Анализ современных методов диагностики и ветеринарно-санитарная экспертиза мяса при лейкозе крупного рогатого скота

Рудакова, Оксана Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Анализ современных методов диагностики и ветеринарно-санитарная экспертиза мяса при лейкозе крупного рогатого скота
ВАК РФ 06.02.05, Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

Автореферат диссертации по теме "Анализ современных методов диагностики и ветеринарно-санитарная экспертиза мяса при лейкозе крупного рогатого скота"

На правах рукописи

РУДАКОВА Оксана Николаевна

АНАЛИЗ СОВРЕМЕННЫХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ И ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ ЭКСПЕРТИЗА МЯСА ПРИ ЛЕЙКОЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

06.02.05 - ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и встеринарно-санитарная экспертиза

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

- 3 ДЕК 2010

Москва-2010

004616215

Работа выполнена на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Меньшикова Зииаида Николаевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, ст. научный сотрудник

Лавина Светлана Алексеевна

кандидат ветеринарных наук, доцент Чебакова Галина Викторовна

Ведущая организация - ГОУ ВПО «Российский университет дружбы народов»

Защита состоится « года в часов на заседании

диссертационного совета Д 22ш)42.05 упри ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23; тел.(495) 377-93-83

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23).

Автореферат разослан 2010 года и размещен на сайте http://mgavm.ru/

Ученый секретарь .

диссертационного совета Волчкова Л.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Важным условием продовольственной безопасности нашей страны является производство достаточных по объему, доброкачественных, экологически безвредных и полноценных продуктов питания животного происхождения. Сдерживающими факторами в обеспечении населения такими продуктами являются антропогенные составляющие: нарушение правил гигиены и ветеринарно-санитарной экспертизы при откорме, убое и доставке продуктов переработки животного сырья потребителю, недостаточная разработка современных критериев оценки качества продуктов убоя животных (Москалик P.C., 2003; Туник А.Н., 2005; Смирнов A.M., 2005; Месрабян Д.С. и соавторы, 2006). Особого внимания заслуживает оценка мяса, получаемого от животных, пораженных различными болезнями, в частности, таким заболеванием как лейкоз, встречающийся во всех субъектах Российской Федерации и многих странах мира.

Лейкоз крупного рогатого скота - хроническое, неопластическое заболевание вирусной этиологии, вызываемое онкорнавирусом типа С - вирусом лейкоза крупного рогатого скота (BJIKPC), характеризуется нарушением механизмов пролиферации лимфоидных клеток и появлением новообразований в различных кроветворных органах и тканях.

Плановые мероприятия по диагностике лейкоза поголовья крупного рогатого скота показывают, что число неблагополучных пунктов по лейкозу в нашей стране увеличивается (Кунаков A.A., Альбикова Г.М., 2002; Гулюкин М.И. и соавторы, 2004; Соколов Д.С., 2004). С 1997г эта болезнь занимает первое место в структуре инфекционной патологии.

Вопросы оздоровления стад от лейкоза сводятся к единственно действенному методу-убою больных и инфицированных BJIKPC животных и замену их здоровыми особями. Поэтому на мясоперерабатывающих предприятиях подвергается убою большое количество инфицированных животных, данные о качестве продукции, получаемой от таких животных, крайне ограничены и неоднозначны.

Согласно нормативным документам (1988г.), в практике отечественных перерабатывающих предприятий мясо инфицированных ВЛКРС, гематологически положительных на лейкоз животных, без морфологических, патанатомических изменений в туше и органах, реализуется без ограничений. Хотя ранее проведенные исследования показали, что туши и внутренние органы больных лейкозом животных, убитых в опухолевой стадии болезни, имеют существенные отклонения от нормы по биохимическим и органолептическим показателям (Пипирас Ю.Ю., 1971; Пахомов Л.Н., 1998; Альбикова Г.М., 2002). Сведения о контаминации продуктов убоя ВЛКРС и качестве продукции, получаемой от животных больных лейкозом, в литературе отсутствуют.

В странах Евросоюза ветеринарный контроль за качеством и безопасностью продуктов животноводства, соответствующий нормативным документам, осуществляется в процессе производства (на ферме, в хозяйстве), с прижизненным исследованием крови, молока, а также тканей животных от выборочного убоя (Смирнов A.M., 2006).

В этой связи использование современных, новых методов для прижизненной и послеубойной диагностики лейкоза, изучения качества продуктов убоя животных, инфицированных ВЛКРС и больных лейкозом, является актуальным и требует внимания специалистов ветеринарно-санитарного профиля.

Цель работы. Цель нашей работы - сравнительное изучение комплекса современных методов прижизненной и послеубойной диагностики лейкоза крупного рогатого скота и определение критериев оценки качества и безопасности продуктов убоя на разных стадиях лейкозогенеза (болезни).

Задачи исследования:

1. Изучить ретроспективные данные по распространению лейкоза крупного рогатого скота в некоторых областях РФ и их корреляцию с послеубойным выявлением болезни;

2. Провести сравнительный анализ информативности клинического, серологического (РИД), гематологического, молекулярно-биологического (ПЦР) и морфологического (электронная микроскопия) методов исследования для прижизненной диагностики лейкоза;

3. Изучить органолептические, физико-химические, гистологические исследования мышечной ткани и внутренних органов при различных стадиях лейкоза;

4. Установить возможность контаминации продуктов убоя крупного рогатого скота вирусом лейкоза и сопутствующими микроорганизмами;

5. Определить пищевую и биологическую ценность мяса больного лейкозом скота;

6. Предложить и научно обосновать критерии ветеринарно-санитарной оценки продуктов убоя крупного рогатого скота при лейкозе.

Научная новизна. Впервые для прижизненной и послеубойной диагностики лейкоза использован комплекс современных диагностических методов исследования, включающий в себя серологические, гематологические, вирусологические, морфологические электронно-микроскопические и молекулярно-биологические (ПЦР) методы исследования.

Определена возможность использования морфофункциональных особенностей лимфоцитов крови в качестве констант предубойной оценки продуктов убоя больных лейкозом животных. -

Изучены эпизоотические особенности распространения лейкоза крупного рогатого скота в некоторых областях Российской Федерации за период 1994-2009 гг. Установлено отсутствие прямой корреляции стадий лейкозного процесса и послеубойного выявления болезни на мясоперерабатывающих предприятиях.

Представлены новые данные ветеринарно-санитарной оценки качества и безопасности продуктов убоя крупного рогатого скота на разных стадиях лейкозогенеза.

Впервые доказана возможность контаминации продуктов убоя животных провирусной ДНК ВЛКРС и его длительная сохранность в мясном сырье. Уточнена пищевая и биологическая ценность мяса при лейкозе.

Практическая значимость. На основании проведенных исследований усовершенствованы и научно-обоснованы данные по ветеринарно-санитраной экспертизе мяса и других продуктов убоя животных, больных лейкозом. Рекомендованы критерии определения санитарной, пищевой и биологической ценности мяса крупного рогатого скота при различных формах и стадиях лейкоза. Полученные данные имеют теоретическое и практическое значение, способствуют совершенствованию диагностики лейкоза, получению экологически чистой продукции и предотвращению распространения этиологического агента данной болезни. Основные результаты проведенных исследований вошли в учебное пособие «Лейкоз крупного рогатого скота (диагностика, ветеринарно-санитарная экспертиза, профилактика и оздоровительные мероприятия)», М. 2005г., утвержденное УМО ВУЗов, действующие рекомендации «Противоэпизоотические мероприятия при лейкозе крупного рогатого скота в фермерских и личных подсобных хозяйствах граждан», М. 2007 г., утверждены на заседании секции «Инфекционная патология животных» отделения ветеринарии РАСХН 15.03.06 г, учебное пособие «Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов убоя сельскохозяйственных животных при лейкозе» утв. УМО вузов РФ по образованию в области ветеринарии и зоотехнии 11.10.2010 №63-138.

Материалы и иллюстрации, представленные в диссертации, используются в учебном процессе по курсу ветеринарно-санитарной экспертизы в ФГОУ ВПО МГАВМ и Б для студентов факультета ветеринарной медицины и слушателей факультета повышения квалификации.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты ретроспективного анализа эпизоотологической ситуации и послеубойного выявления лейкоза крупного рогатого скота в некоторых регионах РФ;

2. Использование современных методов исследования и значимость полученных результатов в оценке доброкачественности, биологической ценности и безопасности продуктов убоя животных на разных стадиях лейкозного процесса;

3. Предложения по ветеринарно-санитарной экспертизе и реализации мяса, продуктов убоя, полученных от крупного рогатого скота на разных стадиях лейкозогенеза.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на международных конференциях: на 4-ой Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции». - М., 2002 г.; на 1-ой Международной межвузовской, научно-практической конференции аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент в науке», посвященной 300-летию Санкт-Петербурга, С-Петербург, 2003 г.; на 4-ой Международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию МГАВМ и Б. - М., 2006 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, в т.ч. 2 в рецензируемых ВАК журналах, 2 учебных пособия, 1 рекомендация.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 135 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследования, выводов, практических предложений. Работа содержит 24 рисунка, 19 таблиц. Библиографический список включает 171 источник, из которых 56 иностранных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

Работа проводилась на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы, в лаборатории инфекционной патологии и биотехнологии (группа по изучению лейкозов с/х животных ФГУ) МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, хозяйствах Выгонического района Брянской области, Можайского района Московской области, на Калужском мясокомбинате, сотрудникам которых мы выражаем искреннюю благодарность за организационно-техническое содействие.

Объектом наших исследований служили 327 голов крупного рогатого скота черно-пестрой породы: из них 233 животных из хозяйства и 88 коров поступивших на мясокомбинат.

Животные по клиническим исследованиям были разделены на следующие группы:

-клинически здоровые коровы, серологически отрицательные в реакции иммунодиффузии (РИД) - 78 головы;

-Клинически здоровые коровы, серологически положительные (РИД+), бессимптомная стадия лейкоза - 214 голов:

Больные коровы;

-серологически положительные (гематологическая стадия болезни) - 35 голов

- опухолевая стадия - 9 голов.

Были изучены статистические данные ветеринарной отчетности и проведена прижизненная и послеубойная диагностика крупного рогатого скота больного лейкозом.

Исследования проводились по стандартным методикам согласно «Методическим указаниям по диагностике лейкоза крупного рогатого скота», М.1999

Гематологические исследования проводили путем подсчета лейкоцитов в камере Горяева, приготовления мазков крови и их окраса по Романовскому-Гимзе, выведением лейкограммы и на гематологическом анализаторе COBAS MIRA (Щвейцария).

Серологические исследования проводили с помощью реакции иммунодиффузии в агаровом геле с гликопротеидным gp антигеном BJIKPC.

Полимеразная цепная реакция. Для определения вирусоносительства ВЛКРС у крупного рогатого скота, кроме реакции иммунодиффузии использовалась полимеразная цепная реакция - один из молекулярно-биологических методов диагностики. Материалом для анализа служили образцы мяса крупного рогатого скота и цельная кровь, взятая из яремной вены в одноразовые вакуумные пластиковые пробирки, содержащие в качестве концентрата ЭДТА. Для проведения исследования использовали диагностический набор серии Pak DNA PCR test BLV(gag).

Электронная микроскопия. Электронно-микроскопические исследования нативных и культивированных in vitro лимфоцитов крови крупного рогатого скота проводили по стандартной методике на электронном микроскопе JEM 100 С на кафедре биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМ и Б. им К.И. Скрябина.

Ветеринарно-санитарную экспертизу туш и внутренних органов проводили согласно «Правилам ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов». Органолептические исследования проводили по ГОСТ 7269-79 «Мяса. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести». Микробиологические исследования туш коров и их внутренних органов проводили по ГОСТ 21237-75 «Мясо. Методы бактериологического анализа». Физико-химические исследования (pH мяса, активности пероксидазы и наличия продуктов первичного распада белков) - по ГОСТу 23392-78 «Мясо. Методы химического и микроскопического анализа свежести мяса» и согласно «Правил ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов», М.1988. Определение влаги проводили по ГОСТ 9793-74 «Мясные продукты. Методы определения содержания влаги», белка - ГОСТ 25011-81 «Мясо и мясные продукты. Методы определения белка», жира - ГОСТ 23042-86 «Мясо и мясные продукты. Метод определения жира». Определение аминокислот проводили на аминокислотном анализаторе после кислотного гидролиза обезжиренной и высушенной навески в вакууме при 105С в течение 24 часов.

Биологическую ценность мяса определяли на основании химических и биологических методов. Санитарное качество мяса и других продуктов, характеризующее их безопасность, определяли согласно П.П. 10.2.11,10.11. «Правил ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов» М.1988 с помощью бактериологических, физико-химических, молекулярно-биологических методов (ПЦР) исследования. Токсичность мяса определяли с помощью реснитчатых инфузорий Tetrachymena pyriformis, которые имеют сходство с высшими организмами по основным параметрам обмена веществ (Долгов. В.А., 1993). Опыты на инфузориях проводили согласно «Методическим рекомендациям по использованию инфузорий Tetrachymena pyriformis для токсико-биологической оценки сельскохозяйственных продуктов», «Методическим рекомендациям для использования экспресс-метода биологической оценки продуктов и кормов» и методическим рекомендациям «Использование инфузорий (Tetrachymena pyriformis) в качестве тест-культуры в приборе «Биотестер-2 (экспресс-метод)».

Цифровой материал экспериментальных исследований обрабатывали согласно «Методическим указаниям к методу вычисления среднеквадратической ошибки и доверительных интервалов средних арифметических величин» (Жаков М.С., 1985; Плохинский H.A., 1979).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Ретроспективный анализ распространения лейкоза

Лейкоз имеет широкое распространение среди крупного рогатого скота на территории Российской Федерации. Количество больных лейкозом животных в последние годы увеличивается, несмотря на снижение общего поголовья крупного рогатого скота по стране в два и более раза.

Были изучены ретроспективные данные по эпизоотологической ситуации, распространению лейкоза в Калужской, Брянской и Московской областях Центрального ФО Российской Федерации и их корреляции с послеубойным выявлением болезни. Поскольку изучение эпизоотологической ситуации является первым звеном в диагностике лейкозов мы проанализировали данные ветеринарной отчетности и боенской статистики по лейкозу крупного рогатого скота за 1994-2009гг и результаты собственных исследований за последние 6 лет.

Анализ ситуации по лейкозу в Калужской области показал, что за весь период исследования инфицированность коров BJ1KPC, определяемая в РИД, сохранялась на высоком уровне, до 41%, гематологически положительных на лейкоз было от 0,84 до 10,6%. При ветеринарно-санитарной экспертизе на мясокомбинатах было выявлено от 53 до 182 лейкозных туш, из них утилизировано лишь 65%.

Московская область была и остается неблагополучной по лейкозу, несмотря на это, как видно из таблицы, количество РИД положительных животных (min 8,3%; max 24,0%) ниже, чем в Калужской области (min 12,0%; max 18,5%), видимо, это связано с тем, что еше не все хозяйства области ведут плановую и интенсивную борьбу с лейкозом. Есть фермы, на которых уничтожение больных лейкозом животных привело бы к уничтожению всего стада.

Наибольший процент инфицированное™ (18,5%) зарегистрирован в Брянской области в 2000 году. Поголовье крупного рогатого скота в последующие годы резко сократилось, с 487834 гол.(1994) осталось 210500 гол.(2009г.) - количество больных лейкозом животных с 1,9% возросло до 4,3%, инфицированность BJ1KPC осталась на высоком уровне до - 14,8%.

70 60 50 40 30 20 10 0

Ulli

dl д д д д ¿Ыйит

NC? NC? & N=? N# ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^

Рис I. Результаты прижизненной и послеубойной диагностики лейкоза у крупного рогатого скота в Калужской области

• — .-

- — ■!

■ — —

. — — И; Ж Ц| 1,Н1 ,,П -"Л л - 1ЙШЕЕ

1994 1996 1998 2000 2002 2004 2007 2009

□ % гем + ■ %РИД +

□ % Утилиз

Рис. 2. Результаты прижизненной и послеубойной диагностики лейкоза крупного рогатого скота в Московской области

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

1--

П " - —

ни- и ь- П п п

1 -1 «Л 41 Л

□ % гем + ■ % РИД +

□ % Уилиз

1994 1996 1998 2000 2002 2004 2007 2009

Рис 3. Результаты прижизненной и послеубойной диагностики лейкоза у крупного рогатого скота в Брянской области

Таким образом, анализ статистических данных по трем областям Центрального ФО России, в хозяйствах, которых мы работали, показал, что несмотря, на совершенствование профилактических мероприятий мер борьбы с лейкозом, уменьшение численности поголовья крупного рогатого скота в два с лишним раза, количество инфицированное™ животных неуклонно растет. Небольшое количество туш и органов с признаками лейкоза, выявляемые на мясокомбинатах, говорит о том, что большинство животных сдают на убой в стадии вирусоносительства, в бессимптомный или субклинический (гематологический) период развития лейкоза и поэтому туши и органы этих животных поступают на реализацию без ограничений.

Сравнительная оценка прижизненных методов диагностики лейкоза крупного

рогатого скота

Исследования проведены на поголовье крупного рогатого скота СПК «Уручье» Брянской области неблагополучной по хроническому лимфолейкозу.

В СПК «Уручье» было проведено клиническое обследование 233 голов крупного рогатого скота (в возрасте 5-8 лет). У 5-ти животных наблюдали опухолевую стадию

лейкоза. Больные коровы угнетены, едят не охотно, много лежат, температура, пульс, дыхание в пределах нормы. Также у них отмечали:

-увеличение разной степени нижнечелюстных, поверхностных паховых, надколенных и параанальных. Лимфатические узлы увеличены в несколько раз, при этом не наблюдали их воспалительных реакций. При пальпации лимфатические узлы плотной консистенции, холодные, безболезненные, подвижные.

- у одного животного выявили опухоли размером 4-6 см под кожей в различных участках тела.

- у другого животного наблюдали экзофтальм

- при ректальном исследовании у 2-х коров обнаруживали увеличение тазовых (глубоких паховых) лимфоузлов. Все животные с опухолевой стадии болезни были старше 5-ти лет.

Серологический метод. Для выявления вирусоспецифических антител мы брали пробы крови от 233 голов крупного рогатого скота черно-пестрой породы и исследовали в реакции иммунодиффузии в агаровом геле (РИД) по стандартной методике. Установлено, что сыворотки крови 155 животных были положительными в РИД к антигенам ВЛКРС, 78 были РИД отрицательными.

Гематологический метод. Гематологический метод заключается в количественной и качественной оценке лейкоцитов периферической крови животных для ранней диагностики болезни на всех стадиях ее развития.

Гематологическим исследованиям подверглись 155 проб крови РИД положительных животных, из них при оценке по «лейкозному ключу» 10 оказались положительными на лейкоз, то есть количество лейкоцитов было от 10,8 тыс до 32,0 тыс/мкл. Процент лимфоцитов выше 70%.

Исследование крови коров с помощью ПЦР. Для постановки ПЦР на выявление провирусной ДНК вируса лейкоза КРС были получены пробы ДНК, выделенные из цельной крови коров. Всего в ПЦР было исследовано 15 проб ДНК крови с праймерами, направленными на выявление вируса лейкоза крупного рогатого скота. Использовали диагностический набор серии Pak DNA PCR test BLV(gag). В качестве положительного контроля использовали ДНК выделенную из перевиваемой культуры клеток почки эмбрионы овцы, хронически инфицированной ВЛКРС (FLK), в качестве отрицательного контроля использовали дистиллированную воду. С помощью ПЦР подтверждено наличие провирусной ДНК вируса лейкоза у серологически положительных животных, а также у отдельных серологически отрицательных животных. Также доказано, что с помощью ПЦР можно выявить положительно реагирующих животных на 10% больше, чем при серологическом методе - РИД.

Электронно-микроскопический метод. Проведены электронно-микроскопические исследования лимфоадных клеток крови 15 животных. 5 клинически здоровых, но серологически положительных, 5 больных лейкозом коров в гематологической стадии и 5 голов в опухолевой стадии болезни. Лимфоидные клетки крови здоровых животных в основном были представлены малыми и средними лимфоцитами с ровной или извилистой поверхностью, изредка встречались менее дифференцированные клетки типа больших лимфоцитов и лимфобластов. У инфицированных ВЛКРС животных в лимфоцитах находили аномальные образования в ядрах лимфоцитов - ядерные карманы, маркеры лейкознотрансформированных клеток. Вирионы вируса лейкоза находили только in vitro в культурах лейкоцитов крови коров на всех стадиях болезни. Данные комплексного исследования животных приведены в таблице 1.

Таблица 1. Комплексное исследование здорового и больного лейкозом крупного

рогатого скота

ЖИВОТНЫЕ КОЛ-ВО ЛЕЙКОЦИТОВ тыс/мкл МВД-МАХ % ЛИМФОЦИТОВ МВД-МАХ ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ

Наличие ВЛКРС т УКГО % лимфоцитов с ЯК на 250КЛ

Контроль Клинически здоровые п-5, РИД-; ПЦР -; 5500-6700 50-60 - -

Инфицированные ВЛКРС п=5,РИД+; ПЦР+ 6960-13500 65-70 + 2,91+0,85

Больные ХЛЛ п=5, Гематологическая стадия РИД +; ПЦР + 13800-21700 80-87 + 7,12+1,61

Опухолевая стадия п=5, ПЦР+ 24200-45100 90-93 + 28,01+5,01

После проведения прижизненных исследований можно сделать вывод, что современные методы прижизненной диагностики гемабластозов позволяют с меньшей (РИД) или большей (ПЦР, электронная микроскопия) степенью достоверности установить наличие вируса лейкоза и наличие лейкознотрансформированных лимфоцитов в периферическом пуле крови крупного рогатого скота на всех стадиях лейкозного процесса.

Рис 4. Фрагмент 48 часовой культуры лейкоцитов крови больной лейкозом коровы х 38000

Рис 5. Ультратонкий срез лимфоцита крови с ядерными карманами, при хроническом лимфолейкозе. (Гематологическая стадия) х 18000

Ветеринарно-санитарная характеристика продуктов убоя при различных стадиях лейкозного процесса у крупного рогатого скота

Материал для проведения послеубойной диагностики и ветеринарно-санитарной экспертизы туш и внутренних органов крупного рогатого скота на разных стадиях

заболевания был собран на убойном пункте в СПК «Уручъе» Брянской области. Калужском и Можайском мясокомбинатах.

На Можайском мясокомбинате при убое 20 коров только у одной определили опухолевую стадию заболевания с изменениями в лимфатических узлах и селезенке. 19 животных были с бессимптомной стадией течения лейкозного процесса.

На Калужском мясокомбинате из 68 животных обнаружено 3 головы в опухолевой стадии. Возраст коров с видимыми изменениями в органах был от 8 до 10 лет. 25 животных поступивших на мясокомбинат были гематологически положительными и 40 серологически положительными.

При послеубойном осмотре туш и органов больных лейкозом животных установлено, что опухолевые образования в большей мере появляются у животных с количеством лейкоцитов в крови 25-30 тыс/мкл и содержанием лимфоцитов 75-80%.

Патологоанатомические исследования. В бессимптомной стадии (РИД+) в тушах и органах животных не было обнаружено патологоанатомических изменений, свойственных хроническому лимфолейкозу. При послеубойной осмотре туш и органов животных во II и Ш-ей стадиях развития лейкозного процесса отмечали разную степень увеличения селезенки, лимфоузлов, печени, сердечной мышцы и других органов. На рисунках 6,7 хорошо видны типичные лейкозные поражения.

Рис. 6. Лимфоидный лейкоз. Рис. 7. Увеличение надвымянного лимфоузла.

Селезенка увеличена, капсула напряжена. Разроет лимфоидной ткани, казеозный некроз.

Гистологические исследования. После проведения гистологических исследований были выявлены структурные изменения мышечной ткани и органов в зависимости от степени поражения животного лейкозным процессом. Особенно отмечали выраженные поражения в соединительнотканной строме лимфоузлов и органов за счет инфильтрации опухолевой тканью, атрофию паренхимы, замещение ее лейкозной тканью, очаговые кровоизлияния, казеозный некроз в пораженных участках органов и тканей. Все эти изменения встречались только у животных в гематологической и опухолевой стадии болезни.

Рис.8. Подвздошный лимфотический узел. Лимфоидная инфильтрация мозговых синусов при хроническом лимфолейкозе. Окр. гем.-эозином

Рис. 9. Сердце. Лимфоидная инфильтрация миокарда при хроническом лимфолейкозе. Окраска гем.-эозином. Ув 20x40

Органолептическая оценка мяса крупного рогатого скота больного лейкозом.

Для органолептического исследования нами были взяты пробы мяса от 93 голов крупного рогатого скота больного лейкозом и 10 проб мяса от здорового крупного рогатого скота контрольной группы. Первоначально осматривали туши для определения внешнего вида и цвета туши, консистенции мяса, запаха, прозрачности и аромата бульона. При оценке качества мяса, полученного при убое крупного рогатого скота больного лейкозом, особенно при его хранении, одним из основных контрольных показателей считается свежесть. Она характеризует степень глубины изменения мяса, которую оценивают в зависимости от уровня расщепления белков и их производных, окислительных изменений жира при длительном контакте с кислородом воздуха.

В настоящее время принята следующая классификация свежести мяса: свежее, сомнительной свежести и несвежее. Результаты органолептического исследования представлены в таблице 2.

Таблица 2. Органолептические показатели туш и мяса крупного рогатого скота больного лейкозом

НАИМЕНО ВАНИЕ ГРУППЫ ЖИВОТНЫХ НА РАЗНЫХ СТАДИЯХ ХЛЛ

Контрольная п=10 Инфицированные ВЛКРС п=59, РИД+; ПЦР+ Больные ХЛЛ п=25, Гематологическая стадия Опухолевая Стадия п=9

1 2 3 4 5

Внешний вид и цвет: •поверхности туши Имеет корочку подсыхания бледно-розового цвета Имеет корочку подсыхания бледно-розового цвета Имеет корочку подсыхания бледно-розового цвета Имеет корочку подсыхания бледно-розового цвета

Мышцы на разрезе Слегка влажные, не оставляют влажного пятна на фильтровальной бумаге, красного цвета Слегка влажные, не оставляют влажного пятна на фильтровальной бумаге, красного цвета Слегка влажные, не оставляют влажного пятна на фильтровальной бумаге, красного цвета Влажные, слегка липкие, оставляют пятно на фильтровальн бумаге темно-красного цвета

1 2 3 4 5

Консистен ция Мышцы упругие, плотные, при надавливании образуется ямка, которая быстро выравнивается Мышцы упругие, плотные, при надавливании образуется ямка, которая быстро выравнивается Мышцы упругие, плотные, при надавливании образуется ямка, которая быстро выравнивается Мышцы менее упругие, плотные, при надавливании образуется ямка, выравнивается медленно

запах Специфический свойственный свежему мясу Специфический, свойственный свежему мясу Специфический, свойственный свежему мясу Специфический свойственный мясу несвежему или сомнительной свежести

Состояние жира Жир желтоватого цвета, плотный. Консистенция твердая, при раздавливании -крошится Жир желтоватого цвета, плотный. Консистенция твердая, при раздавливании -крошится Жир желтоватого цвета, плотный. Консистенция твердая, при раздавливании -крошится Жир имеет серовато-матовый оттенок, мягкий при раздавливании мажется.

Состояние сухожилий Сухожилия упругие, плотные, поверхность суставов гладкая, блестящая Сухожилия упругие, плотные, поверхность суставов гладкая, блестящая Сухожилия упругие, плотные, поверхность суставов гладкая, блестящая Сухожилия менее плотные, матового белого-цвета. Суставные поверхности слегка покрыты слизью.

Физико-химические показатели мяса крупного рогатого скота. Проведенными исследованиями выявлены отличия физико-химических показателей мяса от животных больных лейкозом по сравнению с мясом здоровых животных. рН мяса у контрольных животных снизился через сутки до 5,7. При определении количества летучих жирных кислот (ЛЖК) наблюдали увеличение их количества с удлинением сроков хранения от 2,5 (контрольная группа) до 5,3 мг КОН.

Таблица 3.Физико-химические показатели мяса крупного рогатого скота больного

Лейкозом

ГРУППЫ результаты исследования мяса КРС

рН реакция на реакция с Формольная количество

пероксидазу Си804 проба ЛЖК

24ч 48ч 96ч 24ч 48ч 96ч 24ч 48ч 96ч 24ч 48ч 96ч 24ч 1 48ч 96ч

контрольная группа п=10 5,8 5,7 5,9 + + + - - - - - - 2,5 2,8 2,7

5,79 + 0,04 2,67 + 0,07

бессимптомная стадия п=59 5,8 5,8 5,9 + + + + + 2,7 2,8 2,8

5,84+ 0,02 2,77 ± 0,02

гематологическая стадия п=25 5,8 6,3 5,9 + + + - - + • + + 2,7 3,0 3,4

6,00+ 0,05 3,12 + 0,04

опухолевая стадия п=9 6,3 6,4 6,5 + - ■ + + + + + + 4,0 4,1 5,3

6,38+0,03 4,68 + 0,01

р<0,05

При постановке реакции на пероксидазу выявлены следующие показатели: контрольная группа - положительная реакция; бессимптомная - положительная; гематологическая - сомнительная; опухолевая - преимущественно отрицательная.

При определении формольной пробы: контрольная группа - отрицательная; бессимптомная - отрицательная; гематологическая - отрицательная, иногда отмечались положительные, опухолевая - положительная реакция.

Проведенные физико-химические исследования показали, что в мясе животных убитых в бессимптомной стадии процессы созревания существенно не нарушаются, в гематологической - процесс созревания нарушается, быстро накапливаются продукты распада белка. В опухолевой стадии установлены явные отклонения от нормы по физико-химическим показателям мяса крупного рогатого скота.

Химический состав мяса крупного рогатого скота. Химический состав характеризует питательную ценность мяса. Качественные показатели складываются из сбалансированности содержания белка, жира, влаги и других веществ. Изучен химический состав мяса крупного рогатого скота на разных стадиях заболевания. Данные представлены в таблице 4.

Таблица 4. Химический состав длиннейшей мышцы спины крупного рогатого скота

показатели Единицы Группы животных

измерения контроль Бессимпт. РИД+ РИД+, Гем+ Опухолева) стадия

ВЛАГА % 74,90+ 0,05 75,31+0,19 76,97+ 0,07 77,21+0,02

%к контролю 100 100,55 102,76 103,08

ЖИР % 3,52+0,02 3,49+0,01 3,47+0,01 3,46+0,09

%к контролю 100 99,15 98,58 98,30

БЕЛОК % 20,6+0,14 20,4+0,05 20,2+ 0,09 20,1+0,03

%к контролю 100 99,03 98,05 97,57

ЗОЛА % 1+0,01 1,1+0,02 1,1 + 0,01 1,2+0,02

%к контролю 100 110 110 120

р<0,05

Таким образом, можно сделать вывод, что в длиннейшей мышце спины у животных больных лейкозом, уже в бессимптомной стадии происходят изменения химического состава - увеличение содержания влаги, понижается уровень белка и жира. При дальнейшем течении лейкозного процесса (гематологическая, опухолевая стадии) эти изменения выражены еще более заметно. Все эти данные свидетельствуют о том, что качественные характеристики мяса изменяются, ухудшается пищевая ценность мяса.

Аминокислотный состав. При исследовании аминокислотного состава в белках мяса были выявлены различия у больных лейкозом и здоровых животных. При исследовании обнаружено, что аминокислотный состав мяса меняется в зависимости от стадии лейкозного процесса. Эти изменения наиболее выражены на поздних стадиях развития лейкоза. Наблюдается уменьшение треонина на 5,03% в бессимптомной стадии; на 15,33% в гематологической и на 17,16% в опухолевой стадии, валин - 5,05%, 9,76%, 7,5%, метионин -5,1%, 15,6%, 17,3%, фенилаланин - 9,96%, 5,98%, 14,6%, лизин - 4,15% 15,6%, 16,44% соответственно стадиям лейкозного процесса. Данные представлены в таблице 5.

Таблица 5. Аминокислотный состав мяса крупного рогатого скота на разных стадиях

заболевания

Показатели Единицы Измере | ния Группы животных

контроль Бессимпт. РИД+ РИД+, Гем+ Опухолевая стадия

НЕЗАМЕНИМЫЕ АМИНОКИСЛОТЫ

валин мг% 5,74 ±0,54 5,45 ±0,15 5,18 + 0,12 5,31 ±0,26

% к контролю 100 94,95 90,24 92,50

изолейцин мг% 4,69 ±0,31. 4,44 + 0,06 4,51 + 0,19 4,34+ 0,46

% к контролю 100 94,67 96,16 92,53

лейцин мг% 8,14+0,39 7,71+0,16 6,88+0,19 6,74± 0,30

% к контролю 100 94,72 84,52 82,80

лизин мг% 8,21+0,47 7,87+0,21 6,90+ 0,21 6,86+0,52

% к контролю 100 95,85 84,04 83,56

метнонин мг% 2,94+0,25 2,79+ 0,14 2,48+ 0,25 2,43+0,31

% к контролю 100 94,9 84,4 82,7

Треонин мг% 4,37+ 0,40 4,15+0,18 3,70+ 0,23 3,62+0,81

% к контролю 100 94,97 84,67 82,84

триптофан мг% 1,37+0,33 1,30±0,16 1,16+0,33 1,13+ 0,42

% к контролю 100 94,89 84,67 82,48

фенилаланин мг% 4,52+0,51 4,07+0,15 4,25+ 0,31 3,86+ 0,51

% к контролю 100 90,04 94,02 85,40

ЗАМЕНИМЫЕ АМИНОКИСЛОТЫ

аланин мг% 6,82+ 0,63 6,48 ±0,28 6,15 ±0,22 5,83 + 0,28

% к контролю 100 95,01 90,18 85,48

аргинин мг% 6,48 ±0,27 6,82 ± 0,33 6,92 + 0,29 7,08 + 0,45

% к контролю 100 105,25 106,80 109,30

аспаргиновая кислота мг% 11,63+ 0,27 11,00+0,11 9,82+0,10 9,94+0,36

% к контролю 100 94,58 84,44 85,47

гистин мг% 3,98 ±0,36 3,81 ±0,28 3,40+0,19 3,36 ±0,34

% к контролю 100 95,73 85,43 84,42

глицин мг% 4,39 ±0,41 4,20 ±0,12 3,75 ± 0,28 3,71 ±0,64

% к контролю 100 95,67 85,42 84,51

глутаминовая кислота мг% 18,01+0,44 17,25+0,11 15,22+0,17 15,40+0,29

% к контролю 100 95,78 84,50 84,51

оксипролин мг% 0,29 + 0,25 0,28 ±0,12 0,25 ±0,24 0,27 ±0,26

% к контролю 100 96,55 86,21 93,10

Пролин мг% 3,29 + 0,36 3,15+0,13 2,78 + 0,25 2,81 + 0,36

% к контролю 100 95,74 84,99 85,41

серии мг% 4,52 + 0,44 4,33 + 0,23 3,82 + 0,23 3,87 + 0,39

% к контролю 100 95,79 84,52 85,62

тирозин мг% 4,00 ±0,36 3,83 + 0,14 3,38 + 0,26 3,42 ±0,40

% к контролю 100 95,75 84,5 85,5

цистин мг% 1,55 + 0,37 1,48 ±0,12 1,32+ 0,16 1,31 ±0,21

% к контролю 100 95,48 85,16 84,51

р<0,05

Таким образом, после проведенных исследований можно сделать вывод, что мясо животных на поздних стадиях лейкозного процесса (гематологическая и опухолевая) по комплексу химических показателей не соответствует нормам, установленным для доброкачественного мяса.

Бактериологические исследования. Для бактериологического исследования были отобраны пробы мышечной ткани (сгибатели и разгибатели передней и задней конечности), сердца, печени, почек и лимфатические узлы, от 39 животных на разных стадиях болезни.

Бактериологическими исследованиями продуктов убоя крупного рогатого скота, убитого в различных стадиях инфекционного процесса было выявлено:

-Из мышечной ткани здоровых (контрольных) животных были выделены следующие микроорганизмы: единичные спорообразующие палочки, кокки. В одном случае из мышечной ткани была выделена -В. subtilis. Микроорганизмы рода Proteus и Salmonellae не обнаружены;

-Из мышечной ткани опытной группы животных в бессимптомной стадии лейкоза были выделены также микрококки, аэробные бациллы и кокковые микроорганизмы. В двух случаях из мышечной ткани были выделены аэробные бациллы, в одном случае - В. subtilis, в другом - В. mycoides. Из печени были выделены бактерии рода Proteus, из лимфатических узлов в двух случаях были обнаружены бактерии группы кишечных палочек;

-В мышечной ткани больных (опытных) животных в гематологической стадии лейкоза патогенных и условно-патогенных микроорганизмов не обнаружено. Бактерии рода E.coli выделены в пяти случаях: в двух - из печени, в двух - из лимфатических узлов и в одном случае - из почек.

-В опухолевой стадии из мышечной ткани больных животных выделены бактерии группы Е. coli. Сальмонеллы выделены в одном случае из мышечной ткани и во всех 5 случаях из лимфатических узлов.

Определение биологической ценности мяса. При биологической оценке мяса на инфузориях тетрахименах вначале определяли его возможное токсическое действие на простейших, а затем проводили изучение относительной биологической ценности (ОБЦ) продукта (контрольных животных - 10, в бессимптомной -15, гематологической - 15, опухолевой -9).

Выживаемость тетрахимен на мясе больных животных (в различной стадии болезни) была меньше, чем у контрольной группы при максимальной величине навески мяса.

При определении показателя ОБЦ, основанного на генеративной (ростовой) реакции тетрахимен, нами установлено его снижение у мяса больных лейкозом животных по сравнению со здоровыми.

Таблица б.Относительная биологическая ценность (ОБЦ) мяса больных лейкозом

животных

ГРУППА ЖИВОТНЫХ СРЕДНЕЕ КОЛИЧЕСТВО В1 МЛ КЛЕТОК ИНФУЗОРИЙ ОБЦ % К КОНТРОЛЮ

Контрольная группа 44,2x10" 100,0

Бессимптомная стадия 42,48 х104 9б,1±1,2

Гематологическая стадия 40,8 хЮ4 92,3±0,9

Опухолевая стадия 38,19x10' 86,4±0,8

р<0,05

Полимеразная цепная реакция. Для индикации BJIKPC в продуктах убоя использовались образцы мышечной ткани крупного рогатого скота отобранных на разных стадиях лейкозного процесса: 5 - бессимптомная стадия; 5 - гематологически положительные; 5 - опухолевая и 5 проб от контрольной животных. Исследования проводились 3 раза с периодичностью в один месяц. Пробы мышечной ткани хранились в морозильной камере. Для постановки ПЦР на выявление провирусной ДНК вируса лейкоза КРС использовались наборы серии GenePak DNA PCR test BLV (gag).

В необходимое количество пробирок с лиофилизированной полимеразой добавляли 10 мкл ПЦР-растворителя. В наборе для обнаружения BJIKPC праймеры (gag) уже внесены. После полного растворения сухого содержимого в пробирки добавляли по 5 мкл пробы ДНК исследуемых образцов, мяса, печени, селезенки. В пробирку для отрицательного контроля вместо ДНК добавляли 5 мкл буфера ТЕ. Затем содержимое всех пробирок перемешивалось на вортексе. После этого в пробирки добавляли по 2 капли минерального масла (20 - 25 мкл). Пробирки центрифугировались 10 сек при 2000 оборотах в минуту. После этого смесь помещали в амплификатор. Для регистрации результатов использовался метод электрофореза в 1,5% агарозном геле. Для окраски агарозного геля использовали бромистый этидий, в концентрации 0,5 мкг/мл. Результаты исследований представлены в таблице 7.

Таблица 7. Индикация ВЛКРС в продуктах убоя крупного рогатого скота на разных стадиях лейкозного процесса (ПЦР)

Пробы мяса, селезенки, печени,сердца СРОК ХРАНЕНИЯ, Д НЕЙ t -20°С

1 30 60 90

Контроль - - - -

Бессимптомная стадия + + + +

Гематологическая стадия + + + +

Опухолевая стадия + + + +

Таким образом, с помощью ПЦР-тест системы, как самого чувствительного на сегодняшний день метода обнаружения провирусной ДНК ВЛКРС, доказана его длительная сохранность в мышечной ткани и органах при 1 -20°С.

Проведенные нами исследования позволяют заключить, что продукты убоя животных в бессимптомной стадии болезни (РИД+), а также при поражении единичных лимфоузлов и лейкоцитозе не могут выпускаться в реализацию без ограничений.

Учитывая вышесказанное в «Правилах ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов» необходимо ввести более аргументированную, строгую ветеринарно-санитарную оценку мяса и продуктов убоя, как животных больных лейкозом, так и только инфицированных ВЛКРС (т.е. РИД+), то есть все продукты убоя животных больных лейкозом, необходимо подвергать термической обработке.

Современная научно-обоснованная ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя при лейкозах, на наш взгляд, даст положительные результаты для получения экологически чистой продукции, предотвращения потенциальной возможности трансгенных изменений вируса лейкоза крупного рогатого скота и его распространения как этиологического агента гемобластозов.

ВЫВОДЫ

1. Ретроспективный анализ статистических данных по распространению лейкоза крупного рогатого скота в Калужской, Московской и Брянской областях Российской Федерации в период с 1994-2009 г свидетельствует о наличии тенденции к увеличению числа инфицированных животных и уменьшению количества случаев послеубойного выявления болезни.

2. Прижизненные методы диагностики позволяют прогнозировать качество получаемой продукции и пути ее реализации в зависимости от стадий лейкозогенеза. С помощью новых методов исследования (ПЦР, электронная микроскопия), более точно определены животные с онкорновирусной инфекцией и выявлены малигнизированные лимфоидные клетки в периферическом пуле крови крупного рогатого скота больного

лейкозом. Опухолевые клетки имеют маркерные аномалии (ядерные карманы). Количество ядерных карманов коррелирует со степенью тяжести лейкозного процесса.

3. Послеубойными методами диагностики установлено, что основными формами лейкоза крупного рогатого скота являются лимфолейкоз и лимфосаркома. Характерные для лейкоза патологоанатомические и гистологические изменения обнаруживали в лимфоузлах, сердце, селезенке, реже в мышечной ткани. Патогномоничными признаками для лейкозного процесса были: увеличение органов в размере, нарушение их качественного и количественного клеточного состава, инфильтрация опухолевыми лимфоидными клетками, очаговые кровоизлияния и казеозный некроз. Такие признаки не могут быть информативными для ветеринарно-санитарной экспертизы туш и органов в начальных стадиях болезни, так как они характерны для развернутого опухолевого процесса.

4. Мясо и продукты убоя крупного рогатого скота больного лейкозом отличались по органолептическим и физико-химическим показателям от продуктов убоя здоровых животных:

-мясо животных убитых в опухолевой стадии болезни имело органолептические признаки характерные для мяса сомнительной свежести или несвежего даже при кратковременном хранении (2-3 суток) в холодильнике.

-физико-химические показатели мяса больного лейкозом крупного рогатого скота отличались от мяса здоровых животных повышением pH, изменением реакции на пероксидазу, результатами формольной пробы, увеличением содержания летучих жирных кислот. Это свидетельствует о замедлении процессов созревания, снижение активности тканевых ферментов и накоплении продуктов метаболизма белка в мясе больных животных.

5. По мере развития болезни ухудшается пищевая ценность и санитарное качество мяса. В мясе больных животных возрастало содержание влаги. У здоровых животных этот показатель составил 74,90% при бессимптомной стадии от был больше на 0,55%, при гематологической на 2,76% и опухолевой стадии на 3,08% (р < 0,05). Содержание белка снижалось от 20,6% до 20,13% (р < 0,05); жира от 3,52% (р < 0,05) до 3,46% (р < 0,05) соответственно. В белках мышечной ткани снижается содержание аминокислот метионина, триптофана, фенилаланина, лизина.

6. Бактериологическими исследованиями установлена контаминация образцов мышечной ткани и внутренних органов крупного рогатого скота больного лейкозом условно-патогенной и патогенной микрофлорой, присутствие которой не допускается СанПиН и ветеринарно-санитарными правилами. При исследовании выделяли бактерии из рода Salmonella, группы E.coli, рода Proteus, кокки. По частоте обнаружения микроорганизмов в органах и тканях на первом месте стоят лимфоузлы, затем печень, почки и мышечная ткань.

7. В первые с помощью ПЦР и электронной микроскопии доказано наличие в пробах охлажденного, замороженного мяса и внутренних органах от больных лейкозом животных провируса лейкоза крупного рогатого скота, его длительная сохранность при t-20°C а также присутствие лейкознотрансформированных лимфоидных клеток в мясе и мясопродуктах на разных стадиях лейкозогенеза.

8. Относительная биологическая ценность мяса больных животных в стадии бессимптомной инфекции снижается на 3,9%, в гематологической на 7,7%, в опухолевой на 13,6%. Установлено токсическое действие лейкозного мяса на тест-объект Tetrahymena Pyriformis. Оно выражается в отрицательном влиянии на выживаемость, характере движения и морфологии инфузорий.

9. На основании проведенных исследований доказано, что мясо крупного рогатого скота с прижизненными положительными серологическими и гематологическими результатами исследования на лейкоз необходимо направлять на термическую обработку по разработанным режимам с последующим использованием на пищевые мясные продукты. В виду контаминации мяса и других продуктов убоя бактериальными, вирусными и

клеточными (опухолевыми) патогенами, они' не могут быть разрешены к свободной реализации.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

По результатам исследований разработаны и утверждены:

1. Учебное пособие «Лейкоз крупного рогатого скота (диагностика, ветеринарно-санитарная экспертиза, профилактика и оздоровительные мероприятия)» утв. УМО Вузов по образованию в области ветеринарии и зоотехнии, гриф N06-426; М.2005

2. Рекомендации «Противоэпизоотические мероприятия при лейкозе крупного рогатого скота в фермерских и личных подсобных хозяйствах граждан» М.2007., утв. на заседании секции «Инфекционная патология животных» отделение ветеринарии РАСХН М. 2006г.

3. Учебное пособие «Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов убоя сельскохозяйственных животных при лейкозе» утв. УМО вузов РФ по образованию в области ветеринарии и зоотехнии 11.10.2010X263-138

4. Результаты исследований и иллюстрации по диссертационной работе используются при чтении лекций по ветеринарно-санитарной экспертизе студентам факультета ветеринарной медицины и слушателей Факультета повышения квалификации в ФГОУ ВПО Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина и будут полезны в других высших учебных заведениях по специальности «Ветеринария» и по курсу специализации «Ветеринарно-санитарная экспертиза».

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Апробация современных методов исследований (реакции полимеразных цепей, электронная микроскопия) позволяет рекомендовать использование этих методов для дальнейшей дифференциальной диагностики лейкоза от болезней с лейкемоидными реакциями, для отбора животных (крупного рогатого скота) для биотехнологических целей, получения биопрепаратов, послеубойной заготовке сырья для медицинской и биологической промышленности.

2. Метод ПЦР может быть полезен для индикации провирусной ДНК ВЛКРС в охлажденном, замороженном отечественном и импортном мясном сырье от крупного рогатого скота.

3. Регламент проведенных исследований по оценке продуктов убоя при лейкозе может использоваться как модель в экспериментальных исследованиях по другим инфекционным патологиям крупного рогатого скота.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ

1. Рудакова О.Н. Современные методы прижизненной диагностики и ветеринарно-санитарная экспертиза мяса при лейкозе крупного рогатого скота./ Меньшикова З.Н., Рудакова О.Н.// Материалы 4-й Международной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля с/х продукции. - Москва, 2002,- С. 37-39.

2. Рудакова О.Н Некоторые аспекты обоснования ветеринарно-санитарной оценки продуктов убоя крупного рогатого скота при лейкозе с помощью электронной микроскопии./ Рудакова О.Н.// Материалы I Международной межвузовской научно-практической конференции аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент в Науке, посвященной 300-летию Санкт-Петербурга», 2003,- С.81-82.

3. Рудакова О.Н. Сравнительный анализ методов прижизненной диагностики и ветеринарно-санитарной оценки продуктов убоя крупного рогатого скота при спонтанном лейкозе./ Рудакова О.Н.// Материалы Международной учебно-методической конференции, посвященной 85-летию академии. - Москва, 2004,- Ч.2.-С.368-370.

4. Рудакова О.Н. Цитоморфологичеекая оценка крови, лимфатических узлов и селезенки при гемобластозах. / Меньшикова З.Н., Сноз Г.В., Рудакова О.Н.//Там же, - С.365-367.

5. Рудакова О.Н. Индикация вируса лейкоза и сопутствующих микроорганизмов в продуктах убоя крупного рогатого скота при гемобластозах./ Меньшикова З.Н., Рудакова О.Н.// Материалы 3-ей конференции по учебно-методической, воспитательной и научно-практической работе академии. - Москва, 2006.- Ч.З.- С. 32-35.

6. Рудакова О.Н. Лейкоз крупного скота (диагностика, ветеринарно-санитарная экспертиза, профилактика и оздоровительные мероприятия). /Меньшикова З.Н., Боровков М.Ф., Курмакаева Т.В., Рудакова О.Н. // Учебное пособие. - Москва, 2006,- С.40.

7. Рудакова О.Н. Противоэпизоотические мероприятия при лейкозе крупного рогатого скота в фермерских и личных подсобных хозяйствах граждан./ Гулюкин М.И., Барабанов И.И., Симонян Г.А.. Иванова Л.А., Рудакова О.Н.// Рекомендации. - Москва, 2007.

8. Рудакова О.Н. Оценка качества и безопасности продуктов убоя при лейкозе крупного рогатого скота. / Меньшикова З.Н., Рудакова О.Н. // Ветеринарная медицина. -2007. - № 2-3. - С.13

9. Рудакова О.Н. Характеристика перевиваемых культур клеток, хронически инфицированных ВЛКРС. / C.B. Вангели, М.И. Гулюкин, Г.А. Надточей, Л.А. Иванова, О.Н. Рудакова// Ветеринария.-2007. - №10. - С. 53.

10. Рудакова О.Н. Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов убоя сельскохозяйственных животных при лейкозе. / З.Н. Меньшикова, Т.В. Курмакаева, О.Н. Рудакова, М.Ф. Боровков, Бузераиб Абдел Крим // Учебное пособие. - Москва, 2010. -С.78

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 10.11.2010 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,0 Печать авторефератов (495)730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Рудакова, Оксана Николаевна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Определение и классификация лейкоза-крупного рогатого скота»

1.2 Этиологиялейкоза крупного рогатого скота

1.2.1.Классификация, морфология и антигенная структура вируса лейкоза крупного рогатого скота

1.2.2.Устойчивость вируса лейкоза крупного рогатого скота

1.2.3.Патогенные свойства ВЛКРС

1.3 Распространение болезни и экономический ущерб

1.4 Эпизоогологические особенности

1.5 Диагностика лейкоза крупного рогатого скота

1.5.1.Прижизненная диагностика

1.5.2.Предубойная диагностика

1.5.3.Послеубойная диагностика

1.6.Ветеринарно-санитарная оценка качества и безопасности туш, внутренних органов и других продуктов убоя

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследования

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2.1. Ретроспективный анализ распространения лейкоза в некоторых областях российской Федерации

2.2.2. Сравнительная оценка прижизненных методов диагностики

Лейкоза крупного рогатого скота

2.2.3. Послеубойная диагностика

2.2.4. Ветеринарно-санитарная характеристика продуктов убоя при различных стадиях лейкозного процесса у крупного рогатого скота

- органолептическая оценка мяса крупного рогатого скота больного лейкозом

- физико-химические показатели мяса крупного рогатого скота

- определение химического состава мяса крупного рогатого скота

- аминокислотный состав мяса крупного рогатого скота

- бактериологические исследования

- определение биологической ценности мяса

- полимеразная цепная реакция

2.2.5. Обсуждение результатов исследования

3. ВЫВОДЫ

4. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ

НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

5. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

6. ИСПОЛЬЗОВАННАЯ НОРМАТИВНАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯ

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Анализ современных методов диагностики и ветеринарно-санитарная экспертиза мяса при лейкозе крупного рогатого скота"

Актуальность темы. Важным условием продовольственной безопасности нашей страны является, производство достаточных по объему, доброкачественных, экологически безвредных и полноценных продуктов питания животного происхождения. Сдерживающими факторами в обеспечении населения такими продуктами являются антропогенные составляющие: нарушение правил гигиены и ветеринарно-санитарной экспертизы при откорме, убое и доставке продуктов переработки животного сырья потребителю, недостаточная разработка современных критериев оценки качества продуктов убоя животных (Москалик P.C., 2003; Туник А.Н., 2005; Смирнов A.M., 2005; Меграбян Д.С. и соавторы, 2006). Особого внимания заслуживает оценка мяса и других продуктов убоя, получаемых от животных, пораженных различными болезнями, в частности, таким заболеванием как лейкоз, встречающийся во всех субъектах Российской Федерации и многих странах мира. В последнее десятилетие лейкоз в РФ занимает одно из ведущих мест в инфекционной патологии. В 2002 г. на долю лейкоза пришлось 53%, в 2004 г. - 57,4% установленных случаев. Болезнь наносит значительный экономический ущерб из-за нарушения воспроизводства стад, вынужденного убоя и выбраковки высокопродуктивных больных животных, ограничений хозяйственной деятельности (продажа молока, племенного молодняка), затратами на оздоровительные мероприятия. Большую тревогу вызывает качество используемой в пищу продукции от больных животных (JI.K. Эрнст, В.П. Шишков, 1984; М.И. Гулюкин, Н.И. Петров, 2005).

Основными методами прижизненной диагностики лейкоза являются реакции иммунодиффузии в агаровом геле (РИД), иммуноферментный анализ (ИФА) и полимеразная цепная реакция (ПЦР), которые позволяют выявить животных, зараженных BJ1KPC на ранних сроках инфицирования при отсутствии других признаков болезни (Muller J., Yan der Maaten M., 1979; Бурба Л.Г., Шишков В.П., 1986; Иванова JI.А., 1999; Джапаралиев Н.Т. и соавторы, 2004; Двоеглазов Н.Г. и соавторы, 2005).

Плановые мероприятия по- серологическому тестированию на лейкоз поголовья крупного рогатого скота показывают, что число неблагополучных пунктов по лейкозу в нашей стране увеличивается (Кунаков, A.A., Альбикова* Г.М., 2002; Гулюкин М.И. и соавторы, 2004; Соколов Д.С., 2004).

Вопросы оздоровления стад от лейкоза, при недостаточности мер специфической профилактики, сводятся к единственно действенному методу -убою больных и инфицированных ВЛКРС животных и замене их здоровыми особями. Данные о качестве продукции, получаемой от убойных животных, крайне ограничены и неоднозначны (Адуцкевич В.А., 1969; Пипирас Ю.Ю., 1971; Лемеш В.М., Пахомов П.И., 1989; Кунаков A.A. и соавторы, 2000; Альбикова Г.М., 2002).

Согласно нормативным документам (1988г.), в практике отечественных перерабатывающих предприятий мясо инфицированных ВЛКРС, гематологически положительных на лейкоз животных, без морфологических патоанатомических изменений в туше и органах, реализуется без ограничений. Хотя ранее проведенные исследования показали, что туши и внутренние органы больных лейкозом животных, убитых в опухолевой стадии болезни, имеют существенные отклонения от нормы по биохимическим и органолептическим показателям (Пахомов Л.Н., 1998; Альбикова Г.М., 2002). Сведения о контаминации продуктов убоя ВЛКРС и качестве продукции, получаемой от животных на различных стадиях лейкоза, в литературе отсутствуют.

В этой связи использование современных новых методов для прижизненной и послеубойной диагностики лейкоза, изучения качества продуктов убоя животных, инфицированных ВЛКРС и больных лейкозом, является актуальным и требует внимания специалистов ветеринарно-санитарного профиля в решении одной из главных задач — обеспечение экологически чистыми и безопасными продуктами животного происхождения населения нашей страны.

В странах Евросоюза ветеринарный контроль за качеством и безопасностью продуктов животноводства, соответствующий нормативным документам, осуществляется в процессе производства (на ферме, в хозяйстве), с прижизненным исследованием - крови, молока, а также тканей животных от выборочного убоя (Смирнов A.M., 2006).

Цель и задачи исследования

Цель нашей работы - сравнительное изучение комплекса современных методов прижизненной и послеубойной диагностики лейкоза крупного рогатого скота и определение критериев оценки качества и безопасности продуктов убоя на разных стадиях лейкозогенеза (болезни).

Задачи исследования:

3. Изучить органолептические, физико-химические, гистологические показатели мышечной ткани и внутренних органов при различных стадиях лейкоза;

5. Определить пищевую и биологическую ценность мяса больного лейкозом скота;

Научная новизна работы

Впервые для прижизненной и послеубойной диагностики лейкоза использован комплекс современных диагностических методов исследования, включающий в себя серологические, гематологические, вирусологические, морфологические (электронная микроскопия) и молекулярно-биологические (ПЦР) методы исследования.

Определена возможность использования морфофункциональных особенностей лимфоцитов крови в. качестве констант предубойной оценки продуктов убоя больных лейкозом животных.

Изучены эпизоотические особенности распространения лейкоза крупного рогатого скота в некоторых областях Российской Федерации за период 19942009 гг. Установлено отсутствие прямой корреляции стадий лейкозного процесса и послеубойного выявления болезни на мясоперерабатывающих предприятиях.

Практическая значимость

На основании проведенных исследований усовершенствованы и научно-обоснованы данные по ветеринарно-санитраной экспертизе мяса и других продуктов убоя животных, больных лейкозом. Рекомендованы критерии определения санитарной, пищевой и биологической ценности мяса крупного рогатого скота при различных формах и стадиях лейкоза. Полученные данные имеют теоретическое и практическое значение, способствуют совершенствованию диагностики лейкоза, получению экологически чистой продукции и предотвращению распространения этиологического агента данной болезни. Основные результаты проведенных исследований вошли в учебное пособие: «Лейкоз крупного рогатого скота (диагностика, ветеринарно-санитарная экспертиза, профилактика и оздоровительные мероприятия)», М. 2005г., утвержденное УМО ВУЗов; действующие рекомендации

Противоэпизоотические мероприятия при лейкозе крупного рогатого скота в фермерских и личных подсобных хозяйствах граждан», М. 2007 г., утверждены на заседании секции «Инфекционная патология животных» отделения ветеринарии РАСХН 15.03.06 г. Москва; учебное пособие «Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов убоя сельскохозяйственных животных при лейкозе» утв. УМО вузов РФ по образованию в области ветеринарии и зоотехнии 11.10.2010 №63-138.

Материалы и иллюстрации, представленные в диссертации, используются в учебном процессе по курсу ветеринарно-санитарной экспертизы в ФГОУ ВПО МГАВМ и Б им. К. И. Скрябина для студентов факультета ветеринарной медицины и слушателей факультета повышения квалификации.

Основные положения, выносимые на защиту

Апробация работы

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на международных конференциях:

- 4-ой Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции», М. 2002 г.;

- 1-ой Международной межвузовской, научно-практической конференции аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент» в «Науке», посвященной 300-летию Санкт-Петербурга, С-Петербург, 2003 г.;

- 4-ой Международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию МГАВМ и Б им. К.И Скрябина, М. 2006 г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, в т.ч. 2 в рецензируемых ВАК журналах, 2 учебных пособия, 1 рекомендация.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 137 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследования, выводов, практических предложений. Работа содержит 24 рисунка, 19 таблиц. Библиографический список включает 171 источник, из которых 56 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза", Рудакова, Оксана Николаевна

выводы

1. Ретроспективный анализ статистических данных по распространению лейкоза крупного рогатого скота в Калужской, Московской и- Брянской областях Российской Федерации в период с 1994-2009 г свидетельствует о наличии тенденции к увеличению числа инфицированных животных и уменьшению количества случаев послеубойного выявления болезни.

3. Послеубойными методами диагностики установлено, что основными формами лейкоза крупного рогатого скота являются лимфолейкоз и лимфосаркома. Характерные для лейкоза патологоанатомические и гистологические изменения обнаруживали в лимфоузлах, сердце, селезенке, реже в мышечной ткани. Патогномоничными признаками для лейкозного процесса были: увеличение органов в размере, нарушение их качественного и количественного клеточного состава, инфильтрация опухолевыми лимфоидными клетками, очаговые кровоизлияния и казеозный некроз. Такие признаки не могут быть информативными- для ветеринарно-санитарной экспертизы туш и органов в начальных стадиях болезни, так как они характерны для-развернутого опухолевого процесса.

-мясо? животных убитых в опухолевой-; стадии болезни имело оргаиолептические признаки?-характерные для мяса; сомнительной свежести; или несвежего даже при кратковременном- хранении? (2-3 суток) в холодильнике.

-физико-химические показатели мяса больного лейкозом < крупного г рогатого1 скота отличались от мяса здоровых: животных повышением pH, изменением реакции на пероксидазу, результатами формольной пробы, увеличением содержания летучих жирных кислот. Это свидетельствует о замедлении процессов созревания, снижение активности тканевых ферментов и накоплении продуктов метаболизма белка в мясе больных животных.

5. По мере развития болезни ухудшается пищевая ценность и санитарное качество мяса. В мясе больных животных возрастало содержание влаги. У здоровых животных этот показатель составил 74,90% при бессимптомной стадии от был больше на 0,55%, при гематологической на 2,76% и опухолевой стадии на 3,08% (р < 0,05). Содержание белка снижалось от 20<6% до120,13% (р < 0,05); жира от 3,52% (р < 0,05) до 3,46% (р < 0-05) соответственно. В белках мышечной ткани снижается содержание аминокислот метионина, триптофана, фенилаланина, лизина.

6. Бактериологическими исследованиями установлена контаминация образцов мышечной ткани и внутренних органов крупного рогатого скота больного лейкозом условно-патогенной и патогенной микрофлорой, присутствие которой не допускается СанПиН и ветеринарно-санитарными правилами. При исследовании выделяли- бактерии = из рода Salmonella, группы Ii .coli, рода Proteus, кокки. По частоте обнаружения микроорганизмов.в органах и тканях на первом месте стоят лимфоузлы, затем; печень, почки и мышечная ткань.

7. В первые: с помощью ПЦР и электронной микроскопии; доказано» . наличие в пробах охлажденного,, замороженного мяса и внутренних органах от больных лейкозом животных провируса лейкоза крупного рогатого скота, его длительная сохранность при t-20°C а также присутствие лейкознотрансформированных лимфоидных клеток; в мясе и мясопродуктах на разных, стадиях лейкозогенеза. у

8: Относительная биологически ценность мяса- больных животных в стадии бессимптомной? инфекции! снижается® на 3,9%, в гематологической на 7,7%, в опухолевой на 13,6%. Установлено токсическое действие лейкозного мяса на тест-объект Те^аЬутепа РупГоггшБ. Оно выражается^ в отрицательном влиянии на выживаемость, характере движения и морфологии инфузорий.

4. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ

РЕЗУЛЬТАТОВ

По результатам исследований разработаны и утверждены:

1. Учебное пособие «Лейкоз крупного рогатого скота (диагностика, ветеринарно-санитарная экспертиза, профилактика и оздоровительные мероприятия)» утв. УМО Вузов по: образованию в области ветеринарии и зоотехнии, гриф.N06-426; М.2005

2. Рекомендации. «Противоэпизоотические мероприятия при лейкозе крупного рогатого скота в фермерских и личных подсобных хозяйствах граждан» М.2007., утв. на; заседании секции «Инфекционная; патология животных» отделение ветеринарии РАСХН М. 2006г.

4. Результаты исследований и иллюстрации по- диссертационной, работе используются при чтении' лекций по ветеринарно-санитарной экспертизе студентам факультета ветеринарной медицины и» слушателей Факультета повышения «квалификации в ФГОУ ВПО Московской"? государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина и будут полезны в других высших учебных заведениях по специальности «Ветеринария» и по курсу специализации «Ветеринарно-санитарная экспертиза».

5. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

6. ИСПОЛЬЗОВАННАЯ НОРМАТИВНАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯ

Правила по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота. М.,1999 Утверждены Минсельхозпрода России от 11 мая 1999 года.

Диагностика лейкоза крупного рогатого скота: Методические указания.-М.,2000. Утверждены Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации. 23.08.2000 года.

Противоэпизоотические мероприятия при лейкозе крупного рогатого скота в фермерских хозяйствах и личных подсобных хозяйствах граждан. Рекомендации. М., 2007.

Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов. М.,1988.

Гост 7269-79 «Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести».

Гост 21237-75 «Мясо. Методы бактериологического анализа».

Гост 23392-78 «Мясо. Методы химического и микроскопического анализа свежести мяса».

Гост 9793-74 «Мясные продукты. Методы определения содержания влаги».

Гост 23042-86 «Мясо и мясные продукты. Методы определения жира».

Гост25011-81 «Мясо и мясные продукты. Методы определения белка».

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Рудакова, Оксана Николаевна, Москва

1. Аарт, Х.К. Выявление влияния факторов, повышающих риск заболевания лейкозом крупного рогатого скота / Х.К.Аарт, Ю.А. Симоварт, Э.М. Нымм // Теоретические и практические вопросы ветеринарии. — 1988. -Т.2-С.165-166.

2. Адуцкевич, В.А. Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса при лейкозах. М., 1967.

3. Аналькин, В.А. Лейкоз крупного рогатого скота / В.А.Аналькин, М.И.Гулюкин, Н.И.Петров. СПб., 2005.

4. Бузераиб Абдель Крим. Электронно-микроскопические, серологические и гематологические показатели при инфицировании овец вирусом лейкоза крупного рогатого скота / Бузераиб Абдель Крим: автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук М., 1986. - 24 с.

5. Бурба, Л.Г. Диагностика лейкозов сельскохозяйственных животных / Л.Г.Бурба, А.А.Кунаков. — М: «Колос», 1983. 190 с.

6. Бурба, Л.Г. Профилактика и борьба с лейкозом крупного рогатого скота / Л.Г.Бурба // Вестник сельскохозяйственной науки. 1986. - №10. — С. 109 — 113.

7. Бурба, Л.Г. Профилактика лейкозов и меры борьбы с ним // Лейкозы и злокачественные опухоли животных / Л.Г.Бурба, В.М.Нахмансон; под ред. В.П.Шишкова, Л.Г.Бурбы//М.: «Колос», 1988. С.321 - 329.

8. Бусол, В.А. Методические рекомендации по эпизоотологическому исследованию при лейкозе крупного рогатого скота / В.А.Бусол. — М., 1982. -12 с.

9. Бусол, В.А. Тест-система для выявления ВЛКРС полимеразной цепной реакцией / В.А.Бусол, О.Ю.Лиманская, А.П.Лиманский, В.И.Цымбал // Ветеринария. 1999. - №6. - С.27-30.

10. Валихов, А.Ф. Изучение онкорновируса, выделенного при лейкозе крупного рогатого скота / А.Ф.Валихов // Проблемы экспериментальной онкологии лейкозов человека и животных. М. 1979. - С.75 - 79.

11. Валихов, А.Ф. Биологические свойства вируса лейкоза крупного рогатого скота; диагностика и профилактика инфекции / А.Ф.Валихов: автореферат диссертации доктора биологических наук. — М., 1992.

12. Винокурова, З.В. Гельмобластозы крупного рогатого скота в Якутии (патоморфологическая характеристика). Якутск, 2000.

13. Гаврилова, Г.А. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота / Г.А. Гаврилова, Ю.А.Макаров, С.В.Бахметьева // Ветеринария. 2004. - № 1. - С. 2023.

14. Гладырь, Е.А. Создание и экспериментальная апробация высокочувствительной тест-системы диагностики лейкоза крупного рогатого скота / Е.А.Гладырь, Н.А.Зиновьева, А.А.Ермилов и др. // Вет. Патология. -2006. -№3.-С.87-90.

15. Гулюкин, М.И. Эпизоотологическая оценка методов прижизненной диагностики лейкоза крупного рогатого скота / М.И. Гулюкин, Е.А. Дун, Н.В. Замараева и др. // Вестник РАСХН. 2000. - №3. - С. 60-62.

16. Гулюкин, М.И. Разработка эффективных мероприятий против лейкоза крупного рогатого скота / М.И. Гулюкин, Л.А.Иванова, Н.В. Замараева и др. // Ветеринария. 2002,- №12.- С.3-8.

17. Гулюкин, М.И. Эпизоотологическая эффективность системы ВИЭВ борьбы с лейкозом крупного рогатого скота / М.И. Гулюкин, В.М. Нахмансон, Л.А.Иванова и др. // Веткорм. 2006. - №1. - С.14-16.

18. Гусева Е.В. Применение ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний животных / Е.В.Гусева, Г.А.Сатина. Владимир, 1995. - 44 с.

19. Джапаралиев, Н.Т. Молекулярно-биологические методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота: автореферат диссертации кандидата биологических наук. Владимир, 2002.

20. Джапаралиев, Н.Т. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота методом ПЦР ИФА / Н.Т. Джапаралиев, Н.Ф.Ломакин, Л.Б. Прохватилова // Вет. и мед. аспекты зооантропонозов. - Покров, 2003, - ч.2, - С.414-418.

21. Донник, И.М. Утилизация туш крупного рогатого скота по причине лейкоза / И.М.Донник, В.М.Мельникова, Е.И. Корсонова // Всероссийская конференция к 65-летию Свердловской НИВС: Материалы. — Екатеринбург, 2000. — С.212-122.

22. Донченко, A.C. Анализ эпизоотического процесса лейкоза крупного рогатого скота / A.C. Донченко, С.И.Логинов // Ветеринарная медицина. — 2007. -№1. — С.80-82.

23. Дрогун, А.Г. Клиником-морфологические исследования крупного рогатого скота при лейкозе и лейкемоидных реакциях / А.Г. Дрогун, В.М.Лемеш, В.НЯкубов // Патоморфология, патогенез и диагностика болезней сельскохозяйственных животных.-М., 1980.- С. 199-200.

24. Иванова, Л.А. Разработка и испытание метода иммуноферментного анализа для диагностики лейкоза крупного рогатого скота / Л.А.Иванова: автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук. М., 2000. - 21 с.

25. Иванова, Л.А. Опыт использования секретов молочной железы коров для выявления антител к вирусу лейкоза / Л.А.Иванова, М.И. Гулюкин, А.В.Васин и др. // Бюллетень ВИЭВ. М., 1996. - Вып. 77. - С.67. 32

26. Ивчина, Е.Ю. Актуальные вопросы ветеринарной санитарии на мясоперерабатывающих предприятиях / Е.Ю. Ивчина // Ветеринария. — 2007. -№8. С.42-46.

27. Ковтун В.Я. О патоморфологической диагностике гемобластозов у крупного рогатого скота / В.Я.Ковтун // Патоморфология, патогенез и диагностика болезней сельскохозяйственных животных. — М., 1980. С.189-190.

28. Комарова, И.Н. Разработка ПЦР-теста для видовой идентификации и количественной оценки мясного сырья / И.Н.Комарова: автореферат диссертации кандидата биологических наук. М., 2005. - 21с.

29. Коромыслов, Г.Ф. Лейкозы и опухолевые болезни сельскохозяйственных животных / Г.Ф. Коромыслов, Л.Г. Бурба, В.М. Нахмансон и др. // Труды ВИЭВ. Т.70. М.: ВИЭВ., 1991. - С.146.

30. Крикун, В.А. Слизистая носа наиболее вероятный путь заражения животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота / В.А.Крикун // Лейкозы крупного рогатого скота: сб. научных трудов МВА им. К.И.Скрябина. - М., 1985. - С.5-7.

31. Кудрявцева, Т.П. Лейкоз животных / Т.П.Кудрявцева // М. Россельхозиздат. 1980. - С.150.

32. Кудряшов, A.A. Патологоанатомические изменения при лимфоидном лейкозе крупного рогатого скота / А.А.Кудряшов, Н.И.Петров // Ветеринария. — 1999.-№10.-С.14-15.

33. Кузнецов, А.П. Влияние некоторых факторов на интенсивность перезаражения коров лейкозом / А.П.Кузнецов, Е.А.Маринин, Л.К.Семина // Ветеринария. 2006. №7. - С. 16-18.

34. Кузнецова, H.B. Использование полимеразной цепной реакции для выявления инфицированного вирусом лейкоза крупного рогатого скота / Н.В.Кузнецов, Г.А.Симонян // Ветеринария. 1997. - №5. - С. 15-16.

35. Кукайн, P.A. Вирус лейкоза крупного рогатого скота / Р.А.Кукайн, Л.И.Нагаева, В.П.Ложа и др. // Рига. «Зинатне». 1982.

36. Кунаков, A.A. К вопросу ветсанэкспертизы и оценки продуктов убоя при лейкозе / А.А.Кунаков, И.Г.Серегин // Труды ВИЭВ. М.1999 - С.232-234.

37. Лазарев, И.М. Опухоли лимфатических узлов (цитологическая диагностика) / И.М.Лазарев // Атлас. Кишинев, 1990.

38. Лемеш, В.М. О доброкачественности мяса при лейкозе крупного рогатого скота / В.М. Лемеш, П.И.Пахомов // Тез. докладов 2-ой международной научно-практической конференции. -М., 1997. — G.45-46.

39. Лемеш, В.М. Изменение качества мяса при заболевании крупного рогатого скота лейкозом / В.М. Лемеш, П.И. Пахомов // Проблемыпроизводства молока и говядины. Материалы Международной конференции. — Жодино., 1996. С.68-69.

40. Макаров, В.В. ПЦР-диагностика лейкоза крупного рогатого1 скота /

41. B.В.Макаров, Д.Н.Гринишин // Ветеринария. 2005. - №4. - С.9-11.

42. Маккерди, Б.Д: Обнаружение и идентификация патогенных микроорганизмов молекулярными методами / Б.Д. Маккерди, Д.А. Чимера // В кн.: Молекулярная клиническая диагностика. -М.: Мир. 1999. - С.496-506.

43. Максимова, Е.В. Особенности иммуноморфологических изменений с лейкемической формой лейкоза / Е.В.Максимова, Л.В.Губайдуллина // Эффективность адаптивных технологий в животноводстве. — Ижевск. 2004. —1. C.65-70.

44. Мальцева, H.A. Использование диагностических ДНК-зондов для обнаружения провируса бычьего лейкоза у инфицированных коров / H.A. Мальцева, A.C. Каледина, Е.И. Олейник и др. // Вопросы вирусологии. 2002. — Т.47. - №:. - С.38-41

45. Мандыгра, Н.С. Эпизоотологическое значение прижизненной диагностики лейкоза крупного рогатого скота / Н.С. Мандыгра // Ветеринария. -2000. №6.-С. 15-17.

46. Меграбян, Д.С. Лейкоз крупного рогатого скота. 1. Характеристика болезни и ее этиологии / Д.С. Меграбян, A.B. Метелев, В.В. Колотвин и др. // Российский ветеринарный журнал. 2006. - №3. - С.5-7.

47. Меграбян, Д.С. Методы диагностики в борьбе с лейкозом крупного рогатого скота (РИД, ИФА, ПЦР) / Д.С. Меграбян // Ветеринарная патология.-2009.-№2.-С.85-87.

48. Меньшикова, З.Н. Электронно-микроскопическая характеристика вариантов морфогенеза бычьего лейкозного вируса / З.Н.Меньшикова, Махмуд Абдель З.С. // Сборник научных трудов МВА. 1980. - Т.107, - С.13-19.

49. Меньшикова, З.Н. Особенности морфологии лимфоидной ткани и качества мяса при хроническом лимфолейкозе крупного рогатого скота / З.Н. Меньшикова, Т.В. Курмакаева, М.И. Гулюкин и др. // Материалы

50. Всероссийской конференции к 65-летию Свердловской НИВС.- Екатеринбург, 2001. С.115-117.

51. Меньшикова, З.Н. Морфологическая оценка лимфатической системы при лейкозе крупного рогатого скота / З.Н.Меньшикова, Г.В.Сноз, М.Ф.Боровков // Материалы методической и научной конференции: сб. науч. Трудов. -М., 2001. С.228-230.

52. Москалик, P.C. Лейкоз крупного рогатого скота (меры профилактики и борьбы Молдавии) / P.C. Москалик, Е.В. Ренице. Кишинев, 2003.

53. Мурватуллаев, С.А. Трансплацентарная передача ВЛКРС от матери к потомству / С.А. Мурватуллаев // Бюллетень ВИЭВ. 1983. - В.50. - С. 13-14.

54. Надточей, Г. А. Морфологическая характеристика и иммунологические свойства онкорнавируса типа С крупного рогатого скота / Г.А. Надточей, А.Ф. Валихов, Л.Г. Бурба, В.А.Горбатов // Доклады ВАСХНИЛ. 1976. -№5.-С.31-34.

55. Нахмансон, В.Н. Особенности инфекционного и эпизоотического процесса при лейкоза крупного рогатого скота / В.М. Нахмансон // Ветеринария. 1990. - №7. - С.32-36.

56. Нахмансон, М.В. Ведущее звено в системе профилактики и борьбы с лейкозом / В.М.Нахмансон // Ветеринария. 1994. - №3. - С.9-13.

57. Нахмансон, BIM. Особенности инфекционного процесса лейкоза крупного рогатого скота / В.М. Нахмансон, Н.И.Петров, C.B. Лопунов // Веткорм. 2005. - №6. - С. 12-13.

58. Облап, Р.В. Выявление провирусной ДНК крупного рогатого* скота ' методом полимеразной цепной реакции / Р.В. Облап, С.Б. Зеленый, В.И. Глазко // Материалы Сибирского международного ветеринарного конгресса. -Новосибирск. 2005. - С.44-45.

59. Обухов, И.А. Применение ПЦР в ветеринарии / И.А.Обухов // Аграрная Россия. М. - 2002. - №2. - С.62-64.

60. Орлов, A.A. Перекисное окисление липидов и морфология сыворотки крови при лейкозе крупного рогатого скота / А.А.Орлов, И.А. Пахмутов // Тез. докладов III Российской конференции патофизиологии с международным участием. М. - 2004. - С.51.

61. Орлянкин, Б.Г. Таксономия ретровирусов и характеристика вируса лейкоза крупного рогатого скота / Б.Г. Орлянкин, М.И. Гулюкин, Н.В. Замараева и др. // Труды ВИЭВ, т.72. М.: ВИЭВ. - 1999, - С. 16-22.

62. Орлянкин, Б.Г. Классификация ретровирусов и характеристика вируса лейкоза крупного рогатого скота / Б.Г.Орлянкин, М.И.Гулюкин, Н.В.Замараева //Ветеринария. 2000. - №5. - С. 17-19.

63. Парчинский, О.Ч. Сопоставление клинической картины и патоморфологических изменений органов, желудочно-кишечного тракта при лимфатическом лейкозе у крупного рогатого скота- / О.Ч. Парчинский // Проблемы лейкоза. М. Колос. - 1967.

64. Пахомов, П.И. Ветеринарно-санитарная и биологическая оценка мяса крупного рогатого скота больного лейкозом / П.И.Пахомов: автореф. дис. канд. ветеринарных наук. Минск. - 1998. - 19 с.

65. Петров, Н.И. Диагностика и методы борьбы с лейкозом крупного рогатого скота / Н.И.Петров // Материалы Всероссийского совещания-семинара. Брянск., - 2004. - С. 104-106.

66. Пиголкина, В.В. Ультраструктура лейкоцитов крови и кроветворных органов крупного рогатого скота при гемобластозах/ В.В.Пиголкина // Труды ВИЭВ, т. 70. -М.: ВИЭВ, 1983.-С. 141.

67. Пипирас, Ю.Ю. Оценка мяса крупного рогатого скота при лейкозе / Ю.Ю. Пипирас: автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук. Литература СХА., 1972. - 18с.

68. Прохватилова, Л.Б. Применение ПЦР для раннего обнаружения провируса лейкоза крупного рогатого скота у экспериментально инфицированных животных / Л.Б. Прохватилова, С.Н.Козлов, А.И.Ломакин и др. // Ветеринария. 2001. - №8. - С. 17-21.

69. Пышко, И.И. Ветеринарно-санитарная оценка мяса крупного рогатого скота больного лейкозом в субклинической стадии развития болезни / И.И.Пышко: автореферат диссертации кандитата ветеринарных наук. Беларусь. НИВ И. - 1972.

70. Русинович, A.A. Эпизоотическая характеристика лейкоза крупного рогатого скота / A.A. Русинович // Издание Академии аграрных наук Республики Беларусь. 2002. - №1. - С.73-77.

71. Рыбаков, С.С. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции / С.С.Рыбаков // Вестник РАСХН. 1998. - №5. -С.65-68.

72. Салимов, Х.С. О методах индикации онкорнавирусной инфекцию / Х.С. Салимов // С.-х. биол. 1986. - №12. - С.99-103.

73. Светличкин, В.В. Теоретическое обоснование и разработка теста систем ускоренной оценки безопасности и качества объектов ветеринарно-санитарного контроля / В.В. Светличкин: автореферат диссертации доктора ветеринарных наук. М.2002. - 40 с.

74. Свириденко, Г.М. Пути обеспечения безопасности молока при лейкозе крупного рогатого скота / Г.М. Свириденко, Е.Г.Семов // Молочная промышленность. 2003. - №7. - С.8-10.

75. Симонян, Г.А. Цитоморфологическая диагностика гемобластозов крупного рогатого скота / Г.А.Симонян, В.А.Горбатов, Г.С.Петровский // Труды ВИЭВ. Т.59. М.: ВИЭВ, 1983. - С.35-42.

76. Симонян, Г.А. Методы прижизненной диагностики лейкоза / Г.А.Симонян // Лейкозы и злокачественные опухоли животных: под ред. В.П.Шишкова, Л.Г.Бурды. -М. Агропромиздат, 1988. - С.133-153.

77. Симонян, Г.А. Ветеринарная гематология / Г.А.Симонян, Ф.Ф. Хисамутдинов // М. Колос. - 1995. - 256 с.

78. Симонян, Г.А. Цитоморфология клеток кроветворения у крупного рогатого скота при гемобластозах / Г.А. Симонян // Российский ветеринарный журнал. М. - 2006. - №3. - С.9-12.

79. Смирнов, A.M. Контроль качества и безопасности мяса и мясопродуктов / А.М.Смирнов // Ветеринария. 2006. - №8. - С.3-5.

80. Смирнов Н.П. Научные и практические основы оздоровления стад от лейкоза крупного рогатого скота в Сибири / П.Н.Смирнов, В.В.Храмцов, В.В.Смирнова // Всероссийская конференция к 65-летию Свердловской■ НИВС: материалы. Екатеринбург. - 2000. - С. 104-114.

81. Смирнов, П.Н. Лейкоз крупного рогатого скота: проблемы и их решения на уровне субъектов Федерации / П.Н.Смирнов // Ветеринария. 2007. - №8. - С.4-6.

82. Смирновг Ю.П. Основные пути распространение лейкоза- / Ю.П.Смирнов // Ветеринарная1 газета. 1999i - №4. - с.3-4.

83. Смирнова, В.В. Гемобластозы крупного рогатого скота / В.В.Смирнова // Актуальные вопросы зоотехнической науки и практики как основа улучшения качества и здоровья сельскохозяйственных животных. — Ставрополь. 2003. - С.404-406.

84. Снежков, Н.И. Биологические свойства молока и его роль в распространении возбудителя лейкоза крупного рогатого скота / Н.И.Снежков, М.И. Гулюкин, Л.Г. Бурба и др. // Ветеринария. 1991. - №1. - С.30-34.

85. Соколов, Д.С. Краткий аналитический обзор состояния изученности проблемы ветеринарно-санитарной оценки мяса при лейкозе крупного рогатогоскота / Д.С.Соколов // Материалы Международного Сибирского ветеринарного конгресса. Новосибирск. - 2004. - 200.

86. Сюрин, Н.В. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В.Соловьева, Н.В.Фомина // М.: ВНИТИБП. 1998.

87. Таджибаев, A.A. Патоморфологические изменения при спонтанном и экспериментальном лейкозе / A.A. Таджибаев: автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук, 1984. 19 с.

88. Туник, А.Н. Обеспечение эпизоотологического и ветеринарно-санитарного благополучия Москвы / А.Н.Туник // Труды ВНИИВ СГЭ. «Проблемы ветеринарной санитарии и экологии». М. - 2006. - Т. 118. — С. 1217.

89. Федоров, B.C. Особенности проявления эпизоотического процесса лейкоза крупного рогатого скота в хозяйствах различных форм собственности /

90. B.С.Федоров, А.Г.Иванов, В.В.Храмцов // Научное обеспечение ветеринарных проблем в животноводстве: сборник научных трудов ИЭВ Сибири и Дальнего Востока. Новосибирск. - 2000. - С.81-83.

91. Федотов, В.П. Лейкоз крупного рогатого скота в Ивановской области / В.П.Федотов, О.В.Иванов // Ветеринария. 2006. - №3. - С.23-25.

92. Хисамутдинов, Ф.Ф. Племенной молодняк — источник вируса лейкоза крупного рогатого скота / Ф.Ф. Хисамутдинов, И.Н.Никитин // Ветеринария. 1996. - №. - С. 11-14.

93. Храмцов, В.В. Влияние эпизоотического состояния на сроки оздоровления стад от лейкоза (на примере Красноярского края) / В.В.Храмцов,

94. C.И.Логинов, А.Т. Анишин // Научное обеспечение ветеринарных проблем вживотноводстве: сборник научных трудов H3Bi Сибири и Дальнего Востока. -Новосибирск. 2000. - С.196-198.

95. Шкаева, H.A. Лейкоз крупного рогатого скота на территории Урала / Н.А.Шкаева, В.А. Бударков // Ветеринария. 2005. - №9. - С.9-11.

96. Шкута, А.Б. Краткий обзор диагностической эффективности гематологического метода диагностики лейкоза крупного рогатого скота / А.Б. Шкута // Материалы Международного Сибирского ветеринарного конгресса. -Новосибирск. 2005. - С. 172.

97. Шишкин, A.B. Современные особенности распространения лейкоза крупного рогатого скота в субъектах Российской Федерации / А.В.Шишкин: автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук. 2006. - 21с.

98. Шишков, В.П. Наступление на лейкозы животных / В.П.Шишков // Наука и человечество. М- 1988. - С.103-113.

99. Шишков, В.П. Ультраструктурная характеристика вирусопродуцирующих лимфоцитов при лейкозе крупного рогатого скота // В.П.Шишков, З.Н.Меньшикова // Архив патологии. 1989. - №4.- С.45-52.

100. Эрнст, Л.К. Новые аспекты селекции крупного рогатого скота на устойчивость к лейкозу / Л.К.Эрнст, В.П.Шишков // Сельскохозяйственная биология. 1984. - №2. - С.96-104.

101. Alencar Filno, R. Estudo ultrastructurae de linfocitos de bovines infectodos pelo virus da leucose / de T.R.Alencar, J.July, W.Oliveira et al. // Biologico. 1982. - №5. - P.135-137.

102. Bendixen; N. Bovine^ enzootic leucosis / N.Bendixen // Adv. Vet. Sci. -1972.-№10.-P.l29-204.120: Bolognesi; D. Assembly of type concornaviruses a model / D.Bolognesi, H.Frank, R.Montelaro et al. // Science. 1987, 199. - №25. -P.183-186.

103. Bruck K. Biologically active epitopes of bovine leukemia virus glycoprotein egp 51: their dependence on protein glycosylation and genetic variabieitty / K.Bruck, N.Rensonnet, D.Portetelle et al. // Virology. 1984. - 136, №L. -P.20-31.

104. Burny A. Laleucemie bovine: systeme modele de leucemogenisation par un retrovirus / A.Bumy, Y.Cleuter, C.Dandoy et al. // Ann. Med. Vet. 1986, 130. -№4. - P.287-294.

105. Burny, A. Bovine leukemia: Facts and hypotheses derived from the study of an infections cancer / A.Burny, Y.Cleuter, R.Kettmann et al. // Vet. Microbiol. -1988.- 17.-№3.- P. 197-218.

106. Buxton, B. Role of insects the transmission of bovine leucosis virus: potential for transmission by stable flies horn and tabanids / B.Buxton, N.Hinkle, R.Schuetz // Amer. J. Vet. Res. 1985. - №46. - P. 123-126.

107. Calafat J. Morphogenesis of bovine leukemia virus / J.Calafat, A.Ressang // Virology, 1978, 80. - №1., P.42-53.

108. Calafat J. Ultrastractural study of viruslike particles in Chiness hamster, lung cells / J.Calafat, J.Hilkens // J. Jen. Virol. 1978. - 41. - №2. - P.417-420:

109. Evermann J. Prevalence of bovine leukemia virus antibody in seven heard of Holstein-friesian cattle / J.Evermann //J. Veter. Res. 1986. - #177. - P.549-550.

110. Ferrer, J.F. Bovine lymphosarcoma / J.F.Ferrer // Adv. Vet. Sci. Comp. Med. 1980,-v.24.-P. 1-68.

111. Ferrer, J. F. Role of colostrum and milk in the natural transmission of the bovine leukemia virus / J.Ferrer, C.Piper // Cancer. Res. 1981. - №41. - P.4906-4909.

112. Floris, A. Bovine leukaemia virus and peripheral blood lymphocytes homeostasis / A.Floris, R.Kettmann, L.Willems // Biotechnol. Agron. Soc. Environnew. 2007. Vol. 11. - №1. - p. 69-78.

113. Gallo, R. Isolation and tissue distribution of type — c virus and viral components from a gibbon age (Hylobates lar) with lymphocytic leukemia / R.Gallo, R. Gallagher, F.Wong-Staal et al. // Virology. 1982. - 84. - №2. - P.359-373.

114. Gupta, Ph. Exhanced expression of the c-myc gene in bovine leukemia virus induced bovine tumors / P. Gupta, S.Kashmiri, M.Erisman et al. // Cancer. Res. - 1986.-46. - №12. -P.6295-6298.

115. Johnson, K. Bovine leukemia virus: A herdbased control strategy / RJohnson, C.Osion, J.Kapeene // Prev. Veter. Med. 1985. - №3. -P.359-340.

116. Hamomoto, H. Histopathological study on six cases of calf leucosis / H.Hamomoto, T.Yoshino //Nat. Inst. Anim. Health. Q. 1975. - №11. P.22-28.

117. Kelly, E. Early detection of bovine leukemia virus in cattle by use of the polymerase chain reaction / E.Kelly // Amer. J. Vet. Res. 1993. - v.54. - №2. -P.205-209.

118. Klintevall, K. Evaluation of an indirect ELISA for the detection of antibodies to bovine leukemia virus in milk and serum / K. Klintevall, K.Naslund, S.Svedlund // J.Ovirol. Methods. 1991.-Vol.33.-P.319-333.

119. Kono Y. Studies of fetuses from cows clinically affected with bovine leucosis / Y.Kono, H.Sentsui, K.Arai et al. // Vet. Microbiology. 1983. - №18. -P.505-508.

120. Koyama, H. Optimal titer of bovine- leukemia virus antigen for immunodiffusion test / H. Koyama // J Japan Veter. Med. Assn. 1981. - №34. -P.374-378.

121. Kono, X. Contact transmission,of bovine leukemia'virus under insect-free conditions / Y.Kono, S.Hiroshi, A.Keigo et al. // Jap. J. Vet. S. C. 1983, 45. - №6. -P. 799-807.

122. Lorenz, R. Observation on serologically weak-positive reactions with the immunodiffusion test (IDT) in the diagnosis of enzootic bovine leucosis (EBL) infections / R. Lorenz et al. // Current topics in Vet.Med. and Anim.Sci. 1982. -№15. -P.413.

123. Mammerickx, M. Rapid detection of bovine leukemia virus infection in a large cattle population with an ELISA performed on pooled sera grouped by heard / M. Mammerickx et al. // Veterinärmedizin. 1985. - Vol.32. - №8. - P.601-608.

124. Mamoum, R. Sequence variability of bovine leukemia virus env gene and to the structure and antigenicity of the glycoproteins / R.Mamoun, M.Morisson, N.Rebeyrotte // J. Virol. 1990. - 64,№9. - P.4180-4188.

125. Meier, U. Ergebnisse des Einsatzes des Elzumimmunoassay bei der Bekmpfung der enzootischen Rinderleikose in der DDR / U.Meier, W.F.Schilow, W. Wittmann et al. // Tagunsbericht Akad. Der Landwirtschaftwiss. der DDR. 1984.

126. Miller, J.M. Virus-Like particles in phytohemagglutinin-stimulated lymphocyte cultures with referect to bovine lymphosarcoma / J.M.Miller, C.Olson, K.G.Gillette // J.Nat.Cancer Inst. 1969. - 43. - №6. - P. 1297-1302.

127. Miller, L.D. Blood from bovine leukemia vims-infected cattle: Antigen production correlated with infectivity / L.D.Miller, M.J. Van der Maaten, M.J,F.Schmerr // Amer.J.Vet.Res. 1985. - №46. P.808-810.

128. Mussgay, M. The bovine leucosis virus / M.Mussgay, B.Dietrshold, B.Frenzel // Med:Microbiol. and lmmunol. 1987. - v. № 1 -3. - P. 131 -138.

129. Ohsnima, K. Pathological-studies on aleukemic case of bovine leucosis / K. Ohsnima, K.Omi, K.Okada et al.// Japan J.Veter.Sci. 1980. - №42. - P.297-309.

130. Horvath, M. Electron microscopytool to diagnostics pathology / M.Norvath // Vet.Med.Praha. 1996. - 41. - P. 191 -195.

131. Olson, C. Role of C-type virus in bovine lymphosarcoma / C.Olson, L.Miller, J.Miller // Bibliogr. Haematol. 1973. - №39-P.3249-3256.

132. Olson, C. C-type virus and lymphocyte nuiclear projections in bovine lymphosarcoma / C.Olson, L.Miller, K.Gillette // J.Amer.Vet.Med:Ass. 1970, 156.- P.1880-1883.

133. Onuma, M. Integration of bovine leukemia virus DNA in the genomes of bovine lymphosarcoma cells / M.Onuma, N.Sagata, K.Okata et al. // Microbiol. And Immunology. 1982. - 26. - №8.-P.813-820.

134. Onions, D. Animal models: lessons from feline and bovine leukemia virus infections / D.Onions //Leuk. Res. 1985,9 - №6. - P.709-711.

135. Ogawa, Y. No involvement of bovine virus in sporadic bovine lymphosarcoma / Y.Ogawa, N.Sagata, M.Onuma et al. // 1986, 30. №7. - P.697-701.

136. Ressang, A. Transmissie en immunologische respons bij enzootische bovine leukose / A.Ressang, N.Mastenbroek, J.Quak // Tijdschr.Diergeneesk. 1987.- №16. P.657-660.

137. Results of veterinary inspection of slaughter animals and meat in Poland in 2003 //Med. Weter.-2005. Vol. 61. -№10.-P. 1160-1161.

138. Ristan, E. Zur Funktion des humoralen und zelluralen Immun systems bei Rindern mit Enzootischer leukose / E.Ristau, W.Wittmann // Monatsh. Veterinär. Med. 1985. - №6. - P.548-553.

139. Romero, C. Boophilus microplus. Bovine leucosis virus infectivity in Boophilus microplus ticks / C.Romero, D.Abaracon, Ch.Rowe et al. // Vet.Rec. -1984. №17. - P.440-442.

140. Romero, C. Transmission of bovine leukemia virus in milk / C.Romero, B.Cruz, Ch.Rowe // Trop. Anim.Health and Prod. 1983. - №4. - P.215-218.

141. Prem, P. Evidence for the. replication of bovine leukemia virus in« the B' lymphocytes-/ P.Prem, K.Pomeroy, D.Johson et al. // Amer. J. Vet. Res. 1977. - 6. -P.873-876.

142. Sagata, N. Comparison'of the entire genomes of bovine leukemia^ virus and characterization of their unidentified open reading frames / N.Sagata, T.Yasunaga, K.Ohishi et al. // Embo J. 1985:v3. - №13. - PI3231-3237

143. Theilen, G. Bovine lymphosarcoma in California / G.Theilen, D.Dungworth, J.Lengyel // Epizootologic and Hematoloc aspects. Health Lab. Sei. -1961. №1. -P.96-106.

144. Van der Maaten, M. Role of the spleen in the path genesis of experimentally induced bovine leukemia virus infection / M. Van der Maaten, J.Miller, M.Schmerr // Veterinary Microbiol. 1982. - №7. - P.411-418.

145. Von Melcher. Zur Ätiologie und Pathogenese der leukamien / H. von Melcher, K.Hoffken, C.Schmidth // Dtsch. Med. Wochenschr. 1983. - 108. - №44. -P.1686-1692.

146. Watanabe, K. A case of ovine lymphosarcoma / K.Watanabe et al. // J.Japan.Ket.Med.Assn. 1999, v.47. - №3. - P. 172-173.

147. Weber, A. Relationship between nuclear pockets in bovine peripheral blood lymphocytes and C-type virus particles in cultures of these cells / A.Weber, M.Fahning, R.Hammer et al. // J.Natl.Cancer.Just. 1973. - №51. - P.81-88.

148. Weber, A. Ensootic bovine leucosis: Frevaleuce of Blood Lymphocyte Nuclear Pockets in Dairy Bulls in the United States and Foreign Contries / A.Weber, C.Bingham, K.Pomeroy et al. // Amer.J.Vet.Res. 1980. - v.41. - №1. -P.14-18.

149. Weiland, F. Ultrastructural comparison of bovine leukemia virus (BLV) with C-type particles of other species / F. Weiland, S.Ueberschar // Arch.Virol. -1976, 52. №1-2. -P.157-190.

150. Yoshikawa, T. Scanning electron« microscopic study of bovine leukemic cells / T. Yoshikawa, T.Oyamada, H.Yoshikawa et al. // Amer.J.Vet.Res. 1983, 44. - №7. -P.1358-1362.

151. Wittman, W. Grundlagen einer konzeption für ein leukoze bekam pfungs program unter Nutzung des Embryotras - fers / W.Wittman et al. // Mh.Veter. -Med. - 1990. -N45. - S.300-303.

Информация о работе

Рудакова, Оксана Николаевна
кандидата биологических наук
Москва, 2010
ВАК 06.02.05

Диссертация

Анализ современных методов диагностики и ветеринарно-санитарная экспертиза мяса при лейкозе крупного рогатого скота - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы