Наследуемая бессамцовость у двух видов кокцинеллид - Adalia bipunctata L. и Harmonia axyridis Pall

Зинкевич, Наталья Сергеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Наследуемая бессамцовость у двух видов кокцинеллид - Adalia bipunctata L. и Harmonia axyridis Pall
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Наследуемая бессамцовость у двух видов кокцинеллид - Adalia bipunctata L. и Harmonia axyridis Pall"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова

На правах рукописи УДК 575.13:579.23:591.33

РГБ ОД 1 8 ЯНВ 2000

Зинкевич Наталья Сергеевна

НАСЛЕДУЕМАЯ БЕССАМЦОВОСТЬ У ДВУХ ВИДОВ

КОКЦИНЕЛЛИД-ADALIA BIPVNCTA ТА L. И HARMONIA AXYRID1S PALL.

03.00.15 - генетика

Автореферат диссертации на соискаиие ученой степени кандидата биологических паук Москва 1999

Работа выполнена в лаборатории сравнительной генетики животных Института общей генетики им. II.И. Вавилова РАН

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор И. А. Захаров

Официальные оппоненты: доктор биологических наук М.И. Гордеев, кандидат биологических наук A.M. Куликов

Ведущее учреждение: БиНИИ СПбГУ

Защита состоится «_» _ 2000 года в

__часов на заседании диссертационного совета Д002.49.01 при

Институте общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН (117809, ГСП-1, Москва, В-333, ул. Губкина, 3, факс (095) 132-89-62)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН

Автореферат разослан «_»_1999 года

Ученый секретарь

диссертационного совета

кандидат биологических наук Г.Н. Полухина

1. Общая характеристика работы

1.1. Актуальность проблемы. Симбиотические микроорганизмы чрезвычайно широко распространены в природе. До недавних пор возможности их изучения ограничивались неспособностью симбионтов к росту вне организма хозяина. Последние достижения молекулярной биологии дали новые подходы к изучению таких симбионтов. В настоящее время проводится анализ ряда симбиотических систем, которые были описаны много лет назад, но исследование которых до сих пор представляло известные сложности.

Большой интерес вызывает способность наследуемых симбионтов модифицировать размножение хозяина таким образом, чтобы получать оптимальные возможности для своего распространения. У представителей различных групп членистоногих цитоплазматически наследуемые микроорганизмы могут вызывать партеногенез, феминизацию, цитоплазматическую несовместимость при скрещиваниях и гибель мужских эмбрионов. Известны два типа явлений, связанных с гибелью самцов: ранняя гибель эмбрионов или личинок первой стадии (обнаружена у многих групп насекомых и клещей) и поздняя гибель личинок четвертой стадии (обнаружена только у кровососущих комаров в результате пролиферации микроспоридий).

Бактерии, принадлежащие к родам Wolbachia, Rickettsia и Spiroplasma, способные вызывать отклонения от нормального соотношения полов у насекомых и клещей, индуцируют значительные изменения в популяциях своих хозяев и тем самым могут изменять направление эволюционных процессов, происходящих в этих популяциях. Механизмы, приводящие к элиминации самцов на разных стадиях эмбриогенеза, остаются пока мало изученными.

После первой работы Я.Я. Jlyca (1947), выполненной на Adalia bipimcíata, для пяти других видов божьих коровок (Coleóptera: Coccinellidae) было описано явление цнтоплазматически наследуемого отклонения от нормального соотношения полов, вызванного гибелью самцов на стадии яйца. В некоторых случаях

вызывающие наследуемую бессамцовость бактерии были идентифицированы, в других (например, у Harmonía axyridis) нет.

Дальнейшее изучение внутриклеточных симбионтов божьих коровок позволит получить дополнительную информацию о морфологических проявлениях действия бактерий на разных стадиях оогенеза и эмбриогенеза. Визуализация процессов, сопровождающих гибель самцов, является необходимым условием для понимания механизмов, вызывающих явление бессамцовости и того, как подобные механизмы могли возникнуть в процессе эволюции.

В связи с вышесказанным представлялось актуальным провести более глубокое изучение некоторых особенностей явления бессамцовости у двух видов кокцинеллид - Harmonía axyridis и Adalia bipunctata.

1.2. Цели и задачи исследования. Целью данной работы являлось исследование явления бессамцовости в российских популяциях азиатского вида Harmonía axyridis, сравнительное изучение цитоморфологических проявлений наследуемой бессамцовости у двух видов кокцинеллид Adalia bipunctata и Harmonía axyridis. В работе были поставлены следующие конкретные задачи:

определение вторичного соотношения полов в новосибирской популяции Harmonía axyridis;

- выделение бессамцовых линий у Harmonía axyridis;

- идентификация бактерий, вызывающих андроцидный эффект в сибирских популяциях Harmonía axyridis;

исследование соотношений полов у Adalia bipunctata в популяциях Москвы, Санкт-Петербурга и Ленинградской области;

- электронно-микроскопическое изучение трансовариальной передачи бактерий в семьях Adalia bipunctata и Harmonía axyridis;

- определение стадии и морфологических проявлений гибели мужских эмбрионов Adalia bipunctata и Harmonía axyridis.

1.3. Научная новизна. Впервые учтено вторичное половое соотношение в одной из популяций Harmonía axyridis и показано наличие в сибирских популяциях этого вида самок, в потомстве которых отсутствуют самцы. Впервые показано, что бессамцовость в

популяциях Harmonía axyndis может вызываться симбиотическими цитоплазматически наследуемыми бактериями класса Mollicules рода Spiroplasma. Установлено, что эта бактерия филогенетически не связана с ранее описанной спироплазмой, вызывающей нарушения в соотношении полов у Drosophila. Показано, что спироплазма, выделенная нами из Harmonía axyridis филогенетически близка к спироплазме, вызывающей явление бессамцовости в популяциях Adalia bipunctata, но данные бактерии не являются идентичными. Проведено изучение морфопатологии мужских эмбрионов Adalia bipunctata и Harmonía axyridis и впервые идентифицированы стадии, на которых происходит остановка развития. Впервые изучено состояние яичников инфицированных самок.

1.4. Практическая ценность. Микроорганизмы, модифицирующие половой процесс хозяина, могут найти практическое использование в качестве агентов биологического контроля численности и/или полового состава в популяциях вредных и полезных видов насекомых, наличие или отсутствие отклонения от нормального соотношения полов в популяциях насекомых может служить своеобразным тестом на благополучие (или неблагополучие) данной экосистемы в целом.

1.5. Апробация работы. Основные материалы работы доложены на семинаре кафедры эмбриологии биологического факультета МГУ (25 марта 1999 года), на Конференции молодых ученых и аспирантов ИОГен РАН и кафедры генетики и селекции биологического факультета МГУ (16 ноября 1999 года), представлены на 2-ой съезд ВОГиС (Санкт-Петербург, февраль 2000 г.).

1.6. Публикации. По теме диссертации опубликована 1 научная работа, находятся в печати 1 научная работа и тезисы в трудах 2-ого съезда ВОГиС.

1.7. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы (48 отечественных и 221

зарубежный источник). Работа содержит 11 таблиц и иллюстрирована 25 рисунками.

2. Материалы и методы

Насекомые. Жуки Harmonía axyridis (Pall.) (Coccinellidae, Coleóptera) были собраны И.А. Захаровым на стадии имаго при лете на зимовку в 1997-1999 годах в Новосибирском Академгородке и в Кызыле (Республика Тыва). Популяции в районах, где осуществляли сбор хармоний, являлись практически мономорфными. Все жуки обладали фенотипом axyridis. В течение 4 месяцев жуки находились в холодильнике, при переносе их в условия лаборатории сразу же начиналась копуляция и откладка яиц.

Жуки Adalia bipunctata (L.) (Coccinellidae, Coleóptera) были отловлены в Санкт-Петербурге, в Ленинградской области (г. Гатчина, г. Кронштадт), в Москве и в Московской области (г. Дубна). В ряде экспериментов также были использованы лабораторные линии A. bipunctata: КиЗ, И12, И22, Sp4, ПФ4.

Для выделения бессамцовых линий проводили учет вылупляемости личинок из яиц, отложенных самками в индивидуальных культурах. Если вылупляемость была не выше 50%, и это сопровождалось отсутствием значительного числа серых яиц, среди тех, из которых не вылупились личинки, то в случайной выборке определяли пол потомства. Пол жуков у A. bipunctata определяли на стадии имаго путем вскрытия, выявляя наличие сперматеки (у самок) или сифона (у самцов). Коровкам вида Н. axyridis свойственен половой диморфизм: у самок голова черная с небольшим белым пятном на лбу, у самцов голова белая. В работе пол жуков определяли визуально, по окраске головы.

Исследования эмбриогенеза жуков в бессамцовых семьях проводили двумя методами. Для предварительного анализа картины эмбрионального развития яйца дехорионизировали при помощи хлоракса (10% водного раствора гипохлорита натрия). Затем эмбрионы отмывали в двух сменах физиологического раствора и помещали на покровное стекло в каплю вазелинового масла. Для микроскопирования и фотографирования препараты готовили по методу "висячей капли". В дальнейших исследованиях применяли фиксацшо и окрашивание эмбрионов. Девителлинизацию и

фиксацию эмбрионов осуществляли по методу, предложенному Залокаром (Zalocar, 1971). Затем проводили окрашивание эмбрионов азур-эозином по Лилли (Lillie, 1954).

Для изучения морфологии овариол извлекали яичники из самок. Овариолы окрашивали нейтральным красным, препараты готовили по методу "висячей капли". Для обнаружения бактерий в яичниках делали мазки, которые фиксировали 96° этиловым спиртом и окрашивали метиленовой синькой. Просматривали препараты при увеличении х 90 под иммерсией.

Препараты для электронно-микроскопического анализа готовили из материала овариол самок A. bipunctata и Я. axyriciis по методам, предложенным Уикли (Уикли, 1975). Срезы получали на ультратоме LKB, окрашивали по Рейнольдсу (Reynolds, 1963). Срезы просматривали в электронном микроскопе JEM-100CX при ускоряющем напряжении 80k V и инструментальном увеличении от 10000 до 60000.

Выделение ДНК из жуков Harmonia axyridis проводили по методу Д.В.Муха (Муха и др., 1995).

Идентификацию паразитических бактерий осуществляли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим секвенированием продуктов амплификации. Предварительное выявление бактериальных симбионтов проводили с помощью пары праймеров Ш1 и гР1, которые амплифицируют участок генов 16S рибосомной РНК бактерий и позволяют получить характерный продукт длиной около 1400 п.н. Для идентификации бактерии, инфицирующей Harmonia axyridis, проводили полимеразную цепную реакцию, используя праймеры, специфичные для генов 16S рРНЗС бактерий класса Mollicates, к которому относится и Spiroplasma (Hurst et al., 1996). Полимеразную цепную реакцию проводили на приборе Термоциклер РТС-100 (MJ Research, Inc., USA). Использовали термофильную ДНК-полимеразу из Thermus aquaticus (Тац-полимеразу) (Биоком, Москва). Реакцию проводили в объеме 40 мкл, используя так называемый "Hot Start".

Электрофорез продуктов амплификации проводили в 2% агарозном геле.

Определение последовательности нуклеотидов вели по методу Сенгера (Sanger et al., 1977).

Использованные в филогенетическом анализе последовательности генов 16S рРНК были получены из генного банка GenBank. Филогенетический анализ проводили с использованием пакета программ филогенетического анализа WET. Матрицы сходства были рассчитаны по методу Nei, Gojobori. Дендрограмма построена по методу "neighbor-joining".

Статистические методы. Флуктуирующая асимметрия (FA) билатеральных признаков вычислялась как: (L-R)/('/2(L+R)), где L и R - левое и правое значение признака, соответственно (Palmer, Strobeck, 1986).

В других случаях использовались общепринятые статистические методы.

3. Результаты

3.1. Вторичное соотношение полов в новосибирской популяции Harmonia axyridis. Соотношение полов в семьях и выделение бессамцовых линий у собранных в природе жуков Harmonia axyridis.

Для определения вторичного соотношения полов (соотношения полов при вылуплении) определяли пол жуков, собранных в природе на стадии куколки и выведенных в лабораторных условиях. Нами был определен пол 214 особей из популяции Новосибирска. Процент самок в данной популяции составлял 63,1±3,3%. Соотношение полов было 135 самок : 79

самцов, что достоверно отличается от 1:1 (х2=14,65 Р<0,001).

От 18 самок, собранных в Новосибирске, и 16 самок, собранных в Кызыле было получено потомство. Учитывали выход личинок и определяли стадию, на которой прекращалось развитие яиц. Если яйца, из которых не вышли личинки были желтого цвета, то имела место ранняя эмбриональная гибель; если же яйца были серые, то - поздняя эмбриональная гибель. Пол имаго определяли визуально. Полученные результаты приведены в Табл.1.

Таблица 1. Развитие и пол потомства самок новосибирской (Novo) и кызыльской (Kyz) популяций Harmonía axyridís

Самка Учтено кладок Вылупилось личинок Число нераз-вившихся яиц Получено в потомстве

серых желтых самок самцов

Novo 64 4 43 15 12 11 4

Novo 69 2 23 4 3 2 2

Novo 70 4 115 10 11 7 11

Novo 71 4 75 13 54 24 19

Novo 72 4 139 19 4 9 9

Novo73 4 162 17 8 9 7

Novo74 2 66 8 5 19 18

Novo75 4 124 7 8 15 18

Novo 101 5 47 37 24 24 0

Novo 102 - - - - 6 2

Novo 103 4 89 21 31 6 7

Novo 105 3 33 4 4 4 6

Novo 106 3 56 31 23 7 5

Novo 107 - - - - 4 3

Novo 108 3 16 4 43 16 0

Novo 111 3 100 11 11 12 7

Novo 112 3 60 16 11 7 9

Novo 115 3 59 4 2 10 7

Kyz 1 2 18 2 3 4 1

Kyz 2 3 63 7 6 2 4

Kyz 3 2 51 11 5 2 3

Kyz 4 1 25 1 1 2 1

Kyz 5 4 98 5 3 5 1

Kyz 6 1 22 15 4 5 0

Kyz 7 3 83 20 5 8 5

Kyz 9 4 78 9 3 4 7

Kyz 10 4 109 8 14 4 4

Kyz 11 4 79 18 10 5 3

Kyz 12 2 45 5 3 2 4

Kyz 13 5 48 10 37 5 2

Kyz 14 2 54 7 4 2 3

Kvz 15 3 36 30 22 9 0

Kyz 16 1 16 2 2 3 2

Kyz 18 3 48 1 5 4 1

Примечание к Табл. 1 : значок '-' означает, что учет не проводился

Из 34 семей в 30 были получены и самцы, и самки, суммарное соотношение полов в этих обоеполых семьях - 181 самка : 158

самцов (х2=1,56<3,8 различия от теоретически ожидаемого соотношения полов (1:1) не достоверны). В семье NovolOl в первых 5 кладках самцов не было, в 2 последующих самцы появились. Наконец, в семьях Novo 108 и Kyz 15 самцов не было при достаточно большой численности потомства.

В потомстве самки Novol08 было изучено наследование признака бессамцовости (Табл.2). В четырех изученных поколениях в сумме от 7 самок было получено 117 потомков; все они оказались самками.

Таким образом, отклонение от нормального (1:1) соотношения полов в популяции Н. axyridis обусловлено не дифференциальной выживаемостью самок на стадии личинки, а наличием в данной популяции самок, производящих, исключительно женское потомство.

Таблица 2. Наследование признака бессамцовости в последовательных поколениях семьи Novo 108

Самка Поколе- Учте- Вылу- Число Получено в

ние но пилось неразвившихся потомстве

потомства кладок личинок яиц

серых желтых самок самц

Novo 108 1 3 16 4 43 16 0

Novo 108-1 2 3 33 7 70 12 0

Novo 108-2 2 5 26 17 58 12 0

Novo 108-1-1 3 2 14 0 27 17 0

Novo 108-2-1 3 2 36 12 47 19 0

Novo 108-1- 4 4 61 12 62 41 0

1-2

Всего 4 поколе- 19 186 52 307 117 0

проана- ния

лизировано:

3.2. Соотношения полов в популяциях Ada.Ua ЫршШаШ и изменчивость числа овариол у самок

В 1996-1997 г. нами было изучено вторичное соотношение полов в популяциях Санкт-Петербурга, Москвы и Дубны и третичное в осенней генерации Москвы 1997 г. В 1999 г. в

популяциях Санкт-Петербурга и области нами было изучено как вторичное, так и третичное соотношение полов.

Наши данные для популяции Москвы 1996 г. соответствуют результатам, полученным ранее Я.Я.Лусом, который указывал, что процент самцов в этой популяции в разные годы составлял от 27,8% до 41,9%, а также данным И.А. Захарова, согласно которым в дагаюй популяции 35-40% самцов (Лус, 1947; Захаров, 1995). В 1997 г. в популяции Москвы наблюдалось некоторое снижение доли самок (Табл.3).

Таблица 3. Доля самок в природных популяциях Ас/аИа Ырипс1а/а Москвы, Дубны и Санкт-Петербурга и количество овариол у самок

Популяция Год Число самок в выборке % самок в популяции X2 Среднее число овариол Флуктуирующая аимметрня числа овариол

Москва 1996 93 61,2±4,0 7,61; Р<0,01 29,510,70 0,01002± 0,00274

Москва 1997 80 54,1 ±4,1 0,97* 28,6±0,47 0,01013+ 0,00304

Дубна 1996 109 54,5+3,5 1,62* 30,1+0,68 0,00994± 0,00287

Дубна 1997 105 55,3+3,6 2,11* 29,8±0,54 0,01034± 0,00264

Санкт-Петербург 1996 94 74,0+3,9 29,29; Р<0,001 27,6±0,40 0,02491± 0,00400

*- различия от теоретически ожидаемого (1:1) не достоверны

Соотношение полов в популяции Дубны было близким к нормальному соотношению полов (1:1) (Табл.3).

В популяции Санкт-Петербурга был обнаружен значительный и достоверный сдвиг в сторону преобладания самок (Табл. 3).

Популяции адалий Москвы и Санкт-Петербурга резко отличаются окраской элитр: в Москве преобладают красные, а в Санкт-Петербурге - черные особи (Сергиевский, Захаров, 1983; Захаров, 1992). Для того, чтобы выяснить, существует ли связь между различным фенотипическим составом популяций Москвы и

Санкт-Петербурга и сдвигом в соотношении полов в этих популяциях был исследован материал, собранный в Санкт-Петербурге и в двух городах Ленинградской области - Кронштадте и Гатчине, значительно отличающихся по доле черных особей от Санкт-Петербурга. Данные по сравнению процентного соотношения полов и доли меланистов в исследованных популяциях приводятся в Табл.4.

Таблица 4. Соотношение полов и доля меланистов в популяциях ЛсЫш ЫрипШШ Санкт-Петербурга, Гатчины и Кронштадта (1999 г.)

Популяция % самок в выборке % меланистов в выборке Число особей в выборке и число особей, у которых был определен пол (в скобках)

Санкт-Петербург 68,3±2,3 70,9±2,2 422(417)

Кронштадт 71,0±5,8 54,8±6,3 62 (62)

Гатчина 69,1+3,1 41,0±3,3 227 (217)

Доля черных особей в популяциях Гатчины и Кронштадта значительно ниже, чем в Санкт-Петербурге, при этом доля самок в исследованных популяциях Ленинградской области остается столь же высокой, как и в Санкт-Петербурге (Табл. 4). Таким образом полиморфизм популяций адалий не связан со степенью инфицированности этих популяций андроцидными бактериями.

Нами было проведено изучение степени инфицированности самок природных популяций бактериями путем анализа окрашенных метилеповой синькой мазков яичников самок. Большие различия в инфицированности популяций Москвы и Санкт-Петербурга позволяют выяснить возможное влияние инфекции на плодовитость, оцениваемую числом овариол. Согласно полученным дашшм, среднее число овариол в популяциях Москвы достоверно выше среднего числа овариол в Санкт-Петербургской популяции. Также достоверно различались значения флуктуирующей асимметрии по числу овариол у самок из данных популяций - в выборке Санкт-

Петербурга значение показателя асимметрии числа овариол выше, чем в выборке Москвы.

В Санкт-Петербургской популяции были исследованы две группы самок, в мазках одной группы были обнаружены бактериоподобные клетки, в мазках другой группы их не было обнаружено. Средние числа овариол в этих группах достоверно различались (у инфицированных самок овариол в яичниках было меньше, чем у неинфицированных). Для обеих групп Санкт-Петербурга были подсчитаны значения флуктуирующей асимметрии, которые также достоверно различались (у инфицированных самок значение показателя асимметрии было выше, чем у неинфицированных).

Давшою историю имеет вопрос о приспособительной ценности красных и черных форм в популяциях (Лусис, 1961). Для Санкт-Петербургской популяции 1997 г., а также для популяций Санкт-Петербурга и Гатчины 1999 г. было проведено сравнение средних значений числа овариол у черных (меланистов) и красных (немеланистов) особей. Несмотря на то, что средние значения числа овариол у красных и черных особей достоверно не различаются, можно говорить о наличии тенденции увеличения числа овариол у красных особей, по сравнению с черными. Сравнительный анализ популяций Санкт-Петербурга и Гатчины 1999 г. показал, что средние значения числа овариол в этих популяциях достоверно не различаются, также достоверно не различаются показатели флуктуирующей асимметрии.

3.3. Развитие эмбрионов кокцинеллид при заражении аидроцидными бактериями

Из половины яиц Adalia bipimctata и Harmonía axyridis, полученных от самок-носительниц фактора бессамцовости, вылупления личинок не наблюдается (Лус, 19476; Захаров и др., 1996). Невылупившиеся эмбрионы предположительно являются самцами и гибнут в течение эмбриогенеза. У Adalia bipimctata невылупившиеся яйца во всех наблюдаемых нами кладках были желтого цвета, аналогичная картина наблюдалась для кладок самки Novo 108 Harmonía axyridis и ее потомства, в то время как в потомстве самки Novo 101 Harmonía axyridis и ее дочерей Novo 101-

1 it Novo 101-2 практически все кевылупившиеся яйца были серого цвета. Таким образом, даже простые наблюдения за поведением яиц у Harmonía axyridis свидетельствуют о том, что остановка эмбрионального развития мужских эмбрионов может происходить на разных этапах эмбриогенеза.

На ранних стадиях эмбриогенеза не наблюдали отклонений в развитии эмбрионов. У Adalia bipunctata была обнаружена остановка развития у приблизительно 1/8 части эмбрионов в течение первых суток эмбриогенеза, в период 18-20 часов. В норме в этот период происходит обособление клеток бластодермы, и начинает формироваться зародышевая полоска, при нарушении эмбриогенеза обнаруживается остановка развития на стадии ранней бластодермы. У приблизительно 1/8 части эмбрионов остановка развития происходит во время появления головной и углубления вентральной борозд (25-30 часов). Приблизительно еще 1/8 часть эмбрионов останавливалась в развитии до окончания сегментации мезодермы (до 45-48 часов), у еще 1/8 части эмбрионов наблюдали остановку развития в период, когда начинается сегментация головы и туловища (до 50-55 часов).

Развитие эмбрионов Harmonía axyridis, полученных от самки Novo 108 и ее дочерей, обнаруживает закономерности, характерные для эмбрионов из бессамцовых семей адалии. На ранних этапах эмбриогенеза отклонений в развитии обнаружить не удалось. Примерно 1/8 эмбрионов претерпевала остановку развития на стадии формирования синцитиалыюй бластодермы (24-28 часов). Приблизительно еще 1/8 часть эмбрионов останавливалась в развитии на стадии ранней гаструлы (после 36-38 часов), еще 1/8 часть - в период, когда происходит сегментация мезодермы (после 60-65 часов) и 1/8 часть - во время сегментации головы и туловища (после 70-72 часов).

На стадии выхода личинок из куколок (примерно 72 ч. у Adalia и 96 - у Harmonía) видны морфологические аномалии эмбрионов, в различные периоды остановки развития, в которых процессы некроза представлены в разной степени.

В кладках, отложенных самкой Harmonía axyridis Novo 101, яйца, вылупления из которых не происходило, были серого цвета.

Микроскопический анализ показал, что на всем протяжении эмбриогенеза развитие большей части эмбрионов шло синхронно. Обычно единичные эмбрионы, но в некоторых кладках до 30%, не развивались вообще, половина эмбрионов развивалась нормально (в дальнейшем из них выходили самки), оставшаяся же часть продолжала развитие до формирования личиночных структур. После того как эти зародыши достигали стадии, предшествующей вылуплению, они так и оставалась в яйцевых оболочках.

В результате проведенных исследований было установлено, что для всех, использованных в эксперименте эмбрионов, полученных от бессамцовых самок Adalia bipunctata и самки Harmonia axyridis Novo 108 были идентифицированы, по крайней мере, четыре критические точки развития. Одна поломила эмбрионов (женского пола) преодолевает все критические этапы развития и успешно достигает личиночной стадии, а позднее и стадии имаго. Для другой половины эмбрионов (очевидно, мужского пола) характерна остановка в развитии на том или ином критическом этапе развития с последующей некротизацией.

3.4. Микроскопическое изучение яичников инфицированных и неинфицированных самок кокцинеллид

Взрослые самки божьих коровок имеют парные яичники с овариолами телотрофического типа (в телотрофических овариолах все питающие клетки (трофоциты) собраны в проксимальном отделе яичника в единую для всех ооцитов питающую камеру). Среднее число овариол в разных популяциях адалии в разные годы является стабильным и составляет 27-30 в обоих яичниках (Таблица 3). У репродукгивно активной самки каждая овариола состоит из гермария и фолликулов, у молодой самки, а также самки, пребывающей в состоянии имашнальной диапаузы, овариола состоит только из одного гермария.

Электронно-микроскопические исследования яичников кокцинеллид выявили микроорганизмы различных типов. Были обнаружены микроорганизмы овальной формы в цитоплазме клеток гермария Adalia bipunctata из популяции Санкт-Петербурга В ооците Adalia bipunctata обнаружены спиралевидные спироплазмоподобные микроорганизмы.

Ни в одном случае не обнаружено массовое бактериальное инфицирование фолликулов самок. В овариолах тех самок, у которых молекулярно-генегические исследования показали отсутствие бактерий, мы не обнаружили эндосимбонтов.

В английской линии SP4 методами электронной микроскопии выявлено обширное бактериальное заражение: в оогониальных клетках, ооцитах и клетках фолликулярного эпителия цитоплазма содержит большие количества бактериоподобных клеток. Наблюдаемые микроорганизмы по форме и размерам похожи на риккетсий. Цитоплазма инфицированных клеток была разрушена. В ядрах инфицированых клеток бактерии не были обнаружены.

3.5. Идентификация бактерии, вызывающей явление бессамцовости у Harmonía axyridis

Результаты анализа продуктов ПЦР, полученных при амплификации ДНК жуков Harmonía axyridis, представлены на рис.1. ДНК особи H.axyridis Novo 108 дала характерный амплифицированный фрагмент размером около 1400 п.н. (дорожка 3), что подтвердило присутствие бактериальной ДНК в тотальной ДНК, выделенной из жуков этой линии. После амплификации со специфичными для бактерий класса Mollicutcs праймерами был получен продукт ПЦР размером около 429 п.н. у ДНК H.axyridis Novo 108 (дорожка 6), тогда.как у ДНК самца H.axyridis Novo75 такого амплифицированного фрагмента обнаружено не было (дорожка 7).

Для сравнения мы провели ПЦР с ДНК Adalia bipimetata (fei5 из Петербурга) с ранее обнаруженной в лаборатории Spiroplasma (Захаров и др., 1998), которая дала характерный амплифицированный фрагмент размером 429 п.н. (дорожка 8).

Амплифицированный . в полимеразной цепной реакции фрагмент бактериального гена 16S рРНК был секвенирован. Была определена последовательность 362 нуклеотидов (рис.2), ее сравнили с данными генного банка (GenBank).

12 3 45 6 7 8

Рис.1. Выявление и идентификация бактериальной ДНК в тотальной ДНК, изолированной из жуков Н. axyridis.

Электрофорез в 1,2% агарозном геле продуктов амплификации ДНК при использовании специфических ПЦР-праймеров.

Амплификация с праймерами, общими для большинства бактерий; дорожки:

1- маркер молекулярного веса -фрагменты ДНК фага X после обработки рестриктазой Pst I

2- ПЦР-коктейль (компоненты ПЦР без ДНК)

3- ДНК Harmonía axyridis Novo 108

Амплификация с праймерами, специфичными к ДНК бактерий класса Molliciites (Spiroplasma)\ дорожки:

4- маркер молекулярного веса - фрагменты ДНК плазмиды pBR322 после обработки рестриктазой Msp I

5- ПЦР-коктейль (компоненты ПЦР без ДНК)

6- ДНК Harmonio axyridis Novo 108

7- ДНК Harmonía axyridis Novo 75 (самец)

8- ДНК Adalia bipunctata со Spiroplasma

362 п.п.; 106 А; 70 С; 104 G; 81 Т; 1 неизвестен; СТАСАТТАСТ AGAGTATAGG AGAGGTTAGT GGAATTTCAT GTGTAGCGGT GGAATGCGTA GATATATGAA GGAACACCAG TGGCGAAGGC GGCTAACTGG CCTATTACTG ACGTTGTGGC ACGAAAGCGT GGGGAGCAAA TAGGATTAGA TACCCTAGTA GTCCACGCCG TAAACGATGA GTACTAAGTG TTGCCATGAG GCAGTGCTGT AGCTAACGCA TTAAGTACTC CGCCTGAGTA GTATGCTCGC AAGAGTGAAA CTCAAAGGAA TTGACGGGGA CCCGCACAAG CGGTGGAGCA TGTGGTTTAA TTCGAAGCAA CGCGAAGAAC CTTACCAGGT CTTGACATAC CTTGCNAAGC ТА Рис. 2. Нуклеотидная последовательность амплифицированного фрагмента гена 16S рРНК бактерий-симбионтов линии Novo 108 Harmonía axyridis

Полученная последовательность полностью совпала с соответствующим фрагментом гена 16S рРНК Spiroplasma группы VI (Tully et al., 1995).

До недавнего времени в классе Mollicutes была известена только одна бактерия, вызывающая явление бессамцовости. Это Spiroplasma группы П (типичная линия - DW-1), выделенная из Drosophila Willistoni. Филогенетически спироплазма дрозофилы связана с кластером, типичным представителем которого является Spiroplasma citri. Спироплазма, выделенная нами из божьей коровки Harmonio axyridis, филогенетически не связана со спироплазмой дрозофилы и кластеризуется с спироплазмой, выделенной из иксодовых клещей (см. рис.3).

Согласно классификации, выполненной Вейссбургом (Weissburg et al., 1989) спироплазма иксодовых клещей, линия Y-32, образует отдельный кластер. Дендрограмма, представляющая филогенетические связи исследуемой бактерии, выполненная на основании результатов настоящей работы, в целом совпадает с дендрограммой, построенной ранее Вейссбургом. Спироплазма, выделенная из Н. axyridis и ранее выделенная в нашей лаборатории спироплазма из A.bipunclata образуют кластер с линией Y-32, причем этот кластер значительно отличается от друтих кластеров, представленных на дендрограмме (рис.3).

S.Abi

S.Hax S.Y32

r-S.CMS S.TG1 -Sap

iMca Mmy

-Apo

¡Smi

■ S.DW1 : Sci

Sti

|S.DU1 S.MQl

0.2

0.1

0.0

Рис. 3. Филогенетическое дерево, представляющее положение бактерии Spiroplasma, выделенной из Н. axyriclis. Дендрограмма построена методом neighbor-joining, дистанции рассчитаны по методу Nei.Gojobori. Обозначения бактерий: Мса - Mycoplasma capricolum, Mmy - Mycoplasma mycoides, S.Hax - спироплазма, выделенная из H. axyridis (линия Novo 108), S.Abi - спироплазма, выделенная mA.bipunclata, S.Y32 - Spiroplasma VT группы (типовая линия Y-32), S.TG1 - Spiroplasma XXIII группы (типовая линия TG-1), S.MQl - Spiroplasma VII группы (типовая линия MQ-1), S.DW1 - Spiroplasma II группы (типовая линия - DW-1), Sci -Spiroplasma citri, S.CN5 - Spiroplasma IX группы (типовая линия CN-5), Sap - Spiroplasma apis, SDU1 - Spiroplasma XII группы (типовая линия -DU-1), Sta - Spiroplasma taiwanense, Smi - Spiroplasma minim, Apo -Acholeplasma polakii

Результаты филогенетического анализа являются неожиданными, поскольку более логичным было бы предположить наличие родственных связей между спироплазмой, вызывающей явление бессамцовости у представителей рода Drosophila и спироплазмой, выделенной из Harmonía axyridis. Кроме того, известно, что иксодовые клещи являются паразитами теплокровных, и вряд ли могли инфицировать кокцинеллид.

Обсуждение

В ходе работы установлено, что вторичное соотношение полов в изученной природной популяции Harmonía axyridis, собранной в Академгородке под Новосибирском, достоверно отличалось от (1:1) и было сдвинуто в сторону преобладания самок. Результаты анализа вторичных половых соотношений в отдельных семьях с обоеполым потомством, выделенных из популяций Я. axyridis, соответствовали ожидаемому отношению 1:1 (суммарная доля самцов составляла 50,5%), поскольку известно, что у кокцинеллид имеет место хромосомный механизм определения пола, при котором самки имеют две Х-хромосомы, самцы Х- и Y- хромосому (Lyapunova et al., 1984).

Электронно-микроскопические исследования яичников самок, зараженных бактериями рода Spiroplasma, не выявили серьезных нарушений как в гермариальной, так и в фоликулярной частях овариол. Несмотря на то, что было просмотрено более 500 ультратонких срезов овариол от 22 самок A. bipunctata и 12 самок Я. axyridis (от каждой особи получали 10-30 срезов), места локализации бактериоподобных организмов наблюдали редко, были обнаружены либо одиночные спироплазмоподобные клетки, либо их небольшие скопления.

Результаты электронно-микроскопического анализа свидетельствуют о том, что различные бактерии, вызывающие один и тот же эффект (гибель мужских эмбрионов), по-разному влияют на состояние овариол инфицированных самок. Как уже омечалось, у линии адалий из английской популяции в цитоплазме клеток фолликулярного эпителия яичников и в цитоплазме ооцитов (ооплазме) было обнаружено большое количество риккетсионодобных организмов. Картины бактериального

заражения и состояние цитоплазмы инфицированных клеток свидетельствовали о сильном цитопатогенном эффекте данных микроорганизмов. Между тем, у самок A. bipundata и Н. axyridis, зараженных, согласно результатам ПЦР, спироплазмой, мы не наблюдали больших количеств бактериальных клеток.

Эмбриологические исследования показали, что как у адалии, так и у хармонии не наблюдается остановки развития на самых ранних этапах эмбриогенеза, то есть фактор бессамцовости не препятствует началу дробления яйцеклетки. Для обеих кокцинеллид была показана остановка развития части эмбрионов на стадии формирования синцитиальной бластодермы. Также наблюдались эмбрионы, у которых остановка развития происходила на различных стадиях органогенеза. Заслуживает внимания тот факт, что для хармонии, по крайней мере семьи Novo 101, наблюдалась остановка развития эмбрионов на стадии, предшествующей вылуплению. Возможно, накопление бактерий, вызывающих бессамцовость, или их продуктов приводит в данном случае к формированию мышечной дистрофии, и личинка не может разорвать оболочки яйца, чтобы выйти наружу.

В развитии Adalia bipunctata и Harmonio axyridis имеются особые чувствительные или критические периоды, в течение которых происходит гибель мужских эмбрионов, зараженных андроцидными бактериями. В результате проведенных исследований нами были установлены четыре критических периода развития для эмбрионов A. bipunctata и Я. axyridis Novo 108, на каждом из которых наблюдали гибель примерно 1/8 части эмбрионов. На этих критических этапах происходила остановка развития, затем следовало разрушение тканей эмбриона и, в конце концов, некроз. Половина эмбрионов преодолевала все критические периоды и успешно вылуплялась. У остальных эмбрионов наблюдалась остановка развития на различных стадиях, подобно тому, как это происходит в линиях Drosophila с цитоплазматической несовместимостью, вызванной бактерией рода Wolbachia и с отклонением от нормального соотношения полов, вызванным бактерией рода Spiroplasma (Tsuchiyama-Omura et al., 1988; Callaini et al., 1996).

Выводы

1. Вторичное соотношение полов в новосибирской популяции Harmonía axyridis достоверно сдвинуто в сторону преобладания самок. В данной популяции обнаружены самки, в потомстве которых отсутствуют самцы.

2. Бессамцовость в сибирских популяциях Harmonía axyridis определяется действием цитошгазматически наследуемой симбиотической бактерии, принадлежащей к порядку Mycoplasmatales, роду Spíroplasma.

3. Спироплазма, . выделенная из Harmonía axyridis, филогенетически близка к спироплазме, вызывающей явление бессамцовости у Adalia bipunctata, и к Spiroplasma ixodetis лиши Y-32, обнаруженной у иксодового клеща Ixodes pacificus.

4. Гибель мужских зародышей у Adalia bipunctata и Harmonía axyridis Novo 108 наблюдается после образования полярных клеток (начала половой детерминации), на различных стадиях эмбриогенеза, во время которых происходит: 1) переход от синцитиальной к клеточной бластодерме, 2) появление вентральной и головной борозд, 3) сегментация мезодермы, 4) сегментация головы и туловища. На каждой стадии гибнет приблизительно 1/8 часть от общего числа эмбрионов.

5. Клетки фолликулярного эпителия адалий английской линии Sp4 заражены большим количеством бактериальных эндосимбионтов (риккетсий). Цитоплазма клеток при этом показывает признаки повреждения, ядро остается неповрежденным и свободным от бактерий. В изученных нами линиях Adalia bipunctata и Harmonía axyridis, инфицированных бактериями рода Spiroplasma, в цитоплазме ооцитов и клеток фолликулярного эпителия обнаружены немногочисленные бактёриоподобные организмы, при этом цитоплазма оставалась неповрежденной.

Список работ, опубликованных по материалам диссертации

1. Захаров И.А., Зинкевич Н.С., Шайкевич Е.В., Высоцкая JI.B., Доржу Ч.М., Межерес М.Е.Н. Соотношение полов и явление бессамцовости в сибирских популяциях Harmonía axyridis (Pall.) // Генетика. 1999. Т. 35. № 6. С. 771-776.

2. Зинкевич Н. С., Темкина JI. М., Соколова М. И. Особенности эмбриогенеза и оогенеза жуков Adalid bipunctata L. и Harmonía axyridis Pall, в бессамцовых семьях. // Онтогенез. 2000. Т. 31.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Зинкевич, Наталья Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Жуки семейства Coccinellidae

1.2. Генетика и биология кокцинеллид

1.2.1. Adalia bipunctata

1.2.2. Harmonía axyridis как генетический объект

1.2.2.1. Биология Harmonía axyridis

1.2.2.2. Harmonía axyridis как модельный объект в различных областях биологии

1.2.2.3. Кариотип Harmonía axyridis

1.2.2.4. Феногеография Harmonía axyridis, полиморфизм по окраске

1.2.2.5. Бессамцовость у Harmonía axyridis

1.3. Спироплазма как андроцидная бактерия

1.3.1. Молликуты

1.3.2. Род Спироплазма

1.3.2.1. Классификация и таксономия спироплазм

1.3.2.2. Спироплазма и бессамцовость 26 1.3.2.3 Вирусы спироплазм

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Насекомые

2.2. Методы культивирования насекомых

2.3. Методы выделения бессамцовых линий и определение соотношения полов в популяциях

2.4. Методы световой микроскопии эмбрионов

2.5. Методы световой микроскопии овариол

2.6. Методы электронно-микроскопического анализа

2.7. Выделение ДНК

2.8. Полимеразная цепная реакция

2.9. Электрофорез

2.10. Определение последовательности нуклеотидов секвенирование)

2.11. Филогенетический анализ

2.12. Статистические методы

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3 .1. Вторичное соотношение полов в новосибирской популяции Harmonía axyridis. Соотношение полов в семьях и выделение бессамцовых линий у собранных в природе жуков Harmonía axyridis

3.2. Соотношения полов в популяциях Adalia bipunctata и изменчивость числа овариол у самок

3.3. Развитие эмбрионов кокцинеллид при заражении андроцидными бактериями

3.3.1. Нормальный ход эмбриогенеза у кокцинеллид

3 .3.2. Особенности эмбриогенеза Adalia bipunctata в бессамцовых семьях

3.3.3. Особенности эмбриогенеза Harmonía axyridis в бессамцовых семьях

3 .4. Микроскопическое изучение яичников инфицированных и неинфицированных самок кокцинеллид

3.4.1. Морфология яичников и овариол

4.2. Состояние фолликулярного эпителия

3.5. Идентификация бактерии, вызывающей явление бессамцовости у

Harmonía axyridis

ОБСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Наследуемая бессамцовость у двух видов кокцинеллид - Adalia bipunctata L. и Harmonia axyridis Pall"

Актуальность проблемы. Симбиотические микроорганизмы чрезвычайно широко распространены в природе. До недавних пор возможности их изучения ограничивались неспособностью симбионтов к росту вне организма хозяина. Последние достижения молекулярной биологии дали новые подходы к изучению таких симбионтов. В настоящее время проводится анализ ряда симбиотических систем, которые были описаны много лет назад, но исследование которых до сих пор представляло известные сложности.

После первой работы Я.Я. Jlyca (19476), выполненной на Adalia bipunctata, для пяти других видов божьих коровок (Coleóptera: Coccinellidae) было описано явление цитоплазматически наследуемого отклонейия от нормального соотношения полов, вызванного гибелью самцов на стадии яйца. В некоторых случаях вызывающие наследуемую бессамцовость бактерии были идентифицированы, в других (например, у Harmonía axyridis) - нет.

Дальнейшее изучение внутриклеточных симбионтов божьих коровок позволит получить дополнительную информацию о морфологических проявлениях действия бактерий на разных стадиях оогенеза и эмбриогенеза. Визуализация процессов, сопровождающих гибель самцов, является необходимым условием для понимания механизмов, вызывающих явление бессамцовости, и того, как подобные механизмы могли возникнуть в процессе эволюции.

Цели и задачи исследования. Целью данной работы являлось исследование явления бессамцовости в российских популяциях азиатского вида Harmonía axyridis, сравнительное изучение цитоморфологических проявлений наследуемой бессамцовости у двух видов кокцинеллид Adalia bipunctata и Harmonía axyridis. В работе были поставлены следующие конкретные задачи:

- определение вторичного соотношения полов в новосибирской популяции Harmonía axyridis;

- выделение бессамцовых линий у Harmonía axyridis;

- идентификация бактерий, вызывающих андроцидный эффект в сибирских популяциях Harmonía axyridis',

- исследование соотношений полов у Adalia bipunctata в популяциях Москвы, Санкт-Петербурга и Ленинградской области;

- электронно-микроскопическое изучение трансовариальной передачи бактерий в семьях Adalia bipunctata и Harmonía axyridis-,

- определение стадии и морфологических проявлений гибели мужских эмбрионов Adalia bipunctata и Harmonía axyridis.

Научная новизна. Впервые учтено вторичное половое соотношение в одной из популяций Harmonía axyridis и показано наличие в сибирских популяциях этого вида самок, в потомстве которых отсутствуют самцы. Впервые показано, что бессамцовость в популяциях Harmonía axyridis может вызываться симбиотическими цитоплазматически наследуемыми бактериями класса Mollicutes рода Spiroplasma. Установлено, что эта 6 бактерия филогенетически не связана с ранее описанной спироплазмой, вызывающей нарушения в соотношении полов у БгозоркИа. Показано, что спироплазма, выделенная нами из Нагтота ахупсИя, филогенетически близка к спироплазме, вызывающей явление бессамцовости в популяциях Ada.Ua Ырипсгма, но данные бактерии не являются идентичными. Проведено изучение морфопатологии мужских эмбрионов А(1аНа Ырипс1Ма и Нагтота ахупсИз и впервые идентифицированы стадии, на которых происходит остановка развития. Впервые изучено состояние яичников инфицированных самок.

Практическая ценность. Микроорганизмы, модифицирующие половой процесс хозяина, могут найти практическое использование в качестве агентов биологического контроля численности и/или полового состава в популяциях вредных и полезных видов насекомых; наличие или отсутствие отклонения от нормального соотношения полов в популяциях насекомых может служить своеобразным тестом на благополучие (или неблагополучие) данной экосистемы в целом.

Апробация работы. Основные материалы работы доложены на семинаре кафедры эмбриологии биологического факультета МГУ (25 марта 1999 года) и на Конференции молодых ученых и аспирантов ИОГен РАН и кафедры генетики и селекции биологического факультета МГУ (16 ноября 1999 года).

Публикации. По теме диссертации опубликована 1 научная работа, находятся в печати 1 научная работа и тезисы, представленные на 2-ой съезд ВОГиС.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы (48 отечественных и 221 зарубежный источник). Работа содержит 11 таблиц и иллюстрирована 25 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Зинкевич, Наталья Сергеевна

Выводы

2. Бессамцовость в сибирских популяциях Harmonía axyridis определяется действием цитоплазматически наследуемой симбиотической бактерии, принадлежащей к порядку Mycoplasmatales, роду Spiroplasma.

3. Спироплазма, выделенная из Harmonía axyridis, филогенетически близка к спироплазме, вызывающей явление бессамцовости у Adalia bipunctata, и к Spiroplasma ixodetis линии Y-32, обнаруженной у иксодового клеща Ixodes pacificus.

5. Клетки фолликулярного эпителия адалий английской линии Sp4 заражены большим количеством бактериальных эндосимбионтов (риккетсий). Цитоплазма клеток при этом показывает признаки повреждения, ядро остается неповрежденным и свободным от бактерий. В изученных нами линиях Adalia bipunctata и Harmonía axyridis, инфицированных бактериями рода Spiroplasma, в цитоплазме ооцитов и клеток фолликулярного эпителия обнаружены немногочисленные бактериоподобные организмы, при этом цитоплазма оставалась неповрежденной.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Зинкевич, Наталья Сергеевна, Москва

1. Айзенштадт Т.Б. Цитология оогенеза. М.: Наука. 1984. 247с.

2. Алтухов Ю.П. Генетические процессы в популяциях. М.: Наука. 1983. 279с.

3. Бей-Биенко Г.Я. Общая энтомология. М.: Высшая школа. 1980. 416с.

4. Воронин К.Е. Особенности формирования зимующей популяции хармонии {Harmonía axyridis Pall.) дальневосточного хищника тлей // Тр. ВИЗР. 1965. Т.24. С.228-233.

5. Воронин К.Е. Биология хищника тлей хармонии (Harmonía axyridis Pall., Coccinellidae, Coleoptera).-B кн.: Вредные насекомые советского Дальнего Востока. Владивосток. 1966. С.177-185.

6. Воронин К.Е. Акклиматизация дальневосточного хищника тлей хармонии (Leis axyridis Pall.) в Предкарпатье. Тр. ВИЗР. 1968. Т.31. С. 234-243.

7. Воронцов Н.Н., Блехман А.В. Фено- и геногеография окраски надкрылий в популяциях восточноазиатской коровки Harmonía axyridis Pall. (Coleóptera, Coccinellidae) // Докл. АН СССР. 1986. Т.286. С.205-208.

8. Гилберт С. Биология развития: в 3-х т. М.: Мир. 1993. Т.1. 228с.

9. Добржанский Ф.Г. Имагинальная диапауза у божьих коровок // Известия Отд. Прикл. Энтом. 1922. Т.2. С.229-234.

10. Заславский В.А., Богданова Т.П. Особенности имагинальной диапаузы у двух видов Chilocorus (Coleóptera, Coccinellidae) //Тр. Зоол. ин-та АН СССР. 1965. Т.36. С.89-95.

11. Захаров В.М. Асимметрия животных // М.: Наука. 1987. 216с.

12. Захаров И.А. Взаимодействие антропогенных и природных факторов в развитии городского меланизма в популяциях Adalia bipunctata L. Восточной Европы // Генетика. 1990. Т. 26. № 11. С. 1932-1941.

13. Захаров И.А. Изучение генетической дифференциации и стабильности состава популяций Adalia bipunctata L. г. Москвы // Генетика. 1992. Т. 28. № 5. С. 179-181.

14. Захаров И.А. Двуточечная божья коровка {Adalia bipunctata) как генетический объект // Генетика. 1995. Т.31. № 2. С.149-161.

15. Захаров И.А. Изучение наследования рисунка на надкрыльях у Adalia bipunctata II Генетика. 1996. Т. 32. № 4. С. 579-583.

16. Захаров И.А., Херст Г.Д.Д., Чернышева Н.Э., Межерес М.Э.Н. Наследуемая по материнской линии бактерия, вызывающая бессамцовость в Петербургской популяции Adalia bipunctata не принадлежит к роду Rickettsia II Генетика. 1996. Т.32. №11. С. 15041508.

17. Захаров И.А., Горячева И.И. Половые соотношения в популяциях Adalia bipunctata и популяционно-генетическое значение бессамцовости // Генетика. 1998. Т.34. №11. С. 1-7.

18. Захаров И.А., Шайкевич Е.В., Горячева И.И. Бактерии рода Spiroplasma инфицируют двуточечную божью коровку (Adalia bipunctata L.) в России // ДАН. 1998. Т. 362. С. 570573.

19. Захаров И.А., Зинкевич Н.С., Шайкевич Е.В., Высоцкая JI.B., Доржу Ч.М., Межерес М.Е.Н. Соотношение полов и явление бессамцовости в сибирских популяциях Harmonía axyridis (Pall.) // Генетика. 1999. Т. 35. С. 1-5.

20. Захваткин Ю.А. Эмбриология насекомых (курс лекций). Учеб. Пособие для университетов // М. Высш. школа. 1975. 327с.

21. Иванова-Казас О.М., Кричинская Е.Б. Курс сравнительной эмбриологии беспозвоночных животных// JL: Изд-во Ленингр. университета. 1988. 352с.

22. Кожанова Н.И., Пасичник М.И. Дифференцировка ооцитов и питающих клеток в телотрофных овариолах жука Coccinella septempunctata II Цитология. 1979. Т.21. С.1145-1149.

23. Кузнецов В.Н. Эколого-фаунистический очерк кокцинеллид (Coleóptera, Coccinellidae) Якутии. В кн.: Биология некоторых видов вредных и полезных насекомых Дальнего Востока. Владивосток. 1978. С.19-30.

24. Кузнецов В.Н. Биология хищных кокцинеллид и их роль в динамике численности тлей на зерновых культурах и сое в Приморском крае. В кн.: Биология некоторых видов вредных и полезных насекомых Дальнего Востока. Владивосток. 1978. С.63-69.

25. Лус Я.Я. Некоторые закономерности размножения популяций Adalia bipunctata L. Гетерозиготность популяций по леталям // Докл. АН СССР. 1947. Т.57. №8. С.825-828.

26. Лус Я.Я. Некоторые закономерности размножения популяций Adalia bipunctata L. Бессамцовые линии в популяциях // Докл. АН СССР. 1947. Т.57. №8. С.951-954.

27. Лусис Я.Я. О биологическом значении полиморфизма окраски у двуточечной коровки Adalia bipunctata L. // Latvijas Entomologs. 1961. №4. С.3-29.

28. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. М. Мир. 1984. 479с.

29. Медведев H.H. Исследования по генетике развития. Критические периоды и их отношение к вопросу о механизме действия генов в развитии // ДАН СССР. 1939. Т.22. №6. С.347-349.

30. Медведев H.H. Исследования по генетике развития. Дальнейшие данные о критических периодах в развитии Drosophila melanogaster // ДАН СССР. 1939. Т.25. №6. С.519-521.

31. Муха Д.В., Сидоренко А.П., Лазебная И.В., Захаров И.А. Анализ вариабельности структуры кластера рибосомальных генов в пределах класса Insecta // Генетика. 1995. Т.31. №9. С. 1249-1253.

32. Определитель бактерий Берджи. М. Мир. 1997. Т.2. 800с.

33. Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника. М.: Советская наука. 1957. 467с. Росс Г., Росс Ч., Росс Д. Энтомология. М. Мир. 1985. 576с.

34. Савойская Г.И. О зимовках некоторых кокцинеллид Юго-Восточного Казахстана // Зоол. журн. 1960. Т.34. вып.6. С.881-887.

35. Савойская Г.И. Насекомые защитники урожая. Алма-Ата. 1974. 126с.

36. Савойская Г.И. Кокцинеллиды (систематика, применение в борьбе с вредителями в сельском хозяйстве). Алма-Ата. 1983. 245с.

37. Савойская Г.И. Тлевые коровки. М. Агропромиздат. 1991. 78с.

38. Сергиевский С.О., Захаров И.А. Экологическая генетика популяций Adalia bipunctata: концепция "жесткого и гибкого" полиморфизма // Исслед. по генетике. Л.: ЛГУ. 1981. №9. С.112-129.

39. Сергиевский С.О., Захаров И.А. Изучение генетического полиморфизма популяций двуточечной божьей коровки Adalia bipunctata (L.) Ленинградской области. Сообщ. 2. Состав популяции города Ленинграда // Генетика. 1983. Т.19. №4. С.635-640.

40. Сергиевский С.О., Захаров И.А. Реакция популяций на стрессовые воздействия: концепция двуступенчатого реагирования // Онтогенез, эволюция, биосфера / Под ред. Яблокова A.B. М.: Наука. 1989. С. 157-173.

41. Тимофеев-Ресовский Н.В., Свирежев Ю.М. Об адаптационном полиморфизме в популяциях Adalia bipunctata // Пробл. кибернетики. 1966. Вып. 16. С. 137-146.

42. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих. М.: Мир. 1975. 324с.

43. Холин С.К. Стабильность генетического полиморфизма по окраске надкрылий Harmonía axyridis Pall. (Coccinellidae, Coleóptera) в Приморском крае // Генетика. 1990. Т.26. №12. С.2207-2213.

44. Холодковский Н.А. Курс энтомологии теоретической и прикладной. С.-Петербург. 1896. 622с.

45. Шванвич Б.Н. Курс общей энтомологии. Введение в изучение строения и функций тела насекомых. М.: Советская наука. 1949. 900с.

46. Шлегель Г. Общая микробиология. М. Мир. 1987. 567с.

47. Якобсон Г.Г. Жуки России и Западной Европы. Руководство к определению жуков. С.Петербург. 1905. 508с.

48. Beeman R.W., Stuart J.J., Brown S J. and Denell R.E. Structure and function of the homeotic gene complex (HOM-C) in the Beetle, Tribolium castaneum // BioEssays. 1993. V.15. №7. P.439-444.

49. Bergey's manual of systematic bacteriology. V.l. Krieg N.R., ed. Williams Wilkins, Baltimor. 1984.

50. Boyle L., O'Neill S.L., and Robertson H.M. Interspecific and intraspecific horizontal transfer of Wolbachia in Drosophila II Science. 1993. V. 260. P. 1796-1799.

51. Bové J.M. Molecular features of mollicutes // Clin.Infect.Dis.1993. V.17 ( Supp 1.1 ): S.10-31.

52. Bove J.M., Saillard C. Cell biology of spiroplasmas / In "The Mycoplasmas" (eds. Whitcomb R.F. and Tully J.G ). New York: Academic. 1979. V.3. P.83-153.

53. Bové J.M., Carle P., Gamier M. et al. Molecular and cellular biologie of spiroplasmas / In "The Mycoplasmas" (eds. Whitcomb R.F. and Tully J.G.). Academic Press. San Diego. 1989. V.5. P.243-364.

54. Brown H.D. The behaviour of newly hatched coccinellid larvae (Coleoptera: Coccinellidae) // J. Entomol. Soc. S. Afr. 1972. V.35. P. 149-157.

55. Buntin G.D. and Bouton J.H. Aphid (Homoptera: Aphididae) management in alfalfa by spring grazing with cattle // J. Entomol. Sci. 1997. V.32. № 3. P.332-342.

56. Buzzati-Traverso A. An extreme case of sex ratio Drosophila bilineata II Dros. Info.Serv. 1941.V. 14. P.49.

57. Cayre M., Strambi C., Charpin P. et al. Neurogenesis in adult insect mushroom bodies // J. Comp. Neurol. 1996. V.371. P.300-310.

58. Calavan E.C. and Bove J.M. Ecology of Spiroplasma citri / In "The Mycoplasmas" (Whitcomb R.F. and Tully J.C. eds.) Academic Press. San Diego. 1989. V.5. P.425-485.

59. Callaini G., Riparbelli M.G., Giordano R. and Dallai R. The distribution of cytoplasmic bacteria in the early Drosophila embryo is mediated by astral microtubules. J. Cell Sci. 1994. V.107. P. 673-682.

60. Callaini G., Riparbelli M.G., Giordano R. and Dallai R. Mitotic defects associated with cytoplasmic incompatibility in Drosophila simulans. II J. Invert. Pathol. 1996. V.65. P.55-64.

61. Canale-Parola E. Motility and chemotaxis of spirochetes // Ann. Rev. Microbiol. 1978. V.32. P.69-99.

62. Carle P., Laigret F., Tully J.G. and Bove J.M. Heterogenety of genome sizes within the genus Spiroplasma II Int.J.Syst.Bacter.1995. V.45. P.178-181.

63. Carson H.L. A female producing strain of D. borealis Patterson // Dros. Info. Serv. 1956. V.30. P.109-110.

64. Casanova J., Sanchez-Herrero E., Busturia A., Morata G. Double and triple mutant combination of thebithorax complex of Drosophila// EMBO J. 1987. V.6. P.3103-3109.

65. Cavalcanti A.L.G. and Falkao D.N. A new type of sex ratio of Drosophila prosaltans Duda // Proc. Int. Cong. Genet. IX.1954.V.2.P.1233-1235.

66. Cavalcanti A.L.G., Falkao D.N. and Castro L.E. The interaction of nuclear and cytoplasmic factors in the inheritance of the sex ratio character in Drosophila prosaltans II Proc. Int. Cong. Genet. X. 1958. V.2. P.47.

67. Cazemajor M., Landre C. and Montchamp-Moreau C. The sex-ratio trait in Drosophila simulans:genetic analysis of distortion and suppression // Genetics. 1997. V.147. P.635-642.

68. Chang C-J. And Chen T.A. Substrate utilization in defined media // Yale J.Biol.Med. 1983. V.56.1. P.439-445.

69. Chang C-J. Nutrition and cultivation of spiroplasmas / In "The Mycoplasmas" (Whitcomb R.F. and Tully J.G. eds.) Academic Press. San Diego. 1989. V.5. P.201-241.

70. Chang K-S., Shiraishi T., Nakasuji F. and Morimoto N. Abnormal sex-ratio condition in the walnut leaf beetle, Gastrolina depressa (Coleoptera: Chrysomelidae) // Appl. Ent. Zool. 1991.V.26.P.299-306.

71. Chapman H.C., Woodard D., Kellen W.R., Clark T.B. Host-parasite relationships of Thelohania associeted with mosquitoes in Louisiana (Nosematidae: Microsporidia) // J. Invert. Pathol. 1966. V.8. P.452-456.

72. Chen T.A., Lei J.D. and Lin C.P. Detection and identification of plant and insect Mollicutes / In "The Mycoplasmas" (Whitcomb R.F. and Tully J.C. eds.) Academic Press. San Diego. 1989. V.5. P.393-424.

73. Chen T.A., Liao C.H. Corn stunt spiroplasma: Isolation, cultivation, and proof of pathogenicity // Science. 1975. V.188. P.1015-1017.

74. Clark H.F. and Rorke L.B. Spiroplasmas of tick origin and their pathogenecity / In "The Mycoplasmas" (M.F. Barile and S Razin, eds.). 1979. New York, Academic Press. V.l. P.155-174.

75. Clements A.N. and Boocock M.R. Ovarian development in mosquitoes: stages of growth and arrest, and follicular resorption // Physiol.Entomol. 1984. V.9. P.1-8.

76. Clyde W.A. Mycoplasma pneumoniae respiratory disease symposium: summation and significance // Yale J. Biol. Med. 1983. V.56. P.523-527.

77. Coderre D., Lucas E. and Gagne I. The occurence of Harmonía axyridis (Pallas) (Coleoptera: Coccinellidae) in Canada // The Canadian Entomologist. 1995. V.127. P.609-611.

78. Cohen AJ. , Williamson D.L. and Oishi K. SpV3 virus of Drosophila spiroplasmas // Israel J. Med. Sci. 1987. V.23. P.429-433.

79. Cole R.M. Mycoplasma and spiroplasma viruses: ultrastructure / In "The Mycoplasmas" (M.F. Barile and S Razin, eds.). 1979. New York, Academic Press. V.l. P.385-410.

80. Colman S.D., Hu P.C., Litaker W. and Bott K.F. A physical map of the Mycoplasma genitalium genome //Med. Microbiol. 1990. V.4. P.683-687.

81. Counce SJ. and Poulson D.F. Developmental effects of the sex ratio agent in embryos of Drosophila willistoni II J. Exp. Zool. 1962. V.151. P. 17-31.

82. Counce S.J. and Poulson D.F. The expression of maternally-transmitted sex ratio condition (SR) in two strain of£). melanogaster II Genetica. 1966. V.37. P.364-390.

83. Daniels M.J. Mechanisms of spiroplasma pathogenicity / In "The Mycoplasmas" (M.F. Barile and S Razin, eds.). 1979. New York. Academic Press. V.3. P.209-227.

84. Davis R.E. and Worley J.F. Motile, helical microorganisms asociated with corn stunt disease // Phytopathology. 1973. V.63. P.403-408.

85. Dobzhansky Th. Zur kenntnis der gattung Coccinella auct. // Zoolog. Anzeiger. 1925. Bd.LXII. P.16-250.

86. Dobzhansky Th. Geographical variation in lady-beetles // Am. Nat. 1933. V.67. P.97-126.

87. Driever W., Nüsslein-Volhard C. A gradient of bicoid protein in the Drosophila embryo // Cell. 1988. V. 54. P. 83-94.

88. Driever W., Nüsslein-Volhard C. The bicoid protein is a positive regulator of hunchback transcription in the early Drosophila embryo // Nature. 1989. V. 337. P. 138-143.

89. Ebbert M.A. The interaction phenotype in the Drosophila m//zstom-spiroplasma symbiosis // Evolution. 1991. V.45. P.971-988.

90. Ettifouri M., Ferran A. Influevce of larval rearing diet on the intensive searching behaviour of Harmonía axyridis (Col.: Coccinellidae) larvae//Entomophaga. 1993. V.38. P.51-59.

91. Fawcett D.W. The cell: its organells and inclusions. W.B. Saunders Co. Philadelphia. USA. 1981. 862p.

92. Fox G.E., Pechman K.R., Woese C.R. Comparative cataloging of 16S ribosomal ribonucleic acid: Molecular approach to procaryotic systematics // Int. J. Syst. Bacteriol. 1977. V.27. P.44-57.

93. Fox G.E., Stackebrandt E., Hespell R.B. et al. The Phylogeny of prokaryotes // Science. 1980. V.209. P. 457-463.

94. French V. Insect development: the long and the short of it // Nature. 1993. V.361. P.400-401.

95. Frischer L.E., Hagen F.S. Garber R.L. An inversion that disrupts the Antennapedia gene causes abnormal structure and localization of RNAs // Cell. 1986. V.47. P. 1017-1023.

96. Fujihara T., Kawabe M. and Oishi K. A sex-transformation gene in Drosophila melanogaster II J. Hered. 1978. V.69. P.229-236.

97. Gotoh T. Experimental transfer of abnormal "sex-ratio" in the ladybird beetle, Harmonia axyridis (Pallas) (Coleoptera: Coccinellidae) //Appl.Entomol.Zool. 1982. V.17. P.319-324.

98. Gotoh T. and Niijama K. Caracterics and agent(s) of abnormal sex ratio ( SR ) in two aphidophagus coccinellid species. In "Ecology of Aphidophaga". Proc. II Symp. Zoirowske Podradi (ed. HodekF.). 1986. P.545-550.

99. Grill C.P., Moore A.J., Brodie E.D. The genetics of phenotypic plasticity in a colonizing population of the ladybird beetle, Harmonia axyridis II Heredity. 1997. V.78. P.261-269.

100. Grow J.F. and Aoki K. Group selection for a polygenic behavioral trait: Estimating the degree of population subdivision//Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1984. V.81. P.6073-6077.

101. Guillemaud T., Pasteur N. Ant Rousset F. Contrasting levels of variability between cytoplasmic genomes and incompatibility types in the mosquito Culexpipiens II Proc. R. Soc. Lond. B. 1997. V.264. P.245-251.

102. Gundersen D.E., Lee I.-M., Rehner S.A. et al. Phylogeny of mycoplasmalike organisms (phytoplasmas): a basis for their classification // J. Bacteriol. 1994. V.176. P.5244-5254.

103. Hackett K.J., Lynn D.E., Wiliamson D.L. et al. Cultivation of the Drosophila sex ratio spiroplasma // Science. 1986. V.232. P.1253-1255.

104. Hackett K.J. and Clark T.B. Ecology of spiroplasmas / In "The Mycoplasmas" (Whitcomb R.F. and Tully J.G. eds.) New York. Academic Press. 1989. V.5. P.l 13-200.

105. Hironori Y., Katsuhiro S. Cannibalism and interspecific predation in two predatory ladybirds in relation to prey abundance in the field // Entomophaga.l997.V.42. №1-2. P. 153-163.

106. Hodek I. Biology of Coccinellidae. Prague.Academia.1973. 260p.

107. Hoffman A.A., Turelli M. and Simmons G.M. Undirectional imcompatibility between populations of Drosophila simulans II Evolution. 1986.V.40.P.692-701.

108. Hoffman A.A. Partial cytoplasmic imcompatibility between two Australian populations of Drosophila melanogaster I I Entomol. Exp. Appl. 1988.V.48.P.61-67.

109. Hurst G.D.D., Majerus M.E.N, and Walker L. Cytoplasmic male killing elements in Adalia bipunctata (Linnaus) (Coleoptera: Coccinellidae) //Heredity. 1992. V.69. P.84-91.

110. Hurst G.D.D., Majerus M.E.N, and Walker L.E. The importance of the cytoplasmic male-killing elements in natural populations of the two spot ladybird, Adalia bipunctata (Linnaus) (Coleoptera: Coccinellidae) //Biol. J. Linn. Soc. 1993. V.49. P.195-202.

111. Hurst G.D.D., Purvis E.L., Sloggett JJ. and Majerus M.E.N. The effect of infection with male-killing Rickettsia on the demography of female Adalia bipunctata L. (two spot ladybird) // Heredity. 1994. V.73. P.309-316.

112. Hurst G.D.D., Sharpe R.G., Broomfield A.H. et al. Sexually transmitted disease in a promiscuous insect Adalia bipunctata II Ecol.Entomol.l995.V.20.P.230-236.

113. Hurst G.D.D., Hammarton T.C., Obrycki JJ. et al. Male-killing bacteria in a fifth ladybird beetle, Coleomegilla maculata (Coleoptera: Coccinellidae)//Heredity. 1996. V.77. P.177-185.

114. Hurst G.D.D., Hammarton T.M., Bandi C. et al. The diversity of inherited parasites of insects: the male-killing agent ot the ladybird beetle Coleomegilla maculata is a member of the Flavobacteria // Genet. Res. 1997. V.70. P. 1-6.

115. Hurst G.D.D., Bandi C., Sacchi L. et al. Adonia variegata (Coleoptera: Coccinellidae) bears maternally inherited Flavobacteria that kill males only // Parasitology. 1999. V.l 18. P.125-134.

116. Hurst G.D.D., Schulenberg J.H.G.V.D., Majerus T.M.O. et al. Invasion of one insect species, Adalia bipunctata, by two different male-killing bacteria // Ins. Mol. Biol. 1999. V.8. P.133-139.

117. Hurst G.D.D., Jiggins F.M., Schulenberg J.H.G.V.D et al. . Male-killing Wolbachia in two species of insects. Proc. Roy. Soc. Lond. B. 1999. V.266. P.735-740.

118. Hurst L.D. Cytoplasmic sex ratio distorters in animals // Biol.Rev.l993.V.68.P.121-193.

119. Jamada M.A. Nawa S. and Watanabe T.K. A mutant of SR organism ( SRO ) in Drosophila that does not kill the host males // Jap.J.Gen. 1982.V.57.P.301-305.

120. Katsoyannos P., Kontodimas D.C., Stathas GJ. and Tsartsalis C.T. Establishment of Harmonia axyridis on citrus and some data on its phenology in Greece // Phytoparasitica. 1997. V. 25. №3. P.183-191.

121. Klingler M. Segmentation in insects: how singular is Drosophila? // BioEssays. 1994. V.16. №6. P.391-392.

122. Koana T., Miyake T. Effects of the sex ratio organism on in vitro differentiation of Drosophila embryonic cells // Genetics. 1983. V.104. P.l 13-122.

123. Kobayashi S. and Sakaguchi B. Multiplication of SR agents in Drosophila // Annual report of national institute of genetics №15.1965. Japan. P.40-41.

124. Komai T. and Hosino Y. Contributions to the evolutionary genetics of the lady-beetle, Harmonia. II. Microgeographic variations // Genetics. 1951. V.36. P. 382-390.

125. Komai T. Genetics of ladybeetles // Adv. Gen. 1956. V.8. P.155-188.

126. Komai T., Chino M. Observations on geographic and temporal variations in the lady-beetle Harmonia axyridis. 1. Elytral patterns // Proc. Japan Acad. 1969. V. 45. P.284-287.

127. Krafsur E.S., Kring T.J., Miller J.C. et al. Gene flow in the exotic colonizing ladybeetle Harmonia axyridis in North America // Biol. Control. 1997. V.8. P.207-214.

128. Kuppeveld F.J.M., van der Logt J.T.M., Angulo A.F. et al. Genus- and species-specific identification of Mycoplasmas by 16S rRNA amplification // Appl. Environ. Microbiol. 1992. V.58. P.2606-2615.

129. Kuroda Y., Shimada Y., Sakaguchi B.et al. Effects of sex-ratio (SR)-spiroplasma infection on Drosophila primary embryonic cultured cells and on embryogenesis // Zool. Sei. 1992. V.9. P.283-291.

130. Magni G. "Sex-ratio": a non-mendelian character in Drosophila bifasciata II Nature. 1953. V.172. P.81.

131. Magni G. Thermic cure of cytoplasmic sex ratio of Drosophila bifasciata II Caryologia. 1954. V.6. P.1213-1216.

132. Magni G. Effect of natural selection on a cytoplasmic character in Drosophila bifasciata II Proc. Int. Cong. Genet. X. 1958. V.2. P.175.

133. Majerus M., Kearn P. Ladybirds. Richmond Publishing Co. Slough. 1983.103 p.

134. Majerus M.E.N., O'Donald P. and Weir J. Female mating preference is genetic // 1982. V.300. P.521-523.

135. Majerus M.E.N., O'Donald P., Kearns P.W. and Ireland H. Genetics and evolution of female choice//Nature. 1986. V. 321 .P. 164-167.

136. Majerus M.E.N., Kearn P.W.E., Ireland H., Forge H. Ladybird as teaching aids. 1. Collecting and culturing II J. Biol. Educ. 1989. V.23. №2. P.85-95.

137. Majerus T.M.O., Majerus M.E.N., Knowles B. et al. Extreme variation in the prevalence of inherited male-killing microorganisms between three populations of the ladybird Harmonia axyridis (Coleoptera: Coccinellidae) //Heredity. 1998. V.81. P.683-691.

138. Mallawia L.P. Genetics of Rickettsia / In "Rickettsia and Rickettsial diseases" (Kazar J. and Raoult D., eds.). Bratislava. 1991.p.l49-159.

139. Malogolovkin C. and Poulson D.F. Infective transfer of maternally inherited "sex ratio" in Drosophila pauliostorum II Science. 1957. V.126. P.32.

140. Malogolovkin C. Maternally inherited "sex ratio" condition in Drosohpila willistoni and Drosophila paulistorum II Genetics. 1958. V.43. P.274-286.

141. Malogolovkin C. Temperature effects on maternally inherited abnormal sex ratio in Drosophila willistoni and Drosophila equinoxalis II Am. Nat. 1959.V.93.P.365-368.

142. Malogolovkin C., Poulson D.F. and Wright E.J. Experimentl transfer of maternally inherited abnormal sex ratio in Drosophila willistoni II Genetics. 1959. V.44. P.59-74.

143. Malogolovkin C., Carvalho G.G. and da Paz M.C. Interspecific transfer of the 'sex-ratio' condition in Drosophila II Genetics. 1960. V.45. P.1553-1557.

144. Malogolovkin C., Carvalho G.G. Direct and indirect transfer of the "sex-ratio" condition in different species of Drosophila II Genetics. 1961. Y.46. P.1009-1013.

145. Malogolowkin-Cohen C., Rodrigues-Pereira M.A.Q. Sexual drive of normal and SR flies of Drosophila nebulosa // Evolution. 1975. V.29. P.579-580.

146. Matsuka M., Hashi H., Okada I. Abnormal sex-ratio found in the lady beetle, Harmonia axyridis Pallas (Coleoptera: Coccinellidae) // Appl. Ent. Zool. 1975. Y.10. №.2. P.84-89.

147. McCoy R.E., Caudwell A., Chang CJ. et al. Plant diseases associated with mycoplasma-like organisms / In "The Mycoplasmas" (Whitcomb R.F. and Tully J.C. eds.) Academic Press. San Diego. 1989. V.5. P.545-640.

148. McGarrity G.J. and Williamson D.L. Spiroplasma pathogenicity in vivo and in vitro / In "The Mycoplasmas" (Whitcomb R.F. and Tully J.C. eds.) Academic Press. San Diego. 1989. V.5. P.365-392.

149. Megraud F., Gamon L., Sarama J. Characterization of Spiroplasma mirum in the cell cultures // Yale J.Biol.Med.l983.V.56. P.900.

150. Moran N. and Baumann P. Phylogenetics of cytoplasmically inherited microorganisms of arthropods // TREE. 1994. V.9. №1. P. 15-20.

151. Moran N.A., Munson M.A., Baumann P.D. and Ishikawa H. A molecular clock in endosymbiotic bacteria is calibrated using the insect hosts // Proc. R. Soc. Lond. B. 1993. V.253. P.167-171.

152. Moriwaki D. and Kitagawa O. Female producing female of Drosophila bifasciata found in Japan // Dros. Info. Serv. 1954. V.28. P.137-138.

153. Moriwaki D. and Kitagawa O. 'Sex-Ratio-J' in Drosophila bifasciata II Jap. J. Genet. 1957. V.32. P.208-210.

154. Mouches C., Candresse T., McCarrity G.J. et al. Analysis of spiroplasma proteins: contribution to the taxonomy of group IV spiroplasmas and the characterization of spiroplasma protein antigens // Yale J. Biol. Med. 1983. V.56. P.431-437.

155. Myamoto C., Oishi K. Effects of SR-spirochete infection on Drosophila melanogaster carrying intersex genes // Genetics. 1975. V.79. P.55-61.

156. Nakata T. Population fluctuations of aphids and their natural enemies on potato in Hokkaido, Japan // Appl. Entomol. Zool. 1995. V.30. №1. P.129-138.

157. Nalepa C.A., Kidd K.A. and Ahlstrom K.R. Biology of Harmonia axiridis (Coleoptera: Coccinellidae) in winter aggregations // Ann. Entomol. Soc. Am. 1996. V.89. P. 681-685.

158. Neimark H.C. Extraction of an actin-like protein from the prokaryote Mycoplasma pneumoniae II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977. V.74. P.4041-4045.

159. Niijima K. and Nakajima K. Abnormal sex ratio in Menochilius sexmaculatus (Fabricius) // Bull. Fac. Agric. Tamagawa Univ. 1981. V.21. P.59-67.

160. Niki Y. Ultrastructural study of the sex ratio organism (SRO) transmission into oocytes during oogenesis in Drosophila melanogaster II Jpn. J. Genet. 1988. V.63. P.11-21.

161. Nusslein-Volhard C., Wieschaus E. Mutations affecting segment number and polarity in Drosophila//Nature. 1980. V.287. P.795-801.

162. Nusslein-Volhard C.,Frohnhofer H.G., Lehmann R. Determination of anteroposterior polarity in Drosophila embryo // Science. 1987. V. 238. P. 1675-1681.

163. Nusslein-Volhard C. From egg to organism. Studies on embryonic pattern formation // JAMA. 1991. V.266. №13. P.1848-1849.

164. Nüsslein-Volhard C. Gradients that organize embryo development // Scientific American. 1996. V.275. №2. P.54-61.

165. Obata S. Mechanisms of prey finding in the aphidophagous ladybird beetle, Harmonía axyridis (Coleoptera: Coccinellidae) // Entomophaga. 1986. V. 31. P. 303-311.

166. Obata S. The influence of aphids on the behavior of adults of the ladybird beetle, Harmonía axyridis (Coleoptera: Coccinellidae) // Entomophaga. 1997. Y.42. №1-2. P. 103-106.

167. Obrycki JJ. Kring TJ. Predaceous coccinellidae in biological control // Ann. Rev. Entomol. 1998. V. 43. P. 295-321.

168. Oishi K., Poulson D.F. A virus associated with SR-spirochetes of Drosophila nebulosa II Proc. Natl. Ac. Sci. USA. 1970. V.67. P. 1565-1572.

169. Oishi K., Poulson D.F. and Williamson D.L. Virus-mediated change in clumping properties of Drosophila SR spiroplasmas // Current Microbiology. 1984. V.10. P.153-158.

170. O'Neil S.L. Cytoplasmic symbionts in Tribolium confusum II J. Invert. Pathol. 1989.V.53.P. 132134.

171. O'Neil S.L., Giordano R., Colbert A.M. A. et al. 16S rRNA phylogenetic analysis of the bacterial endosymbionts associated with cytoplasmic incompatibility in insects // Proc. Natl. Ac. Sci. USA. 1992. V.89. P.2699-2702.

172. O'Neil S.L. and Karr T.L. Bidirectional imcompatibility between conspecific populations of Drosophila simulans II Nature. 1990. V.348. P.178-180.

173. O'Neil S.L., Hoffmann A.A., Werren J.H., eds. Influential passengers. Inherited microorganisms and arthropod reproduction. Oxford: University Press. 1997. 214 p.

174. Ongagna P.P., Iperti G. Influence de la temperature et de la photoperiode chez Harmonía axiridis Pallas (Col., Coccinellidae): obtention d'adultes rapidement feconds ou en dormance // J. Appl. Ent. 1994. V.117.P.314-317.

175. Ongagna P., Giuge L., Iperti G., Ferran A. Life cycle of Harmonía axiridis (Coleoptera; Coccinellidae) in its area of introduction south-eastern France // Entomophaga. 1993. V. 38. №1. P. 125-128.

176. Osawa N. Sibling and non-sibling cannibalism by larvae of a lady beetle Harmonía axiridis Pallas (Coleoptera; Coccinellidae) in the field // Res. Popul. Ecol. 1989. V.31. P. 153-160.

177. Osawa N. Sibling cannibalism in the ladybird beetle Harmonía axiridis: fitness consequences for mother and offspring // Res. Popul. Ecol. 1992. V.34. P.45-55.

178. Osawa N. Population field studies of the aphidophagous lady beetle Harmonia axiridis Pallas (Coleoptera; Coccinellidae): life tables and key factor analysis // Res. Popul. Ecol. 1993. V. 35. P. 335-348.

179. Osawa N., Nishida T. Seasonal variation in elytral color polymorphism in Harmonia axiridis (the ladybird beetle) the role of nonrandom mating // Heredity. 1992. V.69. P.297-307.

180. Ota T., Kawabe M., Oishi K. and Poulson D.F. Non male-killing spiroplasmas in Drosophila hydei II J. Hered. 1979.V.70.P.211-213

181. Palmer A.R., Strobeck C. Fluctuating asymmetry: measurement, analysis, patterns // Annu. Rev. Ecol. Syst. 1986. V. 17. P. 391-421.

182. Phillips R.N. and Humphery-Smith I. The histipathology of the experimentally induced infections of Spiroplasma taiwanense (class: Mollicutes) in Anopheles stephensi mosquitoes // J. Invertebr. Pathol. 1995. V.66. P.185-195.

183. Poulson D.F. and Sakaguchi B. Hereditary infection in Drosophila II Genetics. 1961.V.46.P.890-891.

184. Poulson D.F. and Sakaguchi B. Nature of the sex ratio agent in Drosophila II Science. 1961. V.133.P. 1489-1490.

185. Poulson D.F. Further case of maternal SR in Drosophila species // Dros. Info. Serv. 1966.V.41 .P.77

186. Prout T. and Bungaard J. The population genetics of sperm displacement // Genetics. 1977. V.85. P. 95-124.

187. Ranhand J.M., Mitchell W.O., Popkin T.J. and Cole K.M. Covalently closed circular deoxyribonucleic acids in spiroplasmas // J.Bacteriol.l980.V.143.P.l 194-1199.

188. Rasmussen I.E. Ovary transplantation in "sex-ratio" stock of D. bifasciata // Dros. Info. Serv. 1956. V.30. P.148.

189. Razin S. Characterisation of the Mycoplasma genom // Int.J.Biol.Med. 1983. V.56. P.357-366.

190. Razin S. and Freundt E.A. The mycoplasmas / In "Bergey's manual of systematic bacteriology" (KriegN.R. and Holt J.G. eds.) Baltimore. 1984. Y.l. P.740-793.

191. Razin S. Molecular biology and genetics of mycoplasmas (Mollicutes) II Microbiol.Rev. 1985. Y.49. №4. P.419-455.

192. Razin S. Molecular approach to mycoplasma phylogeny / In "The mycoplasmas" (Whitcomb R.F. and Tully J.G. eds.) Academic Press. San Diego. 1989. V.5. P.33-69.

193. Reynolds E.S. The use of lead citrate at high pH as an electronopaque stain in electron microscopy // Journal of Cell Biology. 1963. V. 17. P. 208-212.

194. Rigaud T. and Juchault P. Genetic control of the vertical transmission of a cytoplasmic factor in Armadillidium vulgare Latr. (Crustacea, Oniscidea) // Heredity. 1992. V.68. P.47-52.

195. Rigaud T. and Juchault P. Conflict between femenizing sex ratio distorters and an autosomal masculinizing gene in the terrestrial isopod Armadillidium vulgare Latr // Genetics. 1993. V.133. P.247-252.

196. Saglio P., L'Hospital M., Lafleche D. et al. Spiroplasma citri gen. And sp. N. A mycoplasma-like organism associated with "stubborn" disease of citrus // Int. J. Syst. Bacterid. 1973. V.23. P.191-204.

197. Sakaguchi B. and Poulson D.F. Transfer of the sex ratio condition from Drosophila willistoni to Drosophila melanogaster II Anatomical Record. 1960. V.138. P.381.

198. Sakaguchi B. and Poulson D.F. Distribution of "sex ratio" agent in tissues of Drosophila willistoni I I Genetics. 1961. V.46. P. 1665-1676.

199. Sakaguchi B. and Poulson D.F. Interspecific transfer of the "sex ratio" from Drosophila willistoni to D. melanogaster II Genetics.l963.V.48.P.841-861.

200. Sakaguchi B. and Oishi K. Nature of the substance produced by nebulosa-SR agent that kills willistoni-SR agent in Drosophila II Annual report of National institute of genetics №15. 1965. P.38-39.

201. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R DNA sequencing with chain-terminating inhibitors // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977. V.74. P.5463-5467.

202. Scott M.P., Carroll S.B. The segmentation and homeotic gene network in early Drosophila development // Cell. 1987. V. 51. P. 689-698.

203. Shull A.F. An all-female strain of lady beetles with reversion to normal sex ratio // Am. Nat. 1948. V.82. P.241-251.

204. Sturtevant A.H. and Dobzhansky Th. Geographical distribution and cytology of "sex ratio" in Drosophila pseudoobscura and related species // Genetics. 1936. V.21. P.473-490.

205. Tan C.C. and Li J.C. Inheritance of the elytral color patterns of the lady-bird beetle, Harmonia axyridis Pallas // Amer. Nat. 1934. V.68. P. 252-265.

206. Tan C.C. Mosaic dominance in the inheritance of color patterns in the lady-bird beetle, Harmonia axyridis II Genetics. 1946. V.31. P. 195-209.

207. Tan C.C. Seasonal variations of color patterns in Harmonia axyridis II Proc.8th Intern. Congr. Genet. 1949. P.669-670.

208. Townsend R., Plaskitt K.A., Daniel M.J. and Markham P.J. Isolation and caracterisation of a non-helical strain of Spiroplasma citri II J. Gen. Microbiol. 1977. V.100.P.15-21.

209. Townsend R, Burgess J. and Plaskitt K.A. Morphology and ultrastructure of helical and non-helical strain of Spiroplasma citri II J. Bacterid. 1980. V.142. P.973-981.

210. Townsend R. Spiroplasma fibrils // Yale J.Biol.Med. 1983. V.56. P.447-452.

211. Trouve C., Ledee S., Ferran A., Brun J. Biological control of the damson-hop aphid, Phorodon humuli (Horn.: Aphididae), using the ladybeetle Harmonia axyridis (Col.: Coccinellidae) // Entomophaga. 1997. V. 42. №1/2. P. 57-62.

212. Tsuchiyma S., Sakaguchi B., Oishi K. Analysis of gynandromorph survivals in Drosophila melanogaster infected with the male killing SR organisms // Genetics. 1978. V.89. P.711-721.

213. Tsuchiyama-Omura S., Sakaguchi B., Koga K. and Poulson D.F. Morphological features of embryogenesis in Drosophila melanogaster infected with a male killing spiroplasma // Zool. Sci. 1988. №5. P.375-383.

214. Tully J.G., Whitcomb R.F., Clark H.F., Williamson D.L. Pathogenic mycoplasmas: Cultivation and vertebrate pathogenicity of a new spiroplasma // Science. 1977. V.195. P.892-894.

215. Tully G.J., Whitcomb R.F., Rose D.L. et al. Characterisation and taxonomic status of tick spiroplasmas: a review // Yale J. Biol. Med. 1983. V.56. P.599-603.

216. Tully J.G., Rose D.L., Clark E.A. et al. Revised group classification of the genus Spiroplasma (class Mollicutes) with proposed new groups XII to XXIII // Int.J.Sys.Bacter.l987.V.37.P.357-364.

217. Tully J.G. Class Mollicutes: new perspectives from plant and arthropod studies / In "The Mycoplasmas" (Whitcomb R.F. and Tully J.C. eds.) Academic Press. San Diego. 1989. V.5. P.l-31.

218. Tully J.G., Rose D.L., Yunker C.E. et al. Spiroplasma ixodetis sp.nov., a new species from Ixodes pacificus ticks collected in Oregon // Int.J.Syst.Bacter.1995. V.45. P.23-28.

219. Ueno H. Fluctuating asymmetry in relation to two fitness components, adult longevity and male mating success in a ladybird beetle, Harmonia axyridis (Coleoptera, Coccinellidae) // Ecological Entomology. 1994. V.19., №1. P.87-88.

220. Ueno H. Genetic estimations for body size characters, development period and development rate in a coccinelid beetle, Harmonia axiridis II Res. Popul. Ecol. 1994. V.36. P. 121-124.

221. Ueno H. Estimate of multiple insemination in a natural population of Harmonia axiridis (Coleoptera: Coccinellidae) // Appl. Entomol. Zool. 1996. V.31. №4. P. 621-623.

222. Watanabe T.K. A new sex transforming gene in the second chromosome of Drosophila melanogaster II Jpn. J. Genet. 1975. V.50. P.269-271.

223. Weisburg W.G., TullyJ.G., Rose D.L. et al. A phylogenetic analysis of the Micoplasmas: basis for their classification // J. Bacteriol. 1989. V.171. P.6455-6467.

224. Weisburg W.G., Barnes S.M., Pelletier D.A. and Lane D J. 16S ribosomal DNA amplification for phylogenetic study//J. Bacteriol. 1991. V.173. P.697-703.

225. Werren J.H., Hurst G.D.D., Zhang W. et al. Rickettsial relative associated with male killing in the ladybird beetle (Adalia bipunctata) // J. Bacteriol.l994.V.176.P.388-394.

226. Whitcomb R.F. The biology of spiroplasmas // Ann. Rev. Entomol. 1981. V.26. P.397-425.

227. Whitcomb R.F., Clark T.B., Tully J.G. et al. Serological classification of spiroplasmas: current status // Yale J.Biol.Med.l983.V.56.P.453-459.

228. Whitcomb R.F., Bove J.M., Chen T.A. et al. Proposed criteria for an interim serogroup classification for members of the genus Spiroplasma (class Mollicutes) // Int. J. Syst. Bacteriol. 1987. V.37. P.82-84.

229. Whitcomb R.F. Spiroplasma kunkelir. biology and ecology / In "The Mycoplasmas" (Whitcomb R.F. and Tully J.C. eds.) Academic Press. San Diego. 1989. V.5. P.487-544.

230. Whitcomb R.F., Tully J.G., Rose D.L. et al. Spiroplasma monobiae sp. nov. from the vespid wasp Monobiae quadridens (Hymenoptera: Vespidae) // Int. J. Syst. Bacteriol. 1993.V.43.P.256-260.

231. Williamson D.L. Atypical transovarial transmission of sex ratio spirochetes by Drosophila robusta Sturtevant // J. Exp. Zool. 1966. V.161. P.425-430.

232. Williamson D.L., Whitcomb R.F. Helical wall-free prokaryotes in Drosophila, leafhoppers and plants // Coloq. Inst. Natl. Sante Rech. Med. 1974. V.33. P. 283-290.

233. Williamson D.L., Whitcomb R.F. Plant mycoplasmas: a cultivable spiroplasma causes corn stunt disease // Science. 1975. V.188. P.1018-1020.

234. Williamson D.L., Adams J.R., Whitcomb R.F. et al. Spiroplasma platyhelix sp. nov., a new Mollicute with unusual morphology and genome size from dragonfly Pachydiplax longipennis II Int. J. Syst. Bacterid. 1997. V.47. P.763-766

235. Williamson D.L. and Poulson D.F. Sex ratio organisms (spiroplasmas) of Drosophila / In "The Mycoplasmas" (Barile M.F. and Razin S. eds.) New York. Academic Press. 1979. V.3. P.175-208.

236. Williamson D.L., Hackett K.J., Wagner A.G. et al. Pathogenicity of cultivated Drosophila willistoni spiroplasmas // Curr. Microbiol. 1989. V.19. P.53-56.

237. Williamson D.L., Tully J.G. and Whitcomb R.F. The genus Spiroplasma / In "The Mycoplasmas" (Whitcomb R.F. and Tully J.G. eds.) Academic Press. San Diego. 1989. V.5. P.71-111.

238. Williamson D.L., Adams J.R., Whitcomb R.F. et al. Spiroplasma platyhelix sp. Nov., a new mollicute with unusual morphology and genome size from the dragonfly Pachydiplax longipennis II Int. J. Syst. Bacteriol. 1997. V.47. P.763-766.

239. Williamson D.L., Whitcomb R.F., Tully J.G. et al. Revised group classification of the genus Spiroplasma II Int. J. Syst. Bacteriol. 1998. V.48. P.l-12.

240. Woese C.R., Maniloff J., Zahlen L.B. Phylogenetic analysis of the mycoplasmas // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1980. V.77. P.494-498.

241. Yamada M-A., Nawa S., Watanable T.K. A mutant of SR organism (SRO) in Drosophila that does not kill the host males // Jpn. J. Genet. 1982. V.57. P.301-305.

242. Ye F., Laigret F., Whitley J.C. et al. A physical and genetic map of the Spiroplasma citri genome //Nucleic Acids Res. 1992. V.20. №7. P.1559-1565.

243. Ye F., Laigret F. and Bove J.M. A physical map of the procaryote Spiroplasma melliferum and its comparison with the Spiroplasma citri map // C.R. Acad. Sei. 1994. V.317. P.392-398.

244. Yoshii Z., Konishi H. Electron microscopy of spiroplasma (SMCA) // Yale J.Biol.Med. 1983.V.56. P.902-903.

245. Zalocar M. Fixation oiDrosophila eggs without pricking // Dros. Inf. Serv. 1971. V. 47. P. 128129.

246. Zalocar M. and Erk I. Phase-partition and staining of Drosophila eggs // Stan Technology. 1977. V.52. №2. P.89-95.

247. Zissler D. and Sander K. The cytoplasmic architecture of the egg cell of Smittia spec. (Diptera, Chironomidae). II. Periplasm and yolk-endoplasm // Wilhelm Roux's Arch. V.183. P.233-248.

Информация о работе

Зинкевич, Наталья Сергеевна
кандидата биологических наук
Москва, 1999
ВАК 03.00.15

Диссертация

Наследуемая бессамцовость у двух видов кокцинеллид - Adalia bipunctata L. и Harmonia axyridis Pall - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы