Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Усовершенствование системы оздоровительных противолейкозных мероприятий в сельскохозяйственных организациях Уральского региона

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Усовершенствование системы оздоровительных противолейкозных мероприятий в сельскохозяйственных организациях Уральского региона"

НаТТравах рукописи

X / /)

ЛЫСОВ АЛЕКСЕЙ ВИКТОРОВИЧ

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СИСТЕМЫ ОЗДОРОВИТЕЛЬНЫХ ПРОТИВОЛЕЙКОЗНЫХ МЕРОПРИЯТИИ В

СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ОРГАНИЗАЦИЯХ

УРАЛЬСКОГО РЕГИОНА

:> V )

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией И иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 9 ДПР

Екатеринбург-2012

» г

. ! С '

005018031

Диссертация выполнена в отделе мониторинга и прогнозирования инфекционных заболеваний животных ГНУ Уральского научно-исследовательского ветеринарного института Российской академии сельскохозяйственных паук

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Заслуженный ветеринарный врач Российской Федерации, кандидат ветеринарных наук, Тагарчук Александр Терентьевич

Ошейков Владимир Григорьевич,

доктор ветеринарных наук, профессор, ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Россельхозакадемии, главный научный сотрудник лаборатории диагностических исследований и биотехнологии

Ведущая организации:

Ибишов Джаланр Фейруз-оглы,

доктор ветеринарных наук, профессор ФГБОУ ВПО «11ермская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д.Н. Прянишникова», заведующий кафедрой внутренних незаразных болезней, хирургии и акушерства

Федеральное государственное образовательное учреждение профессионального образования государственная академия медицины», г.Троицк

бюджетное высшего «Уральская ветеринарной

Защита состоится CuxJj^ucf_ 2012 г. в часов на -

заседании диссертационного совета Д 006.099.01 при Уральском научно-исследовательском ветеринарном институте РАСХН по адресу: 620913, Екатеринбург, ул. Главная, 21, корпус № 2.

Адрес: Государственное научное учреждение Уральский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии 620142 г. Екатеринбург, ул. Белинского 112 а, тел/факс (343) 257-64-82, 257-82-63.

Адрес сайта института: http:// www.urnivi.ru: E-mail: info@urnivi.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уральского научно-исследовательского ветеринарного инс титута Россельхозакадемии

Автореферат разослан «o^k »cUtZJ^TQ 2012

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

Печура Е.В.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальности темы. В структуре инфекционной патологии лейкоз занимает лидирующее место и Российской Федерации и составляет более 60% от числа инфекционных заболеваний (М.И. Гулюкин, 2011).

Широкое распространение лейкоза в сельскохозяйственных предприятиях всех форм собственности приносит огромный экономический ущерб животноводству, в том числе племенному, требует значительных затрат на проведение оздоровительных мероприятий. Болезнь поражает в первую очередь высокопродуктивных коров, что является прямой угрозой национальному генофонду крупного рогатого скота страны (Н.И. Петров, 2001; H.A. Мальцева с соавт., 2003).

Установлено снижение питательной ценности молока инфицированных I3JI КРС коров из-за уменьшения содержания в нем показателей общего белка и суммы аминокислот, в том числе пяти незаменимых (валина, лейцина, метиошша, фешшаланина, триптофана) и семи заменимых (ГШ. Смирнов, 2002; М.И. Гулюкин, Л.А. Лопунов, А.Ф. Валихов, 2009, И.М. Донник и соавт., 2012).

Отсутствие средств терапии и профилактики, социальная значимость данной нозологии определяют актуальность фундаментальных и прикладных исследований по данной проблеме (А.Т. Татарчук с соавт., 1996; Г.А. Симонян, 2005; П.II. Смирнов с соавт., 2007; J1.K. Эрнст, H.A. Зиновьева, 2008; -М.И. Гулюкин, 2008, 2009; И.М. Донник с соавт., 2000, 2008, 2010;).

В настоящее время наукой достигнуты значительные успехи в изучении этиологии, патогенеза, эпизоотологии, генетике, патоморфологии, диагностике и других аспектах лейкозного заболевания. Однако ряд вопросов, в том числе по профилактике и борьбе с лейкозом, остаются недостаточно изученными, а некоторые требуют усовершенствования с учетом развития современной науки.

Перечисленные выше проблемы и вопросы определяют современную потребность ветеринарной . практики в новых научно-обоснованных рекомендациях но диагностике, факторам передачи, мерам борьбы и профилактике лейкоза крупного рог атого скота.

Особого внимания требует повышение эффективности оздоровления от инфекции в условиях экологических, экономических особенностей регионов И отдельных субъектов (В.А. Красноперов, 2007; М.И. Гулюкии, 2009; А.Т. Татарчук, 2011).

В настоящее время основным методом диагностики лейкоза крупного рогатого скота является серологическое исследование с применением реакции иммунодиффузии (РИД). Однако недостаточно высокий предел чувствительности РИД при выявлении животных - вирусоносителей лейкоза (ВЛКРС) (П.Н, Смирнов, 1989; В.М. Чекишев, 1995; М.И. Гулюкин, 2001; В.В. Храмцов, 2007; И.М. Донник, 2008) заставляет изыскивать новые или усовершенствовать имеющиеся методы диагностики. Высокая эффективность применения иммупоферментного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ГПДР), при проведении комплексных оздоровительных мероприятий, позволяют выявить наибольшее число животных на ранних стадиях вирусоносительства (В.А. Бусол, 1987; А.Т. Татарчук, 1995, 2010; Ю.Г1. Смирнов, 1995; М.И. Гулюкин, 2001; Л.И. Нагаева, 2003; А.Н. Шаров, 2006; G. Monti et al., 2005; А.И. Клименко, 2008; И.М. Донник, 1996, 2010; М.В. Петропавловский, 2011; Зиновьев и др., 2011).

Все перечисленные вопросы весьма актуальны и требуют эффективного, научно-обоснованного и практического решения во многих субъектах Российской Федерации, в том числе в Уральском регионе.

Цель исследовании: провести комплексную оценку факторов влияющих на особенности проявления и распространения лейкоза крупного рогатого скота и с учетом региональных экологических и экономических условий усовершенствовать систему обеспечивающую благополучие по данной нозологии.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по лейкозу па территории региона в зависимости от географического расположения, технологии содержания и возраста животных.

2. Определить чувствительность комплексов диагностических тестов (РИД, ИФА, ПЦР) и эффективность их применения на разных этапах оздоровления животных от вируса лейкоза.

3. Изучить возможность ранней диагностики инфицированных возбудителем лейкоза (ВЛКРС) животных с помощью комплексных серологических и молекулярпо-генетических методов исследований.

4. На основании полученных данных усовершенствовать научно-обоснованную систему нрошволейкозных мероприятий, обеспечивающую благополучие молочных ферм по лейкозу крупного рогатого скота, и дать оценку ее результативности.

Научная новизна. Ыа основании исследований изучена динамика эпизоотической ситуации но лейкозу крупного рогатого скота в административно-территориальных зонах региона за 8 лет. Установлены в динамике различные уровни стабилизации и изменения показателей вирусоносительства, числа неблагополучных пунктов, заболеваемости в регионе. Показано, что внедрение в 1992-2005п\ научно- обоснованной системы ликвидации лейкоза КРС в Свердловской области позволило оздоровить 99,4% неблагополучного в отношении данной инфекции поголовья. Применение ранней диагностики инфицированного возбудителем молодняка с использованием ГІЦР наряду с серологическими методами исследований, позволяет выявлять 93% телят-вирусопосителей.

Практическая значимость н реализации результатов исследований.

Разработаны схемы оздоровления поголовья крупного рогатого скота сельскохозяйственных предприятий с учетом комплекса экономических, социальных и эпизоотологических особенностей субъекта и отдельных сельскохозяйственных предприятий.

Внедрение программы оздоровления поголовья сельскохозяйственных предприятий позволило снизить инфицироваипость в Тюменской области в 6 раз (с 32,6% в 2001г. до 5,2% в 2010г.), оздоровить за 10 лет 189

неблагополучных пунктов (61%).

По результатам исследований подготовлено 3 научно-практических рекомендаций, утвержденных НТС МСХиП Свердловской области:

«Методология снижения инфицировашюсти животных вирусом лейкоза в оздоравливаемых стадах крупного рогатого скота», г.Екатеринбург, 2009; «Способ ранней диагностики лейкоза у молодняка крупного рогатого скота», г. Екатеринбург, 2010; «Экспериментальные данные по эффективности диагностических исследований на ранних стадиях вирусоносительства лейкоза крупного рогатого скота», г. Екатеринбург, 2011; а также 2 научно-практических рекомендаций, утвержденных управлением ветеринарии Тюменской области: «Разработка и внедрение комплексной программы противолейкозных мероприятий направленных на снижение уровня инфицировашюсти поголовья КРС вирусом лейкоза в сельскохозяйственных предприятиях Тюменской области», 2010; «Проведение противолейкозных научно-исследовательских работ в сельскохозяйственных предприятиях Заводоуковского, Упоровского и Ялуторовского районах Тюменской области. Разработка схем заключительных оздоровительных противолейкозных мероприятий для сельскохозяйственных предприятий», 2011.

Экономический эффект от внедрения в 2009-2011 годах составил 58163,4 тыс. рублей.

Основные положении диссертации, выносимые на защиту:

1. Эпизоотический анализ распространения лейкоза КРС в Уральском регионе в зависимости от географического расположения территорий, возраста животных.

2. Динамика выявления вирусоносителей возбудителя лейкоза в сельскохозяйственных организациях Тюменской области.

3. Определение чувствительности комплексов диагностических тестов (РИД, ИФА, ГПДР) и эффективности их применения на разных этапах оздоровления скота от вируса лейкоза КРС.

4. Результативность усовершенствованной научно-обоснованной системы оздоровительных противолейкозных мероприятий в сельскохозяйственных предприятиях Свердловской и Тюменской областей.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях, семинарах, совещаниях, в том числе:

Международной научпо-практнческой конференции посвященной 50-ти летнему юбилею института эпизоотологии УААН (Украина, г.Ровно, 2009); Всероссийской межрегиональной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики хронических инфекций и патологии животных» (г.Омск, 2009); Международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики инфекционных болезней животных и птиц» (г.Екатеринбург, 2009, 2010); производственных совещаниях специалистов Уральского региона; на ученых советах ГНУ Уральского НИВИ РЛСХН (г. Екатеринбург, 2009-2011).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 6 научных работ, в том числе: 2 в изданиях рекомендованных ВАК РФ (журнал «Ветеринария Кубани» - 1, журнал « Аграрный вестник Урала» - 1), 1 в зарубежном издании (научно-технический бюллетень «Института биологии животных УААН»), Издано 2 научно-практических рекомендаций.

Об!,ем и структура диссертации. Диссертация изложена на 140 страницах печатного текста и включает разделы: введение, общая характеристика работы, обзор литературы, собственные исследования, материалы и методы, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 15 рисунками. Список литературы включает 150 источников, в том числе 50 источников зарубежных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Диссертация выполнена в отделе мониторинга и прогнозирования инфекционных заболеваний животных ГНУ Уральского научно-исследовательского ветеринарного института Российской академии сельскохозяйственных наук. Исследования проведены в период 2009-2011 гг. в соответствии с:

Про1раммой фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного

комплекса Российской Федерации на 2006-2010гг., тема «Разработать способ ранней прижизненной диагностики лейкоза у молодняка крупного рогатого скота» (№ Государственной регистрации 01.2.006 13098).

- Государственным контрактом на проведение научно-исследовательских работ в 2009г., по теме «Выявление причин выделения массовых положительных (РИД) реакций па заключительной стадии оздоровления скота от вируса лейкоза крупного рогатого скота в сельскохозяйственных предприятиях Заводоуковского, Ишимского и Ялуторовского районов Тюменской области» (№ Государственной регистрации 45/1239-09 от 31.08.2009г.).

- Государственным контрактом на проведение научно-исследовательских работ в 2010г., по теме «Разработка и внедрение комплексной программы противолейкозных мероприятий в сельскохозяйственных предприятиях Заводоуковского, Упоровского и Ялуторовского районов Тюменской области» (№ Государственной регистрации 30-0681/10 от 15.06.2010г.).

Для эпизоотического анализа распространенности лейкоза крупного рогатого скота на территории региона использованы статистические данные ветеринарной отчетности, результаты диагностических исследований на лейкоз ветеринарных лабораторий Свердловской, Тюменской, Курганской и Челябинской областей, результаты лабораторных исследований биологического материала выполненных в Уральском НИВИ.

Объектом исследований являлось поголовье крупного рогатого скота сельскохозяйственных предприятий Свердловской, Тюменской, Курганской и Челябинской областей.

Предметом исследований служили пробы цельной крови и сыворотки от поголовья инфицированного вирусом лейкоза и здоровых животных.

Диагностические исследования крови, сыворотки крови животных в РИД, ИФА, ПЦР проведены согласно «Методических указаний по диагностике лейкоза крупного рогатого скота», утвержденных Департаментом ветеринарии МСХ РФ от 23.08.2000г.

Сравнительную эффективность методов лабораторной диагностики выявления инфицированных ВЛ КРС животных проводили в

животноводческих предприятиях региона. В неблагополучных стадах проводили забор крови от телок разного возраста. Также исследовали пробы крови полученные от экспериментально зараженных баранов. Отбор проб крови осуществлялся в стерильные одноразовые пробирки с соблюдением правил асептики. Материал тестировали одновременно различными методами: РИД, ИФА, ПЦР

Пробы сыворотки, для постановки реакции иммунодиффузии (РИД), получали из отобранной в стерильные одноразовые пробирки без коагулянта крови. Для лучшего отделения сыворотки пробирки выдерживали 4 часа при температуре +25-28°С. Транспортировка проб проводилась с использованием термоконтейнера (при температуре +8-10°С). Для проведения РИД использовали диагностический набор производства Курской биофабрики. Подготовка компонентов реакции к работе осуществлялась в соответствии с «Наставлением по применению набора для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота». Постановка РИД, учет и оценка результатов проводились согласно «Методических указаний но диагностике лейкоза крупного рогатого скота» №13-7-2/2130 от 23.08.2000г.

Исследования проб методом иммунофермептного анализа (ИФА) проводили с использованием набора для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота ВЕРИ-тест (производитель НПО «Нарвак», г.Москва) и набора SEIIELISA® BLV Ad Mono Bloking (фирма Synbiotics, Франция). Материалом для исследования методом иммунофермептного анализа являлась сыворотка крови.

Отбор проб крови для проведения исследований методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) осуществлялся в вакуумные пробирки с EDTA К:, Green Vac-Tube™ (фирма Green Cross MS). Транспортировка проб проводилась с использованием термоконтейнера (при температуре +4-8°С). В случае необходимости пробы подвергались заморозке при температуре -20°С. Исследование выполняли с помощью тест-системы «Лейкоз» (производитель ФГНУ ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребпадзора, г.Москва) по инструкции утвержденной Россельхозпадзором 29.02.2006г., а также праймерами

GenPak®DNA PCR BLV изготовленными лабораторией «ИЗОГЕН» г. Москва, Россия.

Всего клинически исследовано поголовье 15 сельскохозяйственных предприятий 15957 голов, в том числе 11968 коров. Проведено лабораторных исследований сыворотки и крови: РИД - 1084 проб, ИФА - 915 проб, ПЦР -1099 проб. Исследовано 15 сборных проб молока от 225 голов коров.

Статистическая обработка цифровых данных была выполнена с использованием стандартных программ Microsoft Office для ПК.

2.2. Результат ы собственных исследований

2.2.1 Распространение лейкоза крупного рогатого скота и территориальные особенности проявления болезни в понуляцних животных.

Эпизоотологический анализ позволил определить число неблагополучных по лейкозу пунктов и динамику их движения на основании результатов серологических и гематологических исследований скота.

Одним из критериев, отражающих эпизоотическую ситуацию по лейкозу крупного рогатого скота, представляло наличие неблагополучных пунктов по Федеральным округам Российской Федерации (таблица 1), (М.И, Гулюкин, Г.А. Симонян и др., 2011).

Таблица 1 - Количество неблагополучных пунктов по Федеральным округам состоянием на 01.01.2011г.

Название округа Кол-во неблагополучных пунктов %отРФ

Российская Федерация 2222 100

Центральный Ф.О. 565 25,4

С.Западный Ф.О. 135 6,0

Южный Ф.О. 127 5,7

Приволжский Ф.О. 660 29,7

Уральский Ф.О. 430 19,3

Сибирский Ф.О. 253 п,з

Д.Восточный Ф.О. 51 2,2

Оценить напряженность ситуации и распространенность ВЛ КРС на территории субъектов можно было по степени инфицированное™ скота. В соответствии с этой градацией регионы распределяли следующим образом:

- инфицированное исследованного поголовья до 10% зарегистрирована 0 38 субъектах, среди которых Пермский край, Тюменская и Свердловская

области;

- инфицированное!!, до 30% зарегистрирована в 25 субъектах, в том числе в Курганской, Челябинской областях, Краснодарском крае;

- инфицировапность 30% и более зарегистрирована в 4 субъектах: Нижегородской и Рязанской областях, Приморском крае и республике Адыгея;

На основании данных отчетов Департамента ветеринарии МСХ РФ о результатах серологических и гематологических исследований крупного рогатого скота на лейкоз за период 2000-2010гг. (таблица 2) установлено, что количество выявляемых больных лейкозом животных неуклонно снижается.

Таблица 2 - Результаты серологических исследований КРС на лейкоз, тыс. гол.

гематологических

Годы Исслед. по гематологии Выявлено больных % больных Исслед. по серологии (РИД) Выявлено инфицированных % инфицирован ных

2000 5035,84 104,4 . 2,2 11750,6 1513,4 12,9

2001 4891,90 114,7 2,3 12995,2 1778,7 13,7

2002 4493,39 111,4 2,4 14146,5 1415,3 10,3

2003 4487,04 121,3 2,7 15056,3 1613,5 10,7

2004 4619,20 127,6 2,7 14678,6 1618,7 11,2

2005 4498,90 107,6 2,4 13327,2 1401,0 10,5

2006 4008,51 98,09 2,4 12201,8 1162,5 9,5

2007 4005,67 93,75 2,3 11876,0 1213,6 10,2

2008 3920,29 82,50 2,1 12948,1 1119,5 8,6

2009 3939,93 73,98 1,8 17614,6 1138,1 8,3

2010 3690,41 60,41 1,6 13518,6 10189,7 7,5

При этом охват поголовья крупного рогатого скота серологическими диагностическими исследованиями растет. За 15 лет количество исследований в РИД увеличилось на 38,5%. В то же время количество гематологических

исследований снизилось па 24,7%, при этом количество больных выявилось в 1,5% меньше. Такую динамику следует считать положительной.

Увеличение серологических исследований поголовья крупного рогатого скота происходит преимущественно за счет исследований с целью выяснения эпизоотической ситуации по лейкозу, а также за счет увеличения кратности исследований в оздоравливаемых хозяйствах.

2.2.2 Распространение лейкоза крупного рогатого екога на территории Уральского Федерального округа

Распространение лейкоза крупного рогатого скота на территории Уральского федерального округа остается одной из основных проблем животноводческой отрасли в регионе (И.М. Донник, А.Т. Татарчук и др., 20002011).

Заболевание на территории региона было зарегистрировано в 70-х годах . прошлого века. Первично, в 1950-60гг., использовался клинический метод диагностики заболевания. Однако при этом методе выявлялись животные на стадии развившегося заболевания. Использовавшаяся в последующие (19601970 годы), так называемая гематологическая методология оздоровления позволяла вывести из оборота стада животных на стадии развития морфологических изменений в крови. При этом животные с алейкемической формой лейкоза и животные носители вирусной инфекции оставались среди общего поголовья. Лишь с внедрением в практику серологических диагностических исследований (РИД) специалисты ветеринарной службы смогли увидеть и оценить всю картину распространения инфекции ВЛ КРС (В.А. Красноперо», 2002).

На территории Свердловской области в период 1992-201 Огг. была реализована комплексная программа оздоровительных противолейкозпых мероприятий, позволившая оздоровить от инфекции 99,4% неблагополучных МТФ (рис. 1).

Рисунок 1 - Динамика оздоровления МТФ Свердловской области от лейкоза крупного рогатого скота (1992-2010гг.)

