Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфологические аспекты нормального гистогенеза и реактивных изменений гладкой мышечной ткани миометрия крыс

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфологические аспекты нормального гистогенеза и реактивных изменений гладкой мышечной ткани миометрия крыс"

На правах рукописи

Созыкин Александр Александрович

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ НОРМАЛЬНОГО ГИСТОГЕНЕЗА И РЕАКТИВНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ ГЛАДКОЙ МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ МИОМЕТРИЯ КРЫС

03.00.25- гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Волгоград - 2004 г.

Работа выполнена в Ростовском государственном медицинском университете.

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Хлопонин Петр Андреевич

Официальные оппоненты доктор медицинских наук, профессор

Ямщиков Николай Васильевич

доктор медицинских наук, профессор Должиков Александр Анатольевич

Ведущая организация: Ярославская государственная медицинская

академия

Защита состоится " 7-Ъ " ^аа-су^тА 2004 г. в _ часов на

заседании диссертационного совета Д 208.008.01 при Волгоградском государственном медицинском университете (400066, Волгоград, пл. Павших борцов, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Волгоградского государственного медицинского университета

Автореферат разослан " 1 ^ "

2004 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор

С.И.Зайченко

сШЛ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Среди медико-биологических проблем современной гистологической науки одной из стержневых, по определению Д С Саркисова (1977), является проблема гистогенеза и регенерации тканей и органов В этой связи проводимые исследования пре- и постнатального развития многих органов и систем у млекопитающих животных способствуют более глубокому и объективному пониманию не только механизмов аномальных гисто- и органогенезов, но и морфологических основ взаимоотношения тканей в многотканевых системах, способности их к физиологической и репаратив-ной регенерации (Заварзин А.А., 1985, Данилов Р.К , 1996, 2001)

При этом в последнее десятилетие творческие усилия отечественных (Баженов Д В., 1996; Зашихин А Л с соавт., 1999, 2001, 2002, 2003, Агафонов Ю В , 1999; Суворова Г Н , 2001) и зарубежных (Garfield R.E. et al., 1992; Somlyo A V et al, 1994, Chen YH et al, 1997) морфологов направлены на изучение структурно-функциональных характеристик висцеральной гладкой мышечной ткани, входящей в состав практически всех полых органов млекопитающих и человека Ими установлены некоторые особенности гистогенеза и дефинитивного строения гладкой мышечной ткани пищеварительной, дыхательной и мочевыделительной систем, исследованы морфологические проявления её реактивности в ответ на воздействие различных альтерирующих факторов.

Гладкая мышечная ткань (ГМТ) миометрия матки млекопитающих и человека, характеризующаяся, как известно, спецификой выполняемых функций и эндокринной зависимостью, пока малоизучена Особенно малоинформативны сведения о ранней дифференцировке её мезенхимальных предшественников в эмбриональных закладках стенки матки Также недостаточно изучены основные составляющие лейомиоге-нез процессы в пре- и постнатальном миометриогенезе Необходим и тщательный анализ формирования интерстициального компонента в миометрии матки.

Базисные процессы гистогенеза составляют основу репаративных реакций гладкой мышечной ткани позвоночных и человека В этой связи в экспериментальной морфологии и физиологии предопределена необходимость изучения моделируемых на лабораторных животных клинических ситуаций с хирургическим или иным воздействием на стенку матки При этом отмечена достаточная пластичность миометрия в условиях этого воздействия (Зотов Л А , 1970 , Garfield R. Е., Denial Е Е 1974., Kawaguchi К 1985., Gabella G., 1981., Pietro М., 1990 , Савицкий Г А , 2000) Однако в

'«А.НЬНАЯ

Г f* А ■jpr

РОС ¿4«. > •• f

?on6i

литературе ещё неполно освещены вопросы о количественных и качественных изменениях клеточных элементов и межклеточного вещества по ходу репарации мио-метрия Не определены критерии жизнеспособности гладкомышечных клеток (ГМК, лейомиоцитов) в пограничной с повреждением зоне Также ещё нет целостного представления о закономерностях нормального лейомиогистогенеза, особенностях гистологического строения гладкой мышечной ткани миометрия у взрослых крыс в различные стадии астрального цикла, о закономерностях восстановительных процессов в поврежденном миометрии крыс В этой связи представляется актуальным проведение сравнительного комплексного морфологического исследования (с применением методов классической гистологии, гистохимии, электронной микроскопии, стереоморфометрии) нормального и репаративного лейомиогенезов в мышечной оболочке матки лабораторных крыс.

Цель исследования - морфологический анализ проявлений нормального и репаративного лейомиогенезов в миометрии крыс

Задачи исследования

1 Изучить ультраструктуру гладкой мышечной ткани миометрия в матке взрослых крыс

2 Изучить морфологические проявления нормального лейомиогенеза в пре- и постнатальном миометриогенезе

3 Исследовать особенности морфологических проявлений репаративных изменений в экспериментально поврежденном миометрии взрослых крыс

4. Изучить проявления изменений интерстициального компонента миометрия в динамике восстановления поврежденной стенки матки взрослых крыс

Научная новизна полученных результатов

Впервые с использованием светооптического, иммуно-цитохимического, электронно-микроскопического и стереоморфометрического методов проведено комплексное морфологическое исследование проявлений нормального пре- и постна-тального развития ГМТ, а также реактивных её изменений в миометрии крыс после механической травмы стенки матки

Впервые получены данные о ранней специфической дифференцировке мезенхи-мальных предшественников ГМК миометрия, о процессах пролиферации и апоптоза

дифференцирующихся гладких миоцитов, о становлении интегративных взаимоотношений гладкомышечных клеток по ходу лейомиогистогенеза, об особенностях ультраструктурной организации миометрия у взрослых крыс в половом цикле; о количественных и качественных изменениях межклеточного вещества в ГМТ миометрия.

Впервые проведен электронно-микроскопический анализ основных процессов ре-паративного лейомиогенеза в поврежденной гладкой мышечной ткани матки млекопитающих' де- и редифференцировки лейомиоцитов, их межклеточных взаимоотношений Установлены различия в диапазоне реактивных ультраструктурных перестроек лейомиоцитов в зависимости от степени их дезинтеграции

Впервые методами электронной микроскопии и ультраструктурной морфометрии в пограничной с повреждением гладкой мышечной ткани миометрия матки крыс обнаружены явления фенотипической модуляции части "темных" ("сократительных") миоцитов в "светлые" ("сократительно-синтетические") Представлена морфофунк-циональная характеристика этих клеток, изучены соотношения их относительных объемов и межклеточного вещества, прослежена динамика изменений морфомет-рических параметров некоторых внутриклеточных структур (ядра, эндоплазматиче-ской сети, митохондрий, рибосом, плотных телец, миофиламентов) лейомиоцитов прираневого миометрия.

Научно-практическая значимость работы

Работа представляет собой комплексное экспериментально - гистологическое исследование некоторых составляющих нормальный и репаративный гистогенезы процессов в миометрии крыс Полученные данные об основных закономерностях становления его висцеральной гладкой мышечной ткани в миометриогенезе- о диф-ференцировке лейомиоцитов, их интегративных взаимоотношениях, изменениях пролиферативной активности, участии в образовании межклеточного вещества -представляют интерес для ученых смежных медико - биологических специальностей- цитологов, биологов, биохимиков, анатомов, физиологов

Экспериментально-морфологическим и морфометрическим изучением посттравматических реактивных изменений гладкой мышечной ткани матки млекопитающих установлены различные диапазоны внутриклеточных перестроек лейомиоцитов прираневого миометрия в зависимости от изменяющихся межмиоцитарных и межтканевых взаимоотношений, от специфики организации межклеточного вещества

Полученные данные существенно расширяют имеющиеся представления о пластических свойствах этой ткани; они необходимы практикующим акушерам - гинекологам в объективной оценке морфофункционального состояния миометрия, повреждаемого при реконструктивных и родоразрешающих оперативных вмешательствах на матке

Основные положения диссертации, выносимые на защиту: 1 Гладкая мышечная ткань миометрия взрослых крыс образована в основном популяцией сократительных гладких миоцитов, интегрированных в два пласта с продольной (наружный пласт) и циркулярной (внутренний пласт) ориентацией и разделенных интерстицием До 25% относительного объема ГМТ составляет межклеточное вещество

2. Закономерными морфологическими проявлениями раннего лейомиогенеза в мезенхиме презумптивных закладок матки крыс (в стенках дистальных отделов па-рамезонефральных протоков) являются изменение формы клеток (и частичная утрата ими отростков), установление межклеточных взаимоотношений, возрастающий уровень развития органелл интра- и экстрацеллюлярного биосинтезов, появление в цитоплазме специфического гладкомышечного а - актинина, очагов сборки сократительного аппарата и др.

3 Клеточный дифферон в развивающейся гладкой мышечной ткани миометрия представлен несколькими типами лейомиоцитов малодифференцированными, дифференцирующимися, дифференцированными По ходу её гистогенеза происходит нарастание мономорфносгги популяции дифференцирующихся лейомиоцитов, усложнение межмиоцитарных взаимоотношений, падение их пролифератив-ной активности, элиминация некоторых из них апоптозом, возрастание относительного объема гладких миоцитов в ткани и уменьшение относительного объема клеточного ядра, значительная редукция органелл биосинтеза и, как следствие, - снижение интенсивности образования сократительного аппарата, межклеточного вещества и др

4 Морфологические изменения большинства гладких миоцитов в перинекротиче-ской зоне поврежденного миометрия крыс являются необратимыми (некротическими), лишь в немногих "переживших" травму лейомиоцитах этой зоны уже в первые 24-48 часов эксперимента очевидны проявления глубокой (в пределах "рубежа" детерминации) дедифференцировки, завершающейся дезинтеграцион-

ной атрофией к 30-м суткам эксперимента

5 Более половины основной массы лейомиоцитов в расположенном за пределами перинекротической зоны миометрии характеризуются обратимой реорганизацией своей структуры с явлениями внутриклеточной регенерации и трансформации (с 3-х по 7-е сутки эксперимента) в сократительно - синтетические До 9% клеток такого типа еще обнаруживались к 90-м суткам эксперимента

Апробация работы.

Материалы диссертации докладывались и обсуждались на 51 - 55-й итоговых научных конференциях студентов и молодых ученых РостГМУ (1997, 1998, 1999, 2000, 2001 г.г), научной конференции, посвященной 50-летию анатомического кружка РостГМУ (1997); 3-й научной сессии РостГМУ (2000), научной конференции "Актуальные вопросы фундаментальной и прикладной медицинской морфологии", посвященной 100-летию со дня рождения зд н РСФСР проф ПА Соколова (Ростов - на -Дону, 2000), науч конф молодых ученых России (Ижевск, 2000 г), "Морфологические основы гистогенеза и регенерации тканей" (Санкт-Петербург, 2001); 9-й региональной конференции молодых ученых (Санкт-Петербург, 2001), науч конф "Актуальные медико-биологические проблемы в современных условиях" (Ижевск, 2001); 75-й Всероссийской студенческой научной конференции, посвященной 100 - летию СНО КГМУ (Казань, 2001), научно-практической конференции "Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии" (Томск, 2002), 3,4-й международных научно-практических конференциях "Здоровье и образование в 21 -м веке" (Москва 2002, 2003 г.г.)

Публикации результатов исследования

По теме диссертационной работы опубликовано 11 научных работ

Объем и структура диссертации.

Диссертация состоит из введения, главы обзора литературы, главы по материалам и методам исследования, двух глав собственных исследований нормального и репаративного лейомиогистогенеза, обсуждения полученных результатов, выводов и указателя литературы, включающего 103 отечественных и 95 зарубежных источников Работа изложена на 135 страницах машинописного текста, иллюстрирована 1 схемой, 1 графиком, 5 таблицами, 3 диаграммами, содержит 14 световых и 35 электронных микрофотографий

Материал и методы исследования

Процессы эмбрионального и постнатального развития гладкой мышечной ткани, изучены нами в стенке матки 27-ми зародышей, 25-ти крысят, и 6-ти взрослых крыс

Зародыши 15, 16, 17, 21 суток внутриутробного развития (табл 1) получали от подопытных животных с датированным сроком беременности, определявшимся в соответствии с предполагаемым временем оплодотворения Стадии развития зародышей устанавливались также согласно таблице последовательности их у нормально развивающихся крыс (Астауров Б Л , 1975)

3, 5, 15, 30 - суточные крысята и взрослые (контрольные и беременные) животные умерщвлялись декапитацией под эфирным наркозом (в соответствии с приказом МЗ РСФСР № 754)

Для изучения особенностей гистологического строения нормального миометрия взрослых крыс материал забирался на стадии метаэструс и эструс, определявшихся с использованием метода вагинальных мазков (Кабак Я М , 1968)

В экспериментальном разделе работы на половозрелых (1 год) нерожавших белых беспородных крысах весом 180-210 г исследованы морфологические изменения гладкой мышечной ткани миометрия крыс после его механического повреждения. Животным под нембуталовым наркозом (из расчета 25 мг этаминала натрия на 1кг массы, вводимого внутрибрюшинно) после предварительной обработки операционного поля 5% раствором йода, вдоль белой линии производился разрез кожи длиной 4-5 см; затем вскрывалась брюшная полость Далее с помощью ранорасши-рителя открывался доступ к матке, которая аккуратно извлекалась и стенка её правого рога передавливалась анатомическим пинцетом со сточенными на браншах зубцами с экспозицией в 1 минуту После этого брюшная полость ушивалась послойно и наглухо В исследуемые сроки послеоперационного периода животные де-капитировались под эфирным наркозом

Материал для морфологического анализа был взят от 60 крыс на 1,3,5,7,15,30,90-е сутки эксперимента (табл 2) В качестве контроля использован левый рог матки 3-х интактных годовалых крыс

Для световой микроскопии материал фиксировался в жидкости Карнуа и в 10% растворе нейтрального формалина Серийные парафиновые срезы толщиной 5-7 мкм окрашивались по общепринятым гистологическим методикам (гематоксилином - эозином, по Ван-Гизон) и селективным методом выявления соединительной ткани по Кроссмону Микросъемку гистологических препаратов производили на микроскопе

"Axiolab" с фотонасадкой фирмы "Carl Zeiss".

Материал для электронно - микроскопического исследования после всех общепринятых этапов его обработки, ультрамикротомии и контрастированния ультратонких срезов просматривался в микроскопах ЭМВ - 100Б и JEM - 100S

С целью идентификации лейомиогенных клеток в стенке матки эмбрионов самых ранних сроков исследования (15,16,17-е сутки внутриутробного развития) и изучения архитектоники гладкой мышечной ткани матки в постнатальном периоде жизни применялся метод выявления а - гладкомышечного актинина с помощью набора моно-клональных антител фирмы SIGMA Это иммуногистохимическое исследование выполнено на базе Центра клинической морфологии и генетики РостГМУ

Для оценки пролиферативной активности дифференцирующихся лейомиоцитов развивающейся мышечной оболочки матки определялся митотический индекс (число фигур митоза на 10000 ядер миоцитов, выраженное в % и установленное на гистологических препаратах не менее чем от 3-х животных).

Для количественной оценки ультраструктурной организации как дифференцирующихся, так и реактивноизмененных гладкомышечных клеток миометрия взрослых крыс использован метод электронно - микроскопического стереологического морфометрирования (Автандилов Г Г , 1990; Непомнящих Л М ,1994) В нашем исследовании проведен морфометрический анализ изменений следующих стерео-морфометрических параметров Vk - относительного объема клеток в ткани (в %); Nk -106 - численной плотности клеток в 1/мм 3 ткани, среднего объема клеток (V кл.) а также относителных объемов (VI в %) некоторых указанных структур (ядра, эндо-плазматической сети, рибосом, митохондрий, прикрепительных пластинок, плотных телец) Определение вышеперечисленных тканевых показателей, а также объемной плотности внутриклеточных структур проводилось по методу А А Глаголева (1941) с использованием универсальной тестовой системы, содержащей 140, 360 тест-точек, на которую проецировали изображения фотопластинок при конечном увеличении 7000 - 8000 для тканевых и 35000 - 40000 для внутриклеточных показателей

Линейные размеры дифференцирующихся и дифференцированных гладкомышечных клеток в двух взаимно перпендикулярных направлениях, а также толщину гладкомышечных пластов определяли на гистологических препаратах, окрашенных гематоксилином - эозином, с помощью винтового окулярмикрометра MOB - 1V-15Ä.

Полученные в работе данные обработаны методами вариационной статистики с определением средних ошибок Степень достоверности различий измеряемых структур вычисляли с помощью критерия Стьюдента при Р= 0,95

Таблица 1

Распределение материала для морфологического исследования процессов нормального лейомиогенеза у крыс в пре- и постнатальном периодах развития.

Сроки развития Количество исследований

Зародыш 15 суток 4 3

Зародыш 16 суток 4 3

Зародыш 17 суток 4 2

Зародыш 21 суток 3 3

Крысята 3 суток 3 3

Крысята 5 суток 3 3

Крысята 15 суток 3 3

Крысята 30 суток 4 3

Крыса, 1 год, з з

метаэструс

Крыса, 1 год, эструс 3 3

ИТОГО 34 29

Таблица 2

Распределение экспериментального материала для морфологического исследования посттравматических изменений гладкой мышечной ткани мио-

метрия крыс.

Сроки эксперимента Количество исследований

Методом световой микроскопии Методом электронной микроскопии

1-е сутки 3 3

3-й сутки 7 5

5-е сутки 7 5

7-е сутки 6 3

15-е сутки 5 3

1 месяц 3 3

3 месяца 3 3

ИТОГО 34 26

Результаты исследования и их обсуждение Морфологическая характеристика пре- и постнатального гистогенеза гладкой мышечной ткани матки взрослых крыс.

Проведенным нами светооптическим и электронномикроскопическим исследованием препаратов зародышей крыс в пренатальном онтогенезе обнаружены проявления дивергентной дифференцировки клеток мезенхимы в стенках дистальных отделов парамезонефральных протоков (эмбриональных закладок оболочек стенки матки крыс) у 16-ти суточных зародышей Морфобиохимическая дифференцировка мезенхимных клеток очевидна на 17-е сутки пренатального развития зародышей крыс О проявлениях последней позволяет утверждать положительная реакция на специфический для лейомиоцитов а - актинин

Прицельная электронная микроскопия малодифференцированных тканевых элементов, окружающих эпителий в стенках парамезонефральных протоков на 17-е сутки эмбриогенеза, позволяет нам достоверно различать среди них «темные» и «светлые» мезенхимные клетки, расположенные без определенной ориентации и ещё контактирующие между собой многочисленными тонкими отростками Весьма специфичной ультраструктурой характеризовались «темные» клетки, обладавшие высоким ядерно-цитоплазматическим соотношением, проявлениями активации ядер, хорошо развитыми органеллами биосинтеза, а также наличием коротких слабоструктурированных адгезивных соединений друг с другом Вполне вероятно, что эти проявления отражают начало экспрессии специфических белков в эмбриональном лейомиогистогенезе (Obinata Т , Abe Hiroshi., Saiga Kan et al 1992) и дифференцирующиеся «темные» клетки являются презумптивными гладкомышечными или премиобластами Исходя из преобладающей субэпителиальной локализации «светлых» клеток, отсутствия между ними контактных взаимодействий, особенностей ультраструктуры (достоверно высокий внутриклеточный объем цистерн ЭПС) они -предшественники фибробластического дифферона

В конце пренатального периода (на 21-е сутки), начавшие миогенную дифферен-цировку «темные» клетки формирующегося миометрия зародышей крыс по своей ультраструктурной характеристике соответствуют определению малодифференцированных лейомиоцитов. На периферии их цитоплазмы выявляются плотные тельца, очаги сборки миофиламентов, кавеолы, очевидны послойная клеточная ориентация и установление адгезивных и десмосомальных межклеточных соединений

В последующем (с 21-х суток эмбриогенеза по 3-й сутки постнатального периода) между дифференцирующимися лейомиоцитами развивающегося миометрия услож-

няются межмиоцитарные взаимодействия. При этом обнаруживаются не только участки адгезии смежных клеточных мембран, десмосомоподобные соединения, но и короткие плотные контакты. Превалирование в пренатальном периоде развития адгезивных межмиоцитарных соединений, допускающих в пределах адгезии ионный и низкомолекулярный трансмембранный транспорт (Т Г Боровая, Р К Данилов 2001), видимо, обусловлено высокими потребностями клеточных элементов закладывающегося миометрия в веществах обеспечивающих процесс цитодифференцировки на молекулярном уровне

Регистрируемый на 21-е сутки внутриутробного развития показатель пролиферации (МИ = 2,85+0,4%) (рис 1) - одного из основных составляющих гистогенез процессов (А Г Кнорре 1971, ПП Румянцев 1982, ПА Хлопонин 1988 и др.) объективно отражает отсутствие конкурентного антагонизма ранней дифференцировки гладких мышечных клеток и синтеза в них ДНК За счет пролиферации малодифференциро-ванных и дифференцирующихся лейомиоцитов в формирующемся миометрии идет стабильное нарастание численной плотности гладкомышечных клеток Процессы специфической дифференцировки миоцитов длительное время не препятствуют делению клеток Наблюдаемые снижение их митотической активности в конце первого месяца постнатальной жизни самок крысят и одновременное повышение уровня дифференцированности лейомиоцитов были закономерны и очевидны

Даже на 3-й сутки после рождения крысят в развивающейся гладкой мышечной ткани двурогой матки нами обнаруживались клетки с ультраструктурными проявлениями запрограммированной клеточной гибели (апоптоза) резким уплотнением хроматина в ядре, гомогенизацией и уплотнением цитоплазматического матрикса, фрагментацией ядра и цитоплазмы с образованием окруженных мембраной апопто-тических телец Наши наблюдения, как и данные ГН Суворовой (2001), исследовавшей гистогенез гладкой мышечной ткани желудочно-кишечного тракта крыс, свидетельствуют о том, что большинство гибнущих путем апоптоза гладкомышечных клеток обнаруживается в конце эмбрионального и в раннем постнатальном периоде

пос1на!альный периоды развития

Рис 1 Изменения показателей пролиферативной активности (МИ%) дифференцирующихся лейомиоцитов мышечной оболочки матки крыс в динамике пре- и по-стнатального развития.

С гибелью части дифференцирующихся ГМК возможно связано незначительное падение роста их относительных объемов в формирующейся ГМТ матки (рис 2) По мнению АА Клишова (1984), НВ Ямщикова (1991), апоптоз характерен для всех развивающихся мышечных тканей и с его помощью элиминируются не только избыточные в количестве клетки, но и аномально развивающиеся миоциты, клеточные элементы с поврежденной структурой ДНК И А Алов (1964), В И Агол (1996) считают, что выделяющиеся при распаде гибнущих апоптозом клеток вещества активируют процессы дифференцировки расположенных рядом клеточных элементов

3 сутки 5 сутки 7 сутки 15 сутки 30 сутки

постнатяльный период

Рис.2 Динамика изменений относительных объемов дифференцирующих-

ся лейомиоцитов мышечной оболочки матки крыс в пре- и постнатальном периодах развития

✓> t > /т Л, Ji

% 4 '> '»> 4 \ V V V ^

f Bipouui крыса

Пр* ■ постна гельши раявтяс

Рис 3 Динамика изменений относительных объемов (%) некоторых внутриклеточных структур, дифференцирующихся лейомиоцитов мышечной оболочки матки крыс в пре- и постнатальном периодах развития

Запрограммированная клеточная гибель имеет универсальный характер (Evan G et al, 1998, Хананашвили Я А , с соавт 2001) и является столь же необходимой составляющей механизма гистогенеза, как и пролиферация, обеспечивающей оптимальный количественный и качественный клеточный состав дифферона гладкой мышечной ткани в конкретный период органогенеза

В пренатальном миометриогенезе характерны относительно одинаковые темпы дифференцировки клеток гладкомышечного дифферона, однако дифференцированных миоцитов к концу этого периода развития в миометрии не обнаружено и это, видимо, обусловлено возрастной спецификой функционирования органа Относительно пролонгированное и синхронное во всех лейомиоцитах образование структур сократительного аппарата подтверждают данные электронной стереоморфометрии внутриклеточных структур Постепенное нарастание содержания миофиламентов, плотных телец, прикрепительных пластинок в развивающихся гладкомышечных элементах матки также очевидно к более поздним срокам (рис 3) Следовательно, образование относительно мономорфной популяции гладких мышечных клеток в миометрии в раннем постнатальном развитии крыс специфично, в сравнении с популяциями гладкомышечных клеток кровеносных сосудов, (Сосс C.I. et al 1994) бронхов, мочевыводящих путей и мочевого пузыря, желудка и кишечника экспериментальных млекопитающих (Р Somlyo 1985, 1986 , Ю В Агафонов 1999 , Е Н Ба-шилова 1999 , В Н Давиденко 2000 , A J1 Зашихин 2001 , Г Н Суворова 2001 , Ю В Агафонов, А Л Зашихин 2002), подверженных возрастающей функциональной на-

грузке уже в первые часы после рождения У трехсуточных крысят в дифференцирующихся миоцитах миометрия, имеющих уже веретеновидную форму и образующих закладки двух его пластов, компоненты контрактильного аппарата занимают лишь до 8% относительного объема цитоплазмы Показатели относительных объемов основных внутриклеточных органелл (гранулярной эндоплазматической сети, свободных рибосом, митохондрий) и ядра свидетельствуют об активации интра- и экстрацеллюлярных биосинтезов

К концу второй недели постнатального периода жизни крысят ультраструктура дифференцирующихся клеток гладкой мышечной ткани усложняется В цитоплазме их достоверно и значительно возрастает объем контрактильного аппарата, остаются хорошо развитыми органеллы биосинтеза не только внутриклеточных белков, но и компонентов межклеточного вещества (ГА Савицкий, 2001) Именно поэтому подобные дифференцирующиеся гладкие миоциты в раннем постнатальном миомет-риогенезе у крыс мы относим к миоцитам «сократительно-синтетического» типа Они описаны в развивающемся миометрии женщин (I Konishi at a11 1984; Г В Безнусен-ко 1997), в развивающейся мышечной оболочке желудка крыс (Uehara Y et al, 1987; Хлопонин П А , Давиденко В Н 2000) Сходные по ультраструктурной организации лейомиоциты были также выявлены в гистогенезе ГМТ в аорте (J Н Chamley , G R. Campbell, R Ross 1981, BP Бабаев , Ю В Бобрышев , О В Стенина 1990), в трахее - (Cameron AR, Bullock СС, Klrkpatrick СТ 1982), бронхах - (А Л Зашихин 1999), мочеточнике - (Е Н Башилова 1999), пищеводе - (Д В Баженов 1984) млекопитающих

К 30-м суткам постнатальной жизни крыс уже близка к завершению фенотипиче-ская трансформация "светлых" гладких мышечных клеток миометрия в "тёмные", а некоторые морфометрические показатели содержащихся в них органелл биосинтеза, соответствуют по величине таковым в дефинитивной ГМТ матки взрослых крыс

На стадии метаэструс она образована в основном «темными» миоцитами сократительного типа Межклеточное вещество (V=24,9+1,3%) разделяет гладкомышеч-ные клетки и наиболее выражено возле сосудов микроциркуляторного русла Оно представлено аморфным компонентом и ориентированными в различных направлениях пучками коллагеновых фибрилл, "вплетающихся" в базальную мембрану мио-цитов В прослойках его, разделяющих миометрий на два пласта гладкомышечных клеток (циркулярный и продольный), обнаруживаются клеточные элементы рыхлой волокнистой соединительной ткани, кровеносные и лимфатические сосуды, тканевые элементы вегетативной нервной системы

Особенностями ультраструктурной организации ГМТ, выявленными нами в мио-метрии крыс в фазу эструс, являются морфометрически установленная тенденция к снижению относительных объемов гладких мышечных клеток на 4,7%, более выраженная разобщенность лейомиоцитов, хаотичная направленность коллагеновых фибрилл, "разрыхление" структуры базальных мембран Как считает Я Д Киршенб-лат (1965), изменения в матке крысы во время астрального цикла обусловлены влиянием значительного количества вырабатываемого яичниками эстрадиола Это мнение и наши данные согласуются с результатами исследования миометрия в условиях моделирования течки у кастрированных крольчих (К1агк N , 1980), введение им эстрадиола вызывало задержку воды в межклеточных пространствах Нами также установлена достоверная тенденция к увеличению внутриклеточных относительных объемов ЭПС, рибосом, митохондрий, компонентов сократительного аппарата в цитоплазме ГМК Эти факты, как и проявления структурно-функциональной активности ядер гладкомышечных клеток, ЛИ Пешев (1970), Л С Персианинов с соавт (1975), Р Реауег е! а1 (1980), ГА ГА Савицкий с соавт (1985) рассматривают в качестве ультраструктурных эффектов, конечным выражением которых являются гипертрофия и гиперплазия гладких миоцитов Однако митотической активности лейомиоцитов в дефинитивном миометрии крыс мы не наблюдали Всё это коррелирует с результатами исследования ЭоггЛуо А V (1985), установившего, что активация локализованных в ядре рецепторов эстрогенов инициирует синтезы рибосо-мальных, матричных, транспортных РНК, активацию цАМФ и АДФ - зависимых ферментов и т д

Развитие интерстициального компонента в миометрии матки коррелирует с формированием наружного и внутреннего пластов гладких миоцитов При этом в его РВСТ в пренатальном периоде развития преобладает основной (аморфный) компонент межклеточного вещества Постепенно и, особенно в постнатальном периоде увеличивается содержание элементов РВСТ между пластами гладких миоцитов Очевидно также интенсивное развитие сосудов микроциркуляторного русла С 3-х по 5-е сутки постнатального периода коллагеновые волокна начинают преобладать над основным веществом и принимать упорядоченную организацию, формируя к 15 -30-м суткам постнатальной жизни соединительнотканные «футляры» комплексов гладкомышечных клеток С 30-х суток постнатальной жизни увеличение относительной массы миометрия (митотическая активность гладких миоцитов к этому сроку затухает) продолжается за счет нарастания внутриклеточных объемов ГМК и относительного объема межклеточного вещества

Таким образом, гладкая мышечная ткань миометрия крыс представляет собой единый клеточный дифферон, развивающийся из пролиферирующих мезенхимных клеток, консолидировавшихся в стенках дистальных отделов парамезонефральных протоков В динамике специфической дифференцировки гладкие мышечные клетки проходят этапы презумптивных лейомиоцитов ("премиобластов"), вступивших в дифференцировку малодифференцированных лейомиоцитов, дифференцирующихся сократительно - синтетических ("светлых") и дифференцированных сократительных ("темных") миоцитов Данный процесс реализуется на основе детерминации и ранней интеграции гладких миоцитов, сопровождаясь изменением их ультраструктурной организации и закономерным снижением пролиферативной активности (в сочетании с физиологическим апоптозом) в первую неделю постнатального онтогенеза

Научно обоснован интерес к данным литературы о наличии в развивающейся и дефинитивной ГМТ тонкого кишечника крыс и человека (Т(1ипепЬегд 1. 1995), пило-рического отдела желудка крыс (В Н Давиденко 2000), бронхах крыс (А Л Зашихин 1999), (Н М Уоид 1996) нескольких типов интерстициальных клеток (Кахаля), выполняющих связующую роль между вегетативной нервной системой и лейомиоци-тами (Раизэопе - РеП|дпги М-Э 1992), регулирующих периодичность и интенсивность контрактильной активности ГМК В нашем исследовании миометрия, в матке взрослых небеременных крыс подобные клетки не обнаруживались, что возможно связано либо с особенностью их топографической локализации либо с малочисленностью популяции

Не выявлены нами в динамике лейомиогенеза, а также в миометрии взрослых крыс, и "малые" клетки, рассматривающиеся как коммитированные предшественники лейомиоцитов (резервная популяция) (АЛ Зашихин 1997 , В Н Давиденко 1998), описанные в составе дифференцирующейся и дефинитивной ГМТ млекопитающих в органах ЖКТ, воздухоносных и мочевыводящих путях

Морфологическая характеристика посттравматических изменений в гладкой мышечной ткани миометрия крыс.

Описательный метод при изучении процессов регенерации тканей и органов экспериментальных животных и человека предполагает, прежде всего, вполне приемлемый для настоящей работы принцип констатации и анализа обнаруживаемых проявлений посттравматических реактивных изменений тканевых элементов в зависимости от их удаленности от места повреждения.

Спустя 24 часа после локальной травмы стенки матки зона непосредственного её повреждения заполнена некротизированными тканями, отечна и инфильтрирована многочисленными форменными элементами крови, среди которых преобладают клетки лейкоцитарного ряда К 3-м суткам эксперимента макрофаги уже активно фагоцитируют в области травмы детрит, а пролиферативно-активные фибробласты прираневой слизистой оболочки - синтезируют межклеточное вещество, вследствие чего раневой дефект в миометрии заполняется образованной de novo соединительной тканью В течение 3-7-х суток после повреждения отмечается обильная её вас-куляризация В литературе имеется значительное количество данных, доказывающих синхронизацию новообразования в ране клеток эндотелия «микрососудов» и фибробластов (Лебедев ДА с соавт 1990), чему способствуют одинаковые факторы их роста и пролиферации (Misisses Р et al 1986) Особая роль в выработке этих факторов, стимулирующих и регулирующих развитие соединительной ткани на месте повреждения, отводится макрофагам (Klark К A et al 1982) К 15-м суткам эксперимента можно утверждать о завершении резорбциии детрита Продолжающаяся в последующем биосинтетическая активность большинства клеток фибробластиче-ского дифферона приводит к реорганизации образующейся соединительной ткани с появлением многочисленных коллагеновых волокон и атрофией части сосудов мик-роциркуляторного русла Через 30 и, тем более, 90 суток после экспериментальной травмы раневой дефект стенки правого рога матки крысы заполнен соединительнотканным рубцом, представленным, в основном, волокнистым компонентом межкле- « точного вещества соединительной ткани

В перинекротическом миометрии спустя одни сутки после повреждения большинство гладкомышечных клеток деструктивно изменены, во многих из них очевидны необратимые некробиотические изменения, нарушены межклеточные взаимоотношения в следствие чего наблюдается полная или частичная дезинтеграция небольших групп или отдельных гладких миоцитов от неповрежденной мышечной оболочки Лишь иногда, к концу 3-х суток эксперимента, встречаются миоциты а) с близкими к

контрольным характеристиками и б) с ультраструктурными проявлениями клеточной дедифференцировки (гипертрофией ядра и ядрышек с преобладанием в последних гранулярного компонента, увеличением содержания свободных рибосом, гиперплазией элементов гранулярной ЭПС, наличием участков резорбции контрактильного аппарата и др) Дедифференцировка, как временная структурная реорганизация клеток с потерей признаков их специализации и упрощением их внутренней структуры (И Б Токин, 1972), по мнению А А Клишова (1983), является своеобразной формой функциональной адаптации, наблюдаемой при действии на клетки альтерирующего фактора Выявляемая гиперплазия органелл биосинтеза у некоторых "переживающих" травму гладких миоцитов перинекротической зоны, а также снижение плотности их цитоплазматического матрикса к 3-м и, особенно, к 7-м суткам после нанесения травмы на стенку матки, является логичным следствием преобразования части дифференцированных «сократительных» лейомиоцитов в «сократительно -синтетические» Обусловлено это повышенной потребностью поврежденного органа в элементах РВСТ, заполняющей обширный раневой дефект

В дальнейшем на 7,10,15-е сутки эксперимента структурно реорганизованные лейомиоциты этой зоны, дезинтегрированные от пограничного с повреждением миометрия, постепенно оказываются "замурованными" в межклеточном веществе РВСТ и атрофируются к 30-м суткам эксперимента вследствие прогрессирующей рубцово - фиброзной трансформации соединительной ткани Установлено, что с 15-х по 30-е сутки наблюдений здесь обнаруживаются и гладкие миоциты, гибнущие путем посттравматического апоптоза Для них характерны типичная структура сарколеммы, грубая крупноглыбчатая конденсация хроматина в ядрах и относительно сохранная извилистая кариолемма, крупные ядрышки, уплотненный цитоплазмати-ческий матрикс цитоплазмы, в котором видны единичные расширенные цистерны ЭПС, структурно неповрежденные митохондрии, элементы сократительного аппарата и обширные очаги миоцитолизиса По мнению В А Тронова (1999), в клетках, не способных по различным причинам восстановить полноценную структуру ДНК, активируется «система охраны генома» - ген, кодирующий белок фосфопротеин р53, запускающий «программу» уничтожения На эту возможность активации программированной клеточной гибели указывает В С Новиков (1996), отмечая реактивные изменения в межклеточном веществе ГМТ, утрату коммуникативных взаимодействий между ГМК, не исключено также влияние индукторов апоптоза, выделяемых макрофагами, тканевыми базофилами и фибробластами в процессе посттравматического восстановления стенки матки

К 30-90-м суткам наблюдений перинекротическая зона экспериментально поврежденного миометрия заполняется плотной волокнистой соединительной тканью с немногочисленными, обнаруженными обычно по периферии рубца, сосудами микро-циркуляторного русла.

В расположенном за пределами перинекротической зоны миометрии уже с первых суток эксперимента наблюдалась нарастающая гетероморфность клеток гладкой мышечной ткани и появление лейомиоцитов с различным по плотности цитоплазма-тическим матриксом, признаками активации ядра и концентрации вблизи него свободных рибосом, расширенных канальцев эндоплазматической сети, очагами мио-цитолизиса и др

Спустя 48 и 72 часа после повреждения проявления репаративного лейомиогисто-генеза в этой зоне миометрия наиболее многообразны. К этому периоду среди погибших и "агонирующих" ГМК встречаются многочисленные лейомиоциты с ультраструктурными признаками жизнеспособности просветлением цитоплазматического матрикса, частичной конденсацией хроматина ядер, очагами локального или генерализованного миоцитолизиса, гиперплазией гранулярной эндоплазматической сети, митохондрий, увеличением количества свободных рибосом и полисом Такие клетки, по аналогии с миоцитами перинекротической зоны, интерпретированы нами, как "сократительно-синтетические" Весьма специфично, что редукция элементов сократительного аппарата происходила в них без заметного участия лизосом Об активации внелизосомальных, разрушающих миофиламенты протеаз, в накапливающих метаболиты клетках полагают Балакина Г Б , Скопичев В Г , Арутюнян Н А (1988).

Миоцитолизис, как одно из основных проявлений адаптивной структурной реорганизации "темных" лейомиоцитов в "светлые", сопряжен, на наш взгляд, с активированием внутриклеточной регенерации Подтверждением этому были обнаруживаемая уже с 3-х суток эксперимента в миоцитах и "светлого"и «темного» типов' гипертрофия ядра, укрупнение и базофилия ядрышек, состоящих в основном из гранулярного компонента, увеличение количества свободных рибосом, наличие мелких округлых митохондрий с короткими редкими кристами и прозрачным матриксом, накопление гранул липидов и гликогена Также очевидна локализация многочисленных рибосом, митохондрий вблизи миофиламентов В прозрачном матриксе «светлых» миоцитов наиболее характерны развитая гранулярная эндоплазматическая сеть По данным морфометрии относительный объем "светлых" лейомиоцитов достигает своего максимума к 5-м суткам эксперимента (рис.4)

эксперимента

Рис.4

Динамика относительных объемов «темных» и «светлых» ГМК в пограничном с повреждением миометрии крыс

В этот период в них относительно велико содержание органелл общего значения и гораздо меньше - элементов сократительного аппарата Вполне обосновано, что закономерный подъём относительной плотности «светлых» миоцитов в начале ре-паративного процесса определен необходимостью активного биосинтеза веществ не только для восстановления собственной ультраструктуры, но и для образования компонентов экстрацеллюлярного матрикса в очаге обширного экспериментального повреждения

Относительный объем "темных" лейомиоцитов в пограничном с повреждением миометрии, снижавшийся к 5-м суткам эксперимента до 15,3+1,3%, на наш взгляд, обусловлен не только трансформацией части миоцитов этого типа в "светлые", но и нарастанием интерстициального и внутриклеточного отека Наблюдаемый в сократительных (темных) миоцитах внутриклеточный очаговый миоцитолизис приводит к снижению относительного объема плотных телец, прикрепительных пластинок и миофиламентов Множественные проявления везикулообразования и кавеоляции плазмолеммы "темных" гладкомышечных клеток свидетельствуют об интенсивном трансмембранном транспорте веществ

Примечателен факт, что ГМК, подобные по ультраструктуре «светлым», обнаруживаются в гладкой мышечной ткани развивающейся матки в раннем постнатальном периоде, когда также активно идут процессы внутриклеточного биосинтеза компонентов не только контрактильного аппарата, но и межклеточного вещества ГМТ В этой связи можно полагать, что наблюдаемые нами явления обратимой детерминированной фенотипической модуляции лейомиоцитов зависимы не только от объема биосинтетической нагрузки, выполняемой гладкомышечными клетками в смоделированных патологических условиях, но и от уровня их цитодифференцировки

Подобные реактивные изменения происходили у млекопитающих в гладкой мышечной ткани после экспериментальной перевязки артерий конечностей, аорты, бедренной артерии (О.Я Кауфман, 1977), бронхов при моделировании бронхоспаз-ма (АЛ Зашихин, 1997), при локальном термическом повреждении пилорического отдела желудка (В H Давиденко, 2000) при моделировании ишемии тонкого кишечника (Кабакова АЕ 1989, ИП Евдокимова, ИВ Фолькман 1980, ЛИ Аруин , 1987), экспериментальных травмах (химическая, механическое перерастяжение, ожог) сфинктера прямой кишки (Г H Суворова, 2000, H В Ямщиков , Г H Суворова 2003) Обратимый характер проявлений посттравматической дедифференцировки и вторичная дифференцировка в тканях при стабильной их детерминации, существующей на определенных этапах гистогенезов, по мнению ЕШ Герловина (1972), определяется репрессией и дерепрессией ДНК, контролируемой регуляторными генами

Дальнейшее повышение относительных объемов "темных" лейомиоцитов с 7-х суток эксперимента коррелирует с активированием в них ядер, некоторым (в сравнении со "светлыми" ГМК) повышением содержания рибосом, лизосом, митохондрий и канальцев эндоплазматического ретикулума в цитоплазме К 30-90-м суткам эксперимента показатели относительных объемов "темных" лейомиоцитов в ткани, равно как и внутриклеточных объемов ЭПС, митохондрий, рибосом, компонентов сократительного аппарата, приближаются к контрольным Сохраняющиеся в граничащих с соединительнотканным рубцом гладкой мышечной ткани "светлые" лейомиоциты, (до 9% относительного объема на 90-е сутки эксперимента) имеют характерную для них ультраструюуру Это позволяет предположить участие их в обновлении структурных компонентов рубца

Немаловажна роль в восстановлении структуры большинства лейомиоцитов при-раневого миометрия крыс межклеточных контактов, обеспечивающих процессы оптимального внутриклеточного метаболизма (Daniel ЕЕ. et al 1980), интеграции и цитодифференцировки (Konieshi I , Fujii S , Okamura H., Mori T., 1984, Garfield R.E , Thilander G., Blennerhassett M G., Sakal N , 1992)

Пролиферации реактивно измененных гладкомышечных клеток в поврежденной мышечной оболочке матки крыс не наблюдалось Возможно, это обусловлено блокированием митотического цикла дифференцирующихся лейомиоцитов уже к концу 30-х суток постнатального периода развития в связи с воздействием на геномный аппарат "специфического продукта дифференцировки - миофиламентов" (Бродский В Я , Урываева ИВ 1981)

Таким образом, проведенное экспериментально-морфологическое исследование репарации миометрия матки крыс после его локального повреждения позволило (на основании качественного и количественного микро- и субмикроскопического изучения пограничного с повреждением миометрия) выделить весьма специфичные проявления посттравматических изменений его ГМТ Это а) весьма продолжительная по времени отсроченная гибель лейомиоцитов в перинекротической зоне поврежденного миометрия (по 30-е сутки эксперимента) путем некроза, апоптоза и дезинте-грационной атрофии, б) отсутствие эффекта активации митотической пролиферации ГМК, их гипертрофии в прираневом миометрии и за его пределами в) активное участие претерпевающих внутриклеточную реорганизацию гладкомышечных клеток пограничного с повреждением миометрия в синтезе межклеточного вещества ГМТ (особенно на 5-7-е сутки эксперимента) г) присутствие (на 90-е сутки эксперимента) в граничащем со сформированным соединительнотканным рубцом миометрии до 9% «светлых» «сократительно-синтетических» гладких миоцитов

выводы

1 Висцеральная ГМТ в миометрии матки взрослых крыс представлена популяцией "темных" сократительных лейомиоцитов, ориентированных друг относительно друга и интегрированных многочисленными короткими простыми адгезивными, щелевыми и плотными межмиоцитарными контактами Вместе с межклеточным веществом, составляющим до 24% относительного объема ткани, они формируют наружный продольный и внутренний циркулярный пласты ГМТ, разделенные ин-терстициальным компонентом

2 Наиболее ранние проявления специфической дифференцировки ГМК в стенке развивающейся матки крыс обнаруживаются на 17-е сутки эмбриогенеза в "темных" мезенхимных клетках стенок сближающихся дистальных отделов парамезо-нефральных протоков

3 В процессе пре- и постнатального лейомиогенеза в клеточном диффероне развивающегося миометрия представленном несколькими типами ГМК презумптивны-ми малодифференцированными ("премиобластами"), дифференцирующимися (сократительно-синтетическими), дифференцированными (сократительными) ГМК, детерминированы закономерные проявления их специфической дифференцировки и становления межмиоцитарных взаимоотношений, снижение пролифе-ративной активности и элиминация части дифференцирующихся лейомиоцитов апоптозом, снижение интенсивности биосинтезов компонентов межклеточного вещества

4 Специфичным для репаративного лейомиогенеза в матке крысы является' отсутствие проявлений митотического деления ГМК, гипертрофии прираневых лейомиоцитов, способность к длительной выживаемости в перинекротической зоне (до 30-х суток эксперимента) групп лейомиоцитов, утративших межклеточные взаимоотношения с интактным миометрием, участие многих прираневых ГМК в синтезе межклеточного вещества, заполняющего раневой дефект на 3-7-е сутки эксперимента

5 Закономерным морфологическим проявлением реактивных изменений ГМТ пограничного с очагом механического повреждения миометрия было нарастание гете-роморфности её лейомиоцитов, обусловленное очевидным преобразованием части сократительных ("темных") миоцитов в сократительно - синтетические ("светлые") Весьма достоверный факт присутствия вблизи рубца к 90-м суткам эксперимента до 9% "светлых" ГМК предполагает участие последних в поддержа-

нии оптимального состояния мышечно - соединительнотканнных взаимоотношений в этой области миометрия

6 Характерными, ультраструктурными критериями состояния реактивности "светлых" ГМК в пограничном с травмой миометрии, подтверждаемыми методом внутриклеточной стереоморфометрии, являются гипертрофия их ядер и ядрышек, гиперплазия органелл интра- и экстрацеллюлярных биосинтезов, митохондрий, появление свободных от миофиламентов очагов миоцитолизиса, а также периферическая локализация малочисленных элементов контрактильного аппарата

7 Исходом обширной механической травмы стенки матки является заполнение дефекта в ней межклеточным веществом рыхлой волокнистой соединительной ткани (трансформирующейся к 15-м суткам эксперимента в рубцовую), образованным не только биосинтетически активными пролиферирующими фибробластами, но и «пережившими» травму и адаптивную структурную реорганизацию гладко-мышечными клетками пограничного с повреждением миометрия

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1 Созыкин А А Электронно-микроскопическое исследование миометрия крыс в ус-

ловиях экспериментальной травмы // Тез науч конф "Актуальные вопросы фундаментальной и прикладной медицинской морфологии", посвящ 100-летию со дня рождения заслуженного деятеля науки РСФСР, проф П А Соколова Ростов - на - Дону, -2000.-С 8.

2 Созыкин А. А Мышечно-соединительнотканные взаимоотношения в миометрии

крыс после механической травмы // В сб труды молодых ученых России, Ижевск, 2000. - С. 44

3 Созыкин А А , Хлопонин П А Об ультраструктурных посттравматических измене-

ниях в организации гладкой мышечной ткани матки крыс // Матер 3-й научной сессии РГМУ- Ростов - на - Дону, 2000 - С 120

4 Созыкин А А Некоторые аспекты пренатального лейомиогенеза в миометрии за-

родышей крыс // Матер 55 - й итоговой научной конференции РГМУ, Ростов - на -Дону, 2001 -С. 109

5 Давиденко В Н , Созыкин А А Об изменениях некоторых морфометрических по-

казателей миоцитов в прираневых зонах матки и желудка крыс // В сб • Морфологические основы гистогенеза и регенерации тканей - гС-Петербург, 2001-С. 121.

6 Созыкин А А , Лалаян Р С Заживление ран матки при повреждении миометрия //

В сб ■ Вопросы прикладной анатомии и хирургии Материалы 9-й региональной конференции молодых учёных - Санкт-Петербург, 2001-С 83-84.

7 Созыкин А А Об изменениях некоторых морфометрических показателей гладких

миоцитов в прираневой зоне матки крыс. // В сб. Актуальные медико-биологические проблемы в современных условиях - Ижевск, 2001-С-36.

8. Созыкин А А Посттравматические изменения в миометрии крыс // Матер 75-й Веер Студенческой науч конференции, посвященной 100-летию студенческого научного общества КГМУ, Казань, 2001 - С 168

9 Созыкин А А Эмбриональный лейомиогенез в миометрии крыс//Материалы 11-й Международной научно-практической конференции "Здоровье и образование в 21-м веке" Москва, 2001- С 204

10 Созыкин А А К вопросу о посттравматических трансформациях в миометрии крысы после экспериментальной механической травмы // В сб Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии Вып 2 Томск, 2002 - С 221-222.

11 Созыкин А А , Хлопонин П А , Радченко А Ю Морфологическое исследование нормального и посттравматического гистогенеза гладкой мышечной ткани мио-метрия крыс // В сб Материалы IV- Международной научно-практической конференции «Здоровье и Образование в XXI веке», Москва, 2003 - С 578

Печать цифровая Бумага офсетная. Гарнитура "Тайме". Формат 60 х 84 /16 Объем 1,1 уч. - изд. л Заказ № 53. Тираж 100 экз. Отпечатано в КМЦ"КОПИ ЦЕНТР" 344006, г. Ростов-на-Дону, Суворова, 19. тел. 47-34-88

РНБ Русский фонд

2006-4 7130

2 J о" 'i

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Созыкин, Александр Александрович

Введение

Обзор литерауры

Глава 1. Современные данные о развитии, строении и регенерации гладкой мускулатуры матки у млекопитающих и человека.

1.1. О структуре гладкой мышечной ткани матки млекопитающих 10 и человека.

1.2. Морфологические аспекты нормального лейомиогистогенеза в развивающемся миометрии млекопитающих и человека.

1.3. Морфологические аспекты репаративного лейомиогистогенеза млекопитающих и человека.

Собственные исследован ия.

Глава 11. Материалы и методы исследования.

Глава 111. Морфологическая характеристика гистогенеза 41 гладкой мышечной ткани в развивающемся миометрии матки крыс (Rattus Norvegicus).

Глава IV. Гистологический анализ проявлений 67 реактивных изменений в миометрии крыс после экспериментального механического повреждения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфологические аспекты нормального гистогенеза и реактивных изменений гладкой мышечной ткани миометрия крыс"

Актуальность проблемы.

Среди медико-биологических проблем современной гистологической науки одной из стержневых, по определению Д.С. Саркисова (1977), является проблема гистогенеза и регенерации тканей и органов. В этой связи проводимые исследования пре- и постнатального развития многих органов и систем у млекопитающих животных способствуют более глубокому и объективному пониманию не только механизмов аномальных гисто- и органогенезов, но и морфологических основ взаимоотношений тканей в развивающихся, обновляющихся и восстанавливающихся многотканевых системах.

При этом в последние годы творческие усилия отечественных (Баженов Д.В., 1996; Зашихин А.Л. с соавт., 1999, 2001, 2002, 2003; Агафонов Ю.В., 1999; Суворова Г.Н., 2001) и зарубежных (Garfield R.E. et al., 1992; Somlyo A.V. et al., 1994; Chen Y.H. et al., 1997) морфологов были направлены на изучение структурно-функциональных характеристик висцеральной гладкой мышечной ткани, входящей в состав практически всех полых органов млекопитающих и человека. Ими уже установлены некоторые особенности гистогенеза и дефинитивного строения гладкой мышечной ткани органов пищеварительной, дыхательной и моче-выделительной систем, исследованы морфологические проявления её реактивности в ответ на воздействие альтерирующих факторов.

Малоизученной остается гладкая мышечная ткань миометрия матки млекопитающих и человека, характеризующаяся, как известно, спецификой выполняемых функций и эндокринной зависимостью. Особенно малоинформативны сведения о ранней дифференцировке её мезенхимальных предшественников в эмбриональных закладках стенки матки млекопитающих. Также недостаточно изучены основные составляющие лейомиогенез процессы детерминации, пролиферации, дифференцировки и апоптоза, интеграции гладких миоцитов в пре- и постнатальном миометриогенезе. Необходимо и тщательное изучение формирования интерстициального компонента в миометрии матки.

Базисные процессы гистогенеза составляют основу репаративных реакций гладкой мышечной ткани позвоночных и человека. В этой связи в экспериментальной морфологии и физиологии предопределена необходимость изучения моделируемых на лабораторных животных клинических ситуаций с хирургическим или иным воздействием на стенку матки. Экспериментальные работы, посвященные регенерации миометрия после её механической травмы единичны. Отмечена достаточная пластичность его в условиях воздействия на матку различных альтерирующих факторов (Зотов Л.А., 1970., Garfield R.E., Denial Е.Е. 1974., Kawaguchi К. 1985., Gabella G., 1981., Pietro M., 1990., Савицкий Г.А., 2000). Однако суждения этих морфологов о реорганизации мышечно-соединительнотканных взаимоотношений на месте того или иного повреждения весьма противоречивы. Неполно освещены вопросы о количественных и качественных изменениях клеточных элементов и межклеточного вещества по ходу репарации миометрия. Не определены критерии жизнеспособности лейомиоцитов в пограничной с повреждением зоне.

Таким образом, в литературе пока ещё нет целостного представления о закономерностях нормального лейомиогистогенеза, особенностях гистологического строения гладкой мышечной ткани миометрия у взрослых крыс в различные стадии эстрального цикла, а также о закономерностях репаративных процессов в поврежденном миометрии млекопитающих. В этой связи представляется актуальным проведение сравнительного комплексного морфологического исследования (с применением методов классической гистологии, гистохимии, электронной микроскопии, стереоморфометрии) нормального и репаративного лейомиогенезов в мышечной оболочке матки лабораторных крыс.

Цель исследования - морфологический анализ проявлений нормального и репаративного лейомиогенезов в миометрии крыс.

Для реализации цели исследования были поставлены следующие задачи:

1. Изучить ультраструктуру гладкой мышечной ткани миометрия в матке взрослых крыс.

2. Изучить морфологические проявления нормального лейомиогенеза в пре- и постнатальном миометриогенезе.

3. Исследовать особенности морфологических проявлений репаративных изменений в экспериментально поврежденном миометрии взрослых крыс.

4. Изучить проявления изменений интерстициального компонента миометрия в динамике восстановления поврежденной стенки матки взрослых крыс.

Научная новизна.

Впервые с использованием светооптического, иммуноцито-химического, электронно-микроскопического и стереоморфометрического методов проведено комплексное морфологическое исследование проявлений нормального пре- и постнатального развития гладкой мышечной ткани, а также реактивных её изменений в миометрии крыс после механической травмы стенки матки.

Впервые получены данные о ранней специфической дифференцировке мезенхимальных предшественников гладкомышечных клеток миометрия, о процессах пролиферации и апоптоза, о становлении интегративных взаимоотношений гладкомышечных клеток по ходу лейомиогистогенеза; об особенностях ультраструктурной организации миометрия у взрослых крыс в половом цикле (на стадиях метаэструс и эструс); о количественных и качественных изменениях межклеточного вещества в ГМТ миометрия.

Впервые проведен электронно-микроскопический анализ основных процессов репаративного лейомиогенеза в поврежденной гладкой мышечной ткани матки млекопитающих: де- и редифференцировки лейомиоцитов, их межклеточных взаимоотношений, пролиферации и апоптоза. Установлены различия в диапазоне реактивных ультраструктурных перестроек лейомиоцитов в зависимости от степени их дезинтеграции.

Впервые методами электронной микроскопии и ультраструктурной морфометрии в пограничной с повреждением гладкой мышечной ткани миометрия матки крыс (после нанесения экспериментальной травмы) обнаружены явления посттравматической фенотипической модуляции части "темных" ("сократительных") миоцитов в "светлые" ("сократительно-синтетические"). Представлена морфофункдиональная характеристика "темных" и "светлых" гладких мышечных клеток, изучены соотношения их относительных объемов и межклеточного вещества, прослежена динамика изменений морфометрических параметров некоторых внутриклеточных структур (ядра, эндоплазматической сети, митохондрий, рибосом, плотных телец, миофиламентов) лейомиоцитов прираневого миометрия. Проведенное исследование позволило обнаружить проявления компенсаторно-приспособительных реакций в гладкой мускулатуре матки по ходу репаративного лейомиогистогенеза, определить критерии жизнеспособности "переживающих" травму гладких мышечных клеток поврежденной мышечной оболочки.

По ходу выполнения экспериментального раздела настоящей работы, совместно с сотрудниками кафедры топографической анатомии и оперативной хирургии РостГМУ, разработан и апробирован способ определения прочности швов, наложенных на матку (патент РФ на изобретение №2203625 от 10.03.2003).

Практическая значимость.

Работа представляет собой комплексное экспериментально-гистологическое и стереометрическое исследование некоторых составляющих нормальный и репаративный гистогенезы процессов в миометрии крыс. Полученные данные об основных закономерностях становления его висцеральной гладкой мышечной ткани в миометриогенезе: о дифференцировке лейомиоцитов, их интегративных взаимоотношениях, изменениях пролиферативной активности, участии в образовании межклеточного вещества представляют интерес для ученых смежных медикобиологических специальностей: цитологов, биологов, биохимиков, анатомов, физиологов.

Экспериментально-морфологическим и морфометрическим изучением посттравматических реактивных изменений гладкой мышечной ткани матки млекопитающих установлены различные диапазоны внутриклеточных перестроек лейомиоцитов прираневого миометрия в зависимости от изменяющихся межмиоцитарных и межтканевых взаимоотношений, от специфики организации межклеточного вещества. Полученные данные существенно расширяют имеющиеся представления о пластических свойствах этой ткани; они необходимы практикующим акушерам-гинекологам в объективной оценке морфофункционального состояния миометрия, повреждаемого при реконструктивных и родоразрешающих оперативных вмешательствах на матке.

Основные положения выносимые на защиту:

1. Гладкая мышечная ткань миометрия взрослых крыс образована в основном популяцией сократительных гладких миоцитов, интегрированных в два пласта с продольной (наружный пласт) и циркулярной (внутренний пласт) ориентацией и разделенных интерстицием. До 25% относительного объема ГМТ составляет межклеточное вещество.

2. Закономерными морфологическими проявлениями раннего лейомиогенеза в мезенхиме презумптивных закладок матки крыс, то есть в стенках дистальных отделов парамезонефральных протоков, являются: изменение формы клеток (она становится вытянутой) и частичная утрата ими отростков, установление межклеточных взаимоотношений, возрастающий уровень развития органелл интра- и экстрацеллюлярного биосинтезов, появление в цитоплазме специфического гладкомышечного а - актинина, очагов сборки сократительного аппарата и др.

3. Клеточный дифферон в развивающейся ГМТ миометрия представлен несколькими типами лейомиоцитов: малодифференцированными; дифференцирующимися (сократительно-синтетическими); дифференцированными (сократительными). По ходу гистогенеза гладкой мышечной ткани матки происходит: нарастание мономорфности популяции дифференцирующихся лейомиоцитов, усложнение их межмиоцитарных взаимодействий, падение пролиферативной активности, элиминация некоторых из них апоптозом, возрастание относительного объема гладких миоцитов и уменьшение относительных объемов их ядер, закономерная значительная редукция органелл биосинтезов и, как следствие, - снижение интенсивности образования сократительного аппарата, компонентов межклеточного вещества и др.

4. Морфологические изменения большинства гладких миоцитов пери-некротической зоны поврежденного миометрия крыс являются необратимыми (некротическими); лишь в немногих "переживших" травму лейомиоцитах этой зоны уже в первые 24-48 часов эксперимента очевидны проявления глубокой (в пределах "рубежа" детерминации) дедифферен-цировки, завершающейся дезинтеграционной атрофией к 30-м суткам эксперимента.

5. В расположенном за пределами перинекротической зоны миометрии более половины основной массы лейомиоцитов характеризуются обратимой реорганизацией своей структуры с явлениями внутриклеточной регенерации и трансформации (с 3-х по 7-е сутки эксперимента) в сократительно-синтетические. До 9% клеток такого типа еще обнаруживались в указанной зоне к 90-м суткам эксперимента.

Апробация работы.

Материалы диссертации докладывались и обсуждались на 51 - 55-й итоговых научных конференциях студентов и молодых учёных РостГМУ (1997, 1998, 1999, 2000, 2001г.г.); научной конференции посвященной 50-летию анатомического кружка РостГМУ (1997); 3-й научной сессии РостГМУ (2000); научной конференции "Актуальные вопросы фундаментальной и прикладной медицинской морфологии", посвященной 100-летию со дня рождения заслуженного деятеля науки РСФСР, профессора П.А. Соколова (Ростов -на-Дону, 2000); заседаниях Ростовского общества анатомов, гистологов и эмбриологов (РостГМУ 2001, 2003 г.г.); науч. конф. молодых ученых России (Ижевск, 2000); "Морфологические основы гистогенеза и регенерации тканей" (Санкт-Петербург, 2001); 9-й региональной конф. молодых ученых (Санкт-Петербург, 2001); "Актуальные медико-биологические проблемы в современных условиях" (Ижевск, 2001); 75-й Всероссийской студенческой научной конференции, посвященной 100-летию студенческого научного общества КГМУ (Казань, 2001); "Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии" (Томск, 2002); 3,4-й международных научно-практических конференциях "Здоровье и образование в 21-м веке" (Москва 2002, 2003).

По теме диссертационной работы опубликовано 11 научных работ.

Внедрение в практику.

Основные положения диссертации внедрены в учебный процесс на кафедрах гистологии, цитологии и эмбриологии, нормальной анатомии, нормальной физиологии, топографической анатомии и оперативной хирургии, общей биологии РостГМУ; кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии Ярославскох^ГМ^. и используются при изложении материала на лекциях и практических занятиях по темам: «Мышечные ткани», «Регенерация тканей», «Органы женской половой системы».

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, главы обзора литературы, главы по материалам и методам исследования, двух глав собственных исследований нормального и репаративного лейомиогистогенеза, обсуждения полученных результатов, выводов и указателя литературы, включающего 103 отечественных источников и 95 зарубежных источников. Работа изложена на 135 страницах машинописного текста, иллюстрирована 1 схемой, 1 графиком, 5 таблицами, 3 диаграммами; содержит 14 светооптических и 35 электронно-микроскопических микрофотографий.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Созыкин, Александр Александрович

ВЫВОДЫ

1. Висцеральная ГМТ в миометрии матки взрослых крыс представлена популяцией "темных" сократительных лейомиоцитов, ориентированных друг относительно друга и интегрированных многочисленными короткими простыми адгезивными, щелевыми и плотными межмиоцитарными контактами. Вместе с межклеточным веществом, составляющим до 24% относительного объема ткани, они формируют наружный продольный и внутренний циркулярный пласты ГМТ, разделенные интерстициальным компонентом.

2. Наиболее ранние проявления специфической дифференцировки ГМК в стенке развивающейся матки крыс обнаруживаются на 17-е сутки эмбриогенеза в "темных" мезенхимных клетках стенок сближающихся дистальных отделов парамезонефральных протоков.

3. В процессе пре- и постнатального лейомиогенеза в клеточном диффероне развивающегося миометрия представленном несколькими типами ГМК: презумптивными малодифференцированными ("премиобластами"), дифференцирующимися (сократительно-синтетическими), дифференцированными (сократительными) ГМК; детерминированы закономерные проявления их специфической дифференцировки и становления межмиоцитарных взаимоотношений, снижение пролиферативной активности и элиминация части дифференцирующихся лейомиоцитов апоптозом, снижение интенсивности биосинтезов компонентов межклеточного вещества.

4. Специфичным для репаративного лейомиогенеза в матке крысы является: отсутствие проявлений митотического деления ГМК; гипертрофии прираневых лейомиоцитов; способность к длительной выживаемости в перинекротической зоне (до 30-х суток эксперимента) групп лейомиоцитов, утративших межклеточные взаимоотношения с интактным миометрием; участие многих прираневых ГМК в синтезе межклеточного вещества, заполняющего раневой дефект на 3-7-е сутки эксперимента.

5. Закономерным морфологическим проявлением реактивных изменений ГМТ пограничного с очагом механического повреждения миометрия было нарастание гетероморфности её лейомиоцитов, обусловленное очевидным преобразованием части сократительных ("темных") миоцитов в сократительно - синтетические ("светлые"). Весьма достоверный факт присутствия вблизи рубца к 90-м суткам эксперимента до 9% "светлых" ГМК предполагает участие последних в поддержании оптимального состояния мышечно-соединительнотканных взаимоотношений в этой области миометрия.

6. Характерными, ультраструктурными критериями состояния реактивности "светлых" ГМК в пограничном с травмой миометрии, подтверждаемыми методом внутриклеточной стереоморфометрии, являются: гипертрофия их ядер и ядрышек, гиперплазия органелл интра- и экстрацелшолярных биосинтезов, митохондрий, появление свободных от миофиламентов очагов миоцитолизиса, а также периферическая локализация малочисленных элементов контрактильного аппарата.

7. Исходом обширной механической травмы стенки матки является заполнение дефекта в ней межклеточным веществом рыхлой волокнистой соединительной ткани (трансформирующейся к 15-м суткам эксперимента в рубцовую), образованным не только биосинтетически активными пролиферирующими фибробластами, но и «пережившими» травму и адаптивную структурную реорганизацию гладкомышечными клетками пограничного с повреждением миометрия.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Созыкин, Александр Александрович, Волгоград

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия // М .- 1990 - 384с.

2. Агол В.И. Генетически запраграммированная смерть клетки // Сорос, образоват. журн.-1996 - №6. - С.20-24

3. Агафонов Ю.В. Морфофункциональные закономерности реактивности гладкой мышечной ткани различных органных систем // Автореф. док. дис. - Архангельск - 1999 - 46с.

4. Агафонов Ю.В., Зашихин А.Л. Ультраструктурная организация диффузного хроматина в динамике миобластической дифференцировки // В сб.: применение современных методов анализа в изучении структуры и функции клетки. Архангельск - 2002 - С.5-6.

5. Академия наук СССР; проблемы биологии развития «Объекты биологии развития» // под. ред. Б. Л. Астаурова М. - Наука - 1975 - С.125.

6. Алов И.А., Брауде А.И., Аспиз М.Е. Основы функциональной морфологии клетки // М. - Медицина - 1964 - С.9-12

7. Данилов Р.К., Боровая Т.Г. Руководство по гистологии // С.- Петербург -т.1 -2001 -300с.

8. Аруин Л.П., Бабаева А.Г., Гельфанд В.Б. Регенерация гладкой мышечной ткани //В кн.: Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций - М.- Медицина - 1987- С.68-94.

9. Арутюнян Н.А., Савченко О.Н., Савицкий Г.А., Скопичев В.Г., Секретарева С.Е. Особенности рецепции эстрадиола в узлах миомы различной морфологической структуры // Акушерство и гинекология -1986- вып.З - С.17-19.

10. Архипенко В.И., Гербильский Л. В., Черченко Ю.П., Чуич Г.А.-Структура и функции межклеточных контактов // В кн.: Структура и функции биологических мембран- М. Наука 1975-С.77-96.

11. Бабаев В.Р., Бобрышев Ю.В., Стенина О.В., Тарарак Э. М. -Фенотипические варианты гладкомышечных клеток в атероматозной бляшке аорты человека // Архив патологии-1990-№5-С. 16-21.

12. Баженов Д. В.- Регенерация мускулатуры толстой кишки в условиях эксперимента // Архив АГЭ- 1973 т.64 - вып.6 - С.81-84 .

13. Баженов Д.В. Межклеточные взаимоотношения в мышечных тканях пищевода // Архив АГЭ - 1987 - т.93- вып.8 - С.77-82 .

14. Баженов Д.В. Мышечные ткани пищевода млекопитающих (актуальные вопросы гистогенеза, структурной организации и регенерации) // Автореф. докт дис - Ленинград - 1988 - 36 с.

15. Балакина Г.Б., Скопичев В.Г., Арутюнян Н.А. Локализация ферментов гидролиза в гладких миоцитах молочной железы и матки // Архив АГЭ -1988 -т.94 - №4 - С.64-68.

16. Башилова Е.Н. Некоторые аспекты реактивной трансформации гладкой мускулатуры мочеточника // В сб. Структура и функция гладкой мускулатуры висцеральных органов и эндокринного аппарата поджелудочной железы. Архангельск - 1999 - С.8.

17. Башилова Е.Н. Морфо-функциональная характеристика и реактивность гладкой мышечной ткани мочевыносящих путей. // Автореф.канд. дисс-Архангельск 2000 - 36с.

18. Безнусенко Г.В. Ультраструктурная и пространственная организация гладкомышечных клеток в миоме матки и макроскопически неизмененного миометрия // Одесский медицинский вестник. - 1992 - С.22.

19. Безнусенко Г.В. Трехмерная организация клеточной системы миомы матки и макроскопически неизмененнного миометрия // Владимирский медицинский вестник. - Владимир. - 1996 - с.73-76.

20. Безнусенко Г.В. Гладкие миоциты миометрия в периоды его ускоренного роста в пренатальном онтогенезе, при беременности и миоме матки. // Автореф. канд. дисс.- М.-1997-23 с.

21. Беляева Е.А. Цитохимическая характеристика роста миометрия в тканевой культуре // Архив АГЭ - 1973 т.32. - С.9-12.

22. Брехман Г.И., Миронов А.А. Ультраструктурное исследование лейомиомы матки // Акушерство и гинекология - 1986 - вып.2 - С.22-24.

23. Бродский В.Я., Урываева И.В. Клеточная полиплоидия, пролиферация и дифференцировка // М. - Наука - 1981-259с.

24. Быков B.JL- Цитология и общая гистология С.-П. - 1999 - Соитие- 519с.

25. Волкова О.В., Пекарский М.И.- Эмбриогенез и возрастная гистология внутренних органов человека. // М.-Медицина-1976 486с.

26. Ваганова М.Е., Перов Ю.Л., Постнов Ю.В. .Роль Са зависимых каналов эндоплазматической сети гладких миоцитов в механизмеих сокращения// Медицина 1964 - С.9-12 .

27. Гамбарян А.П. Крыса // Л. -1955 - 234с.

28. Галкина Ю.М., Баннова Д.А., Сапожников А.Т. Гемоциркуляторно-стромально - гладкомышечные взаимодействия в миометрии женщин пожилого и старческого возраста. // В сб.: Памяти академика Д. А. Жданова. - М.1998,- с.39-40.

29. Гладкий А.П. Некоторые закономерности регенерации мускулатуры внутренних органов // Архив АГЭ - 1975 - т.69 - вып.8-С.101-109.

30. Гладкий А.П., Баженов Д.В. Реактивность гладкой мышечной ткани толстой кишки в условиях экспериментальной непроходимости // Архив АГЭ - 1976 -т.71 - вып.7- С.47-51.

31. Глаголев А.А. Геометрические методы количественного анализа агрегатов под микроскопом. // Львов - 1941. - 263с.

32. Говырин В.А., Озирская Е.В., Рейдлер Н.М. Формирование мышечного и нервного компонентов стенки бедренной артерии у собак в раннем постнатальном онтогенезе // Архив АГЭ - 1984 - т.84 - вып.6 - С.38-49.

33. Голуб Д.М., Прокапчук В.А. Морфологическое исследование развития инфантильных маток кролика в условиях кастрации и органофиксии. // В сб.: Нейрогуморальные механизмы; рефлекторные реакции. - Минск. -Наука и техника - 1973 - с.186-190.

34. Давиденко В.Н. Нормальный и репаративный гистогенез гладкой мышечной ткани желудка млекопитающих. // Автореф. канд. дис. -Волгоград - 2000 - 25с.

35. Данилов Р.К. Очерки гистологии мышечных тканей // Уфа -Башкортостан - 1994 - 50с.

36. Дубинко Г.А. Синтез ДНК и размножение клеток при развитии гладкой мускулатуры // Архив АГЭ -1966 т.50 - вып.5 - с.47-53.

37. Евдокимов И.Р., Фрольксис И.В. К вопросу о влиянии повышения осмолярности внеклеточной среды на ультраструктуру гладких мышечных клеток сосудов // Архив АГЭ - 1980 - т.78 - вып.1 - С.78-82.

38. Зашихин A.JI. Дифференцировка клеток стенки бронхов в ранний период эмбрионального развития легких // Архив АГЭ-1991-Т.101 - вып.7 - С.67-74.

39. Зашихин А.Л., Агафонов Ю.В. Динамика популяции мышечных клеток воздухоносных путей при изменении функциональной нагрузки легких // Пульмонология - 1994 - вып.З - С. 34-41.

40. Зашихин А.Л. Морфо-функциональная характеристика, гистогенез и реактивность гладкой мышечной ткани бронхов // Автореф. док. дис. -Архангельск - 1994 - 39 с.

41. Зашихин А.Л., Агафонов Ю.В. Гладкая мышечная ткань бронхов (особенности гистогенеза) // Морфология - 1997 - т. 109 - №1 - С.75-81

42. Зашихин А.Л., Агафонов Ю.В. Структура популяции гладких миоцитов (аспекты внутриорганной организации гладкой мышечной ткани) , // Морфология - 1997 - т.112 - №4 - С. 61-67.

43. Зашихин А.Л., Агафонов Ю.В., Черняев А.Л. Морфометрическая и ультраструктурная характеристика гладкой мускулатуры бронхов при экспериментальном бронхоспазме. // Архив патологии - 1997 - т.59,-вып.2 - С.38-41.

44. Зашихин А.Л. некоторые аспекты ультраструктурной организации миофибробластов в составе висцеральной гладкой мускулатуры // В сб.: Доклады 6 конгресса международной ассоциации морфологов -Астрахань - 2001- С.22

45. Зотов Л.А. Люминесцентно-микроскопическое исследование нуклео-протеидов миометрия в условиях регенерации. // Архив АГЭ - 1968 -вып. 10 - С. 18-20.

46. Зотов Л.В. Гистогенез и регенерация гладкой мышечной ткани и нервного аппарата стенки матки. // Автореф. канд. дисс. - Калининград.-1970 - 35с.

47. Жеденов В.Н. Анатомия кролика // М -. Наука -1957- 326 с.

48. Железнов Б. И. Структура и функциональная морфология мышцы матки при нормальной беременности, в родах и при слабости родовой деятельности // 7-й Межд. Конгресс акуш. - гин., М., - 1973 - С.57.

49. Заварзин А.А. Основы частной цитологии и сравнительной гистологии многоклеточных животных// Л. - Наука - 1976. - 320с.

50. Заварзин А.А. Основы сравнительной гистологии // Л. - ЛГУ -1985- 400с.

51. Заостровская Л.А. Морфофункциональная организация и реактивность гладкой мускулатуры мелких бронхов у человека // В сб.: Материалы 4 съезда росийских морфологов с международным участием -1999-С.32-34.

52. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А., Западнюк Б.В. -Лабораторные животные // Киев Головное издательство объединения «Вища школа» - 1983 - С. 243-276.

53. Зашихин A.JI. Ультраструктура межклеточных контактов гладких миоцитов дыхательных путей // Архив АГЭ - 1988 - т.95 - вып.12 - С.49-54.

54. Зашихин A.JI. Развитие и ультраструктура нейромышечных контактов гладкой мышечной ткани бронхов // Архив АГЭ - 1989 - т.97 - вып.7 -С.80-82.

55. Зашихин A.JI. Ультраструктурные аспекты гистогенеза гладкой мышечной ткани бронхов // В кн.: Реактивность и регенерация - Л. -ВМедА имени С.М. Кирова - 1990 - С. 27 -43.

56. Кабак Я.М. Практикум по эндокринологии. Основные методики экспериментально - эндокринологических исследований // М. МГУ,-1968-275с.

57. Кабаков А.Е. Фенотипические изменения гладкомышечных клеток аорты человека: экспрессия винкулина, калдесмона и актина // Автореф. канд. дис. -М. - 1989 -23с.

58. Кауфман О .Я., Перов Ю.Л., Бойков А.Л., Тимашкевич Т.Б. Значение повреждения для появления «активированных» гладких мышечных клеток.// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины,- 1977 -Вып.7,- С.112-115.

59. Кауфман О.Я. «Активированные» гладкие мышечные клетки кровеносных сосудов: происхождение, ультраструктура, роль в патологии // 6-й Всесоюзный съезд патологоанатомов - М. - 1977 - С. 90.

60. Кауфман О.Я. Гипертрофия и регенерация гладких мышц // М. - Наука -1979- 183с.

61. Кауфман О.Я. Сосудистая стенка и сосуды как система. Гладкие мышечные клетки кровеносных сосудов в норме и при изменении гемодинамики // В кн.: Очерки по гемодинамической перестройке сосудистой стенки - М. - Медицина - 1979 - 196с.65.