Морфологическая характеристика реактивных изменений сердечной мышечной ткани в условиях экспериментально измененного гистогенеза

Ямщикова, Екатерина Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфологическая характеристика реактивных изменений сердечной мышечной ткани в условиях экспериментально измененного гистогенеза
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфологическая характеристика реактивных изменений сердечной мышечной ткани в условиях экспериментально измененного гистогенеза"

На правах рукописи

Ямщикова Екатерина Николаевна

Морфологическая характеристика реактивных изменений сердечной мышечной ткани в условиях экспериментально измененного эмбриогенеза

03.00.25 Гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оренбург 2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Самарский государственный медицинский

университет"

Научный руководитель доктор биологических наук, профессор

Суворова Галина Николаевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Шевлюк Николай Николаевич

доктор медицинских наук, профессор Яцковский Александр Никодимович

Ведущая организация Российский государственный медицинский

университет

Защита диссертации состоится 2004 г. В -

часов на заседании диссертационного совета К 208.066.01 при ГОУ ВПО "Оренбургская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации" по адресу: 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6, зал заседания диссертационного совета.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Оренбургской государственной медицинской академии

Автореферат разослан 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Семченко Ю.П.

932533

ВВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы

Среди разрабатываемых в современной морфологии проблем фундаментального и прикладного характера значительное место занимает изучение закономерностей гистогенеза и регенерации тканей и органов.

Сложность и многоплановость различных сторон эмбрионального гистогенеза и регенерации миокарда обусловливают широкий круг вопросов, привлекающих внимание морфологов (Румянцев П.П.,1982; Непомнящих Л.М с соавт., 1986,1989; Швалев В.Н., 1989; Ямщиков Н.В., 1985,1991; Стадников А.А, 1994,1997; Данилов Р.К., 2000).

Изучение структурных основ развития миокарда представляет не только теоретический, но и практический интерес. О повышенном внимании клиницистов к строению и работе сердца свидетельствует выделение науки о болезнях этого органа в самостоятельный раздел — кардиологию. Актуальность исследования миокарда в большой степени обусловлена недостаточным знанием патогенеза многочисленных заболеваний сердца. В последние годы все большее внимание гистологов привлекает проблема регенерации сердечной мышечной ткани. Необходимость изучения ее восстановительных свойств связана с тем, что миокард довольно часто вовлекается в патологические процессы. Эффективность лечебных мероприятий во многом зависит от понимания механизмов восстановительных процессов в тканях сердца.

межклеточных и межтканевых миокарде.

Остается спорным вопрос об особенностях развития и функции светлых и темных кардиомиоцитов. До сих пор нет достоверных данных о соотношении и особенностях топографии разных видов гибели кардиомиоцитов. Отсутствуют исследования эмбрионального кардиомиогенеза и особенностей реактивных изменений кардиомиоцитов различных камер сердца в условиях воздействия фармакологических препаратов.

В терапевтической практике широко применяются глюкокортикоидные препараты, в частности, преднизолон. В экспериментальной эмбриологии глюкокортикоидные препараты используют как вещества, обладающие тератогенной активностью. В связи с этим запросы теоретической и практической медицины ставят перед исследователями задачи по изучению реактивности органов и тканей в условиях воздействия данных препаратов. Известно, что метаболические процессы, протекающие в тканях эмбрионов, в значительной степени зависят от гормональной регуляции. Однако в литературе отсутствуют сведения о строении миокарда эмбрионов и взрослых животных после введения глюкокортикоидов. Данные о реактивных изменениях сердечной мышечной ткани в ходе ее эмбрионального гистогенеза немногочисленны и часто противоречивы. Существование спорных и малоизученных сторон дифференцировки, пролиферации и клеточной гибели кардиомиоцитов объясняет наш интерес к эмбриональному и постэмбриональному развитию сердечной мышечной ткани в норме и при экспериментально измененном эмбриогенезе. Выяснение этих вопросов с помощью гистологических, электронно-микроскопических,

иммуноцитохимических и морфометрических методов имеет не только теоретическое значение, но и является чрезвычайно актуальным для практической медицины и, в частности, для кардиологии.

Цель работы — морфологический анализ эмбрионального и постнатального развития, структурной организации сердечной мышечной ткани в условиях экспериментально измененного эмбриогенеза путем введения зародышам глюкокортикоидного препарата преднизолона.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить структурную организацию сердечной мышечной ткани различных камер сердца белых крыс в норме и в условиях экспериментально измененного эмбриогенеза.

2. Выявить изменения морфометрических показателей кардиомиоцитов различных отделов сердца в ходе экспериментально измененного гистогенеза.

3. Исследовать гетероморфизм кардиомиоцитов в эмбриональном развитии белых крыс. Выяснить особенности реактивных изменений светлых и темных сердечных мышечных клеток при воздействии преднизолона.

4. Изучить морфологические проявления гибели кардиомиоцитов в процессе эмбрионального развития сердца белых крыс в норме и при воздействии преднизолона.

Научная новизна полученных данных

Используя комплекс морфологических методов, впервые в рамках одного исследования проведено детальное изучение гистогенеза сердечной мышечной ткани в норме и при воздействии на плоды белых крыс глюкокортикоидного препарата. В работе получены количественные характеристики кардиомиоцитов предсердий и желудочков в экспериментально измененном гистогенезе и последующем постнатальном развитии.

Впервые проведено комплексное гистологическое,

иммуноцитохимическое, морфометрическое и электронно-микроскопическое исследование структурной организации миокарда белых крыс в норме и после введения им преднизолона в течение внутриутробного периода развития. С помощью комплекса методов гистологического исследования изучены реактивные изменения и регенераторные процессы, происходящие в сердечной мышечной ткани в ответ на воздействие преднизолона.

в ходе эмбрионального развития сердца. Сочетание методов электронной микроскопии и иммуноцитохимии позволило изучить морфологические проявления гибели кардиомиоцитов в ходе экспериментально измененного гистогенеза.

Научная и практическая значимость работы

В работе представлено комплексное морфологическое исследование эмбрионального развития миокарда белых крыс в условиях воздействия преднизолона. Полученные в работе данные об эмбриональном развитии сердца углубляют представления о кардиомиогенезе и представляют несомненный интерес для эмбриологов и гистологов.

Полученные данные о структурной организации миокарда, сформированного в условиях измененного гистогенеза, имеют значение для разработки теоретических основ применения глюкокортикоидных препаратов в практической медицине. Данные о гистогенезе сердечной мышечной ткани в условиях экспериментально измененного эмбриогенеза могут быть использованы для моделирования врожденных пороков сердца.

Полученные в результате данного исследования морфометрические, иммуноцитохимические и электронно-микроскопические характеристики сердечной мышечной ткани могут быть использованы в качестве базовых при проведении экспериментов на лабораторных животных.

Проведенное исследование позволило выявить морфологические особенности сердечной мышечной ткани эмбрионов и взрослых животных в условиях экспериментально измененного эмбриогенеза. Результаты исследований следует учитывать при обосновании применения глюкокортикоидов в клинической практике.

Выявленные закономерности динамики морфологических изменений сердечной мышечной ткани расширяют существующие представления об ее реактивных изменениях при различных воздействиях.

Общетеоретические результаты работы целесообразно использовать в преподавании соответствующих разделов гистологии, эмбриологии и кардиологии.

Положения, выносимые на защиту

1. Закономерные процессы эмбрионального гистогенеза сердечной мышечной ткани - пролиферация, дифференцировка, интеграция и клеточная гибель имеют свои особенности проявления в нормальном и экспериментально измененном гистогенезе.

2. Иммуногистохимическое выявление апоптоза с помощью моноклональных антител к белку р53 позволяет установить наличие 2-х видов гибели кардиомиоцитов — морфогенетической и гистогенетической.

3. Экспериментальное изменение эмбриогенеза в результате введения глюкокортикоидного препарата преднизолона вызывает нарушение ультраструктурных характеристик кардиомиоцитов, их морфометрических показателей, а также изменение интенсивности клеточной гибели.

Апробация работы

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на научной конференции "Гистологическая наука России в начале XXI века: итоги, задачи, перспективы" (г. Москва, 2003), на Всероссийской научной конференции "Реактивность и пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях", посвященной памяти члена-корреспондента АМН СССР профессора Ф.М. Лазаренко (г. Оренбург, 2003), на Всероссийской конференции "Молодые ученые - медицине" (г. Самара, 2003), на V Общероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (г. Казань, 2004), на расширенном заседании Самарского отделения Всероссийского научного общества анатомов, гистологов и эмбриологов (2004).

Внедрение результатов исследования

Результаты исследований используются в учебном процессе в Самарском государственном медицинском университете при чтении лекций и проведении

практических занятий по темам «Мышечные ткани» и «Сердечно-сосудистая система».

Публикации. По материалам диссертации опубликованы в печати 6

работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных иследований, их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 146 источников, из которых 68 - отечественные. Иллюстративный материал представлен 1 таблицей, 84 рисунками, которые включают 63 электронограммы и 15 микрофотографий.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования

Для решения поставленных задач в работе был проведен эксперимент по изучению эмбрионального гистогенеза и постнатального развития поперечнополосатой мышечной ткани сердца в норме и экспериментально измененных условиях. В качестве объекта исследования были использованы белые беспородные крысы различных сроков эмбрионального и постнатального развития.

Крыс с датированным сроком беременности получали по стандартной методике (Методы биологии развития, 1977). Первым днем беременности животных считали день обнаружения сперматозоидов во влагалищных мазках.

Животные были разделены на 2 группы: экспериментальную и контрольную.

В экспериментальной группе крысам с первого дня беременности ежедневно в асептических условиях внутрибрюшинно вводили синтетический глюкокортикоид преднизолон в дозе 0,15 мг на 100 г веса тела животного.

В контрольной группе беременным самкам внутрибрюшинно в условиях асептики вводили физиологический раствор.

Плоды необходимых сроков развития получали после вскрытия беременных самок, усыпленных эфирным наркозом в соответствии с условиями, изложенными в приказе МЗ РСФСР № 754. Изучены плоды крыс из обеих групп в возрасте 17, 18, 19, 20 суток эмбрионального развития. Для изучения постнатального развития сердечной мышечной ткани брали материал от новорожденных, 3,7-дневных, 3, 6-недельных крысят и половозрелых крыс.

В целом в работе изучен материал от 108 животных. Количество животных, их возраст и методы исследования приведены в таблице.

Таблица

Характеристика материала и методов исследования нормального

и экспериментально измененного кардиомиогенеза

Объект Методы исследования, Возраст Число

исследования экспериментальная модель. особей

Белые Общегистологические Плоды крыс с 17-х 24

беспородные Иммуногистохимиче- по 20-е сутки

крысы ский эмбриогенеза

Изучение Электронная Крысята

эмбриогенеза микроскопия новорожденные, 30

Изучение Морфометрическая 3-, 7-дневные, 3-,

постнатального оценка 6- недельные,

развития Статистическая обработка половозрелые

Белые Введение Плоды крыс с 17-х по 24

беспородные терапевтических доз 20-е сутки

крысы преднизолона крысам эмбриогенеза

Изучение с первого дня

реактивности беременности до Крысята 30

сердечной завершения новорожденные,

мышечной ткани эксперимента. 3-, 7-дневные, 3-,

на введение Общегистологические 6- недельные,

преднизолона в Иммуногистохимиче- половозрелые

эмбриогенезе и ские

постнатальном Электронная

периоде микроскопия Морфометрическая оценка Статистическая обработка

Характеристика методов исследования

Метод световой микроскопии срезов сердца

Для изучения срезов сердца методом световой микроскопии материал фиксировали в 10% нейтральном формалине на фосфатном буфере (рН=7,0) или жидкости Карнуа, заливали в парафин, после чего готовили поперечные и продольные срезы сердца с помощью роторного микротома. Обзорные гистологические препараты получали путем окраски срезов толщиной 5-6 мкм гематоксилином и эозином по стандартной методике (Волкова О.В., Елецкий Ю.К., 1982).

Метод щелочной диссоциации кардиомиоцитов

Для получения изолированных кардиомиоцитов использовали метод щелочной диссоциации тканей В.Я. Бродского и соавт. (1983). Кусочки миокарда предсердий и желудочков фиксировали в холодном 10% нейтральном формалине на фосфатном буфере (рН=7,0). После фиксации в течение 10-14 дней производили поперечные срезы ткани толщиной 1-2 мм и помещали в 50% КОН на двое суток. Затем пипеткой отбирали КОН, а кусочки ткани перекладывали в холодильник в дистиллированную воду на 1-2 суток. После двухчасовой экспозиции при комнатной температуре воду осторожно сливали, добавляли свежую дистиллированную воду из расчета 1 мл на 2 мг миокарда. С помощью магнитной мешалки в течение 20-30 минут производили окончательное разделение кардиомиоцитов. Визуально контролировали качество разделения кардиомиоцитов по возрастанию степени опалисценции суспензии. Полученную суспензию наносили на предметное стекло, мазок подсушивали на воздухе при комнатной температуре, затем окрашивали гематоксилином и эозином по стандартной методике.

В исследованном материале имела место определенная доля неразделившихся кардиомиоцитов (8-10 на 100 клеток).

МорфомегрическиИ метод

Морфометрические исследования кардиомиоцитов производились в мазках изолированных клеток. С помощью винтового окулярмикрометра МОВ-

1-15х получали информацию о размерах клетки и ядер. Затем по полученным данным вычисляли объемы ядер, цитоплазмы кардиомиоцитов, ядерно-цитоплазменное отношение.

Обьем ядер кардиомиоцитов вычисляли, используя формулу эллипсоида вращения (Ташкэ К., 1980): V=/ я64\2,

где dk- малый диаметр измеряемого объекта; dg- большой диаметр измеряемого объекта. Для вычисления размеров кардиомиоцитов использовали формулу цилиндра V= 7i/4d2L, где d- диаметр, L- длина клетки.

На каждой изученной стадии проводили измерение размеров 100 клеток от разных животных. Полученные в работе данные обработаны методами вариационной статистики с определением их средних ошибок. Степень вероятности отличий измеряемых структур вычисляли с помощью критерия Стьюдента при Р=0,95.

Статистическая обработка и графические построения проведены с использованием стандартного статистического пакета STATGRAPHICS, электронных таблиц Excel 97 в среде Windows 3.11.

Получение фотографического изображения микропрепаратов

Микрофотографии с препаратов получали на микроскопе С-11 с помощью микрофотонасадки МФН-12 У.4.2 и фотоаппарата Nicon F70.

Электронно-микроскопический метод

Материал для электронно-микроскопического исследования подвергали префиксации в течение 2-х часов в 2,5% растворе глютарового альдегида на ОДМ фосфатном буфере с рН=7,4 (Milloning G., 1961), затем фиксировали в 1% растворе тетраокиси осмия на таком же фосфатном буфере при температуре 0-4°С в течение 1 часа (Pallade G.E., 1962). После этого материал промывали в растворе фосфатного буфера, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в аралдит по методике А.М. Glaruert, R.H. Glaruert (1958). Для прицельного электронно-микроскопического анализа со всех

блоков получали серийные полутонкие срезы толщиной 1-2 мкм, которые окрашивали 1% раствором метиленового синего. Ультратонкие срезы толщиной 200-500 нм готовили на ультрамикротоме LKB 4804A, контрастировали 2,5% раствором уранилацетата на 50% этиловом спирте и 0,3% растворе цитрата свинца по E.S. Reynolds (1963). Срезы просматривали и фотографировали на электронном микроскопе Hitachy-HU-12.

Данный фрагмент работы выполнен в лаборатории электронной микроскопии РГМУ.

Приносим искреннюю благодарность члену-корреспонденту РАМН, профессору В.В. Банину за помощь в проведении электронно-микроскопического исследования.

Гистохимический метод

Клетки, гибнущие путем апоптоза, определяли иммуногистохимически с помощью антител к белку р53. Исследование проведено с помощью непрямого иммунопероксидазного метода в прописи А.П. Киясова (1998). В настоящей работе использованы моноклональные антитела к белку р53 фирмы DAKO. Депарафинированные срезы, после промывки в 0,1М трис HCI буфере и в 1% подвергали обработке раствором неиммунной кроличьей сыворотки, после чего препараты инкубировали с мышиными моноклональными антителами. Затем срезы тщательно промывали в буфере и обрабатывали кроличьими антителами (rabbit-antimouse), мечеными пероксидазой хрена. После этого под контролем микроскопа выявляли активность пероксидазы раствором хромогена З-амино-9-этилкорбазола в перекиси водорода. Промытые буфером препараты докрашивали гематоксилином Карацци и заключали в глицерин-желатину.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИИ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В работе представлены результаты изучения эмбрионального и постнатального развития, структурной организации сердечной мышечной ткани белых крыс, сформированной в условиях экспериментально измененного гистогенеза.

Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что реактивные изменения миокарда в ответ на введение преднизолона в эмбриональном периоде проявляются как на клеточно-тканевом, так и на субклеточном уровнях.

Светооптически повреждение сердечной мышечной ткани обнаруживается лишь в самом позднем эмбриональном и в течение постнатального онтогенеза. Оно проявляется в развитии внутриклеточного и межклеточного отека, нарушении тинкториальных свойств миокарда. Цитоплазма поврежденных кардиомиоцитов вакуолизирована, слабо окрашивается эозином. Такие клетки составляют большую часть миокарда до конца внутриутробного развития и сохраняются до половозрелого возраста животных.

Одновременно изменяются морфометрические характеристики кардиомиоцитов различных камер сердца. Для получения морфометрических характеристик кардиомиоцитов нами использованы изолированные кардиомиоциты, полученные методом щелочной диссоциации миокарда, позволяющим объективно оценить форму, размеры клетки и ядра, а также ядерно-цитоплазменное отношение.

Морфологическое изучение изолированных кардиомиоцитов, полученных с помощью метода щелочной диссоциации миокарда, показывает, что для различных стадий гистогенеза сердечной мышечной ткани белой беспородной крысы характерен полиморфизм клеток желудочков и предсердий, что особенно выражено в эмбриогенезе и раннем постнатальном периоде. Постепенно количество отростков уменьшается, но они полностью не исчезают, обеспечивая установление сетевидной структуры миокарда,

сохраняющейся на протяжении всего онтогенеза. В кардиомиоцитах отчетливо выражена поперечная исчерченность. Подавляющее большинство сердечных миоцитов к 6-й неделе постнатального развития становятся двуядерными. Изучение их морфометрических показателей показывает, что чувствительность кардиомиоцитов различных отделов к пренатальному введению преднизолона различна. Это проявляется в том, что размеры кардиомиоцитов левых предсердия и желудочка у экспериментальных животных (6 недель постнатального развития) становятся меньше, а размеры миоцитов правых желудочка и предсердия увеличиваются по сравнению с контролем (рис.1).

Рис. 1. Размер кардиомиоцитов (мкм2) сердца 6-недельных крысят

Динамика изменения ядер в миоцитах желудочков и левого предсердия такая же, как и у цитоплазмы, поэтому показатели ядерно-цитоплазменного отношения в этих отделах не отличаются от контрольных. Реакция кардиомиоцитов правого предсердия на введение глюкокортикоидов отличается тем, что размеры их ядер, по сравнению с контролем, уменьшаются (рис. 2).

Мы объясняем этот факт тем, что для миокарда правого предсердия наиболее характерен структурный и функциональный дуализм. Согласно данным литературы, здесь находится основная масса секреторных клеток, содержащих натрийуретический фактор (Румянцев П.П.,1982). Полученные

нами данные могут быть свидетельством конкурентно--заместительных отношений глюкокортикоидов и гормонов, образующихся секреторными кардиомиоцитами. С другой стороны, наблюдаемое в эксперименте снижение показателя ЯЦО согласуется с данными литературы о механизме действия стероидных гормонов через ядерный аппарат (Розин В.Б. с соавт.,1981).

