза. Стабильные аналоги промежуточного бисубстратного комплекса спермин/спермидин-Лг'-ацетилтрансферазной реакции представляют собой практически значимый инструмент исследования активного центра этого ключевого фермента катаболизма полиаминов, в том числе и методами рентгено-структурного анализа.

Апробапия работы. Отдельные части работы докладывались на: VII Международной Путинской школе-конференции молодых ученых "Биология -наука XXI века" (Пущино, 2003 г.); International Conference for Young Scientists and Ph.D. Students on Molecular Biology and Genetics (Kiev, Ukraine, 2003 г.); VII Международной Энгельгардтовской конференции (Суздаль, 2004 г.); XVII International Roundtable on Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids (Bern, Switzerland, 2006 г.); International Conference "Polyamine: Forty Years of Mammalian Ornithine Decarboxylase" (Kuopio, Finland, 2008 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 статей.

Объем диссертации. Диссертация изложена на_ страницах и состоит из

введения, обзора литературы, обсуждения полученных результатов, экспериментальной

части и выводов. Материал иллюстрирован_таблицами, _рисунками и_

схемами. Список цитированной литературы включает__наименований.

Работа выполнена при финансовой поддержке грантами РФФИ: 03-04-49080_а, 06-04-49638_а, 08-04-91317-ИНД. а, 08-04-91777-АФ_а; а также Федеральной целевой программой "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технического комплекса России" (Госконтракт № 02.512.11.2237).

Введение. Полиамины спермин (Spm) и спермидин (Spd) присутствуют в клетках различных типов и жизненно необходимы для их нормального роста. Высокое внутриклеточное содержание Spm и Spd определяет разнообразие их клеточных функций, многие из которых остаются все еще малоизученными, что обеспечивает поступательное развитие этой области биохимии [Cohen S.S A guide to the polyamines. New York: Oxford University Press. 1998].

HINVA^MA A'SDC HOOCV H

Агматин (Agm)

N NH, H 1 Аргинин

AdoMet

NHAc

Спермин (Spm)

Рис.1. Метаболизм полиаминов. Лл#ВС-аргининдекарбоксил аза; ODC -орнитиндекарбоксилаза; AdoMetDC-£-аденозшшетиокиндекарбоксштза; SMO - сперминоксидаза; SSAT- спермиа'спермилян-уУ'-ацетилтрансфераза; РАО-полиаминоксидаза; AdoMet - S-аденозилметионин; dc-AdoMet - декарбоксилированный S-аденозилметионин.

Метаболизм полиаминов включает в себя несколько ферментов, ключевыми из которых являются на путях биосинтеза PLP-зависимая ODC и пируватзависимая AdoMetDC, а на путях катаболизма - SSAT (Рис. 1). Все эти ферменты весьма коротко-живущие (время жизни в клетке - 30 мин.), а их активность и биосинтез определяются, в том числе, внутриклеточным содержанием полиаминов. Недавно в животных клетках была обнаружена SMO, флавинзависимый фермент, окисляющий Spm в Spd без предварительного jV'-ацетилирования [Wang Y.et al, Cancer Res. 2001, 61, 5370; Murray-Stewart T., et al, Biochem, J. 2002, 368. 673]. Таким образом, деградация Spm может происходить двумя независимыми путями.

Избирательное регулирование активности ферментов метаболизма полиаминов широко используется при изучении биохимических функций Spm и Spd. Повышенное содержание полиаминов в опухолевых клетках, по сравнению с нормальными, делает задачу истощения пула Spm и Spd весьма актуальной. Первоначально основное внимание уделялось созданию специфических ингибиторов AdoMetDC и ODC, что привело к набору веществ, эффективно действующих в культуре клеток, но, как правило, существенно менее активных in vivo [Seiler N. Curr. Drug Targets 2003, 4, 537]. Последнее связано с тем, что клетки эукариот имеют систему активного транспорта полиаминов, а экзогенные Spm и Spd способны полностью заменять полиамины, синтезируемые клеткой.

Начиная с середины 90-х годов, активация ферментов катаболизма полиаминов, ключевым из которых является SSAT, стала рассматриваться в качестве универсального алгоритма истощения внутриклеточного пула Spm и Spd. Были найдены вещества (в основном, терминально foc-алкилированные производные Spm и его гомологов), повышающие клеточную активность SSAT в десятки и сотни раз и обладающие выраженной цитостатической и противоопухолевой активностью [Casero, R.A. & Marion L.J Nat. Rev. Drug Diseov. 2007, 6, 373]. В условиях супериндукции SSAT Spm и Spd не способны восстанавливать рост клеток, поэтому потребовалось создать метаболически устойчивые и функционально-активные a-метилированные производные Spm и Spd, пригодные для обращения эффектов in vivo и in vitro. Эти вещества оказались полезными инструментами для исследования метаболизма полиаминов и их функций [Keinanen Т.А., et al, Mini Rev. Med. Chem. 2007, 7, 813].

Гидроксиаминсодержашие аналоги спермина и спермидина и их производные. Биологические эффекты полиаминов и их аналогов определяются геометрией молекулы и зарядом протонированных аминогрупп. Зависимость биологических эффектов аналогов Spm и Spd от их строения исследована весьма подробно, однако вклад зарядовой составляющей остается малоизученным. Поэтому зарядодефицитные аналоги полиаминов являются полезным инструментом исследования клеточных функций и метаболизма Spm и Spd. Рациональным подходом к созданию веществ этого типа является понижение основности аминогруппы путем замены соседней СНг-группы на кислород. Таким образом, был получен набор гидроксиламинсодержапщх аналогов полиаминов. Лучшие из этих веществ 5-(5'-дезокси-5'-аденозил)метилтиоэтилгидроксил-амин и 1-аминоокси-З-аминопропан являются одними из самых эффективных необратимых ингибиторов AdoMetDC и ODC соответственно (см. обзор [Хомутов А.Р. Биохимия 2002,67,1403] и ссылки в нем). Используя комбинацию этих ингибиторов, удалось впер-

вые химическим способом полностью истощить пул Spm и Spd и показать ключевую роль Spd в поддержании роста и жизнеспособности клеток [Kramer D.L. et al, Biochem. J. 1989, 259. 325]. При помощи 5-(5'-дезокси-5,-аденозил)метилтиоэгилгидроксиламина было показано, что AdoMetDC синтезируется в клетках в виде пробелка [Autelli К, et al, Evix. J. Biochem. 1991, 196, 551], а также исследованы особенности транспорта полиаминов и их аналогов в клетки [Kramer D.L., et al, J.Cell Physiol. 1993, 155, 399]. Таким образом, с помощью этих ингибиторов удалось получить ряд принципиальных для биохимии полиаминов результатов. Изостерные и зарядодефицитные аминооксианалоги Spm и Spd \Khomutov A.R., et al, Tetrahedron 1996, 52. 13751] оказались эффекторами ферментов метаболизма полиаминов, они проникали в клетки, обладали низкой цито-токсичностью и регулируемой катаболической устойчивостью, а их активность определялась не только структурой аналога, но и типом клеток [Хомутов А Р. Биохимия 2002, 67,1159]. Однако аминооксианалоги Spm остаются малодоступными соединениями.

Получение аминооксианалогов спермина и их моноацетильных производных. На первом этапе работы были разработаны удобные методы синтеза гидрокиламинсодержащих аналогов Spm, а также получены неизвестные ранее N1- и Nu-л/оно-Ас-производные AOSpm.

Синтез 1-аминоокси-3,8-диаза-11-аминоундекана (AOSpm) (П1) был осуществлен, исходя из 7-(Г-этоксиэтилиден)аминоокси-5-азагептан-1-ола (Схема 1). На первой стадии его аминогруппу защищали и образовавшееся Вос-производное (I) превращали в соответствующий мезилат, который без дальнейшей очистки вводили в реакцию с избытком 1,3-диаминопропана, что приводило к диамину (П). Одновременное удаление кислотолабильных защитных групп позволило получить целевой AOSpm (III) с выходом 52%, считая на исходный аминоспирт, что в три раза выше описанного ранее [Khomutov A.R., etal, Tetrahedron 1996, 52,13751].

Схема 1

Вое

(II)

(III) AOSpm

.NHjMHCt

¿-Вос20/диоксан; ;/-MsCl/Et3N/CH2Cl2; iii - NH2(CH2)3NH/rHF; hi - НС1/Н20/;-РЮН.

Первоначально мы предполагали, что исходным веществом в синтезе 11-(-IV-ацетил)аминоокси-4,9-диаза-1-аминоундекана (VI) может служить три-Вос-производное

(IV) (Схема 2). Для получения ключевого интермедаата (V) необходимо было избирательно удалить этокеиэтилиденовую защиту аминооксигруппы в присутствии кислотолабильных Л'-Вос-защитных групп. Оказалось, что это превращение гладко проходит даже в гетерогенных условиях при использовании КШ04 в водном спирте. В гомогенных условиях, обрабатывая моль этоксиэтилиденового производного 0.5 молем Нг304 в водном спирте в течение несколько минут при комнатной температуре, удается получить искомое три-Вос-производное //-ацетиламинооксиспермина (V) с выходом, близким к количественному. Таким образом, впервые удалось избирательно удалить кислотолабильную этокеиэтилиденовую защитную группу в присутствии кислото-лабильной Л'-Вос-группы.

Схема 2

(И) ■

ACHN'0—

Вое (V) н (VI)

i - ВосаО/диоксан, //- 0.5 экв. H2SC>4/H20/Et0H; Ш-AcCl/THF.

Избирательное удаление Л'-Вос-защитных групп в присутствии 0-замещенных эфиров ацетилгидроксамовой кислоты, a priori, представлялось вполне реальным. Однако выяснилось, что реакция проходит неоднозначно как при использовании НС1/МеОН при 20°С, так и при использовании и-TosOH при 0°С. В обоих случаях наблюдалось образование значительных количеств AOSpm (1П). Поэтому для получения соединения (VI) вместо Вос-защитных групп была использована Cbz группа (Схема 3).

Схема 3

СЬг (X)

/- СЬгО/ГНГ/КаНСОз/НгО; й-М5СШ3М/СН2С12; й/-Ш2(СН2)3Ш2/ТНР; ¡V-СЬтСШ3>!/СН2а2; V - НС1/Н20/|-РЮН; VI - АсО/ТГО", № - Н2/Р<1

Синтез Л^'-моноацетильного производного (XIII) проводили, исходя из соединения (II) (Схема 4). Первичную аминогруппу превращали в соответствующее салицили-деновое производное, а вторичную защищали, используя В0С2О. Салицилиденовую

защитную группу удаляли действием основания О-метилгидроксил амина, что приводило к соответствующему амину (XI). Однозначность протекания этих трех реакций позволяет проводить все превращения "one-pot" и выделять уже соединение (XI), аминогруппу которого затем ацетилировали избытком уксусного ангидрида в пиридине и моноацетат

(XII) выделяли колоночной хроматографией на силикагеле. Одновременное удаление кислотолабильных защит аминоокси- и аминогрупп привело к целевому Nn-Ac-AOSpm

(XIII) с выходом 60%, считая на соединение (П).

Схема 4

(II)

Г вое

Вое

IVItf

eu0An,O^n

I - С6Н,С(0)Н(ОН)/диоксан; U - Вос20/диоксан, Ш - Н2КОСН3-основ./диоксан; tv - Ас20/Ру;

v-HCl/H20//-Pr0H.

До настоящего времени образование 1,10-диаминоокси-3,8-диазадекана (XV) (BAOSpm) было описано в качестве побочного продукта (выход ~ 2%) в реакции амино-оксиэтилирования путресцина [Khomutov A.R., etal, Tetrahedron 1996, 52,13751]. В настоящей работе для получения BAOSpm использовали аминооксиэтшшрование Nlj/-6uc-Ns-Put с последующим "one-pot" удалением Ns-защитных групп тиофенолом (Схема 5). Промежуточное соединение (XIV) выделяли колоночной хроматографией на силикагеле, и после удаления этоксиэтилиденовых защитных групп получили целевой BAOSpm (XV) с суммарным выходом 63%, считая на бис-Ns-Put.

Схема 5

ме н

н ............I

(XIV) Ме

NH/4HCI

(XV) BAOSpm

I - C2Hj0(CH3)C=N0(CH2bBr/K2C03/DMF; ü - PhSH/K2C03/DMF;«i - НС1/Н20//-РЮН.

Таким образом, были получены неизвестные ранее Nи N11- моноацетильные производные аминооксиспермина (VI) и (XIII), а также предложены удобные методы синтеза AOSpm (III) и BAOSpm (XV).

Получение стабильных аналогов бисубстратного комплекса, возникающего в ходе спермин/спермидин Л^-апетилтрансФеразной реакции. Одной из традиционных задач химической энзимологии полиаминов является разработка методов истощения внутриклеточного пула Spm и Spd, что вполне естественно, учитывая повышенное содержание полиаминов в опухолевых клетках. Соответственно, были найдены эффективные индукторы SSAT, ключевого фермента катаболизма полиаминов, однако набор ингибиторов SSAT, в отличие от ODC и AdoMetDC, весьма ограничен. Развитие молекулярной биологии полиаминов показало, что полиаминзависимый продуктивный и непродуктивный сплайсинг пре-мРНК SSAT играет важную роль в регуляции уровня Spm и Spd в клетке [Hyvonen М.Т., et al, RNA 2006, 12, 1569]. Поскольку избирательные ингибиторы SSAT являются удобным инструментом исследования активных и неактивных форм фермента, в том числе и методами рентгеноструктурного анализа, возникла необходимость получения таких структур.

Механизм S SAT-реакции не предусматривает промежуточного образования ацетилированного фермента происходит прямой перенос ацетильной группы Ас-СоА на субстрат. Поэтому вполне очевидным было использовать для ингибирования фермента конъюгаты SH-CoA со Spm или Spd. Ранее были описаны конъюгаты Со-А и полиаминов с ацетатным линкером (Рис. 2), которые ингибировали изолированный фермент с IC50 0.5-5 |iM в зависимости от строения полиаминного фрагмента [Ervin B.G., et al, Biochemistry 1984, 23, 4250]. Однако схема синтеза была пригодна для получения производных только симметричных полиаминов. Поэтому для приготовления конъюгатов SH-CoA, а также D-пантотеина, избирательно noiV1- или iV8 -положениям Spd был специально разработан достаточно сложный многостадийный синтез [Roblot G., et al, Tetrahedron 1993, 29,6381].

Располагая набором гидроксиламинсодержащих аналогов Spm и Spd с концевой аминооксигруппой, естественным представлялось использовать различия в реакционной способности H2NO- и HjN-rpynn дан получения искомых конъюгатов СоА-полиамин.

н О О

R-CHj-N-LcHz-S-CoA <= R-CH2-N- Y -S-CoA => R-0-N=pCH2-S-CoA

CHj CHj

Стабильный аналог Переходное состояние Стабильный аналог

переходного состояния ацетшпрансферазной переходного состояния

с ацетатным линкером реакции с оксимным линкером

Рис.2. Моделирование переходного состояния бисубстратного комплекса, возникающего в ходе

SSAT-реакции, с помощью конъюгатов СоА-полиамин с ацетатным и ацетоновым линкерами.

На первой стадии разработанного нами простого двухстадийного синтеза СоА-БН или .О-пантотеин алкилировали хлорацетоном в слабощелочной среде (Схема 6). Полученный кетон без выделения реагировал с соответствующим О-замещенным щцроксил-амином, что привело к целевым соединениям с выходами, близкими к количественным.

Схема 6

СоА-БН-

(Ра^-эь -

СОА-Э^Д, (XVI)

Ме

N—I*

(ХУПНХХ)

РаМ-Э___^

(XXI)

Ме

К= й

\^КН2(ХУ11), (XXII);

(ХХН)-(ХХУ) /-^И^^-х^мн, (XVIII), (XXIII); -^/^Й^^НН^ХХ), (XXV)

Ж;

БН-СоА

---

РаМ-Э»

Д^Х» но

0 он

1 Ма

ОН

I - С1СН2СОСНэ/СНзС№Н2СШаНСОз-№2СОз, «-КОШ2; Ш - ШТ/ЕЮН/Н20

Как следует из данных Табл. 1, соединение (XVIII) в 22 раза активнее кетона (XVI), который действует хуже, чем любой из конъюгатов СоА-полиамин, что подтверждает вклад полиаминного фрагмента в эффективность торможения. Наиболее активным оказалось соединение (XVIII), моделирующее конъюгат по /^-положению 8р<1, тогда как соединение (XVII), моделирующее конъюгат по М1-положению Бр<1, было не столь эффективно (значения ГС50 получены при 4.5 цМ концентрации Ас-СоА в субстратной смеси).

Табл. 1. Ингибирование (¡Си) ББАТ коиьюгатами СоА-БН и £>-пантотеина с аминооксианалогами полиаминов.

Соединение XVI XVII XVIII XIX XX XXI XXII XXIII XXIV XXV

1СИ цМ 22 6 1 17 5 >100 >100 >100 >100 >100

Следует отметить, что использование ацетатного линкера давало обратную картину зависимости действия ингибитора от строения полиаминного фрагмента [ЕЫп В.в, е1

al, Biochemistry 1984, 23, 4250]. При этом активности лучших представителей каждого из набора конъюгатов были близки, т.е. эффективность действия ингибитора зависит не только от строения полиаминного фрагмента, но и от структуры линкера. Вклад аденозинового фрагмента СоА в эффективность торможения SSAT был определяющим, что прямо следует из низкой активности соответствующих пантотеиновых производных (ср. (XVIII) и (ХХ1П)). Следует отметить, что в случае сукцинил-СоА-ацетоацетат трансферазы пантотеновая часть субстрата вносит значительный вклад в эффективность связывания субстрата [Flerke С.А. & Jencks WP. J. Biol. Chem. 1986, 261, 7603].

Таким образом, был получен набор новых аналогов бисубстратного комплекса SSAT-реакции на основе CoA-SH и D-пантотеина. Соединения (XVIII), (XX) и (XVII) эффективно тормозили SSAT, причем их активность была сравнима с таковой для лучших из известных ранее ингибиторов.

Получение окса-анадогов спермина. В живых системах Spm и Spd во многом взаимозаменяемы, что осложняет исследование их роли в регуляции клеточного метаболизма. Поэтому одной из важных методических задач биохимии полиаминов является создание подходов, позволяющих "разделить" клеточные эффекты Spm и Spd. Несмотря на кажущуюся простоту, эта задача до сих пор не имеет удачного решения из-за взаимопревращений полиаминов Синтез набора стереоизомеров а-метилированных аналогов Spm и Spd, не являющихся субстратами SSAT, но способных выполнять основные функции полиаминов in vitro и in vivo, был первым шагом в этом направлении [Keinanen ТА, et al, Mini Rev. Med. Chem. 2007, 7, 813]. Однако легкость расщепления а,со-диметильных производных Spm под действием SMO требует создания эффективных избирательных ингибиторов этого недавно открытого фермента.

В этой части работы описывается синтез неизвестного ранее oxa-Spm (XXIX). Так как замена метиленовой группы в пятом положении Spm на атом кислорода изостерна, то можно ожидать, что oxa-Spm (XXIX) будет хорошим конкурентным ингибитором SMO. Атом кислорода понижает основность соседней NH группы на ~ 5 порядков (рКа 2.7 против рКа 7.97 у ЯЛ'-группы Spm, см. Рис. 3) и, следовательно, oxa-Spm (XIX) при физиологическом значении pH существует в виде трикатиона. Так как происходящее в активном центре SMO депротонирование вторичной аминогруппы Spm предшествует его окислению, то oxa-Spm (XXIX) может рассматриваться как своеобразный аналог промежуточно возникающей в активном центре SMO трехзарядной формы Spm. Известно, что ферментативное окисление Spm происходит через промежуточное образование основания Шиффа, гидролиз которого приводит к 3-аминопропаналю и Spd.

Если oxa-Spm (XXIX) будет окисляться подобно Spm, то в активном центре SMO in situ может образоваться оксим (XXXVI), представляющий собой стабильный аналог основания Шиффа. Поскольку получение стабильных аналогов промежуточных соединений ферментативных реакций является универсальным алгоритмом создания эффективных ингибиторов ферментов, то наряду с oxa-Spm (XXIX) был получен и оксим (XXXVI).

Синтез 1,12-диамино-4,9-диаза-5-оксадодекана (XXIX) был осуществлен последовательным наращивание аминометиленовой цепи (Схема 7), а также блочным методом (Схема 8). В обоих случаях ключевой стадией являлось алкилирование соответствующих 2-нитробензолсульфонильных (Ns-) производных 3-№Вос-амино-пропилйодидом. Для получения соединения (XXVII) О-замещенный щцроксиламин

(XXVI) нозилировали в стандартных условиях сульфохлорирования аминов, что привело к образованию значительных количеств бис-продукта. Использование в качестве основания эквивалентных количеств пиридина вместо EtjN не снижает количеств бис-нозильного производного. Однако проведение реакции с 2.5-3.0-кратным избытком О-замещенного гидроксиламина без оснований позволяет получить .коно-№-производное

(XXVII) с выходом около 70 %, считая на NsCl. Алкилирование Ns-производного (XVII) 3-Лг-Вос-амикопропилйодидом и последующее "one-pot" денозилирование тиофенолом привели к тризащщценному соединению (XXVIII), из которого одновременным удалением Вое- и Cbz- защитных групп, при помощи НВг/АсОН, был получен целевой тетра-гидробромид oxa-Spm (XXIX).

Схема 7

Me Cbz , сы

NHCbZ --

(XXVI)

<rta „/

(XXVII)

Cbz

Н (XXVIII) Н (XXIX) оха-врт

/ - НСШ-Рг0Н/Н20; й - №С1/СН2С12; Ш - В0сШ(СН2)31/К2СО3/ОМР; й> - РЬ8Н/К2С03/0МР;

V-НВг/АсОН.

Использование конвергентного синтеза (Схема 8) повысило суммарный выход оха-врт (XXIX). На первой стадии аминогруппу 1-(1'-этоксиэтилиден)аминоокси-3-аминопропана нозилировали эквивалентом №С1. Затем удаляли этоксиэтшшденовую защиту мягким кислотным гидролизом и свободную аминооксигруппу нозилировали 0.4

экв. №С1. Избыток гидроксиламина (XXXI) отделяли и вновь нозилировали. Затем соединение (XXXII) алкилировали 3-Лг-Вос-аминопропилйодидом, а после удаления защитных групп получали оха-Брт (XXIX). Следует отметить, что данная последовательность превращений позволяет выделить почти все промежуточные соединения, не прибегая к колоночной хроматографии на силикагеле.

Схема 8

М» , Ма ,

(XXX)

(XXXI) (XXXII)

Йи Н ВОСИП - N - - ^Ч^МНВОС -- ^--^^и-О^^И^^ЫН^НВГ

Н (ХХХШ) " (XXIX) оха-Эрт

/ - №С№3№СН2С12, й - НС1/МеОН; Ш - №С1/СН2С12; Ы - ВосМН(СН2)31/К2С03/1>МР;

V - РЬ8Н/К2СОз/ОМР; VI - НВг/АсОН.

