Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярно-биологические аспекты создания укороченных форм цитохрома Р450 2В4

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Прозоровский, Тимур Владимирович

б.ВЫВОДЫ

1. Были созданы методами генетической инженерии химерные конструкции цитохрома Р450 2В4 с глутатион-Б-трансферазой, которые содержали встроенные в N-концевую аминокислотную последовательность протеолитические сайты для фактора Ха и тромбина: ГЗТ- (Д2-27)2В4Ха, ГБТ-(А2-27)2B4gXa(his)6, TST-(A2-27)2B4Th(his)б, TST-2E1:2B4(his)б. Указанные конструкции были экспрессированы в Escherichia coli.

2. Обнаружено, что при гетерологической экспрессии химерных конструкций 2В4 в Escherichia coli рекомбинантный белок образует прочный комплекс с молекулярными шаперонами DnaK и GroEL, что указывает, вероятно, на нарушие локального фолдинга доменов, составляющих химерный белок.

3. Диссоциация комплекса цитохрома Р450 2В4 с молекулярными шаперонами DnaK и GroEL происходит при расщеплении пептидной связи в линкерной последовательности между FST доменом и 2В4 (при протеолизе с фактором Ха или тромбином), а также при ограниченном протеолизе в PPGP мотиве с IgA эндопротеиназой.

4 . Установленно сайты узнавания фактором Ха и тромбином (позиция 4 6-4 9) являются доступными для действия протеиназ, что указывает на специфичность его структурной организации.

5. Получена укороченная форма цитохрома (1-3 4) 2В4 за счет проведения ограниченного протеолиза с IgA эндопротеиназой, узнающей нативную последовательность PPGP (31-34). Укороченный цитохром (1-34) 2В4 находится в олигомерном состоянии, соответствующем, вероятно, тетрамеру. Полученный белок представляет интерес для изучения его каталитических свойств и расшифровки пространственной структуры.

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В данной работе впервые была показана возможность получения укороченной формы цитохрома Р450 2В4, лишенного 33 N-концевых аминокислотных остатка. Ограниченный протеолиз был выполнен с IgA эндопротеиназой, узнающей специфическую последовательность РРХР (где X соответствует аминокислотным остаткам аланина, серина, треонина или глицина). Интересно, что PPGP район присутствует во многих микросомальных формах цитохрома Р450 в составе PPGPXPXXG мотива и играет важнейшую роль в процессе фолдинга белка (Yamazaki S. et al., 1993) . Полученный белок представляет интерес для изучения его каталитических свойств и расшифровки пространственной структуры. Предварительный анализ показал, что белок находится в олиго-мерном состоянии, соответствующем преимущественно тетрамеру.

Попытка получения белка с более укороченным N-концевым сегментом оказалась неудачной. Выбранный район 4 6-4 9 в Р450 2В4 является устойчивым к действию специфических протеиназ. Даже после удаления TST домена и ассоциированных с химерным белком молекулярных шаперонов, которые могли бы блокировать доступ к данному району, ограниченный протеолиз носит неспецифический характер и протекает не во встроенных сайтах для расщепления протеолитическими ферментами: фактором Ха и тромбином.

Также было обнаружено, что встраивание протеолитического сайта для тромбина (MYPRGN) в N-концевую аминокислотную последовательность играет критическую роль в экспрессии белка. Выделение этих форм цитохрома (EST-(Д2-27)2В4(Th) (his)6 и TST-2E1:2В4(his)6) в виде холоэнзимов не привело к успеху.

Результаты, полученные в настоящей работе, говорят о том, что ассоциация молекулярных шаперонов GroEL/DnaK с химерным белком происходит, вероятно, из-за локального нарушения структуры 2В4 в районе соединения с глутатион-Б-трансферазой, либо локального нарушения структуры в С-концевом районе глутатион-Б-трансферазы. Это подтверждается результатами о том, что диссоциация комплекса происходит после проведения ограниченного протеолиза в районе соединения двух белков .

Структурные элементы или мотивы, являющиеся недоступными для СгоЕЬ/БпаК в нативной молекуле ГБТ и/или Р450 2В4, при химеризации этих двух белков распознаются шаперонами и являются ответственными за образование комплексов. Искусственное сближение двух различных белковых структур (в данном случае глутатион-З-трансферазы и цитохрома Р450 2В4) за счет соединения пептидной связью, осуществленное при помощи генной инженерии, вероятно, приводит к нарушению фолдинга белковых структур в районе «вынужденного» взаимодействия. Накопленные сведения дают основание полагать, что данная проблема является общей для белков, экспрессируемых в системе с глутатион-Б-трансферазой (ТЬа1п А. е! а1., 1996; КоИтап М. е! а1. , 2000).

При разделении ГЭТ и Р450 2В4 происходит восстановление целостности структур этих белков, возможно, благодаря тем же СгоЕЪ/БпаК, после чего комплекс диссоциирует. Интересно, что непосредственное участие шаперонина СгоЕЬ в формировании фолдинга другой формы цитохрома млекопитающих, Р450 ЗА7, недавно было подтверждено в работе 1поие Е. еЬ а1. (2000) .

Полученные в настоящей работе результаты указывают на возможное участие ОпаК-СгрЕ-БпаJ и СгоЕЪ-СгоЕБ систем шаперонов в экспрессии химерной молекулы цитохрома Р4 5 0 2В4 с глутатион-Б-трансферазой. Таким образом, ко-экспрессия этих систем шаперонов с химерной молекулой цитохрома 2В4 возможно будет способствовать увеличению уровня экспрессии функционально активного фермента, как это было показано при гетерологической экспрессии Р450 ЗА7 с СгоБЬ-СгоЕБ в работе Тпоие Е. ЕЬ а1. (2000) .

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Прозоровский, Тимур Владимирович, Москва

1. Amarneh B., Simpson E.R. Expression of a recombinant derivative of human aromatase P450 in insect cells utilising the baculovirus vector // Mol. Cell. Endocrinol.-1995.- V.109.- R.l-5.

2. Argos, P., Mathews F.S. Microsomal cytochromes b5 and P450 during induction of aryl hydrocarbon hydroxylase activity in mammalian cell culture // J. Biol. Chem.- 1975.- V.250.1. P.747-751.

3. Barnes H.J., Arlotto M.P. and Waterman M.R. Expression and enzymatic activity of recombinant cytochrome P450 17 alpha-hydroxilase in Escherichia coli // Proc. Natl. Acad. Sci.-1991.- V.88.- P.5597-5561.

4. Barnes H.J. Maximising Expression of Eucaryotic Cytochrome P450s in Escherichia coli. in Eucaryotic cytochrome P450s in E.coli // Methods, in Enzymology.- 1995.- V.I.- P.3-13.

5. Bar-Nun S., Kreibich G., Adesnik M., Alterman L., Negishi M., Sabatini D.D. Synthesis and insertion of cytochrome P450 into endoplasmic reticulum membranes // Proc. Natl. Acad. Sci.- 1980.- V.77.- P. 965-969.

6. Black S.D., Coon M.J. Structural features of liver microsomal NADPH-cytochrome-P450 reductase. Hydrophobic domain, hydrophilic domain, and connecting region // J. Biol. Chem.- 1982,- V.257.- P. 5929-5938.

7. Black S.D. and Coon M.G. Coexpression of genetically engineered fused enzyme between yeast NADPH-P450 reductaseand human cytochrome P450 3A4 and human cytochrome b5 in yeast // FASEB. J.- 1982,- V.6.- 680-685.

8. Bridges A., Gruenke L., Chang Y.-T., Vakser I.A., Loew G., Waskell 1. Identification of the binding site on cytochrome P450 2B4 for Cytochrome b5 and cytochrome P450-reductase // J. Biol. Chem.-1998.- V.273- P.17036-17049 .

9. Brown C.A. and Black S.D. Membrane topology of mammalian cytochromes P-450 from liver endoplasmic reticulum. Determination by trypsinolysis of phenobarbital-treated microsomes // J. Biol. Chem. -1989.- ¥.264.- P.4442-4449.

10. Buchberger A., Schroder H., Hestercamp T., Schonfeld H.-J., Bukau B. Substrate shuttling between the DnaK and GroEL systems indicates a chaperone network promoting protein folding // J. Mol. Biol.- 1996.- V.261.- P.328-333.

11. Bukau B., Hotwich A.L // The Hsp70 and Hsp60 chaperone machines // Cell.- 1998.- V.92- P.351-366.

12. Chen W., Peter R.M, McArdle S., Thummel K.E., Sigle R.O., Nelson S.D. Baculovirus expression and purification of human and rat cytochrome P450 2E1 // Arch. Biochem. Biophys.- 1996.- V.335.- P.123-130.

13. Clark B.J., Waterman M.R. The hydrophobic amino-terminal sequence of bovine 17 alpha-hydroxylase is required for theexpression of a functional hemoprotein in COS 1 cells // J. Biol. Chem.- 1991.- V.25.- P.5898-5904.

14. Coon M.J., Ding X.X., Pernecky S.J., Vaz A.D. Cytochrome P450: progress and predictions // FASEB. J.- 1992.- V.6.-P.669-673 .

15. Cosrrie J., Johnson E.F. Engineering microsomal cytochrome P450 2C5 to be a soluble, monomeric Enzyme // J. Biol. Chem.- 2000.- V.275.- P.2545-2553.

16. Crouy-Chanel A., Kohiyama M. , Richarme G. Interaction of DnaK with native proteins and membrane proteins correlates with their accessible hydrophobicity // Gene.- 1999.-V.230.- P.163-170.

17. Cullin C. Two distinct sequences control the targeting and anchoring of the mouse P450 1A1 into the yeast endoplasmic reticulum membrane // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1992.- V.184- P.1490-1495.

18. Dean W.L, Gray R.D. Relationship between state of aggregation and catalytic activity for cytochrome P-450LM2 and NADPH-cytochrome P-450 reductase // J. Biol. Chem.-1982.- V.25.- P.14679-14685.

19. Durley R.C.E., Mathews F.S. Enzymatic and electron transfer activities in crystalline protein complexes // Acta. Crystallogr.- 1996.- V. D.52.- P.65-76.

20. Estabrook R.W., Shet M.S., Fisher C.W., Jenkins C.M., Waterman M.R. The interaction of NADPH-P450 reductase with P450: an electrochemical study of the role of the flavinmononucleotide-binding domain // Arch. Biochem. Biophys -1996.- V.333.- P.308-315.

21. Ewalt K.L., Hendrick J.P., Houry W.A., Hartl F.U. In vivo observation of polypeptide flux through the bacterial chaperonin system // Cell.- 1997- V.90.- P.491-500.

22. Faulkner K.M., Shet M.S., Fisher C.W., Estabrook R.W. Electrocatalytically driven omega-hydroxylation of fatty acid using cytochrome P450 4A1 // Proc. Natl. Acad. Sci.-1995,- V. 92.- P.7705-7709.

23. Fenton W.A., Kashi Y., Furtak K., and Horwich A.L. Residues in the chaperonin GroEL required for polypeptide binding and release // Nature.- 1994,- V.371- P.614-619.

24. Fisher C.W., Caudle D.L., Martin-Wixtrom C., Waterman M.R., Estabrook R.W. High-level expression of functional human cytochrome P450 1A2 in Escherichia coli // FASEB. J. 1992,- V.6.- P.759.

25. Gasser R., Negishi M., Philpot R.M. Primary structures of multiple forms of cytochrome P-450 isozyme 2 derived from rabbit pulmonary and hepatic cDNAs // Mol. Pharmacol.-1988. -V.32. -P.22-30.

26. Gilliam E.M.J., Baba I, Kim B.R., Ohmori S, Guengerich F.P. Expression of modified human cytochrome P450 3A4 in Escherichia coli and purification and reconstitution of the enzyme // Arch. Biochem. Biophys.- 1993.- V.305.- P.123-131.

27. Gilliam E.M.J., Guo Z., Martin M.V., Jenkins C.M., Guengerich F.P. Functional expression of cDNAs for bovine 11 beta-hydroxylase-aldosterone synthases, P450-11 beta)-2 and -3 and their chimeras // Arch. Biochem. Byophys.-1995,- V.319.- P.540.

28. Gold L. and Stormo G.D. in "Escherichia coli and Salmonella typhimurium: Cellular and Molecular Biology",

29. Neidhardt F.C. and Ingraham J.L., eds.) American. Society, for Microbiology. Washington. DC.- 1990.- V. 1302- P.342

30. Gruenke L., Konopka K., Cadieu M., Waskell L. The stoichiometry of the cytochrome P-450-catalyzed metabolism of methoxyflurane and benzphetamine in the presence and absence of cytochrome b5 // J. Biol. Chem.- 1995.- V.250.-P.747-751.

31. Guengerich F.P. in „Frontiers in Biotransformation" (Ruckpaul K. and Rein H. , eds.) // London.- 1989.- V.I.-P.101-150.

32. Guengerich F.P., Martin M.V., Guo Z., Chun Y.-J. Purification of Functional Recombinant P450s from Bacteria // Arch. Biochem. Biophys.- 1996.- V.312.- P.35-37.

33. Hartl F.U. Molecular chaperones in cellular protein folding // Nature.- 1996.- V.381.- P.571-580.

34. Hesterkamp T., Hauser S., Lutke H., Bukau B. Escherichia coli trigger factor is a prolyl isomerase that associates with nascent polypeptide chains // Proc. Natl. Acad. Sci.-1996.- V.93.- P.4437-4441.

35. High S., Dobberstein B. Mechanisms that determine the transmembrane disposition of proteins // Curr. Opin. Cell. Biol.- 1992.- V.4.- P.581-586.

36. Houry W.A., Frishman D, Eckerskorn C, Lottspeich F, and Hartl F.U. Identification of in vivo substrates of the chaperonin GroEL // Nature.- 1999.- V.371.- P.614-619.

37. Hsu P.Y., Tsai A.L., Kulmacz R., and Wang L.H. Expression, purification, and spectroscopic characterization of human thromboxane synthase. J. Biol. Chem.- 1999.- V.274.- P.762-769.

38. Johnson J.L., Craig E.A. Protein folding in vivo: unraveling complex pathways // Cell.- 1997.- V.90.- P.201-204 .

39. Kedzie K.M., Philport R.M., Halpert J.R. Functional expression of mammalian cytochromes P450IIB in the yeast Saccharomyces cerevisiae // Arch. Biochem. Biophys.- 1991.-V. 291.- P.176-186.

40. Kempf A., Zanger U.M., Meyer U.A. Truncated human P450 2D6: expression in Escherichia coli, Ni(2+)-chelate affinity purification, and characterisation of solubility and aggregation // Arch. Biochem. Biophys.- 1995.- V. 321. -277 .

41. Kyte J., Doolittle R.F. A simple method for displaying the hydrophobic character of a protein // J. Mol. Biol.-1982.- V.157. P.105-132.

42. Laemmli U.K. One-Dimensional SDS-PAGE // Nature. London.-1970.- V.227.- P.680-684.

43. Lamb D.C., Kelly D.E., Venkateswarlu K., Manning N.J., Bligh H.F.J., Schunck W.-H., Kelly S.L. Generation of a complete, soluble, and catalytically active sterol 14 alpha-demethylase-reductase complex // Biochemistry.-1999.- V.38.- P.8733-8738 .

44. Lambert L.A., Abshire K., Blankenhorn D., Slonczewski J.L. Proteins induced in Eschericgia coli by benzoic acid // J. of Bacteriology.- 1997.- V.179.- P.7595-7599.

45. Larson J.R., Coon M.J., Porter T.D. Alcohol-inducible cytochrome P-450IIE1 lacking the hydrophobic NH2-terminal segment retains catalytic activity and is membrane-bound when expressed in Escherichia coli // J. Biol. Chem.-1991.- V. 266.- P.7321-7324.

46. Mary L., Shank-Retzlaff K., Raner G.M., Coon M.J., Sligar S.G. Membrane topology of cytochrome P450 2B4 in Langmuir-Blodgett mono-layers // Arch, of Biochem. and Biophysics.-1998.- V.359.- P.82-88.

47. Matsuura S., Fujii-Kuriyama Y., Taskiro Y. The transmembrane region of microsomal cytochrome P450 identified as the endoplasmic reticulum retention signal // J. Cell. Biol.- 1978.- V.78.- P.503-519.

48. Modi S., Paine M.J., Sutcliffe M.J., Lian L.Y., Primrose W.U., Wolf C.R., Roberts G.C. A model for human cytochrome P450 2D6 based on homology modeling and NMR studies of substrate binding // Biochemistry.- 1996.- V.35.- P.4540-4 55 0 .

49. Monier S., Van Luc P., Kreibich G., Sabatini D., Adesnik M. Signals for the incorporation and orien-tation of cytochrome P450 in the endoplasmic Reticulum membrane // J. Cell. Biol.- 1988,- V.107.- P.457-470.

50. Nebert D.W, Gonzalez F.J. P450 genes: structure, evolution, and regulation // Annu. Rev. Biochem.- 1987.-V.56.- P.945-993.

51. Nelson D.R., Strobel H.W. On the membrane topology of vertebrate cytochrome P-450 proteins // J. Biol. Chem.-1988.- V. 263.- P.6038-6050.

52. Nilsson O.S., DePierre J.W., Dallner G. Investigation of the transverse topology of the microsomal membrane usingcombinatios of proteases and the non-penetrating reagent diazobenzene sulfonate // Biochem. Biophys. Acta.- 1978.-V.511.- P.93-104.

53. Omura T., Sato R. Structute and function of cytochrome P450 // Biochemistry.- 1964.- V.5.- P.156-164.

54. Omura T. Forty years of cytochrome P450 // Biochem Biophys Res Commun.- 1999.- V.266.- P.690-698.

55. Pernecky S.J., Coon M.J. N-terminal modifications that alter P450 membrane targeting and function. Methods Enzymol.- 1996.- V.272.- P.25-34.

56. Pfanner N. Who chaperones nascent chains in bacteria? // Current. Biology.- 1999.- V.9- P.720-724.

57. Pompon D., Louerat B., Bronine A, Urban P. Yeast expression of animal and plant P450s in optimized redox environments // Methods. Enzymol.- 1996.- V.272.- P.51-64.

58. Porter T.D., Coon M.J. Cytochrome P-450. Multiplicity of isoforms, substrates, and catalytic and regulatory mechanisms // J. Biol. Chem.- 1991.- V.25.- P.13469-13472.

59. Poulos T.L., Finzel B.C., Howard A.J. High-resolution crystal structure of cytochrome P450cam // J. Mol. Biol.-1987.- V.195.- P.687-700.

60. Ravichandran K.G., Boddupalli S.S., Hasermann C.A., Peterson J.A., Deisenhofer J. Crystal structure of hemoprotein domain of P450BM-3, a prototype for microsomal P450's // Science.- 1993.- V.6.- P.731-736.

61. Rohman M., Harrison-Lavoie K.J. Separationm of copurifing GroEL from gfutathione-S-transferase fusion proteins // Protein. Expression, and Purific.- 2000.- V.20.- P.45-47.

62. Ryan R., Grimm S.W., Kedzie K.M., Halpert J.R., Philpot R.M. Sequence of a chicken phenobarbital-inducible cytochrome P450 cDNA: regulation of two P450 mRNAs transcribed from different genes // Arch. Biochem. Biophys.- 1993 .- V.304.- P.454-463.

63. Sagara Y., Barnes H.J., Waterman M.R. Protein synthesis inhibitors and ethanol selectively enhance heterologous expression of P450s and related proteins in Escherichia coli // Arch. Biochem. Biophys.- 1993.- V.304.- P.272-278.

64. Sakaguchi M., Katsuyoshi M., Sato R. Signal recognition particle is required for co-translational insertion ofcytochrome P-450 into microsomal membranes // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A.- 1984,- V.81-11.- P.3361-3364.

65. Sakaguchi M., Mihara K., Sato R. A short amino-terminal segment of microsomal cytochrome P-450 functions both as an insertion signal and as a stop-transfer sequence // EMBO J.- 1987,- V. 6.- P.2425-2431.

66. Scheller U., Kraft R., Schroder K.-L.,Schunck W.-H. Generation of the soluble and functional cytosolic domain of microsomal cytochrome P450 52A3 // J. Biol. Chem.-1994.- V. 269.- P.12779-12783.

67. Smith D.B., Johnson K.S. Single step purification of polypeptides expressed in Escherichia coli as fusions with glutathione S-transferase // Gene.- 1988.- V. 67.- P.31-40.

68. Smith G.,Tew D., Wolf C. Membrane topology of NADPH-cytochrome P450 reductase on the endoplasmic reticulum // Proc. Natl. Acad. Sci. Usa.- 1994.- V.91.- P.8710-8714.

69. Shimoji M., Yin H., Higgins L., Jones J.P. Design of a novel P450: a functional bacterial-human cytochrome P450 chimera // Biochemistry.- 1998.- V.37.- P.8848-8852.

70. Shoun H., Suyama W., Yasui T. Soluble nitrate/nitrite-inducible cytochrome P450 of the fungus, Fusarium oxysporum // FEBS Lett.- 1989. -V.244.- P.11-14.

71. Szczesna-Skorupa E., Browne N., Mead D., Kemper B. Positive charges at the NH2 Terminus convert the membrane-anchor signal peptide of cytochrome P-450 to a secretory signal peptide // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1988.-V.85.- P.738-742.

72. Szczesna-Skorupa E., Kemper B. NH2-terminal substitutions of basic amino acids induce translocation across the microsomal membrane and glycosylation of rabbit cytochrome P450IIC2 // J. Cell. Biol.- 1989.- V.108.- P.1237-1243.

73. Thain A., Gaston K., Jenkins 0., and Clarkie A. R. A method for the separation of GST fusion proteins from copurifying GroEL // Trends. Genet.- 1996.- V.12.- P.209-210.

74. Tsuprun V.L., Myasoedova K.N., Berndt P., Sograf O.N., Orlov E.V., Ya C.V., Archakov A.V., Skulachev V.P. Quaternary structure of the liver microsomal cytochrome P-450 // FEES. Lett.- 1986.- V.205.- P.35-50.

75. Uvarov V.Yu., Sotnichenko A.I., Vodovozova E.L., Molotkovsky J.G., Kolesanova E.F., Lyulkin Y.A., Stier A., Krueger V., Archakov A.I. Determination of membrane-bound fragments of cytochrome P-450 2B4 // Eur. J. Biochem.-1994.- V.222P.483-489.

76. Vergeres G., Waskell L. Microsomal cytochromes b5 and P450 during induction of aryl hydrocarbon hydroxylase activity in mammalian cell culture // Biochemie.- 1995.- V. 77.- P.604-620.

77. Viitanen P.V., Gatenby A.A., Lorimer G.H. Purified chaperonin 60 (groEL) interacts with the nonnative states of a multitude of Escherichia coli proteins // Protein. Sci.- 1992.- V.I.- P.363-9.

78. Vlasuk G.P., Ghrayeb J., Ryan D.E., Reik L., Thomas P.E., Levin W., Walz F.G. Multiplicity, strain differences, and topology of phenobarbital-induced cytochromes P450 in rat liver microsomes // Biochemistry.- 1982.- V.21.- P.789-798.

79. Von Wachenfeldt C., and Johnson E.F. in „Cytochrome P450-Structure, Mechanism, and Biochemistry" (Oritz de Montellano P., edc.), 2n<: Ed., Plenum. Publishing. Corp. NY.- 1995.- P.183-223.

80. Von Wachenfeldt C., Richardson T.H., Cosme J., Johnson E.F. Microsomal P450 2C3 is expressed as a soluble dimer in Escherichia coli following modifications of its N-terminus // Atch. Biochem. Biophis.- 1997.- V.339.- P.107-114.

81. Wagner S.L., Dean W.L., Gray R.D. Zwitterionic detergent mediated interaction of purified cytochrome P-450LM4 from5,6-benzoflavone-treated rabbits with NADPH-cytochrome P-450 reductase // Biochemistry.- 1987.- V.26.- P.2343-2348.

82. Waterman M.R. and Johnson E.F. The P450 superfamily: update on new sequences, gene mapping, and recommended nomenclature // Methods. Enzymol.- 1991.- V.206.- P.320-327 .

83. Wang M., Roberts D., Paschke R., Shea T., Masters B., Kim J. Acetone catabolism by cytochrome P450 2E1: studies with CYP2El-null mice // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1997.-V. 94P.8411-8416.

84. White S.H. Hydrophaty plots and the prediction of membrane topology. Membrane protein structure: Experimental approaches (White S.H., ed.) Oxford. University. Press. London.- 1994.- P.97-124.

85. Williams P.A., Cosme J., Sridhar V., Johnson E.F., McRee D.E. Mammalian microsomal cytochrome P450 monooxygenase: structural adaptations for membrane binding and functional diver-sity // Mol. Cell.- 2000.- V.5.- P.121-131.

86. Wolin S.L. From the elephant to E.coli: SRP-dependenr protein targeting // Cell.- 1994,- V.77.- P.787-790.

87. Xu Z., Horwich A.L., Sigler P.B.: The crystal structure of the asymmetric GroEL-GroES-(ADP)7 chaperonin complex // Nature.- 1997,- V.388.- P.741-750.

88. Yamazaki S., Sato K., Suhara K., Sakaguchi M., Mihara K., Omura T. Importance of the proline-rich region following signal-anchor sequence in the formation of correct conformation of microsomal cytochrome P-450s // J. Biochem. 1993.- V.114.- P.652-657.