Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфологические аномалии интерфазных ядер клеток крови у человека и животных при радиационных воздействиях
ВАК РФ 03.00.15, Генетика
Автореферат диссертации по теме "Морфологические аномалии интерфазных ядер клеток крови у человека и животных при радиационных воздействиях"
РГБ од
1 9 ВИЗ 1990
На правах рукописи
СТАРКОВА Екатерина Васильевна
УДК : 576.312.1 :614.87б] -018.5
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ АНОМАЛИИ ИНТЕРФАЗНЫХ ЯДЕР КЛЕТОК КРОВИ У ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ ПРИ РАДИАЦИОННЫХ ВОЗДЕЙСТВИЯХ.
Специальность : 03.00.15 - Генетика
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических
наук
САНКТ-ПЕТЕРБУРГ-ПУШКИН 1997
Работа выполнена в отделе генетики и биотехнологии Всероссийского научно-исследовательского института генетики и разведения сельскохозяйственных животных, в лаборатории клеточной и молекулярной радиобиологии Всероссийского центра экстренной и радиационной медицины и в лаборатории патоморфологии крови Кировского научно-исследовательского института гематологии и переливания крови.
Научные руководители - доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ А.Ф.Яковлев; доктор медицинских наук А.М.Никифоров.
Официальные оппоненты - доктор медицинских наук, Н.Н.Мамаев; доктор биологических наук, профессор И.Е. Вороб-цова.
Ведущее учреждение - Институт цитологии РАН.
Защита состоится 1998 г. в часов
на заседании диссертационного совета Д.020.07.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте генетики и разведения сельскохозяйственных животных по адресу : 189620, С.-Петербург-Пушкин, Московское шоссе, 55-А.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института генетики и разведения сельскохозяйственных животных.
Автореферат разослан С^С^СС^Х 199^г.
Ученый секретарь
Диссертационного совета,
доктор сельскохозяйственных наук,
профессор В.И.Волгин
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальнос2Ь_темы. Воздействия.ионизирующей радиации из клеточные популяции приводят и появлению клеток с ;iно— мально измененными ядрами (Nordenson, 1946; Trowell, 1952; Ingram et al., 1952; Лаптева-Попова и др., 1959; Dienstbier et al.. 1964; Глузман и др.. 1992). К настоящему времени известен достаточно широкий спектр морфологических типов ядерных аномалий, однако классификация и полные сведения об их генезе отсутствуют. Известно также, что ядерные аномалии могут указывать не только на дегенеративные процессы в клетках, в которых они наблюдаются, но и на факт предшествующих хромосомных и (или) геномных нарушений в результате которых они сформировались (Hsu, 1974; Muller et al., 1985; Quimsigeh, 1995). Среди разновидностей морфологических ядерных аномалий можно выделить аномалию, при которой ядро имеет достаточно длинный хроматиновый вырост в пространство цитоплазмы. Согласно сведениям одних авторов, которые обозначали их как ядерные протрузии, ядерные почки, ядерные проекции, такие аномалии возникли из-за отставания длинных плечей маркерных хромосом в анафазе митоза ( Atkin, 1964; Hsu, 1974). согласно другим, которые обозначали их как полумосты или "хвостатые" ядра (ХЯ), - в результате разрывов хромосомных мостов, сформированных дицентрическими хромосомами (Прокофьева-Бельговская, 1961; Кравцов и др., 1996). Дицентрические хромосомы являются маркерами радиационного воздействия и метод, основанный на определении частоты встречаемости клеток с ХЯ, в перспективе может быть использован в радиационно-эпидемиологических исследованиях, тем более, что опыт ликвидации последствий радиационных аварий показал необходимость разработки и внедрения краткосрочных информативных методов для обследования облученного контингента (Гуськова, 1996). Поскольку лимфоциты периферической крови являются наиболее изученными, удобными для цитоге-нетических исследований и, вместе с этим, радиочувствительными нлетками, представляется целесообразным разрабатывать метод ХЯ именно в популяциях лимфоцитов. Однако, для внедрения такого метода в практику требуется детальное изучение аномалий типа ХЯ. включающее исследования возможных механиз-
мов их образования, морфологических разновидностей, радиоспецифичности, определение фоновых частот встречаемости лимфоцитов с ХЯ в популяциях человека и т. д.
Целью настоящей работы явилось изучение ХЯ в лимфоцитах периферической крови человека и животных. При этом были поставлены следующие задачи:
1. Определить основные морфологические типы ХЯ лимфоцитов человека и животных и предложить их классификацию.
2. Изучить состояние хроматина (наличие прицентромер-ного и теломерног'о гетерохроматина, ядрышек ) в "хвостах" ядер лимфоцитов человека.
3. Исследовать частоту встречаемости клеток с ХЯ в костном мозге у мышей после облучения различными дозами и выяснить характер дозовой зависимости.
4. Определить фоновые показатели частот встречаемости лимфоцитов с ХЯ в периферической крови у здоровых мужчин, женщин и детей.
5. Определить частоты встречаемости лимфоцитов с ХЯ в периферической крови у облученных пациентов (ликвидаторов аварии на ЧАЭС) и у пациентов с измененным иммунологическим статусом.
6. Изучить возможную связь показателя "частота встречаемости лимфоцитов с ХЯ" с показателями "частота хромосомных аберраций дицентрического типа", "частота встречаемости лимфоцитов с микроядрами (МЯ)", "частота встречаемости лимфоцитов с хромосомными мостами".
7. На основе полученных данных представить вероятный механизм образования ХЯ в лимфоцитах.
И§УНЦэя_новизна:
Впервые определено ограниченное число морфологических типов хвостатых ядер в лимфоцитах периферической крови человека и животных, показана их видовая специфичность и зависимость от влияния ионизирующих излучений.Представлена классификация основных морфологических типов хвостатых ядер.
Обнаружено повышенное содержание ядрышек в хвостатых ядрах по сравнению с морфологически нормальными ядрами.
Определены фоновые показатели частот встречаемости лимфоцитов с хвостатыми ядрами в периферической крови у мужчин, женщин, детей.
Обнаружена повышенная частота лимфоцитов с хвостатыми ядрами и связь (коэффициент корреляции - 0.73) с частотой хромосомных аберраций дицентрического типа у лиц, принимавших участие в ликвидации аварии на ЧАЭС. Выявлена положительная корреляция между показателями "частота встречаемости лимфоцитов с хвостатыми ядрами" и показателями "частота встречаемости лимфоцитов с микроядрами", "частота встречаемости лимфоцитов с хромосомными мостами".
ПЕ§21И2§£Ь§3_Ц§Ш59сть_2аботы. Проведенные исследования служат обоснованием необходимости использования показателя "частота встречаемости лимфоцитов с "хвостатыми" ядрами" в периферической крови in vivo в цитогенетическом прескрининге популяций после радиационных воздействий.
АЕЕ°бация_£>аботы^ Материалы диссертационной работы были представлены на Конференции "Медико-психологические последствия аварии на ЧАЭС" (С.-Петербург, 1994); 3-м съезде по радиационным исследованиям (Москва, 1997); I Европейском цитогенетическом конгрессе (Афины, 1997); Международной конференции "Низкие дозы радиации: биологические эффекты и и контроль регуляции" (Севилья, 1997); Международной конференции "Стратегия экологической безопасности" (С.-Петербург, 1997); научно-практической конференций "Ueдико-социальные аспекты проблем ветеранов-атомщиков и пути их решения" (С.-Петербург, 1997); 9-ом Конгрессе по генетике человека (Инсбрук, 1997).
Публикации. По результатам исследований опубликовано 9 печатных работ.
Структуда_и_объем_диссертауии. Диссертация состоит из разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований, обсуждение, выводы, практические предложения и список литературы, включающий 186 публикаций отечественных и зарубежных авторов. Объем диссертации составляет 135 страниц машинописного текста. Представлено 6 таблиц и 35 рисунков.
Сокращения:ХЯ - хвостатое ядро, МЯ - микроядро.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В экспериментах использовали мышей линии ВАЬВ/с разводки питомника РАМН "Рапполово", крупный рогатый скот черно-пестрой породы (хозяйство "Красная славянка"), свиньи породы ландрас, выращенные во ВНИИФиБПЙ (г. Боровск).
Группу облученных пациентов составили 160 человек (мужчины) в возрасте от 30 до 72 лет, подвергшихся воздействию ионизирующей радиации 6-10 лет назад. По данным истории болезни 154 человека из этой группы получили малые дозы облучения (до 0,25 Су) и 6 человек получили большие дозы облучения (более 1,5 Су). Контрольные группы составили 89 здоровых мужчин в возрасте от 19 до 60 лет, 50 женщин в возрасте от 20 до 60 лет и 37 дете'й в возрасте от 3 до 6 лет, не подвергавшихся ранее (по анкетным данным) радиационному воздействию.
Облучение мышей проводили на установке РУМ-17 (Военно-медицинская академия, С.-Петербург) тормозными Х-лучами в дозах 0,5; 1,0; 1,5 и 2,0 Су, при мощности дозы 0,65 ву/мин, во вращающихся кассетах, по 8 особей на каждую дозу.
Венозную гепаринизированную кровь облучали в том же режиме в пенициллиновых флаконах (по 3 мл). Дозы облучения от О до 4,0 Су. Взятие образцов для анализа проводили до и сразу после облучения, а затем через 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 и 7,0 часов после облучения. Контрольные и опытные образцы крови при этом находились в термостате при 37°С.
Гематологические препараты периферической крови и костного мозга (из бедренной кости мышей) готовили обычным способом. Мазки высушивали, фиксировали 96% этиловым спиртом и окрашивали красителем Гимза.
Частоты встречаемости лимфоцитов с ХЯ, МЯ и мостами определяли в выборках из 500 лимфоцитов. Не учитывали малые лимфоциты и клетки с признаками дегенерации и повреждений.
Для получения препаратов метафазных хромосом использовали культуру ФГА-стимулированных! лимфоцитов.Препараты окрашивали красителем Гимза. Дифференциальное окрашивание метафазных хромосом проводили по в-методу с использованием трипсина (Макгрегор, Варли; 1986).
Препараты двуядерных лимфоцитов в цитохалазиновом блоке получали по методу, описаному Анкиной и соавторами (1991). Препараты окрашивали красителем Гумза. Анализировали 500 двуядерных клеток с ХЯ.
Ядрышки в ядрах лимфоцитов выявляли с использованием метода окраски ядрышковых организаторов нитратом серебра (Мамаев, 1980).
Для выявления блоков гетерохроматина в клетках in vivo использовали свежеприготовленные мазки периферической крови (время с момента приготовления мазка до его окраски красителем Гимз'а не превышало 1 час). Блоки гетерохроматина в клетках in vitro выявляли по методу С-окрашивания с использованием гидроксида бария (Sumner et al., 1971).
Локализацию центромерных сигналов, выявленных TRITC и теломерных сигналов, выявленных FITC в ХЯ лимфоцитов определяли (совместно с Ю.А.Логиновой) с использованием неизотопного варианта двухцветной флуоресцентной гибридизации in situ (FISH-метод) (Lichter et al., 1992). Анализ препаратов проводили на флуоресцентном микроскопе при длине волны 460-490 нм.
Статистическую достоверность различия сравниваемых значений частот оценивали с помощью непараметрического U-крите-рия Вилкоксона-Манна-Уитни и t-критерия Стьюдента. Коэффициент корреляции определяли по Спирмену (Гублер, Генкен,1972).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Морфологические исследования типов "хвостатых" ядер_в
лимфоцитах__пе^ифецической__кдови_человека___и___животных^
"Хвосты" ядер лимфоцитов в наших наблюдениях представляли собой тонкий вырост ядра в пространство цитоплазмы, часто с терминальным расширением, длиной от 2 мкм до 7 мкм. Нами были выделены 16 основных морфологических типов ХЯ (рис. 1). Полученные данные свидетельствуют, что ХЯ лимфоцитов имеют ограниченное число морфологических типов. Частота встречаемости различных фенотипов у исследованных видов животных и человека различна, а воздействие ионизирующих излучений приводит к расширению фенотипического разнообразия ХЯ у облученных людей и животных.
Рисунок 1 (схема). Морфологические фенотипы ХЯ лимфоцит периферической крови человека и. животны
^5£1215_в£хв§чаемости_э2ит2областов_с_аномалиям
костном_мозге_1п_у1уо_мыщей_после__рентгеновского__облучен
Безличными__аозами. Выявлено, что с увеличением дозы облуч
ния частота эригробластов с ХЯ возрастает с 0,23% в контре до 2,9% при дозе облучения 1,5 Су (рис.2,а). Для показате-г "частота встречаемости эритробластов с мостами" и "чаете
Частота,
ХЯ, хромосомными мостами и МЯ (а) и ана-телофаз с хромосомными мостами и с отставаниями (б) в костном мозге мышей от от дозы общего облучения.
По вертикали - частота встречаемости клеток с аномалиями (%); по горизонтали - доза облучения (Су).
встречаемости эритробластов с МЯ" также отмечалась линейная зависимость во всем исследованном интервале доз. Очевиден рост показателя "частота встречаемости ана-телофаз с хромосомными мостами" при увеличении лучевой нагрузки - от 1,96% (контроль) до 22,09% (доза облучения 2 Су) (рис.2,б). Аналогичная зависимость проявляется и в увеличении числа митозов, сопровождающихся отставанием хромосом или их фрагментов. Результаты позволяют сделать вывод о том, что показа-
тель "частота встречаемости клеток с ХЯ" является радио чувствительным и положительно коррелирует с частотой ана телофаз с мостами.
Частота__встречаемости__лимфоцитов__с__ХЯ__в__популяци
22п§22ШИХся___клеток____периферической_крови_____поел
2й£П§ЕИМёН2Ё5ЬНОго_облучения, С целью исключения возможное! образования ХЯ вследствие апоптоза или пострадиационно сегментации ядер было проведено исследование динамик показателя "частота лимфоцитов с ХЯ" после эксперименталь ного облучения периферической крови. Повышение частот встречаемости лимфоцитов с ХЯ отсутствовало в исследование временном интервале и во всем диапазоне доз для выборо* включающих по 1000 лимфоцитов на точку. Все наблюдаемые pas личия не были статистически достоверными (р >0,05). Даннь указывают на тот факт, что формирование ХЯ не связано морфологическими изменениями ядер, возникающими "под лучом*
22££УШэация_ блоков_гетерохроматина_в^
£г5£оков_после_культивирования__in__vitro_в__ХЯ__лимфоците
периферической_крови_человека. Выявлена общая закономерное! в распределении блоков гетерохроматина in vivo и in vitro "хвостах" ядер лимфоцитов (рис.3). Блоки гетерохроматш выявляются в основании терминального расширения "хвоста", самом терминальном расширении, а также в области соединен! ядра и "хвоста".
Рисунок 3. Схемы локализации гетерохроматиновых блоков in vivo (а), С-блоков in vitro (б), центромерных сигналовС в "хвостах" ядер лимфоцитов периферической крови человека.
Изучение__ядрышковых__структур__§___Г^востатых^___ядрах
лимфоцитов__периферической__крови__человека. После реакции
серебрения ядрышковых организаторов*на мазках периферической крови были исследованы 122 лимфоцита с ХЯ. 32 ХЯ (26,2%) содержали ядрышко в терминальном расширении "хвоста". Были проведены сравнительные исследования числа ядрышек в нормальных и "хвостатых" ядрах лимфоцитов у двух облученных пациентов. В ХЯ было обнаружено достоверно большее содержание числа ядрышек по сравнению с морфологически нормальными ядрами. Среднее число ядрышек в ХЯ у первого пациента составило 2,35 ядрышка'на ядро, а в нормальных - 1,4 ядрышка на ядро (р<0,001). У второго пациента эти показатели составили 1,68 и 1,18 соответственно (р<0,05). Результаты свидетельствуют, что в.ХЯ имеет место транскрипция цистроков рРНК (в 26% случаев ), а наличие "хвостов" влияет на структурно-функциональную организацию интерфазного ядра.
Исследование ХЯ в популяциях лимфоцитов, культивирован-Исследовали частоты лимфоцитов с ХЯ в популяциях двуядерных лимфоцитов после цитохалазинового блока. Частота лимфоцитов с ХЯ в облученных культурах (1,5Су) составила - 1,30 - 0,25%, а в необлученной 0,40 - 0,12% (различия оказались достоверными (р<0,05)). Модель блокированных двуядерных лимфоцитов использовали с целью выяснения места разрывов хромосомных мостов. Результаты исследования 1000 двуядерных лимфоцитов с ХЯ свидетельствуют, что подавляющее большинство клеток с ХЯ относится к случаю, когда одно ядро имеет "хвост", а второе его не имеет. Только в 25,4% случаев оба ядра имели "хвосты". Данные этих исследований, по-видимому, указывают на тот факт, что, в основном, "хвосты* ядер не образуются путем простого разрыва хромосомных мостов пополам и, как правило, не являются полумостами.
клеточного_уикла. Клетки с ХЯ на стадии профазы наблюдали в культуре ФГА-стимулированных лимфоцитов. Во всех наблюдаемых 33 случаях "хвосты" в профазных ядрах представляли собой хроматиновые тяжи состоящие не более чем из двух нитей хроматина, при этом все они заканчивались слепо, не возвращаясь обратно в ядро. Результаты наблюдений свидетельствуют о том, что "хвосты" ядер ФГА-стимулированных лимфоцитов проходят
фазу синтеза ДНК и, судя по относительным размерам к ядру включают в себя хроматиновый материал одной-двух хромосом.
И£££§А2§&ние__теломерных__и_прицентроме]эных__последовг
т§льностей_в_"хвостах" яде2_лимфоуитов_ методом__Двухцветно
45У2Е§сцентной_ гибридизации_ 1П_§1Ъи. Результаты показала что центромеры располагаются преимущественно в основан!' "хвостов" и (или) в области терминального расширения, а те ломеры - в области терминального расширения (рис 3,в). Сле дует отметить, что среди 46 исследованных "хвостов" не бш обнаружено "хвостов" с более, чем двумя центромерными сигне лами и одним теломерным. Приведенные данные указывают тот факт, что "хвосты" ядер, вероятно, сформированы однс или двумя хромосомами. Наличие теломерных районов в терм» калькых расширениях "хвостов" (5 случаев из 46) указывает * возможность формирования "хвостов" без разрывов хромосом.
Частота_встречаемости_лимфоуитов_с_ХЯ_в__перифе^ическс
£Е222_33222вых__доноров__и__облученных__пациентов. Во веб
контрольных группах (мужчины, женщины, дети) модальный клас представлен лицами, у которых ХЯ в лимфоцитах не встречалис а интервал изменчивости исследуемого признака состав! от 0% до 0,6%. Средняя частота лимфоцитов с ХЯ в контрольнс мужской выборке составила 0,14%, в контрольной женской 0,13%, а в контрольной детской - 0,04%. Мужская и женскг выборки достоверно не различались между собой (р>0,05), I отличались достоверно от выборки детей (р<0,05 в обоих слз чаях).«Таким образом, условной верхней границей нормы покг зателя "частота встречаемости лимфоцитов с ХЯ" для перифер! рической крови человека можно считать 0,6%. ХЯ в лимфоцит? были обнаружены_у большинства облученных пациентов (рис.4' Максимальная частота лимфоцитов с ХЯ составила 3,2%, а сре; няя - 0,56%. Различие между группой облученных пациентов и контрольными группами по исследованному показателю бы: достоверным (р<0,001, во всех случаях). Эти данные позволя) сделать вывод о повышенной частоте лимфоцитов с ХЯ у обл^ ченных пациентов. У пациентов этой группы наблюдались и дв; ядерные лимфоциты с хромосомными мостами (средняя часто-встречаемости 0,07%). В крови здоровых доноров (мужск. группа) аналогичные клетки встречались с частотой 0,005%.
80-|
-дети (n = 37)
$
i-
g-.
i-
к t
í-
>
Ф
^wm
-женщины (n -= 50) ■ -мужчины (n = 89) | -облученные (мужчины) (n = 160)
О
Г 0,4
i"
1 _ ■
1—
0,6 0,8 1,0 1,2 1.4 1,6 1,8 3,2
Рисунок 4. Гистограммы распределений лиц контрольной группы и облученных пациентов по признаку "частота встречаемости лимфоцитов с "хвостатыми" ядрами в периферической крови". По вертикали - число обследованных лиц (%); по горизонтали -частота встречаемости лимфоцитов с ХЯ (%).
Ib
1-Т--Т Т-
1,0 1,2 1.4 1,6
п 1,8
Частота встречаемости лимфоцитов периферической крови_с
МЯ_в__популяциях__облученных__пациентов_и_заоровых__доноров^
МЯ в лимфоцитах in vivo, наблюдаемые нами, соответствовали всем морфологическим критериям МЯ (Muller, Streffer, 1995). Различия между группой облученных пациентов и группами
здоровых доноров по данному признаку оказались достовернь (р<0,01 во всех случаях). Средняя частота лимфоцитов с in vivo у ликвидаторов составила 0,21%, а таког показатель в выборках лиц контрольных групп составил - О,С (мужчины), 0,06% (женщины), 0,05% (дети). Признак "чаете лимфоцитов с МЯ" у облученных пациентов коррелирон с признаком "частота лимфоцитов с ХЯ". Коэффицие корреляции составил 0,4 (п=160! р<0,001).
Аномалии__56S2__лимфоцитов__у_пауиентов_с__атопически
ЕёЁУЩями. Были обследованы 52 пациента с аллергологичесн патологией. Средняя частота встречаемости лимфоцитов с ХЯ этой группе составила 0,17% при размахе изменчивости от до 1,2%. Средняя частота встречаемости лимфоцитов с МЯ со тавила 0,08%. Различия между данной группой пациент и контрольной группой по исследуемым показателям бы. не достоверны (р >0,05).
Частоты__лимфоцитов__с__дицентрическими__хромосомами
облученныхпациентов. Были исследованы частоты метафаз дицентрическими хромосомами у 47 облученных пациентов различными частотами встречаемости лимфоцитов с ХЯ (рис. 5 Положительная корреляция между показателями "частота лимф цитов с ХЯ в периферической крови in vivo" и "часто ФГА-стимулированных лимфоцитов с дицентриками в культу in vitro" в этой выборке оказалась статистически значим (р<0,001), а коэффициент корреляции, вычисленный по Спирме составил 0,73. Повышенные частоты дицентрических хромосом лимфоцитах (0,1%) были выявлены у 17 из 22 пациентов частотами встречаемости лимфоцитов с ХЯ от 0,8% и выш У данных пациентов частота метафаз с дицентриками варьиров ла от 0,5% до 7,0%. Таким образом, методом определения ча тоты встречаемости лимфоцитов с ХЯ нам удалось определи пациентов цитогенетической "группы риска", у которых бы выявлена повышенная частота дицентриков.
_Исслецование_дифференциально_окра п
циентов_с^ысокими_частотами_встречаем с х
Были обследованы несколько облученных пациентов с повышенн содержанием дицентрических хромосом (совместно с Н.М.Ярцев и Р.Ф.Федорцевой). Данные указывают на повышенную часто аберраций не только нестабильного, но и стабильного типа.
Дицентрики (%)
•4.«
1,0 1.* 1.6 1.4
1,1 1.0 o,s 0,6 0,4 0.2
• •
1« •!«•• «•••••«
Ml • •
О 0,1 0,4 0,6 0,8 1,0 1,1 1,4 1,6 1,8 ХЯ(%)
Рисунок 5. Распределение облученных пациентов по показателям "частота лимфоцитов с ХЯ в периферической крови in vivo" и "частота ФГА-стимулированных лимфоцитов с дицентриками в культуре in vitro".
6.0
выводы
1. Аномалии ядер лимфоцитов периферической крови ti "хвостов" имеют ограниченное число морфологических феноти] у человека и животных. Частота встречаемости определен; типов "хвостов" ядер лимфоцитов у видов с различными xpoi сонными наборами различна. Спектр морфологических феноти ХЯ в пределах одного вида изменяется в зависимости от вл кия радиационного фактора и времени прошедшего с моме его воздействия.
2. Блоки гетерохроматина и, в частности, центромерн гетерохроматина локализованы ,в основании « терминальн расширения "хвоста", в самом терминальном расширении и области соединения ядра с "хвостом".
3. В "хвостах" ядер встречаются ядрышки. ХЯ имеют,' д товерно больше ядрышек, чем морфологически нормальные яд
4. С увеличением дозы облучения в костном мозге мы частота эритробластов с ХЯ, МЯ и мостами повышалась, при частота эритробластов с ХЯ была наиболее высокой.
5. Средняя частота встречаемости лимфоцитов с ХЯ в пуляциях практически здоровых людей составляет: у мужчи 0,14% (min-0% , шах - 0,6%), у женщин - 0,13% (niin-C max - 0,6%), у детей - 0,04% (min-0%, max - 0,6%). У паци тов с атопической болезнью •средняя частота встречаемо лимфоцитов с ХЯ ядрами составляв 0.17% при размахе изме* вости от 0% до 1,2%.
•6. Средняя частота встречаемости лимфоцитов с ХЯ в риферической крови облученных пациентов (ликвидаторов авг на ЧАЭС) составляет 0,56% (размах изменчивости от 0% до í 7. Выявлена положительная корреляция (значение коэ<] циента корреляции — 0,73) между частотой встречаем* лимфоцитов с ХЯ in vivo и частотой хромосомных аберрг (дицентрического типа) in vitro у облученных пациенте
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ При использовании теста хвостатых ядер в цитогенети« ком прескрининге популяций после радиационных воздейс-рекомендуется учитывать особенности кариотипа изучав] вида с использованием классификационной таблицы морфол! гических фенотипов ХЯ.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Старкова Е.В., Кравцов В.Ю., Федорцева Р.Ф..Аномалии интерфазных ядер лимфоцитов в периферической крови у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС. "Вопросы трансфузиоло-гии и клинической медицины". Материалы 5-й научной конференции молодых ученых. 1996, Киров, с.46.
2. Федорцева Р.Ф., Кравцов В.Ю., Старкова Е.В., Тюкаче-ва М.В.*,Никифоров A.M.. Перспективы выявления хромосомных аберраций у облученных пациентов путем исследования интерфазных ядер в лимфоцитах периферической крови in vivo. Материалы научно-практической конференции "Мелико-социальные аспекты проблем ветеранов-атомщиков и пути их решения". 1997-, С.-Петербург, с. 110.
3. Кравцов В.Ю.," Федовцева Р.Ф., Старкова Е.В., Тюкачева М.В., Яковлев А.Ф., Никифоров A.M.. "Хвостатые" ядра- возможный маркер радиационных воздействий в клеточных популяциях. Материалы 3-го съезда по радиационным исследованиям. 1997, Москва. Т.2, С.16.
4. Старкова Е.В., Логинова Ю.А. , Кравцов В.Ю., Федорцева Р.Ф. . Локализация гетерохроматина и ядрышек в "хвостатых" ядрах лимфоцитов облученных пациентов. Там же, с.34.
5. Федорцева Р.Ф., Кравцов В.Ю., Старкова Е.В., Тюкачева М.В., Яковлев А.Ф., Никифоров A.M.. Частота встречаемости лимфоцитов с аномальными ядрами в периферической крови in vivo у облученных пациентов. Там же, с.35.
6. Кравцов В.Ю., Федорцева Р.Ф., Логинова Ю.А. , Старкова Е.В., М.В.Тюкачева, А.Ф.Яковлев, А.М.Никифоров.. Морфологические аномалии ядер типа "хвостов" в лимфоцитах и их связь с дицентрическими хромосомами у облученных пациентов // Генетика. 1997. Т.33. N 12. С. 1675-1680.
7. Kravtsov V.Yu., Starkova E.V., Loginova Yu.A., Yakovlev A.F., Nikiforov A.M., Fedortseva R.F.. "Tailed nuclei are a possible cell marker of radiational effects. IAEA/WHO. International Conference on "Low doses of ionizing radiation: biological effects and regulatory control". Sevilia. 1997. Book of Papers. IAEA-CN.67/117.
8. Kravtsov V.Yu., Starkova E.V., Loginova Yu.A.. Proshin S.N., Tjukacheva M.V. "Tailed" shape of nukleus as a possible indicator of chromosome aberrations /Cytogenet. Cell Genet. 1997. V.77. N 1-2. P.7.
9. Fedortseva R.F., Starkova E.V., Kravtsov V.Yu., Tjukacheva M.V. Nuclear abnormalities in peripheral blood in vivo cells of irradiated and nonirradiated persons /Cytogenet. Cell Genet. 1997. V.77. N 1-2. 69.
- Старкова, Екатерина Васильевна
- кандидата биологических наук
- Санкт-Петербург ; Пушкин, 1997
- ВАК 03.00.15
- Аномалии ядер и кариотическая стабильность клеток млекопитающих
- Нарушения морфологии интерфазных ядер в клеточных популяциях животных при оценке влияния на геном дестабилизирующих факторов
- Аномалии ядер и кариотипическая стабильность клеток млекопитающих
- НАРУШЕНИЯ МОРФОЛОГИИ ИНТЕРФАЗНЫХ ЯДЕР В КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЯХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ОЦЕНКЕ ВЛИЯНИЯ НА ГЕНОМ ДЕСТАБИЛИЗИРУЮЩИХ ФАКТОРОВ
- Природные антитела, реагирующие с гистонами