Синтез оксима (XXXVI) был осуществлен, исходя из З-ЛЧЗос-аминопропанола (Схема 9), который сначала окисляли до соответствующего альдегида действием хлор-хромата пиридиния на нейтральной А1гОз. Затем 3-(7/-тре/и-бутилоксикарбонил)амино-пропаналь без выделения вводили в реакцию с 1-аминоокси-4-аза-7-аминогептаном, а образовавшийся оксим (XXXV) выделяли колоночной хроматографией на силикагеле в виде смеси син- и анти-изомеров в соотношении 40:60, как следует из данных 'Н-ЯМР. Последующее удаление Вос-защитной группы действием НС1/МеОН при 0°С привело к искомому тригидрохлориду (XXXVI), при этом соотношение син- и анти-изомеров мало изменилось и составило 35:65.

Схема 9

ян.

(XXXIV)

ВосНМ.

* н

н2 -знс1

(XXXV) (XXXVI)

I - Вос20/ТНР; и - СЮз'РуНС1/А120з/СН2С12; Ш - Н2Ш(СН2)3М1(СН2)3Ш2/МеС>Н/Н20; Ы - НСШеОН.

Определение иКа аналогов спермина. Биологические свойства полиаминов и их аналогов зависят не только от геометрии молекул, но и от степени протонирования аминогрупп. Спермин при физиологических значениях рН существует в виде тетра-катиона. Однако при замене СНг-группы на кислород основность соседнего атома азота

сильно уменьшается, а аналоги представляют собой при физиологических значениях рН трикатионы. С применением метода 'Н-ЯМР спектроскопии были определены значения рКа аминооксигруппы АОЗрт, ВАОЭрт (рКа 3.20) и оха-врт (рКа 2.67).

10,94 7.97 н 10'12

Н Брт 9,04

"2-67 оха-Зрт ВА03Рт

3-20 Н д03рт

Рис.3. Значения рКа гидроксиламинсодержащих аналогов Брт.

Синтез и биологическая активность функдионально-замещенных алкокси-гуанидинов. Среди природных производных гидроксиламина наиболее извес-тны аминокислота канаванин (а-амино-у-гуанидинооксимасляная кислота), широко распространенная в растениях, и антибиотик циклосерин (4-аминоизоксазолидон-З), применяемый для лечения туберкулеза.

Г !

МН2 0

Канаванин Циклосерин

Методы синтеза и химия циклосерина были разработаны еще в конце 50-х начале 60-х годов, однако удобные способы получения алкоксигуанидинов, в том числе и канаванина, практически не развиты. Известно лишь, что обработка защищенного производного каналина й'-метилизотиомочевиной при 20°С в течение 72 ч приводит к

канаванину с выходом 10% [Rosenthal G.A. et al, Anal. Biochem. 1983, 133, 277], a кипячение с циан-амидом в спирте (5 ч) позволяет получить канаванин с выходом 70 % [Frankel M., et al, J. Chem. Soc. 1963, 3127]. Таким образом, предполагая использовать функционально-замещенные алкоксигуанидины в качестве инструмента исследования метаболизма полиаминов, мы были вынуждены сначала разработать удобный метод синтеза этих малодоступных соединений.

В настоящей работе для получения гуанидинооксиалканов впервые был использован трифлат ди-Вос-гуанидина, который быстро и практически количественно превращает алифатические амины в соответствующие гуанидины [Feicktinger К.,et al, J. Org. Chem. 1998, 63, 3804]. Однако О-замещенные гидроксиламины существенно менее нуклеофильны по сравнению с соответствующими алифатическими аминами. Поэтому на первом этапе мы исследовали взаимодействие трифлата ди-Вос-гуанидина с модельным О-бензилгвдроксиламином.

Г- H

в ~-0'NH* BocmZ-NHSOsCF, Í|-"Y^°'NTNHB0C

S? ~ NBoc

Оказалось, что ди-Вос-производное бензилоксигуанидина образуется с практически количественным выходом, но реакция протекает существенно медленнее (Рис. 4), чем в случае бензиламина. Величина константы скорости реакции второго порядка (мольные соотношения О-бензилгидроксиламина и трифлата ди-Вос-гуанидина), определенная с использованием метода 'Н-ЯМР (Рис. 4) по изменению интегралов сигналов СНг-протонов О-бензилгидроксиламина (8 4.63 м.д.) и СН2-протонов ди-Вос-защшценного бензилоксигуанидина (5 5.01 м.д.), составила 2.66-Ю'2 л-моль"'-мин~' (Т]д 75 мин при 37°С).

время час

Рис.4. Кинетика гуанидинилирования О-бензилгидроксиламина (0.3 М) трифлатом ди-Воо-гуавидина (0.3 М) в присутствии EtзN (0.3 М) в СОС13 (0.5 мл) при 37°С.

На следующем этапе работы в реакцию с трифлатом ди-Вос-гуанидина были введены различные эфиры гидроксиламина, включая функционально-замещенные

(Схема 10). Оказалось, что гуанидшшрование аминооксисоединений с высоким выходом удается осуществить при наличии в радикале меркапто- и гидроксщрупп, а также экзо-циклической аминогруппы аденина.

Схема 10

N800 ЫВос

К"°МН1 + РзСЗОаМ^НВос " ИОНМ^ЫНВос

-СН2СН2СН2ОН

-СН2СН2СН2С| мн2

-СН2СН2СН2СМ <>ЫТ| N

■СН2СН2СН2СН2СШ2 >1ДЫ-1

-СН(СН3)СН3 Ь-О^)

-СНгРИ >-{

-СН2СН2СН2СН2БН он ОН

Таким образом, был найден эффективный способ гуанидилирования аминоокси-группы, позволивший получить целевые гидроксиламинсодержащие аналоги Алт.

мн н

Адт

NN NN „ N4

Н Н 1л.. Н

вАРА NGPG АО-Адт

Рис.5. Агматин и его гидроксиламинсодержащие аналоги.

Исходным соединением в синтезах АО-А§т (XXXVIII), вАРА (ХЫ) и ШРв (ХЫП) служит 1-(Г-этоксиэтшшден)ашшоокси-3-аминопропан (Схема 11). Гуаниди-нилирование его свободной аминогруппы трифлатом ди-Вос-гуанидина было осуществлено по стандартной методике для аминов, и ди-Вос-производное (XXXVII) получено с выходом, близким к количественному. Удаление защитных групп действием НС1/ЕЮН привело к медленно смокающему на воздухе дигидрохлориду АО-А^ (XXXVIII), который был превращен в хорошо кристаллизующийся дитозилат.

Схема 11

NBoc н NH

BocHNAN'0-^NYNHBOC NAN'°—-VNHj *2HBr

i H (XLII) NBoc 2 H Дн

III, IV

(XLIII) NGPG

H II vil H

^O^-^N-^NHBoc«гтозОН

(XXXVIII NBOC NH

( ' (XXXVHI) AO-Agm

NBoc v/ NH

HjN'°—B0CHNA„^s^NHCte—~ h¡/n-O^NH2 *2HBr (XXXIX) H (XL) H (XLI)GAPA

i - (BocNH)2C=NTf7Et3N/CH2Cl2; ü - HCl//-Pr0H/H20; Ш - Cbz-Cl/Et3N/THF; iv - HCl/EtOH/HjO; v - (BocNH)2C=NTffEt3N/CHCy37°C; vi - HBr/AcOH; vii - Dowex 1x8 в TosCT форме.

Следует отметить, что AO-Agm является изостерным зарядодефицитным аналогом Agm и образует, подобно другим О-замещенным гидроксиламинам, стабильные оксимы с альдегидами и кетонами, включая PLP, который служит коферментом ArgDC. Так как аминооксианалоги субстратов пируват- и PLP-зависимых ферментов метаболизма аминокислот являются их эффективными ингибиторами (см.обзор [Хомутов А.Р. Биохимия 2002, 67, 1403] и ссылки в нем), то следует ожидать высокой активности AO-Agm (XXXVIII) по отношению к ArgDC.

При получении GAPA (XLI) свободную аминогруппу 1-(1'-этоксиэтилиден)-аминоокси-3-аминопропана сначала карбобензоксилировали, а затем удаляли этокси-этилиденовую защиту, что приводило к соответствующему гидрохлориду (XXXIX) (Схема 11). Гуанидинилирование аминооксигруппы трифлатом ди-Вос-гуанидина позволило получить с высоким выходом соединение (XL). Одновременное удаление Вос-и Cbz-защитных групп привело к кристаллическому дигидробромиду GAPA (XLI).

Мы реализовали несколько схем получения NGPG (ХЫП), наиболее удачной из которых является синтез, исходящий из 1-аминоокси-З-аминопропана, свободные амино-и аминооксигруппы которого гуанидилировали 1.9 экв. трифлата ди Вос-гуанидина при 37СС (Схема 11). Соединение (XLII) очтцали колоночной хроматографией на силика-геле, и после удаления Boc-защшных групп получали дигидробромид NGPG (ХЫП).

Определение рКа аналогов агматина. Основность гуанидиноокси-фрагмента О АР А и NGPG имеет значение для правильного использования этих аналогов в биохимии полиаминов. С применением метода 'Н-ЯМР спектроскопии были определены

значения рКа аминооксигруппы AO-Agm (рКа4.05) и гуанидинооксшрупп GAPA (рКаб.7) и NGPG (рКаб.9). Таким образом, GAP А, являясь изостером Agm, по основности ближе к Put и, скорее всего, будет активно переноситься в клетки, используя, подобно Agm, систему транспорта Put.

в.в Agm " 12.5

NH NH и NH

H2N0^-NANHj H2NvX-^.O(.ANH2

4'05 AO-Agm GAPA 8 7 NH NGPQ "••»

Рис.6. Определение рКа гидроксиламинсодержащих аналогов Agm.

Ингибирование размножения Leishmania donovani действием GAPA1.

Протозойные инфекции - причина заболевания и смерти миллионов людей преимущественно в тропиках и субтропиках. Висцеральный лейшманиоз, возбудителем которого является Leishmania donovani, одно из самых распространенных заболеваний в Индии. Сегодня в мире не существует противолейшманиозной вакцины, а появление форм, устойчивых к "Солюсурьмину" (SAG), основному сурьмасодержащему противо-лейшманиозному препарату, еще более осложнило лечение этого заболевания [Croft SL, et al, Clin. Microbiol. Rev. 2006,19,111].

Одним из жизненно важных метаболитов L. donovani является трипанотион бис-(глутатионил)спермидин), образование которого зависит, в том числе, от уровня Spd у паразита. Метаболизм полиаминов у L. donovani (Рис. 7) не так сложен, как у млекопитающих (Рис. 1). У паразита отсутствует Spm, a Spd не катаболизирует до Put. Известно, что подавление биосинтеза Spd у L.donavani приводит к снижению содержания трипанотиона и гибели паразита [НеЪу О., et al, Amino Acids 2007, 33, 359]. Сложность применения этого подхода для практической полиаминотерапии состоит в том, что Spd

1 Совместно с Prof. R.Madhubala (Университет Дж. Неру, Дели, Индия)

необходим и клеткам хозяина. Однако ODC паразитов не имеет С-концевых PEST-последовательностей, поэтому время ее полужизни существенно больше, по сравнению с ODC млекопитающих, что позволяет создать в паразите значительное количество "заингибированного" фермента. Например, а,а-дифторметилорнитин (DFMO) - эффективный необратимый ингибитор ODC, используется для лечения поздних стадий сонной болезни, вызываемой Tripanosoma brucei gambeisi [Burri С. & brun R., Parasitai. Res. 2003,90, S49].

Трипанотион

Рис.7. Метаболизм полиаминов у L donovam I- Орнитиндекарбоксилаза, //-S-аденозилметиониндекарбоксилаза, Щ- спермидинсинтаза, h> - глутатионилспермидинсшггаза, V - трипанотионсинтаза, vi - трипанотиондисульфидредуктаза.

Успех применения специфических ингибиторов для практической терапии во многом определяется возможностью создания их активно-транспортируемых форм. Однако такие ингибиторы ODC как DFMO и АРА in vitro весьма активны по отношению к L. donovam [Singh S., et al, Antimicrob. Agents Chemother. 2007, 51, 528] и Plasmodium falciparum [Das Gupta R„ et al, Antimicrob. Agents Chemother. 2005, 49, 2857], хотя и пассивно проникают в эти паразиты. Поэтому в заключительной части настоящего исследования мы попытались создать активно-транспортируемую форму АРА, превратив его в GAP А, который сможет проникать в клетки, используя систему транспорта Put.

Известно, что АРА ингибирует ODC из Ldonovani с К, 10"9М [Singh S., et al, Antimicrob. Agents Chemother. 2007, Я, 528], тогда как GAPA оказался существенно менее активен К,6-10"бМ. Однако по отношению к Ldonovani дикого типа оба ингибитора проявляли близкую активность (Табл. 2).

Табл. 2. Сравнение эффектов SAG, АРА и GAPA на SAG-чувствительные (S-1) и SAG-резистентные (R-1 и GE-1) клинические изоляты L donovani (Данные любезно предоставлены Prof. R.Madhubala университет Дж.Неру, Дели, Индия)

1С5Л(цМ)

Промастиготы* Амастиготы**

Изоляты SAG APA GAPA SAG APA GAPA

Дикий тип L.donovani 57 42 36 15 5 9

S-1 47 19 10 13 10 9

R-1 128 >400 8 62 >200 18

GE-1 164 >400 8 >95 >200 3

*Промастигота - жгутиковая форма L donovani, в организме москитов переносчиков.

* * Амастигота ■ безжгутиковая форма L. donovani, внутри паразитофорной вакуоли макрофагов.

Сопоставление активностей АРА и GAPA по отношению к изолированной ODC и L. donovani свидетельствует, что GAPA, скорее всего, активно проникает в паразит и, следовательно, позволяет считать GAPA первым активно-транспортируемым ингибитором ODC.

Возможность внутриклеточной трансформации GAPA в АРА (Рис. 8) определяется наличием в клетке низкоспецифичных уреидогидролаз. Известно, что многие аргиназы способны превращать канаванин в каналин, а некоторые из них способны даже расщеплять Agm до Put [Dabir S„ et al, Int. J. Biol. Sci. 2005,1, 114]. Кроме того, макрофаги, в которых локализована L donovani, обладают агматиназной активностью [Sartre М. etal, Biochem. J. 1998, 330,1405].

Другие мишени?

NH2 Н

GAPA рКавв.71

Клеточная стенка

GAPA

Уреидо-гидролазы

jiM Ингибитор ODC

H2N'

APA

пМ Ингибитор ODC

Рис.8. Предположительный механизм действия GAPA.

Проникнув в Ldonovani, GAPA, подобно АРА, вызывает снижение уровня Put и Spd (Табл. 3), а экзогенные Put и/или Spd полностью нейтрализуют эффекты ингибитора (данные не приведены), что свидетельствует о том, что биохимическая мишень GAPA связана с метаболизмом полиаминов. Однако GAPA, в отличие от АРА, мало влияет на

уровень трипанотиона в ЬЛопоуат (Табл. 3). Таким образом, наблюдаемая картина, по-видимому, не может быть описана только в терминах ингибирования СЮС под действием в АРА или в результате ее расщепления до АРА, а взаимосвязь: уровень 8р<1 - уровень трипанотиона у £ Ыопоуат может иметь достаточно сложный характер.

Табл. 3. Влияние GAPA и АРА на уровень полиаминов и трипанотиона (Try) у промастигот Ldonovani (Данные любезно предоставлены Prof. R.Madhubala университет Дж Неру, Дели, Индия)

Put (цмоль/мг белка) Spd (нмоль/мг белка) Тч (нмоль/10 клеток)

Ldonovani 14.1 + 2.3 40.0 ± 7.0 45.9 ± 7.0

Ldonovani + 40 цМ GAPA 3.5 ±1.1 29.4 ±3.5 39.4 ±1.8

Ldonovani + 40 цМ APA* 3.9 ±1.8 24.3 ± 2.9 9.4 ±2.1

♦Данные из работы [Singh S, et al, Antimicrob. Agents Chemother. 2007, ü, 528]

Другим принципиальным отличием GAPA от АРА и DFMO является его высокая эффективность по отношению к формам Ldonovani, резистентным к сурьмасодержащим препаратам (Табл. 2). Следует отметить, что устойчивость к этим препаратам сопровождается повышенной активность ферментов биосинтеза Spd, в первую очередь ODC, что, по-видимому, и снижает эффективность АРА и DFMO.

Таким образом, нельзя исключить, что GAPA имеет еще одну метаболическую мишень, отличную от ODC. Нечто подобное наблюдалось при сравнении эффектов DFMO и АРА на рост мицелия фитопатогенного гриба Pyr.oryzae. Оба ингибитора ODC снижали содержание Put и замедляли рост мицелия, который восстанавливался при внесении в среду Put. Однако АРА, действуя, в отличие от DFMO, еще и на ранние этапы биосинтеза меланина, вызывал обесцвечивание мицелия, окраска которого восстанавливалась после добавления Put [Хомутов А Р., и др. Биоорган, химия 1989,15, 706].

Таким образом, механизм действия GAPA требует детального исследования, поскольку возможность существования биологической мишени для GAPA, отличной от ODC, может быть уникальным для этого паразита и, следовательно, представлять перспективную цель для избирательного воздействия на Ldonovani.

Выводы:

1. Предложены удобные методы получения аминооксианалогов спермина, их неизвестных ранее моно-ацетильных производных, а также окса-аналогов спермина, необходимых для исследования ферментов катаболизма полиаминов.

2. Синтезирован набор новых ингибиторов спермин/спермидин-Лг1-ацетилтрансферазы (SSAT) на основе Со А, Д-пантотеина и аминооксианалогов полиаминов с использованием ацетонового линкера. Показано, что производные СоА эффективно ингибирует фермент в цМ концентрациях.

3. Предложен общий способ превращения 0-замещенных гидроксиламинов в алкокси-гуанидины, позволяющий получать разнообразные функционально-замещенные производные с выходами близкими к количественным.

4. Синтезированы неизвестные ранее зарядодефицитные аналоги агматина на основе 1-аминоокси-3-аминопропана. Предложен способ превращения 1-аминоокси-З-амино-пропана, эффективного ингибитора орнитиндекарбоксилазы, в активно-транспортируемый проингибитор. Показано, что 1-гуанидиноокси-З-аминопропан эффективно ингибирует размножение Leishmania donovani, в том числе и формы резистентные к сурьмасодержащим препаратам.

Основное содержание работы отражено в следующих публикациях:

1. Хомутов А.Р., Симонян А.Р.. Вепсалайнен Й., Кейнанен Т.А., Алхонен JI., Янне Ю. "Новые окса-аналоги спермина." // Биоорган. Химия, 2005, т. 31, № 2, с. 206212.

2. Симонян А.Р.. Григоренко H.A., Вепсалайнен Й., Хомутов А.Р. "Новые зарядодефицитные аналоги агматина." // Биоорган. Химия, 2005, т. 31, № 6, с. 645650.

3. Симонян А.Р.. Вепсалайнен Й., Хомутов А.Р. "Аминооксианалоги спермина и их моно-ацетильные производные." // Биоорган. Химия, 2006, т. 32, № 6, с. 643-650.

4. Grillo М.А., Battaglia V., Colombatto S., Rossi C.A., Simonian A.R.. Salvi M., Khomutov A.R., Toninello A. "Inhibition of agmatine transport in liver mitochondria by new charge-deficient agmatine analogues." // Biochem. Soc. Trans., 2007, v. 35, № 2, p. 401-404.

5. Simonian A.. Khomutov A., Hyvonen T., Grigorenko N., Keinanen T., Vepsalainen J., Alhonen L., Janne J. "Novel CoA-polyamine conjugates for effective inhibition of spermine/speimidine-W'-acetyltransferase." // Nucleosides, Nucleotides, and Nucleic Acids, 2007, v. 26, № 10-12, p. 1245-1248.

6. Singh S., Jhingran A., Sharma A., Simonian A.R.. Soininen P., Vepsalainen J., Khomutov A.R., Madhubala R. "Novel agmatine analogue, y-guanidinooxypropyl-amine (GAP A) efficiently inhibits proliferation of Leishmania donovani by depletion of intracellular polyamine levels." // Biochem. Biophys. Res. Commun., 2008, v. 375, № 1, p. 168-172.

Напечатано о готового оригинал-макета

Издательство ООО "МАКС Пресс" Лицензия ИД N 00510 от 01.12.99 г. Подписано к печати 22 10.2008 г. Формат 60x90 1/16. Усл.печ.л. 1,5. Тираж 100 экз Заказ 602 Тел. 939-3890. Тел./факс 939-3891. 119992, ГСП-2, Москва, Ленинские горы, МГУ им. М В. Ломоносова, 2-й учебный корпус, 627 к.

Содержание диссертации, кандидата химических наук, Симонян, Алина Руслановна

1. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

2. ВВЕДЕНИЕ.

3. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

3.1. Ферменты биосинтеза полиаминов.

3.1.1. Орнитиндекарбоксилаза и ее ингибирование.

3.1.1.1. Ингибиторы ODC.

3.1.2. S-Аденозилметиониндекарбоксилаза и ее ингибирование.

3.1.1.1. Ингибиторы AdoMetDC.

3.2. О-Замещенные гидроксиламины.

3.2.1. Получение О-замещенных гидроксиламинов.

3.2.1.1. Синтезы эфиров гидроксдламина из спиртов.

3.2.1.2. Синтезы эфиров гидроксиламина из алкилгалогенидов.

3.2.2. Превращения О-алкилоксииминоэфиров.

3.2.2.1. Реакции нуклеофильного замещения.

3.2.2.2. Реакции окисления.

3.2.2.3. Реакции восстановления.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Гидроксиламинсодержащие аналоги Spm и Spd и их производные.

4.1.1. Получение окса-аналогов спермина.

4.1.2. Получение аминооксианалогов спермина и их моноацетильных производных.

4.1.3. Определение рКа аналогов спермина.

4.1.4. Получение стабильных аналогов промежуточного комплекса SSAT реакции.

4.2. Синтез и биологическая активность функционально-замещенных алкоксигуанидинов.

4.2.1. Получение аминооксианалогов агматина.

4.2.2. Определение рКа аналогов агматина.

4.2.3. Ингибирование транспорта агматина в митохондрии.

4.2.4. Ингибирование размножения L.donovani 1-гуанидиноокси-З-аминопропаном

GAP А).

5. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

5.1. Получение гидроксиламинсодержащих аналогов полиаминов и их производных.

5.1.1. Получение окса-аналогов спермина.

5.1.2. Получение аминооксианалогов спермина и их моноацетильных производны.

5.1.3. Получение ингибиторов SSAT.

5.2. Получение функционально замещенных алкоксигуанидинов.

5.2.1. Определение константы скорости реакции гуанидилирования О-бензил-гидроксиламина.

5.2.2. Получение функционально-замещенных алкоксигуанидинов.

5.2.3. Получение аминооксианалогов агматина.

5.3. Определение рКа аминоокси и оксааналогов спермина и агматина.

6. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Новые гидроксиламинсодержащие аналоги агматина и биогенных полиаминов"

История биогенных полиаминов началась в 1678 г., когда А. Левенгук выделил кристаллы фосфата спермина из семенной жидкости человека. В 1926 г. был осуществлен первый химический синтез спермина. Несмотря на столь длительную историю, интерес к этим соединениям не исчезает и только в 2007 г. было опубликовано более 2600 работ, посвященных различным аспектам изучения их функций в клетке.Полиамины, спермин (Spin), спермидин (Spd) и их предшественник путресцин (Put) присутствуют в значительных количествах в клетках животных и растений, в бактериях, а также входят в состав вирусных частиц [1]. Количество и соотношение индивидуальных полиаминов зависит от типа клеток, а также определяется и скоростью их роста.Эукариотические клетки, как правило, содержат мало Put и значительные количества Spm и Spd, тогда как у прокариотов уровень Put обычно выше уровня Spd, а количество Spm незначительно [2]. Опухолевые клетки имеют повышенный, по сравнению с нормальными клетками, уровень Spm и Spd [3]. Полиамины необходимы для роста клеток, их дифференцировки и апоптоза [4].При физиологических значениях рН Spm и Spd существуют в виде поликатионов и многочисленные жизненно важные функции полиаминов определяются эффективным связыванием с отрицательно заряженными макромолекулами, участками мембран, рецепторов и т.п. Spm и Spd являются важными элементами архитектуры нуклеиновых кислот и способны, например, индуцировать переход В-формы ДНК в Z-форму [5].Известно два примера высокоспецифического взаимодействия полиаминов с нуклеиновыми кислотами. Полиамины индуцируют сдвиг рамки считывания при биосинтезе антизима (AZ) [6] - белка, специфически взаимодействующего с орнитиндекарбоксилазой (ODC) и способствующего деградации фермента в 26S протеосомах [7]. Снижение внутриклеточного содержания Spm и Spd приводит к "непродуктивному" сплайсингу пре-мРНК спермин/спермидин-ЛГ'-ацетилтрансферазы (SSAT) и образованию каталитически неактивного белка, соответственно катаболизм полиаминов замедляется, а избыток Spm и Spd и/или их аналогов стимулирует продуктивный сплайсинг пре-мРНК SSAT [8]. Полиамины служат природными регуляторами активности топоизомераз, рестриктаз, а также ферментов биосинтеза ДНК и РНК. Недавно было показано, что в присутствии Spm и Spd повышается точность обратной транскриптазы HIV-1 [9]. Полиамины участвуют в регуляции транспорта Са2 + в митохондрии [10], являются модуляторами ]У-метил-1)-аспартатного рецептора [11] и эффекторами транспорта К+ [12].Существует достаточно многочисленная группа метаболически значимых ковалентных производных Spm и Spd, из которых наиболее известны - гипузин и трипанотион. Аминокислота гипузин [7Уе-(4-амино-2-оксибутил)-/,-лизин] (Рис. 1) возникает в результате постгрансляционной модификации s-аминогруппы Lys-50 в высококонсервативном участке фактора инициации трансляции (eIF5A), присутствующего у всех эукариот. Двухстадийная трансформация остатка лизина в гипузин критична для активности eIF5A, a Spd служит единственным донором аминобутильного фрагмента в дезоксигипузинсинтазной реакции [13]. Spd входит в состав трипанотиона (iV'^ V8-бг/с(глутатионил)спермидин дисульфид) - жизненно важного метаболита таких болезнетворных паразитов как Plasmodium falciparum, Leishmania donovani, Trypanosoma brucei gambiense, вызывающих малярию, лейшманиоз и сонную болезнь соответственно [14]. Ацильные производные Spm и Spd - одни из важных компонентов токсинов некоторых пауков и ос Philauthus trianguhtm, блокирующих глутамат-активируемые ионотропные рецепторы [15]. Ацильные производные полиаминов, в том числе и сайдерофоры, присутствуют и у бактерий [16]. Spm и Spd участвуют в процессах образования поперечных сшивок белковых цепей, катализируемых трансглутаминазами [17]. И, наконец, производные природного антибиотика спергуалина с хиральным Spd-фрагментом обладают выраженной иммунодепрессантной активностью [18].Таким образом, разнообразие и жизненная важность клеточных функций полиаминов позволяют рассматривать Spm, Spd в качестве низкомолекулярных регуляторов клеточного метаболизма, причем уменьшение концентрации полиаминов приводит к торможению роста или гибели клеток. II,N4 NH A ArgDC N NH2 Н AdoMet Агматин (Agm) Агмапшназа Путресцин (Put) NH i N NH, H 2 Аргинин AdoMetDC \lc-AdoMet- Spd синтаза H ,N.Спермидин (Spd) NH, SSAT r NH2 DHS;HS AdoMet AdoMetDC d^c-AdoMet Спермин (Spm) Рис. 1. Метаболизм полиаминов. ArgDC— аргининдекарбоксилаза; ODC— орнитин-декарбоксилаза; AdoMetDC - ^-аденозилметиониндекарбоксилаза; SMO - сперминоксидаза; SSAT— спермин/спермидин-iV1 -ацетилтрансфераза; РАО - полиаминоксидаза; DHS — дезоксигипузинсинтаза; HS - гипузинсинтаза; AdoMet - ^-аденозилметионин; dc-AdoMet - декарбоксилированный ^-аденозилметионин.Метаболизм полиаминов тесно связан с превращениями орнитина (Огп), метионина и &-аденозилметионина (AdoMet) и включает в себя несколько ферментов, ключевыми из которых на путях биосинтеза являются пиридоксаль-5'-фосфат (PLP) зависимая ODC и пируват зависимая й'-аденозилметиониндекарбоксилаза (AdoMetDC), а на путях катаболизма - спермин/спермидин-Л^-ацетилтрансфераза (SSAT) (Рис. 1). Биосинтез и деградация этих короткоживущих (время жизни в клетке около 30 мин) ферментов легко индуцируются, в том числе и в ответ на изменение внутриклеточной концентрации Spm и Spd. Столь быстрая деградация связана с необходимостью оперативно регулировать внутриклеточное содержание полиаминов и объясняется наличием PEST-последовательностей на С-концах этих ферментов. Клетки оснащены системой активного транспорта полиаминов, которая вносит существенный вклад как во внутриклеточное содержание полиаминов, так и в регуляцию их метаболизма.Аналоги полиаминов и регуляторы ферментов их метаболизма — ценный инструмент исследования функций Spm, Spd и агматина (Agm). В настоящей работе описываются удобные методы получения оригинальных аминоокси- и окса-аналогов Spm, создание на их основе новых ингибиторов SSAT, представляющих собой стабильные аналоги промежуточного бисубстратного комплекса ферментативной реакции, а также получение набора набора неизвестных ранее функционально-замещенных алкоксигуанидинов, в том числе и аминооксианалогов Agm, эффективно подавляющих развитие L.donovani.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Симонян, Алина Руслановна

6. выводы

2. Синтезирован набор новых ингибиторов спермин/спермидин-А^'-ацетилтрансферазы (SSAT) на основе СоА, .D-пантотеина и аминооксианалогов полиаминов с использованием ацетонового линкера. Показано, что производные СоА эффективно ингибирует фермент в цМ концентрациях.

3. Предложен общий способ превращения Озамещенных гидроксиламинов в алкокси-гуанидины, позволяющий получать разнообразные функционально-замещенные производные с выходами близкими к количественным.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата химических наук, Симонян, Алина Руслановна, Москва

1. Cohen S.S. A guide to the polyamines. // 1998. N.Y.: Oxford Univers. Press. P. 1-595.

2. Tabor C.W., Tabor H, 1,4-Diaminobutane (putrescine), spermidine, and spermine. // Annu.Rev.Biochem. 1976. V. 45. P. 285-306.

3. Wallace H.M. Targeting polyamine metabolism: a viable therapeutic/preventative solution for cancer? // Expert Opin.Pharmacother. 2007. V. 8. P. 2109-2116.

4. Seller N. Raul F. Polyamines and apoptosis. // J.Cell.Mol.Med. 2005. V. 9. P. 623-642.

5. Matthews H.R. Polyamines, chromatin structure and transcription. // BioEssays. 1993. V. 15. P. 561-567.

6. Rom E., Kahana C. Polyamines regulate the expression of ornithine decarboxylase antizyme in vitro by inducing ribosomal frame-shifting. IIProc.Natl.Acad.Sci. USA 1994. V. 91. P. 3959-3963.

7. Hayashi S., Murakami Y., Matsufuji S. Ornithine decarboxylase antizyme: a novel type of regulatory protein. // Trends BiochenuScL 1996. V. 21. P. 27-30.

8. Bakhanashvili M., Novitsky E., Levy I., Rahav G. The fidelity of DNA synthesis by human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase increases in the presence of polyamines. H FEBSLett. 2005. V. 579. P. 1435-1440.

9. Salvi M„ Toninello A. Effects of polyamines on mitochondrial Ca2+ transport. // BiochinuBiophysActa. 2004. V. 1661. P. 113-124.

10. Berger M.L., Noe Ch.R. Polyamine regulation of the NMDA receptor complex as a target in drug development. // Curr.TopicsMed.Chem. 2002. V. 3. P. 51-64.

11. Nichols C.G., Lopatin A.N. Inward rectifier potassium channels. /I Ann u. Rev. Physiol. 1997. V. 59. P. 171-191.

12. ParkM.H. The post-translational synthesis of a polyamine-derived amino acid, hypusine, in the eukaryotic translation initiation factor 5A (eIF5A). // J.Biochem. 2006. V. 139. P. 161169.

13. Heby O., Persson L., Rentala M. Targeting the polyamine biosynthetic enzymes: a promising approach to therapy of African sleeping sickness, Chagas' disease and leishmaniasis. II Amino Acids. 2007. V. 33. P. 359-366.

14. Rash L.D., Hodgson W.C. Pharmacology and biochemistry of spider venoms. I I Toxicon. 2002. V. 40. P. 225-254.

15. Cohen S.S. A guide to the polyamines. //N.Y.: Oxford University Press, 1998. P. 44-52.

16. Lebreton L., JostE., Carboni В., AnnatJ., Faultier M., Dutartre P., Renaut P. Structure-immunosuppressive activity relationships of new analogues of 15-deoxyspergualin.

17. Structural modification of spermidine moiety. // J.Med.Chem. 1999. V. 42. P. 4749-4763.

18. Gale E.F. The bacterial amino acid decarboxylases. // Adv.Enzytnol. 1946. V. 6. P. 1-32.

19. Kitani Т., Fujisawa H. Purification and properties of ornithine decarboxylase from rat liver. II J.BioLChem. 1983. V. 258. P. 235-239.

20. Kameji Т., Murakami Y., Fujita K., Hayashi S. Purification and some properties of ornithine decarboxylase from rat liver. // Biochim.Biophys.Acta. 1982. V. 717. P. 111-117.

21. Persson L. The specific activity of purified mammalian ornithine decarboxylase is in accordance with the theoretical value of a pure enzyme. II Acta Chem.Scand.B. 1981. V. 35. P. 737-738.

22. McCann P.P., PeggA.E. Ornithine decarboxylase as an enzyme target for therapy. // PharmacoLTher. 1992. V. 54. P. 195-215.

23. Applebaum D.M., Dunlap J.C., Morris D.R. Comparison of the biosynthetic and biodegradative ornithine decarboxylases of Escherichia coli. II Biochemistry. 1977. V. 16. P. 1580-1584.

24. Obenrader M.F., Prouty W.F. Detection of multiple forms of rat liver ornithine decarboxylase. И J.BioLChem. 1977. V. 252. P. 2860-2864.

25. Coleman, C.S., Stanley B.A., Viswanath R., PeggA.E. Rapid exchange of subunits of mammalian ornithine decarboxylase. 11 J.BioLChem. 1994. V. 269. P. 3155-3158.

26. AlmrudJ.J., Oliveira M.A., KernA.D., Grishin N.V., Phillips M. A., Hackert M.L. Crystal structure of human ornithine decarboxylase at 2.1 A resolution: structural insights to antizyme binding. // J.MoLBiol. 2000. V. 295. P. 7-16.

27. Jackson L.K., Baldwin J., Akella R., Goldsmith E.J., Phillips M.A. Multiple active site conformations revealed by distant site mutation in ornithine decarboxylase. // Biochemistry. 2004. V. 43. P. 12990-12999.

28. Jackson L.K., Brooks H.B., Myers D.P., Phillips M.A. Ornithine decarboxylase promotes catalysis by binding the carboxylate in a buried pocket containing phenylalanine 397. // Biochemistry. 2003. V. 42. P. 2933-2940.

29. Hayashi S., Murakami Y Rapid and regulated degradation of ornithine decarboxylase. // BiochenuJ. 1995. V. 306. P. 1-10.

30. Matsufuji S., Matsufuji Т., Miyazaki Y, Murakami Y., Atkins J.F., Gesteland R.F., Hayashi S. Autoregulatory frameshifting in decoding mammalian ornithine decarboxylase antizyme. H Cell. 1995. V. 80. P. 51-60.

31. Murakami Y., Fujita K., Kameji Т., Hayashi S. Accumulation of ornithine decarboxylase-antizyme complex in HMOA cells. И BiochenuJ. 1985. V. 225. P. 689-697.

32. Murakami Y, Matsufuji S., HayashiS., Tanahashi N., TanakaK. Degradation of ornithine decarboxylase by the 26S proteasome. // BiochenuBiophys.Res.Commun. 2000. V. 267. P. 1-6.

33. Driscoll J., Frydman J., Goldberg A.L. An ATP-stabilised inhibitor of the proteasome is a component of the 1500 kDa ubiquitin conjugate-degrading complex. // Proc.Natl.Acad.Scu USA. 1992. V. 89. P. 4986-4990.

34. Murakami Y., Matsufuji S., Kameji Т., Hayashi S., Igarashi К., Tamura Т., Tanaka K., IchiharaA. Ornithine decarboxylase is degraded by the 26S proteasome without ubiquitination. IINature. 1992. V. 360. P. 597-599.

35. Mitchell J.L., Judd G.G., Bareyal-Leyser A., Ling S. Y. Feedback repression of polyamine transport is mediated by antizyme in mammalian tissue-culture cells. // BiochenuJ. 1994. V. 299. P. 19-22.

36. Zhu C., Lang D. W., Cojfino P. Antizyme2 is a negative regulator of ornithine decarboxylase and polyamine transport. // J.BioLChem. 1999. V. 274. P. 26425-26430.

37. Bey P., Danzin C., Van Dorsselaer V., Mamont P., JungM., Tardif C. Analogues of ornithine as inhibitors of ornithine decarboxylase. New deductions concerning the topography of the enzyme's active site. // J.Med.Chem. 1978. V. 21. P. 50-55.

38. Sosnovsky G„ Lukszo J., Gravela E., Zuretti M.F.In the search for new anticancer drugs. 13. Phosphonic and phosphinic analogues of ornithine. // J.Med.Chent. 1985. V. 28. P. 1350-1354.

39. Relyea N., Rando R.R. Potent inhibition of ornithine decarboxylase by p,y,-unsaturated substrate analogs. //BiochenuBiophys.Res.Commun. 1975. V. 67. P. 392-398.

40. Abdel-Monem M.M., Newton N.E., Ho B.C., Weeks C.E. Potential inhibitors of polyamine biosynthesis. 2. a-Alkyl- and benzyl-(+/-)-ornithine. И J.Med.Chem. 1975. V. 18. P. 600604.

41. Skinner W.A., Johansson J. G. Ornithine analogs as potential ornithine decarboxylase inhibitors 1. N-Substituted ornithine derivatives. // J.Med.Chem. 1972. V. 15. P. 427-428.

42. Abdel-Monem M.M., Newton N.E., Weeks C.E. Inhibitors of polyamine biosynthesis. 1. a-methyl-(+/-)-ornithine, an inhibitor of ornithine decarboxylase. // J.Med.Chem. 1974. V. 17. P. 447-451.

43. O'Leary M.H., Herreid R.M. Mechanism of inactivation of ornithine decarboxylase by a-methylornithine. // Biochemistry. 1978. V. 17. P. 1010-1014.

44. Toney M.D., Hohenester E., Cowan S. IF., Jansonins J.N. Dialkylglycine decarboxylase structure: bifunctional active site and alkali metal sites. II Science. 1993. V. 261. P. 756759.

45. HarikS.I., Snyder S.H. Ornithine decarboxylase: inhibition by a-hydrazinoornithine. // Biochim.Biophys.Acta. 1973. V. 327. P. 501-509.

46. Inoue H., Kato Y., Takigawa M., Adachi K., Takeda Y. Effect of DL-a-hydrazino-8-aminovaleric acid, an inhibitor of ornithine decarboxylase, on polyamine metabolism in isoproterenol-stimulated mouse parotid glands. // J.Biochem. 1975. V. 77. P. 879-893.

47. Rahiala E.L., Kekomaki M., Janne J., Raina A., Raiha N.C. Inhibition of pyridoxal enzymes by L-canaline. //Biochim.Biophys.Acta. 1971. V. 227. P. 337-343.

48. Persson L., Khomutov A.R., Khomutov R.M. Feedback regulation of S-adenosylmethionine decarboxylase synthesis. // Biochem.J. 1989. V. 257. P. 929-931.

49. Хомутов P.M., Денисова Г.Ф., Хомутов А.Р., Белостоцкая К.М., Шлосман Р.Б., Артамонова Е.Ю. Аминооксипропиламин — эффективный ингибитор орнитиндекарбоксилазы in vitro и in vivo. II Биоорган.хпмия. 1985. Т. 11. С. 15741576.

50. StanekJ., FreiJ., MettH., Schneider P. Regenass U. 2-Substituted 3-(aminooxy)propanamines as inhibitors of ornithine decarboxylase: synthesis and biological activity. // J.Med.Chem. 1992. V. 35. P. 1339-1344.

51. Dufe V.T., Ingner D., Heby O., Khomutov A.R., Persson L., Al-Karadaghi S. A structural insight into the inhibition of human and Leishmania donovani ornithine decarboxylases by l-amino-oxy-3-aminopropane. // Biochenu J. 2007. V. 405. P. 261-268.

52. Хомутов A.P. Ингибирование ферментов биосинтеза полиаминов субстратоподобными О-замещенными гидроксиламинами. // Биохимия. 2002. V. 67. Р. 1403-1412.

53. MetcalfB.W., Bey P., Danzin C., Jung M. J., Casara P., VevertJ.P. Catalytic irreversible inhibition of mammalian ornithine decarboxylase (E.C.4.1.1.17) by substrate and product analogs. // J^nuChenuSoc. 1978. V. 100. P. 2551-2553.

54. Danzin С., Casara P., Claverie N. MetcalfB. W. a-Ethynyl and a-vinyl analogues of ornithine as enzyme-activated inhibitors of mammalian ornithine decarboxylase. // J.Med.Chem. 1981. V. 24. P. 16-20.

55. Bey P., Gerhart F., Van Dorsselaer V., Danzin C. a-(Fluoromethyl)dehydroomithine and a-(fluoromethyl)dehydroputrescine analogues as irreversible inhibitors of ornithine decarboxylase. II J.Med.Chem. 1983. V. 26. P. 1551-1556.

56. Mamont P.S., Danzin C., Kolb M., Gerhart F., Bey P., Sjoerdsma A. Marked and prolonged inhibition of mammalian ornithine decarboxylase in vivo by esters of (E)-2-(fluoromethyl)dehydroornithine. // BiochenuPharmacol. 1986. V. 35. P. 159-165.

57. Danzin C., Bey P., Schirlin D., Claverie N. a-Monofluoromethyl and a-difluoromethyl putrescine as ornithine decarboxylase inhibitors: in vitro and in vivo biochemical properties. IIBiochenuPharmacol. 1982. V. 31. P. 3871-3878.

58. Danzin C., Casara P. a-Allenyl putrescine, an enzyme-activated irreversible inhibitor of bacterial and mammalian ornithine decarboxylases. IIFEBS Lett. 1984. V. 174. P. 275-278.

59. Bey P., Bolkenius F.N., Seller N., Casara P. N-2,3-Butadienyl-l,4-butanediamine derivatives: potent irreversible inactivators of mammalian polyamine oxidase. // J.Med.Chem. 1985. V. 28. P. 1-2.

60. Danzin C., Casara P., Claverie N., Grove J. Effects of the enantiomers of 5-hexyne-l,4-diamine on ODC, GAD and GABA-T activities in the rat. II BiochenuPharmacol. 1983. V. 32. P. 941-942.

61. RecseiP., Snell E. Pyruvoyl enzymes. II Annu.Rev.Biochenu 1984. V. 53. P. 357-387

62. Hackert M.L., PeggA.E. Pyruvoyl-dependent Enzymes. // Comprehensive Biological. Catalysis Sec G, ed. M. L. Sinnott, Academic Press Ltd. 1997. V. 3. P. 201-216.

63. PajunenA., CrozatA., Janne O.A., Ihalainen R., Laitinen P.H., Stanley В., Madhubala R„ PeggA.E. Structure and regulation of mammalian S-adenosylmethionine decarboxylase. // J.BioLChem. 1988. V. 263. P. 17040-17049.

64. PeggA.E., McCann P.P. S-adenosylmethionine decarboxylase as an enzyme target for therapy. // PliarmacoLTher. 1992. V. 56. P. 359-377.

65. PeggA.E., XiongH., FeithD., ShantzL.M. S-adenosylmethionine decarboxylase: structure, function and regulation by polyamines. //BiochenuSoc.Trans. 1998 V. 26. P. 580-586.

66. TolbertD. W., Zhang Y., Cottet S.E., BennettE.M. EkstromJ.L., PeggA.E., EalickS.E. Mechanism of human S-adenosylmethionine decarboxylase proenzyme processing as revealed by the structure of the S68A mutant. //Biochemistry. 2003. V. 42. P. 2386-2359.

67. Xiong H, Pegg A.E. Mechanistic studies of the processing of human S-adenosylmethionine decarboxylase proenzyme. Isolation of an ester intermediate. // J.BioLChem. 1999. V. 274. P. 35059-35066.

68. Tekwani B.L., Bacchi C.J., Secrist J.A.III, PeggA.E. Irreversible inhibition of S-adenosylmethionine decarboxylase of Trypanosoma brucei brucei by S-adenosylmethionine analogues. // BiochenuPharmacol. 1992. V. 44. P. 905-911.

69. PeggA.E. S-adenosylmethionine decarboxylase: a brief review. // Cell BiochenuFunct. 1984. V. 2. P. 11-15.

70. Tolbert W.D., EkstromJ.L., Mathews LI, Secrist J.A. Ill, Kapoor P., PeggA.E., EalickS.E. The structural basis for substrate specificity and inhibition of human S-adenosylmethionine decarboxylase. //Biochemistry. 2001. V. 40. P. 9484-9494.

71. Stanley B.A., PeggA.E. Amino acid residues necessary for putrescine stimulation of human S-adenosylmethionine decarboxylase proenzyme processing and catalytic activity. // J.BioLChem. 1991. V. 266. P. 18502-18506.

72. Diaz E„ Anton D.L. Alkylation of an active-site cysteinyl residue during substrate-dependent inactivation of E.coli S-adenosylmethionine decarboxylase. II Biochemistry. 1991. V. 30. P. 4078-4081.

73. McCann P.P., PeggA.E., Sjoerdsma A. (eds) Inhibition of polyamines metabolism: biological significance and basis for new therapies. // Academic Press. New York. 1987.

74. Pegg A. E. Inhibitors of ornithine and S-adenosylmethionine decarboxylases. // The Physiology of Polyamines. CRC Press. Boca Raton, FL 1989. P. 303-314.

75. Janne J., Alhonen L., Leinonen P. Polyamines: from molecular biology to clinical applications. UAnn.Med. 1991. V. 23. P. 241-259.

76. PeggA.E. Inhibition of mammalian S-adenosylmethionine decarboxylase activity by 1,1'-((methylethanediyKdene)-dinitrilo)6w(3-aminoguanidine). // J.Biol.Chem. 1978. V. 253. P. 539-542.

77. Hibasami H„ Tsukada Т., Maekawa S„ Nakashima K. Methylglyoxal 6w(butylamidino-hydrazone), a new inhibitor of polyamine biosynthesis that simultaneously inhibits ornithine decarboxylase, adenosylmethionine decarboxylase and spermidine synthase. //

78. Biochem.Pharmacol. 1986. V. 35. P. 2982-2983.

79. Regenass U., Caravatti G., MettH., StanekJ., Schneider P., Midler M., Matter A., Vertino P., Porter C. W. New S-adenosylmethionine decarboxylase inhibitors with potent antitumor activity. II Cancer Res. 1992. Y. 52. P. 4712-4718.

80. StanekJ., Caravatti G., Capraro H.G., FuretP., MettH., Schneider P., Regenass U. S-adenosylmethionine decarboxylase inhibitors: new aryl and heteroaryl analogues of methylglyoxal fe(guanylhydrazone). // J.Med.Chem. 1993. V. 36. P. 46-54.

81. StanekJ., Caravatti G., FreiJ., FuretP., MettH., Schneider P., Regenass U. 4-Amidinoindan-l-one 2'-amidinohydrazone: a new potent and selective inhibitor of S-adenosylmethionine decarboxylase. // J.Med.Chem. 1993. V. 36. P. 2168-2171.

82. Хомутов A.P., Хомутов P.M. Серосодержащие гидроксиламины для ингибирования ферментов и модификации нуклеиновых кислот. // Биорган.химия. 1986. Т. 12. С. 1662-1674.

83. Хомутов P.M., Завалова Л.Л., Сырку В.И., Артамонова Е.Ю., Хомутов А.Р. Эффективный ингибитор декарбоксилазы 8-аденозилметионина. // Биорган.химия. 1983. Т. 9. С. 130-131.

84. Артамонова Е.Ю., Хомутов А.Р., Завалова Л.Л., Хомутов P.M. Необратимое торможение декарбоксилазы S-аденозилметионина аминооксианалогами продукта ферментативной реакции. // Биоргап.химия. 1986. Т. 12. С. 206-212.

85. Ко lb M., Barth J. Synthesis of 5'-(3-aminooxypropyl)amino.-5'-deoxyadenosine. // Liebigs Ann.Chem. 1985. P. 1035-1040.

86. PeggA.E., Jones D.B., Secrist J.A.III. Effect of inhibitors of S-adenosylmethionine decarboxylase on polyamine content and growth of L1210 cells. // Biochemistry. 1988. V. 27. P. 1408-1415.

87. Pankaskie M., Abdel-Monem M.M. Inhibitors of polyamine biosynthesis. 8. Irreversible inhibition of mammalian S-adenosyl-Z-methionine decarboxylase by substrate analogues. // J.Med.Chem. 1980. V. 23. P. 121-127.

88. Danzin C., Marchal P., Casara P. Irreversible inhibition of rat S-adenosyl methionine decarboxylase by 5'-((Z)-4-amino-2-butenyl.methylamino)-5'-deoxyadenosine. // BiochenuPItarmacol. 1990. V. 40. P. 1499-1503.

89. Wu Y., Woster P.Л/. 5-(5,-deoxy-5,-adenosyl)-l-ammonio-4-(methylsulfonio)-2-cyclopentene: A potent, enzyme-activated irreversible inhibitor of S-adenosylmethionine decarboxylase. H J.Med.Chem. 1992. V. 35. P. 3196-3201.

90. Wu Y.O., Woster P.M. Irreversible inhibition of human S-adenosylmethionine decarboxylase by the pure diastereomeric forms of S-(5'-deoxy-5'-adenosyl)-l-ammonio-4-methyl-sulfonio-2-cyclopentene (AdoMac). // BiochenuPharmacol. 1995. V. 49. P. 1125-1133.

91. Rodriguez E.C., Marcaurelle L.A., Bertozzi C.R. Aminooxy-, hydrazide, and thiosemicarbazide-functionalized saccharides: versatile reagents for glycoconjugate synthesis. // J.Org.Chem. 1998. V. 63. P. 7134-7135.

92. Theilacker W„ Ebke K. Darstellung von O-alkyl-hydroxylaminen. И Angew.Chem. 1956. V. 68. P. 303.108Хомутов P.M., Северин E.C., Гнучев H.B., Деревянко Т.Я. Синтез некоторых О-замещенных гидроксиламинов. // Изв. АН СССР. Сер.хим. 1967. С. 1820-1823.

93. ChoongI.C., Ellman J.A. Synthesis of alkoxylamines by alkoxide animation with 3,3'-di-tert-butyloxaziridine. // J.Org.Chem. 1999. V. 64. P. 6528-6529.

94. Hudson R.F., Lawson A. J., RecordKA.F. Oxaziridinyl free radicals. // J.ChenuSoc.Chem. Commun. 1975. P. 322-323.

95. HughesD.L. Organic Reactions. //N-Y.: John Wiley & Sons Inc 1992. V. 42. P. 337-636.

96. Grochowski E., JurczakJ. A new synthesis of 0-alkylhvdroxylamines. // Synthesis. 1976. P.682-683.

97. Maillard L. Т., BenohoudM, Durand P., BernardBadet B. A new supported reagent for the parallel synthesis of primary and Oalkyl hydroxylamines through a base-catalyzed Mitsunoby reaction // J.Org.Chem. 2005. V. 70. P. 6303-6312.

98. Su S., Giguere J.R., Schaus S.E., Porco J.A. Jr. Synthesis of complex alkoxyamines using a polymer-supported jV-hydroxyphthalimide. // Tetrahedron. 2004. V. 60. P. 8645-8657.

99. Trevisiol E., Dejrancq E., Lhomme J., Laayoun A., Cros P. Synthesis of methylketone containing nucleoside triphosphates for RNA labelling. // Tetrahedron. 2000. V. 56. P. 6501-6510.

100. Trevisiol E., RenardA., Dejrancq E., Lhomme J. The oxyamino-aldehyde coupling reaction: An efficient method for the derivatization of oligonucleotides. // Tetrahedron Lett. 1997. V. 38. P. 8687-8690.

101. Muddana S.S., Peterson B.R. Facile synthesys of CIDs: Biotinylated estrone oximes efficiently heterodimerize estrogen receptor and streptavidin proteins in yeast three hybrid systems. // Org.Lett. 2004. V. 6. P. 1409-1412.

102. Хомутов A.P. и соавт. Гидрохлорид 4-аминооксибутиламида биотина как реагент для биотинилирования нуклеиновых кислот и белков. Авт. свидетельство СССР №1591458, приоритет от 09.12.1988.

103. Zon J., Amrhein N. Inhibitors of phenylalanine ammonia-lyase: 2-aminoindan-2-phosphonic acid and related compounds. //Liebigs Ann.Chem. 1992. P. 625-628.

104. Lee M.-R., Lee J., BaekB.-H., Shin I. The first solid-phase synthesis of oligomeric a-amino-oxy peptides IISyn.Lett. 2003 P. 325-328.

105. Kafarski P., LejczakB. Biological activity of aminophosphonic acids. // Phosphorus Sulfur and Silicon. 1991. V. 63. P. 193-215.

106. Хомутов A.P., Хомутов P.M. Синтез аминооксифосфоновых кислот и их эфиров. // Изв. АН СССР Сер.хим. 1986. С. 1202-1204.

107. LaCoste A.M., Dumora С., ZonJ. Aminooxyphosphonates as slow binding inhibitors of aspartate and alanine aminotransferases from porcine heart. // J.Enzyme Inhibition. 1993. V. 7. P. 237-248.

108. Drescher M, Hammerschmidt F. Enzymes in organic chemistry 5: first and chemo-enzymatic synthesis of a-aminooxyphosphonic acids of high enantiomeric excess. // Tetrahedron. 1997. V. 53. P. 4627-4636.

109. Burgess K., Gibbs R.A., Metzker M.L., Raghavachari R. Synthesis of an oxyamide linked nucleotide dimer and incorporation into antisense oligonucleotide sequences. // J.ChenuSoc. Commun. 1994. P. 915-916.

110. Davies L.C. Synthesis of 5'-O-aminothymidine and 5'-deoxy-5'-hydrazinothymidine, novel nucleoside derivatives. // Nucleosides Nucleotides. 1985. V. 4. P. 395-400.

111. Vasseur J.J., Debart F.,Sanghi S.Y., Cook P.D. Oligonucletides: Synthesis of a novel methylhydroxylamine-linked nucleoside dimer and its incorporation into antisense sequence. II J^inuChenuSoc. 1992. V. 114. P. 4006-4007.

112. PerbostM., Hoshiko Т., Morvan F„ Swayze E., Griffey R.H., Sanghvi Y.S. Synthesis of 5'-0-amino-2'-deoxypyrimidine and purine nucleosides: building blocks for antisense oligonucleosides. II J.Org.Chem. 1995. V. 60. 5150-5156.

113. KarpeiskyA., Gonzalez C., Burgin A.B., Beigelman L. Highly efficient synthesis of 2'-ami-no nucleosides and their incorporation in hammerhead ribozymes. // Tetrahedron Lett. 1998. V. 39. P. 1131-1134.

114. Sal о H., Hakala H., Prakash T.P., Kawasaki A., Manoharan M., Lonnberg H. Aminooxy functionalized oligonucleotides: preparation on-support derivatization and postsynhetic attachment to polymer support. // Bioconjug.Chem. 1999. V. 10. P. 815-823.

115. Tronchet J.M.J., Zosimo-Landolfo G., Galland-Barrera G. Dolatshahi N. Some protected 0-amino sugars and their derivatives. // Carbohydrate Res. 1990. V. 204. P. 145-156.

116. Waldstein M.E. Uber die darstellung von O-subsituren Hydroxylaminen. // Liebigs Ann.Chem. 1876. V. 181. P. 384-391.

117. BemhardS.A., Shalitin Y., Tashjan Z.H. The Reaction of Formohydroxamic Acid with Acyl Derivatives in Neutral Aqueous Solution. II J.Am.Chem.Soс. 1964. V. 86. P. 4406-4414.

118. Jencks W.P. The Reaction of Hydroxylamine with Activated Acyl Groups. Mechanism of the Reaction. // J.Am.Chem.Soc. 1958. V. 80. P. 4585-4588.

119. Pomeroy J.H., Craig C.A. Two new syntheses of nitriles from aldehydes, using 0,jV-bis-(trifluoroacetyl)-hydroxylamine or trifluoroacetohydroxamic acid. // J.Am.Chem.Soc. 1959. V. 81. P. 6340-6341.

120. Хаузер Ч., Ренфроу В. Синтезы органических препаратов, (ред. Казанский Б.А.). // 1949. Т. 2. С. 87.

121. Stolberg M.A., Mosher W.A., Wagner-Jauregg T. Synthesis of a Series of Vicinally Substituted Hydroxamic Acids. // J.Am.ChenuSoc. 1957. V. 79. P. 2615-2617.

122. Tandon S.G., Bhattachaiya S.C. Preparation and Properties of Some JV-Aryl Hydroxamic Acids. // J.ChenuEng.Data. 1962. V. 7. P. 553-555.

123. SmrtJ., BeranekJ., HorakM. Synthesis of 4-amino-3-isoxazolidinone. // Collect.Сhzech. ChenuComnu 1959. V. 24. P. 1672-1675.

124. Jones D.S., Hammaker J.R., Tedder M.E. A convient synthesis of iV-(/er?-butyloxycarbo-nyl)aminooxy ethers. // Tetrahedron Lett. 2000. V. 41. P. 1531-1533.

125. KingH. Zyo-Oxazolidine and tetrahydro-1: 2-wooxazine. // J.ChenuSoc. 1942. P. 432-433.

126. Testa E. 0: A'-Disubstituted hydroxylamines. V. Synthesis and properties of the a-aminooxycarboxylic acids, analogs of natural a-aminocarboxylic acids. // Helv.chim.acta. 1963. V. 46. P. 766-780.

127. Bauer L., SureshKS. S-co-(aminooxy)alkyl.isothiuronium salts, co,co'-bis(aminooxy)-alkanes and related compounds. // J.Org.Chem. 1963. V. 28. P. 1604-1608.

128. Kasztreiner E., Szilagyi G., KosaryJ., Hyszti Zs. Synthesis of O-substituted hydroxylamines. II Acta Chim. (Budapest). 1975. V. 84. P. 167-180.

129. Lin P.K., Maquire N.M., Brown D.M. Synthesis of novel oxa-isosteres of spermidine and spermine. // Tetrahedron Lett. 1994. V. 35. P. 3605-3608.

130. BorekE., Clarke H. Compounds related to canaline and canavanine. // J.Biol.Chem. 1938. V. 125. P. 479-494.

131. ХомутовP.M., КарпейскийМ.Я., Северин E.С. Синтез тетрагидрооксазин-1,2-она-3. // Изв. АН СССР. Сер.хим. 1962. С. 1074-1076.

132. Block P.J. (±)-(Isopropylidenaminooxy)propionic acid. // J.Org.Chem. 1965. V. 30. P. 1307-1308.

133. Exner О. II ChenuListy. 1956. V. 50. P. 779-790.и!ч ? *4 • '

134. Jones L. W., SneedM.C. A Study of p-benzylformhydroxamic acid. // J.Am.ChenuSoc.1. V \ 4 . ^ * V у■ Ш'ЪУ. 39. P. 674-679.

135. Yamada T. The Determination of Oxime Nitrogen. If Acta ChenuScand. 1955. V. 9. P. 349' 351.

136. Bruson H., Biener T. The Chemistry of Acrylonitrile. IV. Cyanoethylation of Active Hydrogen Groups. // J.Am.ChenuSoc. 1943. V. 65. P. 23-25.

137. Hershberg E.B. Regeneration of steroid ketones from their semicarbazones with pyruvic acid. // J.Org.Chem. 1948. V. 13. P. 542-546.

138. Engel C.R. Steroids and Related Products. V. The Synthesis of 1 l-Dehydro-17a-methylcorticosterone. /IJ.Am.Chem.Soc. 1956. V. 78. P. 4727-4733.

139. Slates H.L., Wendler N.L. Transformations of the Cortical Side Chain. Oxygen Elimination at Cn and C2\. II J.Org.Chem. 1957. V. 22. P. 498-500.

140. Хомутов P.M. Синтез О-замещенных гидроксиламинов. //Журн.Общ.Химии. 1961. Т. 31. С. 1992-1995.

141. Хомутов P.M., Хомутов А.Р. Меркурированные (9-замещенные гидроксиламины. // Изв. АН СССР, Сер.хим. 1985. С. 2649-2650.

142. Хомутов P.M., Карпейский М.Я., Северин Е. С Синтез и некоторые реакции р-фминооксиаланина. II Изв. АН СССР. Сер.хим. 1964. С. 680-685.

143. Хомутов P.M., Хомутов А.Р. Синтез аминооксианалогов путресцина и спермидина. // Биоорг.химия. 1989. Т. 15. С. 698-703.

144. Bauer L., Suresh K.S., Ghosh В.К. Synthesis of (o-(Aminooxy)alkanethiols. // J.Org.Chem. 1965. V. 30. P. 949-951.

145. Khomutov A.R., Vepsalainen J., Shvetsov A.S., Hyvdnen Т., Keinanen T.A., Pustobaev V.N., Eloranta Т.О., Khomutov R.M. Synthesis of hydroxylamine analogues of polyamines. // Tetrahedron. 1996. V. 52. P. 13751-13766.

146. Casero, R.A. and Woster P.M. Terminally alkylated polyamine analogues as chemotherapeutic agents. // J.Med.Chem. 2001. V. 44 P. 1-26.

147. Wang Y., Deverewc W„ Woster P.M., Murray-Stewart Т., Hacker A., Casero R.A. Cloning and characterization of a human polyamine oxidase that is inducible by polyamine analogue exposure. // Cancer Res. 2001. V. 61. P. 5370-5373.

148. Murray-Stewart Т., Wang Y., Devereux W., Casero R.A. Cloning and characterization of multiple human polyamine oxidase splice variants that code for isoenzymes with different biochemical characteristics. // Biochem.J. 2002. V. 368. P. 673-677.

149. WangY., Murray-Stewart Т., Devereux W., Hacker A., Frydman В., Woster P.M., Casero R.A. Properties of purified recombinant human polyamine oxidase, PAOhl/SMO. // Biochem.Biophys.Res.Com. 2003. V. 304. P. 605-611.

150. Federico R., Leone L., Botta M., Binda C„ Angelini R., Venturini G., Ascenzi P. Inhibition of pig liver and Zea mays L. polyamine oxidase: a comparative study. // J.Enzyme Inhib. 2001. V. 16. P. 147-155.

151. Binda C., Angelini R., Federico R., Ascenzi P., MatteviA. Structural bases for inhibitor binding and catalysis in polyamine oxidase. // Biochemistry. 2001. V. 40. P. 2766-2776.

152. Templeton D.M., Sarkar В. Fletcher-Powell minimization of analytical potentiometric data by microcomputer: application to the Cu(II) complexes of biological polyamines. // Can.J.Chem. 1985. V. 63. P. 3122-3128.

153. Vujcic S., Diegelman P., Bacchi C.J., Kramer D.L., Porter C. W. Identification and characterization of a novel flavin-containing spermine oxidase of mammalian cell origin. // BiochenuJ. 2002. V. 367. P. 665-675.

154. Wolfenden R. Transition state analog inhibitors and enzyme catalysis. // Annu.Rev.Biophys.Bioeng. 1976. V. 5. P. 271-306.

155. Fukuyama Т., Jow Ch.K., Cheung M. 2-Nitrobenzenesulfonamides and 4-nitrobenzenesulfonamides: Exceptionally versatile means for preparation of secondary amines and protection of amines. // Tetrahedron Lett. 1995. V. 36. P. 6373-6374.

156. Eloranta Т.О., Khomutov A.R., Khomntov R.M., Hyvonen T. Aminooxy analogues of spermidine as inhibitors of spermine synthase and substrates of hepatic polyamine acetylating activity. // J.Biochenu(Tokyo). 1990. V. 108. P. 593-598.

157. Rosenthal G.A., Thomas D. Radiochemical synthesis of DL-canaline and the colorimetric assay of canaline. //AnaLBiochem. 1984. V. 140. P. 246-249.

158. Григоренко H.A., Вепсалайнен Й., Ярвинен А., Кейнанен Т.А., Алхонен Л., Янне Ю., Хомутов А.Р. Новый синтез а-метил и а,а'-диметилспермина. //Биооргап.химия. 2005. Т. 31. С. 200-205.

159. Erwin В., Persson L., PeggA.E. Differential inhibition of histone and polyamine acetylases by multisubstrateanalogues. //Biochemistry. 1984. V. 23. P. 4250-4255.

160. Roblot G„ Wylde R., Martin A., Parello J. Regioselective synthesis of inhibitors of histone acetyl transferase covalently linking spermidine to the S-terminus of coenzyme-A and fragments // Tetrahedron. 1993. V. 29. P. 6381-6398.

161. Rosenthal G.A., Downum K.R., Mattler J.E. Radiochemical synthesis of L-guanidinooxy-14C.canavanine. // AnaLBiochem. 1983. V. 133. P. 277-282.

162. Frankel M„ Knobler Y., Zvilichovsky G. Synthesis of ДZ-canavanine. // J.ChenuSoc. 1963. P. 3127-3130.

163. Feichtinger K., ZapfC., Sings H.L., Goodman M. Diprotected triflylguanidines: a new class of guanidinylation reagents. //J.Org.Cliem. 1998. V. 63. P. 3804-3805.

164. Antopolsky M„ AzhayevA. Stepwise solid-phase synthesis of peptide-oligonucleotide phosphorothioate conjugates employing Fmoc peptide chemistry. // Tetrahedron Lett. 2000. V. 47. P. 9113-9117.

165. Law S.K., Minich T.M., Levine R.P. Covalent binding efficiency of the third and fourth complement proteins in relation to pH, nucleophilicity, and availability of hydroxyl groups. //Biochemistry. 1984. V. 23. P. 3267-3272.

166. Reis D.J., Regunathan S. Is agmatine a novel neurotransmitter in brain? // Trends PharmacoLSci. 2000. V. 21. P. 187-193.

167. Grill о M.A., Colombatto S. Metabolism and function in animal tissues of agmatine, a biogenic amine formed from arginine. // Amino Acids. 2004. V. 26. P. 3-8.

168. Raasch W„ Regunathan S., Li G. Reis D.J. Agmatine, the bacterial amine, is widely distributed in mammalian tissues. // Life Sci. 1995. V. 56. P. 2319-2330.

169. Molderings G.J., HeinenA., Menzel S., Gothert,M. Exposure of rat isolated stomach and rats in vivo to (14)C.agmatine: accumulation in the stomach wall and distribution in various tissues. // Fimd.Clin.Pharmacol. 2002. V. 16. P. 219-225.

170. Salvi M„ Battaglia V., Mancon M., Colombatto S., Cravanzola C., Calheiros R., Marques M.P.M., Grillo M.A., Toninello A. Agmatine is transported into liver mitochondria by a specific electrophoretic mechanism. И Biochem. J. 2006. V. 396. P. 337-345.

171. Croft SL, Sundar S, Fairlamb AH. Drug resistance in leishmaniasis. // Clin.MicrobioLRev. 2006. V. 19. P. 111-126.

172. Singh S., Mukherjee A., Khomutov A.R., Persson L., Heby O., Chatterjee M., Madhubala R. Antileishmanial effect of 3-aminooxy-l-aminopropane is due to polyamine depletion. // Antimicrob.Agents Chemother. 2007. V. 51. P. 528-534.

173. Dabir S., Dabir P., Somvanshi B. Purification, properties and alternate substrate specificities of arginase from two different sources: Vigna catjang cotyledon and buffalo liver. // Int. J.BiolSci. 2005. V. 1. P. 114-22.

174. Sastre M., Galea E., Feinstein D., Reis D.J., Regunathan S. Metabolism of agmatine in macrophages: modulation by lipopolysaccharide and inhibitory cytokines. // Biochem. J. 1998. V. 330. P. 1405-1409.

175. Хомутов А.Р., Джавахия В.Г., Воинова Т.М., Ермолинский Б.С., Хомутов P.M. Аминооксианалог путресцина ингибирует поликетидный путь биосинтеза природных соединений. // Биоорган.химия. 1989. Т. 15. С. 706-709.

176. Khomutov A.R., Shvetsov A.S., Vepsalainen J.J., Kritzyn A.M. Novel acid-free cleavage of iV-(2-hydroxyarylidene) protected amines. // Tetrahedron Lett. 2001. V. 42. P. 2887-2889.

177. Титце JI., Айхер Т. Препаративная органическая химия: Реакции и синтезы в практикуме органической химии и научно-исследовательской лаборатории. Пер. с нем. М.: Мир, 1999. С. 120.

178. Ellman G.L. Tissue sulfhydryl groups. // Arch.BiochenuBiophys. 1959. V. 82. P. 70-77.

Информация о работе

Симонян, Алина Руслановна
кандидата химических наук
Москва, 2008
ВАК 03.00.03

Диссертация

Новые гидроксиламинсодержащие аналоги агматина и биогенных полиаминов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы