Молекулярные механизмы регуляции активности цитохромов Р450 подсемейства 1А в печени крыс при воздействии на организм холода

Перепечаева, Мария Леонидовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Молекулярные механизмы регуляции активности цитохромов Р450 подсемейства 1А в печени крыс при воздействии на организм холода
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Молекулярные механизмы регуляции активности цитохромов Р450 подсемейства 1А в печени крыс при воздействии на организм холода"

На правах рукописи

003445004

Перепечаева Мария Леонидовна

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ АКТИВНОСТИ ЦИТОХРОМОВ Р450 ПОДСЕМЕЙСТВА 1А В ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ НА ОРГАНИЗМ ХОЛОДА

03 00 04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 4 И ЮЛ 2008

Новосибирск - 2008

003445004

Работа выполнена в ГУ Научно-исследовательском институте молекулярной биологии и биофизики СО РАМН (Новосибирск, Россия)

Научный руководитель:

доктор биологических наук, доцент Гришанова А Ю

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Душкин М И кандидат биологических наук, Макарова С И

Ведущая организация:

ГУ Научно-исследовательский институт цитологии и генетики СО РАН (Новосибирск)

Защита состоится чб •• с о 2008 г в_часов на заседании

диссертационного совета Д 001 034 01 в ГУ Научно-исследовательском институте биохимии СО РАМН (630117, г Новосибирск, ул академика Тимакова, 2, тел 8-(383)333-54-81)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Научно-исследовательского института биохимии СО РАМН

Автореферат разослан "(/ " ч-о^гл!^- 2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук,

старший научный сотрудник Русских Г С

Актуальность проблемы

Воздействие умеренного холода на организм в целом - на уровне поведенческих, метаболических, физиологических реакций достаточно хорошо изучено и описано во множестве работ Однако только в последние несколько лет процессы, происходящие при действии холода, стали активно изучаться на молекулярном уровне Было выявлено, что действие умеренного холода (снижение температуры тела на несколько градусов) на клетки млекопитающих вызывает комплексный ответ, включающий, помимо активации компенсаторных механизмов, таких, как убиквитин-протеосомный путь и синтез белков холодового шока, замедление многих процессов происходит ингибирование транскрипции большинства генов и трансляции большинства белков, процессинга и деградации РНК, ферментативных реакций (Sonna LA et al, 2002, Al-Fageeh M В , Smales С M , 2006) В этой связи представляется интересным выявленный в опытах на крысах факт, что на фоне действия умеренного холода происходит, напротив, увеличение активности ферментов метаболизма ксенобиотиков, и, в частности, цитохрома Р450 1А1 (CYP1A1) (Громова OA и др , 2002) Механизм этого явления остается неизвестным Других сведений о влиянии умеренного холода на индукцию CYP1A у теплокровных животных в литературе нет Известны только немногочисленные работы по изучению индукции CYP1A при совместном действии холода и сильных индукторов CYP1A на рыбах (Kloepper-Sams Р J , Stegeman J J , 1992, Sleiderink H M , Boon J P , 1996)

Подсемейство цитохромов CYP1A состоит из двух членов CYP1A1 и CYP1A2 CYP1A1 конститутивно экспрессируется на очень низком уровне, CYP1A2 - на достаточно высоком, но оба фермента индуцируются при воздействии таких соединений, как полициклические ароматические углеводороды (ПАУ) и ариламины, которые являются "классическими" индукторами CYP1A В последние десятилетия накоплено множество сведений о том, что индукторами CYP1A могут быть не только ксенобиотики типа ПАУ, но и вещества с совершенно иными физико-химическими свойствами, в том числе, эндогенного происхождения (Denison M S , Nagy S R , 2003) Физические воздействия тоже способны активировать ферменты метаболизма ксенобиотиков была показана индукция CYP1A при таких воздействиях, как гидродинамический удар, ультрафиолет, ультразвук, гипероксия (Marin Е et al, 1988, Okamoto Т et al, 1993, Гришанова A Ю, Зуева Т В , 2000, Gonzalez M С et al, 2001, Monk SA et al, 2001, Feng Q et ai, 2002) В ответ на воздействие физических факторов в организме происходит запуск различных биохимических реакций биологически активными веществами, полученными из окружающей среды или освобожденными из физиологических "депо" В случае индукции цитохромов Р450 при действии физических факторов логично предполагать наличие

эндогенных медиаторов, опосредующих запуск экспрессии соответствующих генов

Если активация CYP1A2 может осуществляться как на транскрипционном, так и на посттранскрипционном уровне, то для CYP1A1 на данный момент доказан единственный путь активации путь сигнальной трансдукции, зависимый от арилгидрокарбонового рецептора (AhR)

AhR представляет собой лиганд-активируемый транскрипционный фактор В неактивном состоянии AhR находится в цитоплазме в комплексе с двумя молекулами Hsp90, кошаперонами и тирозинкиназой c-Src После связывания с лигандом происходит диссоциация комплекса, перенос AhR в ядро и димеризация с белком Amt (Ah receptor nuclear translocator, ядерный переносчик арилгидрокарбонового рецептора) Затем гетеродимер AhR/Arnt взаимодействует с элементами, чувствительными к ксенобиотикам (XRE) энхансера гена CYP1A1I2, что приводит к инициации транскрипции CYP1AJ/2

Hsp90 поддерживает AhR в конформации, облегчающей взаимодействие с лигандом, но препятствующей связыванию с ДНК Hsp90 относится к белкам теплового шока и выполняет функцию шаперона Известно, что Hsp90 растений могут активироваться и при воздействии холода (Krishna Р et al, 1995), но данных о влиянии холода на Hsp90 животных в литературе нет

AhR и Amt являются фосфопротеинами, поэтому процессы фосфорилирования и дефосфорилирования играют важную роль в Ah-рецепторном пути Известно, что для димеризации Amt с AhR необходимо фосфорилирование Amt, а для связывания комплекса AhR/Arnt с ДНК - фосфорилирование AhR и осуществляется оно по тирозиновому остатку (Ma Q, 2001) Ряд литературных источников свидетельствует о том, что ингибиторы тирозиновых киназ (ТК) семейства Src снижают экспрессию CYP1A, при этом аналогичные данные о действии на CYP1A неспецифических ингибиторов ТК противоречивы Имеющиеся в литературе сведения о влиянии на экспрессию CYP1A ингибиторов ТК получены при работе с клеточными культурами и не могут быть экстраполированы на животных Литературные данные свидетельствуют также о том, что киназы осуществляют постгрансляционную модификацию некоторых форм цитохромов Р450, например, CYP2B1/2 (Oesch-Bartlomowicz В, Oesch F , 2005), однако данных о роли ТК в фосфорилировании CYP1А в литературе нет

Известно, что интенсификация метаболизма в условиях холода приводит к возрастанию уровня окислительных процессов в клетке (Куликов В Ю и др , 1998, Шустанова Т А , и др , 2001, Бородин Е А и др, 1992, Sahm Е, Gumu$lu S, 2007) Это может приводить к

накоплению в клетке поврежденных белков и к активации протеосомной системы, осуществляющей их деградацию Протеосомная система также опосредует процесс деградации и негативной регуляции AhR Известно, что под действием "классических" индукторов CYP1A т vitro наблюдается усиление деградации AhR протеосомами, что обеспечивает отрицательную обратную связь, приводящую к уменьшению периода полужизни AhR и, следовательно, к ослаблению гиперэкспрессии СУР JA (Ma Q, Baldwin KT, 2000, Santiago-Josefat BE et al, 2001) Данных о том, происходит ли аналогичный процесс т vivo, в литературе нет Цель и задачи исследования

Цель данной работы состояла в исследовании механизма, лежащего в основе увеличения активностей цитохромов Р450 подсемейства 1А в печени крыс при воздействии на организм умеренного холода

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи

1 Определить относительное содержание мРНК и количество белка CYP1A в печени крыс при разной длительности пребывания животных при 4°С

2 Исследовать относительное содержание мРНК, функциональную активность и количество белка AhR в печени крыс при разной длительности пребывания животных при 4°С

3 Исследовать относительное содержание мРНК Arnt, AhRR и Hsp90 в печени крыс при разной длительности пребывания животных при 4°С

4 Исследование возможности участия эндогенных соединений в качестве посредников в процессе индукции CYP1A в печени крыс при разной длительности пребывания животных при 4°С

5 Исследовать возможную роль протеосом и тирозиновых протеинкиназ (используя в качестве инструмента исследования ингибиторы тирозиновых киназ) в активации CYP1A под действием холода

Научная новизна

Впервые установлены механизмы индукции CYP1A под действием холода индуцирующее влияние холода на CYP1A1 реализуется на транскрипционном уровне через AhR-зависимый путь сигнальной трансдукции, a CYP1A2 - на постгранскрипционном уровне Впервые выявлено, что при холодовом воздействии происходит снижение экспрессии таких компонентов AhR-сигнального пути, как Arnt и Hsp90 Показано, что эндогенным посредником в процессе регуляции экспрессии CYP1A1 под действием холода может быть токоферол Показано, что при этом происходит повышение относительного содержания мРНК токоферол-переносящего белка (а-ТПБ), осуществляющего перераспределение токоферола в организме Впервые показано

разнонаправленное изменение активностей протеосом в печени крыс под действием холода повышение химотрипсиновой и пептидилглутамин-пептидгидролазной протеосомных активностей и уменьшение трипсиновой протеосомной активности Впервые показана взаимосвязь ТКсемейства Src с уменьшением активности CYP1A1 в печени крыс, подвергнутых воздействию холода, на постгранскрипционном уровне ТК (но не семейства Src) связаны с увеличением активности CYP1A2 в печени крыс при воздействии на крыс умеренного холода (4°С) на посттранскрипционном уровне

Научно-практическая значимость

По своему содержанию работа носит преимущественно фундаментальный характер и представляет собой исследование молекулярного механизма индукции CYP1A в печени крыс под действием холода Полученные результаты имеют значение для понимания механизмов активации экспрессии генов CYP1A

Основные положения, выносимые на защиту

1 Воздействие на крыс умеренного холода приводит к увеличению в печени крыс активности CYP1A1 в результате активации транскрипции гена CYPIA1 с вовлечением Ah-рецептор зависимого пути сигнальной трансдукции, а также к увеличению активности CYP1А2, регулируемой на посттранскрипционном уровне

2 a-Токоферол может участвовать в индукции CYP1A1 в печени крыс под действием холода в качестве одного из эндогенных посредников

3 При воздействии на крыс умеренного холода происходит повышение химотрипсиновой и пептидилглутамин-пептидгидролазной протеосомных активностей, и понижение трипсиновой протеосомной активности

4 К факторам, негативно регулирующим активность CYP1A1 в печени крыс на фоне воздействия холодом, можно отнести ТК ТК семейства Src уменьшают активность CYP1A1 в печени крыс, подвергнутых воздействию холода, на постгранскрипционном уровне ТК (но не семейства Src) участвуют в увеличении активности CYP1A2 в печени крыс при воздействии на крыс умеренного холода на постгранскрипционном уровне Лимитирующими индукцию CYP1А холодом факторами являются Amt и Hsp90

Апробация работы Результаты работы были представлены на следующих конференциях 8-ая Международная Путинская школа-конференция молодых ученых "Биология - н аука XXI ве ка", Пущино, 2004, IX Дальневосточная молодежная школа-конференция по актуальным проблемам химии и биологии, Владивосток, 2005, XIII международная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых

"Ломоносов - 2006", Москва, 2006, девятая Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей "Человек и его здоровье", Санкт-Петербург, 2006, VI Всероссийская конференция молодых ученых "Проблемы фундаментальной и прикладной медицины" в рамках 13 международного конгресса по приполярной медицине, Новосибирск, 2006, международная научная конференция "Свободные радикалы, антиоксиданты и старение", Астрахань, 2006 Публикации

По теме диссертации опубликованы 3 статьи и 6 тезисов в сборниках конференций

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов, результатов, обсуждения, выводов и списка литературы Работа изложена на 136 страницах машинописного текста, содержит 20 р исунков и 17 таблиц Список литературы включает 298 источников, в том числе 275 иностранных

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на самцах крыс Вистар массой 150-250 грамм (лаборатория разведения животных Института цитологии и генетики СО РАН, г Новосибирск) Животные содержались в одиночных клетках и получали стандартную лабораторную диету и воду ad libitum Эксперименты проведены в соответствии с этическими нормами и рекомендациями по гуманизации работы с лабораторными животными, отраженными в "Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей" (Страсбург, 1985) Забой крыс осуществлялся декапитацией, проводился под эфирным наркозом

Для исследования холодового воздействия экспериментальные крысы содержались в одиночных клетках при +4°С в течение 1, 5 и 10 суток, контрольная группа содержалась в аналогичных клетках при комнатной температуре Ежедневно проводилось измерение ректальной температуры и массы тела животных

Для исследования воздействия ингибиторов ТК на фоне воздействия холодом все крысы содержались при температуре +4 С в течение 5 суток Экспериментальные крысы получали в течение 5 суток генистеин (5 мг/кг веса тела), гербимицин А (33 мкг/кг веса тела) или гелдамицин (50 мкг/кг веса тела) в растворе ДМСО внутрибрюшинно Контрольная группа получала только раствор ДМСО внутрибрюшинно

Для исследования воздействия ингибиторов ТК на фоне введения бенз(а)пирена (БП) все крысы получали разведенный в масле БП в дозе 5 мг/кг в течение первых 4 суток Экспериментальные крысы получали в

течение 5 суток генистеин (5 мг/кг веса тела), гербимицин А (33 мкг/кг веса тела) или гелдамицин (50 мкг/кг веса тела) в растворе ДМСО внутрибрюшинно Контрольная группа получала раствор ДМСО и масло внутрибрюшинно

Цитозольную фракцию и микросомы печени выделяли при температуре +4°С методом дифференциального центрифугирования Количество белка в микросомах и цитозоле определяли по методу Лоури с соавторами (Lowry OU et al, 1951), общее содержание цитохромов Р450 измеряли, как описано Омура и Сато (Omura Т, Sato R, 1964) Скорости О-деалкилирования высокоспецифичных субстратов для CYP1A1 и CYP1A2 - 7-этокси- (ЭРОД), и 7-метокси- (MP ОД) резоруфинов, соответственно, определяли в микросомах печени флюориметрическим методом по скорости образования резоруфина (Burke М D et al, 1985) Активность НАДФН-цитохром Р450 редуктазы в микросомах печени определяли по скорости восстановления цитохрома с (Phillips А Н , Langdon R G, 1962) Активность глутатион-Б-трансферазы в цитозоле определяли по скорости образования 2,4-динитрофенилглутатиона, используя в качестве акцептора глутатиона 1-хлор-2,4-динитробензол, а в качестве стандарта - S-2,4-динитрофенилглутатитон (Habig WH et al, 1974) Для детекции белков CYP1A (в микросомах печени) и AhR (в цитозоле печени) белки разделяли электрофорезом по Laemmli (Laemmli U К, 1970), переносили на нитроцеллюлозную мембрану полусухим способом в дискретной буферной системе на приборе Fastblot "Biometra" (Германия) Мембрану инкубировали с антителами мыши против CYP1A1 и CYP1A2 крысы (Gnshanova AY, Lyakhovich VV, 1992) для детекции CYP1A, а для детекции AhR - с антителами козы против AhR кр ысы (Santa Cr uz) и против ß-актина крысы (Santa Cruz) Для визуализации иммунореактивных белков использовали набор реактивов ExtrAvidin alkaline phosphatase staining kit (Sigma) На каждую дорожку геля наносили одинаковое суммарное количество белка.

Суммарную РНК клеток печени выделяли фенольным методом (Chattopadhyay N et al, 1993) или с помощью набора для выделения РНК фирмы Вектор-Бест Относительное содержание мРНК CYP1A1, CYP1A2, AhR, Amt, AhRR, Hsp90, a-TTP определяли методом полуколичественной ОТ-ПЦР Для синтеза кДНК т vitro брали по 400 нг РНК на пробу Амплификацию проводили с парами праймеров, специфичными к нуклеотидным последовальностям CYPIA1, CYP1A2, AhR, Amt, AhRR, Hsp90, a-TTP и генов "домашнего хозяйства" ß-актина, GAPDH и гр129, которые выступали в качестве внутреннего стандарта ПЦР оптимизировали по числу циклов, концентрации Mg2+, количеству праймеров Каждую пробу амплифицировали дважды Продукты ПЦР

анализировали электрофорезом в 6% акриламидном или в 2% агарозном геле Гель окрашивали бромистым этидием, сканировали с помощью видеосистемы "DNA Analyzer" (Москва) и денситометрировали с помощью программы "Total Lab" Уровень мРНК оценивали путем отношения оптической плотности продукта ОТ-ПЦР, полученного с использованием специфических праймеров к нуклеотидной последовательности гена, к оптической плотности продукта, полученного с использованием специфических праймеров к генам "домашнего хозяйства"

Экстракт ядер получали по методу Gorski (Gorski К et al, 1986) в модификации Меркуловой (Меркулова ТИ и др , 1998) Дня получения двуцепочечного зонда 26-нуклеотидные последовательности XRE3 (Denison MS, Deal RM, 1990) метили [у-Р32] в реакции кинирования (Маниатис Т и др, 1984) и гибридизовали ДНК/белковые комплексы анализировали методом задержки в 6% полиакриламидном геле (Denison М S , Deal R М , 1990)

Определение малонового диальдегида (МДА) проводили как описано Андреевой (Андреева Л И, 1988), содержание токоферолов в микросомах печени определяли флюориметрическим методом (Hansen LG, Warwick WJ, 1970), активности протеосом определяли флюориметрическим методом (Selman С, Gruñe Т , 2002), количество карбонильных групп было определено спектрофотометрическим методом в реакции с 2,4-динитрофенилгидразином (Reznick A Z , Packer L , 1994), содержание общего и конъюгированного билирубина в сыворотке крови крыс определяли набором фирмы Вектор-Бест, содержание кортикостерона в сыворотке крови крыс - радиоиммунным анализом

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программы Statistica, версия 6 0 Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента и подтверждали U-тестом Мана-Уитни Результаты представлены в виде М ± SD или SE, где М - среднее, SD - среднее квадратичное отклонение, SE - стандартная ошибка Число животных в группе 3-21

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Характеристика метаболических процессов у крыс при длительном воздействии умеренно низкой температуры (модель Харта) У крыс были определены некоторые параметры физиологических и обменных процессов, которые, как было показано ранее, меняются при длительном воздействии умеренно низкой температуры (Hart J S, 1956, Hart J S, 1963) Такими показателями, в частности, являются изменение массы тела и снижение способности организма поддерживать температуру ядра тела

Среднесуточная прибавка массы тела крыс, г

т т

- *

2 J О суток 5 суток 10 суток

Рисунок 1. Динамика изменения среднесуточной прибавки массы тела контрольных и подвергавшихся воздействию холодом крыс Приведены средние значения ± БЕ *-р <0,005 □ - контроль а - холод

Результаты измерения массы контрольных и экспериментальных крыс представлены на рисунке 1 Среднесуточная прибавка массы тела крыс снижалась к 5 суткам пребывания на холоде и восстанавливалась до контрольного уровня к 10 суткам Такие изменения прибавки массы тела крыс, подвергаемых воздействию холода, согласуются с данными литературы (Hart J S, 1956, Hart J S, 1963)

Результаты измерения температуры ядра тела контрольных и экспериментальных крыс представлены на рисунке 2 Наблюдалось достоверное снижение температуры ядра тела крыс на 1,1 °С к 10 суткам холодового воздействия, что согласуется с данными литературы (Hart J S, 1956, Hart J S, 1963)

Температура ядра тела крыс, °С

Рисунок 2 Динамика изменения температуры ядра тела крыс, подвергавшихся воздействию

холодом Приведены средние значения±SD *-р<0,005

Известно, что интенсификация метаболизма в условиях холода приводит к возрастанию уровня окислительных процессов в клетке Было исследовано содержание карбонильных групп, которое является показателем интенсивности процессов свободнорадикального окисления белков, и содержание малонового диальдегида, являющееся показателем интенсивности процессов перекисного окисления липидов Данные об этих показателях, представленные на рисунке 3, показывают, что содержание карбонильных групп через 10 суток воздействия холодом достоверно возрастало в 2,4 раза по сравнению с контролем Статистически достоверных различий в содержании МДА в микросомах печени крыс не выявлено, хотя наблюдалась тенденция к увеличению МДА на 1 сутки воздействия холодом и снижению ниже контрольного уровня к 10 суткам

Полученные результаты о содержании карбонильных групп соответствуют данным Selman с соавторами (Selman С et al, 2002),

ОЭ "1

38 37 -36 -35 34

контроль 5 суток 10 суток

которые выявили нарастание содержания окисленных белков в печени мышей-полевок во время их пребывания на холоде в течение времени от 10 часов до 4,5 суток при температуре от 4° до 10°С Увеличение уровня карбонильных групп у мышей-полевок через 4,5 суток сопоставимо с тем, которое мы наблюдаем у крыс на 5 сутки воздействия холодом - около 40%

Карбонильные группы, 4 _ нмоль/мг белка

гН

_Е±3_

.¿г

120 80 40 i 0

МДА, нмоль/мг белка

* А

Ä.

/ V J

Рисунок 3 Содержание карбонильных групп белков в цитозоле печени крыс и содержание МДА в микросомах печени крыс, подвергавшихся холодовому воздействию Приведены средние значения ± ЭБ * - р < 0,05

Данные о содержании МДА соответствуют полученным ранее в модели Харта данным, свидетельствующим о том, что содержание МДА в микросомах печени крыс не возрастает (Колосова Н Г и др , 1981)

Было определено общее содержание токоферолов в микросомах печени крыс, подвергнутых действию холода Данные, приведенные в на рисунке 4, показывают, что уровень токоферолов на 1 сутки воздействия холодом не изменялся, но возрастал на 5 и 10 сутки пребывания животных на холоде, причем повышение уровня токоферола происходило несмотря на то, что дополнительно токоферол, кроме содержащегося в их обычном рационе, крысы не получали Это свидетельствует о мобилизации эндогенных запасов токоферола и/или усиленного его усвоения из пищи под действием холода

Токоферол, мкг/мг белка

0,2 1

0,1

контроль 5 суток 10 суток

Рисунок 4 Количество токоферола в микросомах печени крыс, подвергнутых воздействию холода Приведены средние значения ± ББ * - р < 0,05

Известно, что в перераспределении токоферола между тканями принимают участие глюкокортикоиды (Feingold IB, 1999) Мы определили содержание кортикостерона в плазме крови крыс, пребывающих на холоде Результаты измерений, представленные на

рисунке 5, показывают, что в сравнении с контрольной группой уровень кортикостерона достоверно увеличивался в 2,1 раза на 5 сутки и в 3 раза на 10 сутки воздействия холода Наблюдаемое увеличение уровня кортикостерона в плазме крови крыс под действием холода согласуется с данными литературы (Hart J S, 1963, Dronjak S et al, 2004)

Таким образом, показатели исследованных параметров физиологических и обменных процессов свидетельствуют, что условия содержания экспериментальных животных соответствуют условиям классической модели адаптации организма к длительному воздействию умеренно низкой температуры

Характеристика микросомальной монооксигеназной системы (ММС)

Для характеристики ММС печени контрольных и подвергаемых воздействию холода крыс было исследовано общее количество цитохромов Р450, специфические активности СУР1А1 и СУР1А2, активности НАДФН-цитохром Р450 редуктазы и глутатион-Б-трансферазы Результаты представлены на рисунке 6

Общее содержание цитохромов Р450 при воздействии холодом не изменялось Активность НАДФН-цитохром Р450 редуктазы повышалась по сравнению с контрольным уровнем при действии холода в течение 5 суток в 1,8 раза Достоверных различий между значениями активности фермента у контрольных животных и крыс, подвергаемых действию холода в течение 1 и 10 суток, выявлено не было Активность глутатион-Б-трансферазы снижалась в 1,8 раза при воздействии холодом в течение 1 суток по сравнению с контрольным уровнем, между значениями активности фермента в контрольной и подвергаемых действию холода в течение 1 и 10 суток группах животных достоверных различий выявлено не было

Активности СУР1А1 и СУР1А2 снижались на 1 сутки воздействия холодом в 2,2 и 1,7 раза соответственно Так как целью нашего исследования было изучение процессов, активирующих, а не ингибирующих индукцию СУР1А, то в дальнейшем процессы, происходящие в организме на 1 сутки воздействия холодом, не исследовались

Кортикостерон, мкг/мл

0,4 1

Рисунок 5. Содержание

кортикостерона в сыворотке

контрольных и экспериментальных крыс Приведены средние значения ±

* р — < 0,05, **- р< 0,005

печени крыс при холодовом воздействии

При действии холода в течение 5 и 10 суток активности СУР1А повышались: активность СУР1А1 - в 2,2 и 2,8 раза при 5- и 10-суточном воздействии холодом соответственно, а активность СУР1А2 - в 2,9 и 3,2 раза при 5- и 10-суточном воздействии холодом соответственно.

0,5 0

Общее содержание цитохромов Р450 1 нмоль/мгбелка

Ь гЪ г£

гЬ

60 -j

20 -

0 -I

Контроль 1 сутки 5 суток 10 суток

Активность НАДФН-цитохром Р-450 редуктазы, нмоль/мин на мг белка ^

г£п

600 400 200 0

Актив ность глу татион-З-трансферазы, нмоль/мин на мг белка

Контроль 1 сутки 5 суток 10 суток

-ь

Контроль

сутки 5 суток 10 суток

600

400

200

Активность цитохрома Р-450 1А1, пмоль/мин на мг белка

-ь

150

S00

150

Активность цитохрома Р-450 1А2, пмоль/мин на мг белка

— 0

Контроль 1 сутки 5 суток 10 суток Контроль 1 сутки 5 суток 10 суток

Рисунок 6. Характеристика системы биотрансформации ксенобиотиков печени контрольных и подвергавшихся действию холода крыс. Приведены средние значения ± SD. * - р < 0,05, ** - р < 0,005, *** - р < 0,001. **** - р < 0,0001. Для активности ЭРОД и МРОД п=21,9,21,14; для содержания цитохромов п=19,9,13,13; для активности НАДФН-цитохром Р450 редуктазы, глутагион-S-трансферазы п=9,9,7,6 для контрольной группы, групп, подвергавшихся воздействию холодом в течение 1.5,10 суток соответственно.

Исследование уровней мРНК CYP1A1 и CYP1A2 и апоферментов CYP1A1 и CYP1A2 в печени крыс при холодовом воздействии

Для того чтобы определить механизм повышения активностей CYP1A1 и CYP1A2, наблюдаемых на 5 и 10 сутки воздействия холодом, мы исследовали на этих сроках относительное содержание мРНК CYP1A и уровень апоферментов соответствующих генов в печени крыс.

Уровень мРНК CYP1A был рассчитан как отношение оптической плотности продукта ОТ-ПЦР, полученного с использованием специфических праймеров к последовательностям генов CYP1A к оптической плотности продукта, полученного с использованием специфического праймера к последовательности Р-актина. Полученные данные представлены на рисунке 7.

Действие холода сопровождалось увеличением относительного содержания мРНК CYP1A1 в печени крыс, подвергавшихся воздействию холодом в течение 5 и 10 суток, в 37 и в 26 раз соответственно, по сравнению с контрольной группой. Относительное содержание мРНК CYP1A2 достоверно снижалось по сравнению с содержанием в контрольной группе на 5 сутки воздействия холодом в 1,4 раза и к 10 суткам воздействия холодом - в 1,5 раза. Таким образом, действие холода на организм вызывает в печени крыс накопление мРНК, кодирующей CYPJAJ и снижение уровня мРНК, кодирующей CYP1A2.

Белок CYP1A1 и CYP1A2 детектировали методом иммуноблот анализа в микросомах печени крыс с использованием моноклональных антител против CYP1A1/1A2 (клон 14Н5, Grishanova A.Y., Lyakhovich V.V., 1992). В качестве положительного контроля использовали микросомы печени крыс, индуцированных 3-метилхолантреном. Полученные данные представлены на рисунке 8.

мРНК CYP1А1/ мРНК Ь-актана

2,5 2 1,5 1

0,5 -О

мРНК CYP1A2/ мРНК Ь-актина

пЕ-

Контроль 5 суток 10 суток

Рисунок 7. Относительное содержание мРНК генов CYP1A1 и СУР1А2 в печени крыс, подвергавшихся воздействию холода. Приведены средние значения ± ЗБ. * -р< 0,005, **-р< 0,001.

Для полуколичественного анализа апоферментов электрофоретическому разделению подвергали по 100 мкг микросомного белка из печени контрольных и подвергавшихся холодовому воздействию крыс. СУР1А1 обнаруживался в микросомах печени крыс, подвергавшихся действию холода в течение 5 и 10 суток, и содержание его увеличивалось во времени. В контрольной группе и в группе животных, находившихся под действием холода в течение 1 суток, апофермент СУР1А1 обнаружен не был. СУР1А2 был зарегистрирован в микросомах печени крыс как контрольной, так и экспериментальных

групп, причем длительность воздействия холодом влияет на интенсивность полосы, соответствующей СУР1А2, увеличивая ее.

CYP1A1

CYP1A2

Холод

1 сутки 5 суток 10 суток

Рисунок 8. Иммуноблот микросомных белков печени крыс с использованием моноклональных антител против CYP1A1/1A2 (клон 14Н5, Grishanova AY., Lyakhovich V.V., 1992).

Дорожки: 1 - микросомы печени контрольных животных; 2-4 - микросомы печени крыс после холодового воздействия; 5 - микросомы печени крыс, индуцированных 3-метилхолантреном. На дорожки 1-4 было нанесено по 100 мкг микросомного белка, на дорожку 5-30 мкг микросомного белка

Таким образом, действие на организм холода приводит к появлению апофермента CYP1A1 и к увеличению содержания апофермента CYP1A2 в печени крыс.

В настоящее время единственным доказанным механизмом индукции CYP1A1 является AhR-зависимый путь сигнальной трансдукции (Ma Q., 2001). Индукция CYP1A2 по данным ряда исследователей возможна как с участием AhR, так и может быть опосредована другими факторами (Adams N.H., 1993; Quattrochi L.C. et al., 1994; Ryu D.Y. et al., 1997). Полученные нами данные об изменении относительного содержания мРНК CYP1A1 и CYP1A2 и апоферментов, кодируемых соответствующими генами, позволяют заключить, что индукция CYP1A1 в печени крыс под действием холода происходит в результате транскрипционной активации гена, а индукция CYP1A2 опосредуется посттранскрипционными механизмами.

Исследование активности протеосом при действии холода

Активация транскрипции гена CYP1A1 происходит с участием лиганд-активируемого транскрипционного фактора - AhR. Ускорение или замедление деградации белка AhR может быть одним из факторов, обеспечивающих регуляцию экспрессии CYP1A1. Показано, что на индукцию CYP1A1 "классическими" лигандами AhR влияют протеосомы (Ma Q., Baldwin К.Т 2000). Для выяснения возможного участия протеосом в регуляции экспрессии С YP1A1 в печени крыс под действием холода были исследованы активности 20S протеосом (пептидилглутамин-пептидгидролазная, трипсиновая и химотрипсиновая) в цитозоле печени крыс, подвергавшихся холодовому воздействию.

Из результатов, представленных на рисунке 9, видно, что протеосомные активности по-разному изменяются на фоне воздействия холодом. Так, пептидилглутамин-пептидгидролазная активность достоверно возрастала в 2 раза, а трипсиновая активность достоверно снижалась на 10-е сутки воздействия холодом по сравнению с контрольной группой. Химотрипсиновая активность увеличивалась в 3,4 раза как на 5-е, так и на 10-е сутки воздействия холодом.

пептццилглутаминовая протеосомная активность

трипсиновая протеосомная активность

химотрипсиновая протеосомная активность

60 40 20

60 40

16 12

|Ь

lil

Jä

Рисунок 9. Протеосомные активности в цитозоле крыс, подвергавшихся холодовому воздействию. Приведены средние значения ± SD. * -р < 0,01; **-р < 0,0005.

Таким образом, при воздействии холодом на крыс две протеосомные активности в печени увеличивались и одна - снижалась. Такие данные о разнонаправленном изменении активности 20S протеосом не дают возможности однозначно говорить о влиянии протеосом на уровень белка AhR в печени крыс при их длительном пребывании на холоде.

Исследование влияния холода на экспрессию основных компонентов AhR-сигнального пути

Для более полного понимания молекулярных механизмов индукции CYP1A1 в печени крыс под действием холода было исследовано влияние длительного пребывания крыс на холоде на экспрессию основных компонентов AhR-сигнального пути трансдукции: Hsp90, Amt, penpeccopa AhR (AhRR) и на экспрессию AhR.

Данные, представленные на рисунке 10(А), показывают, что под действием холода относительное содержание мРНК Hsp90 уменьшалось на 5 и 10 сутки воздействия холодом в 1,7 и 1,8 раза соответственно.

Данные об относительном содержании мРНК AhR на разных сроках воздействия холодом, представленные на рисунке Ю(Б), показывают, что относительное содержание мРНК AhR в печени крыс под действием холода не изменяется.

мРНК Hsp90 /мРНК 1,2 GAPDH

0,8 0,4

А /

dn * "

Ш Л -й,

мРНК AhR/мРНК GAPDH

0,8 О,

/ //

Рисунок 10. Относительное содержание мРНК Н$р90 (А) и мРНК АНЯ (Б) в печени крыс, подвергавшихся холодовому воздействию. Приведены средние значения ± ЭО. * - р < 0,05. **-р <0.005.

Результаты иммуноблот анализа белка АЬЯ в цитозоле печени крыс, представленные на рисунке 11 (А и Б), показывают, что количество АЫ1 в цитозоле под действием холода не изменяется

Рисунок 11. (А) - Иммуноблот

AhR

ß-актин

s 6

mmfß

СП. 2 2

5 0

ife

цитозольных белков печени крыс с использованием антител против AhR и ß-актина. Дорожки 1 -цитозоль печени контрольных животных; 2 - экстракт ядер печени крыс после воздействия холодом в течение 5 суток; 3 - экстракт ядер печени крыс после воздействия холодом в течение 10 суток. На ' 2 3 дорожки было нанесено по 100-150

мкг цитозольного белка. (Б) - Количество AhR было рассчитано как отношение оптической плотности продукта, полученного с использованием антител против AhR к оптической плотности продукта, полученного с использованием антител против ß-актина.

Результаты исследования относительного содержания мРНК Amt и AhRR представлены на рисунке 12 (А и Б).

мРНК Arnt/мРНК р-2 актина

Н-1 .

1,5 1

0,5 О

мРНК AhRR/мРНК ß-О з актина

<Г

сГ

0.2 0,1 О -0,1

а 4

£3

4-°

У ъ*

йГ

Рисунок 12. Относительное содержание мРНК Агп/ (А) и мРНК АИЯЯ (Б) в печени крыс, подвергавшихся холодовому воздействию. Приведены средние значения ± БО. *-р< 0,05; **-р <0,005.

Данные, представленные на рисунке 12 (А), показывают, что и на 5 и на 10 сутки воздействия холодом в печени крыс происходит уменьшение относительного содержания мРНК Amt в 1,2 и 1,8 раза соответственно Данные, представленные на рисунке 12(Б), показывают, что под действием холода относительное содержание мРНК AhRR в печени крыс не изменяется

Таким образом, холодовое воздействие на крыс не влияет на экспрессию в их печени ключевого транскрипционного фактора - AhR, регулирующего транскрипцию CYP1A1, а также на экспрессию AhRR Однако экспрессия в печени двух других компонентов AhR-зависимого сигнального пути - Hsp90 и Amt, при холодовом воздействии на крыс ингибируется

Исследование влияния ингибиторов тирозинкиназ (ТК) на активность CYP1A на фоне холодового воздействия AhR и Amt являются фосфопротеинами Фосфорилирование AhR необходимо для связывания комплекса AhR/Arnt с ДНК, а фосфорилирование Amt - для димеризации с AhR (Ma Q, 2001) Фосфорилирование AhR осуществляется по тирозиновому остатку при участии ТК, в частности, в процессе индукции CYP1A1 омепразолом (Lemaire G et а], 2004) Показано, что в функционировании сигнального пути AhR принимает участие ТК c-Src (Park S , Henry ЕС et al, 2000) c-Src протеинкиназа является интегральным компонентом комплекса AhR-hsp90 в цитозоле, и при связывании лиганда с AhR c-Src активируется и освобождается из комплекса (Enan Е , Matsumura F , 1996)

Для изучения роли ТК в индукции CYP1A под действием холода, исследовали влияние на активность CYP1A и мРНК CYP1A ингибиторов ТК - неспецифического конкурентного ингибитора ТК генистеина и ингибиторов ТК семейства Src гербимицина А и гелданамицина, которые одновременно являются ингибиторами Hsp90 Результаты представлены на рисунке 13

Генистеин не изменял активность CYP1A1, индуцированную холодом, однако вызывал повышение уровня мРНК CYP1A1 в 1,7 раза Активность CYP1A2 под действием генистеина снижалась в 1,7 раза, а уровень мРНК CYP1A2 не изменялся

Активность CYP1A1 под действием гербимицина А и гелданамицина на фоне воздействия холодом возрастала в 1,6 и 3,1 раза соответственно, в то время как уровень мРНК CYP1A1 при этом не изменялся

На активность CYP1A2 и на уровень мРНК CYP1A2 в печени крыс, находящихся на холоде, ни гербимицин А, ни гелданамицин не влияли

СУР 1А1

СУР 1А2

600 400 200 О

100 124

310

163

^ ¿Г «/

<0<

о1

¿У /

¡5 150

§ 100 ш

1 50 < о

100

гГ

^ / /

Холод 5 суток СУР 1А1

х 300 | 200 100 0

100

172

-Е-

105

□ й

Л* А«* л^ ^

¿Р «/ /

0 X

о. ^ 5 X О.

X о л о

го X 300

го 200 -

¡5 100

СУР 1А2

100

128

114

—Эг

123

у / у /

Холод 5 суток Холод 5 суток

Рисунок 13. Активность и относительное содержание мРНК СУРЫ при введении генистеина, гербимицина и гелданамицина на фоне 5 суток воздействия холодом. Результаты выражены в процентах по отношению к контрольному уровню. Контрольная группа - крысы, подвергшиеся холодовому воздействию в течение 5 суток и получавшие ДМСО. Приведены средние значения ± ЭБ. * - р < 0,05.

На фоне введения БП - "классического" индуктора СУР1А, ингибиторы ТК, в отличие от их действия на фоне холода, не влияли ни на активность СУР1А, ни на относительное содержание мРНК СУР1А. Результаты представлены на рис. 14.

СУР 1А1

СУР 1А2

£ <

200 150 -100 50 0

100

150

гЬ

уО ^ оЛ*

* у /

^ У /

<ч ^ <<Г

200 -150 -] 100 1 50 -0^

100

122

.С?

СУР 1А1

2 I

О. (0

х ю

150 -100 50 О

100

У / У ^ У

Рисунок 14. Активность и относительное содержание мРНК СУР1А при введении генистеина, гербимицина А и гелданамицина в течение 5 суток на фоне введения БП в дозе 5 мг/кг. Результаты выражены в процентах по отношению к контрольному уровню. Контрольная группа получала ДМСО и масло. Приведены средние значения ± 80.

Исследование влияния холода на ДНК-связывакнцую способность АЬИ в печени крыс

Для доказательства АЫ1-зависимого механизма индукции СУР1А1 в печени крыс под действием холода была исследована функциональная активность АЬЯ. Появление ДНК-связывающей формы АЬЯ в печени крыс выявляли с помощью метода гель-ретардации. На рисунке 15(А) представлен радиоавтограф электрофоретического распределения в 6 % ПААГ 32Р-меченого ХЯЕЗ, инкубированного с экстрактами белков ядер клеток печени контрольных и подвергнутых действию холода в течение 5 либо 10 суток крыс. В качестве положительного контроля использовали экстракты ядер клеток печени крыс, получавших классический индуктор СУР1А - БП.

Интенсивность засветки полосы, соответствующей ДНК-белковому комплексу, образованному активной формой димера АЬЯ/АпП

и 32Р-меченным ХЯЕЗ, увеличивалась у крыс, подвергнутых воздействию холода в течение 5 и 10 суток.

Для доказательства специфичности комплексов, образованных 32Р-меченным ХЯЕЗ и белками ядерных экстрактов, проводили их истощение немеченными олигонуклеотидами: ХЛЕЗ.

Полученные данные, представленные на рисунке 15 (Б), свидетельствуют о специфичности исследуемых комплексов, так как они ослабляются или исчезают при добавлении ХЯЕЗ.

,2Р-ХЯЕЗ + + + + +

32Р-ЖЕЗ К К Холод 5с БП Холод Юс ЕП + + + + +

ХЛЕЗ - х20 х50 х75 х100

Рисунок 15. А - Радиоавтограф электрофореграммы, полученный после электрофореза в 6% ПААГ 32Р-меченного ХЯЕЗ, инкубированного с белками ядер клеток печени крыс контрольных (К), подвергнутых холодовому воздействию и получавших бензо(а)пирен (БП). 32Р-меченный Х11ЕЗ присутствует во всех дорожках.

Дорожки: 1 - 32Р-меченный ЖЕЗ, 2,3 - печень контрольных крыс; 4-6 - печень крыс после воздействия холодом в течение 5 суток, 7 - печень крыс, индуцированных БП, 8-10 - печень крыс после воздействия холодом в течение 10 суток. Б - Радиограф электрофоретического разделения в 6% ПААГ 32 Р-меченного ХНЕЗ, инкубированного с белками ядер клеток печени крыс, индуцированных БП. 32Р-меченный Х11ЕЗ присутствует во всех дорожках. Числами указан избыток немеченного олигонуклеотида.

Таким образом, полученные данные позволяют сделать вывод о том, что транскрипционная индукция СУР1А1 опосредуется через АЬ-рецепторный путь сигнальной трансдукции.

Исследование содержания токоферола в печени и билирубина

в сыворотке крови крыс под действием холода Исследование того, какие эндогенные вещества могут опосредовать процесс индукции СУР1А1, возможно, в качестве лигандов АЬЯ, проводилось на основе ранее полученных данных о том, что а-токоферол (Сидорова Ю А , 2005) и билирубин (Гришанова А Ю , Зуева Т В, 2000) способны осуществлять транскрипционную активацию С¥Р1А1 В печени контрольных и экспериментальных животных было измерено содержание билирубина в сыворотке крови, и токоферола в микросомах печени Результаты представлены на рисунке 16 (А, Б)

0,2 -1

0,1 -

Токоферол, мкг/мг белка

Билирубин, мкмоль/л

15 1 10 -5 О

контроль 5 суток 10 суток

Контроль 5 суток 10 суток

Рисунок 16 Количество токоферола в микросомах печени и билирубина в сыворотке крови крыс, подвергнутых воздействию холода Приведены средние значения ± ББ * - р < 0,05, ** - р < 0,01

Из рисунка 16 видно, что содержание билирубина через 5 суток достоверно не изменялось и увеличивалось только на 10 сутки воздействия холодом в 1,7 раза Уровень токоферола возрастал на 5 и 10 сутки эксперимента в 6 и 15 раз, соответственно

с; <а ю

0,22

0,14

с о

о.

-е-

0,06

-0,02

0 200 400 600 800

ЭРОД, пкмоль/мин на мг белка

Рисунок 17. Корреляция между между содержанием токоферола и активностью СУР1А1 в микросомах печени крыс Коффициент корреляции для токоферола и ЭРОД составил г = 0,63, р <0,05

На рисунке 17 представлены результаты корреляционного анализа между содержанием токоферола и активностью СУР1А1, который показывает, что между исследуемыми параметрами существует корреляция (г = 0,63, р<0,05)

Транспорт а-токоферола происходит с участием недавно обнаруженных токоферол-ассоциированных белков, к которым относится а-ТПБ Была исследована экспрессия а-ТПБ в печени контрольных и экспериментальных крыс Результаты представлены на рисунке 18

мРНК а-ТТБ/ мРНК гр129 0,8 п

0,4 О

йл

гЬ

1+1

Г*1

^ <ь \ <Ь чО

Рисунок 18 Относительное содержание мРНК а-ТПБ в печени крыс, подвергавшихся холодовому воздействию

Приведены средние значения ± ББ * - р < 0,00005

Относительное содержание мРНК а-ТПБ в печени крыс, подвергавшихся холодовому воздействию в течение 5 суток, возрастало в 1,4 раза При других сроках холодового воздействия достоверных различий выявлено не было Возрастание относительного содержания мРНК а-ТПБ в печени на 5 сутки действия холода может объясняться тем, что в этот период времени происходит интенсивное перераспределение токоферола в организме, для обеспечения которого необходимо повышение количества токоферол-транспортных белков Снижение экспрессии а-ТПБ к 10 суткам холодового воздействия говорит о том, что произошло достаточное накопление токоферола в клетке, чтобы запустились механизмы обратной связи, уменьшающие экспрессию а-ТПБ

Не ясно, является ли повышение активности СУР1А "побочным" явлением при адаптации организма к холоду, или оно выполняет какую-то физиологическую функцию Миллионы лет назад ксенобиотиков типа ПАУ не существовало, и небольшое увеличение активности цитохромов Р450 могло значимо не сказываться на состоянии организма в такой ситуации, когда ему более важно приспособиться к охлаждению Тогда можно было бы сделать вывод о том, что ответ организма на длительное воздействие умеренного холода не представляет собой набор только адаптивных физиологических и биохимических реакций, целью которых является приспособление к неблагоприятному фактору окружающей среды Так как все процессы в организме тесно связаны между собой, в том числе на уровне молекулярных механизмов регуляции, неудивительно, что при воздействии холода может происходить и множество процессов, не имеющих прямого отношения к адаптивным реакциям на охлаждение

Физиологический смысл повышения активности СУР1А при длительном воздействии умеренного холода, возможно, существует, но пока трудно найти объяснение этому явлению В литературе появляется все больше информации об эндогенных индукторах СУР1 А, однако, физиологическая роль такой индукции СУР1А пока не ясна Можно предположить, что такие соединения важны для адаптации к холоду сердечно-сосудистой системы, так как известно, что СУР1А метаболизируют арахидоновую кислоту до веществ, играющих важную роль в регуляции сердечно-сосудистой системы

В данной работе мы исследовали не следствия увеличения активности цитохромов 1А под действием холода, а его причину и молекулярный механизм

Результаты проведенного нами исследования подтвердили данные о том, что воздействие холодом приводит к активации цитохромов СУР1А, и прояснили механизм их активации Оказалось, что СУР1А1 под действием холода активируется на транскрипционном уровне с участием АИЯ-зависимого пути сигнальной трансдукции, а СУР1А2 - на посттранскрипционном уровне Подтвердилось предположение о том, что роль эндогенных посредников в процессе индукции СУР1А1 могут играть токоферол и билирубин Выяснилось, что лимитирующими факторами, обеспечивающими невысокую степень индукции СУР1А1 под действием холода, могут быть тирозиновые киназы и компоненты АЬЯ-зависимого пути сигнальной трансдукции

Таким образом, представленные результаты важны как для понимания механизмов активации экспрессии генов СУР1А, так и для понимания молекулярных процессов, происходящих в организме при действии умеренного холода

ВЫВОДЫ

1 Воздействие умеренного холода (4°С) приводит к увеличению в печени крыс активности СУР1А1 через 5 и 10 суток в результате активации транскрипции гена СУР1А1 с вовлечением АЬ-рецептор зависимого пути сигнальной трансдукции

2 При воздействии на крыс умеренного холода (4°С) в течение 5 и 10 суток в печени животных относительное содержание мРНК компонентов АЫ1-сигнального пути, таких как АИР и репрессор АИЛ (АИЯК), не изменяется, а ядерного переносчика АЫ1 (Аш) и Нвр90 уменьшается

3 Воздействие на крыс умеренного холода (4°С) в течение 5 и 10 суток приводит к увеличению в печени животных активности СУР1А2, которое регулируется на посттранскрипционном уровне

4 Корреляционный анализ взаимосвязи между содержанием токоферолов и активностью СУР1А1 в совокупности с данными об увеличении экспрессии а-ТПБ позволяет предполагать участие а-токоферола в регуляции активности СУР1А1

5 При воздействии на крыс умеренного холода (4°С) происходит повышение химотрипсиновой и пептидилглутамин-пептидгидролазной протеосомных активностей и уменьшение трипсиновой протеосомной активности

6 Данные об изменении активности СУР1А и относительного содержания мРНК СУРЫ при одновременном действии холода (4°С) и ингибиторов тирозиновых киназ свидетельствуют о том, что тирозиновые протеинкиназы семейства Бгс участвуют в уменьшении активности СУР1А1 в печени крыс, подвергнутых воздействию холода, на посттранскрипционном уровне Тирозиновые протеинкиназы (но не семейства Бгс) участвуют в увеличении активности СУР1А2 в печени крыс при воздействии на крыс умеренного холода (4°С) на постгранскрипционном уровне

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Громова О А , Гришанова А Ю , Перепечаева М Л , Колосова Н Г, Колпаков А Р Влияние длительного холодового воздействия на активность цитохром Р450 содержащих монооксигеназ и глутатион-Б-трансферазы в микросомах печени крыс // Бюлл Эксп Биол и Мед -2004 -Т 137 -N9 - С 268-271

2 Перепечаева М Л, Сидорова Ю А, Гришанова А Ю Влияние холодового стресса на экспрессию генов ЛЬЯ-зависимого пути регуляции СУР 1 в печени крыс//Бюлл Эксп Биол Мед -2006 -Т 141 -N3 - С 287-291

3 Перепечаева М Л, Колосова Н Г , Гришанова А Ю Активности 20Б протеосом и уровень окисленных белков в печени крыс при длительном воздействии холода // Бюлл Эксп Биол и Мед - 2006 -Т 142 -N2 - С 182-185

4 Перепечаева М Л, Сидорова Ю А , Колосова Н Г , Гришанова А Ю. Индукция цитохромов Р450 1А1 и 1А2 печени крыс при холодовом стрессе // 8-я международная Пущинская школа-конференция молодых ученых "Биология - наука 21 века", Пущино -2004 -С 64

5 Перепечаева М Л , Сидорова Ю А , Гришанова А Ю Исследование взаимосвязи между активностями 208 протеосомы и индукцией цитохрома Р450 1А1 на фоне воздействия холодом // IX Дальневосточная школа-конф по актуальным проблемам химии и биологии, Владивосток - 2005 - С 44

6 Перепечаева М Л Токоферол как возможный эндогенный посредник в активации цитохрома Р450 1А1 под действием холода // XIII международная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов - 2006", Москва -2006 -С 178

7 Перепечаева МЛ Токоферол-транспортный белок как возможный маркер стресса // Девятая Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей "Человек и его здоровье", Санкт-Петербург - 2006 - С 257-258

8 Перепечаева М Л Содержание окисленных белков и активности 20S протеосом в печени крыс при длительном воздействии холода // VI Всероссийская конференция молодых ученых "Проблемы фундаментальной и прикладной медицины" в рамках 13 международного конгресса по приполярной медицине, Новосибирск -2006 -С 44

9 Колосова Н Г , Гришанова А Ю Перепечаева М Л , Колпаков АР а-Токоферол в адаптивных реакциях на холод // Международная научная конференция "Свободные радикалы, антиоксиданты и старение", Астрахань - 2006 - С 76-77

Список используемых сокращений

AhR - арилгидрокарбоновый рецептор

AhRR - репрессор арилгидрокарбонового рецептора

Amt - ядерный переносчик арилгидрокарбонового рецептора

CYP - цитохром Р450

XRE - элемент, чувствительный к ксенобиотикам

а-ТПБ - а-токоферол-переносящий белок

БП - бенз(а)пирен

ДМСО - диметилсульфоксид

МДА - малоновый диальдегид

ММ С - микросомальная монооксигеназная система

мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота

МРОД - метоксирезоруфин-О-деметилазная активность

ОТ-ПЦР - обратно-транскриптазная полимеразно-цепная реакция

ПАУ - полициклические ароматические углевовороды

ТК тирозиновая киназа

ЭРОД - этоксирезоруфин-О-деэтилазная активность

Соискатель Перепечаева М Л

Подписано к печати 02 июля 2008г Тираж 100 экз Заказ № 731 Отпечатано "Документ-Сервис", 630090, Новосибирск, Институтская 4/1, тел 335-66-00

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Перепечаева, Мария Леонидовна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Система биотрансформации ксенобиотиков.

1.1.1. Общая характеристика системы биотрансформации ксенобиотиков.

1.1.2. Суперсемейство цитохромов Р

1.1.3. Подсемейство цитохромов Р450 1А.

1.2. Арилгидрокарбоновый рецептор.

1.2.1 Суперсемейство генов ядерных рецепторов.

1.2.2. Структура, функция и сигнальный путь AhR.

1.2.3. Регуляция сигнального пути арилгидрокарбонового рецептора.

1.2.4. Роль протеинкиназ в регуляции сигнального пути арилгидрокарбонового рецептора.

1.2.5. Роль протеосом в процессе деградации AhR.

1.3. Индукция CYP1A без участия "классических" лигандов AhR.

1.3.1. Эндогенные индукторы и модуляторы CYP1A1.

1.3.2. Билирубин.

1.3.3. Витамин Е (а-токоферол).

1.3.4. Кортикостерон.

1.4. Биологические эффекты холодового фактора.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Реактивы.

2.2. Животные.

2.3. Методы исследования.

2.3.1. Выделение микросом и цитозолей печени крыс.

2.3.2. Определение количества белка в микросомах и цитозолях.

2.3.3. Определение количества цитохромов Ь5 и Р450 в микросомах печени крыс.

2.3.4. Определение активности НАДФН-цитохром Р450 редуктазы в микросомах печени крыс.

2.3.5. Определение активности глутатион-Б-трансферазы в цитозоле печени крыс.

2.3.6. Определение активностей CYP1A1 и CYP1A2 в микросомах печени крыс.

2.3.7. Количественное определение малонового диальдигида.

2.3.8. Определение токоферолов в микросомах печени крыс.

2.3.9. Электрофорез белков в денатурирующем ПААГ.

2.3.10. Полусухой электроперенос беков на нитроцеллюлозную мембрану.

2.3.11. Иммунохимический анализ белков микросом.

2.3.12. Иммунохимический анализ белков цитозоля.

2.3.13. Выделение суммарной клеточной РНК.

2.3.13.1. Выделение суммарной клеточной РНК ДСН-фенольным методом

2.3.13.2. Выделение суммарной клеточной РНК набором фирмы Вектор-Бест.'.

2.3.14. ДНКазная обработка.

2.3.15. Электрофорез РНК в частично денатурирующих условиях.

2.3.16. Определение концентрации РНК.

2.3.17. Определение уровня мРНК CYP1A1, CYP1A2, AhR, Arnt, AhRR, Hsp90, TTP.

2.3.17.1. Обратная транскрипция.

2.3.17.2. Полимеразная цепная реакция.

2.3.17.3. Анализ продуктов ПЦР.

2.3.18. Выделение экстракта ядер клеток печени.

2.3.19.0пределение белка в экстрактах ядер.

2.3.20. Приготовление зонда для ДНК/белкового связывания.

2.3.20.1. Мечение олигонуклеотида.

2.3.20.2. Очистка олигонуклеотида.

2.3.21. Анализ ДНК/белковых комплексов.

2.3.22. Определение активностей протеосом.

2.3.23. Определение количества карбонильных групп.

2.3.24. Определение общего и конъюгированного билирубина.

2.3.25 Определение уровня кортикостерона.

2.4. Статистическая обработка.

Глава 3. Результаты.

3.1. Характеристика метаболических процессов у крыс при длительном воздействии умеренно низкой температуры (модель Харта).

3.2. Характеристика микросомальной монооксигеназной системы печени крыс при холодовом воздействии.

3.3. Исследование уровней мРНК CYP1A1 и CYP1A2 и апоферментов CYP1А1 и CYP1A2 в печени крыс при холодовом воздействии.

3.4. Исследование активности протеосом при холодовом воздействии.

3.5. Исследование влияния холода на экспрессию основных компонентов AhR-сигнального пути.

3.6. Исследование влияния ингибиторов ТК на активность CYP1A на фоне холодового воздействии.

3.7. Исследование влияния холода на ДНК-связывающую способность AhR в печени крыс.

3.8. Исследование содержания токоферола в печени и билирубина в сыворотке крови крыс под действием холода.

Глава 4. Обсуждение результатов.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярные механизмы регуляции активности цитохромов Р450 подсемейства 1А в печени крыс при воздействии на организм холода"

Воздействие умеренного холода на организм в целом - на уровне поведенческих, метаболических, физиологических реакций достаточно хорошо изучено и описано во множестве работ. Однако только в последние несколько лет процессы, происходящие при действии холода, стали активно изучаться на молекулярном уровне. Было выявлено, что действие умеренного холода (снижение температуры тела на несколько градусов) на клетки млекопитающих вызывает комплексный ответ, включающий, помимо активации компенсаторных механизмов, таких, как убиквитин-протеосомный путь и синтез белков холодового шока, замедление многих процессов: происходит ингибирование транскрипции большинства генов и трансляции большинства белков, процессинга и деградации РНК, ферментативных реакций (Sonna L.A. et al., 2002; Al-Fageeh M.B., Smales C.M., 2006). В этой связи представляется интересным выявленный в опытах на крысах факт, что на фоне действия умеренного холода происходит, напротив, увеличение активности ферментов метаболизма ксенобиотиков, и, в частности, цитохрома Р450 1А1 (CYP1A1) (Громова О.А. и др., 2002). Механизм этого явления остается неизвестным. Других сведений о влиянии умеренного холода на индукцию CYP1A у теплокровных животных в литературе нет. Известны только немногочисленные работы по изучению индукции CYP1A при совместном действии холода и сильных индукторов CYP1A на рыбах (Kloepper-Sams P.J., Stegeman J.J., 1992; Sleiderink Н.М., Boon J.P., 1996).

Подсемейство цитохромов CYP1A состоит из двух членов: CYP1A1 и CYP1A2. CYP1A1 конститутивно экспрессируется на очень низком уровне, CYP1A2 - на достаточно высоком, но оба фермента индуцируются при воздействии таких соединений, как полициклические ароматические углеводороды (ПАУ) и ариламины, которые являются "классическими" индукторами CYP1A. В последние десятилетия накоплено множество сведений о том, что индукторами CYP1A могут быть не только ксенобиотики типа ПАУ, но и вещества с совершенно иными физико-химическими свойствами, в том числе, эндогенного происхождения (Denison M.S., Nagy S.R., 2003). Физические воздействия тоже способны активировать ферменты метаболизма ксенобиотиков: была показана индукция CYP1A при таких воздействиях, как гидродинамический удар, ультрафиолет, ультразвук, гипероксия (Marin Е. et al., 1988; Okamoto Т. et al., 1993; Гришанова А.Ю., Зуева T.B., 2000; Gonzalez M.C. et al., 2001; Monk S.A. et al., 2001; Feng Q. et al., 2002). В ответ на воздействие физических факторов в организме происходит запуск различных биохимических реакций биологически активными веществами, полученными из окружающей среды или освобожденными из физиологических "депо". В случае индукции цитохромов Р450 при действии физических факторов логично предполагать наличие эндогенных медиаторов, опосредующих запуск экспрессии соответствующих генов.

Если активация CYP1A2 может осуществляться как на транскрипционном, так и на посттранскрипционном уровне, то для CYP1A1 на данный момент доказан единственный путь активации: путь сигнальной трансдукции, зависимый от арилгидрокарбонового рецептора (AhR).

AhR представляет собой лиганд-активируемый транскрипционный фактор. В неактивном состоянии AhR находится в цитоплазме в комплексе с двумя молекулами Hsp90, кошаперонами и тирозинкиназой c-Src. После связывания с лигандом происходит диссоциация комплекса, перенос AhR в ядро и димеризация с белком Arnt (Ah receptor nuclear translocator, ядерный переносчик арилгидрокарбонового рецептора). Затем гетеродимер AhR/Arnt взаимодействует с элементами, чувствительными к ксенобиотикам (XRE) энхансера гена CYP1AH2, что приводит к инициации транскрипции CYP1A1I2.

Hsp90 поддерживает AhR в конформации, облегчающей взаимодействие с лигандом, но препятствующей связыванию с ДНК. Hsp90 относится к белкам теплового шока и выполняет функцию шаперона. Известно, что Hsp90 растений могут активироваться и при воздействии холода (Krishna P. et al., 1995), но данных о влиянии холода на Hsp90 животных в литературе нет.

AhR и Arnt являются фосфопротеинами, поэтому процессы фосфорилирования и дефосфорилирования играют важную роль в Ah-рецепторном пути. Известно, что для димеризации Arnt с AhR необходимо фосфорилирование Arnt, а для связывания комплекса AhR/Arnt с ДНК - фосфорилирование AhR и осуществляется оно по тирозиновому остатку (Ma Q., 2001). Ряд литературных источников свидетельствует о том, что ингибиторы тирозиновых киназ (ТК) семейства Src снижают экспрессию CYP1A, при этом аналогичные данные о действии на CYPIA неспецифических ингибиторов ТК противоречивы. Имеющиеся в литературе сведения о влиянии на экспрессию CYPIA ингибиторов ТК получены при работе с клеточными культурами и не могут быть экстраполированы па животных. Литературные данные свидетельствуют также о том, что киназы осуществляют посттрансляционную модификацию некоторых форм цитохромов Р450, например, CYP2B1/2 (Oesch-Bartlomowicz В., Oesch F., 2005), однако данных о роли ТК в фосфорилировании CYP1A в литературе нет.

Известно, что интенсификация метаболизма в условиях холода приводит к возрастанию уровня окислительных процессов в клетке (Куликов В.Ю. и др., 1998; Шустанова Т.А., и др., 2001; Бородин Е.А. и.др., 1992; Sahin Е., Giimii§lu S., 2007). Это может приводить к накоплению в клетке поврежденных белков и к активации протеосомной системы, осуществляющей их деградацию. Протеосомная система также опосредует процесс деградации и негативной регуляции AhR. Известно, что под действием "классических" индукторов CYPIA in vitro наблюдается усиление деградации AhR протеосомами, что обеспечивает отрицательную обратную связь, приводящую к уменьшению периода полужизни AhR и, следовательно, к ослаблению гиперэкспрессии CYPIA (Ma Q., Baldwin K.T., 2000; Santiago-Josefat B.E. et al., 2001). Данных о том, происходит ли аналогичный процесс in vivo, в литературе нет.

Изложенное выше определило цель настоящей работы: исследовать механизм, лежащий в основе увеличения активностей цитохромов Р450 подсемейства 1А в печени крыс при воздействии на организм умеренного холода.

Классическая модель Харта (Hart J.S., 1963), которая была использована в нашем исследовании, представляет собой содержание животных в индивидуальных клетках при +4°С в течение 40 суток. В данной работе был выбран временной интервал до 10 суток, так как, согласно имеющимся ранее данным, в дальнейшем происходит снижение активностей вплоть до контрольного уровня (Громова О.А. и др., 2002).

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: 1. Определить относительное содержание мРНК и количество белка CYP1A в печени крыс при разной длительности пребывания животных при 4°С.

2. Исследовать относительное содержание мРНК, функциональную активность и количество белка AhR в печени крыс при разной длительности пребывания животных при 4°С.

3. Исследовать относительное содержание мРНК Arnt, AhRR и Hsp90 в печени крыс при разной длительности пребывания животных при 4°С.

4. Исследование возможности участия эндогенных соединений в качестве посредников в процессе индукции CYP1A в печени крыс при разной длительности пребывания животных при 4°С.

5. Исследовать возможную роль протеосом и тирозиновых протеинкиназ (используя в качестве инструмента исследования ингибиторы тирозиновых киназ) в активации CYP1A под действием холода.

Научная новизна

Впервые установлены механизмы индукции CYP1A под действием холода: индуцирующее влияние холода на CYP1A1 реализуется на транскрипционном уровне через AhR-зависимый путь сигнальной трансдукции, a CYP1A2 - на постгранскрипционном уровне. Впервые выявлено, что при холодовом воздействии происходит снижение экспрессии таких компонентов AhR-сигнального пути, как Arnt и Hsp90. Показано, что эндогенным посредником в процессе регуляции экспрессии CYP1A1 под действием холода может быть токоферол. Показано, что при этом происходит повышение относительного содержания мРНК токоферол-переносящего белка (а-ТПБ), осуществляющего перераспределение токоферола в организме. Впервые показано разнонаправленное изменение активностей протеосом в печени крыс под действием холода: повышение химотрипсиновой и пептидилглутамин-пептидгидролазной протеосомных активностей и уменьшение трипсиновой протеосомной активности. Впервые показана взаимосвязь ТК семейства Src с уменьшением активности CYP1A1 в печени крыс, подвергнутых воздействию холода, на посттранскрипционном уровне. ТК (но не семейства Src) связаны с увеличением активности CYP1A2 в печени крыс при воздействии на крыс умеренного холода (4°С) на постгранскрипционном уровне.

Научно-практическая значимость

По своему содержанию работа носит преимущественно фундаментальный характер и представляет собой исследование молекулярного механизма индукции CYP1A в печени крыс под действием холода. Полученные результаты имеют значение для понимания механизмов активации экспрессии генов CYPJA.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Воздействие на крыс умеренного холода приводит к увеличению в печени крыс активности CYP1A1 в результате активации транскрипции гена CYP1A1 с вовлечением Ah-рецептор зависимого пути сигнальной трансдукции, а также к увеличению активности CYP1A2, регулируемой на посттранскрипционном уровне.

2. а-Токоферол может участвовать в индукции CYP1A1 в печени крыс под действием холода в качестве одного из эндогенных посредников.

3. При воздействии на крыс умеренного холода происходит повышение химотрипсиновой и пептидилглутамип-пептидгидролазной протеосомных активностей, и понижение трипсиновой протеосомной активности.

4. К факторам, негативно регулирующим активность CYP1A1 в печени крыс на фоне воздействия холодом, можно отнести ТК. ТК семейства Src уменьшают активность CYP1A1 в печени крыс, подвергнутых воздействию холода, на посттранскрипционном уровне. ТК (но не семейства Src) участвуют в увеличении активности CYP1A2 в печени крыс при воздействии на крыс умеренного холода на постгранскрипционном уровне. Лимитирующими индукцию CYP1A холодом факторами являются Arnt и Hsp90.

Апробация работы Результаты работы были представлены на следующих конференциях: 8-ая Международная Пущииская школа-конференция молодых ученых "Биология - наука XXI века", Пущино, 2004; IX Дальневосточная молодежная школа-конференция по актуальным проблемам химии и биологии, Владивосток, 2005; XIII международная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов - 2006", Москва, 2006; девятая Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей "Человек и его здоровье", Санкт-Петербург, 2006; VI Всероссийская конференция молодых ученых "Проблемы фундаментальной и прикладной медицины" в рамках 13 международного конгресса по приполярной медицине, Новосибирск, 2006; международная научная конференция "свободные радикалы, антиоксиданты и старение", Астрахань, 2006.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Перепечаева, Мария Леонидовна

107 Выводы

1. Воздействие умеренного холода (4°С) приводит к увеличению в печени крыс активности CYP1A1 через 5 и 10 суток в результате активации транскрипции гена CYP1A1 с вовлечением Ah-рецептор зависимого пути сигнальной трансдукции.

2. При воздействии на крыс умеренного холода (4°С) в течение 5 и 10 суток в печени животных относительное содержание мРНК компонентов AhR-сигнального пути, таких как AhR и репрессор AhR (AhRR), не изменяется, а ядерного переносчика AhR (Arnt) и Hsp90 уменьшается.

3. Воздействие на крыс умеренного холода (4°С) в течение 5 и 10 суток приводит к увеличению в печени животных активности CYP1А2, которое регулируется на посттранскрипционном уровне.

4. Корреляционный анализ взаимосвязи между содержанием токоферолов и активностью CYP1A1 в совокупности с данными об увеличении экспрессии а-ТПБ позволяет предполагать участие а-токоферола в регуляции активности CYP1A1.

5. При воздействии на крыс умеренного холода (4°С) происходит повышение химотрипсиновой и пептидилглутамин-пептидгидролазной протеосомных активностей и уменьшение трипсиновой протеосомной активности.

6. Данные об изменении активности CYP1A и относительного содержания мРНК CYP1A при одновременном действии холода (4°С) и ингибиторов тирозиновых киназ свидетельствуют о том, что тирозиновые протеинкиназы семейства Src участвуют в уменьшении активности CYP1A1 в печени крыс, подвергнутых воздействию холода, на посттранскрипционном уровне. Тирозиновые протеинкиназы (но не семейства Src) участвуют в увеличении активности CYP1A2 в печени крыс при воздействии на крыс умеренного холода (4°С) на посттранскрипционном уровне.

108

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Перепечаева, Мария Леонидовна, Новосибирск

1. Андреева Л.И. Количественное определение малонового диальдегида. // Лабораторное дело. 1988. - T.l 1. - С. 41-43.

2. Бородин Е.А., Доровских В.А., Бородина Г.П., Дорошенко Г.К. и.др. Перекисное окисление липидов и функциональные свойства эритроцитов при действии холода. // Бюллетень Сибирского отделения Российской Академии медицинских наук. 1992. -N 4. - С. 79-84.

3. Гришанова А.Ю., Зуева Т.В. Билирубин как эндогенный посредник в активации экспрессии CYP1A1 под действием ультразвука. // Вопросы медицинской химии. 2000. - № 2. - С. 117-127.

4. Громова О.А. Роль гидрофобных взаимодействий в функционировании НАДФН-зависимых систем биологического окисления в мембранах эндоплазматического ретикулума печени крыс: Дис. канд. биол. наук. Новосибирск. 1989. - 174 с.

5. Громова О.А., Гришанова А.Ю., Гуляева Л.Ф., Колпаков А.Р. и др. Влияние длительного холодового воздействия на цитохромы Р450 в микросомах печени крыс. // Тезисы докладов IV съезда физиологов Сибири (Новосибирск). 2002. -С. 64-65

6. Громова О.А., Гришанова А.Ю., Гуляева Л.Ф., Колпаков А.Р. и др. Влияние длительного холодового воздействия на цитохромы Р450 в микросомах печени крыс. // Тезисы докладов IV съезда физиологов Сибири (Новосибирск). 2002. -С. 64-65.

7. Гуляева Л.Ф., Гришанова А. Ю., Громова О. А., Слынько Н. Н., Вавилин В. А., Ляхович В. В. Микросомная монооксигеназная система живых организмов в биомониторинге окружающей среды. Новосибирск: Наука. Сиб.отделение. -1994.- 100 с.

8. Кахровер Н.Б., Хмелевский Ю.В. Глутатион-8-трансферазы, ферменты детоксикации. // Украинский биохимический журнал. 1983 - Т. 55, N1 - С. 86-92.

9. Колесниченко JI.С., Кулинский В.И. Глутатионтрансферазы. // Успехи современной биологии. 1989. - Т. 107, вып. 2 - С. 179-194.

10. Колосова Н.Г., Шорин Ю.П., Куликов В.Ю. Реакции перекисного окисления липидов в печени и легких крыс при долговременной адаптации к холоду. // Бюлл. эксп. биол. и мед. -1981.-N4.-C. 436-437.

11. Колпаков А.Р. Влошчинский П.Е., Колосова Н.Г. Механизмы адаптации к холоду у людей и животных. // Вестн. Росс. Акад. Мед. наук. 1993. - V.8. - С. 2931.

12. Колпаков А.Р., Колпаков М.А., Панин Л.Е. Фармакокинетика антипирина и изониозида у крыс в динамике адаптации к холоду. // Бюлл. эксп. биол. и мед. -1994. Т.118. - N 9. - С. 279-280.

13. Кулаева О.Н. Белки теплового шока и устойчивость растений к стрессу. // Соросовский образовательный журнал. 1997. -N. 2. - С.5-13.

14. Куликов В.Ю., Семенюк А.В., Колесникова Л.И. Перекисное окисление липидов и холодовой фактор. Новосибирск: Наука. 1998. - 192 с.

15. Ляхович В.В., Цырлов И.Б. Структурные аспекты биохимии монооксигеназ. Новосибирск: Наука. Сиб.отделение. 1978.-238 с.

16. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1984.-479 с.

17. Мишин В.М., Ляхович В.В. Множественные формы цитохрома Р450. -Новосибирск: Наука. Сиб.отделение. 1985. - 181 с.

18. Сидорова Ю.А., Гришанова А.Ю., Ляхович В.В. Транскрипционная активация цитохрома Р4501А1 альфа-токоферолом. // Бюлл. эксп. биол. и мед. -2004. Т. 137. - N 9. - С. 264-267.

19. Скабкин М.А, Скабкина О.В., Овчинников Л.П. Мультифункциональные белки с доменом холодового шока в регуляции экспрессии генов. // Успехи биологической химии. 2004. - Т. 44. - С 3-52 .

20. Шабалина И.Г., Колпаков А.Р., Соловьев В.Н., Колосова Н.Г., Панин Л.Е. Энергентический статус печени крыс в динамике адаптации к холоду. // Биохимия. 1995. - Т. 60. -N. 3 - С. 441-449.

21. Adachi J., Mori Y., Matsui S., Matsuda T. Comparison of gene expression patterns between 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin and a natural arylhydrocarbon receptor ligand, indirubin. // Toxicol. Sci. 2004. - V. 80(1) - P. 161-169.

22. Adachi J., Mori Y., Matsui S., Takigami H. et all. Indirubin and indigo are potent aryl hydrocarbon receptor ligands present in human urine. // The Journal of Biological Chemistry. 2001. - V. - 276(34). - P. 31475-31478.

23. Adams N.H., Levi P.E., Hodgson E. Regulation of cytochrome P-450 isozymes by methylenedioxyphenyl compounds. // Chem. Biol. Interact. 1993. - V. 86(3). - P. 255274.

24. Adcock I.M., Cosio В., Tsaprouni L., Barnes P.J., Ito K. Redox regulation of histone deacetylases and glucocorticoid-mediated inhibition of the inflammatory response // Antioxidants & Redox Signaling. 2005. - V. 7(1-2). - P. 144-152.

25. Adcock I.M., Ito K., Barnes P.J. Glucocorticoids: effects on gene transcription. // Proc. Am. Thorac. Soc. 2004. - V. 1(3) - P. 247-254.

26. Aluru N., Renaud R., Leatherland J.F., Vijayan M.M. Ah Receptor-mediated impairment of interrenal steroidogenesis involves StAR protein and P450scc gene attenuation in rainbow trout. // Toxicol. Sci. 2005. - V. 84(2). - P. 260-269.

27. Andersen M.L., Bignotto M., Machado R.B., Tufik S. Different stress modalities result in distinct steroid hormone responses by male rats. // Braz. J. Med. Biol. Res. -2004. V. 37(6). - P. 791-797.

28. Argyropoulos G., Harper M.E. Molecular biology of thermoregulation. Invited review: Uncoupling proteins and thermoregulation. // J. Appl. Physiol. 2002. - V. 92. -P. 2187-2198.

29. Armstrong, R. N. Structure, catalytic mechanism, and evolution of the glutathione transferases.// Chem. Res. Toxicol. 1997. - V.10. - P. 2-18.

30. Astrom A., DePerre J.W. Rat liver microsomes cytochrome P450, purification, characterization, multiplicity and induction. // Biochem. Biophys. Acta. 1986. - V.853. -P. 1-27.

31. Aviram M. Kent U.M., Hollenberg P.F. Microsomal cytochromes P450 catalyze the oxidation of low density lipoprotein. // Atherosclerosis. 1999. - No. 143. - P. 253260.

32. Azzi A., Breyer I., Feher M., Ricciarelli R., Stocker A., Zimmer S., Zingg J. Nonantioxidant functions of alpha-tocopherol in smooth muscle cells. // J. Nutr. 2001. -V. 131(2).-P. 378-381.

33. Azzi A., Stocker A. Vitamin E: non-antioxidant roles. // Prog. Lipid Res. 2000. -V. 39(3).-P. 231-255

34. Backlund M., Ingelman-Sundberg M. Different structural requirements of the ligand binding domain of the aryl hydrocarbon receptor for high- and low-affinity ligand binding and receptor activation. // Mol. Pharmacol. 2004. - V. 65(2). - P. 416-425.

35. Backlund M., Ingelman-Sundberg M. Regulation of aryl hydrocarbon receptor signal transduction by protein tyrosine kinases. // Cell Signal. 2005. - V. 17(1). - P. 3948. '

36. Backlund M., Jojansson I., Mkrtchian S., Ingelman-Sunberg M. Signal transduction-mediated activation of the aryl hydrocarbon receptor in rat hepatoma H4IIE cells.//Eur. J. Biochem. 1997.-V. 261.-P. 66-71.

37. Bamberger C.M., Schulte H.M., Chrousus G.P. Molecular determinants of glucocorticoid receptor function and tissue sensitivity to glucocorticoids // Endocrine Reviews. 1996 - V. 17(3). - P. 245-261.

38. Bartsch H., Nair U., Risch A., Rojas M., Wikman H., Alexandrov K. Genetic Polymorphism of CYP Genes, Alone or in Combination, as a Risk Modifier of Tob acco-related Cancers. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2000. - V. 9(1). - P. 3-28.

39. Bernshausen Т., Jux В., Esser C., Abel J., Fritsche E. Tissue distribution and function of the Aryl hydrocarbon receptor repressor (AhRR) in C57BL/6 and Aryl hydrocarbon receptor deficient mice. // Arch Toxicol. 2006. - V. 80(4). - P. 206-211.

40. Berry C.S., Zarembo J.E., Ostrow J.D. Evidence for conversion of bilirubin to dihydroxyl derivatives in the Gunn rat. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1972. -V. 49.-P. 1366- 1375.

41. Black S., Coon M.J. Structural features of liver microsomal NADPH-cytochrome P-450 reductase: hydrophobic domain, hydrophilic domain, and connecting region. // J. Biol. Chem. 1982. - V.257. - P. 5929-5938.

42. Blagosklonny M.V. ITsp-90-associated oncoproteins: multiple targets of geldanamycin and its analogs. // Leukemia. 2002. - V. 16. - P. 455-462

43. Boscoboinik D., Szewczyk A., Azzi A. Alpha-tocopherol (vitamin E) regulates vascular smooth muscle cell proliferation and protein kinase С activity. // Arch. Biochem. Biophys. 1991. -V. 286(1). - P.264-269.

44. Bowry V.W., Ingold K.U., Stocker R. Vitamin E in human low-density lipoprotein. When and how this antioxidant becomes a pro-oxidant. // Biochem. J. -1992. -V. 288(2). P. 341-344.

45. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilazing the principle of protein-dye binding. // Anal. Biochem. -1976.-V.72.-P. 248-254.

46. Brauze D., Widerak M., Cwykiel J., Szyfter K., Baer-Dubowska W. The effect of aryl hydrocarbon receptor ligands on the expression of AhR, AhRR, ARNT, Hiflalpha, CYP1A1 and NQOl genes in rat liver. I I Toxicol. Lett. 2006. - V. 167(3). - P. 212-220.

47. Brigelius-Flohe R., Kelly F.J., Salonen J.T, Neuzil J., Zingg J.M., Azzi A. The European perspective on vitamin E: current knowledge and future research. // Am. J. Clin. Nutr. 2002. - V.76. - P. 703-716.

48. Brigelius-Flohe R., Traber M.G. Vitamin E: function and metabolism. // FASEB Journal.-1999-V. 13.-P. 1145-1155.

49. Burke M. D., Thompson S., Mayer R. T. Etoxy-, pentoxy-, benzyloxi-, phenoxazones and homologues a series of substrates to distinguish between different induced cytochrome P450. // Biochem. Pharmacol. 1985. - V. 34. - P. 3337-3346.

50. Campbell T.C., Hayes J.R. Role of nutrition in the drug-metabolizing enzyme system. // Pharmacol. Rev. 1974. -V. 26(3). - P. 171-197.

51. Caruso J.A., Laird D.W., Batist G. Role of HSP90 in Mediating Cross-Talk between the Estrogen Receptor and the Ah Receptor Signal Transduction Pathways. // Biochemical Pharmacology. 1999. -V. 58. - P. 1395-1403.

52. Carver L.A., Jackiw V., Bradfield C.A. The 90-kDa heat shock protein is essential for Ah receptor signaling in a yeast expression system. // J. Biol. Chem. 1994. - V. 269(48).-P. 30109-30112.

53. Chambon P. A decade of molecular biology of retinoic acid receptors. // FASEB J. 1996. -V. 10.-P. 940-954.

54. Chan A.C. Vitamin E and atherosclerosis. // J. Nutr. 1998. - V. 128(10). - P. 1593-1596.

55. Chang, C.Y., Puga, A. Constitutive activation of the aromatic hydrocarbon receptor // Mol. Cell. Biol. 1998. - V. - P. 525-535.

56. Chattopadhyay N., Kher R., Godbole M. Inexpensive SDS/phenol method for RNA extraction from tissues. // Biotechniques. 1993. - V. 15. - P. 24-26.

57. Chen В., Kayukawa Т., Monteiro A., Ishikawa Y. The expression of the HSP90 gene in response to winter and summer diapauses and thermal-stress in the onion maggot, Delia antiqua. // Insect. Mol. Biol. 2005. - V. 14(6) - P. 697-702.

58. Chen H.W., Lii C.K., Sung W.C., Ко Y.J. Effect of vitamin E on rat hepatic cytochromeP-450 activity. //Nutr. Cancer. 1998. - V. 31(3). -P.178-183.

59. Chen Y.T., Ding J.H. Vitamins E and К induce aryl hydrocarbon hydroxylase activity in human cell cultures. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1987. - V. 143(3). -P. 863-871.

60. Cho I.J., Kim S.G. Oltipraz inhibits 3-methylcholanthrene induction of CYPIAI by С С ААТ/ enhancer-b inding protein activation // J. Biol. Chem. 2003. - V. 278. - P. 44103-44112.

61. Chow С. K. Vitamin E and oxidative stress. // Free Radic. Biol. Med. 1991 - V. 11(2).-P. 215-232.

62. Conley A., Hinshelwood M. Mammalian aromatases. // Reproduction. 2001. -V.121.-P. 685-695.

63. Cranston W.I., Hellon R.F., Mitchell D. Is brain prostaglandin synthesis involved in responses to cold? // J Physiol. 1975. - V. 249(2). - P. 425-434.

64. Danniel V. Glutathione S-transferase: gene structure and regulation of expression.// Crit. Biochem. Mol. Biol. 1993. - V. 28. - P. 173 - 207.

65. Daujat M., Peryt В., Lesca P., Fourtanier G., Domergue J., Maurel P. Omeprazole, an inducer of human CYP1A1 and 1A2, is not a ligand for the Ah receptor. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. - V. 188(2). - P. 820-825.

66. Davarinos N.A., Pollenz R.S. Aryl hydrocarbon receptor imported into the nucleus following ligand binding is rapidly degraded via the cytosplasmic proteasome following nuclear export. // J. Biol. Chem. 1999. - V. 274(40). - P. 28708-28715.

67. Davies K.J. Degradation of oxidized proteins by the 20S proteasome. //Biochimie. -2001. V. 83(3-4).-P. 301-310.

68. De Matteis F., Trenti Т., Gibbs A.H., Greig J.B. Inducible bilirubin- degrading system in the microsomal fraction of rat liver. // Mol. Phamacol. 1989. - V. 35. - P. 831-838.

69. Delescluse C., Lemaire G., de Sousa G., Rahmani R. Is CYP1A1 induction always related to AHR signaling pathway? // Toxicology. 2000. - V. 153. - P.73-82.

70. DeMartino G.N., Slaughter C.A. The proteasome, a novel protease regulated by multiple mechanisms. // J Biol Chem. 1999. - V. 274(32). - P. 22123-22126.

71. Denison M.S., Deal R.M. The binding of transformed aromatic hydrocarbon (Ah) receptor to its DNA recognition site is not affected by metal depletion. // Mol. Cell. Endocrinol.-1990.-V. 69(1).-P. 51-57.

72. Denison M.S., Fisher J.M., Whitlock J.P. The DNA recognition site for the dioxin-Ah receptor complex. Nucleotide sequence and functional analysis. // J. Biol. Chem. -1988. V. 263(33). - 17221-17224.

73. Denison M.S., Nagy S.R. Activation of the aryl hydrocarbon receptor by structurally diverse exogenous and endogenous chemicals. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2003 - V.43. - P. 309-334.

74. Denison M.S., Whitlock J.P. Xenobiotic-inducible transcription of cytochrome P450 genes. // J. Biol. Chem. 1995. - V.270 (31). - P.l 8175 - 18178.

75. Deveci D., Egginton S. Cold exposure differentially stimulates angiogenesis in glycolytic and oxidative muscles of rats and hamsters. // Exp. Physiol. 2003. - V. 88. -P. 741-746.

76. Dey A., Nebert D. W. Markedly increased constitutive CYP1A1 mRNA levels in the fertilized ovum of the mouse. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. - V. 250(2).-P. 657-661.

77. Diaz D., Fabre I., Daujat M., Saint A.B, Bories P., Michel H., Maurel P. Omeprazole is an aryl hydrocarbon-like inducer of human hepatic cytochrome P450. // Gastroenterology. 1990. - V. 99(3). - P. 737-747.

78. Dvorak Z., Vrzal R., Pavek P., Ulrichova J. An evidence for regulatory cross-talk between aryl hydrocarbon receptor and glucocorticoid receptor in HepG2 cells. // Physiol. Res. 2007. - May 30. - Epub ahead of print.

79. Feingold I.B., Longhurst P.A., Colby H.D. Jiang W. et al., Effects of adrenocorticotropic hormone and dexamethasone on adrenal and hepatic alpha-tocopherol concentrations. // Free Radic. Biol. Med. 1999. - V.26 (5-6). - P. 633-638.

80. Feng Q., Kumagai Т., Nakamura Y., Uchida K., Osawa T. Induction of cytochrome P4501A1 by autoclavable culture medium change in ITepG2 cells. // Xenobiotica. 2002. - V. 32(11). - P. 1033-1043.

81. Fontaine F., Delescluse C., de Sousa G., Lesca P., Rahmani R. Cytochrome 1A1 induction by primaquine in human hepatocytes and HepG2 cell: absense of binding to the aryl hydrocarbon receptor. // Biochem. Pharmacol. 1999. - V. 57. - P.255-262.

82. Fujita J. Cold shock response in mammalian cells. / Fujita J. // J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 1999. - V. 1(2). - P. 243-245.

83. Gairola C., Chen L.H. Effect of dietary vitamin E on the aryl hydrocarbon hydroxylase activity of various tissues in rat. // Nutr. Res. 1982. - V. 52(4). - P. 398401.

84. Galbo H., Houston M.E., Christensen N.J., Hoist J.J., Nielsen В., Nygaard E., Suzuki J. The effect of water temperature on the hormonal response to prolonged swimming. // Acta. Physiol. Scand. 1979. - V. 105. - P. 326-337.

85. Gambone C.J., Hutcheson J.M., Gabriel J.L., Beard R.L., Chandraratna R.A., Soprano K.J., Soprano D.R. Unique property of some synthetic retinoids: activation of the aryl hydrocarbon receptor pathway. // Mol. Pharmacol. 2002. - V. 61(2). - P. 334342.

86. Gertz M.A. Cold hemolytic syndrome. // Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program. 2006.-P. 19-23.

87. Gibson G.G. The cytochrome P450 IV family: constitutive and inducible haemoproteins. // Biochem. Soc. Transact. 1990. - V.l8. - P. 14-15.

88. Giguere V. Orphan Nuclear Receptors: From Gene to Function. // Endocrine Reviews 1999. - V. 20(5) - P. 689-672.

89. Gonzalez F.J. The molecular biology of cytochrome P450s. // Pharmacol. Rev. -1989.-V. 40.-P. 243-288.

90. Gonzalez F.J., Kimura S., Nebert D.W. Comparison of the flanking regions and introns of the mouse 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-inducible cytochrome PI -450 and P3 -450 genes. // J. Biol. Chem. 1985. - V. 260. - P. 5040-5049.

91. Gonzalez M.C., Marteau C., Franchi J., Migliore-Samour D. Cytochrome P450 4A11 expression in human keratinocytes: effects of ultraviolet irradiation. // Br. J. Dermatol. 2001. - V. 145(5). - P. 749-757.

92. Gorski K., Carniero V., Schilber U. Tissue-specific in vito transcription from the mouse albumin promoter. // Cell. 1986. - V. 47. - P. 767-776.

93. Gradelet S., Leclerc J., Siess M.H., Astorg P.O. Beta-Apo-8'-carotenal, but not beta-carotene, is a strong inducer of liver cytochromes P4501A1 and 1A2 in rat. // Xenobiotica. 1996. - V. 26(9). - P. 909-919.

94. Gradin K., Whitelaw M.L., Toftgard R., Poellinger L., Berghard A. A tyrosin kinase-dependent pathway regulates ligand-dependent activation of the dioxin receptor in human keratinocytes. // J. Biol. Chem. 1994. - V. 269. - P. 23800-23807.

95. Grishanova A.Y., Lyakhovich V.V. // Proc. VII Int. Conf. On Cytochrome P450, (eds/ Archacov A.I., Bachmanova G.I.). INCO-TNC, Moscow. 1992. - P. 525-527.

96. Grune T. Oxidative stress, aging and the proteasomal system. // Biogerontology. -2000. V. 1(1).-P. 31-40.

97. Grune Т., Reinheckel Т., Davies K.J. Degradation of oxidized proteins in mammalian cells. // FASEB J. 1997. - V. 11(7). - P. 526-534.

98. Guengerich F.P. Cytochrome P450: what have we learned and what are the future issues? // Drug. Metab. Rev. 2004. - V. 36(2). - P. 159-197.

99. Guigal N., Seree E., Bourgarel-Rey V., Barra Y. Induction of CYP1A1 by serum independent of AhR pathway. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - V. 267(2). -P. 572-576.

100. Guigal N., Seree E., Nguyen Q.B., Charvet В., Desobry A., Barra Y. Serum induces a transcriptional activation of CYP1 Al gene in HepG2 independently of the AhR pathway. // Life Sci. 2001. -V. 68(18). - P. 2141-2150.

101. Habig W.H., Pabst M.J., Jakoby W.B. Glutathione S-transferases. The first enzymatic step in mercapturic acid formation. // J. Biol. Chem. 1974. - V.249 (22). - P. 7130-7139.

102. Hahn M. E. Mechanisms of innate and acquired resistance to dioxin-like compounds. // Rev. Toxicol. 1998. - V.2. - P. 395-443.

103. Handschin C., Meyer U.A. Regulatory network of lipid-sensing nuclear receptors: roles for CAR, PXR, LXR, and FXR. // Arch. Biochem. Biophys. 2005. - V. 433(2). -P. 387-396.

104. Hansen L. G., Warwick W. J. A fluorometric micromethod for fat tocopherol. // Clin. Biochem. 1970. - V.3 (3). - P. 225-229.

105. Harper P.A., Riddick D.S., Okey A.B. Regulating the regulator: Factors that control levels and activity of the aryl hydrocarbon receptor // Biochem. Pharmacol. -2006. V. 72(3) P. - 267-279.

106. Harstad E.B., Guite C.A., Thomae T.L., Bradfield C.A. Liver deformation in Ahr-null mice: evidence for aberrant hepatic perfusion in early development. // Mol. Pharmacol.-2006.- V. 69(5)-P. 1534-1541.

107. Hart J.S. Insulative and metabolic adaptations to cold in vertebrates. // Symp. Soc. Exp. Biol. 1964.-V. 18.-P. 31-48.

108. Hart J.S., Jansky L. Thermogenesis due to exercise and cold in warm- and cold-acclimated rats. // Can. J. Biochem. Physiol. 1963. - V. 41. - P. 629-634.

109. Hartley D.E., Edwards J.E., Spiller, Alom N., Tucci S., Seth P., Forsling M.L., File S.E. The soya isoflavone content of rat diet can increase anxiety and stress hormone release in the male rat. // Psychopharmacology. 2003. - V. 167. - P. 46-53.

110. Hayes J. D., Pulford D. J. The glutathione S-transferase supergene family: Regulation of GST and the contributions of the isoenzymes to cancer chemoprotection and drug resistance. // CRC Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 1995. - V. 30. - P. 445600.

111. Hedlund E., Gustafsson J.-A., Warner M. Cytochrome P450 in the brain; a review // Current Drug Metabolism. 2001. - V.2 (3). - P. 245-263.

112. Heilmann L.J., Sheen Y.-Y., Bigelow S.W., Nebert D. W. The trout P4501A1 gene: cDNA and deduced protein sequence, expression in liver, and evolutionary significance. // DNA. 1988. - V.7. - P. 853-857.

113. Helsby N.A., Chipman J.K., Gescher A., Kerr D. Inhibition of mouse and human CYP 1A- and 2El-dependent substrate metabolism by the isoflavonoids genistein and equol. // Food Chem. Toxicol. 1998. - V. 36(5). - P. 375-382.

114. Henklova P., Vrzal R., Ulrichova J., Dvorak Z. Role of mitogen-activated protein kinases in aryl hydrocarbon receptor signaling. // Chem. Biol. Interact. 2008. - V. 172(2).-P. 93-104.

115. Hines R. N., Levy J. В., Conrad R. D., Iverson P. L., Shen P. L., Renil A. M., Bresniek E. Gene structure and nucleotide sequence for rat cytochrome P-450. // Arch. Biochem. Biophys. 1985. - V.237. - P. 465-476.

116. Hiramatsu K., Yamada Т., Katakura M. Acute effects of cold on blood pressure, renin-angiotensin-aldosterone system, catecholamines and adrenal steroids in man. // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 1984.-V. 11.-P. 171-179.

117. Hoelper P., Faust D., Oesch F., Dietrich C. Evaluation of the role of c-Src and ERK in TCDD-dependent release from contact-inhibition in WB-F344 cells. // Arch. Toxicol. 2005. - V. 79, - P. 201-207.

118. Honkakoski P., Negishi M. Regulation of cytochrome P450 (CYP) genes by nuclear receptors. // Biochem. J. 2000. - V. 347(2). - P. 321-337.136. http://biochemie.web.med.uni-muenchen.de/YeastBiol/137. http ://vvw w.expasv. ch/

119. Ikuta Т., Kobayashi Y., Kawajiri K. Phosphorylation of nuclear localization signal inhibits the ligand-dependent nuclear import of aryl hydrocarbon receptor. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004. - V.317 (2). - P. 545-550.

120. Ishizuka Т., Lazar M.A. The nuclear receptor corepressor deacetylase activating domain is essential for repression by thyroid hormone receptor. // Mol. Endocrinol. -2005. Epub ahead of print.

121. Jaiswal А. К., Nebert D. W., Gonzalez F. J. Human P3-450: eDNA and complete amino acid sequence. //Nucl. Acids Res. 1986. - V.14. - P. 6773- 6774.

122. Jaiswal A.K., Gonzalez F.J., Nebert D. W. Human dioxin-inducible cytochrome Pr450: complementary DNA and amino acid sequence. // Science. 1985. - V.228. - P. 80-83.

123. James P., Whitlock Jr. Induction of cytochrome P4501A1. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1999.-V. 39.-P. 103-125.

124. Jansky L. Humoral thermogenesis and its role in maintaining energy balance. // Physiol. Rev. 1995. -V. 75(2). - P. 237-259.

125. Jin В., Ryu D.Y. Regulation of CYP1A2 by histone deacetylase inhibitors in mouse hepatocytes. // J. Biochcm. Mol. Toxicol. -2004. -V. 18 (3). P. 131-132.

126. Kapitulnik J., Gonzalez F.J. Marked endogenous activation of the CYP1A1 and CYP1A2 genes in the congenitally jaundiced Gunn rat. // Mol. Pharmacol. 1993. - V. 43(5).-P. 722-725.

127. Kapitulnik J., Hardwick J.P., Ostrow J.D., Webster C.C., Park S.S., Gelboin H.V. Increase in a specific cytochrome P-450 isoenzyme in the liver of congenitally jaundiced Gunn rats. // Biochem. J. 1987. - V. 242(1). - P. 297-300.

128. Karchner S.I., Franks D.G., Powell W.H., Hahn M.E. Regulatory interactions among three members of the vertebrate aryl hydrocarbon receptor family: AHR repressor, AHR1, and AFIR2. // J. Biol. Chem. 2002. - V.277 (9). - P. 6949-6959.

129. Kastner P., Mark M., Chambon P. Nonsteroid nuclear reseptors: What are genetic studies telling us about their role in real life? // Cell. 1995. - V. 83. - P. 859-869.

130. Katschinski D.M. On Heat and Cells and Proteins 11 News Physiol. Sci. 2004. -V. 19. — P. 11-15.

131. Kawajiri K., Goton O., Sogawa K., Tagashira Y., Muramatsu M., Fujii-Kuriyama Y. Coding nucleotide sequence of 3-methylcholantrene-inducible cytochrome P-450d cDNA from rat liver. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. - V. 81. - P. 1649-1653.

132. Kazi A., Daniel K.G., Smith D.M., Kumar N.B., Doua Q. P. Inhibition of the proteasome activity, a novel mechanism associated with the tumor cell apoptosis-inducing ability of genistein. // Biochemical Pharmacology. 2002. - V. 66(6). - P. 965976.

133. Kazlauskas A., Poellinger L., Pongratz I. Evidence That the Co-chaperone p23 Regulates Ligand Responsiveness of the Dioxin (Aryl Hydrocarbon) Receptor. // J. Biol. Chem. 1999. - V. 274(19).-P. 13519-13524.

134. Kazlauskas A., Poellinger L., Pongratz I. Two distinct regions of the immunophilin-like protein XAP2 regulate dioxin receptor function and interaction with hsp90. // J. Biol. Chem. 2002. - V.277 (14). - P. 11795-11801.

135. Kazlauskas A., Sundstrom S., Poellinger L., Pongratz I. The hsp90 Chaperone Complex Regulates Intracellular Localization of the Dioxin Receptor // Mol. Cell Biol. -2001. V. 21(7) - P. 2594-2607.

136. Kel A., Reymann S., Matys V., Nettesheim P., Wingender E., Borlak J. A novel computational approach for the prediction of networked transcription factors of aryl hydrocarbon-receptor-regulated genes. // Mol. Pharmacol. 2004. - V. 66(6). - P. 15571572.

137. Kensler T. W. Chemoprevntion by inducers of carcinogene detoxication enzymes.// Environ. Health. Perspect. 1997. - V. 105. - P. 965-970.

138. Kikuchi H, Hossain A. Signal transduction-mediated CYP1A1 induction by omeprazole in human HepG2 cells. // Exp. Toxicol. Pathol. 1999. - V. 51(4-5). - P. 342-346.

139. Kikuchi H., Hossain A., Yshida H., Kobayashi S. Induction of cytochrome P450 1A1 is tyrosin kinase-dependent and is not inhibited by a-naphtoflavone. // Arch. Biochem. Biophys. 1998. - V. 15.-P. 351-335.

140. Kimura S., Donovan J.C., Nebert D.W. Expression of the mouse Pi 450 gene during differentiation without foreign chemical stimulation. // J. Exp. Pathology. 1987. -V. 3(1).-P. 61-74.

141. Kinyamu H.K., Chen J., Archer Т.К. Linking the ubiquitin-proteasome pathway to chromatin remodeling/modification by nuclear receptors. // Journal of Molecular Endocrinology. 2005. - V.34. - P. 281-297.

142. Kloepper-Sams P.J., Stegeman J.J. Effects of temperature acclimation on the expression of hepatic cytochrome P4501A mRNA and protein in the fish Fundulus heteroclitus. //Arch. Biochem. Biophys. 1992. - V. 15(1). - P. 38-46.

143. Kobayashi K., Numayama-Tsuruta K., Sogawa K., Fujii-Kuriyama Y. CBP/p300 functions as a possible transcriptional coactivator of Ah receptor nuclear translocator (Arnt). // J. Biochemistry. 1997. - V. 122(4). - P. 703-710.

144. Kontush A., Finckh В., Karten В., Kohlschutter A., Beisiegel U. Antioxidant and prooxidant activity of alpha-tocopherol in human plasma and low density lipoprotein. // J. Lipid Res. 1996.-V. 37(7).-P. 1436-1448.

145. Korkalainen M, Linden J, Tuomisto J, Pohjanvirta R. Effect of TCDD on mRNA expression of genes encoding bHLH/PAS proteins in rat hypothalamus. // Toxicology. -2005.-V. 208.-P. 1-11.

146. Kretz-Remy C., Arrigo A.P. Modulation of the chymotrypsin-like activity of the 20S proteasome by intracellular redox status: effects of glutathione peroxidase-1 overexpression and antioxidant drugs. // Biol Chem. 2003. - V. 384(4). - P. 589-595.

147. Krishna P., Sacco M., Cherutti J.F., Hill' S. Cold-Induced Accumulation of hsp90 Transcripts in Brassica napus. // Plant Physiol. 1995. - V. 107 (3). - P. 915-923.

148. Krusekopf S., Roots I., Plildebrandt A.G., Kleeberg U. Time-dependent transcriptional induction of CYP1A1, CYP1A2 and CYP1B1 mRNAs by H+/K+

149. ATPase inhibitors and other xenobiotics. // Xenobiotica. 2003. - V.33 (2). - P. 107118.

150. Kumar M.B., Perdew G.H. Nuclear receptor coactivator SRC-1 interacts with the Q-rich subdomain of the AhR and modulates its transactivation potential. // Gene Expr. -1999. V.8 (5-6). - P. 273-286.

151. Kuno Y., Adolph E.F., Smith R.E. Metabolic adaptations to temperature and altitude. Concluding remarks // Fed. Proc. 1966 - V.25 (4). - P. 1427-1433.

152. Kuroshima A., Habara Y., Uehara A., Murazumi K., Yahata Т., Ohno T. Cross adaption between stress and cold in rats. // Pflugers Arch. 1984. - V. 402(4). - P. 402408.

153. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. // Nature. 1970. - V.227 (5259). - P. 680-685.

154. Lai K.P., Wong M.H., Wong C.K. Modulation of AhR-mediated CYP1A1 mRNA and EROD activities by 17beta-estradiol and dexamethasone in TCDD-induced H411E cells.//Toxicol. Sci.-2004.-V. 78(1).-P. 41-49.

155. Lee S.M., Clemens M.G. Effect of alpha-tocopherol on hepatic mixed function oxidases in hepatic ischemia/reperfiision. // Hepatology. 1992. - V. 15(2). - P. 276281.

156. Lees M.J., Peet D.J., Whitelaw M.L. Defining the role for XAP2 in stabilization of the dioxin receptor. // J. Biol. Chem. 2003. - V. 278(38). - P. 35878-35888.

157. Lemaire G, Delescluse C, Pralavorio M, Ledirac N, Lesca P, Rahmani R. The role of protein tyrosine kinases in CYP1 Al induction by omeprazole and thiabendazole in rat hepatocytes. // Life Sci. 2004. - V. 74(18) P. 2265-2278.

158. Lii C.K., Sung W.C., Ко Y.J., Chen H.W. Alpha-Tocopherol acetate supplementation enhances rat hepatic cytochrome PROD activity in the presence of phenobarbital induction. // Nutr. Cancer. 1998. - V. 32(1). - P. 37-42.

159. Liu A.Y., Bian H., Huang L.E., Lee Y.K. transient cold shock induces the heat shock response upon recovery at 37°C in human cells. // J. Biol. Chem. 1994. - V. 269(20).-P. 14768-14775.

160. Liu D., Waxman D.J. Post-transcriptional regulation of hepatic NADPH-cytochrome P450 reductase by thyroid hormone: independent effects on poly(A) tail length and mRNA stability. // Mol. Pharmacol. 2002. - V. 61(5). - P. 1089-1096.

161. Long W.P., Pray-Grant M., Tsai J.C., Perdew G.H. Protein kinase С activity is required for aryl hydrocarbon receptor pathway-mediated signal transduction. // Mol. Pharmacol.-1998.-V.53 (4).-P. 691-700.

162. Lowry O.U., Rosebrough N.I., Farr A.L., Randall R.I. Protein measurements with the Folin reagent. //J. Biol. Chem. 1951. - V. 153. - P. 265-275.

163. Ma Q. Induction of CYPIAI. The AhR/DRE paradigm: transcription, receptor regulation and expanding biological roles. // Current Drug. Met. 2001. - V.2. - P. 149164.

164. Mangelsdorf D.J., Thummel C., Beato M., Herrlich P., Schutz G., Umesono K., Blumberg В., Kastner P., Mark M., Chambon P., et al. The nuclear reseptor superfamily: the second decade. // Cell. 1995. - V. 83. - P. 835-839.

165. Mannervik В., Awasthi Y. C., Board P. G. Nomenclature for human glutathione transferases. // Biochem. J. 1992. - V. 282. - P. 305-308.

166. Matz J.M., LaVoi K.P., Moen R.J., Blake M.J. Cold-induced heat shock protein expression in rat aorta and brown adipose tissue. // Physiol. Behav. 1996. - V.60 (5). -P.1369-1374.

167. McKinnon R.A. Cytochrome P450. Multiplicity and Function. // Australian J. Hospital Pharmacy. 2000. - V. 30(2). - P. 54-56.

168. McMillan B.J., Bradfield C.A. The aryl hydrocarbon receptor is activated by modified low-density lipoprotein. // Proc. Natl. Acad. Sci USA.- 2007. V.104 (4). -P. 1412-1417.

169. Meyer B.K., Perdew G.H. Characterization of the AhR-hsp90-XAP2 core complex and the role of the immunophilin-related protein XAP2 in AhR stabilization. // Biochemistry. 1999.-V. 38(28).-P. 8907-8917.

170. Mimura J., Ema M., Sogawa K, Fujii-Kuriyama Y. Identification of a novel mechanism of regulation of Ah (dioxin) receptor function. // Research Communication. -1999.-V. 13(1),-P. 20-25.

171. Monk S.A, Denison M.S., Rice H.R. Transient Expression of CYP1A1 in Rat Epithelial Cells Cultured in Suspension. // Archives of Biochemistry and Biophysics. -2001.-V. 393(1).-P. 154-162.

172. Monostory K., Kohalmy K., Prough R.A., Kobori L., Vereczkey L. The effect of synthetic glucocorticoid, dexamethasone on CYP1A1 inducibility in adult rat and human hepatocytes. // FEBS Lett. 2005. - V. 579(1). - P. 229-235.

173. Morgan E.T. Regulation of cytochromes P450 during inflammation and infection. // Drug Metab. Rev. 1997. - V.29 (4). - P. 1129-1188.

174. Morgan E.T., Sewer M.B., Iber H., Gonzalez F.J., Lee Y.H., Tukey R.H., Okino S., Vu Т., Chen Y.H., Sidhu J.S., Omiecinski C.J. Physiological and pathophysiological regulation of cytochrome P450. // Drug Metab. Dispos. 1998. - V.26 (12). - P. 12321240.

175. Murray G.I., Foster C.O., Barnes T.S., Weaver R.J, Ewen S.W., Melvin W.T., Burke M.D. Expression of cytochrome P4501A in breast cancer // Br. J. Cancer. 1991. -V. 63(6).-P. 1021-1023.

176. Nebert D.W., Russell D.W. Clinical importance of the cytochromes P450. // Lancet. 2002. - V. 360(9340). - P. 1155-1162.

177. Neet K., Hunter T. Vertebrate non-receptor protein-tyrosine kinase families. // Genes Cells. 1996. - V. 1(2). - P. 147-169.

178. Nollen E.A.A., Morimoto R.I. Chaperoning signaling pathways: molecular chaperones as stress-sensing "heat-shock" proteins. // Journal of Cell Sciense. 2002. -V. 115.-P. 2809-2816.

179. Ohno S., Nakajima Y., Inoue K., Nakazawa H., Nakajin S. Genistein administration decreases serum corticosterone and testosterone levels in rats. // Life Sci.- 2003. V. 74(6). - P: 733-742.

180. Okamoto К., Tanaka H., Ogawa H., Makino Y., Eguchi H., Hayashi S., Yoshikawa N., Poellinger L., Umesono K., Makino I. Redox-dependent regulation of nuclear import of the glucocorticoid receptor. // J. Biol. Chem. 1999. - V. 274(15) - P. 10363-10371.

181. Okamoto Т., Mitsuhashi M., Fujita I., Sindhu R.K., Kikkawa Y. Induction of cytochrome P450 1A1 and 1A2 by hyperoxia. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1993.-V.197.-P. 878-885.

182. O'Leary K.A., McQuiddy P., Kasper C.B. Transcriptional regulation of the TATA-less NADPH cytochrome P-450 oxidoreductase gene. // Arch. Biochem. Biophys. -1996.-V. 15(2).-P. 271-280.

183. Omura Т., Sato R. The carbon monooxide binding pigment of liver microsomes. Solubilization, purification and properties. // J. Biol. Chem. - 1964 - V. 239 - P. 23702385.

184. Park S., Henry E.C., Gasiewicz T.A. Regulation of DNA binding activity of the ligand-activated aryl hydrocarbon receptor by tyrosine phosphorylation. // Arch. Biochem. Biophys. 2000. - V. 381(2).-P. 302-312.

185. Parkinson A. Biotransformation of xenobiotics. In: Casaret & Doll's toxicology: the basic science of poisons// ed. by Klaassen C. 5.ed. New York: Mc Graw Hill. 1996. -P. 113-186.

186. Pascussi J.M., Gerbal-Chaloin S., Drocourt L., Maurel P., Vilarem M.J. The expression of CYP2B6, CYP2C9 and CYP3A4 genes: a tangle of networks of nuclear and steroid receptors. // Biochim. Biophys. Acta. 2003. - V. 1619(3). - P.243-245.

187. Phelan D., Winter G.M., Rogers W.J., Lam J.C., Denison M.S. Activation of the Ah receptor signal transduction pathway by bilirubin and biliverdin. // Arch Biochem Biophys. 1998. -V. 357(1). - P. 155-163.

188. Phelan D.M., Brackney W.R., Denison M. S. The Ah receptor can bind ligand in the absence of receptor-associated heat-shock protein 90. // Arch. Biochem. Biophys, -1998.-V. 353.-P. 47-54

189. Phillips A.H., Langdon R.G. Hepatic triphosphopyridine nucleotide-cytochrome с reductase: isolation, characterization and kinetic studies. // J. Biol. Chem. 1962. -V.237.-P. 2652-2660.

190. Piechocki M.P., Hines R.N. Functional characterization of the human CYP1A1 negative regulatory element: modulation of Ah receptor mediated transcriptional activity. //Carcinogenesis. 1998. -V. 19(5). - P. 771-780.

191. Pollenz R.S, Buggy C. Ligand-dependent and -independent degradation of the human aryl hydrocarbon receptor (hAHR) in cell culture models. // Chemico-Biological Interactions. 2006. - V. 164. - P. 49-59.

192. Pollenz R.S. Specific blockage of ligand-induced degradation of the Ah receptor by proteasome but not calpain inhibitors in cell culture lines from different species. // Biochem. Pharmacol. 2007. - V. 74(1) - P. 131-143.

193. Porter T.D. Jud Coon: 35 years of P450 research, a synopsis of P450 history. // Drug Metab. Dispos. 2004. - V. 32(1). - P. 1-6.

194. Poulos T.L. Intermediates in P450 catalysis //• Philos. Transact. A Math. Phys. Eng. Sci. 2005. - V. 363(1829). - P. 793-806.

195. Quattrochi L.C., Vu Т., Tukey R.H. The human CYP1A2 gene and induction by 3-methylcholanthrene: A region of DNA that supports Ah receptor binding andpromoter-specific induction. // J. Biol. Chem. 1994. - V.269. - P.6949-6954.

196. Ram P.A., Waxman D.J. Thyroid hormone stimulation of NADPH P450 reductase expression in liver and extrahepatic tissues. Regulation by multiple mechanisms. // J. Biol. Chem. 1992. - V. 267(5). - P. 3294-3301.

197. Rape M., Jentsch S. Productive RUPture: activation of transcription factors by proteasomal processing. // Biochim. Biophys. Acta. 2004. - V. 1695(1-3). - P. 209213.

198. Reznick A.Z., Packer L. Oxidative damage to proteins: spectrophotometric method for carbonyl assay. // Methods Enzymol. 1994. - V. 233. - P. 357-363.

199. Ro D., Ehlting J., Douglas C.J. Cloning, functional expression, and subcellular localization of multiple NADPH-cytochrome P450 reductases from hybrid poplar. // Plant Physiol.-2002.-V. 130(4).-P. 1837-1851.

200. Roberts B.J., Whitelaw M.L. Degradation of the basic Helix-Loop-Helix/Per-ARNT-Sim homology domain dioxin receptor via the ubiquitin/proteasome pathway. // The journal of biological chemistry. 1999. - V. 274(50). - P. 36351-36356.

201. Rowlands J. C., He L., Hakkak R., Ronis M.J.J., Badger Т. M. Soy and whey proteins downregulate DMBA-induced liver and mammary gland CYP1 expression in female rats. // Journal of Nutrition. 2001. - Vol 131. - P. 3281-3287.

202. Ryu D.Y., Levi P.E., Hodgson E. Regulation of hepatic CYP1A isozymes by piperonyl butoxide and acenaphthylene in the mouse. // Chem. Biol. Interact. 1997. -V. 105(1).-P. 53-63.

203. Sarbolouki M.N., Spycher S.E., Sassoon J., Azzi A. A novel human tocopherol-associated protein: cloning, in vitro expression, and characterization. // J. Biol. Chem.2000. V. 275(33). - P. 25672-25680.

204. Savas U., Griffin K.J., Johnson E.F. Molecular mechanisms of cytochrome P-450 induction by xenobiotics: An expanded role for nuclear hormone receptors. // Mol. Pharmacol. 1999.-V. -56(5).-P. 851-857.

205. Schirmer K, Chan A.G., Bols N.C. Transitory metabolic disruption and cytotoxicity elicited by benzoa.pyrene in two cell lines from rainbow trout liver. // J. Biochem. Mol. Toxicol. 2000. - V. 14(5). - P. 262-276.

206. Schleimer R.P. Glucocorticoids suppress inflammation but spare innate immune responses in airway epithelium. // Proc. Am. Thorac. Soc. 2004. - V. 1(3). - P. 222230.

207. Schmidt J.V., Bradfield C.A. Ah receptor signaling pathways. // Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. 1996.-V.12.-P. 55-89.

208. Schrenk D. Impact of dioxin-type induction of drug-metabolizing enzymes on the metabolism of endo- and xenobiotics. // Biochem. Pharmacol. 1998. - V. 55(8). - P. 1155-1162.

209. Seidel S.D., Winters G.M., Rogers W.J., Ziccardi M.H. Activation of the Ah receptor signaling pathway by prostaglandins. // J. Biochem. Molecular Toxicology2001.-V. 4.-P. 187-196.

210. Shaban Z., El-Shazly S., Abdelhady S., Fattouh I., Muzandu K., Ishizuka M., Kimura K., Kazusaka A., Fujita S. Down regulation of hepatic PPARalpha function by AhR ligand. J. // Vet. Med. Sci. 2004. - V. 66(11). - P. 1377-1386.

211. Shaban Z., El-Shazly S., Ishizuka M., Kimura K., Kazusaka A., Fujita S. PPARalpha dependent modulation of hepatic CYP1A by clofibric acid in rats. // Arch. Toxicol. 2004. - V. 78(9). - P. 496-507.

212. Shao D., Lazar M.A. Modulating nuclear receptor function: may the phos be with you. // J. Clin. Invest. 1999. - V. 103 (12). - P. 1617-1618.

213. Sheehan D., Meade G., Foley V. M., Dowd C. A. Structure, function and evolution of glutathione transferases: implication for classification of non mammalian members of an ancient enzyme superfamily. // Biochem J. - 2001. - V. 360. - P. 1-16.

214. Shephard R.J. Fat metabolism, exercise, and the cold. // Can. J. Sport Sci. 1992. -V. 17(2).-P. 83-90.

215. Shertzer H.G., Puga A., Chang C., Smith P., Nebert D.W., Setchell K.D., Dalton T.P. Inhibition of CYPIAI enzyme activity in mouse hepatoma cell culture by soybean isoflavones. // Chem. Biol. Interact. 1999. - V. 123(1). - P. 31-49.

216. Shih H., Pickwell G.V., Guenette D.K., Bilir В., Quattrochi L.C. Species differences in hepatocyte induction of CYPIAI and CYP1A2 by omeprazole. // Hum. Exp. Toxicol. 1999.-V. 18(2).-P. 95-105.

217. Shore L.J. The in vitro formation of glutathione conjugates of bilirubin dimethylester by hepatic microsomes of jaundiced Gunn rat. // Hepatology. 1989. - V. 10.-P. 615.

218. Silver G., Krauter K.S. Expression of cytochromes P-450c and P-450d mRNAs in cultured rat hepatocytes. // J. Biol. Chem. 1988. - V.263. - P. 11802-11807.

219. Sleiderink H.M., Boon J.P. Temporal induction pattern of hepatic cytochrome P450 1A in thermally acclimated dab (Limanda limanda) treated with 3,3',4,4'-tetrachlorobiphenyl (CB77). // Chemosphere. 1996. - V. 32(12). - P. 2335-2344.

220. Smalas A.O, Leiros H.K, Os V., Willassen N.P. Cold adapted enzymes. // Biotechnol. Annu. Rev. 2000. - V. 6. - P. 1-57.

221. Smith A.G., Muscat G.E. Orphan nuclear receptors: therapeutic opportunities in skeletal muscle // Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 2006. - V. 291(2). - P. 203-217.

222. Sogawa K., Fujii-Kuriyama Y. Ah receptor, a novel ligand activated transcription factor. //J. Biochem. - 1997. - V.122. -P.1075-1079.

223. Song Z. Pollenz R.S. Ligand-dependent and independent modulation of aryl hydrocarbon receptor localization, degradation, and gene regulation. // Mol. Pharmacol. -2002.-V. 62(4).-P. 806-816.

224. Sonna L.A, Fujita J, Gaffin S.L, Lilly C.M. Invited review: effects of heat and cold stress on mammalian gene expression. // J. Appl. Physiol. 2002. - V. 92(4). - P. 1725-1742.

225. Sonneveld E., Jonas A., Meijer O.C., Brouwer A., van der Burg B. Glucocorticoid enhanced expression of dioxin target genes through regulation of the rat aryl hydrocarbon receptor. // Toxicol. Sci. 2007. - Aug 9. - Epub ahead of print.

226. Sterling K., Weaver J., Ho K.L., Xu L.C., Bresnick E. Rat CYP1A1 negative regulatory element: biological activity and interaction with a protein from liver and hepatoma cells. // Mol. Pharmacol. 1993. - V. 44(3). - P. 560-568.

227. Tamasi V., Vereczkey L., Falus A., Monostory K. Some aspects of interindividual variations in the metabolism of xenobiotics. // Inflamm. Res. 2003. - V. 52(8). - P. 322-333.

228. Teupser D., Thiery J., Seidel D. Alpha-tocopherol down-regulates scavenger receptor activity in macrophages. // Atherosclerosis. 1999. - V. 144(1). - P. 109-115.

229. Tian Y., Ke S., Denison M.S., Rabson A.B., Gallo M.A. Ah receptor and NF-kappaB interactions, a potential mechanism for dioxin toxicity. // J. Biol. Chem. 1999. -V. 274(1).-P. 510-515.

230. Tikuisis P., Ducharme M.B., Moroz D., Jacobs I. Physiological responses of exercised-fatigued individuals exposed to wet-cold conditions. // J. Appl. Physiol. -1999.-V.4.-P. 1319-1328.

231. Timsit Y.E., Chia F.S., Bhathena A., Riddick D.S. Aromatic hydrocarbon receptor expression and function in liver of hypophysectomized male rats. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 2002. - V. 185(2) - 136-145.

232. Traber M.G., Packer L. Vitamin E: beyond antioxidant function. // Am. J. Clin. Nutr. 1995. - V. 62(6). - P. 1501-1509.

233. Tsyrlov I.B., Zakharova N.E., Gromova O.A., Lyakhovich V.V. Possible mechanism of induction of liver microsomal monooxygenases by Phenobarbital. // Biochim. Biophys. Acta. 1976. - V. 421(1). - P. 44-56.

234. Uchida Y., Yano A., Kumakura S., Sakuma Т., Nemoto N. Enhancer elements in the mouse Cypla2 gene for constitutive expression. // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 2002. V.297(5). - P. 1297.

235. Wahli W., Martinez E. Superfamily of steroid nuclear receptors: positive and negative regulators of gene expression. // FASEB J. 1991. - V. 5(9). - P. 2243-2249.

236. Wanner R., Brommer S., Czarnetzki B.M., Rosenbach T. The differentiation-related upregulation of aryl hydrocarbon receptor transcript levels is suppressed by retinoid acid. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. - V. 209. - P. 706-711.

237. Whitlock J.P. Induction of cytochrome P4501A1. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol.- 1999.-V. 39.-P. 103-125.

238. Wiseman S.B, Vijayan M.M. Aryl hydrocarbon receptor signaling in rainbow trout hepatocytes: role of hsp90 and the proteasome. // Сотр. Biochem. Physiol. С Toxicol. Pharmacol. 2007. - V. 146(4) - P. 484-491.

239. Xu C., Li C.Y., Kong A.N. Induction of phase I, II and III drug metabolism/transport by xenobiotics. // Arch. Pharm. Res. 2005. - V. 28(3). - P. 249268.

240. Xu L., Glass C.K., Rosenfeld M.G. Coactivator and corepressor complexes in nuclear receptor function. // Curr. Opin. Genet. Dev. 1999. - V. 9(2). - P. 140-147.

241. Xu L.C., Bresnick E. Induction of cytochrome P4501A1 in rat hepatoma cell by polycyclic hydrocarbons and a dioxin. // Biochem. Pharmacol. 1990. - V.40. - P. 1399 -1403.

242. Yang Y.M., Huang D.Y., Liu OF., Zhong J.C., Du K., Li Y.F., Song X.H. Inhibitory effects of vitamin A on TCDD-induced cytochrome P-450 1A1 enzyme activity and expression. // Toxicol. Sci. 2005. - V. 85. - P. 727-734.

243. Zenone E.A., Ostrow J.D. Oxidative enzyme systems and the catabolism of unconjugated bilirubin (UCB). // Gastroenterology. 1977. - V. 72. - P. 1180.

244. Zhai Y., Pai H.V., Zhou J., Amico J.A., Vollmer R.R., Xie W. Activation of pregnane X receptor disrupts glucocorticoid and mineralocorticoid homeostasis. // Mol. Endocrinol. 2007. - V. 21(1). - P. 38-47.

245. Zhang S., Qin C., Safe Sh. H. Flavonoids as aryl hydrocarbon receptor agonists/antagonists: effects of structure and cell context. // Environmental Health Perspectives.-2003.-V. 111(16).-P. 1877-1882.

Информация о работе

Перепечаева, Мария Леонидовна
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2008
ВАК 03.00.04

Диссертация

Молекулярные механизмы регуляции активности цитохромов Р450 подсемейства 1А в печени крыс при воздействии на организм холода - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Молекулярные механизмы регуляции активности цитохромов Р450 подсемейства 1А в печени крыс при воздействии на организм холода - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы