Морфология органов иммуногенеза нерпы байкальской и экспериментальная оценка эффективности ее липидов при разных патологиях

Ламажапова, Галина Петровна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Морфология органов иммуногенеза нерпы байкальской и экспериментальная оценка эффективности ее липидов при разных патологиях
ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Морфология органов иммуногенеза нерпы байкальской и экспериментальная оценка эффективности ее липидов при разных патологиях"

На правах рукописи

005001491 (!

Ламажапова Галина Петровна

МОРФОЛОГИЯ ОРГАНОВ ИММУНОГЕНЕЗА НЕРПЫ БАЙКАЛЬСКОЙ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЕЕ ЛИПИДОВ ПРИ РАЗНЫХ ПАТОЛОГИЯХ

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

1 о НОЯ 2011

Благовещенск - 2011

005001491

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления»

Научный консультант

доктор биологических наук, профессор Жамсаранова'Сэсэгма Дашиевна

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Кухаренко Наталья Степановна

доктор биологических наук, профессор Абидуева Елена Юрьевна

доктор биологических наук, профессор Рядинская Нина Ильинична

Ведущая организация ФГОУ ВПО «Иркутская

государственная сельскохозяйственная академия»

Защита диссертации состоится 15 декабря 2011 г. в Ю00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.027.02 при ФГОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет» в Институте ветеринарной медицины и зоотехнии в аудитории 2(a) 5 корпуса по адресу: 675005, г. Благовещенск, ул. Политехническая, 86. E-mail: ivmz_dalgau@mail.ru. Я G

J f

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет».

Автореферат диссертации опубликован на сайте ВАК РФ Ьйр//уак^^оу.ги. Автореферат разослан октября 2011 года

Ученый секретарь диссертационного совета ( " O.JI. Самусенко

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Уникальность экологической системы озера Байкал несомненна и признана мировым и российским обществом юридически. В 1996 г. озеро и непосредственно примыкающие к нему территории были включены в Список природных объектов Всемирного наследия ЮНЕСКО. В 1999 г. принят Закон Российской Федерации «Об охране озера Байкал». В связи с этим значительное внимание ученых и специалистов, работающих на Байкале в последние годы, уделено исследованию загрязнения озера Байкал, в том числе его биоты. По данным двух независимых групп исследователей (Японии и США, 19912000 гг.), байкальские воды можно отнести к чистым. Оказалось, что концентрации основных экотоксикантов в водах Байкала по порядку величин были такими же, как найденные в Северном Ледовитом океане, и сопоставимы с теми, которые были обнаружены в озерах Верхнее и Гурон из системы Великих озер Северной Америки (Грачев М.А., 2002).

Имеющиеся наблюдения по динамике численности живых организмов на протяжении длительного времени не выявили достоверных изменений населяющих Байкал популяций за время, прошедшее с начала промышленной революции. Можно предполагать, что эти популяции существенно не изменяются и не изменятся под действием химических антропогенных факторов и в ближайшие десятилетия. Регулярный мониторинг фито- и зоопланктона пока не дал информации, которая требовала бы принятия неотложных практических решений (Грачев М.А., 2002). Несмотря на это, никак нельзя рекомендовать его прекращение. Более того, по нашему мнению, необходимы расширение и углубление разработок и исследований по поиску более чувствительных и интегральных методов мониторинга экосистемы озера.

Уникальной особенностью пресноводной экосистемы Байкала является наличие в ней эндемичного байкальского тюленя - нерпы (Pusa (Phoca) sibirica Gmel), единственного млекопитающего и поэтому высшего звена пищевой цепи. В последние годы биология байкальской нерпы достаточно хорошо изучена, в особенности благодаря работам В.Д. Пастухова (1993) и его учеников (Петров Е.А., 1997; 1998 и др.). Численность нерпы, определенная по методике В.Д. Пастухова ~(1993) в модификации Е.А. Петрова (1998), после 1972 г. варьирует в пределах от 70 до 140 тыс. особей.

Большое внимание общественности к благополучию популяции байкальской нерпы было привлечено осенью 1987 - зимой 1988 г., так как

в это время произошла массовая гибель этих животных. Возникли подозрения, что гибель нерпы вызвана поступившими в Байкал неизвестными ядовитыми веществами. Но применение методов молекулярной биологии позволило однозначно установить, что причиной массовой гибели послужил морбилливирус, аналогичный вирусу чумы плотоядных и родственный вирусу кори человеку.

В литературе иногда высказывается предположение, что байкальские тюлени в те годы были поражены морбилливирусами по причине ослабления их иммунитета из-за накопления высоких концентраций хлорорганических веществ (Nakata Sh. et al., 1997). Такое предположение имеет право на существование, поскольку известно, что хлорорганические вещества относятся к иммунотоксикантам, так как органами-мишенями являются органы иммунной системы. Однако убедительных доказательств взаимосвязи морбилливирусных эпизоотий с накоплением хлорорганических веществ в тканях животных до настоящего времени не получено.

В связи с этим состояние иммунной системы, ответственной за поддержание внутренней среды организма, является чувствительным показателем влияния химического и биологического загрязнения. В настоящее время иммунный статус байкальской нерпы остается практически не изученным. По-прежнему отсутствует четкая картина по морфологии и цитоархитектонике органов иммунной системы нерпы. Имеющиеся в литературе данные отрывочны и недостаточны для решения проблем охраны здоровья, сохранения и рационального использования данного вида тюленей.

Для сохранения биоразнообразия и биоравновесия экосистемы озера Байкал популяция байкальской нерпы поддерживается в определенных пределах путем санитарного отлова строго ограниченного количества животных - в пределах от 1-3 до 6 тыс. особей в год. Животное добывается с целью получения меха, а остальная часть (жир и внутренние органы) в лучшем случае направляется на зверофермы. Вместе с тем ткани байкальской нерпы (подкожное сало и печень) являются перспективными источниками биологически активных полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК). Исследования химического состава показали, что они содержат достаточное количество ю-6 и ш-3 ПНЖК в оптимальных соотношениях - 3,19:1 (в пече-ни) и 0,77 (в жире).

Исследованиями многих ученых (Антонов В.Ф., 1982; Vaugn D.M., 1994; Левачев М.М., 1999; Тутельян В.А., 1999; Погожева A.B., 2004; Wijendran V., Hayes К.С., 2004; Титов В.Н., 2005; Chaplin S., 2005;

Sampath H., Ntambi J.V., 2005; Шендеров Б.А., 2008 и др.) доказана роль ПНЖК в поддержании нормальной деятельности клеточных мембран как обязательных компонентов клетки, а также в оптимизации мембранных и других клеточных процессов и, соответственно, в развитии адаптационных реакций при различных патологических состояниях.

Создание супрамолекулярных наноразмерных систем, таких как липосом на основе липидов нерпы, содержащих ПНЖК, решает задачи целенаправленной доставки биологически активных соединений в патологические очаги организма. Наличие тропности и других свойств у липосомальных форм биологически активных веществ и лекарственных препаратов дает ряд преимуществ по сравнению с применением их в интактном виде, что изучено многими учеными (Торчилин В.П., 1982; Грегориадис Г., Аллисон Л., 1983; Марголис Л.Б., Бергельсон Л.Д., 1986; Zhang L. et al., 1997; Каплун А.П. с соавт., 1999; Ramadas М. et al., 2000; Манаенков О.В., 2006; Баллюзек Ф.В. с соавт., 2008; Селина О.Е. с соавт., 2008; Швец В.И. с соавт., 2008; Зайцев С.Ю., 2010; Сейфулла Р.Д., 2010 и др.). Эффективность воздействия липосом обусловлена возможностью их проникновения в ткани и клетки-мишени. Таким путем может быть обеспечена доставка не только полезных для организма липидов, из которых состоит липосомальная мембрана, но и других веществ, транспортируемых липосомами.

Значимость и необходимость исследований по данной теме подтверждается государственной поддержкой в следующих грантах и программах:

- «Исследование иммунного статуса байкальской нерпы в системе биомониторинга озера Байкал» (гранты по приоритетным направлениям науки для молодых ученых ВСГТУ, 2000, 2005);

«Получение гистоморфологических показателей органов иммунной системы байкальской нерпы» (Федеральные целевые программы «Государственная поддержка интеграции высшего образования и фундаментальной науки на 1997-2000 гг.», 1999 и «Интеграция науки и высшего образования России на 2002-2006 годы», 2003);

- «Разработать способы получения и использования вторичных источников местного сырья животного и растительного происхождения в качестве иммунопротекторов», 1996-2000, и «Разработка и исследование эффективности новых липосомальных форм биологически активных веществ», 2003-2005 (Региональная научно-техническая программа «Бурятия. Наука и техника»);

- «Проведение экспедиционных исследований эндемиков озера Байкал как биоиндикаторов его системы» (Федеральная целевая программа «Интеграция науки и высшего образования России на 20022006 годы», 2001);

- «Проведение экспедиционных исследований эндемиков озера Байкал» (Международный экспедиционный проект СО РАН, 2002);

- «Разработка рекомендаций по использованию нетрадиционных индикаторов в практике государственного экологического контроля и мониторинга окружающей среды на основе анализа влияния загрязнений озера Байкал на состояние особо ценных биологических компонентов экосистем» (Федеральная целевая программа «Экология и природные ресурсы России», подпрограмма «Охрана озера Байкал и Байкальской природной территории», 2003);

- «Выполнение разработки метода получения пролипосом, содержащих жир байкальской нерпы» (Федеральная целевая научно-техническая программа «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники» на 2002-2006 годы), 2005;

«Иммуноморфологические особенности организма при воздействии компонентов функционального питания», 2006-2007, и «Разработка наноформ биологически активных веществ природного происхождения», 2008-2010 (Аналитическая ведомственная целевая программа «Развитие научного потенциала высшей школы». Мероприятие 1).

Целью настоящей работы явилось исследование морфологии органов иммунной системы и лимфоидных структур кишечника байкальской нерпы, а также оценка эффективности липосом на основе липидов нерпы при различных патологиях.

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

1. Изучить гистоморфологические особенности структурной организации . органов иммунной системы (тимуса, селезенки, лимфатических узлов) и лимфоидной ткани, ассоциированной со стенками кишечника, байкальской нерпы.

2. Установить особенности развития органов иммуногенеза и лимфоидных структур кишечника байкальской нерпы в постнатальном онтогенезе.

3. Определить характер изменения иммуноморфологических реакций в лимфоидных структурах кишечника байкальской нерпы под

влиянием биогенных факторов среды (сапрофитной микрофлоры кишечника и паразитофауны желудочно-кишечного тракта);

4. Исследовать биологическую активность липосом из вторичного липидного сырья байкальской нерпы (покровного жира и жира печени), содержащего уникальное соотношение ш-6/со-З жирных кислот.

5. Исследовать фармакотерапевтическую эффективность (гепато-протеюгорное, ранозаживляющее и адаптогенное действия) липосо-мальных биологически активных средств на основе липидов нерпы.

6. Исследовать возможность использования липосом на основе ПНЖК жира нерпы для повышения эффективности биологически активных средств (пептидного биорегулятора и растительных средств, обладающих противовоспалительным, ранозаживляющим и адапто-генным действиями). *

Научная новизна работы.

Впервые исследованы морфология и цитоархитектоника тимуса, селезенки, брыжеечных лимфатических узлов, а также структурных элементов диффузной лимфоидной ткани, ассоциированной со стенками пищеварительного тракта байкальской нерпы (Риза ¡Шпса йте!.). Впервые раскрыты особенности строения, возрастные и поло-вые различия органов иммунопоэза байкальской нерпы. Изучены изменения в лимфоидных структурах пищеварительного тракта нерпы, связанные с глистной инвазией и влиянием сапрофитной микрофлоры.

Теоретически обоснована возможность использования ценного по оптимальному содержанию со-3 и со-6 жирных кислот вторичного липидного сырья (покровного жира и жира печени) байкальской нерпы при создании супрамолекулярных наноразмерных систем. Способы получения липосом, содержащих биологически активные липиды байкальской нерпы, защищены патентами РФ. В модельных экспериментах по - воспроизведению различных патологических состояний выявлены биологическая активность и фармако-терапевтическая эффективность разработанных липосомальных средств. Установлена иммуномодулирующая, мембраностабилизирующая, антиоксидантная, гиполипидемическая и противовоспалительная активность липосом на основе липидов нерпы. Выявлено, что липосомальное средство, содержащее липиды нерпы, обладает адаптогенным, гепатопротекторным и ранозаживляющим действиями.

Показано, что применение биологически активных средств в липосомальных структурах, содержащих эссенциальные со-3 и со-6 жирны? кислоты в оптимальном соотношении, способствует усилению

фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности исследуемых средств.

Практическая значимость работы.

Результаты проведенных исследований содержат сведения по морфологии и клеточному составу некоторых органов иммунной системы уникального пресноводного млекопитающего - байкальской нерпы - и могут быть рекомендованы для оценки состояния популяции этого животного в системе биомониторинга экосистемы озера Байкал Оперативная оценка состояния иммунных органов нерпы позволит разработать меры по сохранению биоразнообразия озера.

^ Разработаны липосомальные средства с добавлением жира байкальской нерпы, а также липосомальное ранозаживляющее средство на основе липидов нерпы. Результаты проведенных исследований являются экспериментальным обоснованием дальнейших работ по конструированию лечебно-профилактических средств нового поколения на основе нанокапсул из вторичных природных липидов и получения липосомальных форм лекарственных средств с использованием триацилглицеролов, содержащих оптимальное соотношение ш-б/со-З жирных кислот.

Результаты исследований могут быть использованы:

- при написании разделов справочной и учебной литературы по видовой и возрастной сравнительной морфологии и лимфологии;

- в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по анатомии и гистологии животных на биологических, охотоведческих и ветеринарных факультетах высших учебных заведений.

Теоретические и прикладные результаты работы применяются при чтении курса лекций и проведении лабораторно-практических занятий в Восточно-Сибирском государственном университете технологий и управления, изложены в методических указаниях для студентов специальностей «Технология мяса и мясных продуктов» и «Биотехнология», в 2 монографиях, а также в выпускных квалификационных и научно-исследовательских работах студентов. Материалы диссертации приняты к внедрению в Уральской государственной академии ветеринарной медицины, Башкирском государственном аграрном университете, Алтайском государственном аграрном университете, Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Особенности морфологии и цитоархитектоники органов иммунной системы и лимфоидных структур кишечника байкальской нерпы.

2. Онтогенетические особенности структурной организации органов иммуногенеза байкальской нерпы.

3. Иммуноморфологические изменения в лимфоидных структурах пищеварительной системы байкальской нерпы под влиянием биогенных факторов среды как чувствительный показатель состояния иммунной системы организма.

4. Высокая фармакологическая активность и выраженная фармакотерапевтическая эффективность липосомальных средств на основе липидов нерпы при различных патологиях в эксперименте.

5. Усиление биологической активности и повышение фармако-терапевтической эффективности биологически активных средств при включении в липосомальные структуры, полученные на основе жира нерпы, обусловленное действием эссенциальных ш-3 и со-6 жирных кислот и адресной доставкой в организм.

Апробация работы. Основные результаты работы докладывались, обсуждались и одобрены на международных и российских научных конференциях и симпозиумах: Международной конференции молодых ученых «От фундаментальной науки к новым технологиям. Химия и биотехнология БАВ, пищевых продуктов и добавок. Экологически безопасные технологии» (Тверь, 2001); Международной научной конференции «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий» (Саранск, 2001); Международной научной конференции «Научные основы сохранения водосборных бассейнов: междисциплинарные подходы к управлению природными ресурсам^» (Улан-Удэ, Улан-Батор, 2004); VIII Международном семинаре-презентации инновационных научно-технических проектов «Биотехнология - 2005» (Пущино, 2005); П Международной научно-технической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы технологии живых систем» (Владивосток, 2007); IV и VI Московских международных конгрессах «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2007, 2011); IX Международной конференции «Опто-, наноэлектроника, нанотехнологии и микросистемы» (Ульяновск, 2007); Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию проф. ИД. Спирюхова «Актуальные вопросы экологической, сравнительной, возрастной и экспериментальной морфологии» (Улан-Удэ, 2007); Всероссийской

конференции молодых^ ученых «Экология в современном мире: взгляд научной молодежи» (Улан-Удэ, 2007); III International Symposium in Chemistry «Chemistry and Food Safety-2008» (Ulaanbaatar, Mongolia, 2008); Международной научно-практической конференции «Биотехнология: Вода и пищевые продукты» (Москва, 2008); П1 Меж-дународной научной конференции «Traditional Medicine: a current Situation and Perspectives of Development» (Ulan-Ude, 2008); Erdos Forum on Development of International Traditional Medicine (Erdos, China, 2009); III Международной научно-технической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы технологии живых систем» (Владивосток, 2009); III Международной научно-практической конференции молодых ученых «Жас-Галым-2009» (Тараз, Казахстан, 2009); Международной школе-семинаре «Current Problems of Food Engineering and Biotechnology» (Ulan-Ude,

2009); International Conference on «Innovation in food and nutrition science» (Ulaanbaatar, Mongolia, 2010); I Всероссийской научно-практической конференции «Биотехнология в интересах экологии и экономики Сибири и Дальнего Востока» (Улан-Удэ, 2010); XI Международной конференции молодых ученых «Пищевые технологии и биотехнологии» (Казань,

2010); XIII Международной научно-технической конференции «Наукоемкие химические технологии - 2010» (Иваново, 2010); Международной научной конференции «Проблемы экологии: чтения памяти проф. М.М. Кожова» (Иркутск, 2010) и других (Иркутск, 1999; Элиста, 2000; Чита, 2000; Улан-Удэ, 2003, 2004; Москва, 2005; Оренбург, 2009).

Публикации. По материалам выполненных исследований опубликовано 66 работ, в том числе 11 статей, в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ, получено 3 патента РФ на изобретения, опубликованы 2 монографии.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 290 страницах, содержит 45 таблиц, 91 рисунок и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследований, главы собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений, списка литературы, включающего 348 источников, из них иностранных авторов -119.

В соответствии с поставленными задачами диссертационной работы были проведены исследования по схемам, представленным на рисунках 1 и 2.

Рис. 1. Схема исследования иммунного статуса байкальской нерпы и количество исследованных особей

Объем проведенных исследований

Вид проведенного исследования Исследовано животных (голов) in vivo Всего проведено исследований in vitro

1. 1.1 Мыши (250) 50

1.2 Крысы (90) -

1.3 - 100

2. 2.1 Мыши (200) 50

2.2 Крысы (80) -

2.3 - 100

2.4 Крысы (60) -

2.5 Крысы (30) -

3. 3.1 Крысы (50) -

3.2 Крысы (60) -

3.3 Крысы (30) -

4. 4.1 Мыши (250) 50

4.2 Мыши (250).. Крысы (90) 50

4.3 - 100

5. 5.1 Крысы (30) -

5.2 Крысы (30) -

Всего 1300 500

Рис. 2. Схема исследований по экспериментальной оценке эффективности липидов байкальской нерпы

и объем проведенных исследований

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Исследование иммунной системы байкальской нерпы

Исследования структурной организации и клеточного состава органов лимфопоэза байкальской нерпы проводились в Проблемной научно-исследовательской лаборатории Восточно-Сибирского государственного технологического университета и лаборатории функциональной анатомии Научно-исследовательского института морфологии человека РАМН (г. Москва).

Отбор материала производился от особей байкальской нерпы в ходе комплексных научных экспедиций, приуроченных к промысловой добыче байкальской нерпы, в период с 2000 по 2009 г. Отлов животных производился 2 раза в год (весенний и осенний периоды) в районе Среднего Байкала.

В соответствии с возрастной периодизацией, предложенной Е.А. Петровым (2003), были выделены следующие возрастные группы особей байкальской нерпы: 1) особи в возрасте 1 мес., 2) особи в возрасте до I года, 3) особи в возрасте от 2 до 4 лет, 4) особи в возрасте от 4 до 12 лет, 5) особи в возрасте от 13 до 19 лет.

Определение возраста животных проводили по роговым валикам на когтях по методу, предложенному К.К. Чапским (1941) и по годовым слоям в тканях зубов (Клевезаль Г.А., Клейненберг С.Е., 1967).У каждой особи для исследований отбирались тимус, селезенка, брыжеечные лимфатические узлы, принимающие лимфу от тонкого кишечника, участки подвздошной кишки с групповыми лимфоидными узелками и участки прямой кишки.

Для исследований использовали материал только от тех особей байкальской нерпы, которые не имели внешних признаков заболеваний и патологических изменений внутренних органов.

Кусочки органов (объемом 1-2 см3) фиксировали в 10%-ном водном растворе нейтрального формалина и, после стандартной спиртовой проводки, заливали в парафин. Гистологические срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван Гизону (для морфологической оценки препарата и изучения площадей структурных компонентов). Подсчет клеток проводили на срезах, окрашенных азур-П-эозином. Метод окрашивания клеток метиловым зеленым пиронином по Браше, позволяющий выявить клеточные формы, богатые нуклеиновыми кислотами, использовался для более точной дифференцировки бластных форм лимфоцитов, а также для

определения степени" зрелости и функ-циональной активности плазматических клеток.

Изучение микротопографии лимфоидных- органов проводили при помощи бинокулярной лупы МБИ-1 (увеличение: ок. х12.5; об. х4.0) методом точечного счета (Глаголева A.A., 1941) в модификации С.Б. Сте-фанова (1974), позволяющим в относительных величинах определить площади, занимаемые структурными компонентами органа (в % от общей площади среза). Для измерения применяли стандартную сетку с шагом 1 мм.

При изучении цитоконструкции структурно-функциональных компонентов органов иммунной системы животного подсчет клеток проводили при помощи микроскопа МБИ-3 при увеличении объектива -х90 под масляной иммерсией по методу С.Б. Стефанова (1974) с использованием 25-узловой морфометрической сетки с шагом 10 мкм, вмонтированной в окуляр (хЮ) микроскопа. Подсчитывали следующие виды клеток: бластные формы, большие, средние и малые лимфоциты, клетки с картинами митоза, незрелые и зрелые плазматические клетки, нейтрофильные и эозинофильные лейкоциты, эпителио-ретикулоциты, макрофаги, деструктивно измененные клетки. Подсчет клеток проводили на условной единице площади гистологического среза (880 мкм2). Полученный цифровой материал подвергали компьютерной статистической обработке по программе Statistika 6.0 и Excel.

2.2. Получение и исследование эффективности липосом на основелипидов нерпы

Материалом исследований служили: липосомы из яичных фосфолипидов; липосомы из фосфолипидов печени нерпы; липосомы из яичных фосфолипидов, загруженные активной фракцией тимуса, отваром противовоспалительного фитосбора; липосомы из фосфолипидов печени нерпы, -загруженные водным раствором экстракта какалии копьевидной, водным раствором экстракта черных листьев бадана толстолистного. Все полученные липосомы содержали жир байкальской нерпы в концентрации 3 мг/мл и антиоксидант а-токо-ферола ацетат в концентрации 1% (по отношению к липидному компоненту), соответствующий требованиям ФС 42-2654-89-8.10. Жир нерпы получен согласно ТУ 9281-017-02069473-2001.

Экстракцию фосфолипидов из яичных желтков производили по классическому методу Фолча (Биохимия, 1989), из печени нерпы-по методу, предложенному М. Кейтсом (1975). Липосомальные структуры готовили по методу, предложенному A.D. Bangham et al.

(1964). Ультрамикроскопирование липосомапьных частиц производили с помощью электронного просвечивающего микроскопа JEOL JEM-2000 FXII. Количество малонового диальдегида (МДА) как конечного продукта перекисного окисления липидов (ПОЛ) в липосомах определяли методом пробы с 2-тиобарбитуровой кислотой (Сорокоумова Г.М., 2000).

Активную фракцию тимуса получали из вилочковой железы молодняка крупного рогатого скота модифицированным методом В .Я. Ариона (1982). Экстракты какалии копьевидной (ЭКК) (Патент РФ N»2206333), черных листьев бадана толстолистного (ЭБТ) (Лубсандоржиева П.-Н.Б., 2002), комплексный противовоспалительный фитосбор (Самбатова Э.И., 2001) получены в химико-фармацевтической лаборатории Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (ИОЭБ СО РАН). Отвар фитосбора готовили согласно требованиям ГФ XI.

Экспериментальные исследования проводились на: 1) половозрелых мышах обоего пола линии СВА и гибридах (СВАхС57В1/6) массой 20-22 г, полученных из питомника РАМН «Столбовая»; 2) белых беспородных крысах обоего пола массой 150-250 г, полученных из питомника филиала №5 ГНЦ «Институт биофизики федерального управления «Медбиоэкстрем» при Минздраве России г. Ангарск. Животные находились в стандартных условиях содержания в виварии на обычном рационе. Эксперименты осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г.).

Фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов (ПМ) мышей в отношении Staph, aureus в системе in vitro исследовали по методике И.С. Фрейдлин (1976). Макрофагальное звено иммунного ответа исследовали в реакциях Fc-розеткообразования и определения антигенпрезентирующей активности макрофагов (Имельбаева Э.А., 1996). Иммуномодулирующую активность липосомальных средств изучали в реакциях, опосредующих клеточный (в реакциях «Гиперчувствительность замедленного типа» - ГЗТ (Методические рекомендации, 1992) и «трансплантат против хозяина» - РТПХ (Тессенев В., 1979)) и гуморальный (в реакции антителообразования (Методические рекомендации, 1992)) иммунитет. Ростстимулирующую активность тимоцитов морской свинки оценивали в реакции «активного розеткообразования» с эритроцитами кролика (Nekam К. et al., 1982).

Для гистоморфологического исследования участки слепой кишки подопытных мышей и раневые участки крыс фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина, депарафинированные

гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван Гизону (Меркулов Г.А., 1969).

Изучение противовоспалительной активности исследуемых средств проводили на стандартных моделях асептического воспаления, «ватной гранулемы» согласно Методическим рекомендациям (1983) и формалинового отека лапок крыс (Тринус Ф.П., 1975). Также определение противовоспалительной активности проводили на двух моделях острого перитонита (Александров П.Н. с соавт., 1986; Методические рекомендации ..., 1989). Острый адреналиновый отек у мышей вызывали введением раствора адреналина гидрохлорида подкожно (Томчин А.Б. с соавт., 1997).

Оценку мембраностабилизирующей активности липосомальных средств осуществляли по выраженности степени гемолиза эритроцитов, вызываемого реактивом Фентона (перекисный гемолиз), и добавлением дистиллированной воды (осмотический гемолиз) (Ковалев И. Е. с соавт 1986).

Степень выраженности окислительных процессов в организме экспериментальных животных определяли по содержанию МДА в сыворотке крови (Клебанов Г.И. с соавт., 1988) и печени животных (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977) в модификации Е.А. Строева и В.Г. Макаровой (1986), а также уровня окисленного и восстановленного глутатионав сыворотке крови (Anderson М.Е., 1989).

С целью оценки состояния антиоксидантной системы у животных в сыворотке крови определяли активность глутатионпероксидазы (по методу F.H. Stults et al., 1977), глутатионредуктазы (по методу Е. Racker, 1955), каталазы (Королюк М.А. и др., 1988) и супероксиддисмутазы (Чевари С. и др., 1985).

Уровни содержания в крови животных липидов (общего холестерина, холестерина липопротеидов низкой и очень низкой плотности, холестерина липопротеидов высокой плотности, триглицеридов) определяли стандартизированными биохимическими методами с помощью наборов реагентов производства ЗАО «Вектор-Бест»: «Новохол», «ЛВП-Холестерин-Ново» и «Триглицериды-Ново».

Гепатопротекторное действие липосомальных средств было изучено на животных с токсическим гепатитом, который вызывали пероральным введением тетрахлорметана согласно методу А.Н. Олей-ника (1984). Желчь для исследования получали в условиях острых опытов по методике Н.П. Скакуна и А.Н. Олейника (1967). Оценку желчеобразовательной и желчевыделительной функции печени проводили по скорости секреции и общему количеству выделенной желчи, концентрации желчных кислот (Карбач Я.И., 1961), а концентра-

цию холестерина в желчи определяли по методу С.М. Дроговоз (1971), билирубина - по методу Ван ден Берга в модификации Н.П. Скакуна (1956).

Для воспроизведения раневых повреждений были использованы модели линейной, плоскостной кожно-мышечной кожной раны и модель химического ожога кожи (Клюев М.А., 1989; Пономарева-Астраханцева JI.3., 1954; Ойвин И.А., Шетель С.Л., 1961). Прочность образовавшегося рубца определяли методом тензиометрии (Коваленко И.В., 1984); проводили планиметрическое, цитологическое и гисто-логическое исследования раны (Шалимов С.А., 1989).

Реакции поверхностной иммунофлуоресценции выполняли на клетках, прикрепленных к стеклу с помощью поли-Ь-лизина (Иммунологические методы, 1987).

Об адаптогенных свойствах липосомальных средств судили по времени выносливости крыс в стандартном тесте плавания до полного утомления (Dawson С.A., Horvath S.M., 1970), по ориентировочно-исследовательскому поведению и суммарной двигательной активности животных в тестах «открытое поле» (Калуев A.B., 1998) и «Т-образный лабиринт» (Буреш Я, с соавт., 1991).

Для оценки влияния средств на состояние гематологических показателей у животных определяли концентрацию гемоглобина унифицированным гемоглобинцианидным методом (Пупочная В.И., 2003) с помощью набора реагентов «Диагем-Т» (НПО «РЕНАМ») и вычисляли лейкоцитарную формулу крови общепринятым методом (Меньшиков В.В. с соавт., 1987).

Полученные цифровые данные обрабатывали статистически с применением непараметрических (Вилкоксона-Манна-Уитни) (Гублер И.В., 1973) и параметрических (Стьюдента - с помощью компьютерной программы Jandel SigmaPlot32) критериев. Достоверными считались отличия с вероятностью р<0,05.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Особенности структурной организации органов иммуногенеза байкальской нерпы в постнатальном онтогенезе

Проведенные исследования по оценке микроанатомических и морфологических характеристик органов иммунной системы байкальской нерпы позволили выявить некоторые особенности их строения как на макро-, так и на микроанатомическом уровнях.

Так, тимус байкальской нерпы, в отличие от тимуса других млекопитающих, состоит не из двух, а из четырех долей. Две доли -грудные, расположены за грудиной и лежат на сердце. Две другие доли -шейные, охватывают трахею.

Микроанатомическое строение тимуса нерпы имеет типичный для млекопитающих вид. К видоспецифическим особенностям микроструктуры можно отнести наличие толстой фиброзной капсулы и интенсивное развитие в строме органа волокнистой соединительной ткани, что, по-видимому, объясняется особенностями биологии развития и среды обитания этого животного. Кроме того, по нашим данным, в мозговом веществе тимуса нерпы наблюдается высокое содержание гранулоцитарных лейкоцитов (нейтрофилов и эозинофилов) - более 2%.

Сравнительный морфометрический анализ показал, что в тимусе новорожденных и молодых нерп преобладает корковое вещество, тогда как у взрослых животных - мозговое. Поэтому кортико-медуллярный индекс, отражающий соотношение площадей коркового и мозгового вещества, с возрастом уменьшается (рис. 3).

новорожденные

молодые Группы животных

половозрелые

» корковое вещество а мозговое вещество -^кортако^едултарныйт^^]

Рис. 3. Относительная площадь (%) и кортико-медуллярный индекс структурных компонентов тимуса байкальской нерпы в различные возрасты

Исследования показали, что в тимусе половозрелых нерп возрастает доля соединительнотканных элементов и сосудистого русла. Площадь капсулы увеличивается в 1,6 раза, а площадь сосудов - в 3 раза по сравнению с молодыми животными. У взрослых нерп также увеличивается площадь, занимаемая на гистологических срезах

тимическими тельцами (в 1,8 раза). Причем, как показали исследования, происходит это не за счет увеличения их количества, а за счет их укрупнения и появления кистоподобных структур. Тем самым с возрастом у нерп появляются признаки возрастной инволюции.

Исследования морфологии и микротопографии селезенки байкальской нерпы показали, что орган имеет типичную для млекопитающих структурную организацию. Появление в селезенке молодых животных большего, чем у новорожденных, числа лимфоидных узелков с центрами размножения связано с созреванием лимфоидной ткани, усилением ее функциональной активности. Появление высокого содержания плазматических клеток, особенно зрелых (антителопродуцирующих) форм, указывает на резкое усиление гуморального иммунитета с возрастом. При этом слабая морфологическая выраженность зон накопления Т-клеток в . пери-артериальных лимфоидных муфтах (ПАЛМ) связана, очевидно, с компенсаторным усилением и преобладающей функцией гуморального иммунитета у этих животных, что объясняется, по-видимому, условиями обитания животных.

Выявлено, что у половозрелых животных, по сравнению с молодыми, четко выявляются признаки возрастной инволюции лимфоидной ткани и органа в целом: резко увеличивается содержание соединительной ткани в селезенке и склерозируются сосуды. В сравнении с молодыми у половозрелых нерп заметно увеличивается (на 14,8 клетки) плотность клеток в функционально активных лимфоидных узелках с центрами размножения (в центрах размножения и в мантии) (рис. 4), что в значительной степени связано с изменением в соотношении лимфоидных клеток в сторону общего снижения процесса лимфоцитопоэза.

У половозрелых нерп, по сравнению с молодыми, в лимфоидных структурах селезенки резко уменьшается количество (вдвое - в центрах размножения) или исчезают (в ПАЛМ и красной пульпе) малодифференцированные формы лимфоцитов. Исключение составляет красная пульпа, где отмечено усиление пролиферации клеток в 1,8 раза. К половозрелому возрасту, по сравнению с молодыми, отмечается тенденция в увеличении содержания зрелых форм лимфоцитов в белой пульпе. При этом у молодых и половозрелых животных практически не изменяется интенсивность процессов деструкции клеток, но несколько снижается макрофагальная активность клеток в центрах размножения и в мантии узелков.

центр размножения 100 -

новорожденные

молодые

взрослые

красная пульпа

Iiajim

лимф.узелок без центров размножения

мантия лимф.узелка

Рис. 4. Соотношение плотности распределения клеток на единице площади гистологического среза (880 мкм2) в структурных зонах селезенки нерп в различные возрастные периоды

Изучение структурной организации брыжеечных лимфатических узлов байкальской нерпы, принимающих лимфу от тонкого отдела кишечника, выявило следующие особенности: сильное развитие соединительной ткани; большая площадь, занимаемая лимфоидными узелками, высокое содержание среди них вторичных лимфоидных узелков; большая доля, занимаемая мозговым веществом; наличие широких межклеточных пространств.

Клеточный состав брыжеечных лимфатических узлов байкальской нерпы, принимающих лимфу от тонкого отдела кишечника, во всех возрастных группах характеризуется: наличием большого числа малодифференцированных форм клеток (лимфобластов и больших лимфоцитов) в центрах размножения лимфоидных узелков; исключительно высоким содержанием плазматических клеток; превышением количества плазмобластов над количеством плазмоцитов; превышением числа малых лимфоцитов над числом средних лимфоцитов почти во всех структурно-функциональных зонах; преобладанием средних и малых лимфоцитов в корковом веществе по сравнению с мозговым; высоким содержанием ретикулярных клеток; наличием небольшого числа эозинофилов; более высокой плотностью распределения клеток в корковом веществе по сравнению с мозговым веществом.

В постнатальном онтогенезе брыжеечные лимфатические узлы байкальской нерпы, принимающие лимфу от тонкого отдела кишечника,

претерпевают следующие возрастные изменения структурной организации: увеличение относительной площади

соединительнотканного компонента; уменьшение доли, занимаемой корковым веществом; уменьшение относительной площади лимфоидных узелков, в том числе вторичных лимфоидных узелков. Проявляется тенденция к возрастному снижению корково-мозгового индекса (рис. 5).

В брыжеечных лимфатических узлах байкальской нерпы, принимающих лимфу от тонкого кишечника, в процессе постнатального онтогенеза происходят: снижение числа средних лимфоцитов и ретикулярных клеток, увеличение числа плазматических клеток; уменьшение числа больших лимфоцитов, увеличение содержания малых лимфоцитов в корковом веществе; снижение числа деструктивно измененных и разрушенных клеток в центрах размножения лимфоидных узелков; уменьшение числа малых лимфоцитов в мозговом веществе.

1-месячные особи в особи в особи в особи в особи возрасте до возрасте 2-3 возрасте 4- возрасте 131 года лет 12 лет 19 лет

Возрастные группы байкальской нерпы

■Капсула и трабекулы ■Мозговое вещество

■Корковое вещество

Рис. 5. Динамика возрастных изменений относительной площади основных морфофункциональных зон брыжеечных лимфатических узлов, принимающих лимфу от тонкого кишечника байкальской нерпы

Состояние и закономерности развития лимфоидной ткани пищеварительной системы у нерп в значительной мере могут являться показателями особенностей питания и воздействия изменений среды обитания.

Исследованиями особенностей строения и развития лимфоидной ткани, ассоциированной со стенками тонкого кишечника, у байкальских нерп установлено, что лимфоидные бляшки располагаются по всей длине тонкой кишки, но большее их количество находится в подвздошной кишке. Групповые лимфоидные узелки у этих животных встречаются также и в начальном отделе толстого кишечника (по 2-3), что отличает их от других млекопитающих. Как показали наши наблюдения, у нерп в тонкой кишке в разные возрастные периоды выявлено различное количество лимфоидных бляшек. Колебания в количестве лимфоидных бляшек в течение жизни байкальской нерпы совпадают с таковыми у человека. Как и у людей, лимфоидные бляшки у нерпы начинают формироваться еще на стадии внутриутробного развития. Их количество в этом периоде, как и в старческом возрасте, наименьшее по сравнению с другими периодами жизни.

Макроскопически бляшки байкальской нерпы со стороны просвета кишки слабо возвышаются над уровнем слизистой оболочки и имеют гладкую поверхность в отличие от человека и грызунов. Специфичность микротопографии лимфоидных бляшек подвздошной кишки ■' нерпы проявляется в том, что все лимфоидные узелки имеют широкие центры размножения, вокруг которых отсутствует типичная мантийная зона. Отличительным признаком в морфологии лимфоидных бляшек у байкальских нерп является развитие плотного соединительно-тканного каркаса вокруг лимфоидных узелков, развитие которого, по мнению некоторых авторов, объясняется особенностями влияния температурного режима на их организм, в частности, холодных вод (Кондратьева И.А., 2001; 2002). Нами отмечено также слабое развитие межузелковой зоны в лимфоидных бляшках у молодых животных и появление типичной обширной межузелковой зоны только у взрослых нерп. Увеличение площади межузелковой зоны у половозрелых нерп свидетельствует, видимо, о развитии с возрастом Т-зависимой зоны, зоны локализации лимфоцитов, участвующих в регуляции клеточного иммунитета (Петров Р.В., 1976). Выявленные возрастные изменения в микротопографии лимфоидных бляшек у нерп соответствуют возрастным изменениям иммунных органов у некоторых экспериментальных животных (крыс, мышей, кролика) и человека (Сапин М.Р., 1987; Григоренко Д.Е., 2004).

Лимфоидная ткань в слизистой оболочке стенок прямой кишки нерпы различных возрастов, как и у других млекопитающих, представлена как одиночными лимфоидными узелками, находящимися в собственной пластинке, так и групповыми образованиями, расположенными в 2-3 слоя в подслизистой основе слизистой оболочки кишки и заходящими в собственную пластинку органа. Особенностью

слизистой оболочки прямой кишки нерп является присутствие в ней огромного количества глубоко расположенных крипт, среди которых встречаются ветвящиеся формы. В отличие от крипт прямой кишки человека, у нерпы крипты имеют разный диаметр, пронизывают скопления лимфоидной ткани и выстланы столбчатым (цилиндрическим) реснитчатым эпителием. В просвете крипт постоянно обнаруживаются конгломераты, состоящие из лимфоцитов и десквамированного эпителия.

В онтогенезе лимфоидная ткань прямой кишки нерпы претерпевает характерные для млекопитающих возрастные изменения, которые сводятся к разрастанию соединительной ткани и началу постепенного склерозирования лимфоидных узелков, что ведет к ослаблению функции клеточного воспроизводства. Деструктивные процессы в лимфоидных узелках (за исключением центральной зоны) с возрастом становятся менее выраженными, а в собственной пластинке слизистой оболочки сохраняются на прежнем уровне.

Таким образом, несмотря на эндемический характер байкальской фауны вообще и нерпы - в частности, проведенные исследования показали схожую закономерность структурной организации лимфоидных органов, присущую для человека и млекопитающих. В то же время выявлено, что морфологические и микроанатомические характеристики исследуемых органов байкальской нерпы имеют некоторые отличительные особенности. Видоспецифические признаки конструкции органов иммунопоэза и лимфоидных структур у нерпы объясняются, по-видимому, особыми условиями существования животного, к которым относятся постоянное воздействие низких температур и длительное пребывание организма глубоко под водой.

Выявленные возрастные изменения в строении органов лимфопоэза нерпы отвечают общим для всех млекопитающих закономерностям онтогенетического развития иммунной системы. Анализ возрастных изменений структуры и клеточного состава органов иммунной системы показал, что с возрастом у животных превалирует функция гуморального иммунитета, о чем свидетельствует наличие большого количества крупных, хорошо развитых лимфоидных узелков с центрами размножения во всех исследованных органах, а также резкое усиление плазматической реакции. Уменьшение площади, занимаемой паренхимой тимуса, периартериальными лимфоидными муфтами в селезенке и паракортикальной зоной в лимфатических узлах, характеризует снижение клеточного иммунитета нерп с увеличением их возраста.

3.2. Влияние биогенных экологических факторов

на морфофункциональное состояние лимфоидных органов байкальской нерпы

Известно, что развитие патогенной микрофлоры и заселение различных органов паразитами у млекопитающих приводит к изменению иммунного статуса животных (Соколова О.В., Денисенко Т.Е., 2004), которое выражается в структурной перестройке органов иммунной системы.

Были отобраны пробы брыжеечных лимфатических узлов от особей байкальской нерпы в возрасте до 1 года, в содержимом кишечника которых были обнаружены микроорганизмы-сапрофиты, являющиеся патогенными для белых мышей. Исследованные микроорганизмы относятся к грамотрицательным стафилококкам (Хандажапова Б.Б., 2005). Было отмечено, что у особей байкальской нерпы, в кишечнике которых присутствовали данные микроорганизмы, в брыжеечных лимфатических узлах происходило увеличение деструктивных изменений, усиление пролиферативных процессов с одновременным разрастанием соединительнотканных элементов и повышением антителообразующей активности.

По данным исследований сотрудников Лаборатории паразитологии ИОЭБ СО РАН, одним из распространенных паразитических гельминтов, поражающих позвоночных гидробионтов Байкала, является нематода СоМгасаесит оясиШит Ъшксйепь'м. Заселение прямой кишки нерпы нематодами приводило к нарушению целостности слизистой оболочки органа. В местах нахождения паразита в первую очередь поражался эпителий. Эпителиальные клетки набухали, вакуолизировались, и вследствие нарастания дистрофических процессов подвергались распаду и вместе с подлежащей тканью отслаивались, попадая в просвет органа. В этом месте оставался «оголенный» участок ткани в виде микроэрозии, покрытой толстым слоем слизи. В области дна крипт клетки эпителия растягивались настолько, что образовывали синцитий, который местами прерывался, и окружающая лимфоидная ткань оказывалась открытой для непосредственного контакта с внешней средой. В области эрозий, расположенных на поверхности слизистой оболочки кишки и в криптах, наблюдался более активный выход лимфоцитов в просвет кишки.

Инвазия нематодами в прямой кишке нерпы приводила к существенной перестройке соотношений клеток разных популяций. В лимфоидных узелках происходило уплотнение в распределении клеток на стандартной площади гистологического среза за счет увеличения числа малых лимфоцитов и стромальных клеток. В центральных зонах узелков

отмечалась слабая тенденция к активизации митотической активности клеток лимфоидного ряда. При мало меняющихся процессах разрушения клеток в составе всего узелка в нем отмечалось незначительное ослабление макрофагальной активности. В то же время отличительной особенностью собственной пластинки слизистой оболочки явилось значительное увеличение содержания макрофагов и практически удвоение количества эозинофилов, что осуществлялось на фоне снижения числа плазмоцитов и малых лимфоцитов. Плотность в распределении клеток в собственной пластинке слизистой оболочки уменьшалась. Все эти процессы являются отражением реакции организма животного на органические изменения в стенке кишки и токсическое воздействие паразита на морфологическом уровне.

Полученные данные свидетельствовали о напряженности иммунной системы обследуемых особей. Однако данная напряжённость является результатом нормального функционирования иммунной системы организма животных как ответ на предъявленные условия.

Таким образом, состояние иммунной системы байкальской нерпы, ответственной за адаптацию животного к изменяющимся внешним факторам и являющейся интегральным индикатором состояния всего организма Риза Б&тса, может быть использовано в системе биомониторинга Байкала, поскольку нерпа находится на вершине пищевой цепи экосистемы озера и является основным кумулятором экотоксикантов и объектом воздействия биогенных экологических факторов.

Результаты исследования морфофункциональных особенностей индивидуального развития и факторов, влияющих на защитные силы организма байкальской нерпы, легли в основу разработки научно-методических рекомендаций рационального использования вторичного липидного сырья, остающегося после добычи животного. С целью эффективной доставки биологически активных липидов нерпы в организм были разработаны способы получения липосомальных средств на их основе.

3.3. Биологическая активность липосом на основе вторичных липидов нерпы

Основной проблемой эффективного использования биологически активных липидов нерпы является разработка способов целенаправленной доставки их в органы- и клетки-мишени. Наличие тропности и других свойств у липосомальных форм биологически активных веществ и лекарственных препаратов дает ряд преимуществ по

сравнению с применением их в интактном виде, что изучено многими учеными. Таким путем может быть обеспечена не только доставка полезных для организма липидов, из которых состоит липосомальная мембрана, но и других веществ, транспортируемых липосомами

Свойства липосом как искусственных липидных мембранообразующих конструкций уникальны. Фосфолипиды мембраны липосом нетоксичны, после введения в организм вступают в обменные процессы и не накапливаются в организме. Следует отметить что существующие методы получения липосом позволяют легко заключать в фосфолипидные везикулы как гидрофильные, так и липофильные лекарственные препараты и биологически активные вещества Модифицируя модельные липидные мембраны фосфолипидами содержащими полиеновые жирные кислоты, можно добиться увеличения их биологической ценности и, следовательно, повышения эффективности липосомальной технологии (Грегориадис Г., 1983).

Жир байкальской нерпы как типичный представитель «морского» жира имеет триглицеридную структуру с высокой степенью ненасыщенности кислотных цепей, что обусловливает его высокую биологическую активность. Исследования химического состава жира нерпы, проведенные совместно с сотрудниками БИЛ СО РАН и учеными из Норвегии и Финляндии, выявили 60 жирных кислот, из которых на долю полиненасыщенных приходится 22-23% (в том числе наиболее важных - эйкозапентаеновой - 2,65%, - докозагексаеновой - 6 28%) Следует отметить, что соотношение жирных кислот семейства со-6/ш-З в жире нерпы составляет 0,77:1.

Нами был разработан способ получения липосомальных структур с добавлением в качестве функционального ингредиента жира байкальской нерпы. На способ получения липосом был получен Патент РФ на изобретение (№ 2153328). В качестве мембранообразующего компонента в липосомах первоначально были использованы фосфолипиды яичного желтка.

Создание и разработка оптимальных технологий липосомальных средств требуют следования многим требованиям по стандартизации и контролю их качества, в том числе определению размера частиц и оценке безопасности разрабатываемых средств.

Средний размер частиц в полученных липосомальных суспензиях вычисленный теоретически методом спектротурбидиметрии, составил' шо,5 нм. Расчетные данные были подтверждены электронной микроскопией (рис. 6).

Рис. 6. Электронная микрофотография суспензии с липосомами (указаны стрелками). Увел, х! 5000.

Как известно, жиры рыб и морских млекопитающих очень I нестойки при хранении в силу окислительных процессов, происходящих

, в жирных кислотах. Поэтому при разработке и хранении липидных

препаратов важно учитывать сохранность жиров. Одним из показателей окислительной порчи является определение конечного продукта свободнорадикального окисления - малонового диальдегида (МДА). Применение антиоксиданта а-токоферола ацетата в концентрации 1% в липосомах продлевало срок их хранения до 6 месяцев, о чем I свидетельствовало то, что интенсивное накопление МДА в липосомах

наблюдалось только с этого срока.

Липосомальное средство исследовали на санитарно-I микробиолоические показатели безопасности и качества по требованиям,

предъявляемым к пищевым продуктам на основе переработки животного сырья в соответствии с СанПиН 2.3.2.1078-01. Данные I бактериологического анализа липосомального средства при получении и

хранении при Т=4±2°С в течение 1, 3 и 6 месяцев хранения со дня изготовления показали, что рост числа тестируемых микроорганизмов в исследуемых образцах не превышал нормативных показателей.

Таким образом; нами установлено, что полученные липосомы можно отнести к бионанокапсулам, безопасным по микро-биологическим показателям.

3.3.1. Биологическая активность липосом с жиром нерпы

Наличие в составе жира нерпы со-3 и со-6 ПНЖК в оптимальном для организма соотношении предполагает наличие у липосом на его основе высокой биологической ценности.

В экспериментах на лабораторных животных была установлена выраженная иммунобиологическая активность липосом на основе жира нерпы в отношении макрофагального, клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа на фоне азатиоприновой иммуносупрессии. Это проявлялось в достоверном увеличении показателей активности леритонеальных макрофагов и интенсивности фагоцитоза в отношении Staphylococcus aureus, а также в повышении антигенпредставляющей и Fc-розеткообразующей активности (РОА) перитонеальных макрофагов; в увеличении показателя индекса реакции «Трансплантат против хозяина» (РТПХ); в повышении антителообразующей активности (АОА) спленоцитов мышей (рис. 7).

Гистоморфологическими исследованиями показано, что иммунокорригирующее действие липосом характеризовалось восстановлением морфологических структур в собственной пластинке слизистой оболочки и в лимфоидных образованиях в стенках слепой кишки мышей на фоне иммунной супрессии, вызванной азатиоприном.

Антигенпрезентирующая активность макрофагов

фагоцитоза

Рис. 7. Влияние липосом на основе жира нерпы на показатели различных звеньев иммунитета экспериментальных мышей

Известно, что любое повреждение тканей независимо от причины, вызвавшей его, сопровождается воспалительным процессом. В физиологических условиях воспалительная реакция является неотъемлемой частью защитных свойств организма и носит адаптивный характер (ТринусФ.П., 1975).

Развитие воспалительной реакции в пораженном месте протекает в несколько стадий. В экспериментах на крысах было установлено, что липосомальное средство с включением жира нерпы обладало выраженным противовоспалительным действием на всех стадиях процесса воспаления, проявляя антиульцерогенные свойства, антиэкссудативное действие и пролиферативную активность.

Кроме того, при воспроизведении моделей острого перитонита было выявлено, что применение липосом приводило к уменьшению отека в брюшной полости за счет стимулирования грануляции тучных клеток, а также снижения проницаемость сосудов перитонеальной полости.

В опыте по воспроизведению острого адреналинового отека легких у мышей была выявлена значительная противоотечная активность исследуемых липосом, что выражалось в увеличении продолжительности жизни животных и уменьшении легочного коэффициента.

Как известно, мембраны играют ключевую роль как в структурной организации, так и в функционировании всех клеток. В зависимости от жирнокислотного состава фосфолипидного бислоя мембран форменных элементов крови могут меняться деформируемость и пластичность эритроцитов и тромбоцитов. На текучесть мембран в значительной мере оказывает влияние степень ненасыщенности высших жирных кислот. Известно, что ш-З ПНЖК в значительно большей степени, чем ПНЖК ряда со-6, влияют на повышение текучести.

В экспериментах in vitro нами была установлена выраженная мембраностабилизирующая активность липосом, содержащих ПНЖК жира нерпы. Как показали исследования, липосомы оказывали протекторное действие на мембраны эритроцитов при их повреждении на моделях перекисного и осмотического гемолиза.

3.3.2. Биологическая активность липосом на основе липидов печени нерпы

С целью усиления фармакологических свойств липосом и более полного использования липидного сырья байкальской нерпы яичные фосфолипиды были заменены на фосфолипиды, выделенные из печени нерпы (Патент РФ №2308940). Преимуществом жира, содержащегося _

во внутренних органах, перед покровным, является наличие в нем фосфолипидов. Содержание фосфолипидов в печени нерпы составляет 4,7% от сухого остатка. Жирнокислотный состав липидов печени нерпы включает в себя более 25 ПНЖК, на их долю приходится 35,7% (в том числе эйкозапентаеновой - 0,44%, докозагексаеновой - 6,73%). При этом соотношение жирных кислот семейства со-6/со-З составляет 3,19:1, что позволяет отнести печень байкальской нерпы'к числу перспективных источников биологически активных веществ (Кабирова И.Р., 2005).

В проведенных экспериментах было выявлено, что включение в состав липосом липидов печени нерпы приводило к усилению их иммуномодулирующей активности по сравнению с липосомами на основе яичных фосфолипидов. Причем максимальное увеличение иммуностимулирующего действия липосом на основе липидов печени было обнаружено в отношении антителообразования у спленоцитов (рис. 8).

-Азатиоприногая супрессия ;

-Влияние липосом на основе фосфолипидов -яичных желтков

■Влияние липосом ка основе фосфолипидов ; печени нерпы I

Активность фагоцитоза

Индекс РТПХ ' Интенсивность

фагоцитоза

Рис. 8. Сравнительная оценка иммунобиологической активности липосом на основе различных фосфолипидов. За 100% приняты показатели иммунитета интактной группы животных

Проведенные исследования по оценке противовоспалительных свойств при воспроизведении двух моделей острого перитонита у крыс показали, что липосомы на основе фосфолипидов печени с добавлением жира нерпы оказывали более сильное действие по сравнению с липосомами, полученными на основе яичных фосфолипидов, а также по сравнению с липосомами с добавлением рыбьего жира.

Установлено, что показатели стабилизации мембран эритроцитов под воздействием липосом из липидов печени при воспроизведении перекисного и осмотического гемолиза были достоверно выше (на 50 и 37,5% соответственно), чем в аналогичных опытах при введении липосом

Индекс реакции ГЗТ Г

150,00% -

АОА спленоцитов

на основе яичных фосфолипидов, используемых в той же концентрации, что и фосфолипиды печени нерпы. Влияние липосом, полученных из фосфолипидов печени нерпы с жиром нерпы, на предотвращение осмотического гемолиза было достоверно эффективнее (на 26,5%) по сравнению с действием липосом с фармакопейным препаратом - рыбьим жиром, взятым в тех же концентрациях.

Известно, что в регуляции клеточных функций ведущее место играют про- и антиокислительные процессы. В эксперименте на лабораторных животных показано, что длительный холодовой стресс у крыс сопровождался накоплением МДА в крови и печени, а также повышением редокс-коэффициента (соотношения окисленного глутатиона к восстановленному) в крови. Выявлено, что введение экспериментальным животным липосомальной формы ПНЖК нерпы приводило к замедлению процессов ПОЛ в тканях крыс, при этом способствовало восстановлению глутатиона в крови и повышению активности основных ферментных биоантиоксидантов (каталазы, супероксиддисмутазы, глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы).

На модели экспериментальной гиперхолестеринемии было выявлено, что введение крысам разработанных липосом способствовало регуляции липидного состава крови животных, при этом происходило понижение уровня как общего холестерина, так и холестерина липопротеинов низкой и очень низкой плотности с одновременным повышением уровня холестерина липопротеинов высокой плотности. Тем самым коррекция дислипидемического состояния сопровождалась снижением риска атерогенности и агрегационного состояния тромбоцитарной системы крови.

3.4. Фармакотерапевтическая эффективность липосомальной формы липидов нерпы

В опытах по воспроизведению токсического гепатита у крыс была установлена выраженная холеретическая активность липосом, приготовленных на основе фосфолипидов печени байкальской нерпы, что выражалось в ускорении желчевыделительной функции печени крыс и повышении общего количества выделенной животными желчи. Наряду с ускорением холереза под влиянием липосом отмечены позитивные изменения и в биохимическом составе желчи, выражавшиеся в повышении концентрации общих желчных кислот и содержания билирубина в секретируемой желчи. Следует отметить, что липосомы проявляли выраженное гепатопротекторное действие, начиная с 7 суток

наблюдения, тогда как положительное действие фармакопейного препарата сравнения «Холосас» проявлялось только с 14 суток.

Липосомы широко применяют в лечебных мазях и косметике. С целью изучения ранозаживляющего действия липосом было разработано трансдермальное средство, содержащее липосомы с ПНЖК жира нерпы (Патент РФ на изобретение №2417075). С учетом основных патогенетических факторов развития раневых повреждений, были использованы модели линейной и плоскостной кожно-мышечной раны, а также модель химического ожога кожи. Животным опытных групп после операции на рану накладывали гель, приготовленный на основе полиэтиленгликоля (ПЭГ) и содержащий липосомы. Установлено положительное влияние липосомального средства на укрепление межклеточных структур при регенеративных процессах в поврежденных тканях, выражавшееся в увеличении прочности рубца на разрыв после лечения гелем линейной раны. Выраженное ранозаживляющее действие липосом проявлялось и в существенном уменьшении площадей плоскостной и постожоговой ран (рис. 9) в ранние сроки эксперимента, и в положительной динамике структурной реорганизации новообразованной после асептического повреждения ткани, и в ускорении процессов заживления ран по срокам эпителизации.

300.000

200,000

100,000

0,000

0,340

0,280

0,250

Э Площадь плоскостной: раны, кв. мм

3 Площадь ран при | химическом ожоге, кв.; мм

- Прочность рубца, кг

Контроль

Гель с липосомами

Группы животных

Рис. 9. Изменение площадей плоскостной и постожоговой ран и прочности рубца после линейной раны при воздействии геля с липосомами

Результаты исследования разработанной лекарственной формы в течение 4 месяцев на присутствие патогенных и условно патогенных микроорганизмов позволяют расценить испытуемое средство как

микробиологически безопасное согласно требованиям, предъявляемым к парфюмерно-косметической продукции по действующим СанПиН 1.2.681-97.

Исследованиями эффективности липосом при формировании адаптационного ответа крыс к длительному холодовому стрессу было выявлено увеличение физической выносливости животных в тесте «плавания до изнеможения». При этом наступало снятие психоэмоционального напряжения, проявлявшееся повышением мотивационных характеристик поведения и уровня ориентировочно-исследовательского поведения, а также снижением уровня тревоги, страха, неуверенности в тестах «Открытое поле» и «Т-образный лабиринт».

3.5. Транспортная способность липосом на основе липидов нерпы

Известно, что липосомы являются эффективной транспортной системой для различных биологически активных соединений (Каплун А.П., ¡999).

Вычисления модифицированным методом мечения красителем (Не1аи Н. е1 а1., 1996) объема внутренней водной фазы в разработанных липосомальных структурах позволили заключить, что внутрь липидных везикул, содержащих триацилглицеролы жира нерпы, включалось от 14,7% до 49,9% водного компонента от исходно взятого. В проведенных экспериментах были использованы суспензии, состоящие из липосомальных структур на основе вторичных липидов нерпы с заключенными внутрь и не включившимися в липосомы водными растворами пептидного биорегулятора или растительных экстрактов.

Были проведены эксперименты по исследованию иммунобиологической активности липосомальных средств, содержащих в своем составе жир байкальской нерпы, с включением активной фракции тимуса крупного рогатого скота и противовоспалительного пятикомпонентного фитосбора.

Результаты исследований показали (рис. 10), что полученные комплексы с липосомальными структурами стимулируют функциональную активность перитонеальных макрофагов, Т-лимфоцитов и анти-телообразующих клеток в иммунологических тестах с моделируемой супрессией. При этом выявлено, что применение как пептидного биорегулятора, так и фитосбора в комплексе с липосомами способствует усилению иммуномодулирующих свойств исследуемых биологически активных средств.

Активность фагоцитоза ¡п VI ^о

—Аэатиоприновая супрессия

Влияние липосомальной формы фитосбора

АОА спленоцитое

Индекс РТПХ

Рс-РОА макрофагов

Интенсивность фагоцитоза ¡п \iitro

Ангигенпрезентируюшэя активность макрофагов

Рис. 10. Иммунобиологическая активность липосомальной формы противовоспалительного фитосбора. За 100% приняты показатели иммунитета интактной группы животных

Установлено, что противовоспалительная активность комплексного фитосбора при включении его в липосомальные структуры, содержащие жир байкальской нерпы, повышалась по сравнению со «свободной» формой растительного средства.

Аналогичные результаты были получены при исследовании мембраностабилизирующей активности экстракта какалии копьевидной. Способность к восстановлению мембран эритроцитов у растительного средства повышалась на 7,5% в случае перекисного гемолиза и на 18% -в случае осмотического гемолиза при включении его в липосомальные средства.

Показано, что включение экстракта какалии копьевидной в липо-сомальное трансдермальное средство, содержащее ПНЖК нерпы, способствовало повышению ранозаживляющего действия фитоэкстракта (по сравнению с линиментной формой растительного средства на основе вазелина). При этом применение липосомальной формы растительного средства сопровождалось и восстановлением показателей иммунитета у животных с раневым повреждением.

Введение экстракта черных листьев бадана толстолистного (ЭБТ) в липосомальной форме сопровождалось положительной динамикой показателей неспецифической адаптации организма к холодовому воздействию.

Таким образом, показано, что при включении ПНЖК в липо-сомальные структуры сохраняется функция липосом как контейнеров для транспортной доставки биологически активных веществ и лекарственных средств, обусловливая пролонгированное действие последних и увеличивая их фармакологическую эффективность.

4. ВЫВОДЫ

1. Структура органов иммуногенеза (тимуса, селезенки, брыжеечного лимфатического узла) и лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистой оболочкой пищеварительного тракта, байкальской нерпы (Ржа $1Ыгка Оте1.) соответствует общим закономерностям строения аналогичных органов человека и других млекопитающих.

2. Отличительные особенности микротопографии и клеточного состава органов иммунной системы байкальской нерпы касаются отдельных деталей их структуры. Тимус, в отличие от тимуса человека, имеет 4 доли, а длина пакетов брыжеечных лимфатических узлов достигает 8 см. Отмечено более интенсивное развитие лимфоидных структур в кишечнике байкальской нерпы по сравнению с человеком и другими животными.

3. Характерной чертой микроскопического строения исследованных органов является обильное разрастание соединительной ткани в виде мощных трабекул (в тимусе, селезенке, лимфатическом узле) или отдельных пучков кодлагеновых волокон внутри пейеровых бляшек и лимфоидных структурах в стенке прямой кишки. В селезенке нерпы слабо развиты периартериальные лимфоидные муфты; количество лимфоидных узелков в органе небольшое, но они большие с крупными центрами размножения. У пейеровых бляшек узкая мантия и слабо развитая межузелковая зона. Крипты в прямой кишке проникают глубоко в скопления лимфоидной ткани. В тимусе отмечено наличие большого количества макрофагов в корковом веществе, особенно у молодых животных.

иммунитета. В краевой пульпе селезенки с возрастом отмечается компенсаторное увеличение содержания малодифференцированных (бластов и больших лимфоцитов) и делящихся клеток. В мозговом веществе тимуса, в мякотных тяжах лимфатических узлов и в пейеровых бляшках повышается количество плазматических клеток, а в прямой кишке их доля снижается.

5. Для всех структур лимфоидной ткани свойственно относительно небольшое содержание макрофагов (за исключением тимуса), число которых с возрастом уменьшается. На фоне общего снижения доли макрофагов в мозговом веществе тимуса и в собственной пластинке слизистой оболочки прямой кишки наблюдается увеличение числа эозинофилов. В отличие от человека и лабораторных животных уровень деструкции клеток в органах иммуногенеза нерпы с возрастом практически остается без изменений.

6. Оценена степень напряженности лимфоидных структур пищеварительного тракта байкальской нерпы под воздействием биогенных факторов окружающей среды. В брыжеечных лимфатических узлах животных, в кишечнике которых были обнаружены микроорганизмы, патогенные для белых мышей, в 1,5 раза увеличивается площадь лимфоидных узелков с центрами размножения и в 8 раз сокращается площадь, занимаемая лимфоидными узелками, не содержащими центров размножения. На цитологическом уровне происходит значительное уменьшение числа бластов и больших лимфоцитов (в 4 раза), исчезают митотически делящиеся клетки, в два раза увеличивается содержание плазмобластов, макрофагов, усиливается деструкция клеток.

7. Выявлено, что в прямой кишке при глистной инвазии нарушается целостность эпителиального покрова, развиваются микроэрозии, в основании крипт эпителий уплощается, принимает синцитиальный вид, что благоприятствует выходу лимфоцитов. Общее число лимфоцитов и малодифференцированных клеток в лимфоидных узелках при этом увеличивается, а содержание макрофагов и плазматических клеток сокращается. В собственной пластинке слизистой оболочки прямой кишки нерпы вдвое увеличивается доля эозинофилов и в 3 раза - макрофагов. Количество лимфоцитов и плазматических клеток уменьшается.

8. Установлена иммуномодулирующая, противовоспалительная и мембраностабилизирующая активность липосомальной формы покровного жира нерпы в модельных экспериментах по воспроизведению иммунодефицитного состояния, воспалительных процессов в тканях лабораторных животных и деструкции мембран эритроцитов.

9. Замена яичных фосфолипидов на липиды печени нерпы, содержащие оптимальное соотношение <о-6/<а-3 ПНЖК, в рецептуре липосом приводит к усилению их иммунобиологической и мембрано-стабилизирующей активности. Выявлена антиоксидантная активность липосом на основе липидов печени нерпы, проявляющаяся в повышении уровня и активности антиокислительных ферментов. Липосомы на основе липидов печени проявляют выраженный противовоспалительный эффект при воспроизведении острого перитонита и гиполипидемическую активность на модели гиперхолестеринемии.

10. Установлена фармакотерапевтическая эффективность липосомальных средств, содержащих ПНЖК жира нерпы. Применение липосом способствует усилению секреции и улучшению биохимического состава желчи экспериментальных животных с токсическим гепатитом. В условиях длительного холодового стресса введение животным исследуемых липосом приводит к повышению физической работоспособности, улучшению психоэмоционального состояния и стимуляции ориентировочно-исследовательского поведения, что указывает на адаптогенные свойства разработанного средства.

11. На моделях раневых повреждений у крыс при применении ранозаживляющего геля, содержащего липосомальную форму липидов нерпы, отмечено ускорение по сравнению с контролем развития грануляционной ткани и созревания рубца после линейных кожных ран, а также ранняя эпителизация раневых дефектов при заживлении плоскостных кожно-мышечных ран и химических ожогов кожи.

12. При использовании в липосомальных структурах ПНЖК липидов нерпы сохраняется функция липосом как контейнеров для транспортной доставки биологически активных средств. При включении пептидного биорегулятора и растительных средств в липосомы, содержащие липиды нерпы, повышается их фармакологическая и фармакотерапевтическая эффективность. В экспериментах на животных выявлено усиление иммунокорригирующих свойств активной фракции тимуса крупного рогатого скота при включении в липосомальные структуры. Включение комплексного противовоспалительного фитосбора в липосомы, содержащие жир нерпы, повышает его иммуномодулирующую и противовоспалительную активность. Отмечено ускорение протекания регенеративных процессов в ранах при применении липосомальной формы экстракта какалии копьевидной по сравнению со «свободной» формой растительного средства. Липосомальная форма экстракта из черных листьев бадана толстолистного оказывает более выраженное стресспротекторное действие, чем его «свободная» форма.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Данные по гистоморфологическому исследованию органов иммунной системы байкальской нерпы рекомендовать в качестве биоиндикаторных характеристик экосистемы озера, используя их как исходную базу данных для оценки степени влияния различных внешних факторов на иммунную систему организма, проводимой в рамках биологического мониторинга.

2. Регистрируемую динамику изменений морфофункциональных показателей иммунной системы байкальской нерпы использовать для характеристики состояния экосистемы Байкала при разработке мер по сохранению биоразнообразия озера.

3. Липосомальные средства на основе биологически активных липидов байкальской нерпы рекомендовать фармацевтической промышленности для создания новых высокотехнологичных лекарственных средств, а также биологически активных добавок к пище и кормам с использованием наноразмерных систем.

4. Липосомальное ранозаживляющее средство рекомендовать к внедрению в производство трансдермальных препаратов нового поколения в виде гелей и мазей, обладающих высокой эффективностью.

5. Сведения по морфологии и клеточному составу органов иммуногенеза байкальской нерпы использовать в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на биологических, охотоведческих и ветеринарных факультетах и написании учебников, учебных пособий и справочных руководств по видовой и возрастной сравнительной морфологии животных для студентов вузов.

6. СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для публикации основных результатов диссертации

1. Сапин М.Р., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д., Григоренко Д.Е., Ерофеева Л.М. Лимфоидные структуры в стенке слепой кишки мышей в условиях иммунной депрессии и ее коррекция липосомальными средствами И Морфология. - 2001. - Т.120. - №4. - С. 42-45.

2. Ламажапова Г.П., Григоренко Д.Е., Ерофеева Л.М., Сапин М.Р., Жамсаранова С.Д. Восстановление иммунитета липосомами из жира байкальской нерпы//Российские морфологические ведомости -2001 -№3-4.-С. 41-43.

3. Аверина Е.С., Бодоев Н.В., Жамсаранова С.Д., Ламажапова Г.П., Раднаева Л.Д. Иммуномодулирующая активность липосомальных средств, полученных из концентратов жира байкальской нерпы // Вестник новых медицинских технологий. - 2003. - Т.Х. - №3. - С. 8486.

4. Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Структурная реорганизация лимфоидных образований кишечника мышей при азатиоприновой иммунной супрессии // Бюллетень Научного центра сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева РАМН «Сердечнососудистые заболевания». - 2003. - Т.4. - №5. - С. 30.

5. Ерофеева Л.М., Жамсаранова С.Д., Кутырев И.А., Ламажапова Г.П., Сапин М.Р. Особенности морфологии и цитоархитектоники брыжеечных лимфатических узлов у взрослых особей байкальской нерпы // Вестник новых медицинских технологий. - 2С04. - T.XI. - №3. - С. 18-20.

6. Кутырев И.А., Ламажапова Г.П., Ерофеева J1.M., Жамсаранова С.Д. Сравнение микроанатомических и цитологических характеристик брыжеечного лимфатического узла полувзрослых и взрослых особей байкальской нерпы (Phoca sibirica) II Зоологический журнал. - 2006. -Т.85. - №7. - С. 886-892.

7. Кутырев И.А., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Структурная организация брыжеечных лимфатических узлов байкальской нерпы Phoca sibirica Gmel. в постнатальном онтогенезе // Известия РАН. Серия биологическая. - 2008. - №4. - С. 453-458.

8. Кутырев И.А., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Клеточный состав коркового вещества брыжеечных лимфатических узлов байкальской нерпы в постнатальном онтогенезе // Морфология. -2008. - Т.134. - №6. - С. 38-42.

9. Kutyrev I.A., Lamazhapova G.P., Zhamsaranova S.D. Structural organization of Mesenteric Lymph Nodes in postnatal development of the Baikal seal, Pusa sibirica Gmel. II Biology Bulletin. - 2008. - T.35. - №4. - P. 389-393.

10. Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д., Хандаева А.Ц. Исследование противовоспалительной активности липосомальных средств из природных липидов // Вестник новых медицинских технологий. - 2009.-T.XVI.-№3-С. 179-180.

11. Большунова Е.А., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Исследование влияния липосомальной формы экстракта бадана толстолистного на формирование адаптационного потенциала организма // Вестник Восточно-Сибирского государственного технологического университета. - 2010. - №4. - С. 83-88.

Монографии

12. Кутырев И.А., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Брыжеечные лимфатические узлы байкальской нерпы: гистоморфология в постнатальном онтогенезе. - Saarbrucken: LAP Lambert Academic Publishing, 2011.- 167 с.

13. Ламажапова Г.П., Григоренко Д.Е., Аминова Г.Г., Ерофеева Л.М., Жамсаранова С.Д., Кутырев И.А., Дондитов Э.В. Органы иммунной системы байкальской нерпы (Pusa sibirica Gmel). - М.: Издательство «Спутники-», 2011:- 133 с.

Патенты

14. Тыхеева H.A., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Способ получения липосом. Патент РФ на изобретение № 2153328, опубл. 27.07.2000. Бюл. № 21.

15. Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д., Цыренжапов A.B., Николаев С.М. Способ получения липосом, обладающих иммунокорригирующим и гепатопротекторным действием. Патент РФ на изобретение № 2308940, опубл. 27.10.2007. Бюл. № 30.

16. Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Способ получения липосомагтьного средства, обладающего ранозаживляющим действием. Патент РФ на изобретение № 2417075, опубл. 27.04.2011. Бюл.№ 12.

Статьи в других периодических изданиях

17. Тыхеева H.A., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Изучение иммунокорригируюгцих свойств липосомальных средств, полученных на основе жира нерпы // Вестник Восточно-Сибирского государственного технологического университета. - 2001. - №3. - С. 51-58.

18. Lamazhapova G.P., Hunhinov A.M., Zhamsaranova S.D. Research of Influence of Liposomal Form of Polyunsaturated Fatty Acibs from the Baikal Seal Fat on Transport of Antituberculosis Means // New Research on Biotechnology in Biology and Medicine. - Nova Science Publishers, Inc., New York, 2006. -P^ 189-192.

19. Кутырев И.А., Хандажапова Б.Б., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д., Цыдыпов В.Ц. Гистоморфологические показатели брыжеечных лимфатических узлов байкальской нерпы (Pusa sibirica) при обнаружении и отсутствии в кишечнике микроорганизмов, патогенных для белых мышей // Вестаик Бурятского государственного

университета. Серия Химия, биология, география. Вып. 3. - 2007. -Улан-Удэ: Изд-во БГУ. - С. 301-303.

20. Жамсаранова С.Д., Ламажапова Г.П. Перспективы использования наноразмерных форм в биотехнологии и медицине // Вестник Восточно-Сибирского государственного технологического университета. - 2007. -№1. - С. 35-38.

21. Хандаева А.Ц., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Сравнительная оценка противовоспалительной эффективности липосом, полученных на основе разных фосфолипидов // Вестник Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова. - Улан-Удэ: Изд-во БГСХА, 2008. - №4 (13). - С. 13-17.

22. Zhamsaranova S.D., Lamazhapova G.P. Research of reparation properties of liposomal form of biogenic lipids // Journal of International Research Publications: Materials, Methods & Technologies. - 2009. -Vol.3.-Part 1.-P. 431-441.

23. Ламажапова Г.П., Большунова E.A., Жамсаранова С.Д. Экспериментальное исследование адаптогенных свойств липосомальной формы экстракта бадана толстолистного // Бюллетень ВосточноСибирского научного центра СО РАМН. - 2009. - №2 (66) - С. 268-270.

24. Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Иммунофармако-логический эффект комплексных средств, содержащих биогенные полиненасыщенные жирные кислоты // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН. - 2009. - №3 (67). - С. 192-196.

25. Lamazhapova G.P., Zhamsaranova S.D. Research of antioxidant activity of liposomal form of extract from Bergenia crassifolia' black leaf in experiment // Мэс засал сэтгуул (Journal of Surgery, Ulaanbaatar, Mongolia).-2011.-№ 13.-C. 152-154.

Работы, опубликованные в сборниках научных трудов и материалах международных и всероссийских конференций

26. Самбатова Э.И., Ламажапова Г.П. Исследование иммунологической активности комплексного фитосбора // Тез. докл. всеросс. науч.-практ. молодежного симпозиума «Экология Байкала и Прибайкалья». - Иркутск, 1999. - С. 59.

27. Самбатова Э.И., Ламажапова Г.П., Баханова Е.М., Николаев С.М., Жамсаранова С.Д. Фармакологическое действие комплексного фитосбора // Сб. матер, междунар. конгресса «Традиционная медицина -2000». - Элиста, 2000. - С. 262-265.

28. Ламажапова Г.П., Самбатова Э.И., Жамсаранова С.Д., Николаев С.М. ГГротивоотечная активность липосомальной формы комплекс-

ного фитосбора // Матер, междунар. науч.-практ. конф. «Флора, растительность и растительные ресурсы Забайкалья». - Чита, 2000. - С. 96-99.

29. Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Биологическая активность липосом, полученных на основе триацилглицеринов жира байкальской нерпы // Матер, междунар. конф. молодых ученых «От фундаментальной науки к новым технологиям. Химия и биотехнология БАВ, пищевых продуктов и добавок. Экологически безопасные технологии». - Тверь: Изд-во ТГТУ, 2001. - С. 21-22.

30. Ламажапова Г.П., Самбатова Э.И., Жамсаранова С.Д., Николаев С.М. Оценка эффективности использования липосом из жира нерпы в качестве носителя комплексного фитосбора // Матер, междунар. науч. конф. «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий». - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2001. - С. 186-188.

31. Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Влияние липосом из жира байкальской нерпы на активность макрофагов // Успехи современного естествознания. - 2003. - №6. — С. 63-64.

32. Кутырев И.А., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Морфология тимуса и лимфоидной бляшки байкальской нерпы // Сб. науч. тр. «Актуальные проблемы морфологии». - Красноярск, 2003. - С. 119-121.

33. Кутырев И.А., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Возрастные изменения гистоморфологических показателей органов иммунной системы байкальской нерпы // Матер, всеросс. молод, науч.-практ. конф. «Молодые ученые Сибири». - Улан-Удэ, 2003. - С. 34-36.

34. Кутырев И.А., Ламажапова Г.П., Ерофеева Л.М., Жамсаранова С.Д. Цитологические особенности брыжеечного лимфатического узла подростков байкальской нерпы // Сб. науч. тр. «Актуальные проблемы морфологии», Красноярск, 2004. - С. 161-162.

35. Кутырев И.А., Ламажапова Г.П., Ерофеева Л.М., Григоренко Д.Е., Жамсаранова С.Д. Микроанатомические особенности лимфоидных органов нерпы - эндемика экосистемы озера Байкал // Матер, междунар. науч. конф. «Научные основы сохранения водосборных бассейнов: междисциплинарные подходы к управлению природными ресурсами». -Улан-Удэ - Улан-Батор, 2004. - С. 156-157.

36. Ламажапова Г.П., Хунхинов A.M., Жамсаранова С.Д. О перспективности рационального использования жира байкальской нерпы в лечебных целях // Матер, всеросс. науч.-техн. конф. с междунар. участием «Новые технологии добычи и переработки природного сырья в условиях экологических ограничений» (г. Улан-Удэ, 26-30 июля 2004 г.). -Улан-Удэ: Изд-во БНЦ СО РАН, 2004. - С. 153-154.

37. Жамсаранова С.Д., Ламажапова Г.П. Разработка новых лекарственных средств на основе природных источников сырья с ис-

пользованием высоких технологий // Матер, междунар. науч.-практ. конф. - VIII Междунар. семинара-презентации инновационных научно-технических проектов «Биотехнология - 2005», Пущино, 18-19 ноября

2005 г. (под ред. Решетиловой Т.А., Музафарова E.H.) - М.: ЗАО «А-Принт», 2005. - С. 47-50.

38. Жамсаранова С.Д., Ламажапова Г.П., Цыренжапов A.B. Оценка гепатопротекторной эффективности природных фосфолипидов // Сб. матер. III Юбилейной выставки-конф. с междунар. участием «Высокоэффективные пищевые технологии, методы и средства для их реализации». - М.: Изд-во МГУПП. - 2005. - С. 202-203.

39. Корбутова Н., Ламажапова Г.П., Сорокоумова Г.М., Швец В.И. Получение коллоидных систем (эмульсий, липосом), содержащих, как функциональный ингредиент, жир байкальской нерпы // XI Междунар. науч.-техн. конфер. «Наукоемкие химические технологии-2006»: Тез. докл. T.I. - Самара, 2006. - С. 168.

40. Жамсаранова С.Д., Ламажапова Г.П. Перспективы использования липосомальной формы природных эссенциальных нутриентов при оптимизации питания // «Диетология: проблемы и горизонты». I съезд диетологов и нутрициологов России (5-6 декабря

2006 г., г. Москва). - С. 36-37.

41. Муратова Т.С., Ламажапова Г.П. Исследование желчегонной активности липосом на основе природных фосфолипидов // Основные направления функционального питания и безопасность пищевых продуктов: Матер, всерос. науч. молод, конф. с междунар. участием. -Улан-Удэ: Изд-во ВСГТУ, 2006. - С. 49-50.

42. Дружинина Д.Н., Хандаева А.Ц., Ламажапова Г.П. Исследование биологической активности природных липидов в эксперименте // «Актуальные проблемы технологии живых систем»: Сб. матер. II Междунар. науч.-техн. конф. молодых ученых. Владивосток: Изд-во ТГЭУ, 2007. С. 23-26.

43. Жамсаранова С.Д., Ламажапова Г.П., Хандаева А.Ц. Исследование биологической активности природных липидов в липосомальной форме // «Биотехнология: состояние и перспективы развития»: Матер. IV Московского междунар. конгресса, М.: Изд-во ЗАО «Экспо-биохим-технологии», 2007. -Ч. 1. - С. 158.

44. Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Некоторые характеристики наносомальных структур из природного сырья // «Опто-, наноэлектроника, нанотехнологии и микросистемы». Труды IX Междунар. конф. - Ульяновск: Изд-во УлГУ, 2007. - С. 125.

45. Хандаева А.Ц., Ламажапова Г.П. Эффективность лекарственных средств на основе биологически активных компонентов

тканей байкальской нерпы // «Экология в современном мире: взгляд научной молодежи»: Матер, всеросс. конф. молодых ученых, Улан-Удэ, 24-27 апреля 2007 г. - Улан-Удэ: Изд-во ГУЗ РЦМП МЗ РБ, 2007 - С 390-391.

46. Дондитов Э.В., Ламажапова Г.П, Особенности микроскопической анатомии тимуса байкальской нерпы // «Экология в современном мире: взгляд научной молодежи»: Матер, всеросс. конф. молодых ученых, Улан-Удэ, 24-27 апреля 2007 г. - Улан-Удэ- Изд-во ГУЗ РЦМП МЗ РБ, 2007. - С. 23-24.

47. Дондитов Э.В., Ерофеева Л.М., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Возрастные изменения морфологии тимуса байкальской нерпы // «Актуальные вопросы экологической, сравнительной, возрастной и экспериментальной морфологии»: Матер, междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию проф. И.А. Спи-рюхова. - Улан-Удэ: Изд-во ФГОУ ВПО «БГСХА им. В.Р. Филиппова» 2007. - С. 27-28.

48. Кутырев И.А., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Общие закономерности изменения клеточного состава брыжеечных лимфатических узлов байкальской нерпы в постнатальном онтогенезе // «Актуальные вопросы экологической, сравнительной, возрастной и экспериментальной морфологии»: Матер, междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию проф. И.А. Спирюхова. - Улан-Удэ: Изд-во ФГОУ ВПО «БГСХА им. В.Р. Филиппова», 2007. - С. 37-39.

49. Zhamsaranova S.D., Lamazhapova G.P. Nanosystems on the Base of Natural Lipids as Perspective Drugs for Treatment of Different Diseases // Proceedings of 3rd International Symposium in Chemistry "Chemistry and Food Safety-2008". - October 02-04, 2008. Ulaanbaatar, Mongolia. - P. 35.

50. Жамсаранова С.Д, Ламажапова Г.П. О возможности использования наноформ природных липидов как компонентов питания // «Биотехнология: Вода и пищевые продукты»: Матер, междунар. науч.-практ. конф., М.: Изд-во ЗАО «Экспо-биохим-технологии», 2008. - С. 204.

51. Zhamsaranova S.D., Lamazhapova G.P. Ways of Integration of Modern Technologies and Achievements of Traditional Medicine II Materials of the П1 International Scientific Conference «Traditional Medicine: a current Situation and Perspectives of Development». - Ulan-Ude: The Publishing House of the Ministry of Health of Buryatia, 2008. - P. 74-75.

52. Zhamsaranova S.D., Lamazhapova G.P. Research of Efficiency of Natural Polyunsaturated Fatty Acids in Liposomal Form // Abstract Book of Erdos Forum on Development of International Traditional Medicine China Erdos, 2009.-P. 85.

53. Большунова Е.А., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Исследование влияния липосомальной формы экстракта из черных листьев бадана толстолистного на иммунный статус лабораторных животных при холодовом стрессе // International Conference on Biomolecular Science in honor of the 75th anniversary of the birth of Professor Yuri Ovchinnikov (September, 28 - October, 2, 2009): Abstracts, Moscow -Pushchino, 2009. - Vol. 1. — P. 141-142.

54. Жамсаранова С.Д., Большунова E.A., Ламажапова Г.П. Влияние липосомальной формы экстракта черных листов бадана толстолистного на физическую выносливость лабораторных животных в условиях солодового воздействия II Матер, междунар. науч.-практ. конф. «Пищевая промышленность: состояние, проблемы, перспективы». -Оренбург: ИПК ГОУ ОГУ, 2009. - С. 133-136.

55. Большунова Е.А., Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. «Влияние липосомальной формы экстракта листьев бадана толстолистного на ориентировочно-исследовательское поведение лабораторных животных в условиях холодового воздействия» // Сб. матер. III Междунар. науч.-техн. конф. молодых ученых «Актуальные проблемы технологии живых систем». - Владивосток: Изд-во ТГЭУ, 2009.-С. 192-194.

56. Ламажапова Г.П., Халматов A.B. Репаративная активность липосомальной формы природных полиненасыщенных жирных кислот» // Матер. III Междунар. науч.-практ. конф. молодых ученых «Жас-Галым-2009». -Тараз, Казахстан, 2009. - С. 169-173.

57. Lamazhapova G.P., Zhamsaranova S.D. Reparation properties of liposomal form of Cacalia hastate L. I/ Current Problems of Food Engineering and Biotechnology: Proceedings of the International Workshop, July 4-7, 2009, Ulan-Ude (Russia). - Ulan-Ude: The Publishing House of East Siberian State University of Technology, 2010. - P. 86-92.

58. Bolschunova E.A., Lamaschapova G.P., Schamsaranova S.D. Die Effektivität der Nutzung der Liposomenform des Extraktes aus Schwarzen Blättern des dickblättrigen Badans (Bergenia crassifolia (L) Fritsch) bei der Kältebewirkung. // Current Problems of Food Engineering and Biotechnology: Proceedings of the International Workshop, July 4-7, 2009, Ulan-Ude (Russia). - Ulan-Ude: The Publishing House of East Siberian State University of Technology, 2010. - S. 72-77.

59. Galina P. Lamazhapova, Sesegma D. Zhamsaranova Adaptogenic activity of polyunsaturated fatty acids in liposomal form H International Conference on "Innovation in Food and Nutrition Science", July 7-11, 2010, Ulaanbaatar, Mongolia, 2010. - P. 213-217.

60. Ламажапова Т.П., Жамсаранова , С.Д. Разработка и исследование фармакологической активности нанокомплексов на основе природных биологически активных веществ // Биотехнология в интересах экологии и экономики Сибири и Дальнего Востока: матер. I Всеросс. науч.-практ. конф. - Улан-Удэ: Изд-во ВСГТУ, 2010. - С. 70-75.

61. Ламажапова Г.П., Дондитов Э.В., Жамсаранова С.Д. О необходимости иммуномониторинга байкальской нерпы // Проблемы экологии: чтения памяти проф. ММ. Кожова: Тез. докл. междунар. науч. конф. и междунар. шк. для мол. ученых (Иркутск, 20-25 сентября 2010 г.). - Иркутск: Изд-во Иркут. гос. ун-та, 2010. - С. 424.

62. Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Новая биологически активная форма природных нутриентов // XI Междунар. конф. молодых ученых «Пищевые технологии и биотехнологии» (Казань, 13-16 апреля 2010 г.). Сб. тез. докл. Ч. 2. - Казань: Отечество, 2010. - С. 137.

63. Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д. Антиоксидантный эффект фитоэкстракта в липосомах // Матер. XIII Междунар. науч.-тех. конф. «Наукоемкие химические технологии - 2010» (Иваново, 29 июня -2 июля 2010 г.) -ГОУВПО Иван. гос. хим.-технол. ун-т. - Иваново 2010 -С. 246.

64. Ламажапова Г.П., Жамсаранова С.Д., Сорокоумова Г.М., Каплун А.П., Польшаков В.И. Характеристика липосомапьных структур из нетрадиционного липидного сырья // «Нетрадиционные ресурсы, инновационные технологий и продукты»: Сб. науч. тр РАЕН - Выпуск 18. -М.: РАЕН, 2010. - С. 107-112.

65. Galina P. Lamazhapova, Sesegma D. Zhamsaranova. Prospects for the use of liposomal form of natural polyunsaturated fatty acids in geriatrics // Chemistry in Medicine: Booklet of International Conference. -Ulaanbaatar, Mongolia, 2010. - P. 18-19.

66. Ламажапова Г.П., Бальхаев М.И., Жамсаранова С.Д., Лубсандоржиева П.-Н.Б., Николаев С.М. Ранозаживляющая активность липосомальной формы растительного средства И «Биотехнология: состояние и перспективы развития»: Матер. VI Московского междунар. конгресса. - М.: Экспо-биохим-технологии, Изд-во РХТУ им. Д.И. Менделеева, 2011. - Ч. 1. - С. 81 -82.

7. СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АОА — антителообразующая активность БАД - биологически активная добавка

БИП СО РАН - Байкальский институт природопользования

Сибирского отделения Российской Академии Наук

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа

ИОЭБ СО РАН - Институт общей и экспериментальной биологии

СО РАН

МДА - малоновый диальдегид

ПАЛМ - периартериапьные лимфоидные муфты

ПМ - перитонеальные макрофаги

ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты

ПОЛ - перекисное окисление липидов ~ .-, ;

ПЭГ - полиэтиленгликоль

РОА - розеткообразующая активность

РТПХ - реакция трансплантат против хозяина

ЭБТ - экстракт из черных листьев бадана толстолистного

ЭКК - экстракт какалии копьевидной

сЧ

Подписано в печать 3.10.2011 г. Формат 60x84 1/16. Усл.пл. 2,79. Тираж 100 экз. Заказ № 186.

Издательство ВСГУТУ 670013. г. Улан-Удэ, ул. Ключевская, 40, в.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Ламажапова, Галина Петровна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Систематика, биология, экология и хозяйственное значение байкальской нерпы (Риза $1Ыг1са (ЭтеИп, 1798).

1.2. Особенности иммунной системы гидробионтов.

1.2.1. Иммунная система рыб.

1.2.2. Иммунная система водных млекопитающих.

1.3. Биологическая ценность полиненасыщенных жирных кислот.

1.4. Печень и жир байкальской нерпы как перспективные источники полиненасыщенных жирных кислот.

1.4.1. Химический состав печени нерпы.

1.4.2. Химический состав жира нерпы.

1.5. Супрамолекулярные наноразмерные системы для транспорта биологически активных соединений.

1.5.1. Общая характеристика и способы получения нанокапсул.

1.5.2. Липосомы как бионанокапсулы для транспорта биологически активных соединений и лекарственных средств.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материал и методы исследования органов иммунной системы байкальской нерпы.

2.1.1. Материал для исследования.

2.1.2. Методы исследования морфологии и клеточного состава органов.

2.2. Материал и методы экспериментальной оценки эффективности липидов нерпы.

2.2.1. Материал для исследования.

2.2.2. Методы получения и исследования биологической активности и фармакотерапевтической эффективности липосом на основе липидов нерпы.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Иммунный статус байкальской нерпы.

3.1.1. Морфология и цитоархитектоника органов иммунной системы байкальской нерпы в постнатальном онтогенезе.

3.1.2. Характеристика степени напряженности иммунной системы байкальской нерпы под влиянием биогенных факторов.

3.2. Биологическая активность и фармакотерапевтическая эффективность липосом на основе липидов нерпы.

3.2.1. Биологическая активность липосомальной формы жира байкальской нерпы.

3.2.2. Биологическая активность липосомальной формы липидов печени байкальской нерпы.

3.2.3. Фармакотерапевтическая эффективность липосомальных средств на основе липидов нерпы.

3.2.4. Эффективность биологически активных средств при включении их в липосомы на основе липидов нерпы.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Морфология органов иммуногенеза нерпы байкальской и экспериментальная оценка эффективности ее липидов при разных патологиях"

Актуальность. Уникальность экологической системы озера Байкал несомненна и признана мировым и российским обществом юридически. В 1996 году озеро и непосредственно примыкающие к нему территории были включены в Список участков мирового природного наследия ЮНЕСКО. В 1999 году принят Закон Российской Федерации "Об охране озера Байкал".

Биосообщество озера эволюционировало многие миллионы лет в уникальных условиях исключительно чистой воды с бедным, но тонко сбалансированным набором питательных веществ. Именно этот химический состав водной среды, и организмы, развившиеся в ней, сделали Байкал тем, что он есть: в то время как большая часть Байкала все еще изумительно чиста по обычным стандартам, относительно небольшие химические изменения могут воздействовать на эндемичные организмы с самыми негативными последствиями.

В связи с этим, значительное внимание специалистов, работающих на Байкале в последние годы, уделено исследованию загрязнению вод озера Байкал, его биоты и донных осадков токсическими веществами. Среди подобных веществ наибольшее беспокойство во всем мире вызывают хлорорганические соединения (ХОС), поскольку многие из них производились и применялись в больших количествах, а также по той причине, что они весьма устойчивы и могут долгое время сохраняться в окружающей среде.

По данным двух независимых групп исследователей (Японии и США, 1991-2000 гг.) концентрация полихлорированных бифенилов (ПХБ) в водах Байкала ни в одной точке не превышает 2 нг/л, что позволяет отнести байкальские воды к чистым. Оказалось, что концентрации других ХОС в водах Байкала были такими же, как найденные в Северном Ледовитом океане (32-400 пг/л), и сопоставимы с теми, которые были найдены в озерах Верхнее и Гурон из системы Великих озер Северной Америки [Грачев М.А., 2002].

Имеющиеся наблюдения по динамике популяций живых организмов на протяжении длительного времени не выявил достоверных изменений населяющих Байкал популяций за период, прошедший с начала промышленной революции. Можно предполагать, что эти популяции существенно не изменятся под действием химических антропогенных факторов и в ближайшие десятилетия. Регулярный мониторинг фито- и зоопланктона пока не дал информации, которая требовала бы принятия неотложных практических решений. Несмотря на это, никак нельзя рекомендовать его прекращение. Более того, необходимо расширение и усиление разработок и исследований по поиску более чувствительных и интегральных методов мониторинга экосистемы озера [Грачев М.А., 2002].

Уникальной особенностью пресноводной экосистемы Байкала является наличие в ней эндемичного байкальского тюленя - нерпы (Рим бШпсо. Оте1), единственного млекопитающего, и, поэтому, высшего звена пищевой цепи. В последние годы биология байкальской нерпы очень хорошо изучена, в особенности благодаря работам В.Д. Пастухова (1993) и его учеников. Численность нерпы, определенная по методике Пастухова [Пастухов В.Д., 1993], после 1972 года варьирует в пределах от 70 до 140 тысяч особей.

По последним данным, концентрации ПХБ и ДДТ (4,4-дихлор-дифенил-трихлорэтана) в жире байкальской нерпы существенно ниже, чем у тюленей из Балтики и с восточного побережья Канады, но выше, чем у тюленей Арктики и запада Тихого океана. Количества же сверх-экотоксикантов - полихлордибенздиоксинов и полихлордибензфуранов в биоте исчезающе малы. Так, порядковые оценки показывают, что во всех байкальских голомянках сосредоточено всего 3 грамма, а во всей байкальской нерпе - 0.12 грамма суммы этих соединений [Грачев М.А., 2002].

Большое внимание общественности к благополучию популяции байкальской нерпы было привлечено осенью 1987 - зимой 1988 гг., так как в это время произошла массовая гибель этих животных. Заболевшие нерпы с характерными симптомами (малая подвижность, паралич конечностей, конъюнктивит) выбрасывались на берег и там погибали. В общей сложности тогда погибло около 6 тыс. тюленей. Возникли подозрения, что гибель нерпы вызвана поступившими в Байкал неизвестными ядовитыми веществами. Но применение методов молекулярной биологии позволило однозначно установить, что причиной массовой гибели являлся морбилливирус, аналогичный вирусу чумы плотоядных и родственный вирусу кори человека.

В литературе иногда высказываются предположения, что байкальские тюлени в те годы были поражены морбилливирусами по причине ослабления их иммунитета из-за накопления высоких концентраций ХОС [Nakata Sh. et al., 1997]. Такое предположение имеет право на существование, поскольку известно, что ХОС относятся к иммунотоксикантам, так как органами-мишенями являются органы иммунной системы. Однако убедительных доказательств взаимосвязи морбилливирусных эпизоотий с накоплением ХОС в тканях животных до настоящего времени не получено.

В этой связи состояние иммунной системы, ответственной за поддержание внутренней среды организма, является чувствительным показателем влияния химического и биологического загрязнения. В настоящее время иммунный статус байкальской нерпы практически остается не изученным. По-прежнему отсутствует четкая картина по морфологии и цитоархитектонике органов иммунной системы. Имеющиеся в литературе данные отрывочны и недостаточны для решения проблем охраны здоровья, сохранения и рационального использования данного вида тюленей.

Для сохранения биоразнообразия и биоравновесия экосистемы озера Байкал популяция байкальской нерпы поддерживается в определенных пределах путем санитарного отлова строго ограниченного количества животных - в пределах от 1-3 до 6 тысяч особей в год. Животное добывается с целью получения меха, а остальная часть (жир и внутренние органы) в лучшем случае направляется на зверофермы. Вместе с тем, ткани байкальской нерпы (подкожное сало и печень) являются перспективными источниками биологически активных полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК). Исследования химического состава показали, что они содержат достаточное количество со-6 и со-3 ПНЖК в оптимальных соотношениях -3.19:1 (в печени) и 0.77 (в жире).

Исследованиями многих ученых [Антонов В.Ф., 1982; Vaugn, D.M. et al., 1994; Левачев М.М., 1999; Тутельян В.А. с соавт., 1999; Погожева А.В., 2004; Wijendran V., Hayes К.С., 2004; Титов В.Н., 2005; Chaplin S., 2005; Sampath H., Ntambi J.V., 2005; Шендеров Б.А., 2008 и др.] доказана роль ПНЖК в поддержании нормальной деятельности клеточных мембран как обязательных компонентов клетки, а также в активации мембранных процессов, и соответственно, в развитии адаптационных реакций при различных патологических состояниях.

Создание липосом на основе ПНЖК липидов нерпы решает зада чи целенаправленной доставки биологически активных липидов в организм. Наличие тропности и других свойств у липосомальных форм биологически активных веществ (БАВ) имеет ряд преимуществ по сравнению с применением этих веществ в интактном виде, что изучено многими учеными [Торчилин В.П. с соавт., 1982; Грегориадис Г., Аллисон Д., 1983; Марголис Л.Б., Бергельсон Л.Д., 1986; Zhang L. et al., 1997; Каплун А.П. с соавт., 1999; Ramadas M. et al., 2000; Баллюзек Ф.В. с соавт., 2008; Селина О.Е. с соавт., 2008; Швец В.И. с соавт., 2008; Зайцев С.Ю., 2010; Сейфулла Р.Д., 2010 и др.]. Эффективность воздействия липосом обусловлена возможностью их проникновения в ткани- и клетки-мишени. Таким путем может быть обеспечена не только доставка полезных для организма липидов, из которых состоит липосомальная мембрана, но и других веществ, транспортируемых липосомами.

Государственную поддержку исследования по данной работе нашли в следующих грантах и программах:

- «Исследование иммунного статуса байкальской нерпы в системе биомониторинга озера Байкал» (гранты по приоритетным направлениям науки для молодых ученых ВСГТУ, 2000 и 2005);

- «Получение гистоморфологических показателей органов иммунной системы байкальской нерпы» (Федеральные целевые программы «Государственная поддержка интеграции высшего образования и фундаментальной науки на 1997-2000 гг.», 1999 г. и «Интеграция науки и высшего образования России на 2002-2006 годы», 2003);

Разработать способы получения и использования вторичных источников местного сырья животного и растительного происхождения в качестве иммунопротекторов», 1996-2000 и «Разработка и исследование эффективности новых липосомальных форм биологически активных веществ», 2003-2005 (Региональная научно-техническая программа «Бурятия. Наука и техника»);

- «Проведение экспедиционных исследований эндемиков озера Байкал как биоиндикаторов его системы (Федеральная целевая программа «Интеграция науки и высшего образования России на 2002-2006 годы», 2001);

- «Иммуноморфологические особенности организма при воздействии компонентов функционального питания», 2006-2007, «Разработка наноформ биологически активных веществ природного происхождения», 2008-2010 (Аналитическая ведомственная целевая программа «Развитие научного потенциала высшей школы». Мероприятие 1).

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

1. Изучить гистоморфологические особенности структурной организации органов иммунной системы (тимуса, селезенки, лимфатических узлов) и лимфоидной ткани, ассоциированной со стенками кишечника, байкальской нерпы.

3. Определить характер изменения иммуноморфологических реакций в лимфоидных структурах кишечника байкальской нерпы под влиянием биогенных факторов среды (сапрофитной микрофлоры кишечника и паразитофауны желудочно-кишечного тракта).

4. Исследовать биологическую активность липосом из вторичного липидного сырья байкальской нерпы (покровного жира и жира печени), содержащего уникальное соотношение со-6/сэ-З жирных кислот.

5. Исследовать фармакотерапевтическую эффективность (гепатопротекторное, ранозаживляющее и адаптогенное действия) липосомальных биологически активных средств на основе липидов нерпы.

Научная новизна работы.

Впервые исследованы морфология и цитоархитектоника тимуса, селезенки, лимфатических узлов, а также структурных элементов диффузной лимфоидной ткани, ассоциированной со стенками пищеварительного тракта

------„ /г>г л о—-„—с---------нерпы ^ или ліиіг іии игпеї.). опсрьыс раскрьиы ишисннисіи строения, возрастные и половые различия органов иммунопоэза байкальской нерпы. Изучены изменения в лимфоидных структурах пищеварительного тракта нерпы, связанные с глистной инвазией и влиянием сапрофитной микрофлоры.

Теоретически обоснована возможность использования ценного по оптимальному содержанию со-3 и со-6 жирных кислот вторичного липидного сырья (покровного жира и жира печени) байкальской нерпы при создании супрамолекулярных наноразмерных систем. Способы получения липосом, содержащих биологически активные липиды байкальской нерпы, защищены патентами РФ. В модельных экспериментах по воспроизведению различных патологических состояний выявлена биологическая активность и фармакотерапевтическая эффективность разработанных липосомальных средств. Установлена иммуномодулирующая, мембраностабилизирующая, антиоксидантная, гиполипидемическая и противовоспалительная активность липосом на основе липидов нерпы. Выявлено, что липосомальное средство, содержащее липиды нерпы, обладает адаптогенным, гепатопротекторным и ранозаживляющим действиями.

Показано, что применение биологически активных средств в липосомальных структурах, содержащих эссенциальные со-З и со-6 жирные кислоты в оптимальном соотношении, способствует усилению фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности исследуемых средств.

Практическая значимость работы.

Результаты проведенных исследований содержат сведения по морфологии и клеточному составу некоторых органов иммунной системы уникального пресноводного млекопитающего - байкальской нерпы и могут быть рекомендованы для оценки состояния популяции этого животного в системе биомониторинга экосистемы озера Байкал. Оперативная оценка состояния иммунных органов нерпы позволит разработать меры по сохранению биоразнообразия озера.

Разработаны липосомальные средства с добавлением жира байкальской нерпы, а также липосомальное ранозаживляющее средство на основе липидов нерпы. Результаты проведенных исследований являются экспериментальным обоснованием дальнейших работ по конструированию лечебно-профилактических средств нового поколения на основе нанокапсул из вторичных природных липидов и получения липосомальных форм лекарственных средств с использованием триацилглицеролов, содержащих оптимальное соотношение со-6/со-З жирных кислот.

Результаты исследований могут быть использованы:

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Особенности морфологии и цитоархитектоники органов иммунной

1 « и сисхемы и лимцюидных структур кишечника байкальской нерпы.

2. Онтогенетические особенности структурной организации органов иммуногенеза байкальской нерпы.

3. Иммуноморфологические изменения реакций в лимфоидных структурах пищеварительной системы байкальской нерпы под влиянием биогенных факторов среды как чувствительный показатель состояния иммунной системы организма.

5. Усиление биологической активности и повышение фармакотерапевтической эффективности биологически активных средств при включении в липосомальные структуры, полученные на основе жира нерпы, обусловленное действием эссенциальных со-3 и (0-6 жирных кислот и адресной доставкой в организм.

Апробация работы. Основные результаты работы докладывались, обсуждались и одобрены на международных и российских научных конференциях и симпозиумах: Международной научной конференции «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий» (Саранск, 2001); Международной научной конференции «Научные основы сохранения водосборных бассейнов: междисциплинарные подходы к управлению природными ресурсами» (Улан-Удэ, Улан-Батор, 2004); Международной научно-практической конференции - 8-м Международном семинаре-презентации инновационных научно-технических проектов «Биотехнология - 2005» (Пущино, 2005); II Международной научно-технической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы технологии живых систем» (Владивосток, 2007); Четвертом и Шестом Московских международных конгрессах «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2007, 2011); IX Международной конференции «Опто-, наноэлектроника, нанотехнологии и микросистемы» (Ульяновск, 2007); Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию проф. И.А. Спирюхова «Актуальные вопросы экологической, сравнительной, возрастной и экспериментальной морфологии» (Улан-Удэ, 2007); 3rd International Symposium in Chemistry "Chemistry and Food Safety-2008» (Ulaanbaatar, Mongolia, 2008); Международной научно-практической конференции «Биотехнология: Вода и пищевые продукты» (Москва, 2008); III Международной научной конференции «Traditional Medicine: a current Situation and Perspectives of Development» (Ulan-Ude, 2008); Erdos Forum on Development of International Traditional Medicine (Erdos, China, 2009); III Международной научно-технической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы технологии живых систем» (Владивосток, 2009); III Международной научно-практической конференции молодых ученых «Жас-Галым-2009» (Тараз, Казахстан, 2009); Международной школе-семинаре «Current Problems of Food Engineering and Biotechnology» (Ulan-Ude, 2009); International Conference on "Innovation in food and nutrition science" (Ulaanbaatar, Mongolia, 2010); XI Международной конф. молодых ученых «Пищевые технологии и биотехнологии» (Казань, 2010); XIII Международной научно-технической конф. «Наукоемкие химические технологии - 2010» (Иваново, 2010); Международной науч. конф. «Проблемы экологии: чтения памяти проф. М.М. Кожова» (Иркутск, 2010) и других (Иркутск, 1999; Элиста, 2000; Чита, 2000; Тверь, 2001; Улан-Удэ, 2003, 2004; 2007; 2010; Москва, 2005; Оренбург, 2009).

1.1.

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Ламажапова, Галина Петровна

выводы

1. Структура органов иммуногенеза (тимуса, селезенки, брыжеечного лимфатического узла) и лимфоидной ткани, ассоциированной со слизистой оболочкой пищеварительного тракта, байкальской нерпы {Рта БгЬЫса Сте1.) соответствует общим закономерностям строения аналогичных органов человека и других млекопитающих.

3. Характерной чертой микроскопического строения исследованных органов является обильное разрастание соединительной ткани в виде мощных трабекул (в тимусе, селезенке, лимфатическом узле) или отдельных пучков коллагеновых волокон внутри пейеровых бляшек и лимфоидных структурах в стенке прямой кишки. В селезенке нерпы слабо развиты периартериальные лимфоидные муфты; количество лимфоидных узелков в органе небольшое, но они большие с крупными центрами размножения. У пейеровых бляшек узкая мантия и слабо развитая межузелковая зона. Крипты в прямой кишке проникают глубоко в скопления лимфоидной ткани. В тимусе отмечено наличие большого количества макрофагов в корковом веществе, особенно у молодых животных.

4. С возрастом изменения, происходящие в строении органов лимфопоэза байкальской нерпы, отвечают общим для всех млекопитающих закономерностям онтогенетического развития органов иммунной системы. Во всех изученных органах с возрастом происходит разрастание соединительной ткани, сопровождающееся склерозированием кровеносных сосудов. С увеличением возраста в лимфоидных органах байкальской нерпы наблюдается превалирование функции гуморального иммунитета с одновременным снижением клеточного иммунитета. В красной пульпе селезенки с возрастом отмечается компенсаторное увеличение содержания малодифференцированных (бластов и больших лимфоцитов) и делящихся клеток. В мозговом веществе тимуса, в мякотных тяжах лимфатических узлов и в пейеровых бляшках повышается количество плазматических клеток, а в прямой кишке их доля снижается.

6. Оценена степень напряженности лимфоидных структур пищеварительного тракта байкальской нерпы под воздействием биогенных факторов окружающей среды. В брыжеечных лимфатических узлах животных, в кишечнике которых были обнаружены микроорганизмы, патогенные для белых мышей, в 1.5 раза увеличивается площадь лимфоидных узелков с центрами размножения и в 8 раз сокращается площадь, занимаемая лимфоидными узелками, не содержащими центров размножения. На цитологическом уровне происходит значительное уменьшение числа бластов и больших лимфоцитов (в 4 раза), исчезают митотически делящиеся клетки, в два раза увеличивается содержание плазмобластов, макрофагов, усиливается деструкция клеток.

7. Выявлено, что в прямой кишке при глистной инвазии нарушается целостность эпителиального покрова, развиваются микроэрозии, в основании крипт эпителий уплощается, принимает синцитиальный вид, что благоприятствует выходу лимфоцитов. Общее число лимфоцитов и малодифференцированных клеток в лимфоидных узелках при этом увеличивается, а содержание макрофагов и плазма-тических клеток сокращается. В собственной пластинке слизистой оболочки прямой кишки нерпы вдвое увеличивается доля эозинофилов и в 3 раза - макрофагов. Количество лимфоцитов и плазматических клеток уменьшается.

9. Замена яичных фосфолипидов на липиды печени нерпы, содержащие оптимальное соотношение со-6/со-З ГТНЖК, в рецептуре липосом приводит к усилению их иммунобиологической и мембраностабилизирующей активности. Выявлена антиоксидантная активность липосом на основе липидов печени нерпы, проявляющаяся в повышении уровня и активности антиокислительных ферментов. Липосомы на основе липидов печени проявляют выраженный противовоспалительный эффект при воспроизведении острого перитонита и гиполипидемическую активность на модели гиперхолестеринемии.

11. На моделях раневых повреждений у крыс при применении ранозаживляющего геля, содержащего липосомальную форму липидов нерпы, отмечено ускорение по сравнению с контролем развития грануляционной ткани и созревания рубца после линейных кожных ран. а также ранняя эпителизация раневых дефектов при заживлении плоскостных кожно-мышечных ран и химических ожогов кожи.

12. При использовании в липосомальных структурах ПНЖК липидов нерпы сохраняется функция липосом как контейнеров для транспортной доставки биологически активных средств. При включении пептидного биорегулятора и растительных средств в липосомы, содержащие липиды нерпы, повышается их фармакологическая и фармакотерапевтическая эффективность. В экспериментах на животных выявлено усиление иммунокорригирующих свойств активной фракции тимуса крупного рогатого скота при включении в липосомальные структуры. Включение комплексного противовоспалительного фитосбора в липосомы, содержащие жир нерпы, повышает его иммуномодулирующую и противовоспалительную активность. Отмечено ускорение протекания регенеративных процессов в ранах при приме-нении липосомальной формы экстракта какалии копьевидной по сравнению со «свободной» формой растительного средства. Липосомальная форма экстракта из черных листьев бадана толстолистного оказывает более выраженное стресспротекторное действие, чем его «свободная» форма.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора биологических наук, Ламажапова, Галина Петровна, Улан-Удэ

1. Аверина Е.С. Исследование жирнокислотного состава жира байкальской нерпы Phoca (PUSA) Sibirica Gmel и разработка новых путей его применения: дис. . канд. хим. наук. Улан-Удэ, 2003. - 149 с.

2. Александров П.Н., Сперанская Т.В., Бобков Ю.Г. и др. Влияние рутина и эскуламина на некоторые модели асептического воспаления // Фармакология и токсикология. 1986. - №1. - С. 84-86.

3. Андерсон Д.П. Иммунология в тепловодном рыбном хозяйстве /У Болезни и паразиты в тепловодном рыбном хозяйстве. Душанбе, 1997. - С. 27-34.

4. Антонов В.Ф. Липиды и ионная проницаемость мембран. М.: Наука, 1982.- 151 с.

5. Арион В.Я. Выделение, физико-химические свойства и биологическая активность Т-активина // Итоги науки и техники. Сер. Иммунология. М. - 1982. - Т. 10. - С. 45-53.

6. Арсеньев В.А. Байкальский тюлень, или байкальская нерпа // Млекопитающие Советского Союза / Под ред. В.Г. Гептнера и Н.П. Наумова, М.: Высшая школа, 1976. - Т.2. - Ч.З. - С. 220-231.

7. Арутюнов Г.П., Костюкевич О.И., Хадышьян Г.Г. Немедикаментозные методы коррекции системного воспаления при заболеваниях сердечно-сосудистой системы // Сердце. 2005. - Т.4. - №5. -С. 268-272.

8. Баллюзек Ф.В., Куркаев A.C., Сенте Л. Нанотехнологии для медицины. М.: ООО «Сезам-Принт», 2008. 103 с.

9. Балышева В.И., Власова H.H., Селина O.E., Белов С.Ю., Сухорукое Г.Б., Марквичева Е.А. Микрокапсулирование ДНК как способ доставки ДНК-вакцин // Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние и дикие животные. 2007. - №1. - С. 25-26.

10. Барабой В.А. Механизмы стресса и перекисного окисления липидов //Успехи совр. биол.- 1991.-Т.111.-Вып.6.-С. 923-931.

11. Баранов B.C. Генная терапия медицина XXI века // Соросовский образовательный журнал. - 1999. - №3. - С. 63-68.

12. Баранова JI.B. Эпизоотия и болезни тюленей // Вспышка чу^ы плотоядных у байкальской нерпы. Новосибирск: Наука, 1992. - С. 7-12.

13. Батуев K.M. К вопросу сравнительной морфологии пейеровых бляшек некоторых домашних и лабораторных животных // Тр. Пермского мединститута. 1968. - Т.81. - №4. - С. 45-51.

14. Белоусов Ю.Б., Тхостова Э.Б. Классы гипотензивных препаратов: стратегия и тактика выбора первого препарата // Сердце. 2002. - Т.1. - №5. - С. 220-226.

15. Берюшева Е.А. Возрастные изменения клеточного состава брыжеечного лимфатического узла крыс // Вестник Белоцерковского государственного аграрного университета. 2005. - Вып.2. - С. 11-15.

16. Биохимия. Практикум для студентов университетов / Под ред. Астаниани. М.: Изд-во МГУ, 1989. - С. 45-47.

17. Бобовникова Ц.И., Вирченко Е.П., Дибцева A.B. и др. Водные млекопитающие — индикаторы присутствия хлорорганических пестицидов и полихлорированных бифенилов водной среде /У Гидробиологический журнал. 1986. - Т.22. - №2. - С. 63-66.

18. Богданов Е.В., Свиридов Ю.В., Московцев A.A., Жданов Р.И. Невирусный перенос генов in vivo в генной терапии // Вопросы медицинской химии. 2000. - №1. - С. 234-251.

19. Богданова И.А., Овчинников К.Г., Торбенко В.П., Герасимов A.M. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1987. - Т. 103. - №13. - С. 659.

20. Бодоев A.B. Влияние экстракта черных листьев бадана толстолистного и его лекарственной формы на течение раневых повреждений кожи. Дис. . к.м.н. Улан-Удэ, 1999. - 111 с.

21. Бородина Т.Н., Румш Л.Д., Кунижев С.М., Сухоруков Г.Б., Ворожцов Г.Н., Фельдман Б.М., Марквичева Е.А. Полиэлектролитные микрокапсулы как системы доставки биологически активных веществ // Биомедицинская химия. 2007а. - Т.53. - №5. - С. 557-565.

22. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д.П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. М., 1991. - 268 с.

23. Бурлакова Е.Б. Изучение аддитивного антиокислительного действия суммы природных антиоксидантов липидов // Вопросы медицинской химии. 1990. - Т.36. - №4. - С. 72-74.

24. Буянтуев Б.Р. Прибайкалье. Улан-Удэ: Бурятско-Монгольское книжное издательство, 1955. - С. 16-27.

25. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И., Козлов A.B., Осипов А.Н., Рощупкин Д.И. Свободные радикалы в живых системах. Итоги Науки и техники. Серия: Биофизика. 1991. - Т.29. - 252 с.

26. Водовозова Е.Л., Кузнецова Н.Р., Кадыков В.А., Хуцян С.С., Гаенко Г.П., Молотковский Ю.Г. Липосомы как нано-носители липидных конъюгатов противоопухолевых агентов мелфалана и метотрексата // Российские нанотехнологии. 2008. - Т.З. - №3-4. - С. 162-172.

27. Вспышка чумы плотоядных у байкальской нерпы (1987-1988) / Под ред. М.А. Грачева. Новосибирск: Наука, 1992. - 71 с.

28. Выренков В.Е., Шишло В.К., Антропова Ю.Г., Рыжова А.Б. Современные данные о структурно-функциональной организации лимфатического узла // Морфология. 1995. - Т. 108. - №3. - С. 84-90.

29. Галазий Г.И. Байкал в вопросах и ответах. М.: Мысль, 1987. - 221с.

30. Галактионов В.Г. Иммунология. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1998. 479с.

31. Геннис Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функции. Пер. с англ. М.: Мир, 1997. - 624 с.

32. Гичев Ю.Ю., Гичев Ю.П. Руководство по биологически активным пищевым добавкам. М.: Триада-Х, 2001. - С. 30-82.

33. Глаголев A.A. Геометрические методы количественного анализа агрегатов под микроскопом. Львов: Госгеолитиздат, 1941. - 82 с.

34. Гладыш А.П., Пронин Н.М. Жалцанова Д.-С.Л. Многолетние изменения биологических показателей и зараженности байкальской нерпы //

35. Вопросы развития рыбного хозяйства в бассейне озера Байкал. Д.: Промрыбвод, 1984. - С. 100-108.

36. Говядинова A.A., Ланге М.А., Хрущов Н.Г. Гемопоэтические органы уникальной локализации у осетровых рыб // Онтогенез. 2000. - Т.31. . с. 440-445.

37. Грачев Е.А. О работах по изучению байкальской нерпы и ее промысла // Фонды Сибирск. отделения ВНИОРХ. Иркутск, 1934. - С. 105.

38. Грачев М.А. О современном состоянии экологической системы озера Байкал. Новосибирск: Изд-во СО РАН, 2002. - 156 с.

39. Грегориадис Г., Аллисон Л. Липосомы в биологических системах. -М.: Медицина, 1983. 256 с.

40. Григоренко Д.Е. Лимфоидные структуры двенадцатиперстной кишки человека в подростковом и юношеском возрасте // Морфология. -2002. №5. - С. 63-65.

41. Григоренко Д.Е. Динамика возрастных изменений микроструктуры лимфоидной бляшки человека // В сб. "Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии". Тр. НИИ МЧ РАМН. М., 2004. - С. 89-91.

42. Григорьев B.C. Возрастные особенности микроморфологии вилочковой железы и лимфатических узлов свиней // Проблемы животноводства и пути их решения. Самара. - 1998. - С. 95-97.

43. Грошева Е.И. Содержание тяжелых металлов в гидробионтах озера Байкал // Проблемы экологии Прибайкалья: Тез. докл. III Всесоюз. науч. конф. Иркутск, 1988. - 4.2. - С. 14.

44. Грошева Е.И., Бобовникова Ц.И., Рензони А. Приоритетные хлорорганические соединения в тканях нерпы озера Байкал // Экология. -1996. №5. - С. 390-392.

45. Гублер И.В., Генкин A.A. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. Л., 1973. -53 с.

46. Гурин И.С., Ажгихин И.С. Биологически активные вещества гидробионтов источник новых лекарств и препаратов. - М.: Наука, 1981. -С. 24-28.

47. Гурова JI.A., Пастухов В.Д. Питание и пищевые взаимоотношения пелагических рыб и нерпы Байкала. Новосибирск: Наука, 1974. - 184 с.

48. Деев С.М., Лебеденко E.H., Петров Р.В. Наноантитела // Международный форум по нанотехнологиям Rusnanotech-08: сб. тез. докл., М., 2008. С. 66-67.

49. Демченко А.И., Заварзина Г.А., Лаврентьева В.Б., Усов Л.А. Химический состав липидов байкальской нерпы // Морфологические и экологические исследования байкальской нерпы. Новосибирск: Наука. СО РАН, 1982. - С. 39-57.

50. Дмитриева О.Ю. Немедикаментозные методы профилактики и лечения метаболического синдрома // Метаболический синдром / Ред. Ройтберг Г.Е. М.: МЕДпресс-информ, 2007. - С. 161-180.

51. Долгова М.А., Кульбах О.С., Подосинников И.С. Строение тимуса, лимфатических узлов подвздошной кишки и брыжейки у крыс на разных сроках беременности // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1985. -Т.89. -№Ю.-С. 71-76.

52. Дроговоз С.М. Нарушение интенсивности желчеотделения и химического состава желчи при дистрофии печени, вызванной четыреххлористым углеродом // Вопросы медицинской химии. 1971. - Т. 17. - Вып.4. - С. 397-400.

53. Егоров И.А., Ивахник Е.В. Обогащение яиц кур селеном и витамином Е // Птица и птицепродукты. 2006. - №2. - С. 42-44.

54. Ерофеева Л.М. Строение и цитоархитектоника тимуса человека в подростковом и юношеском возрастных периодах // Морфология. 2002. -№6. - С. 37.

55. Забродин В.А. Анатомические варианты формы тимуса взрослого человека // Морфология. 2002. - Т. 121. - №2-3. - С. 54.

56. Забродин В.А. Оценка асимметрии тимуса взрослого человека по его макропараметрам на основе корреляционного анализа. // Вестник новых медицинских технологий. 2003. - Т.Х. - №1-2. - С. 58-59.

57. Зайцев С.Ю. Супрамолекулярные системы на границе раздела баз как модели биомембран и наноматериалы. Донецк; М.: Норд Компьютер, 2006.-189 с.

58. Зайцев С.Ю. От супрамолекулярных биохимических систем к биомедицинским нанотехнологиям. М.: Изд-во ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2008.-21 с.

59. Зайцев С.Ю. Супрамолекулярные наноразмерные системы на границе раздела фаз: Концепции и перспективы для бионанотехнологий. -М.: ЛЕНАНД, 2010. 208 с.

60. Заключение государственной экологической экспертизы «Прогноз общих допустимых уловов (добычи) рыбы и нерпы в озере Байкал в 2004 году» (рук.). М.: Минприроды РФ. - 2003.

61. Зилов Е. А. Химия окружающей среды: учебное пособие. Иркутск: Иркут. ун-т. - 2006. - 148 с.

62. Иванов Т.М. Байкальская нерпа, ее биология и промысел // Изв. Биол.-географ. НИИ при Вост.-Сиб. гос. университете. Иркутск, 1938. -T.VIII. - Вып. 1-2. - С. 5-119.

63. Ивановская Т.Е., Зайратьянц О.В., Леонова Л.В., Волощук И.Н. Патология тимуса у детей. Санкт-Петербург: СОТИС, 1996. - 270 с.

64. Имельбаева Э.А. Иммунологические, иммуноцитохимические и биохимические методы исследования фагоцитирующих клеток. Методические рекомендации. Уфа, 1996. - 87 с.

65. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фриммеля. М., 1987. - С. 244-246.

66. Исаева Н.М., Козиненко И.И. Влияние химических соединений на иммунный статус рыб в аквакультуре // Вопросы ихтиологии. 1992. - Т.32. -Вып.1. - С. 157-167.

67. Кабирова И.Р. Характеристика и промышленное использование печени байкальской нерпы на пищевые цели: дис . канд. тех. наук. Улан-Удэ, 2005- 118 с.

68. Каганова Н.В. Изменение содержания глюкозы и эозинофилов в крови афалин (Tursiops truncatus ponticus Barabascn, 1940) // Морские млекопитающие Голарктики: Сб. науч. тр. по материалам третьей международной конференции. М., 2004. - С. 242-244.

69. Калуев A.B. Стресс, тревожность и поведение (актуальные проблемы моделирования тревожного поведения у животных). Киев: CSF, 1998. - 98 с.

70. Каплун А.П., Шон Л., Краснопольский Ю.М., Швец В.И. Липосомы и другие наночастицы как средство доставки лекарственных веществ // Вопросы медицинской химии. 1999. - Т.45. - Вып.1. - С. 5-15.

71. Карбач ЯМ. Количественное определение желчных кислот в желчи и крови с применением хроматографического метода // Биохимия. 1961. -Т.26. - №2. - С. 305-309.

72. Карпов Ю.А. Профилактика осложнений после перенесенного инфаркта миокарда: роль омега-3-полненасыщенных жирных кислот // Сердце. 2005. - Т.4. - №5. - С. 264-266.

73. Кейтс М. Техника липидологии. М.: «Мир», 1975. - 236 с.

74. Киташова A.A. Реакции врожденного и приобретенного иммунитета у рыб в естественных и экспериментальных условиях: автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 2002. - 22 с.

75. Клебанов Г.И., Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О. Оценка антиокислительных свойств плазмы крови с применением желточных липопротеидов // Лабораторное дело. 1988. - №3 - С. 59-62.

76. Клевезаль Г.А., Клейненберг С.Е. Определение возраста млекопитающих (по слоистым структурам зубов и кости). М.: Наука, 1967. - 172 с.

77. Клюев М.А. Лекарственные средства, применяемые в медицинской практике в СССР. М., 1989. - 512 с.

78. Кобаяси Н. Введение в нанотехнологию / Н. Кобаяси. Пер. с японск. М.: БИНОМ, Лаборатория знаний, 2007. 134 с.

79. Ковалев И.Е, Данилова Н.П., Андронати С.А., Жеребин Ю.Л. Влияние эномеланина на гемолиз эритроцитов, вызываемый свободнорадикальными реакциями и др. факторами // Фармакология и токсикология. 1986. - №4. - С.89-91.

80. Ковалевский Г.В. Очерки иммуноморфологии. Новосибирск: Наука, 1976. - 268 с.

81. Коваленко И.В. Тензиометрия ран в повседневной хирургической практике // Клиническая хирургия. 1984. - №1. - С. 52-54.

82. Койгушская Г.П. Морфогенез лимфоидной ткани некоторых органов пищеварительного тракта в постнатальном периоде онтогенеза крою после внутриутробной антигенной стимуляции // Сб. Акт. питания морфогенезу. Черновцы. - 1996. - С. 98.

83. Койгушская Г.П., Колотилкина Т.О. Реактивные изменения брыжеечных лимфатических узлов в онтогенезе // Морфогенез и регенерация: Сб. научн. тр. Курск, 1999. - С. 46.

84. Колпаков А.Д., Колосова Н.Г., Панин Л.Е. Содержание ТФ и продуктов ПОЛ в тканях крыс Вистар в динамике адаптации к холоду // Вопросы медицинской химии 1995. - №6 - С. 31-37.

85. Кондратьева И.А., Киташова A.A. Функционирование и регуляция иммунной системы рыб // Иммунология. 2002. - №2. - С. 97-101.

86. Кондратьева И.А., Киташова A.A., Ланге М.А. Современные представления об иммунной системе рыб. Часть 1. Организация иммунной системы рыб // Вестник Московского университета. 2001. - Сер. 16. - №4. -С. 11-19.

87. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г. и др. Метод определения активности каталазы // Лабораторное дело. 1988. - №6. - С. 1619.

88. Краюшкин А.И. Закономерности конструкции и строения висцеральных и соматических лимфатических узлов, принимающих лимфу от различных органов и регионов тела: автореф. дис. . канд. биол. наук. -М., 1995.-37 с.

89. Крепе Е.М. Липиды клеточных мембран. Л.: Наука, 1981. - 339с.

90. Кудрин А.Н. Современная концепция научной фармакотерапии. Роль питания в регуляции жизнедеятельности и гомеостаза организма // Вестник АМН. 1996. - №12. - С. 20-23.

91. Куликов В.Ю., Семенюк A.B., Колесникова Л.И. Перекисное окисление липидов и холодовой фактор. Новосибирск: Наука, Сиб. отд-ние, 1988.- 192 с.

92. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Структура, свойства, биологическая роль и регуляция глутатионпероксидазы // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113.-Вып. 1. - С. 107-122.

93. Левин Ю.М. Основы лечебной лимфологии. М.: Медицина, 1986.-288 с.

94. Лен Ж.-М. Супрамолекулярная химия: Концепции и перспективы. Новосибирск: Наука, 1998. - 334 с.

95. Ломакина Л.В., Шугалей B.C. Влияние акклиматизации к холоду на активность кислых пептид-гидролаз в обогащенных лизосомальных фракциях тканей мозга и печени крыс /'/' Физиологический журнал СССР. -1980. Т.66. - №3. - С. 400-403.

96. Лопатин Ю.М., Илюхин О.В. Контроль жесткости сосудов.

97. Клиническое значение и способы коррекции // Сердце. 2007. - Т.6. - №3. -п1 ÍU 1 и .

98. Лубсандоржиева П-Н.Б. Фитохимическая характеристика листьев бадана толстолистного и получение адаптогенного средства: дис. . канд. фарм. наук. Улан-Удэ, 1997. - 142 с.

99. Лубсандоржиева П-Н.Б. Серия. Лекарственные растения тибетской медицины. Бадан толстолистный. Улан-Удэ: Изд-во БНЦ СО РАН, 2002.-С. 46-51.

100. Лубсандоржиева П-Н.Б. Антиоксидантная активность экстрактов из BERGENIA CRASSIFOLIA (L.) FRITSCH и VACCINIUM VITIS-IDAEAE (L.) in vitro // Химия растительного сырья. 2006. - №4. - С. 45-48.

101. Майборода A.A., Черняк Б.А. Морфологическая характеристика некоторых органов байкальской нерпы // Морфологические и экологические исследования байкальской нерпы. Новосибирск: Наука. Сибирское отд., 1982.-С. 20-39.

102. Марголис Л.Б., Бергельсон Л.Д. Липосомы и их взаимодействие с клетками. М.: Наука, 1986. - 240 с.

103. Мартынов П.И. Байкальская нерпа: материалы по млекопитающим Баргузинского заповедника // Тр. Баргузинского заповедника. Улан-Удэ, 1960. - Вып.2. - С. 59-61.

104. Махмудов З.А. Возрастные изменения количества верхних брыжеечных лимфатических узлов у взрослого человека // Вестник РУДН.: Сер. Медицина. 1997. - №2. - С. 19-23.

105. Меерсон Ф.З. Адаптивная медицина. М., 1993. - 331 с.

106. Меньшиков В.В., Делекторская JI.H., Золотницкая Р.П. и др. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник. М., 1987. -364 с.

107. Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К., Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов // Успехи соврем, биологии. 1993. -Т. 113. - №4. - С. 442-455.

108. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники. -Медицина: Лен. отд., 1961. 153 с.

109. Методические рекомендации по оценке иммунотоксических свойств фармакологических средств. -М., 1992. — 21 с.

110. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению лекарственных препаратов для местного лечения гнойных ран. М., 1989. - 45 с.

111. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению нестероидных противовоспалительных фармацевтических веществ. М., 1983. - 16 с.

112. Методы биоиндикации и биотестирования природных вод / Сб. тр. под ред. Брызгало В.А. и Хоружей Т.А. Л.: Гидрометеоиздат. - Вып.1. -1987.

113. Микряков В.Р., Попов A.B. Особенности структурно-функциональной организации иммунной системы рыб (на примере русского осетра и волжской стерляди) // Осетровые на рубеже XXI века: Тез. докл. междунар. конф. Астрахань. - 2000. - С. 74-76.

114. Микряков В.Р. Реакция иммунной системы рыб на техногенное загрязнение Шексинского плеса Рыбинского водохранилища // Тез. докл. VIII съезда Гидробиологического общества РАН. Калининград, 2001. - Т.2. - С. 121-126.

115. Мисюра А.Г., Богданова JI.H. Система крови черноморской афалины // Черноморская афалина Tursiops truncatus ponticus: Морфология, физиология, акустика, гидродинамика. М.: Наука, 1997. - С. 186-213.

116. Морфофизиологические и экологические исследования байкальской нерпы / Богданов Л.В., Пастухов В.Д., Иванов М.К. и др.-Новосибирск.: Наука, 1982. 260 с.

117. Нанобиотехнологии: путь в будущее / Под ред. А. Гордеева. М.: Федеральн. агентство по науке и инновациям РФ ООО «Парк-медиа», 2008. -68 с.

118. Нилова Н.С. Полежаева Л.Н. Активность антиоксидатных ферментов синаптосом головного мозга крыс при различном уровне адаптации к стрессу // Биологические мембраны. 1992. - Т.9. - №10. - С. 1092-1095.

119. Озернюк Н.Д. Экологическая биоэнергетика. М.: Знание, 1989.64 с.

120. Ойвин И.А., Шетель С.Л. Методика изучения местных нарушений капиллярной проницаемости // Материалы по патогенезу воспаления и патологии белков крови. Душанбе, 1961. - Т.49. - №5. - С. 167-173.

121. Олейник А.Н. Поражение печени ксенобиотиками и алкоголем, пути повышения эффективности их фармакотерапии: автореф. дисс. . докт. мед. наук. М., 1984. - 50 с.

122. Оленников Д.Н., Танхаева Л.М., Николаева Г.Г., Рохин A.B., Кушнарев Д.Ф. Биологически активные вещества сухого экстракта какали копьевидной // Химия растительного сырья. 2004. - №3. - С. 59-62.

123. Орлов М.М., Каганова Н.В., Мухля A.M. Биохимическая адаптация китообразных при содержании в неволе // Журнал эволюционной биохимии и физиологии. 1991. - Т.27. - №4. - С. 446-451.

124. Пальцев М.А., Иванов A.A. Межклеточные взаимодействия. М., 1995.-224 с.

125. Пастухов В.Д. О некоторых показателях состояния стада и о промысле байкальской нерпы // Морские млекопитающие. М. - 1969. - С. 17-126.

126. Пастухов В.Д. Об экологических и морфо-физиологических адаптивных особенностях байкальской нерпы и причинах, их обусловивших // Тез. докл. V Всесоюзного совещания по изучению морских млекопитающих, 4.1. Махачкала. - 1972. - С. 65-68.

127. Пастухов В.Д. Нерпа Байкала. Новосибирск: Наука, 1993. - 271с.

128. Перлов A.C., Урманов М.И. Об анатомии пищеварительной системы сивучей // Морские млекопитающие. М., 1971. - С. 193-206.

129. Пестерева О.В. Теоретическое обоснование и практические рекомендации использования жира байкальской нерпы на пищевые цели: дисс. . канд. техн. наук. Улан-Удэ, 1995. - 97 с.

130. Петров Е.А. Распределение байкальской нерпы (Pusa sibirica, Pinnipedia, Phocidae) II Зоологический журнал. 1997а. - Т.76, №10. - С. 1202-1209.

131. Петров Е.А. Современное состояние популяции байкальской нерпы // Экологически эквивалентные виды гидробионтов в Великих Озерах Мира: Междунар. симп. Улан-Удэ, 19976. - С. 83-86.

132. Петров Е.А. Современное состояние популяции байкальской нерпы Pusa sibirica: линейно весовые характеристики // Зоологический журнал. - 1999. - Т.79. - №9. - С. 1117-1124.

133. Петров Е.А. Байкальская нерпа: эколого-эволюционные аспекты: автореф. дис. . д-ра биол. наук. Улан-Удэ: Бурят, гос. ун-т., 2003. - 38 с.

134. Петров Е.А. К динамике численности популяции байкальской нерпы (Pusa sibirica Gm.) // Морские млекопитающие Голарктики: Сб. науч. тр. по мат-лам III Междунар. конф. (Коктебель, Крым, Украина, 11-17 октября 2004 г.). М., 2004. - С. 456-460.

135. Пе 1 ров Е.А., Воронов A.B., Егорова Л. И. и др. х 10Ловозрастная структура и репродуктивный потенциал байкальской нерпы (Pusa sibirica, Pinnipedia, Phocidae) // Зоологический журнал. 1997. - Т.76. - №6. - С. 743749.

136. Петров Е.А., Егорова Л.И. Современное состояние популяции байкальской нерпы Pusa sibirica (Pinnipedia, Phocidae). Питание и упитанность // Зоологический журнал. 1998. - Т.77. - №5. - С. 593-600.

137. Петров Р.В. Иммунология и иммуногенетика. М.: Медицина, 1976.-336 с.

138. Петров Р.В. Иммунология. М., 1987. - 456 с.

139. Петров Р.В., Хаитов P.M., Мартынов А.И. Нановакцины и аллерготропины // Международный форум по нанотехнологиям Rusnanotech-08. Сб. тез. докл., 2008. С. 68.

140. Погожева A.B. Сердечно-сосудистые заболевания, диета и ПНЖК cö-З.-М., 2000.-320 с.

141. Погожева A.B. Значение диетотерапии в комплексном лечении сердечно-сосудистых заболеваний // Клиническое питание. 2004а. - №2. -С. 12-17.

142. Погожева A.B. Основы рациональной диетотерапии при сердечно-сосудистых заболеваниях // Клиническая диетология. 20046. -Т.1. - №2. - С. 17-29.

143. Пономарева-Астраханцева Л.З. Метод экспериментальногополучения ран и язв // Воспроизведение заболеваний у животных для экспериментально-терапевтических исследований. М., 1954. - С. 66-73.

144. Пронин Н.М., Жалцанова Д.-С.Д. Паразиты байкальского тюленя: систематический состав // Биоразнообразие байкальской Сибири. -Новосибирск. 1999. - Ст. 2.3.4. - С. 163-166.

145. Пронина C.B. Морфофункциональная характеристика селезенки щенков байкальской нерпы (Pusa sibiica Gmel.) // Морфология. 2006. - Т.29. - №3. - С. 56-58.

146. Прохорович Е.А. Полиненасыщенные жирные кислоты класса омега-3 в профилактике и лечении артериальной гипертонии и ее осложнений // Практикующий врач. 2006. - №1. - С. 2-4.

147. Пупочная В.И. Определение гемоглобина в крови // «Новости Вектор-бест». 2003. - №2 (28). - С. 12-14.

148. Раднаева Л.Д. Академическая лаборатория в университете // Наука в Сибири. 2007. - №32-33. - С. 2617-2618.

149. Раднаева Л.Д., Пестерева О.В., Чиркина Т.Ф., Аверина Е.С., Бодоев Н.В. Исследование химического состава жира байкальской нерпы // Химия в интересах устойчивого развития. 1999. - №7. - С. 713-717.

150. Реакция иммунной системы рыб на загрязнение воды токсикантами и закисление среды / В.Р. Микряков, Л.В. Балабанова, Е.А. Заботина и др. М.: Наука, 2001. - 126 с.

151. Ржавская Ф.М. Жиры рыб и морских млекопетающих // Пищевая промышленность. М., 1976. - С. 43-47.

152. Романов В.В. Иммунный статус афалин, содержащихся в неволе как критерий инфекционной устойчивости: дисс . канд. биол. наук. М., 1991.-230 с.

153. Самбатова Э.И. Экспериментальная фармакотерапия повреждений легких средствами растительного происхождения: дисс. . канд. мед. наук. Улан-Удэ, 2001. - 133 с.

154. Сапин М.Р. Иммунные структуры пищеварительной системы. -М., Медицина, 1987а. 224 с.

155. Сапин М.Р. Принципы организации и закономерности строения органов иммунной системы человека Н Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 19876. - Т.92. - №2. - С. 5-16.

156. Сапин М.Р., Никитюк Д.Б. Иммунная система, стресс и иммунодефицит. М.: Джангар, 2000. 184 с.

157. Сапин М.Р., Этинген J1.E. Иммунная система человека. М.: Медицина, 1996. - 304 с.

158. Сапин М.Р., Юрина H.A., Этинген JI.E. Лимфатический узел. -М.: Медицина, 1977. 272 с.

159. Свиридов Н.С. Опыт учета численности и распределения нерпы на оз. Байкал с помощью самолета // Известия Иркутского с.-х. ин-та. 1955. - Вып.6. - С. 321-331.

160. Свиридов Н.С. Нерпа и ее охрана на Байкале // Краеведческий сборник Бурятского фил. геогр. о-ва СССР. Улан-Удэ, 1958. - Вып.З. - С. 4755.

161. Себякин Ю.Л., Буданова У.А. pH-чувствительные катионные липопептиды для создания транспортных систем медицинского назначения // Биоорганическая химия. 2006а. - Т.32. - №5. - С. 453-458.

162. Себякин Ю.Л., Буданова У.А. Изучение взаимосвязи структура -свойства в ряду катионных липопептидов // Вестник МИТХТ. 20066. - Т.1. -№1.- С. 44-49.

163. Сейфулла Р.Д. Фармакология липосомальных препаратов (в эксперименте и клинике). М.: «Глобус Континенталь», 2010.-241 с.

164. Селина O.E., Белов С.Ю., Власова H.H. и др. Биодеградируемые микрокапсулы с включенной в них ДНК для создания новых ДНК-вакцин // Биоорганическая химия. 2009. - Т.35. - №1. - С. 113-121.

165. Селина O.E., Чинарев A.A., Бартковиак А., Бовин Н.В., Марквичева Е.А. Альгинат-хитозановые микросферы для специфической сорбции антител // Биоорганическая химия. 2008. - Т.34. - №4. - С. 522-529.

166. Сидоров А.И., Манаенков О.В. Сульман Э.М. Инкапсулирование нанолипосом в полисахаридных матрицах на основе альгинатов // Междунар. форум по нанотехнологиям Rusnanotech-OS. Сб. тез. докл. М., 2008. - С. 233.

167. Скакун Н.П. Нейрогуморальный механизм желчегонного действия инсулина // Проблемы эндокринологии и гормонотерапии. 1956. -№6. - С. 75-78.

168. Скакун Н.П., Олейник А.Н. Сравнительное действие атропина и метациона на внешнесекреторную функцию печени // Фармакология и токсикология. 1967. - Т.30. - №3. - С. 334-337.

169. Слоним А.Д. Экологическая физиология животных: Учеб. пособие для студентов биол. специальностей ун-тов. М.: Высшая школа, 1971.-448 с.

170. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии / Под ред. В.Н. Ореховича. — М.: Медицина, 1977. — С. 66-68.

171. Степанов, А.Е. Краснопольский Ю.М., Швец В.И. Физиологически активные липиды. М.: Наука, 1991.- 136 с.

172. Стефанов С.Б. Морфометрическая сетка случайного шага как средство ускоренного измерения элементов морфогенеза // Цитология. -1974. Т. 14. - Вып.6. - С. 785-787.

173. Сторожонок Н.М. Фосфолипиды- важнейшие составляющие неферментативной антиоксидантной системы // Биоантиоксидант / Мат. междунар. симпоз. Тюмень: Изд-во ТюмГУ, 1997. - С. 25.

174. Строев Е. А., Макарова В. Г. Практикум по биологической химии. Учеб. пособие для фармац. вузов и фак. М.: Высш. школа. - 1986. -175 с.

175. Сунцова Н.А. Морфометрические показатели брыжеечных лимфатических узлов нутрии в постнатальном онтогенезе // Сельскохозяйственная биология: Сер. «Биология животных». 2002. - №2. -С. 107-111.

176. Тактаров В. Существуют ли «гены ожирения»? // Les Nouvelles Esthetiques (русское издание). 2004. - №6. - С. 88-94.

177. Тарасова E.H., Мамонтов A.A., Пастухов M.B. Уровень содержания диоксинов и фуранов в байкальской нерпе // Докл. РАН. 1997. -Т.354.-№5.-С. 713-718.

178. Тессенев В. Реакция «трансплантат против хозяина» на мышах гибридах первого поколения /'/' Иммунологические методы. М., 1979. - С. 182-186.

179. Титов В.Н. Жирные кислоты, холестерин и атеросклероз // Пищевые ингредиенты. Сырье и добавки. 2005. - №2. - С. 36-38.

180. Титов И.И., Волошинский A.B., Колодий И.А. Первый опыт эндолимфатического введения тиенама // Вестник научных исследований. -1997. -№1.- С. 75-79.

181. Ткачук В.А., Ширинский В.П., Парфенова Е.В. Конструирование наночастиц для адресной доставки терапевтических средств в клетки и их органеллы // Междунар. форум по нанотехнологиям Rusnanotech-08. Сб. тез. докл. -М., 2008. -С. 191.

182. Торчилин В.П., Смирнов В.Н., Чазов Е.И. Проблеммы и перспективы использования липосом для направленного транспорта лекарств (обзор) // Вопросы медицинской химии. 1982. - Т.28. - №1. - С. 3-12.

183. Тринус Ф.П., Мохорт H.A., Клебанов Б.М. Нестероидные противовоспалительные средства. Киев, 1975. - 240 с.

184. Трясучев П.М. Региональные характеристики структуры и инволюционных изменений подмышечных, шейных, кишечных и брыжеечных лимфатических узлов // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 19836. - Т.84. - №4. - С. 38-44.

185. Трясучев П.М., Чиркина И.А., Олыпанникова В.В. Сопоставления строения печеночных и брыжеечных лимфоузлов белой крысы // Проблемы теоретической медицины и фармации: сб. науч. тр. -Витебск, 1997.-С. 16-18.

186. Тутельян В.А., Самсонов М.А., Левачев М.М., Погожева A.B., Исаев В.А. Применение растительных и животных источников ПНЖК омега-3 в диетотерапии сердечно-сосудистых больных / Методические рекомендации. М.: Институт питания РАМН, 1999. - 20 с.

187. Флоренсов В.А. Кроветворная функция лимфатических узлов в онтогенезе и эволюции позвоночных // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1966. - Т.51. - №9. - С. 48-60.

188. Фрейдлин И.С. Использование культуры мышиных перитонеальных макрофагов в качестве модели для изучения клею к мононуклеарной фагоцитарной системы организма и их изменений под влиянием биологически активных веществ / Метод рекомендации. Л., 1976. -67 с.

189. Хандажапова Б.Б., Муруева Г.Б., Цыдыпов В.Ц. Циркуляция патогенных микроорганизмов в организме байкальской нерпы // Проблемы и перспективы ветеринарии в XXI веке: Междунар. конф.: тез. докл. Улан-Удэ, 2005.-С. 170-171.

190. Хартман У. Очарование нанотехнологии. М.: БИНОМ, Лаборатория знаний, 2007. 134 с.

191. Химия жиров / Тютюнников Б.Н., Гладкий Ф.Ф., Бухштаб З.И. и др. М.: Колос, 1992. - 448 с.

192. Цибулькина Е.А. Иммунолипосомальные системы направленного транспорта малых интерферирующих РНК в клекти-мишени: автореф. дис. . канд. хим. наук. М., 2008. - 24 с.

193. Цыб А.Ф. Лекарственные и радиофармацевтические препараты, создаваемые на основе наномолекулярных технологий // Междунар. форум по нанотехнологиям Rusnanotech-08: сб. тез. докл. М., 2008. - С. 193.

194. Чазова И.Е. Артериальная гипертония. Стандарты сегодняшнего дня и нерешенные проблемы // Сердце. 2002. - Т.1. - №5. - С. 217-219.

195. Чапский К.К. Морские звери Советской Арктики. Л.-М.: Главсевморпути. - 1941. - 187 с.

196. Чевари С., Чаба И., Секкей Й. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах // Лабораторное дело. 1985. - №11. - С. 678-681.

197. Чередеев А.Н. Fc-рецепторы на фагоцитирующих клетках // Иммунология. 1995. - №3. - С. 21-26.

198. Шабров A.B., Дадали В.А., Макаров В.Г. Биохимические основы действия микрокомпонентов пищи. М.: Леовит нутрио, 2003. - 165 с.

199. Шайхова Х.Э., Хакимов A.M., Хорошаев В.А. Морфология регионарных лимфатических узлов при лимфотропной терапии острого отита // Вестник оториноларингологии. 1999. - №2. - С. 8-10.

200. Шалимов С.А., Радзиховский А.П., Кейсевич Л.В. Руководство по экспериментальной хирургии. М., 1989. - 272 с.

201. Швец В.И. Перспективные направления создания эффективных лекарственных препаратов методами нанобиотехнологии // Междунар. форум по нанотехнологиям Rusnanotech-08: сб. тез. докл. М., 2008. - С. 195.

202. Швец В.И., Каплун А.П., Краснопольский Ю.М., Степанов А.Е., Чехонин В.П. От липосом семидесятых к нанобиотехнологии XXI века // Российские нанотехнологии. 2008. - Т.З. - №11-12. - С. 52-56.

203. Шендеров Б.А. Функциональное питание при гипертонической болезни и хронической сердечной недостаточности // Лечащий врач. 2006. -№3. - С. 14-17.

204. Шендеров Б.А. Функциональное питание и его роль в профилактике метаболического синдрома. М.: ДеЛи принт, 2008. - 319 с.

205. Экологическая физиология человека. Адаптация человека к экстремальным условиям среды / Под ред. О.Г. Газенко. М.: Наука, 1979. -704 с.

206. Юрина Н.А. Клеточный состав структурных компонентов регионарных лимфатических узлов человека в возрастном аспекте: дисс. . канд. биол. наук. М., 1971. - 134 с.

207. A prospective study of intake of fish and marine fatty acids and prostate cancer / Augustsson K., Michaud D.S., Rimm E.B., et al. // Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention. 2003. - V. 12. - №1. - P. 64-67.

208. Ai H., Jones S.A., Lvov Y.M. Biomedical Applications of Electrostatic Layer-by-Layer Nano- Assembly of Polymers, Enzymes, and Nanoparticles // Cell Biochem. Biophys. 2003. - V.39. - P. 23-43.

209. Anderson M.E., Dolphin D., Poulson R., Avramovic O. Enzymatic and Chemical Methods for the Determination of Glutathione / Eds. John Wiley // Coenzymes and Cofactors: Glutathione. New York, 1989. - P. 339-366.

210. Antipov A.A., Sukhorukov G.B., Leporatti S., Radtchenko I.L., Donath E., Mohwald H. Polyelectrolyte multilayer capsule permeability control // Colloid. Surf.: Physicochem. Eng. Aspects. 2002. - V.198. - P. 535-541.

211. Bangham A.D., Home R.W. Negative Staining of Phospholipids and their Structured Modification by Surface Agents as Observed in the Electron Microscope // J. Mol. Biol. 1964. - V.8. - P. 660-668.

212. Bannister J.V., Bannister W.H., Rotillio G. Aspects of the structure, function, and applications of superoxide dismutase // CRC Crit. Rev. Biochem. -1987.-V.22.-P. 111-180.

213. Barnett S.A., Dickson R.G. Wild mice in the cold: Some findings on adaptation /7 Biol. Rev. 1989. - V.64. - P. 317-340.

214. Batist G., Barton J., Chaikin P. Myocet (liposome encapsulated doxorubicin citrate): a new approach in breast cancer therapy // Expert Opin. Pharmacother. 2002. - №3. - P. 1739-1751.

215. Bellisle F., Diplock A.T., Hornstra G. et al. Functional Food Science in Europe // British J. Nutrition. 1998. - V.80. - Suupl. 1. - P. 1-193.

216. Bharad Bushan. Springer Handbook of Nanotechnology. Berlin; Heidelberg; N.Y.: Springer, 2nd edition 2007. - 1916 p.

217. Bionanotechnology. Proteins to Nanodevices / Eds. V. Renugopalakrishnan and R.V. Lewis. Berlin; Heidelberg; N.Y.: Springer, 2006. -1916 p.

218. Birdi K.S. Lipid and Biopolymer Monolayers at Liquid Interfaces. N.Y.; London: Plenum Press, 1989. 325 p.

219. Borodina T., Markvicheva E., Kunizhev S., Moewald H., Sukhorukov G., Kreft O. Controlled release of DNA from self-degrading microcapsules // Macromol Rap Communications. 2007. - V.28. - P. 1894-1899.

220. Boyd B.J. Colloidal drug delivery // Drug Delivery Report. -Autumn/Winter 2005. P. 63-69.

221. Brigger I., Dubernet C, Couvreur P. Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis // Adv. Drug Deliv. Rev. 2002. - V.54. - P. 631-651.

222. Caruso F., Fiedler H., Haage K. Assembly of beta-glucosidase multilayers on spherical colloidal particles and their use as active catalysts // Colloid. Surf.: Physicochem. Eng. Aspects. 2000. - V. 169. - №1-3. - P. 287-293.

223. Chaplin S. Type 2 Diabetes: Prevention and Management. ILSI Europe Concise Monograph Series. ILSI. 2005. - 35 p.

224. Claudio N. Nanobiotechnology and Nanobiosciences. N.Y.: World Scientific Publishing Co., 2008. 380 p.

225. Couvreur P., Barratt G., Fattal E., Legrand P., Vauthier C. Nanocapsuie technology : a review // Therapeutic Drag Carrier Systems. 2002. -№19.-P. 99-134.

226. Cowan D.F., Smith. T.Morphology of the lymphoid organs of the bottlenose dolphin, Tursiops truncates II J. Anat. 1999. - V.194. - P. 505-517.

227. Dawson C.A., Horvath S.M. Swimming in small laboratory animals // Med. Sci. Sports Exerc. 1970. - V.2. - N5. - P. 51-78.

228. De Deckere E.A. Possible beneficial effect of fish and fish n—3 polyunsaturated fatty acids in breast and colorectal cancer // Eur J Cancer Prev. -1999. V.8. - №3. - P. 213-221.

229. Effects of n-3 Fatty Acids on Cancer Risk / MacLean M.D., Catherine H. et al. // JAMA (The Journal of the American Medical Assotiation). 2006. -V.295. - №4. - P. 403^415.

230. Ehud G. Plenty of Room for Biology at the Bottom. An Introduction to Bionanotechnology. N.Y.: World Scientific Publishing Co., 2007. - 200 p.

231. Fendler J.H. Membrane Mimetic Chemistry: Characterizations and Applications of Micelles, Microemulsions, Monolayers, Bilayers, Vesicles, Host-Guest Systems and Polyions. N.Y.: Wiley, 1982. 522 p.

232. Ferranti V., Marchais H., Chabenat C., Orecchioni A.M., Lafont O. Primidone-loaded poly-epsilon-caprolactone nanocapsules: incorporation efficiency and in vitro release profiles // International Journal of Pharmaceutics. -1999.-V.193.-P. 107-111.

233. Fessi H., Puisieux F., Devissaguet J.Ph., Ammoury N., Benita S. Nanocapsule formation by interfacial polymer deposition following solvent displacement // International Journal of Pharmaceutics. 1989. - V.55. - P. Rl-R4.

234. Fonntaine J.-J., Pépin M., Pardon P. Comparative histopathology of draining lymph node after infections with virulent or attenuated strains of Salmonella abortusovis in lambs // Veterinary Microbiology. 1994. - V.39. -Iss.l-2.-P. 61-69.

235. Forman H.J., Fisher A.B. Antioxidant defenses // Oxigen and living processes: an interdisciplinary approach / Ed. D.L. Gilbert. New York: SpringerVerlag, 1981.-P. 235-249.

236. Friedrich P. Supramolecular enzyme organization. Quaternary structure and beyond. Budapest: Akademiai Kiado, 1984. P. 3343.

237. Geraci J.R., Medway W. Simulated field blood studies in the bottle-nosed dolphin, Tursiops Truncatus // J. Wildl. Dis. 1973. - №29. - P. 869-875.

238. Ghafoorunissa I.A., Rajkumar L., Acharya V. Dietary (n-3) long chain polyunsaturated fatty acids prevent sucrose-induced insulin resistance in rats // J. Nutr. -2005. V. 135. - №11. - P. 2634-2638.

239. Gilroy D.W., Lawrence T., Perretti M., Rossi A.G. Inflammatory resolution: new opportunities for drug discovery // Nat Rev Drug Discover. 2004. - V.3. - №5. - P. 401-416.

240. Grachev M.A., Kumarev V.P., Mamaev L.V. Distemper virus in Baikal seals // Nature. 1989. - №338. - P. 209-210.

241. Graf A., Jack K.S., Whittaker A.K., Hook S.M., Rades T. Protein delivery using nanoparticles based on microemulsions with different structure-types // European Journal of Pharmaceutical Sciences. 2008. - V.33. - P. 434444.

242. Grahl-Nielsen O., Halvorsen A.-K., Bodoev N. et al., Fatty acid composition of the blubber of Baikal Seal, Phoca sibirica, and its marine relative, the ringed seal, Phoca hispida II Mar Ecol Prog Ser. 2005. - V.305. - P. 261274.

243. Gray D. Understanding germinal centre // Res. Immunol., 1991. -V.142. №3. - P. 236-242.

244. Gregoriadis G. Engineering liposomes for drug delivery: progress and problems // Trends Biotechnol. 1995. - V.13. - №12. - P. 527-537.

245. Gregoriadis G., Bacon A., Capparos-Wanderley W. et al. Plasmid DNA vaccines: entrapment into liposomes by dehydration-rehydration // Methods Enzymol. 2003. - V.367. - P. 70-80.

246. Haneef W., Khan G.A., Siddique M. Pathology of mesenteric lymph nodes of buffaloes and cattle with special reference to salmonellosis // Arch. Roum Pathol. Exp. Microbiol. 1990. - V.49. - №3. - P. 229-232.

247. Harris J., Bird D.J. Modulation of the fish immune system by hormones // Veterinary immunology and immunopatology. 2000. - V.77. - P. 163-176.

248. Heiati H., Phillips N.C., Tawashi R. Evidence for phospholipids bilayer formation in solid lipid nanoparticles formulated with phospholipids and triglyceride // Pharmaceutical Research. 1996. - V.13. - №9. - P. 1406-1410.

249. Jonson D.W., Beckman K., Fellenberg A.J. et al. Monoenoic fatty acids in human brain lipids: isomer identification and distribution // J. Lipids. -1992.-V.27.-P. 177-180.

250. Kay A.B. Eosinophils as effector cells in immunity and hypersensitivity disorders // Clin. Exp. Immunol. 1985. - V.62. - P. 1-9.

251. Kubik T., Bogunia-Kubik K., Sugisaka M. Nanotechnology on duty in medical applications // Current Pharmaceutical Biotechnology. 2005. - V.6. -№1. - P. 17-33.

252. Lambert G., Fattal E., Couvreur P. Nanoparticulate systems for the delivery of antisense oligonucleotides // Adv. Drug. Deliv. Rev. 2001. - V.47. -№1. - P. 99-112.

253. Lands W.E. Actions of anti-inflammatory drugs // Trends Pharmacol. Sci. 1981. - №2. - P. 78-80.

254. Li W., Ishida T., Okada Y. et al. Increased gene expression by cationic liposomes (TFL-3) in lung metastases following intravenous injection // Biol. Pharm. Bull. 2005. - V.28. - №4. - P. 701-706.

255. Liu Y-J., Johnson G.D., Gordon J., Maclennan I.C. Germinal centres in T-cell-dependent antibody responses // Immunol. Today, 1992. V.13. - №1. -P. 17-21.

256. Lvov Y., Antipov A., Mamedov A., Mohwald H., Sukhorukov G. Urease encapsulation in nanoorganized microshells // Nano Letters. 2001. - V.l. -P. 125-128.

257. Lvov Y., Moehwald H. Protein Architecture: Interfacial Molecular Assembly and Immobilization Biotechnology. N.Y.: Marcel Dekker Publ., 2000. -394 p.

258. Lvov Y.M., Lu, Z., Schenkman, J, B., Zu, X., and Rustling, J. F. Direct electrochemistry of myoglobin and cytochrome P450(carn) in alternate layer-by-layer films with DNA and other polyions // J. Am. Chem. Soc. 1998. -V.120.-P. 4073-4080.

259. Maier T., Jenni S., Ban N. Architecture of mammalian fatty acid synthase at 4.5 A resolution // Science. 2006. - V.311. - P. 1258-1262.

260. Marino S., Kirshner D.E. The human immune response to Mycobacterium tuberculosis in lung and lymph node // Journal of Theoretical Biology. 2004. - V.227. - Iss.4. - P. 463-486.

261. Markvicheva E., Dugina T., Grandfils Ch., Lange M., Stashevskaya K., Vasilieva T., Rumsh L., Strukova S. Use of bioencapsulated proteinases and peptides for wound healing, Charter 12 // Advanced Biomaterials for Medical

262. Applications, Series II Mathematics, Physics and Chemistry / D.W. Thomas. (Ed.). Dordrecht; Boston; London: Kluwer Academic Publishers, 2004a. P. 165-176.

263. Morin C., Barratt G., Fessi H., Devissaguet J.P., Puisieux F. Improved intracellular delivery of a muramyl dipeptide analog by means of nanocapsules // International Journal of Immunopharmacology. 1994. - V.16. - P. 451-456.

264. Nagata H., Hokary R., Suzuki H. In vivo identification of parasinus macrophages in the mesenteric lymph node // Clin. Hemorheol. Microcirc. 2000. - V.23. - №2-4. - P. 345-348.

265. Nanobiotechnology: Concepts, Applications and Perspectives / Eds. By C.M. Niemeyer and C.A. Mirkin. Wiley-VCH, 2004 491 p.

266. Nekam K. Fudenberg H.H. Strelkanskas A.J. Identification of "activ" T-lymphocytes among effector cells in guinea pigs // Immunopharmacol. 1982. -V.5. - №1. - P. 85-94.

267. Nielsen J. Immunological and hematological parameters incaptive Harbor seals {Phoca-vitulina) II Marine mammal science. 1995. - T.l 1. - №3. - P. 00314-00323.

268. Niemeyer C.M., Mirkin C.A. Nanobiotechnology: Concepts, Applications and Perspectives. Wiley-VCH, 2004. - 491 p.

269. Pahlavani M.A., Ichardson A., Cheung H.T. Age-dependent changes of the mesenteric lymph node of Fisher F344 rats: morphological and histometric analasis // Mech. Ageing Dev. 1987. - V.39. - №2. - P. 137-146.

270. Puglisi G., Fresta M., Giammona G., Ventura C.A. Influence of the preparation conditions on poly(ethylcyanoacrylate) nanocapsule formation // International Journal of Pharmaceutics. 1995. - V.125. - P. 283-287.

271. Pullarkat R.K., Reha H. Distribution of positional isomers of monoenoic fatty acids in pig-brain white matter sphingolipids // J. Neurochem. -1976. V.27. -№1. - P. 321-322.

272. Racker E. Clutatione reductase from baker's yeast and beef liver// J Biol. Chem. 1955. - V.217. - №2. - P. 855-865.

273. Ramadas M., Paul W., Dileep K.J. et al. Lipoinsulin encapsulated alginate-chitosan capsules: intestinal delivery in diabetic rats // J. Microencapsul. 2000. V. 17. - №4. - P. 405-411.

274. Romano T., Felten S.Y., Olshowka J.A. A microscopic investigation of the lymphoid organs in the beluga, Delphinapterus leucas II Journal of Morphology. 1993. - V.215. - P. 261-287.

275. Romano T., Felten S.Y., Olshowka J.A. Noradrenic and peptidergic innervation of lymphoid organs in the beluga, Delphinapterus leucas: an anatomical link between the nervous and immune system // Journal of Morphology. 1994. - V.221. - P. 243-259.

276. Sampath H., Ntambi J.V. Polyunsaturated fatty acid regulation of genes of lipid metabolism // Ann. Rev. Nutr. 2005. - V.25. - P. 317-340.

277. Selye H. A syndrome produced by diverse nocuous agents // Nature. -1936.-V.3479.-P. 32.

278. Serhan C.N., Brain S.D., Buckley C.D., Gilroy D.W., Haslett C, O'Neill L.A., Perretti M., Rossi A.G., Wallace J.L. Resolution of inflammation: state of the art, definitions and terms // FASEB J. 2007. - V.21. - P. 325-332.

279. Shi X., Wang S., Chen X., Meshinchi S., Baker J.R. Encapsulation of Submicrometer-Sized 2-Methoxyestradiol Crystals into Polymer Multilayer Capsules for Biological Applications // Molecular Pharmaceutics. 2005. - V.3. -№2.-P. 144-151.

280. Shin E.J., Ko K.H., Kim W.K. et al. Role of glutathione peroxidase in the ontogeny of hippocampal oxidative stress and kainate seizure sensitivity in the genetically epilepsy-prone rats // Neurochem. Int. 2008. - V.52. - P. 1134-1147.

281. Sies H. Glutathione and its role in cellular functions // Free Radic. Biol. Med. 1999. - V.27. - P. 916-921.

282. Springer Handbook of Nanotechnology / Ed. Bharad Bushan. Berlin; Heidelberg; N.Y.: Springer, 2nd edition 2007. 1916 p.

283. Stults F.H., Forstrom J.W., Chiu D. T.Y., Tappel A.L. Rat liver glutathione peroxidase: Purifi cation and study of multiple forms // Arch. Biochem. Biophys. 1977. -V. 183. - P. 490-497.

284. Taniguchi I., Sakurada A., Murakami G. Comparative histology of lymph nodes from aged animals and humans with special reference to the proportional areas of the nodal cortex and sinus // Annals of anatomy. 2004. - P. 337-347.

285. Teplyi D.L. Surfactant activity and lipid peroxidation in cold exposure and after alpha-tocopherol administration// Ross. Fiziol. Zh. im. I.M. Sechenova. -1997. V.83. - №10. - P. 63-67.

286. Torchilin V. Nanoparticulates as Drug Carriers. N.Y.: World Scientific Publishing Co., 2006. - 756 p.

287. Ulman A. An introduction to Ultrathin Organic Films from Langmuir-Bblodgett to Self-assembly. Boston: Acad. Press, 1991. 442 p.

288. USPTO Patent №20060002994 "Responsive liposomes for ultrasonic drug delivery". 2006.

289. Vaugn D.M., Reinharr G.A., Swaim S.F. Evaluation of dietary n-6 to n-3 fatty acid ratios on leukotriene B synthesis in dog skin and neutrophils // J. Vet Intern Med. 1994. - V.8. - P. 188.

290. Vauthier C., Dubernet C., Fattal E., Pinto-Alphandary H., Couvreur P. Poly(alkylcyanoacrylates) as biodegradable materials, for biomedical applications // Advanced Drug Delivery Reviews. 2003. - V.55. - P. 519-548.

291. Vita A.J. et al. The effect of nutritional prevention of cardio-vascular disease // Circulation. 2000. - V.102. - P. 846-851.

292. Volodkin D.V., Larionova N.I., Sukhorukov G.B. Protein encapsulation via porous CaCOs microparticles templating // Biomacromolecules. 2004a. - V.5. - P. 1962-1972.

293. Volodkin D.V., Petrov A.I., Prevot M., Sukhorukov G.B. Matrix Polyelectrolyte Microcapsules: New System for Macromolecule Encapsulation // Langmuir. 2004b. - V.20. - P. 3398-3406.

294. Watanabe I., Tanabe Sh., Amano M., Miyazaki N., Petrov E.A., Tatsukawa R. Mercury and cadmium accumulation of Baikal seal and Caspian seal

295. Proceedings of 6th Intern. Conf. on the H. Iwata, Conservation and Management of Lakes-Kasumugaura. 1995a. - V.2. - P. 1179-1182.

296. Watanabe I., Tanabe S., Tatsukawa R., Amano M., Miyazaki N., Petrov E.A. Specific Accumulation of Heavy Metals in Relict Pinnipeds, Baikal Seals and Caspian Seals // Second SETAC World Congress. Vancouver, Canada, 1995b.-P. 243.

297. Watanabe I., Ichihashi H., Tanabe S., Amano M., Miyazaki N., Petrov E., Tatsukawa R. Trace element accumulation in Baikal seal {Phoca sibirica) from the Lake Baikal // Environmental Pollution. 1996. - V.94. - P. 169-179.

298. Weiss S. Oxygen, ischemia and inflammation // Acta Physiol. Scand. -1986. V.126. - Suppl. 548. - P. 9-57.

299. Wiberg K., Oehme M., Haglund P., Karlsson H., Olsson M., Rappe C. Enantioselective analysis of organochlorine pesticides in herring and seal from the Swedish marine environment // Mar.-Pollut.-Bull. 1998. - V.36. - №5. - P. 345353.

300. Wijendran V., Hayes K.C. Dietary n-6 and n-3 fatty acid balance and cardiovascular health // Ann. Rev. Nutr. 2004. - V.24. - P. 597-615.

301. Yoshihara D., Fujiwara N., Ookawara T. et al. Protective role of glutathione S-transferase A4 induced in copper/zinc-superoxide dismutase knockout mice // Free Radic. Biol. Med. 2009. - V.47. - P. 559-567.

302. Yurasov V.V., Kucheryanu V.G., Kryzhanovsky G.N. et al. Progress in Drug Delivery Systems // Biomedical Research Foundation, Tokio. 1996. -V.5.-P. 171-174.

303. Zapata A. Phytogeny of the fish immune system // Bull. Inst. Pasteur.- 1983. V.81. - №2. - P. 165-186.

304. Zhang L., Hu J., Lu Z. Preparation of Liposomes with a Controlled Assembly Procedure // J. of Colloid and Interface Science. 1997. - V.190. - №1.- P. 76-80.

305. Zimmer A., Kreuter J. Microspheres and nanoparticles used in ocular delivery systems // Advanced Drug Delivery Reviews. 1995. - V. 16. - P. 61-73.

306. И. Кутыреа Г. Ламажапом. С. Жаисаранова

307. И. Кутырев Г. Ламажапова С. Жамсаранова

308. БРЫЖЕЕЧНЫЕ £ ЛИМФАТИЧЕСКИЕ УЗЛЫ I БАЙКАЛЬСКОЙ НЕРПЫ

309. ГИСТОМОРФОЛОГИЯ 8 ПОСТНАТАЛЬНОМ1. ОНТОГЕНЕЗЕ1.»

Информация о работе

Ламажапова, Галина Петровна
доктора биологических наук
Улан-Удэ, 2011
ВАК 06.02.01

Диссертация

Морфология органов иммуногенеза нерпы байкальской и экспериментальная оценка эффективности ее липидов при разных патологиях - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Морфология органов иммуногенеза нерпы байкальской и экспериментальная оценка эффективности ее липидов при разных патологиях - тема автореферата по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы