Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Индуцибельность ферментов биотрансформации ксенобиотиков в печени мышей, различающихся по чувствительности к гепатоканцерогенному действию орто-аминоазотолуола

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Захарова, Людмила Юрьевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Множественные формы цитохрома Р450.

1.2 Характеристика цитохромов Р450 подсемейства 1А.

1.2.1. Индукция щитохромаР4501А1.

1.2.2.Копститутив1шя экспрессии и индукция цитохрома Р4501,42.

1.2.3. Субстратная специфичность цитохромов Р4501А.

1.3 Ферменты конъюгации в биотрансформации ксенобиотиков.

1.3.1 Уридиндис}ос<}отюкуронидтрапс(}еразы.

1.3.2 DtymamuoH~S~mpaHC($epam.

1.3.3 №ацетттранс4еразы.

1.1.4 Сулыротрансфразы.

1.5 Метаболическая активация канцерогенных ароматических аминов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Индуцибельность ферментов биотрансформации ксенобиотиков в печени мышей, различающихся по чувствительности к гепатоканцерогенному действию орто-аминоазотолуола"

Актуальность темы

В связи с развитием химической промышленности и растущим загрязнением атмосферы воздуха, стремительно растет количество чужеродных соединений, оказывающих вредное воздействие на организм человека. К таким соединениям могут быть отнесены синтетические пищевые добавки, пестициды, выбросы промышленных предприятий и т.д.

В последниие десятилетия накоплено большое количество лабораторных данных, установивших канцерогенные свойства многих химических соединений. Эти соединения могут рассматриваться: как потенциальные канцерогены для человека. При всем разнообразии химической структуры, химические канцерогены имеют одно общее свойство - это электрофильные соединения, способные связываться с нуклеофильными участками клеточных макромолекул. В связи с этим большое значение придается исследованию ферментативных систем, обеспечивающих защиту от чужеродных соединений. Система биотрансформации ксенобиотиков включает две сопряженные фазы. К 1-й фазе относятся ферменты микросомальной монооксигеназной системы, осуществляющие первичное окисление субстратов, что в итоге часто приводит к превращению проканцерогенного субстрата в активный канцероген. Ферменты микросомальной монооксигеназной системы обладают весьма широкой субстратной специфичностью, которая обеспечивается функционированием множественных форм цитохрома Р450 - центрального компонента этой системы. Показано, что цитохромы Р450 являются терминальным акцептором электронов в системе микросомального окисления (Porter, Coon, 1991). Ко 2-й фазе относятся ферменты, осуществляющие последующие реакции конъюгации с образованием гидрофильных продуктов, которые легко выводятся из организма. Основным местом аккумуляции липофильных загрязнителей из окружающей среды является печень. Активность внутриклеточного метаболизма химических соединений, а, следовательно, судьба попавшего в клетку ксенобиотика, во многом определяется способностью ферментов метаболизма к индукции, т.е. увеличению количества фермента и его каталитической активности в ответ на введение ксенобиотика. Способность к индукции характерна для многих цитохромов Р450 (Denison, Whitlock, 1995) и для некоторых ферментов 2-й фазы (Parkinson, 1996).

Для исследования процессов химического канцерогенеза в качестве модели часто используют инбредные линии мышей. Этому способствует ряд обстоятельств. Известно, что для окислительного метаболизма ксенобиотиков характерны генетические вариации, как в популяции людей, так и в популяции грызунов. Например, вариации ответа на полициклические ароматические углеводороды (ПАУ) среди инбредных линий мышей связаны с полиморфизмом Ah-рецептора (Gielen, 1972), причем этот ответ влияет на индуцибельность ферментов как 1-й, так и 2-й фазы метаболизма ксенобиотиков (Denison, Whitlock, 1995). Инбредные линии мышей отличаются по индуцибельности цитохромов Р450 подсемейства 1А. Этим ферментам принадлежит важная роль на стадии инициации химического канцерогенеза, поскольку они осуществляют биоактивацию большого количества загрязнителей окружающей среды типа ПАУ (преимущественно Р450 1А1), ароматических аминов (преимущественно Р450 1А2) и ряда других канцерогенных соединений (Nebert, McKinnon, 1994). Показано также, что инбредные линии отличаются по чувствительности к химическому канцерогенезу. Упомянутые факторы обеспечивают широкое применение инбредных линий мышей в качестве модели при исследовании процессов химического канцерогенеза.

Одним из больших классов химических канцерогенов являются аминоазобензолы, применяемые в качестве красителей в промышленности. Эти соединения характеризуются выраженной видовой и органной специфичностью (Miller, 1953). Ранее сотрудниками Института цитологии и генетики СО РАН Калединым В.И. и др. (Каледин В.И., 1990) была выявлена различная чувствительность инбредных линий мышей к гепатоканцерогенезу, индуцируемому одним из азобензолов - о-аминоазотолуолом (ОAT). Известно, что канцерогенный эффект оказывают не сами азосоединения, а их метаболиты (Beland, 1990), причем наряду с реакциями активации в организме протекают и реакции детоксикации, направленные на обезвреживание высокотоксичных промежуточных соединений. На основании этих фактов была выдвинута гипотеза, состоящая в том, что на инициирующих этапах канцерогенеза краткосрочное введение канцерогена приводит к таким изменениям в активности некоторых ферментов биотрансформации, которые могут сказаться на дальнейшем развитии событий, а именно - трансформации клетки и развитии опухолей. В рамках подобной гипотезы можно предполагать, что чувствительность или резистентность линии к индукции опухолей ОАТ на инициирующей стадии канцерогенеза определяется на уровне его метаболизма, протекающего неодинаково у мышей различных линий. Тогда количество образующегося реактивного метаболита ОАТ будет неодинаково у разных линий, при этом одним из факторов определяющих развитии канцерогенного процесса является баланс между активностями ферментов активации и детоксикации. Частота и длительность введения канцерогена также могут влиять на индуцибельность ферментов биотрансформации. Таким образом, важно провести оценку активности и индуцибельности ферментов как на инициирующей стадии, гак и на более поздних стадиях канцерогенеза.

На основании вышеизложенного, были сформулированы цель и задачи исследования.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы является исследование индуцибельности ферментов биотрансформации ксенобиотиков в печени мышей инбредных линий на инициирующих и более поздних этапах канцерогенеза, вызываемого о-аминоазотолуолом. Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Охарактеризовать индуцирующее действие о-аминоазотолуола на активность цитохромов Р450 подсемейства 1А в печени мышей

2. Используя иммуноферментный анализ с применением моноклональных антител, показать, какие изоформы цитохромов Р450 1А индуцирует о-аминоазотолуол.

3. Изучить активность основных конъюгирующих ферментов 2-й фазы - глутатион-Б-трансферазы и уридиндифосфоглюкуронозил трансферазы - в печени мышей, индуцированных о-аминоазотолуолом.

4. Оценить активность конъюгирующих ферментов 2-й фазы in vivo с использованием тестового субстрата - ацетаминофена.

5. Охарактеризовать активность цитохромов Р450 подсемейства 1А и глутатион-8-трансферазы у исследуемых линий при долговременной индукции о-аминоазотолуолом.

Научная новизна работы.

Впервые исследовано индуцирующее действие о-аминоазотолуола на цитохромы Р-450 печени мышей. Охарактеризована активность ферментов 2-й фазы - г л утати о н - S -тр an с ф ер аз ы и уридиндифосфоглюкуронозил трансферазы - у четырех инбредных линий мышей. Охарактеризовано влияние долговременного многократного введения о-аминоазотолуола на индукцию цитохромов Р450 1А и глутатион-8-трансферазы.

Исследование основных ферментов биотрансформации ксенобиотиков, участвующих в метаболизме о-аминоазотолуола у мышей инбредных линий, позволило сделать ряд заключений о взаимосвязи между чувствительностью или резистентностью отдельных линий к индуцируемому о-аминоазотолуолом гепатоканцерогенезу и активностью ферментов 1-й и 2-й фазы.

Научно-практическое значение работы

Полученные результаты являются новой информацией о ферментах метаболизма ксенобиотиков в печени инбредных линий мышей, подвергавшихся воздействию гепатоканцерогена - о-аминоазотолуола. Результаты выполненного исследования имеют значение для дальнейшего изучения механизмов формирования чувствительности или резистентности к химическому гепатоканцерогенезу.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Независимо от чувствительности к гепатоканцерогенезу, у мышей ПАУ-индуцибельных линий под действием о-аминоазотолуола значительно увеличивается активность цитохромов Р450 1А, у ПАУ-неиндуцибельных линий этого не происходит. 8

2. У мышей ПАУ-индуцибельных линий под действием о-аминоазотолуола индуцируется активность цитозольной глутатион-8-трансферазы.

3. Активность уридиндифосфоглюкуронозил трансферазы не различается среди исследуемых линий мышей и не меняется при введении им о-аминоазотолуола.

4. Длительное многократное введение о-аминоазотолуола увеличивает степень индукции цитохромов Р450 1А в печени мышей линии СВА, по сравнению с однократным введением, что может вносить вклад в развитие канцерогенного процесса

Самостоятельность выполнения работы

Основная часть представленных в работе данных получена лично автором. Результаты по определению уровня экспрессии генов Cyplal и Сур1а2 любезно предоставлены к.б.н. Тимофеевой О.А и к.б.н. Филипенко МЛ. (НИБХ, СО РАН). Автор благодарен академику РАМН д.б.н. Ляховичу В.В. за заинтересованность и поддержку в выполнении данной работы. Автор выражает благодарность к.б.н. Каледину В.И. (ИЦиГ, СО РАН) за предоставленный материал, к.м.н. Вавилину В.А. за помощь в освоении метода ВЭЖХ. Автор выражает глубокую признательность д.б.н. заведующей лабораторией молекулярных механизмов канцерогенеза Л.Ф. Гуляевой за общее руководство, постоянную помощь и поддержку в ходе выполнения данной работы.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Захарова, Людмила Юрьевна

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

Азосоединения широко используются в качестве красителей в ряде отраслей промышленности. Некоторые из них являются канцерогенами для животных и дают положительный ответ в тестах на мутагенность. Показано, что структурно близкие азобензолы обладают различным канцерогенным потенциалом. Поскольку канцерогенный эффект оказывают не исходные соединения, а их метаболиты, то одной из возможных причин таких различий может быть различная степень генотоксичности ультимативных канцерогенов. Показано, что необходимым шагом в активации азобензолов, и в частности ОАТ, является N-гидроксилирование, осуществляемое преимущественно цитохромами Р450 1А (Cheung Y-L., 1994). ОАТ в присутствии микросомальной фракции из печени крыс, индуцированных Арохлором 1254, мощным индуктором CYP1A1, проявлял ярко выраженный мутагенный эффект в тесте Эймса. Это соответствует высокой скорости образования N-гидроксиметаболитов. Цитохром Р450 1А2 конститутивно экспрессируется в печени грызунов, которая является органом-мишенью для ОАТ. Количество этого фермента в печени невелико, следовательно количество образующихся реактивных интермедиатов незначительно. Однако, при повторяющихся воздействиях азобензолов на печень грызунов эти соединения могут селективно индуцировать ту форму Р450, которая осуществляет их N-гидроксилирование, ускоряя таким образом процесс образования генотоксичных интермедиатов. Ранее с использованием классических индукторов ПАУ-типа (БП, MX) было показано, что для экспериментальных животных характерны межлинейные различия в активности цитохромов Р450 1А. Известно также, что наряду с реакциями активации, в организме протекают реакции направленные на обезвреживание и выведение токсичных продуктов метаболизма. Эти данные позволили выдвинуть гипотезу, состоящую в том, что изменения в активности ферментов биотрансформации ксенобиотиков, вызванные краткосрочным введением ОАТ, приводят к изменениям в скорости его метаболизма, и, следовательно, способны повлиять на дальнейшее развитие событий, а именно, на трансформацию клетки и возникновение опухолей. Таким образом, активность ферментов 1-й и 2-й фазы на инициирующем этапе карценогенеза, может повлиять на чувствительность или резистентность линии Вышеизложенные соображения послужили основанием для изучения активности ферментов биотрансформации в печени мышей различных линий. В качестве объекта исследования была выбрана генетическая модель, разработанная к.б.н. В.И. Калединым с сотрудниками (Каледин, 1990), показывающая существование межлинейных различий по чувствительности к индуцируемой ОАТ гепатокарциноме.

Инбредные линии мышей отличаются по чувствительности к канцерогенному действию многих химических соединений, в том числе и по чувствительности к ОАТ. Вызывая опухоли почти у 100% животных одних линий (DD, SWR, СВА), это соединение практически не оказывает влияния на другие линии (CC57BR, C57BL, AKR) (Каледин В.И., 1990, Singer В., 1991). Причем у мышей различных линий частота возникновения опухолей печени, индуцированных ОАТ, не связана с частотой образования спонтанных опухолей (Каледин В.И., 1984). Кроме того, инбредные линии мышей являются удобной моделью для изучения индуцибельности цитохромов Р450 подсемейства 1А, поскольку отличаются по индуцибельности этих цитохромов Р450, ферментов осуществляющих первичное окисление ПАУ, ароматических аминов и ряда других ксенобиотиков. Эти различия обусловлены генетически и связаны с дефектами Ah-рецептора (Nebert D.W., 1989).

3.1 Характеристика Cypla в печени мышей инбредных линий

В описываемых экспериментах в печени мышей четырех инбредных линий была изучена активность и индуцибельность цитохромов Р450 подсемейства 1А, осуществляющих первичное окисление аминоазосоединений. Известно, что ОАТ, как и ряд других производных азобензола, индуцируют в печени крыс ряд изоформ цитохрома Р450 по типу ПАУ (Cheung Y-L., 1994). Для того, чтобы установить оптимальные условия для оценки индукции Cypla, были проведены эксперименты по дозо- и время-зависимой индукции. Эксперименты проводились с использованием мышей линии C57BL, которая является тестовой при оценке индукторов ПАУ-типа. Результаты экспериментов представлены в таблице 2. В экспериментах по дозо-зависимой индукции микросомы выделяли спустя 72 часа после введения ОАТ. Как следует из полученных результатов, при введении ОАТ в дозе 66 и 112,5 мг/кг массы общее содержание Р450 практически не изменялось по сравнению с контролем, а активности ЭРОД и МРОД возрастают в 6,6 и в 6,2 раз, соответственно, при применении дозы 66 мг/кг массы; ив 8,4 и 8,9 раз при использовании дозы 112,5 мг/кг массы. При введении ОАТ в дозе 225 мг/кг массы, общее содержание дитохрома Р450 возрастало по сравнению с контролем в 1,85 раз, а ЭРОД и МРОД активности возрастали в 13,5 и 19,1 раз, соответственно. Таким образом, наибольшее увеличение, как общего содержания, так и активностей Cyplal и Сур1а2 наблюдалось при введении ОАТ в дозе 225 мг/кг массы. В экспериментах по время-зависимой индукции получены следующие результаты. ОАТ вводили в дозе 225 мг/кг массы. При выделении микросом спустя 24 и 48 ч после введения ОАТ, общее содержание Р450 практически не изменялось по сравнению с контролем, а ЭРОД и МРОД активности увеличились в 2,8 и 3,3 раз, соответственно, при выделении микросом спустя 24 ч после введения ОАТ, ив 4,1 и 4,2 раза при выделении микросом спустя 48 ч. Результаты, полученные при выделении микросом спустя 72 ч после введения ОАТ, описаны выше. При выделении микросом спустя 96 ч после введения ОАТ наблюдалось увеличение общего содержания Р450 в 1,6 раза, а ЭРОД и МРОД активности увеличивались в 13,2 и 15,8 раз, соответственно. Для сравнения приведены результаты, полученные при введении классического индуктора CYP1A, БП в дозе 100 мг/кг массы и выделении микросом спустя 72 ч. По сравнению с контрольными животными, при индукции БП, общее содержание Р450 возрастало в 1,4 раза, а активности ЭРОД и МРОД увеличивались в 10,1 и 13,8 раз, соответственно. Исходя из полученных результатов, оптимальными были признаны условия, при которых индукция была максимальна: ОАТ применялся в дозе 225 мг/кг массы, оценка активности Cypla проводилась через 72 ч после введения индуктора. В этих условиях ОАТ являлся индуктором монооксигеназ, не уступающим по активности классическому индуктору - БП (табл.2).

Заключение

При исследовании активности ферментов метаболизма ксенобиотиков в печени инбредных линий мышей при краткосрочной индукции не обнаружено общей закономерности, связанной с чувствительностью или резистентностью линий к ОАТ-индуцируемому гепатоканцерогенезу. Однако, в рамках выдвинутой гипотезы, можно отметить некоторые детали, которые возможно оказывают влияние на чувствительность к ОАТ-индуцируемой гепатоме в отдельных случаях.

1. С учетом сообщений о том, что незначительных количеств Р450 (несколько пикомолей) (Shimada, et.al., 1994) оказывается достаточно для активации проканцерогена, можно предположить, что у мышей линии SWR базальной активности Cypla оказывается достаточно для метаболической активации ОАТ.

2. Отсутствие индукции Cypla и высокая базальная активность TST у мышей линии AKR могут иметь отношение к формированию резистентности этой линии к гепатоканцерогенезу.

3. У мышей резистентной линии C57BL действие ОАТ приводит к уменьшению относительной доли сульфатного конъюгата и к росту доли глутатионового конъюгата в моче, т.е. к усилению детоксикационных процессов, что возможно предотвращает накопление реактивных метаболитов, вызванное усилением активности Сур 1 а.

4. Усиление детоксикационных процессов при краткосрочном введении ОАТ наблюдается и для чувствительной линии СВА. Однако длительная обработка канцерогеном приводит к супериндукции Cypla (индукция в 3 раза больше, чем в случае однократного введения ОАТ), что приводит к значительному увеличению количества реактивных метаболитов. Активность TST изменяется одинаково в обоих случаях. Можно предположить, что нарушение баланса между реакциями активации и детоксикации играет роль в формировании чувствительности к гепатокарциноме для линии СВА.

Отсутствие унитарного механизма формирования чувствительности на стадии инициации канцерогенеза неудивительно, учитывая многостадийность и многофакторность этих процессов. В настоящей работе рассматривается лишь один из аспектов канцерогенеза и не учитывается роль остальных факторов, в

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Захарова, Людмила Юрьевна, Новосибирск

1. Bock K.W., Lilienblum W., Fischer G., Schirmer G., Bock-Hennig B.S., The role ofconjugation reactions in detoxification // Arch toxicol., 1987, v.60, p.22-29. Bock K.W. Roles of UDP-glucuronosyltransferases in chemical carcinogenesis. // Crit

2. Conney A.H. Induction of microsomal enzymes by foreign chemicals and carcinogenesis by polycyclic aromatic hydrocarbons // Cancer Res., 1982, v.42, p.4875-4917

3. Corsol L., Marc N., Wein S., Fautrel A., Guillouzo A., Pineau T. Phenobarbital induces P4501A2hnRNA, mRNA and in the liver of C57BL/6J wild type and aryl hydrocarbon receptor knock-out mice // FEBS Letters, 1998, v.425, p.293-297

4. Xenobiotica, 1992, v.22, p. 1073-1081 Grishanova A.Y., Lyakhovich V.V. // Proc. VII Int. Conf. On Cytochrome P450, (eds/

5. Archacov A.I., Bachmanova G.I.). INCO-TNC, Moscow, 1992, p. 525-527 Guengerich F.P. Human cytochrome P450 enzymes // Life Sci., 1992, v.50, p. 14711478

6. Habig W.H., Pabst M.J., Jacoby W.B. Gluthation S-transferases. The first enzymatic step in mercapturic acid formation. // J. Biol. Chem., 1974, v. 249, p. 17301739

7. Hlavica P., Golly I., Lehnerer M., Shulze J. Primary aromatic amines: their Noxydative bioactivation // Hum.Exp. Toxicol., 1997, v. 16, p.441-448 Hogenesch J.B., Chan W.K., Jackiw V.H., Brown C., Gu Y.-Z., Pray-Grant M.,

8. Perdew G.H., Brandfield C.A. // J. Biol. Chem., 1997, v.272, p.8581-8593 IARC. Cancer Causes. Occurence and Control. // Tomatis I. (Ed.) IARC Scientific

9. Free Radic Res., 1998, v.28, p.647-658. Kimura S, Kawabe M, Ward J.M., Morishima H., Kadlubar F.F., Hammons G.J., Femandez-Salguero P.,Conzalez F.J. 4-aminobiphenyl-inducedhepatocarcinogenesis in mice. //Carcinogenesis, 1999, v.9, p.1825-1830

10. D.W. The UDP glycosyltransferase gene superfamily: recommended nomenclature update based on evolutionary divergence // Pharmacogenetics, 1997, v.7, p.255-269.

11. MacLeod S, Sinha R, Kadlubar F.F, Lang N.P. Polymorphisms of CYP1A1 and GSTM1 influence the in vivo function of CYP1A2 // Mutat Res., 1997, v. 376, p.135-142

12. Mannerviclc В., Awasthj Y.C., Board P.G. Nomenclature for human gluthation transferases //Biochen. J., 1992, v.282, p.305-308

13. McKinnon R.A., McManus M.E.,//Princess Takamatsu Symp., 1995, v. 23, p. 4553

14. Miller J.A. Carcinogenesis by chemicals. An overview СНА Glowes memorial lecture// Cancer Res. - 1970. - Vol. 60. - P. 559-576.

15. Miller J.A., Miller E.C. Carcinogenic aminoazodyes // Adv. Cancer Res., 1953, v.l, p.339-353

16. Minchin F.F. N- and O-acetylation of aromatic and heterocyclic amine carcinogens by human monomorphic and polymorphic acetyltransferases expressed in COS-1 cells // Biochem. Biophys. Res. Commun. 199 2. - Vol. 185. - P. 839-844.

17. Morgeensem R., Wallin H., DePierre J.W. Mechanisms of activation of microsomalgluthation transferase // In " Gluthation S-transferases and carcinogenesis"(Mantle T.J., Pickett C.B., Hayes J.D. eds) Taylor&Francis, London, 1987

18. Munzel P.A., Lehmkoster Т., Brack M. Aryl hydrocarbon receptor-inducible or constitutive expression of human UDP-glucuronosyltransferase //Arch biochem bioph., 1998, v.350, p.72-78.

19. Nebert D.W. The Ah locus: genetic differences in toxicity, cancer, mutation, and birth defects.// Crit.Rev. Toxicol., 1989, v.20, p.137-152

20. Nebert D.W., Gelboin H.V., The in vivo and in vitro induction of aryl hydrocarbon hydroxylase in mammalian cells of different species, tissues, strains, and developmental and hormonal states. // Arch Biochem Biophys., 1969, v. 134, p.76-89.

21. Nebert D.W., Gonzales F.J. P450 genes: structure, evolution and regulation // Ann. Rev. Biochem. 1987, v.56, p.945-993

22. Parkinson A. Biotransformation of xenobiotics // Casarett and Doull's Toxicology. //

23. Eds. Klaassen C.D, 1996, p. 114-184 Paulson G.D, Caldwell J, Hutson D.H, Menn J.J. (eds.) Xenobiotic Conjugation

24. Chemistry// Wachington, D.C: American Chemical Society, 1986, p.1-358 Phelan D.M, Brackney W.R, Denison M.S. The Ah-receptor can bind ligand in the absence of receptor-associated heat-shock protein 90 // Arch. Biochem. Biophys, 1998, v.353, p.47-54

25. Thompson G.H., Wu R.W., Felton J.S. Introduction of cytochrome P450 1A2 metabolic capability into cell lines genetically matched for DNA repair proficiency/deficiency // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. - Vol. 88. - P. 3827-3831.

26. Vatsis K.P., Weber W.W., Bell D.A. Nomenclature for N-acetiltransferases. //

27. Chem., 1997, v.378,p.69616-69621 Whitlock J.P. Induction of Cytochrome P450 1A1 // Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol.,1999, v.39, p. 103-125 Wild D, Feser W, Michel S, Lord H.L., Josephy P.D., // Carcinogenesis, 1995, v. 16, p. 643-648

28. Windmill K.F., McKinnen R.A., Zhu X, Gaedigk A, Grant D.M., Mc Manus M.E. The role of xenobiotic metabolizing enzymes in arylaminetoxicity and