Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Цито- и гистологические особенности лимфатических узлов и селезенки коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Цито- и гистологические особенности лимфатических узлов и селезенки коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС"

На правах рукописи

Люто Андрей Александрович

ЦИТО- И ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ И СЕЛЕЗЕНКИ КОРОВ, СЕРОПОЗИТИВНЫХ В РИД НА ВЛКРС

06.02.01 - Диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

г 1 ноя 2013

005539342

Улан-Удэ-2013

005539342

Работа выполнена на кафедре анатомии, патологической анатомии и хирургии ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет».

Научный руководитель доктор ветеринарных наук, профессор

Донкова Наталья Владимировна — заведующая кафедрой анатомии, патологической анатомии и хирургии ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет» (г. Красноярск)

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Хибхенов Лопсондоржо Владимирович - заведующий кафедрой анатомии, гистологии и патоморфологии ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Р. Филиппова» (г.Улан-Удэ), доктор ветеринарных наук, профессор Чумаков Виктор Юрьевич - заведующий кафедрой морфологии и физиологии животных ФГБОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н.Ф Катанова» (г. Абакан) Ведущая организация ФГБОУ ВПО «Иркутская государственная

сельскохозяйственная академия» (г. Иркутск)

Защита диссертации состоится «12» декабря 2013 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220.006.01 при ФГБОУ ВПО «Бурятская сельскохозяйственная академия имени В.Р. Филиппова» (670024, Республика Бурятия, г. Улан-Удэ, ул. Пушкина, 8, тел. 8 (3012) 44-26-11, 8 (3012) 44-25-90; факс 8 (3012) 44-21-33. E-mail: bgsha@bgsha.ru).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГБОУ ВПО «Бурятская сельскохозяйственная академия имени В.Р. Филиппова»; (670024, Республика Бурятия г. Улан-Удэ, ул. Пушкина, 8, тел. 8(3012)44-26-11, 8(3012) 44-25-90; факс 8 (3012) 44-21-33.

Объявление о защите и автореферат диссертации опубликованы на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Бурятская сельскохозяйственная академия имени В.Р. Филиппова» http://www.bgsha.ru и на интернет-сайте ВАК http://vak2.ed.gov.ru.

Автореферат разослан« b » (лХ)^ч)1/Ъ<Л 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Томитова Елизавета Алексеевна

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Проблема лейкоза крупного рогатого скота широко и давно обсуждается в научной литературе и практической ветеринарной медицине. Установлено его распространение во всех регионах России [Гулюкин, 2003; Смирнов, 2005; Абакин, 2010; Александров, 2012].

За последние 15 лет в Российской Федерации уровень инфицированности ВЛКРС практически не изменился и находится в пределах 10,3-14,7 %, а доля лейкоза в структуре инфекционной патологии крупного рогатого скота составляет более 50 % [Гулюкин, 2005, 2007; Криворучко, Абакин, Дубравная, 2011; Генджиев, Генджиева, 2012].

Согласно «Правилам по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота» от 11 мая 1999 г. основными методами диагностики ВЛКРС являются серологический (РИД) и гематологический. Известно, что при иммунологической диагностике иногда возникают ложные положительные результаты, обусловленные высоким содержанием иммуноглобулинов в сыворотке крови животных, что может быть связано с различными патологиями [Смирнов, Рябова, 2002], в том числе и глистными инвазиями [Смирнов, Апалькин, Волков, 1995].

Согласно В.А. Апалькину с соавт. (2005), существующие методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота имеют недостатки, поэтому актуальными являются исследования по оптимизации регламента для каждого метода в системе оздоровительно-профилактических мероприятий при лейкозе.

Несмотря на то, что гистологические и цитологические методы диагностики подтверждают диагноз на лейкоз в 95 % случаев, их применение весьма ограничено [Пономарева, 2006; Александров, 2012]. С учетом вероятного возникновения ложноположительных серологических реакций, изучение микроструктуры органов иммунной системы (лифатические узлы и селезенка) у коров, серопозитивных в РИД на лейкоз, является актуальным.

Цель и задачи исследований. Основной целью работы являлось изучение цитологических, гистологических и гистохимических особенностей лимфатических узлов и селезенки коров, серопозитивных в реакции иммунной диффузии (РИД) на ВЖРС.

Были поставлены следующие задачи:

1. Провести анализ уровня инфицированности ВЖРС и заболеваемости лейкозом в хозяйствах Красноярского края.

2. Изучить качественный и количественный состав лейкоцитов крови коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС.

3. Установить цитологические, гистологические и гистохимические особенности лимфатических узлов и селезенки коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС, с изменениями в лейкограмме.

4. Установить цитологические, гистологические и гистохимические особенности лимфатических узлов и селезенки коров, серпозитивных в РИД на ВЛКРС, на фоне инвазии дикроцелиями.

з

Научная новизна. Впервые установлен характер цитологических, гистологических и гистохимических изменений в лимфатических узлах и селезенке коров, серпозитивных в РИД на ВЛКРС, на фоне инвазии дикроцелиями. Определена активность нуклеиновых кислот и уровень содержания гликогена в лимфоидном пролиферате корковой зоны надколенных, надвыменных и бронхиальных лимфатических узлов коров. Установлена возможность развития ложноположительной серологической реакции на ВЛКРС на фоне инвазии дикроцелиями.

Теоретическая и практическая значимость. Данная работа является фрагментом темы «Морфофункциональные особенности органов и тканей животных в норме и при патологии» направления научно-исследовательской работы кафедры анатомии, патологической анатомии и хирургии Красноярского государственного аграрного университета.

Установленные микроструктурные изменения лимфатических узлов, селезенки серпозитивных в РИД на ВЛКРС коров могут служить критерием оценки цитоморфологических изменений при лимфопролиферативных заболеваниях крупного рогатого скота и дифференциальной диагностике ложнопо-ложительных серологических реакций на лейкоз.

Внедрение результатов исследований. Результаты исследований используются при чтении лекции и проведении лабораторных занятий по дисциплинам цитология, гистология, патологическая анатомия, а также эпизоотология животных на кафедрах: «Анатомия, патологическая анатомия и хирургия», «Эпизоотология, микробиология, паразитология и ветеринарно-санитарная экспертиза» Красноярского государственного аграрного университета; «Анатомия и физиология животных» Хакасского государственного университета им. Н.Ф. Катанова; «Диагностика, внутренние незаразные болезни, фармакология, хирургия и акушерство» Омского государственного аграрного университета им. П.А. Столыпина.

Апробация работы. Основные материалы исследований доложены: на Всероссийской очно-заочной научно-практической и научно-методической конференции с международным участием «Инновации в научно-практической деятельности» (Красноярск, 2010); 3-й Красноярской региональной научно-практической конференции «Животные как часть экосистемы» (Красноярск, 2010); Международной заочной научной конференции «Проблемы современной аграрной науки» (Красноярск 2010, 2011); Международной научно-практической конференции «Наука: опыт, проблемы, перспективы развития» (Красноярск, 2012); научной интернет-конференции «Актуальные проблемы ветеринарии» (Новосибирск, Омск, Красноярск, Барнаул, 2012).

Личный вклад автора. Представленные в диссертационной работе экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены автором самостоятельно.

Публикации. По результатам научных исследований опубликовано восемь печатных работ, в том числе две - в ведущих научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ: «Ветеринарная патология», «Вестник КрасГАУ».

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

• Лимфатические узлы и селезенка коров, инфицированных ВЛКРС и с изменениями в лейкограмме, имели цитологические, гистологические, а также гистохимические изменения на всех уровнях микроструктуры органа.

• В органах иммунной системы коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС, на фоне инвазии дикроцелиями отсутствовали характерные для лим-фоидного лейкоза микроструктурные изменения.

• Гистологические и гистохимические методы исследования лимфатических узлов и селезенки позволяют дифференцировать аллергические реакции при инвазиях от изменений при лейкозе крупного рогатого скота.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 110 страницах печатного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций. Список использованной литературы включает в себя 160 источников, в том числе 60 иностранных. Работа содержит 4 таблицы и 40 рисунков, из них 3 макрофотографии и 30 микрофотографий.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал и методы исследования

2.1.1. Объект и материалы исследований

Исследования и обработка экспериментального материала проведены в течение 2009-2013 гг. на кафедре «Анатомия, патологическая анатомия и хирургия» Красноярского государственного аграрного университета, в ЗАО «Агрофирма Маяк» Сухобузимского района, хозяйстве «Захаровская заимка» Енисейского района Красноярского края, убойном пункте Уярского мясокомбината и отделе «Ветеринарная медицина» Красноярского НИИ животноводства Россельхозакадемии.

Объектом исследования явился черно-пестрый голштинизированный крупный рогатый скот, коровы в возрасте от трех до восьми лет.

Материалом для исследования послужили цельная кровь, сыворотка крови, лимфатические узлы и селезенка, а также информационные материалы службы по ветеринарному надзору Красноярского края и отдела экономического анализа и прогнозирования министерства сельского хозяйства и продовольственной политики Красноярского края.

Для решения поставленных задач на базе животноводческого комплекса ЗАО «Агрофирмы Маяк», неблагополучного по лейкозу крупного рогатого скота, было сформировано три группы животных.

Первая группа — больные лейкозом коровы: положительно реагирующие в реакции иммунодиффузии на ВЛКРС (РИД+), гематологически положительные (Гемо+).

Вторая группа - инфицированные коровы: положительно реагирующие в реакции иммуной диффузии на ВЛКРС (РИД+), гематологически отрицательные (Гемо-).

Третья группа - клинически здоровые коровы: отрицательно реагирующие в реакции иммунодиффузии на ВЛКРС (РИД-).

Схема формирования опытных групп животных представлена в таблице 1.

Таблица 1 - Схема формирования опытных групп животных

Группа Серологические исследования Гематологические исследования Кол-во животных в группе

1 - больные РИД+ Гемо+ 15

2 - инфицированные РИД+ Гемо- 20

3 - здоровые РИД- Гемо- 20

2.1.2. Методы исследований

Основными методами исследования являлись гистологические, гистохимические, цитологические, гематологические и биостатистические, а также ретроспективный анализ инфицированности и заболеваемости животных ВЛКРС. Общая структура исследований приведена на рисунке 1.

Гистологические и гистохимические методы. Для гистологического исследования отбирали надколенные 1утрЬопос1ш виЫНасиз, надвыменные 1утрЬопос1из БиргататгН и трахеобронхиальные 1утрЬопоёиз 1гасЬеоЬгопсЬа1ез лимфатические узлы. Кусочки органов фиксировали в 10 %-м растворе нейтрального формалина и жидкости Буэна, промывали под проточной водой, обезвоживали путем последовательного проведения через батарею спиртов возрастающей крепости и уплотняли в парафине согласно общепринятым методикам, описанным в руководствах по гистологии. Поперечные и продольные срезы толщиной 5-10 мкм изготавливали на санных микротомах «МС-2» и «Техном» с насадкой для криотомии.

Для получения обзорных препаратов гистологические срезы окрашивали гематоксилином Эрлиха и эозином, по Ван Гизон и Малори.

Гликоген и гликопротеины выявляли реактивом Шиффа при предварительном окислении препаратов периодатом натрия по методу А.Л. Шабадаша, в сочетании с энзиматическим контролем срезы выдерживали в растворе амилазы слюны при I +37 °С в течение одного часа. За гликоген принимали ШИК-позитивные вещества, ферментирующиеся амилазой слюны. ШИК-позитивный материал, устойчивый к ферментированию амилазой, относили к нейтральным гликопротеидам. Гликоген окрашивался в интенсивный темно-красный цвет, мукоиды и гликопротеины - в красно-лиловый [Хонин, Барашкова, Семченко, 2004].

б

Рисунок I - Общая структура исследований

ДНК- и РНК-содержащие структуры выявляли окраской метиловым зеленым с пиронином по Браше. При этом структуры, содержащие РНК, окрашиваются в красный цвет, ядерный хроматин - в зеленый, сине-зеленый или пурпурно-зеленый. Контрольные препараты, обработанные рибонуклеазой, не окрашиваются пиронином, ДНК хроматина выявляют в виде частиц зеленого цвета или зелено-синих образований [Хонин, Барашкова, Семченко, 2004].

Цитологические методы. Цитологическому исследованию подвергнуты биоптаты поверхностных шейных лимфатических узлов коров, а также мазки цельной крови.

Для получения обзорных цитологических препаратов биоптаты лимфатических узлов и мазки крови окрашивали по Паппенгейму, комбинированному методу, сочетающему в себе предварительное окрашивание-фиксацию метиле-новым синим по Май-Грюнвальду, с последующим докрашиванием краской Романовского-Гимза. Данный метод позволяет достоверно дифференцировать как ядро, так и зернистость лейкоцитов. Определение соотношения различных форм лейкоцитов (лейкоцитарную формулу) проводили по методу Филлипчен-ко.

Гематологические методы. Для гематологического исследования у животных отбирали пробы крови из яремной вены. Цельную кровь, полученную при добавлении антикоагулянта, подвергли морфологическому анализу на кафедре анатомии, патологической анатомии и хирургии Красноярского государственного аграрного университета. Для подсчета количества лейкоцитов пробы цельной крови разводили в жидкости Тюрка и далее производили подсчет лейкоцитов в 100 больших квадратах в камере Горяева [Карпуть, 1986]. Исследование сыворотки крови в реакции иммунодиффузии (РИД) проводили в КГБУ «Краевая ветеринарная лаборатория» г. Красноярска, ул. Дудинская, 5 г. Результаты исследований оценивали согласно «Методическим рекомендациям по диагностике лейкоза крупного рогатого скота» от 23.08 2000 г. № 13-7-2/2130.

Сводные данные по количеству исследованных проб представлены в таблице 2.

Ретроспективный анализ инфицированности BJIKPC и заболеваемости лейкозом животных проводили по данным информационных материалов службы по ветеринарному надзору Красноярского края и отдела экономического анализа и прогнозирования министерства сельского хозяйства и продовольствия Красноярского края, а также журналам ветеринарной отчетности (форма вет. 1) ЗАО «Агрофирма Маяк» за период с 2008 по 2011 г.

Биостатистические методы. Полученные в ходе проведенных экспериментальных исследований данные обработаны с учетом рекомендаций по биометрии [Глотов 1982; Лакин 1990; Автандилов, 1990, 2004].

Оценку достоверности различий проводили методом вариационной статистки с использованием t-критерия Стьюдента. Различия считали значимыми, если вероятность случайности не превышала 5 % (Р<0,05).

Статистическую обработку полученных данных проводили на ПК с помощью прикладных программ Microsoft Office Exel 2007.

Термины и обозначения, приводимые в тексте, даны в соответствии с Международной Ветеринарной Анатомической номенклатурой (Nomina Anatómica Veterinaria, 2013).

Таблица 2 - Сводные данные по количеству исследованных проб

Методы исследований Количество исследованных проб Итого

1-я группа 2-я группа 3-я группа

Гематологические 15 20 20 55

Цитологические 15 20 20 55

Гистологические 15 20 20 55

Гистохимические 15 20 20 55

Патоморфологические 15 20 20 55

Всего 275

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Анализ уровня инфицированности ВЛКРС и заболеваемости лейкозом в хозяйствах Красноярского края

Проведенный анализ по данным информационных материалов службы по ветеринарному надзору Красноярского края и отдела экономического анализа и прогнозирования министерства сельского хозяйства и продовольствия Красноярского края, показал, что уровень инфицированности ВЛКРС за период с 2008 по 2011 г. составил 1,95-2,1 %. В среднем за год выявляется до 340 больных лейкозом животных, что составляет 0,6 %. Количество животных, исследованных на ВЛКРС за указанный период, снизилось при фактически неизменном уровне инфицированности и заболеваемости, что свидетельствует о напряженной ситуации по лейкозу в крае (рис. 2).

-Инфицированны е животные (положительно реагирующие в РИД на ВЛКРС)

-Больные (ГЕМО положительные)

2008

2009

Рисунок 2 - Количество инфицированных ВЛКРС и больных лейкозом коров в Красноярском крае за период с 2008 по 2011 г.

Наиболее неблагополучная ситуация по ВЛКРС складывается в Сухобу-зимском, Емельяновском, Енисейском, Ермаковском, Большемуртинском, Ба-лахтинском, Курагинском, Назаровском, Боготольском, Каратузском, Тюхтет-ском, Саянском и Рыбинском районах.

Так, в Сухобузимском районе Красноярского края в ЗАО «Агрофирма Маяк», анализ по уровню заболеваемости ВЛКРС за 2008-2011 г. показал, что уровень инфицированности животных (положительно реагирующих в РИД) в 2008 г. составил 34,3 %, в 2009 г. - 26,5; в 2010 г. - 37,4; в 2011 г. - 18,7 %; а уровень заболеваемости - 0,7; 0,8; 1,1 и 1,8 % соответственно, то есть вырос за исследуемый период более чем вдвое (рис. 3).

-♦-РИД

положительные

'—ъг^ьь ч^-п—гьми

т» 18,7

--С--С.Т -□ 1,8

7ГУ1Я 7ППЧ 7П1П ?П11

Рисунок 3 —Динамика инфицированности ВЛКРС и заболеваемости

животных в ЗАО «Агрофирма Маяк» за период с 2008 по 2011 г., %

Таким образом, в 2011 г. в ЗАО «Агрофирма Маяк» Сухобузимского района Красноярского края уровень инфицированности ВЛКРС превысил средние значения по краю более чем в 9 раз, а по уровню заболеваемости -втрое, что свидетельствует о напряженной эпизоотической ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в данном хозяйстве.

2.2.2. Качественный и количественный состав лейкоцитов крови коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС

На базе животноводческого комплекса ЗАО «Агрофирмы Маяк» исследован качественный и количественный состав лейкоцитов крови больных, инфицированных и здоровых коров.

Уровень лейкоцитов у больных животных в среднем выше, чем у клинически здоровых, в 2,5 раза (Р < 0,001), при этом количество лимфоцитов достоверно превышает контрольные значения втрое. Уровень лейкоцитов и лимфоцитов у инфицированных животных не имеет существенных отличий по сравнению со здоровыми (табл. 3).

Согласно таблице, статистически значимые различия по количеству лейкоцитов имеет 1-я группа по отношению к контрольной, при 1= 13,3 и р<0,001 разница между 1-й и 3-й группой составила 10,922 х 1012/л клеток. Показатели

Ю

2-й группы по отношению к 3-й группе составили 1,016 при 1=2,5 и р<0,05 и находятся в пределах статистически неопределенных различий.

Такая же закономерность прослеживается и в составе лимфоцитов. В 1-й группе по отношению к 3-й группе разница в абсолютном количестве лимфоцитов в среднем равна 10,076 х 1012/л клеток при 1=9,1 и р<0,001. Во 2-й группе -0,855 х1012/ л клеток при 1=2 и р>0,05, из этого следует, что разница в количестве лимфоцитов лежит вне пределов статистической значимости.

В группе инфицированных и здоровых животных уровень лимфоцитов и лейкоцитов находится в пределах физиологической нормы.

Таблица 3 - Количество лейкоцитов и лимфоцитов в крови коров

Группа Лейкоциты, 109/л Лимфоциты, % Лимфоциты, 109/ л Возраст, лет РИД и Гемо-статус

1 - больные 18,1 ±2,3* 79,6±6,5* 14,3±2,4* 5,9 Гемо+, Рид+

2—инфицированные 8,20±0,9 62,5+4,3 5,1±1,4 5,9 Гемо-, Рид+

3 - здоровые 7,2±0,7 59,5±2,9 4,2+1,1 6,1 Гемо-, Рид-

Примечание: уровень достоверности различий по отношению к 3-й группе: *Р<0,001.

При анализе качественного состава лейкоцитов крови крупного рогатого скота у больных, инфицированных и здоровых животных установлено, что наиболее характерные отличия в лейкограмме выявлены в 1-й и 2-й группах, в частности, по количеству лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов (табл. 4).

Таблица 4 - Лейкограмма периферической крови коров, %

Нейтрофилы Эозинофилы, %

Группа Моноциты, % Юные, % Палочкояд., % Сегментояд., % Базофилы, % Лимфоциты, 9?

1 — больные 2,8±2,2 0,6+0,6 2,7±1,5 7,2±3,6* 0,40±0,4 6,7±2,3 79,6±б,4*

2 - инфицированные 4,1+1,7 0 3,9±1,1 20,6±3,8 0,30+0,3 8,6+2,4 62,5±4,3

3 - здоровые 3,8±1,5 0 4,2±0,9 24,4±2,9 0,70±0,7 7,4±1,6 59,5±3,3

Примечание: уровень достоверности различий по отношению к 3-й группе: *Р<0,001.

При исследовании мазков крови морфологические изменения лимфоцитов отмечаются лишь у больных коров. В поле зрения на малом увеличении наиболее часто встречаются лимфоциты (до 2-15 в поле зрения). В мазках крови больных животных они составляют большую часть клеток, причем среди

лимфоцитов наиболее часто встречаются большие, средние лимфоциты и поврежденные клетки, при этом структура гранулоцитов не изменена.

Таким образом, из числа инфицированных ВЛКРС коров, выявленных в РИД, количество гематологически больных составляет в среднем 3,3 %. Уровень лейкоцитов у больных животных в среднем выше, чем у клинически здоровых в 2,5 раза (Р< 0,001), при этом количество лимфоцитов достоверно превышает контрольные значения втрое. У 96,7 % коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС, достоверной разницы в качественном и количественном составе лейкоцитов периферической крови по сравнению с контролем не установлено.

2.2.3. Цитологические, гистологические и гистохимические особенности лимфатических узлов и селезенки коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС, с изменениями в лейкограмме

При осмотре на убойном пункте мясокомбината надвыменных, надколенных лимфатических узлов установлено, что у животных, положительно реагирующих в РИД, и имеющих изменения в лейкограмме (лимфоцитоз), отмечается незначительное увеличение их размеров. Капсула лимфатических узлов отделяется легко, на разрезе граница между мозговой и корковой зоной трудноразличима. Трахеобронхиальные лимфатические узлы увеличены в разной степени: от 2 до 5 раз. Капсула лимфатических узлов отделяется легко, на разрезе рисунок органа стерт.

Микроскопически в надвыменных, надколенных и бронхиальных лимфатических узлах у коров, положительно реагирующих в РИД и имеющих изменения в лейкограмме (лимфоцитоз), отмечается сильно выраженная парафолли-кулярная гиперплазия лимфоидных клеток. Границы лимфатических фолликулов не определяются, корковая зона заполнена диффузными пролифератами, состоящими из зрелых малых и средних лимфоцитов и лимфобластов (рис. 4). У клинически здоровых животных (РИД-отрицательные) в исследуемых лимфатических узлах на малом увеличении фолликулы имеют четко очерченные границы, светлый герминативный центр и выраженную корону фолликула. Па-рафолликулярная зона лимфатического узла рыхло заполнена лимфоцитами и ретикулярными клетками; краевые синусы небольшие, но четко выраженные. Капсула лимфоузлов хорошо выражена, умеренных размеров, незначительно разволокнена и содержит различное количество жировой ткани в зависимости от упитанности животного.

У больных лейкозом животных в лимфатических узлах единично встречалась фолликулярная гиперплазия, она выражалась в равномерно и плотно заполненных герминативных центрах фолликулов, состоящих из В-лимфоцитов, разной степени зрелости, и стиранием границ короны фолликула. На фоне фолликулярной гиперплазии обнаруживали фигуры митоза и гиперхромные властные клетки (рис. 5).

Рисунок 4 - Лимфатический узел. Корова. РИД+, Гемо+. Окраска: гематоксилин и эозин. Об. 10х: А - корковое вещество; Б - лимфоидная парафолликулярная гиперплазия

Рисунок 5 - Лимфатический узел. Корова. РИД+, Гемо +. Окраска: гематоксилин и эозин. Об. 40х: А - гиперплазия фолликула;

Б - стирание границы короны; | - митоз гиперхромных властных клеток

При окраске по методу Ван-Гизон лимфатических узлов больных лейкозом коров отмечали сильное утолщение и инфильтрацию капсулы лимфоидны-ми элементами (рис. 6).

При окраске по методу Маллори выявляли повышенную чувствительность ядер клеток инфильтрата к базофильному компоненту реактива Маллори, а также уменьшение количества клеток, положительно реагирующих на кислый фуксин в мозговой зоне, капсуле лимфатических узлов. Трабекулы значительно расширены и содержат единичные фуксинофильные клетки (рис.7).

Рисунок 6 — Лимфатический узел. Корова. РИД+, Гемо +. Окраска: по Ван Гизон. Об. 40х: А - инфильтрация коркового вещества; Б - инфильтрация капсулы

Рисунок 7 — Лимфатический узел. Корова. РИД+, Гемо+. Окраска: по Маллори. Об. 40х: А - утолщение трабекул; | - единичная фуксинофилъная клетка

При окраске по Браше на срезах лимфатических узлов, полученных от больных животных, видны зоны инфильтрации, характеризующиеся выраженной метиленофилией, что свидетельствует об интенсивной пролиферации нуклеиновых кислот. Пролифераты окружены плотным ободком пиронинофиль-ных клеток, соответствующих по структуре плазмоцитам (рис. 8).

При окраске срезов Шифф-йодной кислотой по Шабадашу зоны пролиферации характеризуются заполнением парафолликулярных пространств мо-номорфными диффузно-расположенными ШИК-негативными клетками лим-фоидного ряда, эти клетки имеют светлые округлые ядра и узкий ободок плохо заметной цитоплазмы. Помимо пролифератов можно отметить общее снижение полисахаридов в корковом веществе лимфатических узлов, что выражается в более бледной окраске стромы и ретикулярных клеток, а также клеточных мембран. Рисунок коркового слоя в зонах инфильтраций практически полностью стерт. По периферии пролифератов встречаются клетки, имеющие крупные ШИК-позитивные включения в виде глыбок в цитоплазме (рис. 9).

Рисунок 8 - Лимфатический узел. Корова. Рисунок 9 - Лимфатический узел. Корова.

РИД+, Гемо+. Окраска: по Браше. Об. 40х: РИД+, Гемо+. Окраска: по Шабадашу.

1" - плазмоциты, мозговая зона Об. 40х: | - Глыбки ШИК + в лимфоцитах,

корковая зона

В мозговом веществе у больных животных происходит обильный разроет и инфильтрация соединительной ткани при одновременной гипертрофии мя-котных тяжей. Область мозговых синусов и трабекул, мозгового вещества также в различной степени инфильтрирована клетками лимфоидного ряда. У здоровых животных соединительной ткани в мозговом веществе сравнительно немного, трабекулы тоньше, мозговые синусы и мякотные тяжи четко выражены, а пространство в синусах заполнено единичными, отдельно лежащими лимфоцитами.

При осмотре селезенки больных животных установлено, что орган увеличен в размере, дряблый, края на разрезе не смыкаются, граница между белой и красной пульпой в ряде случаев стерта. Микроскопически отмечалось размывание границ герминативных центров и корон фолликулов (рис. 10), расширение мантийной и стирание маргинальной зон (рис. 11). Кроме того, во всех зонах селезенки отмечалась умеренная пролиферация лимфоидных клеток, локализованных в виде дифузных тяжей в красной пульпе. На срезах селезенки у здоровых животных лимфоидные фолликулы имели четко очерченные границы белой и красной пульпы.

Рисунок 10 - Селезенка. Корова. РИД+, Рисунок 11 - Селезенка. Корова. РИД+,

Гемо+. Окраска: гематоксилин и эозин. Гемол-. Окраска: по Маллори. Об. 10х: Об. 4х: А - стирание границ фолликула; | - стирание границ фолликула | - пролифераты лимфоидных клеток

Таким образом, у коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС и с изменениями в лейкограмме, при гистологическом и гистохимическом исследовании выявляли изменения на всех уровнях микроструктуры, характерные для лим-фоидного лейкоза. В лимфатических узлах - стирание рисунка корковой и мозговой зоны, заполнение паренхимы дифузными пролифератами лимфоидных клеток с повышенной чувствительностью ядер клеток к базофильному компоненту реактива Маллори; выраженную метиленофилию, свидетельствущую об интенсивном синтезе нуклеиновых кислот; увеличение количества плазмоци-тов; снижение уровня ШИК-позитивного вещества в корковом веществе. В селезенке - утолщение и инфильтрация капсулы лимфоидными элементами, стирание рисунка фолликулов, дифузное умеренное заполнение красной пульпы лимфоидными клетками.

2.2.4. Гистологические и гистохимические особенности лимфатических узлов и селезенки коров, положительно реагирующих в РИД и инвазированных дикроцелиями

При осмотре туш крупного рогатого скота, положительно реагирующего в серодиагностике на лейкоз, из хозяйства «Захаровская заимка» Енисейского района Красноярского края в убойном цехе Уярского мясокомбината установлено, что все животные имели упитанность ниже средней, поверхностные лимфатические узлы и селезенка не увеличены. При этом характерных для лейкоза крупного рогатого скота патоморфологических изменений в иммунных и иных органах выявлено не было. Лимфатические узлы на разрезе в ряде случаев имели стертый рисунок, на границе коркового и мозгового вещества выявляли очаги кровоизлияний и некроза размерами от 0,2 до 0,5 см в виде полос черного цвета.

Селезенка при осмотре дряблая, на разрезе соскоб обильный, границы красной и белой пульпы сохранены. При осмотре печени установлено, что орган темно-коричнегого цвета, дряблой консистенции, края разреза не смыкают-

ся. В желчных протоках были обнаружены дикроцелии. Гельминты были обнаружены у всех 20, сданных на мясокомбинат, коров.

В лимфатических узлах и селезенке коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС, на фоне инвазии дикроцелиями отсутствовали патогномоничные для лимфоидного лейкоза микроструктурные признаки. В лимфатических узлах регистрировались изменения, характерные для аллергических и иммунологических реакций при инвазиях (повышение количества эозинофильных клеток, активация плазмоцитов).

Лимфатические фолликулы варьировали по размеру, но сохраняли структуру и границы (рис. 12). В абсолютном большинстве образцов обнаруживали многочисленные эозинофильные гранулоциты (рис. 13), локализующиеся в па-рафолликулярной зоне, а также в зоне выносящего лимфатического протока, капсуле и трабекулах (рис. 14). В области лимфатических фолликулов соединительнотканные элементы при окраске по Ван-Гизон имеют тонковолокнистую структуру (рис. 15).

Рисунок 12 - Лимфатический узел. Корова. РИД+, Гемо-. Окраска: гематоксилин и эозин. Об. 4х: А — лимфатический фолликул; Б - парафолликулярная зона

Рисунок 13 - Лимфатический узел. Корова. РИД+, Гемо-. Окраска: гематоксилин и эозин. Об. 10х: А - эозинофилы; Б - плазмоциты

Рисунок 14 - Лимфатический узел. Корова. РИД+, Гемо-. Окраска: по Маллори. Об. 40 х: Т — фуксинофилъные клетки

Рисунок 15 - Лимфатический узел. Корова. РИД+, Гемо -. Окраска. по Ван Гизон. Об. 40х: А - лимфатический фолликул

В области центрального синуса и ворот лимфатического узла характерным является сильное развитие стромальных элементов - коллагеновых и эла-стиновых волокон.

На препаратах лимфатических узлов коров, окрашенных по Браше (рис. 16), обнаруживаются участки лимфоидной ткани с выраженной пиронинофилией в мозговой зоне, что указывает на активный синтез белков плазматическими клетками, при этом метиленофилии, как в случае с больными лейкозом животными, не наблюдали.

Лимфатические узлы коров, окрашенные Шифф-йодной кислотой по Ша-бадашу (рис. 17), содержали большое количество фуксинофильных гранул, особенно в реактивных центрах фолликулов.

Рисунок 16 - Лимфатический узел. Корова. Рисунок 17 - Лимфатический узел. Корова.

РИД+, Гемо-. Окраска: по Браше. Об. 40х: РИД+, Гемо-. Окраска: по Шабадашу.

| - плазмоциты, мозговая зона Об. 10х: | - ШИК-позитивные гранулы,

реактивный центр фолликула

При микроскопии селезенки установлено, что лимфатические фолликулы белой пульпы имеют широкую маргинальную зону, хорошо выраженный рисунок и границы самого фолликула; иногда встречаются конгломераты из 2-5 фолликулов со слившейся маргинальной зоной (рис. 18).

Маргинальная зона лимфатических фолликулов селезенки интенсивно инфильтрирована эозинофильными клетками. При окраске по Маллори наблюдается четкая закономерность локализации этих клеток, дающих выраженную положительную окраску кислым фуксином (рис. 19). Клеточный состав реактивных центров лимфатических фолликулов селезенки, мантийной зоны, а также красной пульпы оставался без изменений.

Рисунок 18 - Селезенка. Корова. РИД+, Гемо-. Окраска: гематоксилин и эозин. Об. 4х: Т — конгломерат из 5 лимфатических фолликулов

Рисунок 19 - Селезенка. Корова. РИД+, Гелю-. Окраска: по Маплори. Об.Юх: А - мантийная; Б - маргинальная зоны; | - фуксинофильные клетки

Гистологические и гистохимические исследования лимфатических узлов и селезенки коров, серпозитивных в РИД на ВЛКРС и инвазированных дикро-целиями, свидетельствуют об отсутствии признаков, патогномоничных для лимфоидного лейкоза. В лимфатических узлах регистрировали повышение количества эозинофильных клеток и активацию плазмоцитов, присущую для аллергических и иммунологических реакций при инвазиях. Таким образом, гистологические и гистохимические методы исследования лимфатических узлов и селезенки позволяют дифференцировать аллергические реакции при инвазиях от изменений при лейкозе крупного рогатого скота.

1. В Красноярском крае уровень инфицированности ВЛКРС за период с 2008 по 2011 г. составил 1,95-2,1 %. В среднем за год выявляется до 340 больных лейкозом животных, что составляет 0,6 %. Наиболее неблагополучная ситуация по ВЛКРС складывается в Сухобузимском, Емельяновском, Енисейском, Ермаковском, Болынемуртинском, Балахтинском, Курагинском, Назаров-ском, Боготольском, Каратузском, Тюхтетском, Саянском и Рыбинском районах. В ЗАО «Агрофирма Маяк» Сухобузимского района Красноярского края уровень инфицированности ВЛКРС за период с 2008 по 2011 г. составил в среднем 18,7 %, а уровень заболеваемости - 1,6 %;

2. Из числа инфицированных ВЛКРС коров, выявленных в РИД, количество гематологически больных составляет в среднем 3,3 %. Уровень лейкоцитов у больных животных в среднем выше, чем у клинически здоровых, в 2,5 раза (Р< 0,001), при этом количество лимфоцитов достоверно превышает контрольные значения втрое. У 96,7 % коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС, достоверной разницы в качественном и количественном составе лейкоцитов периферической крови по сравнению с здоровыми животными не установлено.

ВЫВОДЫ

3. В лимфатических узлах и селезенке коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС и с изменениями в лейкограмме, при гистологическом и гистохимическом исследовании выявляли характерные для лимфоидного лейкоза изменения на всех уровнях микроструктуры органов.

4. В микроструктуре лимфатических узлов коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС и с изменениями в лейкограмме, выявляли: стирание рисунка корковой и мозговой зоны, заполнение паренхимы диффузными пролиферата-ми лимфоидных клеток с повышенной чувствительностью ядер клеток к базо-фильному компоненту реактива Маллори; выраженную метиленофилию, сви-детельствущую об интенсивном синтезе нуклеиновых кислот; увеличение количества плазмоцитов; снижение уровня ШИК-позитивного вещества в корковом веществе.

5. В микроструктуре селезенки коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС и с изменениями в лейкограмме, выявляли: размывание границ герминативных центров и корон фолликулов, расширение мантийной и стирание маргинальной зон; умеренную пролиферацию лимфоидных клеток селезенки, локализованных в виде диффузных тяжей в красной пульпе.

6. В органах иммунной системы коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС, на фоне инвазии дикроцелиями отсутствовали характерные для лимфоидного лейкоза микроструктурные изменения. В лимфатических узлах регистрировали повышение количества эозинофильных клеток и активацию плазмоцитов, присущую для аллергических и иммунологических реакций при инвазиях. В селезенке отмечали 2 вида изменений - расширение и утолщение короны и мантийной зоны, гиперплазию маргинальной зоны.

7. Гистологические и гистохимические методы исследования лимфатических узлов и селезенки позволяют дифференцировать аллергические реакции при инвазиях от изменений при лейкозе крупного рогатого скота.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Результаты исследований по цито- и гистологическим особенностям лимфатических узлов и селезенки коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС могут быть использованы:

- при написании соответствующих разделов учебных и справочных пособий и руководств по патологической анатомии и гистологии сельскохозяйственных животных;

- в учебном процессе на ветеринарных, зооинженерных и биологических факультетах высших и средних учебных заведений;

- в научно-исследовательских институтах, занимающихся выяснением и разработкой методов диагностики и борьбы с ВЛКРС;

- для формирования общей картины развития и течения патологических процессов при лейкозе крупного рогатого скота.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Статьи в ведущих научных журналах РФ, рекомендованных ВАК РФ:

1. Люто A.A., Донкова Н.В. Гистологические изменения лимфатических узлов коров, инфицированных ВЛКРС // Ветеринарная патология. - 2012. -Т. 41. -№ 3. - С. 52-55.

2. Люто A.A., Филипьев М.М., Донкова Н.В. Морфология клеток крови коров с серопозитивной и гемосомнительной реакцией на лейкоз // Вестник КрасГАУ. - 2012. - № 10..-С. 144-148.

Статьи и тезисы докладов в других изданиях:

3. Люто A.A., Донкова Н.В. Диагностика гемобластозов крупного рогатого скота в хозяйствах Красноярского края // Инновации в науке и образовании: опыт, проблемы, перспективы развития. Ч. II: мат-лы Всерос. очно-заочной науч.-практ. и науч.-метод. конф. с междунар. участием. - Красноярск, 2010.-С. 247-249.

4. Люто A.A. Проблемы, связанные с диагностикой лейкоза крупного рогатого скота // Проблемы современной аграрной науки: мат-лы междунар. заоч. науч. конф. - Красноярск, 2010. - С. 116-117.

5. Люто A.A., Филипьев М.М., Донкова Н.В. Принципы микроструктурной диагностики гемобластозов // Животные как часть экосистемы: мат-лы 3-й Красноярской региональной научн.-практ. конф. - Красноярск, 2011. -С. 51-53.

6. Люто A.A., Донкова Н.В. Особенности клеточного состава мазков отпечатков лимфатических узлов крупного рогатого скота // Инновации в науке и образовании: опыт, проблемы, перспективы развития. Ч. 2: мат-лы Всерос. очно-заочной науч.-практ. и науч.-метод. конф. с междунар. участием. - Красноярск, 2011.- С. 309-311.

7. Донкова Н.В., Люто A.A., Филипьев М.М. Особенности морфологии крови коров инфицированных ВЛКРС // Наука и образование: опыт, проблемы, перспективы развития. Ч. 2: мат-лы междунар. науч.-практ. конф. - Красноярск, 2012.-С. 310-311.

8. Донкова Н.В., Люто A.A. Микроструктура иммунокомпетентных органов РИД-позитивных коров, инвазированных дикроцелиями // Наука и образование: опыт, проблемы, перспективы развития. Ч. 2: мат-лы междунар. науч.-практ. конф. - Красноярск, 2013. - С. 280-284.

Санитарно-эпидемиологическое заключение № 24.49.04.953.П. 000381.09.03 от 25.09.2003 г. Подписано в печать 31.10.2013. Формат 60x84/16. Бумага тип. № 1. Печать - ризограф. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 823 Издательство Красноярского государственного аграрного университета 660017, Красноярск, ул. Ленина, 117

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Люто, Андрей Александрович, Красноярск

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧЕРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «КРАСНОЯРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

На правах рукописи

Люто Андрей Александрович

ЦИТО- И ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ И СЕЛЕЗЕНКИ КОРОВ, СЕРОПОЗИТИВНЫХ В РИД НА ВЖРС

06.02.01 - Диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология

и морфология животных

^ Диссертация

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

ю

см

гг °

о

С7) доктор ветеринарных наук, профессор

4 ■ О

Научный руководитель: доктор ветеринарных ш Донкова Наталья Владимировна

Красноярск 2013

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений.................................................................... 4

Введение................................................................................. 5

1 Обзор литературы............................................................. 9

1.1 Проблема лейкоза в животноводстве. Распространение лейкозов в России и мире.................................................................. 9

1.2 Этиология и патогенез лейкоза крупного рогатого скота............ 13

1.3 Методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота............... 25

1.4 Влияние ассоциативного течения лейкоза и других инфекционных и инвазионных заболеваний на результаты 31 серологических реакций......................................................

2. Собственные исследования................................................. 36

2.1 Материалы и методы исследования....................................... 36

2.1.1 Объект и материалы исследования........................................ 36

2.1.2 Методы проведения цитологических и гистологических исследований................................................................... 37

2.2 Результаты исследований.................................................... 42

2.2.1 Анализ заболеваемости ВЛКРС в хозяйствах Красноярского

края............................................................................... 42

2.2.2 Качественный и количественный состав лейкоцитов крови коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС......................................... 46

2.2.3 Цитологические, гистологические и гистохимические особенности лимфатических узлов и селезенки коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС, с изменениями в лейкограмме..................................................................... 50

2.2.4 Гистологические и гистохимические особенности лимфатических узлов и селезенки коров, положительно реагирующих в РИД, и инвазированных дикроцелиями.................................................... 68

3 Обсуждение полученных результатов........................................................................82

Выводы....................................................................................................................................................91

Практические рекомендации................................................................................................93

Библиографический список..................................................................................................94

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГАГ - гликозаминогликаны

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

РНК - рибонуклеиновая кислота

ШИК - Шифф-йодная кислота

ВЛКРС - вирус лейкоза крупного рогатого скота

РИД - реакция иммунной диффузии

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ИФА - иммунноферментный анализ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Проблема лейкоза крупного рогатого скота широко и долго обсуждается в научной литературе и практической ветеринарной медицине. Установлено распространение его во всех регионах России [Значение показателя охвата ..., 2003; Лейкоз крупного рогатого скота ..., 2005; Абакин С.С., 2010; Александров И.Д., 2012].

За последние 15 лет в Российской Федерации уровень инфицированности ВЛКРС практически не изменился и находится в пределах 10,3-14,7 %, а доля лейкоза в структуре инфекционной патологии крупного рогатого скота составляет более 50 % [Апалькин В.А. Гулюкин М.И, Петров Н.И., 2005, Гулюкин М.И., 2007; Криворучко Д.Г., Абакин С.С., Дубравная Г.А., 2011; Генджиев А.Я., Генджиева О.Б., 2012].

Согласно «Правилам по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота» от 11 мая 1999 г. основными методами диагностики ВЛКРС являются серологический (РИД) и гематологический. Известно, что при иммунологической диагностике иногда возникают ложные положительные результаты, обусловленные высоким содержанием иммуноглобулинов в сыворотке крови животных, что может быть связано с различными патологиями [Смирнов Ю.П., Рябова Ю.В., 2002], в том числе и глистными инвазиями [Смирнов П.Н., Апалькин В.А., Волков Ф.А., 1995].

Согласно В.А. Апалькину с соавт. (2005), существующие методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота имеют недостатки, поэтому актуальными являются исследования по оптимизации регламента для каждого метода в системе оздоровительно-профилактических мероприятий при лейкозе.

Несмотря на то, что гистологические и цитологические методы диагностики подтверждают диагноз на лейкоз в 95% случаев, их применение весьма ограниченно [Пономарева И.С., 2006; Александров И.Д., 2012]. С учетом вероятного возникновения ложноположительных серологических

реакций, изучение микроструктуры органов иммунной системы (лимфатические узлы и селезенка) у коров, серопозитивных в РИД на лейкоз, является актуальным.

Цель и задачи исследований. Основной целью работы являлось изучение цитологических, гистологических и гистохимических особенностей лимфатических узлов и селезенки коров, серопозитивных в реакции иммунной диффузии (РИД) на ВЖРС.

Были поставлены следующие задачи:

1. Провести анализ уровня инфицированности В ЛКРС и заболеваемости лейкозом в хозяйствах Красноярского края;

2. Изучить качественный и количественный состав лейкоцитов крови коров, серопозитивных в РИД на В ЛКРС;

3. Установить цитологические, гистологические и гистохимические особенности лимфатических узлов и селезенки коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС, с изменениями в лейкограмме;

4. Установить цитологические, гистологические и гистохимические особенности лимфатических узлов и селезенки коров, серпозитивных в РИД на ВЛКРС, на фоне инвазии дикроцелиями.

Научная новизна. Впервые установлен характер цитологических, гистологических и гистохимических изменений в лимфатических узлах и селезенке коров, серпозитивных в РИД на ВЛКРС, на фоне инвазии дикроцелиями. Определена активность нуклеиновых кислот и уровень содержания гликогена в лимфоидном пролиферате корковой зоны надколенных, надвыменных и бронхиальных лимфатических узлов коров. Установлена возможность развития ложноположительной серологической реакции на ВЛКРС на фоне инвазии дикроцелиями.

Теоретическая и практическая значимость. Данная работа является фрагментом темы: «Морфофункциональные особенности органов и тканей животных в норме и при патологии» направления научно-исследовательской

работы кафедры анатомии, патологической анатомии и хирургии Красноярского государственного аграрного университета.

Установленные микроструктурные изменения лимфатических узлов, селезенки, серпозитивных в РИД на ВЛКРС коров, могут служить критерием оценки цитоморфологических изменений при лимфопролиферативных заболеваниях крупного рогатого скота и дифференциальной диагностике ложноположительных серологических реакций на лейкоз.

Внедрение результатов исследований. Результаты исследований используются при чтении лекции и проведении лабораторных занятий по дисциплинам цитология, гистология, патологическая анатомия, а так же эпизоотология животных на кафедрах: «Анатомия, патологическая анатомия и хирургия», «Эпизоотология, микробиология, паразитология и ветеринарно-санитарная экспертиза» Красноярского государственного аграрного университета; «Анатомия и физиология животных» Хакасского государственного университета им. Н.Ф. Катанова; «Диагностика, внутренние незаразные болезни, фармакология, хирургия и акушерство» Омского государственного аграрного университета им. П.А. Столыпина.

Апробация работы. Основные материалы исследований доложены на:

Всероссийской очно-заочной научно-практической и научно-методической конференции с международным участием «Инновации в научно-практической деятельности» (Красноярск, 2010); третьей Красноярской региональной научно-практической конференции «Животные как часть экосистемы» (Красноярск, 2010); Международной заочной научной конференции «Проблемы современной аграрной науки» (Красноярск 2010, 2011); Международной научно-практической конференции «Наука: опыт, проблемы, перспективы развития» (Красноярск, 2012); научной интернет-конференции «Актуальные проблемы ветеринарии» (Новосибирск, Омск, Красноярск, Барнаул, 2012).

Личный вклад автора. Представленные в диссертационной работе экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены автором самостоятельно.

Публикации. По результатам научных исследований опубликовано восемь печатных работ, в том числе две - в ведущих научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ: «Ветеринарная патология», «Вестник КрасГАУ».

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

• Лимфатические узлы и селезенка коров, инфицированных ВЛКРС и с изменениями в лейкограмме, имели цитологические, гистологические, а так же гистохимические изменения на всех уровнях микроструктуры органа.

• В органах иммунной системы коров, серопозитивных в РИД на ВЛКРС, на фоне инвазии дикроцелиями, отсутствовали характерные для лимфоидного лейкоза микроструктурные изменения.

• Гистологические и гистохимические методы исследования лимфатических узлов и селезенки, позволяют дифференцировать аллергические реакции при инвазиях от изменений при лейкозе крупного рогатого скота.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 110 страницах печатного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций. Список использованной литературы включает в себя 160 источников, в том числе 60 иностранных. Работа содержит 4 таблицы, 40 рисунков, из них 3 макрофотографии и 30 микрофотографий.

1 Обзор литературы 1.1 Проблема лейкоза в животноводстве. Распространение лейкозов в России и мире

Одним из самых распространенных хронических инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных, наносящих значительный экономический ущерб животноводству, является лейкоз крупного рогатого скота (ВЛКРС). Проблема лейкоза имеет общебиологическое и медицинское значение и до настоящего времени не потеряла своей актуальности. Лейкоз вышел на первое место в ряду хронических инфекций крупного рогатого скота. [Иммунноферментная диагностика ВЛКРС ..., 2000; Особенности распространения антигенов..., 2008; Система мероприятий оздоровления ..., 2008; Анализ эпизоотической ситуации ..., 2008; Вариабельность гена епу ..., 2009; Особенности течения и ...,2010].

На сегодняшний день, единственными наиболее эффективными методами борьбы с лейкозом крупного рогатого скота, являются его ранняя диагностика, изоляция и методичная выбраковка больных животных, с последующим формированием свободного от вируса лейкоза стада [Особенности инфекционного процесса ..., 2008; Новые методы исследования ..., 2008; Особенности течения и распространения ..., 2010].

Установление принадлежности ВЛКРС к определенному генотипу может служить основанием для расширения исследований в данном направлении, в проведении исследований в выявлении патогенетических особенностей развития лейкозного процесса, как в экспериментальном, так и в спонтанном вариантах [Дробот Е.В., 2007; Зинатов Ф.Ф, 2008; Вариабельность генаепу ..., 2009].

Распространение лейкоза КРС. По данным аналитического центра Россельхознадзора ситуация по распространению лейкоза: эндемическая. Представленные данные плохо поддаются пространственному и временному анализу и контролю. Очаговая инцидентность (п = 8,25) = 230,5. Сравнительная

структура средней инфицированное™ ВЛКРС в отдельных субъектах РФ за 2009 представлена на рисунке 1 [Петропавловский М.В., 2010].

ПФО; 19%

Рисунок 1 - Сравнительная структура средней инфицированности ВЛКРС в отдельных субъектах РФ за 2009г.

В среднем по России (2008 г.) инфицированность поголовья 8,2 - 10,7%, в Приволжском Федеральном округе - 12,7%, в Ульяновской области - 20,8%, Пензенской области - 21,2%, Пермском крае - 21,9%, в Оренбургской области 34,8%. Число больных животных по округу составляет 26,1% от их количества по России [Анализ эпизоотической ситуации 2008].

Установлено, что в животноводческих предприятиях Уральского региона средний уровень инфицированности ВЛКРС коров и молодняка составляет соответственно: в Тюменской области - 7% и 8%, в Челябинской области - 16%, в Курганской области - 12,4%, в Свердловской области - 0,001%) [Петропавловский М.В., 2010].

Анализ данных инфицированности и заболеваемости проведенный И.М. Донник с соавторами (2010) показывает, что в течение длительного времени в

популяции крупного рогатого скота Челябинской области сохраняется высокий средний уровень инфицированности животных вирусом лейкоза (14,1-23,07); при этом в разрезе районов цифры колеблются от 9,1 до 59,7% [Особенности течения и распространения ...,2010].

Несмотря на значительное улучшения эпизоотической ситуации по энзоотическому лейкозу крупного рогатого скота в целом по Свердловской области, снижение общей инфицированности крупного рогатого скота вирусом лейкоза (включая молодняк и скот, содержащихся в частном секторе) с 1999 г. по 2003 г. в 1,74 раза, в отдельных районах инфицированность ВЛКРС продолжает оставаться высокой [Повышение эффективности диагностики ..., 2007].

По данным И.С. Пономаревой (2009), инфицированность животных в Оренбургской области порядка 30%. Так, если в 1991 г. инфицированность животных в стаде в среднем по области составляла 7,41%, то к 2006 году рассматриваемый показатель увеличился до 23,6% (33% у коров). Заболеваемость составила 1,9%, при вариабельности за исследуемый период от 1,36% до 2,6%. Процент инфицированности крупного рогатого скота в Оренбургской области увеличился в 4,4 раза, процент больных - в 1,9 раз. Среди племенного скота молочного направления инфицированность достигает 31,16%, среди мясного скота она значительно ниже и составила в среднем по области 6,51%. Средний областной показатель заболеваемости скота не превышает 2%. Коэффициент корреляции между количеством инфицированных и больных животных г +0,96. Количество неблагополучных пунктов уменьшилось с 68 до 47, за счет полной ликвидации скотоводства в хозяйствах [Полимеразная цепная реакция ..., 2009].

Эпизоотия лейкоза крупного рогатого скота в Калининградской области носит стационарный характер. По заболеваемости крупного рогатого скота лейкозом (1,7%) и инфицированности животных ВЛКРС (23,9%) область относится к наиболее неблагополучным регионам Российской Федерации. Из

165 хозяйств области, только 3 хозяйства являются благополучными по данному заболеванию [Минасян В.Г., Судиян A.B., 2009].

В Ставропольском крае серопозитивный ответ получен у 24,2% животных (29% среди общественного скота и 21,5% - частного) от числа подлежащих исследованию в РИД. По сравнению с 2001 годом количество инфицированных животных увеличилось на 4,5%. [Чайка Т.И., Абакин С.С., Колесников В.И., 2003].

В структуре инфекционной патологии крупного рогатого скота в Алтайском крае первое место занимает лейкоз. От общего числа исследованных коров симментальская порода составляет 43,5%. Средний процент инфицированности равен 40,3%, этот показатель находится в пределах 29,056,0%, количество гематологически больных лейкозом коров от общего числа исследованных составляет 4,8%. Анализ результатов гематологических исследований позволил определить, что в период осенних диагностических исследований выявлялось большее количество больных лейкозом коров в возрасте 4-6 лет [Разумовская В.В., Прудникова В.Н., 2007].

Эпизоотическая обстановка по лейкозу крупного рогатого скота в Саратовской области за 2004 - 2010 г. свидетельствует, что количество животных-вирусоносителей снизилось с 11,5% (2004 г.) до 2,1% (2010 г.). Гематологическими исследованиями также отмечается тенденция сокращения относительного количества больных животных с 5,5% (2004г.) до 3% (2010 г) [Мелкина П.С., Агольцов В.А., Дружаева H.A., 2012].

По сообщениям ряда исследователей, лейкоз крупного рогатого скота получил широкое распространение и в странах СНГ: на Украине, Белоруссии (Бусол В. А., 1987), в республике Молдова [Москалик P.C., 1992], в Узбекистане [Салимов Х.С., Крикун В.А., 1985].

Лейкоз крупного рогатого скота получил широкое распространение и в странах Восточной Европы: Чехословакии, Болгарии, Венгрии [Belev N., Cuzouher К., Naidenova N., 1978; GrundbockM., 1982].

За рубежом ВЛКРС регистрировали во Франции [Scoten Е., 1985], Бельгии [Rapid Detection of Bovine 1985], Италии [Prevalence of BLV infection ..., 1980], Великобритании [Marcson L., 1980], Турции [Characterisation ofenv ...,2011].

Инфицированность BJI KPC в Аргентине составляла около 32,85%, [Trono К. G., Perez- Filgueira D.M, 2001].

Также имеются сообщения о широком распространении ВЛКРС в Бразилии, Чили, Кубе, Сальвадоре, Ямайке, Сирии, Замбии, Никарагуа, Египте, Японии, Польше, Израиле [Azuba R.B., Zieger U., Schmidt F.W., 1994; Losieczka, К., Klimentowski S. 1994; Both wild-type and strongly ..., 1997; Scrologische und virologischc ..., 1999; Zaghawa A., Beier D., 2002; Partial sequencing of env ..., 2003; Buzala E. Deren W., 2003, Felmer R., 2005; Evidens for BLV unfect