Рис. 2. Ядерно-цитоплазменное отношение кардиомиоцитов 6-недельных крысят

Дальнейшая динамика морфометрических показателей направлена на установление дефинитивных показателей, при этом в правом предсердии и желудочке размеры мышечных клеток и их ядер в дефинитивном миокарде продолжают увеличиваться по сравнению с контролем (рис.3). Это свидетельствует о том, что реактивность сердечной мышечной ткани правой половины сердца осуществляется по механизму регенерационной гипертрофии кардиомиоцитов. Как подчеркивает ряд исследователей (Саркисов Д.С., Втюрин Б.В., 1967; Романова Л.К., 1984), это явление является своеобразным биологическим процессом, особым видом регуляторной реакции, направленным на выравнивание нарушений, связанных с повреждением органа как целого. В основе наблюдаемой в правой половине сердца гипертрофии кардиомицитов, возникшей в течение постнатального роста, могут лежать

различные механизмы. Это может быть обусловлено не только активацией синтеза ДНК и усилением белкового синтеза. А. Хехт (1975) считает, что кроме увеличения функциональной нагрузки причиной гипертрофии сердца

2500 2000

левый правый левое правое

желудочек желудочек предсердие предсердие

□ контроль шпредниэолон

Рис. 3. Размеры кардиомиоцитов (мкм ) сердца 10-недельных крысят.

является увеличенный распад белков, морфологически выявляющийся в виде некрозов. Кроме того, в условиях введения глюкокортикоидов нами обнаружено усиление гибели путем апоптоза, что также может стимулировать постнатальный рост клеток.

Одним их фундаментальных биологических процессов, определяющих клеточный гомеостаз в организме является гибель клеточного материала, происходящая в эмбриогенезе. Физиологическое значение апоптоза в процессе гисто- и органогенеза также велико, как и роль созидательных процессов: путем апоптоза элиминируются избыточные количества клеток, аномально развивающиеся клетки, клетки с поврежденной структурой ДНК. По А. GШcksraann (1951), следует различать программированную клеточную гибель трех видов: морфогенетическую, связанную с перемещениями материала зародышевых листков и тканей, гистогенетическую, происходящую при дифференцировке клеток, и филогенетическую, сопровождающую процессы метаморфоза. В данной работе кардиомиоциты, гибнущие путем апоптоза,

выявляли иммуноцитохимически с помощью моноклональных антител к белку р53.

Нами установлено, что в течение эмбрионального развития в стенке сердца обнаруживается два вида гибели кардиомиоцитов. В первом случае гибнущие клетки располагаются в миокарде предсердий и желудочков беспорядочно, преимущественно поодиночке и вне связи с формирующимися кровеносными сосудами и трабекулами. Такой вид гибели - гистогенетический - осуществляется путем апоптоза. Он является достаточно редким событием и лишь незначительно усиливается перед рождением животных.

Второй разновидностью клеточной гибели, встречающейся в ходе нормального развития сердца, является морфогенетическая гибель. Она связана с формообразовательными процессами, происходящими в сердце и затрагивает большие группы кардиомиоцитов. Такие группы обнаруживаются вокруг формирующихся сосудов, в наружных слоях миокарда, а также вблизи формирующихся соединительно-тканных перегородок. Кроме этого, морфогенетический апоптоз затрагивает большие группы клеток в . субэндокардиальных слоях миокарда. Особенно ярко это явление выражено в трабекулярном миокарде в конце эмбриогенеза.

На основании анализа собственных данных мы считаем, что глюкокортикоиды не только стимулируют апоптоз, происходящий в эмбриогенезе, но и пролонгируют процессы повреждения клеток. В отличие от нормы, у экспериментальных животных апоптотически измененные кардиомиоциты встречаются и в раннем постнатальном развитии. Это может иметь большое значение, так как, по мнению некоторых авторов (Волков В.И., 1982; Хлопонин П.А., 1988), интенсификация гибели кардиомиоцитов и выделение в межклеточное пространство продуктов их распада активизируют окружающие клетки.

Кроме этого, действие преднизолона в пренатальном периоде вызывает некроз, который в норме не обнаруживается. Следовательно, глюкокортикоиды не только изменяют суицидную программу кардиомиоцитов, но также

вызывают их повреждения, характеризующиеся необратимой структурной реорганизацией. При этом в светлых кардиомиоцитах выявляются ультраструкгурные изменения. В цитоплазме происходит набухание митохондрий, отек и расширение саркоплазматической сети, после чего нарушается целостность межклеточных контактов.

Поскольку в литературе отсутствуют работы, детально изучающие гистогенез и постнатальную организацию сердечной мышечной ткани в условиях воздействия глюкокортикоидными препаратами, то в нашем исследовании этому вопросу уделено особое внимание.

Анализ полученных в работе данных позволил проследить изменение ультраструктурной организации кардиомиоцитов в условиях пренатального воздействия преднизолоном.

На 17-е сутки экспериментально измененного эмбрионального развития отмечается гетероморфизм кардиомиоцитов, который проявляется в том, что в соседних клетках наблюдается разный темп накопления и упорядочивания пучков миофибрилл. Большинство миоцитов предсердий наряду с организованными миофибриллами содержит неорганизованные пучки миофиламентов. Многие кардиомиоциты сохраняют нормальную или незначительно измененную ультраструктуру. В цитоплазме других кардиомиоцитов обнаруживается явление вакуольной дистрофии. Причем в одних клетках отек возникает за счет гиалоплазмы, а в других - за счет значительного расширения цистерн ЭПС. В обоих случаях вакуолизация цитоплазмы возникает без грубого нарушения структуры органелл. Третий тип клеток - темные кардиомиоциты, в них увеличено количество миофибрилл и цитоплазма полностью заполнена сократительным аппаратом.

В последующие сроки эмбриогенеза обнаруживаются кардиомиоциты с грубым нарушением структуры органелл. Во многих клетках происходит лизис миофибрилл. Оставшиеся сократительные структуры располагаются неупорядоченно, возникает значительный внутриклеточный отек. Одновременно происходит просветление кариоплазмы, особенно в центре ядра,

что, вероятно, связано с нарушением проницаемости кариолеммы и поступлением из цитоплазмы в ядро воды. Иногда в ядре вследствие отека появляются электронно-прозрачные полости. В митохондриях таких клеток наблюдается набухание матрикса, кристы укорачиваются, их мембраны частично разрушаются. В некоторых митохондриях наблюдается гомогенизация матрикса.

В случае обратимости произошедших изменений агранулярная ЭПС расширяется, фрагментируется, её цистерны образуют крупные полости, которые подходят к плазматической мембране и, сливаясь с ней, способствуют выведению избытка жидкости за пределы клетки.

Вместе с тем, к концу эмбриогенеза увеличивается популяция темных клеток с хорошо развитым сократительным аппаратом. Ядра таких клеток характеризуются конденсацией хроматина. Количество митохондрий в их цитоплазме становится меньше, чем в светлых клетках, расширенные цистерны ЭПС заполняются электронно-светлым материалом. Контакты между темными миоцитами, а также между темными и светлыми клетками нарушаются. Интестициальное пространство постепенно расширяется. В некоторых темных кардиомиоцитах дистрофические изменения стремительно нарастают и они гибнут.

В конце экспериментально измененного эмбриогенеза обнаруживается появление межклеточного отека. В расширенное интерстициальное пространство вливается содержимое погибших клеток и между кардиомиоцитами обнаруживаются фрагменты мембран й рибосомы. Деструктивные процессы в миокарде становятся максимально выраженными. Ядра кардиомиоцитов имеют неравномерно расширенное перинуклеарное пространство. В них наблюдается периферическая конденсация хроматина. Кариолемма образует многочисленные инвагинации. В миоцитах, ультраструктура которых соответствует светлым клеткам, миофибриллы часто пересокращены. В них отсутствует четкая поперечная исчерченность, 2-полоски имеют неправильный ход. Агранулярная саркоплазматическая сеть в

поврежденных кардиомиоцитах вакуолизирована, в митохондриях возникает гомогенизация внутренних структур - кристы практически перестают быть различимыми. Эти изменения, по-видимому, являются терминальными и приводят к некротической гибели.

После рождения у. крысят контрольной группы миокард предсердий и желудочков образован дифференцирующимися кардиомиоцитами, среди которых есть как темные, так и светлые клетки, взаимодействующие между собой.

Первая неделя после рождения животных и соответственно после окончания введения преднизолона характеризуется сохранением отечности интерстиция. Пространство между кардиомиоцитами и стенкой капилляра расширено, эндотелиальные клетки имеют темную цитоплазму с большим количеством микропиноцитозных пузырьков. Межклеточное пространство отличается активным состоянием фибробластов: их количество в интерстиции значительно больше, чем в норме, цитоплазма клеток заполнена гранулярной ЭПС. Характер дальнейших ультраструктурных изменений темных кардиомиоцитов может быть различным. Часть сердечных мышечных клеток остается в составе миокардиальных волокон, сохраняет структуру контактов с соседними клетками. Другие - темные миоциты вследствие возникшего отека интерстиция обособляются от соседних клеток. Несмотря на сохранность ядра и сократительного аппарата, в органоидах общего значения возникают деструктивные процессы - гомогенизация матрикса митохондрий, нарушение расположения цистерн саркоплазматической сети, их фрагментация и расширение. Часть темных кардиомиоцитов не способна возвратиться к устойчивому состоянию, их дальнейшая деструкция переходит в некротические изменения - происходит гомогенизация миофибрилл, резкое расширение межмиофибриллярных пространств. Ядра при этом пикнотизируются.

В миоцитах предсердий и желудочков начинают доминировать процессы внутриклеточной регенерации. С этого срока наблюдается активизация клеточной оболочки. Плазмолемма образует многочисленные, различной

глубины инвагинации и цитоплазматические отростки, часто превращающиеся в вакуоли. Образовавшиеся вакуоли отшнуровываются от поверхности клетки и в результате такого своеобразного экзоцитоза фрагменты цитоплазмы оказываются в интерстиции. Остатки погибших органоидов подвергаются аутофагии. Глубокое повреждение кардиомиоцитов наблюдается даже через неделю после рождения крысят - в некоторых миоцитах органоиды исчезают, появляются многочисленные капли жира, развивается некроз, в результате которого клетки погибают. Вместе с тем, часть кардиомиоцитов гибнет путем апоптоза.

На 6-й неделе постнатального развития в миокарде сохраняются единичные поврежденные кардиомиоциты или группы поврежденных кардиомиоцитов, находящиеся в состоянии внутриклеточной регенерации. В это время в миокарде перестают определяться поврежденные сердечные мышечные клетки, находящиеся в процессе гибели. Жизнеспособные миоциты, имевшие различные повреждения ультраструктуры, претерпевают к этому времени внутриклеточную регенерацию.

Кроме того, в некоторых миоцитах введение преднизолона вызывает нарушение обмена веществ и, в связи с этим, в отдельных расширенных канальцах эндоплазматической сети кардиомиоцитов происходит накопление липидов. В некоторых митохондриях наблюдается размытость контуров крист. Матрикс этих митохондрий плотный, кристы расположены неориентированно, во многих митохондриях встречаются липидные капли. В целом же структура миокарда восстанавливается, сердечные миоциты значительно увеличиваются в размерах, в них резко нарастает объем сократительного аппарата.

К 10-й неделе постнатального развития межклеточный и внутриклеточный отек в миокарде окончательно исчезает. Частично разрозненные ранее кардиомиоциты не утрачивают жизнеспособность благодаря сохранившимся вставочным дискам. Аккумуляция липидов может объясняться либо сдвигом динамического равновесия в сторону усиления поступления липидов в порядке приспособления к возросшим энергетическим

потребностям сердца, либо депрессией окисления липидов вследствие нарушения координации окислительного фосфорилирования (Данилова К.М., 1972).

Таким образом, степень выраженности деструктивных изменений органелл сердечных миоцитов по сравнению с масштабами регенерации возрастает до конца эмбриогенеза. В тот же период возрастает отечность их цитоплазмы. В некоторых кардиомиоцитах появляются признаки вакуольной дистрофии. А.В. Авцын, В.А. Шахламов (1979) считают, что вакуольная дистрофия является обратимым процессом, однако при продолжительном действии патогенного фактора может привести миоциты к гибели. Действительно, в большей части кардиомиоцитов наряду с явлениями альтерации начинаются внутриклеточные регенераторные процессы, подробно описанные Д.С. Саркисовым (19770,1977,1987).

Мозаичность внутриклеточных изменений кардиомиоцитов, появляющаяся в ответ на воздействие преднизолона, очевидно, обусловлена неодинаковой степенью дифференцировки кардиомиоцитов, различным функциональным состоянием клеток, и, возможно, их разной чувствительностью к глюкокортикоидам.

Обратимые ультраструктурные изменения кардиомиоцитов при воздействии преднизолона проявляются в эозинофилии цитоплазмы, вакуолизации ультраструктур, возникновении малых мембранных дефектов и появлении миелиновых телец. Однако благодаря внутриклеточной регенерации жизнеспособность большинства кардиомиоцитов с подобными нарушениями ультраструктуры сохраняется.

Поздними и достоверными признаками гибели кардиомиоцитов путем некроза следует считать появление крупных мембранных дефектов, расширение перинуклеарного пространства, значительное разряжение цитоплазматического матрикса и сильную вакуолизацию цистерн эндоплазматической сети. Затем следует кариопикноз, кариорексис и

кариолизис. Такие изменения являются терминальными, имеют необратимый характер и свидетельствуют о наступлении некроза.

В кардиомиоцитах с признаками апоптоза возникают маргинация ядерного хроматина, расширение перинуклеарного пространства, уплотнение ядра, после чего происходит конденсация цитоплазмы и образование выпячиваний на поверхности клетки.

Особого внимания заслуживает вопрос о наличии в сердечной мышечной ткани кардиомиоцитов, имеющих особенности ультраструктурной организации темных и светлых клеток. Известно, что темные и светлые клетки встречаются в различных тканях, входящих в состав многих органов (Коломина С.МД985; Меркулова О.С., Даринский Ю.А., 1982; Торбек В.Э., Юрина Н.А., 1998; Улыбина И.Н. Цындаренко С.Н., 1973, Ясвоин Г.В.,1948).

Светлые кардиомиоциты характеризуются преобладанием в ядре эухроматина, наличием в цитоплазме равномерно распределенных органоидов общего значения, средней плотностью расположения миофибрилл. Темные кардиомиоциты содержат очень плотно расположенные миофибриллы. В их ядрах преобладает гетерохроматин. Обращает на себя внимание, что характер структурно-функциональной реорганизации темных и светлых кардиомиоцитов в ответ на введение преднизолона различен. Светлые сердечные миоциты реагируют на воздействие преднизолона вакуолизацией органоидов и отечностью цитоплазмы. Далее следует деструкция органоидов. Реактивные изменения темных кардиомиоцитов начинаются с нарушения межклеточных контактов с окружающими миоцитами, после чего в темных миоцитах возникают деструктивные изменения.

Интерпретация полученных данных возможна с позиций функциональной обусловленности структурной организации миокарда. Выявленные различия структуры популяции темных и светлых кардиомиоцитов являются одним из механизмов регуляции поддержания функционального единства миокарда. Интеграция различных морфологических форм миоцитов, их различные способы реактивности в составе единой

популяции обусловливают стереотипный тип реакций на повреждение, пластичность и восстановительные способности миокарда.

В противоположность этому, Л.Б. Калимуллина (2002), считает, что темные клетки представляют собой популяцию с интенсивным белковым синтезом, среди которых могут находиться элементы, гибнущие путем апоптоза. Действительно, существует представление о том, что процесс апоптоза в сердце отличается от классического (Narula J., Kolodgie F.D., 2000) и не исключено, что структура темных кардиомиоцитов в сердечной мышечной ткани отражает начальные изменения, приводящие к их гибели.

Таким образом, проведенные эксперименты по изучению развития сердечной мышечной ткани в норме и в процессе экспериментально измененного гистогенеза показывают, что закономерно протекающие процессы пролиферации, дифференцировки и программированной клеточной гибели приводят к установлению дефинитивного строения с определенным диапазоном изменчивости. Результаты полученных данных свидетельствуют о том, что действие глюкокортикоидных препаратов на кардиомиогенез заключается в повреждении ультраструктур кардиомиоцитов, усилении гибели мышечных клеток путем апоптоза и появлении гибели путем некроза. Одновременно возникает комплекс процессов внутриклеточной регенерации, который приводит к восстановлению обратимо поврежденных клеток и постнатальной регенерационной гипертрофии сохранившихся кардиомиоцитов. Следовательно, нарушение кардиомиогенеза проявляется на основе закономерных базисных процессов, присущих эмбриональному гистогенезу, и характер возникших изменений определен, с одной стороны пластичностью, с другой - детерминацией сердечной мышечной ткани.

ВЫВОДЫ

1. Экспериментальное нарушение эмбриогенеза крысиного зародыша путем многократного введения глюкокортикоидного препарата - преднизолона вызывает деструктивные процессы в сердечной мышечной ткани, проявляющиеся в нарушении ультраструктуры ядер и цитоплазматических органоидов кардиомиоцитов.

2. Восстановление структурной организации кардиомиоцитов осуществляется путем внутриклеточной регенерации. В динамике морфологических показателей сердечных миоцитов наблюдается корреляция в пределах правой и левой половин сердца. В раннем постнатальном периоде у экспериментальных животных кардиомиоциты левой половины сердца (предсердия и желудочка) характеризуются меньшими размерами по сравнению с контролем. Размеры ядра и цитоплазмы кардиомиоцитов правого предсердия и правого желудочка превышают контрольные показатели.

3. Наличие различных морфологических форм кардиомиоцитов в составе сердечной мышечной ткани обусловливает пластичность и восстановительные способности миокарда. В эксперименте в светлых кардиомиоцитах деструктивные изменения завершаются перестройкой синтетического аппарата с последующей внутриклеточной регенерацией поврежденных органелл. Темные кардиомиоциты являются менее устойчивой к повреждению популяцией сердечных мышечных клеток. При экспериментальном воздействии глюкокортикоидов в них возникают необратимые повреждения ядерного аппарата и внутриклеточных органелл. Гибнущие миоциты теряют межклеточные контакты и подвергаются гибели по механизму, морфологически сходному с апоптозом.

р53 и метода электронной микроскопии установлено, что в процессе эмбрионального развития сердечной мышечной ткани имеют место два вида клеточной гибели кардиомиоцитов, происходящих путем апоптоза, -гистогенетическая и морфогенетическая. Гистогенетической гибели подвергаются отдельные кардиомиоциты, расположенные мозаично. Морфогенетическая гибель затрагивает большие группы кардиомиоцитов. Она связана с формообразовательными процессами, происходящими в сердце, и обеспечивает дефинитивное строение сердца как органа.

5. Элиминация кардиомиоцитов в ходе экспериментально измененного гистогенеза путем введения глюкокортикоидного препарата осуществляется двумя способами. Первый характеризуется выраженной апоптотической гибелью кардиомиоцитов. Количество гибнущих кардиомиоцитов значительно больше, чем у контрольных животных. Кроме этого обнаруживаются морфологические проявления гибели кардиомиоцитов, свидетельствующие о том, что разрушение клеток происходит по механизму некроза.

6. Возникающие в результате воздействия глюкокортикоидов изменения соотношения и интенсивности процессов дифференцировки и программированной клеточной гибели кардиомиоцитов в процессе активного кардиомиогенеза лежат в основе клеточных и тканевых механизмов патологического гистогенеза. Диапазон этих изменений обусловлен пластичностью сердечной мышечной ткани и ее специфической детерминацией.

Практические рекомендации

1. Представленные морфологические, иммуногистохимические и электронно-микроскопические характеристики дифференцирующихся и дифференцированных кардиомиоцитов могут быть использованны как основополагающие при проведениии экспериментов на плодах белых беспородных крыс.

2. Установленные особенности кардиогенеза при воздействии на зародыш синтетического глюкокортикоида преднизолона следует учитывать при моделировании врожденных аномалий развития сердца с помощью препаратов, обладающих эмбриотропным действием.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Иммуногистохимический и морфологический анализ кардиомиоцитов в ходе эмбрионального и постэмбрионального развития миокарда. //Материалы докладов Всероссийской научной конференции "Гистологическая наука России в начале XXI века: итоги, задачи, перспективы" - Москва, 22-24 октября, 2003 г. - М, 2003.-С.30-31 (соавт.: Ямщиков Н.В., Шурыгина О.В.).

2. Морфометрические особенности изолированных кардиомиоцитов предсердий и желудочков в эмбриональном и постэмбриональном развитии кур //Материалы докладов всероссийской научной конференции "Реактивность и пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях", посвященной памяти члена-корреспондента АМН СССР профессора Ф.М. Лазаренко., г. Оренбург, 18-20 ноября, 2003г.- Морфология, Т. 124, №5, 2003 г. - С. 85 (соавт.: Ямщиков Н.В., Шурыгина О.В.).

3. Морфологическая характеристика кардиогенеза крыс //Сборник докладов конференции молодых исследователей "Аспирантские чтения- 2003" -Самара, 2003. - С.326-328.

4. Иммуногистохимический анализ гибели кардиомиоцитов в нормальном и экспериментально измененном эмбриогенезе // Материалы научной конференции" Фундаментальные и прикладные проблемы гистологии. Гистогенез и регенерация тканей." С.-Петербург, 7-8 апреля 2004.- СПб, 2004. - С. 77-78 (соавт.: Вологдина Н.Н., Суворова Г.Н.)

5. Морфометрический анализ изолированных кардиомиоцитов различных отделов сердца // Материалы научной конференции " Фундаментальные и прикладные проблемы гистологии. Гистогенез и регенерация тканей." С.Петербург, 7-8 апреля 2004. - СПб, 2004. - С. 75-77 (соавт.: Ямщиков Н.В., Суворова Г.Н.).

6. Ультраструктурный и иммуноцитохимический анализ кардиомиогенеза эмбрионов птиц и крыс // Материалы V Общероссийского съезда анатомов, гистологов и эмбриологов, г. Казань, 17-18 сентября 2004 г. -Морфологические ведомости. - №1-2. - 2004 г.- С. 127 (соавт.: Ямщиков Н.В., Шурыгина О.В.).

Подписано в печать 11.11.2004. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печать оперативная. Объем 1,51 усл. печ. л. Тираж 120 экз. Заказ 982.

Отпечатано в типографии ООО «ОФОРТ» 443068, г. Самара, ул. Межевая, 7. Лицензия ПД 7-0050 от 30.08.2000 г. Тел. 35-37-01,35-37-45,79-08-22.

№234 1«

РНБ Русский фонд

2005-4 23124

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Ямщикова, Екатерина Николаевна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О СТРУКТУРНОЙ И МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ ОРГАНИЗАЦИИ СЕРДЕЧНОЙ МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ В НОРМАЛЬНОМ РАЗВИТИИ И ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО ИЗМЕНЕННОМ МИОГЕНЕЗЕ

1.1. Современные представления об источниках и факторах развития тканей, образующих стенку сердца.

1.2. Гистогенез сердечной мышечной ткани позвоночных животных в эмбриональном и постнатальном периодах онтогенеза.

1.3. Источники развития и морфофункциональная характеристика немиокардиальных клеток мышечной оболочки сердца.

1.4. Морфологическая характеристика клеточной гибели в процессе эмбрионального кардиомиогенеза.

1.5. Ультраструктурная организация сердечной мышечной ткани.

1.6. Реактивные изменения тканей и органов под влиянием различных глюкокортикоидных препаратов.

2.2 РАЗВИТИЕ СЕРДЕЧНОЙ МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ В

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО ИЗМЕНЕННОМ ГИСТОГЕНЕЗЕ

2.2.1 Светооптическое изучение развития сердечной мышечной ткани после

2.2.2 Внутриклеточные деструктивные процессы в развивающейся сердечной

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1.1 Материал исследования.

2.1.2 Характеристика методов исследования. пренатального введения преднизолона мышечной ткани и гибель кардиомиоцитов

2.2.3 Ультраструктурная организация кардиомиоцитов различных стадий дифференцировки в эксперименте с пренатальным введением преднизолона.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфологическая характеристика реактивных изменений сердечной мышечной ткани в условиях экспериментально измененного гистогенеза"

Актуальность проблемы. Среди разрабатываемых в современной морфологии проблем фундаментального и прикладного характера значительное место занимает изучение закономерностей гистогенеза и регенерации тканей и органов.

Сложность и многоплановость различных сторон эмбрионального гистогенеза и регенерации миокарда обусловливают широкий круг вопросов, привлекающих внимание морфологов (.Румянцев П.П,1982; Непомнящих Л.М. с соавт., 1986,1989; Швалев В.Н., 1989; Ямщиков Н.В., 1985,1991; Стадников, А.А. 1994,1997; Данилов Р.К., 2000).

Изучение структурных основ развития миокарда представляет не только теоретический, но и практический интерес. О повышенном внимании клиницистов к строению и работе сердца свидетельствует выделение науки о болезнях этого органа в самостоятельный раздел — кардиологию. Актуальность исследования миокарда в большой степени обусловлена недостаточным знанием патогенеза многочисленных заболеваний сердца. В последние годы все большее внимание гистологов привлекают проблема регенерации сердечной мышечной ткани. Необходимость изучения её восстановительных свойств связана с тем, что миокард довольно часто вовлекается в патологические процессы. Эффективность лечебных мероприятий во многом зависит от понимания механизмов восстановительных процессов в тканях сердца.

Методологической основой изучения регенераторных возможностей сердечной мышечной ткани является знание закономерных процессов нормального эмбрионального развития. В связи с этим подлежит дальнейшему изучению соотношение базисных процессов эмбрионального гистогенеза - пролиферации, дифференцировки, интеграции и клеточной гибели, закономерное протекание которых приводит к нормальному формированию миокарда. В литературе недостаточно освещены морфологические аспекты межклеточных и межтканевых взаимоотношений в развивающемся миокарде. Остается спорным вопрос об особенностях развития и функции светлых и темных кардиомиоцитов. До сих пор нет достоверных данных о соотношении и особенностях топографии разных видов гибели кардиомиоцитов. Отсутствуют исследования эмбрионального кардиомиогенеза и особенностей реактивных изменений кардиомиоцитов различных камер сердца в условиях воздействия фармакологических препаратов.

Известно, что метаболические процессы, протекающие в тканях эмбрионов, в значительной степени зависят от гормональной регуляции. В терапевтической практике широко применяются глюкокортикоидные препараты, в частности, преднизолон. Однако в литературе отсутствуют сведения о строении миокарда эмбрионов и взрослых животных после пренатального введения глюкокортикоидов. Данные об реактивных изменениях сердечной мышечной ткани в ходе её эмбрионального гистогенеза немногочисленны и часто противоречивы. Более того, в экспериментальной эмбриологии глюкокортикоидные препараты используют как вещества, обладающие тератогенной активностью. В связи с этим запросы теоретической и практической медицины ставят перед исследователями задачи по изучению реактивности органов и тканей в условиях воздействия данных препаратов. Существование спорных и малоизученных сторон дифференцировки, пролиферации и клеточной гибели кардиомиоцитов объясняет наш интерес к эмбриональному и постэмбриональному развитию сердечной мышечной ткани в норме и при экспериментально измененном эмбриогенезе. Выяснение этих вопросов с помощью гистологических, электронномикроскопических, иммуноцитохимических и морфометрических методов имеет не только теоретическое значение, но и является чрезвычайно актуальным для практической медицины и, в частности, для кардиологии.

Цель работы - морфологический анализ эмбрионального и постнатального развития, структурной организации сердечной мышечной ткани в условиях экспериментально измененного кардиомиогенеза путем введениям зародышам глюкокортикоидного препарата преднизолона.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задами:

Научная новизна полученных данных.

Используя комплекс морфологических методов, впервые в рамках одного исследования проведено детальное изучение гистогенеза сердечной мышечной ткани в норме и при воздействии на плоды белых крыс глюкокортикоидного препарата. В работе получены количественные характеристики кардиомиоцитов предсердий и желудочков в постнатальном периоде после экспериментально измененного гистогенеза.

Впервые проведено комплексное гистологическое, иммуноцитохимическое, морфометрическое и электронномикроскопическое исследование структурной организации миокарда белых крыс в норме и после введения преднизолона в течение внутриутробного периода развития. С помощью комплекса методов гистологического исследования изучены регенераторные процессы, происходящие в сердечной мышечной ткани в ответ на воздействие преднизолона.

Впервые с помощью иммуноцитохимического метода исследования с применением моноклональных антител к белку р53 изучены особенности топографии гибнущих кардиомиоцитов и установлено наличие морфогенетической и гистогенетической программированной клеточной гибели в ходе эмбрионального развития сердца. Сочетание методов электронной микроскопии и иммуноцитохимии позволило изучить морфологические проявления гибели кардиомиоцитов в ходе экспериментально измененного гистогенеза.

Научная и практическая значимость работы.

Полученные данные о структурной организации миокарда, сформированного в условиях измененного эмбриогенеза, имеют значение для разработки теоретических основ применения глюкокортикоидных препаратов в практической медицине. Данные о гистогенезе сердечной мышечной ткани в условиях экспериментально измененного эмбриогенеза могут быть использованы для моделирования врожденных пороков сердца.

Полученные в результате данного исследования морфометрические, иммуноцитохимические и электронномикроскопические характеристики сердечной мышечной ткани могут быть использованы в качестве базовых при проведении экспериментов на лабораторных животных.

Положения, выносимые на защиту.

2. Иммуногистохимическое выявление апоптоза с помощью моноклональных антител к белку р53 позволяет установить наличие 2-х видов гибели кардиомиоцитов - морфогенетической и гистогенетической.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на научной конференции "Гистологическая наука России в начале XXI века: итоги, задачи, перспективы" (г. Москва, 2003), на Всероссийской научной конференции "Реактивность и пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях", посвященной памяти члена-корреспондента АМН СССР профессора Ф.М. Лазаренко (г. Оренбург, 2003), на Всероссийской конференции "Молодые ученые - медицине" (г. Самара, 2003), на V Общеросийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (г.

Казань, 2004), на расширенном заседании Самарского отделения Всероссийского научного общества анатомов, гистологов и эмбриологов (2004).

Внедрение результатов исследования.

Результаты исследований используются в учебном процессе в Самарском государственном медицинском университете при чтении лекций и проведении практических занятий по темам «Мышечные ткани» и «Сердечно-сосудистая система».

Публикации. По материалам диссертации опубликованы в печати 6 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования, их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 146 источников, из которых 68 — отечественные. Иллюстративный материал представлен 1 таблицей, 84 рисунками, которые включают 63 электронограммы и 15 микрофотографий.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Ямщикова, Екатерина Николаевна

Выводы

1. Экспериментальное нарушение эмбриогенеза крысиного зародыша путем многократного введения глюкокортикоидного препарата — преднизолона-вызывает деструктивные процессы в сердечной мышечной ткани, проявляющиеся в нарушении ультраструктуры ядер и цитоплазматических органоидов кардиомиоцитов.

2. Восстановление структурной организации кардиомиоцитов осуществляется путем внутриклеточной регенерации. В динамике морфологических показателей сердечных миоцитов наблюдается корреляция в пределах правой и левой половины сердца. В раннем постнатальном периоде у экспериментальных животных кардиомиоциты левой половины сердца (предсердия и желудочка) характеризуются меньшими размерами по сравнению с контролем. Размеры ядра и цитоплазмы кардиомиоцитов правого предсердия и правого желудочка превышают контрольные показатели.

4. Программированная гибель является неотъемлемым процессом эмбрионального гистогенеза сердечной мышечной ткани крыс. С помощью иммуноцитохимической реакции с моноклональными антителами к белку р53 и метода электронной микроскопии установлено, что в процессе эмбрионального развития сердечной мышечной ткани имеют место два вида клеточной гибели кардиомиоцитов, происходящих путем апоптоза, — гистогенетическая и морфогенетическая. Гистогенетической гибели подвергаются отдельные кардиомиоциты, расположенные мозаично. Морфогенетическая гибель затрагивает большие группы кардиомиоцитов. Она связана с формообразовательными процессами, происходящими в сердце, и обеспечивает дефинитивное строение сердца как органа.

5. Элиминация кардиомиоцитов в ходе экспериментально измененного путем введения глюкокортикоидного препарата гистогенеза осуществляется двумя способами. Первый характеризуется выраженной апоптотической гибелью кардиомиоцитов. Количество гибнущих кардиомиоцитов значительно больше, чем у контрольных животных. Кроме этого обнаруживаются морфологические проявления гибели кардиомиоцитов, свидетельствующие о том, что разрушение клеток происходит по механизму некроза.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Ямщикова, Екатерина Николаевна, Оренбург

1. Авцын А.П., Шахламов В.А. Ультраструктурные основы патологии клетки. — М.: Медицина, 1979. 316 с.

2. Балуева О.Б. Морфофункциональная характеристика кардиомицитов крыс в норме и после воздействия этилого эфира диметилтрихлоргексеновой кислоты в различные периоды онтогенеза: Автореф. дисс. . канд. Мед. Наук. СПб, 1996- 22с.

3. Белушкина Н.Н., Северин С.Е. Молекулярные основы патологии апоптоза // Архив патологии. -2001. Т.72. - №1. - С. 51-60.

4. Валиуллин В.В. Влияние дексаметазона на развитие денервационных изменений в быстрой и медленной скелетной мышцах //Бюлл. экспер. биол. 1999. - Т. 128 - №7. - С. 51 -53.

5. Валиуллин В.В. Нейротрофический контроль и гуморальная регуляция пластичности скелетной мышцы: Автореф дисс. . докт. биол. наук — Саранск, 1996. -46с.

6. Валиуллин В.В., Дзамуков Р.А. Роль импульсивной активности мотонейрона в регуляции состава миозинов медленной скелетной мышцы // Бюлл. экспер. биол. 1998. - Т. 126 - №10. - С. 472 - 473.

7. Волков В.И. Морфологическая характеристика сердечных миоцитов лягушки (Rana ridibunda) в процессе кардиогенеза. // Арх. Анат., 1982. -Т.82. вып.З. - С. 73-80.

8. Горбачева Т.В. Химико-токсикологическое исследование анаболических стероидов: Автореф. диссс. . док.мед. наук. СПб, 1996. - 22с.

9. Дробышева Р.А. Гистохимический анализ дифференцировки мышечных элементов миокарда человека в эмбриогенезе // Гистогенез, регенерация и трансплантация миокарда и скелетных мышц, Куйбышев, 1970. С.30-36.

10. Дробышева Р.А. Дивергентная дифференцировка мышечных элементов миокарда у некоторых позвоночных: Автореф. дисс. . докт. мед. наук. -Куйбышев: КМИ,1975. 46с.

11. Дробышева Р.А. Секреторные гранулы в кардиомиоцитах // Арх. анат. -1975. Т. 69. - №7. - С.23-26.

12. Ерохина И.Л. Пролиферация и синтез ДНК на ранних стадиях развития миокарда // Цитология. 1968. - Т. 10. - № 2. - с. 162-172.

13. Казанин В.И. Систематика клеточных реакций в патологии. — 2-е изд. -М.: Медицина, 2004. 104 с.

14. Калимуллина Л.Б. К вопросу о "темных" и "светлых" клетках. -Морфология. 2002. - Т. 122, №4. - С. 75-80.

15. Карсанов Н.В. Некоторые итоги изучения молекулярной сущности интра-и экстракардиальной дистрофии миокарда // Артериальная гипертония и недостаточность сердца. Тбилиси, 1971. - С. 109-111.

16. Кетлинский С.А. Влияние гидрокортизона на изменение митотической активности в некоторых эпителиях эпидермального типа // Архив анат. — 1974. Т.67. - Вып. 11. - С. 76-79.

17. Клишов А.А. Гистогенез и регенерация тканей. — Л.: Медицина, 1984. -232 с.

18. Клишов А.А. Концепция клеточно-дифферонной организации тканей и проблемы регенерации // Реактивность и регенерация тканей: Тез. докл. науч. конф. Ленинград, 1990. - С. 32.

19. Кнорре А.Г. Гистогенез сердечной мышцы в нормальном индивидуальном развитии, при регенерации и трансплантации // Тр. Ин-та экспер. морфол. АН Груз. ССР. Тбилиси, 1961. - Т.9. - С.55-59.

20. Коган М.Е., Белов Л.Н., Леонтьева Т.А. Определение количества клеток в различных органах и тканях после щелочной диссоциации // Арх. пат. — 1976.-Т. 38.-№ 1.-С. 77-80.

21. Коломина С.М. Современное состояние вопроса о темных и светлых клетках в нормальных и опухолевых тканях. // Успехи соврем, биологии. -1985. Т.100. - №2. - С. 302-320.

22. Комиссаренко В.П., Тронька Н.Д., Минченко А.Г. Современные представления о механизме действия глюкокортикоидных гормонов // Физиол. Журн. 1982. - 28. - Вып. 6. - С. 721-733.

23. Кырге П.К. Молекулярные механизмы действия глюкокортикоидов // Успехи физиол. Наук. 1981. - Вып.1. - С. 56-79.

24. Лушников Е.Ф., Загребин В.М. Апоптоз клеток: морфология, биологическая роль, механизмы развития // Арх. пат. 1987. - Т. 69. -Вып. 2. - С. 84-89.

25. Лушникова Е.Л., Непомнящих Л.М., Молодых О.П., Клинникова М.Г. Гибель, элиминация и регенерация кардиомиоцитов мышей после гипертермии // Бюлл. экспер. биол. 2000. - Т.130 - №8. - С. 228-231.

26. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз). М.: Медицина, 2001.- 192 с.

27. Меркулова О.С., Даринский Ю.А. Реакция нейронов на длительную стимуляцию. Л. - Наука, 1982.

28. Мишин В.Г. Ультраструктурный анализ изменений эмбриональной скелетной мышечной ткани при метаболических нарушениях: Автореф. дисс. . канд.мед. наук. Л., 1978.-25с.

29. Мусхешвили Г.Д., Адлер В.В., Шапот B.C. Вероятные причины снижения пролиферативной активности тимуса крыс при однократном введении глюкокортикоидов // Биохимия. 1983. -Т.48. -№11.- С. 1914-1920.

30. Мышечные ткани: Учеб. Пособие / Авт.: Е.А.Шубникова, Н.А. Юрина, Н.Б. Гусев, О.П. Балезина, Г.Б. Большакова / Под ред. Ю.С. Ченцова. М.: Медицина, 2001. - 240 с.

31. Новиков B.C. Программированная клеточная гибель. СПб.: Наука, 1996. - 276 с.

32. Пальцев М.А., Попова Л.М. Клиническое значение электронно-микроскопического исследования биоптатов мышцы при миастении в условиях лечения преднизолоном // Архив патологии. 1981. - №1. — С.52-57.

33. Патюченко О.Ю. Развитие мышечного и интерстициального компонентов миокарда в пренатальном кардиогенезе человека: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Саранск, 2000. - 24с.

34. Пахомов А.Н. Сравнительное гистохимическое изучение АТФ-азной активности скелетной, сердечной и гладкой мускулатуры в ходе развития цыпленка // Вестн. Ленинградского универ. — 1969. Т.9. - Вып. №2. -С.122-127.

35. Программированная клеточная гибель / Под ред. B.C. Новикова. СПб., 1996.-276 с.

36. Ренова Л.В. Морфологические изменения миокарда человека при различном уровне глюкокортикоидов в организме // Тр. Ленинград, науч. общ-ва патологоанатомов. 1983. - Вып. 24. - С. 133-136.

37. Розин В.Б., Смирнов А.Н. Рецепторы и стероидные гормоны. М.: Изд-во МГУ. - 1971. - С. 314-317.

38. Романова JI.К. Регуляция восстановительных процессов. М.: Изд-во Моск. ун-та. - 1974. - 175 с.

39. Руденко Е.Ю. Морфофунуциональная характеристика тканей сердца в нормальном и экспериментально измененном эмбриогенезе озерной лягушки (Rana ridibunda Р.): Афтореф. дисс. . канд. биол. наук. -Саранск, 1999-26 с.

40. Руководство по гистологии. В 2 т. СПб.: СпецЛит, 2001. - 495 с.

41. Румянцев П.П. Генетический аппарат миокардиальных клеток и механизмы регенерации мышцы сердца // Регуляторные механизмы регенерации / М., 1973. С. 35-50.

42. Румянцев П.П. Кардиомиоциты в процессах репродукции, дифференцировки и регенерации. Л.: Наука, 1982. - 288 с.

43. Румянцев П.П., Соколовская И.Л. Синтез ДНК и кинетика пролиферации ядер в ходе дифференциации мышцы сердца // Исследование клеточных циклов и метаболизма нуклеиновых кислот при дифференциации клеток. -М.-Л.: 1964.-С. 71-82.

44. Саркисов Д.С., Втюрин Б.В. Электронная микроскопия деструктивных и регенераторных внутриклеточных процессов. М., 1967.-224с.

45. Саркисов Д.С. Регенерация и ее клиническое значенеие. М.: Медицина, 1970.-283 с.

46. Саркисов Д.С. Очерки по структурным основам гомеостаза. М.: Медицина, 1977. - 352 с.

47. Селезнев Ю.М., Смирнов В.Н. Молекулярные аспекты глюкокортикоидной регуляции метаболизма (Обзор литературы) // Вест. А.М.Н. СССР. 1980. - №8. - С. 74-82.

48. Скворцов О.И. Клеточные механизмы эмбрионального развития сердечной мышечной ткани в норме ипри воздействии физических факторов: Автореф дисс. . канд. мед. наук. Москва, 1997-23 с.

49. Скворцов О.И., Болоха А.А. Становление межклеточных контактов в эмбриогенезе сердечной мышечной ткани куриного эмбриона // Матер. IV съезда российских морфологов с междунар. участием. — Российские морфологические ведомости. 1999. - № 1-2. - С. 135.

50. Сээне Т.П., Алев К.П. Глюкокортикоиды во внутриклеточном метаболизме миозина и актина // Бюл. экспер. биол. -1986. -№11. — С.557-559.

51. Твердохлеб И.В. Гетерогенность митохондриального аппарата миокарда и механизмы ее формирования в раннем онтогенезе крыс // Цитология и генетика. 1998. - Т.32 - №2. - С. 8-12.

52. Торбек В.Э., Юрина Н.А. Гетерогенность эпителиоцитов тимуса и их ультраструктура у новорожденных крыс. // Морфология. Т.114. - вып.6. -С. 54-59.

53. Улыбина И.Н., Цындаренко С.Н. О соотношении темных и светлых клеток Пуркинье мозжечка крыс при различных способах фиксации ткани в норме и при гипоксии. // Цитология. 1973. -Т. 16. - №2. -С. 155-159.

54. Хехт А. Введение в экспериментальные основы современной патологии сердечной мышцы. М.: Медицина, 1975. - 503 с.

55. Хлопонин П.А. Сравнительно-морфологические аспекты гистогенеза и реактивных изменений тканей сердца позвоночных: Автореф. дисс. . докт.мед. наук. Киев, 1988. - 43 с.

56. Хлопонин П.А. Сравнительный анализ процессов дифференцировки и пролиферации кардиомиоцитов желудочков и предсердий в онтогенезе птиц // Арх. анат. 1976. - Т. 71. - № 12. - С. 49-57.

57. Хлопонин П.А. Эмбриональный и постэмбриональный гистогенез миокарда желудочков и предсердий сердца птиц: Автореф. дисс. . канд. Мед. Наук. Ростов-на-Дону, 1975. - 24с.

58. Хлопонин П.А., Патюченко О. Ю. Об изменениях пролиферативного компонента кардиомиогенеза в пренатальном развитии человека // Тез докл. 1 Науч. сес. Рост. гос. мед. ун-та / Ростов-на Дону. — 1996. — С. 59-60.

59. Хлопонин П.А., Патюченко О.Ю. Морфологическая характеристика мио-и эндокарда в сердце зародыша человека 5 недель внутриутробного развития // Морфогенез и регенерация: Сб. науч. трудов.

60. Целлариус Ю.Г., Семенова JI.A. Гистопатология очаговых метаболических повреждений миокарда // Изд-во Наука, Новосибирск, 1972.-210 с.

61. Шорникова М.В. Митохондриальные контакты в системе митохондриома кардиомиоцитов в норме, при физиологических нагрузках и в патологии // Онтогенез. 2000. - Т.31 - №6. - С. 470-475.

62. Шурыгина О.В. Гистогенез стенки сердца куриных эмбрионов в норме и при воздействии ретаболила // Морфологические ведомости. 2002. - № 1-2. С. 59-62.

63. Шурыгина О.В. Локализация некоторых цитоскелетных белков в развивающемся сердце эмбрионов кур // Проблемы морфологии (теоретические и клинические аспекты). — Тез. докл. Общероссийской конф. С междунар. Участием 14-16 мая 2002 г. Сочи, 2002. С. 89.

64. Шурыгина О.В. Структурная организация миокарда в нормальном и экспериментально измененном эмбриогенезе: Афтореф. Дисс. . канд. Мед. наук. Саранск, 2003 - 28 с.

65. Ямщиков Н.В. Структурная организация мышечной ткани сердца и нарушения миогенеза в различные периоды развития: Дисс. . докт. мед. Наук.-Самара, 1991.-335с.

66. Ясвоин Г.В. Темные и светлые клетки. //М.-Изд-во АМН СССР. 1948.

67. Abbot C.F., Tandler В., Vignos P.J. Glucocorticoid induced alterations in the rabbit heart // Lab. Invest. - 1982. - Vol. 47. - №6. - P. 603610.

68. Abdelwahid E., Pelliniemi L.J. et al. Apoptosis in the pattern formation of the ventricular wall during mouse heartorganogenesis // Anat. Rec. 1999. - Vol. 256.-№2.-P. 208-217.

69. Adam S.M., Pelouch V. Isoforms of troponin in normal and diseased myocardium // Phusiol Res. 1999. - Vol. 48. - № 4. - P.235-247.

70. Aliverti V., Bonanomi L., Giavini E. et al. The extent of fetal ossification as an index of delayet development in teratogenic studies on the rat // Teratology. 1979. - Vol. 20. - P. 237-242.

71. Allen S.P., Francis-West P.H. et al. Characterisation of gene expression in the developing chic heart // J. Anat. 1997. - № 1. - P. 123.

72. Andrev F.D., Dowen D., Zimmerman E.F. Glucocorticoid inhibition of RNA synthsis and the critical period for cleft palate induction in inbred mice // Teratology. 1973. - Vol.7. - №7. - P. 167-176.

73. Antonia F.M., Prevention of programmed cell death in C. elegans by human bcl-2//Science, 1999. Vol. 258. - P. 1955-1957.

74. Arai A., Yamamoto K., Toyama J. Murine cardiac progenitor cells require visceral embryonic endoderm and primitive streak for terminal differentiation // Dev. Dyn. -1997. Vol. 210. - № 3. - P. 344-353.

75. Armstrong M. Т., Lee D.Y., Armstrong P.B. Regulation of proliferation of the fetal myocardium // Dev. Dyn. 2000. - Vol.219. - №2. - P. 226-236.

76. Baughman G., Harrigan M.T. Genes newly identified as regulated by glucocorticoids in murine thymocytes // Mol.

77. Boyer A.S., Ayerinskas I.I. et al. TGF32 and TGF(53 have separate and sequenital activities during epithelial-mesenchymal cell transformation in the embryonic heart // Dev. Biol. 1999. - Vol. 208. - №2. - P. 530-545.

78. Bruneau B.G. Transcriptional regulation of vertebrate cardiac morphogenesis // Circ. Res. 2002. - Vol.90. - №5. - P. 509-519.

79. Caperhart A. A., Mjaatvedt C.H., Hoffman S. et al. Dynamic expression of a native chondroitin sulfate epitope reveals microheterogenciti of extracellularmatrix organisation in embryonic chic heart // Anat. Rec. 1999. - Vol.254. -P. 181-195.

80. Carbone A., Minieri M., Di Nardo P. Proliferating cells in adult cardiomyopathic hamster ventricles // Цитология. 1997. - Vol. 39. - №10. -P. 913-917.

81. Challice C.E., Edwards G.A. The micromorphology of the developing ventricular muscle // In: The spesialized tissues of of the heart / Eds. A.P. de Caravallo e.a. Amsterdam e.a.: Elsevier, 1961. - P. 44-75.

82. Choy M., Oltjen S.L., Otani Y. et al. Fibgoblast growth factor-2 stimulates embryonic cardiac mesenchymal cell proliferation // // Dev. Dyn. 1996. - Vol. 206. - №2.-P. 193-200.

83. Corda S., Samuel J.-L., Rappaport L. Extracellular matrix and groth factors during heart groth // Heart Failure Rev. 2000. - Vol. 5. - №2. - P. 119-130.

84. De Almeida A., Mustin D., Forman M.F. et al. Effects of mast cells on the behavior of isolated heart fibroblasts: Modulation of collagen remodeling and gene expression // J. Cell. Physiol. 2002. - Vol. 191. - № 1. - P. 51 -59.

85. De Haan R.L. Morphogenesis of vertebrata heart // In: Organogenesis. N.Y., 1965. - P.377-419.

86. De Rosier D.J. The chanding shape of actine // Nature. 1990. - Vol. 347. - P. 21-22.

87. De Rosier D.J., Hiney L.G., Bonder E. et al. A change in twist of actin provides the forse for the extension of the acrosomal process in limulus sperm:the false discharge reaction // J. Cell Biol. 1982. - Vol. 93. - P. 324337.

88. Dong M.-Q., Zhu M.-Z. et al. I. Influens of natriuretic peptide on proliferation of cardiomyocytes of nevborn rats //J. Forth Milit. Med. Univ. 2000. -Vol.21.-№4.-P. 443-445.

89. Doyle D.D., Goings G., Ambler J. et al. Dystrophin associates with caveolae of rat cardiac myocytes. Relationship to dystroglucan // Circ. Res. 2000. - Vol. 87. -№6.-P. 480-488.

90. Ehrman L.A., Yutzey K.E. Lack of regulation in the heart forming region of avion embryos//Dev. Biol. 1999. - Vol.207. - 31. - P. 163-175.

91. Forbes M.S., Rennels M.L., Nelson E. Ultrastructure of pericytes in mouse heart//Amer. J. Anat. 1977. - Vol.149. - №1. - P.47-69.

92. Gluksmann A. Cell death in normal vertebrate ontogeny // Biol. Rev. Vol. 60.-P. 129-136.

93. Gourdie R. G., Wei Y., Kim D. et al. Endothelin-induced conversion of embryonic heart muscle cells into impulse-conducting Purkinje fibers // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1998. - Vol. 95. - №12. - P. 6815-6818.

94. Hackney J., Pratt R. The extent of fetal ossification as an index of delayet development in teratogenic studies on the rat // Teratology. 1978. - Vol. 12. -P. 27-29.

95. Hagmann M. A gene that scrambles your heart // Science. 1999. - Vol. 283. -№5405.-P. 1091, 1093.

96. Harrer L.D., Hasghighi K., Kim H.W. et al. Cjjrdinate regulation of SR Ca 2+-ATPase and phospholamban in developing murine heart // Amer. J. Physiol.: Heart and Circ. Phusiol. 1997. - Vol. 41. - № 1. - P. 57-66.

97. Higsmith S., Cooke R. Tvidence for actomyosin conformational changes involved in tension generation // J. Muscle Res. cell. Motil. 1983. - Vol. 4. -P. 207-237.

98. Horky M., Hasghighi К., Kim H.W. Apoptosis in the pattern formation of the ventricular wall during mouse heartorganogenesis // Anat. Rec. 1997. - Vol. 255. - № 7. - P. 208-222.

99. Hurle J.M., Lafarge M. Cytokinesis in developing cardiac muscle cells. An ultrastructural study in the chick embryo // Biol, cellul. 1978. - t. 33. - p. 195-198.

100. Huxley A.F., Simmons R.M. Propised mechanism of foree generation in striated muscle // Ibid. 1971. - Vol. 233. - P. 533-538.

101. Huxley H.E. The mechanism of muscular contraction // Science. 1969. -Vol. 164.-P. 1356-1366.

102. Jelinek R., Dostal M. Inhibitory effect of corticoids on the proliferative pattern in mouse palatal process // Teratology. 1975. - Vol. 2. - P. 193-198.

103. Kahane N., Kalheim C. Identification of early postmitotic cells in distinct embryonic sites their possible roles in morphogenesis // Cell and Tissue Res. 1998. - Vol. 294. - № 2. - P. 297-307.

104. Kirby M.L. Getting to the heart of cardiac morphogenesis // Circ. Res. -2001. Vol. 88. - №4. - P. 370-372.

105. Knaapen M.W., Vrolijk B.C., Wenink A.C. Ultrastructural changes of the myocardium in the embryonic rat heart // Anat. Rec. 1999. - Vol. 248. — № 2.-P. 233-241.

106. Lai К. M., Pawson Т. The Sch A phosphotyrosine docking protein sensitizes cardiovascular signaling in the mouse embryo // Dev. Dyn. —2000. Vol.14. -№ 9. - P.l 132-1145.

107. Lamers W. H., Moorman A.M. Cardiac septation. A late contribution of embryonic primary myocardium to heart morphogenesis // Circ. Res. 2002. -Vol.91. - №2.-P. 93-103.

108. Lemanski L.F., Zajdel R.W., Bhatia R. et al. Molecular biologi of heart development in the mexican axolotl, Ambystoma mexicanum // Цитология. -1997. Т. 39. - № 10. - С. 918-927.

109. Lin L., Hong H. et al. Zhonguoo yaolixue tongbao // Chin. Pharmacol. Bull. -2001. №6.-P.661-666.

110. Lyons G.E. Vertebrate heart development // Curr. Opin. Genet, and Dev. -1996. №4.-P. 454-460.

111. Manasek F.J. Embryonic development of the heart. I. A light and electron microscopic study of myocardial development in the early chick embryo // J. Morphol. 1968. - Vol. 127. - №7. - P. 329-365.

112. Manasek F.J. Histogenesis of embryonic myocardium // Amer. J. Cardiol. -1970. Vol.25. - № 2. - P.149-168.

113. McNutt U.S. Ultrastructure of intercellular junctions in adult and developing cardiac muscle // Amer. J. Cardiol. 1970. - Vol. 25. - № 2. - P. 169-183.

114. Montague L.W., Gaido M.L. A calcium-dependent nuclease from apoptotic rat thumocytes is homologous with cyclophilin. Recombinant cyclophilin А, В and С have nuclease activing // J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 269, № 29. - P. 18877-18880.

115. Mora M., Di Blasi C. et al. Deyelopmental expression of dystrophin,dystrophin-associated glycoproteins and other membrane cytosceletal proteins inhuman sceletal and heart muscle // Dev. Brain Res. 1996. - Vol. 245. - № 4. - P.699.707.

116. Mosier H.D., Dearden L.C., Roberts R.C. et al. Regional differences in the effect of glucocorticoids of maturation of the fetal skeleton of the rat // Teratology.-1981.-Vol. 23. №1. - P. 15-24.

117. Nakago K., Senda M., Touno M. et al. Role of glucocorticoids in terminal differentiation and tissue-specific function (a review) // Develop. Grow. And Differ. 1999. - Vol.8. - №7. - P.310-327.

118. Narula J., Kolodgie F.D., Virmani R. Apoptosis fnd cardiomyopathy // Curr. Opin. Cardiol., 2000.-V.l5. -№3.-P. 183-188.

119. Onuocha G. N., Alpar E.K. et al. Distribution of VIP, substance P, neurokinin A and neirotensin in rat heart: An immunocytochemical study // Neuropeptides. 1999. - Vol. 33. - № 1. - P. 19-25.

120. Opitz J. M., Clark E.B. Heart development. An introduction // Amer. J. Med. Genet. 2000. - Vol. 97. - №4. - P. 238-247.

121. Pratt R., Greene S. Inhibition of palatal epithelial cell death by altered protein synthesis//Devel. Diol. 1978. - Vol. 54. - P.135-145.

122. Przybylski R.J., Chlebowski J.S. DNA synthesis, mitosis and fusion of myocardial cells // J. Morphol. 1972. - Vol. 137. - P. 417-432.

123. Raff M.S., Barres B.A. et al. Programmed cell death and the control of cell survial: lessons from the nervous system // Science, 1993. Vol. 262. -№5134.-P. 695-700.

124. Rosental N., Xavier-Neto J. From the bottom of the heart : Anteroposterior decisions in cardiac muscle differentiation // Curr. Opinion Cell Biol. 2000. - Vol. 12. - №6. - P. 742-746.

125. Ross R.S., Borg Т.К. Integring and the myocardium // Circ. Res. 2001. -Vol. 88.-№11.-P. 1112-1119.

126. Rowland J.M., Hendrickx A.G. Teratogenicity of triameinolon acetonide in the rat // Teratology. 1983. - Vol. 27. - №1. - P.13-15.

127. Rupp H., Maisch B. Control of apoptosis of cardiovascular fibroblasts: A novel drug targer // Anat. Rec. 1999. - Vol.24. - № 3. - P. 225-231.

128. Russel A., Ornoy A., Ritchie J. et. al. Nransplacental and neonatal effects of hypercortosonism in the rat on thymo-lymphatic system differentiation and serum immunoglobulin levels // Adv. Exp. Med. Biol. 1972. - Vol.27. -P.252-271.

129. Schneider R., Pfitzer P. Die Zahl der Kerne in isolierten Zellen des menschlichen Myocards // Virchow's Arch. 1973. - Bd.12. - P.238-258.

130. Sminh T.T. Heart development. An introduction // Amer. J. Med. Genet. -1998. Vol. 89. - №5. - P. 38-47.

131. Sugimoto M., Kojima A., Endo H. Role of glucocorticoids in terminal differentiation and tissue-specific function (a review) // Develop. Grow. And Differ. 1977. - Vol.18. - №3. - P.319-327.

132. Thomas S.P., Bircher-Lehmann L., Thomas S. A., et al. Synthetic strands of neonatal mouse cardiac myocytes // Circ. Res. 2000. - Vol. 87. - №6. — P. 467-473.

133. Vaux D.L., Weissmann I.L. et al. Prevention of programmed cell death in C. elegans by human bcl-2//Science, 1992.-Vol. 258.-P. 1955-1957.

134. Webb S., Anderson R.H., Lamers W.H. et al. Mechanisms of deficient cardiac septation in the mouse with trisomy 16 // Circ. Res. 1999. - Vol.84. - №8. -P. 897-905.t

135. Wegener К., Hollweg S., Maurer W. Autoradiographische Bestimmung der DNS-Verdopplungszeit und anderer Teil-Phasen des Zell-Zuklus bei fetalen Zellarten der Ratte // Z.Zellforsch. 1964. - Bd. 63. - S. 309-326.

136. Xavier-Vidal R. Uma breve revisao sobre alguns aspectos do desenvolvimento embrionario do coracao com espicial referencia as arterias coronarias // Arq. bras, cardiol. 1997. - Vol. 68. - №4. - P. 305-309.

137. Zammit P. S., Kelly R.G. et al. Supression of atrial myosin gene expression occurs independently in the left and right venticles of the developing mouse heart // Dev. Dyn. 2000. - Vol.217. - №1. - P. 75-85.

138. Zigelhoffer- Mihalovicova В., Kolar F., Jacob W., Tribulova N. et al. Modulation of mitochondrial contact sites formation in immature rat heart // Gen. Phusiol. and Biophus. 1998. - Vol. 17. - № 4. - P. 385- 390.

Информация о работе

Ямщикова, Екатерина Николаевна
кандидата медицинских наук
Оренбург, 2004
ВАК 03.00.25

Диссертация

Морфологическая характеристика реактивных изменений сердечной мышечной ткани в условиях экспериментально измененного гистогенеза - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы