Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Патоморфологические изменения респираторной системы различных видов животных при экспериментальном заражении вирусом гриппа A (H5N1)

ВАК РФ 03.02.02, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Патоморфологические изменения респираторной системы различных видов животных при экспериментальном заражении вирусом гриппа A (H5N1)"

На правах рукописи

ГРИЦЫК ОКСАНА БОРИСОВНА

4846428

ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ РЕСПИРАТОРНОЙ СИСТЕМЫ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЗАРАЖЕНИИ ВИРУСОМ ГРИППА А (Н5Ш)

03.02.02 - вирусология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 9 МАЙ 2011

Кольцово- 2011

4846428

Работа выполнена в Федеральном Государственном Учреждении Науки Государственном научном центре вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты потребителей и благополучия человека Минздравсоцразвитая России

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Малкова Елена Михайловиа

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Бочаров Евгений Федорович

доктор биологических наук, профессор Шестопалова Лидия Владимировна

Ведущая организация: Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова

Защита состоится июня года в часов на заседании

диссертационного совета Д 208.020.01 при Федеральном Государственном Учреждении науки Государственном научном, центре вирусологии и биотехнологии «Вектор» (630559, р.п. Кольцово, Новосибирской области)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНЦ ВБ «Вектор»

Автореферат разослан "_ Ь " мая 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук

Г.П. Трошкова

Актуальность работы. Грипп — острое вирусное высоко контагиозное инфекционное заболевание. Вирусы гриппа относятся к семейству Orthomixoviridae. Вирус гриппа А является РНК-вирусом, кодирующим до И белков (Konig R. et al., 2010). Резервуаром вирусов гриппа А в природе являются водоплавающие дикие птицы, которые считаются естественными хозяевами вируса гриппа А (Львов Д.К.и др., 1979; Webster R. et al., 1992; Suarez, 2000; Львов Д.К.и др., 2005). Заболевание у диких птиц сопровождается, как правило, бессимптомным течением инфекции, в то время как для домашних птиц характерна высокая летальность. Появление высоко патогенного вируса гриппа птиц A (H5N1) привело к разрушительной эпизоотии глобального масштаба, в которую были вовлечены страны Азии, Европы и Африки (Юшков Ю.Г. и др., 2006; Шаршов К.А. и др., 2007; Horimoto T., Kawaoka Y., 2005; Brown J.D. et al., 2009; Jonkers A.R.T. et al., 2009). Этот возбудитель приобрел способность вызывать тяжелые случаи респираторных заболеваний среди людей, которые характеризуются развитием пневмоний, респираторного дистресс-синдрома (РДС) и мультиорганных поражений (Соминина A.A. и др., 2006).

На протяжении последних лет высокопатогенные варианты вируса гриппа птиц А (H5N1) были выделены от многих млекопитающих, в том числе от тигров, леопардов, домашних кошек, домашних собак, диких грызунов. Заболевание у представителей этих видов протекало как респираторная инфекция, часто в патологический процесс вовлекались несколько систем организма (Chotpitayasunondh T. et al. 2005; Songsermn T., et al. 2006; Kuiken T. et al. 2004; Marschall J. et al. 2008; Barnard D., 2009).

Особенности воздействия вируса гриппа изучаются на различных моделях экспериментальных животных. Наиболее часто в экспериментах используют птиц, мышей, хорьков, обезьян и свиней (Itoh Y. et al., 2009; Maines T.R. et al., 2009; Munster V. J. et al., 2009). Однако большинство работ связаны с оценкой эффективности лекарственных препаратов и вакцин, а не целенаправленно с изучением патогенеза вирусной инфекции. В настоящее время исследования, посвященные анализу структурных изменений, обусловленных воздействием вируса гриппа A (H5N1), носят разрозненный характер (Subbarao К. et al., 1998; Yuen К.Y. et al., 1998; To K.F. et al., 2001), и не обобщают наиболее характерные особенности патогенеза заболевания, возникающего у разных видов животных. Органы дыхания наиболее уязвимы при развитии заболевания, вызываемого вирусом гриппа, что делает актуальным изучение патогенетических особенностей развития инфекционного процесса при исследовании патолого-гистологических и ультраструктурных изменений в респираторной системе.

Цель работы: оценить структуру и морфогенез вируса гриппа, и изучить развитие патологических процессов в респираторной системе у различных видов животных при экспериментальном заражении вирусом гриппа A (H5N1).

Задачи исследования:

1.Исследовать морфологические изменения, вызванные вирусом гриппа A (H5N1), в клетках дыхательной системы у различных видов животных (кур, гусей, мышей, кошек), идентифицировать клетки-мишени, поддерживающие репродукцию вируса.

2.Изучить патолого-гистологические и ультраструктурные характеристики воздухопроводящего, респираторного и сосудистого компартментов дыхательной системы при заражении вирусом гриппа A (H5N1) птиц и млекопитающих.

3.Выделить видовые особенности репликации вируса гриппа и стереотипные реакции при развитии инфекционного процесса, обусловленного заражением экспериментальных животных вирусом гриппа A (H5N1 ).

4.Представить патогенез развития основных-патологических процессов в легких пр гриппе A (H5N1) у различных видов животных и особенности репродукции вируса.

Научная новизна. Впервые показаны, как стереотипные, так и видовые особенност развития патологического процесса в слизистых оболочках кондактивного и респираторног компартментов легких при инфицировании некоторых птиц и млекопитающих вирусо гриппа A (H5N1). Выявлена репликация вируса гриппа не только на апикальной, но и н латеральных поверхностях эпителиоцитов, а также на мембранных комплексах клеточны органелл эпителиоцитов бронхопроводящего и респираторного отделов легких. Впервы представлены данные о возможной локализации вирусных частиц в участках некроза пр поражении вирусом A (H5N1) слизистых оболочек дыхательной системы и описаны и структурные особенности. Даны ультраструктурные характеристики вируса в различны видах клеток у животных отдельных видов, а также особенности изменения клеточны органелл, мембран и структуры ядра.

Впервые обобщены данные о поражении кондактивного, респираторного сосудистого компартментов легких. Показано развитие респираторного дистресс-синдром при повреждении эпителиоцитов и альвеолоцитов, приводящее к нарушениям цилиарно аппарата, системы сурфактанта и развитию фиброза Представлены данные о доминирующе формировании филоформ вируса гриппа в альвеолоцитах II типа.

Выявлен характер повреждения сосудистого компартмента и проанализирована е роль в развитии синдрома диссеминированого внутрисосудистого свертывания (ДВС генерализации инфекции и танатогенезе.

Представлены данные о сопряженности процессов некроза и апоптоза при заражени вирусом гриппа A (H5N1) и их зависимость от типа клетки и вида животного.

Практическая значимость. Выявленное и описанное поражение респираторно компартмента, проявляющееся уменьшением воздушности, дистрофически-некротическим изменениями альвеолоцитов I и II типов, нарушением структуры стромальных компоненте а также появлением гиалиновых мембран, выстилающих стенки альвеол, позволя расценивать данные патологические элементы как прогностически неблагоприятны которые при наличии других признаков, таких как отек, кровоизлияния, некроз клет (особенно альвеолоцитов II типа) и воспалительно-клеточной инфильтрации, лежат в осно патогенеза гриппозной инфекции и должны учитываться при проведении лечебн реанимационных мероприятий.

Положения, выносимые на защиту

1. Репликация вируса гриппа A (H5N1) показана в клетках эпителиальной выстил слизистых оболочек дыхательных путей и альвеол, а также в эндотелиальных клетках очагах некроза у различных видов животных. Выявление плеоморфных вирусных частиц п ультраструктурном исследовании в клетках кондактивного, респираторного и сосудисто компартментов легких чаще происходит при затяжном характере течения заболевания, ч при молниеносной летальной инфекции. При развитии заболевания, вызванного заражени вирусом гриппа A (H5N1), выделены основные синдромы, обусловливающие тяже течения заболевания и его исход: респираторный дистресс-синдром и синдро диссеминированного внутрисосудистого свертывания.

2. При заражении животных высокопатогенным вирусом гриппа A (H5N1) развивают первичная вирусная пневмония и бронхит, которые в динамике развития заболевай принимают гнойный или гнойно-некротический характер. Показано появление эпителиальной выстилке на начальных стадиях инфекционного процесса многоядернь

клеток и развитие ранних регенеративных процессов, сопровождающихся пролиферацией эпителия слизистых оболочек дыхательных путей при реконвалесценции. 3.Одновременное развитие процессов дистрофии, некроза и апоптоза рассматривается как характерный признак поражения тканей легких высокопатогенными штаммами вируса гриппа A (H5N1).

4. Подтверждены различия в чувствительности различных видов животных к заражению вирусом гриппа A (H5N1).

5. Процесс почкования плеоморфных частиц вируса гриппа происходит на апикальной и латеральной поверхностях клеток, а также в мембранных цитоплазматических органеллах. Полиморфизм вирусных частиц больше связан с типом клетки, стадией заболевания, чем с видом животного.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены и обсуждены на XI Росссийско-германской конференции форума Коха-Мечникова «Туберкулез, СПИД, вирусные гепатиты, проблемы безопасности крови и менеджмент в здравоохранении» (Томск, 2007), XXII Российской конференции по электронной микроскопии (Черноголовка, 2008), Научно-практической конференции «Современные проблемы инфекционной патологии человека» (Минск, 2008), Международной научно-практической конференции «Проблемы совершенствования межгосударственного взаимодействия в подготовке к пандемии гриппа» (Новосибирск, 2008), международной конференции CBMTS-Industry VI «The Fifth World Congress on Chemical, Biological and Radiological Terrorism» ( Cavtat, 2009). Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 4 статьи в реферируемых научных журналах, включенных в список ВАК, и одна монография. Структура и объем диссертации. Содержание диссертации изложено на 141 странице печатного текста. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, списка литературы и приложения, иллюстрирована 8 таблицами и 50 рисунками. Список литературы включает 38 отечественных и 122 зарубежных источника.

Вклад автора в диссертационную работу. Автором определены цель, задачи, выбраны объекты и методы исследования. Образцы тканей, парафиновые, полутонкие и ультратонкие срезы обработаны и проанализированы лично автором.

Материал и методы исследования Вирусологическая часть работы, сопровождавшаяся заражением животных вирусом гриппа A (H5N1), выполнялись в отделе эпидемиологии особо опасных инфекций (зав. канд. биол. наук А.П. Агафонов) канд. мед. наук A.A. Сергеевым и O.K. Деминой, а также в отделе зоонозных инфекций и гриппа (зав. канд. биол. наук A.M. Шестопалов) канд. биол. наук. A.B. Зайковской (Федеральное государственное учреждение науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»). Работа с кошками выполнена на кафедре эпизоотологии, паразитологии, инфекционных и инвазионных болезней животных института ветеринарной медицины Федерального Государственного образовательного учреждения высшего и профессионального образования «Омский Государственный аграрный университет» канд. вет. наук A.A. Ковалевской.

В работе использовали штаммы вируса гриппа птиц субтипа H5N1, выделенных на территории России и полученных из коллекции микроорганизмов ГНЦ ВБ «Вектор»: A/Chicken/Kurgan/05/2005, A/Duck/Kurgan/08/2005, A/Chicken/Suzdalka/Nov-11/2005, A/Goose/Krasnozerskoe/627/05.

Дизайн исследования представлен на рисунке 1.

До формирования стоков, использованных в работе, все штаммы прошли не более трех пассажей на развивающихся куриных эмбрионах (РКЭ) и имели концентрации 1,1 - 8,5 lg 50% эмбриональных инфекционных доз в 1 мл (lg ЭИД50/мл). До использования экспериментах стоки хранили в низкотемпературной морозильной камере при минус 70°С.

Концентрацию вируса гриппа в вирус-аллантоисной жидкости (ВАЖ) и в образц органов исследуемых животных определяли стандартным методом титрования пр инфицировании 9-10-ти суточных РКЭ. Для разведения вируса использовали среду Хенкса антибиотиками. Последовательные десятикратные разведения ВАЖ вводили в аллантоисн) полость 6-ти РКЭ. Через 2 суток инкубации инфицированных куриных эмбрионов при 36° определяли наличие вируса в реакции гемагглютинации с эритроцитами петух Концентрацию вируса в ВАЖ и в других образцах выражали в ^ЭИД50/мл.

Экспериментальные исследования, проводились на разных видах животных: Куры - кросса Highsex Brown генетической линии Rod-island массой 280 - 320 г полученных из Новосибирской птицефабрики (14 особей).

Гуси - Anser anser формы domesticus (14 особей), массой 550-600 г, полученных и гусиной фермы р.п. Красноозерка, Новосибирской области.

Мыши - интактные беспородные разнополые белые мыши ICR массой 14 - 16 г полученных из питомника ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора.

Кошки - 14 клинически здоровых, беспородных разнополых кошек, серонегативных отношении вируса гриппа А /Н5, в возрасте 4 месяца.

Всех животных и птиц содержали на стандартном рационе с достаточнь количеством воды согласно ветеринарному законодательству и в соответствии требованиями по гуманному содержанию и использованию животных в экспериментальнь исследованиях.

Всех животных инфицировали интраназально с применением седативных средств традиционным методом в дозе 10 ЛД50 для каждого вида животного:

Куры - 0,02 мл вируссодержащей жидкости с концентрацией 8,5±0,7 ^ЭИД50/мл; Гуси - 0,02 мл вируссодержащей жидкости с концентрацией 5,5±0,7 lg ЭИД50/МЛ. Мыши - 0,03 мл вируссодержащей жидкости с концентрацией 1,1±0,4 lg ЭИД50/МЛ д штамма A/Chicken/Kurgan/05/2005; 4,7±0,6 lg ЭВДо/мл для штамма A/Duck/Kurgan/08/2005 и 6,7±0,7 lg ЭИДо/мл для штамма A/Chicken/Suzdalka/Nov-11/2005.

Кошки - 1 мл вируссодержащей жидкости с концентрацией 6,0±0,6 lg ЭИД^о/мл. Beet, животным из контрольных групп интраназально вводилось аналогичное количеств физиологического раствора.

Птиц и мышей умерщвляли методом цервикальной дислокации. Убой коше производили тотальным обескровливанием при помощи кардиальной пункции, под эфирнь наркозом. Органы для патолого-гистологического исследования получали:

• у кур через 12, 24, 36, 48 и 72 часа после заражения, используя по 3 животных н временную точку;

• у гусей через 3, 5, 7, 10, 15 сутки после заражения, используя по 3 животных н временную точку;

• у мышей каждые 24 часа в течение 8 суток после заражения. В эксперимент-использовали по 3 мыши на временную точку;

• у кошек с интервалом 24 Часа в течение 8 суток.

После вскрытия у мышей иссекали трахею и легкие; у птиц и кошек исследовали слизистую оболочку носовой полости, трахею и легкие. Все полученные образцы фиксировали в 4% растворе параформальдегида при 4°С в Течение 48 часов.

вируса гриппа A (H5N1)

доза заражения (lg ЭИДго/гол.)

способ заражения

экспериментальные

животные (п=количество голов)

объект изучения

A/Chicken/ Kurgan/ 05/2005

А/Duck/ Kurgan /08/2005

А/Chicken/ SuzdaJka /Nov-11/2005

A/Goose/ Krasnoozerskoye /627/05

0,17

0,11

0,03

0,14

0,2

5,7

ИНТРАНАЗАЛЬНОЕ

LVTl

куры гуси мыши кошки

п=14 п=14 п=50 п=50 п=50 11=14

РЕСПИРАТОРНАЯ СИСТЕМА

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

световая микроскопия

\

электронная

микроскопия

Ч /

иммуногистохимня

Рис.1. Дизайн исследования Для светооптического исследования материал после фиксации обезвоживали по стандартной методике и заливали в парафин. Парафиновые срезы толщиной 4-5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, по ван Гизону с докраской эластических волокон резорцин-фуксином Вейгерта. Просмотр препаратов а микрофотосъемка проводились на световом микроскопе Imager Z1 (Zeiss, Германия).

Для электронно-микроскопического исследования образцы легких, после фиксации в 4% параформальдегиде промывали в трех порциях раствора Хенкса по 30 минут в каждой, дофиксировали в 1%-ом растворе четырехокиси осмия в течение 2 часов. Затем образцы быстро промывали в двух порциях раствора Хенкса, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации, проводили через ацетон, заливали в смесь эпона и аралдита. Из блоков, залитых в смесь эпоксидных смол, готовили полутонкие (1мкм) и ультратонкие срезы на

ультратоме Ultracut (Reichert-Jung, Австрия). Полутонкие срезы окрашивали 1% раствором азура II, приготовленном на 1% растворе тетрабората натрия. Ультратонкие срезы последовательно контрастировали спиртовым раствором уранилацетата и цитратом свинца. Ультратонкие срезы исследовали в электронном микроскопе JEM 1400 (Jeol, Япония), фотосъемку проводили с помощью встроенной цифровой камеры Jeol и цифровой камеры бокового ввода Veleta (SIS, Германия).

Для иммунопероксидазной реакции использовали парафиновые срезы, которые наносились на предметные стекла, обработанные полилизином. В качестве первых антител использовали антитела к нуклеопротеину (NP) вируса гриппа A (H5N1) в разведении 1:100. Антитела любезно предоставлены профессором R.G.Webster. После депарафинирования срезы обрабатывали в СВЧ печи при температуре 120°С в течение 7 минут и помещали в 1,5% раствор перекиси водорода на 10 мин. Для устранения неспецифических реакций срезы инкубировали с блокирующей сывороткой. Инкубацию срезов с первыми антителами проводили 30-60 минут при комнатной температуре во влажной камере. Промывку осуществляли в фосфатном буфере (PBS) (pH 7,2-7,4). Затем срезы инкубировали с биотинированными антителами (affinity-purified anti-immunoglobulin, panspecific). Реакцию выполняли при помощи набора Novocastra peroxidase detection system (RE7120-K500) (Novocastra Ltd., UK). Пероксидазу выявляли раствором диаминобензидина тетрагидрохлорида (DAB). В качестве отрицательного контроля использовали срезы без применения первых антител.

Результаты исследования и их обсуждение Серия экспериментов, в которой для заражения вирусом гриппа A (H5N1) были использованы различные виды животных, представила особенности репликации вируса и вызываемых им патологических изменений клеток и тканей респираторной системы. Современные принципы морфологической диагностики инфекционных болезней в целом, и гриппа, в частности, позволили исследовать локализацию вируса в клетке и внеклеточном пространстве, а также описать изменения структуры слизистых оболочек верхних дыхательных путей, трахеи, бронхов и собственно респираторной ткани.

Проведенное комплексное патоморфологическое исследование с использованием методов световой и электронной микроскопии показало, что при интраназальном заражении кур вирусом гриппа A (H5N1) штамма A/Chicken/Kurgan/05/2005 патологический процесс захватывал все слизистые оболочки от полости носа до альвеол и сопровождался дистрофией и некрозом эпителиоцитов. Основные патоморфологические проявления инфекции, а также взаимодействие вируса гриппа с компонентами клеток дыхательной системы у кур представлены в таблицах 1-3.

Причиной дистрофических и некротических изменений ткани являлась интоксикация, обусловленная выработкой цитокинов при развившемся воспалительном процессе, а появляющиеся участки некроза и распада тканей становились новыми источниками интоксикации.

Морфологические эквиваленты присутствия вируса обнаруживались в эпителии носа, трахеи, бронхов, парабронхов и воздушных капилляров. Воспаление при заражении кур развивалось остро и быстро распространялось по всем уровням дыхательной системы. Выраженные нарушения гемодинамики проявлялись полнокровием сосудов и капилляров, появлением крупных кровоизлияний, парезом микроциркуляторного русла, тромбообразованием, развитием отека всех соединительнотканных элементов. Особенности нарушений кровообращения обусловливали выраженность сосудисто-экссудативных

явлений, повреждение стенок сосудов. В эндотелии сосудов и капилляров также обнаруживались вирус-специфические изменения.

Таблица 1

Патологические изменения в респираторной системе кур при заражении _вирусом гриппа А (Н5Ш)_

место повреждения срок заражения

12 час 24 час 36 час 48 час 72 час

слизистая оболочка носовой полости дистрофия реснитчатого эпителия и глацдулоцитов дистрофия и некроз эпителия дистрофия и некроз эпителия и очаги воспалительно- клеточной инфильтрации дистрофия, некроз, апоптоз и десквамация эпителия дистрофия и некроз, очаги воспалительно- клеточной инфильтрации

слизистая оболочка трахеи и бронхов гиперплазия и гиперсекреция бокаловидных клеток, отек и полнокровие интерстиция, очаги воспалительно -клеточной инфильтрации дистрофия реснитчатого эпителия, гиперсекреция бокаловидных клеток, отек интерстиция тоже некроз слизистой оболочки, обширные кровоизлияния некроз слизистой оболочки, обширные кровоизлияния, очаги воспалительно- клеточной инфильтрации

респираторная ткань отек, дистрофия и некроз альвеолоцитов II типа дистелектазы, мелкие очаги воспалительно- клеточной инфильтрации, отек, апоптоз альвеолоцитов I типа, дистрофия и некроз альвеолоцитов II типа дистелектазы, крупные очаги воспалительно- клеточной инфильтрации, апоптоз альвеолоцитов I типа, дистрофия и некроз альвеолоцитов II типа интенсивная воспалительно- клеточная инфильтрация некроз, апоптоз и десквамация эпителиоцитов отек, некроз

сосудистый компарт-мент диапедезные кровоизлияния стаз, отек, сладж, увеличение количества кровоизлияний, деэндотелизация отек, дистония сосудов, увеличение количества кровоизлияний, деэндотелизация крупные кровоизлияния, отек, деэндотелизация множественные обширные кровоизлияния, дистония сосудов, некроз сосудистой стенки, деэндотелизация

Выявленные основные признаки РДС сочетались с течением воспалительного процесса и развитием бронхитов и пневмонии. Патологические изменения распространялись на все слои слизистой оболочки трахеи и бронхов, включая мышечные оболочки и интерстиций.

Развитие инфекции, при заражении гусей вирусом гриппа А (Н5Ш) имело значительные отличия. Если течение заболевания у кур носило молниеносный характер,

быстро заканчиваясь летальным исходом, что и обусловило незначительную продолжительность эксперимента, то грипп у гусей развивался постепенно.

Таблица 2

Расположение вирусных частиц в воздухопроводящей системе кур при заражении __вирусом гриппа А (Н5Ы1) __

срок заражения реснитчатые клетки бокаловидные клетки клетки базального слоя

ядра ЦМ почкование на апикальной ЦМ не выявлено

12ч поперечные и продольные профили микротрубочек, перераспределение хроматина на внутренней поверхности репликация ВЧ (сферической формы с четкими контурами, без нуклеокапсида), единичные ВЧ с «опушенным» контуром

24ч

Збч

48ч - почкование вирусных частиц на мембранах ГЭПР, кГ

Примечание: ВЧ - вирусные частицы; ГЭПР - гладкий эндоплазматический ретикулум; кГ — комплекс Гольджи; ЦМ - цитоплазматическая мембрана

Таблица 3

Расположение вирусных частиц в респираторном компартменте легких кур при заражении ___вирусом гриппа А (Н5Ш)_

срок заражения альвеолоциты I типа альвеолоциты II типа

ядра цитоплазма и ЦМ ядра цитоплазма и апикальная ЦМ

12 час перераспределение хроматина, вирус специфические структуры почкование ВЧ на апикальной поверхности ЦМ, скопление ВЧ сферической формы с двухслойной мембраной и спикулами, ВЧ с нуклеокапсидами, или зернистым, осмиофильным содержимым не выявлено почкование на апикальнбй поверхности единичных нитевидных выростов, крупные ВЧ в цитоплазме сферической, овальной или удлиненной формы с характерными признаками в виде нуклеокапсида

24 час перераспределение хроматина, микротрубочки почкование ВЧ на мембране, скопление зрелых ВЧ в цитоплазме, ВЧ в вакуолях не выявлено скопление ВЧ с нуклеокапсидами в цитоплазме, почкование на мембране

36 час перераспределение хроматина, микротрубочки ВЧ в цитоплазме и вакуолях не выявлено ВЧ в вакуолях цитоплазмы

48 час перераспределение хроматина, микротрубочки зрелые ВЧ в цитоплазме не выявлено ВЧ, почкующиеся на мембранах кГ

Примечание: ВЧ - вирусные частицы; ГЭПР - гладкий эндоплазматический ретикулум; кГ — комплекс Гольджи; ЦМ - цитоплазматическая мембрана

Особенности патологического процесса и взаимодействие вируса гриппа с компонентами клеток дыхательной системы гусей отражены в таблицах 4,5.

При развитии инфекции, вызванной вирусом гриппа А (Н5Ш) у гусей, нарушалась синхронность течения патологических процессов и выявлялось уникальное сочетание одновременного и агрессивного развития процессов некроза и апоптоза. При этом апоптотически измененные клетки обнаруживались в очагах некроза Апоптоз преобладал в

альвеолоцитах I типа, базальных клетках эпителиального слоя трахеи и бронхов; а некроз - в альвеолоцитах II типа и эндотелиальных клетках. Эти процессы сопровождались отеком и деструкцией коллагеновых и эластических волокон.

Таблица 4

Патологические изменения в респираторной системе гусей при заражении __вирусом гриппа А (Н5М1)_

место повреждения срок за эажения

3 сут 5 сут 7 сут 10 сут

слизистая оболочка носовой полости дистрофические изменения эпителия, отек собственной пластинки слизистой оболочки дистрофические и некротические изменения эпителия, отек собственной пластинки слизистой оболочки, мелкие диапедезные кровоизлияния нарастание некротических изменений реснитчатого эпителия, гиперплазия и гиперсекреция бокаловидных клеток, отек всех соединительноткан ных прослоек дистрофиически-некротические изменения слизистой оболочки, очаги воспаления

слизистая оболочка трахеи и бронхов дистрофия реснитчатого эпителия, гиперплазия и гиперсекреция бокаловидных клеток гиперсекреция бокаловидных клеток, жидкость в просветах, отек всех соединительнотканных прослоек, очаги воспаления тоже некроз стенки бронхов, очаги воспаления

респираторная ткань дистелектазы и эмфиземы, мелкоочаговая мононук-леарная инфильтрация, преобладание апоптоза в альвеолоцитах I типа, дистрофически-некротические изменения с нарушением синтеза и секреции сурфактанта в альвеолоцитах II типа крупные очаги ателектаза, очаги воспалительной инфильтрации, дистрофически-некротические изменения альвеолоцитов И типа очаги дистелехтаза, выраженная дистрофия элителиоцитов воздушных капилляров, мелкие очаги воспалительной инфильтрации в участках деструкции респираторной ткани, дистрофически-некротические изменения альвеолоцитов II типа некротические изменения, очаги воспаления, дистрофически-некротические изменения альвеолоцитов II типа

сосудистый отдел полнокровие капилляров, крупные кровоизлияния, тромбообразование деэндотелизация стаз эритроцитов в капиллярах, деэндотелизация кровоизлияния, деэндотелизация множественные обширные кровоизлияния, дистония сосудов, деэндотелизация

Кроме того, у гусей основные признаки острого РДС сочетались с течением

нарастающего воспалительного процесса Мелкие очаги пневмонии выявлялись в паренхиме

легкого уже на 3 сутки после заражения и сохранялись до 15 суток. Для трахеи и бронхов характерны дистрофически-некротические изменения реснитчатого эпителия, гиперплазия и гиперсекреция бокаловидных клеток, что, в целом, сопровождалось нарушением гистоархитеюгоники эпителиального слоя. Через 7 дней появлялись признаки пролиферации эпителия с формированием очагов гиперплазии эпителия бронхов, трахеи и слизистой оболочки альвеолярно-трубчатых желез носа. Преобладали выраженные дистрофически-некротические изменения альвеолоцитов II типа, сопровождающиеся утратой их фенотипических признаков, что способствовало развитию РДС, обусловленного нарушением синтеза, секреции и утилизации сурфактанта. Выраженные нарушения гемодинамики в респираторной системе птиц приводили к появлению других важных признаков РДС: интраальвеолярному, интрабронхиальному и генерализованному стромапьному отеку, а также кровоизлияниям, стазу и сладжу эритроцитов в капиллярах, тромбообразованию.

Таблица 5

Расположение вирусных частиц в клетках дыхательной системы гусей при заражении

вирусом гриппа А (Н5М)

срок заражения эпителий носовой полости слизистая оболочка трахеи и бронхов альвеолоциты 1типа альвеолоциты II типа

3 сутки скопление ВЧ в цитоплазме базальных эпителиоцитов, в очагах некроза зрелые вирионы, преобладали крупные ВЧ, до 120нм в диаметре почкование ВЧ на апикальной поверхности мерцательных эпителиоцитов, в цитоплазме эпителиоцитов вирус-специфические структуры, в ядрах электронно-плотные зернистые включения репликация ВЧ на поверхности ЦМ в виде сферических и нитчатых структур, в ядрах электронно-плотные включения репликация и почкование вируса, перераспределение хроматина

5 сутки почкование вируса,накопление ВЧ в цитоплазме и в вакуолях накопление ВЧ между ресничками, почкование вируса на апикальной ЦМ бокаловидных эпителиоциов, в ядрах перераспределение хроматина накопление ВЧ в цитоплазме, почкование ВЧ на цитоплазматических мембранах ГЭПР, кГ, репродукция ВЧ на внутренней поверхности ЦМ, из них часть дефектные на апикальной поверхности активное. почкование ВЧ с формированием нитевидных выростов ЦМ

Примечание: ВЧ - вирусные частицы; ГЭПР - гладкий эндоплазматический ретикулум; кГ — комплекс Гольджи; ЦМ - цитоплазматическая мембрана.

Помимо альвеолоцитов наибольшей степени деструктивных изменений подвергались эпителиальные клетки. Признаки репродукции вируса и вирусных компонентов выявлялись в клетках эпителия слизистых оболочек респираторного тракта, а также в альвеолоцитах и эндотелиоцитах. Следует отметить, наличие зрелых вирусных частиц в очагах некроза, обладающих специфическим фенотипом. В целом, процесс деструкции клеток, сопровождавшийся высвобождением вирионов, соответствовал цитопатогенному эффекту.

При исследовании особенностей патологического процесса, вызванного вирусом гриппа птиц, в воздухопроводящих путях легких мышей выявлялся очаговый характер поражения бронхиального дерева. Заражение всеми штаммами вызывало выраженные деструктивные изменения эпителиальной выстилки воздухоносных путей. Одновременно в эпителиальном слое появлялись многоядерные клетки..

Основные патологические изменения в респираторной системе мышей показаны в таблице 6.

Таблица 6

Патологические изменения в респираторной системе мышей при заражении вирусом гриппа А (Н5Ш)

А /СЫскеп/Ки^ап /05/2005

А ЛЭиск/Кш^ап /08/2005

А /СЬюкеп/БигсЫка /1^оу-1 1/2005

дис- и ателектазы;

мелкоочаговая пневмония;

гнойно-некротический бронхит;

нарушения микроциркуляции;

интраальвеолярные кровоизлияния;

формирование гиалиновых мембран

дистрофически-некротические изменения бронхиального эпителия;

перибронхиальные, периваскулярные и мелкие паренхиматозные очаги воспаления;

развитие гнойно-некротического бронхита;

нарушения гемодинамики;

интраальвеолярные _кровоизлияния_

дистрофические изменения бронхиального эпителия;

вирусные частицы в реснитчатых эпителиоцитах;

дис- и ателектазы;

множественные мелкие очаги воспалительно-клеточной инфильтрации;

нарушение гемодинамики; развитие интраальвеолярных, периваскулярных и перибронхиальных кровоизлияний

Изучение особенностей патологического процесса в респираторной ткани мышей, вызванного тремя штаммами вируса А(Н5№), обладающими разной патогенностью для данного вида животных, показало, что, несмотря на определенные отличия в степени выраженности и времени возникновения отдельных структурных изменений, прослеживались закономерности, характерные для исследуемой инфекции. В респираторном отделе легких одновременно развивались несколько патологических процессов: выявлялись морфологические признаки РДС, воспаления и расстройств гемодинамики, включающие морфологические эквиваленты синдрома ДВС. В первую очередь следует отметить раннее развитие признаков воспаления (пневмонии).

Изучение особенностей патологического процесса в респираторной системе кошек, вызванного штаммом А/Соозе/КгаБпоогегекоуе/627/05 вируса гриппа А (Н5М1) показало, что воспалительный процесс развивался с первых суток после инфицирования и с разной степенью активности затрагивал все отделы респираторной системы.

Особенности патологического процесса и взаимодействие вируса гриппа с компонентами клеток дыхательной системы кошек отражены в таблицах 7, 8.

Нарушения в верхних дыхательных путях представлены дистрофическими изменениями эпителия слизистой оболочки носа, возникновением очагов его пролиферации и неравномерной секреции бокаловидных клеток. Характерны отек подслизистой оболочки, ее лимфоцитарная инфильтрация, парез сосудов. В трахее регистрировалось очаговое поражение эпителиальной выстилки. Дистрофические изменения эпителиоцитов и их десквамация в первые дни заболевания сопровождались нарушениями гемодинамики в виде выраженного отека и диапедезных кровоизлияний. При иммуногистохимическом

исследовании вирусный антиген обнаруживали в цитоплазме и ядрах бокаловидных и реснитчатых эпителиоцитов, а также в клетках базального слоя.

В респираторном отделе легкого уменьшалось воздухонаполнение с различной степенью выраженности, отмечались нарушения гемодинамики, развитие воспалительных изменений. Пневмония в первые сутки после заражения носила мелкоочаговый характер, но уже с третьих суток захватывала большую часть паренхимы легких и принимала сливно" характер. В патологический процесс вовлекались все компартменты легких и через 5 суто после заражения развивались гнойный бронхит и крупноочаговая гнойная пневмония Степень поражения респираторной системы нарастала и через 7 суток после заражени изменения соответствовали гнойно-некротическому бронхиту и гнойно-фибринозно пневмонии. Иммунопероксидазная реакция позволила выявить антиген вируса гриппа как альвеолоцитах и эндотелиальных клетках, так и в альвеолярных макрофагах сегментоядерных нейтрофилах.

Таблица

Патологические изменения в респираторной системе кошек при заражении _вирусом гриппа А (Н5Ш)

место повреясде-ния

Сроки заражения

24 час

3 сут

5 сут

7 сут

слизистая оболочка носа

многоядерные клетки-симпласты, повышение секреторной активности бокаловидных клеток, дистрофия и десквамация реснитчатых клеток

многоядерные клетки-симпласты, повышение секреторной активности бокаловидных клеток, дистрофия и десквамация реснитчатых клеток, подслизистая оболочка отечна, инфильтрирована лимфоцитами

слизистая оболочка трахеи

дистрофия, десквамация эпителия, отек, диапедезные кровоизлияния в собственной пластинке

интенсивная десквамация эпителия, отек собственной пластинки

очаговые повреждения эпителия, отек собственной пластин

бронхи

то же, перибронхиально мононуклеарная инфильтрация

дистрофия,

некроз, десквамация эпителия, отек собственной пластинки

то же, очаговая лейкоцитарная инфильтрация

дистрофия и некроз эпителиоцитов слизисто оболочки

респираторная ткань

дистелектаз,

очаговая лейкоцитарная инфильтрация межальвеолярных перегородок

дистелектаз, жидкость в альвеолах, очаговая лейкоцитарная инфильтрация

крупные очаги воспалительно-

клеточной инфильтрации

отечная жидкость, воспалительная инфильтрация

сосуды

стаз эритроцитов в капиллярах, парез сосудов мышечного типа, деэндотелизация

крупные субэпителиальные

кровоизлияния, интраальвеолярные кровоизлияния, деэндотелизация

парез сосудов с агрегаци эритроцитов, деэндотелизация

В целом, результаты проведенного исследования показали возможность развития тяжелых респираторных нарушений при заражении кошек вирусом гриппа А (Н5Ш), сопровождающихся выраженными дистрофически-некротическими изменениями эпителиальной выстилки верхних дыхательных путей, трахеи, бронхов и альвеол, стремительным формированием очагов воспаления в респираторной ткани и развитием гнойно-некротического бронхита.

Таблица 8

Расположение вирусных частиц в клетках дыхательной системы кошек при заражении

вирусом гриппа A (H5N1)

срок заражения эпителий носовой полости слизистая оболочка трахеи и бронхов альвеолоциты I типа альвеолоциты II типа

1 сутки почкование ВЧ на апикальной поверхности ЦМ бокаловидных клеток, в ядрах зернистые включения почкующиеся нитевидные формы вируса между ресничками, репликация ВЧ на внутренней ЦМ, в ядрах зернистые включения и микротрубочки не выявлено в ядрах и цитоплазме вирус-специфические структуры и формирующиеся ВЧ

3 -5 сутки почкование ВЧ на апикальной поверхности ЦМ эпителиальных клеток выявление округлых и нитевидных форм вируса в реснитчатых и бокаловидных клетках, филоформы вирионов между ресничками, в ядрах перераспределение хроматина почкование ВЧ сферической и нитевидной формы, в ядрах микротрубочки в цитоплазме скопление ВЧ, филоформы вирионов, в ядрах перераспределение хроматина и микротрубочки

7 сутки в цитоплазме эпителиоцитов накапливались ВЧ репликация вируса происходила на апикальной поверхности ЦМ не выявлено на нуклеолемме ядер скопление множества ВЧ

Примечание: ВЧ - вирусные частицы; ГЭПР - гладкий эндоплазматический ретикулум; кГ — комплекс Гольджи; ЦМ - цитоплазматическая мембрана.

Известно, что изменения органов дыхания при гриппе характеризовались, прежде всего, альтерацией эпителия дыхательных путей (Ibricevic А. et al., 2006; Kuiken Т., Taubenberger J.K., 2008). Среди них отмечались неспецифические дистрофические изменения, обусловленные действием продуктов вирусного синтеза, в виде дефектов ресничек эпителиоцитов (Цирзерлинг A.B., 1977; Lowry R.J., 2003).

Таким образом, при заражении экспериментальных животных разных видов высокопатогенным вирусом гриппа птиц A (H5N1) отмечено поражение всех компартментов легких. Поражение эпителиальной выстилки слизистой оболочки носа, трахеи и бронхов сопровождалось выраженными дистрофическими и некротическими изменениями реснитчатых эпителиоцитов, гиперсекрецией бокаловидных эпителиоцитов, а также развитием воспалительного процесса в слизистых оболочках, который быстро распространялся на все слои слизистых оболочек. Выявленная цилиарная дисфункция и гиперсекреция нарушали воздухопроводящую функцию дыхательных путей, что усугублялось обтурацией бронхов за счет бронхоспазма или скопления клеточного детрита и воспалительно-клеточного экссудата. На этом фоне отмечалась активная репликация вирусных частиц на апикальной и латеральной поверхностях эпителиоцитов и появление вирус-специфических структур в ядрах клеток.

Известно, что для более глубоких слоев стенки дыхательных путей характерны оте полнокровие и клеточная инфильтрация, а через несколько дней после появления первы клинических симптомов заболевания обнаруживались признаки регенерации эпители (Цинзерлинг A.B., Цинзерлинг В.А., 2002). Дистрофически-деструктивные изменения клето их десквамация, повреждение ресничек, вызываемые респираторными вирусами, приводят снижению активности местных факторов защиты с последующим наслоением бактериально инфекции. Таким образом, одним из основных патологических процессов, возникающих пр гриппозной инфекции, является развитие цилиарной дисфункции.

Повреждение поверхностного эпителия слизистой оболочки бронхов у животны разных видов приводило к следующим функционально-структурным нарушениям: 1 изменение клиренса ресничек, 2) изменение количества и качества слизи, вырабатываемог бокаловидными клетками. Это вызывало уменьшение резистентности слизистой оболочк кондактивных отделов респираторной системы, распространению инфекции в дистально направлении, в том числе и за счет гипо- и акинезии ресничек. Следует добавить, чт воздействие на мерцательный эпителий вируса гриппа является частным случае приводящим к изменению характера и двигательной активации ресничного аппарата. Пр этом известно, что индуцированное возбудителем инфекционного процесса поврежден ткани сопровождается высвобождением медиаторов воспаления и накопление катехоламинов в легочной ткани (Мотавкин П.А., Гельцер Б.И., 1998). В то же вре. закономерно усиление тонических свойств миоцитов и сужение бронхиальных просвето охарактеризованное как бронхоспазм у использованных в эксперименте животных.

Рассматривая в целом воздухопроводящую систему, необходимо подчерки значимость ее эпителиальной выстилки для функции легких, поскольку эпителий поми выполнения защиты и участия в кондиционировании воздуха контролирует проходимо бронхов, определяющих оптимальную наполняемость воздухом респираторных отделов счет изменения тонуса мышечных клеток. При инфекции, вызываемой вирусом гриппа (H5N1) у всех видов животных, хотя и с некоторыми отличиями в степени выраженност присутствовали дистрофические, или дистрофически-некротические изменения эпителия, процессе развития инфекционного заболевания именно эпителиоциты первыми испытывг интенсивное воздействие вирусных частиц, поскольку являются местом их наибол интенсивной репликации. Одновременно уменьшение воздухонаполнения респираторн ткани, обусловленное альтерацией эпителиальной выстилки, способствует формировани дис- и ателектазов, которые сами по себе могут рассматриваться как морфологическ эквивалент РДС.

Патологический процесс при экспериментальном гриппе птиц носил диффузнь характер и захватывал все слои стенок бронхов всех уровней, что приводило к нарушени воздухопроводящей и очищающей функций бронхиального дерева. Данн патоморфологические изменения можно охарактеризовать как острое, распространенн поражение кондактивного компартмента, сопровождающееся перестройкой секреторно аппарата слизистой оболочки бронхов и нарушением очистительной функции бронхо снижением неспецифической резистентности; развитием воспалительного (гнойн некротического) процесса как в эпителии, так и в глубоких слоях бронхиальной стенки обструктивными нарушениями вентиляции легких. Все это приводило к быстрому развита острой дыхательной недостаточности и являлось важным компонентом развивающего РДС. Одновременно в эпителиальном слое появлялись многоядерные клетки. Известно, ч вирус гриппа, являясь мощным иммунодепрессантом, способствует развита

пролиферативных и метапластических изменений бронхиолоальвеолярного эпителия (Безуглова Т.В. и др., 1991).

Развитие первичной вирусной пневмонии при гриппозной инфекции представляет собой особую проблему. Принято считать, что пневмония является относительно редким осложнением гриппа и в большинстве случаев развивается при вторичном инфицировании бактериальной микрофлорой (Цинзерлинг А.В., 1977; БуЬ^ 1.К. е1 а1., 2000). Однако при инфицировании людей вирусом гриппа А субтипа Н5Ш заболевание отличается тяжестью клинических проявлений, связанных именно с развитием первичной вирусной пневмонии и РДС. Аналогичные данные получены при экспериментальном инфицировании вирусом гриппа А (Н5Ш) обезьян, у которых развивался РДС и лихорадка, ассоциированные с некротической интерстициальной пневмонией (Шттекугаап СЗ.Р. й а!., 2001). Появление воспалительно-клеточной инфильтрации, начиная с первых суток заболевания при заражении вирусом гриппа птиц свидетельствовало о первично-вирусном характере выявленных изменений. Особенностью развившейся первичной вирусной пневмонии при заражении вирусом гриппа птиц Н5Н1 являлось ее быстрое прогрессирование.

Выявленные поражения альвеолярного эпителия продемонстрировали стереотипность, свойственную гриппозной инфекции. Это, в первую очередь, альтеративно-деструктивные изменения альвеолоцитов II типа, в которых помимо изменения фенотипических особенностей распределения и секреции ламеллярных телец, наблюдалось разрастание множественных нитевидных выростов на апикальной поверхности цитоплазмы. Выявленные вирусные частицы в цитоплазме альвеолоцитов II типа у всех видов животных полностью блокируют функцию клетки.

Поверхность альвеолярных мембран легких представляет собой наибольшую по площади поверхность в организме, которая контактирует с окружающей средой. В ходе экспериментов прослежена реакция клеток аэрогематического барьера на вирусную инфекцию в виде повреждения структур, вызывающих нарушение функциональной активности клеток. Острое повреждение эпителиальных и эндотелиальных клеток альвеолярной перегородки приводило к тяжелым нарушениям газообмена, гипоксии и развитию РДС. В целом, повреждения легких возникли в результате течения следующих процессов: 1) прямой репликации вирусов в клетках; 2) непрямого действия клеточных цитокинов; 3) ишемии в результате грубых нарушений микроциркуляции.

Следует отметить, в клетках легких животных, инфицированных вирусом гриппа А (Н5Ш), нарушалась последовательность течения патологических процессов и выявлялось сочетание одновременного развития процессов некроза и апоптоза. При этом апоптотически измененные клетки обнаруживались в очагах некроза, ассоциированного с высоким уровнем вирусной репликации. Наиболее часто апоптоз выявлялся в альвеолоцитах I типа, базальных клетках эпителиального слоя трахеи и бронхов; а некроз - в альвеолоцитах II типа и эндотелиальных клетках. В последнее время большое значение придается роли апоптоза в патогенезе острых и хронических вирусных инфекций человека и животных, однако его роль в патогенезе гриппа птиц не установлена.

Поражение респираторного компартмента проявлялось уменьшением воздушности, дистрофически-некротическими изменениями альвеолоцитов I и II типов, нарушением структуры стромальных компонентов. Появление гиалиновых мембран, выстилающих стенки альвеол, было обнаружено только при заражении вирусом гриппа А (Н5М1) мышей. Однако это позволяет расценивать данный патологический элемент как прогностически неблагоприятный, который при наличии других признаков таких как отек, кровоизлияния,

некроз клеток (особенно альвеолоцитов II типа) и воспалительно-клеточная инфильтрация, может резко снизить эффективность лечебных мероприятий.

Известно, что при респираторных инфекциях общие неспецифические изменения, как и при других инфекционных заболеваниях, заключаются в возникновении дистрофических процессов, а также расстройствах кровообращения (Цинзерлинг A.B., 1977). Основным местом размножения вируса служат реснитчатые и бокаловидные клетки слизистой оболочки верхних дыхательных путей, и инфекция распространяется по всему протяжению респираторного тракта - от носовых ходов до терминальных бронхиол и альвеол (Цинзерлинг A.B., Цинзерлинг В.А., 2002; Bay A. et al., 2007; van Riel D. et al., 2007). Дистрофические изменения альвеолярного эпителия в ходе эксперимента варьировали по степени выраженности, отмечалось формирование очагов некроза в респираторной ткани.

Наличие выстилающих альвеолы гиалиновых мембран, отечной жидкости, эритроцитов и волокон фибрина в просветах альвеол мышей, зараженных вирусом гриппа А (H5N1), расценивалось как морфологические признаки РДС. Подобные изменения в альвеолах были описаны при гриппе у людей (Ware L.B., Matthay М.А. 2000; Taubenberger J.K. et al. 2005). В респираторной ткани у заболевших животных происходило повреждение аэрогематического барьера, приводящее к накоплению отечной жидкости в альвеолах за счет повышения проницаемости эндотелия капилляров. Сама отечная жидкость и сформированные гиалиновые мембраны блокировали поступление кислорода в организм, а прилежащие альвеолы - спадались, еще больше усиливая дыхательную недостаточность.

При любых инфекционных заболеваниях и, в особенности, при гриппе существенное значение в танатогенезе придается нарушениям кровообращения и развитию ДВС-синдрома. При гриппе действие вирусов и продуктов метаболически-протеолитических процессов на стенку сосудов приводит к микроциркуляторным нарушениям, проявляющихся спазмом капилляров с последующей дилатацией, стазами, тромбозами, повышением проницаемости сосудистой стенки и появлением микродиапедезных кровоизлияний (Цинзерлинг A.B. и др., 1990; Осидак JI.B. и др., 2004). Тромбообразование происходило в результате выраженного венозного застоя и нарушений микроциркуляции в виде агрегации эритроцитов, затрудняющих и останавливающих кровоток. Развитие ДВС-синдрома в респираторном компартменте легких при заражении животных вирусом гриппа A (H5N1) характеризовалось стазом и агрегацией эритроцитов с их деформацией и изменением тинкгориальных свойств, расслоением крови на эритроциты и плазму в просвете сосудов, выпадением в просвете сосудов и альвеол свободно лежащих нитей фибрина, а также формированием тромбов различного характера. У всех видов животных выявлен внутрисосудистый и интраальвеолярный гемолиз эритроцитов. Эти изменения сопровождались интерстициальным отеком и внутриальвеолярными кровоизлияниями. В настоящем исследовании выявлены все основные патоморфологические признаки фазы гиперкоагуляции синдрома ДВС: внутрисосудистая коагуляция, микротромбы, геморрагии и некрозы участков респираторной ткани.

Следует обратить внимание на присутствие структурных признаков реорганизации соединительной ткани межальвеолярных перегородок, которые проявлялись в виде значительного утолщения эластических волокон и исчезновения их извитости. Компактные скопления эластики отмечались не только в очагах ателектаза, но и распределялись диффузно в паренхиме легкого.

Особое внимание во всех группах экспериментальных животных обращали на состояние сосудистого компартмента. Установлено, что поражение сосудов не ограничивается только развитием морфологических признаков ДВС-синдрома. Нарушения

гемодинамики в виде выраженного отека, в том числе периваскулярного и перибронхиалыюго, а также отека соединительнотканных перегородок обнаруживали до развития ДВС-синдрома. Характерным признаком развития гриппозной инфекции было появление дистопии сосудов, проявляющееся в их спазме и парезе. При этом в динамике развития заболевания у экспериментальных животных в сосудах мышечного типа преобладал парез сосудов, развивающийся после разрешения спазма и отличавшийся не только десквамацией эндотелиальных клеток, но и фрагментацией эластических мембран сосудистой' стенки. В патологический процесс вовлекались все слои стенки сосудов, и альтеративные изменения выявлялись также в миоцитах мышечной оболочки. Кровенаполнение венозных сосудов варьировало, но чаще всего регистрировали полнокровие.

Для микроциркулярного русла с первых часов заболевания свойственно состояние стаза эритроцитов в капиллярах и их агрегация в виде сладж-феномена. Только на более поздних стадиях болезни появлялись запустевшие, парегичесмг измененные капилляры. Патологические изменения в строении стенок сосудов и их функциональном состоянии при активном размножении вируса гриппа в эндотелиоцитах можно расценивать как из основных звеньев развития гриппозной инфекции.

При экспериментальном заражении животных вирусом гриппа А (Н5М1) рано развивались признаки регенеративных процессов, сопровождающихся пролиферацией эпителия слизистых оболочек дыхательных путей, которые расценивались как процессы гиперплазии и гипертофии. При этом в респираторной ткани появлялись очаги разрастания эластических волокон, связанные с реакцией соединительной ткани легких на течение воспалительного процесса. Схема патогенеза инфекции, вызванной экспериментальным заражением животных вирусом гриппа А (Н5№), представлена на рисунке 2.

В целом, в патогенезе гриппозной инфекции, вызванной вирусом гриппа птиц А (ГОШ), выделены основные синдромы, обусловливающие тяжесть течения заболевания и его исход: респираторный дистресс-синдром и синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания. Роль воспаления при этом не является приоритетной.

ВЫВОДЫ

1. При ультраструкгурном исследовании у инфицированных птиц (кур и гусей) и млекопитающих (мышей и кошек) репликация вируса гриппа А (Н5Ш) выявлена в реснитчатых и бокаловидных клетках эпителиальной выстилки слизистых оболочек дыхательных путей, альвеолоцитах I и II типов, а также в эндотелиальных клетках и очагах некроза.

2. Патологические изменения на тканевом, клеточном и субклеточном уровне носят стереотипный характер, развиваются во всех отделах респираторной системы и непосредственно связаны с процессом репродукции вируса гриппа. Тяжесть течения заболевания при заражении экспериментальных животных вирусом гриппа А (Н5№) и его исход определяют респираторный дистресс-синдром и синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания.

3. Одновременное развитие процессов дистрофии, некроза и апоптоза является характерным признаком поражения тканей легких высокопатогенными штаммами вируса гриппа А (Н5Н1).

4. При заражении вирусом гриппа А (Н5№) кур патологический процесс развивается стремительно и носит деструктивный характер. Для гусей, мышей и кошек свойственно более медленное развитие инфекции.

инфицирование животных вирусом гриппа А (Н5М1)

реснитчатые клетки

деструкция органелл вакуолизация цитоплазмы парциальные некрозы

бокаловидные клетки

гиперсекреция диско мпозиция цитоплазмы парциальные некрозы

цилиарная дисфункция

алвеолоциты Птипа

дистрофия десквамация некроз

эндотелии

дистрофия

некроз десквамация

нарушение

синтеза сурфактанта

повышение проницаемости аэро-гематического барьера

воздухопроводящий компартмент

респираторный компартмент

сосудистым компартмент

дистрофическо-некротические изменения эпигелиоцитов

гиперсекреция, гиперплазия бокаловидных клеток

отек, некроз собственной пластинки слизистой

дисталекгазы, ателектазы

воспалительно-клеточные инфильтраты

нарушение синтеза сурфактанта

некроз аэро-гематического барьера

дисгояия

формирование стазов

тромбообразование

дистрофия эндотелиоцитов

некроз эластических мембран

ОСНОВНЫЕ СИНДРОМЫ

гнойно-некротическое воспаление респираторный дистресс-синдром синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания

Рис.2. Схема патогенеза гриппозной инфекции у экспериментальных животных.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Онищенко Г.Г., Малкова Е.М., Таранов О.С., Омигов В.В., Грицык О.Б., Агафонов А.П., Корнеев Д.В., Сергеев A.A., Демина O.K., Шестопалов A.M., Ставскйй Е.А., Дроздов И.Г. Вирус гриппа A (H5N1): Атлас патологических изменений внутренних органов домашней птицы / под ред. Г.Г.Онищенко, И.Г.Дроздова. - Новосибирск: Информ-Экспресс, 2009. - 240 с.

2. Малкова Б.М., Таранов О. С., Агафонов А.П., Демина O.K., Грицык О.Б., Сергеев A.A., Дроздов И.Г. Патологические изменения воздухопроводящего компартмента легких мышей при экспериментальном гриппе птиц A/H5N1 /У Биомедицинский журнал (www.medlme.ru). - 2009. - Том. 10. - С. 492-507.

3. Малкова Е.М., Таранов О.С., Агафонов А.П., Демина O.K., Грицык О.Б., Сергеев A.A., Дроздов И.Г. Патологические изменения респираторного компартмента легких мышей при экспериментальном гриппе птиц A/H5N1// Биомедицинский журнал (www.medime.ru). - 2009. - Том. 10. - С. 508-523.

4. Малкова Е.М., Грицык О.Б.. Омигов В.В., Корнеев Д.В., Дадаева A.A., Ставскйй Е.А., Дроздов И.Г. Структурные изменения слизистой оболочки верхних дыхательных путей у домашних гусей Anser anser при экспериментальном гриппе A (H5N1) // Морфологические ведомости. - 2010. - №2. - С. 58-63.

5. Малкова Е.М., Грицык O.E., Ковалевская A.A., Омигов В.В., Шестопалов A.M., Зайковская A.B., Ставскйй Е.А., Дроздов И.Г. Патологические изменения респираторной системы домашних кошек Felis catas при экспериментальном гриппе птиц A(H5N1) // Морфологические ведомости. - 2010. - №3. - С. 30-35.

6. Рябчикова Е.И., Омигов В.В., Гетманова Т.Н., Демина O.K., Грицык О.Б., Сергеев A.A. Скарнович М.О., Шишкина Л.Н. Высокопатогенный вирус гриппа птиц: особенности поражения внутренних органов птиц и животных ¡1 VII Росссийско-германская конференция форума Коха-Мечникова «Туберкулез, СПИД, вирусные гепатиты, проблемы безопасности крови и менеджмент в здравоохранении». - Томск,

2007. - С. 224-225.

7. Рябчикова Е.И., Малкова Е.М, Грицык О.Б.. Таранов О.С., Демина O.K., Шиков А.Н., Дутов В.H Ультраструктурные особенности поражения легких мышей, зараженных разными штаммами высокопатогенного вируса гриппа птиц H5N1 // XXII Российская конференция по электронной микроскопии - Черноголовка, 2008.

8. Рябчикова Е.И., Малкова Е.М., Таранов О.С., Демина O.K., Грицык О.Б.. Сергеев A.A., Агафонов А.П., Сергеев А.Н., Дроздов И.Г. Особенности поражения легких при интраназальном заражении мышей штаммами разной вирулентности вируса гриппа субтипа H5N1II Современные проблемы инфекционной патологии человека. - Минск,

2008.-С. 108-112.

9. Грицык О.Б.. Демина O.K., Шиков А.Н., Агафонов А.П., Рябчикова Е.И. Изучение изменений крови и костного мозга мышей, зараженных штаммами вируса гриппа субтипа H5N1, обладающими разной патогенностью для данного вида животных // Проблемы совершенствования межгосударственного взаимодействия в подготовке к пандемии гриппа. - Новосибирск, 2008. - С.114 - 116.

10. Taranov O.S., Malkova Е.М., Gritsvk О.В.. Démina O.K., Ryabchikova E.I. Features of pathology in mice experimentally infected with highly pathogenic H5N1 influenza virus // CBMTS-Industry VI «The Fifth World Congress on Chemical, Biological and Radiological Terrorism». - Cavtat, Croatia. - 2009. - P. 207-210.

Список использованных сокращений

В АЖ - вирус-аллантоисная жидкость ВЧ - вирусные частицы

ГПЭР - гладкий эндоплазматический ретикулум

ДВС - диссеминированное внутрисосудистое свертывание

кГ - комплекс Гольджи

РДС - респираторный дистресс-синдром

РНК-рибонуклеиновая кислота

РКЭ развивающиеся куриные эмбрионы

ЦМ - цитоплазматическая мембрана

ЭИД50 - 50% эмбриональная инфекционная доза

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Грицык, Оксана Борисовна

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Современные представления о вирусе гриппа, особенности инфекции, вызываемой вирусом гриппа птиц А (Н51Ч1).

1.1 Современная классификация и клинические проявления гриппа.

1.2. Общая характеристика вирусов гриппа.

1.2.1. Струкгурно- функциональные свойства вируса гриппа.

1.2.2. Антигенная изменчивость вируса гриппа.

1.3. Эпидемиология гриппозной инфекции.

1.4. Особенности натогенеза гриппозной инфекции.

1.5. Морфологические изменения различных органов и. тканей при гриппе.

1.5.1. Патоморфологические изменения легких у человека при гриппе.

1.5.2. Патоморфологические внелегочные изменения у человека при 1риппе .;

1.5.3. Патоморфологические изменения легких у животных и птиц нри гриппе

1.5.4. Патоморфологические внелегочные изменения у живот ных и и гиц нри гриппе.

1.6. Вирус гриппа А (Н51Ч1).

1.6.1. Особенности вируса гриппа А (Н51Ч1).

1.6.2. Патогенность вируса гриппа птиц для человека.

1.6.3. Клинические особенности гриппа А (Н51Ч1) у людей.

1.6.4. Экспериментальные модели при исследовании свойств вируса 1рипна А (Н51Ч1).

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. Структурные изменения органов респираторной системы у различных видов животных.

3.1. Патолого-гистологические и ультраструктурные изменения респираторной системы у птиц.

3.1.1. Патологические изменения легких у кур.

3.1.2 Патологические изменения в легких гусей.

3.2. Патологические изменения дыхательной системы у мышей.

3.2.1 .Патологические изменения воздухопроводящего компартмента легких мышей при экспериментальном гриппе птиц A (H5N1).

3.2.2 Патологические изменения респираторного компартмента легких мышей при экспериментальном гриппе птиц A (H5N1).

3.3. Патологические изменения в респираторной системе кошек.

ГЛАВА 4. Обсуждение результатов исследования.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Патоморфологические изменения респираторной системы различных видов животных при экспериментальном заражении вирусом гриппа A (H5N1)"

Актуальность работы

Грипп — острое вирусное высоко контагиозное инфекционное заболевание. Вирусы гриппа относятся к семейству ОгЛогтхоупчёае. Вирус гриппа А является РНК-вирусом, кодирующим до 11 белков [146]. Резервуаром вирусов гриппа А в природе являются водоплавающие дикие птицы, которые считаются естественными хозяевами вируса гриппа А [164; 19]. Заболевание у диких птиц сопровождается, как правило, бессимптомным течением инфекции, в то время как для домашних птиц характерна высокая летальность. Появление высокопатогенного вируса гриппа птиц А (Н5Ш) привело к разрушительной эпизоотии глобального масштаба, в которую были вовлечены страны Азии, Европы и Африки [7; 87]. Этот возбудитель приобрел способность вызывать тяжелые случаи респираторных заболеваний среди людей, которые характеризуются развитием пневмоний, респираторного дистресс-синдрома (РДС) и мультиорганных поражений [32].

На протяжении последних лет высокопатогенные варианты вируса гриппа птиц А (Н5Ы1) были выделены от многих млекопитающих, в том числе от тигров, леопардов, домашних кошек, домашних собак, диких грызунов. Заболевание у представителей этих видов протекало как респираторная инфекция, часто в патологический процесс вовлекались несколько систем организма [60; 143; 99; 115; 46].

Особенности воздействия вируса гриппа изучаются на различных моделях экспериментальных животных. Наиболее часто в экспериментах используют птиц, мышей, хорьков, обезьян и свиней [91; 113; 102]. Однако большинство работ связаны с оценкой эффективности лекарственных препаратов и вакцин, а не целенаправленно с изучением патогенеза вирусной инфекции. В настоящее время исследования, посвященные анализу структурных изменений, обусловленных воздействием вируса гриппа А (Н5"Ы1), носят разрозненный характер [145; 175; 154], и не обобщают наиболее характерные особенности патогенеза заболевания, возникающего у разных видов животных. Органы дыхания наиболее уязвимы при развитии заболевания, вызываемого вирусом гриппа, что делает актуальным изучение патогенетических особенностей развития инфекционного процесса при исследовании патолого-гистологических и ультраструктурных изменений в респираторной системе. Цель работы: оценить структуру и морфогенез вируса гриппа, и изучить развитие патологических процессов в респираторной системе у различных видов животных при экспериментальном заражении вирусом гриппа А (Н5Ы1). Задачи исследования:

1. Исследовать морфологические изменения, вызванные вирусом гриппа А (Н51ЧI), в клетках дыхательной системы у различных видов животных (кур, гусей, мышей, кошек), идентифицировать клетки-мишени, поддерживающие репродукцию вируса.

2. Изучить патолого-гистологические и ультраструктурные характеристики воздухопроводящего, респираторного и сосудистого компартментов дыхательной системы при заражении вирусом гриппа А (Н5Ш) птиц и млекопитающих.

3. Выделить видовые особенности репликации вируса гриппа и стереотипные реакции при развитии инфекционного процесса, обусловленного заражением экспериментальных животных вирусом гриппа А (Н5ЬП).

4. Представить патогенез развития основных патологических процессов в легких при гриппе А (Н5Ш) у различных видов животных и особенности репродукции вируса.

Научная новизна

Впервые показаны, как стереотипные, так и видовые особенности развития патологического процесса в слизистых оболочках кондактивного и респираторного компартментов легких при инфицировании некоторых птиц и млекопитающих вирусом гриппа А (Н5Ы1). Выявлена репликация вируса гриппа не только на апикальной, но и на латеральных поверхностях эпителиоцитов, а также на мембранных комплексах клеточных органелл эпителиоцитов бронхопроводящего и респираторного' отделов легких. Впервые представлены данные о возможной локализации вирусных частиц в участках некроза при поражении вирусом А (Н5Ш) слизистых оболочек ^ дыхательной системы и описаны их структурные особенности. Даны ультраструктурные характеристики вируса В' различных видах клеток у животных отдельных видов, а' также особенности изменения клеточных органелл, мембран и структуры ядра.

Впервые обобщены данные о поражении копдактивного, респираторного и сосудистого компартментов легких. Показано развитие респираторного дистресс-синдрома при повреждении эпителиоцитов и альвеолоцитов, приводящее к нарушениям цилиарного аппарата, системы сурфактанта и развитию фиброза. Представлены данные о доминирующем формировании филоформ вируса гриппа в альвеолоцитах II типа. Выявлен характер повреждения сосудистого компартмента и проанализирована его роль в развитии синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС), генерализации инфекции и танатогенезе.

Представлены данные о сопряженности процессов некроза и апоптоза при заражении вирусом гриппа А (Н5Ы1) и их зависимость от типа клетки и вида животного.

Практическая значимость

Выявленное и описанное поражение респираторного компартмента, проявляющееся уменьшением воздушности, дистрофически-некротическими изменениями альвеолоцитов I и II типов, нарушением структуры стромальных компонентов, а также появлением гиалиновых мембран, выстилающих стенки альвеол, позволяет расценивать данные патологические элементы как прогностически неблагоприятные, которые при наличии других признаков, таких как отек, кровоизлияния, некроз клеток (особенно альвеолоцитов II типа) и воспалительно-клеточной инфильтрации, лежат в основе патогенеза гриппозной инфекции и должны учитываться при проведении лечебно-реанимационных мероприятий. Положения, выносимые на защиту:

1. Репликация вируса гриппа А (Н5Ы1) показана в клетках эпителиальной выстилки слизистых оболочек дыхательных путей и альвеол, а также в эндотелиальных клетках и очагах некроза у различных видов животных. Выявление плеоморфных вирусных частиц при ультраструктурном исследовании в клетках кондактивного, респираторного и сосудистого компартментов легких чаще происходит при затяжном характере течения заболевания, чем при молниеносной летальной инфекции. При развитии заболевания, вызванного заражением вирусом гриппа А (Н5Ш), выделены основные синдромы, обусловливающие тяжесть течения заболевания и его исход: респираторный дистресс-синдром и синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания.

2. При заражении животных высокопатогенным вирусом гриппа А (Н51чИ) развиваются первичная вирусная пневмония и бронхит, которые в динамике развития заболевания принимают гнойный или гнойно-некротический характер. Показано появление в эпителиальной выстилке на начальных стадиях инфекционного процесса многоядерных клеток и развитие ранних регенеративных процессов, сопровождающихся пролиферацией эпителия слизистых оболочек дыхательных путей при реконвалесценции.

3. Одновременное развитие процессов дистрофии, некроза и апоптоза рассматривается как характерный признак поражения тканей легких высокопатогенными штаммами вируса гриппа А (Н5М1).

4. Подтверждены различия в чувствительности различных видов животных к заражению вирусом гриппа А (Н5Ы1).

5. Процесс почкования плеоморфных частиц вируса гриппа происходит на апикальной и латеральной поверхностях клеток, а также в мембранных цитоплазматических органеллах. Полиморфизм вирусных частиц больше связан с типом клетки, стадией заболевания, чем с видом животного.

Апробация работы

Материалы диссертации были доложены и обсуждены на XI Российско-германской конференции форума Коха-Мечникова «Туберкулез, СПИД, вирусные гепатиты, проблемы безопасности крови и менеджмент в здравоохранении» (Томск, 2007), XXII Российской конференции по электронной микроскопии (Черноголовка, 2008), Научно-практической конференции «Современные проблемы инфекционной патологии человека» (Минск, 2008), Международной научно-практической конференции «Проблемы совершенствования межгосударственного взаимодействия в подготовке к пандемии гриппа» (Новосибирск, 2008), международной конференции CBMTS-Industry VI «The Fifth World Congress on Chemical, Biological and Radiological Terrorism» ( Cavtat, 2009).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 4 статьи в реферируемых научных журналах, включенных в список ВАК, и одна монография.

Структура и объем диссертации

Содержание диссертации изложено на 141 странице печатного текста. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, списка литературы и приложения, иллюстрирована 7 таблицами и 50 рисунками. Список литературы включает 38 отечественных и 122 зарубежных источника.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Грицык, Оксана Борисовна

123 ВЫВОДЫ

1. При ультраструктурном исследовании у инфицированных птиц (кур и гусей) и млекопитающих (мышей и кошек) репликация вируса гриппа А (Н5КП) выявлена в реснитчатых и бокаловидных клетках эпителиальной выстилки слизистых оболочек дыхательных путей, альвеолоцитах I и II типов, а также в эндотелиальных клетках и очагах некроза.

2. Патологические изменения на тканевом, клеточном и субклеточном уровне носят стереотипный характер, развиваются во всех отделах респираторной системы и непосредственно связаны с процессом репродукции вируса гриппа. Тяжесть течения заболевания при заражении экспериментальных животных вирусом гриппа А (Н5Ш) и его исход определяются степенью выраженности респираторного дистресс-синдрома и синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания.

3. Одновременное развитие процессов дистрофии, некроза и апоптоза является характерным признаком поражения тканей легких высокопатогенными штаммами вируса гриппа А (Н51Ч1).

4. При заражении вирусом гриппа А (Н5Ш) кур патологический процесс развивается стремительно и носит деструктивный характер. Для гусей, мышей и кошек свойственно более медленное развитие инфекции. инфицирование животных вирусом гриппа А (Н51Ч1) реснитчатые клетки дестр\ кция органелл, вакуолизация цитоплазмы, парциальные некрозы бокаловидные клетки альвеолоциты II типа гиперсскреция, дискомпозпция цитоплазмы, парциальные некрозы дистрофия десквамация некроз эндотелии дистрофия некроз десквамация воздухопроводящии компартмент дистрофическо-некротические изменения эпителиоцитовгиперсекреция, гиперплазия бокаловидных клеток отек, некроз собственной пластинки слизистой респираторный комнартмент дистелектазы, ателектазы воспалительно-клеточные инфильтраты нарушение синтеза сурфактанта некроз аэро-гематического барьера сосудистыи компартмент дистония формирование стазов тромбообразование дистрофия эндотелиоцитов некроз эластических мембран

ОСНОВНЫЕ СИНДРОМЫ гноино-некротическое воспаление респираторный дистресс-синдром синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания

Рис.50. Схема патогенеза гриппозной инфекции у экспериментальных животных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Грицык, Оксана Борисовна, Кольцово

1. Агафонов А.П., Демина O.K., Шиков А.Н. и др. Вирус гриппа птиц А (H5N1) // Вакциноуправляемые респираторные вирусные инфекции. Грипп, корь, краснуха, эпидемический паротит // Под ред. И.Г.Дроздова. — Новосибирск, 2008. 210 с.

2. Безуглова Т.В., Казанцева И.А., Ланге А., Ретиг В. Патоморфология хронизации и исходов микоплазма-вирусных пневмоний в эксперименте // Арх. патол. 1991. - №11. - С. 33-37.

3. Валькович Э.И. Морфологические изменения почек у детей при аденовирусной и респираторно-синцитиальной инфекциях // Арх. патол. -1974. №12. - С. 17-21.

4. Валькович Э.И. Вирусные и микоплазменные гломерулопатии у детей //Арх. патол. 1980. -№3.-С. 10-15.

5. Варясин В.В., Шастина Г.В. Изменения сердца при некоторых острых респираторных инфекциях у детей // Арх. патол. 1983. - №10. — С. 21-26.

6. Вольберг Е.Д., Шастина Г.В. Изменение поджелудочной железы при острых вирусных респираторных инфекциях // Арх. патол. 1974. - №12. — С. 33-36.

7. Вракин, В.Ф., Сидорова М.В. Анатомия и гистология домашней ппщы//М.: Колос, 1984.-С. 139- 159.

8. Донченко A.C., Юшков Ю.Г., Леонов C.B. и др. Разработка вакцины против высокопатогенного вируса гриппа птиц H5N1// Ветеринария. 2009. № 2. С. 23-26.

9. Ерман Б.А., Тулакина Л.Г., Устьянцев В.П. и др. Ультраструктурная патология инфекционных болезней. Новосибирск: Наука, 1992. — 92 с.

10. Ерман Б.А., Тулакина Л.Г., Шабунина Н.Р. и др. Ультраструктурная патология врожденной инфекции, вызванной респираторными вирусами // Арх. патол. 1991. - №2. - С. 27-32.

11. Есипова И. К. Легкое в норме. Новосибирск: Наука, 1975.

12. Заплатников A. JI. Принципы рациональной терапии острых респираторных вирусных инфекций у детей раннего возраста // Русский медицинский журнал. 2004. - №13. - С. 790-795.

13. Исаков В.А. Тяжелые формы гриппа (клиника и система этапного лечения): Автореф. дис. д-ра мед наук. — С-Петербург, 1996.

14. Кропоткина Е.А., Руднева И.А., Русанова О.С. и др. Механизм ограничения репродукции реассортантов вируса гриппа А при неполном функциональном соответствии продуктов генов гемагглютинина и нейраминидазы // Вопр Вирусол. 1998. - №. 1. - С. 17-20.

15. Кузнецов O.K., Степанова JT.A. Механизмы возможного появления пандемического вируса из возбудителя гриппа птиц // Российский биомедицинский журнал (www.medline.ru). 2006. - Т.7. - С. 337-348.

16. Лобанова Т.П., Кихтенко Н.В., Сараев Д.В. и др. Птичий грипп // Грипп птиц: происхождение инфекционных биокатастроф. С-Петербург: Росток, 2005.-С. 61-95.

17. Львов Д.К., Ямникова С.С., Федякина И.Т. и др. Экология и эволюция вирусов гриппа в России (1979-2002 гг.) // Вопр. вирусол. — 2004. № 3. -С. 17-24.

18. Львов Д.К., Ямникова С.С., Забережный А.Д., Гребенникова Т.В. Межпопуляционные взаимодействия в системе вирусы гриппа А — животные человек // Вопр. Вирусол. - 2005. - №.4. - С. 4-11.

19. Львов Д.К., Забережный А.Д., Алипер Т.И. Вирусы гриппа: события и прогнозы // Природа. 2006. - №6. - С. 3-13.

20. Малеев В.В., Соминина A.A., Цыбалова JI.M. и др. Птичий грипп: эпидемиология, клиника и лечение // Грипп птиц: происхождение инфекционных биокатастроф С-Петербург: Росток, 2005. — С. 103-128.

21. Маянский А.Н. Микробиология для врачей (очерки патогенетической микробиологии. Нижний Новгород: Изд-во НГМА, 1999. - 400 с.

22. Мельникова В.Ф., Аксенов O.A., Вовк Ю.И. О диагностическом значении оксифильных включений при гриппе //Бюлл. экспер. биол. — 1974. -№10.-С. 120-124.

23. Мотавкин П.А., Гельцер Б.И. Клиническая и экспериментальная патофизиология легких. М., Наука, 1998, 336с.

24. Осидак JI.B., Жилинская H.H., Дриневский В.П. и др. Новый этиотропный комплекс для лечения гриппа// Детские инфекции. — 2004. -№4. С. 54-57.

25. Петров В.Ю., Якунина JT.H., Плахута Т.Г., Сосков Г.И. Сравнительная характеристика острой тромбоцитопенической пурпуры у детей, ассоциированной с ОРВИ и гриппом // Педиатрия. 2004. - №2. - С. 30-36.

26. Пигаревский В.Е. Гистопатология и вопросы патогенеза гриппа. — JL: Медицина, 1964.

27. Семенов С.П., Коновалов Г.В., Тарос Л.Ю., Кудрявцева В.К. Патоморфологические изменения в головном мозге и некоторых внутренних органах при экспериментальной гриппозной инфекции у мышей // Арх. патол. 1990. - №5. - С. 50-55.

28. Смородинцев A.A. Гипотезы и факты о происхождении пандемических вирусов // Вопр. вирусол. — 1975. №1. - С. 105-113.

29. Смородинцев A.A. Грипп и его профилактика JL: Медицина, 1984. -384 с.

30. Смородинцев A.A., Лузянина Т.Я., Иванова H.A. Возвращение вируса гриппа AI и проблема происхождения пандемических вирусов // Вопр. вирусол. 1979. - № 1. - С. 87-91.

31. Соминина A.A., Сорокин Е.В., Царева Т.Р., Кореняко И.Е. Вирус гриппа А (H5N1) как один из вероятных возбудителей предстоящей пандемии // Цитокины и воспаление. — 2006. №1. - С.3-9.

32. Учайкин В.Ф. Диагностика, лечение и профилактика гриппа и острых респираторных заболеваний у детей. — Москва, 2004. — 14 с.

33. Цинрзерлинг A.B. Этиология и патологическая анатомия острых респираторных инфекций. — JL: Медицина, 1977. — 160 с.

34. Цинзерлинг A.B., Шастина Г.В. Энтероколит при острых вирусных респираторных инфекциях у детей // Арх. патол. 1974. - №10. - С. 54-59.

35. Цинзерлинг A.B., Анисимова Ю.Н., Иоакимова Н.В. Острые респираторные инфекции у умерших детей и роль ДВС-синдрома при этих заболеваниях // Арх. патол. 1990. - №6. - С. 7-12.

36. Цинзерлинг A.B., Цинзерлинг В.А. Современные инфекции: Патологическая анатомия и вопросы патогенеза. — С-Петербург, 2002. — 352 с

37. Цинзерлинг В.А. Патологическая анатомия и некоторые вопросы патогенеза поражений головного мозга респираторными вирусами: Автореф. дис. докт.мед. наук. М., 1988.

38. Цинзерлинг В.А., Чухловина M.J1. Инфекционные поражения нервной системы: вопросы этиологии, патогенеза и диагностики. — С-Петербург: ЭЛБИ-СПб, 2005. 405 с.

39. Шастина Г.В. Поражение кишечника при острых вирусных и микоплазменных инфекциях // Арх. патол. 1986. - №12. — С. 22-29.

40. Шастина Г.В. Морфологические изменения кишечника при острых респираторных вирусных, микоплазменной и сочетанных инфекциях: Автореф. дис. д-ра мед. наук. Л., 1988.

41. Якунин Ю.А., Ямпольская Э.И., Кипнис С.Л., Сысоева И.М. Болезни нервной системы у новорожденных и детей раннего возраста. М.: Медицина. 1979.-е. 187- 192.

42. Abdel-Ghafar A.N., Chotpitayasunondh T., Gao Z. et al. Update on avian influenza A (H5N1) virus infection in humans // N. Engl. J. Med. 2008. - Vol. 358.-P. 261-273.

43. Alexander D.J. A review of avian influenza in different bird species // Vet. Microbiol. 2000. - Vol. 74. - P. 3-13.

44. Austin F.J., Werster R.G. Antigenic mapping of an avian HI influenza virus haemagglutinin and interrelationships of HI viruses from humans, pigs and birds // J. Gen. Virol. 1986. - Vol.67. - P. 983-992.

45. Barnard D. Animal models for the study of influenza pathogenesis and therapy // Antiviral research. 2009 - Vol. 82 - P. 110-122

46. Basler C.F., Aguilar P.V. Progress in identifying virulence determinants of the 1918 H1N1 and the Southeast Asian H5N1 influenza viruses // Antiviral Res. -2008.-Vol. 79.-P. 166-178.

47. Bay A., Etlik O., Oner A.F. et al. Radiological and clinical course of pneumonia in patients with avian influenza H5N1 // Eur. J. Radiol. — 2007. Vol. 61.-P. 245-250.

48. Bean W.J., Cox N.J., Kendal A.P. Recombination of human influenza A viruses in nature // Nature. 1980. - Vol. 284. - P.638-640.

49. Bridges C., Katz J.M., Seto W.H. et al. Risk of influenza A (H5N1) infection among health care workers exposed to patients with influenza A (H5N1), Hong Kong // J. Infect. Dis. 2000. - Vol. 181. - P. 344-348.

50. Bruder D., Srikiatkhachorn A., Enelow R.I. Cellular immunity and lung injury in respiratory vims infection // Viral. Immunol. 2006. — Vol. 19. - P. 147155.

51. Buchy P., Mardy S., Vong S. et al. Influenza A /H5N1 virus infection in human in Cambodia // J. Clin. Virol. 2007. - Vol. 39. - P. 101-1061

52. Capua I., Alexander D.J. Human health implications of avian influenza viruses and paramyxoviruses // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2004. - Vol. 23.-P. 1-6.

53. Carson J.L., Collier A.M., Hu S.C.S. Acquired ciliary defects in nasal epithelium of children with acute viral upper respiratory infections // New. Engl. J. Med. 1985. - Vol. 312. - P. 463-468.

54. Chan P. Outbreak of avian influenza A (H5N1) virus infection in Hong Kong in 1997 //Clin. Infect. Dis. 2002.-Vol. l.-P. 58-64.

55. Chen B.J., Leser G.P., Morita E., Lamb R.A. Influenza virus hemagglutinin and neuraminidase, but not the matrix protein, are required for assembly and budding of plasmid-derived virus-like particles // J. Virol. 2007. - Vol. 81. - P. 7111-7123.I

56. Cheng C.Y., Poon L.L., Lau A.S. et al. Induction of proinflammatory cytokines in human macrophages by influenza A (H5N1) viruses: a mechanism for the unusual severity of human disease? // Lancet. — 2002. — Vol. 360. — P. 18311837.

57. Cheng C.Y., Suki M.Y., Lee J.S., Piris M. Induction of proinflammatory mediators by H5N1 infection of primary human lung microvascular endothelial cells // Cytokine. 2008. - Vol. 43. - P. 243-262.

58. Cheung C.Y., Poon L.L., Lau A.S. et al. Induction of proinflammatory cytokines in human macrophages by influenza A (H5N1) viruses: a mechanism for the unusual severity of human disease? //Lancet. 2002 - Vol. 360 - P.831 -837.

59. Chotpitayasunondh T., Ungchusak K., Hanshaoworakul W. et al. Human* Disease from Influenza A (H5N1), Thailand, 2004 // Emerg. Infect. Dis. 2005 -Vol. 11 - P. 201-209.

60. Cioc A.M., Nuovo G.J. Histologic and in situ viral finding in the myocardium in cases of sudden, unexpected death // Mol. Pathol. 2001. - Vol. 15.-P. 914-922.

61. Delogu M., De Marco M.A., Donatelli 1. et al. Ecological. aspects of influenza A virus circulation; in wild; birds of the Western Palearctic, // Vet: Res. Com. 2003. - Vol. 27. - P. 101 -106. . >

62. Dybing J.K., Schultz-Cherry K.S., Swayne D.E. et al . Distinct pathogenesis of Hong Kong H5N1 viruses, in mice compared to that of other highly pathogenesis 115 avian influenza viruses // J: Virol: Vol: 74. - P. 1443-1450.

63. Eccles R. Understanding the symptoms of the common cold and influenza

64. Lancet Infect. Dis. 2005. - Vol. 5: - P; 718-725 *

65. Da Silva E.V., Da Rosso A. P. et al. Araguari virus, a new member of the family Orthomyxoviridae: serologic, ultrastructural, and molecular characterization // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2005 - Vol. 73 - P. 1050-1058

66. Fesq II., Bacher M., Nain M., Gemsa D. Programmed; cell death (apoptosis) in human; monocytes infected by influenza A virus // Immunobiology. 1994.-Vol. 190.-P. 175-182.

67. Fouchier R.A., Munster V., Wallensten A. et al. Characterization of a novel influenza A virus hemagglutinin subtype (HI 6) obtained from black-headed gulls // J: Virol. 2005. - Vol. 79.- P. 2814-2822.

68. Frederick S. B. Kibenge, Molly J. T. Kibenge, et al. Antigenic variation among isolates of infectious salmon anaemia virus correlates: with genetic variation of the viral haemagglutinin gene //J. Gen, Virol. 2001 - Vol. 82 - P. 2869-2879.

69. Gao P., Watanabe S., Ito T. et al. Biological heterogeneity, including" ■systemic replication in mice, of H5Ni influenza A virus isolated; from humans in Hong Kong //J. Virol. 1999: - Vol. 73 - P. 3184-3189.

70. Garigliany M-M., Habyerrimana A., Lambecht B. et al. Influenza a strain-dependent pathogenesis in fatal H1N1 and H5N1 subtype infection of mice // Emerg. Inf. Dis. 2010. - Vol. 16 - P. 595-603.

71. Garsia-Sastre A., Egorov A., Matassov D. et al. Influenza A virus lacking the NS1 gene replicated in interferon-deflcient system // Virology. 1998. - Vol. 252.-P. 324-330.

72. Gibbs M.J., Armstrong J.S., Gibbs A.J. Recombination in the hemagglutinin gene of the 1918 "Spanish flu" // Science. 2001. - Vol. 293. - P. 1842-1845.

73. Gooskens J., Kuiken T., Claas E.C. et al. Severe influenza resembling hemorrhagic shock and encephalopathy syndrome // J. Clin. Virol. 2007. - Vol. 39.-P. 136-140.

74. Guan Y., Peiris J.S.M., Lipatov A.S. et al. Emergence of multiple genotypes of H5N1 avian influenza viruses in Hong Kong SAR // PNAS. 2002. -Vol. 99. - P. 8950-8955.

75. Gubareva L.V., McCullers J.A., Bethell R.C., Webster R.G. Characterization of influenza A/HongKong/156/97 (H5N1) virus in a mouse model and protective effect of zanavir on H5N1 infection in mice // J. Infect. Dis. — 1998. -Vol. 178.-P. 1592-1596.

76. Harder TC, Vahlenkamp TW. Influenza virus infections in dogs and cats. //Vet Immunol Immunopathol. 2010 - Vol. 134 - P. 54-60.

77. Hatada E., Saito S., Fukuda R. Mutant influenza viruses with a defective NS1 protein cannot block the activation of PCR in infected cells // J. Virol. 1999. -Vol. 73.-P. 2425-2433.

78. Hatta M., Gao P., Halfmann P., Kawaoka Y. Molecular basis for high virulence of Hong Kong H5N1 influenza A viruses // Science. 2001. - Vol. 293. -P. 1840-1842.

79. Hayden F., Croisier A. Transmission of avian influenza viruses to and between humans // J. Infect. Dis. 2005. - Vol. 192. - P. 1311 -1314.

80. Hien T.T., Liem N.T., Dung N.T. et al. Avian influenza A (H5N1) in 10 patients in Vietnam // N. Engl. J. Med. 2004. - Vol. 350. - P. 1179-1188.

81. Hinshaw V.S., Bean W.J., Webster R.G., Sriram G. Genetic reassortment of influenza A viruses in the intestinal tract of ducks // Virology. — 1980. Vol. 102.-P. 412-419.

82. Hinshaw V.S., Air G.M., Gibbs A.J. et al. Antigenic and genetic characterization of a novel hemagglutinin subtype of influenza A viruses from gulls // J. Virol. 1982 - Vol. 42. - P. 865-872.

83. Hinshaw V.S., Olsen C.W., Dybdahl-Sissoko N., Evans D. Apoptosis: a mechanism of cell killing by influenza A and B viruses // J. Virol. — 1994. Vol. 68.-P. 3667-3673.

84. Horimoto T., Kawaoka Y. Influenza: lessons from past pandemics, warnings from current incidents // Nat. Rev. Microbiol. — 2005. — Vol. 3. — P. 591600.

85. Hui D.S. Review of clinical symptoms and spectrum in humans with influenza A/H5N1 infection//Respirology. 2008. - Vol. 13-P. 10-13.

86. Hyland L., Webby R., Sandbulte M.R. et al. Influenza virus NS1 protein protect against lymphohemapoetic pathogenesis in an vivo mouse model // Virology. -2006. Vol. 349.-P. 156-163.

87. Ibricevic A., Pekosz A., Walter M.J. et al. Influenza virus receptor specificity and cell tropism in mouse and human airway epithelial cells // J. Virol. 2006. - Vol. 80. - P. 7469-7480.

88. Ito T. Molecular basis for the generation in pigs of influenza A viruses with pandemic potential // J. Virol. 1998. - Vol. 72. - P. 7367-7373.

89. Jang H., Boltz D., Sturm-Ramirez K. et al. Highly pathogenic H5N1 influenza virus can enter the central nervous system and induce neuroinflammation and neurodegeneration // PNAS. 2009. - Vol. 106. - P. 14063-14068.

90. Johnson N.P., Mueller J. Updating the accounts: global mortality of the 1918-1920 "Spainish" influenza pandemic // Bull. Hist. Med. 2002. - Vol. 76. -P. 105-115.

91. Kandun N., Trasnaningsih E., Purba W.H. et al. Factors associated with case fatality of human H5N1 virus infections in Indonesia: a case series // Lancet. -2008. Vol. 372. - P. 744-749.

92. Katz J.M., Lim W., Bridge C.B. et al. Antibody response in individuals infected with avian influenza A (H5N1) viruses and detection of anti-H5 antibody among household and social contacts // J. Infect. Dis. 1999. - Vol. 180. - P. 1763-1770.

93. Kawaoka Y., Yamnikova S., Chambers T.M. et al. Molecular characterization of a new hemagglutinin, subtype HI 4, of influenza A virus // Virology. 1990 - Vol. 179. -P.759-767.

94. Klopfleisch R., Wolf P.U., Uhl W. et al. Distribution of lesions and antigen of highly pathogenic avian influenza virus A/Swan/Germany/R65/06 (H5N1) in domestic cats after presumptive infection by wild birds // Vet. Pathol. 2007. -Vol. 44.-P. 261-268.

95. Koopmans M., Wilbrink B., Conyn M. et al. Transmission of H7N7 avian influenza A virus to human being during a large outbreak in commercial poultry farms in the Netherlands // Lancet. 2004. - Vol. 363. - P. 587-593.

96. Kuiken T., Rimmelzwaan G., van Riel D. et al. Avian H5N1 influenza in cats // Science. 2004. - Vol. 306. - P. 241.

97. Kuiken T., Taubenberger J.K. Pathology of human influenza revisited // Vaccine. 2008. - Vol. 265. - P. 59-66.

98. Larson E.W., Dominik J.W. et al. Influenza virus population dynamics in the respiratory tract of experimentally infected mice. //Infect Immun. 1976 - N 13 -P.438-47.

99. Latorre-Margalef N., Gunnarsson G., Munster V.J. et al. Effects of influenza A virus infection on migrating mallard ducks // Proc. Biol. Sci. 2009 -Vol.276 - P. 1029-36.

100. Leschnik M., Weikel J., Mostl K. et al. Subclinical infection with avian influenza A (H5N1) virus in cats // Em. Inf. Dis. 2007. - Vol. 13. - P. 243-247.

101. Likos A.M., Kelvin D.J., Cameron C.M. et al. Influenza viremia and the potential for blood-borne transmission // Transfusion. 2007. - Vol. 47. — P. 10801088.

102. Li K.S., Guan Y., Wang J. et al. Genesis of a highly pathogenic and potentially pandemic H5N1 influenza virus in eastern Asia // Nature. 2004. -Vol. 430.-P. 290-213.

103. Lipatov A.S., Govorkova E.A., Webby R.J. et al. Influenza: emergence and control // J. Virol. 2004. - Vol. 78. - P. 8951-8959.

104. Liu D., Liu X.L., Yan J.H. et al. Interspecies transmission and host restriction of avian H5N1 influenza virus // Sci. China. Ser. C. Life. Sci. - 2009. -Vol. 52(5).-P. 428-438.

105. Lois A. Zitzow, Thomas R. et al. Pathogenesis of Avian Influenza A (H5N1) Viruses in Ferrets //J. Virol. 2002 - Vol. 76, No. 9 - P. 4420-4429.

106. Lowen A.C., Palese P. Influenza vims transmission: basic science and implications for the use of antiviral drugs during a pandemic // Infect. Disord. Drug Targets. 2007. - VOL 7. - P. 318-328.

107. Lowry R.J. Influenza vims induction of apoptosis by intrinsic and extrinsic mechanisms // Int. Rev. Immunol. 2003. - Vol. 22. - P. 425-449.

108. Lu X., Tumpey T.M., Morken T. et al. A mouse model for the evaluation of pathogenesis and immunity to influenza A (H5N1) viruses isolated from humans // J. Virol. 1999.-Vol. 73.-P. 5903-5911.

109. Maines T.R., Lu X.H., Erb S.M. et al. Avian influenza (H5N1) viruses isolated from humans in Asia in 2004 exhibit increased virulence in mammals // J. Virol. 2005. - Vol. 79. - P. 11788-11800.

110. Maines TR., Jayaraman A., Belser JA. et al. Transmission and pathogenesis of swine-origin 2009 A(H1N1) influenza viruses in ferrets and mice // Science -2009 Vol. 325 - P.484-487.

111. Marschall J., Hartmann K. Avian influenza A H5N1 infections in cats // J. Fel. Med. Surg.-2008.-Vol. 10. P. 359-365.

112. Marschall J., Schulz B., Harder T.C. et al. Prevalence of influenza A H5N1 virus in cats from areas with occurrence of highly pathogenic avian influenza in birds. // Clin. J. Fel. Med.Surg.- 2008. Vol.10. - P. 355-358.

113. Matrosovich M., Tuzikov A., Bovin N. Early alterations of the receptor-binding properties of HI, H2 and H3 avian influenza virus hemagglutinins after their introduction into mammals // J. Virol. 2000. - Vol. 74. - P. 8502-8512.

114. McCauley J., Nakamura K., Palese P. et al. Virus taxonomy: seventh report of the International Committee on Taxonomy of Viruses // Academic Press, San Diego, Calif., 2000.- P. 585-597.

115. Morens D.M., Taubenberger J.K., Harvey H.A. et al. The 1918 influenza pandemic: lessons for 2009 and the future // Critical Care Medicine. 2010. - Vol. 38.-P. 10-20

116. Mori I., Komatsu T., Takeuchi K. et al. In vivo induction of apoptosis by influenza vims // J. Gen. Virol. 1995. - Vol. 76. - P. 2869-2873.

117. Morris S.J., Prise G.E., Barnett J.M. et al. Role of neuraminidase in influenza virus-induced apoptosis // J. Gen. Virol. 1999. - Vol. 80. - P. 137-146.

118. Murakami S., Iwasa A., Iwatsuki-Horimoto K. et al. Cross-clade protective immunity of H5N1 influenza vaccines in a mouse model // Vaccine. 2008. - Vol. 26. - P. 6398-6404.

119. Murphy B.R, Webster R.G. Orthomyxoviruses. // Fields virology. 1996. P. 1397-445.

120. Olafsson S., Kumlin U., Dimock K. et al. Avian influenza and sialic acid receptors: more than meets the eye? // Lancet Infect. Dis. 2005 — N 5 - P. 184188.

121. Pantin-Jackwood M.J., Swayne D.E. Pathobiology of Asian highly pathogenic avian influenza H5N1 virus infections in ducks. // Avian Dis. 2007 -N51-P. 250-259.

122. Pappas C., Aguilar PV., Basler CF., et al. Single gene reassortants identify a critical role for PB1, HA, and NA in the high virulence of the 1918 pandemic influenza virus. // Proc. Natl. Acad. Sc.i USA.- 2008 Vol. 8 - P. 3064-3069.

123. Perrone LA., Plowden JK., García-Sastre A. et al. H5N1 and 1918 pandemic influenza virus infection results in early and excessive infiltration of macrophages and neutrophils in the lungs of mice. //PLoS Pathog. — 2008 N 4(8) P.100-115.

124. Price G.E., Smith H., Sweet C. Differential induction of cytotoxicity and apoptosis by influenza virus strain of differing virulence // J. Gen. Virol. 1997 -Vol. 78-P. 2821-2829.

125. Reid A.H., Fanning T.G., Janczewski T.A. et al. Novel origin of the 1918 pandemic influenza virus nucleoprotein gene // J. Virol. 2004 - Vol. 78 - P. 12462-12470.

126. Rigoni M., Shinya K., Toffan A. et al. Pneumo- and neurotropism of avian origin Italian highly pathogenic avian influenza H7N1 isolates in experimentally infected mice // J.Virol. 2007 - Vol. 364 - P. 28-35.

127. Rimmelzwaan G.F., Kuiken T., van Amerongen G. et al. Pathogenesis of influenza A (H5N1) virus infection in primate model // J. Virol. 2001 — Vol. 75 -P. 6687-6691.

128. Rimmelzwaan G.F., Van Riel D., Baars M. et al. Influenza A virus (H5N1) infection in cats causes systemic disease with potential novel routes of virus spread within and between host // Am. J. Pathol. 2006 - Vol. 168 - P. 176-183.

129. Roberts H., Lim W.S. Viral lung infections and the potential for a human pandemic // Medicine. 2008. - Vol. 36. - P. 291-294.

130. Rogers G.N., Paulson J.C. Receptor determinants of human and animal influenza virus isolates: differences in receptor specificity of the H3 hemagglutinin based on species of origin. // J.Virol. 1983. - Vol. 127. - P. 361-373.

131. Rohm C. Different haemagglutinin cleavage site variants of H7N7 in an influenza A viruses outbreak in chickens in Leipzing, Germany // J.Virol. 1996 -Vol. 218-P. 253-257.

132. Rohm C., Zhou N., Suss J. et al. Characterization of a novel influenza hemagglutinin, HI 5: criteria for determination of influenza A subtypes. // Virologe. 1996(6).-Vol. 217. - P. 508-516.

133. Schultz-Cherry S., Krug R.M., Hinshaw V.S. Induction of apoptosis by influenza virus // Semin. Virol. 1998. - Vol. 8. - P. 491-495.

134. Shinya K., Ebina M., Yamada S. et al. Avian flu: influenza virus receptors in the human airway // Nature. 2006 - Vol. 440 - P. 435-436.

135. Shortridge K.F., Zhou N.N., Guan Y. et al. Characterization of avian influenza viruses from poultry in Hong Kong // Virology. 1998 - Vol. 252 -P.331-342.

136. Songsermn T., Amonsin A., Chutinimitkul S., et al. New Strain of Influenza A Virus (H5N1), Thailand // Em. Inf. Dis. 2007 March; 13(3): 506507.

137. Songserm T., Amonsin A., Jamon R. et al. Avian influenza H5N1 in naturally infected domestic cat // Em. Inf. Dis. 2006. - Vol. 12. - P. 681-683 .

138. Steinhauer D.A. Role of hemagglutinin cleavage for the pathogenicity of influenza virus // Virology. 1999. - Vol. 258. - P. 1-20.

139. Stephen EL., Dominik JW. et al. Treatment of influenza infection of mice by using rimantadine hydrochlorides by the aerosol and intraperitoneal routes. //Antimicrob Agents Chemother. 1975 -N 8 P.l54-158.

140. Suzuki Y. Sialobiology of influenza molecular mechanism of host range variation of influenza viruses // Biol. Pharm. Bull. 2005. - Vol. 28. - P. 399-408.

141. Takahashi M., Yamada T., Nakashita Y. et al. Influenza virus-indeced encephalopathy: clinicopathologic study of an autopsied case // Pediatr. Int. 2000 -Vol. 42-P. 204-214.

142. Tanaka H., Park C., Ninomiya A. et al. Neurotropism of the 1997 Hong Kong H5N1 influenza virus in mice // Vet. Microbiology. 2003 - Vol. 95 - P. 113.

143. Taubenberger J.K., Morens D.M. The pathology of influenza virus infections // Annu. Rev. Pathol. 2008 - Vol. 3 - P. 499-522.

144. Taubenberger J.K., Reid A.H., Krafft A.E. et al. Initial genetic characterization of the 1918 "Spanish" influenza virus // Science. — 1997 — Vol. 275-P. 1793-1796.

145. Taubenberger J.K., Reid A.H., Lourens R.M. et al. Characterization of the 1918 influenza virus polymerase genes //Nature. 2005 - Vol. 437 - P. 889-893.

146. Thanawongnuwech R., Amonsin* A., Tantilertcharoen R. et al. Probable Tiger-to-Tiger Transmission of Avian Influenza H5N1 // Em. Inf. Dis. J. 2005 -Vol. 11 P. 699-701

147. To K.F., Chan P.K., Chan K.F. et al. Pathology of fatal human infection associated with avian influenza A H5N1 virus // J. Med. Virol. 2001 - Vol. 63 -P. 242-246.

148. Trampuz A., Prabhu-R.M., Smith T.F. et al. Avian influenza: a new pandemic threat? // Mayo Clin. Proc. 2004. - Vol. 76. - P. 523-530.

149. Wagner R., Matrosovich M., Klenk H.D. Functional balance between haemagglutinin and neuraminidase in influenza virus infections // Rev. Med. Virol. -2002- Vol. 12-P. 159-66.

150. Walsh J.J., Dietlein L.F., Low F.N. et al. Bronchotracheal response in human influenza: type A, Asian strain, as studied by light and electron microscopic examination of bronchoscopic biopsies // Arch. Intern. Med. 1961. - Vol. 108. -P. 376-388.

151. Ware L.B., Matthay M.A. The acute respiratory distress syndrome // N. Engl. J. Med. 2000. - Vol. 342. - P. 1334-1349.

152. Webster R.G., .Bean W.J., Gorman O.T. et al. Evolution and ecology of influenza A viruses // Microbiol. Rev. 1992. - Vol. 56. - P. 152-179

153. Webster R.G., Govorkova E.A. H5N1 influenza-continuing evolution and spread // N. Engl. J. Med. 2006. - Vol. 355. - P. 2174-2177.

154. Webster R.G., Laver W.G. Antigenic variation of influenza viruses // In: The influenza viruses and influenza. Ed Kilbourne E.D. Academic Press, Inc. -1975. New York. - P. 270-314.

155. Webster R.G., Laver W.G., Air G.M., Schild G.C. Molecular mechanisms of variation in influenza viruses // Nature. 1982. - Vol. 296. - P. 115-121.

156. Webster R.G. The importance of animal influenza for human disease // Vaccine. 2002. - Vol. 20. - P. S16-S20. ~

157. Weiner LP., Fleming J.O. Viral infections of the nervous system. //J Neurosurg. 1984 - N 61 P. 207-224.

158. Wilschut J., McElhaney J.E. Antigenic drift and shift: epidemic and pandemic influenza // Influenza. Malta: Mosby. - 2005. - P. 45-67.

159. Wilschut J., McElhaney J.E. The influenza virus: structure and replication // Influenza. Malta: Mosby. - 2005. - P. 23-45.

160. WHO. A revised system of nomenclature for influenza viruses. //World Health Organization (WHO) Memorandum Bull.- 1980. Vol. 58. - P. 585-591.

161. WHO global influenza preparedness plan: the role of WHO and recommendations for national measures before and during pandemics Geneva: WHO, 2005 (http: // www. who.int.).

162. World Health Organization. Avian influenza ("bird flu") fact sheet. 2006. (http ://www. who. int/mediacentre/factsheets/avian in fluenza)

163. Xu C.L., Dong L.B., Xin L. et al. Human avian influenza A (H5N1) virus infection in China // Sci. China. Ser. C. Life Sci. - 2009 - Vol. 52 - P. 407-411.

164. Young J.F., Palese P. Evolution of human influenza A viruses in nature. Recombination contributes to genetic variation of H1N1 strains // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. - Vol. 76. - P. 6547-6551.

165. Yuen K. Y., Chan P. K. S., Peiris M., et al. Clinical features and rapid viral diagnosis of human disease associated with avian influenza A H5N1 viruses // Lancet. 1998. - Vol. 351. - P. 467-471.1. ИЛЛЮСТРАЦИИ

166. Рис. 2. Респираторная ткань легких кур через 12 часов после заражения штаммом А/СЫскеп/Клщ*ап/05/2005. Эритроциты в просвете парабронха. Периваскулярный отек. Полутонкий срез. Азур II. Ув. 400.

167. Рис. 3. Респираторная ткань легких кур через 12 часов после заражения штаммом АУСЫскеп/Клщтап/05/2005. Деструкция крист митохондрий. Скопление вирус-специфических частиц в цитоплазме альвеолоцита. Электронограмма. Ув. 10000

168. Рис. 4 Респираторная ткань легких кур через 24 часа после заражения штаммом А/СЫскеп/Киг§ап/05/2005. Некроз аэрогематического барьера. Ламеллярные тельца в просвете альвеолы. Электронограмма. Ув. 10000

169. Рис. 5. Респираторная ткань легких кур через 24 часа после заражения штаммом А/СЫскеп/Киг§ап/05/2005. Формирование крупной вакуоли в цитоплазме альвеолоцита II типа. Электронограмма. Ув. 15000

170. Рис. 8. Респираторная ткань легких кур через 36 часов после заражения штаммом АУСЫскеп/Кш^ап/05/2005. Формирование в цитоплазме альвеолоцита II типа крупных вакуолей, содержащих вирус-специфические частицы. Электронограмма. Ув. 10000

171. Рис. 9. Респираторная ткань легких кур через 36 часов после заражения штаммом А/СЬюкеп/Ки^ап/05/2005. Формирование в цитоплазме альвеолоцита II типа крупных вакуолей, содержащих вирус-специфические частицы. Электронограмма. Ув. 15000

172. Рис. 10. Эпителий трахеи гуся через 3 суток после заражения штаммом А/СЫскеп/Кигдап/05/2005. Дискомпозиция эпителиального слоя. Бокаловидные клетки переполнены слизью. Окраска гематоксилином и эозином. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 400.

173. Рис. 11 Респираторная ткань легких гуся через 5 суток, после заражения штаммом А/СЫскеп/Кш^ап/05/2005. Кровоизлияния в просветах парабронхов. Дистелектазы. Окраска гематоксилином и эозином. Ув 200.

174. Рис. 12. Поверхностный эпителий слизистой оболочки носа гуся через 5 суток после заражения вирусом гриппа А(Н5Ш). Пикноз и лизис ядер эпителиоцитов. Электронограмма. Ув. 10000

175. Рис. 13. Слизистая оболочка носа гуся через 5 суток после заражения вирусом гриппа А(Н5Ы1). Бокаловидные клетки слизистой оболочки носа через 5 суток после инфицирования. Репликация вируса на латеральных поверхностях клеток.

176. Рис. 14. Слизистая оболочка трахеи гуся через 5 суток после заражения вирусом гриппа А(Н5Ш). Почкование вируса гриппа на апикальной поверхности цитоплазмы бокаловидной клеткиЭлектронограмма. Ув. 15000- г

177. Рис. 16. Респираторная ткань легкого гуся через 5 суток, после заражения штаммом А/СЫскеп/Кш^ап/05/2005. Участок перибронхиальной паренхимы. Скопление гетерофилов в просвете парабронха. Спазм сосуда мышечного типа. Полутонкий срез. Азур II. Ув. 400.

178. Рис. 17. Слизистая оболочка бронха гуся Ашег ашег через 7 суток после заражения вирусом гриппа А (Н5Ш). Неравномерное распределение и утрата ресничек в клетке мерцательного эпителия. Вакуолизация цитоплазмы. Электронограмма. Ув. 10000

179. Рис. 18. Респираторная часть легкого гуся Ашег атег через 7 суток после заражения вирусом гриппа А (Н5Ш). Репродукция вируса в эпителиальных клетках выстилки воздушных капилляров. Электронограмма. У в.20000

180. Рис. 20. Легкое мыши, инфицированной вирусом гриппа птиц (штамм A/Chicken/ Kurgan/05/2005). 1 сутки после заражения. Дистрофические изменения и отек миоцитов мышечной оболочки крупных сосудов. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 400.

181. Рис. 21. Легкое мыши, инфицированной вирусом гриппа птиц (штамм А/СЫскеп/Ки^ап/05/2005). 1 сутки после заражения. Выраженные дистрофические изменения и десквамация эпителиоцитов слизистой оболочки бронхиолы. Полутонкий срез. Азур П. Ув. 400.

182. Рис. 25. Легкое мыши, инфицированной вирусом гриппа птиц (штамм А/СЫскеп/БигсЫка/Ыоу-! 1/2005). 5 сутки после заражения. Периваскулярная очаговая воспалительно-клеточная инфильтрация. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 400.

183. Рис. 26. Легкое мыши, инфицированной вирусом гриппа птиц (штамм A/Chicken/ Kurgan/05/2005). 5 сутки после заражения. Дистелектаз. Полнокровие капилляров. Утолщенные пучки эластических волокон. Полутонкий срез. Азур II. Ув. 400.

184. Рис. 27. Легкое мыши, инфицированной вирусом гриппа птиц (штамм А/СЫскеп/ Киг§ап/05/2005). 5 сутки после заражения. Дистрофические изменения ламеллярных телец. Почкование вируса на апикальной поверхности альвелоцита II типа. Электронограмма. Ув. 10000

185. Рис. 28. Респираторная часть легкого мыши, инфицированной вирусом гриппа птиц (штамм А/Duck/ Kurgan/08/2005) через 5 суток после заражения вирусом гриппа A (H5N1). Альвеолоцит I типа. Апоптоз ядра. Конденсация хроматина. Электронограмма. Ув. 10000

186. Рис. 29. Легкое мыши, инфицированной вирусом гриппа птиц (штамм A/Duck/ Kurgan/08/2005). 7 сутки после заражения. Очаг воспалительно-клеточной инфильтрации. Деструкция эластических волокон. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 200.

187. Рис. 30. Легкое мыши, инфицированной вирусом гриппа птиц (штамм А/СЫскеп/8игс1а1ка/Коу-11/2005). 1 сутки после заражения. Очаг воспалительно-клеточной инфильтрации в респираторной ткани легкого. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 200.

188. Рис 33. Слизистая оболочка носа кошки через 24 часа после заражения вирусом гриппа А(Н5Ш). Умеренные дистрофические изменения эпителиального слоя. Отек подслизистой оболочки. Полутонкий срез. Азур II. Ув. 400.

189. Рис. 34. Слизистая оболочка носовой полости кошки Felis catus через 24 часа после заражения вирусом гриппа A(H5N1). Гиперсекреция бокаловидных клеток. Пикноз ядер эпителиоцитов. Образование очагов парциального некроза. Электронограмма. Ув. 10000

190. Рис. 36. Трахея кошки через 24 часа после заражения вирусом гриппа А(Н5Ш). Дистрофические изменения и десквамадия эпителиоцитов. Эритроциты в просвете трахеи. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 400.

191. Рис. 37. Респираторная ткань легкого кошки Felis catus через 24 часа после заражения вирусом гриппа A(H5N1). Дистелектаз. Накопление неоднородного вещества в просветах альвеол. Полнокровие капилляров. Полутонкий срез. Азур И. Ув. 400.

192. Рис. 40 Слизистая оболочка носа кошки через 3 суток после заражения вирусом гриппа А(Н5Ш). Появление многоядерных клеток-симпластов. Полутонкий срез. Азур II. Ув. 400.

193. Рис. 41. Слизистая оболочка носа кошки через 3 суток после заражения вирусом гриппа А(Н5Ш). Появление многоядерных клеток-симпластов. Полутонкий срез. Азур II. Ув. 400.i ■ t