Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярно-генетическая идентификация вируса, вызвавшего эпизоотию в популяции байкальской нерпы (Phoca sibirica) в 1987-88 гг.

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Деникина, Наталья Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Род Morbillivirus.

1.1. Таксономия рода.

1.2. Структура и состав вириона.

1.3. Организация генома и стратегия репликации морбилливирусов.

1.4. Краткая характеристика генов белков морбилливирусов.

Глава 2. Морбилливирусные эпизоотии у морских млекопитающих.

2.1. Морбилливирусные эпизоотии у ластоногих в 1987-1988гг.

2.2. Морбилливирусные инфекции у китообразных.

2.3. Возможные источники заражения популяций тюленей.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 3. Материалы и методы исследования.

3.1. Материалы.

3.2. Методы.

Глава 4. Выбор последовательностей оснований синтетических олигонуклеотидных зондов для обнаружения РНК вируса чумы плотоядных.

Глава 5. Доказательство методом гибридизации присутствия и активной репликации морбилливирусов в тканях байкальских нерп. Оценка пораженности популяции.

5 1 Результаты гибридизации РНК, выделенной из тканей нерпы РВ6, погибшей в аквариальной, пос.Листвянка, с клинической картиной характерной для вируса чумы плотоядных.

5.2. Сравнительная гибридизация РНК, выделенных из тканей собаки, павшей от СБУ, новорожденного нерпенка, двух условно здоровых нерп разного возраста, и двух погибших на льду нерп.

5.3. Тотальная гибридизация положительных проб РНК со всеми имеющимися зондами.

5.4. Зондирование РНК от 120 условно здоровых нерп, полученных в 1988г. во время весенне-летнего планового отстрела.

5.5. Выявление небольших отличий вируса байкальской нерпы от СБУ гибридизацией с 32Р-меченными зондами на фрагмент М-гена с 484 по 1050 позицию.

Глава 6. Определение таксономического положения морбилливируса байкальской нерпы с помощью сравнительного анализа нуклеотидных последовательностей фрагментов генов N и Р различных вакцинных и диких штаммов СБУ.

6.1. Определение и сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей фрагментов гена N (позиции 595-795) вакцинных штаммов СБУ и изолята вируса от байкальской нерпы.

6.2. Определение и сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей фрагментов гена Р (позиции 439-798) вируса от байкальской нерпы, вакцинных штаммов СБУ и изолятов СБУ от животных.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетическая идентификация вируса, вызвавшего эпизоотию в популяции байкальской нерпы (Phoca sibirica) в 1987-88 гг."

Актуальность проблемы. Осенью 1987 г. на Байкале произошла вспышка острого инфекционного заболевания у байкальских тюленей (Phoca sibirica Gmel., байкальская нерпа), которая привела к гибели более 6000 животных из общего числа 80-100 тысяч (Петров и др., 1992; Пронин, Кабанов, 1992). Ранее эпизоотии у байкальских тюленей не регистрировались. Заболевание сопровождалось симптомами, характерными для морбилливирусных инфекций (Бейм, 1988). В декабре 1987 г. во время экспедиции на Малые Ушканьи острова было замечено, что из пяти собак, имевших тесный контакт с больными нерпами, три умерли с типичными признаками чумы плотоядных. На основании опроса местных жителей (метеорологов) В.С.Колесник, сотрудник Иркутского противочумного института Сибири и Дальнего Востока, высказал предположение, что эпизоотия в популяции байкальской нерпы вызвана вирусом чумы плотоядных.

Сыворотки крови больных нерп давали слабо положительный ответ в реакции с антителами к вирусу кори (род Morbillivirus, семейство Paramyxoviridae). При радиоиммунометрии и при иммуноферментном анализе обнаруживались антитела к вирусу чумы плотоядных (CDV) у 60-80 % животных (Grachev et al., 1989).

Эти результаты, а также предварительные данные патоморфологических исследований были обсуждены в ноябре 1988 г. на состоявшемся в Иркутске рабочем совещании и послужили основанием для того, чтобы считать CDV, или родственный ему вирус, наиболее вероятной причиной болезни нерпы. Обсуждались и возможные источники заболевания; так, одним из вероятных считали живые вакцины против CDV, используемые в пушном звероводстве в Т окресности озера Байкал.

К 1988 г. были описаны 4 вида рода Morbillivirus-, вирус кори (MV), чумы крупного рогатого скота (RPV, риндерпест), чумы мелких жвачных (PPRV) и чумы плотоядных (CDV). Считалось, что каждый представитель рода имеет свой круг хозяев (Barrett, 1991), так, вирус чумы плотоядных может поражать представителей 5 из 7 семейств отряда хищных. Данных о восприимчивости к морбилливирусам не только байкальских тюленей, но и других представителей отряда ластоногих, не было. Поэтому гипотеза о морбилливирусной инфекции, как причине массовой гибели байкальской нерпы, требовала серьёзного подтверждения, как и гипотеза о причастности живых анти-CDV вакцин к заражению популяции. Кроме того, через шесть месяцев после массовой гибели байкальской нерпы, в апреле 1988 г., эпизоотия охватила тюленей в Северном и Балтийском морях. Наблюдался массовый падёж серых (Halichoerus gryphus) и обыкновенных (Phoca vitulina) тюленей. Европейскими учеными было выдвинуто предположение о вирусе герпеса, как о причине эпизоотии (Osterhaus, 1988). Но уже предварительные серологические исследования убедительно показали, что животные поражены вирусом CDV или близкородственным ему (Osterhaus, Vedder, 1988), а в 1989 г. антитела к вирусу чумы плотоядных или близкородственному ему вирусу были обнаружены у тюленей на побережье Гренландии (Dietz, 1989). Естественно возник вопрос о возможной взаимосвязи этих эпизоотий и путях заражения столь отдалённых друг от друга популяций.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилась молекулярно-генетическая идентификация вируса, вызвавшего массовую гибель байкальской нерпы, определение его видовой принадлежности, проверка гипотез о живых анти-CDV вакцинах, как о возможных источниках инфекции и о связи эпизоотий байкальских и европейских тюленей. Для этого необходимо было последовательно решить следующие задачи:

1. Подобрать структуры олигонуклеотидных зондов для определения наличия вирусспецифических РНК в образцах тканей павших и больных животных на основании сравнения опубликованных нуклеотидных последовательностей известных морбилливирусов (Rozenblatt et al., 1985, Barrett et al., 1985, Bellini et al., 1986).

2. Показать наличие как вирионной, так и матричных морбилливирусных РНК в тканях павших и больных животных, используя метод гибридизации.

3. Определить по результатам гибридизации наиболее консервативные участки генома морбилливирусов, пригодные для использования в полимеразной цепной реакции (ПЦР) в качестве универсальных праймеров при массовой диагностике морбилливирусных инфекций. Оптимизировать условия экспресс -диагностики морбилливирусных инфекций методом ПЦР с использованием образцов тканей, минуя этап культивирования вируса.

4. Амплифицировать фрагменты генома морбилливируса байкальской нерпы и других штаммов вируса чумы плотоядных, включая вакцинные штаммы. Клонировать и определить их нуклеотидную последовательность.

5. Определить видовую принадлежность морбилливируса байкальской нерпы и степень его родства с вакцинными штаммами СОУ и вирусом обыкновенных тюленей (РЭУ) на основе полученных в ходе работы и имеющихся в литературе данных о нуклеотидных последовательностях морбилливирусов.

Научная новизна и практическая значимость работы. В представленной работе впервые молекулярно - биологическими методами было показано, что вирус чумы плотоядных может не только поражать представителей отряда ластоногих, в частности, байкальскую нерпу (Ркоса $1Ыг1са), но и являться причиной массовой гибели этих животных. Впервые для идентификации природной инфекции был использован метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), отработаны методы обработки собранного материала и выделения РНК, позволяющие в кратчайшие сроки идентифицировать инфекционный агент. Впервые была разработана и предложена для использования в ПЦР-диагностике природных морбилливирусных инфекций система универсальных морбилливирусных праймеров. Определены нуклеотидные последовательности фрагмента гена белка нуклеокапсида длиной 200 нуютеотидов для изолята вируса байкальской нерпы и реизолированного вакцинного штамма и участка кодирующей области гена фосфопротеина длиной 380 нуклеотидов для изолятов CDV, полученных от хорька, собаки и байкальской нерпы, а так же для двух вакцинных штаммов и РНК, выделенной непосредственно из мозга павшей нерпы. Установлены филогенетические связи вируса байкальской нерпы. Показано, что живые коммерческие вакцины, используемые в звероводстве, не были причиной эпизоотии байкальской нерпы. Показано отсутствие близкой связи между вирусом байкальской нерпы и Р0У.

Использованные в работе методы позволяют в относительно короткий срок показать наличие активно размножающегося вируса в организме животного, а потому являются перспективными для быстрой диагностики морбилливирусной инфекции в природных популяциях и могут быть полезны при мониторинговых исследованиях ластоногих.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Эпизоотия в популяции байкальской нерпы в 1987-1988гг. вызвана морбилливирусом.

2. Морбилливирус, вызвавший эпизоотию у байкальской нерпы, является вирусом чумы плотоядных.

3. Коммерческие живые вакцины против вируса чумы плотоядных непричастны к заражению популяции байкальской нерпы.

4. Вирус, поразивший популяцию байкальской нерпы, не был причиной эпизоотии у обыкновенных и серых тюленей в Северной Европе.

Апробация работы и публикации. Материалы диссертации были представлены на Международном симпозиуме "Morbillivirus infections" (Hannover, 1994). По материалам диссертации опубликовано у статей.

Структура и объем работы. Предлагаемая диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы (две главы), 3-х глав собственных исследований, заключения, выводов и списка использованной литературы (153 отечественных и зарубежных источников). Обьем работы составляет 107 страниц машинописного текста, включающего 5 таблиц и 13 рисунков.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Деникина, Наталья Николаевна

ВЫВОДЫ.

1. Доказано присутствие и активная репликация морбилливирусных РНК в тканях байкальских тюленей с использованием метода гибридизации с набором радиоактивно меченых праймеров, комплементарных вирионной и матричной РНК вируса кори человека и вируса чумы плотоядных.

2. Показано с использованием метода гибридизации, что уровень пораженности популяции байкальской нерпы морбилливирусом составлял 70%.

3. Установлено в результате гибридизации при разных температурах и сравнительного анализа последовательностей фрагмента гена белка нуклеокапсида, что морбилливирус, поразивший популяцию байкальской нерпы, является штаммом СБУ.

4. Показано в результате сравнительного анализа полученных последовательностей фрагмента гена фосфобелка длиной 380 пн изолятов вируса чумы плотоядных, выделенных от собаки и хорька, вируса от байкальских тюленей и двух коммерческих вакцинных штаммов, применяемых в окресностях озера Байкал, что использованные в окресностях озера Байкал живые вакцины против вируса чумы плотоядных (штамм ЯоскЬот и коммерческая живая вакцина от 811епп^-Р1о1щ11 Согрогайоп) имеют низкую степень родства с вирусом от байкальских тюленей. Следовательно, маловероятно, что они явились источником заражения байкальских тюленей.

5. Показано в результате сравнительного анализа определенных последовательностей фрагмента гена фосфобелка длиной 380 пн, что эпизоотии европейских и байкальских тюленей не имеют этиологических связей.

6. Отработана и предложена к использованию система универсальных морбилливирусных праймеров, позволяющая в короткие сроки осуществлять дифференциальную диагностику морбилливирусных инфекций в популяциях различных животных.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Целью изложенной выше работы была идентификация вируса, вызвавшего эпизоотию у байкальской нерпы (Ркоса вШпса) в 1987-1988гг. Под идентификацией подразумевалось не только определение видовой принадлежности исследуемого вируса, но и исследование внутривидовых генетических взаимосвязей для установления возможного источника инфекционного агента, поразившего популяцию байкальской нерпы, и выяснения связи эпизоотий у байкальских и европейских тюленей.

Поскольку в самом начале эпизоотии на основании клинических данных сотрудником Иркутского противочумного института Сибири и Дальнего Востока В.С.Колесником была выдвинута гипотеза о морбилливирусной природе заболевания, первой задачей работы было выявление морбилливирусных РНК в образцах тканей, взятых у павших тюленей и животных без видимых клинических признаков болезни. Выбранная стратегия гибридизационного

-зл зондирования суммарных РНК Р-мечеными синтетическими олигонуклеотидами, комплементарными как вирионной, так и матричной РНК вируса чумы плотоядных и кори, полностью себя оправдала. Удалось не только доказать присутствие вируса в органах байкальских нерп, но и показать наличие процесса его активной репликации. Кроме того, методом сравнительной гибридизации при переменных температурах с 32Р-мечеными синтетическими олигонуклеотидными зондами была установлена видовая принадлежность исследуемого вируса. Гибридизационный скрининг популяции байкальской нерпы весной-летом 1988г. показал, что около 70 % популяции было поражено вирусом чумы плотоядных, что полностью соответствует данным, полученным в результате иммунологических анализов.

Следующим шагом в идентификации морбилливируса байкальских тюленей было определение его положения внутри вида и проверка предположения о наличии цепи передачи вируса от коммерческих живых анти -СЭУ вакцин через байкальских нерп к тюленям Северной Европы. Для решения этой задачи были определены и проанализированы последовательности фрагментов генов N и Р различных вакцинных штаммов СБУ, а также изолятов от животных и вирусной РНК, выделенной непосредственно из образцов тканей. В результате были получены доказательства отсутствия прямых связей вируса байкальской нерпы как с вакцинными штаммами СБУ, так и с вирусом европейских тюленей. Видимо, источником инфекции байкальской нерпы стали наземные плотоядные, зараженные СОУ.

До эпизоотии на Байкале литературных даных о том, что морбилливирусы могут поражать представителей ластоногих и других водных млекопитающих, не было. Но заболевание байкальской нерпы стало лишь началом большой серии морбилливирусных эпизоотий у представителей различных видов животных, у которых ранее эти инфекции не регистрировались. Эпизоотия у европейских тюленей, у дельфинов Средиземноморья, вспышка СЭУ у крупных кошек в Африке и Северной Америке - все эти факты вызвали значительное усиление интереса к морбилливирусам. Были описаны три новых члена рода - вирус европейских тюленей (РБУ), вирус дельфинов (ЭМУ) и вирус морских свиней (РМУ). На Международном Симпозиуме по морбилливирусным инфекциям, проходившем в Ганновере летом 1994г., были обсуждены все последние данные и высказано предположение о панзоотии морбиливирусных инфекций, вызванной неизвестными, возможно - экологическими, причинами.

Такое внимание международной научной общественности к проблеме морбилливирусных инфекций подтверждает актуальность и важность вышеизложенной работы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Деникина, Наталья Николаевна, Иркутск

1. Бейм A.M., Трошева Е.И., Павлов Б.К. и др. Диагностическое исследование заболевания байкальской нерпы (отчет по хоз. договору с Лимнол. ин-м СО АН СССР). Байкальск, 1988. - 42 с.

2. Бейм A.M., Колесник B.C., Куделин В.М. и др. О клинической симптоматике эпизоотии в популяции байкальской нерпы // Вспышка чумы плотоядных у байкальской нерпы. Новосибирск.:Наука, Сиб-е отд-е,1992. -С.26-30.

3. Белых О.И., Лихошвай Е.В., Солодун Ю.В. и др. Исследования тканей погибших нерп с помощью методов электронной и иммуноэлектронной микроскопии // Вспышка чумы плотоядных у байкальской нерпы. -Новосибирск.:Наука, Сиб-е отд-е,1992. С.36-40.

4. Букринская А.Г., Зайдес В.М. Молекулярная биология парамиксовирусов. -М.: Медицина, 1978. 183 с.

5. Жданов А. Заболела нерпа // Правда. 1987. - 26 декабря.

6. Зорин В.Л., Котенко Ю.Г., Кумарев В.П. и др. Иммунохимический анализ вирусной инфекции байкальской нерпы // Первая Верещагинская байкальская международная конференция (2-7 октября 1988 г.). Иркутск, 1988. - С. 82.

7. Зорин В.Л., Нагиева Ф.Г., Дорофеев В.М и др. Антитела против вируса чумы плотоядных у популяции байкальской нерпы // Вспышка чумы плотоядных у байкальской нерпы. Новосибирск.: Наука, Сиб-е отд-е, 1992. - С. 45-47.

8. Колесник B.C., Бейм A.M., Колесник P.C. и др. Клинико-анатомическая характеристика эпизоотии в популяции байкальской нерпы // Вспышка чумы плотоядных у байкальской нерпы. Новосибирск.: Наука, Сиб-е отд-е, 1992. - С. 30-36.

9. Кумарев В.П. Эпизоотия байкальской нерпы, вызванная вирусом, близкородственным вирусу чумы плотоядных // Первая Верещагинскаябайкальская международная конференция (2-7 октября 1988 г.). Иркутск, 1988. -С. 12-13

10. Лошаков В. Расплата //Правда Бурятии. 1987.- 25 декабря

11. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Молекулярное клонирование М: Мир, 1984.-432 с.

12. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование. (Практическое пособие). М: Наука, 1981.-288 с.

13. Остерхауз А.Д.М.Е., Визер И.К.Г., Зорин В.Л. и др. Заражение собак чумой плотоядных материалом от байкальской нерпы // Вспышка чумы плотоядных у байкальской нерпы. Новосибирск.: Наука, Сиб-е отд-е, 1992а. - С. 52-53.

14. Остерхауз А.Д.М.Е., Визер И.К.Г., Зорин В.Л. и др. Сравнительная характеристика морбилливирусов, изолированных от Phoca vitulina и Ph. sibirica II Вспышка чумы плотоядных у байкальской нерпы. Новосибирск.: Наука, Сиб-е отд-е, 1992b. - С. 60-61.

15. Пастухов В.Д. Нерпа Байкала Новосибирск: ВО "Наука", 1993. - 272с.

16. Петров Е.А., Елагин O.K., Егорова Л.И. и др. Состояние популяции байкальской нерпы // Вспышка чумы плотоядных у байкальской нерпы. -Новосибирск.: Наука, Сиб-е отд-е, 1992. С. 20-26.

17. Пронин Н.М., Кабанов Д.Е. Оценка масштабов гибели байкальских тюленей в 1987 / 1988 гг. // Вспышка чумы плотоядных у байкальской нерпы. -Новосибирск.: Наука, Сиб-е отд-е, 1992. С. 12-20.

18. Солодун Ю.В., Гольдберг O.A., Дмитриев Б.В. Морфологические проявления морбилливирусной инфекции в байкальской нерпе // Первая Верещагинская байкальская международная конференция (2-7 октября 1988 г.). -Иркутск, 1988.-С. 81.

19. Стенограмма рабочего совещания по болезни нерпы на Байкале. -Байкальск. 1988. - 10-12 ноября.

20. Титенко A.M., Зорин B.JI., Борисова Т.И. и Солодун Ю.В. Серологическое исследование сывороток крови нерп Phoca sibirica на присутствие антител к морбилливирусу байкальской нерпы. Иркутск. Иркут. н.-и. противочумн. ин-т. Сиб. и Дал. Вост., 1990. - С. 18.

21. Титенко A.M., Борисова Т.И., Зорин B.J1. и др. Выделение морбилливируса от байкальской нерпы Phoca sibirica и его предварительная характеристика // Вопр. вирусологии. 1991а. -N 1. - С. 57-59.

22. Титенко A.M., Борисова Т.И., Чипанина В.М. и др. Экспериментальное инфицирование нерпы Phoca sibirica морбилливирусом // Вопр. вирусологии. -1991b.-N6.-C. 511-512.

23. Титенко A.M., Борисова Т.И., Зорин B.JI. и др. Изоляция морбилливируса от нерпы // Вспышка чумы плотоядных у байкальской нерпы. Новосибирск.: Наука, Сиб-е отд-е, 1992а. - С. 47-51.

24. Титенко A.M., Зорин B.JL, Борисова Т.И. и др. Серологическое исследование сывороток байкальской нерпы на присутствие антител к ее морбилливирусу // Вспышка чумы плотоядных у байкальской нерпы. -Новосибирск.: Наука, Сиб-е отд-е, 1992b. С. 53-60.

25. Филдс Б.Н., Найп Д.М., Мэрфи Ф.А.и др. Вирусология. Москва.: Мир, 1989,- 1440 с.

26. Чернеску К., Шодорок Й., Кажал Н. Корь. Патогенез и профилактика.-Бухарест, Изд-во АН СРР, 1981. 237 с.

27. Appel M.L.G. Canine distemper virus // Virus infection of Carnivores / Appel M. New York: Elsevier, 1987. - P. 133-159.

28. Appel M.L.G., Reggiardo C., Summers B.A. et al. Canine distemper virus infection and encefalitis in javelinas (collared peccaries) // Arch.Virol. 1991. - V.l 19. -P. 147-152.

29. Appel M.L.G., Yates R.A., Foley A.L. et al. Canine distemper virus epizootic in lions, tigers, and leopards in North America // J.Vet.Diagn. Invest. 1994. - V.6. - P. 277-288.

30. Barrett T. and Underwood B. Comparison of messenger RNAs induced in cells infected with each member of the morbillivirus group // Virology. 1985. - V.145. -P.195-199.

31. Barrett T., Shimpton S.B., Russel S.E.H. Nucleotide sequence of the entire protein coding region of canin distemper virus polimerase associated (P) protein mRNA // Virus Research. 1985. - V.3. - P. 367- 372.

32. Barrett T., Subbarao S., Belsham G.J. et al. The molecular biology of the morbilliviruses // The Paramyxoviruses / Kingsbury D. W. New York: Plenum Press, 1991.-P. 83-102.

33. Barrett T., Visser I.K.G., Mamaev L. et al. Dolphin and porpoise morbilliviruses are genetically distinct from phocine distemper virus // Virology. 1993a. - V.193. - P. 1010-1012.

34. Barrett T., Romero C.H., Baron M.D. et al. The molecular biology of rinderpest and pest des petits ruminants // Ann. Med. Vet.- 1993b. V.137. - P. 77-85.

35. Bellini W.J., Englund G., Rozenblatt S. et al. Measles virus P gene codes for two proteins // J. Virol.- 1985. V.53. - P. 908-919.

36. Bellini W.J., Englund G., Richardson C.D. et al. Matrix gene of measles and canine distemper virus: cloning, nucleotide sequences, and deduced amino acid sequences // J. Virol. 1986. - V. 58, N2. - P. 408-416.

37. Belykh O., Goldberg O., Likhoshway Y.,Grachev M.A. Light, electron and immuno-electron microscopy of organs from seals of Lake Baikal sampled during the morbillivirus infection of 1987-1988 // Europ. J. of Vet. Pathology. 1997.-V.3. - N3. -P. 133-145.

38. Bengtson J.L., Boveng P., Franzen U. et al. Antibodies to canine distemper virus in Antarctic seals // Marine Mammal Sci. 1991. - V.7. - P. 85-87.

39. Black F.L. Epidemiology of paramyxoviruses // The Paramyxoviruses / Kingsbury D. W. New York: Plenum Press, 1991. - P. 509-536.

40. Blixenkrone-Moller M., Sharma M.,Varsanyi T.M. et al. Sequence analysis of the genes encoding the nucleocapsid protein (NP) and phosphoproten (P) of phociddistemper virus, and editing of the P gene transcript // J.Gen. Virol. 1992.- V.73. - P. 885-893.

41. Blumberg B.M., Crowley j.c., Silverman J.I. et al. Measles virus L protein evidences elements of ancestral RNA polimerase // Virology. 1988. - V.164. - P. 487-497.

42. Bohn W., Ciampor F., Rutter R., Mannweiler K. Lokalization of nucleocapsid associated polipeptides in measles virusinfected cells by immunogold labelling after resin embedding // Arch. Virol. 1990. - V.l 14. - P. 53-64.

43. Bostock C.J., Barrett T., Crowther J.R. Characterization of the European seal morbillivirus // Vet. Microbiol. 1990. - V. 23. - P. 351-360.

44. Buckland R., Giraudon P., Wild F. Expression of measles virus nucleoprotein in Escherichia coli : use of deletion mutants to locate the antigenik sites // J. Gen. Virol. — 1989.- V.68.-P. 1695-1703.

45. Buckland R., Wild F. Leucine zipper motif extends // Nature. 1989. - V.338. -P. 547.

46. Cattaneo R., Schmid A., Rebmann G. et al. Accumulated measles virus mutations in a case of subacute sclerosing panencephalitis: interrupted matrix protein riding frame and transcription alteration // Virology. 1986. - V.l54. - P. 97-107.

47. Cattaneo R., Rebmann G., Baczko K. et al. Altered ratios of measles virus transcripts in deseased human brains // Virology. 1987a. - V. 160 - P. 523-526.

48. Cattaneo R., Rebmann G., Schmidt A. Altered transcription of a defective measles virus genome derived from a diseased human brain // EMBO J. 1987b. - V.6. -P. 681-688.

49. Cattaneo R., Kaelin K., Baczko K. et al. Measles virus editing provides ah additional cystein-rich protein // Cell. 1989. - V.56. - P. 759-764.

50. Cathomen T., Buchholz C.J., Spielhofer P. Preferential initiation at the second AUG of the measles F mRNA: a role for the long untranslated region //Virology. -1995.-V.214.-P. 628-632.

51. Chirgwin J.M., Przybyla A.E., MacDonald R.J. et al. Isolation of biologikally active ribonucleic acid from sources enriched in ribonuclease // Biochemistry. 1979. -V.18.-P. 5294.

52. Chomczynski P. and Sachi N. Single-step method of RNA isolation by guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal. Biochem. 1987. - Vol. 162.-P. 156-159.

53. Collins P.L. The molecular biology of human respiratory syncytial virus (RSV) of the genus Pneumovirus II The Paramyxoviruses / Kingsbury D. New York: Plenum Press, 1991.-P. 103-125.

54. Cosby S.L., McQuaid S., Duffy N. et al. Characterization of seal morbillivirus // Nature. 1988. - V.336. - P. 115-116.

55. Curran M.D., Rima B.K. Nucleotide sequence of the gene encoding the matrix protein of a recent measles virus isolate // J. Gen Virol. 1988. - V.69. - P. 2407-2411.

56. Curran J., Maro J.-B., Kolakofsky D. The Sendai virus non-structural proteins specifically inhibit viral mRNA synthesis // Virology. 1992. - V. 189. - P. 647-656.

57. Deshpande K.L., Portner A. Monoclonal antibodies to the P protein of Sendai virus define its structure and role in transcription // Virology. 1985. - V.140. - P. 125134.

58. Diallo A., Barrett T., Baron M., Subbarao S.M. et al. Differentiation of rinderpest and peste des petits ruminants viruses using specific cDNA clones // J. Virol. Meth. -1989.-V.23.-P. 127-136.

59. Dietz R., Ansen C.T., Have P. et al. Clue to seal epizootic ? // Nature. 1989. -V.338. - P. 627.

60. Domingo M., Ferrer L., Pumarola M. et al. Morbillivirus in dolphins // Nature. 1990. - V.348.-P.21.

61. Duignan P.J., Sadove S., Saliki J.T. et al. Phocine distemper in harbor seals (Phoca vitulina) from Long Island, New-York // J. Wildl. Dis. 1993. - V. 29. - P. 465-469.

62. Ezeokoli C.D., Umoh J.U., Chineme C.N. et al Clinikal and epidemiologikal features of peste des petits ruminants in Sokoto Red goats // Rev. Elev. Med. Vet. Pays trop. 1986. - V.39. - P. 269-273.

63. Evans S.A., Belsham G.J., Barrett T. The role of the 5' nontranslated regions of the fusion protein mRNAs of canine distemper and rinderpest virus // Virology. 1990. -V.177.-P. 317-323.

64. Fields S., Winter G., Brownlee G.G. Structure of neuraminidase gene in human imfluenza virus A/PR/8/34 // Nature. 1981. - V.290. - P. 213-217.

65. Finch J.T., Gibbs A.J. Observations on the structure of the nucleocapsids of some paramyxoviruses // J. Gen. Virol. 1970. - V.6. - P. 141-150.

66. Galinski M.S. Annotated nucleotide and protein sequences for selected Paramyxoviridae II The Paramixoviruses / Kingsbury D.W. New York: Plenum Press, 1991.-P. 527-568.

67. Gill D.S., Banerjee A.K. Vesicular stomatitis virus NS protein: structural similarity without extensive sequence homology // J.Virol. 1985. - V.55. - P. 60-66.

68. Giraudon P., Jacquier M.F., Wild T.F. Antigenik analysis of Afrikan measles virus field isolates: identification and localization of one conserved and two variable epitope sites on the NP protein // Virus Res. 1988. - V.10. - P. 137-152.

69. Gombart A.F., Hirano A., Wong T.W. Expression and properties of the V protein in acute measles virus and subacute sclerosing panencephalitis strains // Virus Res. 1992.-V.25.-P. 63-78.

70. Grachev M.A. Distemper virus in Baikal seals // New Scientist. 1988. - 22.

71. Grachev M.A., Kumarev V.P., Mamaev L.V. et al. Distemper virus in Baikal seals // Nature. 1989. - V.338. - P. 209.

72. Greer P.A., Hasel K.W., Millward S. Cloning and in vitro expression of the measles virus matrix gene // Biochem. Cell Biol. 1986. - V.65. - P. 1038-1043.

73. Haas L., Barrett T., Harder T. et al. Detection of phocine distemper virus using the polymerase chain reaction // Dtsch. Tierarztl. Wschr. 1990. - V. 97. - P. 93-95.

74. Haas L., Baron M.D., Liess B. et al. Editing of morbillivirus P gene transcripts in infected animals // Vet.microbiol. 1995. - V.44. - P. 299-306.

75. Haas L., Hofer H., East M. et al. Canine distemper virus infection in Serengeti spotted hyaenas // Vet. Microbiol. 1996. - V.49. - P. 147-152.

76. Hall W.W., Lamb R.A., Choppin P.W. The polypeptides of canine distemper virus. Synthesis in infected cells and relatidness to the polypeptides of other morbilliviruses // Virology. 1980. - V.100. - P. 433-449.

77. Hanahan D. Techniques for transformation of E.coli. // DNA cloning, V. 1 / Ed. D.M. Glover. Oxford, Washington DC: IRL. Press, 1985. - P.109-136.

78. Harder T.C., Moennig V., Greiser-Wilke I. et al. Analysis of antigenic differences between sixteen phocine distemper virus isolates and other morbilliviruses //Arch. Virol.- 1991. V.l 18. - P. 261-268.

79. Harder T.C., Kenter M., Appel M.J.G. et al. Phylogenetic evidence for canine distemper virus in Serengeti"s lions // Vaccine. 1995. - V.l3. - P. 521-523.

80. Harder T.C. Herpesvirus and morbillivirus of aquatic and terrestial carnivores -Enschede, Netherlands. 1997. - P. 210.

81. Harwood J. Lessons from the seal epidemic // New Scien. 1989. - V. 121. - P.38.41.

82. Juneau M.L. Famille des Paramyxoviridae // Can. J. Med. Technol. 1991. -V.53.-P. - 169-173.

83. Kennedy S., Smyth J.A., McCullough S.J. et al. Confirmation of the cause of recent seal deaths // Nature. 1988a. - V.335. - P. 403.

84. Kennedy S., Smyth J.A., Cush P.F. et al. Viral distemper now found in porpoises//Nature. 1988b.-V.336.-P. 21.

85. Kennedy S., Smyth J.A., Cush P.F. et al. Histopathologic and immunocytochemical studies of distemper in seals // Vet. Pathol. 1989. - V.26. -P.97-103.

86. Kennedy S., Smyth J.A., Cush P.F. et al. Histopathologic and immunocytochemical studies of distemper in harbour porpoises // Vet. Pathol. 1991. -V.28.-P.1-7.

87. Kovamees J., Blixenkrone-Moller M., Sharma M. et al. The nucleotide sequence and deduced amino acid composition of the haemagglutinin and fusion proteins of the phocid distemper virus // J.Gen.Virol. 1991a.- V.72. - P. 2959-2966.

88. Mahy B.W.J., Barrett T., Evans S. et al. Characterization of seal morbillivirus //Nature. 1988. - V.336. - P. 115.

89. Martin S.J. The structure and composition of morbillivirus: a brief review // Rev.Sci.Tech.Off.Int.Epiz. 1986. - V.5. - P. 389-393.

90. McCullough S.J., McNeilly F., Allan G.M. et al. Isolation and characterization of a porpoise morbillivirus // Arh.Virol. 1991. - V.l 18. - P.247-252.

91. Morell V. Serengeti's big cats going to the dogs // Science. 1994. - V.335.1. P. 403.

92. Murphy G., Kavanagh T. Speeding-up the sequencing of double-stranded DNA //NAR.- 1988,- V. 16.-P. 5198.

93. Murrey V. Improved double-stranded DNA sequencing using the linear polimerase chain reaction // NAR. 1989. - V. 17. - P. 8889. New Scien.- 1988. - V. 1631. - P. 21.

94. Norrby E., Utter G., Orvell C., Appel M.J.G. Protection against canine distemper virus in dogs after immunization with isolated fusion protein // J. Virol. -1986.-V.58.-P. 536-541.

95. Norrby E., Oxman M.N. Measles virus // Virology. / Fields B.N. New York : Raven press, Ltd., 1990. - P. 1013-1044.

96. Oglesbee M., Tatalick L., Rise J., Krakovska S. Isolation and characterization of canine distemper virus nucleocapsid variants // J. Gen. Virol. 1989. - V.70. - P. 2409-2419.

97. Orvell C. Structural polipeptides of canine distemper virus // Arch. Virol. -1980.- V. 66., P. 193-206.

98. Orvell C., Blixenkrone-Moller M., Svansson W.et al. Immunological relationships between phocid and canine distemper virus studied with monoclonal antibodies // J. Gen. Virol. 1990. - V. 71. - P. 2085-2092.

99. Osterhaus A.D.M.E. Seal death // Nature. 1988. - V.334. - P. 301-302.

100. Osterhaus A.D.M.E., Vedder EJ. Identification of a virus causing recent seal death // Nature. 1988. - V.335. - P. 20.

101. Osterhaus A.D.M.E., Groen J., De Vries P. et al. Canine distemper virus in seals // Nature. 1988. - V.335. - P. 403-404.

102. Osterhaus A.D.M.E. A morbillivirus causing mass mortality in seals // Vaccine. 1989. - V.7. - P. 483.

103. Osterhaus A.D.M.E., UytdeHagg F.G.S.M., Visser I.K.G. et al. Seal vaccination success // Nature. 1989a. - V.337. - P. 21.

104. Osterhaus A.D.M.E., Groen J., UytdeHagg F.G.S.M. et al. Distemper virus in Baikal seals // Nature. 1989b. - V.338. - P. 209-210.

105. Osterhaus A.D.M.E., Broeders H.W.J.,Groen J. et al. Different morbillivirus in European and Siberian seals // Vet.Rec. 1989c. - V.125. - P. 647-648.

106. Osterhaus A.D.M.E., Groen J., Spiykers H.E.M. et al. Mass mortality in seals caused newly discovered virus-like morbillivirus // J. Vet. Microbiol. 1990. - V.23. -P. 343-350.

107. Osterhaus A.D.M.E., de Swart R.L., Vos H.W. et al. Morbillivirus infections in aquatic mammals: newly identified members of the genus // Vet. Microbiol. 1995. -V.44.-P. 219-228.

108. PCR technology Principles and applications for DNA amplification. Erlich H.A. (ed). - New York: Stokton Press, 1988.

109. Pringles C.R. Rhabdovirus genetics // The Rhabdoviruses / Wagner R.R. New York: Plenum Press. - 1987. - P. 167-243.

110. Radecke F., Billeter M.A. The nonstructural C protein is not essential for multiplication of Edmonston B strain measles virus in cultured cells // Virology. -1996,-V.217.-P. 418-421.

111. Rima B.K. The proteins of morbilliviruses // J. Gen. Virol. 1983. - V. 64. - P. 1205-1219.

112. Rima B.K., Baczko K., Clarke D.K. et al. Characterization of clones for sixth (L) gene and a transcriptional map for morbilliviruses // J.Gen. Virol. 1986. - V. 67. -P.1971-1978.

113. Robbins S.J., Bussel R.H., Rapp F. Isolation and partial characterization of two forms of cytoplasmic nucleocapsid from measles virus infected cells // J. Gen. Virol. -1980. - V.47. - P. 301-310.

114. Roelke-Parker M.E., Munson L., Packer C. et al. A canine distemper virus epidemik in Serengeti lions // Nature, 1996. - V.379. - P. 441-445.

115. Ross P.S., Visser I.K.G., Broeders H.J. et al. Antibodies to phocine distemper in Canadian seals//Vet. Rec. 1992. -V. 130. - P. 514-516.

116. Rozenblatt S., Eizenberg O., Ben-Levy R. et al. Sequence homology within the morbilliviruses // J. Virol. 1985. - V.54, N2. - P. 684-690.

117. Sambrook J., Fritch E.F., Maniatis T. Molecular cloning a laboratory manual // NY: Gold Spring Harbor Lab. Press, 1989.

118. Sanger F., Niclen S., Coulson A.R. DNA Sequence with chain-therminating ingibitors // Ibid., 1978. V. 304. - P. 5463-5467.

119. Seal J.J. Crossing the species barrier viruses and the origins of AIDS in perpective //Royal Soc. Med. - 1989. - V. 82. - P. 285-300.

120. Sheshberadaran H., Norrby E., McCullough K.C. et al. The antigenic relationship between measles, canine distemper and rinderpest viruses studied with monoclonal antibodies // J. Gen. Virol. 1986. - V. 67. - P. 1381-1392.

121. Stuen S., Have P., Osterhaus A.D.M.E. et al. Serological investigation of virus infections in harp seals (Phoca groenlandica) and hooded seals (Cystophora cristata) II Vet. Rec. 1994. - V.134. - P. 502-503.

122. Spehner D., Kirh A., Drillien R. Assembly of nukleocapsidlike structures in animal cells infected with a vaccinia virus recombinant encoding the measles virus nucleoprotein // J. Virol. 1991. - V. 65. - P. 6296-6300.

123. Taylor J., Pincus S., Tartaglia J. et al. Vaccinia virus recombinants expressing the measles virus fusion or hemagglutinin glicoprotein protect dogs against canine distemper virus challenge // J. Virol. 1991. - V. 65. - P. 4263-4274.

124. Thomas S.M., Lamb R.A., Paterson R. Two mRNAs that differ by two non-templated nucleotides encode the amino co-terminal proteins P and V of the paramyxovirus SV5 // Cell. V. 54. - P. 891-902.

125. Trudgett A., Lyons C., Welsh M.J. et al. Analysis of a seal and porpoise morbillivirus using monoclonal antibodies // Vet. Rec. 1991. - V.128. - P.61.

126. Tsukiama K., Sugiyama M., Yoshikawa Y. et al. Molecular cloning and sequence analysis of the rinderpest virus mRNA encoding the hemagglutinin protein // Virology. 1987. - V.160. - P. 48-54.

127. Van Bressem M.F., Visser I.K.G., v.d.Bildt M.V.G. et al. Morbilivirus infection in Mediterranian striped dolphins (Stenella coeruleoalba) II Vet.Rec. 1991. -V.129.-P. 471-472.

128. Van Bressem M.F., Visser I.K.G., De Swart R.L. et al. Dolphin morbilivirus infection in different parts of the Mediterranian Sea // Arch.Virol. 1993. - V.129. - P. 235-242.

129. Visser I.K.G., v.d.Bildt M.V.G., Brugge H.N. et al. Vaccination of harbour seals (Phoca vitulina) against phocid distemper with two different inactivated canine distemper virus (CDV) vaccines I I Vaccine. 1989. - V.7 - P. 521-526.

130. Visser I.K.G., Kumarev V.P., Orvel C. et al Comparison of two morbilliviruses isolated from seals during outbreaks of distemper in North West Europe and Siberia // Arch. Virol. 1990. - V.l 11. - P. 149-164.107

131. Visser I.K.G., Van Bressem M.F., De Swart R.L. et al. Characterization of morbilliviruses isolated from dolphins and porpoises in Europe // J. Gen. Virol. -1993a. V.74. - P. 631-641.

132. Visser I.K.G., Van Bressem M.F., Barrett T. et al. Morbillivirus infections in aquatic mammals // Vet.Res. 1993b. - V.24. - P. 169-178.

133. Wardrop E.A., Briedis D. Characterisation of V protein in measles virus-infected cells // J. Virol. 1991. - V.65. - P. 3421-3428.

134. Wong T.C., Wipf G., Hirano A. The measles virus matrix gene and gene product defined by in vitro and in vivo expression // Virology. 1987. - V.l57. - P. 497-508.

135. Yamanaka M., Hsu D., Jones L. et al. Cloning and sequence analysis of hemagglutinin gene of the virulent strain of the rinderpest virus // Virology. 1988. -V.166. - P.251-253.