Молекулярно-клеточные и морфологические особенности раннего фиброзирования легких мышей линии C57Bl/6 при гриппе A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05

Аникина, Аурика Георгиевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Молекулярно-клеточные и морфологические особенности раннего фиброзирования легких мышей линии C57Bl/6 при гриппе A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05
ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Молекулярно-клеточные и морфологические особенности раннего фиброзирования легких мышей линии C57Bl/6 при гриппе A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05"

На правах рукописи

АНИКИНА АУРИКА ГЕОРГИЕВНА

МОЛЕКУЛЯРНО-КЛЕТОЧНЫЕ И МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАННЕГО ФИБРОЗИРОВАНИЯ ЛЕГКИХ МЫШЕЙ ЛИНИИ С57В1/6 ПРИ ГРИППЕ А/Н5М A/GOOSE/KRASNOOZERSKOYE/627/OS

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология 14.03.02 - патологическая анатомия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 5 ОКТ 2012

Новосибирск - 2012

005053953

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научный центр клинической и экспериментальной медицины» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (Новосибирск)

Научные руководители: Заслуженный деятель науки РФ, академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Шкурупий Вячеслав Алексеевич

кандидат медицинских наук

Потапова Оксана Валентиновна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор кафедры физиологии, факультета естественных наук, ФГБОУ ВПО Новосибирского государственного университета

доктор медицинских наук, профессор кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии ГБОУ ВПО Новосибирского государственного медицинского университета

Обухова Лидия Александровна

Сажнна Татьяна Вениаминовна

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное учреждение НИИ Региональной патологии и патоморфологин СО РАМН (Новосибирск)

Защита состоится «23» октября 2012 г. в «12-00» часов на заседании диссертационного совета Д.001.048.01 при ФГБУ «НЦКЭМ» СО РАМН по адресу: ул. Тимакова, 2; г. Новосибирск, 630117; тел/факс 8(383)333-64-56

С диссертацией можно ознакомься в библиотеке ФГБУ «НЦКЭМ» СО РАМН

Автореферат разослан сентября 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, д.б.н.

Пальчикова Н.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Грипп относят к группе острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ), которые занимают одно из первых мест в структуре инфекционных заболеваний. По данным ВОЗ, ежегодно в мире болеет гриппом от 3 до 5 млн. человек, эпидемии гриппа ежегодно уносят жизни 250-500 тыс. человек (ВОЗ; Слепушкин А.Н., 2003). Заболеваемость гриппом высока во всех возрастных группах. Смертность от гриппа отчетливо приходится на лиц пожилого возраста, наиболее часто связанная с обострением имевшихся у пациента заболеваний (сердечно-сосудистых, респираторных, болезней обмена) (Семенов Б.Ф., Покровский В.И., 2004; Малый В.П. и др., 2007; Салтыкова ТС 2008- Bhat N. et al., 2005).

Основные эпидемии гриппа XX века были вызваны вирусами гриппа птиц модифицированных путем генетической реассортации между штаммами гриппа птиц и людей (пандемии 1957 и 1968 гг.) или адаптации птичьего штамма вируса гриппа к человеку («испанка» 1918-1919 гг.) (Claas Е.С., 2000).

Грипп пгиц в XXI веке приобретает значение мировой проблемы, поскольку вирус гриппа преодолел межвидовые барьеры и обрел способность вызывать заболевание у человека, как это случилось в 1997 г. в Гонконге (Claas Е.С. et al, 1998; Osterhaus A.D. et al., 2002), в декабре 2003 г. в Юго-Восточной Азии, вызвав вспышки заболевания в разных странах (Бектимиров Т.А., 2005; Львов Д.К. и др., 2006; Соминина А.А. и др., 2006; Tarantola A. et al., 2010). В дальнейшем оказалось, что вирусы гриппа A/H5N1, выделенные от заболевших в 2004 г., подверглись дополнительной мутации. Большая часть мутировавших вирусов оказались резистентными к ремантадину (Тимченко В.Н., Чернова Т.М., 2008). В 2005 г. и первом квартале 2006 г. зарегистрированы заболевания гриппом A/H5N1 среди перелетных и домашних птиц на территории РФ (Ющук Н.Д. и др., 2007).

По данным ВОЗ на 29 декабря 2010 года заболеваемость человека гриппом птиц зарегистрирована в 58 странах мира, а общее количество вирусологически подтверждённых случаев заболевания людей, вызванного штаммами субпша A/H5N1, составило 512, из которых 304 (60%) закончились летальным исходом, при этом среди детей до 15 лег летальность при гриппе A/H5N1 достигает 89% (ВОЗ).

В ходе исследований было отмечено, что у инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 людей и лабораторных животных развивается острый респираторный дистресс-синдром и ранний интерстициальный фиброз легких (Шестопалова JI.B. и др., 2008; То K.F., et al., 2001; Kortweg С., Gu J. et al., 2008; Qiao J. et al., 2009). Фиброз легких, развивающийся в столь короткие сроки и не характерный для острых инфекций, является одним из осложнений, приводящих к инвалидизации и ведущим к смерти больных. Феномен раннего (в остром периоде инфекционного заболевания) фиброза представляет большой интерес с позиций общей патологии, особенно при вирусной инфекции, поскольку патогенез его не изучен. Имеются лишь отдельные сообщения феноменологического характера о раннем фиброзе при инфицировании вирусом гриппа A/H5N1. Его высокая потенциальная опасность для человека, резистентность к немногочисленным противовирусным препаратам и плохо изученный патогенез предполагает актуальность дальнейшего детального изучения патогенеза данного заболевания. В частности, большой интерес представляет ранний фиброз легких - одно из важнейших патогенетических факторов, обусловливающих высокую летальность в связи с развитием острой легочной, а затем сердечной недостаточности у инфицированных людей и животных.

Цель исследования. Исследовать молекулярно-клеточные и патоморфологические особенности фиброгенеза легких после инфицирования вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 мышей лилии С57В1/6.

Задачи исследования:

1. Методом флуоресцентной микроскопии и с помощью иммуногистохимического анализа изучить топологию вируса.

2 Изучил, общие патоморфологические изменения в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных штаммом вируса гриппа А/Н5Ы1 Л/гоо5е/Кга5поогег5коуе/627/05

в процессе развития заболевания. __...

3 Исследовать масштабы фиброза в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных штаммом вируса гриппа А/Н5Ш А/8оо5е/Кта5поогеп;коуе/627/05 в разные

периоды инфекционного процесса.

4 Изучить содержание различных типов коллагена в легких мышеи линии С57В1/6, инфицированных штаммом вируса гриппа А/Н5М1 АУёоозе/Кта5поо2ег5коуе/627/05

в разные периоды инфекционного процесса.

5 Изучить изменения количества фибробластов, оценить их пролиферативную, «фибропластическую акгамюсш» в легких мышей шшии С57В1/6, инфицированных штаммом вируса гриппа А/Н5Щ Л/еоо5е/Кга3поо2ег5коуе/627/05 в разные периоды

инфекционного процесса.

6 Изучить особенности экспрессии факторов роста и их рецепторов, провоспалигельных цигокинов, матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов в патогенезе раннего фиброза легких у мышей линии С57В1/6, инфицированных штаммом вируса гриппа ЛЛ15Ы1 А/ЕОО5е/Кга5Поогеп;коуе/627/05 в разные периоды инфекционного процесса.

Научная новизна. Впервые в эксперименте исследованы изменения и вероятные механизмы нарушения и восстановления структурно-функционального гомеостаза в легких в целом и системе соединительной ткани (внеклеточного матрикса) легких мышеи» С57В1/6 после их инфицирования высокопатогенным штаммом вируса гриппа А/Н5Ш А/воо5е/Кга!тоо2ег5коуе/627/05. Показано, что характер деструктивных процессов помимо цитопатаческих эффектов вируса детерминирован вторично развивающимися патологическими структурно-функциональными изменениями, детерминирующими и усиливающими состояние гипоксии клеток и структур легких и в целом в организме.

Впервые показано, что инфицирование животных этим вирусом сопряжено с инфицированием их фибробластов * макрофагов. При этом получены свидетельства того, что инфицирование этих клеток вирусом А/Н5Ш А/Еоо8е/Кга8поо2ег8коуе/627/05 является трштерным механизмом для «запуска» процессов пролиферации фибробластов, увеличения юс численности, экспрессии ММРз и их ингибиторов (ММР-2, ММР-9, ММР-10, Т1МР-2) фибробластами и макрофагами легких, регулирующих процессы обмена структур внеклеточного матрикса, поскольку изменения величин, характеризующих эта процессы, не имели очевидной корреляционной зависимости от уменьшения количества инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ш А/яоо5е/Кгаяюогег8коуе/627/05 фибробластов.

Впервые показано, что в рассматриваемой экспериментальной модели раннее фиброзирование легких детерминировано дисрегуляцией, вероятно, неспецифических механизмов репаративной ОЬаШисю) регенерации и механизмов гомеостазирования в системе соединительной ткани, возможно в связи с продолжающейся персистенцией вируса в исследованных и иных клетках организма. Впервые показано, что усиление фибробластами легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ш А/§оо8е/Кгаяюогег5коуе/627/05 экспрессии провоспалигельных цигокинов (ЮТ-а и 1Ь-6) сопряжено с усилением процесса воспаления и в итоге усилением фиброзирования легких.

Научно-практическая значимость. Полученные данные свидетельствуют о том, что основным фактором, индуцирующим и поддерживающим раннее фиброзирование в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ш А/яоозе/Кта5поо2еп;коуе/627/05 является инфицирование фибробластов и продолжающееся персисгирование в них и макрофагах вируса, приводящее к дискоординации процессов гомеостазирования в системе соединительной ткани легких. Эти данные указывают на необходимость разработки средств профилактики проникновения вируса гриппа А/Н5Ш А^оо5е/Кга!тоогегекоуе/627/05 в клетки, в частности фибробласты и макрофаги или разработку средств эффективного уничтожения вирусов. Полученные результаты уточняют

ряд патогенетических механизмов повреждения легких и развития одного из основных осложнений, в частности раннего фиброза легких, дополняют традиционные представления об этапах развития воспаления, в частности его репаративной фазы при инфицировании млекопитающих вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05.

Работа выполнена в рамках Федеральной целевой научно-технической программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России на 2009-2013 гг.», госконгракт № 02.740.11.0709.

Положения, выносимые на защиту:

1. Инфицирование мышей линии С57В1/6 вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Kiasnoozerskoye/627/05 сопряжено с персистированием его в фибробласгах и макрофагах, развитием деструктивных процессов в легких, сопряженных с развитием вторичной острой гипоксии, обусловленной как дыхательной недостаточностью, так и формирующимся капиллярно-паренхиматозным блоком, препятствующим газообмену. Это является триггерным фактором для формирования патогенетической цепи дисрегуляторных и метаболических изменений в системе соединительной ткани легких, а продолжающаяся дискоординация процессов гомеостазирования в ней поддерживается персистенцией вируса в этих клетках.

2. Процессы раннего фиброзирования индуцированы вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Kiasnoozerskoye/627/05 и поддерживаются развившейся гипоксией, ранней и активной пролиферацией фибробластов легких, их дифференцированием и последующим увеличенным синтезом структур внеклеточного матрикса: коллагеновых, ретикулярных и эластических волокон, коллагенов I, III, IV и VI типов.

3. Процесс фиброзирования легких мышей линии C57BI/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 регулируется ростовыми факторами FGF и EGF и их рецепторами, экспрессируемыми как самими фибробластами, так и макрофагами. Фиброз как процесс неполноценной репарации легких (substitucio) развивается после повреждения, а также в ответ на острую гипоксию и обусловлен дискоординацией процессов гомеостазирования в системе соединительной ткани в связи с недостаточной активностью MMPs (ММР-2, ММР-9, ММР-10), ограничиваемых высокой экспрессией TIMP-2. Экспрессия фибробластами провоспалительных цитокинов TNF-a и IL-6 усугубляет фиброзирование легких через механизм стимуляции пролиферации фибробластов и продуцирование ими структур внеклеточного матрикса.

Внедрение результатов работы в практику. Основные положения работы внедрены в практику преподавания на кафедре патологической анатомии ГБОУ ВПО НГМУ Минздрав России в раздел «Воспаление», «Инфекционные болезни», «Регенерация».

Апробация работы. Материалы исследований доложены на IV Международной Научно-практической Конференции молодых ученых «Клинические и теоретические аспекты современной медицины» (Москва, 2012).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 научные работы, из них 2 в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ для публикации материалов диссертационных исследований.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитированной литературы: 65 отечественных и 212 зарубежных источников. Работа изложена «а 143 страницах машинописного текста, содержит 18 таблиц, 33 рисунка. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В качестве инфекционного агента был выбран вирус гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05, выделенный из легкого гуся, погибшего во время вспышки гриппа птиц в селе Краснозерское Новосибирской области в сентябре 2005 года.

Экспериментальные работы с вирусами гриппа A/H5N1 были проведены в лаборатории отдела зоонозных инфекций и гриппа ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» (Новосибирск) в соответствии с санитарными правилами безопасности работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами (СП 1.2.731 от 25.01.05).

Работа выполнена на 90 мышах-самцах линии С57В1/6, в возрасте 2 месяцев с массой тела 20-25 г (питомник лабораторных животных НИИ Клшщческой Иммунологии СО РАМН) Животных содержали в стандартных условиях со свободным доступом к воде и пище Перед проведением эксперимента их адаптировали к условиям содержания. Исследование проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. № 755), с соблюдением международных принципов Хельсинскои декларации. Учитывая, что в популяции млекопитающих и человека, в частности, основной путь передачи вируса гриппа А является воздушно-капельный, то инфицирование мышей проводили интраназально дозой равной 5 МЛД50.

Для проведения эксперимента было сформировано 3 подопытных группы животных:

Первая группа - кмггрольная - была представлена 20 интактными мышами линии С57В1/6.

Вторая группа состояла из 50 мышей, которых инфицировали вирусом гриппа A/H5N1 a/goose/Krasnoozerskoye/627/05.

Третья группа состояла из 20 мышей, которых инфицировали вирусом гриппа A/H5NI A/goose/Krasnoozerskoye/627/05, у которых изучали патогенносгь штамма по показателю летальности животных, выраженного в процентах.

Для исследования биологического материала экспериментальных животных первой и второй групп выводили из эксперимента путем дислокации позвонков в шейном отделе. Сбор материала проводили на 1, 3, 6, 10 и 14 сутки после инфицирования. Объектом

исследования служили легкие.

Исследование выполнено с использованием оборудования ЦКП ФГБУ «НЦКЭМ» СО РАМН «современные оптические системы».

Для светооптического исследования, полученный материал, после фиксации в 10% растворе нейтрального формалина, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и ксилолов и заключали в синтетическую парафиновую смесь «HISTOMDC» (BioVitrum, Россия). Срезы изготавливали на микротоме («MICROM», Германия) толщиной 3,5 мкм. Окраску проводили по стандартной методике гематоксилином и эозином (обзорная), пикрофуксином по методу ван Гизон азотнокислым серебром, орсеином с целью оценки объемной плотности волокнистой соедшштельной ткани (дифференциация коллагеновых, ретикулярных и эластических волокон).

Проводили ИГХ анализ с использованием непрямого АЕС (стрепгавидин-пероксидазного) метода для оценки: объемной плотности эндогенного коллагена в легких; пролиферативной, функциональной и профибротической активности фибробластов и легочных макрофагов, исследования численной плотности клеток, экспрессирующих ростовые факторы и их рецепторы, провоспалительные цитохины, матриксные металлопротеиназы и их ингибиторы с использованием специфических первичных антител.

Для проведения ИГХ исследования срезы легких подвергали депарафшгазации, регидратации, демаксировке антигенов в микроволновой печи мощностью 700W, в течение 20-25 минут. Затем, после однократного промывания в дистиллированной воде и фосфатном буфере (PBS), производили блокирование эндогенной пероксидазы в течение 5 минут. Экспозицию с первичными антителами проводили согласно инструкциям производителей. Затем срезы инкубировали с HRP-коньюгатом и вторичными антителами (система детекции «Spring Bioscience»), далее обрабатывали DAB-субстратом и дополнительно докрашивали гематоксилином Майера. Затем проводили по спиртам возрастающей концентрации и ксилолам, покрывали синтетической покровной средой «Bio Mount» (Bio Vitnim, Россия) и заключали под покровное стекло.

Топологию вируса в фибробластах определяли методом иммунофлуорисценщш -непрямого анализа с использованием первичных антител, меченых флуорохромом FITC, на антиген вируса Influenza A («Abcam»), с использованием стандартной методики приготовления препаратов с помощью конфокального лазерно-сканирующего микроскопа LSM 710 (Carl Zeiss). В качестве контроля использовали натизные образцы, которые предварительно депарафинизировали стандартньм методом.

Анализ гистологических препаратов проводили на микроскопе Axiolmager Al с фотокамерой AxioCam MRc (Carl Zeiss). Морфометрию структурных элементов тканей осуществляли с помощью окулярной сетки из 100 точек площадью 3,64x10" мкм2 (при определении численной (Nai) и/или объемной (Vv) плотности структур) (Автандилов, 2000) и инструментов программы AxioVision (rel. 4.8.2).

В ходе данной работы определяли объемную плотность (Vv) фиброзной ткани: коллагеновых, эластических и ретикулярных волокон. Оценивали численную плотность (Nai) фибробластов, PCNA+фибробластов, фибробластов, экспрессирующих антиген вируса Influenza А. Изучали численную плотность (Nai) клеток легких, экспрессирующих исследуемые маркеры: MMPs, Т1МР-2, FGF, FGFR, EGF, EGFR. Расчет «фибропластической активности» проводили по соотношению объемной плотности коллагеновых волокон к численной плотности фибробластов, то есть по количеству коллагена приходящегося на один фибробласт (Шкурупий В.А., 2007) в закрытой тестовой системе.

Статистический анализ результатов выполняли с использованием пакета статистического анализа Microsoft Office Excel 2007 и стандартного пакета программ STATISTICA v.6. Определяли средние арифметические величины (М), стандартную ошибку средней величины (m). Для выявления вероятности достоверности различий сравниваемых средних величин применяли t-критерий Стъюдента. Статистически значимыми считали различия при 5% уровне значимости (р<0,05). Также проводили корреляционный анат з по Пирсону.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Летальность и средняя продолжительность жизни мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа Л/Н5Ы1 Л/£ОО1е/Кга$поогег$коус/627/05

При исследовании патогенности вируса гриппа А/Н5М1 А^оо5е/Кга5поогег8коуе/627/05 для мышей линии С57В1/6 использованного в дозе 5 МЛД50, наблюдали гибель животных, начиная с 10 суток после инфицирования. По окончании срока наблюдения (14 сутки) летальность инфицированных животных составила 70% при показателе средней продолжительности жизни животных - 12,3 суток. Гибели интактных мышей контрольной группы не наблюдали. Полученные данные подтверждают высокую патогешюсть вируса гриппа А/Н5Ш А^оозе/Кга5Поогег5коуе/627/05 для млекопитающих.

Структурные изменения в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гршта А/115 N1 A/gоозе/Кга5поо2ег$коуе/627/05

При гистологическом исследовании легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ш А/'5ОО5е/Кга5поо2егекое/627/05 обнаружили деструктивные процессы, представленные: некрозами, зонами ателектазов и острой эмфиземы, а также кровоизлияниями, отеком и инфильтратами (см. табл. 1), что также было обнаружено рядом других авторов у беспородных мышеи и хорьков при иных инфицирующих дозах с использованием различных штаммов вируса гриппа А/Н5Гм'1 (Шестог.алова Л.В. и др., 2008; Во<1е\¥е5 Я. й а1., 2011; Рик^Ы М. с1 а1„ 2011).

Показатель объемной плотности патоморфологических изменений (некрозы, ателектазы, эмфизема) был максимальным на 10 сутки эксперимента и составлял около 60% легких инфицированных мышей. К 14 суткам величина исследуемого показате:1я составляла почти 30% от объема легкого (табл. 1). Величина объемной плотности кровоизлияний была

максимальной на 6 сутки и составляла более 30% от общего объема легких, с последующим снижением на 10% на 10 сутки. К 14 суткам показатель объемной плотности кровоизлияний составлял 10% (см. табл. 1). На 10 сутки инфекционного процесса показатель объемной плотности зон отека был максимальным и составлял более 60%, с последующим снижением на 14 сутки, что соответствовало 30% от общего объема легких (см. табл. 1). Кроме того, деструктивные изменения в легких инфицированных мышей были представлены инфильтратами, которые уже в 1 сутки эксперимента составляли более 20% от общей площади легочной ткани. Максимальным показатель объемной площади инфильтратов был на 6 сутки и составлял более 30%. На более поздних сроках исследования наблюдали снижение показателя объемной плотности инфильтратов на 10% на 10 сутки и на 17,5% на 14 сутки, относительно 6 суток после инфицирования (см. табл. 1). Клеточный состав инфильтратов был представлен макрофагами, лимфоцитами и фибробластами.

Таблица 1

Результаты исследования патомдрфологических изменений в легких мышей после инфицировании вирусом гриппа А/Н5М1 А/еоо5е/Кга5Поогегекоуе/б27/05 (М±т)_

Объект и параметры исследования Сутки после инфицирования Мыши линии С57В1/6

Ингактные Инфицированные

1 16,6±1,42а

Объемная плотность 3 20,3±2,05"!

деструктивных 6 0,3±0,1 59,2±2,54аС|

изменений (Уу), % 10 59,9± 1,62"

14 27,7±1,44а"

1 17,35±1,61а

Объемная плотность кровоизлияний (Уу), % 3 24,3±2,056аЬ

6 5,6±0,8 31,7±2,52аЬ

10 20,2±2,67аЬ

14 10,5±0,72ав

1 15,4±1,15а

Объемная плотность зон отека (Уу), % 3 24,8±1,63аЬ

6 0,2±0,1 39,2±1,48""

10 63,5±0,85аЬ

14 29,4±1,23а0

1 22,0±2,25а

Объемная плотность инфильтратов (Уу), % 3 29,6±3,53аЬ

6 4,1±0,06 33,8±3,24а

10 21,4±3,35а|>

14 16,5±1,28аЬ

Примечания:

«а» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров инфицированных мышей по сравнению с аналогичными показателями у мышей в контрольной группе;

«Ь» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров с предыдущим периодом исследования.

Патоморфологические изменения - некроз, отек, эмфизема.

Приведешше данные в ряде случаев учитывают объемную плотность (Уу) патоморфологических изменений, топологически идентифицируемых в одних и тех же структурах при микроскопическом и морфометрическом исследовании. Например -ателектазы и инфильтраты, зоны некрозов с зонами клеточной воспалительной инфильтрации и отека.

Результаты исследования компонентов внеклеточного матрикса (коллагеновых, эластических и ретикулярных волокон) легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05

В работах ряда авторов помимо деструктивных изменений, в легких инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 животных, обнаруживали развитие быстро прогрессирующего раннего фиброза (Шестопалова Л.В. и др., 2008; Малкова Е.М. и др., 2009; Qiao J. et al., 2009).

При гистологическом исследовании образцов легких мышей линии C57BI/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 на 1-3 сутки эксперимента наблюдали увеличение объемной плотности коллагеновых волокон, обнаруженных преимущественно периваскулярно и перибронхиально. Начиная с 6 суток после инфицирования, коллагеновые волокна появлялись в зонах инфильтратов и ателектазов.

Уже в 1 сутки после инфицирования показатель объемной плотности коллагеновых волокон был больше по сравнению с величиной аналогичного показателя в группе контроля в 2 раза. В последующие периоды эксперимента наблюдали постепенное нарастание величины показателя объемной плотности коллагеновых волокон, достигающего максимума к 14 суткам, что составляло увеличение в 7 раз по сравнению с 1 сутками инфекционного процесса (табл. 2).

Таблица 2

Результаты морфометрического исследования содержания волокнистой соединительной ткани в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5М (М±т)__

Объект и параметры исследования Сутки после инфицирования Мыши линии С57В1/6

Интактные Инфицированные

Коллагеновые волокна (Уу), % 1 0,91±0,58с 4,6±1,29ас

3 6,Ш,77*

6 10,4±1,08,Ьс

10 12,6±0,86аЬс

14 16,2±1,24аЬс

Эластические волокна (Уу), % 1 1,6±0,45с 7,4±0,71"

3 16,3±1,25аЬс

6 17,6±1,01ас

10 23,5±1,57аЬс

14 22,4±1,16"с

Ретикулярные волокна (Уу), % 1 6,1±1,4Г 15,6±2,49™

3 20,142,76™

6 37,7±2,974Ьс

10 34,3±3,36а£

14 19,5±1,18аЬс

Примечания:

«Ь» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров с предыдущим периодом исследования;

«с» - достоверность отличия величии рассматриваемых параметров между разными типами волокон по периодам исследования.

Ретикулярные и эластические волокна при исследовании легких инфицированных животных обнаруживали как в интерспщии, так и в зонах ателектазов и воспалительных инфильтратов во все периоды патологического процесса.

Величина объемной плотности ретикулярных волокон была больше в 2,6 раза в 1 сутки инфекционного процесса по сравнению с величиной аналогичного показателя в группе контроля. Максимального значения величина исследуемого показателя достигала на 6 сутки, то есть в 2,4 раза больше по сравнению с таковым в 1 сутки эксперимента. К 14 суткам инфекционного процесса наблюдали снижение величины показателя объемной плотности ретикулярных волокон з 2 раза по сравнению с 6 сутками эксперимента (см. табл. 2).

При исследовании эластических волокон легких инфицированных мышеи, обнаружили, что показатель их объемной плотности был выше в 4,6 раза по сравнению с величиной аналогичного показателя в группе контроля. Максимальную величину объемной плотности эластических волокон наблюдали на 10 суши, увеличение по сравнению с величиной аналогичного показателя в 1 сутки патологического процесса составило более чем

в Зраза (см. табл. 2). „„,„„ „

Как следует из представленных данных, суммарный объем ретикулярных и эластических волокон на 3 сутки патологического процесса составил более 36/о легких, тогда как коллагеновых волокон - около 7% (рис. 1). К 10 суткам процент «молод™» соединительной ткани - 58%, объем же коллагеновых волокон составил более 12/» (см.

табл. 2).

При оценке соотношения величин показателей объемной плотности «молодой» и «зрелой» волокнистой соединительной ткани наблюдали постепенное уменьшение соотношения величин исследуемых показателей во все периоды инфекционного процесса (см. рис. 1).

;50

» 40

130

¡20

„и

контроль

1 сутки . 3 сутки 6 сутки 10 сутки Сроки исследования (сутки)

О "Зрелая" СТ Я "Молодая" СТ

14 сутки

Рис 1 Результаты исследования соотношения величин объемных плотностей «зрелой» (коллагеновые волокна) и «молодой» волокнистой соединительной ткани (эластические и ретикулярные волокна) в легких мышей, инфицированных вирусом гриппа А/Н5М1 А,^оозе/Кга8поо2ег5коуе/627/05 в динамике заболевания.

Так у интактных животных соотношение коллагеновых волокон к ретикулярным и эластическим составляло 7,85. К 1 суткам эксперимента наблюдали увеличение величины соотношения изучаемых показателей в 1,4 раза. В последующем, с 1 по 14 сутки величина соотношения «молодой» соединительной ткани к «зрелой» уменьшилась почти в 4 раза.

Результаты изучения различных типов коллагена легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05

Составной частью внеклеточного матрикса соединительной ткани являются фибриллярные структуры, которые в большей степени представлены коллагеновыми белками - коллагенами I, III, IV типов, создающими каркас всех легочных структурных образований (Суханова Л.А., 2010; Suki В., Bates J.H., 2008).

При гриппе A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 в легких экспериментальных животных уже на ранних сроках инфекционного процесса в шггерстиции легких наблюдали накопление всех исследуемых типов коллагена с преобладанием коллагена III типа. На 1-3 сутки после инфицирования коллаген I и III типа обнаруживали преимущественно в межальвеолярных перегородках, периваскулярно и перибронхиально. Начиная с 6 суток инфекционного процесса, данные типы коллагена регистрировали также в зонах инфильтрации и ателектазов.

При ИГХ исследовании в легких экспериментальных животных наблюдали утолщение базальных мембран за счет увеличишя в них содержшшя коллагена IV типа во все периоды инфекционного процесса. Также отмечали его увеличение вокруг бронхов и сосудов. Коллаген VI типа преобладал в межальвеолярных перегородках, а также в инфильтратах и зонах ателектазов, начиная с 3 суток инфекционного процесса.

Показатель объемной плотности коллагена I типа в 1 сутки после инфицирования был больше почти в 2 раза относительно аналогичного показателя в группе контроля. В последующие периоды инфекционного процесса наблюдали постепенное увеличение показателя объемной плотности коллагена I типа, с максимальным его значением на 10 сутки, что в 1,6 раза больше, чем в 1 сутки заболевания. К 14 суткам отмечали стабилизацию процесса синтеза коллагена I типа (табл. 3).

Величина объемной плотности коллагена III типа была выше в 1 сутки инфекционного процесса в 2,3 раза относительно аналогичного показателя в группе контроля, достигая максимальной величины на 6 сутки после инфицирования, что в 1,5 раза больше, чем в 1 сутки заболевания. В последующие сроки (10 и 14 сутки) величина объемной плотности коллагена III типа постепенно снижалась, достигая величины таковой в 1 сутки инфекционного процесса (см. табл. 3).

В легких инфицировашнлх животных величина показателя объемной плотности коллагена IV типа была больше к 1 суткам заболевания в 1,5 раза по сравнению с величиной аналогичного показателя у мышей контрольной группы. На 3 и 6 сутки после инфицирования наблюдали постепенное увеличение исследуемого показателя, его величина была максимальной на 6 сутки после инфицирования, увеличиваясь в 1,3 раза по сравнению с его величиной в 1 сутки эксперимента. На 10 и 14 сутки наблюдали снижение всличшгы объемной плотности коллагена IV типа (см. табл. 3).

При исследовании объемной плотнссти коллагена VI типа в легких мышей, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 было обнаружено, что величина его объемной плотности была больше почти в 1,5 раза по сравнению с величиной аналогичного показателя в группе контроля, с последующей стабилизацией процесса вплоть до 10 суток, когда произошло увеличение величины исследуемого показателя в 1,4 раза по сравнению с его величиной в 1 сутки инфекционного процесса. На 14 сутки заболевания величина объемной плотности VI типа коллагена достоверно не отличалась относительно таковой в предыдущий период заболевания (см. табл. 3).

Таблица 3

Результаты исследования объемной плотности коллагенов различных типов в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5М

А/аоо5е/Кга5поогег5коуе/627/05 (М±т)

Объект и параметры исследования Сутки после инфицирования Мыши линии С57В1/6

Интактные Инфицированные

1 12,1±1,4Р

3 13,3±1,12*

Коллаген 1 (Уу), % 6 ' 6,2±0,92 16,1±1,34,ь

10 19,5±1,76"ь

14 17,9±1,21*

1 14,3±1,32"

3 16,45±1,40*

Коллаген III (Уу), % 6 6,2±0,74 20,6*1,35'"

10 15,5±0,92*ъ

14 12,7±0,83"ь

1 12,4±1,16*

3 12,7±0,91*

Коллаген IV (Уу), % 6 8,4±0,45 1б,5±1,10"ь

10 16,2±1,25"

14 14,8±0,90"

1 7,4±1,22"

3 8,8±1,35'

Коллаген VI (Уу), % 6 5,1±0,84 7,8±0,94*

10 10,2±1,30аЬ

14 12,2±1,72"

Примечания:

«а» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров инфицированных мышей по сравнению с аналогичными показателями у мьпней в контрольной группе;

«Ь» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров с предыдущим периодом исследования.

Результаты изучения структурно-функциональной активности фибробластов легких мышей линии С57В1/6 в динамике инфекционного процесса

При микроскопическом исследовании легких инфицированных мышей увеличение количества фибробластов наблюдали периваскулярно и перибронхиалыю, начиная с 3 суток после инфицирования - в инфильтратах, состоящих из лимфоцитов, макрофагов и в утолщенных межальвеолярных перегородках.

Согласно результатам ИГХ исследования легких мышей, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ш А/§оо8е/Кгаетоогег5коуе/627/05, в 1 сутки заболевания величина численной плотности фибробластов по сравнению с таковой у интактных животных была большей почти в 6 раз (табл. 4). В последующем величина этого показателя продолжала увеличиваться, достигая максимального значения на 10 сутки после инфицирования, что в 1,7 раза больше по сравнению с величиной того же показателя в 1 сутки заболевания. На 14 сутки инфекционного процесса наблюдали снижение величины численной плотности фибробластов в 1,3 раза относительно таковой в предыдущий период заболевания (см. табл.

Ранее на модели с использованием беспородных мышеи, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ш А^оо5е/К1ая1оогег5коуе/627/05 в дозе 10 МЛД5о, было показано, что вирус способен реплицироваться в альвеолоцитах, макрофагах легких и эндотелиоцитах легочных артерий (Шестопалова Л.В. и др., 2008). В данном эксперименте методом ИФ определяли

антиген вируса A/H5N1 (Inf А), меченного флюорохромом FITC в фибробластах. Была выявлена его экспрессия в фибробластах легких инфицированных мышей уже в 1 сутки инфекционного процесса. В период с 1 по 3 сутки доля инфицированных фибробластов составляла около 25% всех фибробластов легких инфицированных мышей. Затем происходило резкое снижение величины численной плотности Inf А+фибробластов до 7% от всех фибробластов легких вплоть до 14 суток (см. табл. 4). Вероятно, это происходило в связи с гибелью части инфицированных фибробластов путем апоптоза (Daidoji Т. et а!., 2008; Hu Y. et al., 2012), а их относительное количество резко уменьшалось в связи с активными процессами пролиферации фибробластов (см. табл. 4), возможно, той их части, которая не была инфицирована.

Таблица 4

Результат исследования численной плотности фибробластов, экспрессирующих исследуемые маркеры в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5М1 А/еоО5е/Кга5поогег5коуе/627/05 (М±т)_

Объект и параметры исследования Сутки после инфицирования Мыши линии С57В1/6

Интактные Инфицированные

Фибробласты (Nai) 1 1,4±0,10 8,2±0,86а

3 14,3±0,74аЬ

6 13,6±0,65а

10 14,3±0,72"

14 11,1±0,47аЬ

Фибробласты Inf А+ (Nai) 1 2,1 ±0,34

3 3,2±0.37

6 0,8±0,18ь

10 0,8±0,18

14 0,7±0,21

Фибробласты PCNA+ (Nai) 1 0,9±0,21 2,5±0,27а

3 3,7±0,29"ь

6 3,8±0,6Г

10 4,7±0,89"

14 1,3±0,33ь

«Фибропластическая активность» фибробластов 1 0,7 0.26

3 0,43

6 0,76

10 0,88

14 1,33

Примечания:

«а» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров инфицировшшых мышей по сравнению с аналогичными показателями в контрольной группе;

«Ь» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров с предыдущим периодом исследования.

Так, по результатам КГХ исследования с использованием маркера РСКА установлено, что через 1 сутки после инфицирования величина числешюй плотности фибробластов, экспрессирующих этот маркер была больше величины данного параметра у интактных животных почти в 3 раза (см. табл. 4). В дальнейшем наблюдали постепешюе увеличение численной плотности РСЫ А+фибробластов. К 10 суткам после 1шфицирования величина искомого показателя достигала максимального значения, почта в 2 раза больше по сравнению с таковой в 1 сутки после инфицирования. На 14 сутки эксперимента величина численной плотности фибробластов экспрессирующих РСЫЛ уменьшилась в 3,7 раза по

сравнению с величиной этого параметра в предыдущий период заболевания (см. табл. 4), возможно, в связи с процессом дифференцирования фибробластов и соответственно снижением их пролиферативной активности (см. табл. 4).

«Фибропластическая активность» фибробластов, напротив, в 1 сутки после инфицирования была меньшей, чем у интакгных животных в 2,5 раза, но в последующем увеличивалась вплоть до 14 суток, превышая таковую более чем в 5 раз относительно величины этого параметра у инфицированных мышей в 1 сутки эксперимента (см. табл. 4).

Согласно данным корреляционного анализа между величинами показателей инфицированных фибробластов и их «фибропластической активностью» была выявлена высокая отрицательная корреляционная связь (рис. 2). Последняя возрастала с увеличением периода после инфицирования и, следовательно, степени дифференцирования фибробластов.

Сроки исследования (сутки) ■ 'фн6ровлвстччвска*»утиш«о<ть'фибро6л«сто» —«г-Inf Д+фн5ро6л»сты

Рис 2. Результаты корреляционного анализа «фибропластической активности» фибробластов и численной плотности Inf А+фибробластов в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 с указанием корреляционной связи между величинами исследуемых параметров, б/п - безразмерный показатель.

Результаты исследования матриксных металлопротеиназ (ММР) и их ингибиторов (TIMP) в процессе фиброгенеза

При морфометрическом исследовании полученных образцов легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 во все периоды эксперимента наибольшее количество из исследуемых клеток, экспрессирующих ММР-2, ММР-9, ММР-10 и TIMP-2 составляли макрофаги (табл. 5, 6, 8). В 1-3 сутки инфекционного процесса клетки, экспрессирующие исследуемые маркеры располагались преимущественно в межальвеолярных перегородках, в меньшей степени, вокруг бронхов и сосудов. Начиная с 6 суток заболевания, большинство позитивно окрашенных клеток наблюдали в инфильтратах и зонах ателектазов.

При исследовании образцов легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 было обнаружено, что в 1 сутки заболевания величина численной плотности макрофагов, экспрессирующих ММР-2 была большей по сравнению с таковой в контроле в 2,5 раза. Количество фибробластов, экспрессирующих исследуемый маркер в 1 сутки

эксперимента было больше в 3,2 раза относительно аналогичного параметра у мышей в контрольной группе (см. табл. 5, 6).

Максимальной величины численная плотность макрофагов, экспрессирующих ММР-2 достигала на 6 сутки эксперимента, в 2 раза превышая таковую у мышей в 1 сутки инфекционного процесса. В последующем наблюдали уменьшение количества ММР-2+макрофагов вплоть до 14 суток (см. табл. 5). К данному сроку эксперимента величина численной плотности макрофагов, экспрессирующих исследуемый маркер уменьшилась в 1,5 раза по сравнению с величиной того же показателя на б сутки инфекционного процесса.

Количество макрофагов, экспрессирующих ММР-9 и ММР-10 было больше, чем у мышей контрольной группы в 2,5 и в 2,7 раза соответственно. Величина численной плотности ММР-9+макрофагов и ММР-10+макрофагов была наибольшей в 2,6 и в 1,6 раза на 6 сутки относительно величины аналогичного показателя в 1 сутки эксперимента (см. табл. 5). В последующие периоды инфекционного процесса наблюдали постепенное снижение величин численной плотности макрофагов, экспрессирующих ММР-9 в 1,7 раз на 14 сутки, и в 1,6 раза, макрофагов, экспрессирующих ММР-10 в тот же период эксперимента.

Таблица 5

Результаты исследования численной плотности макрофагов, экспрессирующих матриксные металлопротеингзы н их ингибиторы в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н51Ч1 А/коо5е/Кгамюогеп8коуе/627/05 (М±т>_

к . _. —,-- Объект и параметры исследования Сутки исследования Мыши линии С57В1/6

Интактные Инфицированные

ММР-2 (ЫаО 1 0,8±0,12 1,9±0,25а

3 2,3±0,31"

6 3,9±0,22*ь

10 3,7±0,29а

14 2,6±0,36"ь

ММР-9 (Ш) 1 0,8±0,16 2,1±0,39*

3 3,1±0,35а

6 5,5±0,63аЬ

10 4,8*0,41*

14 3,2±0,56*ь

ММР-10 (N31) 1 0,9±0,19 2,4±0,47*

3 3,1±0,31'ь

6 3,9±0,52а

10 2,9±0,38'ь

14 2,4±0,19а

Примечания:

«а» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров инфицированных мышей по сравнению с аналогичными показателями у мышей в контрольной группе; «Ь» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров с предыдущим периодом исследования.

Величина численной плотности фибробластов в легких мышей линии С57В1/6, экспрессирующих ММР-2 возрастала с 1 по 10 сутки более чем в 3 раза по сравнению с величиной аналогичного параметра в 1 сутки инфекционного процесса (см. табл. 6). К 14 суткам эксперимента наблюдали тенденцию к снижению величины данного показателя.

Количество фибробластов, экспрессирующих ММР-9 к 1 суткам эксперимента было большим в 4 раза по сравнению с таковым у интактных мышей, и достигало наибольшей величины на 10 сутки, т.е. почти в 3 раза большей относительно величины аналогичного параметра в 1 сутки инфекционного процесса. В последующем наблюдали тенденцию к снижению количества ММР-9+фибробластов (см. табл. 6).

Величина численной плотности фибробластов, экспрессирующих ММР-10 к 1 суткам исследования была больше в 3,4 раза относительно таковой в группе контроля^ с последующим увеличением их количества к 6 суткам в 3,7 раза по сравнению с величиной гшалогичного параметра в 1 сутки эксперимента. На 10 супси ш,фекционного процесса Габ^ш снижение величины численной плотное™ ММР-10+фибробластов в 1,4 раза по сравнению с величиной этого показателя в предыдущие сроки эксперимента, с последующей тенденцией к снижению на 14 супси инфекционного заболевания (см. табл. 6).

Таблица 6

Результаты исследования численной плотности фибробластов, экспрессирующих матриксные металлопротеиназы и их ингибиторы в легКих мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ш А/аоо*е/Кга*поо*ег5коуе627/05(М±т)-

-*---ТПI.____________Мыши линии С57В1/6

Объект и параметры исследования

ММР-2

ММР-9

ММР-10

Сутки исследования

Интактные

10 14

0,3±0,15

0,2±0,09

0д±0,05

Инфицированные

0,9±0,24* 1,3±0.33* 2.7+0,41" 2.9±0,28" 2.6+0.27* 0,6+0,31' 1.0+0,28' 1,7±0,26'ь 1,9+0,29' 1,3+0,36' 0,6+0,26' 1.5±0.22**' 2.4±0,24^ 1.7^0,29*" 1,2+0,33*

Полученные данные (см. табл. 5, 6) свидетельствуют о том, ™ плотности клеток (макрофагов и фибробластов), экспрессирующих ММР-2, ММР-9, ММР-10 сопряжено с быстро прогрессирующим ранним фиброзом легких инфицированных мышеи, что подтверждается сильной и средней положительной корреляционно« связью величин коллагенов определенных типов и денатурирующими их соответствующими ММР* (см.

табл.7). Таблица 7

Результаты корреляционного анализа между величинами объемных плотностей коллагенов различных типов и денатурирующих их ММР» репрессируемых макрофагами и фиброблястами в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных

ВИРУСОМ гриппа А/Н5М А/еоозе/Кгапоогегзкоуе/о //из -, Коэффициент корреляции

Объекты корреляционного исследования Мф Фб

Коллаген I (Уу) - ММР-2, -9 (Кш) 0,858 0,951

Коллаген III (УИ - ММР-10 (КаО 0,992 0,909

Коллаген IV (Уу) - ММР-2, -9, -10 №0 0,954 0.972

Коллаген VI (Уу) - ММР-2, -9 №) 0,524 0,723

ИГХ методом в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5?Я1 А^оо$е/Кга$поогег5коуе/627/05, исследовали численную плотность клеток, экспрессирующих Т1МР-2 (см. табл. 8). Величина численной плотности макрофагов, экспрессирующих Т1МР-2 к 1 суткам эксперимента была выше в 3,8 раза относительно таковой у мышей контрольной группы. Наибольшее количество Т1МР-2 <-макрофагов наблюдали на 10 сутки, по сравнению с величиной аналогичного параметра в 1 сутки эксперимента их количество увеличилось в 3 раза. В последующие сутки наблюдали тенденцию к снижению величины численной плотности клеток, экспрессирующих исследуемый маркер (см. табл. 8).

Количество Т1МР-2+фибробластов уже в 1 сутки эксперимента было большим, чем у мышей в контрольной группе в 7,7 раз (см. табл. 8). К 6 суткам инфекционного процесса наблюдали увеличение количества фибробластов, экспрессирующих исследуемый маркер почти в 4 раза по сравнению с таковым в 1 сутки заболевания. В более поздние периоды эксперимента (10 и 14 сутки) наблюдали снижение величины численной плотности Т1МР-2+фибробластов, к 14 суткам в 1,2 раза по сравнению с величиной аналогичного показателя на 6 сутки инфекционного процесса (см. табл. 8).

Таблица 8

Результаты исследования численных плотностей макрофагов и фибробластов, экспрессирующих Т1МР-2 у легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ш А/коо5е/Кга8поогег5коуе/627/05 (М±ш)_

Исследуемые клетки Сутки после инфицирования Экспрессия TIMP-2 (Nai)

Интактные Инфицированные

Макрофаги 1 0,9±0,15с 3,5±0,37ас

3 5,5±0,41аЬс

6 9,9±0,64аЬс

14 9,3±0,43ас

Фибробласты 1 0,2±0,07с 1,9^,26^

3 3,7±0,31аЬс

6 7,6±0,45аЬс

10 6,2±0,ЗЗаЫ:

14 5,5±0,27'с

Примечания:

«а» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров инфицированных мышей по сравнешпо с аналогичными показателями у мышей в контрольной группе;

«Ь» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров с предыдущим периодом исследования.

Известно, что активность ММР-2 регулируется TIMP-2 (Lakatos G, et al., 2012), активность ММР-8, -9, -!0, регулируется TIMP-1 (Huang L.W. et al., 2000; Clark R.T. et al., 2011). Следует принимать во внимание, что TIMP-1 является ингибитором нескольких типов MMPs, a TIMP-2 — ингибитор преимущественно ММР-2. Кроме того, при изучении экспрессии матриксных металлопротеиназ, ММР-2 из всех представле1шых MMPs в наибольшем количестве экспрессируется фибробластами. Поэтому для выявления характера соотношения экспрессии данных маркеров нами было предпршито исследование соотношения численных плотностей макрофагов и фибробластов, экспрессирующих ММР-2 и TIMP-2 (рис. 3).

1 сутки 3 сутки 6 сутки

Сроки исследования (сутки) □ ММР-2 ЯТ1МР-2

10 сутки 14 сутки

Рис 3 Результаты исследования соотношения общей численной плотности макрофагов и фибробластов, экспрессирующих ММР-2 и общей численной плотносш макрофагов и фибробластов, экспрессирующих Т1МР-2 в легких мышей, инфицированных вирусом гриппа А/Н5№ А/§оо5е/Кта5ПОО2етзкоуе/627/05 в динамике заболевания.

Как следует из представленных данных (см. рис. 3), соотношение клеток, экспрессирующих Т1МР-2/ММР-2 клеток (макрофагов и фибробластов) в легких интактных мышей равно 1 1 У инфицированных мышей исследуемое соотношение в 1 сутки эксперимента составляет 1,9, с последующим постепенным увеличением на каадом сроке инфекционного процесса. Наибольшей величины соотношение Т1МР-2/ММР-2 у инфицированных мышей достигает к 14 суткам и составляет почти 3 единицы. Согласно полученным данным, преобладание численной плотности клеток, экспрессирующих Т1МР-2 над численной плотностью ММР-2+клеток свидетельствуют об активации механизмов снижения у инфицированных мышей процессов внеклеточной деструкции коллагена I, IV и

У!ТИП Полученные данные свидетельствуют о том, что в исследуемых экспериментальных условиях регуляция процессов синтеза и деградации структур внеклеточного матрикса реализуется фибробластами и макрофагами - «фибропластическои активностью» фибробластов и протеолитической активностью ММРб, ограничивающихся, в свою очередь, избыточностью Т1МР. «Дисбаланс» этих процессов в рассматриваемой ситуации ввдимо, одна из причин раннего фиброза легких согласно данным корреляционного

Результаты корреляционного анализа численных плотностей фибробластов и фибробластов, экспрессирующих ММР*, ТШР-2, а также фибробластов, экспрессирующих ММРз, ТШР-2 и «фибропластическои активности» фибробластов в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ш А/яоо5е/Кга5поогег5коуе/627/05

Объекты корреляционного исследования

Фибробласты - ММР-2, -9. -10+фибробласты

«Фибропластическая активность» - ММР-2, -9, 10+фибробласты

Фибробласты - Т1МР-2+фибробласты

Коэффициент корреляции 0,862

0,462

0,835

«Фибропластическая активность» -Т1МР-2+фибробласты__

0,499

Результаты изучения клеточного состава и численной плотности клеток, экспрессирующих профибротические факторы роста и их рецепторы (FGF, FGFR, EGF, EGFR)

Ведущая патогенетическая роль в развитии фиброза принадлежит цитокинам, включая факторы роста (GF — growth factor), которые регулируют воспалительный ответ на повреждение клеток, в частности его репаративяую фазу (фиброгенез) (Малежик Л.П. и др., 1993; Пургов A.B., Хренов A.A., 1990).

При гистологическом исследовании образцов легких мышей линии С57В1У6, инфицированных вирусом гриппа A/H5NI A/goose/Krasnoozerskoye/627/05, на 1-3 сутки наблюдали увеличение численных плотностей макрофагов и фибробластов, экспрессирующих FGF, EGF и их рецепторы преимущественно в межальвеолярных перегородках, а также периваскулярно и перибронхиально. На 6-14 сутки эксперимента «положительно» окрашенные макрофаги и фибробласты появлялись, помимо указанных областей, в инфильтратах и зонах ателектазов.

При ИГХ исследовании образцов легких мышей линии С57В1/6 инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 в 1 сутки заболевания величина численной плотности макрофагов, экспрессирующих FGF была выше по сравнению с таковой у интактных мышей более чем в 2 раза (табл. 10).

Таблица 10

Результаты исследования численной плотности макрофагов, экспрессирующих исследуемые параметры в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н51Ч1 А/ЕОО5е/Кга5ПОогегзкоуе/627/05 (М±т)_

Объект и параметры исследования Сутки после инфицирования Мыши линии С57В1/6

Интактные Инфицированные

FGF (Nai) 1 0,7±0,15 1,5±0,2Г

3 3,6±0,27аЬ

6 5,5±0,32'ь

10 5,9±0,29"

14 4,6±0,ЗЗаЬ

FGFR (Nai) 1 0,8±0,19 2,2±0,24*

3 2,8±0,27аЬ

6 4,8±0,35"ь

10 4,9±0,25"

14 4,5±0,34"

EGF (Nai) 1 1,1±0,22 2,1±0,33*

3 2,9±0,25>ь

6 4,4±0,42'ь

10 3,7±0,31*

14 3,2±0,27"

EGRF (Nai) 1 0,8±0,16 1,5±0,23'

3 2,3±0,38аЬ

6 4,3±0,34аЬ

10 5,2±0,27аЬ

14 4,9±0,36"

Примечания:

В последующем наблюдали постепенное увеличение численной плотности РОР+макрофагоз с ее максимумом на 10 сутки инфекционного процесса "У«™« исследушого маркера почти в 4 раза относительно 1 суток эксперимента. К 14 сукш наблюдали снижение величины численной плотное™ макрофагов экспрессирующих РСР в 1 3 раза по сравнению с предыдущим сроком исследования (см. табл. 10).

' Величина численной плотности макрофагов, экспрессирующих РСШ к 1 су-гкам после инфицирования была больше величины данного параметра у ингакгных живот™* * 27 раза В д^ьнейшем наблюдали постепенное увеличение численнои плотное™ клеток, экспрессирующих этот маркер. К 10 суткам после инфицирования величина деленной пГГо^ РОР^макрофагов была максимштьной - увеличение в 2,2 раза по сравнению с величиной Ш!алогичного параметра в I сутки исследования. В дальнейшем наблюдали Г снижению величины численной плотное™ макрофагов, экспрессирующих

ГСРТ^й1ши С57В1/6 в 1 сутки эксперимента величина численной шютаоеш ЕОР+макрофагов была больше величины аналогичного параметра в группе кошроля в 1 8 раза Наибольшей величина численной плотности макрофагов, экспрессирующих ЕО¥ была на 6 сутки эксперимента, превышая величину численной плотности исследуемого маркера более чем в 2 раза по сравнению с таковой в 1 сутки инфекциошюго процесса (см. табл. 10£ На 10 и 14 сутки наблюдали снижение количества ЕОР+макрофагов, к 14 суткам в 1,4 раза по сравнению с величиной аналогичного показателя в 6 сутки заболевания.

Р ™нная плотность макрофагов, экспрессирующих ЕСРЯ у инфицированных мышей в 1 сутки эксперимента была больше, чем у шггактных мышеи в 1,8 раза. С 1 по 10 супси после инфицирования в легких мышей регистрировали увеличение численнои плотности ЕСРЯ+макрофагов в 3,4 раза. Величина исследуемого показателя к 14 суткам ™™ по сравнению с величиной численной пло-шое™ ЕС-РЯ+макрофагов на 10

сутки эксперимента не изменялась (см. табл. 10). _ „„„.,,

При гистологическом исследовании образцов легких мышеи линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ш АУёоо3е/Кгазпоогег5коуе/627/05 в 1 с>™ после инфицирования величина численной плотности фибробластов, экспрессирующих РОР была боГпе по сравнению с таковой в кошроле в 2 раза. Максимальной величина ™сле шои ^ое™ РСТ+фибробласшв была на 10 суши эксперимента - в 2,4 раза по сравнению с величиной аналогичного показателя в 1 сутки заболевания (табл. 11).

Величина численной плотности фибробластов, экспрессирующих ГОРЯ в 1 сутки исследования было больше в 2,8 раза величины аналогичного показателя у мышеи в группе кошроля. Количество фибробластов, экспрессирующих РСРЯ постепенно увеличивалось, до™ наибольшего значения на 14 сутки эксперимента. Таким образом, величина численной пло-пюсти РОРЯ+фиброблаегов увеличилась в 2,2 раза по сравнению с величинои аналогичного показателя в 1 сутки после инфицирования (см. табл. 11)^

Количество фибробластов, экспрессирующих ЕСР в легких инфицировать« мышеи было больше величины аналогичного параметра у интактных мышеи в 2,2 раза. В последующие сроки исследования наблюдали увеличен численнои плотности ЕОР+фибробластов с наибольшим значением на 6 сутки эксперименте - в ^Ьшит сравнению с таковой в 1 супси инфекционного процесса (см. табл. 11). На Ки 1.4^ сутки эксперимента наблюдали стабилизацию величины численнои плотности фибробластов,

экспрессирующих ЕвР. пг,гг) „ , ___„

Величина численной плотное™ фибробластов, экспрессирующих ЕСт в 1 сутки эксперимента была большей, чем в труппе контроля в 1,6 раза. С 1 по Юсу™, после инфицирования в легких мышей регистрировали увеличение численнои плотности Е<ЗРК.+фибробластов в 3,2 раза. К 14 суткам наблюдали тенденцию к сниженш исследуемого показателя (см. табл. 11).

Таблица 11

Результаты исследования численной плотности фибробластов, экспрессирующих исследуемые параметры в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом

ГПиппо А№!4'1 А _____________нитгл,,., 1 ^

Объект и параметры исследования Сутки после инфицирования Мыши линии С57В1/6

Интактные | ИнсЬициоованные

РвР (Ма1) 1 1,2±0,12 2,5±0,27а

3 4,2±0,ЗГЬ

6 5,7±0,37аЬ

10 5,8±0,42*

14 5,2±0,35а

РОИЯ (N31) 1 0,9±0,24 2,7±0,28а

3 3,9±0,24аЬ

6 4,9±0,18*ь

10 5,5±0,ЗЗаЬ

14 5,9±0,25а

ЕОИ (N81) 1 1,4±0,19 3,0±0,13а

3 3,6±0,22и

6 5,5±0,27аЬ

10 4,9±0,36аь

14 5,3±0,34а

БОШ7 (Ш) 1 1,0±0,14 1,7*0,24*

3 2,8±0,28"ь

6 4,7±0,35аЬ

10 5,3±0,34а

14 4,8±0,41*

величин рассматриваемых параметров аналогичными показателями у мышей в

«а» - достоверность отличия средних инфицированных мышей по сравнению с контрольной группе;

«Ь» - достоверность отличия средних величин рассматриваемых параметров с предыдущим периодом исследования.

При оценке корреляционных взаимоотношений между численной плотностью фибробластов, экспрессирующих РвР, РСР и их рецепторы и численной плотностью всех фибробластов легких мышей линии С57В1/6 наблюдали прямую высокую степень корреляционной взаимосвязи. Согласно данным корреляционного анализа между величинами показателей численной плотности фибробластов, экспрессирующих исследуемые факторы роста и их рецепторы и «фибропластической активностью» фибробластов наблюдали прямую среднюю степень взаимосвязи (табл. 12). Полученные данные корреляционного анализа свидетельствуют о том, что увеличите количества фибробластов и макрофагов, экспрессирующих профибротичекие факторы роста и их рецепторы в большей степени обусловливают увеличите количества фибробластов в легких инфицированных мышей, нежели на их «фибропластическую активность», значительно влияя, таким образом на объем соединительной ткани.

Таким образом, из полученных данных следует, что повыше1шая экспрессия профибротических факторов роста и их рецепторов в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5М1 А^оо5е/кга5поолсг5коус/627/05, влияющих на процессы роста, пролиферации и хемотаксиса фибробластов способствуют увеличению объема синтезируемых фибробластами компонентов внеклеточного матрикса, то есть, развитию фиброза.

Таблица 12

Результаты корреляционного анализа исследуемы, параметров в легки, мь.шей лИ1ШИ

- - --------------КОрреЛЯЦИИ

Объекты корреляционного исследования Фибробласты - РвР+фибробласты

УуИц^Ц^'Ц**"* ■----г

Фибробласты - ЕвР+фибробласты

ФИН^цлауш* т—г

Фибробласты - РОга+фибробласты гтн.кробпасты - ЕвРЯ+фибробласти --' _____" тихАтт^п

..уь.тКр^ттл^стичргкая активность» - РГ.Р+Фибробласты

—-________________ СГ^Б+Аы^ПлбтТЯСТЫ

<<<1>ИРРОШ1а^1Ичсс1Уад --•--■—--

..^чКр^ппягтичкская активность» - КПР+Аибробласты «Фибропласгическая активность» - К ¿Н К+Фибробласты

«гоипрппласгичстал амид.^-^—-------т—•—--

..^..^„„-^скяя активность» - га а+Фибробласты -с_________™ А рОР+клетки и ЕвР+клетки (N81)

К^пчягрнпиые волокна (Уу>---------——

ГУУ. - РОРЯ+клетки и ШИЧмети (№.)

0,902

0,834

0,846

0,787

0,515

0,558

0,618

0.664

0,911

0,973

Результаты исследования экспрессии провоспалительныхцгтокинов ТЪТ-а и11.-6 фибробластамипегких после инфицирования мышей линии С57В1/6 вирусом гриппа А/Н5Ы1

легких мышей линии С57В1/6, шарованных вирусом «т,А/НЯ« А/еоо5е/К135поогегХкоуе/627/05 обнаружили, что шперстициальные а ™ Фибробласты в составе инфильтратов демонстрировали

Л£ГКИХВ легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ш

13). Таблица 13

Результаты исследования численной плотности фибробластов, зкспрессир^оших таГ-ТиТб в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ш А/А005е/Кга5П00гегек0уе/627/05 (М±т)-

Объект и параметры исследования

ЮТ-а (ЫаО

Сутки после инфицирования

Мыши линии С57В1/6

Интакгные

1,240,12

1Ь-6 (Ыа1)

0,5±0,06

Инфицированные

2.040,22'° 3,4±02Г

2,840,23*

2,640,31' 0,940,18*°

1,6±0,16'

3,040,31

2,240,26'"

2,040,33'

"Г "верность отличия средних величин рассматриваемых параметров инфицированны Гмшей ^сравнениюс аналогичными показателями у мышей в контрольной группе, Г дГстоГрнГГ отлимия средних величин рассматриваемых параметров с предьщущи периодом исследования

Наибольшей величины исследуемый показатель достиг на б сутки - количество ТЫР-а+фибробластов увеличилось почти в 3 раза по сравнению с величиной аналогичного параметра в 1 сутки эксперимента. В последующие сроки эксперимента регистрировали снижение величины численной плотности фибробластов, экспрессирующих TNF-a в 1,3 раза на 14 сутки по сравнению с его величиной на 6 сутки эксперимента.

Количество 1Ь-6+фибробластов в легких инфицированных мышей в 1 сутки исследования было большим в 1,7 раза по сравненшо с величиной исследуемого параметра у шггактных мышей. С 1 по 6 сутки наблюдали увеличите численной плотности фибробластов, экспрессирующих 1Ь-6 в 3,3 раза, с последующим уменьшением их количества к 14 суткам в 1,45 раза (см. табл. 13).

При анализе корреляционных взаимоотношений между количеством фибробластов экспрессирующих ТОТ-а, 11.-6 и общим количеством ' фибробластов, обнаружили положительную высокую степень корреляции. Средняя корреляционная связь между количеством РСХА+фибробластов и количеством фибробластов, экспрессирующих исследуемые провоспалительные цитокины, очевидно обусловлена их слабой степенью дифференцированности (табл. 14). Между величинами численной плотности Т№-а+фибробластов, 1Ь-6+фибробластов и объемной плотности коллагеновых волокон, наблюдали высокую и среднюю положительные корреляционные связи (см. табл. 14).

Таблица 14

Результаты корреляционного анализа численных плотностей фибробластов, экспрессирующих исследуемые провоспалительные цитокины в легких мышей линии

Объекты корреляционного исследовашш Коэффициент корреляции

Фибробласты (КаО - ТМР-а+фибробласты (N31) 0,794

Фибробласты (ЫаО - 1Ь-6+фибробласты (Ш) 0,816

РСЫА+фибробласты (N31) - Т№-а+фибробласты (Ш) 0,593

РСЫА+фибробласты (Ыа1) - 1Ь-6+фибробласгы (Ш) 0,623

«фибропластическая активность» - TNF-a+фибpoблаcш (N3!) 0,512

«Фибропластическая активность» - 1Ь-6+фибробласты Пч'аг) 0,458

Коллагеновые волокна (Уу) - ТОТ-а+фибробласты (N31) 0,855

Коллагеновые волокна (Уу) - 1Ь-6+фчбробласты (Ыа1) 0,623

ТОТ-а - провоспалительный щггокин, обладающий способностью стимулировать не только пролиферацию фибробластов, но и <рттез ими коллагена (Фрейдлин И.С., 1998). Об этом ¿ке свидетельствуют данные корреляционного анализа (см. табл. 14), где показан более высокий коэффициент корреляции ЮТ-а, чем в случае 11.-6.

ВЫВОДЫ

1. Инфицирова1ше мышей линии С57В1/6 вирусом гриппа Д/Н5К1 А^оо5е/Кга8поо2ег5коуе/627/05, наряду с другими клетками приводит к инфнцированию фибробластов и последующему нарастанто масштаба деструктивных изменений в легких не только вследствие прямого цитопатического воздействия вирусов, но и его косвенно опосредованных эффектов, детерминирующих процессы локальной гипоксии и ишемии вследствие тромбоэмболичсских, геморрагических осложнений, нарушения проницаемости стенки гемических сосудов, интерстициального и впутриальвеолярного отеков.

2. Инфицирование фибробластов вирусом гриппа Л/ШЫ! А/ёоозе/Кга5поогег5коуе/627/05 является триггерным фактором, «запускающим» процессы пролиферации фибробластов на ранних этапах после инфицирования животного и увеличивающим долю дедифференцированных фибробластов в легких, у которых по мере

продолжительности периода после инфицирования усиливается «фибропласшческая Г™Г™^у[с1урно-фУнК!шонать!1ое проявление их -^"'„Г лЖЗК.

ял ИнЛишпювание фибробластов легких вирусом гриппа лшэт А/™о5е^5поо*еХуеГб27/05 является тригтерным фактором процессов синтеза ^Гобл^ГГГв'не—го матрикса и их последующей трансформатии, 1иво^Гк Р^е^фиброзированию легких, поскольку масштабы его и пролиферащш ЕХстов Р™ .1ГсьФ вопреки существенному уменьшению численности

инфицированных вирусом гриппа фибробластов. п частности

б) Сохраняющаяся персистенция вируса во шюгих "

фибробластах и макрофагах, препятствует восстановлению структурно-функционального

Г°Ме0СГ Инфицирование мышей линии С57В1/6 вирусом гриппа АШ1 Л/Ёоо5 /™^Гоуе/627/05 сопряжено с акшвацией синтеза и избьгт™ —т м I Т11 IV VI типов свидетельствующих О ТОМ, что принес 1М-

^обмена в интерстиции, через стенки и базальные мембраны гемических сосудов газообмена в ^^ Гирусной инфекции, индуцированной вирусом гриппа А/НЛН

А/8ооз^поо^коуТ27/0Гу мышей линии С57В1/6

внеклеточного матрикса в легких детерминированы численностью и активное!,» фибробластов, а также макрофагов, экспрессирующих матрихеные металлопротеиназы (ММРз). ММР 2, ММР

ММ?~ а1 Дисгармоничные отношения между процессами синтеза и деградации структур внекл™о м™сГмотут быть, в частности, обусловлены избыточной экспрессу ^Тштабвдтго чрезмерную активность ММРз как мехатшзм гомеостазирования ^"¿о™ м^Гтакж^еньшения риска повреждения е^ структур в рассматриваемой экспериментальной модели, что может быть одним из вероятных факторов, детерминирующих фиброзироваиие легких.

вероятнж факт р ^ ^„„е ко.тлахена III тала, в том числе в составе ретикуляркьсс и эласт^ волокон, в легких мьнпей после их инфицирования вирусу А/Опо.е/Кга5поогег5коуе/б27/05 и резкое снижение его содержания на 10 и 14 сутки после на фоне постепенного существенно менее масштабного увеличения ТдФе^Тлегких ко^агена I типа, дает основание для предполо— о том, что в рассматриваемой экспериментальной модем «молодая» соедин.ггелы^ тк^ь болес предпочтительно и интенсивно деградируется ММР5, чем «зрелая», а часть ее «расходуется» на формирование «зрелых» волокон соединительной ткани.

5 Инфицирование фибробластов вирусами гриппа АШ5Ш

А /™о5е/Ктазпоо2ег5коуе/627/05 сопряжено с активацией ими экспрессии ростовых факторов (ГО^ РОРК, ЕОР^ЕОРК), стимулирующих пролиферацию фибробластов^ иттхреце^оров^Нл общего объша коллагена и „„ых структур

что в

В,1£-Т=иИ ~а макрофагов в легких, экспрессирующих те же факторы роста и что и фибробласты, может стимулировать хемоаттрактщю

джбсобластов ГлоГси деарукцші в тех зонах органа, где недостаточно содержание їон^^ви^х фи^обла^вУна момент повреждения для их эффекпншой репарации по Г^ХТсіо, что возможно, является фактором рискаразв^я фиброза легких.

° б В условиях инфицирования мышей вирусом гриппа АЛ15Ш

А/2оозе/Кгазпоо^коуе/627/05 фибробласты легких сп^обны .Т^Груя Т^ м коспаления экспрессируя провоспалительные цигокины ТОТ-а и 1Ь-6, стимулируя, таким обр~ою ^лифератХ, вследствие чего, по мере их дифференцирования, возрастает

риск усиления фиброзирования органов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Особенности фибропластических процессов в легких мышей оппозитных линий СБА и С57В1/6 при гриппе A/H5N1 / А.Г. Аникина, О.В. Потапова, В.А. Шкурупий, А.М.Шестопалов // Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов: Материалы 5-й Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. - 2011, Новосибирск. - С. 11.

2. Ковнер A.B. Морфофункциональные изменения эндотелиоцитов сосудов легких при гриппе A/H5N1 у млекопитающих / A.B. Ковнер, А.Г. Аникина, О.В. Потапова // Клинические и теоретические аспекты современной медицины: Материалы IV Международной студенческой научной конференции с участием молодых ученых. - 2012, Москва.-С. 49-50

3. Структурно-функциональные изменения легочных макрофагов и легких мышей, инф^дарованных вирусом гриппа A/II5N1 A/goose/krasnoozerskoye/627/05 / A.B. Ковнер, А.Г. Аникина, О.В. Потапова, Т.В. Шаркова, JI.A. Черданцева, В.А. Шкурупий, A.M. Шестэпалов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2012. - N° 2. - С 196199. (Из списка ВАК).

4. Аппкина, А.Г. Морфофунхциональная характеристика фибробластов и особенности фиброгенеза в легких мышей, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 А/go^se/Krasnoozerskoye/627/05 / А.Г. Аникина, О.В. Потапова, В.А. Шкурупий // Бюллетень экспериментальной биологии и медрцины. - 2012. - № 9. - С. 346-349. (Из списка ВАК)

Автор благодарит сотрудников лаборатории отдела зоонозных инфекций и гриппа под руководством Шестопалова A.M., ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» (Новосибирск) за ведение совместного эксперимента.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ИГХ — иммуногистохимический

МЛД50- мышиная летальная доза, при которой погибает 50% мышей

DAB - 3,3'-диаминобензидин

F ГГС — флуоресцина изотиоционат

FGF - фактор роста фибробластов

FGFR - рецептор фактора роста фибробластов

EGF — эпидермальный фактор роста

EGFR — рецептор эпидермального фактора роста

IL-6 - интерлейкин-6

Inf А - антитела к антигену вируса гриппа A/H5N1 MMPs — матриксные металлопротеиназы Nai - численная плотность

PCNA - ядерный антиген пролиферирующих клеток TIMP-2 - тканевой ингибитор металлопротеиназ 2 TNF-a - фактор некроза оцухоли a Vv - объемная плотность

Соискатель ^ Аникина А.Г.

Подписано к печати 18.09.2012 формат - 60x84 1/8, Усл. печ. л. 1 Бумага: офсетная Печать: трафаретная Тираж: 100 экз. Номер заказа № 549 Типография ООО "ЮГУС-ПРИНТ", ИНН 5402467637, г. Новосибирск, ул. Залесского, 4, тел.: (383) 226-14-56,225-04-47 N ' 26.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Аникина, Аурика Георгиевна

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Общие сведения о вирусах гриппа.

1.1.1. Классификация вирусов гриппа.

1.1.2. Эпидемиология вируса гриппа А/Н5>41.

1.1.3. Строение вируса гриппа А.

1.1.4. Факторы патогенности и изменчивость вируса гриппа.

1.2. Патогенез.

1.2.1. Общие сведения о патогенезе гриппозной инфекции.

1.2.2. Особенности иммунопатогенеза при гриппе А/Н5>П.

1.3. Морфологические изменения в органах млекопитающих и человека при гриппе А/Н5Ш.

1.3.1. Морфология птичьего гриппа А/Н51Ч1 на моделях млекопитающих.

1.3.2. Морфологические изменения в органах и тканях человека при гриппе А/Н5№.

1.4. Фиброгенез и механизмы его регуляции.

1.4.1. Общие сведения о фиброзе.

1.4.2. Клетки-участники фиброгенеза и варианты их происхождения.

1.4.3. Фиброгенез при вирусных инфекциях.

1.4.3.1. Роль ростовых факторов в реализации пневмофиброза.

1.4.3.1.1. Роль трансформирующего фактора роста [3 (ТОР-(3) в фиброгенезе.

1.4.3.1.2. Роль фактора роста фибробластов (БОР) в фиброгенезе.

1.4.3.1.3. Роль эпидермального фактора роста (ЕСР) в фиброгенезе.

1.4.3.1.4. Роль фактора роста эндотелия сосудов (УЕОР) в фиброгенезе.

1.4.3.1.5. Роль тромбоцитарного фактора роста (РБСР) в фиброгенезе.

1.4.3.1.6. Роль фактора роста соединительной ткани (СТСР) в фиброгенезе.

1.4.3.2. Роль про- и противовоспалительных цитокинов в фиброгенезе.

1.4.3.2.1. Роль фактора некроза опухоли а (ТЫБ-а) в фиброгенезе.

1.4.3.2.2. Роль интерлейкина 6 (1Ь-6) в фиброгенезе.

1.4.3.2.3. Роль интерлейкина 13 (1Ь-13) в фиброгенезе.

1.4.3.3. Роль хемокинов в фиброгенезе.

1.4.3.4. Роль вазоактивных цитокинов в фиброгенезе.

1.4.3.5. Морфофункциональные изменения внеклеточного матрикса в процессе фиброгенеза при участии матриксных металлопротеиназ (ММРб) и их ингибиторов (Т1МР).

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объект исследования и экспериментальные животные.

2.2. Материал исследования.

2.3. Методы исследования.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Летальность и средняя продолжительность жизни мышей линии С57В1/6, инфицированных штаммом вируса гриппа А/Н5Ы

А/goose/Krasnoozerskoy е/627/05.

3.2. Топология вируса гриппа А/Н5Ы1 А^оо8е/кга8поогегзкоуе/627/05 и морфологические изменения в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных штаммом вируса гриппа А/Н5№ А^оо8е/кга8поо2ег8коуе/627/05.

3.2.1. Исследование компонентов внеклеточного матрикса (коллагеновых, эластических и ретикулярных волокон) легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ы1.

3.2.2. Изучение различных типов коллагена легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ы1.

3.3. Изучение функциональной активности фибробластов легких мышей линии С57В1/6 в динамике инфицированного процесса.

3.4. Исследование регуляторов фиброгенеза в легких инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 мышей линии С57В1/6.

3.4.1. Роль матриксных металлопротеиназ (ММР) и их ингибиторов (TIMP) в процессе фиброгенеза.

3.4.2. Изучение клеточного состава и численной плотности клеток экспрессирующих профибротические факторы роста и их рецепторы (FGF, FGFR, EGF, EGFR).

3.4.3. Исследование клеточного состава и численной плотности клеток экспрессирующих провоспалительные цитокины (TNF-a и IL-6).

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-клеточные и морфологические особенности раннего фиброзирования легких мышей линии C57Bl/6 при гриппе A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05"

Актуальность исследования

Грипп относят к группе острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ), которые занимают одно из первых мест в структуре инфекционных заболеваний. По данным ВОЗ, ежегодно в мире болеет гриппом от 3 до 5 млн. человек, эпидемии гриппа ежегодно уносят жизни 250-500 тыс. человек (ВОЗ; Слепушкин А.Н., 2003). Заболеваемость гриппом высока во всех возрастных группах, но наиболее тяжело им болеют дети в возрасте от 1 года до 14 лет и лица пожилого возраста. Смертность от гриппа отчетливо приходится на лиц пожилого возраста, наиболее часто связанная с обострением имевшихся у пациента заболеваний (сердечно-сосудистых, респираторных, болезней обмена) (Семенов Б.Ф., Покровский В.И., 2004; Малый В.П. и др., 2007; Салтыкова Т.С., 2008; BhatN. et al., 2005).

Грипп птиц в XXI веке приобретает значение мировой проблемы, поскольку вирус гриппа преодолел межвидовые барьеры и обрел способность вызывать заболевание у человека, как это случилось в 1997 г. в Гонконге (Claas Е.С. et al., 1998; Osterhaus A.D. et al., 2002), в декабре 2003 г. в Юго-Восточной Азии, вызвав вспышки заболевания в разных странах (Бектимиров Т.А., 2005; Львов Д.К. и др., 2006; Соминина А.А. и др., 2006; Tarantola A. et al., 2010). В дальнейшем оказалось, что вирусы A/H5N1, выделенные от заболевших в 2004 г., подверглись дополнительной мутации. Большая часть мутировавших вирусов оказались резистентными к римантадину (Тимченко В.Н., Чернова Т.М., 2008). В 2005 г. и первом квартале 2006 г. зарегистрированы заболевания гриппом A/H5N1 среди перелетных и домашних птиц на территории РФ (Ющук Н.Д. и др., 2007). 6

По данным ВОЗ на 29 декабря 2010 года заболеваемость человека гриппом птиц зарегистрирована в 58 странах мира, а общее количество вирусологически подтверждённых случаев заболевания людей, вызванного штаммами субтипа A/H5N1, составило 512, из которых 304 (60%) закончились летальным исходом, при этом среди детей до 15 лет летальность при гриппе A/H5N1 достигает 89% (ВОЗ).

В ходе исследований было отмечено, что у инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 людей и лабораторных животных развивается острый респираторный дистресс-синдром и ранний интерстициальный фиброз легких (Шестопалова JI.B. и др., 2008; То K.F. et al., 2001; Kortweg С., Gu J. et al., 2008; Qiao J. et al., 2009). Фиброз легких, развивающийся в столь короткие сроки и не характерный для острых инфекций, является одним из осложнений, приводящих к инвалидизации и ведущим к смерти больных. Феномен раннего (в остром периоде инфекционного заболевания) фиброза представляет большой интерес с позиций общей патологии, особенно при вирусной инфекции, поскольку патогенез его не изучен. Имеются лишь отдельные сообщения феноменологического характера о раннем фиброзе при инфицировании вирусом гриппа A/H5N1. Его высокая потенциальная опасность для человека, резистентность к немногочисленным противовирусным препаратам и плохо изученный патогенез предполагает актуальность дальнейшего детального изучения патогенеза данного заболевания. В частности, большой интерес представляет ранний фиброз легких - одно из важнейших патогенетических факторов, обусловливающих высокую летальность в связи с развитием острой легочной, а затем сердечной недостаточности у инфицированных людей и животных.

Цель исследования

Исследовать молекулярно-клеточные и патоморфологические особенности раннего фиброзирования легких после инфицирования вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 мышей линии С57В1/6. 7

Задачи исследования:

1. Методом иммуннофлуоресцентной микроскопии и с помощью ИГХ анализа изучить топологию вируса.

2. Изучить общие патоморфологические изменения в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных штаммом вируса гриппа А/Н51Ч1 А/§оо8е/Кга8поо2егзкоуе/627/05 в процессе развития заболевания.

3. Исследовать масштабы фиброза в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных штаммом вируса гриппа А/Н5Ы1 А/§оо8е/Кга8поогег8коуе/627/05 в разные периоды инфекционного процесса.

4. Изучить наличие и содержание различных типов коллагена в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных штаммом вируса гриппа А/Н51\11 А^оозе/КгаБпоо2ег8коуе/627/05 в разные периоды инфекционного процесса.

5. Изучить изменения количества фибробластов, оценить их пролиферативную, «фибропластическую активности» в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных штаммом вируса гриппа А/Н5Ы1 А/§оо8е/Кга8поогег8коуе/627/05 в разные периоды инфекционного процесса.

6. Изучить особенности экспрессии факторов роста и их рецепторов, провоспалительных цитокинов, матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов в патогенезе раннего фиброза легких у мышей линии С57В1/6, инфицированных штаммом вируса гриппа А/Н5М1 А^оо8е/Кга8поогег8коуе/627/05 в разные периоды инфекционного процесса.

Научная новизна результатов исследования

Впервые в эксперименте исследованы изменения и вероятные механизмы нарушения и восстановления структурно-функционального гомеостаза в легких в целом и системе соединительной ткани внеклеточного матрикса) легких мышей линии С57В1/6 после их инфицирования высокопатогенным штаммом вируса гриппа А/Н51Ч1

А/§оо8е/Кга8поо2ег8коуе/627/05. Показано, что характер деструктивных 8 процессов помимо цитопатических эффектов вируса детерминирован вторично развивающимися патологическими структурно-функциональными изменениями, детерминирующими и усиливающими состояние гипоксии клеток и структур легких и в целом в организме.

Впервые показано, что инфицирование животных этим вирусом сопряжено с инфицированием их фибробластов и макрофагов. При этом получены свидетельства того, что инфицирование этих клеток вирусом А/Н5№ А^00Бе/Кга8П002ег8к0уе/627/()5 является триггерным механизмом для «запуска» процессов пролиферации фибробластов, увеличения их численности, экспрессии ММРб и их ингибиторов (ММР-2, ММР-9, ММР-10, Т1МР-2) фибробластами и макрофагами легких, регулирующих процессы обмена структур внеклеточного матрикса, поскольку изменения величин, характеризующих эти процессы, не имели очевидной корреляционной зависимости от уменьшения количества инфицированных вирусом гриппа А/Н5М1 А/^оо8е/Кга8поо2егзкоуе/627/05 фибробластов.

Впервые показано, что в рассматриваемой экспериментальной модели раннее фиброзирование легких детерминировано дисрегуляцией, вероятно, неспецифических механизмов репаративной (БиЬзййюю) регенерации и механизмов гомеостазирования в системе соединительной ткани, возможно в связи с продолжающейся персистенцией вируса в исследованных и иных клетках организма. Впервые показано, что усиление фибробластами легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н51М1 А^оо8е/Кга8поогег8коуе/627/05 экспрессии провоспалительных цитокинов (Т№-а и 1Ь-6) сопряжено с усилением процесса воспаления и в итоге усилением фиброзирования легких.

Научно-практическое значение работы

Полученные данные свидетельствуют о том, что основным фактором, индуцирующим и поддерживающим раннее фиброзирование в легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ы1 9

А^оо8е/Кга8поогег8коуе/627/05 является инфицирование фибробластов и продолжающееся персистирование в них и макрофагах вируса, приводящее к дискоординации процессов гомеостазирования в системе соединительной ткани легких. Эти данные указывают на необходимость разработки средств профилактики проникновения вируса гриппа А/Н5М1 А^оо8е/Кга8поогег8коуе/627/05 в клетки, в частности фибробласты и макрофаги или разработку средств эффективного уничтожения вирусов. Полученные результаты уточняют ряд патогенетических механизмов повреждения легких и развития одного из основных осложнений, в частности раннего фиброза легких, дополняют традиционные представления об этапах развития воспаления, в частности его репаративной фазы при инфицировании млекопитающих вирусом гриппа А/Н51\Г1 А^оо8е/Кга8поогег5коуе/627/05.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Инфицирование мышей линии С57В1/6 вирусом гриппа А/Н5Ы1 А/§оо8е/Кга8поо2ег8коуе/627/05 сопряжено с персистированием его в фибробластах и макрофагах, развитием деструктивных процессов в легких, сопряженных с развитием вторичной острой гипоксии, обусловленной как дыхательной недостаточностью, так и формирующимся капиллярно-паренхиматозным блоком, препятствующим газообмену. Это является триггерным фактором для формирования патогенетической цепи дисрегуляторных и метаболических изменений в системе соединительной ткани легких, а продолжающаяся дискоординация процессов гомеостазирования в ней поддерживается персистенцией вируса в этих клетках.

2. Процессы раннего фиброзирования индуцированы вирусом гриппа А/Н5Ы1 А^оозе/Кга8Поогег8коуе/627/05 и поддерживаются развившейся гипоксией, ранней и активной пролиферацией фибробластов легких, их дифференцированием и последующим увеличенным синтезом ю структур внеклеточного матрикса: коллагеновых, ретикулярных и эластических волокон, коллагенов I, III, IV и VI типов.

3. Процесс фиброзирования легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5№ А^оо8е/Кгазпоо2ег$коуе/627/05, регулируется ростовыми факторами РвР и ЕОР и их рецепторами, экспрессируемыми как самими фибробластами, так и макрофагами. Фиброз как процесс неполноценной репарации легких (БиЬзйШсю) развивается после повреждения, а также в ответ на острую гипоксию и обусловлен дискоординацией процессов гомеостазирования в системе соединительной ткани в связи с недостаточной активностью ММРб (ММР-2, ММР-9, ММР-10), ограничиваемых высокой экспрессией Т1МР-2. Экспрессия фибробластами провоспалительных цитокинов ТЫР-а и 1Ь-6 усугубляет фиброзирование легких через механизм стимуляции пролиферации фибробластов и продуцирование ими структур внеклеточного матрикса.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Список литературы включает 65 отечественных и 212 зарубежных источников. Работа изложена на 143 страницах машинописного текста, содержит 18 таблиц, 33 рисунка. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Аникина, Аурика Георгиевна

выводы

1. Инфицирование мышей линии С57В1/6 вирусом гриппа А/Н51ч[1 А^оо8е/Кга8поо2егзкоуе/627/05, наряду с другими клетками приводит к инфицированию фибробластов и последующему нарастанию масштаба деструктивных изменений в легких не только вследствие прямого цитопатического воздействия вирусов, но и его косвенно опосредованных эффектов, детерминирующих процессы локальной гипоксии и ишемии вследствие тромбоэмболических, геморрагических осложнений, нарушения проницаемости стенки гемических сосудов, интерстициального и внутриальвеолярного отеков

2. Инфицирование фибробластов вирусом гриппа А/Н51ЧГ1 А/§оо8е/Кга8поо2егзкоуе/627/05 является триггерным фактором, «запускающим» процессы пролиферации фибробластов на ранних этапах после инфицирования животного и увеличивающим долю дедифференцированных фибробластов в легких, у которых по мере увеличения периода после инфицирования усиливается «фибропластическая активность» как структурно-функциональное проявление их дифференцированности. а) Инфицирование фибробластов легких вирусом гриппа А/Н5М1 А/^оо8е/Кга8поо2ег8коуе/627/05 является триггерным фактором процессов синтеза фибробластами структур внеклеточного матрикса и их последующей трансформации, приводящей к раннему фиброзированию легких, поскольку масштабы его и пролиферации фибробластов увеличивались вопреки существенному уменьшению численности инфицированных вирусом гриппа фибробластов. б) Сохраняющаяся персистенция вируса во многих типах клеток, в частности фибробластах и макрофагах, препятствует восстановлению структурно-функционального гомеостаза.

3. Инфицирование мышей линии С57В1/6 вирусом гриппа А/Н5Ш

А/^оо8е/Кга8поо2ег8коуе/627/05 сопряжено с активацией синтеза и

104 избыточным отложением в легких коллагенов I, III, IV, VI типов, свидетельствующих о том, что процесс их фиброзирования носит не только заместительный (репаративно-постнекротический), но и индуцированный состоянием гипоксии характер, как следствие нарушения процессов газообмена в интерстиции, через стенки и базальные мембраны гемических сосудов.

4. В условиях острой вирусной инфекции, индуцированной вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 у мышей линии С57В1/6 процессы синтеза и протеолиза структур внеклеточного матрикса в легких детерминированы численностью и «фибропластической активностью» фибробластов, а также численностью фибробластов и макрофагов, экспрессирующих матриксные металлопротеиназы (MMPs): ММР-2, ММР-9, ММР-10. а) Дисгармоничные отношения между процессами синтеза и деградации структур внеклеточного матрикса, могут быть, в частности, обусловлены избыточной экспрессией TIMP-2, ингибирующего избыточную активность MMPs как механизм гомеостазирования внеклеточного матрикса, и уменьшения риска повреждения конституитивных структур внеклеточного матрикса в рассматриваемой экспериментальной модели может быть одним из вероятных факторов, детерминирующих фиброзирование легких. б) Высокое содержание коллагена III типа, в том числе в составе ретикулярных и эластических волокон, в легких мышей после их инфицирования вирусом гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 и резкое снижение его содержания на 10 и 14 сутки после инфицирования на фоне постепенного существенно менее масштабного увеличения содержания в легких коллагена I типа, дает основание для предположения о том, что в рассматриваемой экспериментальной модели «молодая» соединительная ткань более предпочтительно и интенсивно деградируется MMPs, чем «зрелая», а часть ее «расходуется» на формирование «зрелых» волокон соединительной ткани.

5. Инфицирование фибробластов вирусами гриппа А/Н5Ш А/§оо8е/Кгазпоо2ег8коуе/627/05 сопряжено с активацией ими экспрессии ростовых факторов и их рецепторов (РОЕ, РОРЯ, ЕОР, ЕОРЯ), стимулирующих пролиферацию фибробластов, что в итоге приводит к увеличению общего объема коллагена и иных структур внеклеточного матрикса легких. а) Увеличение количества макрофагов в легких, экспрессирующих те же факторы роста и их рецепторы, что и фибробласты, может стимулировать хемоаттракцию фибробластов в локусы деструкции в тех зонах органа, где недостаточно содержание конституитивных фибробластов на момент повреждения для их эффективной репарации по типу БиЬзйШсю, возможно, является фактором риска развития фиброза легких.

6. В условиях инфицирования мышей вирусом гриппа А/Н5Ы1 А^ооБе/Кга8поо2ег5коуе/627/05 фибробласты легких способны поддерживать процесс воспаления, экспрессируя провоспалительные цитокины ТЫР-а и 1Ь-6, стимулируя, таким образом, свою пролиферацию, вследствие чего, по мере их дифференцирования, возрастает риск усиления фиброзирования органов.

ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В данной экспериментальной работе у инфицированных мышей линии

С57В1/6 вирусом гриппа А/Н5№ Ат^оо8е/Кга8поо2ег8коуе/627/05 методом конфокальной микроскопии обнаружили экспрессию антигена вируса

А/Н5Ы1 (1пГ А), меченного флюорохромом Б1ТС, в различных клетках легких, в том числе в макрофагах и фибробластах во все периоды инфекционного процесса. Наибольшее количество инфицированных вирусом гриппа фибробластов обнаруживали в 1 и 3 сутки после инфицирования, в более поздние периоды (6-14 сутки), количество инфицированных фибробластов значительно сокращалось, возможно, за счет апоптоза (Оа1с1о]1

Т. еХ а1., 2008; Ни У. е1 а1., 2012). При этом наличие фибробластов, экспрессирующих антиген вируса гриппа А на 10 и 14 сутки в интерстиции легких свидетельствовало о продолжающейся персистенции вируса. Развитие масштабных деструктивных изменений в пораженном органе было обусловлено как прямым цитопатическим действием вируса гриппа А/Н5Ы1

А/^оозе/Кга8поо2ег8коуе/627/05, так и опосредованным, то есть свзанным с его персистенцией в легких. Деструктивные изменения развиваются вследствие системной гипоксии и ишемии посредством тромботических и геморрагических осложнений, нарушения проницаемости стенки кровеносных сосудов, интерстициального и внутриальвеолярного отеков. В ответ на повреждение запускаются процессы репарации. Но в данной экспериментальной модели инфицирование фибробластов вирусом гриппа

А/Н5М1 А/§оо8е/Кгазпоогег8коуе/627/05, возможно, является триггерным фактором, «запускающим» процессы пролиферации фибробластов на ранних этапах после инфицирования и увеличивающим долю дедифференцированных фибробластов в легких, у которых по мере увеличения периода после инфицирования увеличивается фибропластическая активность» как структурно-функциональное проявление их дифференцированности. В этой связи происходит постгипоксический избыточный синтез фибробластами структур ВКМ в

99 легких, его интерстиции у инфицированных мышей, приводящий, в итоге, к их раннему фиброзированию. Уже в 1 сутки заболевания объемная плотность соединительной ткани составляла более 20% от общего объема легких с последующим постепенным увеличением вплоть до 14 суток эксперимента.

При этом в составе соединительной ткани соотношение коллагеновых, эластических и ретикулярных волокон изменялось в разные периоды заболевания. Так, во все периоды инфекционного процесса преобладали волокна «молодой» соединительной ткани, количество которых сначала увеличивалось вплоть до 10 суток и к 14 суткам уменьшалось. При этом количество волокон «зрелой» соединительной ткани неуклонно нарастало во все периоды инфекционного процесса, но было существенно меньшим относительно «молодой» соединительной ткани во все периоды эксперимента. При исследовании соединительной ткани легких мышей

С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1

A/goose/Krasnoozerskoye/627/05, обнаружили, что в ее составе в избытке присутствуют фибриллярные структуры, представленные коллагенами I, III,

IV и VI типов. В ходе исследования было обнаружено, что помимо увеличения объемной плотности соединительной ткани, нарастала численная плотность фибробластов, а также увеличивалась их «фибропластическая активность» особенно в финальной части эксперимента. При этом в динамике инфекционного процесса регистрировали увеличение и пролиферативной активности фибробластов вплоть до 10 суток эксперимента. Увеличение масштаба фиброза, пролиферативной и фибропластической активности» фибробластов происходили вопреки существенному уменьшению количества инфицированных вирусом гриппа фибробластов в легких мышей линии С57В1/6 в пределах 2 недель динамических наблюдений в эксперименте. Эти данные не исключает того, что сохраняющаяся персистенция вируса во многих типах клетках, в частности фибробластах и макрофагах, хотя и в значительно меньших количествах, чем в 1 сутки после инфицирования, препятствует развитию

100 компенсаторно-приспособительных процессов восстановления гомеостаза. Исходя из полученных данных, можно предположить, что избыточный синтез компонентов ВКМ свидетельствует о том, что процесс фиброзирования легких носит не только заместительный (репаративно-постнекротический) характер, но и индуцированный состоянием гипоксии, как следствие нарушения процессов газообмена в интерстиции легких, а также обусловленный прямым цитопатическим действием вируса гриппа в связи с его персистированием в клетках легких.

В условиях острой вирусной инфекции, индуцированной вирусом гриппа А/Н5№ А^ооБе/КгаБпоо2ег8коуе/627/05, у мышей линии С57В1/6 процессы поддержания «структурного» гомеостаза во ВКМ легких реализовывались путем синтеза структур внеклеточного матрикса за счет увеличения численности и «фибропластической активности» фибробластов, а процессы протеолиза, увеличением численности фибробластов и макрофагов, экспрессирующих матриксные металлопротеиназы (ММРб): ММР-2, ММР-9, ММР-10. Но в ходе исследования обнаружено, что процессы деградации избыточного количества компонентов внеклеточного матрикса были не достаточно эффективными, поскольку в ответ на усиленную экспрессию матриксных металлопротеиназ в цитоплазме макрофагов и фибробластов происходит избыточная экспрессия, компенсированная выработкой этими же клетками Т1МР-2, ингибирующего активность ММРб, возможно, в связи с его не специфичностью, как процесс, ограничивающий риск повреждения структур легких. Дисбаланс между процессами синтеза и деградации структур ВКМ, которые видимо, обусловлены избыточной экспрессией Т1МР-2, также может быть одной из причин раннего фиброзирования легких.

Продукты распада коллагеновых и эластических волокон являются хематтрактантами для лейкоцитов, моноцитов крови, которые, мигрируя к поврежденному волокну, вырабатывают более десятка различных факторов роста фибробластов, синтезирующих «новый» внеклеточный матрикс

Маянский Д.Н., Урсов И.Г., 1997). Исходя из полученных данных,

101 увеличение как общего количества фибробластов в легких инфицированных мышей, так и их «фибропластической активности», по всей видимости, обусловлено активацией ростовых факторов и их рецепторов (FGF, FGFR, EGF, EGFR), экспрессируемых самими фибробластами и макрофагами. Данные факторы роста, являясь хемоаттрактантами для фибробластов, стимулируют их пролиферацию, влияя на продукцию ими простагландинов, протеогликанов, коллагена, ростовых факторов и ряда цитокинов, включая колониестимулирующие факторы, интерлейкины и интерферон, тем самым играя важную роль в патогенезе фиброза, в частности легочного (Hetzel M. et al., 2005; Ishii Y. et al., 2006; Hardie W.D. et al., 2008). Связывание профибротических факторов роста с их рецепторами, и последующая активация последних также приводит к развитию фиброза (Antoniu S.A., Kolb M.R., 2010), путем стимулирования пролиферации фибробластов, что в итоге приводит к увеличению общего объема коллагена и других компонентов ВКМ легких. Кроме того, помимо продуктов распада соединительной ткани, образующихся при воздействии на избыточные компоненты ВКМ путем экспрессии матриксных металлопротеиназ макрофагами и фибробластами, сам вирус гриппа A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05, реплицирующийся как в фибробластах, так и в макрофагах может запускать активацию рецепторов профибротических факторов роста (Hardie W.D. et al., 2010).

Наряду с этим, можно предположить, что увеличение количества макрофагов и фибробластов в легких, одномоментно экспрессирующих одни и те же факторы роста и их рецепторы, может быть сопряжено со стимуляцией хемоаттракции фибробластов в локусы деструкции в тех зонах органа, где недостаточно содержание конституитивных фибробластов на момент повреждения для их эффективной репарации по типу substitucio.

Возможно, что это является неспецифическим механизмом поддержания структурного» гомеостаза и в рассматриваемой ситуации является фактором риска усиления фиброзирования легких. Кроме того, в условиях

102 инфицирования мышей вирусом гриппа А/Н5Ы1

А^оо8е/Кга8поо2егзкоуе/627/05 фибробласты легких способны поддерживать процесс воспаления, экспрессируя провоспалительные цитокины, такие как Т№-а и 1Ь-6, стимулируя, таким образом, свою пролиферацию, а также синтез коллагена (Фрейдлин И.С., 1998). Вследствие экспрессии ими провоспалительных цитокинов, по мере дифференцирования фибробластов, возрастает риск усиления фиброзирования органов.

Таким образом, в патогенезе раннего фиброза легких мышей линии С57В1/6, инфицированных вирусом гриппа А/Н5Ш

А/§оо8е/Кга8поогегБкоуе/627/05 принимают участие несколько механизмов. Это увеличение количества фибробластов за счет их пролиферации и «фибропластической активности». Дисбаланс уровня ММРб и их ингибиторов. Гиперэкспрессия профибротических факторов роста, таких как РОР и ЕОР, а также их рецепторов, а также увеличение экспрессии провоспалительных факторов роста - ТЫР-а и 1Ь-6. В основе формирования и поддержания дисбаланса в системе ВКМ лежит персистенция вируса.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Аникина, Аурика Георгиевна, Новосибирск

1. Аверьянов A.B. Роль нейтрофильной эластазы в патогенезе хронической обструктивной болезни легких // Цитокины и воспаление. -2007. 6(4). - С. 3-8.

2. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. М.: Медицина, 1990.-384 с.

3. Бектимиров Т. А. Птичий грипп и возможная пандемия // Биопрепараты. -2005. -3. С. 14-16.

4. Бозо И.Я., Деев Р.В., Пинаев Т.П. «Фибробласт» специализированная клетка или функциональное состояние клеток мезенхимного происхождения? // Цитология. - 2010. - 52(2). - С. 99-109.

5. Букринская А.Г. Вирусология. М.: Медицина, 1986. - 336 с.

6. Васильева Г.И., Иванова И.А., Тюкавкина С.Ю. Кооперативное взаимодействие моно- и полинуклеарных фагоцитов, опосредованное моно- и нейтрофилокинами // Иммунология. 2000. - 5. - С. 11-17.

7. Вельков В.В. Прокальцитонин и С-реактивный белок в современной лабораторной диагностике // Лабораторная диагностика. 2010. - 2(52). - С. 39-76.

8. Галимова С.Ф., Надинская М.Ю., Маевская М.В. и др. Новые данные о диагностике и течении фиброза печени // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 2001. - 4(11). - С. 2228.

9. Гамбарян A.C. Три рецептора вирусов гриппа // Медицинская вирусология. 2007. - 24. - С. 245-255.

10. Гололобов В.Г. Регенерация костной ткани при заживлении огнестрельных переломов. СПб.: Петербург-XXI век, 1997. - 160 с.

11. Данилов Р.К. Руководство по гистологии. В 2Т. Т.П. СПб.: СпецЛит, 2001.-733 с.

12. Деева Э.Г. Грипп. На пороге пандемии: руководство для врачей / Э.Г. Деева. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. - 208 с.107

13. Детлеф Ш. Фиброз печени: патогенез, диагностика, лечение // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. -2001.-4.-С. 72-74.

14. Ершов Ф. И., Киселев О. И. Интерфероны и их индукторы (от молекул до лекарств). М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 356 с.

15. Ешану B.C. Цитокины и их биологичекие эффекты при некоторых болезнях печени // Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. 2004. - 5. - С. 11-17.

16. Зайцев A.A., Синопальников А.И. Грипп: диагностика и лечение // РМЖ,-2008.- 16(22).-С. 1492-1502.

17. Клишо Е.В., Кондакова И.В., Чойнзонов E.JI. и др. Прогностическая значимость протеаз у больных плоскоклеточными карциномами головы и шеи // Бюллетень СО РАМН. 2005. - 2(116). - С. 82-91.

18. Колобухина JI.B. Клиника и лечение гриппа // РМЖ. 2001. - 9(16-17). -С. 135-136.

19. Коротчаева Ю.В., Самоходская JIM., Сперанский А.И. и др. Прогностическое значение определения Ил-6 в сыворотке крови и цитохрома 3450 в ткани печени у больных хроническим гепатитом С // РЖГГК. 2008. -18(2).-С. 42-47.

20. Кузнецов O.K., Степанова JI.A. Механизмы возможного появления пандемического вируса из возбудителя гриппа птиц // Вирусология. 2006. -7.-С. 337-348.

21. Литвинова О.М., Смородинцева Е.А., Деева Э.Г и др. Этиология современного гриппа. // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2001. - 1. - С. 5-9.

22. Лысикова М., Вальд М., Масиновски 3. Механизмы воспалительной реакции и воздействие на них с помощью протеолитических энзимов // Журнал Цитокины и воспаление. 2004. - 3. - С. 48-53.

23. Львов Д.К., Забережный А.Д., Алипер Т.И. Вирусы гриппа: события ипрогнозы // Природа. 2006. - 6. - С. 3-13.108

24. Майборода A.A., Кирдей Е.Г., Семинский И.Ж. и др. Учебное пособие по общей патологии: иммунный ответ, воспаление. М.: МЕДпресс-информ, 2006.- 112 с.

25. Макаров В.В., Воробьев A.A., Боев Б.В. и др. Высокопатогенный грипп птиц и грипп человека // Ветеринарная патология. 2004. - 2(3). - С. 4-9.

26. Малежик Л.П., Альфонсов В.В., Будажапова Д.Ц. Влияние тромбина на функциональную активность макрофагов и лимфоцитов // Гематология и трансфузиология. 1993. - 9. - С. 22-27.

27. Малкова Е.М. Таранов О.С., Агафонов А.П. и др. Патологические изменения воздухопроводящего компартмента легких мышей при экспериментальном гриппе птиц A/H5N1 // Вирусология. 2009. - 10. С. 508-523.

28. Малый В.П., Романцов М.Г., Сологуб Т.В. Грипп: Пособие для врачей.- СПб. Харьков, 2007. - 108 с.

29. Маянский Д.Н., Урсов И.Г. Лекции по клинической патологии: Руководство для врачей. Новосибирск, 1997. - 299 с.

30. Нестеренко З.В. Феномен дисплазии соединительной ткани сердца. Миксоматоз сердечных клапанов // Укра'шський медичний альманах. 2010.- 13(4).-С. 139-144.

31. Онищенко Г.Г. Ситуация по заболеваемости гриппом птиц в мире и Российской Федерации. Совершенствование надзора и контроля за гриппом при подготовке к возможной пандемии // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2006. - 5. - С. 4-17.

32. Пальцев М.А., Иванов A.A., Северин С.Е. Межклеточные взаимодействия. М.: Медицина, 2003. - 288 с.

33. Покровский В.И., Пак С.Г., Брико Н.И. и др. Инфекционные болезни и эпидемиология. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 816 с.

34. Потапова О.В., Шкурупий В.А., Шаркова Т.В. и др. Исследованиепрофилактической эффективности окисленного декстрана ипатоморфологических процессов в легких мышей при гриппе птиц A/H5N1 //109

35. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2010. - 150(12). - С. 650-653.

36. Потапова О.В., Шкурупий В.А., Шаркова Т.В. и др. Структурные изменения в головном мозге мышей, инфицированных вирусом гриппа A/H5N1 // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2009. -148(12).-С. 653-656.

37. Результаты лабораторной диагностики гриппа и других ОРВИ в базовых лабораториях ФЦГ и ЦЭЭГ за неделю 14.04.2008 20.04.2008 Available at: http://www.influenza.spb.ru/index.php?newsid= 1206986693

38. Родионова Н.В. Функциональная морфология клеток в остеогенезе. -Киев: Наук. Думка, 1989. 192 с.

39. Салтыкова Т.С. Отсроченная смертность при гриппе и тактика вакцинопрофилактики этой инфекции среди лиц пожилого возраста // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2008. - 2. - С. 55-57.

40. Семенов Б.Ф., Покровский В.И. Концепция отсроченной смерти при гриппе и тактика вакцинопрофилактики инфарктов, инсультов и летальных исходов при этой инфекции // Врач. 2004. - 2. - С. 10-12.

41. Серебренникова С.Н., Семинский И.Ж. Влияние цитокинов на клетки очага воспаления // Проблемы и перспективы современной науки. 2009. -2(1).-С. 20-22.

42. Серов В.В., Шехтер А.Б. Соединительная ткань (функциональная морфология и общая патология). М.: Медицина, 1981. - 312 с.

43. Слепушкин А.Н. Грипп и другие ОРВИ. В кн.: Эволюцияинфекционных болезней в России в XX веке. Под ред. Покровского В.И.,

44. Онищенко Г.Г., Черкасского Б.Л. М.: Медицина, 2003. - С. 184-214.но

45. Смородинцев A.A. Грипп и его профилактика (руководство для врачей). Л.: Медицина, 1984. - 383 с.

46. Соловьева Н.И. Матриксные металлопротеиназы: регуляция активности и роль в процессе онкогенеза // Вопр. мед. химии. 2000. - 5. - С. 30-31.

47. Сологуб Т.В., Ледванов М.Ю, Малый В.П и др. Патогенез вирусных инфекций // Журнал фундаментальные исследования. 2009. - 10. - С. 55-60.

48. Сологуб Т.В., Ледванов М.Ю., Малый В.П. и др. Иммунный ответ при вирусных инфекциях // Успехи современного естествознания. 2009. - 12. -С. 29-33.

49. Соминина A.A., Сорокин Е.В., Царева Т.Р. и др. Вирус гриппа А (H5N1) как один из вероятных возбудителей предстоящей пандемии // Цитокины и воспаление. 2006. - 5(1). - С. 3-10.

50. Струков А.И., Серов В.В. Патологическая анатомия. М.: Медицина, 1996.-696 с.

51. Суханова Л.А. Влияние дисплазии соединительной ткани на образование коллагена у больных туберкулезом легких // Проблеми сучасноТ медично'1 науки та освгги. 2010. - 4. - С. 58-60.

52. Тимченко В.Н., Чернова Т.М. Вирус гриппа птиц: слухи или реальность? // Terra Medica nova. 2008. - 1(51). - С. 29-31.

53. Тотолян A.A. Современный подход к диагностике иммунопатологических состояний // Медицинская иммунология. 1999. -1(1-2).-С. 75-109.

54. Фрейделин И.С. Иммунная система и ее дефекты. СПб.: НТФФ Полисан, 1998. - 114 с.

55. Фрейдлин И.С. Паракринные и аутокринные механизмы цитокиновой иммунорегуляции // Иммунология. 2001. - 5. - С. 4-7.

56. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Современные представления о защите организма от инфекций // Иммунология. 2000. - 1. - С. 61-64.

57. Черешнев В.А., Гусев Е.Ю. Системное воспаление как иммунопатобиологический феномен // Цитокины и воспаление. 2002. -1(2).-С. 17.

58. Черняев A.JL, Самсонова М.В. Воспаление при хронической обструктивной болезни легких: молекулярные основы патогенеза // Consilium Medicum. 2008. - 10(10). - С. 9-14.

59. Чучалин А.Г. Тяжелый острый респираторный синдром (ТОРС) // Российский Медицинский Журнал. 2003. - 22(11). - С. 1197-1205.

60. Шварсалон Н.К., Хайтович А.Б., Кирьякова Л.С. Сравнительная молекулярно-генетическая характеристика пандемических вирусов гриппа A(H1N1) 1918 и 2009 гг // Профшактична медицина. 2009. - 4(8). - С. 7480.

61. Шестопалова Л.В., Шкурупий В.А., Шаркова Т.В. Структурные изменения легких у мышей, инфицированных вирусом гриппа птиц H5N1 субтипа. // Вестник НГУ: Биология, клиническая медицина. 2008. - 6(3-2). -С. 3-10.

62. Шкурупий В.А. Туберкулезный гранулематоз. Цитофизиология и адресная терапия. М.: Издательство РАМН, 2007. - 536 с.

63. Шкурупий В.А., Ткачев В.О., Потапова О.В. и др.

64. Морфофункциональные особенности иммунной системы у мышей линий112

65. СВА и C57Bl/6g // Бюллетень экспериментальной биологии и медедицины -2010.- 12.-С. 70-73.

66. Ющук Н.Д., Ахмедов Д.Р., Мартынов Ю.В. и др. Грипп птиц у человека: угроза пандемии (этиология, эпидемиология, клиника, дифференциальная диагностика, лечение и профилактика): Учебное пособие.- М.: ФГОУ «ВУНМЦ Росздрава», 2007. 72 с.

67. Abboud R.T., Vimalanathan S. Pathogenesis of COPD. Part I. The role of protease-antiprotease imbalance in emphysema // International Journal of Tuberculosis Lung Disease. 2008. - 4 (12). - P. 361-367.

68. Abreu J.G., Ketpura N.I., Reversade B. et al. Connective-tissue growth factor (CTGF) modulates cell signalling by BMP and TGF(3 // Nature Cell Biology- 2002. 4. - P. 599-604.

69. Achdout H., Meningher Т., Hirsh S. et al. Killing of avian and swine influenza virus by natural killer cells // Journal of Virology. 2010. - 84(8). - P. 3993^1001.

70. Ando Т., Okuda S., Yanagida T. et al. Localization of TGFP and its receptors in the kidney // Miner Electrolyte Metab. 1998. - 24(2-3). - P. 149153.

71. Andree C., Swain W.F., Page C.P. et al. In vivo transfer and expression of a human epidermal growth factor gene accelerates wound repair // Proceedings of the National Academy of the Sciences of the USA. 1994. - 91(25). - P. 1218812192.

72. Andreeva E.R., Pugach I.M., Gordon D. et al. Continuous subendothelial network formed by pericyte-like cells in human vascular bed // Tissue Cell. 1998. -30.-P. 127-135.

73. Antoniou K.M., Nicholson A.G., Dimadi M. et al. Long-term clinical effects of interferon y-lb and colchicine in idiopathic pulmonary fibrosis //European Respiratory Journal. 2006. - 28. - P.496-504.

74. Antoniu S.A., Kolb M.R. Intedanib, a triple kinase inhibitor of VEGFR, FGFR and PDGFR for the treatment of cancer and idiopathic pulmonary fibrosis // IDrugs. 2010. - 13(5). - P. 332-345.

75. Baricos W.H., Cortez S.L., Deboisblanc M. et al. Transforming growth factor-beta is a potent inhibitor of extracellular matrix degrada tion by cultured human mesangial cells // Journal of the American Society of Nephrology. 1999. - 10.-P. 790-795.

76. Barleon B., Sozzani S., Zhou D. et al. Migration of human monocytes in response to vascular endothelial growth factor (VEGF) is mediated via the VEGF receptor fit-1 // Blood. 1996. - 87(8). - P. 3336-3343.

77. Barnard D.L. Animal models for the study of influenza pathogenesis and therapy // Antiviral Research. 2009. - 82(2). - P. 110-122.

78. Bartalesi B., Cavarra E., Fineschi S. et al. Different lung responses to cigarette smoke in two strains of mice sensitive to oxidants // European Respiratory Journal 2005. - 25. - P. 15-22.

79. Beigel J.H., Farrar J., Han A.M. et al. Avian influenza A (H5N1) infection in humans; Writing Committee of the World Health Organization (WHO) Consultation on Human Influenza A/H5 // New England Journal of Medicine. -2005. 353(13). - P. 1374-1385.

80. Belser J.A., Maines T.R., Tumpey T.M. et al. Influenza A virus transmission: contributing factors and clinical implications // Expert.Reviews in Molecular Medicine. 2010. - 12. - P. 30-39.

81. Bennett N.T., Schultz G.S. Growth factors and wound healing: biochemical properties of growth factors and their receptors // The American Journal of Surgery. 1993. - 165(6). - P. 728-737.

82. Bertani T., Cutillo F., Zoja C., et al. Tubulointerstitial lesions mediate renal damage in adriamycin glomerulopathy // Kidney International. 1986. - 30. - P. 488-496.

83. Bhat N., Wright J.G., Broder K.R. et al. Influenza-associated deaths among children in the United States, 2003-2004 // New England Journal of Medicine. -2005. 353(24). - P. 2559-2567.

84. Bister V., Skoog T., Virolainen S. et al. Increased expression of matrix metalloproteinases-21 and -26 and TIMP-4 in pancreatic adenocarcinoma // Modem Pathology. 2007. - 20(11). - P. 1128-1140.

85. Bodewes R., Kreijtz J.H., van Amerongen G. et al. Pathogenesis of influenza A/H5N1 virus infection in ferrets differs between intranasal and intratracheal routes of inoculation // The American Journal of Pathology. 2011. - 179(1). - P. 30-36.

86. Boffa J.J., Lu Y., Placier S. et al. Regression of renal vascular and glomerular fibrosis: role of angiotensin II receptor antagonism and matrix metalloproteinases // Journal of the American Society of Nephrology. 2003. -14(5).-P. 1132-1144.

87. Bonner J.C. Mesenchymal cell survival in airway and interstitial pulmonary fibrosis // Fibrogenesis Tissue Repair. 2010. - 25. - P. 3-15.

88. Bonner J.C. Regulation of PDGF and its receptors in fibrotic diseases // Cytokine and Growth Factor Reviews. 2004. - 15(4). - P. 255-273.

89. Border W.A., Noble N.A. Interactions of transforming growth factor-3 and angiotensin II in renal fibrosis // Hypertension. 1998. - 31(1 Pt 2). - P. 181-188.

90. Border W.A., Noble N.A. Transforming growth factor-|3 in tissue fibrosis // New England Journal of Medicine. 1994. - 331(19). - P. 12861292.

91. Bouscambert-Duchamp M., Lina B., Morfin F. Avian influenza in children // Archives de Pediatric. 2009. - 16(2). - P. 101-107.

92. Bren A.F., Pavlovcic S.K., Koselj M. et al. Acute renal failure due to hemorrhagic fever with renal syndrome // Renal Failure. 1996. - 18(4). - P. 635638.

93. Brittan M., Hunt T., Jeffery R. et al. Bone marrow derivation of pericryptal myofibroblasts in the mouse and human small intestine and colon // Gut. 2002. -50(6).-P. 752-757.

94. Bucala R., Spiegel L.A., Chesney J. et al. Circulating fibrocytes define a new leukocyte subpopulation that mediates tissue repair // Molecular Medicine.1994,- 1(1).-P. 71-81.

95. Chan M.C., Cheung C.Y., Chui W.H. et al. Proinflammatory cytokine responses induced by influenza A (H5N1) viruses in primary human alveolar and bronchial epithelial cells // Respiratory Research. 2005. - 6. - P. 135— 142.

96. Cho J.J., Hocher B., Herbst H. et al. An oral endothelin-A receptor antagonist blocks collagen synthesis and deposition in advanced rat liver fibrosis // Gastroenterology. 2000. - 118(6). - P. 1169-1178.

97. Claas E.C. Pandemic infuenza is a zoonosis, as it requires introduction of avian-like gene segments in the human population // Veterinary Microbiology. -2000. 74(1-2). - P. 133-139.

98. Claas E.C., de Jong J.C., van Beek R. et al. Human influenza virus A/HongKong/156/97 (H5N1) infection // Vaccine. 1998. - 16(9-10). - P. 977978.

99. Clark R.T., Nance J.P., Noor S. T-cell production of matrix metalloproteinases and inhibition of parasite clearance by TIMP-1 during chronic Toxoplasma infection in the brain // ASN Neuro. 2011. - 3(1). - P. 1-12.

100. Coker R.K., Laurent G.J. Pulmonary fibrosis: cytokines in the balance // Europen Respiratory Journal. 1998. - 11(6). - P. 1218-1221.

101. Curnow S.J., Falciani F., Durrani O.M. et al. Multiplex bead immunoassayanalysis of aqueous humor reveals distinct cytokine profiles in uveitis //1161.vestigative Ophthalmology and Visual Science. 2005. - 46(11). - P. 42514259.

102. Daidoji T., Koma T., Du A. H5N1 avian influenza virus induces apoptotic cell death in mammalian airway epithelial cells // Journal of Virology. 2008. -82(22).-P. 11294-11307.

103. Deuel T.F. Polypeptide growth factors: roles in normal and abnormal cell growth // Annual Review of Cell Bioogyl. 1987. - 3. - P. 443-492.

104. Direkze N.C., Forbes S.J., Brittan M. et al. Multiple organ engraftment by bone-marrow-derived myofibroblasts and fibroblasts in bone-marrow-transplanted mice // Stem Cells. 2003. - 21(5). - P. 514-520.

105. DiSavio J., Bayne M.L., Conn G. et al. Purification and characterization of a natyrally occurring vascular endothelial growth factor // Journal of Biological Chemistry. 1999. - 270(13). - P. 7717-7723.

106. Douthwaite J.A., Johnson T.S., Haylor J.L. et al. Effects of transforming growth factor-p on renal extracellular matrix components and their regulating proteins // Journal of the American Society of Nephrology. 1999. - 10. - P. 2109-2119.

107. Dow J.K., deVere White R.W. Fibroblast growth factor 2: its structure and property, paracrine function, tumor angiogenesis, and prostate-related mitogenic and oncogenic functions // Urology. 2000. - 55(6). - P. 800-806.

108. Duncan M.R., Frazier K.S., Abramson S. et al. Connective tissue growth factor mediates transforming growth factor beta-induced collagen synthesis: down-regulation by cAMP // FASEB Journal. 1999. - 13(13). - P. 1774-1786.

109. Dybing J.K., Schultz-Cherry S., Swayne D.E. et al. Distinct pathogenesis of hong kong-origin H5N1 viruses in mice compared to that of other highly pathogenic H5 avian influenza viruses // Journal of Virology. 2000. - 74(3). - P. 1443-1450.

110. Ebihara Y., Masuya M., Larue A.C. et al. Hematopoietic origins of fibroblasts: II. In vitro studies of fibroblasts, CFU-F, and fibrocytes // Experimental Hematology. 2006. - 34(2). - P. 219-229.

111. Egido J. Vasoactive hormones and renal sclerosis // Kidney Int. 1996. -49(2). - P. 578-597.

112. Forbes S.J., Russo F.P., Rey V. et al. A significant proportion of myofibroblasts are of bone marrow origin in human liver fibrosis // Gastroenterology. 2004. - 126(4). - P. 955-963.

113. Frazier K., Williams S., Kothapalli D. et al. Stimulation of fibroblast cell growth, matrix production, and granulation tissue formation by connective tissue growth factor // Journal of Investigative Dermatology. 1996. - 107(3). - P. 404411.

114. Freedman S.B, Isner J.M. Therapeutic Angiogenesis for Coronary Artery Disease // Annals of Internal Medicine. 2002. - 136(1). - P. 54-71.

115. Frid M.G., Kale V.A., Stenmark K.R. Mature vascular endothelium can give rise to smooth muscle cells via endothelial-mesenchymal transdifferentiation: in vitro analysis // Circulation Research. 2002. - 90(11). - P. 1189-1196.

116. Fukushi M., Ito T., Oka T. et al. Serial histopathological examination of the lungs of mice infected with influenza A virus PR8 strain // PLoS One. 2011. -6(6).-P. 207-217.

117. Furuse Y., Suzuki A., Kamigaki T. Evolution of the M gene of the influenza A virus in different host species: large-scale sequence analysis // Virology Journal. -2009.-6.-P. 67-81.

118. Gabbiani G., Majno G. Dupuytren's contracture: fibroblast contraction? An ultrastructural study // The American Journal of Pathology. 1972. - 66(1). - P. 131-146.

119. Gamblin S.J., Skehel J.J. Influenza hemagglutinin and neuraminidase membrane glycoproteins // The Journal of Biological Chemistry. 2010. -285(37).-P. 28403-28419.

120. Goodlad R.A., Wright N.A. Peptides and epithelial growth regulation // Experientia. 1987. - 43(7). - P. 780-784.

121. Gressner A.M., Weiskirchen R., Breitkopf K. et al. Roles of TGF-beta in hepatic fibrosis // Frontiers in Bioscience. 2002. - 7. - P. 793-807.

122. Grunert S., Jechlinger M., Beug H. Diverse cellular and molecular mechanisms contribute to epithelial plasticity and metastasis // Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2003. - 4. - P. 657- 665.

123. Gu J., Xie Z., Gao Z. et al. H5N1 infection of the respiratory tract and beyond: a molecular pathology study // Lancet. 2007. - 370(9593). - P. 11371145.

124. Guarino M., Tosoni A., Nebuloni M. Direct contribution of epithelium to organ fibrosis: epithelial-mesenchymal transition // Humun Pathology. 2009. -40(10).-P. 1365-1376.

125. Guo Y., Dong J., Wang M. Studies on the basis of molecular biology of the phase change of influenza A(H1N1) viruses // Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi. 2000. - 14(1). - P. 9-13.

126. Hardie W.D., Hagood J.S., Dave V. et al. Signaling pathways in the epithelial origins of pulmonary fibrosis // Cell Cycle. 2010. - 9(14). - P. 27692776.

127. Hegab A.E., Sakamoto T., Uchida Y. et al. Association analysis of tissue inhibitor of metalloproteinase-2 gene polymorphisms with COPD in Egyptians // Respiratory Medicine. 2005. - 99. - P. 107-110.

128. Hetzel M., Bachem ML, Anders D. et al. Different effects of growth factors on proliferation and matrix production of normal and fibrotic human lung fibroblasts // Lung. 2005. - 183(4). - P. 225-237.

129. Hirschi K.K., DAmore P.A. Pericytes in the microvasculature // Cardiovascular Research. 1996. - 32. - P. 687-698.

130. Horimoto T., Kawaoka Y. Influenza: Lessons from past pandemics, warnings from current incidents // Nature Reviews Microbiology. 2005. - 3(8). -P. 591-600.

131. Horowitz J.C., Rogers D.S., Simon R.H. et al. Plasminogen activation induced pericellular fibronectin proteolysis promotes fibroblast apoptosis // American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 2008. - 38(1). - P. 78-87.

132. Hou X.Q., Sun P.L., Gao Y.W. et al. Pathogenesis of H5N1 avian influenza virus in C57BL/6 mice // Bing. Du. Xue. Bao. 2008. - 24(6). - P. 472-477.

133. Houlihan C., Akdeniz A., Tsalamandris C. et al. Urinary transforming growth factor (3 excretion in patients with hypertension, type 2 diabetes and elevated albumin excretion rate // Diabetes Care. 2002. - 25(6). - P. 10721077.

134. Hu Y., Jin Y., Han D. Mast cell-induced lung injury in mice infected with H5N1 influenza virus // Journal of Virology. 2012. - 86(6). - P. 33473356.

135. Huang L.W., Garrett A.P., Bell D.A. Differential expression of matrix metalloproteinase-9 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 protein and mRNA in epithelial ovarian tumors // Gynecologic Oncology. 2000. - 77(3). - P. 369376.

136. Isaka Y., Brees D.K., Ikegaya K. et al. Gene therapy by skeletal muscle expression of decorin prevents fibrotic disease in rat kidney // Nature Medicine. -1996.-2(4).-P. 418-423.

137. Ishii Y., Fujimoto S., Fukuda T. Gefitinib prevents bleomycin-induced lung fibrosis in mice // American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. -2006.- 174(5).-P. 550-556.

138. Isoda N., Sakoda Y., Kishida N. et al. Pathogenicity of a highly pathogenic avian influenza virus, A/chicken/Yamaguchi/7/04 (H5N1) in different species of birds and//Archives of Virology. 2006. - 151(7). - P. 1267-1279.

139. Jakubzick C., Choi E.S., Joshi B.H. et al. Therapeutic attenuation of pulmonary fibrosis via targeting of IL-4- and IL-13-responsive cells // Journal of Immunology. 2003. - 171. - P. 2684-2693.

140. James A.L., Wenzel S. Clinical relevance of airway remodelling in airway diseases // Europen Respiratory Journal. 2007. -30(1). - P. 134-155.

141. Janeway C.A., Travers P. Immunobiology: The Immune System In Health and Disease. London. - 1999.

142. Jefferis B.J., Whincup P., Welsh P. et al. Prospective study of matrix metalloproteinase-9 and risk of myocardial infarction and stroke in older men and women // Atherosclerosis. 2010. - 208(2). - P. 557-563.

143. Joos L., He J.Q., Shepherdson M.B. et al. The role of matrix metalloproteinases polymorphisms in the rate of decline in lung function // Human Molecular Genetetics. 2002. - 11(5). P. - 569-576.

144. Juge-Aubry C.E., Henrichot E., Meier C.A. Adipose tissue: a regulator of inflammation // Best Practice and Researh. Clinical Endocrinology and Metabolism. 2005. - 19(4). - P. 547-566.

145. Jutel M. Adhesion molecules in allergic inflammation // Allegology Clinical Immunology International. 1999. - 5(3). - P. 153-158.

146. Kamada, Y., Tamura S., Kiso S. et al. Enhanced carbon tetrachloride-induced liver fibrosis in mice lacking adiponectin // Gastroenterology. 2003. -125(6).-P. 1796-1807.

147. Kanno K., Tazuma S., Chayama K. ATlA-deficient mice show less severe progression of liver fibrosis induced by CC1(4) // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2003. - 308(1). - P. 177-183.

148. Karpala A.J., Bingham J., Schat K.A. et al. Highly pathogenic (H5N1) avian influenza induces an inflammatory T helper type 1 cytokine response in the chicken // Journal of Interferon and Cytokine Research. 2011. - 31(4). - P. 393400.

149. Karupiah G. Type 1 and type 2 cytokines in antiviral defense // Veterinary Immunology and Immunopathology. 1998. - 63(1-2). - P. 105-109.

150. Kehrl J.H., Wakefield L.M., Roberts A.B. et al. Production of transforming growth factor beta by human T lymphocytes and its potential role in the regulation of T cell growth // Journal of Experimental Medicine. 1986. - 163. - P. 10371050.

151. Kim S.E., Thanh Thuy T.T., Lee J.H. et al. Simvastatin inhibits induction of matrix metalloproteinase-9 in rat alveolar macrophages exposed to cigarette smoke extract // Experimental Molecular Medicine. 2009. - 41(4). - P. 277287.

152. Kodera M., Hasegawa M., Komura K. et al. Serum pulmonary and activation-regulated chemokine/CCL18 levels in patients with systemic sclerosis: a sensitive indicator of active pulmonary fibrosis // Arthritis and Rheumatism. -2005. 52(9). - P. 2889-2896.

153. Korteweg C., Gu J. Pathology, Molecular Biology, and Pathogenesis of Avian Influenza A (H5N1) Infection in Humans // American Journal of Pathology. 2008. - 172(5). - P. 1155-1170.

154. Kuiken T., van den Brand J., van Riel D. et al. Comparative pathology of select agent influenza a virus infections // Veterinary Pathology. 2010. - 47(5). -P. 893-914.

155. Kumar V., Abbas A.K., Fausto N. Pathologic Basis of Disease. Elsevier Saunders; Philadelphia, PA: 2005. P. 87-118.

156. Lakatos G., Hritz I., Varga M.Z. et al. The impact of matrix metalloproteinases and their tissue inhibitors in inflammatory bowel diseases // Digestive Diseases. 2012. - 30(3). - P. 289-295.

157. Lam S., Van Der Geest R.N., Verhagen N.A. et al. Connective tissue growth factor and igf-I are produced by human renal fibroblasts and cooperate in the induction of collagen production by high glucose // Diabetes. 2003. - 52(12). -P. 2975-2983.

158. Lam W.Y., Yeung A.C., Chu I.M. et al. Profiles of cytokine and chemokine gene expression in human pulmonary epithelial cells induced by human and avian influenza viruses // Virology Journal. 2010. - 26(7). - P. 344-351.

159. Lama V.N., Phan S.H. The extrapulmonary origin of fibroblasts: stem/progenitor cells and beyond // Proceedings of the American Thoracic Society. -2006.-3(4).-P. 373-376.

160. Lawerence W.T., Diegelman R.F. Growth factors in wound healing // Clinical Dermatology. 1994,- 12(1)-P. 157-169.

161. Leask A., Abraham D.J. The role of connective tissue growth factor, a multifunctional matricellular protein, in fibroblast biology // Biochemistry and Cell Biology. 2003. - 81(6). - P. 355-363.

162. Ledbetter S., Kurtzberg L., Doyle S. et al. Renal fibrosis in mice treated with human recombinant transforming growth factor- beta 2 // Kidney Int. 2000. - 58. -P. 2367-2376.

163. Lee S.M., Gardy J.L., Cheung C.Y., et al. Systems-level comparison of host-responses elicited by avian H5N1 and seasonal H1N1 influenza viruses in primary human macrophages // PloS one. 2009. - 4(12). - P. 8072-8083.

164. Lehrke M., Greif M., Broedl U.C. et al. MMP-1 serum levels predict coronary atherosclerosis in humans // Cardiovascular Diabetology. 2009. - 8. -P. 50-56.

165. Li H., Du S., Yang L. et al. Rapid pulmonary fibrosis induced by acute lung injury via a lipopolysaccharide three-hit regimen // Innate Immunity. 2009. -15(3).-P. 143-154.

166. Lu M., Xie Z.G., Gao Z.C. et al. Histopathologic study of avian influenza H5N1 infection in humans // Zhonghua. Bing. Li. Xue. Za. Zhi. 2008. - 37(3). -P. 145-149.

167. Maines T.R., Lu X.H., Erb S.M. et al. Avian influenza (H5N1) viruses isolated from humans in Asia in 2004 exhibit increased virulence in mammals // Journal of Virology. 2005. - 79(18). P. 11788-11800.125

168. Marra F. Hepatic stellate cells and the regulation of liver inflammation 11 Journal of Hepatology. 1999. - 31(6). P. 1120-1130.

169. Marschall J., Hartmann K. Avian influenza A H5N1 infections in cats // Journal of Feline Medicine and Surgery. 2008. - 10(4). - P. 359-365.

170. Mezzano S., Ruiz-Ortega M., Egido J. Angiotensin II and Renal Fibrosis // Hypertension. 2001. - 38(3 Pt 2). - P. 635-640.

171. Moussad E.E., Brigstock D.R. Connective tissue growth factor: what's in a name? // Molecular Genetics and Metabolism. 2000. - 71(1 -2). - P. 276292.

172. Munger J.S., Harpel J., Gleizes P.E. et al. Latent transforming growth factor-p: structural features and mechanism of activation // Kidney Int. 1997. - 51. - P. 1376-1382.

173. Murphy B.R., Webster R.G. Orthomyxoviruses // B. N. Fields, D. M. Knipe, P. M. Howley et al. (ed.) Fields virology. 3rd ed. - Philadelphia, Pa.: LippincottRaven Publishers, 1996. - P. 1397-1445.

174. Nagaoka I., Trapnell B.C., Crystal R.G. Upregulation of platelet-derived growth factor-A and -B gene expression in alveolar macrophages of individuals with idiopathic pulmonary fibrosis //Journal of Clinical Investigation. 1990. -85.-P. 2023-2027.

175. Nagase H., Woessner J.F. Matrix Metalloproteinases // Journal of Biological Chemistry. 1999.-274(31).-P. 21491-21494.

176. Nakamura R., Maeda N., Shibata K. et al. Interleukin-15 Is Critical in the Pathogenesis of Influenza A Virus-Induced Acute Lung Injury // Journal of Virology. 2010. - 84(11). - P. 5574-5582.

177. Neufeld G., Cohen T., Gengrinovitch S. et al. Vascular endothelial growthfactor (VEGF) and its receptors // FASEB Journal. 1999. - 13. -P. 9-22.126

178. Ng V.L., Sabla G.E., Melin-Aldana H. et al. Plasminogen deficiency results in poor clearance of non-fibrin matrix and persistent activation of hepatic stellate cells after an acute injury // Journal of Hepatology. 2001. - 35. - P. 781-789.

179. Nugent M.A., Iozzo R.V. Fibroblast growth factor-2 // International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 2000. - 32(2). - P. 115-120.

180. Oben J.A., Roskams T., Yang S. et al. Hepatic fibrogenesis requires sympathetic neurotransmitters // Gut. 2004. - 53(3). - P. 438-445.

181. Ogura Y., Takakura N., Yoshida H. et al. Essential role of platelet derived growth factor receptor Alpha in the deveiopment of the intraplacental yolk // Biology of Reproduction. - 1998. - 58(1). - P. 65-72.

182. Oikonomidi S., Kostikas K., Tsilioni I. et al. Matrix metalloproteinases in respiratory diseases: from pathogenesis to potential clinical implications // Current Medical Chemistry. 2009. - 16(10). - P. 1214-1228.

183. Okada H., Danoff T.M., Kalluri R. et al. The early role of FSP1 in epithelialmesenchymal transformation // American Journal of Physiology. 1997. - 273. -P. 563-574.

184. Osterhaus A.D., de Jong J.C., Rimmelzwaan G.F. H5N1 influenza in Hong Kong: virus characterizations // Vaccine. 2002. - 20(2). - P. 82-83.

185. Peacock A.J., Dawes K.E., Shock A. et al. Endothelin 1 and endothelin 3 induce Chemotaxis and replication of pulmonary artery fibroblasts // American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 1992. - 7. -P. 492-499.

186. Peiris J.S., de Jong M.D., Guan Y. Avian Influenza Virus (H5N1): a Threat to Human Health // Clinical Microbiology Reviews. 2007. - 20(2). - P. 243-267.

187. Peiris J.S., Yu W.C., Leung C.W. Re-emergence of fatal human influenza A subtype H5N1 disease // Lancet. 2004. - 363(9409). - P. 617-619.

188. Perng D.W., Chang K.T., Su K.C. et al. Matrix metalloprotease-9 induces transforming growth factor-(3(l) production in airway epithelium via activation of epidermal growth factor receptors // Life Science. 2011. 89(5-6). - P. 204-212.

189. Phan S.H. The myofibroblast in pulmonary fibrosis // Chest. 2002. -122(6).-P. 286-289.

190. Piguet P.F., Collart M.A., Grau G.E. et al. TNF/cachectin plays a key role in bleomycin-induced pneumopathy and fibrosis // Journal of Experimrntal Medicine. 1989,- 170.-P. 655-663.

191. Pinzani M., Gesualdo L., Sabbah G.M. et al. Effects of platelet-derived growth factor and other polypeptide mitogens on DNA synthesis and growth of cultured rat liver fatstoring cells // Journal of Clinical Investigation. 1989. - 84. -P. 1786-1793.

192. Powers C.J., McLeskey S.W., Wellstein A. Fibroblast growth factors, their receptors and signaling // Endocrinology Related Cancer. 2000. - 7(3). - P. 165197.

193. Prasse A., Pechkovsky D.V., Toews G.B. et al. A vicious circle of alveolar macrophages and fibroblasts perpetuates pulmonary fibrosis via CCL18 // American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 2006. - 173(7). -P. 781-792.

194. Qiao J., Zhang M., Bi J. et al. Pulmonary fibrosis induced by H5N1 viral infection in mice // Respiratory Research. 2009. - 10. - P. 107-112.

195. Quan T.E., Cowper S.E., Bucala R. The role of circulating fibrocytes in fibrosis // Current Rheumatology Reports. 2006. - 8(2). - P. 145-150.

196. Raghu G., Brown K.K., Bradford W.Z. et al. A placebo-controlled trial ofinterferon y-lb in patients with idiopathic pulmonary fibrosis //New England

197. Journal of Medicine. 2004. - 350. - P. 125-133.128

198. Recommended composition of influenza virus vaccines for use in the 20082009 influenza season. Available at: http://www.who.int/csr/disease/influenza/recommendedcompositionFeb08FullRe port.pdf

199. Ross R., Everett N.B., Tyler R. Wound healing and collagen formation. VI. The origin of the wound fibroblast studied in parabiosis // Journal Cell Biology. -1970.-44(3).-P. 645-654.

200. Russo F.P., Alison M.R., Bigger B.W. et al. The bone marrow functionally contributes to liver fibrosis // Gastroenterology. 2006. - 130(6). - P. 1807-1821.

201. Savage C.R. Jr., Inagami T., Cohen S. The primary structure of epidermal growth factor // The Journal of Biological Chemistry. 1972. - 247(23). - P. 7612-7621.

202. Schlessinger J. The epidermal growth factor receptor as a multifunctional allosteric protein // Biochemistry. 1988. - 27(9). - P. 3119-3123.

203. Schuppan D., Ruehl M., Somasundaram R. et al. Matrix as a modulator of hepatic fibrogenesis // Seminars in Liver Disease. 2001. - 21(3). - P. 351372.

204. Schwabe R.F., Bataller R., Brenner D.A. Human hepatic stellate cells express CCR5 and RANTES to induce proliferation and migration // American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 2003. - 285(5). -P. 949-958.

205. Schwabe R.F., Benyon R.C. How can transforming growth factor beta be targeted usefully to combat liver fibrosis? // Europen Journal of Gastroenterology. Hepatol. 2004. - 16(2). - P. 123-126.

206. Scotton C.J., Chambers R.C. Molecular targets in pulmonary fibrosis: themyofibroblast in focus // Chest. 2007. - 132(4). - P. 1311-1321.129

207. Servold S.A. Growth factors in wound healing // Clinics in Podiatric Medicine and Surgery. 1991. - 8(4). - P. 937-953.

208. Shakunaga T., Ozaki T., Ohara N., et al. Expression of connective tissue growth factor in cartilaginous tumors // Cancer. 2000. - 89(7). - P. 1466-1473.

209. Shi Z., Wakil A.E., Rockey, D.C. Strainspecific differences in mouse hepatic wound healing are mediated by divergent T helper cytokine responses // Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA. 1997. - 94(20). -P. 10663-10668.

210. Shinya K., Makino A., Hatta M. et al. Subclinical brain injury caused by H5N1 influenza virus infection // Journal of Virology. 2011. - 85(10). - P. 5202-5207.

211. Shinya K., Makino A., Tanaka H. et al. Systemic dissemination of H5N1 influenza A viruses in ferrets and hamsters after direct intragastric inoculation // Journal of Virology. 2011. - 85(10). - P. 4673^1678.

212. Shirato K., Osava H., Kaizuka M. et al. Trombin stimulates production of fibronectin by human proximal tubular epithelial cell via a transforming growth factor P-dependent mechanism // Nephrology Dialysis Transplantation. 2003. -18.-P. 2248-2254.

213. Siamopoulos K.C., Elisaf M., Antoniadis A. et al. Hemorrhagic fever with renal syndrome in an endemic area of Greece // American Journal of Nephrology. 1992. - 12(3).-P. 170-173.

214. Sirinonthanawech N., Uiprasertkul M., Suptawiwat O. et al. Viral load of the highly pathogenic avian influenza H5N1 virus in infected human tissues // Journal of Medical Virology. 2011. - 83(8). - P. 1418-1423.

215. Smith R.E. Strichter R.M., Zhang R. et al. A role for C-C chemokines in fibrotic lung disease // Journal of Leukocyte. Biology. 1995. - 57. - P. 782787.

216. Spurzem J.R., Rennard S.I. Phathogenesis of COPD // Seminars in Respiratory and Critical Care Medicine. 2005. -26. - P. 142-153.

217. Stoker M., Gherardi E. Regulation of cell movement: the motogenic cytokines // Biochimica et Biophysica Acta. 1991. - 1072(1). - P. 81-102.

218. Suki B., Bates J.H. Extracellular matrix mechanics in lung parenchymal diseases // Respiratory Physiology and Neurobiology. 2008. - 163(1-3). - P. 3343.

219. Suzuki A., Kusakai G.I., Shimojo Y. et al. Involvement of transforming growth factor-pi signaling in hypoxia-induced tolerance glucose starvation // Journal of Biological Chemistry. 2005. -280(36). - P. 31557-31563.

220. Suzuki Y. Sialobiology of influenza molecular mechanism of host range variation of influenza viruses // Biological and Pharmaceutical Bulletin. 2005. -28 (3).-P. 399-408.

221. Swayne D.E, Beck J.R., Mickle T.R. Efficacy of recombinant fowl poxvirus vaccine in protecting chickens against a highly pathogenic Mexican-origin H5N2 avian influenza virus // Avian diseases. 1997. - 41. - P. 910-922.

222. Tang Z., Ru Q., Zhang Z. Clinical study on relationship between Kver-blood stasis and liver fibrosis // Chung. Kuo. Chung. His. I. Chieh. Ho. Tsa. Chih. -1997.- 17(2).-P. 81-83.

223. Tarantola A., Barboza P., Gauthier V. et al. The influenza A(H5N1) epidemic at six and a half years: 500 notified human cases and more to come // Eurosurveillance. 2010. - 15(29). - P. 1-5.

224. Tekkesin N., Taga Y., Sav A. et al. Induction of HGF and VEGF in hepatic regeneration after hepatotoxin-induced cirrhosis in mice // Hepatogastroenterology. -2011.-58(107).-P. 971-979.

225. Tennstedt C., Wiinschmann S., Schmitz H. et al. Pathological-anatomical findings after serologic and molecular biologic evidence of Hantaan virus infection // Zentralblatt fur Pathologie. 1994. - 140(2). - P. 173-180.

226. To K.F., Chan P.K., Chan K.F. et al. Pathology of fatal human infection associated with avian influenza A H5N1 virus // Journal of Medicine Virology. -2001.-63(3).-P. 242-246.

227. Tolnay A.E., Baskin C.R., Tumpey T.M. et al. Extrapulmonary tissue responses in cynomolgus macaques (Macaca fascicularis) infected with highly pathogenic avian influenza A (H5N1) virus // Archives of Virology. -2010. -155(6).-P. 905-914.

228. Tuder R.M., Yoshida T., Arap W. et al. Cellular and molecular mechanisms of alveolar destruction in emphysema: an evolutionary perspective // Proceedings of the American Thoracic Society. 2006. - 3. - P. 503-511.

229. Ueberham, E., Low R., Ueberham U. et al. Conditional tetracycline-regulated expression of TGF-betal in liver of transgenic mice leads to reversible intermediary fibrosis // Hepatology. 2003. - 37(5). - P. 1067-1078.

230. Uiprasertkul M., Kitphati R., Puthavathana P. et al. Apoptosis and pathogenesis of avian influenza A (H5N1) virus in human // Emerging Infectious Diseases.-2007,- 13(5).-P. 708-712.

231. Ungchusak K., Auewarakul P., Dowell S.F. et al. Probable Person-to-Person Transmission of Avian Influenza A (H5N1) // New England Journal of Medicine. -2005. 352(4). - P. 333-340.

232. Us D. Cytokine storm in avian influenza // Mikrobiyology Bullet. 2008. -42(2).-P. 365-380.

233. Veidal S.S., Karsdal M.A., Vassiliadis E. MMP mediated degradation of type VI collagen is highly associated with liver fibrosis identification andvalidation of a novel biochemical marker assay // PLoS One. 2011. - 6(9). - P. e24753.

234. Wang J., Ma C., Lamb R.A. et al. Exploring organosilane amines as potent inhibitors and structural probes of influenza a virus M2 proton channel // Journal of American Chemical Society. 2011. - 133(35). - P. 13844-7.

235. Wang S., Quang Le Т., Chida J. et al. Mechanisms of matrix metalloproteinase-9 upregulation and tissue destruction in various organs in influenza A virus infection // The Journal of Medical Investigation. 2010. -57(2). - P. 26-34.

236. Wang X., Zhao J., Tang S. et al. Viremia associated with fatal outcomes in ferrets infected with avian H5N1 influenza virus // PLoS One. 2010. - 5. - P. 12099

237. Ward P., Small I., Smith J. et al. Oseltamivir (Tamifluw) and its potential for use in the event of an influenza pandemic // Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 2005. - 55(1). - P. 5-21.

238. Webby R.J., Webster R.G. Emergence of influenza A viruses // Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences.-2001.-356(1416).-P. 1817-1828.

239. Webster R.G., Bean W.J., Gorman O.T. et al. Evolution and ecology of influenza A viruses // Microbiology and Molular Biology Reviews. 1992. -56(1).-P. 152-179.

240. Wells A. EGF receptor // International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 1999. - 31(6). - P. 637-643.

241. Williams E.J., Benyon R.C., Trim N. et al. Relaxin inhibits effective collagen deposition by cultured hepatic stellate cells and decreases rat liver fibrosis in vivo // Gut. 2001. - 49(4). - P. 577-583.

242. Willis B.C., duBois R.M., Borok Z. Epithelial origin of myofibroblasts during fibrosis in the lung // Proceedings of the American Thoracic Society 2006. -3(4).-P. 377-382.

243. Woessner J.F. Jr. MMPs and TIMPs an historical perspective // Molecular Biotechnology. - 2002. - 22(1). - P. 33-49.

244. Wynn T.A. IL-13 effector functions // Annual Review of Immunology. -2003.-21.-P. 425-456.

245. Yoshiji H., Kuriyama S., Yoshii J. et al. Tissue inhibitor of metalloproteinases-1 attenuates spontaneous liver fibrosis resolution in the transgenic mouse // Hepatology. 2002. - 36(4). - P. 850-860.

246. Yu C., Wang F., Jin C. et al. Role of fibroblast growth factor type 1 and 2 in carbon tetrachloride-induced hepatic injury and fibrogenesis // American Journal of Pathology. -2003. 163(4). - P. 1653-1662.

247. Zeisberg E.M., Tarnavski O., Zeisberg M. et al. Endothelial-to-mesenchymal transition contributes to cardiac fibrosis //Nature Medicine. 2007. - 13(8). - P. 952-961.

248. Zhang K., Rekhter M.D., Gordon D. et al. Myofibroblasts and their role in lung collagen gene expression during pulmonary fibrosis: a combined immunohistochemical and in situ hybridization study // American Journal of Pathology. 1994,- 145.-P. 114-125.

249. Zhao Y., Wang Y., Wang Q. et al. Hepatic stellate cells produce vascular endothelial growth factor via phospho-p44/42 mitogen-activated protein kinase/cyclooxygenase-2 pathway // Molecular and Cellular Biochemistry. 2012. -359(1-2).-P. 217-223.

250. Zhou J.J., Fang D.Y., Fu J. et al. Infection and replication of avian influenza H5N1 virus in an infected human // Virus Genes. 2009. - 39(1). - P. 76-80.

251. Zhou M., Huang S.G., Wan H.Y. et al. Genetic polymorphism in matrix metalloproteinase-9 and the susceptibility to chronic obstructive pulmonary disease in Han population of south China // Chinese Medical Journal. 2004. - 117. - P. 1481-1484.

252. Ziesche R., Hofbauer E., Wittmann K. et al. A preliminary study of long-term treatment with interferon y-lb and low-dose prednisolone in patients with idiopathic pulmonary fibrosis //New Englang Journal of Medicine. 1999. - 341. -P. 1264-1269.

Информация о работе

Аникина, Аурика Георгиевна
кандидата медицинских наук
Новосибирск, 2012
ВАК 03.03.04

Диссертация

Молекулярно-клеточные и морфологические особенности раннего фиброзирования легких мышей линии C57Bl/6 при гриппе A/H5N1 A/goose/Krasnoozerskoye/627/05 - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы