Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Нитроксидергические механизмы адъювантного артрита

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Белоголовых, Людмила Александровна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 .Современные аспекты патогенеза аутоиммунного синовита.

1.2. Роль N0 в развитии заболеваний опорнодвигательного аппарата.

1.2.1. Молекулярные свойства N0.

1.2.2.Топография ТЧО-синтазы в хряще и синовиальной оболочке сустава.

1.2.3.Значение N0 в развитии аутоиммунного синовита и дистрофии хряща.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материал исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1.Общеморфологический метод.

2.2.2. Гистохимические исследования.

2.2.3. Иммуноцитохимические исследования

2.2.4. Метод электронной микроскопии.

2.2.5. Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3. ЛОКАЛИЗАЦИЯ И АКТИВНОСТЬ ЫАЭРН

ДИАФОРАЗЫ И 1Ч0-СИНТАЗ В СИНОВИАЛЬНОЙ

ОБОЛОЧКЕ И ХРЯЩЕ ТИБИОТАРЗАЛЬНОГО СУСТАВА У ЗДОРОВЫХ МЫШЕЙ.

3.1. Характеристика синовиальной оболочки.

3.2. Характеристика хряща.

ГЛАВА 4. ЛОКАЛИЗАЦИЯ И АКТИВНОСТЬ ЫАОРН

ДИАФОРАЗЫ И ЫО-СИНТАЗЫ В СИНОВИОЦИТАХ И ХОНДРОЦИТАХ ПРИ АДЪЮВАНТНОМ АРТРИТЕ

4.1. Характеристика синовиальной оболочки.

4.2. Характеристика хряща.

ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ ПРЕДНИЗОЛОНА И М-НИТРО-Ь-АРГИНИНА

НА НИТРОКСИДЕРГИЧЕСКУЮ ФУНКЦИЮ

СИНОВИОЦИТОВ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Нитроксидергические механизмы адъювантного артрита"

Актуальность проблемы. Проблема аутоиммунного воспаления в клинике внутренних болезней является чрезвычайно важной. Аутоиммунные болезни поражают 5-7% населения земного шара, чаше развиваются у женщин, чем у мужчин, как правило, в молодом возрасте и рассматриваются как наиболее частая причина хронической патологии человека [1, 24, 28].

Наиболее яркими представителями системных аутоиммунных болезней являются ревматические заболевания: системная красная волчанка, ревматоидный артрит, системная склеродермия, дерматополимиозит и полимиозит, гранулематоз Вегенера [49, 67]. Развитие аутоиммунных ревматических заболеваний связывают с поликлональной В-кпеточной активацией, Т-клеточной активацией антигеном, молекулярной мимикрией, дефектами генов, кодирующих структуру иммуноглобулинов, Т-клеточных рецепторов и синтез цитокинов, нарушением механизмов программированной гибели клеток (апоптоз) [48, 49]. Многие современные тенденции в изучении иммунопатогенеза воспалительных ревматических заболеваний можно проследить на примере ревматоидного артрита [49, 63]. Это находит свое отражение в морфологии ревматоидного синовита, который представляет собой классический пример иммунного воспаления [27].

Ревматоидный артрит (РА)- одно из наиболее распространенных хронических аутоиммунных заболеваний человека, частота которого в популяции достигает 1% [41, 46], а экономические потери от РА для общества сопоставимы с ишемической болезнью сердца. К кардинальным признакам РА относится неуклонно прогрессирующее поражение суставов (хронические боли, деформация, нарушение функции), приводящее к инвалидности и снижению продолжительности жизни пациентов [47, 49]. Увеличение смертности во многом обусловлено нарастанием частоты сопутствующих заболеваний (инфекции, поражение сердечно-сосудистой системы и почек, остеопоретические переломы и др.), развитие которых патогенетически связано с плохо контролируемыми ревматоидным воспалением и дефектами иммунитета [48, 80].

Ревматоидный артрит (РА) представляет собой хронический прогрессирующий синовит, приводящий к постепенной деструкции суставов [20, 41]. Суть патологического процесса при РА составляет прогрессирующее неконтролируемое воспаление синовиальной оболочки суставов, обусловленное резидентными синовиальными клетками: фибробластами, макрофагами, дендритными, тучными, эндотелиальными клетками, Т- и В-лимфоцитами [20, 45, 63]. Основное значение в патогенезе РА придают двум тесно взаимосвязанным процессам: антиген-специфической активации CD4 Т-лимфоцитов по Th-1 типу, характеризующейся избыточным синтезом интерлейкина (IL-2), интерферона (IFN-y), IL-17, IL-18, и дисбалансом между продукцией провоспалительных цитокинов (фактора некроза опухоли-a (TNF-а), IL-1, LL-6, LL-8 и противовоспалительных цитокинов (IL-10, растворимого антогониста IL-1, растворимых TNF-a рецепторов, IL-4) с преобладанием продукции первых над вторыми [48, 61]. Th-1 клетки вовлечены в реакции клеточного иммунитета, а именно гиперчувствительность замедленного типа, воспаление, клеточную цитотоксичность [39, 26, 43].

Именно нарушение синтеза цитокинов лежит в основе патогенеза хронического воспаления при аутоиммунных заболеваниях. По современным представлениям ключевыми медиаторами иммуновоспалительного процесса при РА являются TNF-a и IL-ip [45, 44, 48, 184] Эти последние регулируют выработку оксида азота (N0), что выдвигает его на передний план патогенетического процесса в синовиальной оболочке. По данным экспериментальных исследований, подавление синтеза N0 ассоциируется с уменьшением признаков воспаления при различных формах экспериментальных артритов [179, 191, 198, 199, 191]. Экспрессия индуцибельной NO-синтазы (iNOS) и повышенный синтез N0 впервые показаны на моделях органоспецифических аутоиммунных заболеваний in vivo, таких как экспериментальный аллергический энцефаломиелит и иммунологически опосредованный диабет у мышей без признаков ожирения [88, 175]. Подобный характер NO-синтазной функции выявлен на модели адъювантного и коллаген-индуцированного артрита у мышей линии MRL// [202]. Дебют экспериментального артрита предотвращается введением монометиларгинина - специфического ингибитора iNOS [179, 202, 205] Однако, остается не выясненным, как интенсивность выработки N0 в структурах синовиальной оболочки контролирует напряженность и длительность воспалительного процесса.

Анализ литературы показывает недостаточность сведений о нитроксидергической функции синовиальной оболочки в норме и при развитии ревматоидного воспаления. Так, концентрация нитритов в синовиальной жидкости значительно превосходит концентрацию нитратов и нитритов в сыворотке крови у больных РА, что указывает на высокий локальный уровень синтеза N0 в суставах, пораженных РА [139, 183]. Известно, что источником N0 в синовиальной жидкости являются гранулоциты [138, 132]. Однако другие типы локальных NO-продуцирующих клеток синовии остаются неизвестны. Вместе с тем, гребует уточнения динамика развития токсического и цитопротективного эффектов N0, притом, что данные об экспрессии NOS в тканях сустава на разных стадиях РА чрезвычайно противоречивы. Одни исследователи отводят N0 роль главного организатора хронического воспаления, другие, напротив, ее отвергают [141]. Не известны также топография и динамика активности NOS синовиоцитов на фоне действия основных фармакологических препаратов.

Многообразие клинических, патологических и иммунологических проявлений РА делает этот процесс похожим на клинико-иммунологический синдром, чем на одну «гомогенную» болезнь [181]. Не случайно РА приобрел статус модели, на которой активно изучаются новые аспекты патогенеза аутоиммунного воспаления и разрабатываются принципиально новые направления противовоспалительной терапии [174]. Выдающееся открытие полного адъюванта Фрейнда дало возможность дальнейшего изучения проявлений клеточного иммунитета при экспериментальном воспроизведении аутоиммунных заболеваний, а именно участия N0 в развитии синовита. Адъювантный артрит мышей напоминает по своему течению и морфологическому проявлению ревматоидный артрит человека [82, 83]. На модели АА планируется уточнить роль ЫО-синтазной компоненты на разных этапах развития синовиального воспаления.

Цель работы: установить значение нитроксидергических механизмов в развитии адъювантного артрита

В работе решались следующие задачи:

1. Определить локализацию и активность ЫЛОРН-диафоразы и N0-синтаз в клетках синовиальной оболочки и хряща тибиотарзального сустава у здоровых мышей линии С57В1аск6.

2. Изучить локализацию и активность ЫАОРН-диафоразы и ЫО-синтаз в синовиоцитах и хондроцитах тибиотарзального сустава на ранней и поздней стадии адъювантного артрита у мышей линии С57В1аск6.

3. Исследовать уровень акгивности КАОРН-диафоразы и ЫО-синтаз в синовиоцитах и хондроцитах тибиотарзального сустава у мышей линии С57В1аск6 с адъювантным артритом на фоне введения специфического ингибитора фермента М-нитро-Ь-аргинина.

4. Изучить влияние преднизолона на активность нитрооксидсинтазы в синовиоцитах и хондроцитах тибиотарзального сустава у мышей линии С57В1аск6 с адъювантным артритом.

Научпая новизна и теоретическое значение работы: а) впервые проведен комплексный анализ участия ЫО-синтазной компоненты в инициации и развитии адъювантного артрита; б) впервые установлена динамика активности ЫАЛРН-диафоразы. индуцибельной и конститутивной ЫО-синтазы в синовиоцитах и хрящевой ткани мышей линии С57В1аск6, дана их детальная количественная характеристика в условиях экспериментального артрита; в) установлено значение блокаторов ЫО-синтазы и преднизолона на экспрессию нитроксидсинтаз в тканях тибиотарзального сустава у мышей на модели ревматоидного воспаления.

Проведенные исследования позволили обосновать и сформулировать научные положения, способствующие пониманию ЫО-ергических механизмов, лежащих в основе становления и развития адъювантного воспаления. Выявленные изменения состояния ЫАОРН-диафоразы, индуцибельной и конститутивной ЫО-синтазы в синовиоцитах и хондробластах, а также фармакологическая коррекция активности ферментов достаточно объективно свидетельствуют о прямом и неоднозначном влиянии оксида азота на патогенез адъювантного воспаления. Это может иметь важное теоретическое значение для разработки новых подходов в понимании патогенетических механизмов ревматоидного артрита у человека.

Практическая ценность работы. Полученные в работе данные по топографии и реактивности ЫО-синтезирующих синовиоцитов и хондроцитов в условиях экспериментального артрита могут быть использованы в области клинической и теоретической ревматологии, патофизиологии и патологической анатомии аутоиммунного поражения опорно-двигательного аппарата. Установленная динамика активности ЫО-синтазы и резистентность синовиоцитов при введении ингибитора энзима и преднизолона может представлять эффективную модель для разработки препаратов направленного действия и надежной фармакологической коррекции патологии суставов при ревматоидном артрите.

Положения, выносимые на защиту:

1 Участие ЫО-содержащих клеточных структур синовиальной оболочки в развитии аутоиммунного артрита определяется их типологической и химической гетерогенностью.

2. Динамика активности NOS в синовиоцитах зависит от стадии воспаления и определяет специфическое эффекторное действие N0 на клетки-мишени.

3. Степень поражения хрящевой ткани суставов при адъювантном артрите коррелирует с NO-синтетической функцией хондробластов

4 Введение Ы-нитро-Ь-аргинина и преднизолона снижает активность фермента в клеточных элементах синовии.

Апробация работы состоялась на кафедре гистологии, цитологии, клеточной биологии ГОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет МЗ РФ» (Владивосток, 2005). Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Конгрессе ревматологов России (Саратов, 2003, Москва, 2004), на заседаниях Приморского краевого терапевтического общества (Владивосток, 2001-2003), Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 25.09. 2004), Конгрессе европейской противоревматической лиги (EULAR, Берлин, 2004), Конгрессе международной ассоциации по остеоартрозу (OASI, Чикаго, 2004), в рамках научной сессии ДВО РАН и СО РАМН «Новые технологии в диагностике и лечении заболеваний человека» (Владивосток, 2005), Тихоокеанской научно-практической конференции студентов и молодых ученых (Владивосток, 2005).

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Белоголовых, Людмила Александровна

выводы

1. Умеренная активность NADPH-диафоразы установлена в синовиоцитах покровного и стромального слоях синовиальной оболочки у здоровых мышей линии C57BIack6. В субпокровном уровне синовии NADPH-d позитивные клетки отсутствуют. Топография NADPH-d совпадает с локализацией конститутивной NOS (c-NOS).

2. Хондроциты и хондробласты тибиотарзального сустава здоровых мышей содержат NADPH-d. Высокая активность фермента выявляется в цитоплазме пролиферируюших хондробластов, занимающих краевую зону хряша В средних и глубоких слоях хрящевой ткани интенсивность окрашивания хондроцитов снижается до умеренной и низкой.

3. Ранняя фаза адъювантного воспаления характеризуется увеличением на 30,4% числа нитрооксидпозитивных клеток. Активность NADPH-диафоразы в клетках синовиальной оболочки определяется на высоком уровне (75,2+3,8 ЕОП). На 30-день адъювантного артрита количество и активность нитрооксидпозитивных клеток снижается.

4 В начальной фазе адъювантного артрита количество синовиоцитов, экспрессирующих iNOS постоянно увеличивается, достигая максимума на 7-14 день. Большинство клеток экспрессирующих i-NOS локализуется в покровном и стромальном слоях синовиальной оболочки.

5. Поздняя стадия адъювантного артрита характеризуется значительным уменьшением количества и интенсивности окрашивания i-NOS реактивных элементов, что сопровождается сохранением экспрессии конститутивного изофермента (n-NOS) в синовиоцитах покровного, субпокровного и глубокого стромального уровней синовиальной оболочки.

6. В раннюю стадию адъювантного артрига преобладают хондробласты с высокой активностью NADPH-d. В позднюю стадию активность фермента и количество нитрооксидпозитивных клеток снижается.

7. Ы-нитро-Ь-аргинин тотально блокирует активность ЫАЭРН-ё, ¿-N08 и п-ЫОБ в макрофагах и синовиоцитах покровного и субпокровного слоях синовиальной оболочки. Активность ЫАГ)РН-(1 в стромальном слое прогрессивно уменьшается до низкой.

8. Преднизолон снижает активность ЫАОРН-ё, ¡-N08 и с-ЫОБ в клетках глубокого стромального слоя синовиальной оболочки.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема аутоиммунного воспаления в клинике внутренних болезней является чрезвычайно важной. Многие современные тенденции в изучении иммунопатогенеза воспалительных ревматических заболеваний можно проследить на примере ревматоидного артрита [27, 28]. Это находит свое отражение в морфологии ревматоидного синовита, который представляет собой классический пример иммунного воспаления [27].

Ревматоидный артрит - одно из самых тяжелых аутоиммунных заболеваний человека с преимущественным поражением суставов, распространенность которого в популяции колеблется от 0.5 до 1% [46]. Через 10-15 лет от начала болезни примерно 90% пациентов теряют трудоспособность, а 1/3 становится полными инвалидами [44]. Уже в дебюте РА воспаление имеет хронический характер, очень быстро приводит к необратимой деструкции суставов, и именно поэтому, плохо поддается воздействию противовоспалительных препаратов [44]. Предполагается, что агрессивное подавление воспаления в самом начале болезни может способствовать снижению риска инвалидности и преждевременной смерти [46]. Учитывая фундаментальный вклад аутоиммунного воспаления в патогенез РА, исследования на модели РА имеют общемедицинское значение [57, 82]. Несомненные успехи в изучении патогенеза РА: уточнения роли провоспалительных медиаторов (цитокинов, лейкотриенов, простагландинов, оксигенных радикалов) в активации деятельности лимфоцитов, макрофагов, синовиоцитов, привели к изменению тактических подходов к лечению РА [80]. На основании полученных данных было выдвинуто несколько основных гипотез патогенеза РА [44]. Согласно одной из них РА -антигеннообусловленное, Т - клеточно-опосредованное заболевание, воспалительный потенциал которого «запускается» через распознавание антигена СБ4+ Т-клетками в синовиальной ткани [80]. Гистологически в синовиальной оболочке даже на поздних стадиях болезни, постоянно выявляются активированные С04+ Т-клетки в тесной ассоциации с антигенпрезентирующими клетками, вызывающими стимуляцию Т-клеток [206]. Скопление в синовиальной оболочке Т-клеток вызывает реакцию гиперчувствительности по ТЫ-механизму (синтез ФНО-а, интерферона-у, интерлейкина-2, ИЛ-12) [24]. Активированные Т-клетки синовиальной оболочки выделяют медиаторы, регулирующие функцию В-клеток, макрофагов, фибробластов (синтез провоспалительных медиаторов) и занимают ключевую позицию в развитии и прогрессировании ревматоидного синовита [206].

В последнее время исследователей привлекает участие оксида азота в патогенезе РА [201]. Обнаружено, что концентрация нитрита в синовиальной жидкости у больных РА была значительно выше концентрации нитритов в сыворотке крови у тех же больных, что иллюстрирует высокий локальный уровень синтеза N0 в суставах, пораженных РА [117]. Интенсивность продукции N0 кореллировала с показателями активности РА, такими, как продолжительность утренней скованности, количество воспаленных и болезненных суставов [99]. Все вышеперечисленные факты позволяют утверждать, что интенсивность продукции N0 у больных РА отражает напряженность воспалительного процесса [148]. Полимеразная цепная реакция подтвердила экспрессию значительного количества т1ША N08-2 в синовиальной оболочке при РА [183]. Иммуногистохимические исследования показали, что в синовиоцитах, эндотелиальных клетках, хондроцитах экспрессируется N08-2 в большей степени, чем в инфильтрирующих синовиальную оболочку мононуклеарных клетках и фибробластах [122]. Большинство синовиоцитов и инфильтрирующих мононуклеаров, иммунореактивных к N08-2, экспрессировали СБ 14 и НЬА-ОЯ рецепторы [122]. Этот факт позволяет предположить, что основными продуцентами N08-2 являются А-синовиоциты.

Многообразие клинических, патологических и иммунологических проявлений РА делает этот процесс более похожим на клинико-иммунологический синдром, чем на одну «гомогенную» болезнь [181]. Неслучайно РА приобрел статус модели, на которой активно изучаются новые аспекты патогенеза аутоиммунного воспаления и разрабатываются принципиально новые направления противовоспалительной терапии [57, 82]. Открытие полного адъюванта Фрейнда дало возможность дальнейшего изучения проявлений клеточного иммунитета при экспериментальном воспроизведении аутоиммунных заболеваний, в том числе участие N0 в развитии синовита.

Резюмируя содержание настоящей работы, мы обсудим некоторые общие вопросы патогенеза адьювантного артрита с точки зрения функции N0 в инициации и развитии аутоиммунного воспаления.

N0 как медиатор этих процессов получил право на самостоятельное существование в начале девяностых годов XX века, но только в последние пять лет с помощью иммуно- и гистохимических методов были установлены основные механизмы его действия на клетки хрящевой ткани и синовиальной оболочки. Радиометрические и биохимические исследования привели к выводу о двух противоположных направлениях активности N0 - цитотоксическом (провоспалительном) и цитопротективном (противовоспалительном). Однако полученные данные не решили вопрос о количественном и топологическом представительстве NO-ергических синовиоцитов на разных стадиях течения аутоиммунного воспаления. Клетки, нарабатывающие N0, поддерживают основной баланс этой молекулы. Типология и локализация NO-продуцирующих клеток определяют спектр действия газа на их ближайшее микроокружение. Оказалось, что главной причиной, препятствующей созданию полномасштабной картины участия N0 в генезе такого аутоиммунного поражения суставов, как ревматоидный артрит, является чрезвычайная гетерогенность локализации активности конститутивной и индуцибельной NOS у человека и экспериментальных животных. Для решения этой задачи потребовались разработки новейших моделей аутоиммунного воспаления и сопоставление их с результатами изучения NOS на материале суставов человека.

Использованная в нашем исследовании специфическая линия мышей C57BIack6, генетически предрасположенных к развитию аутоиммунного воспаления соединительной ткани, имеет определенные преимущества перед другими моделями, так как позволяет исследовать изменение NADPH-d/NOS-содержащих структур на разных стадиях воспалительного процесса. Тем не менее, прежде чем картировать энзимы, мы провели контрольные опыты с тем, чтобы выделить критерии, адекватные для индукции адьювантного артрита у линейных животных в качестве модели РА у человека. Параллельно мы верифицировали картину артрита на срезах, окрашенных гематоксилином и эозином, и только после этого приступали к исследованию топохимии NADPH-d/NOS. Нами установлено, что:

1. Минимальная эффективная доза полного адьюванта Фрейнда, введенного в тибиотарзальный сустав, вызывает развернутую картину аутоиммунного воспаления, которая коррелирует с признаками ревматоидного артрита у человека. При этом мы не наблюдали каких-либо заметных системных проявлений: прибавка в весе у мышей с индуцированным артритом не отличается от таковой у контрольных животных, а воспалительный процесс не распространяется на соседние суставы.

2. Наиболее частыми изменениями синовиальной оболочки при введении адьюванта являются пролиферация синовиоцитов покровного слоя, лимфоидная инфильтрация, ангиоматоз и фибриноидные изменения интерстициальной ткани. При адыовантном артрите достоверно чаще, чем на других моделях, определяется накопление в инфильтрате макрофагов и лимфоцитов, что в известной степени соотносится с патоморфологией ревматоидного артрита у человека В этой связи наиболее важным морфологическим проявлением являются накопление в межуточной ткани плазмоцитов и ангиоматоз, которые статистически значимо чаще встречаются при периартикулярном введении адъюванта. Эти критерии, по нашему мнению и мнению других исследователей [82, 98], убедительно свидетельствуют в пользу специфичности моделируемого адъювантного артрита.

3. NO-ергическая функция синовиоцитов и хондробластов определяется динамикой активности NADPH-d/NOS на разных стадиях воспаления Одновременная идентификация конститутивного (c-NOS) и индуцибельного (i-NOS) изоферментов на фоне введения N-нитро-Ь-аргинина и преднизолона позволяет точнее оценить избирательное вовлечение NO-ергической компоненты в патогенез адъювантного артрита.

Прежде чем перейти к разбору функции N0 в развитии АА рассмотрим топохимию NADPH-d/NOS у здоровых мышей линии С57В1аск6. Активность NADPH-диафоразы (NADPH-d) установлена в синовиоцитах покровного и стромального слоях синовиальной оболочки у здоровых мышей. В покровном слое преобладают синовиоциты с умеренной активностью фермента (42-60 ЕОП). В субпокровном уровне NADPH-d позитивные клетки отсутствуют. Топография NADPH-d совпадает с локализацией конститутивной NOS (c-NOS). У контрольных животных в клетках хряща высокая активность NADPH-d выявляется в цитоплазме пролиферирующих хондробластов, умеренная и низкая в хондроцитах промежуточного и глубокого слоев. Таким образом, нам удалось установить наличие N0- синтетической функции у клеточных элементов хряща и синовии у интактных мышей. Выявлены различия в экспрессии NOS в интактном хряще у человека и экспериментальных животных. Определяются они различной способностью к экспрессии c-NOS, что следует принимать во внимание при оценке результатов полученных в эксперименте и их экстраполяции на человека.

Гистологическая картина адъювантного артрита имеет прогрессирующую динамику и разделяется на два этапа: ранний артрит (до 14 дней от начала введения адъюванта) и поздний или хронический артрит (30-ый день воспаления).

При топохимическом анализе NADPH-d/NOS нами установлен неоднородный паттерн активности энзимов на разных этапах течения воспалительной реакции. В синовиальной оболочке мышей обнаруживаются NADPH-d-позитивные синовиоциты покровного, субпокровного и стромального уровней синовии, сосудистые эндотелиоциты и фибробласты с высокой степенью активности энзима. На 7-й и 14-й день эксперимента количество маркированных клеток, преимущественно с высоким уровнем активности фермента, увеличивается в среднем на 30,4%. На 30-й день эти показатели заметно снижаются, приближаясь к контрольному уровню.

Иммуноцитохимическое исследование NOS показывает возрастание активности i-NOS в синовиоцитах на ранней стадии артрита. Хроническая фаза воспалительной реакции характеризуется снижением i-NOS-иммунореактивного окрашивания клеток и усилением окрашивания на c-NOS. Динамика воспаления сопровождается не только изменениями активности ферментов, но и типологического паттерна маркируемых клеток: в первую неделю адъювантного воспаления выявляются, в основном, плеоморфные синовиоциты покровного и субпокровного слоя, а на поздней стадии - клетки стромального слоя с преобладанием i-NOS-иммунореактивных фибробластов и лимфоцитов.

Гетерогенная локализация конститутивной и индуцибельной NOS указывает на неоднородное участие N0 в развитии адъювантного артрита. Локальная наработка N0 в структурах синовиальной оболочки некоторыми авторами интерпретируется как проявление защитных свойств нитроксида, которые препятствуют накоплению токсических свободных радикалов, пероксинитритов и продуктов воспалительной реакции и, таким образом, защищает от гибели синовиальные клетки [106].

Токсический и защитный эффекты, вызываемые монооксидом азота, взаимодополнительны и противостоят друг другу как элементы одного действия. Они представляют две стороны процесса, обусловленного активностью различных изоформ NOS, уровнем наработки N0 и его окислительно-восстановительным статусом [66]. Избыточная продукция монооксида азота стимулирует локальное образование супероксидных ионов, формирующих первичное звено цитотоксического эффекта. Токсические оксиданты нарушают связи между компонентами клеточных мембран и цитоплазматических белков, запуская механизмы некроза и апоптоза, что на фоне массивного поступления N0 усугубляет энергетический дисбаланс клеток синовиальной оболочки [23, 31].

Обсуждая значение NOS в развитие экспериментального артрита, приведем результаты исследований фермента на модели лаймского артрита у мышей линии DBA/2J, резистентной к развитию артрита и линии C3H/HeJ, восприимчивой к развитию артрита [97]. Авторы работы модифицировали эти линии в генетически дефицитные по экспрессии i-NOS. Несмотря на то, что обе линии были дефицитны по ключевому антимикробному агенту, гистологические признаки артрита оказались одинаковыми в обеих линиях. Другие авторы [143] изучали экспрессию i-NOS в синовиальной оболочке коз, инфицированных вирусом козьего артрита-энцефалита. В результате проведенного исследования не обнаружено доказательств прямой стимуляции вирусом экспрессии i-NOS, а также ее участия в антивирусном ответе. Наличие iNOS в синовии было выявлено только на поздних стадиях течения артрита. Большинство i-NOS-позитивных клеток не несли рецепторов МНС II класса и CD68, что позволило идентифицировать их как синовиоциты типа В [143].

Предполагается [114], что i-NOS в большей степени вовлекается в формирование рубцовой ткани воспаленного сустава. Так, на линиях мышей дефицитных по гену экспрессии i-NOS (C57BL/6Ai) в сравнении с линией мышей C57/B16Cij в условиях аутоиммунного артрита было показано, что делеция гена N0S-2 снижает количество нитротирозин-позитивных хондроцитов, уровень нитратов/нитритов в крови в первой линии [114]. Однако при этом не обнаружено разницы в экспрессии ММР-3 и ММР-9 в хондроцитах и уровне интерлейкина-1 ß в крови животных обеих линий [114]. Авторы делают вывод, что удаление гена iNOS не влияет на развитие артрита, но уменьшает степень дегенерации хряща [91].

С учетом вышеизложенного обнаруженное нами снижение активности индуцибельной изоформы фермента в хронической фазе экспериментального артрита дают основания поставить вопрос о протективной функции i-NOS. Этот вывод подтверждают данные, полученные на различных моделях экспериментального артрита. Авторам удалось показать, что применение селективных ингибиторов i-NOS приводило к ухудшению течения эрозивного артрита [97, 191]. Предполагают, что сущность протективного эффекта i-NOS состоит в сенсибилизации клеточных структур к апоптозу с последующей его реализацией через р53 опосредованный механизм на поздней стадии эволюции РА [116].

Усиление окрашивания синовиоцитов при реакции на NADPH-d/NOS, наблюдаемое нами в модели адьювантного артрита, следует рассматривать как проявление адаптационной активации (индукции) ферментов, возникающей в ответ на введение адъюванта. Синовиоциты способны нарабатывать высокие концентрации N0 в ответ на аппликацию IL-lß, TNF и LPS [213]. Индукция NOS в тканях сустава инициируется дистрофическими, метаболическими и ишемическими изменениями, которые неизбежно возникают в результате действия медиаторов воспаления и продуктов деятельности иммунокомпетентных клеток.

Установленные нами изменения экспрессии NOS позволяют по-новому представить патогенетическую роль N0 в развитии адьювантного синовита. В условиях острого воспаления продукция N0 вызывает токсические явления в тканях сустава и определяется суммарной активностью индуцибельной и конститутивной NOS с доминированием i-NOS. При хроническом процессе спектр эффекторного действия N0 поддерживается активностью, главным образом, конститутивного изофермента. При этом гиперпродукция N0 усиливает интенсивность воспаления, стимулирует проницаемость микрососудов и синтез свободных радикалов [91], потенцирует активность циклооксигеназ и цитокинов [86]

Согласно нашим результатам монотонная экспрессия конститутивной формы NOS на всех стадиях патологического процесса указывает на её участие в патогенезе АА через обеспечение персистирования воспаления, вероятнее всего, путем поддержки Thl- типа иммунного ответа. Убедительные доказательства такого эффекта были приведены в литературе ранее [156, 200].

Таким образом, нами установлено прямое участие NO-ергических механизмов в развитии адъювантного артрита. N0- ергические механизмы определяются функцией синовиоцитов, активность NOS в которых оказалась неоднородной: превалирование i-NOS в острой фазе на фоне перманентного синтеза n-NOS в острой и хронической фазе артрита. Всё это позволяет говорить о возможной протективной функции i-NOS и патологической n-NOS, тем более, что в последующих работах выявлено участие NOS-2 в физиологическом синтезе N0 и участие NOS-1 и N0S-3 в дополнительном синтезе NO при воспалительных заболеваниях [58]. Можно предполагать, что активация N0S-2 -составная часть защитно-адаптационных реакций [58].

Интересные данные получены нами при исследовании локализации NADPH-d/NOS на фоне введения неселективного блокатора ферментов N-нитро-Ь-аргинина и преднизолона. Оба агента вызывают существенную регрессию численности иммунореактивных клеток, но, вероятно, действуют на разные популяции синовиоцитов. При аппликации N-Hmpo-L-аргинина происходит снижение активности NADPH-d, i-NOS и c-NOS в макрофагах стромального слоя, а также в других клетках всех слоев синовиальной оболочки.

Действие N-нитро-Ь-аргинина заключается в подавлении одинаково эффективном как конститутивных, так и индуцибельной изоформ NOS [9]. В результате их использование приводит к нежелательному снижению активности iNOS. Поскольку в ряде работ при использовании N-mnpo-L-аргинина противовоспалительный эффект не достигался, а в некоторых случаях исход воспаления (возникновение эрозии суставов) даже ухудшался, предполагается, что для достижения противовоспалительного эффекта полная блокада синтеза N0 необязательна [191]. Это предположение исходит из того, что защитный эффект ингибиторов NOS определяется не полным прекращением синтеза N0, а снижением его до уровня, при котором супероксиддисмутаза начинает активно взаимодействовать с супероксидом, защищая синовию от него и одновременно препятствуя образованию пероксинитрита и вторичных оксидантов [10].

Неоднородное действие ^нитро-Ь-аргинина обусловлено не только различной типологией обнаруженных синовиоцитов, но и, по-видимому, их неодинаковым участием в поддержании NO-ергического баланса при развитии адъювантного воспаления. Эти данные согласуются с влиянием L-аргинина (L-Arg) на характер течения аутоиммунного воспаления. Установлено, что при адьювантном артрите L-аргинин оказывает противовоспалительное действие, которое связывают с его влиянием на синтез N0 и антиноцицептивным эффектом [84]. При адьювантном артрите L-Arg опосредует выработку опиоидного дипептида киоторфина, который даже в незначительных концентрациях вызывает анальгезию и, таким образом, сдерживает развитие отека периартикулярных тканей [129] Нитропроизводные L-аргинина, блокируя активный центр NOS, снижают активность гуанилатциклазы, что в конечном итоге усиливает болевые реакции и ведет к отеку пораженной конечности. Можно полагать, что аппликация N-нитро-Ь-аргинина в эксперименте потенциирует механизмы адъювантного артрита, несмотря на снижение активности NOS.

Анти- или провоспалительное действие блокаторов NOS находится в определенной зависимости от стадии воспаления, на которой происходит экспозиция препарата. Однако в отличие от ^нитро-Ь-аргинина, локальное действие преднизолона на NO-синтазную функцию синовиальной оболочки направлено преимущественно в сторону снижения напряженности воспалительного процесса. Преднизолон действует на экспрессию энзимов в синовиоцитах, находящихся, главным образом, в глубоком уровне стромального слоя. Снижение активности фермента в этих условиях сопряжено с преобладанием кластерных форм синовиоцитов притом, что тотальная инактивация NOS в них не обнаруживается. Фармакодинамика кортикостероидов включает в себя влияние на различные звенья NOS-зависимого синтеза N0. Преднизолон укорачивает период полураспада мРНК-N0S-2 внутри клеток [58], снижает внутриклеточное содержание мРНК-NOS-l, mPHK-NOS-2 и mPHK-NOS-3 [58], способствует дезинтеграции синтезированных молекул NOS [58], уменьшая проявления воспаления при АА.

Таким образом, применение специфического неселективного и неспецифического блокаторов нитроксидсинтаз в модели адъювантного артрита у линии мышей С57В1аск6 подтвердило наличие NO-ергической функции синовиоцитов и её активное участие в развитии аутоиммунного воспаления. При этом применение специфических ингибиторов NOS не обязательно будет сопровождаться противовоспалительным эффектом.

Влияние NO-синтазной компоненты на развитие адъювантного воспаления не ограничивается клетками синовиальной оболочки. Хронизация воспаления неизбежно распространяется на хрящевую ткань, что в дальнейшем ведет к формированию паннуса и деструкции сустава. Указанным изменениям хряща всегда сопутствует хронический пролиферативный синовит, причем пролиферативная реакция, так же, как и хрящевая структурно-функциональная деградация, демонстрируют отчетливую связь с динамикой активности NOS.

У мышей при введении адъюванта высокая активность NADPH-d/NOS выявляется в цитоплазме пролиферирующих хондробластов в краевой зоне хряща, и хондроцитах, формирующих изогенные группы в глубоких его отделах. Если на ранней стадии воспаления хондроциты экспрессируют высокую активность NADPH-d, то по мере прогрессирования патологического процесса степень окрашивания клеток неизменно снижается. Эта зависимость сопровождается редукцией слоев хрящевой ткани, дезорганизацией лакун и дистрофическими изменениями цитоплазмы хондробластов и хондроцитов. Воспалительное поражение ведет также к общим изменениям тинкториальных свойств межуточной ткани хряща.

У грызунов в норме NADPH-d маркирует все типы хрящевых клеток. Поэтому падение активности NADPH-d при адъювантном артрите носит, по нашему мнению, реактивный характер и является результатом действия гуморальных факторов воспаления, циркулирующих в синовиальной жидкости. Важно подчеркнуть, что у человека хондроциты в норме не экспрессируют NOS [145]. Эта разница в локализации фермента свидетельствует о том, что экстраполяция на человека данных, полученных при изучении артрита с использованием экспериментальных животных, имеет определенные ограничения.

Анализ результатов экспериментального исследования в сопоставлении с литературными данными позволяет констатировать, что синовит является необходимым условием для развития дистрофии хряща вследствие раннего угнетения синтетической активности хондроцитов. При этом хрящевая дистрофия может быть определена как N0- зависимый процесс.

Итак, в развитии адъювантного воспаления принимают участие нитрооксидергические механизмы. Выявленные изменения состояния NADPH-диафоразы, индуцибельной и конститутивной NO-синтазы в синовиоцитах и хондробластах, а также фармакологическая коррекция активности ферментов достаточно объективно свидетельствуют о прямом и неоднозначном влиянии оксида азота на патогенез адъювантного воспаления Иммуноцитохимическое исследование NOS показывает возрастание активности i-NOS в синовиоцитах на ранней стадии артрита. Хроническая фаза воспалительной реакции характеризуется снижением i-NOS-иммунореактивного окрашивания клеток и сохранением окрашивания на c-NOS. Обсуждена протективная функция iNOS в развитии АА и провоспалительная c-NOS на всех стадиях воспалительного процесса при АА. Ы-нитро-Ь-аргинин тотально блокирует активность NADPH-d, i-NOS и c-NOS в макрофагах и синовиоцитах во всех слоях синовиальной оболочки. Выяснено, что для достижения противовоспалительного эффекта полная блокада синтеза N0 необязательна. В отличие от N-HHTpo-L-аргинина, локальное действие преднизолона на NO-синтазную функцию синовиальной оболочки направлено преимущественно в сторону снижения напряженности воспалительного процесса. Наши исследования указывают на непосредственную связь изменений активности NADPH-d/NOS хряща с динамикой развития адъювантного воспаления.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Белоголовых, Людмила Александровна, Владивосток

1. Актуальные проблемы патофизиологии (избранные лекции) / Под ред. Б.Б. Мороза М.: Медицина, 2001.-424с.

2. Альфа2- макроглобулин в сыворотке и синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом и остеоартрозом / З.Коларов, Р. Стоилов, М. Балева, К.Николов, Й. Шейтанов и др. // Терапевт, арх. -2000. Т.72, 35. -С. 17-19.

3. Анализ иммунных нарушений у больных ревматоидным артритом с поражением сердца / В.Т.Тимофеев, Г.В. Порядин, М.В.Головизнин, С.И. Кондратчик // Патолог, физиология и эксперимент, терапия. 1998. - №3. -С. 10-12.

4. Арлеевская, М.И. Клинические и лабораторные признаки нарушенного функционирования иммунной системы у больных ревматоидным артритом и их кровных родственниц / МИ. Арлеевская, Н.П Шилкина, А.П. Цибулькин // Терапевт, арх. 2005. -. № 5. - С.26-29.

5. Барановский, П.В. Влияние салазосульфапиридина ( сульфасалазина) на состояние системы комплемента у крыс с адъювантным артритом / П.В. Барановский, И.Ю. Высоцкий, М.З. Болюх // Фармакология и токсикология. -1989 Т. 52, №1. - С. 65-67.

6. Брюне, Б. Апоптотическая гибель клеток и оксид азота: механизмы активации и антагонистические сигнальные пути: обзор / Б. Брюне, К. Сандау, А. фон Кнетен // Биохимия. 1998. - Т.63, вып.7.- С. 966-975.

7. Ванин, А.Ф. Динитрозильные комплексы железа и Б-нитрозотиолы- две возможные формы стабилизации и транспорта оксида азота в биосистемах: обзор / А.Ф. Ванин // Биохимия -1998. Т.63, вып.7. - С.924-938.

8. Ванин, А.Ф. Оксид азота в биологии: история, состояние и перспективы исследований / А.Ф. Ванин // Биохимия.-1998.-Т.63, вып.7. С. 867-869

9. Ванин, А.Ф. Оксид азота в биомедицинских исследованиях / А.Ф. Ванин // Вестн. Рос. АМН. 2000. -№ 4.- С.- 3-5.

10. Ю.Викторов, И.В. Роль оксида азота и других свободных радикалов в ишемической патологии мозга / И.В. Викторов // Вестн. Рос. АМН. -2000.-№4. -С.5-11.

11. Влияние а2Ь- интерферона in vivo и in vitro на функциональную активность Т- лимфоцитов больных ревматоидным артритом / A.A. Ярилина, М.Ф. Никонова, М.М. Литвина, P.M. Балабанова, A.A. Ярилин // Терапевт, арх.- 2000. № 5. - С.9-17.

12. Влияние бета-каротина на развитие адьювантного артрита и продукцию интерлейкина-1 у крыс / A.A. Потапова, О.В. Буюклинская, Т.Л. Корсова , H.A. Морозова, Л.И. Кривов и др. // Бюл. эксперимент, биологии и медицины.-1993 -Т. 116,№ 12. -С. 611-613.

13. Вовлечен ли оксид азота в адаптационную защиту органов от стрессорных повреждений ? / Е.Б.Маленюк, Н.М. Аймашева, Е.Б. Манухина, В.Д. Микойн, Л.Н. Кубрина, А.Ф. Ванин // Бюл. эксперимент, биологии и медицины. -1998. Т. 126, № 9. - С,

14. Гиперпродукция оксида азота в патофизиологии кровеносных сосудов: обзор / Ж.-К.Стокле, Б. Мюле, Р. Андрианцитохайна, А. Клещев // Биохимия -1998. Т.63, вып.7. - С. 976-983.

15. Гипоксия и оксид азота / И.Ю.Малышев, Е.А.Монастырская, Б.В.Смирин, Е.Б. Манухина // Вестн. Рос. АМН.- 2000. №9. - С.44-48.

16. П.Горрен, А.К.Ф Универсальная и комплексная энзимология синтазы оксида азота: обзор / А.К.Ф. Горрен, Б. Майер // Биохимия -1998. Т.63, вып.7.- С.870-890.

17. Горячев, Д.В. Роль вирусов в развитии ревматоидного артрита / Д.В. Горячев, О.Н. Егорова, P.M. Балабанова // Терапевт, арх. 2001 - Т. 73, № 2. - С. 72-75.

18. Гутенева, Г.С. Адьювантный артрит как иммунологическая модель воспалительного процесса в экспериментальной куролтологии / Г.С.Гутенева // Иммунологические концепции в курортологии: Сб. науч. тр.-1987.-С. 17-20.

19. Дж. Вест. Стерлинг. Секреты ревматологии.-СПб.: БИНОМ-Невский диалект, 1998.- 768 с.

20. Значение химических свойств оксида азота для лечения онкологических заболеваний: обзор / Д А Винк, Й. Водовоз, Дж.А. Кук., М.С. Кришна, С. Ким и др.// Биохимия -1998. -Т.63, вып.7. С. 948-957.

21. Игнатьева, Г.А. Иммунная система и патология / Г.А. Игнатьева // Патолог, физиология и эксперимент, терапия. 1997. - № 4. - С. 26-37.

22. Изменение кислотно-основного состояния синовиально жидкости у больных ревматоидным артритом / В.А.Бобков, Т.Н. Брыленкова, E.H. Копилов, С.Г. Мицкая, Н.И. Козакова // Терапевт, арх. 1999. - Т. 71, № 5. -С.20-22.

23. Иммунологические аспекты диагностики ранней стадии ревматоидного артрита / Т. Тимофеев, H.A. Шостак, Т.К.Логинов, A.A. Мурадянц, Н.М. Швырева, Ю.В. Дунаева // Терапев.арх. -2000. № 5. - С. 19-21.

24. Копьева, Т.Н. Клиническая морфология артритов при ревматических заболеваниях / Т.Н. Копьева, М.С. Веникова М.: РАМН, 1992.-219 с.

25. Кудинов, Ю.Д. Современные взгляды на патогенез аутоиммунных заболеваний/ Ю.Д. Кудинов//Мед. вести. 1997,- №2. -С.29-31.

26. Лисицына, Т.А. Активные формы кислорода и патогенез ревматоидного артрита и системной красной волчанки /Т.А. Лисицына, М.М.Иванова, АД Дурнев // Веста Рос. АМН. 1996. - №12. - С. 15-20.

27. Лукина, Г.В. Новые подходы к биологической иммуномодулирующей терапии ревматоидного артрита: нейтрализация основных цитокинов / Г.В. Лукина, Я.А.Сигидин, С.В. Скуркович, B.C. Скуркович // Терапевт арх. 1998.- Т. 70, №5. - С. 32-37.

28. Маеда, X. Оксид азота и кислородные радикалы при инфекции , воспалении и раке: обзор / X. Маеда, Т. Акаике // Биохимия -1998. Т.63, вып. 7- С. 1007-1019.

29. Макроглобулин в сыворотке и синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом и остеоартрозом / 3. Коларов, Р. Стоилов, М. Балева, К. Николов, Й. Шейтанов и др.// Терапевт, арх.- 2000. № 5 - С. 17-19.

30. Малышев, И.Ю. Стресс, адаптация и оксид азота/ И.Ю. Малышев, Е.Б Манухина // Биохимия -1998.- Т.63, вып.7,- С.992-1006.

31. Манухина, Е.Б. Оксид азота в сердечно-сосудистой системе: роль в адаптационной защите / Е.Б Манухина, И.Ю. Малышев, Ю.В Архипенко // Вестн. Рос. АМН. -2000,- № 4.- С. 16-21.

32. Медведев, А.Н. Влияние Циклоспорина А (сандиммун) на уровень растворимых рецепторов интерлейкина-2 при ревматоидном артрите. /

33. А.Н.Медведев, А.И.Коршунов, Е.Л. Насонов // Терапевт арх. -1997. Т. 69, №8. - С. 19-21

34. Механизмы передачи сигнала оксидант-оксид азота в сосудистой ткани: обзор / М.С Волин, К.А. Дэвидсон, П.М. Камински. Р.П.Фейнгерш, К.М. Мохаззаб-Ч.// Биохимия -1998.- Т.63, вып.7.-С.958-965.

35. Мякоткин, В.А. Генетические аспекты ревматических болезней / В.А. Мякоткин // Вестн. Рос. АМН. -1998 №12. -С.39-43.

36. Насонов, Е.Л. Глюкокортикоиды в ревматологии / Е.Л. Насонов, Н.В.Чичасова, В.Ю. Ковалев. М.: Медицина, 1998 - 160 с.

37. Насонов, ЕЛ. Глюкокортикоиды. 50 лет применения в ревматологии. / Е.Л. Насонов // Терапевт, арх. -1999 №5.- С. 5-9.

38. Насонов, Е.Л. Клиническое значение С-реактивного белка при ревматоидном артрите / Е.Л. Насонов, Н.В. Чичасова, А.А.Баранов // Клинич.медицина. -1997. № 7. - С. 26-30.

39. Насонов, Е.Л. Механизмы действия противоревматических препаратов / Е.Л. Насонов // Терапевт. арх.-1996 № 5. - С.8-13.

40. Насонов, Е.Л. Моноклональные антитела к фактору некроза опухоли-а в ревматологии/Е.Л. Насонов //Рус. мед. журн РМЖ 2003. -Т. 11. №7. -С. 390-397.

41. Насонов, Е.Л. Неоптерин: лабораторный маркер активации клеточного иммунитета при ревматоидном артрите / Е.Л. Насонов, М.Ю. Самсонов, Н.В. Чичасова, Г.Р. Имаметдинова// Терапевт, арх -1998.-Т. 70, №5.-С.28-31.

42. Насонов, Е.Л. Почему необходима ранняя диагностика и лечение ревматоидного артрита / Е.Л. Насонов // Рус. мед. журн.: РМЖ,- 2002. Т. 10, №22. -С. 1009-1012.

43. Насонов, Е.Л. Фактор некроза опухоли о- новая мишень для противовоспалительной терапии ревматоидного артрита / Е.Л. Насонов // Клинич фармакология и терапия. 2001. - № 1 - С.64-70.

44. Насонов, Е.Л. Фармакотерапия ревматоидного артрита с позиций доказательной медицины: новые рекомендации / Е.Л. Насонов // Рус. мед. журн.: РМЖ 2002. - Т. 10, № 6. - С. 294-301.

45. Насонова, В.А. Базисная терапия ревматоидного артрита в ранней стадии / В.А. Насонова, Я.А. Сигидин // Терапевт. арх.-1996. № 5. - С. 5-8.

46. Насонова, В.А. Избранные лекции по клинической ревматологии / В.А. Насонова, Н.В Бунчук.-М.: Медицина, 2001.- 272 с.

47. Насонова, В.А. Клиническая ревматология / В.А Насонова, М.Г. Астапенко.-М.: Медицина, 1989. 590 с.

48. Невзорова, ВА. Роль окиси азота в регуляции легочных функций / В.А. Невзорова, М.В. Зуга, Б.И. Гельцер // Терапевт, арх. 1997. - Т. 69, № 3. -С. 68-73.

49. Недоспасов, A.A. Биогенный NO в конкурентных отношениях: обзор / A.A. Недоспасов // Биохимия -1998. Т.63, вып.7. - С. 881-904.

50. Нежинская, Г.И. Фармакологическая активность иммунокорректоров при адьювантном артрите / Г.И. Нежинская, Н.С. Сапронов // Патолог, физиология и эксперимент. 2001 - №3. -С. 11-13.

51. Особенности распределения болезненности и эрозивного поражения мелких суставов при ревматоидном артрите / E.H. Амосова, А.И.

52. Ивашковский, B.B. Гижко, И.И. Химич, Н.В. Шебеко // Терапевт, арх. -1999.-Т. 71, № 5. С.12-17.

53. Пяй, Л. Длительная медикаментозная терапия ревматоидного артрита и его ремиссия / Л. Пяй, С. Пяй // Терапевт арх. 2000. - № 5.- С.21-25.

54. Раевский, К С. Роль оксида азота в глутаматергической патологии мозга / К.С. Раевский, В.Г. Башкатова, А.Ф.Ванин // Вестн. Рос. АМН. 2000.-№4. -С.5-11.

55. Ранняя диагностика ревматодного артрита / Н.А.Шостак, Г. В Порядин, И В. Золкина, В Т Тимофеев. A.A. Мурадянц // Рос. мед. журн. 1999. -№ 6. - С. 12-14.

56. Растворимые молекулы адгезии (Р-селектин, 1САМ-1, 1САМ—3) при ревматоидном артрите / Е.Л. Насонов, М.Ю. Самсонов, Г.П. Тилз, Е.Л. Никифорова // Терапевт, арх. -1999. Т. 71, № 5. -С. 17-20.

57. Ревматоидный артрит: Диагностика и лечение /В.Н. Коваленко, Н.М. Шуба, Л.Б. Шолохова и др. / ред. В Н. Коваленко К.: МОРИОН, 2001. -272 с.

58. Ремизова, М.И. Роль оксида азота в норме и при патологии: обзор / М.И. Ремизова// Вестн. службы крови России.-2000.-Т. 2, № 5.-С. 53-59.

59. Реутов, В.П. NO- синтазная и нитритредуктазная компоненты цикла оксида азота: обзор / В.П. Реутов, Е.Г Сорокина // Биохимия. 1998. -Т.63, вып.7. - С. 1029-1040.

60. Реутов, В.П. Медико-биологические аспекты циклов оксид азота и супероксидного анион-радикала / В.П. Реутов // Вестн. Рос. АМН. 2000. -№ 4. -С.35-41

61. Ройт, А. Основы иммунологии / А.Ройт//-М.: Мир, 1992. -328 с.

62. Роль окида азота в механизмах развития болевого синдрома / M.JI. Кукушкин, В.Н. Графова, В.С.Смирнова, В.А.Зинкевич, В.К. Решетняк // Анестезиология и реаниматология. 2002. - № 4. -С. 4-6.

63. Салихов, И.Г Фагоцитарные реакции воспаления в клинике и патогенезе ревматоидного артрита / И.Г.Салихов // Казанский мед. журн. 1994. -Т.75, №3. - С. 197-199.

64. Салихов, И.Г. Функциональное состояние клеток- эффекторов воспаления при ревматоидном артрите / И.Г.Салихов, А.И. Рахматуллина, АЛ. Цибулькин // Терапевт, арх. -1991. Т. 63, №5. - С. 82-86.

65. Сапронов, Н.С Особенности развития адьювантного артрита у крыс, сенсибилизированных азоном / Н.С. Сапронов, Г.И. Нежинская // Патолог, физиология и эксперимент, терапия. 1997. -№ З.-С. 35-37.

66. Северина, И.С. Растворимая гуанилатциклаза в молекулярном механизме физиологических эффектов оксида азота: обзор / И.С. Северина // Биохимия -1998. Т.63, вып.7. - С.939-947.

67. Сосунов, A.A. Оксид азота как межклеточный посредник / А.А.Сосунов // Соросовский образовательный журн. 2000. - Т. 6, № 12. - С.27-34.

68. Тейлор, Б.С. Индуцибельная синтаза оксида азота в печени: регуляция и функции: обзор / Б.С. Тейлор, Л.Х. Аларсон, Т Р. Биллиар // Биохимия -1998. -Т.63, вып.7.- С. 905-923.

69. Уразаев, А.Х. Физиологическая роль оксида азота / А.Х. Уразаев, А.Л. Зефиров //Успехи физиол. наук,- 1999 Т30. №1. - С. 54-72.

70. Фишер, A.A. Цитохимическая характеристика нейтрофильных лейкоцитов периферической крови и синовиальной жидкости у больных ревматоидным артритом в динамике лечения / А.Фишер, А.Ю. Ионов, М. Г. Шубич // Ревматология. 1990,- №4. - С. 22-29.

71. Фомина, JÏ.J1. Диагностическое значение адгезивных реаций нейтрофилов при ревматоидном васкулите / Л.Л.Фомина, А.И. Рахматуллина // Терапевт, арх. 1993.- Т. 65, №6. - С. 72-79.

72. Фризен, В Н. Концепция прямого участия кишечника в патогенезе ревматоидного артрита / В.Н. Фризен // Терапевт арх. 1998. -Т. 70, №5. -С. 24-28.

73. Эффекты L-аргинина при хронических болевых синдромах / Е. И. Данилова, В.Н.Графова, М.Л. Кукушкин, В.А. Зинкевич // Эксперимент, клинич. фармакология.-1999. Т.62, №4,- С. 11-13.

74. Якупова, С.П. Дисфункция вегетативной нервной системы у больных ревматоидным артритом и возможности ее медикаментозной коррекции / С.П. Якупова, М.Ф. Исмагилов, И.Г. Салихов // Неврологические вести. -2000.-Т.32, №3-4.-С.28-31.

75. Activation of human peripheral blood mononuclear cells by nitric oxidegenerating compounds / H.M. Lander, P. Sehajpal, D.M. Levine et al. // J. Immunol.-1993.-Vol. 150.-P.1509-1516.

76. Alisa E, Koch. Angiogenesis: Implications for rheumatoid arthritis / E. Alisa Koch // Arthritis Rheumatism -1998 -Vol. 41, №6.-P.951-962.

77. Aminoguanidine, an inhibitir of inducible nitric oxide synthase, ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis in SJL mice /А.Н. Cross, T.P. Misko, R.F. Lin et al. //J. Clin. Invest.-1993.-Vol. 93.-P.2684-2690.

78. Anemia in Rheumatoid Arthritis: Association with Polymorphism in Ше Tumor Necrosis Factor Receptor I and II Genes / J.R. Glossop, P.T. Dawes, A.B. Hassell, D.L. Mattey//J. Rheumatol.-2005.-Vol. 32, №9.-P. 1673-1678.

79. Apparent hydroxyl radical production by peroxinitrite. implication for endothelial injury from nitric oxide and superoxide / J.S. Beckman, T.W. Beckman, T.W Chen et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.-1990.-Vol. 87,-P. 1620-1624.

80. Articular chondrocytes synthesize nitric oxide in response to cytokines and lipopolysaccharide / J. Stadler, M. Stefanovic-Racic, T.R. Billiar et al. // J. Immunol.-1991.-Vol. 147.-P.3915-3920.

81. Association between the expression of inducible nitric oxide synthase by chondrocytes and its nitric oxide-generating activity in adjuvant arthritis in rats

82. Y. Yonekura, I. Koshiishi, K. Yamada et al. // Nitric Oxide.-2003,-Vol. 8, №3.-P. 164-169.

83. Bird, J.L. Nitric oxide inhibits aggrecan degradation in explant cultures of equine articular cartilage / J.L. Bird, S. May, M.T. Bayliss // Equine Vet. J-2000.-Vol. 32, №2.- P 133-139.

84. Blanco, F.J. IL-1-induced nitric oxide inhibits chondrocyte proliferation via PGE-2 / F.J. Blanco, M. Lotz // Exp. Cell Res.-1995.-Vol. 218.-P.319-325.

85. Brown, C.R. Development of lyme arthritis in mice deficient in inducible nitric oxide synthase / C.R. Brown, S.L. Reiner // Infect. Dis.-1999.-Vol. 179, №6,-P. 1573-1576.

86. Chillingworth, N.L. Characterisation of a Freund's complete adjuvant-induced model of chronic arthritis in mice / N.L. Chillingworth, L.F. Donaldson // J Neurosci Methods.-2003.-Vol. 128, №l-2.-P.45-52.

87. Choi, J.W. Nitric oxide production is increased in patients with rheumatoid arthritis but does not correlate with laboratory parameters of disease activity. / J.W. Choi / Clinica Chimica Acta.-2003.-Vol. 336, №l-2.-P.83-87.

88. Chondrocyte apoptosis induced by nitric oxide / F.J. Blanco, R.L. Ochs, H. Schwartz et al. //Am. J. Pathol.-1995.-Vol. 146.-P.75-86.

89. Cloning, characterization and expression of a cDNA encoding an inducible nitric oxide synthase from the human chondrocyte / I.G. Charles, R.M. Palmer, M.S. Hickery et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1993.-Vol. 90.-P. 11419-11423.

90. Combination Treatment of Rat Adjuvant-Induced Arthritis with Methotrexate, Probiotic Bacteria Enterococcus faecium, and Selenium / J.

91. Rovensky, K. Svik, V. Matha, R. Istok, V. Kamarad et al. // Ann N Y Acad Sci.-2005.-Vol. 1051.-P.570-581.

92. Complete Freund's adjuvant promotes the increases of IFN-gamma and nitic oxide in suppressing chronic arthritis induced by pristane / C.L. Zheng, K. Ohki, A. Hossain, A. Kukita, T. Satoh, O. Kohashi // lnflammation.-2003.-Vol. 27, №4.-P.247-255.

93. Cytokine and nitric oxide levels in a rat model of immunologic protection from adjuvant-induced arthritis / A. Conforti, S. Lussignoli, S. Bertani et al. // Int. J Immunopathol. Pharmacol.-2001 -Vol. 14, №3.-P.153-160.

94. Differential function of nitric oxide in murine antigen-induced arthritis / A. Veihelmann, A. Hofbauer, F. Krombach et al. // Rheum.-2002.-Vol. 41-P.509-517.

95. Differentials roles of nitric oxide and oxygen radicals in chondrocytes affected by osteoarthritis and rheumatoid arthritis /1. Mazzetti, B. Grigolo, L. Pulsatelli et al. // Clinical Sci.-2001.-Vol. 101, №6.-P.593-599.

96. Distribution of protein nitrotyrosine in synovial tissues of patients with rheumatoid arthritis and osteoarthritis / J.K. Sandhu, S. Robertson, H.C. Birnboim etal. //J. Rheum.-2003.-Vol. 30, №6.-P.l 173-1181.

97. Does Nitric Oxide Help Explain the Differential Healing Capacity of the Anterior Cruciate, Posterior Cruciate, and Medial Collateral Ligaments? / H.I. Georgescu, Cao Min, M. Stefanovic-Racic et al. // Am. J. Sports Med.-2000-Vol. 28.-P. 176-182.

98. Dual effect of nitric oxide in articular inflammatory pain in zymosan-induced arthritis in rats / J.C. Rocha, M.E.B. Peixoto, S. Jancar et al. // Br J. Pharmacol.-2002.-Vol. 136, №4.-P.588-596.

99. Effect of nitric oxide on cytokine and prostaglandin synthesis by human articular cartilage / C.H. Evans, L. Oppliger. B,A. Michel et al. II Osteoarthritis Cart.-1994.-Vol. 2 (suppl. 1).-P.51.

100. Effect of NOS2 gene deficiency on the development of autoantibody mediated arthritis and subsequent articular cartilage degeneration / H. Kato, K. Nishida, A. Yoshida et al. //J. Rheum.-2003.-Vol. 30.-№2.-P.247-255.

101. Effects of interleukin-lbeta on chondroblast viability and extracellular matrix changes in bovine articular cartilage expiants IG. Stabellini, M. De Mattei, C. Calastrini et al. Il Biomed. Pharmacother.-2003.-Vol. 57, №7 -P.314-319.

102. Effects of nitric oxide on chondrocyte migration, adhesion and cytoskeletal assembly / S R. Frenkel, R.M.Clancy, R.L. Ricci et al. // Arthritis Rheum.-1996.-Vol. 39.-P. 1905-1912.

103. Elevated levels of nitrate in rheumatoid arthritis / O. Onur, A.S. Akinci, F. Akbiyik et al. // Rheum. lnt.-2001.-Vol. 20, №4.-P. 154-158.

104. Elevated nitric oxide production in rheumatoid arthritis. Detection using the fasting urinary nitrate: creatinine ratio / P.S. Grabowski, A.J. England, R. Dykhuizen et al. // Arthritis Rheum.-1996.-Vol. 39.-P.643-647.

105. Endothelin receptor subtype B mediates synthesis of nitric oxide by cultured bovine endothelial cells / Y. Hirata, T. Emori, S. Eguchi, et al. // J. Clin. Invest.-1996.-Vol. 91.-P. 1367-1373.

106. Enhancement of fibroblast collagen synthesis by nitric oxide / M.B. Witte, F.J. Thornton, D.T. Efron et al. // Nitric Oxide.-2000.-Vol. 4.-P.572-582.

107. Evidence for nitric oxide-mediated oxidative damage in chronic inflammation. Nitrityrosine in serum and synovial fluid from rheumatoid patients / H. Kaur, B. Halliwell // FEBS Lett.-1994.-Vol. 350.-P.9-12.

108. Expression and function of CD40 in rheumatoid arthritis synovium / C. Sekine, H. Yagita, N. Miyasaka et al. // J. Rheum.-1998 -Vol. 25.-P.1048-1053.

109. Expression of endothelial nitric oxide synthase and inducible nitric oxide synthase in synovium of rheumatoid arthritis / N. Ishiuchi, S. Yoshino, M. Yokoyama et al. // Ryumachi.-1999.-Vol. 39, №5.-P.749-756.

110. Expression of TGF-betas and their receptors is differentially modulated by reactive oxygen species and nitric oxide in human articular chondrocyte / N. Ayache, K. Boumediene, M. Mathy-Hartert et al. // Osteoarthritis Cart.-2002-Vol. 10, №5.-P.344-352.

111. Furchgott, R.F. Studies on endothelium-dependent vasodilation and the endothelium-derived relaxing factor / R.F. Furchgott // Acta Physiol. Scand -I990.-Vol. 139.-P.257-270.

112. Furchgott, R.F. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine / R.F. Furchgott, J.V. Zawadzki // Nature.-1980.-Vol. 288.-P.373-376.

113. Garthwaite, J. Glutamate, nitric oxide and cell-cell signalling in the nervous system / J. Garthwaite // Trends Neurosci -1991 -Vol. 14.-P.60-67.

114. Generation of nitric oxide by lapine meniscal cells and its effects on collagen biosynthesis: stimulationof collagen production by arginine / M. Cao, M. Stefanovic-Racic, H.I. Georgesku et al. // J. Orthop. Res.-1998.-Vol. 16.-P.104-11.

115. Genetic determinants of rheumatoid arthritis: the inducible nitric oxide synthase (NOS2) gene promoter polymorphism / M. Pascual, M.A. Löpez-Nevot, R. Cäliz et al. // Genes and Immunity.-2002.-Vol. 3.-P.299-301.

116. Glucocorticoids do not affect the induction of a novel calcium-dependent nitric oxide synthase in rabbit chondrocytes / R.M.J. Palmer, T. Andrews, N.A. Foxwell etal. //Biochem. Biophys. Res. Comm.-1992.-Vol. 193.-P.398-405.

117. Grabowski, P.S. Nitric oxide production in cells derived from the human joint / P.S. Grabowski, H. Macpherson, S.H. Ralston // Br. J. Rheum.-1996.-Vol. 35.-P.207-2I2.

118. Herniated cervical intervertebral discs spontaneously produce matrix metalloproteinases, nitric oxide, interleukin-6, and prostaglandin E2 / J.D. Kang, H.I. Georgesku, L. Mclntyre-Larkin et al. // Spine.-1995.-Vol. 20,-P.2373-2378.

119. Hochberg, M C. COX-2 selective inhibitors in the treatment of arthritis: a rheumatologist perspective / M.C. Hochberg // Curr. Top. Med. Chem-2005.-Vol. 5, №5.-P.443-448.

120. Identification of inducible nitric oxide synthase in human osteoarthritic cartilage / M. Stefanovic-Racic, S.C. Watkins, R. Kang et al. // Trans. Orthop. Res. Soc.-1996.-Vol. 21.-P.534.

121. Ignarro, L.J. Biosynthesis and metabolism of endothelium-derived nitric oxide / L.J. Ignarro // Annul Rev. Pharmacol. Toxicol.-1990.-Vol. 30.-P.535-560.

122. IL-17 promotes cartilage degradation (abstract) / L. Bober, M. Lotz, S. Narulaetal.//Arthritis Rheum.-1996.-Vol. 39 (suppl.).-P.120.

123. Immunolocalization of inducible nitric oxide synthase in synovium and cartilage in rheumatoid arthritis and osteoarthritis / P.S. Grabowski, P.K. Wright, R.J Van Hofet al. //Br. J. Rheum.-1997.-Vol. 36.-P.651-655.

124. Increased concentration of nitrite in synovial fluid and serum samples suggest increased nitric oxide synthesis in rheumatic diseases / AJ. Farrel, D R. Blake, R.M. Palmer et al. // Ann. Rheum. Dis.-1992.-Vol. 51.-P.I219-1222.

125. Increased expression of blood mononuclear cell nitric oxide synthesis type 2 in rheumatoid arthritis patients / E.W. StClair, W.E. Wilkinson, T. Lang et al. // J. Exp. Med.-1996.-Vol. 184 -P. 1173-1178.

126. Increased nitric oxide levels in patients with rheumatoid arthritis / Y. Ueki, S. Miyake, K. Tominaga et al. // J Rheumatol -1996 -Vol. 23.-P.230-236.

127. Inducible nitric oxide synthase from human articular chondrocytes: cDNA cloning and analysis of mRNA expression / G. Bilbe, R. Maier, J. Rediske et al. //Biochem. Biophys. Acta.-1994.-Vol. 1208.-P. 145-150.

128. Inducible nitric oxide synthase is expressed in joints of goats in the late stage of infection with caprine arthritis encephalitis virus / F. Lechner, A. Schutte, U. Von Bodungen et al. // Clin. Experim. Immunol.-1999.-Vol. 117, №1.-P.70-75.

129. Induction of nitric oxide synthase in human chondrocytes / R.M.J Palmer., M.S. Hickery, I.G. Charles et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1993.-Vol. 193.-P.398-405.

130. Interleukin-17 induced nitric oxide suppresses matrix synthesis and protects cartilage from matrix breakdown / L. Cai, P. Suboc, Hogue D.A. et al. Hi. Rheum.-2002.-Vol. 29, №8.-P. 1725-1736.

131. Kashanian Moshtaghi, G.R. Nitrite Level of Serum as a Diagnostic and Prognostic Tool in Patients with Rheumatoid Arthritis / G.R. Kashanian Moshtaghi //Arch. Iran. Med.-1999.-Vol. 2, №4.-P.23-26.

132. Kuhes. P. Inducible nitric oxide synthase: a little bit of good in all of us / P. Kubes// Gut.-2000.-Vol. 47, №l.-P.6-9.

133. Kubes, P. Nitric oxide: an endogenous modulator of leukocyte adhesion / P. Kubes, D.N. Granger, M. Suzuki // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.-1991.-Vol. 88.-P.4651-4655.

134. L-arginine is the physiological precursor for the formation of nitric oxide in endothelium dependent relaxation // R.M.J. Palmer, D.D. Rees, D.S. Ashton et al. //Biochem. Biophys. Res. Comm.-1988.-Vol. 153.-P. 1251-1256.

135. L-arginine metabolism in myeloid cells controls T-lymphocyte functions / V. Bronte, P. Serafini, A. Mazzoni et al. // Trends in Immunol.-2003.-Vol. 24, №6.-P.302-306.

136. Localization of 3-nitrotyrosine to rheumatoid and normal synovium / P.I. Mapp, R. Klocke, D.A. Walsh et al. // Arthritis Rheum.-2001.-Vol. 44, №7,-P. 1534-1539.

137. Loss of transforming growth factor counteraction on interleukin 1 mediated effects in cartilage of old mice / A. Scharstuhl, H.M. van Beuningen, E.L. Vitters et al. // Ann. Rheum. Dis.-2002.-Vol. 61, №12.-P. 1095-1098.

138. Marfield, L. Nitric oxide enhances cyclooxygenase activity in articular cartilage / L. Marfield, D. Jang, G.A.C. Murrel // Inflamm. Res.-1996.-Vol. 45.-P.254-258.

139. Marietta, M.A. Nitric oxide: biosynthesis and biological significance / M.A. Marietta//Trends Biochem. Sci.-1989.-Vol. 14.-P.488-492.

140. Mayhan, W.G. Role of nitric oxide in modulating permeability of hamster cheek pouch in response to adenosine 5-diphosphate and bradykinin / W.G. Mayhan//Inflamm.- 1992,-Vol. 16.-P.295-305.

141. Modulation of human T cell responses by nitric oxide and its derivative, S-nitrosoglutathione / P.F. Merryman, R.M. Clancy, X.Y. Heet al. // Arthritis Rheum.-1993.-Vol. 10.-P.1414-1421

142. Molecular therapeutic targets in rheumatoid arthritis / S,M. Sacre, E. Andreakos. P. Taylor, M. Feldmann, B.M. Foxwell // Export Reu. Mol. Theu -2005.-Vol. 7, №17.-P. 1-20.

143. Moncada, S. Biosynthesis of nitric oxide from L-arginine: a pathway for the regulation of cell function and communication / S. Moncada, R.M.J. Palmer, E.A. Higgs//Biochem. Pharmacol -1989-Vol. 38.-P.1709-1715.

144. Murrel, G.A.C. Nitric oxide activates metalloprotease enzymes in articular cartilage / G.A.C. Murrel, D. Jang, R.J. Williams// Biochem. Biophys. Res. Commun.-1996.-Vol. 206.-P. 15-21.

145. Nathan. C.F. Role of nitric oxide synthesis in macrophage antimicrobial activity / C.F. Nathan, J.B.Jr. Hibbs // Curr. Opin. Immunol.-1991.-Vol. 3.-P.65-70.

146. Nitric oxide and energy production in articular chondrocytes / M. Stefanovic-Racic, J. Stadler, H.I. Georgesku et al. //J. Cell Physiol.-1994.-Vol. 159.-P.274-280.

147. Nitric oxide and energy production in articular chondrocytes / M. Stefanovic-Racic, J. Stadler, H.I. Georgesku et al. Hi. Cell Physiol.-1994.-Vol. 159.-P.274-280.

148. Nitric oxide and G proteins mediate the response of bovine articular chondrocytes to fluid -induced shear / P. Das, D.J. Schurman. S R. Lane // J. Orthop. Res.-1997.-Vol. 15.-P.87-93.

149. Nitric oxide and proteoglycan biosynthesis by human articular chondrocytes in alginate culture / H.J. Hauselmann, L. Oppliger, B.A. Michel et al. // FEBS Lett.-1994.-Vol. 352.-P.361-364.

150. Nitric oxide and roteoglycan turnover in rabbit articular cartilage / M. Stefanovic-Racic, M. Mollers, L.A. Miller et al. // J. Orthop. Res.-1997.-Vol. 15.-P.422-429.

151. Nitric oxide inhibits synthesis of aggrecan core protein without altering RNA abundance / M. Stefanovic-Racic, D. Taskiran, T.M. Hering et al. // Trans. Orthop. Res. Soc.-1998.-Vol. 23.-P.300.

152. Nitric oxide inhibits the synthesis of type II collagen without altering Col2Al mRNA abundance: prolyl hydroxilase as a possible target / M. Cao, A. Westerhausen-Larson, C. Niyibizii et al. // Biochem. J.-1997.-Vol. 324 -P.305-310.

153. Nitric oxide mediates interleukin-1 induced inhibition of glycosaminglycan synthesis in rat articular cartilage / T.A.H. Jarvinen, T. Moilanen, T.L.N. Jarvinen et al. // Med. Inflamm.-1995.-Vol. 4.-P. 107-111.

154. Nitric oxide mediates suppression of cartilage proteoglycan synthesis by interleucin-1 / D. Taskiran. M. Stefanovic-Racic. H.I. Georgesku et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun-1994.-Vol. 200.-P. 142-148.

155. Nitric oxide production and inducible nitric oxide synthase expression in inflammatory arthritides / H. Sakurai, H. Kohsaka, M.F. Liu et al. // J. Clin. Invest.-1995.-Vol. 96.-P.2357-2363.

156. Nitric oxide production by superficial and deep articular chondrocytes / T. Hayashi, E. Abe, T. Yamata et al. // Arthritis Rheum.-1997.-Vol. 40.-P.251-269.

157. Nitric oxide production during adjuvant-induced and collagen-induced arthritis / G.W. Cannon, S.J. Oppenshaw, J.B. Hibbs et al. // Arthritis Rheum.-1996.-Vol. 39.-P. 1677-1684.

158. Nitric Oxide Synthase/COX Cross-Talk: Nitric Oxide Activates COX-1 But Inhibits COX-2-Derived Prostaglandin Production / R. Clancy, B. Varenika, Huang Weiqing et al. Hi. Immunol.-2000.-Vol. 165.-P. 1582-1587.

159. Nitric oxide: an important articular free radical / G.A.C. Murrel, M. Dolan, D. Jang et al. Hi. Bone Joint Surg.-1996.-Vol. 78A.-P.265-274

160. Nitric Oxide: an important articular free radical / G.A.C. Murrell, M.D. Phil, M.M. Dolan et al. Hi. Bone Joint Sur.-1996.-Vol. 78.-P.265-74.

161. N-Monomethyl argimne. an inhibitor of nitric oxide synthase, suppresses the development of adjvant arthritis in rats / M. Stefanovic-Racic, K. Meyers, C. Meschter et al. // Arthritis Rheum.-1994.-Vol. 184.-P.1173-1178.

162. Palmer, R.M.J. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium derived relaxing factor / R.M.J. Palmer, A.G. Ferrige, S. Moncada // Nature.-1987.-Vol. 327.-P.524-526.

163. Pathogenesis of rheumatoid arthritis: targeting cytokines / J. Zwerina, K. Redlich, G. Schett, J.S. Smolen // Arm. N. J. Acad. Sci.-2005.-Vol. 1051.-P.716-729.

164. Production of angiogenic activity by human monocytes requires an L-arginin/nitric oxide-synthase-dependent effector mechanism / S.J. Leibovich,

165. P.J. Polverini, T.W. Jong // Proc. Nat. Acad. Sei. USA.-1994.-Vol. 91.-P.4190-4194

166. Production of nitric oxide in the synovial membrane of rheumatoid and osteoarthritis patients / I.B. Mclnnes, B.P. Leung, M. Field et al. // J. Exp. Med.-1996.-Vol. 184.-P 1519-1524.

167. Pro-inflammatory cytokines in rheumatoid arthritis pathogenetic and therapeutic aspects / J.S. Smolen, K. Redlich, J. Zwerina, D Aletaha, G. Steiner, Q. Schett// Clin. Rev. Allers. lmmunol.-2005.-Vol. 28, №3.-P.239-248.

168. Reactive nitrogen species scavenging, rather than nitric oxide inhibition, protects from articular cartilage damage in rat zymosan-induced arthritis / M M. Bezerra, S.D Brain, S. Greenacre et al. // Br J Pharmacol.-2004.-Vol. 141, №1.-P.172-182.

169. Regulation by reactive oxygen species of interleukin-lbeta, nitric oxide and prostaglandin E(2) production by human chondrocytes / G.P. Deby-Dupont, M. Mathy-Hartert, J.Y. Reginster et al. II Osteoarthritis Cart -2002,-Vol. 10, №7.-P.547-555.

170. Regulation of nitric oxide production in osteoarthritic and rheumatoid cartilage. Role of endogenous IL-1 inhibitors / K. Vuolteenaho, T Moilanen, M. Hamalainen et al. H Scand. J. Rheumatol.-2003.-Vol. 32, №1.-P. 19-24.

171. Role of nitric oxide in the activation of NF-kappaB, AP-1 and NOS II expression in articular chondrocytes / M.M. Caramona, A.P Carvalho, A.F. Mendes et al II Inflamm. Res.-2002.-Vol. 51, Ji>7.-P.369-375.

172. Sajeev, Chandran. Nitric oxide: concepts, current perspectives, and future therapeutic implications / Chandran Sajeev, N. Sridhar, Veeranjaneyulu Addepalli//Indian J. Pharmacol.-1998.-Vol. 30.-P.351-366

173. Selective Inhibition of Inducible Nitric Oxide Synthase Exacerbates Erosive Joint Disease / N.L. McCartney-Francis, X. Song, D.E. Mizel et al. // J. Immunol.-2001.-Vol. 166, №4.-P.2734-2740.

174. Serum nitrate and nitrite levels in patients with rheumatoid arthritis, ankylosing spondylitis, and osteoarthritis / Y. Ersoy, E. Ozerol, 0. Baysal et al. //Ann. Rheum. Dis.-2002.-Vol. 61, №l.-P.76-78.

175. Superinduction of cyclooxygenase-2 activity in human osteoarthritis affected cartilage. Influence of nitric oxide / A.R. Amin, M. Attur, R.N. Patel et al. //J. Clin. Invest.-1997.-Vol. 99.-P. 1231-1237.

176. Suppression of adjuvant-induced arthritis by selective inhibition of inducible nitric oxide synthase / J.R. Connor, P.T. Manning, S.L. Settle et al. // Eur. J. Pharmacol.- 1995 -Vol. 273.-P. 15-24.

177. Suppression of arthritis by an inhibitor of nitric oxide synthase / N. McCartney-Francis, J.B. Allen, D.E. Mizel et al. // J. Exp. Med.-1993.-Vol. 178.-P.749-754.

178. The effects of nitric oxide on chondrocytes and lymphocytes / S. Kondo, N. Ishiguro, H. Iwata et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun -1993.-Vol. 197.-P. 1431-1437.

179. The expression and regulation of nitric oxide synthase in human osteoarthritis-affected chondrocytes: evidence for up-regulated neuronal nitric oxide synthase / A R. Amin, P.E. DiCesare, P. Vyas et al. // J. Exp. Med -1995.-Vol. 182.-P.20097-20102.

180. The role of nitric oxide in tissue destruction / S.B. Abramson, A.R. Amin, R.M. Clancy et al. // Best Pract. Res. Clin. Rheum.-2001.-Vol. 15, №5 -P.831-845.

181. The role of nitric oxyde in proteoglycan turnover by bovine articulare cartilage organ cultures / M. Stefanovic-Racic, T.I. Morales, D. Taskiran et al. //J. Immunol.-1996.-Vol. 156.-P. 1213-1220.

182. Tran, C.N. Synovial biology and T cells in rheumatoid arthritis / C.N. Tran, S.K. Lundy, D A. Fox // Pathophysiology.-2005.-Vol. 25.-P. 161-175.

183. Urinary nitrate excretion is increased in patients with rheumatoid arthritis and reduced by prednisolone / D.O. Stichtenoth. J. Fauler, H. Zeidler et al. //Ann. Rheum. Dis.-1995.-Vol. 54.-P.820-824.

184. Vanhoutte, P.M. Endothelium and control of vascular function / P.M. Vanhoutte // Hypertension.-1989.-Vol. 13.-P.658-667.

185. Waldmann, T.A. Targeting the interleukin 15 system in rheumatoid arthritis / T.A. Waldmann // Arthritis Reum-2005.-Vol. 52, №9.-P.2585-2588.

186. Zonal differences in nitric oxide synthesis by bovine chondrocytes exposed to interleukin-1 / K. Fukuda, F Kumano, M. Takayama et al. // Inflamm. Res.-1995.-Vol. 44.-P 434-437.