Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярно-биологические методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Джапаралиев, Нурлан Тынчтыкбекович

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Общая характеристика лейкоза крупного рогатого скота

2.2. Таксономия семейства ретровирусов

2.3. Вирус лейкоза крупного рогатого скота

2.3.1. Морфология ВЛ КРС

2.3.2. Структура генома ВЛ КРС

2.3.3. Репликация вируса

2.3.4. Устойчивость вируса

2.3.5. Культивирование ВЛ КРС

2.4. Эпизоотологические особенности лейкоза КРС

2.4.1. Естественные пути передачи ВЛ КРС

2.4.2. Передача ВЛ КРС в ходе эксперимента

2.5. Меры борьбы и профилактики

2.6. Диагностика лейкоза КРС

2.6.1. Клинические, патоморфологические и гематологические 26 методы исследования лейкоза КРС

2.6.2. Серологические реакции

2.6.3. Прямые методы выявления провируса ВЛ КРС

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-биологические методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота"

Актуальность темы. Вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС) - представитель семейства Retroviridae, рода Deltaretrovirus, вызывающий хроническое заболевание у КРС. Лейкоз КРС распространен во многих странах мира, в том числе и в России, и наносит значительный экономический ущерб, который выражается в снижении молочной продуктивности и ухудшении качества молока, нарушении воспроизводительной способности больных коров, снижении веса и выбраковке инфицированных животных [85].

ВЛ КРС встраивается в геном клетки хозяина в виде провирусной ДНК и способен выделяться во внешнюю среду с кровью и другими биологическими жидкостями (молоко, молозиво, сперма, носовые истечения, слюна и т.п.) в которых могут содержаться инфицированные лимфоциты, которые в свою очередь могут играть определенную роль как фактор инфекции лейкоза [9].

Основополагающую роль в борьбе с лейкозом КРС играет своевременная диагностика. В настоящее время для диагностики лейкоза КРС широко используют серологические методы - реакцию иммунодиффузии (РИД) и иммуноферментный анализ (ИФА). РИД проста в исполнении, но поскольку не у всех животных уровень антител в крови достигает пороговых значений, она не может выявить всех инфицированных животных. Чувствительность ИФА выше, чем РИД, однако, ИФА также не является методом прямого обнаружения возбудителя. Серологические методы эффективны для оценки распространения ВЛ КРС среди поголовья при массовых исследованиях, однако не всегда способны определить заражение в случае тестирования отдельных животных. При проведении повторных диагностических исследований выявляются новые инфицированные животные, которые не были установлены ранее [24].

Анализируя состояние диагностики инфекционных заболеваний, нельзя не отметить внедрение в ветеринарную практику современных молекулярно-биологических методов, в частности метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) - высоко чувствительного и специфичного метода прямого выявления возбудителя, а также его усовершенствованных вариантов - иммуно-ПЦР и ПЦР-ИФА. Полимеразная цепная реакция дает возможность выявить фрагмент генома ВЛ КРС в образцах крови через 1-2 недели после заражения [24]. С помощью ПЦР удается обнаружить провирусную ДНК лейкоза КРС в крови большинства экспериментально инфицированных животных, которые считались отрицательными по данным серологических реакций [24, 85, 124].

Однако, в литературе отсутствуют данные по использованию ПЦР для выявления ВЛ КРС в других биологических жидкостях, в которых могут содержаться инфицированные лимфоциты (молоко, сперма, носовые истечения, слюна и т.п.). Кроме того, в большинстве существующих методик используют, как правило, двойную ПЦР (ПЦР с двумя парами праймеров, т.н. "nested" ПЦР), что приводит к значительному удорожанию диагностической процедуры. Разработка простого и эффективного варианта метода ПЦР с одной парой праймеров, а также усовершенствование существующих специфических методов выявления возбудителя лейкоза КРС в крови и других биологических жидкостях являются весьма актуальной проблемой и стали определяющими при выборе темы диссертационной работы.

Цели и задачи исследований. Основной целью наших исследований явилась разработка и усовершенствование молекулярно-биологических методов диагностики лейкоза крупного рогатого скота.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

- оптимизировать условия подготовки проб для проведения ПЦР при индикации ВЛ КРС в различном биоматериале (цельная кровь, сыворотка крови, молоко, сперма, носовые истечения, суспензия органов и др.);

- на основании сравнительного анализа известных нуклеотидных последовательностей подобрать системы праймеров к различным областям генома ВЛ КРС для проведения ПЦР;

- разработать простой и эффективный метод ПЦР с одной парой праймеров для выявления провирусной ДНК в образцах крови КРС;

- разработать метод ПЦР для выявления провируса ВЛ КРС в образцах молока, сыворотки крови, носовых истечений, спермы и органов животных;

- изучить возможность применения метода ПЦР для выявления провируса лейкоза в крови овец, контактировавших с инфицированным КРС в естественных условиях;

- изучить возможность применения гибридизационно-ферментного варианта метода ПЦР (ПЦР-ИФА) для выявления провируса лейкоза в крови КРС.

Научная новизна. На основании проведенных исследований:

- оптимизированы условия подготовки проб для индикации ВЛ КРС в различном биологическом материале;

- на основании сравнительного анализа известных нуклеотидных последовательностей подобраны системы праймеров и разработана простая и эффективная методика ПЦР с одной парой праймеров для обнаружения ВЛ КРС в образцах крови и оптимизированы условия проведения реакции;

- впервые показано, что метод ПЦР может быть применен для выявления провирусной ДНК в различном биоматериале: молоке, сыворотке крови, носовых истечениях, сперме и органах животных;

- впервые показана возможность применения ПЦР для выявления вируса лейкоза у овец, контактировавших с инфицированным КРС в естественных условиях;

- изучена возможность применения гибридизационно-ферментного варианта метода ПЦР (ПЦР-ИФА) для выявления провируса лейкоза в крови КРС.

Практическая значимость работы состоит в том, что:

- разработаны условия подготовки проб для проведения ПЦР при индикации ВЛ КРС в различном биологическом материале: крови, молоке, сперме, носовых истечениях и органах животных;

- подобраны праймеры для проведения ПЦР, позволяющие амплифицировать фрагменты генома вируса лейкоза;

- разработана методика выявления провируса лейкоза КРС в различных лимфоцит-содержащих биоматериалах с помощью ПЦР, которая одобрена ученым советом и утверждена директором института;

- разработана методика выявления провируса лейкоза КРС в крови КРС с помощью ПЦР с одной парой праймеров, которая одобрена ученым советом и утверждена директором института;

- показано, что с помощью разработанных методик ПЦР вирус лейкоза КРС обнаруживается у овец, контактировавших с инфицированным КРС в естественных условиях;

- показана возможность применения гибридизационно-ферментного варианта метода ПЦР (ПЦР-ИФА) для диагностики лейкоза КРС.

Положения, выносимые на защиту:

- оптимизация условий подготовки проб для проведения ПЦР при индикации провирусной ДНК ВЛ КРС в различных биологических материалах;

- системы праймеров и методика выявления провируса лейкоза КРС в крови КРС с помощью ПЦР с одной парой праймеров;

- методика выявления провируса лейкоза КРС в различных лимфоцит-содержащих биоматериалах с помощью ПЦР;

- результаты исследований серологическими методами и ПЦР образцов крови овец, контактировавших с инфицированным КРС в естественных условиях;

- результаты применения гибридизационно-ферментного варианта метода ПЦР (ПЦР-ИФА) для выявления провируса лейкоза в крови КРС.

Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации доложены на конференции молодых ученых "Достижения молодых ученых -в ветеринарную практику" (Владимир, 2000 г.), на Всероссийской конференции "Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с лейкозами с/х животных и птиц" (Екатеринбург, 2000 г.), на Международной научно-практической конференции "Роль ветеринарной науки в развитии 9 животноводства" (Алматы, Казахстан, 2000 г.), а также на заседаниях ученого совета ВНИИЗЖ (1999-2001 г.г.).

Публикации по работе. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 110 страницах машинописного текста, иллюстрирована 6 рисунками и 16 таблицами и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований и их обсуждение, заключение, выводы, практические предложения, список использованной литературы, включающий 210 источников, из которых 178 иностранных, и приложения.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Джапаралиев, Нурлан Тынчтыкбекович

5. ВЫВОДЫ

1. На основании сравнительного компьютерного анализа нуклеотидных последовательностей подобраны праймеры для проведения ПЦР и установлено, что системы праймеров 1F/1R, 2F/2-3R, 3F/2-3R, 4-5F/4R, 4-5F/5R, 4-5F/2bM и 2а/2ЬМ позволяют амплифицировать фрагмент провирусной ДНК ВЛ КРС из области env и З'-концевой части генома.

2. Разработана методика выявления провирусной ДНК в крови животных с помощью ПЦР с использованием одной пары праймеров 2F/2-3R, 4-5F/4R или 4-5F/2bM.

3. Оптимизированы условия подготовки проб и проведения ПЦР, разработана методика для выявления провируса ВЛ КРС в различных лимфоцит-содержащих биоматериалах (цельная кровь, молоко, носовые истечения, сперма).

4. С помощью разработанной методики ПЦР впервые установлено наличие провирусной ДНК ВЛ КРС в различных лимфоцит-содержащих биоматериалах (цельная кровь, молоко, носовые истечения, сперма).

5. Показано, что с помощью разработанных методик ПЦР удается выявлять провирусную ДНК ВЛ КРС в сыворотке крови и различных органах животных, инфицированных лейкозом.

6. При исследовании серологическими методами и с использованием разработанных методик ПЦР показано, что овцы, которые содержатся с инфицированными лейкозом коровами в естественных условиях, могут заражаться вирусом лейкоза КРС.

7. Продемонстрирована возможность применения гибридизационно-ферментного варианта метода ПЦР (ПЦР-ИФА), в котором используется ПЦР с одной парой праймерами 2а/2Ь и гибридизация с зондом Bio2-2abz, для выявления провируса лейкоза КРС.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Лейкоз КРС широко распространен во многих странах мира и наносит значительный экономический ущерб животноводству, который слагается из снижения продуктивности животных, вынужденного убоя и снижения качества животноводческой продукции. С лейкозом КРС проводится борьба путем выявления больных животных, их изоляции и вынужденного убоя. Однако , когда инфицированность в стаде достигает 30% и более, / вынужденный убой приводит к упадку любое хозяйство. Поэтому в таких хозяйствах проводятся мероприятия по изоляции больных животных и планомерного отправления их на убой. В этом случае огромное значение имеет диагностика лейкоза и индикация вируса. В настоящее время с этой целью, наряду с гематологическими исследованиями, широко применяются серологические методы РИД и ИФА. Однако этими методами выявляются не все больные животные.

В последние годы в диагностике инфекционных болезней широко применяются методы с использованием ПЦР, причем для диагностики лейкоза КРС используют, как правило, метод ПЦР с двумя парами праймеров, что приводит к значительному удорожанию диагностической процедуры, а материалом для исследования служит кровь животных. В литературе отсутствуют данные по использованию ПЦР для диагностики ВЛ КРС в других биологических жидкостях, в которых могут содержаться инфицированные лимфоциты (молоко, сперма, носовые истечения, слюна и т.п.). Разработка простого и эффективного варианта метода ПЦР с одной парой праймеров, а также усовершенствование существующих специфических методов выявления возбудителя лейкоза КРС в крови и других биологических жидкостях были предприняты в настоящей работе.

В ходе проведенных экспериментов были оптимизированы условия подготовки биологических проб для ПЦР. Для выделения ДНК из образцов носовых истечений и молока нами был использован метод ускоренной пробоподготовки. Методом универсальной пробоподготовки мы проводили выделение ДНК из образцов цельной крови и сыворотки.

В результате компьютерного анализа были подобраны праймеры из gp51-env (4-5F/2bM; 4-5F/4R; 4-5F/5R) и З'-концевой части генома (1F/1R; 2F/2-3R; 3F/2-3R) ВЛ КРС, которые позволяли бы амплифицировать фрагменты провирусной ДНК ВЛ КРС при постановке ПЦР.

На основании проведенных экспериментов была разработана методика, позволяющая выявлять провирус ВЛ КРС в различных лимфоцит-содержащих биоматериалах (цельная кровь, сыворотка крови, молоко, носовые истечения, сперма, суспензии органов) с помощью ПЦР с одной парой праймеров. Данная методика одобрена ученым советом и используется в лаборатории для диагностики лейкоза КРС. С помощью разработанной методики выявлен фрагмент амплифицированной ДНК в

78 образцах носовых истечений и молока. Данный факт может служить подтверждением того, что носовые истечения и молоко могут являться фактором распространения и передачи лейкоза КРС интактным животным. С помощью ПЦР удалось выявить провирусную ДНК в суспензиях из селезенки и лимфатических узлов от животного с характерными для лейкоза КРС паталогоанатомическими изменениями данных органов. Также отмечено, что провирус ВЛ КРС чаще обнаруживается в пробах, полученных от животных, у которых значительно повышено содержание лейкоцитов в крови. Однако было установлено, что с помощью метода ПЦР не всегда удается выявить провирусную ДНК ВЛ КРС в образцах сыворотки крови животных, инфицированных лейкозом КРС.

В литературных источниках имеются данные об обнаружении вирусспецифических антител в крови овец экспериментально зараженных ВЛ КРС. С помощью метода ПЦР нам удалось выявить провирус ВЛ КРС в крови овец, содержащихся совместно с КРС в естественных условиях.

С целью разработки альтернативного способа индикации провируса лейкоза КРС, обеспечивающего высокую специфичность и не требующего двухстадийного проведения амплификации в отличие от "nested''-ПЦР мы применили гибридизационно-ферментный вариант метода ПЦР (ПЦР-ИФА) для обнаружения провируса лейкоза КРС.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Джапаралиев, Нурлан Тынчтыкбекович, Владимир

1. Авилов В.М., Нахмасон В.М. Проблема оздоровления крупного рогатого скота от лейкоза // Ветеринария.-1995.- №11.-С.З-6.

2. Бурба Л.Г. Экспериментальное воспроизведение лейкозов у жвачных животных // Лейкозы и опухоли с.-х. ж-ных: Труды ВИЭВ,-1981.-Т. 54.- С. 11-17.

3. Бурба Л.Г. Экспериментальное изучение этиологии лейкозов крупного рогатого скота // Труды ВИЭВ,- 1976.- Т. 44, вып.2,- С.60-69.

4. Бурба Л.Г., Абакин С.С. Онкорнавирусная инфекция овец в зоне Северного Кавказа//Труды ВИЭВ,- 1991.-Т.70.- С.112-114.

5. Васин А.В. Термоустойчивость лейкоза крупного рогатого скота в молоке // Распознавние и меры борьбы с лейкозом человека и ж-ных: Тез. докл. конф. 22-24 сент. 1982г.- Белая Церковь, 1982,- С. 196-197.

6. Гриненко Н.Ф., Тарасишин Л.А., Валихов А.Ф. и др. Сравнение нескольких методов выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота // Вопр. вирусол,- 1980,- №3,- С. 281-284.

7. Гулюкин М.И., Замараева Н.В. Медико-биологические аспекты вируса лейкоза крупного рогатого скота // Акт. вопр. диагностики, профилактики и борьбы с лейкозами с.-х. ж-ных: Мат. Всерос. конф.- Екатеринбург, 2000,-С. 12-25.

8. Гулюкин М.И., Замараева Н.В., Седов В.А. и др. Основные тенденции в организации и проведении противолейкозных мероприятий /

9. Ретровирусные и прионные инфекции животных // Труды ВИЭВ.- 1999.-Т.72,- С. 33-37.

10. Залевский Д.И. Применение сыворотки крови молодняка крупного рогатого скота для культивирования культур клеток in vitro и получения антигена бычьего лейкозного вируса // Новое в инфекционной патологии с.-х. ж-ных: Труды ВИЭВ,- 1983.- Т. 58,- С. 54-58.

11. Инструкция о мероприятиях по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота. Утв. начальником Главного управления ветеринарии Госагропрома СССР 14 августа 1989 г.

12. Крикун В.А. Слизистые носа наиболее вероятный путь заражения животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота // Лейкозы крупного рогатого скота,- 1985.- С. 5-6.

13. Лалов Х.Х. Экспериментальная передача лейкоза крупного рогатого скота // Проблемы экспериментальной онкологии и лейкозов человека и животных / Под ред. Л.М.Шабада, В.П.Шишкова.- М., 1979,- С. 288-292.

14. Ломакин А.И., Прохватилова Л.Б., Рыбаков С.С. и др. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота с помощью полимеразной цепной реакции / Ретровирусные и прионные инфекции животных // Труды ВИЭВ,- 1999,- Т.72,- С. 192 -201.

15. Мурватуллоев С.А. Носовые истечения больных лейкозом коров как фактор передачи вируса лейкоза крупного рогатого скота / Ретровирусные и прионные инфекции животных // Труды ВИЭВ.- 1999.-Т.72,- С. 128- 129.

16. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Молекулярное клонирование // М., 1984,- С. 402-407.

17. Нымм Э.М., Симоварт Ю.А., Парфанович М.И. и др. Об опытах по экспериментальному воспроизведению ретровирусной инфекции у овец // Теорет. и практ. вопр. вет.: Матер. Республ. науч.-техн. конф. по воспроизводству КРС.- Тарту, 1979.- С. 50-52.

18. Паракин В.К., Силкина Л.Ф., Котлярова Н.Н. Экспериментальный лейкоз овец // Лейкозы и опухоли ж-ных: Труды ВИЭВ=- 1981,- Т. 54.- С. 19-25.

19. Прохватилова Л.Б. Разработка методов диагностики лейкоза крупного рогатого скота с использованием синтетических пептидов и олигонуклеотидов: Дис.канд. биол. наук.- Владимир, 1998,- 150 с.

20. Прохватилова Л.В., Колосов С.Н., Ломакин А.И. и др. Разработка метода выявления вируса лейкоза КРС с помощью полимеразной цепной реакции // Акт. пробл. биотехнол. в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии: Мат. науч. конф.- М.,1996.- С. 66.

21. Прохватилова Л.Б., Колосов С.Н., Ломакин А.И. и др. Подготовка проб для выявления вируса лейкоза КРС методом ПЦР // Акт. пробл. биотехнол. в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии: Мат. науч. конф,- М., 1996.- С. 67.

22. Прохватилова Л.Б., Манин Т.Б., Колосов С.Н. и др. Применение метода "гнездовой" ПЦР для диагностики лейкоза КРС // Проб, инфек. патол. с.-х. ж-ных: Тез. докл. конф., поевящ. 100-летию открытия вируса ящура Владимир.- 1997.-С.83-84.

23. Салимов Х.С. Патоморфологические изменения при экспериментальном лейкозе овец, зараженных пассированным вирусом лейкоза // Тр. УзНИВИ,- Ташкент, 1985,- Т. 38. С. 58-63.

24. Симонян Г.А. Степень заболеваемости лейкозом и инфицированности ВЛ КРС поголовья скота в неблагополучных хозяйствах // Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с лейкозами с.-х. ж-ных: Матер. Всерос. конф Екатеринбург, 2000. - С.36-44.

25. Шишков В.П., Бурба Л.Г. Валихов А.Ф. и др. Методы выявления вируса крупного рогатого скота // Лейкозы и злокачественные опухоли животных. М., 1988,- С. 53-58.

26. Шишков В.П., Бурба Л.Г. Валихов А.Ф. Опыты по иммунизации крупного рогатого скота против экспериментальной БЛВ-инфекции // Труды ВИЭВ. 1986,- Т.59.- С. 56-58.

27. Шишков В.П., Бурба Л.Г. Валихов А.Ф. Этиология лейкозов. Вирус лейкоза крупного рогатого скота как этиологический агент лейкоза //Лейкозы и злокачественные опухоли ж-ных:- М., 1988. С. 37-53.

28. Шишков В.П., Бурба Л.Г. Иванова Л.А. и др. Иммуноферменттный метод определения антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота // Бюл. ВИЭВ- 1985.- Т.58,- С. 23-25.

29. Шишков В.П., Валихов А.Ф. Иммунология лейкозов // Лейкозы и злокачественные опухоли животных.- М., 1988.- С. 78-95.

30. Шишков В.П., Валихов А.Ф. Серологические методы выявления животных, инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота // Лейкозы и злокачественные опухоли животных. М., 1988.- С. 173-194.

31. Шишков В.П., Михалева Е.А., Завальный М.А. Использование микроносителей для получения антигена вируса лейкоза крупного рогатого скота // Вестн. с.-х. науки,- 1986.- № 1.- С. 118-121.

32. Шишков В.П., Салимов Х.С., Иткин Б.З. и др. Экспериментальное воспроизведение лейкоза крупного рогатого скота // Вестн. с.-х. науки.-1985,-№ 12,-С. 97-102.

33. Agresti A., Ponti W., Rocchi М. е.a. Use of polymerase chain reaction to diagnose bovine leukemia virus infection in calves at birth // Am. J. Vet. Res.-1993.- V.54, N 3,- P.373-378.

34. Align // Scientific and Educational Software. 1989. Version 1.01.

35. Alexandersen S., Carpenter S., Christensen J. e.a. Identification of alternatively spliced mRNAs encoding potential new regulatory proteins in cattle infected with bovine leukemia virus // J. Virol.- 1993,- V.67 P.39-52.

36. Altaner C., Merza M., Altanerova V., Morein B. Envelope glycoprotein gp51 of bovine leukaemia virus is differently glycosylated in cells of various species and organ origin// Immunol. Immunopatol.- 1993.- V.36.- P. 163-177.

37. Altaner C., Zajac V., Ban J. A simple and inexpensive method for detection of BLV infected cattle based on a modified ELISA principle // Zbl. Vet. Med. В.- 1982,- Bd. 29, №8.- S. 583-590.

38. Altanerova V., Ban J., Altaner C. Induction of immune deficiency syndrome in rabbits by bovine leukemia virus // AIDS.- 1989,- V.3.- P.755-758.

39. Altanerova V., Ban J., Kettmann R., Altaner C. Induction of leukemia in chicken by bovine leukemia virus due to insertional mutagenesis // Arch. Geschwulstfforsch.- 1990,-V.60.- P.98-96.

40. Ballagi-Pordany A., Klindeborn В., Flensburg J., Belak S. Equine herpesvirus type 1: detection of viral DNA sequences in aborted fetuses with the polymerase chain reaction // Vet. Microbiol.- 1990.- V.22.- P. 373-381.

41. Ballagi-Pordany A., Klintevall K., Merza M. e.a. Direct detection of bovine leukemia virus infection: practical applicability of a double polymerase chain reaction// J. Vet. Med. В.- 1992,- V.39.- P.69-77.

42. Ban J., Zajac V., Altaner C., Cerny L. Early diagnosis of virus induced bovine leukosis in milk by a simple modified ELISA test // Zbl.Vet.Med.B.-1982,- V.29, №8,- P. 591-595.

43. Battles J.K., Hu M.Y., Rasmussen L. e.a. Immunological charaterization of the gag products of bovine immunodeficiency virus // J. Virol.- 1992.- V.66.-P.6868-6877.

44. Belak S., Ballagi-Pordany A. Application of the polymerase chain reaction (PCR) in veterinary diagnostic virology // Vet. Res. Comm.- 1993,- V.17.- P. 55-72.

45. Belak S., Ballagi-Pordany A., Flensburg J., Virtanen A. Detection of pseudorabies virus DNA sequences by the polymerase chain reaction // Arch. Virol.- 1989,- V.108.- 279-286.

46. Bossmann H., Siakkou H., Ulrich R. e.a. Радиоиммунологическое определение трансмембранного белка gp 30 лейкемии крупного рогатого скота и сывороточных антител к этому белку // Acta Virol.- 1989,- Т. 33, N. 2.-С. 113-120.

47. Bouillant A.M.P., Archambault D. Le virus de rimmunodeficience bovine: breve revue // Ann. Rech. Vet.- 1990,- N 21.- P. 239-250.

48. Brandon R.B., Naif N. Daniel R.C.W., Lavin M.F. Early detection of bovine leukosis virus DNA in infected sheep using the polymerase chain reaction // Res. Vet. Sci.-1991.- V. 50.- P. 89-94.

49. Brandon R.B., Gatei M.N., Naif H.M. e.a. Observation on blood leucocytes and lymphocyte subsets in sheep infected with bovine leukaemia virus: a progressive study // Vet. Immunol. Immunopathol.- 1989.- V.23.- P. 15-27.

50. Brenner J., Van Haam M., Savir D.,Trainin Z. The implication of BLV infection in the productivity, reproductive capacity and survival rate for dairy cow//Vet. Immunol. Immunopathol.- 1989,- V.22.- P.299-305.

51. Bruck C., Portetelle D., Burny A., Zavada J. Topographical analysis of BLV gp 51 epitopes involved in viral functions // Virology.- 1982.- V. 122,- P. 353362.

52. Bruck C., Rensonnet N., Portetelle D. e.a. Biologically active epitopes of bovine leukemia virus glycoprotein gp51: Their dependence on protein glycosylation and genetic variability//Virology.- 1984,- V.136.- P. 20-31.

53. Buck C., McKeirnan A., Evermann J. A rapid method for the large scale preparation of bovine leukemia virus antigen // Vet. Microbiol.- 1988,- V.17, №2,- P. 107-116.

54. Burny A., Bruck C., Chantrenne H. e.a. Bovine leukemia virus: Molecular biology and epidemiology, New-York: Raven press, 1980.

55. Burny A., Cleuter G., Kettman R. e.a. Bovine leukaemia: Facts and hypoteses derived from the stady of an infectious cancer // Vet. Microbiol.-1988,- V.17.-P. 197-218.

56. Burny A., Cleuter G., Kettman R. e.a. Bovine leukaemia: Facts and hypoteses derived from the study of an infectious cancer // Adv. Vet. Sci. Сотр. Med.-1988.- V.32.- P.149-170.

57. Burridge M.J., Thurmond M.C. An overview of modes of transmission of bovine leukemia virus // Proc. 85th Ann. Meet. US. Anim. Hlth. Ass.-1981.- P. 165-169.

58. Buxton B.A., Schultz R.D., Collins W.E. Role of insects in the transmission of bovine leukosis virus: Potential for transmission by mosquitoes// Am. J. Vet.Res.- 1982,- V.8.- P. 1458-1459.

59. Cantor G.H., McElwain T.F., Birkebak T.A., Palmer G.H. Ribozime cleaves rex/tax mRNA and inhibits bovine leukemia expression // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1993,- V.90.- P.10932-10936.

60. Clausen J., Hoff-Jorgensen R., Rasmusen H.B. Antibody reactivity against animal retrovirus in multiple sclerosis // Acta. Neurol. Scand.- 1990,- V.81.-P.223-228.

61. Cornil I., Delon P., Parodi A.L., Levy D. T-B-cell cooperation for bovine leukemia virus expression in ovine limphocytes // Leukemia.- 1988,- V.2.- P. 313-317.

62. Coulston J., Daniel R.C.W., Lavin M.F. Integration of bovine leukaemia virus at all stages of enzootic bovine leukosis.// Arch. Virol.- 1991,- V.119.- P. 13-23.

63. Coulston J., Naif H., Brandon R. e.a. Molecular cloning and sequencing of an Australian isolate of proviral bovine leukaemia virus DNA: comparison with other isolates// J. Gen. Virol.- 1990,- V.71, №8,- P. 1737-1746.

64. Cowley J.A., Molloy J.В., Dimmock C.N. e.a. Infectivity of bovine leukaemia virus infected cattle: An ELISA for detecting antigens expressed in in vitro cultured lymphocytes// Vet. Microbiol.- 1992,- V.30.- P. 137-150.

65. Da Y., Shanks R.D., Steward J., Lewin H. Milk and fat yields decline in bovine leukemia virus-infected Holstein cattle with persitent limphocytosis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1993,-V.90.- P.6538-6541.

66. De la Hera A., Alvarez Mon M., Sanches Madrid F. e.a. Co-expression of Mac-1 and p150,95 on CD5+ B-Cells. Structural and functional characterization in a human chronic limphocytic leukemia // Eur. J. Immunol.-1988,- V.18.- P.1131-1134.

67. Demirhan I., Altanerova V., Chandra A. e.a. Characterization of the RNA dependent DNA polymerase of bovine leukemia virus // Anticancer. Res. -1996,- V. 16,-P.2501-2505.

68. Depelchin A., Letesson J.J., Lostrie Trussart N. e. a. Bovine leukemia virus (BLV)-infected B-cells express a marker similar to the CD5 T-cell marker // Immunol. Lett.- 1989,- V.20.- P. 69-76.

69. Derse D. Bovine leukemia virus transcription is controlled by a virus encoded trans-acting response elements II J. Virol. 1987.- V.61.- P.2462-2471.

70. Derse D. Trans-acting regulation of bovine leukemia virus mRNA processing // J. Virol.- 1988.- V.62.- P.1115-1119.

71. Derse D., Martarano L. Construction of a recombinant bovine leukemia virus vector for analysis of virus infectivity // J. Virol.- 1990,- V.64.- P. 401405.

72. Djilali S., Parodi A-L. The BLV-induced leukemia-lymphosarcoma complex in sheep.// Vet. Immunol. Immunopathol.- 1989,- V.22.- P. 233-244.

73. Donini G., Dovis M., De Simone F. e.a. Detection of FMDV by polymerase chain reaction amplification and capture hybridization in microplate wells II Rep. See. Res. Group. Stand. EEC.- Rome, 1992,- P. 38-44.

74. Eaves F.M., Molloy J.В., Demmock C.K., Eaves L.E. A field evaluation of the polymerase chain reaction procedure for the detection of bovine leukaemia virus proviral DNA in cattle // Vet. Microbiol.- 1994,- V. 39,- P. 313321.

75. Enzootic bovine leukosis// OIE. Manual of Stand, for Diagn. Tests and Vaccines.- Paris, 2000,- P. 371-380.

76. Fechner H., Blankenstein P., Looman AC. e.a. Provirus variants of the bovine leukemia virus and their relation to the serological status of naturally infected cattle // Virology- 1997 V.237, №2,- P.261-269.

77. Fechner H., Kurg A., Geue L., e.a. Evaluation of polymerase chain reaction (PCR) application in diagnosis of bovine leukaemia virus (BLV) infection in naturally infected cattle//Zbl. Vet. Med. B. 1996- Bd.43, №10. S.621-630.

78. Ferrer J.F., Baliga V., Diglio C. e.a. Development of new methods for the diagnosis of BLV infection // Vet. Microbiol. 1976,- №1,- P. 9-18.

79. Florent G., Delgoffe J.C., Zygraich N. Detection of antibodies to bovine leukemia virus in bovine milk samples with an ELISA involving two monoclonal antibodies //Vet. Microbiol.- 1988,- V. 18, №1,- P. 89-93.

80. Fossum C., Burny A., Portetelle D. e.a. Detection of B- and T-cells, with lectiins or antibodies, in healthy and bovine leukemia virus-infected cattle// Vet. Immunol. Immunopathol. 1988.- V.18.- P. 269-278.

81. Garvey К., Oberste M.S., Elser J.E. e.a. Nucleotide sequence and genome organization of biologically active proviruses of the bovine immunodeficiencylike virus// Virology.- 1990,- V.175.- P. 391-409.

82. Gatei M.H., Lavin M.F., Daniel R.C.W. Serum immunoglobulin concentrations in cattle naturally infected with bovine leukemia virus // J. Vet. Med. В.- 1990,- V. 37,- P. 575-586.

83. Gatei.M.N., Brandon R.B., Naif H.M. e.a. Changes in В and T cell subsets in bovine leukaemia virus-infected cattle // Vet. Immunol. Immunopathol.-1989a.- V.23.- P. 139-147.

84. Gatei M.N., McLennan M.W., Lavin M.F. Daniel R.C.W. Experimental infection of sheep with bovine leukemia virus: Infectivity of blood, nasal and saliva secretions // J. Vet. Med. В.- 1989b.-V.36.-P.652-660.

85. Gaudi S., Ponti W., Agresti A. Detection of bovine leukaemia virus (BLV) infection by DNA probe technology // Moll, and Cell. Probes.- 1990.- V.4, № 3.-P. 163-174.

86. Gilden R., Long C., Hanson M. e.a. Characteristics of the major internal protein and RNA-dependent DNA polymerase of bovine leukemia virus // J. Gen. Virol.- 1975,- V.29, № 3.- P. 305-314.

87. Goudsmit J., Вас N.K.T., Nara P.L. // FASEB J.-1991.-V.5.-P.2427-2436.

88. Grimaldi MG., Poli G., Sartoelli P. e. a. Karyotype analysis of lymphocytes from cattle at different stages of bovine leukemia virus infection // Br. Vet. J.-1983.-V.139.-P.240-246.

89. Grundboeck M., Buzala E., Szczotka M. e.a. Experimental infection of sheep with bovine leukemia virus (BLV) // Polsk. Arch. Wet.- 1991.- V.31.-P.1-2.

90. Guillemain В., Levy J., Lasneret T. e.a. Large scale production and concentration of bovine C-type virus // Vet. Microbiol. 1976.- V.1, № 2/3,- P. 185-192.

91. Gupta P, Kashmiri S., Ferrer J. Transcriptional control of the bovine leukemia virus genome: role and characterization of a non-immunoglobulin plasma protein from bovine leukemia virus-infected cattle // J. Virol. -1984,-V.50.-P. 267-270.

92. Haas L., Diverse Т., Casey J.W. Bovine leukaemia virus gene expression in vivo // J. Virol-1992.- V.66.- P.6223-6225.

93. Heeney J.L., Vally P.J., Jacobs R.M., Vally V.E. Evidence for bovine leukaemia virus infection of peripheral blood monocytes and limited antigen expression in bovine lymphoid tissue // Lab. Invest.-1992.-V66,- P.608-617.

94. Heeney J.L., Vally V.E., Montesanti J. Alterations in humoral immune response to bovine leukaemia virus antigens in cattle with lymphoma // J. Gen.Virol.-1988.-V. 69.-P. 659-666.

95. Heeney J.L., Vally V.E. Transformed phenotype of enzootic bovine limphoma reflects differentiation linken leukemogenesis // Lab. Invest.-1990.-V.62.-P.339-346.

96. Hoff-Jorgensen. An integrational comparison to different laboratory tests for the diagnosis of bovine leokosis: suggestion for international standardization // Vet. Immunol. lmmunopathol.-1989.-V.22.- P. 293-297.

97. Hoss H.E., Olson C. Infectivity of bovine C-type (leukemia) virus for sheep and goats // Am. J. Vet. Res. 1974,- V. 35.- P. 633-637.

98. Hopkins S.G., DiGiacomo R.F. Natural transmission of bovine leukemia virus in dairy and beef cattle // Vet. Clin. North. Am. Food. Anim. Pract. -1997 -V.13, №1,-P.107-128.

99. Jacobs R.M., Song Z., Poon H. e.a. Proviral detection and serology in bovine leukemia virus-exposed normal cattle with lymphoma // Can. J. Vet. Res.-1992.-V.56.-P. 339-348.

100. Jensen W.A., Sheehy S.E., Fox M.H. e. a. In vitro expression of bovine leukaemia virus in isolated B-lymphocytes of cattle and sheep // Vet. Immunol. lmmunopathol.-1990.-V.26.-P.333-342.

101. Johnson R., Kaneene J.В., Anderson S.M. Bovine leukemia virus: Duration of BLV colostral antibody in calves from commercial dairy herds // Prev. Vet. Meth.-1987.-V.4.-P.371-376.

102. Johnson R. and Kaneene J.B. Bovine leukemia virus. P. 3. Zoonotic potential molecular epidemiology, and an animal model // Continuing education article No 8. The compendium, North American Edition. Food animal.-1991b.-V.13, N 10.-P. 1631-1639.

103. Johnson R., Kaneene J.B. Bovine leukemia virus. P. 1. Descriptive epidemiology, clinical manifestation, and diagnostic tests // Continuing education article No 12. The Compendium, Noth American Edition. Food animal.- 1991a.-V.13, №2,-P.315-327.

104. Johnston E.R., Radke K. The SU and TM envelope protein subunits of bovine leukemia virus are linked by disulfide bonds, both in cells and in virions // J. Virol. 2000,- V.74, №6. - P. 2930-2935.

105. Kabeya H., Ohashi K., Sugimoto C. e.a. Characterization of immune responses caused by bovine leukemia virus envelope peptides in sheep // J. Vet. Med. Sci. 1999. - V.61, №5. - P.475-480.

106. Katoh I., Yoshinaka Y, Ikawa Y. Retroviruses protease characterized as a dimeric aspartic proteinase // J. Virol.-1989a.-V.63.-P.2226-2232.

107. Kelly E.J., Jackson M.K., Marsolais Y. e.a. Early detection of bovine leukemia virus in cattle by use of the polymerase chain reaction // Am. J. of Vet. Res.-1993.-V.54, № 2.-P. 205-209.

108. Kerkhofs P., Gatot J.S., Knapen K. e.a. Long-term protection against bovine leukaemia virus replication in cattle and sheep // J. Gen. Virol. 2000. - V.81. - P.957-963.

109. Kettman R., Meunier-Rotival M., Cortadas J. e.a. Integration of bovine leukaemia virus DNA in the bovine genome.// Proc. Natl. Acad.Sci.- 1979.-V.76, №10,- P. 4827-4826.

110. Kettmann R., Cleuter Y, Mammerickx M. e. a. Genomic integration of bovine leukemia provirus: comparison of persistent lymphocytosis with lymphnode tumor form of enzootic // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.-1980. -V.77.-P. 2577-2581.

111. Kettmann R., Deshamps J., Claustriax J.J. e.a. Chromosome integration domain for bovine leukemia provirus in tumors // J.Virol.-1983.-V.47.-P.146-150.

112. Kettmann R., Portetelle D., Mammerickx M. e.a. Bovine leukemia virus: an exogenous RNA oncogenic virus // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1976.-V.73. P.1014-1018.

113. Kittelberger R., Reichel M.P., Meynell R.M. e.a. Detection of antibodies against the core protein p24 of the bovine leukaemia virus in cattle for confirmatory serological testing // J. Virol. Methods. 1999,- V.77, №1. - P. 109-114.

114. Klintevall K. Bovine leukaemia Virus: Course of infection and means of detection: Dissertation.- Uppsala, 1995.

115. Klintevall K., Ballagi-Pordany A., Naslund K., Belak S. Bovine leukaemia virus: rapid detection of proviral DNA by nested PCR in blood and organs of experimentally infected calves //Vet. Microbiol.-1994.- V. 42.- P. 191-204.

116. Klintevall K., Berg A., Svedlund G. e.a. Differentiation between enzootic and sporadic bovine leucosis by use of serological and virological methods // Vet. Rec.-1993.-V. 133.-P.272.

117. Klintevall K., Naslund K., Svedlund G. e.a. Evaluation an indirect ELISAfor the detection of antibodies to bovine leukemia virus in milk and serum // J. Virol. Methods.-1991 .-V.33.-P.319-333.

118. Kono Y., Arai K., Sentsui H. e.a. Protection against bovine leukemia virus infection in sheep by active and passive immunization // Jpn.J. Vet. Sci.-1986.-V.48.-P.117-125.

119. Kozaczynska B. Modification of the ELISA for the determination of antibodies of Ig G-i, Ig G2 and Ig M classes in the serum of bovine leukemia virus-infected animals // Bui. of the Vet. Inst, in Pulawy.- 1996,- V.40, №1,- P. 17-23.

120. Levy D., Kettmann R., Marchand P. e.a. Selective tropism of bovine leukemia virus (BLV) for surface immunoglobulin-bearing ovine lymphcytes // Leukemia.-1987.-V.1.-P.463-465.

121. Lewin HA. Disease resistance and immune response genes: strategies for their detection and evidence of their existence // J. Dairy. Sci.-1989.-V.72,-P. 1334-1348.

122. Lewin H.A. Evidence for BoLA-linked resistance and susceptibility to clinical progression of bovine leukemia virus infection // Anim. Genet.-1986.-V.17.-P.197-207.

123. Lomakina N.F., Fallacara F., Lomakin A.I. e.a. Detection and differetiation between FMD and SVD viruses by PCR-ELISA with universal primers and specific probes // Vet. Virol, in the New Millenium.- Bresia, Italy. 2000.- P. 175176.

124. Martin D., Arjona A., Soto I. e. a. Comparative study of PCR as a direct assay and ELISA and AGID as indirect assays for the detection of bovine leukaemia virus // J. Vet. Med. B. 2001. V.48, №2 - P. 97-106.

125. Mammerickx M., Palm R., Portetelle D.( Burny A. Experimental transmission of leukosis in sheep: latency period of the tumoral disease // Leukemia. -1988. -V.2.-P.103-107.

126. Mammerickx M., Portetelle D., Burny A. Experimental cross-transmissions of bovine leukaemia virus (BLV) between several animal spesies // Zbl. Vet. Med. В.- 1981.-Bd.28,- S. 69-81.

127. Mammerickx M., Portetelle D., Nys J., Burny A. Rapid detection of bovine leuksfemia virus infection in a large cattle population with an ELISA performed on pooled sera grouped by herd// Zbl. Vet. Med. В.- 1985,- Bd.32.-S. 601-608.

128. Mamoun R.2., Morisson M., Rebeyratte N. e.a. Sequence variability of bovine leukemia virus env gene and its relevance to the structure and antigenicity of the glycoproteins // J. Virol.- 1990.- V.64.- P. 4180-4188.

129. Maruyama K., Fukushuma Т., Mochizuki S. Crossreactive antibodies to BLV and HTLV in bovine and human hosts with retrovirus infection // Vet. Immunol. lmmunopathol.-1989,-V.22.-P.265-273.

130. Matthews R.E.F. Classification and nomenclature of viruses // Intervirology.- 1979,- V. 12, № 3/5,- P. 128-296.

131. Miller J.M., Schmerr J.F., Van der Maaten M.J. Comparison of four serologic tests for the detection of antibodies to bovine leukemia virus // Am. J. of Vet. Res.-1981.-V. 42, №1,-P. 5-8.

132. Miller J.M., Miller L.D., Olson C„ Gillette K.G. Virus-like particles in phytohanagglutinin, stimulated lymphocyte cultures with reference to bovine lymphosarcoma//J. Natl. Cancer. Inst. -1969.-V.43.-P.1297-1305.

133. Munch M., Nielsen L., Handberg K. e.a. Detection and subtyping (H5 and H7) of avian type A influenza virus by reverse transcription-PCR and PCR-ELISA // Arch. Virol. 2001. - V. 146.- P. 87-97.

134. Muramatsu Y., Yanase Т., Okabayashi T. e.a. Detection of Coxiella burnetii in cow's milk by PCR-ELISA combined with novel sample preparation method //Appl. Environ. Microbiol.- 1997,- V.63, №6,- P. 2142-2146.

135. Murtaugh M.P., Lin G.F., Haggard D.L. e.a. Detection of bovine leukemia virus in cattle by the polymerase chain reactioin // J. Virol. Meth.- 1991,- V.33, №1,2,-P. 73-85.

136. Naif H.M., Brandon R.B., Daniel R.C.W., Lavin M.F. Bovine leukaemia proviral DNA detection in cattle using the polymerase chain reaction // Vet. Microbiol.- 1990,- V.25.- P. 117-129.

137. Nimer S.D., Gasson J.C., Ни K. e. a. Activation of the GM-CSF promoter by HTLV-I and -II tax proteins // Oncogene.-1989.-V.4.-P.671-676.

138. OIE Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines.- Paris, 1992.-P. 305-312.

139. Okada K., Hosokawa Y., Aida Y., Ohshima К. I. In situ hybridization for the demonstration of bovine leukemia virus transcription in lymphosarcoma cell using biotonylated probes // J. Vet. Med. В.- 1991,- V.38, № 9,- P. 707-713

140. Oshima K., Okado K., Nomakunai S. e. a. Evidence of horizontal transmission of bovine leukemia virus due to blood-sucking tabanid flies // Jpn. J. Vet. Sci. -1981 .-V.43.-P.79-81.

141. Oligo. Programm chosing optimal DNA and RNA primers // Copyright © 1988-1990. Version 3.3-251.

142. Portetelle D. Bovine leucosis resent development with use of monoclonal antibodies and ELISA tests // Res. Adv. in Virus Diag.- Boston, 1984,- P. 157170.

143. Portetelle D., Bruck C., Burny A. e. a. Detection of compliment dependent lytic antibodies in sera from bovine leukemia virus infected animals // Vet. Res. -1978.-V.9.-P.667-674.

144. Portetelle D., Bruck C., Mammerickx M., Burny A. Use of monoclonal antibody in an ELISA test for the detection of antibodies to bovine leukaemia virus // J. Virol. Meth.- 1983.- V.6.- P. 19-29.

145. Portetelle D., Callebaut I., Bex F., Burny A. Vaccination against animal retroviruses // Progress in Vaccinology. -1993.- V.4: Veterinary vaccines. Padney, Hoglund, Prasad, Springier Verlag, Berlin.- P.4959-4965.

146. Portetelle D., Donday C., Burny A. e.a. Synthetic peptides approach to identification of epitopes an bovine leukemia virus envelope glycoprotein gp51 //Virology.- 1989,-V. 169,- P.34-41.

147. Portetelle D., Limbach K., Burny A. e.a. Recombinant vaccinia virus expression of the bovine leukaemia virus envelope gene and protection of immunized sheep against infection // Vaccine. -1991.-V.9.-P. 194-200.

148. Portetelle D., Mammerickx M., Burny A. Use of two monoclonal antibodies in ELISA test for the detection of antibodies to bovine leukaemia virus envelope protein gp 51// J. Virol. Meth.- 1989.-V.23.-P. 211-222.

149. Powers M.A., Grossman D., Kidd L.C., Radke K. Episodic occurrence of antibodies against the bovine leukemia virus rex protein during the course of infection in sheep // J. Virol.-1991.- V.65.- P. 4959-4965.

150. Pringle C.R. Virus taxonomy 1999 // Arch. Virol. - 1999. - V. 144. - P. 421-429.

151. Ressang A.A., Baars J.C., Calafat J. e.a. Studies an bovine leukaemia. 3. The haematological and serological response of sheep and goats for infection with whole blood from leukaemic cattle // Zbl. Vet. Med. В.- 1976,- Bd.23.- S. 662- 669.

152. Rice N.R., Stephens R.M., Cower D. e.a. The nucleotide sequence of the env gene and post-env region of bovine leukemia virus // Virology.- 1984,- V. 138,-P. 82-93.

153. Rise N.R., Stephens R.M., Burny A., Gilden R.V. The gag and pol genes of bovine leikemia virus: Nucleotide sequence and analysis // Virology.- 1985,-V.142.-P. 357-377.

154. Rohde W., Pauli G., Paulsen J. Bovine and ovine leukemia viruses. I. Characterization of viral antigens //J. Virol. 1978.- V.26, № 1.- P. 159-164.

155. Sagata N., Tsuzuku-Kawamura J., Nagayoshi-Aida M. e.a. Identification and some biochemical properties of the major XBL gene product of bovine leukaemia virus // Proc. Natl. Acad. Sci. 1985 a.-V. 82,- P. 7879-7883.

156. Sagata N., Yasunaga Т., Tsuzuky-Kawamura J. Complete nucleotide sequence of the genome of bovine leukaemia virus: Its evolutionary relationship to other retroviruses // Proc. Natl. Acad. Sci .-1985 b.- V.82,- P. 677-681.

157. Sargeant J.M., Kelton D.F., Martin S.W., Mann E.D. Evaluation of a bulk-milk ELISA test for the classification of herd-level bovine leukemia virus status // Prev. Vet. Med. 1997. - V.31, №3-4. - S.223-230.

158. Scholz O., Konshake A., Niemann L. e.a. Preparation von BLV Antigenen und ihre Bewertung Sowie Eignung in einem Anti-BLV-Enzymimmunassay // Mh. Vet.-Med.- 1988,- Bd.43, №19/20.- P. 695-699.

159. Schwartz I., Bensaid A, Polack B. e.a. In vivo leukocyte tropism of bovine leukemia virus in sheep and cattle // J. Virol. -1994.-V.68. -P. 4589-4596.

160. Schwartz-Cornil I., Chevallier N., Belloc C. e.a. Bovine leukaemia virus-induced lymphocytosis in sheep is associated with reduction of spontaneous В cell apoptosis // J. Gen. Virol. 1997. - V.78. - P. 153-162.

161. Seiki M., Hattori Y., Hirayama M. Human adalt T-cell leukemia virus: complete nucleotide sequence of the provirus genome integrated in leukemia cell DNA // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1983,- V. 80.- P. 3618-3622.

162. Semenov A.N., Efremov E.E. A simple direct enzyme immunoassay of antibodies based on the differences in diffusion rates in a gel of a synthetic antigen and of its complex with antibodies // Appl. Biochem. and Biotechn.-1996.-V.56.-P. 73-78.

163. Sherman M.P., Ehrlich G.D., Ferrer J.F. e.a. Amplification and analysis of specific DNA and RNA sequences of bovine leukemia virus from infected cows by polymerase chain reaction // J. Clin. Microbiol.- 1992,- V.30, № 1.-P. 185-191.

164. Shimotokno K., Takahashi Y., Shimizu N. e.a. Complete nucleotide sequence of an infectious clone of human T-cell leukemia virus type II: an open reading frame for the protease gene // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1985.-V.82.- P. 3103-3105.

165. Slavikova К., Kettmann R., Reinerova M e.a. Provirus integration of bovine leukemia virus into DNA of infected human myeloma cells // Neoplasma.-1987.-V.34.-P.653-657.

166. Stott M.L., Thurmond M.C., Dunn S.J. e.a. Integrated bovine leucosis proviral DNA in T helper and T cytotoxic/suppressor lymphocytes // J. Gen. Virol.-1991.- V.72.-P. 307-315.

167. Taylor B.C., Stott J.L., Thurmond M.A., Picanso J.P. Alteration in lymphocyte subpopulation in bovine leukosis virus-infected cattle // Vet.Immunol. lmmunopathol.-1992.- V.31.-P.35-47.

168. Temin H.M. A proposal or a new approach to a preventive vaccine against human immunodeficiency virus type 1 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1993.-V.90.-P.4419-4420.

169. Thurmond M.C., Carter R.L., Puhr D.M., Burridge M.J. Decay of colostral antibodies to bovine leukemia virus with application to detection of calfhood infection //Am. J. Vet. Res.- 1982.-V.43.-P. 1152-1155.

170. Ungar-Waron H., Paz R., Brenner J., Yakobson B. e.a. Experimental infection of calves with bovine leukemia virus (BLV): an applicable model of a retroviral infection // Vet. Immunol. Immunopathol. 1999 - V.67, №2 - P. 195201.

171. Valikhov A.F., Burba L.G., Shishkov V.P. Virological exemenation of semen, milk and blood in BLV infected cattle // 5th Int. Symp. on. BLV.-Tubingen, 1984.

172. Van den Broeke A., Cleuter Y., Chen G. e.a. Even transcriptionally competent proviruses are silent in bovine leukemia virus-induced sheep tumor cells // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. -1988.-V.85. -P. 9263-9267.

173. Van der Maaten M.J., Miller J.M., Schmerr M.J. Effect of colostral antibodies on bovine leukemia virus infection of neinatal calves // Am. J. Vet. Res.-1981 .-V.42.-P. 1498-1500.

174. Van Eijk MJ., Stewart JA., Beever J. e.a. Development of persistent lymphocytosis in cattle is closely associated with BRB2 // Immunogenetics. -1992.-V.37.-P.64-68.

175. Voneche V., Callebaut I., Kettmann R. e.a. The 19-21 amino acid fragment of gp51 adopts an amphiphilic structure and plays a key role in the fusion events induced by bovine leukemia virus // J. Biol. Chem.-1992a.-V.267,-P.15193-15197.

176. Walrand F., Fumoux F., Roelants G. e.a. Incidence of bovine leukemia virus in West African cattle // Int. J. Cancer. -1986.-V.37.-P.619-621.

177. Wang C.T. Bovine leukemia virus infection in Taiwan: evaluation of the enzyme-linked immunosorbent assay and agar gel immunodiffusion test // Jpn. J. Vet. Res.- 1991.-V.39, №2-4,-P. 107-115.

178. Weiland F., Straub O.C. Differences in the in vitro response of lymphocytes from leukotic and normal cattle to Concanavalin A // Res. Vet. Sci. 1976,- V.20.-P. 340-341.

179. Weiland F., Ueberschaer S. Ultrastructure comparison of bovine leukemia virus (BLV) with C-type particle of other .species // Arch. Virol. 1976,- V.52, № 1/2,- P. 187-190.

180. Weiland F., Ueberschaer S., Straub O. e.a. C-type particle in cultured lymphocytes from highly leukemic cattle // Intervirol.- 1974.- V.4, № 2.- P. 140-149.

181. White K.N., Nosaka Т., Kanamori H. e.a. The nucleolar localisation signal of the HTLV-I protein p27-rex is important for of IL-2 receptor // Biochem.Biophys.-1991 .-V. 175.-P.98-103.

182. White K.N., Nosaka Т., Kanamori H. e.a. The nucleolar localisation signal of the HTLV-I protein p27-rex is important for of IL-2 receptor // Biochem.Biophys. -1991.--V.175.-P.98-103.

183. White K.N., Wiliamson N.M., Harlow E. Cellular targets for trandformation by the adenovirus E1A proteins // Cell. -1989.-V.56.-P.67-75.

184. Willems L., Heremans H., Chen G. e.a.Cooperation between bovine leukaemia virus transactivator protein and Ha-ras oncogene product in cellular transformation // EMBO J. -1990.-V.9. P. 1577-1581.

185. Willems L., Kettmann R., Chen G. e.a. A cyclic AMP-responsive DNA-binding protein (CREB2) is a cellular transactivator of the bovine leukemia virus long terminal repeat. // J. Virol. -1992b.-V.66.-P. 766-772.

186. Willems L., Portetelle D., Kerkhofs P. e.a. In vivo transfection of bovine leukaemia provirus into sheep // Virology.- 1992,- V.189.- P. 775-777.

187. Willems L., Thienpont E., Kerkhofs P. e.a. Bovine leukemia virus, an animal model for the study of intrastrain variability // J. Virol.- 1993.- V.67, №2,- P. 1086-1089.

188. Wong-Staal F., Gollo R.C. Human T-lymphotropic retroviruses // Nature.-1985,-V.317,-P. 395-403.

189. Wyati C.R., Wingett D., White J.S. e.a. Persistent infection of rabbits with bovine leukemia virus associated with development of immune dysfunction // J. Virol.- 1989,- V.63, №11.- p. 4495-4506.

190. Xu A., van Eijk M.J., Park C., Lewin H.A. Polymorphism in BoLA-DRB3 exon 2 correlates with resistance to persistent lymphocytosis caused by bovine leukemia virus // J. Immunol.- 1993,-V. 151.- P. 6977-6985.

191. Yoshinaka Y., Katoh I., Copeland TD. e.a. Bovine leukemia virus protease: purification, chemical analysis, and in vitro processing of gag precursor polyproteins//J. Virol.- 1986.-V.57.-P. 826-832.1031С О II Ш Я

192. Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных002 г.1. Методикавыявления провируса лейкоза крупного рогатого скота в различных лимфоцит-содержащих биоматериалах с помощью полимеразной цепнойреакции

193. Разработчики: Джапаралиев Н.Т. Прохватилова Л.Б. Аянот П.К. Ломакин А.И.

194. Рассмотрена и одобрена методкомиссиейпротокол № '( от --------------2002г.и Ученым Советомпротокол № Я. от "3d---------------2002г.1041С Q If i II

195. Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных2002 г.1. Методикавыявления провируса лейкоза крупного рогатого скота в образцах крови КРС с помощью полимеразной цепной реакции

196. Разработчики: Джапаралиев Н.Т. Прохватилова Л.Б. Аянот П.К. Ломакин А.И.

197. Рассмотрена и одобрена методкомиссией протокол № -/ от "Ч>"------------- 2002г.и Ученым Советом1. КОПИЯ

198. МИНИСТРЕСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РФ ФГУ ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЗАЩИТЫ ЖИВОТНЫХ1. СОГЛАСОВАВу1. Зам.ктора по НИР1. ТВЕРЖДАЮшж1. В.М. Захаров 2002 г.1. АКТ

199. О результатах комиссионной проверки "Методики выявления провируса лейкоза крупного рогатого скота в образцах крови КРС с помощью полимеразной цепной реакции"

200. ОСНОВАНИЕ: Приказ директора института № от / V жЛифк 2002 г.

201. Составлен 17. 01. 2002 г. комиссией в составе: Председатель: Перевозчикова Н.А. главный научный сотрудник

202. ОКНИИ и МС, д.б.н., профессор.

203. Члены комиссии: Рахманов А.М Лобанов В.А. Бочков Ю.А.- научный консультант, д.в.н., профессор;- м.н.с. лаб. №11, к.б.н.;- м.н.с. лаб. №11, к.б.н.; Джапаралиев Н.Т. ветеринарный врач лаб. №2.

204. Выделение геномной ДНК из образцов биоматериалов.

205. Проведение полимеразной цепной реакции.

206. Анализ продуктов реакции методом электрофореза в агарозном геле. Все этапы проверки проводили согласно "Методике выявления провирусалейкоза крупного рогатого скота в образцах крови с помощью полимеразной цепной реакции"1. Результаты:

207. С использованием метода ПЦР были выявлены специфические фрагменты ВЛ КРС в 6 образцах, а в 4 образцах получили отрицательный результат, т.е. полученные результаты во всех случаях совпали с ожидаемыми.

208. Сводные результаты исследования образцов крови КРС на выявление генома ВЛ КРС представлены в прилагаемой таблице.1. Заключение:

209. В проведенном комиссионном опыте продемонстрирована возможность выявления генома ВЛ КРС в образцах крови КРС, инфицированного вирусом лейкоза КРС.

210. По результатам проведенного опыта комиссия установила, что метод ПЦР с одной парой праймеров позволяет выявить в образцах крови геном ВЛ КРС.

211. Метод выявления ВЛ КРС с помощью однократной ПЦР может быть использован, наряду с серологическими методами, для выявления инфицированных животных.