Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярно-генетическое изучение мышечной дистрофии Дюшенна в Башкортостане

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гринчук, Олег Васильевич

1.ВВЕДЕНИЕ

1.1.Актуальность работы.

1.2.Цель и задачи исследования.

1.3.Научная новизна.

1.4. Практическая значимость.

1.5.Положения, выносимые на защиту.

2.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ И

2.1. Общая характеристика МДД и МДБ. Н

2.2. Идентификация гена МДД.

2.3. Биохимия и патофизиология мышечных дистрофий Дю-шенна и Беккера. Характеристика дистрофина и ассоциированного с ним гликопротеинового комплекса. ^

2.4.Методы выявления делеций в гене дистрофина. Прямая ДНК-диагностика МДД/МДБ.

2.5.Характеристика делеций и дупликаций, их спектры в популяциях. ^

2.6.Корреляция тяжести заболевания и типа делеций в гене дистрофина.

2.7.Делеционные точки разрыва в гене дистрофина. Механизмы возникновения делеций.

2.8. Точковые мутации в гене дистрофина и методы их регистрации.

2.9.Молекулярно-генетическая диагностика МДД: прямые и косвенные методы.

З.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1. Выделение геномной ДНК.

3.2.Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

3,2.1 .Мультиплексная полимеразная цепная реакция (мПЦР). 3.2.2. Тонкое картирование ДТР в 3 - "горячем " участке гена дистрофина и молекулярно-генетическая диагностика.

3.3. Электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ).

3.4. SSCP-анализ.

3.5. Статистическая обработка результатов.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

4.1.Клиническое описание больных МДД.

4.2.Анализ делеций в гене дистрофина. Спектр делеций и распределение делеционных точек разрыва в гене дистрофина у больных МДД Башкортостана.

4.3.КоРР„ клинических симптомов? пациентов МДД с характером делеций в гене дистрофина.

4.4.Тонкое картирование делеционных точек разрыва в 3- ^ "горячей" области возникновения делеций в гене дистрофина.

4.5.Разработка системы мультиплексных SSCP для поиска полиморфизмов и точковых мутаций в гене дистрофина. ^

4ЖМолекулярно-генетическая диагностика в семьях высокого риска МДД Башкортостана. Практическое применение аналианализа делеций в гене дистрофина: подтверждение диагноза МДД и определение статуса носительства. Косвенная диагностика.

4.7. Создание компьютерной системы "Мышечная дистрофия Дюшенна/ Беккера

4.7.].Разработка формализованной карты обследования на мышечные дистрофии Дюшенна и Беккера.

4.7.2.Создание автоматизированного регистра по мышечной дистрофии Дюшенна в республике Башкортостан.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетическое изучение мышечной дистрофии Дюшенна в Башкортостане"

1.1.Актуальность работы.

Мышечная дистрофия Дюшенна (МДД) - тяжелое сцепленное с полом наследственное заболевание, встречающееся в среднем у одного из 3500 новорожденных мальчиков и приводящее к стойкой инвалидности. Первые признаки заболевания проявляются в возрасте 3-4 лет, в дальнейшем заболевание носит прогрессирующий характер и клинически выражается в дистрофии мышц верхних и нижних конечностей. На сегодняшний день методы кардинального лечения данной патологии отсутствуют (Bakker, van Ommen, 1998, Гринио JI.П., 1998), в связи с чем особую важность приобретают методы профилактики МДД.

В 1988 году методом "обратной генетики" был идентифицирован белковый продукт гена, ответственного за проявление МДД. Методами молекулярной генетики ген дистрофина (ГД) был картирован в средней части короткого плеча Х-хромосомы (Хр21) и оказался самым крупным из всех известных генов млекопитающих (Koenig et al., 1987). Он состоит из 79 экзонов, его размер около 2,5 м.н.п. В 50-60% случаев манифестация МДД связана с достаточно крупными делециями.

В настоящее время накоплены обширные данные в отношении делецион-ных спектров в различных популяциях мира, установлены определенные попу-ляционные различия (Lindlof et al., 1989, den Dunnen et al., 1989, Hodgson et al., 1989, Upadhyaya et al., 1990, Cooke et al., 1990, Covone et al., 1991, Kitoh et al., 1992, Danielli et al., 1993, Zimovski et al., 1993, Winnard et al., 1993, Shomrat et al., 1994, Yang et al., 1994, Patino et al., 1995, Florentin et al., 1995, Todorova et al., 1996, Fajkusova et al., 1997, Singh et al., 1997, Чухрова А.Л., 1997, Evgrafov et al.,1998).

Изучение спектров делеций в гене дистрофина с точной локализацией их делеционных точек разрыва (ДТР) представляет собой уникальную возможность для выяснения механизмов крупных перестроек на молекулярном уровне.

Характер локализации делеции относительно функционально важных доменов дистрофина, а также эффект ее влияния на трансляционную рамку считывания позволяет провести анализ корреляции клинических проявлений пациентов МДД и типа генетического изменения в ГД.

Исследование мутаций в ГД необходимо для проведения прямой ДНК-диагностики у больных МДД: дифференциальной, пресимтоматической и пре-натальной. Изучение мутаций является также обязательным условием для прямой диагностики носительства в семьях высокого риска для женщин - родственниц больных МДД. Традиционно используемые для этой цели методы (например, анализ родословной, определение уровня креатинфосфокиназы (КФК) в сыворотке крови) могут быть существенно уточнены и дополнены результатами молекулярно-генетического обследования (данными мПЦР, mSSCP, анализа наследования аллелей внутригенных полиморфных ДНК-маркеров).

Мутационная частота для ГД составляет 1 на 104 Х-хромосом (Edwards, 1986) и является самой высокой среди известных наследственных моногенных нозологий. Приблизительно 1/3 всех случаев МДД связана с мутациями de novo (Bakker and van Ommen, 1992). Рекомбинационная частота гена в 4 раза выше, чем можно предполагать исходя из его длины (Oudet et al., 1992). Все эти факты говорят об отсутствии накопления в популяции мажорных мутаций или определенных мутантных гаплотипов. В связи с такими особенностями ГД прямая ДНК-диагностика сталкивается с необходимостью выявления индивидуальных мутаций в каждой отдельной семье.

Приблизительно у 1/3 пациентов МДД крупные перестройки (делеции или дупликации) в гене отсутствуют. Выявление точковых мутаций, а также маленьких делеций и дупликаций чрезвычайно затруднено огромными размерами гена. В настоящее время разработка новых технологий обнаружения точковых мутаций позволила успешно проводить их скрининг. Изучение точковых мутаций необходимо, во-первых, как инструмент функционального анализа белка дистрофина, во-вторых, - для расширения границ прямой диагностики МДД/МДБ.

До настоящего времени молекулярно-генетическое изучение МДД в Башкортостане не проводилось. Кроме того, существует объективная необходимость в разработке системы хранения и регулярного обновления имеющихся данных по больным МДД и их семьям (клиника, родословные, молекулярно-генетические данные, результаты опроса родственников больных, эпидемиологические сведения и др.). Как показал мировой опыт, а также опыт ученых нашей республики, наиболее удобным способом для этого является разработка компьютерного регистра базы данных по МДД/МДБ.

Представленная работа, таким образом, с одной стороны, демонстрирует один из подходов для изучения механизма возникновения крупных перестроек на примере ГД; с другой стороны, полученные в ней результаты являются необходимой основой для проведения молекулярно-генетической диагностики в республике Башкортостан. Важным вкладом при систематизации всех данных о больных и их близких родственниках является созданный компьютерный регистр "Мышечная дистрофия Дюшенна / Беккера".

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Гринчук, Олег Васильевич

107 ВЫВОДЫ

1.С помощью оптимизированного метода мультиплексной ПЦР были обследованы 33 неродственных пациента с диагнозом мышечная дистрофия Дю-шенна из Башкортостана. Делеции обнаружены у 8 человек, что составляет 24,2%.

2.Проведен анализ спектра делеций и распределения делеционных точек разрыва в гене дистрофина. Исходя из анализа показано, что в семьях больных МДД с делециями, ДТР которых находятся в 44, 45, 49, 50 интронах гена вполне обосновано применение внутригенных высокополиморфных маркеров STR44, STR45, STR49, STR50 не только для косвенной, но и для прямой диагностики носительства делеций у родственниц больных.

3.Проведено тонкое картирование 13 ДТР в 3'-"горячем " районе гена дистрофина. Для двух из них установлена локализация в участке STR50- экзон 51 в пределах 1,22 т.н.п.

4.В результате корреляционного анализа клинических симптомов у пациентов МДД с характером делеций в гене дистрофина получено подтверждение гипотезы "рамки считывания" А.Монако, согласно которой у больных МДД транскрипт гена нефункционален, а белок в клетке полностью отсутствует. Явление нарушения рамки считывания у пациентов МДД, по видимому, объясняет их относительную фенотипическую однородность по динамике протекания заболевания.

5.Разработаны три мультиплексные системы SSCP-анализа для выявления точковых мутаций в промоторной области и 9 экзонах гена дистрофина. С помощью этих систем были обследованы 25 пациентов МДД без выявленных делеций в гене. В 6, 44, 45 и 53 экзонах гена в 6 случаях были обнаружены изменения подвижности однонитевой ДНК.

6.Разработаны основные подходы проведения молекулярной диагностики миодистрофии Дюшенна в Башкортостане. В результате проведенной прямой и

108 косвенной ДНК-диагностики в 12 семьях высокого риска МДД статус носительства мутации был отвергнут у 14 родственниц больных МДД, а подтвержден у 9 родственниц пациентов.

7.Создан компьютерный регистр базы данных "Мышечная дистрофия Дюшенна/Беккера", который позволяет систематизировать все данные по больным МДД/МДБ Башкортостана и существенно облегчает использование их при организации клинического и молекулярно-генетического консультирования больных МДД/МДБ и их родственников.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В рамках поставленной цели по изучению молекулярно-генетической природы МДД и разработки подходов ДНК-диагностики этого заболевания в Башкортостане в нашей работе получены следующие результаты.

В ходе анализа 5'- и 3'- "горячих" участков гена дистрофина у 33 неродственных больных МДД Башкортостана было выявлено 8 делеций различной локализации и протяженности. Частота делеций в гене составила 24,2%. Таким образом, для больных МДД - жителей Башкортостана мПЦР-амплификация как прямой метод диагностики оказался неэффективным в 75,8% семей, в связи с чем большую значимость в семьях высокого риска МДД из Башкортостана приобретают косвенные методы ДНК-диагностики.

Частота делеций в гене дистрофина из выборки больных МДД из Башкортостана оказалась существенно ниже, чем в большинстве популяций мира. Относительно низкая частота делеций в гене указывает на необходимосп иммуногистохимического обследования пациентов с клиническим диагнозол МДД на дистрофии в мышечной ткани перед проведением прямой ДНК диагностики МДД. Кроме того, необходимо расширить набор молекулярнс генетических маркеров, используемых для косвенной ДНК-диагностики. ' связи с этой же причиной, значительную актуальность для расширения сфер применения прямой ДНК-диагностики в Башкортостане представляют метод скрининга пациентов МДД на точковые мутации в гене дистрофина.

Изучен^ спектр делеций и распределение ДТР в выборке больных клиническим диагнозом МДД из Башкортостана. Показано, что Дг преимущественно сосредоточены в 3'-"горячем" районе гена дистрофина, ч соответствует литературным данным. Выявлено своеобразие спею распределения ДТР в гене дистрофина в республике. Рбнаружено, 1 наибольшие частоты ДТР в гене приходятся на интервалы между 44-45, 45-4 50-52 экзонами. Исходя из этого, делается заключение, что в семьях больг

МДД с делециями из Башкортостана, ДТР которых находятся в областях между экзонами 44-45, 45-47 и 50-52, вполне обосновано применение внутригенных высокополиморфных маркеров, расположенных в 44 (STR-44), 45 (STR-45), 49(STR49), 50 (STR50) интронах гена не только для косвенной, но и для прямой диагностики носительства делеций у женщин - близких родственниц больных с делециями.

Проведенный анализ трансляционной рамки считывания у 6 пациентов МДД с делециями позволил выявить ее нарушение во всех шести изученных случаях, что находится в полном соответствии с гипотезой "рамки считывания" А.Монако. Явление нарушения рамки считывания у пациентов МДД, по видимому, объясняет их относительную фенотипическую однородность по динамике протекания заболевания.

При использовании внутригенных маркеров STR44, STR45, STR49, STR50, а также системы специально подобранных олигонраймеров в участке между STR50 и экзоном 51 проведено тонкое картирование 13 ДТР в 3'-"горячем " районе гена дистрофина. Для двух ДТР установлена локализация в участке STR50 - экзон 51 с точностью 1,22 т.н.п. Для точного установления локализации этих 2 ДТР нами планируется использование реакций F2-R6 и F2-R1 (0,43 и 0,86 т.н.п. соответственно ниже в 3' направлении), а также секвенирование ограниченного участка. Это позволит проверить гипотезу о связи ДТР с повторяющимися элементами генома и возможной их кластеризации.

Оптимизированы условия для проведения SSCP-анализа на основе оптимального разделения однонитевых фрагментов ДНК при электрофорезе. Сформированы 3 мультиплексные SSCP-системы для анализа промоторной области и 9 экзонов гена дистрофина: SSCPa (Pm-область, 6, 50, 52 экзоны). SSCPb (4, 43, 44 экзоны), SSCPc (51, 45, 53 экзоны). С помощью данных трех мультиплексных SSCP-систем обследованы 25 пациентов МДД без выявленных делеций из Башкортостана на точковые мутации в гене дистрофина?. $ ходи проведенного обследования у 6 пациентов в 4 экзонах гена выявлены изменения подвижности однонитевой ДНК. Три изменения подвижности выявлены в 45 экзоне, 1 - в 53,1 - в 44,1 - в 6.

Показана практическая значимость использования частоты делеций и спектра распределения ДТР для разработки подходов ДНК-диагностики МДД. Разработаны основные подходы и принципиальная схема ДНК-диагностики МДД в Башкортостане, что создает условия для проведения пренатальной, дифференциальной, пресимптоматической диагностики данного заболевания в республике.

Обобщая результаты прямой и косвенной диагностики в 12 семьях высокого риска МДД из Башкортостана можно заключить, что статус носительства мутации был отвергнут у 14 родственниц больных МДД, а носительницами оказались 9 женщин из семей высокого риска МДД.

Разработанный компьютерный регистр "Мышечная дистрофия Дюшенна/ Беккера" является важным вкладом при систематизации всех данных о больных и их близких родственниках в Башкортостане. Переход к использованию автоматизированного регистра "Мышечная дистрофия Дюшенна/Беккера" создает условия для новой технологии ведения учета больных и носителей мутации.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гринчук, Олег Васильевич, Уфа

1. Ахмадеева Л.Р. Миотоническая дистрофия в республике Башкортостан// Автореф. дис. . канд. мед. наук.- Пермь.: Пермская государственная медицинская академия, -1997,- 28с.

2. Горбунова В.Н., Баранов B.C. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний,- СПб.: Специальная литература, 1997,- 287 с.

3. Гринио Л.П. Дюшенновская миодистрофия. Н.Новгород: Изд-во НГМА,- 1998. -192 с.

4. Гринио Л.П., Агафонов Б.В. Миопатии,- М.: Медицина.-1997,- 216 с.

5. Гришко В.Т., Малярчук С.Г., Лившиц Л.А. Распределение делеций в гене дистрофина у пациентов с мышечной дистрофией Дюшенна на Украине/Щитология и генетика.- 1993,- Т.27,- N2,- С.68-71

6. Евграфов О.В., Макаров В.Б. Диагностика миодистрофии Дюшенна с помощью зондов ДНК // Журн. невропатол. и психиатрии.-1987.-Т.87,- N.11.-С.1732-1736.

7. Евграфов О.В., Макаров В.Б.ДНК-диагностика наследственных заболеваний // Итоги науки и техники: Генетика человека.- 1991,- Т.9,- С.53-126.

8. Ильина Е.Г., Колосов С.В. Научно-практические аспекты регистра врожденной и наследственной патологии человека // Мат. 2-го Всесоюз. съезда мед.генетиков,- М., 1990. С.524-525.

9. Кобринский Б.А. Автоматизированный генетический регистр // Велотищев А.Н., Бочков Н.П. Наследственная патология человека. Т.2. - М., 1992 - С. 240-244.

10. Ю.Комарова Н.В., Чухрова А.Л., Дадали Е.Л., Ситников В.Ф., Евграфов О.В. ДНК-диагностика миодистрофии Дюшенна // Мат. первого (третьего)

11. Российского съезда медицинских генетиков, г.Москва, 14-16 декабря, 1994, С.47.

12. П.Лобзин B.C., Сайкова Л.А., Шиман А.Г. Нервно-мышечные болезни. -СПб.: Гиппократ, 1998. - 224 с.

13. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование // М.: Мир.- 1984.-480 с.

14. Поляков А.В. Автореф. дис. . канд. биол. наук. М.: Ин-т клинической генетики Медико-генетич. научного центра РАМН, -1992,- 35с,

15. Ростовцев В.Н., Петров А.А., Голенкова Е.В. Структура и функции прикладной программной системы ОМЕГА // Мат. Конф. "Современные проблемы медицинской техники". Минск, 1983. - С. 41-43.

16. Чухрова A.JI. Анализ мутаций в гене дистрофина // Автореф. дис. .канд. медиц. наук.- М.: Ин-т клинической генетики Медико-генетич. научного центра РАМН, -1997.- 25с.

17. Животовский JI.A. Популяционная биометрия,- М.: Наука.- 1991.-269 с.

18. Abbs S., Bobrov М. Analysis of quantitative PCR for the diagnosis of deletion and duplication carriers in the dystrophin gene// J.Med.Genet. -1992,- V.29.-P.191-196.

19. Abbs S., Yau S.C., Clark S. et al. A convinient multiplex PCR system for the detection of dystrophine gene deletions: A comparative analysis of cDNA hybridisation shows mistypings by both methods// J. Med. Genet.-1991.-V.28. -P.304-311.

20. Aldridge G., Kunkel L.M., Bruns G. et al. A strategy to reveal high frequency RFLP's along the human X-chromosome// Am. J. Hum. Genet.- 1984. -V.36.-P.546-564.

21. Ahn A.H., Kunkel L.M. The structural and functional diversity of dystrophin // Nature Genet.- 1993.- V.3.- P.283-291.

22. Artem'yeva O.V., Ivaschenko Т.Е., Glazkov P.B. et al. Analysis of deletion breakpoints in the dystrophin gene in russian D/BMD patients: a novel data on ethnic variations in mutation pattern// Bras.J.Gen.- 1996.- V.19.- P.144.

23. Bakker E., Hofker M.H., Goor N. et al. Prenatal diagnosis and carrier detection of Duchenne muscular dystrophy with closely linked RFLPs // Lancet.-V. 1 .-P.655-658.

24. Bakker E., van Ommen G.J.B. Muscular dystrophies. In: Brock D.I.H., Rodeck C.H., Ferguson-Smith M.A. (ed.) Prenatal Diagnosis and Screening.-1992.

25. Bakker E., van Ommen G.J.B. to (DMD and BMD). In: "Neuromuscular disorders: Clinical and molecular genetics (Edited by A.E.H. Emery).-1998.-P.59-85. John Wiley and sons: Chichester.

26. Baumbach L.L., Chamberlain J.S., Ward P.A. et al. Molecular and clinical correlations of deletions leading to Duchenne and Becker muscular dystrophies // Neurology.-1989.-V.39.-P.465-474.

27. Весктап J.S. Genetic studies and molecular structures: the dystrophin associated complex // Hum.Mol.Genet.-1996.-V.5.-P.865-867.

28. Beggs A.H., Koenig M., Boyce F.M., Kunkel L.M. Detection of 98% of DMD/BMD gene deletions by polimerase chain reactionII Hum. Genet.-1990. -V.86. -P.45-48.

29. Beggs A.H. and Kunkel L.M. Improved diagnosis of Duchenne/ Becker muscular dystrophy // J.Clin.Invest.- 1990,- V.85.- P.613-619.

30. Ben Hamida M., Fardeau M., Attia N. Severe childhood muscular dystrophy affecting both sexes and frequent in Tunisia // Muscle Nerve.- 1983.- V.6.- P.469-480.

31. Blonden L.A., Grootsholten P.M., den Dunnen J.T. et al. 242 breakpoins in the 200 kb deletion-prone P20 region of the DMD gene are widely spread // Genomics.-1991.- V.10.-P.631-639.

32. Ba!drich K., Baldrich M., Monaco A.P., Muller C.R. Replication errors may contribute to the generation of large deletions and duplications in the dystrophin gene //Hum.Mut.- 1992.-V.1.-P.280-287.

33. Boyd Y., Buckle V., Holt S. et al. Muscular dystrophy in girls with X: autosome translocations//J. Med. Genet.-1986.-V.23.-P.484-490.

34. Bronzova J., Todorova A., Kalaydjieva L. Detection of carriers of deletions in the dystrophin gene in Bulgarian DMD-BMD families// Hum. Genet. -1994.-V.93,-P. 170-174.

35. Bulman D.E., Gangopadthyay S.B., Bebchuck K.G. et al. Point mutation in the human dystrophin gene: identification through Western blot analysis // Genomics.-1991,- V.10.- P.457-460.

36. Canki N., Dutrillaux В., Tivadar I. Dystrophic musculaire de Duchenne chez une petite fille porteuse d'une translocation t ( X; 3 ) ( p21; ql3) de novo.

37. Carpenter S., Karpati G. Duchenne muscular dystrophy. Plasma membrane loss initiates muscle cell necrosis unless it is repaired// Brain.- 1979.-V.102.-P.147-161.

38. Chamberlain J.S., Gibbs R.A., Ranier J.E. et al. Deletion screening of the Duchenne muscular dystrophy locus via multiplex PCR amplification// Nuc. As. Res. -1988. -V.16. -P. 11141-11155.

39. Chen J.D., Hejtmancik J.F., RomeoG. et al. A genetic linkage map of five marker loci in and around the Duchenne muscular dystrophy locus // Genomics.-1989.-V.4.-P. 105-109.

40. Clemens P.R., FenwickR.G., Chamberlain J.S. Carrier detection and prenatal diagnosis in Duchenne and Becker muscular dystrophy families, using dinucleotide repeat polymorphisms// Am.J.Hum.Genet.-199l.-V.49.-P.951-960.

41. Cooke A., Lauyon W.C., Wilex D.E. et al. Analysis of Scottish Duchenne and Becker muscular dystrophy famylies with dystrophin cDNA probes // J.Med.Genet.- 1990,- V.27.- P.292-297.

42. Covone A.E., Lerone M., Romeo G. Genotype-phenotype correlation and germline mosaicism in DMD/BMD patients with deletions of the dystrophin gene // Hum.Genet.-1991,- V.87.- P.353-360.

43. Cullan M.J., Fulthrope J.J. Stages in fibre breakdown in Duchenne muscular dystrophy: An electron-microscopic study// J. Neurol.Sci.-1975.- V.24.- P.179-200.

44. Danielli G.A., Mioni F., Muller S.R. et. al. Patterns of deletions of the dystrophine gene in different European populations// Hum.Genet.-1993.-V.91.-P.342-346.

45. Davie A.M., Emery A.E.H. Estimation of proportion of new mutants among cases of Duchenne muscular dystrophy // J.Med.Genet.- 1978,- V.15.- P.339-345.

46. Davies K.E., Pearson P.L., Harper P.S. et al. Linkage analisis of two cloned DNA sequences flanking the Duchenne muscular dystrophy locus on the short arm of the human X-chromosome// Nuc.As.Res.-1983.-V.l 1 .-P.2303-2312.

47. Deininger. P.L. LINEs, short interspersed repeated DNA elements in higher eucariots // In mobile DNA ( Berg D.E., Howe M.M. et al.). -1989,- P.619-636.

48. Den Dunnen J.T., Bakker E., Klein Breteler E.G., Pearson P.L., van Ommen G.J.B. Direct detection of more than 50% of the Duchenne muscular dystrophy mutations by field invertion gels// Nature.-1987.-V.329.-P.640-642.

49. Den Dunnen J.T., Grootscholten P.M., Bakker E. et al. Topography of the Duchenne muscular dystrophy (DMD ) gene: FIGE and cDNA analysis of 194 cases reveals 115 deletions and 13 duplications // Am.J.Hum. Genet.- 1989.- V.45.- P.835-847.

50. Dorkins H., Junien C., Mandel G.I. et al. Segregation analysis of a marker localised on Xp 21.3 in Duchenne and Becker muskular dystrophy families// Hum.Gen.-1985.-V.71.-P. 103-107.

51. D'Souza V.N., Man N., Morris G.E. et al. A nowel dystrophin isophorm is required for normal retinal electrophysiology // Hum.Mol.Genet.-1995.- V.4.-837-842.

52. Edwards J.H. The population genetics of Duchenne: natural and artificial selection//J.Med.Genet.- 1986,- V.23.- P.521-530.

53. Emery A.E.H. Duchenne muscular dystrophy. Oxford Monographs On Medical Genetics, no 15. Rev. ed. Oxford University Press, Oxford-1988.

54. Emery A.E.H. Population frequency of inherited neuromuscular desea-ses a world survey// Neuromuscular Disorders.-1991 .-V. 1 .-P.l9-29.

55. Ervasti J.M., Campbell K.P. Membrane organisation of the dystrophin-glycoprotein complex// Cell.-1991.-V.66.-P.1121-1131.

56. Essen A.J., Abbs S., Baidet M. et al. // paternal origin and gern-line mosaicism of deletions and duplications of the dystrophine gene: European study // Hum.Genet.- 1992.-V.88.-P.249-257.

57. Efstratiadis A., Posakony J.W., Maniatis T. et al. Possible role of microrepeats in the gneration of intrachromosomal gene deletions // Cell.-1980.-V.21.- P.425-441.

58. Evgrafov O.V., Artemyeva O.V., Chuhrova A.L. et al. Comparison of dystrophin gene deletion breakpoints patterns in Russian and other european Duchenne / Becker muscular dystrophy patients // Balkan J.Med.Genet.- 1998,- V.I.- N2,- P.54-59.

59. Fajkusova L., Kuhrova V., Hajek J., Fajkus J. Distribution of dystrophin gene deletions mapped by multiplex PCR in the Moravian population // Mol.Cell.Probes.-1997.- V.ll.-N.l.- P.85-87.

60. Ferrier P., Bamatter F., Klein D. Muscular dustrophy (Duchenne) in a girl with Turner syndrome// J.Med.Genet.-1965.-V.2.-P.38-46.

61. Florentin L., Mavrou A., Kekou K., Metaxotou C. Deletion patterns of Duchenne and Becker muscular dystrophies in Greece // J. Med.Genet.-1995.-V.32.-P.48-51.

62. Forrest E.M., Cross G.S., Speer A. et al. Preferential deletion of exons in Duchenne and Becker muscular dystrophies // Nature.- 1987,- V.329.- P.638-640.

63. Gillard E.F., Chamberlain J.S., Murphy E.G. et al. Molecular and phenotypic analysis of patients with deletions within the deletion-rich region of the Duchenne muscular dystrophy (DMD) gene// Am.J.Hum.Genet.-1989.-V.45.-P.507-520.

64. Greenstein R.M., Reardon M.P., Chan T.S. An X-autosome translocation in a girl with Duchenne muscular dystrophy ( DMD ): evidence for DMD gene localization // Pediat.Res.-1977.-V.l 1.- P.427.

65. Haldane G.B.S. The rate of spontaneous mutation of human gene// J.Genet.-1935.-V.31.-P.317-326.

66. Harper P.S. Huntington's desease: 2 nd edition London etc.: W.B. Saunders company Ltd., 1996,- 438 p.

67. Hiraishi Y., Kato S., Ishihara Т., Takano T. Quantitative Southern blot analysis in the dystrophin gene of Japanese patients with Duchenne or Becker muscular dystrophy: a high frequency of duplications // J.Med.Genet.- 1992. -V.29.-P.897-901.

68. Hodgson S.V., Hart K., Abbs S. et al. Correlation of clinical and deletion data in Duchenne and Becker muscular dystrophy.// J.Med.Genet.- 1989.- V.26.-.P.682-683.

69. Hofker M.H., Wapenaar M.C., Goor N. et al. Isolation of probes detecting RFLP's from X-chromosome specific libraries: potential use for diagnoses of DMD// Hum.Genet.-1985.-V.70.-P. 148-156.

70. Hoffinan E.P., Hudecki M.S., Rosenberg P.A. et al. Cell and fiber-type distribution of dystrophin // Neuron.-1988.-V.1.-P.411-420.

71. Hu X., Ray P.M., Murphy E.G. et al. Duplicational mutation at the Duchenne muscular dystrophy locus: its frequency, distribution, origin, and fenotype-genotype correlation // Am.J.Hum.Genet.-1990.-V.46.-P.682-695.

72. Hugnot J.P., Recan D., Jeanpierre M. et al. A highly informative CACA repeat polymorphism ustream of the human dystrophin gene // Nucl.Acids.Res.- 1991,-V.19.- N.11.-P.3159.

73. Hugnot J.P., Recan D., Jeanpierre M., KaplanJ.C., Tolun A. A highly informative CACA repeat polymorphism upstream of the human dystrophin gene (DMD)//Nucl. Acids.Res. -1991. -V.19. -N.ll.

74. Imoto N., Arinami Т., Hamano K. et al. Topographic pattern of the rearrangement of the dystrophin gene in Japanese Duchenne muscular dystrophy // Hum.Genet.- 1993,- V.92.- P.533-536.

75. Ioannou P., Christopoulos G., Panayides K., Kleathous M., Middleton L. Detection of Duchenne and Becker muscular dystrophy carriers by quantitative multiplex polymerase chain reaction analysis// Neurology. 1992. -V.42. -P. 1783-1790.

76. Koenig M., Hoffinan E.F., Bertelson C.J. et al. Complete cloning of the Duchenne muscular dystrophy (DMD) cDNA and preliminary organisation of the DMD gene in normal and affected individuals // Cell .-1987.-V.50,- P.509-517.

77. Koenig M., Monaco A.P., Kunkel L.M. The complete sequence of dystrophin predicts a rod-shaped cytosceletal protein // Cell.-l 988.-V.53.-P.219-228.

78. Koenig M., Beggs A.H., Moyer M. et al. The molecular basis for Duchenne versus Becker muscular dystrophy: correlation of severity with type of deletion // Am.J.Hum.Genet.-1989.-V.45.-P.498-506.

79. Krawezak M., Cooper D.N. A "deletion hot-spot" sequence, similar to polimerase-arrest sites, observed in independed deletions from different human genes //Hum.Genet.- V.86.-P.425-441.

80. Kunkel L.M., Monaco A.P., Middlesworth W.et al. Specific cloning of DNA fragments absent from the DNA of a male patient with an X-chromosome deletion // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1985.-V.82.-P.4778-4782.

81. Kunkel L.M. et al. Analysis of deletions in DNA from patients with Becker and Duchenne muscular dystrophy // Nature.- 1986,- V.322.- P.73-77.

82. Lederfein D., Yaffe D., Nudel U. A housekeeping type promoter located in the 3-prime region of the Duchenne muscular dystrophy gene, controls the expresion of Dp71, a major product of the gene//Hum. Mol. Genet.- 1993,- V.2.- P. 1883-1888.

83. Lenk U., Hanke R., Thiele H., Speer A. Point mutations at the carboxy terminus of the human dystrophin gene; implications for association with mental retardation in DMD patients // Hum.Mol.Genet.- 1993.-V.4.- P. 1877-1881.

84. Malhotra S.B., Hart K.A., Klamut H.J. et al. Frame-shift deletions in patients with Duchenne and Becker muscular dystrophy // Science.-V.242.-P.755-759.

85. Mathew C.C.The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in Molecular Biology. / Ed. Walker J.M., N.Y., L.: Human Press.; -1984.-V.2. P. 31-34.

86. Matthews P.M., Benjamin D., van Bakel J. et al. Muscle X-inactivation patterns and dystrophin expression in Duchenne muscular dystrophy carriers // NMD. -1994,- V.162.- P.l-12.

87. McKusic V. Mendelian inheritans in man. A catalog of human genes and genetic disorders // 12th edn.The Johns Hopkins university Press, Baltimore, London.-1990.-V.2.- P.2471-2486.

88. McComas A.J., Sica R.E.P., Upton A.R.M. Multiple analysis of motor units in muscular dystrophy // Arch.Nerol.- V.30.-P.249-251.

89. Miciak A., Keen A., Jadayel D., Bundey S. Multiple mutation in an extended Duchenne muscular dystrophy family // J.Med.Genet.- 1992.-V.25.-P. 123-126.

90. Mokri В., Engel A.G. Duchenne dystrophy: electron microscopic findings pointing to a basic or early abnormality in the plasma membrane of the muscule fibre// Neurology.-1975,- V.25.- P.lll 1-1120.

91. Monaco A.P., Bertelson C.J., Middeleswort W. et al. Detection ofdeletions spanning the Duchenne muscular dystrophy locus using a tightly linked DNA segment//Nature.- 1986.- V.316.- P.97-101.

92. Monaco A.P., Neve R.L., Coletti-Feener C. et al. Isolation of candidate cDNA for portions of the Duchenne muscular dystrophy gene // Nature.-1986.-V.323.-P.646-650.

93. Monaco A.P., Bertelson C.J., Liechti-Gallati et al. An explanation for the phenotipic differences between patients bearing partial deletions of the DMD locus // Genomics. -1988,- V.2.- P.90-95.

94. Moser H. Duchenne muscular dystrophy: pathogenetic aspects and genetic prevention// Hum.Gen.- 1984,- V.66.- P. 17-44.

95. Pagel C.N., Morgan J.E. Mioblast transfer and gene therapy in muscular dystrophies// Microsc. Res. and Techn.-1995.- V.30.- P.469-479.

96. Partridge P.M. Patophisiology of Duchenne muscular dystrophy // Cur.Biol.- 1993. V.3.- P.322-325.

97. Passos-Bueno M.R., Bakker E., Kneppers A.L.J, et al. Different mosaicism frequencies for proximal and distal Duchenne muscular dystrophy (DMD) mutations indicate difference in etiology and recurrence risk // Am.J.Hum.Genet.- 1992,- V.51.-P.l 150-1155.

98. Paulson K.E., Matera A.G., Deka N., Schmid C.W. A transposon-like element in human DNA // Nature.- 1985.- V.316.- P.359-361.

99. Pearson C.M. Histopatological features of muscle in the preclinical stages of muscular dystrophy // Brain.- 1962.- V.85.- P. 109-120.

100. Percy M.E., Andrews D.F., Thompson M.W. Duchenne muscular dystrophy carrier detection using logistic determination: serum creatine kinase and hemopexin in combination // Am.J.Med.Genet.-1981.- V.8.-P.397-409.

101. Pizzuti A., Pieretti M., Fenwick R.G. et al. A transposon-like element in the deletion prone region of the dystrophin gene // Genomics.- 1992.- V.13.- P.594-600.

102. Ray P.N., Belfall В., Duff C., et al. Cloning of the breakpoint of an X:21 translocation associated with Duchenne muscular dystrophy // Nature.-1985.-V.318,-P.672-675.

103. Reid P.A.M., Mahler V., Vogt P. et al. Direct carrier detection by in situ hybridization with cosmid clones of the Duchenne (Becker) muscular dystrophy locus // Hum.Genet. V.85.- P.581-586.

104. Roberts R.G., Coffey A.J., Bobrow M.,Bentley D.R. Determination of the exon structure of the distal portion of the dystrophin gene by vectorette PCR// Genomics.- 1992,- V.13.- P.942-950.

105. Roberts R.G., Bobrow M., Bentley D.R. Point mutations in the dystrophin gene // Proc.Natl.Acad. Sci.USA.- 1992,- V.89.- P.2331-2335.

106. Roberts R.G., Gardner R.J., Bobrow M. Seaching for 1 in 2400000 : a review of dystrophin gene point mutations // Hum.Mutat.- 1994.-V.4.- P. 1-11.

107. Roberts R.G. Dystrophin, its gene, and the dystrophinopaties. In: "Advances in genetics: incorporating molecular genetic medicine"(J.C.Hall, J.C.Dunlap, T.Friedman, F.Giannelli, eds.).-1995.-P.177-231. Academic Press: San Diego, CA.

108. Roest P.A.M., Roberts R.G., Sugino S. et al. Protein trancation test (PTT) for rapid detection of translation-terminating mutations // Hum.Mol.Genet.- 1993.-V.2.- P.1719-1721.

109. Rowland L.P. Biochemistry of muscle membrans in Duchenne muscular dustrophy// Muscle and Nerve.-1980.-V.3.-P.3-20.

110. Rybakova I.N., Amann K.J., Ervasti J.M. A new model for the interaction of dystrophin with f actin // J.Cell Biol.- 1996,- V.135.- P.661-672.

111. Saiki R.K. ,ScharfS., Faloona F. etal. // Science.-1985.-V.230.-P.487.

112. Singh V., Sinha S., Mishra S. et al. Proportion and pattern of dystrophin gene deletions in noth Indian Duchenne and Becker muscular dystrophy patients // Hum.Genet.-1997.-V.99.-N.2.-P.206-208.

113. Todorova A. et al. Mutation analysis in Duchenne and Becker muscular dystrophy patients from Bulgaria shows a peculiar distribution of breakpoints by intron // Am.J.Med.Genet.-1996.-V.65.-N.l.-P.40-43.

114. Shomrat R., Gluck E., Legum C., Shilov Y. Relatively low proportion of dystrophin gene deletions in Israeli Duchenne and Becker muscular dystrophy patients //Am.J.Med.Genet. 1994. V.49. P.364-373.

115. Upadhyaya M., Smith R.A., Thomas N.S.T., Norman A.M., Harper P.S. Intragenic deletions in 164 boyc with Duchenne muscular dystrophy (DMD) studied with dystrophin cDNA // Clinical Genetics.- 1990.- V.37.- P.456-462.

116. VerelIen-DemouIin C., Freund M., De Meyer R. et. al. Expression of X-linked muscular dystrophy in a famale due to translocation involving Xp21 and non-random inactivation of the normal X-chromosome // Hum.Genet.- 1984. -V.67.- P.l 15119.122

117. Walton R.G. The inheritance of muscular dystrophy// Acta Genetica, Basel.- 1959,- V.7.- P.318-320.

118. Wieacker P., Davies K.E., Pearson P.L., Ropers H.H. Carrier detection in Duchenne muscular dystrophy by use of cloned DNA sequences // Lancet.-V.i.-P.1325-1326.

119. Wite M.B., Karbalho M., Derse D. et al. Detecting of single base substitutions as heteroduplex polymorphisms // Genomics.- V.12.- P.301-306.

120. Worton R.G. , Duff C., Silvester J.E. et al. Duchenne muscular dystrophy involving translocation of DMD gene next to ribosomal RNA genes // Science.-1984,-V.224.-P. 1447-1448.

121. Yoshida K., Ikeda S.I., Nakamura A. et al. Molecular analysis of the Duchenne muscular dystrophy gene in a patient with Becker muscular dystrophy representing with dilated cardiomyopaty // Muscle Nerve.-1993.-V.19.-P.l 161-1166.

122. Zatz M., Passos-Bueno M.R., Rapoport D. Estimate of the proportion of Duchenne muscular dystrophy with autosomal recessive inheritance// Am.J.Med.Genet.- 1989.-V.32,- P.407-410.

123. Zimovski J.G., Bisko M., Fidzianska E. et al. Deletions within the gene of dystrophin in Duchenne and Becker muscular dystrophy // Neurol.Neurochir.Pol.-1993,- V.27.- N.4.- P.469-478.