874 628

т

1 1 ;

Ш Всего МТФ ■ Было неблагополучных ■ Осталось неблагополучных

В субъекте ликвидирован лейкоз также и в личных подворьях - в 1200 населенных пунктах. В настоящее время поголовье крупного рогатого скота общественного и индивидуального секторов подвергается двухкратному (весной и осенью) серологическому контролю. Случаев выявления положительно реагирующих животных за 5 летний период не отмечено, что свидетельствует о высоком качестве проведенного комплекса оздоровительных мероприятий.

По состоянию на декабрь 2011г. на территории 4-х молочно-товарных ферм (МТФ) Свердловской области осталось всего 680 голов, положительно реагирующих в РИД на лейкоз (0,7% от имеющегося поголовья).

Установлено, что в других субъектах округа количество неблагополучных пунктов в 2011г. насчитывалось в Челябинской области -199, Тюменской области - 114, Курганской области - 108.

Наиболее сложная ситуация по данному заболеванию отмечена на территориях Курганской и Челябинской областей.

В Курганской области работа по оздоровлению поголовья от BJI КРС проводится, но ввиду отсутствия областной противолейкозной программы количество неблагополучных пунктов уменьшилось незначительно: в 2007г. -112; 2008г. - 118; 2009г. - 115; 2011г. - 108. Уровень инфицированности среди коров снижается, но при этом остается одним из самых высоких на территории региона: 2007г. - 27,7%; 2008г. - 20,2%; 2009г. - 12,4%. В области сохраняется высокий уровень инфицированное™ поголовья индивидуального сектора, большое количество заболевших лейкозом животных - 1007 голов (данные на 01.10.2011г.).

Аналогичная ситуация зарегистрирована и на территории Челябинской области. Состоянием на осень 2011г. зарегистрировано 198 неблагополучных пунктова, средний уровень инфицированности исследуемого поголовья составил 17,8%. При проведении гематологических исследований вновь выявлено 13,6% (901гол.) больных животных. С прошлого года оставалось на передержке 399 гембольных животных.

Достаточно успешно реализуется в Тюменской области разработанная в 2002г. целевая научно-техническая программа, утвержденная Департаментом АПК области. Так на территории субъекта в 2001г. было зарегистрировано 307 неблагополучных по инфекции ВЛ КРС пункта. В результате выполнения комплексной программы к 2011г. число пунктов неблагополучных по лейкозу крупного рогатого скота сократилось в 2,6 раза (рис. 2).

Рисунок 2 - Динамика количества неблагополучных по лейкозу крупного рогатого скота пунктов в Тюменской области (2000-2010 гг.)

400 300 200 100

о о оооооооо-^ ооооооооооо счсчсчг^ счсчсчолсчсчо^

■ Колличество неблагополучных пунктов

В 2000-2010гг. сократилось число выделяемых при проведении серологических исследований положительно реагирующих животных. Так если в 2000г. уровень инфицированности коров составлял 32,6%, то в 2010г. этот показатель снизился в 6 раз (до 5,2%) (рис. 3).

Рисунок 3 - Динамика результатов серологических исследований на лейкоз в Тюменской области (2000-2010 гг.)

■ выявленно инфицированных животных %

Заметно снизилось гематологическое проявление лейкоза. В 2000г. было выявлено больных лейкозом животных 3451 голов (2,2%) от исследованного поголовья, к 2010г. количество больных животных сократилось в 2 раза и составило 1462 гол. (1,1% от общего инфицированного поголовья) (рис. 4).

Рисунок 4 — Результаты гематологического исследования крупного рогатого ско та на лейкоз в Тюменской области (2000-2010 гг.)

6000 5000 4000 3000 2000 1000 0

■ выделено гематологически больных животных, гол.

Эффективности реализуемой программы оздоровления во многом способствовали заинтересованность в получении положительных результатов со стороны руководителей сельскохозяйственных предприятий, профессионализм специалистов и четкая координация действий со стороны Управления ветеринарии Тюменской области.

При проведении оздоровительных противолейкозных мероприятий во всех субъектах одним из основных вопросов являлась оценка эффективности используемых диагностических тестов.

В связи с этим нами были проведены исследования, позволившие определить эффективность применения диагностических тестов на разных

этапах оздоровления, в том числе с целью выявления инфицированных живо тных на ранних стадиях.

2.2.3. Определение чувствительности комплексов диагностических тестов (РИД, ИФА, ПЦР) и эффективности их применения на разных этапах оздоровления скога от вируса лейкоза КРС.

Для диагностики лейкоза крупного рогатого скота используются различные методы - РИД, ИФА, ПЦР. Разные время постановки реакций, стоимость проведения исследований, точность выявления вируса, чувствительность методов - вызвали необходимость проведения сравнительных опытов на поголовье с разным уровнем инфицированное™.

По данным многочисленных авторов, ни один из методов (РИД, ИФА, ПЦР) не позволяет полностью выявить всех животных - вирусоносителей По данным многих исследователей эффективность РИД составляет - 75,3-76,1%, ИФА - 83,3%, ПЦР - 92,2%. (М.И. Гулюкин, 2008, П.Н. Смирнов, 2008, Н.Г. Двоеглазов, 2009, JI.K. Эрнст, 2009). Для достижения наибольшего эффекта желательно комбинированное использование серологических и генно -молекулярных методов.

В связи с этим, одной из задач наших исследований являлась оценка эффективности применения РИД, ИФА, ПЦР при диагностике лейкоза крупного рогатого скота, особенно среди поголовья находящегося на разных стадиях оздоровления.

Исследования выполнены на поголовье 10 животноводческих предприятий 3-х районов Тюменской области. Всего исследовано 2700 проб крови, в том числе в РИД - 900, ИФА - 900, ПЦР - 900. Из коров возрастом 4-5 лет были сформированы 3 труппы: 1 - здоровые животные, 2 - животные из оздоравливаемых МТФ и 3 - животные из неблагополучных ферм.

На протяжении 3-х месяцев были проведены комплексные лабораторные диагностические исследования одновременно в РИД, ИФА и ПЦР. Данные по проведенным исследованиям отображены в таблице 3.

Таблица 3 - Результаты диагностических исследований коров

Группы исследуем ых животных Количество проб взятых на исследования (п) Выявлено (+)

РИД % ИФА % ПЦР % % подтвержденных результатов

Группа 1 900 0,7 0,1 0 0,0

Группа 2 900 2,5 2,3 4,8 4,8

Группа 3 900 10,5 11,9 15,9 15,6

Проанализировав полученные данные, мы пришли к выводу, что в оздоравливаемых гуртах ферм (группа 2) с минимальным процентом инфицированных животных (менее 3%) и среди здоровых животных (группа 1) при проведении заключительной стадии лабораторных исследований наиболее оправдана практика применения реакции ПЦР в комплексе с постановкой других исследований (РИД, ИФА). Полимеразная цепная реакция, как наиболее чувствительный метод, позволяет контролировать результаты серологических исследований и выявлять скрытых носителей ВЛ КРС.

По многочисленным данным при проведении диагностических исследований ИФА и ПЦР выявляют дополнительно 18-20% инфицированных животных среди РИД негативного поголовья (М.И. Гулюкин, 2005, Е.А. Гладырь, 2006, Е.В. Дробот, 2007, Ф.Ф. Зинатов, 2008, И.М. Донник, 2009). Проведенными исследованиями подтверждена эффективность применения ИФА исследований «групповых» проб. Возможность исследования сборных проб позволяет снизить затраты необходимые при выполнении оздоровительных мероприятий, сократить сроки постановки и учета реакций, снизить риск от нахождения инфицированных животных среди общего поголовья.

В хозяйствах с высоким процентом инфицированное™ животных вирусом лейкоза (группа 3) целесообразно использование на начальных этапах оздоровительной программы традиционных методов лабораторных исследований - РИД, ИФА, с введением ПЦР диагностики на заключительных стадиях.

В целом применение практики исследований проб крови иолимеразной цепной реакцией одновременно с другими серологическими методиками

позволяет провести наиболее тщательную и полную очистку поголовья хозяйств от животных-вирусоносителей.

2.2.4. Оценка экспериментальных комплексных исследований по выявлению вирусоносителей ИЛ КРС на ранней стадии инфицирования с использованием диагностических тестов РИД, ПЦР

В настоящее время основным методом диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота является серологический - реакция иммунодиффузии (РИД).

Основным вопросом, при выявлении вирусоносителей среди популяции КРС, является снижение возрастного порога исследуемого поголовья (Е.А. Гладырь, 2006 г., Ф.Ф. Зинатов, 2009 г., И.М. Донник, 2010 г.).

Согласно действующих «Правил по борьбе с лейкозом крупного рогатого скота» диагностические исследования молодняка начинают проводить с 6-ти месячного возраста. При этом, как правило, до достижения этого возраста молодняк, полученный от коров инфицированных вирусом лейкоза и здоровых коров, содержится совместно. Существующие традиционные методы диагностики РИД и ИФА не обнаруживают всех инфицированных животных, так как при их применении, нет возможности дифференцировать материнские антитела от антител телят инфицированных ВЛ КРС (В.В. Храмцов, 2007, G. Monti et ai., 2005).

Внедрение в систему оздоровительных мероприятий при лейкозе практики ранней диагностики вирусоносительства позволило бы ускорить процесс ликвидации инфекции в стадах и повысило эффективность процедуры контроля качества проведенных оздоровительных мероприятий.

С этой целью нами были проведены исследования крови и сыворотки крови полученной ог телят возрастом 15-20 дней. Диагностику осуществляли с применением диагностических тестов РИД и ПЦР.

Опыт проводился в 5 животноводческих хозяйствах 3 районов Тюменской области. В группу исследуемых животных были включены телята в возрасте 15-20 дней, рожденные от серонегагивных (группа 1) и

серопозитивных (группа 2) коров. Группы формировали из животных одного возраста. Телят, использовавшихся в эксперименте, содержали изолированно от остального приплода. Всего отобрано и исследовано 184 пробы крови и сыворотки крови.

Исследования проводили в отделе лабораторной диагностики ГНУ Уральского НИВИ и районных ветеринарных лабораториях. С целыо получения наиболее обьективных результатов пробы поступали в кодированном виде, постановка реакций и учет результатов проводили согласно требований методик тест-систем.

Результаты показали, что при постановке ПЦР (таблица 4) первые положительные реакции получены среди телят 2-й группы уже в возрасте 15-20 дней (ПЦР - у 32 животных, РИД - у 28 животных). При этом у 18 животных получено совпадение (РИД, ПЦР) положительных реакций.

Проведенные последующие исследования (ПЦР и РИД), подтвердили первоначальные результаты. При этом на протяжении опыта в ПЦР выявляли положительные результаты более стабильно. При этом, случаи положительного реагирования в РИД имели нестабильный и неповторяющийся характер.

Таблица 4 - Результаты диагностических исследовании телят 15-20 дневного возраста.

Группы Количество Выявлено (+)

исследуемых проб крови РИД ПЦР РИД+ПЦР Кол-во

животных (п) (+) (+) (+) подтвержденных

результатов

Группа 1 64 2 - - _

Группа 2 120 28 32 18 30

Среди телят контрольной группы (1-й) телят, полученных от РИД (-) коров, отмечено появление единичных положительных результатов, что возможно, объясняется перекрёстной контаминацией проб крови при отборе и хранении материала.

В 6 месяцев всех животных контрольной и опытной групп повторно исследовали на вирусоносительство ВЛ КРС. Подтверждено наличие вируса

лейкоза КРС в 30 пробах крови, полученной от ранее реагировавших по ПЦР телят 2 группы. Не было подтверждено вирусоносительство у 2-х телят (6,25%).

Таким образом, по итогам опыта можно заключить, что полимеразная цепная реакция выявляет вирусоносителей BJ1 КРС с 15 дневного возраста и положительная реакция сохраняется весь период наблюдения. Использование для этих целей только РИД позволяет диагностировать вирусоносителей не ранее 4 месячного возраста телят.

3. Выводы

1. Распространение лейкоза крупного рогатого скота зарегистрировано среди поголовья животноводческих предприятий на всей территории Уральского Федерального округа. Установлено, что инфекция имеет широкое территориальное распространение с поражением скота в общественном секторе и среди животных граждан: в Курганской области -13,3%, Челябинской области -17,8%, Тюменской области -5,1%, Свердловской области -0,2%. Широкому и неравномерному распространению заболевания на территории региона способствуют отсутствие региональных оздоровительных программ.

Наиболее благополучная эпизоотическая ситуация отмечена на территории Свердловской области, где за 10 лет оздоровлено 99,4% неблагополучных по лейкозу пунктов.

2. Разработанные научно-обоснованные программы оздоровления реализуются наиболее успешно в сельхозпредприятиях Тюменской области, в которой за 5 лет оздоровлено 189 неблагополучных пунктов из 307имеющихся (61,5%).

В Курганской области количество неблагополучных пунктов за последние 5 лет несколько снизилось: со 112-ти - в 2007г. до 109-ти - в 2011г. В Челябинской области отмечена тенденция увеличения числа неблагополучных по лейкозу пунктов с 60 в 2001г. до 199 в 2011г., что вероятно связано с увеличением количества животных, подвергаемых диагностическим исследованиям.

3. Изучена сравнительная эффективность применения комплекса лабораторных диагностических исследований (РИД, ИФА, ПЦР) в стадах находящихся на различных стадиях оздоровления. Подтверждена целесообразность и практическая значимость использования ПЦР диагностики на заключительных этапах противолейкозных программ, позволяющая выявлять дополнительно 18-20% животных-вирусоносителей.

4. Применение ПЦР для диагностики возбудителя лейкоза среди молодняка в 15-дневном возрасте наряду с серологическими методами исследований позволяет своевременно изолировать инфицированных животных и более результативно формировать здоровое поголовье в оздоравливаемых стадах.

5. На основании результатов выполненных исследований разработана и усовершенствованная научно-обоснованная система оздоровительных противолейкозных мероприятий в неблагополучных популяциях крупного рогатого скота. Внедрение системы в сельскохозяйственных организациях 3-х районов Тюменской области позволило в течение 2010-2011гг. ликвидировать

заболевание в 7-ми фермах.

6. Экономическая эффективность проведенной за 3 года работы составила

58163,4 тыс. рублей.

Практические предложения

Рекомендовано проводить в оздоравливаемых гуртах первое диагностическое исследование молодняка в возрасте 15-20 дней с применением ПЦР. Второе исследование необходимо проводить в 3-х месячном возрасте, при этом в качестве диагностической реакции лучше применять ИФА, как более чувствительный к выявлению вирусоносителей при низком уровне антител. С 6-ти месячного возраста все поголовье следует исследовать в РИД.

Регулярный эпизоотологический анализ диагностических исследований на лейкоз позволяет своевременно корректировать в сельскохозяйственных организациях оздоровительные программы и тем самым повышать их эффективность.

Список работ опубликованных но теме диссертации

1. Лысов A.B. Эффективность методологической системы построения оздоровительных противолейкозных мероприятий на Среднем Урале / A.B. Лысов, И.М. Донник, А.Т. Татарчук, М.П. Михеев, М.В. Петропавловский, H.A. Корнилов, Т.Н. Мальцева // Сборник научных статей, вып. 10 № 4, Львов, Украина, 2009. - с.262-268.

2. Лысов A.B. Методология снижения инфицированности животных вирусом лейкоза в оздоравливаемых стадах крупного рогатого скота / A.B. Лысов, И.М. Донник, А.Т. Татарчук, М.П. Михеев, М.В. Петропавловский // Научно-практические рекомендации, г. Екатеринбург: Уральское издательство, 2009. - 124 с.

3. Лысов A.B. Региональная молекулярно - генетическая структура вируса лейкоза крупного рогатого скота/ A.B. Лысов, И.М. Донник, А.Т. Татарчук, М.П. Михеев, М.В. Петропавловский, C.B. Садчикова // Жури. Ветеринария Кубани, Краснодар, 2010. - №3. - С.12ЛЗ.

4. Лысов A.B. Чувствительность и специфичность диагностических тестов (РИД, ИФА, ПЦР) в выявлении вирусоносителей ВЛ КРС среди оздоравливаемого от лейкоза поголовья крупного рогатого скота/ A.B. Лысов, И.М. Донник, А.Т. Татарчук, М.П. Михеев, М.В. Петропавловский, C.B. Садчикова // Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики болезней животных и птиц: Сборник научных трудов ведущих ученых России и Зарубежья. Вып. 3. - Уральское издательство, г. Екатеринбург, 2009. с. 113-118.

5. Лысов A.B. Особенности течения и распространения лейкоза крупного рогатого скота в Челябинской области/ A.B. Лысов, И.М. Донник, А.Т. Татарчук, М.В. Петропавловский, Ю.Ф. Водиченков, М.П. Михеев// Жури. Аграрный вестник Урала, Екатеринбург, 2010. -№ 10.

6. Лысов A.B. Способ ранней диагностики лейкоза у молодняка крупного рогатого скота/ A.B. Лысов, И.М. Донник, А.Т. Татарчук, А.Г. Исаева, Е.В. Печура, М.П. Михеев, М.В. Петропавловский // Методические рекомендации, г. Екатеринбург: Уральское издательство, 2010. - 35 с.

На правах рукописи

ЛЫСОВ АЛЕКСЕЙ ВИКТОРОВИЧ

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СИСТЕМЫ ОЗДОРОВИТЕЛЬНЫХ

ПРОТИВОЛЕЙКОЗНЫХ МЕРОПРИЯТИЙ В СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ОРГАНИЗАЦИЯХ УРАЛЬСКОГО

РЕГИОНА

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой с тепени кандидата ветеринарных наук

Подписано в печать 12.03.2012. Формат 60 х 84 1/16. Бумага для множительных аппаратов. Печать офсетная.

Гарнитура Times New Roman. Объем 1,0 п.л. Тираж 100. Заказ № 179

Отпечатано в типографии ООО «Таймер» Адрес: 620219, г. Екатеринбург, ул. Луначарского, 136.

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Лысов, Алексей Викторович, Екатеринбург

61 12-16/136

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ УРАЛЬСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СИСТЕМЫ ОЗДОРОВИТЕЛЬНЫХ ПРОТИВОЛЕЙКОЗЦЫХ МЕРОПРИЯТИЙ В СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ОРГАНИЗАЦИЯХ УРАЛЬСКОГО РЕГИОНА

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: Заслуженный ветеринарный врач Российской Федерации, кандидат ветеринарных наук, Татарчук Александр Терентьевич

Екатеринбург - 2012

Содержание

ВВЕДЕНИЕ.....................................................................4

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.............................................11

1.1. Биологические, эпизоотологические, патогенетические и иммуногенетические аспекты ВЛКРС.................................11

V

1.2. Распространение вируса лейкоза крупного рогатого скота в субъектах Российской Федерации...........................23

1.3. Характеристика основных методов прижизненной

диагностики вируса лейкоза..............................................31

1.3.1. Клиническая диагностика........................................32

1.3.2. Гематологический метод....................................34

1.3.3. Серологические методы ....................................39

1.3.3.1. Реакция иммунодиффузии в геле агара (РИД)..39

1.3.3.2. Метод иммуноферментного анализа (ИФА).....44

1.3.4. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)..................46

1.4. Организация противолейкозных мероприятий в Российской Федерации и за рубежом.................................52

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.......................63

2.1. Материалы и методы исследований........................63

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ..........................67

2.2.1. Распространение лейкоза крупного рогатого скота и территориальные особенности проявления болезни в популяциях животных......................................................67

2.2.2. Распространение лейкоза крупного рогатого скота на территории Уральского Федерального округа.................70

2.2.3. Определение чувствительности комплексов диагностических тестов (РИД, ИФА, ПЦР) и эффективности их применения на разных этапах оздоровления скота от вируса лейкоза КРС...................................................................92

2.2.4. Оценка экспериментальных комплексных исследований по выявлению вирусоносителей ВЛКРС на ранней стадии инфицирования с использованием диагностических тестов РИД, ПЦР...................................108

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.. .116

4. ВЫВОДЫ...........................................................124

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ........................126

6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ......................................127

7. ПРИЛОЖЕНИЕ...................................................141

к \ к

ВВЕДЕНИЕ

Актуальности темы.

В структуре инфекционной патологии лейкоз занимает лидирующее место в Российской Федерации и составляет более 60% от числа инфекционных заболеваний (М.И. Гулюкин, 2011).

Широкое распространение лейкоза в

сельскохозяйственных предприятиях всех форм собственности приносит огромный экономический ущерб животноводству, в том числе племенному, требует значительных затрат на проведение оздоровительных мероприятий. Болезнь поражает в первую очередь высокопродуктивных коров, что является прямой угрозой национальному генофонду крупного рогатого скота страны (H.A. Мальцева с соавт., 2003; И.М. Донник, 2001, 2005; С.И. Логинов, 2005; В.В. Храмцов,

М.А. Ам и рок о в, 2006).

Установлено снижение питательной ценности молока инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота коров из-за уменьшения содержания в нем показателей общего белка и суммы аминокислот, в том числе пяти незаменимых (валина, лейцина, метионина, фенилаланина, триптофана) и семи заменимых (H.H. Смирнов, 2002; М.И. Гулюкин, Л.А. Лопунов, А.Ф. Валихов, 2009).

Отсутствие средств терапии и профилактики, социальная значимость данной нозологии определяют актуальность фундаментальных и прикладных исследований по данной проблеме (А.Т. Татарчук с соавт.,2008; Г.А. Симонян, 2005; П.II. Смирнов с соавт., 2007; Л.К. Эрнст,

H.A. Зиновьева, 2008; М.И. Гулюкин, 2008, 2009; И.М. Донник с соавт., 2000, 2008, 2010;).

В настоящее время наукой достигнуты значительные успехи в изучении этиологии, патогенеза, эпизоотологии, генетике, патоморфологии, диагностике и других аспектах лейкозного заболевания. Однако ряд вопросов, в том числе по профилактике и борьбе с лейкозом, остаются недостаточно изученными, а некоторые требуют усовершенствования с учетом развития современной науки.

Перечисленные выше проблемы и вопросы определяют современную потребность ветеринарной практики в новых научно-обоснованных рекомендациях по диагностике, факторам передачи, мерам борьбы и профилактике лейкоза крупного рогатого скота.

Особого внимания требует повышение эффективности оздоровления от инфекции в условиях экологических, экономических особенностей регионов и отдельных субъектов (М.И. Гулюкин, 2009; А.Т. Татарчук, 2010).

В настоящее время основным методом диагностики лейкоза крупного рогатого скота является серологическое исследование с применением реакции иммунодиффузии (РИД). Однако недостаточно высокий предел чувствительности РИД при выявлении животных - вирусоносителей лейкоза (ВЛКРС) (П.Н. Смирнов, 1989; М.И. Гулюкин, 2001; В.В. Храмцов, 2007; И.М. Донник, 2008) заставляет изыскивать новые или усовершенствовать имеющиеся методы диагностики. Высокая эффективность применения иммуноферментного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР), при проведении комплексных оздоровительных мероприятий, позволяют выявить наибольшее число животных на ранних стадиях

вирусоносительства (В.А. Бусол, 1987; А.Т. Татарчук, 2010; Ю.П. Смирнов, 1995; М.И. Гулюкин, 2001; А.Н. Шаров, 2006; G. Monti et а!., 2005; А.И. Клименко, 2008; И.М. Донник, 2010; Зиновьев с соавт., 2011).

Все перечисленные вопросы весьма актуальны и требуют эффективного, научно-обоснованного и

практического решения во многих субъектах Российской Федерации, в том числе в Уральском регионе.

Цель исследований: провести комплексную оценку факторов влияющих на особенности проявления и распространения лейкоза крупного рогатого скота и с учетом региональных экологических и экономических условий усовершенствовать систему обеспечивающую благополучие по данной нозологии.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию по лейкозу на • территории региона в зависимости от географического расположения, технологии содержания и возраста животных.

2. Определить чувствительность комплексов диагностических тестов (РИД, ИФА, ПЦР) и эффективность их применения на разных этапах оздоровления животных от вируса лейкоза.

3. Изучить возможность ранней диагностики инфицированных возбудителем лейкоза (BJ1KPC) животных с помощью комплексных серологических и молекулярно-генетических методов исследований.

4. На основании полученных данных усовершенствовать научно - обоснованную систему

противолейкозных мероприятий, обеспечивающую

благополучие молочных ферм по лейкозу крупного рогатого скота, и дать оценку ее результативности.

Научная новизна.

На основании исследований изучена динамика эпизоотической ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в административно-территориальных зонах региона за 8 лет. Установлены в динамике различные уровни стабилизации и изменения показателей вирусоносительства, числа неблагополучных пунктов, заболеваемости в регионе. Показано, что внедрение в 1992-2005гг. научно обоснованной системы ликвидации лейкоза КРС в Свердловской области позволило оздоровить 99,4% неблагополучного в отношении данной инфекции поголовья. Применение ранней диагностики инфицированного возбудителем молодняка с использованием Г1ЦР наряду с серологическими методами исследований, позволяет выявлять 93% телят-вирусоносителей.

Практическая значимость и реализация результатов исследований.

Разработаны схемы оздоровления поголовья крупного рогатого скота сельскохозяйственных предприятий с учетом комплекса экономических, социальных и эпизоотологических особенностей субъекта и отдельных сельскохозяйственных предприятий.

Внедрение программы оздоровления поголовья сельскохозяйственных предприятий позволило снизить инфицированность в Тюменской области в 6 раз (с 32,6% в

2001г. до 5,2% в 2010г.), оздоровить за 10 лет 189 неблагополучных пунктов (61%).

По результатам исследований подготовлено 3 научно-практических рекомендаций, утвержденных НТС МСХиП Свердловской области: «Методология снижения

инфицированности животных вирусом лейкоза в оздоравливаемых стадах крупного рогатого скота», г.Екатеринбург, 2009; «Способ ранней диагностики лейкоза у молодняка крупного рогатого скота», г. Екатеринбург, 2010; «Экспериментальные данные по эффективности

диагностических исследований на ранних стадиях вирусоносительства лейкоза крупного рогатого скота», г. Екатеринбург, 2011; а также 2 научно-практических рекомендации, утвержденные управлением ветеринарии Тюменской области: «Разработка и внедрение комплексной программы противолейкозных мероприятий направленных на снижение уровня инфицированности поголовья КРС вирусом лейкоза в сельскохозяйственных предприятиях Тюменской области», 2010; «Проведение противолейкозных научно-исследовательских работ в сельскохозяйственных предприятиях Заводоуковского, Упоровского и Ялуторовского районах Тюменской области. Разработка схем заключительных оздоровительных противолейкозных мероприятий для сельскохозяйственных предприятий», 2011.

Экономический эффект от внедрения в 2009-2011 годах составил 58163,4 тыс. рублей.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Эпизоотический анализ распространения лейкоза КРС в Уральском регионе в зависимости от географического расположения территорий, возраста животных.

2. Динамика выявления вирусоносителей возбудителя лейкоза в сельскохозяйственных организациях Тюменской области.

3. Определение чувствительности комплексов диагностических тестов (РИД, ИФА, ПЦР) и эффективности их применения на разных этапах оздоровления скота от вируса лейкоза КРС.

4. Результативность усовершенствованной научно-обоснованной системы оздоровительных противолейкозных мероприятий в сельскохозяйственных предприятиях Свердловской и Тюменской областей.

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях, семинарах, совещаниях, в том числе:

Международной научно-практической конференции посвященной 50-ти летнему юбилею института эпизоотологии УААН (Украина, г.Ровно, 2009);

Всероссийской межрегиональной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики хронических инфекций и патологии животных» (г.Омск, 2009);

Международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики, лечения и

профилактики инфекционных болезней животных и птиц» (г.Екатеринбург, 2009, 2010);

производственных совещаниях специалистов Уральского региона;

на ученых советах ГНУ Уральского НИВИ РАСХН (г. Екатеринбург, 2009-2011).

Публикации.

По теме диссертации опубликованы 6 научных работ, в том числе: 2 в изданиях рекомендованных ВАК РФ (журнал «Ветеринария Кубани» - 1, журнал « Аграрный вестник Урала» - 1), 1 в зарубежном издании (научно-технический бюллетень «Института биологии животных У А АН»). Издано 2 научно-практических рекомендации.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 140 страницах печатного текста и включает разделы: введение, общая характеристика работы, обзор литературы, собственные исследования, материалы и методы, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 15 рисунками. Список литературы включает 150 источников, в том числе 50 источников зарубежных авторов.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биологические, эпизоотологические, патогенетические и иммуногенетические аспекты В Л КРС

Наряду с другими злокачественными заболеваниями кроветворной системы - гемобластозы - одна из наиболее актуальных проблем современной онкологии, решение которой даст возможность целенаправленно воздействовать на него (В.М. Бергольц с соавт., 1978; Л.Г. Бурба, 1979; В.П. Шишков, 1988; М.И. Гулюкин, 1990; А.Г. Незавитин, 1995 и др.).

Лейкоз крупного рогатого скота (гемобластоз) -инфекционное хроническое заболевание опухолевой природы, характеризующееся поражением кроветворной системы с проявлением специфической иммунной реакции,

лимфоцитозом, опухолеподобных образований в органах и тканях организма. Злокачественное перерождение клеток кроветворных органов с нарушением процессов их созревания является определяющим признаком возникновения и развития заболевания (Н.М. Temin, 1971; P.B. Петров, 1982; R.A. Weise, 1984; P.A. Кукайн, 1985; Ф.Л. Киселев с соавт., 1990).

Работы зарубежных и отечественных ученых (G. Bederke et al., 1968; Л.Г. Бурба с соавт., 1977; В.А. Крикун с соавт., 1977; А.Ф. Валихов, 1978; J.A. Robetsson et al., 1977; Swanstrom R., 1990) позволили внести значительный вклад в развитие основных фундаментальных и прикладных направлений по лейкозу крупного рогатого скота.

Вирус лейкоза впервые выделен в 1969 году и, согласно решения Международного Комитета по таксономии вирусов (iCTV), возбудитель лейкоза классифицирован как РНК

содержащий опухолевый вирус семейства Retroviridae, включающий в себя 9 родов.

На первых этапах вирусологических исследований материала полученного от больных лейкозом коров были выявлены вирусные частицы типа С (В.М. Жданов с соавт., 1974, A.M. Коломиец с соавт., 1978; Р.А. Кукайн с соавт., 1979; J.M. Miller et al., 1972; R. Callahan et al., 1976). Это открытие позволило установить вирусную природу лейкоза крупного рогатого скота и признать вирус основным этиологическим агентом заболевания (В.П. Шишков с соавт., 1981).

У ретровирусов высокой вариабельностью отличаются поверхностные белки. Наиболее изучен у вируса лейкоза крупного рогатого скота полиморфизм гена env-gp51.

Gp51 - главный оболочечный гликопротеид, который играет решающую роль в жизненном цикле вириона и является важной детерминантой вирусной инфекционности, содержит эпитопы связывания с клеточными рецепторами, индукции образования синцития, сигналов трансактивации слияния мембраны клеток и поэтому его нуклеотидная последовательность является хорошим геномным маркером в изучении особенностей географического распределения генотипов ВЛ КРС (В. Н. Сюрин и соавт., 1998; Е.В. Дробот, 2007, Н.В. Грачева, 2010; R. Kettman et al., 1981; R.Z. Mamoun et al., 1990; J. Con 1st on et al., 1990; M.A. Sommerfelt, 1999; H. Fechner et al., 1997; D. Beier et al., 2001; E. R. Johnston et al., 2002; M. Li curs i et. al., 2002; Asfaw Y. et al., 2005).

Проведенные исследования по генетической изменчивости гена env ВЛ КРС показали, что существующие различия между отдельными изолятами в мире не столь велики (Е. Portetelle

et. al., 1989; J. Coulson et. al., 1990). Такое низкое генетическое разнообразие может быть связано с относительно невысокой изменчивостью вируса (L. Will cms et. al., 1993).

Однако исследования, основанные на анализе полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ), позволили классифицировать среди штаммов вируса лейкоза крупного рогатого скота до семи различных генотипов, предполагая что вирус лейкоза более разнообразнее, чем ожидалось ранее (Н. Fechner et al., 1997; М. Licursi et al., 2002; Asfaw Y. et al., 2005).

На основе анализа полученных данных недавно была предложена новая классификация штаммов вируса лейкоза крупного рогатого скота на семь различных генотипов (S. Rodriguez et al., 2009).

На основании метода полиморфизма длин рестрикционных фрагментов и ДНК секвенирования вируса лейкоза крупного рогатого скота классифицировано три подгруппы вируса -Бельгийская, Австралийская и Японская (R. Z. Mamoun et al., 1990; Е. Molteni et al., 1996; D. Beier et al., 2001; И.М. Донник с соавт., 2010) (рисунок 1).

Рисунок 1 - Филогенетическое дерево штаммов вируса лейкоза крупного рогатого скота, выделенных в различных странах мира, в том числе в Уральском регионе РФ (М.В. Петропавловский, 2010. Автореферат диссертации к.в.н., 2010).

Среди домашних животных наиболее часто встречаются представители рода Т-клеточного лейкоза человека типа 1 и II, вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), вирус

лейкоза обезьян и род лейковирусов, состоящий из 5 подродов (М.И. Гулюкин, Н.В. Замараева, 1997).

Характерным свойством ретровирусов является наличие у них уникального фермента РНК-зависимой ДНК-полимеразы (ревертазы), способного синтезировать вирусспецифическую ДНК на матрице геномной РНК ретровируса. Это позволяет вирусному геному полностью или частично включаться в геном клетки хозяина и долгое время существовать в форме провируса.

В период латентной алимфатическои стадии, который может продолжаться от нескольких месяцев до нескольких лет, у животных не наблюдают каких либо клинических признаков заболевания (Л.Б. Прихвалитов с соавт., 2001; Н.С. Мандыгра, 2003).

В зависимости от степени распространения опухолевых клеток в организме лейкозы классифицируют на системные и опухолевые.

При системных лейкозах (лимфоидный и миелоидный лейкозы, злокачественный ги