Физиологическое значение полиаминов в репродуктивной функции мужчин в норме и при её нарушениях

Плосконос, Мария Вячеславовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Физиологическое значение полиаминов в репродуктивной функции мужчин в норме и при её нарушениях
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Физиологическое значение полиаминов в репродуктивной функции мужчин в норме и при её нарушениях"

На правах рукописи

Плосконос Мария Вячеславовна

ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ПОЛИАМИНОВ В РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ МУЖЧИН В НОРМЕ И ПРИ ЕЁ НАРУШЕНИЯХ

03.00.13 -физиология

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Мл***/'

Астрахань - 2004

Работа выполнена на кафедре общей и биоорганической химии Астраханской государственной медицинской академии

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Николаев А.А. Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, доцент Кондратенко Е.И. доктор медицинских наук, профессор Тризно Н.Н. Ведущая организация:

Российский государственный медицинский университет

Защита состоится « (Х'Ш^Сс/ 2004 г. в ш часов на заседании диссертационного совета ДМ "212.009.01 при Астраханском государственном университете по адресу: 414000, Астрахань, пл. Шаумяна, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Астраханского государственного университета по адресу: 414056, Астрахань, ул. Татищева, 20-а.

Автореферат разослан « -Л^Ьс-д" 2004 г.

Учёный секретарь регионального диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Бесплодие является насущной медико-социальной проблемой. [Пшеничникова Т.Я и др., 1994, Овсянникова Т.В. и др., 1998, Евдокимов В.В., 1999]. В настоящее время, согласно данным ВОЗ, бесплодием страдают около 15 - 18 % супружеских пар. Причём более чем в половине случаев это связано с нарушением репродуктивной функции мужчины [Евдокимов В.В., 1999].

Наиболее распространённой патологией мужской репродуктивной функции является состояние субфертильности [Николаев А.А., 1994]. Показатели спермограммы таких мужчин занимают промежуточные между нормой и патологией значения.

В обеспечении становления функциональной зрелости сперматозоидов определённую роль играют компоненты семенной плазмы, которые оказывают влияние на сперматогенез и созревание сперматозоидов [Устинкина Т.И. и др., 1987, Николаев А.А., Аншакова Н.И., 1991, Евдокимов В.В. и др., 1995, Липатова Н.А., 1998, Неймарк А.И. и др., 1998, Николаев А.А. и др., 1998, Луцкий Д.Л., Николаев А.А., 1999, Луцкий Д.Л., Николаев А.А., 2000, Терентьев А.А., Таги-рова А.К., 2000]. До настоящего времени не выяснена роль полиаминов в семенной жидкости, в которой их содержание у различных видов животных и у человека достаточно высокое [Полунин А.И. и др., 2001, Lynch MJ. et. al., 1997].

В литературе встречаются отдельные работы, посвященные содержанию полиаминов в спермоплазме, но связи между их уровнем и такими характеристиками эякулята как объём, подвижность, жизнеспособность и морфология сперматозоидов остаётся, не выяснена.

Учитывая важную роль, которую играют полиамины в обмене нуклеиновых кислот и, в частности ДНК, нормальный метаболизм этих соединений необходим для формирования оплодотворяющих свойств спермы.

Возможно, именно исследование спермоплазмы и определение содержания в ней полиаминов в норме и при различных патологических состояниях позволило бы не только расширить наши представления о молекулярных механизмах становления функциональной зрелости сперматозоидов и истинных причинах нарушения репродуктивной функции у мужчин, но и обеспечить своевременную диагностику, определить тактику терапии, возможно, наметить новые пути лечения, осуществить контроль над

уще

Wwp

БИБЛИОТЕКА С-ПетерА

ОЭ W>7«'- /^j

Цель исследования: Провести определение уровня полиаминов спермоплазмы в норме, оценить функциональную роль полиаминов спермоплазмы в процессе фертилизацин и при различных нарушениях фертилыюсти.

Основные задачи исследования:

1. Разработать простой, доступный и чувствительный способ количественного определения полиаминов в спермоплазме.

2. Изучить качественный и количественный полиаминный состав спермоплазмы здоровых мужчин.

3. Изучить изменение уровня и соотношения полиаминов спермо-плазмы при различных нарушениях фертильности.

4. Исследовать изменение спектра полиаминов спермоплазмы при различных нарушениях фертильности.

5. Выявить взаимосвязь физико-химических, морфологических и функциональных показателей оплодотворяющей способности эя-кулятов мужчин с уровнем и соотношением полиаминов спермо-плазмы.

Научная новизна.исследования: Впервые выявлена взаимосвязь основных показателей оплодотворяющей способности эякулятов мужчин с уровнем и соотношением полиаминов спермоплазмы. Изучено участие полиаминов спермоплазмы в формировании оплодотворяющей способности эякулята. Впервые изучено изменение уровня, спектра и соотношения полиаминов спермоплазмы при различных нарушениях репродуктивной функции мужчин.

Научно-практическая значимость работы: Предложен и применён простой, доступный и чувствительный способ количественного определения полиаминов, который может быть использован для прямой оценки уровня полиаминов в спермоплазме в норме и при патологии.

Установлен уровень и соотношение спермина и спермидина в спермоплазме в норме и при различных нарушениях репродуктивной функции у мужчин.

Выявлена связь между уровнем полиаминов спермоплазмы и различными физиологическими характеристиками эякулята.

Изучено влияние спермина и спермидина спермоплазмы на процесс становления функциональной зрелости сперматозоидов.

Апробация работы: Результаты работы представлены и доложены на: Ш конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, СГМУ, 2002 г.); V Всероссийской научной конференции «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия» (Астрахань, 2002 г.); VI Международной научной конференции «Эколого-биологические проблемы Бассейна Каспийского моря» (Астрахань, 2003 г.); Итоговых научно-практических конференциях Астраханской государственной медицинской академии (Астрахань, 2002, 2003 г.); Международном форуме «Аналитики и Аналитика» (Воронеж, 2003 г.); V Общероссийской конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Кисловодск, 2004 г.).

Публикации и изобретения: По теме диссертации опубликованы 12 научных работ; получен 1 патент на изобретение и 1 свидетельство об официальной регистрации программы для ПЭВМ; поданы 2 заявки на изобретения.

Положения, выносимые на защиту.

1. Разработанный достоверный и доступный в применении способ количественного определения полиаминов в спермоплазме, может быть использован для исследования функции оплодотворения и для диагностики её нарушений.

2. Определено содержание спермина и спермидина и соотношение между ними в спермоплазме фертильных мужчин.

3. Выявлена тесная связь уровня полиаминов спермоплазмы с концентрацией сперматозоидов в эякуляте и положительная корреляция уровня спермидина со скоростью сперматозоидов и числом их активно подвижных форм, установлено, что спермин в физиологических концентрациях препятствует агглютинации и агрегации сперматозоидов, а превышение физиологического уровня спермина вызывает снижение подвижности и увеличение числа мёртвых сперматозоидов.

4. Обнаружено изменение уровня полиаминов спермоплазмы и соотношения между ними при различных нарушениях фертильно-сти.

Объём н структура диссертации: Диссертация изложена на 139 страницах, содержит 19 таблиц и 32 рисунка. Она состоит из введения; четырёх глав, включающих обзор литературы, описание методов исследования, изложения фактического материала и обсуждения полученных результатов; заключения; выводов, практических реко-

мендаций; указателя использованной литературы. Библиографический указатель содержит 238 источников, из них 145 на иностранных языках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами нашего исследования были эякулят и спермоплазма фертильных и субфертильных мужчин.

Материал исследования (сперма мужчин) разрабатывался поэтапно. На первом этапе проводили исследования цельной спермы, определяя основные функциональные параметры и цитологические характеристики. На втором этапе начинали исследование спермоплаз-мы. Спермоплазму получали центрифугированием эякулята при 12000 об/мин в течение 15 минут, надосадочную жидкость отделяли. Образцы хранили в морозильной камере при -18°С.

Было исследовано 17 образцов спермы фертильных мужчин в возрасте 24-35 лет, состоящих в браке и имеющих детей не старше 3 лет и 78 образцов спермы мужчин с разными формами субфертильно-сти. Средний возраст обследованных субфертильных пациентов составил 28,2±0,3 года. Длительность бесплодного брака до обращения к врачу варьировала в широких пределах и составляла в среднем 3,3+0,2 года.

Измерение показателей стандартной спермограммы проводили по общепринятым методикам [«Руководство ВОЗ», 2002], используемым как в нашей стране, так и в других странах. Оценивались физико-химические, морфологические и функциональные показатели оплодотворяющей способности эякулята: его объём, время разжижения, вязкость, рН, концентрация и скорость сперматозоидов, процентное содержание активно подвижных и неподвижных сперматозоидов, процентное содержание патологических форм сперматозоидов, наличие агглютинатов и агрегатов, лейкоцитов, мёртвых сперматозоидов, сперматозоидов с цитоплазматической каплей и клеток сперматогенеза. Проводилось так же расширенное цитологическое исследование сперматозоидов: исследовалась патология головки (макро, микро, вытянутая, круглая, гиперхромная, аморфная, 2-х головые и Другие), патология шейки (вытянутая и под углом), патология хвоста (2-хвостые, бесхвостые, другая патология хвоста).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Способ количественного определения полиаминов в

спермоплазме

Содержание полиаминов - спермина и спермидина - в спермоплазме мы определяли по разработанному нами способу (патент на изобретение № 2225981 приоритет от 28.02.02 г.), принцип которого заключался в экстрагировании полиаминов из спермоплазмы н-бутанолом, с последующим их фракционированием методом электрофореза в 1,5 % агаровом геле в 0,1 М лимоннокислом буфере с рН=3,4 при напряжении 200 В и силе тока 40 мА в течение 1 часа. Окрашивали электрофореграммы раствором нингидрина и высушивали. Полиамины определяли в виде розовато-фиолетовых пятен, а идентификацию фракций полиаминов проводили с помощью стандартных препаратов солянокислых производных спермина и спермидина (спермип-тетрагидрохлорида и спермидинтригидрохлорида («Fluka», Швейцария)).

Количественное определение полиаминов проводили после сканирования электрофореграмм на сканере путем конвертации полученного материала в цифровой формат на ПЭВМ (заявка на изобретение № 2002132956 (034842) приоритет от 6.12.02 г.), математически обрабатывали данные, используя разработанную нами специализированную компьютерную программу (свидетельство об официальной регистрации программы для ПЭВМ «ПН 5108» № 2003612170 от 17.09.03 г.) и получали денситограммы.

Концентрации полиаминов в спермоплазме рассчитывали по калибровочным графикам, выражающим зависимость площадей пиков соответствующих пятен стандартных препаратов полиаминов от содержания последних, и выражали в мкг/мл и мкг/1млн сперматозоидов.

2. Содержание полиаминов (спермина и спермидина) в спермоплазме фертильных мужчин и мужчин с разными формами субфертильиости

Для сравнительной оценки уровня, спектра и соотношения полиаминов спермоплазмы фертильных мужчин и мужчин, состоящих в бесплодном браке, нами проведён комплексный анализ эякулятов 95 человек в возрасте от 20 до 42 лет.

Комплексный анализ полученных образцов был проведён поэтапно. Сначала исследовались физико-химические и морфо-функциональные критерии качества спермы. Среди исследованных эякулятов были отобраны 17 проб от здоровых мужчин, соответствующие общепринятым показателям фертильных эякулятов [Николаев А.А, Луцкий Д.Л., 1998, Луцкий Д.Л., 2000, Полунин А.И. и др., 2001]. Из полученных образцов готовили спермоплазму и описанным выше способом определяли содержание в ней полиаминов.

Выявленный уровень полиаминов спермоплазмы, а так же соотношение между полиаминами спермоплазмы фертильных мужчин представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Уровень полиаминов Спермин (Сп) Спермидин (Спд) Сп/Спд

В 1 мл спермоплазмы, мкг/мл 245,1±103,5 184,0± 129,3 1,11-2,60

На 1 млн сперматозоидов, мкг/млн 5,9б±4,09 ~ 3,04±2,32 ' 1,88-2,61

Оставшиеся 78 образцов имели в большей или меньшей степени выраженности отклонения от нормальной спермограммы и были классифицированы как субфертильные. Из них были отобраны 54 пробы эякулятов, которые в дальнейшем разделили на группы в соответствии с каждым показателем спермограммы, а затем проводился их сравнительный анализ. Уровень полиаминов выражали в мкг/1млн сперматозоидов.

Для уточнения физиологической роли исследуемых полиаминов и их участия в формировании оплодотворяющей способности эякулята были рассчитаны коэффициенты линейной корреляции.

Между уровнем полиаминов спермоплазмы и концентрацией сперматозоидов в единице объёма эякулята выявлена достоверная отрицательная корреляция (для спермидина г=-0,31, для спермина г=-0,38, р<0,05). Причём, при увеличении концентрации сперматозоидов в эякуляте содержание спермидина в спермоплазме субфертильных

мужчин уменьшалось примерно в 18,5 раз, тогда как содержание спермина - в 15,4 раза (рис. 1).

к ч о с

я ж о

□ Спермидин, мкг/мл н, ■ Спермин, мкг/млн

и •V*

л А . ^

20-40 40-60 более 60

Концентрация сперматозоидов, млн/мл

Рис. 1. Связь между уровнем полиаминов спермоплазмы и концентрацией сперматозоидов

*р<0,05, достоверно по сравнению с уровнем полиаминов субфертильных мужчин при значениях концентрации сперматозоидов 20 - 40 млн/мл

Полиамины, вследствие своей поликатионной природы имеют высокое сродство к отрицательно заряженным участкам молекул биополимеров [Берлинских Н.К., Залеток СП., 1987]. Участки мембран сперматозоидов содержат отрицательно заряженные фосфолипиды. Поэтому, возможно, уменьшение уровня свободных полиаминов (спермидина и спермина) при увеличении концентрации сперматозоидов в эякуляте связано с их переходом в связанное с поверхностной мембраной сперматозоидов состояние, но эта гипотеза требует экспериментальной проверки. Более резкое снижение уровня спермидина по сравнению с изменением уровня спермина в определённой степени подтверждает это предположение, так как известно [КеннеН: О.М., 81шк1а ХВ., 1978] более высокое сродство спермидина к мембранам.

Ведущей функциональной характеристикой сперматозоидов, определяющей фертильность эякулята, являются показатели двигательной активности. Выявлена достоверная положительная корреляция между спермидином спермоплазмы и двигательными характери-

стоками сперматозоидов - скоростью (г=0,43, р<0,01) и количеством активно подвижных форм (г=0,4, р<0,05). Так при увеличении скорости сперматозоидов уровень спермидина увеличивался в 31,5 раза (рис.2). Изменение уровня спермина при изменении скорости сперматозоидов не являлось достоверным.

Рис. 2. Связь между уровнем спермидина спермоплазмы и скоростью

сперматозоидов *

р<0,05 достоверно по сравнению с уровнем полиаминов субфертильных мужчин при скорости сперматозоидов в эякуляте > 2,5 мм/мин.

С увеличением числа активно подвижных сперматозоидов уровень спермидина увеличивался более чем в 16 раз, однако уровень спермина при этом изменялся не достоверно. Отношение Сп/Спд уменьшалось до 1,35 (рис.3).

Полиамины являются продуктом секреции предстательной железы. Известно, что сперматозоиды человека приобретают нормальную подвижность только после контакта с продуктами секреции придаточных желёз мужской репродуктивной системы [Николаев А.А, Луцкий Д.Л., 1998, Луцкий Д.Л., 2000, Полунин А.И. и др., 2001]. При повышении скорости движения сперматозоидов возрастает потребность в энергии, поэтому необходима высокая активность АТФ-азы.

Спермидин повышает активность АТФ-азы [Karacagil M. et al., 1989] и может ицдуцировать начало флагелляции.

Рис. 3. Связь между уровнем полиаминов спермоплазмы и подвижностью сперматозоидов

** р<0,01; *** р<0,001 достоверно по сравнению с уровнем полиаминов субфертиль-ных мужчин, содержащих 40% и более активно подвижных сперматозоидов в эякуляте.

Двигательные характеристики в фертильном эякуляте должны быть в целом достаточно высокими, однако, некоторое количество неподвижных сперматозоидов допускается. Нами установлено, что сперматозоиды будут обладать нормальными двигательными характеристиками в том случае, если содержание полиаминов в спермоплазме находится в пределах нормы. В тех случаях, когда уровень спермина увеличивался в 2 раза по сравнению с нормой, доля неподвижных сперматозоидов в эякуляте превышала 35 % (таблица 2).

Известно, что в высоких концентрациях полиамины подавляют трансмембранный транспорт глюкозы, ингибируют Na+, К+- АТФаз-ную активность, проявляют антиоксидантный эффект, который, вероятно, связан с их способностью комплексировать с металлами и снижать прооксидантные свойства последних [Цветненко Е.З. и др., 1978, Кричевская А.А. и др., 1981, Хоменко А.К. и др., 1984, Берлинских Н.К., Залеток С.П., 1987, Biedermann В. et. al., 1998]. Глюкоза играет

роль энергетического субстрата для сперматозоидов и участвует в энергетическом обмене сперматозоидов. Угнетение её транспорта высоким содержанием полиаминов вызывает снижение скорости и увеличение числа неподвижных сперматозоидов.

Таблица 2.

Уровень полиаминов спермоплазмы в эякулятах субфертильных мужчин с различным содержанием неподвижных сперматозоидов

Показатель спермограммы Спермин (Сп), мкг/млн Спермидин (Спд), мкг/млн Сп/Спд

Неподвижные сперматозоиды, % >35 п=41 13,40±2,57** 4,23±0,44** 3,17

<35 п=13 6,55±4,10 1,61± 1,22 4,07

** различия достоверны (р<0,01).

Повышенный уровень полиаминов в спермоплазме наблюдается в эякулятах со значительным количеством мёртвых сперматозоидов, причём достоверно положительно коррелируют оба полиамина (для спермина г=0,4, для спермидина г=0,5, р<0,01). Уровень спермина в спермоплазме таких эякулятов увеличивается более чем в 2,5 раза по сравнению с нормой. Уровень спермидина по сравнению с эякулята-ми субфертильных мужчин, содержащих менее 14 % мёртвых сперматозоидов, увеличивается в 3 раза, хотя не превышает уровень нормы. По нашим данным увеличение содержания спермидина и спермина происходит почти синхронно. При этом отношение Сп/Сцд изменяется лишь незначительно с 3,87 до 3,23 (рис. 4).

Объяснение этому мы видим в том, что при увеличении уровня полиаминов в плазме семенной жидкости может происходить их внеклеточное окисление и образование биологически активных веществ — иминоальдегидов, которые в свою очередь даже в очень малых концентрациях могут оказывать губительное действие на мужские половые клетки [Хоменко А.К. и др., 1984, Берлинских Н.К., Залеток С.П., 1987, Голомазова К.А. и др., 2003, 8са1аЪг1по О., РепоИ М.Е., 1981, РоеЫ Л.У., 1982]. Спермидин и спермин окисляются полиаминоксида-зой (ПАО) с образованием кислородных радикалов и перекиси водорода, реактивных альдегидов и акролеина, которые, по-видимому, обладают мутагенными, цитотоксическими и иммуносупресснвными эффектами [Бако^^к М.Т. е! а1., 1981].

18-И

□ Спермвдин, мкг/млн, ■ Спермин, мкг/млн,

□ Сп/Сгщ

менее 14 % 14 % и более

Мертвые сперматозоиды, %

Рис. 4. Связь между уровнем полиаминов спермоплазмы и содержанием мёртвых сперматозоидов в эякуляте

** различия достоверны (р<0,01).

Интересная закономерность выявлена между наличием агглютинатов и агрегатов в эякулятах субфертильных мужчин к уровнем полиаминов спермоплазмы. Средний уровень спермидина в спермоплазме от наличия агглютинатов и агрегатов не зависел, в то время как уровень спермина коррелировал достоверно отрицатель-но(г=-0,3, р<0,05). Так, в эякулятах, имевших большое число агглютинатов, средний уровень спермина в спермоплазме был в 18,2 раза ниже по сравнению с пробами без агглютинации (рис.5). Наличие агрегатов в сперме сопровождалось падением уровня спермина в 21,2 раза. Так как молекула спермина обладает сравнительно высоким положительным поверхностным зарядом (несёт 4 положительно заряженных участка), то, вероятно, оседая на сперматозоидах, спермин препятствует их агглютинации и агрегации.

Отсутствие достоверной корреляции между уровнем полиаминов спермоплазмы и физико-химическими характеристиками эякулята, количеством лейкоцитов, количеством патологических форм сперматозоидов и клеток сперматогенеза, наличием в эякуляте сперматозоидов с цитоплазматической каплей, говорит о том, что с этими пока-

зателями качества эякулята содержание полиаминов в спермоплазме не связано.

Рис 5. Связь между уровнем полиаминов спермоплазмы и количеством агглютинатов в эякуляте

* р<0,05; ** р<0,01 достоверно по сравнению с уровнем полиаминов субфертильных мужчин, эякуляты которых не содержат агглютинатов

Кроме того, полиамины не оказывают влияния и на морфологическое строение сперматозоидов. Наличие у сперматозоидов таких нарушений в морфологическом строении, как различная патология головки, шейки, дефекты хвостовой части, не зависило от уровня полиаминов в спермоплазме.

Все 78 проб субфертильных эякулятов были разделены на группы в соответствии с формами субфертильности и проводился сравнительный анализ уровня полиаминов в мкг/1млн сперматозоидов и отношения Сп/Спд в этих группах (рис.6).

Было установлено, что при полизооспермии" уровень сперми-дина по сравнению с нормой уменьшается примерно в 19 раз, а уровень спермина - в 13 раз. Отношение Сп/Сцд при полизооспермии незначительно увеличивается до 2,85.

12-Г1

□ Спермидин, мкг/млн В Спермин, мкг/млн

О от I до 3 от 3 до 5 более 5 Агглютинаты, в поле зрения

Рис. 6. Уровень полиаминов спермоплазмы при разных формах суб-фертильности

1-норма; 2-полизооспермия; 3-астенозооспермия; 4-олигоастенозооспермия; 5- некрозооспермия

*р<0,05 достоверно по сравнению с нормой.

Содержание спермидина в спермоплазме больных с астенозо-оспермией и олигоастенозооспермией снижается примерно в 3 раза по сравнению с уровнем спермидина в норме. В то же время уровень спермина в спермоплазме этих больных остаётся в пределах нормы, а отношение Сп/Сцд увеличивается примерно до 6,7.

Уровень спермина повышается по сравнению с нормой примерно в 2,7 раза в спермоплазме больных некрозооспермией, а уровень спермидина изменяется не достоверно. Отношение Сп/Сцд при этом увеличивается до 3,51.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что полиамины в семенной плазме обладают высокой биологической активностью: оказывают влияние на двигательную способность сперматозоидов, а изменение их концентрации связано с другими функциональными характеристиками сперматозоидов, что позволяет считать полиамины спермоплазмы частью механизма становления функциональной зрелости сперматозоидов.

выводы

1. Для исследования функции оплодотворения, а так же для диагностики её нарушений разработан достоверный и доступный в применении способ электрофоретического определения полиаминов в спермоплазме.

2. У фертильных мужчин уровень спермина и сперм иди на в спермоплазме составляет 245,1±ЮЗ,5 мкг/мл и 184±129,3 мкг/мл соответственно, а отношение Сп/Сцд составляет 1,112,60.

3. Уровень полиаминов в спермоплазме связан с концентрацией сперматозоидов в единице объёма эякулята, выявлена достоверная отрицательная корреляция уровня спермина и сперми-дина спермоплазмы с концентрацией сперматозоидов в эякуляте.

4. Выявлена функциональная связь между спермидином спермо-плазмы и двигательными характеристиками сперматозоидов: в физиологических концентрациях спермидин увеличивает скорость сперматозоидов и число активно подвижных форм.

5. Превышение физиологического уровня спермина способно оказывать губительное действие на мужские половые клетки, вызывая снижение подвижности и увеличение числа мёртвых сперматозоидов.

6. Спермин в физиологических концентрациях препятствует агглютинации и агрегации сперматозоидов.

7. При олигозооспермии уровень спермидина и спермина в спермоплазме возрастает в 10,8 и 5,4 раза соответственно по мере увеличения степени олигозооспермии, а отношение Сп/Спд уменьшается с 10,26 до 5,17.

8. При астенозооспермии содержание спермидина в спермоплаз-ме снижается в 3,2 раза, а отношение Сп/Свд увеличивается до 6,68. При полизооспермии уровень спермидина и спермина уменьшается в 19 и в 13 раз соответственно.

Практические рекомендации

1: Определение в спермоплазме уровня спермидина и спермина позволяет дополнить диагностический арсенал при исследовании мужской репродуктивной функции и тем самым повысить информативность исследования причин нарушения фертиль-ности эякулята.

2. Определение полиаминов в спермоплазме позволяет сократить группу так называемого идиопатического бесплодия у мужчин, за счёт более детального исследования биохимического состава спермоплазмы.

3. Определение уровня спермидина и спермина в спермоплазме является дополнительным способом контроля над эффективностью проводимой терапии субфертильности у мужчин.

Внедрение результатов работы в практику

♦По результатам проведённых исследований получены патент на изобретение и свидетельство о регистрации программы для ПЭВМ, оформлено 2 заявки на изобретения: «Способ определения полиаминов в биологической жидкости» (патент на изобретение № 2002105459/15 (005605) приоритет от 28.02.02 г.), свидетельство об официальной регистрации программы для ПЭВМ «ПН 5108» № 2003612170 от 17.09.03 г., «Способ количественного определения полиаминов в спермоплазме» (заявка на изобретение № 2002132956 (034842) приоритет от 6.12.02 г.), «Способ определения патогенности микроорганизмов» (заявка на изобретение № 2003106775 (007056) приоритет от 11.03.03 г.).

Результаты исследования используются в научных исследованиях и практической работе:

- кафедры общей и биоорганической химии Астраханской государственной медицинской академии;

- Центра планирования семьи и репродукции человека г. Астрахани для повышения качества диагностики репродуктивного здоровья мужчин и при выборе оптимальных комплексных схем лечения выявленных нарушений оплодотворяющей способности эякулята.

Результаты диссертационной работы используются в качестве учебного материала для студентов, интернов и ординаторов Астраханской государственной медицинской академии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Значение аутомикрофлоры в развитии мужского бесплодия //Сб. статей по мат. Ш конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке». - Томск, СГМУ, 2002 г., С.158-159 (соавт. Бойко О.В., Луцкий Д.Л.).

2. Уровень полиаминов спермоплазмы в норме и при субфертильности у мужчин //Мат. V всеросс. науч. конф. «Эколого-

биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия».- Астрахань, 2002 г.- С.110-111 (соавт. Николаев А.А., Бойко О.В., Луцкий Д.Л., Ефимов Т.В.).

3. Полиамины спермоплазмы у фертильных и субфертильных мужчин //Труды АГМА, Том 24 (ХЬУШ).- Астрахань, 2002 г.-С.82-85 (соавт. Николаев А.А., Ефимов Т.В., Луцкий Д.Л.).

4. Способ определения полиаминов в биологической жидкости //Патент на изобретение №2002105459/15 (005605) от 28.02.02 г. (соавт. Николаев А.А., Луцкий Д.Л., Ефимов Т.В.,).

5. Способ количественного определения полиаминов в спермо-плазме //Заявка на изобретение №2002132956 (034842) приоритет от 6.12.02 г. (соавт. Николаев А.А., Ефимов Т.В., Луц-кийД.Л.).

6. Факторы антимикробной резистентности репродуктивного тракта мужчин //Труды АГМА, Том 28 (ЬН).- Астрахань, 2003 г.- С. 164-166 (соавт. Полунин А.И., Бойко О.В., Луцкий Д.Л.).

7. Влияние полиаминов спермы на биопрофиль микроорганизмов //Мат. VI Междунар. науч. конф. «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря». - Астрахань, 2003 г. -С. 95-96 (соавт. Николаев А.А., Бойко О.В., Осипова Л.А.).

8. Способ определения полиаминов в спермоплазме //Изобретения. Полезные модели. Официальный бюллетень Российского агенства по патентам и товарным знакам № 31 (II ч.) 10.11.2003 г., С.268-269, Фипс Москва (соавт. Николаев А.А., Луцкий ДЛ., Ефимов Т.В.).

9. Способ определения патогенности микроорганизмов //Заявка на изобретение № 2003106775 (007056) приоритет от 11.03.03 г. (соав. Николаев А.А., Бойко О.В.)

10. Свидетельство об официальной регистрации программы для ПЭВМ «ПН 5108» № 2003612170 от 17.09.03 г. (соавт. Ефимов Т.В., Луцкий ДЛ., Николаев А.А.).

11. Способ определения полиаминов в спермоплазме //Междунар. форум «Аналитики и Аналитика» - Воронеж, 2003 г. - С. 97. (соавт. Николаев А.А., Луцкий Д.Л.).

12. Этиологические и диагностические аспекты бактерионоси-• тельства //Фундаментальные исследования. - 2004. - № 1. - С.

40. (соавт. Бойко О.В., Николаев А.А., Луцкий Д.Л., Гудннская Н.И., Стахеева В.В.).

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

1. АТФ-аза — аденозин-трифосфатаза

2. ВОЗ - Всемирная Организация Здравоохранения

3. ПАО - полиаминоксидаза

4. Сп—спермин

5. Спд - спермидин

»1091 1

Тираж 100 экз. Подписано в печать 20.05.04. Заказ № 931

Издательство Астраханской государственной медицинской академии, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Плосконос, Мария Вячеславовна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. БИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ И МЕДИЦИНСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ПОЛИАМИНОВ (обзор литературы).

1.1. Химическое строение и распространение полиаминов.

1.2. Метаболизм полиаминов и факторы его регуляции.

1.3. Необходимость полиаминов для роста и развития.

1.4. Связывание, транспорт и выведение полиаминов из организма.

1.5. Роль полиаминов в репродуктивной системе.

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы исследования.

2.2. Морфологические, функциональные и физико-химические методы исследования спермы.

2.3. Экстракция полиаминов.

2.4. Хроматографические методы исследования полиаминов.

2.4.1. Адсорбционная хроматография.

2.4.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография.

2.5. Электрофоретические методы исследования полиаминов.

2.5.1. Электрофорез на бумаге.

2.5.2. Электрофорез в агаровом геле.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Способ количественного определения полиаминов в спермоплазме.

3.1.1. Расчёт содержания полиаминов (спермина и спермидина) в спермоплазме.

3.1.2. Калибровочный график.

3.2. Содержание полиаминов (спермина и спермидина) в спермоплазме фертильных мужчин и мужчин с разными формами субфертильности.

3.2.1. Связь уровня полиаминов спермоплазмы с различными физико-химическими характеристиками эякулятов субфертильных мужчин.

3.2.2. Связь уровня полиаминов спермоплазмы с концентрацией сперматозоидов в эякулятах субфертильных мужчин.

3.2.3. Связь уровня полиаминов спермоплазмы с различными двигательными характеристиками сперматозоидов в эякулятах субфертильных мужчин.

3.2.4. Связь уровня полиаминов спермоплазмы с содержанием мёртвых сперматозоидов в эякулятах субфертильных мужчин.

3.2.5. Связь уровня полиаминов спермоплазмы с различными показателями воспаления в спермограмме субфертильных мужчин.

3.2.6. Связь уровня полиаминов спермоплазмы с различными морфологическими характеристиками сперматозоидов в эякулятах субфертильных мужчин.

3.2.7. Содержание полиаминов (спермина и спермидина) в спермоплазме мужчин с разными формами субфертильности.

ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Физиологическое значение полиаминов в репродуктивной функции мужчин в норме и при её нарушениях"

Актуальность исследования

Бесплодие является насущной медико-социальной проблемой, как в нашей стране, так и за рубежом [32, 69, 74]. В настоящее время, согласно данным ВОЗ, бесплодием страдают около 15 — 18 % супружеских пар. Более 25 % разводов в мире происходит из-за невозможности иметь детей. В России, ежегодно выявляется около 250 тысяч новых бесплодных пар, а в мире число мужчин и женщин, страдающих бесплодием, ежегодно увеличивается на 2 млн пар. Причём более чем в половине случаев это связано с нарушением репродуктивной функции мужчины [32]. Только в России насчитывается уже более пяти миллионов мужчин, страдающих бесплодием.

Проблема диагностики мужского бесплодия остаётся сложной, особенно в случаях с незначительными изменениями в спермограмме [83].

В настоящее время накоплен обширный материал, касающийся вопросов функционирования мужской репродуктивной системы в норме и при патологии. Однако ещё недостаточно раскрыты молекулярные основы формирования фертильности у мужчин, остаются во многом невыясненными причины её нарушения. Изучение функционирования репродуктивной системы на молекулярном уровне в норме и при патологии, может послужить для создания качественно новых методов диагностики и лечения бесплодия [58].

Наиболее распространённой патологией мужской репродуктивной функции является состояние субфертильности [62]. Показатели спермограм-мы таких мужчин занимают промежуточные (пограничные между нормой и патологией значения), их не удаётся однозначно отнести ни к фертильным, ни к инфертильным.

Определение у мужчин состояния субфертильности основано на исследовании преимущественно морфологических характеристик эякулята [39, 86, 185].

В обеспечении становления функциональной зрелости сперматозоидов определённую роль играют компоненты семенной плазмы, которые оказывают влияние на сперматогенез и созревание сперматозоидов [33, 48, 51, 52, 59, 63, 67, 83, 86]. До настоящего времени не выяснена роль полиаминов в семенной жидкости, в которой их содержание у различных видов животных и у человека достаточно высокое [71, 166].

Возможно, именно исследование спермоплазмы и определение содержания в ней полиаминов в норме и при различных патологических состояниях позволило бы не только расширить наши представления о молекулярных механизмах становления функциональной зрелости сперматозоидов и истинных причинах нарушения репродуктивной функции у мужчин, но и обеспечить раннюю, своевременную и достаточную диагностику, определить тактику и стратегию терапии, возможно, наметить новые пути лечения, осуществить контроль над эффективностью проводимых процедур.

Знания о полиаминах спермальной жидкости остаются фрагментарными. В отечественной и зарубежной литературе встречаются отдельные работы, посвящённые содержанию полиаминов в спермоплазме, но связь между уровнем свободных полиаминов спермоплазмы (спермидин, спермин) и характеристиками эякулята (объём, скорость и характер подвижности, жизнеспособность, морфология сперматозоидов) остаётся не выяснена. Учитывая важную роль, которую играют полиамины в обмене нуклеиновых кислот и, в частности ДНК, нормальный метаболизм этих соединений необходим для формирования оплодотворяющих свойств спермы. Поэтому определение концентрации и соотношения отдельных полиаминов в спермоплазме представляет интерес для диагностического использования в практической анд-рологии [64, 71,148, 166].

Таким образом, следует полагать, что диагностическое исследование уровня полиаминов спермоплазмы имеет большое практическое значение. Определение полиаминов позволяет сократить группу так называемого идиопатического бесплодия у мужчин, за счёт более детального исследования биохимического состава спермоплазмы. Количественное определение уровня полиаминов спермоплазмы может быть использовано не только в качестве дополнительного диагностического теста, но для контроля над качеством проводимой терапии субфертильности у мужчин.

Цель исследования

Провести определение уровня полиаминов спермоплазмы в норме, оценить функциональную роль полиаминов спермоплазмы в процессе ферти-лизации и при различных нарушениях фертильности.

Основные задачи исследования

2. Изучить качественный и количественный полиаминный состав спермоплазмы здоровых мужчин.

3. Изучить изменение уровня и соотношения полиаминов спермоплазмы при различных нарушениях фертильности.

4. Исследовать изменение спектра полиаминов спермоплазмы при различных нарушениях фертильности.

5. Выявить корреляцию и взаимосвязь физико-химических, морфологических и функциональных показателей оплодотворяющей способности эя-кулятов субфертильных мужчин с уровнем и соотношением полиаминов спермоплазмы.

Научная новизна исследования

Впервые выявлена взаимосвязь основных показателей оплодотворяющей способности эякулятов мужчин с уровнем и соотношением полиаминов спермоплазмы.

Изучено участие полиаминов спермоплазмы в формировании оплодотворяющей способности эякулята.

Впервые изучено изменение уровня, спектра и соотношения полиаминов спермоплазмы при различных нарушениях репродуктивной функции мужчин.

Практическое значение работы

Предложен и применён простой, доступный и чувствительный способ количественного определения полиаминов, который может быть использован для прямой оценки уровня полиаминов в спермоплазме в норме и при патологии.

Внедрение результатов работы в практику

По результатам проведённых исследований получены патент на изобретение и свидетельство об официальной регистрации программы для ПЭВМ, оформлено 2 заявки на изобретения:

Способ определения полиаминов в биологической жидкости. Патент на изобретение № 2002105459/15 (005605) приоритет от 28.02.02г.

Свидетельство об официальной регистрации программы для ПЭВМ «ПН 5108» № 2003612170 от 17.09.03 г.

Способ количественного определения полиаминов в спермоплазме. Положительное решение по заявке на изобретение № 2002132956 (034842) приоритет от 6.12.02 г.

Способ определения патогенности микроорганизмов. Положительное решение по заявке на изобретение № 2003106775 (007056) приоритет от 11.03.03 г.

Полученные результаты используются в практической работе Центра планирования семьи и репродукции человека г. Астрахани для повышения качества диагностики репродуктивного здоровья мужчин и при выборе оптимальных комплексных схем лечения выявленных нарушений оплодотворяющей способности эякулята.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Разработанный достоверный и доступный в применении способ количественного определения полиаминов в спермоплазме, может быть использован для исследования функций оплодотворения и для диагностики её нарушений.

2. Определено содержание спермина и спермидина и соотношение между ними в спермоплазме фертильных мужчин.

4. Обнаружено изменение уровня полиаминов спермоплазмы и отношения между ними при различных нарушениях фертильности. to

Апробация результатов

Результаты работы представлены и доложены на:

- III конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, СГМУ, 2002 г.);

- V Всероссийской научной конференции «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия» (Астрахань, 2002 г.);

- VI Международной научной конференции «Эколого-биологические проблемы Бассейна Каспийского моря» (Астрахань, 2003 г.);

- Итоговых научно-практических конференциях Астраханской государственной медицинской академии (Астрахань, 2002, 2003 г.);

- Международном форуме «Аналитики и Аналитика» (Воронеж, 2003г.)

- V Общероссийской конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Кисловодск, 2004 г.)

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Плосконос, Мария Вячеславовна

выводы

2. У фертильных мужчин уровень спермина и спермидина в спермоплазме составляет 245,1±103,5 мкг/мл и 184±129,3 мкг/мл соответственно, а отношение Сп/Спд составляет 1,11 — 2,61.

3. Уровень полиаминов в спермоплазме связан с концентрацией сперматозоидов в единице объёма эякулята, выявлена достоверная отрицательная корреляция уровня спермина и спермидина спермоплазмы с концентрацией сперматозоидов в эякуляте.

4. Выявлена функциональная связь между спермидином спермоплазмы и двигательными характеристиками сперматозоидов: в физиологических концентрациях спермидин увеличивает скорость сперматозоидов и число активно подвижных форм.

6. Спермин в физиологических концентрациях препятствует агглютинации и агрегации сперматозоидов.

7. При олигозооспермии уровень спермидина и спермина возрастает в 10,8 и 5,4 раза соответственно по мере увеличения степени олигозооспермии, а отношение Сп/Спд уменьшается с 10,26 до 5,17.

8. При астенозооспермии содержание спермидина снижается в 3,2 раза, а отношение Сп/Спд увеличивается до 6,68. При полизооспермии уровень спермидина и спермина уменьшается в 19 и в 13 раз соответственно.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Определение в спермоплазме уровня спермидина и спермина позволяет дополнить диагностический арсенал при исследовании мужской репродуктивной функции и тем самым повысить информативность исследования причин нарушения фертильности эякулята.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Плосконос, Мария Вячеславовна, Астрахань

1. Александрова Н.А., Яковенко А.Я., Залеток С.П. Исследование взаимодействия полиаминов с ядерным фактором транскрипции NF-каррав методами компьютерного моделирования //Совет молодых учёных ПНЦ РАН. - 2002. - С. 2.

2. Алыков Н.М., Алыкова Т.В. Аналитическая химия объектов окружающей среды Астрахань: Из-во АГТТУ, 1999.

3. Аншакова Н.И., Рассказов Н.И., Афанасьева А.Ф. и др. Содержание некоторых антигенов семенной плазмы при бесплодии у мужчин //Вест, дерматол и венерол. 1983. - № 3. - С. 59-63.

4. Бассалык Л.С., Немцова М.П., Меразишвили И.В. и др. Полиамины в оценке эффективности химиотерапии у онкологических больных //Вестн. АМН СССР. 1982. - № 3. - С. 57-61.

5. Берлинских Н.К. Белоксинтезирующий аппарат клеток при опухолевом росте. Киев: Наук, думка, 1983.

6. Берлинских Н.К. Полиамины и опухолевый рост. //Вопр. мед. хим. 1991. - № 6. - С. 23-25.

7. Берлинских Н.К., Залеток С.П., Зиневич А.К. и др. Определение экскреции полиаминов в диагностике злокачественных опухолей и для оценки эффективности лечения онкологических больных: Методические рекомендации. М., 1985.

8. Берлинских Н.К., Залеток С.П. Полиамины и опухолевый рост. Киев: Наук, думка, 1987.

9. Берлинских Н.К., Лялюшко Н.М., Матвейчук Я.Д. Содержание полиаминов в печени, почках и опухолях крыс при канцерогенезе молочных желез, индуцированном 7,12-диметилбенз а. антраценом //Укр. биохим. журн. 1980. - 52, № 6. - С. 727-731.

10. Бердинских Н.К., Хоменко А.К., Залеток С.П. и др. Полиамины, ферменты их синтеза и катаболизма при беременности и опухолевом росте //Вестн. АМН СССР. 1980. - № 6. - С. 72-74.

11. Березов Т.Т. Метаболизм аминокислот и полиаминов в злокачественных опухолях //Лаб. дело. 1982. - № 5. - С. 36-40.

12. Березов Т.Т. Орнитиндекарбоксилаза и злокачественный рост //Бюлл. экспер. биол. 1993. - № 6. - С. 600-602.

13. Березов Т.Т., Сяткин С.П. Флюорометрический метод определения активности орнитиндекарбоксилазы из тканей животных //Бюлл. экспер. биол. 1986. - № 7. - С. 119-122.

14. Блинов М.Н., Луганова И.С., Владимирова А.Д. //Вопр. мед. химии. -1983.-№ 2.-С. 124-126.

15. Богоявленская Н.В., Шорошева Т.Г. Изменение содержания полиаминов в плаценте человека при некоторых акушерских осложнениях //Вопр. мед. хим. 1973. - Т. 19 - № 1. - С. 42-44.

16. Булатов М.И., Калинкин И.П. Практическое руководство по фотоколориметрическим и спектрофотометрическим методам анализа. -Из-во «Химия», Ленингр. отд-е, 1972.

17. Ворончихина Л.Д., Демьянова В.Т. Определение содержания полиаминов в моче //Лаб. дело. 1983. - № 5. - С. 29-31.

18. Ворончихина Л.Д., Демьянова В.Т. Определение свободных полиаминов в крови //Лаб. дело. 1985. - № 7. - С. 443-444.

19. Ворончихина Л.Д., Демьянова В.Т. Фракционный состав полиаминов мочи здоровых людей //Лаб. дело. 1988. - № 9. - С. 71-72.

20. Ворончихина Л.Д., Демьянова В.Т., Бердинских Н.К. и др. Характер количественных изменений некоторых показателей обмена полиаминов в крови больных хроническими лейкозами //Вопр. мед. хим. 1989. - № 1. -С. 74-76.

21. Ворончихина JI.Д., Демьянова В.Т., Ипатов С.Г. и др. Спермидин мочи в оценке эффективности лечения хронических лейкозов //Гематология и трансфузиология. 1985. - № 9. - С. 12-15.

22. Ворончихина Л.Д., Демьянова В.Т., Манжаров Н.В. Экскреция полиаминов с мочой у больных с термическими ожогами //Вопр. мед. хим. 1987.-№ 6.-С. 23-26.

23. Ворончихина Л.Д., Демьянова В.Т., Ситников С.А. Содержание полиаминов в крови здоровых людей //Вопр. мед. хим. 1986. - № 2. - С. 43-45.

24. Ворончихина Л.Д., Занковский Ю.В., Бердникова Т.Н. и др. Изменение экскреции полиаминов у больных хроническими лейкозами в процессе лечения //Пробл. гематологии и переливания крови. 1982. - 27, № 9. - С. 25-28.

25. Ворончихина Л.Д., Ковтунова М.Е. Полиамины мочи здоровых детей //Лаб. дело. 1982. - № 8. - С. 49-51.

26. Глинский Г.В., Залеток С.П. Исследование полиаминов в средне-молекулярной фракции плазмы крови //Эксперим. онкология. 1980. - 2, № 5. - С. 75-79.

27. Глинский Г.В., Николаев В.Г., Иванова А.Б. Средние молекулы в плазме крови у онкологических больных. //Эксперим. онкология. 1980. - 2, № 1. -С. 68-71.

28. Горкин В.З. Аминооксидазы и их значение в медицине. М.: Медицина, 1981.

29. Гриневич Ю.А., Дзюбко Н.Я., Некрасов П.Я. и др. Состояние клеточно-опосредованного иммунитета, особенности экскреции полиаминов исодержание холестерина в крови при раке молочной железы. //Клинич. онкология. 1982. - № 2. - С. 12-14.

30. Дэвени Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды и белки. Под редакц. Незлина Р.С. - Изд-во «Мир» - Москва. - 1976.

31. Евдокимов В.В. Системное исследование эякулята при заболеваниях мужских репродуктивных органов: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 1999.

32. Евдокимов В.В., Раков С.С., Липатова Н.А. и др. Комплексное лабораторное исследование эякулятов при заболеваниях мужской репродуктивной системы //Клинич. лаб. диагностика. 1995. - № 6. - С. 114-116.

33. Заалишвили Т.М., Джапаридзе Н.Ш., Сабелашвили Д.Ш. и др. Влияние катионов Cu2+, Zn2+ и биогенных полиаминов на ядерную поли (ADP -Рибоза) полимеразную активность головного мозга крыс //Биохимия. -1990. т.55, № 4. - С. 659-663.

34. Залеток С.П. Экскреция полиаминов при злокачественном росте: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Киев, 1977.

35. Залеток С.П., Александрова Н.А., Тарутинов В.И. и др. Содержание полиаминов и активность ОДК в опухолевых тканях и моче больных с новообразованиями молочной железы //Совет молодых учёных ПНЦ РАН. -2003.-С. 1.

36. Залеток С.П., Берлинских Н.К., Драга Н.В. Некоторые аспекты биологической роли полиаминов при нормальном и опухолевом росте //Эксперим. онкология. 1984. - 4, № 6. - С. 10-17.

37. Залеток С.П., Исмайлова И.М., Берлинских Н.К. Полиамины в лимфоцитах животных при экспериментальном опухолевом процессе //Вопр. мед. хим. 1989. - № 1. - С. 22-26.

38. Импшнецкая Л.П., Горпинченко И.И., Романенко A.M. и др. //Врачебное дело. 1990. - № 8. - С. 61-63.

39. Каграманова А.Т., Тищенко Л.Д. Березов Т.Т. Орнитиндекарбоксилазная активность эпидермиса при псориазе как биохимический показатель гиперпролиферативного процесса //Бюлл. экспер. биол. 1993. - № 6. - С. 618-620.

40. Калинина С.Н., Тиктинский O.JL, Михайличенко В.В. Роль заболеваний, передающихся половым путём, в бесплодном браке //Урол. и нефрол. -1997. -№ 1.-С. 37-40.

41. Ковтунова М.Е., Беляков В.А., Тестоедова Т.А. Полиамины крови здоровых детей //Лаб. дело. 1988. - № 1. - С. 12-14.

42. Кричевская А.А., Шугалей B.C., Цветненко Е.З. Аргиназа и полиамины мозга и печени в механизме защитного действия аргинина при гипероксии. //Бюлл. экспер. биол. и мед. 1981. - № 4. - С. 445-447.

43. Курило Л.Ф., Дубинская В.П., Остроумова Т.В. и др. Анализ патологии сперматогенеза различной этиологии по эякуляту, //Пробл. репродукт. -1995.-№3.-С. 33-38.

44. Лакин Г.Ф. Биометрия. М: Высш. шк., 1990.

45. Ларский Э.Г. Современные методы электрофореза (обзор литературы) //Лаб. дело. 1990. - № 9. - С. 4-12.

46. Липатова Н.А. Лабораторные критерии фертильности эякулята //Клинич. лаб. диагностика. 1998. - № 5. - С. 11-15.

47. Липатова Н.А., Раков С.С., Морозова В.Т. и др. Белковые маркёры спермоплазмы в лабораторной диагностике бесплодия при заболеваниях мужской репродуктивной системы, //Клинич. лаб. диагностика. 1998. -№2.-С. 15-16.

48. Луцкий Д.Л. Иммунохимическая и биохимическая характеристика спермоплазмы субфертильных мужчин: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 2000.

49. Луцкий Д.Л., Николаев А.А. Морфологическое исследование эякулята: Методическое пособие. Астрахань. - 1999.

50. Луцкий Д. Л., Николаев А.А. Корреляция биохимических и физико-химических свойств спермы и морфо-функциональных характеристик сперматозоидов. //Молекулярные исследования мужской субфертильности. /Под ред. А.А. Николаева. Астрахань. - 2000. - С. 4158.

51. Микроскопическая техника /Под ред. Д.С. Саркисова, Ю.Л. Перова. М., 1996.

52. Мирзоян Р.А., Промыслов М.Ш. Путресцин и полиамины в глиомах мозга человека и крысы //Вопр. мед. хим. 1980. - № 3. - С. 379-381.

53. Миронов Я.М., Прикуль И.В., Горин А.И. и др. Изменения в синтезе РНК, вызываемые N-метил N - нитрозомочевиной //Бюлл. экспер. биол. и медиц. - 1982. - № 3. - С. 25-27.

54. Михайловский В.О., Цякало Л.В., Стогний Н.А. и др. Обратимое нарушение синтеза полиаминов и ДНК в регенерирующей печени крысы. //Бюлл. экспер. биол. 1980. - № 8. - С. 165-167.

55. Михайловский В.О., Цякало Л.В., Стогний Н.А. и др. Синтез полиамиинов в печени крыс при термическом ожоге. //Вопр. мед. химии. -1982. -Т.28, №6.-С. 71-75.

56. Молекулярные исследования мужской субфертильности /Под ред. А.А. Николаева. Астрахань, 2000.

57. Неймарк А.И., Фидиркин А.В., Алиев Р.Т. Изменение уровня энзимов спермы при бесплодии //Урол. и нефрол. 1998. - № 2. - С. 44-45.

58. Нечаева Н.В., Фатеева В.И., Ярыгин К.Н. и др. Возможное участие орнитиндекарбоксилазы в контроле околочасового ритма синтеза белка //Бюлл. экспер. биол. и медицины. 1984. - № 2. - С. 158-160.

59. Нечаева Н.В., Ярыгин К.Н., Фатеева В.И. и др. Роль полиаминов в регуляции околочасового ритма синтеза белка в клетке //Бюлл. экспер. биол. и мед. 1980. -№ 8. - С. 211-213.

60. Николаев А.А. Биохимическое и иммунохимическое изучение белков семенной плазмы человека: Дисс. док. мед. наук. Астрахань, 1994.

61. Николаев А.А., Аншакова Н.И. Иммунохимические тесты в диагностике заболеваний мужской репродуктивной системы //Урол. и нефрол. 1991. - № 5. - С. 134-140.

62. Николаев А.А., Луцкий Д.Л. Общая репродуктология: Структурно-функциональная и биохимическая организация мужской репродуктивной системы: Руководство. Астрахань, 1998.

63. Николаев А.А., Луцкий Д.Л., Бочановский В.А., Ложкина Л.В. Активность ферментов спермоплазмы в эякулятах различной фертильности //Урол. и нефрол. 1997. - № 5. - С. 35-39.

64. Николаев А.А., Луцкий Д.Л., Ложкина Л.В. Белковый спектр эякулятов различной фертильности. //Урол. и нефрол. 1998. - № 2. - С. 48-52.

65. Николаев А.А., Луцкий Д.Л., Николаева Н.Н., Ложкина Л.В. Обмен Fe и негемовых ферропротеинов в эякулятах различной фертильности //Урол. и нефрол. 1998. - № 5. - С. 27-31.

66. Николаев В.В., Строев В.А., Астраханцев А.Ф. Биохимические исследования спермоплазмы при мужском бесплодии //Урол. и нефрол. -1993.-№3.-С. 33-36.

67. Овсянникова Т.В., Корнеева И.Е. Бесплодный брак //Акуш. и генекол. -1998. -№ 1.-С. 32-36.

68. Осипова Л.А., Немлий Н.И., Гридина Н.Я. и др. Влияние ингибиторов биосинтеза полиаминов и экзогенных полиаминов на митогенный эффект эпидермального фактора роста в культуре гепатоцитов //Бюлл. экспер. биол. и мед. 1989. - № 3. - С. 339-341.

69. Полунин А.И., Мирошников В.М., Луцкий Л.Д. и др. Хронический неспецифический простатит и уретрит: современные вопросы диагностики и лечения. Астрахань: АГМА., 2001.

70. Порудоминский И.М. Половые расстройства у мужчин. М., 1968.

71. Проскура О.В. Неспецифические простатиты и везикулиты: Руководство по клинической урологии. /Под ред. А.Я. Пытеля. М., 1985. - С. 193-208.

72. Пшеничникова Т.Я., Сухих Г.Т. Бесплодный брак. //Акуш. и гинек. -1994.-№4.-С. 57-60.

73. Романенко В.Н., Орлов А.Г., Никитина Г.В. Книга для начинающего исследователя химика. - Л.: Химия, 1987.

74. Славин М.Б. Методы системного анализа в медицинских исследованиях. -М., 1989.

75. Справочник биохимика: Р.Досон, Д.Эллиот, У.Эллиот, К.Джонс. Пер. с англ. — М.: Мир, 1991.

76. Сяткин С.П. Синтез хлоргидратов полиаминов и их окислительное дезаминирование диаминоксидазой из быстрорастущих тканей. //Вопр. мед. хим. 1980. - № 3. - С. 322-325.

77. Сяткин С.П., Березов Т.Т. Окислительное дезаминирование полиаминов в гепатомах с различной скоростью роста. //Вопр. мед. хим. 1979. - № 5. -С. 611-617.

78. Сяткин С.П., Березов Т.Т. Микрометод флюорометрического определения содержания полиаминов и путресцина в тканях животных тонкослойной хроматографией на пластинках Силуфол UV 254. //Вопр. мед. хим. - 1981. - № 6. - С. 848-851.

79. Сяткин С.П., Березов Т.Т. Обмен полиаминов в злокачественных опухолях. //Вестн. АМН СССР. 1982. - № 3. - С. 10-21.

80. Сяткин С.П., Березов Т.Т., Гридина Н.Я. и др. Полиамины как биохимические маркеры антипролиферативного действия ингибиторов ферментов биосинтеза полиаминов и путресцина в культуре ткани L -клеток. //Вопр. мед. хим. 1991. - № 6. - С. 77-78.

81. Терентьев А.А., Тагирова А.К. Иммунохимическое исследование спермальных антигенов для оценки мужского бесплодия. //Молекулярные исследования мужской субфертильности. /Под ред. А.А. Николаева. -Астрахань. 2000. - С. 136-146.

82. Тиктинский O.JI. Руководство по андрологии. JL, 1990.

83. Тодоров Й. Клинические лабораторные исследования в педиатрии. //4-е изд. русское София «Медицина и физкультура», 1963.

84. Устинкина Т.И., Ткачук В.Н., Потин В.В. Клинико-лабораторная оценка нарушений генеративной функции мужчины при бесплодном браке. //Вестник АМН СССР. 1987. - № 1. - С. 77-84.

85. Федорончук Т.В., Николаева Т.Г., Ваньчкова Г.А. и др. Цитотоксическая активность аналогов полиаминов, модифицированных азотистыми основаниями. //Вестник РУДН, серия медицина. 2000. - № 2. - С. 17-20.

86. Федорончук Т.В., Сяткин С.П., Лулле И. Ж. и др. Влияние химически модифицированных аналогов полиаминов на биосинтез полиаминов и путресцина в бесклеточной тест-системе из гепатомы крыс. //Бюлл. экспер. биол. и мед. 1993.- № 9. - С. 256-258.

87. Харитонов Ю.Я. Аналитическая химия (аналитика). Кн. 2. Количественный анализ. Физико-химические (инструментальные) методы анализа: Учеб. для вузов. М.: Высш. шк., 2001.

88. Хоменко А.К., Дячок Ф.И., Гридина Н.Я. и др. Влияние сывороточной полиаминооксидазы на нормальные и опухолевые клетки. //Эксперим. онкология. 1984. - 6, № 6. - С.63-66.

89. Цветненко Е.З, Шугалей B.C. Полиамины спермин и спермидин в мозге и печени крыс при действии гипероксии. //Бюллетень эксп. биол. и медицины. 1978. - № 1. - С. 28-30.

90. Чудинов А.А., Чудинова Л.А., Коробов В.П. Метод определения низкомолекулярных олигоаминов в различном биологическом материале. //Вопр. мед. хим. 1984. - № 4. - С. 127-131.

91. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том 1. Микрофлора человека и животных и ее функции. М.: Изд-во ГРАНТЬ, 1998.

92. Aigner-Held R.D., Daves Y.G. Polyamines metabolites and conjugates in man and higher animals: a review of the literature. //Physiol. Chem. Phys. 1980. -Vol.12, №3.-P. 389-400.

93. Aitken R. J., West K., Buckingham D. Leukocytic infiltration into the human ejaculation and its association with semen quality, oxidative stress, and sperm function. //J. Androl. 1994. - № 4. - P. 343-352.

94. Ask A., Heby O. Synergistic action of a difluoromethylornithine bis (guanylgydrasone) against mouse L1210 leukemia. A cell kinetic analysis. //Int. Conference on Polyamines. - Budapest. - 1984. - P. 111.

95. Asotra S., Mladenov P.V., Burke R.D. Improved method for benzoyl chloride derivatization of polyamines for high performance liquid chromatography. //J. Chromatogr. - 1987. - Vol. 408. - P. 227-233.

96. Atmar V.J., Kuehn G.D. Phosphorylation of ornithine decarboxylase by a polyamine-dependent protein kinase. //Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1981. -Vol.78, №9.-P. 5518-5522.

97. Aziz S.M., Gillespie M.N., Crooks P.A. et al. The potential of a novel polyamine transport inhibitor in cancer chemotherapy. //J Pharmacol - Exp -Ther.-1996.-Vol. 278, № l.-P. 185-192.

98. Bachrach U. // Polyamines in Biomedical Research. /Ed. J.J.Gangas. New York.-1980.-P. 81-107.

99. Bachrach U., Kaye E., Chaen R. Advances in Polyamine research. //New York, 1983.

100. Beninati S., Piacentini M., Spinedi A. et al. Urinary polyamine excretion in man: unfluence of sex and age. //Biomed. Express. 1980. - Vol.33, № 5. -P. 140-143.

101. Berezov T.T., Syatkin S.P., Khomutov A.R. et al. //European Symposium on Organic Chemistry, 6th: Abstracts. Belgrade. - 1989. - P. 5.

102. Berezov T.T., Syatkin S.P. //International Congress on Therapy with Amino Acids and Analogous, 1st: Abstracts. Vienna. - 1989. - P. 286.

103. Biedermann В., Skatchkov S.N., Brunk I. et al. Spermine/spermidine isexpressed by retinal glial (Muller) cells and controls distinct K+ channels of their membrane. //Glia. 1998. - Vol.23, № 3. - P. 209-220.

104. Blair D.G.R. Activation of mammalian RNA polymerases by polyamines. //Int. J. Biochem. 1985. - Vol.17, № 1. - P. 23-30.

105. Buffoni F. Some contributions to the problem of amine oxidase. //Pharm. Res. Communs. 1980. - Vol.12, № 2. - P. 101-114.

106. Buts J.P. Les facteurs trophiques du lait. Bioactive factors in milk. //Arch-Pediatr. 1998. - Vol. 5, № 3. - P. 298-306.

107. Canellakis E.S., Kyriakidis D.A., Rinehart C.A. et al. Regulation of polyamine biosynthesis by antizyme and some recent developments relating the induction of polyamine biosynthesis to cell growth. //Biosci. Repts. -1985.-№5.-P. 189-204.

108. Capano G., Bloch K.J., Carter E.A. et al. Polyamines in human and rat milk influence intestinal cell growth in vitro. //J Pediatr - Gastroenterol - Nutr. -1998. - Vol.27. - № 3. - P. 281-286.

109. Chaisiri P., Harper M.E., Griffiths K. Plasma spermine concentrations of patients with benign and malignans tumours of the breast or prostate. //Clin, chim. acta. 1979. - Vol.92, № 2. - P. 273-282.

110. Chayen R. Clinical chemistry of polyamines. //Cell. Biochem. Funct.-1984. -Vol.2, №1.-P. 15-20.

111. Chun P.W., Rennert O.M., Saffen E.E., Taylor W.J. Effect of polyamines on the electrokinetis properties of red blood cells. //Biochem. and Biophys. Res. Communs. 1976. - Vol.69, № 8. - P. 1095-1101.

112. Cohen L.F., Lundgren D.W., Farrell P.M. Distribution of spermidine and spermine in blood from cystic fibrosis patients and control subject. //Blood. -1976. Vol.48, № 2. - P. 469-475.

113. Comolli R., Riboni L. Reassociation of eukaryotic ribosomal subunits and polyamine concentration in Yoshida ascites hepatoma and Ehrlich ascites carcinoma cells during growth. //Cancer Biochem. Biophys. 1980. - Vol.5, № l.-P. 25-31.

114. Cooper K.D., Shulka J.B., Rennert O.M. Polyamine distribution in cellular compartments of blood and in aging erythrocytes. //Clin. chim. acta. 1976. -Vol.73, № l.-P. 71-88.

115. Cooper K.D., Shulka T.B., Rennert O.M. Polyamine compartmentalization in various human disease states. //Clin. chim. acta. 1978. - Vol.82, № 1. -P. 1-7.

116. Cullis P.M., Green R.E., Merson-Davies L. et al. Probing the mechanism of transport and compartmentalisation of polyamines in mammalian cells. //Chem Biol. - 1999. - Vol. 6, № 10. - P. 717-729.

117. Delia R., Pegg A.E. Studies on the role of spermidine / spermine N' -acetyltransferase in the metabolism of polyamines. //Ital. J. Biochem. 1984. -'Vol.33,№ l.-P. 53-55.

118. Depiere D., Jung A., Culibras J., Roth M. Polyamine excretion in the urine of cancer patients. //J. Clin. Chem. and Clin. Biochem. 1983. - Vol.21, № 1. -P. 35-37.

119. Desser H., Hocker P., Weiser M., Bohnel J. The content of unbound polyamines in blood plasma and leukocytes of patients with polycythemia vera. //Clin. chim. acta. 1975. - Vol.63, № 2. - P. 243-247.

120. Desser H., Kleinberger G., Klaring J. Plasma polyamine levels in patients with liver insufficiency. //J. Clin. Chem. and Clin. Biochem. 1981. -Vol.19, №3,-P. 159-164.

121. Desser H., Lutz D., Kryer O., Stiever M. Rapid detection of polyamines in the sera of patients with colorectal carcinoma by liquid ion-exchance chromatography. //Oncology. 1980. - Vol.37, № 6. - P. 376-380.

122. Dorhout В., van-Beusekom C.M., Huisman M. et al. Estimation of 24-hour polyamine in take from mature human milk. //J Pediatr - Gastroenterol -Nutr. - 1996. - Vol.23, № 3. - P. 298-302.

123. Dunzendorfen U. Der Einflus reduzierter polyaminbiosynthese auf Tumorwachstum und Immunoglobuline bei Patienten mit Nieren- und Blasenkarzinom. //Therapiewoche. 1983. - Vol.33, № 24. - P. 3355-3356.

124. Duchen K., Thorell L., Nucleotide and polyamine levels in colostrum and mature milk in relation to maternal atopy and atopic development in the children. //Acta-Paediatr. 1999. - Vol.88, № 12. - P. 1338-1343.

125. Fernandez C., Sharrard RM., Tablot M. et. al. Evaluation of the significance of polyamines and their oxidases in the aetiology of human cervical carcinoma. //UK. Br J Can-iNov. 1995. - Vol.72, № 5. - P. 1194-1199.

126. Fogel Petrovic M., Vujcic S., Miller J., Porter C.W. Differential post-transcriptional control of ornithine decarboxylase and spermidine - spermine

127. N1 acetyltransferase by polyamines. //FEBS - Lett. - 1996. - Vol.391, № 1-2.-P. 89-94.

128. Forget P.P., Degraeuwe P.L., Smeets C. Fasting gastric fluid and fecal polyamine concentrations in premature infants. //J Pediatr - Gastroenterol -Nutr. - 1997. - Vol.24, № 4. - P. 389-392.

129. Fu S., Zou X., Wang X. et al. Determination of polyamines in human prostate by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection. //J Chromatogr. - В - Biomed - Sci. - Appl. - 1998. - Vol.709, № 2. - P. 297-300.

130. Fujisawa H., Kitani T. Purification and some properties of antizyme of ornithine decarboxylase from rat liver. //Int. Conf. on Polyamines. -Budapest, 1984.-P. 23.

131. Fujita K., Murakami Y., Hayashi S. A macromolecular inhibitor of the antizyme to ornithine decarboxylase. //Biochem. J. 1982. - Vol.204, № 3. -P. 647-352.

132. Gao Chun Xin, Krull I.S., Trainor T. Determination of aliphatic amines in air by online solid - phase derivatization with HPLC - UV/FL. //J. Chromatogr. Sci - 1990. - Vol.28, № 3. - P. 102-108.

133. Garcia- Dier L. C., Esteban-Ruiz P.F., Villar E., et.al. Enzyme and hormonal markers in the differential diagnosis of human azoospermia. //Arch. Androl. -1992.-№3.-P. 181-194.

134. Gutierrez M.C., G6mez Hens A., Pdrez - Bendito D. Kinetic - photometric determination of spermine, spermidine and their mixtures by the stopped flow technique. //Fresenius Z. anal. Chem. - 1988. - Vol.331, № 6. - P. 642-645.

135. Haddox M.K., Russell D.H. Nuclear transglutaminase activity and nuclear conjugation of polyamines exhibit parallel increases in regenerating rat liver. //Eur. J. Cell. Biol. 1980. - Vol.22, № 1. - P. 112-117.

136. Haddox M.K., Russell D.H. Increased nuclear conjugated polyamines and transglutaminase during liver regeneration. //Proc. Nat. Acad. Sci. USA, Biol. Sci. 1981. - Vol.78, № 3. - P. 1712-1716.

137. Harada J.J., Porter C.W., Morris D.K. Induction of polyamine limitation in Chinese hamster overy cells by a-methylornithine. //J. Cell. Physiol. — 1981. — Vol.107, №3.- P. 413-426.

138. Horn J., Beal S.L., Walach N. et al. Further evidence for the use of polyamines as biochemical markers for malignant tumors. //Cancer Res. -1982. Vol.42, № 8. - P. 3248-3251.

139. Horn J., Beal S.L., Walach N. et al. Relationship of urinary polyamines to tumor activity and tumor volume in patients. //Cancer Res. 1984. - Vol.44, №10.-P. 4675-4679.

140. Horn J., Schlechter P.J., Marton L.J. DFMO as a potential agent in cancer therapy a controlled study. //Int. Conf. on Polyamines. - Budapest. -1984. -P. 117.

141. Hsieh M.C., Cooperman B.S. The preparation and catalytic properties of recombinant human prostate specific antigen (rPSA). //Biochim - Biophys -Acta. -2000. - Vol.1481, № 1. -P. 75-87.

142. Igarashi K., Kashiwagi K., Kishida K. et al. Decrease in the SI protein of 30S ribosomal subunits in polyamine requiring mutants of E. coli growth in the absence of polyamines. //Eur. J. Biochem. 1981. - Vol.114, № 1. - P. 127131.

143. Ignatenko N.A., Gerner E.W. Growth arrest and polyamine - dependent expression of spermidine / spermine Nl-acetyltransferase in human tumor cells. //Cell - Growth - Differ. - 1996. - Vol.7, № 4. - P. 481-486.

144. Janne J., Alhoneu-Hongisto L., Kapyako K., Seppanen P. Experimental approaches to the systemic and topical use of polyamine antimetabolites as antiproliferative agents. //Advances in polyamine research. New York: Raven press, 1983. - P. 17-32.

145. Janne J., Kapyano, Sinervirta R. Effect of inhibitors of polyamine biosynthesis on growth and melanotic expression о melanoma cells. //Int. Conf. on Polyamines. Budapest. - 1984. - P. 15.

146. Jotova I., Wang C., Tabib A. et al. Effects of testosterone and 17 beta -estradiol on the polyamine metabolism in cultivated normal rat kidney epithelial cells. //Amino Acids - 2000. - Vol.18, № 4. - P. 353-361.

147. Kagramanova A.T., Tishenko L.D., Beresov T.T. //Biochemistry of Vitamin B6 / Eds T.Korpela, Ph.christen. Basel; Boston - 1987. - P. 429-432.

148. Kaminski K. Polyamines in gynecological cancers. //Biochem. Soc. Trans. -1981.-Vol.9,№2.-P. 333.

149. Karacagil M., Imamoglu A., Pasaoglu H. et al. The effect of spermine, spermidine and kalikrein on the triple adenosine triphosphatase enzyme activity of spermatozoa in males with oligoasthenozoosperma. //Brit. J. Urol., 1989.-Vol.63, № i.p. 84-86.

150. Koenig H., Goldstone A.D., Igbal Z. et al. Rapid polyamine synthesis plays a key role in the mediation of receptor and voltage-regulated calcium fluxes. //Int. Conf. on Polyamines. - Budapest. - 1984. - P. 8.

151. Kubo S., Tamori A., Nishiguchi S., et al. Relationship of polyamine metabolism to degree of malignancy of human hepatocellular carcinoma. //Oncol Rep. - 1998. - Vol.5, № 6. - P. 1385-1388.

152. Langkamp Henken В., Johnson L.R., Viar M.J., et al. Differential effect on polyamine metabolism in mitogen and superantigen - activated human T-cells. //Biochim. - Biophys. - Acta. - 1998. - Vol.1425, № 2. - P. 337-347.

153. Lauhararta L., Kousa M., Kapyaho K. et al. Reduction of increased polyamine levels in psoriatic lesions by retinoid and PUVA treatments. //Brit. J. Dermatol. 1981. - Vol.105, № 3. - P. 267-272.

154. Leveque J., Delcros J.G., Havouis R., et al. Accumulation of hydroxyspermidine in red blood cells, a potential index of tumor proliferation rate. //Anticancer Res. - 1996. - Nov - Des. - Vol. 16, № 6B. - P. 37453747.

155. Leveque J., Bansard J.Y., Watier E. Polyamines in human breast cancer and its relations to classical prognostic features: clinical implications. //Anticancer-Res. 1999. - Vol. 19, № 3B. - P. 2275-2279.

156. Loser C. Polyamines in human and animal milk. //Br J - Nutr. - 2000. -Nov. - 84 Supp / 1S55-8.

157. Lu В., Liang X., Scott G.K. Polyamine inhibition of estrogen receptor (ER) DNA binding and ligand - binding functions. //Breast - Cancer - Res -Treat. - 1998. - Vol.48, № 3. - P. 243-257.

158. Lynch MJ., Nicholson JK. Proton MRS of human prostatic fluid: correlations between citrate, spermine, and myo-inositol levels and changes with disease. Prostate. - 1997. - Vol.30, № 4. - P. 348-255.

159. Marton L.J. Potential for cerebrospinal fluid polyamine determinations in the diagnosis and therapeutic monitoring of brain tumors. //Advances in polyamine research. /Eds R.A. Campbell et al. New York: Raven press. -1978.-P. 257-263.

160. Marton LJ. An approach to the use of polyamine inhibitors for cancer therapy. //Med. Biol. 1981. - Vol.59, № 6. -P. 458-461.

161. McCann P.P. Regulation of ornithine decarboxylase in eukary otes. //Polyamines in biochemical research. New York: Wiley, 1980. - P. 109124.

162. McCloskey D.E., Yang J., Woster P.M. et al. Polyamine analogue induction of programmed cell death in human lung tumor cells. //Clin. Cancer - Res.- 1996. Vol.2, № 3. - P. 441-446.

163. McEvoy F.A., Hartley C.B. Polyamines in cystic fibrosis. //Pediat. Res. -1975. Vol.9, № 5. - P. 721-724.

164. Milano G., Cassuto J.P., Schneider M. et al. Polyamines in lymphomas: their value in disease staging and monitoring of therapy efficiency. //Nouv. rev. franc, hematol. 1980. - Vol.22, № 3. - P. 249-255.

165. Mitchell J.L.A. Post-translation controls of ornithine decarboxylase activity. //Advances in polyamines research. New York: Raven press. - 1981. - P. 15-26.

166. Morier-Teissier E., Drieu K., Rips R. Determination of polyamines by pre-column derivatization and electrochemical detection. //J. Liquid Chromatogr.- 1988.-Vol.11, №8.-P. 1637-1650.

167. Moulinoux J.-Ph., Le Calve M., Quemener V. et al. In vitro studies on the entry of polyamines into normal red blood cells. //Biochemie. 1984. -Vol.66, №5.-P. 385-393.

168. Moulinoux J.-Ph., Quemener V., Larzul J.-J. et al. Red blood cell polyamines in mice bearing the levis lung carcinoma (3LL) and in patients with bronchopulmonary cancers, //bit. J. Cancer. 1984. - Vol.34, № 2. -P. 277-281.

169. Natta C.L., Kremzner L.T. Polyamines and membrane proteins in Sickle cell disease. //Blood Cells. 1982. - № 8. - P. 273-280.

170. Nishioka K., Romsdahl M.M. Elevation of putrescine and spermidin in sera of patients with solid tumors. //Clin. chim. acta. 1974. - Vol.57, № 1. -P. 155-161.

171. Nishioka K., Romsdahl M.M., Fritsche H.A.; Johnston D.A. Polyamine in sera of patient with solid tumors. //Advances in polyamine research New York: Raven press. - 1978. - P. 265-272.

172. Nissen E., Dettmer E., Fiedler D. et al. Polyamine und ihre Beteutung fur die Kontrolle der Tumorchemotherapie. //Arch. Geschwulstforsch. 1980. -Vol.50, № 4. - P. 336-340.

173. Noak J., Kleessen В., Lorenz A. et al. The influence of a soluble dietary fiber containing diet on the polyamine formation by the intestinal microflora of rats. //Abstr. XII Intern. Symp. Gnotobiology, Honolulu. 1996.

174. Nothig-Lasto V., Weygand-Durasevic J., Livkobic T. et al. Binding of spermine to tRNA stabilises the conformation of the anticodon loop and creates strong binding sites for divalent cations. //Eur. J. Biochem. — 1981. — Vol.117, №2.-P. 263-267.

175. Ombelet W., Wouters E., Boels L. et al. Sperm morphology assessment: diagnostic potential and comparative analysis of strict or WHO criteria in a fertile and a subfertile population. //Int. J. Androl. 1997. - № 6. -P. 367-372.

176. Pegg A.E., Hibasami H., Matsul J. et al. Formation and interconversion of putrescine and spermidine in mammalian cells. //Advances in Enzyme Regulation. 1981. - Vol.19. - P. 427-451.

177. Pegg A.E., McCann P.P. Polyamine metabolism and function. //Amer. J. Physiol. 1982.-Vol.243,№ 12.-P. 212-221.

178. Pegg A.E., Seely J.E., Poso H. et al. Polyamine biosynthesis and interconversion in rodent tissues. //Fed. Proc. 1982. - Vol.41, № 14. -P. 3065-3072.

179. Peulen O., Dewe W., Dandrifosse G. et al. The relationship between spermine content of human milk during the first postnatal month and allergy in children. //Public Health - Nutr. - 1998. - Vol.1, № 3. - P. 181-184.

180. Poehl A.V. Die Einwirkung des Spermins auf die biologischchemischen Eigenschaften der Cholerabacillen. //Dtsch. med. Wchschensch. 1982. -№49.-P. 68-78.

181. Poehl A.V. Der Nachweis des Spermins in verschiedenen Drusen der Thierischen Organismus und die chemische Zusammensetzung des Brownseguard'schen Heilmittels. //Dtsch. med. Wchschensch. 1982. -№49.-P. 46-54.

182. Poso H. A human neuroblastoma cell line with altered form of ornithine decarboxylase. //Int. Conf. on Polyamines. Budapest. - 1984. - P. 128.

183. Rennert O.M., Shukla J.B. Polyamines in health and disease. //Advances in polyamine research. New York: Raven press. - 1978. -Vol. 2. - P. 195-211.

184. Rennert O.M., Trias J., Shukla J.B. Polyamine metabolism in cystic fibrosis. //Tex. Repts Biol, and Med. 1976. - Vol.34, № 1. - P. 187-197.

185. Roch A.M., Quash G.A., Huppert J. Mise en evidence immunochimique de l'attachement specifique de la putrescine aux proteines plasmatiques dont la fibronectine. I 1С. r. Acad. sci. Paris A. 1980. - Vol.290. - P. 449-452.

186. Roch A.M., Thomas V., Quash G. et al. A quantitative and qualitative study of the transglutamine-mediated insertion of polyamines into plasma proteins from patients with bronchpulmonary cancer. //Int. J. Cancer. 1984. -Vol.33.-P. 787-793.

187. Romano M., Cecco В., Cerra M., Matteis A. de. Polyamine excretion as prognostic marker in radiologic therapy of breast carcinoma in metastaticprase. //Advances in Polyamine Res New York: Raven press. - 1983. -Vol. 4.-P. 59-64.

188. Rudkin В., Mamont P., Seller N. Decreased protein-synthetic activity is early consequence of depletion of spermidin in tissue culture cells of rats hepatoma. //Biochem. J. 1984. - Vol.217, № 5. - P. 731-741.

189. Ruggeri P., Nicocia G., Venza I. et al. Polyamine metabolism in prostaglandin E2- treated human T lymphocytes. //Immunopharmacol Immunotoxicol. -2000.-Vol.22,№ l.-P. 117-129.

190. Russell D.H. Clinical relevance of polyamines as biochemical markers of tumor kinetics. //Clin. Chem. 1977. - Vol.23, № 1. - P. 22-27.

191. Russell D.H. Ornithine decarboxylase as a biological and pharmacological tool. //Pharmacology. 1980. - Vol.20, № 3. - P. 117-129.

192. Russell D.H. Ornithine decarboxylase: a key regulatory protein. //Med. Biol. 1981. - Vol.59, № 6. - P. 286-295.

193. Russell D.H. Clinical relevance of polyamines. //Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. -1983. Vol.18, № 3. - P. 261-311.

194. Russell D.H. Covalent modification of proteins by polyamines. //Int. Conf. on Polyamines. Budapest. - 1984. - P. 28.

195. Russell D.H., Stern L.Z. Altered polyamine excretion in duchenne muscular dystrophy. //Neurology. 1981. - Vol.31, № 1. - P. 80-83.

196. Sakagami H., Fujiwara E., Yokote Y. Changes in intracellular concentrations of amino acids and polyamines during the apoptosis of HL-60 cells. //Anticancer Res. - 2000. - Vol.20, № l A. - P. 265-270.

197. Scalabrino G., Ferioli M.E. Polyamine in mammalian tumors. //Advances in Cancer Research. New York: Raven press, 1981.- Vol.35. - P. 151 -268.

198. Scalabrino G., Ferioli M.E. Polyamines in mammalian tumors. //Advances in Cancer Research. New York: Raven press, 1981. - Vol.35. - P. 102.

199. Schuber F., Hong K., Diizgiines N. Polyamines as modulators of membrane fusion: aggregation and fusion of liposomes. //Biochemistry. 1983. -Vol.22, № 26. - P. 6134-6140.

200. Seidl R., Beninati S., Cairns N., et al. Polyamines in frontal cortex of patients with Down syndrome and Alzheimer disease. //Neurosci Lett. - 1996. -Vol.206, № 2-3. - P. 193-195.

201. Seiler N., Bolkenius F.N., Rennert O.M. Interconversion, catabolism and elimination of the polyamines. //Med. Biol. 1981. - Vol.59, № 5/6. -P. 334-346.

202. Seiler N., Knodgen B. Determination of the naturally accurring monoacetyl derivatives of di- and polyamines. //J. Chromatograph. (Biomed. Appl.). -1979.-Vol.164,№ l.-P. 155-168.

203. Seiler N., Knodgen В., Bink G. et al. Diamine oxidase and catabolism polyamines. //Advances in polyamine research. New York: Raven press. -1981.-P. 412.

204. Seiler N., Duranton В., Gosse F., Raul F. Spermine cytotoxicity to human colon carcinoma derived cells (CaCo - 2). //Cell - Biol. - Toxicol. - 2000. -Vol.16, №2. -P. 117-130.

205. Sidransky H., Ethel V., Challakonda M.M. Effect of spermine on hepatic polyribosomes and protein synthesis in rats. //Biochem. Med. 1982. -Vol.27,№ l.-P. 68-81.

206. Siimes M., Sepanen P., Alhonen-Hongisto L. et al. Synergistic action of two polyamine antimetabolites leads to a rapid therapeutic response in childhood leukemia. //Int. J. Cancer. 1981. - Vol.28, № 3. - P. 567-570.

207. Swendseid M.E., Panaqua M., Kopple J.D. Polyamine concentrations in red cells and urine of patients with chronic renal failure. //Life Sci. 1980. -Vol.26, №3.-P. 533-539.

208. Tabor C.W., Tabor H. Polyamines. //Annu. Rev. Biochem. 1984. - Vol.53. -P. 749-790.

209. Takagi Т., Chung T.G., Saith A. Determination of polyamines in hydrolysates of uremic plasma by high performance cation exchange colum chromatography. //J.Chromatogr. (Biomed. Appl.). 1983. - Vol.272, № 2. -P. 279-285.

210. Takami H., Nishioka K. Raised polyamines in erythrocytes from melanomabearing mice and patients with solid tumours. //Brit. J.Cancer. -1980. Vol.41, № 6. - P. 751-756.

211. Takami H., Romsdahl M.M., Nishioka K. Polyamines in blood-cells as a cancer marker. //Lancet. 1979. - Vol.2, № 5. - P. 912-918.

212. Tantini В., Ros C., Caldarera S. A possible mediating role of polyamines in cyclic AMP-phosphodiesterase stimulation in confluent heart cell cultures. //J. Mol. and Cell. Cardiol. 1981. - Vol.13, № 1. - P. 16.

213. Theoharides T.C. Polyamines spermidine and spermine as modulators of calcium-dependent immune processes. //Life Sci. 1980. - Vol.27, № 9. -P. 703-713.

214. Tsukamoto Т., Kinoshita H., Hirohashi K., et al. Human erithrocyte polyamine level after partial hepatectomy. //Hepatogastroenterology. 1997. - Vol.44, № 15. - P. 744-750.

215. Vince A.J. Metabolism of ammonia, urea, and amino acids, and their significance in liver disease. //In: Microbial Metabolism in the Digestive tract (ed. Hill M.J.). 1984. - P. 83-106.

216. Waalkes T.P., Rosenshein N.B., Shaper J.H. et al. A feasibility study in the development of biological markers for ovarian cancer. //J. Surg. Oncol. -1982. Vol.21, № 4. - P. 207-214.

217. Wang J.Y., Viar M.J., Li J. et al. Differences in transglutaminase mRNA after polyamine depletion in two cell lines. //Am J - Physiol. - 1998. - Vol.274, №2, Ptl.-P. 522-530.

218. Weeks R.S., Vanderwerf S.M., Carlson C.L., et al. Novel lysine-spermine conjugate inhibits polyamine transport and inhibits cell growth when given with DFMO. //Exp. Cell - Res. - 2000. - Vol.261, № 1. - P. 293-302.

219. WHO laboratory manual for the examination of human semen and sperm-cervical mucus interaction. WHO. Third Edition. 1992.

220. Wills R.B.H., Silalahi J., Wootton M. Simultaneous determination of food-related amines by high-performance liquid chromatography. //"J.Liquid Chromatogr."- 1987.-Vol.10,№ 14.-P. 3183-3191.

221. Woo K.B., Waalkes T.P., Abeloff M.D. et al. Urinary polyamines for evaluating the course of disease for patients with small carcinoma of the lung. //Cancer. 1983. - Vol.52, № 5. - P. 1684-1690.

222. Wu C., Miyagawa C., Kennedy D.O. et al. Involvement of polyamines in the protection of taurine against the cytotoxicity of hydrazine or carbon tetrachloride in isolated rat hepatocytes. //Chem. Biol - Interact. - 1997. -Vol.103, №3.- P. 213-224.

223. Zabib R.S., Tomasi LB. Enzymatic oxidation of polyamines: relationship to immunosuppressive properties. //Eur. J. Immunol. 1981. — Vol. 11, № 3. — P. 266-269.

Информация о работе

Плосконос, Мария Вячеславовна
кандидата биологических наук
Астрахань, 2004
ВАК 03.00.13

Диссертация

Физиологическое значение полиаминов в репродуктивной функции мужчин в норме и при её нарушениях - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы