Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Поствакцинальный иммунитет к гриппу у разных видов домашних птиц
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов
Автореферат диссертации по теме "Поствакцинальный иммунитет к гриппу у разных видов домашних птиц"
На правах рукописи
ВАРКЕНТИН Андрей Владимирович
ПОСТВАКЦИНАЛЬНЫЙ ИММУНИТЕТ К ГРИППУ У РАЗНЫХ ВИДОВ
ДОМАШНИХ ПТИЦ
06.02.02 «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология»
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
-¿Н'ггс'С
Владимир - 2011
1 СЕН 2011
4852552
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), г. Владимир
Научный руководитель - доктор ветеринарных наук
ИРЗА Виктор Николаевич
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор
МИЩЕНКО Владимир Александрович
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», ФГБУ «ВНИИЗЖ» г. Владимир
доктор ветеринарных наук, профессор КУШНИР Анатолий Тимофеевич
Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии), г. Покров
Ведущая организация - ФГБУ «Всероссийский государственный
Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» ФГБУ «ВГНКИ», г. Москва
Защита диссертации состоится «04» октября 2011 г. в 10°° часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 220.015.01 при ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» по адресу: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец, ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных».
С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в библиотеке и на сайте диссертационного совета Д 220.015.01 при ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»: ЬИр//\уут.агпа11.ги.
Автореферат разослан «/¿>> сс и^б/сиГз. 20^г.
Ученый секретарь совета по защите докторских и кандидатских диссертаций, доцент
А.П. Пономарёв
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Грипп птиц (ГП) - высококонтагиозная особо опасная зооантропонозная болезнь. Заболевание наносит большой экономический ущерб, связанный с гибелью и уничтожением птицы, затратами на проведение ветеринарно-санитарных мероприятий, а также представляет опасность для человека [В.А. Бакулин, 2006].
В Российской Федерации высокопатогенный грипп птиц (ВПГП) не регистрировали с 1968г. по 2005г., и страна считалась благополучной по этому заболеванию. Низкопатогенные вирусы неоднократно выявляли в разные годы среди дикой перелётной птицы на территории страны. В 2005г. в РФ впервые зарегистрирован грипп птиц, вызванный вирусом гриппа птиц (ВГП) H5N1[H.A. Власов, 2006].
Вакцинацию в составе комплекса мер борьбы с ВПГП применяют в некоторых странах [I.Capua, 2004; Н. Chen, 2008-2009; I.H. Brown, 2007; L.D. Sims, 2007]. Обычно для этих целей используют инактивированные и/или векторные вакцины, экспрессирующие ген гемагглютинина [Yu. Kangzhen, 2007; Е. Spackman, 2008].
В РФ для предотвращения распространения и проникновения вируса H5N1 в птицеводческие предприятия с 2006г. применяется стратегия вакцинации домашних птиц разных видов в зонах повышенного риска, примыкающих к местам массовых скоплений диких перелетных водоплавающих птиц [Н. А. Власов, 2006].
В 2005г. в ФГУ «ВНИИЗЖ» по заданию Россельхознадзора была разработана вакцина против гриппа птиц инактивированная эмульгированная из штамма ВГП H5N1. Серийное производство препарата было организовано в ОАО «ПЗБ», и в 2006г. создан его необходимый резерв [Д.С. Сурнев, 2007]. Однако до выпуска первой серии вакцины грипп распространился в 8 субъектах РФ. Особенно тревожная ситуация сложилась в Южном Федеральном округе из-за проникновения вируса в промышленные предприятия, где погибло и было уничтожено более 1,5 млн. кур [A.M. Смирнов, 2007].
В ФГУ «ВНИИЗЖ» были проведены испытания антигенной и иммуногенной активности вакцины на курах, и была показана высокая эффективность биопрепарата. Однако изучение продолжительности поствакцинального иммунитета у разных видов домашних птиц на момент осуществления стратегии вакцинации не было проведено. В ходе анализа информации о напряженности иммунитета у домашних птиц в разных регионах РФ были получены противоречивые данные, что, видимо, было связано со сложностью обеспечения качественного и статистически достоверного контроля напряженности иммунитета у привитого поголовья в личных хозяйствах граждан. Поэтому изучение поствакцинального иммунитета к гриппу у разных видов птиц в экспериментальных условиях приобрело актуальность. Кроме того, занос в 2008г. в
РФ штамма Н5>Л ВГП новой генетической линии (клад 2.3.2) обусловил необходимость изучения протективных свойств вакцин в отношении этого штамма.
Цель и задачи исследований. Цель работы - изучение поствакцинального гуморального иммунитета к гриппу у разных видов домашних птиц. Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
- изучить динамику поствакцинального иммунитета к гриппу птиц у кур, уток, мускусных уток и гусей в зависимости от дозы, способа инъекции и кратности вакцинации;
- определить возможность использования эритроцитов селезня в реакции торможения гемагглютинации (РТГА);
- изучить трансовариальную передачу поствакцинальных антител к ВГП;
- оценить протективные свойства инактивированных вакцин в отношении разных штаммов Н5Ы1 ВГП и установить сроки выделения вируса во внешнюю среду при проведении контрольного заражения;
- сравнить протективный потенциал вакцин из гомологичного эпизоотическому №N1) и гетерологичного (Н5Ю) штаммов ВГП;
- оценить местные тканевые реакции на вакцину у разных видов домашних птиц. Научная новизна. Впервые изучена динамика поствакцинального иммунитета к
гриппу птиц после иммунизации инактивированной эмульгированной вакциной из штамма Н5М1 в зависимости от дозы, способа инъекции и кратности вакцинации у кур, уток, мускусных уток и гусей.
Определены протективные свойства инактивированных вакцин против ВГП подтипа Н5 в отношении штаммов ВГП ГОШ, принадлежащих кладам 2.2. и 2.3.2.
Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны «Рекомендации по вакцинации птиц против гриппа птиц», которые были одобрены Россельхознадзором и разосланы руководителям органов управления ветеринарией субъектов РФ и руководителям территориальных управлений Россельхознадзора в виде циркулярного письма № ФС-АС-2/8881.
Внесены изменения в инструкцию по применению вакцины против гриппа птиц инактивированной эмульгированной.
Одобрены ученым советом и утверждены зам. директора ФГУ «ВНИИЗЖ» «Методические рекомендации по анализу динамики поствакцинального гуморального иммунного ответа у птиц (на примере гриппа, ИЛТ и ИБК)». Основные положения, выносимые на защиту.
1. Динамика поствакцинального иммунитета к гриппу птиц после иммунизации инактивированной эмульгированной вакциной из штамма Н5Ы1 в зависимости от дозы, способа инъекции и кратности вакцинации у кур, уток, мускусных уток и гусей.
2. Протективные свойства инактивированных эмульгированных вакцин против ГП подтипа Н5 в отношении штаммов ВГП H5N1, изолированных на территории РФ.
Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы выполнены совместно с сотрудниками ФГУ «ВНИИЗЖ» Кулаковым В.Ю., Фроловым С.В., Чвалой И.А., Бабиным Ю.Ю., Андриясовым A.B., Циванюк М.А., Волковым М.С., Пичуевым А.Е., а так ж ее сотрудниками ГНУ «ВНИИСХ» Фроловой Л.В., Гришиной Д.С., за что автор выражает им искреннюю благодарность.
Апробация результатов работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на III Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (г. Москва, 2007г.), отчетном собрании ассоциации гусеводов в ГНУ «ВНИИСХ» Россельхозакадемии (г. Суздаль, 2007г.), на заседаниях ученого совета ФГУ «ВНИИЗЖ» в 2007-2010 гг.
Публикация научных исследований. По теме диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 7 статей в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 148 страницах машинописного текста, включает введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложения. Диссертация иллюстрирована 38 таблицами и 23 рисунками. Список литературы включает 200 источников, из них 106 отечественных и 94 зарубежных. В приложениях представлены копии титульных листов документов, подтверждающих достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы
Вакцины:
- вакцина против гриппа птиц инактивированная эмульгированная производства Покровского завода биопрепаратов трех серий: серия 16, контроль 16, дата изготовления 07.2006г.; серия 17, контроль 17, дата изготовления 08.2006г. и серия 21, контроль 21, дата изготовления 08.2007г;
- экспериментальные инактивированные эмульсионные вакцины из штамма ВГП H5N3, моно- и биштаммовая вакцины из штаммов ВГП H5N1, разработанные в ФГУ «ВНИИЗЖ».
Все вакцины, использованные в экспериментах, представляли собой эмульсии обратного типа («вода-масло») на основе адьюванта Монтанид ISA 70 (СЕППИК, Франция) с весовым соотношением водной и масляной фаз 30:70.
Вирус. Для контрольного заражения птиц использовали штаммы ВГП из коллекции ФГУ «ВНИИЗЖ»: А/угка/Новосибирск/02/05 H5N1 и А/курица/Приморск/85/08 H5N1 («Новосибирск» и «Приморск») в дозах 106 ЭИД/50 0,5 см3 внутримышечно.
Подопытные животные. В производственных условиях (ГНУ «ВНИИСХ», г. Суздаль Владимирской обл.) было привито более 5000 гол гусей в возрасте 1-3 года следующих пород: владимирская глинистая, итальянская, китайская серая.
В лабораторных экспериментах в ФГУ «ВНИИЗЖ» было вакцинировано более 450 гол птиц разного возраста (5 сут-5 мес): утят кросса «Благоварский»; мускусных уток; кур кроссов «Хайсекс коричневый» и «Хайсекс-белый». Утки были доставлены из ГППЗ «Благоварский», Республика Башкортостан, куры - из ЗАО п/ф «Кинешемская» Ивановской обл. и ОАО п/ф «Ковровская» Владимирской обл. Условия кормления и содержания птиц соответствовали зоотехническим нормам.
Растворы и реактивы: спирт этиловый 70%, фосфатно-буферный раствор (ФБР, pH 7,2-7,4), физиологический раствор (0,15 М), дихлорэтилен, цитрат натрия 3%.
Оборудование: термостат лабораторный «MIM» (СНГ), высокоскоростная центрифуга «Eppendorf» (Германия), холодильник бытовой «Бирюса» (Россия), морозильная камера (- 20°С) «Sanyo» (Корея), ламинарные шкафы «Импеданс» (Россия), «Esco» (Сингапур) с вертикальным рециркуляционным потоком, компьютер, изолирующие боксы для содержания птиц «Изоп» (Россия), иглы инъекционные 0,8x38 и 0,6x25, шприцы однократного применения различного объема «Луер» (Россия) и «Ситек Сервис» (КНР), автоматические шприцы многоразового использования «Socorex» (EU), пипетки автоматические со сменными наконечниками различного объема «Gilson» (Франция), планшеты полимерные для иммунологических реакций, пробирки Флоринского (Россия).
Вакцинация птиц. Иммунизацию проводили внутримышечно в область груди (в/м) или подкожно в среднюю треть шеи (п/к), предварительно обработав место инъекции 70% раствором этилового спирта. В производственных условиях птиц вакцинировали с помощью автоматического шприца многоразового использования.
Отбор крови и подготовка сывороток. Пробы крови у птиц отбирали из подкрыльцовой вены, у утят - из вены голени до вакцинации и в разные сроки после нее. Подготовку проб и получение сывороток проводили по общепринятой методике [Р.Н. Коровин, 1989]. До исследований сыворотки сохраняли при температуре минус 20°С. Всего отобрано 4500 проб крови, из них 1800 проб в производственном опьпе и 2700 проб в лабораторных экспериментах.
Получение 1% суспензии эритроцитов петуха и селезня. Кровь у петуха и селезня отбирали из подкрыльцовой вены, добавляли 3% раствор цитрата натрия (1 часть на 4 части крови), центрифугировали в течение 10 мин при 1000 об/мин с последующим 3-кратным ресуспендированием осадка эритроцитов в физрастворе до первоначального объема. Для приготовления 1% взвеси эритроцитов из пробирки отбирали 1,0 см3 осажденных эритроцитов и добавляли 99,0 см3 физраствора, после чего использовали в РТГА [Р.Н. Коровин, 1989; С. Terregino, 2009; OIE Manual, 2010].
Серологические исследования. Уровень антител к ВГП в сыворотках крови птиц определяли в РТГА с использованием антигенов (АГ) производства ФГУ «ВНИИЗЖ», ОАО «ПЗБ», Института Зоопрофилактики (Италия) в соответствии с инструкциями производителей диагностических наборов. Уровень антител выражали в средних геометрических титрах (СГТ) в логарифмах с основанием 2 (Iog2).
Определение трансовариальной передачи антител. От вакцинированных птиц проводили отбор яиц. Для приготовления желточного экстракта 1,5 см желтка смешивали с 6,0 см3 физиологического раствора. Затем в пробирки вносили 2,0 см дихлорэтилена, смесь интенсивно перемешивали встряхиванием, прогревали в течение 1 ч при температуре 37°С и центрифугировали 15 мин при 2000 об/мин. Полученную прозрачную, слегка опалесцирующую надосадочную жидкость использовали в РТГА [В.А. Бакулин, 2006; J.R. Beck, 2002].
Оценка поствакцинального иммунитета. Вакцинацию считали эффективной, а поствакцинальный иммунитет напряженным, если у > 80% вакцинированных птиц титр антител составлял >4,0 log2 [Инструкция по применению вакцины, 2006; OIE Manual, 2010].
Оценка местных тканевых реакций на введение вакцины. Результаты наружного осмотра оценивали по появлению припухлости или образованию твердой опухоли в месте введения вакцины, послеубойную оценку степени поражения тканей проводили по критериям, предложенным H.D. Stone [1997].
Критерии учета состояния птиц после заражения вирусом ВГП.
За птицами наблюдали в течение 10 суг. Клинически здоровыми считали птиц, охотно потребляющих корм и воду, адекватно реагирующих на внешние раздражители, без каких-либо признаков заболевания. При любом отклонении от физиологической нормы (отказ от корма и воды, признаки угнетения, нарушения деятельности дыхательной, пищеварительной, нервной систем) считали птицу больной. Тяжелобольными признавали птиц с ярко выраженными признаками поражения различных систем, характерными для гриппа птиц [OIE Manual, 2010].
Прогнозирование иммунного ответа с помощью математической модели. Модель иммунной реакции представляли хронологической диаграммой в виде
несимметричной трапеции, где более пологая боковая сторона соответствует фазе регрессии иммунитета (рис. 1).
H 7« «s ЬЛ _ LI U
4 • ------ -------
1 •
0 П 20 40 п 60 80 100 о 120 140 160 Сут 180
Рис. 1. Модель поствакцинальной гуморальной иммунной реакций у птиц
Примечание: 1о& Т - титры сывороточных антител соответственно времени после вакцинации (сут);
fl - фаза развития, П - фаза стабилизации, f3 - фаза регрессии иммунного ответа; LI - допротектявный период L2 - протекгивный период иммунной реакции; Пунктиром обозначен протекгивный титр антител - 4,0 log2.
Прогнозируемое значение титра антител (log2"T) на фазе D определяли с
помощью уравнения по стандартному методу наименьших квадратов («Линейная
регрессия» в Microsoft Excel): Iog2"T= [kxt]+log2 Т0, где
t - сут, непрерывный отсчет от дня вакцинации;
к - регрессионный коэффициент (сут"1);
logîTo - математический оператор (параметр положения линии регрессии по оси ординат при х = 0).
Расчет продолжительности протективного периода в непрерывном отсчете от дня вакцинации (S) производили по формуле: S(L1+L2)= (log2T0 - log2 Tprot))/ |k|, где Tpr0, - логарифмическая величина протективного титра; log2 То и к - определены ранее. Статистическая обработка и графическое отображение данных. Для вычисления средней арифметической величины и ее статистической ошибки, существенности различий сопоставляемых величин использовали описанные в литературе методы [Н.В. Садовский, 1975; H.A. Плохинский, 1975; Л. Закс, 1976; Дж. Поллард, 1982], а также пакет прикладных программ Microsoft Office Excel 2003.
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.2.1. Поствакцинальный иммунитет у кур Иммунитет при однократной вакцинации в различных вариантах. Исследовали периоды развития, стабилизации и регрессии поствакцинального гуморального иммунного ответа птиц, привитых вакциной производства ОАО «ПЗБ» в следующих вариантах: в/м в дозе 0,5 см3; п/к - 0,5 см3; в/м - 1,0 см3; п/к - 1,0 см3.
Соответственно вариантам иммунизации были образованы 4 экспериментальные и одна контрольная группы молодняка кур 63-сут возраста кросса «Хайсекс коричневый» по 10 гол каждая. Сыворотки крови птиц отбирали во всех группах до эксперимента и через заданные интервалы времени после прививки в течение 180 сут. Титры сывороточных антител к ВГП определяли в РТГА с набором ФГУ «ВНИИЗЖ». Результаты серологических исследований представлены в табл. 1.
Таблица 1
Динамика титров поствакцинальных антител к ВГП у кур в зависимости _от дозы и способа введения вакцины_
Срок после вакцинации, сут Средние тигры в РТГА, 1оь (числитель) и напряженность иммунитета по группам, % (знаменатель)
1 2 3 4 5
привиты 0,5 см' в/м привиты 0,5 см5 п/к привиты 1,0 см! в/м привиты 1,0 см5 п/к контроль (не привит)
14 3.10±0.31 40 "2.00±0.45 40 5.77±0.44 90 6,60±0,87 100 отр.
21 5.10±0.35 90 4,66±0.48 90 6,50±0.54 90 7.20*0,37 100 отр
28 4.70±0.31 80 5.00±0.45 80 б.63±0.62 90 8.25±0.50 80 отр
45 5.30±0.31 80 4.30±0.22 80 7,00±0.47 100 7.80±0,20 100 отр
60 4.80±0,20 80 4.50±0.22 80 6.80±0.20 90 6.75±0,25 100 отр
90 4.20±0.20 60 3.80±0.31 60 5.10±0.20 80 5.50±0.50 100 отр
120 3.75±0.47 10 3.50±0,28 • 10 4.00±0.37 50 5.00±0.58 70 отр
150 2.00±0,53 10 2.00±0.41 10 3.16±0.17 60 3.33±0.33 60 отр
180 2.00±0.57 10 2.00±0,41 10 2.50±0.22 60 2.66±0.66 60 отр
Результаты, представленные на рис. 2, демонстрируют, что данные серологических исследований (табл. 1) практически совпадают с расчетными сроками продолжительности иммунитета, полученными с помощью регрессионного анализа. При иммунизации птиц в/м или п/к в дозе 0,5 см3 допротективный период составлял не менее 14 сут. Период стабилизации иммунной реакции продолжался с 21 по 60 сут, СГТ антител к ВГП имел величину при в/м прививке log2Tstal> = 4,97±0,16 и при п/к -log2 Тть=4,62±0,16. Период регрессии иммунного ответа при обоих вариантах начинался с 60 сут. Уравнение регрессии титров антител имело вид log2"T = (-0,026)t + 6,430 для в/м и log2 "Т = (-0,023)1+5,874 для п/к вакцинации, на основании чего была определена прогнозируемая продолжительность протективного периода при непрерывном отсчете со дня вакцинации: 93±4,20 и 82±6,62 сут для в/м и п/к вариантов, соответственно. Иммунизация в дозе 1,0 см3 обусловила сокращение допротективного периода (L1 < 14 сут) и достоверное возрастание СГТ антител на
фазе стабилизации: log2 Т!1аЬ =6,54±0,20 и /о£2 Т5ШЬ=7,46±0,37 для в/м и п/к вариантов, соответственно. Продолжительность протективного периода составила 128±4,00 сут
для варианта в/м и /36+3,96 сут для варианта п/к вакцинации.
Рис. 2. Развитие, стабилизация и регрессия поствакцинального гуморального иммунного ответа у кур
Значения титров сывороточных антител (1о82 Т) представлены в виде первичных оценок (заштрихованные фигуры) и средних величин (незаштрихованные фигуры) соответственно времени после прививки (сут), дозы и способа введения вакцины, где: а) ♦ и 0 - 0,5 см3, в/м; Ь) ■ и о - 0,5 см3, п/к; с) А и Л - 1,0 см , в/м; Л) о и • - 1,0 см3, п/к. Ось абсцисс пересекает ось ординат в значении 4,0 1о82, что соответствует величине протективного титра антител. Представлены уравнения и линии регрессии титров антител.
Иммунитет у кур после двукратной вакцинации в дозе 0,5 см в/м и п/к.
Повторную прививку птиц проводили через 90 сут, при снижении титров антител до значения < 4,0 1о§2, с использованием вариантов 0,5 см3 в/м и 0,5 см3 п/к. Результаты серологических исследований показаны в табл. 2.
Таблица 2
Динамика титров антител к ВГП у кур после ревакцинации в зависимости
от способа введения вакцины
Отбор Средние титры в РТГА, 1оё2 (числитель) и напряженность иммунитета по
сывороток, группам, % (знаменатель)
сут 0,5 см3 в/м 0,5 см3 п/к контроль
30 7.00±0.37 7.20±0,32 отр.
100,00 100,00
60 6.60±0.26 6.50±0.28 отр.
100,00 83,00
90 6,00±0,19 6.30±0,37 отр.
100,00 83,00
Ревакцинация птиц в обоих вариантах обусловила значительное возрастание напряженности гуморального иммунитета через 30 сут со схожей динамикой
и
иммуногенеза. Уравнение регрессии титров антител имело вид для варианта вакцинации в/м log2 "Т = (-0,016)t + 9,03, а для варианта п/к - log2 "Т = (-0,015)1 + 8,92. Используя приведенные уравнения, установили, что при непрерывном отсчете со дня вакцинации прогнозируемая продолжительность иммунного ответа птиц на протективном уровне после в/м ревакцинации составила 314±18,09 сут, а после иммунизации п/к - 328±20,24 сут.
2.2.2. Поствакцинальный иммунитету мускусныхуток В эксперименте мускусных уток 91-сут возраста, серонегативных к ВГП, иммунизировали вакциной производства ОАО «ПЗБ» следующими способами: в/м -0,5 см3; в/м - 1,0 см3; п/к - 1,0 см3.
Через 1 мес титры антител не достигли уровня 4,0 log2 и составили соответственно указанным вариантам вакцинации, 3,20±0,37 log2; 3,60±0,54 log2 и 3,60±0,65 log2. Птиц, привитых 0,5 см3 в/м, ревакцинировали 0,5 см3 в/м и 1,0 см3 в/м. Птиц остальных групп ревакцинировали через 3 мес, убедившись, что уровень антител в ответ на 1-ю вакцинацию не возрос. При сравнении результатов установили, что продолжительность иммунитета после инъекции вакцины в объеме 1,0 см3 в/м или п/к существенных различий не имела (р<0,05). Однако при уменьшении объема инъекции до 0,5 см3 продолжительность протективного периода существенно снижалась (р>0,05). Через 60 сут (или через 150 сут после начала эксперимента) отметили снижение напряженности гуморального иммунитета во всех группах (табл. 3). Таблица 3
Поствакцинальный иммунитет к гриппу птиц у мускусных уток в зависимости
№ Т Схема вакцинации Средние титры антител в РТГА, (числит.) и напряженность иммунитета по группам, % (знаменах.) после ревакцинации, через мес
1 2 3 4 5 6
1 0,5 см' в/м, через 1 мес 0,5 см' в/м 6.80±0.58 100,00 2.80±0.73 40,00 3.80±1.06 60,00 1.60±1.03 20,00 1.60±1.03 20,00 1.60±0.81 20,00
2 0,5 см' а/м, через 3 мес 1,0 см' в/м 5.60±0.81 80,00 3.4Ш.40 60,00 4.80±0.8б 80,00 5.20±0.66 80,00 4.80±1.47 80,00 3.00±0.89 60,00
3 1,0 см' в/м, через 3 мес 1,0 см' в/м 6.40±0.55 100,00 5.40±0,30 100,00 5.00±0.50 100,00 4.80±0,40 100,00 5.40±0.40 100 4.20±0.40 80,00
4 1,0 см' п/к, через 3 мес 1,0 см' п/к 5.80±1.45 80,00 5.80±1.40 80,00 4.80±1.20 80,00 4.80±1,20 80,00 4.80±1.20 80,00 3.60±0.90 80,00
5 Контроль отр. отр. отр. отр. отр. отр.
Через 30 сут после ревакцинации наступала фаза регрессии, и для нее были определены уравнения регрессии титров антител: log2"T = (-0,033)t+7,12 для группы № 1 log2 "Т = (-0,009l)t+6,18 для группы № 2, log2"T= (-0,011)t+7,29 для группы № 3 и log2"T = (-0,012)t+7,39 для группы № 4. По приведенным уравнениям рассчитали
прогнозируемую продолжительность протективных периодов, которые при непрерывном отсчете со дня вакцинации составили: 95±7,94, 240+9,59; 293+12,12 и 283±9,91 сут для групп №№ 1, 2, 3,4 соответственно.
2.2.3, Поствакцинальный иммунитет у уток Для 1-кратной иммунизации использовали серонегативных к ВГП утят 5-сут возраста. Иммунизацию проводили вакциной производства ОАО «ПЗБ» в дозе 0,5 см3 п/к. Сыворотки крови отбирали у птиц до эксперимента и через 14, 21, 28 и 35 суг. Максимальное значение СГТ антител к ВГП - 2,14±0,28 log2 - отмечено на 14 сут. На 35 сут СГТ антител снизился до нулевых значений.
На следующем этапе работы изучали поствакцинальный иммунитет у уток после 1-, 2- и 3-кратной иммунизации в дозе 1,0 см3 вакциной производства ОАО «ПЗБ». Серонегативных к ВГП 35-сут утят распределили на 3 группы по 10 гол в каждой: две опытных и одну контрольную. Утят вакцинировали в/м и п/к. Аналогично через 21 сут проводили ревакцинацию и еще через 50 сут - 3-ю иммунизацию. Сыворотки крови отбирали у птиц до эксперимента и через 14, 21 суг после 1-й вакцинации; 35, 42, 49 и 71 сут после ревакцинации и с интервалом 1 мес после 3-й вакцинации. Общая продолжительность эксперимента составила 160 сут.
1-кратная иммунизация утят обеих групп обеспечивала выработку у них антител к ВГП в титрах > 4,0 log2 через 14 сут, но на 21 сут СГТ антител составил 2,50±0,54 logj и 3,00±0,53 log2, и птицы были ревакцинированы. После 2-й иммунизации обоими способами через 14 сут отмечали подъем титров антител до максимальных значений к 35 сут: 4,80±0,33 log2 после в/м и 5,50±0,26 log2 после п/к инъекции. Однако фазы стабилизации иммунного ответа не наблюдали. Через 71 сут титры антител снизились до нулевых значений. С помощью регрессионного анализа установили, что ожидаемая продолжительность протективного периода от начала эксперимента при в/м способе составила бы 38±1,301 сут, а при п/к - 43±1,31 сут.
Через 1 мес после 3-й вакцинации титры антител достигали максимальных значений: 4,60±0,58 log2 после в/м и 4,80±0,59 log2 после п/к иммунизаций. Через 2 мес СГТ антител снизились на 0,3 и 0,4 log2, соответственно, а через 3 мес СГТ антител у птиц в обеих группах был ниже протективных значений (рис. 3).
фигуры) и средних величин (не запприхованные фигуры) соответственно времени после прививки (Сут), дозы и способа введения вакцины, где: а) ▲ и Л - 1,0 см3, в/м; Ь) о и • - 1,0 см3, п/к. Ось абсцисс пересекает ось ординат в значении 4,0 что соответствует величине протективного титра антител. Представлены линии регрессии ппров антител.
2.2.4. Поствакциналшый иммунитету гусей Гусей трех пород иммунизировали вакциной производства ОАО «ПЗБ». За 7 мес до эксперимента гуси были 1-кратно привиты этой вакциной, поэтому перед началом опыта определяли остаточный уровень антител к ВГП в РТГА, который составил: у гусей владимирской глинистой породы 1,60±0,29 1о§2; итальянской - 0,50±0,11 1с^2; китайской серой - 0,30±0,05 1о§2. Срок наблюдения составил 690 сут.
1-ю и 2-ю вакцинации проводили в/м в дозах 0,5 см3 и 1,0 см3, и п/к в тех же дозах, с интервалом 1 мес. Интервал между 2-й и 3-й вакцинацией составил 4 мес, между 3-й и 4-й - 7 мес, между 4-й и 5-й - 1мес, между 5-й и 6-й - 9 мес.
1- и 2-кратная иммунизация гусей в дозе 0,5 см3 не обеспечила достижения защитных титров антител и группового иммунитета к ВГП в течение 4 мес наблюдения за исключением гусей породы владимирская глинистая. При 1- и 2-кратной иммунизации гусей в дозе 1,0 см3 в/м и 1,0 см3 п/к СГТ антител к ВГП был выше по сравнению с вакцинацией в дозе 0,5 см3 на 0,5-2,0 к^. Однако требуемый уровень антител и групповой защиты наблюдали только у гусей владимирской глинистой породы. Перед выгоном гусей на пастбище 3-ю и последующие вакцинации проводили в дозе 1,0 см3 п/к. Данные по величине и продолжительности иммунного ответа на вакцину у гусей разных пород представлены в табл. 4. Через 1 мес после 3-й
вакцинации титры антител у гусей превышали 4,0 1о§2, и групповой иммунитет формировался на уровне около 80% и более у поголовья всех пород.
Таблица 4
Поствакцинальный иммунитет у гусей разных пород, привитых ннактнвированной вакциной против гриппа птиц из штамма Н5М
Кратность вакцинации в дозе 1,0 см' п/к Срок отбора сывороток после вакцинации, мес Средние титры антител в РТГА, (числитель), и напряженность иммунитета у гусей трех пород по группам, % (знаменатель)
Итальянская Владимирская глинистая Китайская серая
1 1 4.30±0.96 72,73 5.80±0.95 81,25 3.30±0.71 54,55
2 1 5.10±0.70 70,00 6.30±0.71 81,25 4,70±0,55 71,43
2 3.50±0.88 66,67 4.50±0.89 64,29 4.60±0.76 68,42
3 3.20±0.99 58,33 4.90±0.79 75,00 2.30±0.65 47,37
4 3.00±1.13 55,56 5.00±1,08 77,78 2.5040.65 50,00
3 1 6.10±0.35 87,18 7.60±0,32 93,22 4.30±0.13 78,57
7 1,90±0.44 35,29 3.20±0.33 58,33 1.60±0.37 26,32
. 4 1 5.20±0.46 88,00 7,50±0.36 96,00 4.70±0.39 76,00
5 1 5.70±0,51 84,62 6,50±0,47 90,91 5,00±0,46 77,78
4 2.40±0.61 36,00 4.60±0.62 72,00 1.90*0.58 24,00
б 1 5.00±0.56 72,00 6.20±0.45 88,00 2.90*0.64 40,00
Через 7 мес СГТ антител и показатель группового иммунитета во всех группах
птиц были ниже протективных значений. После 4-й и 5-й вакцинаций титры антител через 1 мес вновь возрастали до 5,00-7,50 к^. Наиболее высокие титры - 7,50±0,36 и напряженность группового иммунитета 96% - отмечены у гусей владимирской глинистой породы. Через 4 мес после 5-й вакцинации СГТ антител сохранялся на защитном уровне - 4,60 - только у гусей этой породы, при этом групповой иммунитет составил 72%. Через 1 мес после 6-й иммунизации СГТ антител выше протективных значений регистрировали у гусей владимирской глинистой и итальянской пород, а у птиц китайской серой породы СГТ антител составил 2,90 1о§2 при 40%-ной групповой защите.
В/м и п/к варианты прививки индуцировали статистически тождественный уровень иммунной реакции, который у гусей в большей степени зависел от дозы введенного антигена. Общая прогнозируемая продолжительность протективного периода от 1-й прививки при 2-кратной вакцинации в дозе 1,0 см3 п/к у гусей разных
пород составила: владимирская глинистая - 189±4,90 сут, итальянская - 77±4,85 сут, китайская серая - 94±3,64 сут, а при 3-кратной вакцинации в дозе 1,0 см3 п/к -328±6,48 сут, 270±6,25 суг, 200±5,32 суг, соответственно.
2.2.5. Сравнение результатов РТГА с эритроцитами петуха и селезня В связи с тем, что при оценке поствакцинального иммунитета у водоплавающих птиц титры антител к ВГП были существенно ниже, чем у кур, в РТГА использовали для сравнения две гемсистемы: эритроциты петуха и селезня. Титры антител к ВГП Н5 в сыворотках крови водоплавающих птиц в обеих гемсистемах отличались незначительно, в то время как результаты РТГА с сыворотками крови кур при использовании эритроцитов селезня были отрицательными, а с эритроцитами петуха -положительными.
2.2.6. Изучение трансовариальной передачи антител к вирусу гриппа птиц От вакцинированных птиц каждого вида отбирали сыворотки крови и яйца по 10-15 шт. Результаты РТГА представлены в табл. 5. Таблица 5
Результаты исследования сывороток крови и желтков яиц от привитых птиц в
РТГА на определение антител к ВГП
Вид (порода) птиц Средний титр антител 8 сыворотке крови несушек (1о&) Средний титр антител в желтке (1о&)
куры 4,90*0,80 4,20±0,70
утки 2,83±1,03 2,10±1,50
мускусные утки 4,60±0,80 4,10±0,76
гуси владимирская глинистая 3,90±0,90 3,00±0,57
итальянская 2,70±0,78 0
китайская серая 2,82*0,56 0
Титры антител к ВГП в суспензиях желтков примерно соответствовали таковым в сыворотках крови несушек, за исключением гусей двух пород, в яйцах которых антител не обнаружили.
2.2.7. Изучение устойчивости кур и уток, привитых разными вакцинами, к заражению высоковирулентными ВГП Н5141
Протективные свойства вакцин изучали в несколько этапов. На первом этапе сравнивали иммунобиологические свойства вакцин из эпизоотического штамма Н5И1 (ОАО «ПЗБ») и из низкопатогенного штамма Н5№ (ФГУ «ВНИИЗЖ»).
Кур 132-сут и утят 10-сут возраста прививали п/к в дозе 0,5 см3. Напряженный поствакцинальный иммунитет у кур после применения вакцины Н5>П сформировался на 30 сут, а после вакцины Н5№ - на 21 сут. У утят тигры антител не достигли протективного уровня. У птиц контрольных групп антител к ВГП не обнаруживали. При тестировании сывороток в РТГА с использованием трех диагностических антигенов были получены воспроизводимые и сопоставимые результаты (табл. 6).
Таблица 6
Формирование иммунного ответа на вакцины из штаммов Н51Ч1 и Н5ГО у
кур и уток
Виды птиц Исследование сывороток крови, через (сут), после вакцинации Средний гетр антител в РТГА, с антигенами
Вакцина Н5Ж «ПЗБ» Вакцина Н5Ю ФГУ «ВНИИЗЖ» экспериментальная
Н5И31 ГОШ2 Н5Ю3 Н5Ю' Н5Ы1г Н5МЗ]
куры 14 0,90±0,38 0,80±0,28 0,73±0,26 2,50±0,46 1,80±0,43 2,00±0,37
21 3,90±0,15 3,80±0,13 3,83±0,15 4,40±0,20 3,80±0,13 4,00±0,18
30 4,10±0,15 4,10*0,65 4,12±0,70 4,60±0,25 4,00±0,08 4,30±0,12
утки 14 2,87±0,08 2,90±0,02 2,85±0,10 3,10±0,12 2,75±0,20 2,87±0,26
21 3,10±0,05 3,20±0,19 3,15±0,15 3,60±0,18 3,50±0,16 3,70±0,20
30 3,00±0,24 3,40±0,24 3,20±0,27 3,5б±0,29 3,60±0,15 3,60±0,13
- антиген производства Институт Зоопрофилактики, Италия;
2 - антиген производства ФГУ «ВНИИЗЖ»;
3 - антиген производства ОАО «ПЗБ».
При проведении через 30 сут после вакцинации контрольного заражения было установлено, что ВГП А/курица/Приморск/85/08 по сравнению с вирусом А/утка/Новосибирск/02/05 обладает более высокой патогенностью для кур и вызывает сверхострое течение болезни и гибель 60-80% привитых птиц, хотя обе вакцины обеспечили устойчивость кур к заражению вирусом «Новосибирск» (табл. 7).
ВГП «Приморск» также вызвал сверхострую форму болезни у неиммунных утят. В то же время, обе вакцины обеспечили защиту утят от гибели после заражения обоими штаммами, при этом титры антител на момент заражения были <4,0
На следующем этапе изучали иммунобиологические свойства разработанных в ФГУ «ВНИИЗЖ» экспериментальных вакцин с антигенами из эпизоотических штаммов ВГП Н5Ы1 «Приморск», «Новосибирск» и из обоих вирусов (биштаммовая). Гемагглютинирующая активность антигенов в каждой из вакцин составляла 9,0 1о§2. На 14, 21,28, 45, 60, 90 и 110 сут после иммунизации в дозе 0,5 см3 в/м испытуемыми образцами вакцин у цыплят и утят отбирали пробы крови.
Динамика титров антител к ВГП у кур в РТГА с гомо- и гетерологичными диагностическими антигенами представлена на рис. 4-5. Тесты с АГ Н5М1 «Новосибирск» показали, что вакцина, изготовленная на основе АГ «Новосибирск», и биштаммовая, обеспечили через 21 сут после иммунизации формирование антител на уровне >4,0 который затем оставался высоким (>5,0 log2) на протяжении 110 сут. Прирост титров антител наблюдали и у цыплят, привитых вакциной из АГ «Приморск», однако до 60 сут они не достигли протективного уровня.
Рис. 4. Результаты РТГА у цыплят с антигеном Рис. 5. Результаты РТГА у цыплят с антигеном
Н5Ы1 «Приморск» Н5?-]1 «Новосибирск».
При исследовании сывороток крови кур в РТГА с АГ «Приморск» иммунный
ответ на введение вакцин из АГ «Приморск» и биштаммовой к 21 сут достигал
уровня >4,0 1о22 и сохранялся выше него на протяжении 110 сут. У цыплят, привитых
H5N1 «Приморск» H5N1 «Новосибирск».
При исследовании сывороток крови кур в РТГА с АГ «Приморск» иммунный ответ на введение вакцин из АГ «Приморск» и биштаммовой к 21 сут достигал уровня >4,0 log2 и сохранялся выше него на протяжении 110 сут. У цыплят, привитых вакциной H5N1 «Новосибирск», антитела в титрах > 4,0 log2 выявляли на 28 сут. Аналогичные результаты РТГА, еще более выраженные в зависимости от соответствия вакцинного антигена диагностическому, получены при тестировании сывороток крови уток (рис. 6-7).
Сыворотки крови птиц, привитых моновакцинами, в РТГА с гомологичными антигенами показали высокую активность. В РТГА с гетерологичными антигенами титры антител были ниже у цыплят на 2-3 log2, а у утят - на 4-6 log2, что свидетельствует об антигенной вариабельности штаммов ВГП внутри подтипа.
Титры антител у кур и уток, привитых биштаммовой вакциной, при исследовании в РТГА с двумя антигенами были статистически одинаковы (р>0,05).
Результаты контрольного заражения привитых кур и обнаружения вируса в клоакальных мазках показаны в табл. 7 Таблица 7
Протективные свойства вакцин при заражении кур ВГП Н51Ч1
Вакцины СГТ антител к ВГП перед заражением, 1оёг Уровень защиты (%) при заражении ВГП: Индикация вирусов в ПЦР через 3 сут
«Новосибирск» «Приморск» «Новосибирск» «Приморск»
Н5Ы1 «ПЗБ»сер. 21 4,10 100 20 - +
Н5№ «ВНИИЗЖ» эксп. 4,30 100 40 - +
Н5Ш «Новосибирск» «ВНИИЗЖ» 4,85 100 70 - -
Н5>41 «Приморск» «ВНИИЗЖ» эксп. 4,50 100 90 - -
Н5Ш(2 штамма) «ВНИИЗЖ» эксп. 4,80 100 100 - -
Биштаммовая и вакцина на основе штамма «Приморск» Н5Ш обладали более высоким протективным потенциалом в отношении штамма «Приморск».
Эксперименты с заражением продемонстрировали зависимость протективного потенциала от их соответствия штамму заражения. Применяемая в стране вакцина не обеспечивает эффективной защиты от ВГП Н5Ы1 клада 2.3.2.
ВЫВОДЫ
1. Выявлены видовые и породные отличия у птиц в величине и продолжительности иммунного ответа, определяемого в РТГА, и в устойчивости птиц к заболеванию и гибели при заражении высоковирулентным вирусом гриппа. У кур иммунный ответ на вакцину более выражен и продолжителен, чем у домашних водоплавающих птиц. Куры более чувствительны к контрольному заражению. У привитых уток воспроизведение признаков болезни при экспериментальном заражении затруднительно независимо от величины титра антител. У гусей трех пород отмечена разная динамика образования и циркуляции поствакцинальных антител.
2. В экспериментальных и полевых испытаниях установлено, что после однократного применения серийно выпускаемой вакцины инактивированной эмульгированной против гриппа птиц в рекомендованной инструкцией дозе 0,5 см3 поствакцинальный иммунитет наступает у кур на 21 сут и сохраняется в течение 3 мес. У уток, мускусных уток и гусей однократная иммунизация не обеспечивает выработки антител к вирусу гриппа в титрах > 4,0 1о§2, поэтому водоплавающих птиц необходимо прививать не менее 2 раз с увеличением дозы до 1,0 см3.
3. Установлено, что способ введения вакцины, внутримышечно или подкожно, не влияет на величину и продолжительность иммунного ответа у разных видов птиц. Показана безвредность серийной и всех экспериментальных вакцин против гриппа птиц для кур и уток.
4. Показана возможность применения эритроцитов петуха в РТГА с сыворотками крови разных видов птиц для контроля напряженности поствакцинального иммунитета. Использование эритроцитов селезня приемлемо только для исследования сывороток крови водоплавающих птиц.
5. При изучении трансовариальной передачи антител к ВГП от вакцинированных кур, уток, мускусных уток и гусынь их потомству, установлено, что содержание антител в желтке соответствует содержанию антител в сыворотке крови.
6. Серийная вакцина инактивированная эмульгированная и экспериментальные вакцины из штаммов H5N1 «Приморск», H5N1 «Новосибирск», препарат на основе обоих штаммов и вакцина из низкопатогенного вируса гриппа птиц подтипа H5N3 обеспечивают 100% защиту кур и уток при заражении вирусом H5N1 А/утка/Новосибирск/02/05.
7. Установлено, что при заражении птиц вирусом H5N1 А/курица/Приморск/85/08/Н5Ш, вакцины на основе этого штамма обладают более высоким протективным потенциалом, чем вакцины на основе штамма А/утка/Новосибирск/02/05/Н5Ш, и обеспечивают защиту от гибели кур на 90-100%, в то время, как защита кур, привитых вакциной на основе штамма А/утка/Новосибирск/02/05/Н5Ы1, составляет 70%. Защита уток, привитых всеми образцами вакцин, составляет 100%.
8. Показана антигенная вариабельность штаммов внутри подтипа H5N1 ВГП. Перекрестная активность сыворотки крови в РТГА с гетерологичным антигеном была у кур на 3,0 log2, а у уток - на 4,0 log2 ниже, чем с гомологичным.
9. Результаты обнаружения генома ВГП в клоакальных мазках с помощью ОТ-ПЦР-РВ показали, что серийно выпускаемая вакцина и все экспериментальные препараты к 3 суткам после заражения обеспечивают прекращение выделения вируса привитой птицей во внешнюю среду.
10. На основе экспериментальных данных предложена математическая модель для прогнозирования динамики поствакцинального гуморального иммунного ответа, ожидаемого после однократной вакцинации фиксированной дозой антигена, и продемонстрирована тождественность расчетных периодов продолжительности иммунитета фактическим данным.
4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ Материалы исследований могут быть использованы для планирования противоэпизоотических мероприятий при гриппе птиц и повышения квалификации ветеринарных специалистов.
5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Использование эритроцитов петуха и селезня в реакции торможения гемагглютинации для оценки поствакцинального иммунитета к гриппу птиц у разных видов птиц A.B. Варкентин, В.Н. Ирза, Т.Ю. Черняева [и др.] // Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2007. - Т. 5. - С. 156-161.
2. Эпизоотическая ситуация по высокопатогенному гриппу птиц в Российской Федерации / В.Н. Ирза, A.B. Борисов, A.B. Фролов [и др.] A.B. Варкентин // Проблемы совершенствования межгос. взаимодействия в подготовке к пандемии гриппа: Междунар. науч.-практ. конф. - 2008. - С. 34-36.
3. Эпизоотия среди диких и домашних птиц, вызванная высоковирулентным вирусом гриппа A/H5N1 генотипа 2.2 (Цинхай-сибирский), на пути осенних миграций в северо-восточной части бассейна Азовского моря (Краснодарский край) / Д.К. Львов, М.Ю. Щелканов, П.Г. Дерябин [и др.] A.B. Варкентин // Вопросы вирусологии. - 2008. - № 2. - С. 14-19.
4. Расшифровка эпизоотической вспышки среди диких и домашних птиц на юге европейской части России в декабре 2007 г / Д.К. Львов, М.Ю. Щелканов, А.Г. Прилипов [и др.] A.B. Варкентин // Вопросы вирусологии. - 2008. - № 4. - С. 18-23.
5. Поствакцинальный иммунитет к гриппу птиц у гусей / Варкентин A.B., Фролов A.B., Циванюк М.А [и др.] // Ветеринария. - 2009,- № 3. - С. 25-27.
6. Изучение поствакцинального иммунитета к гриппу у разных видов домашних птиц / A.B. Варкентин, М.А. Циванюк, В.Н. Ирза, A.B. Борисов // Ветеринария. - 2009. - № 6. - С. 25-28.
7. Особенности течения гриппа А у уток-крякв, вызванного A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 / И.А. Чвала, Л.О. Щербакова, М.И. Шульпин [и др.] A.B. Варкентин //Ветеринария. - 2009. - № 10. - С. 25-26.
8. Characteristics of influenza A infection caused by A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 virus in mallards / I.A. Chvala, L.O. Scherbakova, L.Y. Abramova [et. al.] A.V. Varkentin//Bird Flu 2009: Avian Influenza and Human Health. - Oxford, UK, 2009. - P. 2325.
9. Высокопатогенный грипп птиц. Текущая ситуация и меры контроля / H.A. Власов, В.Н. Ирза, A.B. Варкентин [и др.] // Ветеринария. - 2010. - № 1. - С. 3-7.
10. Особенности инфекции гриппа А у молодняка водоплавающих птиц, вызванной A/Chicken/Primorsky/85/08 H5N1/ И.А. Чвала, Л.Ю. Абрамова, Ю.Ю. Бабин [и др.] A.B. Варкентин // Ветеринария. - 2010. - № 12. - С. 28-30.
Подписано в печать 11.08.2011 г. Формат 60x90/16. Усл. печ. л. 1. Тираж 90 экз. Отпечатано на полиграфической базе ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»
Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Варкентин, Андрей Владимирович
1 ВВЕДЕНИЕ.
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
2.1 Общие сведения о высокопатогенном гриппе птиц.
2.2 Специфическая профилактика высокопатогенного гриппа птиц (ВПГП).
2.2.1 Инактивированные вакцины против ВПГП.
Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Поствакцинальный иммунитет к гриппу у разных видов домашних птиц"
Актуальность темы.
Грипп птиц (ГП) - высококонтагиозная особо опасная зооантропонозная болезнь. Заболевание наносит большой экономический ущерб, связанный с гибелью и уничтожением птицы, затратами на проведение ветеринарно-санитарных мероприятий, а также представляет опасность для человека (2).
В Российской Федерации высокопатогенный грипп птиц (Bill 11) не регистрировали с 1968 г. по 2005 г., и страна считалась благополучной по этому заболеванию. В 2005 г. в РФ впервые зарегистрирован грипп птиц, вызванный вирусом гриппа птиц (ВГП) H5N1. Низкопатогенные вирусы неоднократно выявляли в разные годы среди дикой перелетной птицы на территории страны (15).
В РФ для предотвращения распространения и проникновения вируса H5N1 в птицеводческие предприятия с 2006 г. применяется стратегия вакцинации домашних птиц разных видов в зонах высокого риска, примыкающих к местам массовых скоплений диких перелетных водоплавающих птиц (15). к> 'J'>
Вакцинацию в составе комплекса мер борьбы с ВПГП применяют в некоторых странах Азии и Америки (121, 124, 125, f 138,157,469, 74). iи • С
Обычно для этих целей используют инактивированные эмульсионные и/или векторные вакцины, экспрессирующие ген гемагглютинина (НА) вируса (146, 174).
В 2005 г. в ФГУ «ВНИИЗЖ» по заданию Россельхознадзора была разработана вакцина против гриппа птиц инактивированная эмульгированная из эпизоотического штамма ВГП H5N1. Серийное производство препарата было организовано в ОАО «ПЗБ» и в 2006 г. создан его необходимый резерв (81), однако до выпуска первой серии вакцины грипп распространился в 8 субъектах РФ. Особенно тревожная ситуация сложилась в Южном Федеральном округе (ЮФО) из-за проникновения вируса на промышленные с/х предприятия, где погибло и было уничтожено более 1,5 млн. кур (89).
В ФГУ «ВНИИЗЖ» были проведены испытания антигенной и иммуногенной активности вакцины на курах и была показана высокая эффективность биопрепарата. Однако изучение продолжительности поствакцинального иммунитета у разных видов домашних птиц на момент осуществления стратегии вакцинации не было проведено. В ходе анализа информации о напряженности иммунитета у домашних птиц в разных регионах РФ были получены противоречивые данные, что, видимо, было связано со сложностью обеспечения качественного и статистически достоверного контроля напряженности иммунитета у привитого поголовья в личных хозяйствах граждан. Поэтому изучение динамики и продолжительности поствакцинального иммунитета к гриппу у разных видов птиц в экспериментальных условиях приобрело актуальность.
Кроме того, занос в 2008г. в РФ штамма Н5Ш ВГП новой генетической линии (клад 2.3.2) обусловил необходимость изучения протективных свойств вакцин в отношении этого штамма. Цель и задачи исследований.
Цель работы - изучение поствакцинального гуморального иммунитета к гриппу у разных видов домашних птиц.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
- изучить динамику поствакцинального иммунитета к гриппу птиц у кур, уток, мускусных уток и гусей в зависимости от дозы, способа инъекции и кратности вакцинации;
- определить возможность использования эритроцитов селезня в реакции торможения гемагглютинации (РТГА);
- изучить трансовариальную передачу поствакцинальных антител к вирусу гриппа птиц;
- оценить протективные свойства вакцин в отношении разных штаммов вируса Н5Ш ГП и установить сроки выделения вируса во внешнюю среду при проведении контрольного заражения;
- сравнить протективный потенциал вакцин из гомологичного эпизоотическому (Н5Ш) и гетерологичного (Н5Ш) штаммов ВГП;
- оценить местные тканевые реакции на введение вакцины у разных видов домашних птиц.
Научная новизна.
Впервые изучена динамика поствакцинального иммунитета к гриппу птиц после иммунизации инактивированной эмульгированной вакциной из штамма Н5Ш в зависимости от дозы, способа инъекции и кратности вакцинации у кур, уток, мускусных уток и гусей.
Установлены протективные свойства инактивированных эмульгированных вакцин против гриппа птиц подтипа Н5 в отношении штаммов вирусов ВПГП А Н5Ш, принадлежащих кладам 2.2. и 2.3.2.
Практическая значимость работы.
На основании проведенных исследований разработаны «Рекомендации по вакцинации птиц против гриппа птиц», которые были одобрены
Россельхознадзором и разосланы, руководителям органов управления
I * с ветеринарией субъектов РФ и руководителям территориальных управлений Россельхознадзора в виде циркулярного письма № ФС-АС-2/8881: " - *
Разработан проект «Инструкции по применению вакцины против гриппа птиц инактивированной эмульгированной» и отправлен на утверждение в Россельхознадзор.
Одобрены ученым советом и утверждены зам. директора ФГУ «ВНИИЗЖ» «Методические рекомендации по анализу динамики поствакцинального гуморального иммунного ответа у птиц (на примере гриппа птиц, инфекционного ларинготрахеита и инфекционного бронхита кур).
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Динамика поствакцинального иммунитета к вирусу гриппа птиц после иммунизации инактивированной эмульгированной вакциной из штамма H5N1 в зависимости от дозы, способа инъекции и кратности вакцинации у кур, уток, мускусных уток и гусей.
2. Протективные свойства инактивированных эмульгированных вакцин против ГП подтипа Н5 в отношении вирусов Bill 11 (H5N1), изолированных на территории РФ.
Личный вклад соискателя.
Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы выполнены совместно с сотрудниками лаборатории массовых методов иммунизаций в.н.с., к.в.н. Кулаковым В.Ю., зав. лаб. к.в.н. Фроловым C.B., с.н.с. лаборатории диагностики вирусных инфекций птиц, к.в.н. Чвалой И.А., вед. биологом Бабиным Ю.Ю., н.с., к.б.н. Андриясовым A.B., н.с., к.б.н. Циванюк М.А., зав. лабораторией парамиксовирусных болезней птиц к.в.н. Маниным Т.Б. и с.н.с. лаборатории гриппа и эпизоотологии болезней птиц к.в.н. Волковым М.С., вед. вет. врачом Пичуевым А.Е., а так же с сотрудниками ГНУ «ВНИИСХ» гл. вет. врачом Фроловой Л.В. и рук. лаб. птицеводства Гришиной Д.С., за что автор выражает им искреннюю благодарность. it> iffi Апробация результатов работы. èlifX^
Материалы диссертации доложены и обсуждены на III Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (г. Москва, 2007 г.), отчетном выборном собрании ассоциации гусеводов в ГНУ «ВНИИСХ» Россельхозакадемии (г. Суздаль, 2007 г.), на заседаниях ученого совета ФГУ «ВНИИЗЖ» в 2007-2010 гг.
Публикация научных исследований.
По теме диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 7 статей в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ.
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 148 страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов
Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Варкентин, Андрей Владимирович
Результаты исследования проб органов от погибших птиц в ОТ-ПЦР-РВ были положительными, при этом был обнаружен геном вируса А/утка/Новосибирск/02/05 H5N1.
Таким образом, экспериментальная инактивированная эмульсионная вакцина против гриппа птиц подтипа H5N3 обладала высокой антигенной и иммуногенной активностью. При тестировании сывороток крови, полученных от иммунизированных птиц в РТГА, с использованием трех антигенов, были получены воспроизводимые и сопоставимые результаты по уровню титров антител. .
3.2.8 Изучение протективного действия вакцин против гриппа птиц из штаммов H5N1 и H5N3 для разных видов птиц
До 2008 г. все российские изоляты ВГП 2005-2007 гг. имели генетическое сходство с сублинией H5N1 Цинхай и были между собой идентичными. Вирус, выделенный в 2008 г., относился к той же азиатской генетической линии Bill II (A/Guandong/1/96), но имел некоторые отличия от i <г »• вирусов гриппа птиц, выделенных на территории РФ в 2005-2007 гг. у
1 "«"'А'./ *
• - - „ у •
Для изучения протективных свойств вакцины против гриппа птиц * ■ < инактивированной эмульгированной производства ОАО «ПЗБ», и инактивированной эмульгированной против гриппа птиц подтипа H5N3 по отношению к ВГП, выделенным в 2005 и 2008 гг., были проведены эксперименты с контрольным заражением птиц.
В качестве опытных животных использовали 35 гол кур кросса «Хайсекс белый» в возрасте 132 сут и 57 гол утят кросса «Благоварский» в возрасте 10 сут, серонегативных к вирусу гриппа птиц.
Из птиц каждого вида формировали 3 группы. Каждой птице для облегчения манипуляций и контроля клинического состояния был присвоен идентификационный номер.
Иммунизацию проводили инактивированной эмульгированной вакциной производства ОАО «ПЗБ» серия 21 и экспериментальной инактивированной эмульгированной вакциной против гриппа птиц подтипа Н5№. Схема вакцинации птиц представлена в табл. 28.
Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Варкентин, Андрей Владимирович, Владимир
1. Атлас вспышек высокопатогенного гриппа птиц на территории Российской Федерации / В.М. Гуленкин, В.Н. Ирза, A.B. Фролов и др.. Владимир: «ФГУ ВНИИЗЖ», 2008. - С. 28-33.
2. Бакулин В.А. Болезни птиц. СПб, 2006. - С. 76-92.
3. Бирман Б.Я., Громов И.Н. Иммунодефициты у птиц: практическое пособие. Минск: Бизнес-офсет, 2001. - 140 с.
4. Бойд У. Основы иммунологии. М.: Мир, 1969 - 631 с.
5. Болезни домашних и сельскохозяйственных птиц / Америк, ассоц. патологов птиц; под ред. Б. У. Кэлнека и др., пер. с англ. И. Григорьева и др.. 10-е изд. - М.: Аквариум Бук, 2003. - С. 672-693.
6. Борисов A.B., Ирза В.Н. Клинические признаки и патологоанатомические изменения при гриппе птиц // РацВетИнформ. 2007. - №3. - С. 7-8.
7. Борисов В.В., Борисов A.B., Старов С.К. Особенности применения инактивированных вакцин в птицеводстве // БИО. 2007. - №2. - С. 37-41.
8. Борисов В.В., Старов С.К. Грипп птиц в Новосибирской области: особенности его течения // Ветеринарная жизнь. 2006. Спецвыпуск (ноябрь). - С. 7.
9. Брейтенбах Дж.Х. Контроль над инфекцией птичьего гриппа заслуга вакцинации // БИО. - 2006. - № 5. - С. 25-27.
10. Ю.Бурцева И. Антигенная вариабельность вируса гриппа птиц // Ветеринария е.- х. животных. 2009. - №3. - С. 8-9.
11. И.Вакцинация метод профилактики гриппа птиц / С. Ямникова, В. Смоленский, О. Хохлачев, Н. Власов // Аграрный эксперт. - 2006. -№3. — С. 3-6.
12. Васильев Ю.М. Вакцины против вируса гриппа птиц // Вопросы вирусологии. 2008. - № 6. - С. 4-15.
13. Варден B.JI. Математическая статистика. М.: Иностранная лит. 1960. -435 с.
14. Виткова О.Н. Усовершенствование системы лабораторной диагностики и профилактики гриппа птиц: автореф. дис. канд. вет. наук. Щелково, 2009. - 26 с.
15. Власов H.A. Эпизоотическое состояние, стратегия и тактика борьбы с гриппом птиц в РФ // II Междунар. ветеринарный конгр. по птицеводству. М., 2006. - С.23-29.
16. Воробьиные как резервуар вирусов гриппа А / Э. Джавадов, Э. Амдий, С. Борисенко и др. // Птицеводство. 2007. - №5. - С. 21.
17. Временная инструкция о мероприятиях по борьбе с гриппом птиц: утв. Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 15 августа 1978 г. // Ветеринарное законодательство. М., 1981. - Т. 3.- С. 92-94. .
18. Временное наставление по применению жидкой инактивированной вакцины против гриппа птиц: утверждено Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 31 июля 1978 г. // Ветеринарное законодательство. М., 1981. -Т. 3. С. 196-197.
19. Временное наставление по сухим вирус-вакцинам против классической чумы птиц из штаммов Ру и Р5: утв. Главнымуправлением ветеринарии МСХ СССР 29 мая 1966 г. // Ветеринарное законодательство. М., 1972. - Т 1. - С. 600.
20. Временное наставление по применению сухой инактивированной вакцины против гриппа птиц: утв. Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 22 сентября 1978 г. // Ветеринарное законодательство. -M., 1981.-T. 1.-С. 197-198.
21. Грипп A/H5N1 в России: экология и эволюция (2004-2007 гг.) / О.Н. Виткова, В.Н. Ирза, М.В. Калмыков, С.С. Ямникова // Научные основы произ-ва ветеринарных биол. препаратов: материалы
22. Международной науч. -практ. конф. Щелково, 2007. - С. 35-43. ^
23. Грипп: обзор литературы / Н.С. Дудникова, В.В. Дрыгин, JI.O. Щербакова, A.B. Андриясов. Владимир: ФГУ «ВНИИЗЖ», 2005. -59 с.
24. Грипп птиц / Б.Ф. Бессарабов, И.И. Мельникова, Н.К. Сушкова, С.Ю. Садчиков. М: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, 2006. - 35 с.
25. Грипп птиц производство и испытание инактивированной вакцины / C.B. Крюков, Б.В. Соловьев, Д.А. Лозовой и др. // Грипп птиц: профилактика и меры борьбы: сб. материалов, науч.-практ. конф. -М., 2007. - С. 82-95.
26. Действие криоконсервирования на биологические свойства и молекулярногенетическую структуру штамма «А/ Курица/Сиваш/02/05/ (H5N1)» вируса высокопатогенного гриппа птиц
27. М.Ю. Стегний, И.Л. Дикий, А.Н. Гольцев, и др. // Ветеринарная медицина: м!жвщ. тем. наук. зб. Харюв, 2006. - Вип. 87. - С. 192— 198.
28. Динамика вирулентности штаммов высоковирулентного вируса гриппа A H5N1 генотипа 2.2., изолированных на территории России в 2005-2007 гг. / М.Ю. Щелканов, А.Г. Прилипов, Д.К. Львов и др. // Вопросы вирусологии. 2009. - №2. - С. 8-17.
29. Дудников С.А., Гуленкин В.М. Концепция природной очаговости и грипп птиц // Труды Федерального центра охраны здоровья животных.- Владимир, 2006. Т. 4. - С. 248-280.
30. Жаров A.B., Иванов И.В., Стрельникова А.П. Вскрытие и патоморфологическая диагностика болезней животных. М. , 2000. — 400 с.
31. ЗЗ.Закс Л. Статистическое оценивание. -М.: Статистика, 1976. 598 с.
32. Ибрагимов А. Особенности течения, клиники, и патоморфология гриппа птиц // Птицеводство. 2006. - №4. - С. 42-44.
33. Ибрагимов A.A. Патологоанатомические изменения при гриппе птиц // Ветеринария. 2006. - №4 - С. 26-27.
34. Игнатов П.Е. Иммунитет и инфекция М.: Время, 2002. - 352 с.
35. Изучение иммуногенной активности инактивированнои вакцины против гриппа птиц / C.B. Фролов, Т.Б. Манин, A.B. Борисов и др. // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. Владимир, 2007.-Т. 5.-С. 138-143.
36. Иммунология / P.M. Хаитов. Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович и др.. -М.: Медицина, 2000. 432 с.
37. Инструкция по борьбе с заболеванием птиц чумой: утв. Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 21 июля 1965 г. // Ветеринарное законодательство. М., - 1972. - Т. 2 - С. 326 -330.
38. Ирза В.Н. Краткий анализ эпизоотической ситуации по гриппу птиц H5N1 в Российской Федерации и стратегия мер по контролю данной болезни // Ветеринарная медицина: м1жвщ. тем. наук. зб. — Харюв, 2006. Вип. 87. - С. 78-83.
39. Ирза В.Н. Иммунобиологические свойства вакцины ассоциированной против ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур и синдрома снижения яйценоскости 76 инактивированной эмульгированной: дис. канд. вет. наук. - Владимир, 2000. - С. 136.
40. Ирза В.Н. Эпизоотическая ситуация в мире и РФ по гриппу птиц H5N1 и меры борьбы с ним // Ветеринария в птицеводстве. 2006.-№3. - С. 32-34.
41. Клинические и патологоанатомические изменения при гриппе птиц в Российской Федерации в 2005 году / A.B. Фролов, A.B. Борисов, В.В. Борисов и др. // 2-й Междунар. вет. конгр. по птицеводству. М., 2006. - С.36-38.
42. Коровин Р.Н., Зеленский В.П. Лабораторная диагностика болезней птиц: справочник. М.: Агропромиздат, 1989. -256 с.
43. Лагуткин H.A. Сохраняемость вируса гриппа А в объектах ветнадзора, по данным ВНИИВиМ // Ветеринарный консультант. 2006. - №12. -С. 9.
44. Лагуткин H.A., Хафизов Е.Д. Сохраняемость вируса гриппа А при химических и физических факторах воздействия, по данным ВНИИВиМ и ВНИИВСГЭ // Ветеринарный консультант. 2006. -№12.-С. 9.
45. Лихолетов С.М. Современные аспекты разработки вакцин, адъювантов и иммуномодуляторов // Успехи современной биологии. -1988.-Т. 105,-вып. 1.-С. 83-99.
46. Луговцев В.Ю., Васильев Д.А. Классификация и номенклатура вирусов позвоночных: учеб. пособие для вузов. Ульяновск, 2002. -268 с.
47. Львов Д.К. Медицинская вирусология М.: Мед. информ. агентство, 2008. - 656 с.
48. Львов Д.К, Ильичев В.Д. Миграции птиц и перенос возбудителей инфекции (эколого-географические связи птиц с возбудителями инфекции). М.: Наука, 1979. - 252 с.
49. Львов Д.К. Причина и последствие проникновение на территорию России ВПГП А // Грипп птиц: профилактика и меры борьбы: сб. материалов науч.-практ. конф. М., 2007. - С. 46- 50.
50. Методические рекомендации по лабораторному мониторингу гриппа птиц на территории Российской Федерации: утв. заместителем руководителя Россельхознадзора H.A. Власовым 17.11.2008 г.
51. Методические руководство по определению экономического ущерба и эффективности противоэпизоотических мероприятий при особо опасных болезнях животных / В.М. Гуленкин, Т.З. Байбиков, Ю.В. Зинковский и др. Владимир: ФГУ «ВНИИЗЖ», 1996. - 86 с.
52. Молекулярно-генетический анализ изолятов вируса гриппа птиц подтипа H5N1, выявленных на территории Республики Тыва в 2006 году / A.B. Андриясов, Т.Б. Манин, И.П. Пчёлкина, и др. // Труды
53. Федерального центра охраны здоровья животных. Владимир, 2007. -Т. 5.-С. 111-118.
54. Мониторинг гриппа А у диких птиц /О.Н. Пугачев, Н.В. Большаков, М.В. Крылов и др. // Ветеринария. 2009. - №4.- С. 23-25.
55. Мониторинг вируса гриппа среди дикой и синантропной птицы на территории Омской области / A.A. Ковалевская, Н.Ф. Хатько, В.И Околелов и др. // Ветеринарная патология. 2007. - №1. - С. 178181.
56. Бакаев и др. // Доклады ВАСХНИЛ. 1973. - №12. - С. 19-21. 69.06 эпизоотологическом потенциале вируса гриппа птиц / В.Н. Сюрин, Н.Г. Осидзе, З.Я. Чистова, Ю.В. Родин // Ветеринария. - 1972. - №8. -С. 41-43.
57. Основы инфекционной иммунологии / В.В. Макаров, A.A. Гусев, Е.В. Гусева, О. Сухарев. Владимир: Фолиант, 2000. - 176 с.
58. Оптимизация параметров культивирования штамма «Новосибирск» вируса гриппа птиц / C.B. Фролов, Т.Б. Манин, A.B. Борисов и др. // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. Владимир, 2007.-Т. 5.-С. 131-137.
59. Патологическая анатомия сельскохозяйственных животных / A.B. Жаров, В.П. Шишкова, М.С. Жаков и др.. М., 1999. - 568 с.
60. Пахмутов В.М. Грипп птиц, меры защиты и профилактики // Ветеринарный консультант. 2006. - №15. - С. 3-9.
61. Первый прорыв нового для России генотипа 2.3.2 высоковирулентного вируса гриппа A/H5N1 на Дальнем Востоке / Д.К. Львов, М.Ю. Щелканов, H.A. Власов и др. // Вопросы вирусологии. 2008. - №5. - С. 4-8.
62. Покровский В.И., Киселев О.И. Грипп птиц: Основы патогенеза в эволюцию пандемических вирусов // Грипп птиц: происхождение инфекционных биокатастроф (сб. статей). СПб., 2006 - С. 15-60.
63. Поллард Дж. Справочник по вычислительным методам статистики. -М.: Финансы и статистика, 1982. 344 с.
64. Плохинский H.A. Биометрия. 2-е изд. - М.: Изд-во Моск. ун-та, 1970.-367 с.
65. Правила по борьбе с гриппом птиц: с изменениями от 6 июля 2006 г. -СПб.: ДЕАН,2006.-64 с.
66. Приказ Минсельхоза РФ от 22.06.2006 N 184 «Об утверждении перечня болезней, при которых допускается отчуждение животных и изъятие продуктов животноводства» (Зарегистрировано в Минюсте РФ 14.07.2006 N8064).
67. URL:http://www.fsvps.ru/fsvps/vetlaw/veterinary/animalalienation/vetlaw AnimalAlienation01.html?language=ru.( дата обращения 15.07.2009)
68. Программированная рекомбинация у РНК содержащих вирусов: анализ моделей рекомбинации в приложении к механизма изменчивости вирусов гриппа типа А / О.И. Киселев, Д.В. Сараев,
69. A.A. Егоров, B.M. Блинов // Грипп птиц: происхождение инфекционных биокатастроф: (сб. статей). СПб., 2006.- С. 207-230.81 .Производство и полевые испытания инактивированной эмульгированной вакцины против гриппа птиц (H5N1) / Д.С. Сурнев,
70. B.П. Мельников, А.В Борисов, Д.А. Лозовой // Российский ветеринарный журн. С. х. животные. - 2007. - №2 - С. 6-7.
71. Садовский Н.В. Константные методы математической обработки количественных показателей // Ветеринария. 1975 - №11. - С. 42—46.
72. Санитарный кодекс наземных животных: в 2 т. Т. 2. Рекомендации по болезням Списка МЭБ и другим важным для международной торговли болезням / МЭБ. 17-е изд. - Париж , 2008. - 329 с.
73. Сергеев В.А. Вирусные вакцины. Киев: Урожай, 1993. - 366с.
74. Сергеев В.А. Непоклонов Е.А., Алипер Т.Н. Вирусы и вирусные вакцины. М.: Библионика, 2007. - 524 с.
75. Смирнов A.M. Грипп птиц. Задачи ветеринарной науки // Ветеринария. 2007. -№1,- С. 3-6.
76. Смоленский В.И., Африкантов С.Г., Жуков И.В. Грипп кур, вызванный вариантом ГП-4 // Ветеринария. 1980. - №4. - С. 64-66.
77. Смоленский В.И. Изучение некоторых вопросов патогенеза гриппа птиц и усовершенствование метода оценки иммуногенных свойств инактивированной вакцины против этой инфекции: дис. канд. вет. наук. М., 1976.-217 с.
78. Старов С.К. Справка по методам диагностики высокопатогенного вируса гриппа птиц // БИО. 2006. - № 8. - С. 13-15.
79. Стегний Б.Т., Гадзевич Д.В. Грипп птиц. Его потенциальные опасность. Возможности профилактики и ликвидации болезни // Ветеринарная медицина: м1жвщ. тем. наук. зб. Харюв, 2006. - Вип. 87.-С. 177-186.
80. Стратегия вакцинации птицы против гриппа А птиц в период 2006 года в Российской Федерации: утв. решением Оперативного штаба по координации мероприятий по предупреждению распространения на территории Российской Федерации гриппа птиц 25 апреля 2006 года.
81. Стратегия и тактика борьбы с гриппом на различных этапах эпидемического процесса / С.С. Ямникова, О.Н. Виткова, М.В. Калмыков, и др. // Ветеринарная медицина: м1жвщ. тем. наук. зб. -Харюв, 2006. Вип. 87. - С. 307-313.
82. Стратегический план действий ВОЗ в отношении пандемического гриппа. URL:http://www.who.int/csr/resources/publications/influenza/StartactplanGIP200 6.2aRU.pdf (дата обращения 12.05.2009).
83. Сюрин В.Н., Осидзе Г.А., Иванова Г.А. Грипп птиц актуальная ветеринарно-медицинская проблема // Ветеринария. - 1970. - № 3. -С. 45-47.
84. Сюрин В.Н., Фомина Н.В. Частная ветеринарная вирусология: справочная книга. М.: Колос, 1979. - С. 263-293.
85. Тим Н.В. О биологических свойствах эпизоотического штамма вируса гриппа кур // Ветеринария. 1970 - № 12. - С. 31-33.
86. Феаре К.Дж., Ясью М. Бессимптомная инфекция высокопатогенного вируса гриппа H5N1 у диких птиц: что служит критериями оценки их здоровья? // Российский вет. журн. С.-х. животные. 2007. - №1. - С 19-21.
87. Характеристика изолятов гриппа подтипа H5N1, выделенных в 2006 и 2007 годах на территории ЮФО России / И.А. Чвала, Т.Б. Манин, И.П. Пчелкина и др. // Российский вет. журн. С.-х. животные. Спец. вып., посвящ. 50-летию ФГУ "ВНИИЗЖ". 2008. -№9.-С. 66-69.
88. Штамм для изготовления инактивированной вакцины против гриппа птиц (описание антигенных и биологических свойств) / C.B. Фролов, Т.Б. Манин, И.П. Пчелкина и др. // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. Владимир, 2007. - Т. 5. - С. 119130.
89. Экология и эволюция вирусов гриппа в России (1979-2002 гг.) /Д.К. Львов, С.С. Ямникова, И.Т. Федякина и др. // Вопросы вирусологии. Т. 49.- №3. - С. 17-24.
90. Экспериментальные испытания инактивированной вакцины против высокопатогенного гриппа птиц (ВПГП) подтипов Н5 и Н7 / Э.Д. Джавадов, Н.Д. Придыбайло, Э.М Амдий и др. // Ветеринария в птицеводстве. 2006. - №3. - С.38^12.
91. Яковлев С.С. Эпизоотическая ситуация по гриппу птиц в Р.Ф. // Грипп птиц: профилактика и меры борьбы: сб. материалов науч.-практ. конф. М., 2007. - С. 27-31.
92. A conventional, inactivated oil emulsion vaccine suppresses shedding and prevent viral meat colonisation in commercial (Pekin) ducks challenged with HPAIH5N1 / M.S. Beato, A. Toffan, R. D. Nardi et al. // Vaccine. 2007. - Vol. 25. - P. 4064-4072.
93. A combination in ovo vaccine for avian influenza virus and Newcastle disease virus / J. Steel, S. Burmakina, C. Thomas et al. // Vaccine. 2007. -Vol. 26.-P. 522-531.
94. Akey B.L. Low pathogenicity H7N2 avian influenza outbreak in Virginia during 2002 // Avian Diseases. 2003. - Vol. 47. - P. 10991103.
95. Amonsin A., Payungporn S., Theamboonlers A. Genetic characterization of H5N1 influenza A viruses isolated from zoo tigers in Thailand // J. Virology. 2006. - Vol. 344. - P. 480-491.
96. An inactivated H5N2 vaccine reduces transmission of highly pathogenic H5N1 avian influenza virus among native chickens / O.N. Poetri, A. Boumab, S. Murtinia et al. // Vaccine. 2009. - Vol. 27. - P.2864-2869. Ii<
97. Avian influenza (H5N1) susceptibility and receptors in dogs / R. Maas, T. Tacken, L. Ruuls et al. // Emerging Infectious Diseases. 2008. -Vol. 10.-P. 1219-1221.
98. Avian influenza // OIE. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 2010. Vol. 1. Chap. 2.3.4.iniL:http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Healthstandards/tahm/2.03. 04AI.pdf (дата обращения 31.03.11)
99. Avian influenza in Russia in 2005-2008: some epidemiological aspects and control strategies / V.N. Irza, T.B. Manin, A.V. Frolov et al. //th
100. International Symposium on Avian Influenza: Avian influenza in poultry and wild birds. Athens, Georgia, USA. 2009. - P. 69.
101. Avian influenza virus in water: Infectivity is dependent on pH, salinity and temperature / J.D. Brown, G. Goekjian, R. Poulson et al. // Veterinary Microbiology. 2009. - Vol. 136. - P. 20-26.
102. Avian influenza viruses in wild birds: A moving target / W. M. Boyce, C. Sandrock, K. Johnson et al. // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. 2009. - Vol. 32. - P. 275-286.
103. Ben Jabara K. Highly pathogenic avian influenza an update // Vaccination: A Tool for the Control of Avian Influenza. Verona, Italy, 2007.-P. 3-5.
104. Breytenbach J.H. Guidelines for the administration of Nobilis Influenza H5 vaccine as part of an avian influenza control strategy. URL: http://www.avian-influenza.com/binaries/9560641.pdf (дата обращения 10.08.2009)
105. Capua I., Terregino C. Clinical and pathology of avian influenza infections, guidelines for farm visit and differential // Avian Influenza and Newcastle Disease, a Field and Laboratory Manual, 2009. P. 45-75.
106. Capua I., Marangon S. The use of vaccination as an option for the control of avian influenza // OIE. 71st General Session, Paris. 2003. -11 P
107. Cattoli G., Capua I. Molecular diagnosis of avian influenza during an outbreak // OIE/ FAO International Scientific Conference on Avian Influenza. Paris, 2005. - P. 99- 107.
108. Characterization of H5N1 influenza viruses isolated from migratory birds in Qinghai province of China in 2006 / F. Lei, S. Tang, D. Zhao et al. // Avian Diseases. 2007. -Vol. 51. - P. 568-572.
109. Chen H. Avian influenza vaccination: the experience in China // Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epiz. 2009. - Vol. 28. - P. 267-274.
110. Chen H., Bu Z., Wang J. Epidemiology and control of H5N1 A.I. in China // Avian Influenza. Basel, 2008. - Vol. 27. - P. 27-40.
111. Detection of influenza A viruses from different species by PCR amplification of conserved sequences in the matrix gene / R.A. Fouchier, T.M. Bestebroer, S. Herfst et al. // J. Clinical Microbiology. 2000. -Vol. 38.-P. 4096-4101.
112. Duffy J.I. Vaccine preparation techniques // Vaccine Preparation Techniques. New Jersey, 1980. - P.44-46.
113. Efficacy of an inactivated and a fowlpox vectored vaccine in muscovy ducks against an Asian H5N1 highly Pathogenic avian influenza viral challenge / T. Steenels, S. Van Borm, B. Lambrecht et al. // Avian Diseases. - 2007. - Vol. 50. - P. 325-331.
114. Efficacy of commercial vaccines in protecting chickens and ducks against H5N1 highly pathogenic avian influenza viruses from Vietnam / J. Pfeiffer, D.L. Suarez, L. Sarmento et al. // Avian Diseases. 2010. - №3. -P. 262-271.
115. Efficacy of inactivated vaccines against H5N1 avian influenza infection in duck / D. Middleton, J. Bingham, P. Selleck et al. // J. Virology. 2007. - Vol. 359. - P. 66-71.
116. Efficacy of two H5N9-inactivated vaccines against challenge with a recent H5N1 highly pathogenic avian influenza isolate from a chicken in Thailand / M. Bublot, FX. Le Gros, D. Nieddu et al. // Avian Diseases. -2007. Vol. 51. - P. 332-337.
117. Effects of homologous and heterologous neiraminidase vaccine in chickens against H5N1 highly pathogenic avian influenza / Y.J. Lee, H.W. Sung, J.G. Choi et al. // Avian Diseases. 2007. - Vol. 50. - P. 476-478.
118. Effect of H7N1 vaccination on highly pathogenic avian influenza H7N7 virus transmission in turkeys / Marian E.H. Bos, M. Nielen, G. Koch, A. Stegeman et al. // Vaccine. 2008. - Vol. 26. - P. 6322-6328.
119. Eggert D., Swayne D.E. Single vaccination provides limited protection to ducks and geese against H5N1 // Avian Diseases. — 2010-Vol. 54.-P. 1224-1229.
120. Experiences in control of avian influenza in Europe, the Russian Federation and the Middle East / I.H. Brown, M. Pittman, V. Irza, A. Laddomada // Vaccination: A Tool for the Control of Avian Influenza. -Verona, Italy, 2007. P. 33-38.
121. Feare C. J. The role of wild Birds in the spread of HPAI H5N1 // Avian Diseases. 2007. - Vol. 51. - P. 440-447.
122. Fouchier R.A., Smith D.J. Use of antigenic cartography in vaccine seed strain selection // Avian Diseases. 2010. - Vol. 54 - P. 220-223.
123. Highly pathogenic avian influenza virus (H5N1) isolated from whooper swans, Japan /Y. Uchida, M. Mase, K. Yoneda et al. // Emerging Infectious Diseases. 2008. - Vol. 14, №9. - P. 1427-1429.
124. Highly pathogenic avian influenza (H5N1) in the commercial domestic ducks of South Korea / Y.K. Kwon, S.J. Joh, M.C. Kim et al. // Avian Pathology. 2005. - Vol. 34, №4. - P. 367- 370.
125. Horimoto T., Kawaoka Y. Influenza: lessons from past pandemics, warnings, from current incidents // Nat. Rev. Microbiol. 2005. - Vol. 3. №8. -P. 591-600.
126. Influenza / D. Stamboulian, P.E. Bonvehi, M. Francisco et al. // Infectious Disease Clinics of North America. 2000. - Vol. 14, № 1. - P. 141-166.
127. Influenza vaccines and vaccination strategies in birds / T. van den Berg, B. Lambrecht, S. Marche et al. // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. 2008, - Vol. 31. - P. 121-165.
128. Kangzhen Yu. Avian influenza in China //15th World Veterinary Poultry Congress. Abstract book. China, 2007. - P. 105-110.
129. Keawcharoen J., Oraveerakul K., Kuiken T. Avian Influenza H5N1 in tigers and leopards // Emerging Infectious Diseases. 2004. - Vol. 10. -№.12.-P. 2189-2191.
130. Lee C.W., Saif Y. M. Avian influenza virus // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. 2009. - Vol. 29. -P. 301-310.
131. Lee C.W., Senne, D.A., Suarez D.L. Effect of vaccine use in the evolution of Mexican lineage H5N2 avian influenza virus // J. Virology, 2004.-Vol. 78, № 15.-P. 8372-8381.
132. Lupiani B., Reddy S.M. The history of avian influenza // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. 2009. Vol. 32. - P. 311-323.
133. Marangon S., Cristali A., Busani L. Planning and executing a vaccination campaign against Avian Influenza // Vaccination: A Tool for the Control of Avian Influenza. Verona, Italy, 2007. - P. 99-100.
134. Marangon S., Busani L., Capua I. Practicalities of the implementation of a vaccination campaign for avian influenza // Avian Diseases. 2007. -Vol. 51.-P. 297-303.
135. Martin V., Forman A. Preparing for Highly Pathogenic Avian Influenza // A Manual for Countries at Risk. Rome: FAO, 2006. - 35 p.
136. Martin V., Forman A., Lubroth J. Preparing for Highly Pathogenic Avian Influenza // FAO of the United Nations. Rome, 2009. - 85 p.
137. Myers T.J., Rhorer M.D.A., Clifford J. USDA options for regulatory changes to enhance the prevention and control of avian influenza // Avian Diseases. 2003. - Vol. 47. - P. 982-987.
138. Naeem K., Siddique N. Use strategic vaccination for the control of avian influenza in Pakistan // OIE/FAO International Scientific Conference on Avian Influenza. Paris, 2005. - P. 145-150.
139. Needs assessment for the use of vaccination / M. Weijtens, H. Maurice, H. Van Langen, G. Koch // Vaccination: A Tool for the Control of Avian Influenza. Verona, Italy, 2007. - P. 85 - 87.
140. Neuraminidase assays / M. Aymard, O. Ferraris, L. Gerentes et al. //f' '
141. Dev. Biol. 2003. - Vol. 115. - P. 75-83. t V
142. OIE. Terrestrial Animal Health Code. Chapter 10.4. Avian influenza 2010.URL:http://www.oie.int/index.php?id= 169&L=0&htmflle=chapitrel .10.4.htm (дата обращения 31.03.11)
143. Pathogenicity of highly pathogenic avian influenza viruses of H5N1 subtype isolated in Thailand for different poultry species AT. Saito, C. Watanabe, N. Takamae et al. // Veterinary Microbiology. 2009. - Vol. 133.-P. 65-74.
144. Perkins L.E., Swayne E.D. Pathogenicity of a Hong Kong-Origin H5N1 highly pathogenic avian influenza virus for emus, geese, ducks, and pigeons // Avian Diseases. 2002. - Vol. 46. - P. 46- 53.
145. Persistense of avian influenza viruses in water / D.E. Stallknecht, S.M. Shane, M.T. Kearney, P.J. Zwank // Avian Diseases. 1990. - Vol. 34. - P. 406-411.
146. Pittman M. Legal aspect of vaccination of poultry against avian influenza in the European Union // Vaccination: A Tool for the Control of Avian Influenza. Verona, Italy, 2007. - P. 145.
147. Prevalence of influenza A H5N1 virus in cats from areas with occurrence of highlypathogenic avian influenza in birds / J. Marschall, B. Schulz, T.C., Timm C. et al. // Feline Medicine and Surgery. 2008. -Vol. 10.-P. 355-358.
148. Protective efficacy in chicken, geese, and ducks of an H5N1 inactivated vaccine developed by reverse genetic / G. Tian, S. Zhang, Y. Li et al. // J. Virology. 2005. - Vol. 341. - P. 153-162.
149. Protective efficacy of several vaccines against highly pathogenic H5N1 avian influenza virus under experimental conditions / J. Veits, A. R.Oberdorfer, D. Helfericha et al. // Vaccine. 2008. - Vol. 26. - P. 1688-1696.
150. Protective efficacy of the H5 inactivated vaccine against different highly pathogenic H5N1 avian influenza viruses isolated in China and Vietnam / G. Tiana, X. Zenga, Y. Li et al. // Avian Diseases. 2010. Vol. 54.-P. 287-290.
151. Seek B.M., Squarzoni C., Litamoi J. Experience in control of avian influenza in Africa // Vaccination: A Tool for the Control of Avian Influenza. Verona, Italy, 2007. - P. 45-52.
152. Senne D.A. Avian influenza in north and South America, 2002-2005 // Avian Diseases. 2007. - Vol. 51. - P. 167-173.
153. Sims L.D. Lessons learned from Asian H5N1 Outbreak Control // Avian Diseases. 2007.-Vol. 51. - P. 174-181.
154. Song H., Nieto G., Perez D. A new generation of modified live attenuated avian influenza viruses using a two strategy combination as potential vaccine candidates //J. Virology. - 2007. - Vol. 81. - P. 92389248.
155. Spackman E. Avian Influenza Virus. Athens, GA: Humana Press,2008. -141 p.
156. Stallknecht D.E., Brown J.D. Ecology of avian influenza in wild birds // Avian Influenza. Ames Iowa, 2008. - P. 43-58.
157. Studies of H5N1 influenza virus infection of pigs by using viruses isolated in Vietnam and Thailand in 2004 / Y.K. Choi, T.D. Nguyen, H. Ozaki et al. // J. Virology. 2005. - Vol. 79. - P. 10821-10825.
158. Swayne D. Changing face of avian influenza ecology and its control: from wild birds to poultry and back again // 15th World Veterinary Poultry Congress. Abstract book. China, 2007. - P. 98-104.
159. Swayne D.E., Halvorson D.A. Influenza // Diseases of Poultry 11 111 edit. Ames, Iowa, 2003. - P. 135-160.
160. Swayne D.E. Epidemiology of avian influenza in agricultural and other man made systems // Avian Influenza. - Ames, Iowa, 2008. - P. 59-85.
161. Swayne D.E., Kapczynski D.R. Vaccines, Vaccination, and immunology for avian influenza viruses in poultry // Avian Influenza. -Ames, Iowa, 2008. P. 407-453.r
162. Sylte M. J., Hubby B., Suarez D. L. Influenza neuraminidase antibodies provide partial protection for chickens against high pathogenic avian influenza infection // Vaccine. 2007, Vol. 25. - P. 3763-3772.
163. Terregino C. Capua I. Conventional diagnosis of Avian Influenza // Avian Influenza and Newcastle Diseases, a field and Laboratory, Verlag Italia, 2009.-P. 73-86.
164. The immunogenicity and efficacy against H5N1 challenge of reverse genetics-derived H5N3 influenza vaccine in ducks and chickens / R.G. Webster, R.J. Webby, E. Hoffmann et al. // J. Virology. 2006. - Vol. 351. -P. 303-311.
165. Thiermann A.B. The new world organization for animal health standards on avian influenza and international trade // Avian Diseases. — 2007. Vol. 50. - P. 325-331.
166. Transmission of highly pathogenic avian influenza H5N1 virus in Pekin ducks is significantly reduced by a genetically distant H5N2 vaccine / J. A. van der Goot, M. van Boven, A. Stegeman et al. // J. Virology. -2008.-Vol. 382.-P. 91-97.
167. Use of avian influenza vaccination in Hong Kong / T.M. Ellis, L.D.Sims, H.K.H. Wong et al. // OIE/FAO International Scientific conference on Avian Influenza. Paris, 2005. - P. 133-143.
168. Vaccination against highly pathogenic avian influenza H5N1 virus in zoos using an adjuvanted inactivated H5N2 vaccine / J. Philippa, C. Baas, W. Beyer et al. // Vaccine. 2007. - Vol. 25. - P. 3800-3808.
169. Vaccines protect chickens against H5 highly pathogenic avian influenza in the face of genetic changes in field viruses over multiple years / D.E. Swayne , M.L. Perdue, J.R. Beck et al. // Veterinary Microbiology. 2000. - Vol. 74, № 1-2. - P. 165-172.
170. Validation of Egg Yolk Antibody Testing as a Method to Determine Influenza Status in White Leghorn Hens / J.R. Beck, D.E. Swayne, S. Davison et al. // Avian Diseases. 2002. - Vol. 46. - P. 46 - 53.
171. Vaccination in zoos EC. URL: http://ec.europa.eu/food/animal/diseases/controlmeasures/avian/eurespvac cinationen.htm#zoos (дата обращения 15.07.09)
172. Villarreal С. Experience in Control of Avian influenza in the Americas // Vaccination: A Tool for the Control of Avian Influenza. Verona, Italy, 2007.-P. 53 -60.
173. Weekly disease information OIE. URL: http://www.oie.int/wahis/public (дата обращения 31.03.11)
174. WHO. Continuing progress towards a unified nomenclature system for the highly pathogenic H5N1 avian influenza viruses URL: http://www.who.int/csr/disease/avianinfluenza/guidelines/nomenclature/e п/ (дата обращения 25.03.11)
175. Xiufan Li. Infections and clinical diseases caused by influenza A and Newcastle disease viruses in domestic waterfowl //15th World Veterinary Poultry Congress. Abstract book. China, 2007. - P. 42- 52.
176. Yee K. S. Carpenter Т.Е. Cardona C. J. Epidemiology of H5N1 avian influenza // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. 2009. - Vol. 32. - P. 325-340.
-
Варкентин, Андрей Владимирович
-
кандидата ветеринарных наук
-
Владимир, 2011
-
ВАК 06.02.02
- Особенности эпизоотического процесса и пути совершенствования мер борьбы с гриппом птиц в Дагестане
- Разработка набора реагентов для определения уровня антител к вирусу гриппа А кур иммуноферментным методом
- Особенности эволюции вирусов гриппа в период 1986-98 гг.
- Изоляция и характеристика биологических свойств вирусов гриппа А различного происхождения, циркулирующих среди диких птиц
- Характеристика вирусов гриппа и состояние популяционного иммунитета населения Западной Сибири (2009 - 2012 гг.)
