Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экспрессия цитохромов Р45011А1 и 2В4 в дрожжах Saccharomyces cerevisiae

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Сидорович, Вадим Евгеньевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Структура митохондриальных цитохром Р450-зависимых ферментных систем

1.2. Экспрессия цитохромов Р450 в дрожжах S. cerevisiae

1.3. Экспрессия митохондриальных цитохромов Р450 в дрожжах

S. cerevisiae

1.4. Экспрессия митохондриальных цитохромов Р450 в культуре клеток млекопитающих

1.5. Экспрессия митохондриальных цитохромов Р450 в Escherichia coli А

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Конструирование векторов для экспрессии цитохрома Р450 11А1, НАДФН -адренодоксинредуктазы и адренодоксина

3.2. Анализ субклеточной локализации белков-компонентов цитохром

Р450 11 А1-зависимой ферментной системы в дрожжах S.cerevisiae

3.3. Анализ взаимодействия рекомбинантных Р450 11А1 и АР с микросомальной мембраной

3.4. Определение содержания холоферментов mP450 11А1 и с17/тР450 11А1 в микросомах дрожжей S.cerevisiae

3.5. Определение НАДФН-зависимой цитохром с-редуктазной активности

3.6. Определение активности рекомбинантных цитохромов Р450 11А1 in vitro

3.7. Конструирование векторов для экспрессии цитохрома Р450 2В

3.8. Анализ субклеточной локализации рекомбинантных цитохромов Р450 2В4 в дрожжах S.cerevisiae

3.9. Анализ взаимодействия рекомбинантных цитохромов Р450 2В4 с микросомальной мембраной

3.10. Определение содержания холо- и апоферментов рекомбинантных цитохромов Р450 2В4 в микросомах дрожжей S.cerevisiae

3.11. Определение каталитической активности рекомбинантных цитохромов

Р450 2В4 в реакции О-деалкилирования 7-пентоксирезоруфина

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экспрессия цитохромов Р45011А1 и 2В4 в дрожжах Saccharomyces cerevisiae"

Цитохромы Р450 (Р450) - надсемейство гемопротеияов b-типа, образующих в восстановленном состоянии комплекс с СО с полосой поглощения при 450 нм. Эти белки обнаружены практически у всех представителей животного, растительного и бактериального царств, отсутствуя только у строго анаэробных бактерий (Арчаков, 1983; Porter and Coon, 1991; 220). Цитохромы Р450 относятся к классу монооксигеназ или оксидаз со смешанной функцией и катализируют, по меньшей мере, 15 типов реакций, в том числе реакции ароматического и алифатического гидроксилирования, О, С- и N-деалкилирования, дегалогенирования, образования эпоксидов и др. (Метелица, 1982; 1984). Окисление ряда веществ цитохромами Р450 ведет к образованию конечных или промежуточных продуктов реакции, обладающих токсическими, канцерогенными или аллергенными свойствами (Guengerich and Liebler, 1985; Guengerich, 1990; Archakov and Bachmanova, 1990; Kawajiri, 1994). Функции цитохромов P450 не ограничены катаболизмом соединений экзо- и эндогенной природы - биосинтез стероидных гормонов, простагландинов и метаболитов арахидоновой кислоты также катализируется цитохромами Р450 (Bernhardt, 1998).

Цитохромы Р450 эукариот, а также другие основные компоненты Р450-зависимых монооксигеназных ферментных систем являются мембраносвязанными белками и локализованы в мембранах эндоплазматического ретикулума и внутренней мембране митохондрий (микросомальные и митохондриальные Р450, соответственно). Это обстоятельство наряду с наличием в тканях млекопитающих большого количества близких по первичной структуре, но различных по субстратной специфичности Р450, крайне осложняет выделение и исследование физико-химических свойств этих белков. Несмотря на интенсивные исследования Р450 в течение более чем 30-ти лет, многие аспекты структурно-функциональных взаимоотношений Р450 млекопитающих остаются неизвестными.

Методологией, с помощью которой удается получить индивидуальные формы Р450, является гетерологичная экспрессия кДНК Р450 в культуре клеток млекопитающих, насекомых, в клетках Escherichia coli и дрожжей Saccharomyces cerevisiae (Guengerich, 1991; Clark, 1991; Doehmer, 1993; Gonzalez, 1995; Pompon, 1996). Наглядным примером эффективности и возможностей этого подхода явилось получение данных рентгеноструктурного анализа для микросомального эукариотического цитохрома Р450 2С5 (von Wachenfeldt, 1997; Cosme, 2000; Williams, 2000).

Дрожжи Saccharomyces cerevisiae особенно удобны для создания системы гетерологичной экспрессии Р450 млекопитающих, поскольку в отличие от культур клеток млекопитающих, обеспечивают высокий уровень экспрессии, и, в то же время, в отличие от E.coli, обладают принципиальным сходством структуры субклеточных компартментов, а также механизмов синтеза и транспорта белков с таковыми у высших эукариот.

Гетерологичная экспрессия мигохондриальных цитохромов Р450 млекопитающих представляет значительный интерес для биотехнологии, поскольку именно митохондриальные Р450 катализируют ключевые стадии биосинтеза глюкокортикоидов, минералокортикоидов, андрогенов и витаминов группы D3 (Sakaki, 1992; 1996; Dumas, 1996; Duport, 1998). Оптимизация экспрессии этих ферментов в клетках микроорганизмов способна привести к созданию продуцентов физиологически активных соединений.

Гетерологичная экспрессия микросомальных цитохромов Р450 млекопитающих представляет большой интерес для фармакологов и токсикологов, поскольку позволяет исследовать метаболизм веществ промышленного происхождения индивидуальными формами цитохромов Р450 (221). Сходство первичных последовательностей и перекрывание субстратных специфичностей, характерное для этих ферментов, затрудняют выделение (что представляет особую проблему для цитохромов Р450 человека) и исследование биохимической функции индивидуальных ферментов.

Несмотря на большое число публикаций, посвященных гетерологичной экспрессии цитохромов Р450 в различных системах экспрессии, к настоящему времени не существует универсального подхода для экспрессии цитохромов Р450. В связи с этим представлялось важным изучить экспрессию цитохромов Р450 11А1 и 2В4 млекопитающих в клетках дрожжей S.cerevisiae.

Цель настоящей работы: Разработать системы гетерологичной экспрессии цитохромов Р450 11А1 и 2В4 в дрожжах S.cerevisiae.

Задачи исследования:

1. Сконструировать набор векторов для экспрессии цитохромов Р450 11А1, 2В4 и Р450 11 А1-зависимых электронтранспортных белков в дрожжах S.cerevisiae.

2. Исследовать возможность экспрессии функционально активного митохондриального цитохрома Р450 11А1 млекопитающих вне митохондрий клеток дрожжей.

3. Исследовать влияние N-концевой адресующей последовательности и С-концевого гексагистидинового пептида на экспрессию микросомального цитохрома Р450 2В4 млекопитающих в дрожжах S.cerevisiae.

Научная новизна и практическая значимость работы:

В результате проведенных исследований осуществлено конструирование новых векторных систем, обеспечивающих коэкспрессию митохондриальной цитохром Р450 11А1-зависимой ферментной системы млекопитающих в мембранах эндоплазматического ретикулума и цитозоле клеток дрожжей S.cerevisiae, а также сконструированы плазмиды, обеспечивающие эффективный биосинтез цитохрома Р450 2В4 в клетках S.cerevisiae. Показано, что для получения функционально активного цитохрома Р450 11А1 вне митохондрий дрожжей достаточно экспрессировать кДНК "зрелой" (не содержащей N-концевого адресующего пептида) последовательности цитохрома Р450 11А1. "Зрелая" форма Р450 11А1 является мембранным белком эндоплазматического ретикулума дрожжей S.cerevisiae. Обнаружено, что "зрелые" последовательности АР и АД экспрессируются в функционально активной форме. Низкий уровень экспрессии адренодоксина в цитозоле дрожжевых клеток является лимитирующим фактором при реконструкции активности цитохрома Р450 11А1 in vitro.

Установлено, что N-концевые адресующие последовательности цитохромов Р450 17А1, Р450 2В4 и З'-нетраслируемая последовательность кДНК цитохрома Р450 2В4 не влияют на уровень биосинтеза апофермента цитохрома Р450 2В4 в дрожжах S.cerevisiae. Обнаружено, что N-концевой сигнальный пептид цитохрома Р450 17А1 обеспечивает более эффективный биосинтез холофермента цитохрома Р450 2В4, чем N-концевой сигнальный пептид цитохрома Р450 2В4. Показано, что N-концевые адресующие последовательности цитохромов Р450 17А1 и 2В4, С-концевой гексагистидиновый пептид не влияют на каталитические характеристики рекомбинантных форм Р450 2В4 и на взаимодействие с НАДФН-цитохром Р450-оксидоредуктазой дрожжей.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Сидорович, Вадим Евгеньевич

ВЫВОДЫ

1. Осуществлено конструирование новых векторных систем, обеспечивающих коэкспрессию митохондриальной цитохром Р450 11А1-зависимой ферментной системы млекопитающих в мембранах эндоплазматического ретикулума и цитозоле клеток дрожжей S. cerevisiae. Сконструированы плазмиды, обеспечивающие эффективный биосинтез цитохрома Р450 2В4 в клетках S.cerevisiae.

2. Показано, что экспрессия кДНК "зрелой" (не содержащей N-концевого адресующего пептида) последовательности цитохрома Р450 11А1 (mP450 11А1) обеспечивает биосинтез функционально активного белка в мембранах эндоплазматического ретикулума. "Зрелая" форма Р450 11А1 является мембранным белком эндоплазматического ретикулума дрожжей S.cerevisiae. Экспрессия кДНК "гибридной" (содержащей N-концевой микросомальный адресующий пептид цитохрома Р450 17А1) последовательности цитохрома Р450 11А1 (cl7/mP450 11А1) приводит к биосинтезу функционально неактивного фермента.

3. "Зрелые" последовательности АР и АД экспрессируются в функционально активной форме.

4. Показано, что N-концевые адресующие последовательности цитохромов Р450 17А1 и 2В4, а также З'-нетраслируемая последовательность кДНК цитохрома Р450 2В4 не влияют на уровень биосинтеза апофермента цитохрома Р450 2В4 в дрожжах S.cerevisiae. Обнаружено, что N-концевая адресующая последовательность цитохрома Р450 17А1 обеспечивает в 1.8 раза более эффективный биосинтез холофермента цитохрома Р450 2В4, чем N-концевая адресующая последовательность цитохрома Р450 2В4. Кроме того, N-концевые адресующие последовательности цитохромов Р450 17А1 и 2В4, С-концевой гексагистидиновый

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Сидорович, Вадим Евгеньевич, Москва

1. Арчаков А.И. Оксигеназы биологических мембран. М.: Наука, 1983.

2. Кэтти, Д. и Райкундалия, Ч. Получение поликлональных антител и контроль их качества. В: Антитела. Методы. Ред. Кэтти, Д. М.: Мир, 1991, т. 1, с. 33-115.

3. Лепешева Г.И., Усанов С.А. Сравнительная структурная и иммунохимическая характеристика рекомбинантного и природного цитохромов P450scc (CYPXIAI). -Биохимия, 1998, т. 63, 2, с. 265-276.

4. Метелица Д.И. Активация кислорода ферментными системами. М.: Наука, 1982.

5. Метелица Д.И. Моделирование окислительно-восстановительных ферментов. Минск: Наука и техника, 1984.

6. Новикова Л.А., Савельев А.С., Звягильская Р.А., Лузиков В.Н. Импорт модифицированной формы предшественника цитохрома P450scc в митохондрии из различных источников. -Биохимия, 1995, т. 60, 7, с. 995-1003.

7. Савельев А.С., Новикова Л.А., Друца В.Л., Исаева Л.В., Черноголов А.А., Усанов С.А., Лузиков В.Н. Синтез и некоторые аспекты топогенеза цитохрома P450scc быка в дрожжах. -Биохимия, 1997, т. 62, 7, с. 908-916.

8. Сидорович В.Е., Королев С.В., Карпычев И.В., Эльдаров М.А., Скрябин К.Г. Набор экспрессионных векторов для напрвленного сортинга гетерологичных белков в дрожжах Saccharomuces cerevisiae. -Биотехнология, 1996, т. 2, с. 10-17.

9. Усанов, С.А., Турко, И.В., Чащин, В.Л., Ахрем, А.А. Молекулярная организация комплекса редуктазы в митохондриях коры надпочечников. Исследования с помощью бифункциональных реагентов. -Биоорг. химия, 1986, т. 12, с. 185-194.

10. Черноголов А.А., Усанов С.А. Иммунохимическая характеристика стероид-гидроксилаз митохондрий коры надпочечников. 2. Локализация антигенных детерминант в молекуле цитохрома P450scc (CYP11А1). -Биохимия, 19976, т. 62, 12, с. 1620-1632.

11. Akiyoshi-Shibata, М., Sakaki, Т., Yabusaki, Y., Murakami, Н., and Ohkawa, Н. Expression of bovine adrenodoxin and NADPH-adrenodoxin reductase cDNAs in Saccharomyces cerevisiae. -DNA Cell Biol., 1991(a), vol. 10, 8, p. 613-621.

12. Akiyoshi-Shibata, M., Usui, E., Sakaki, Т., Yabusaki, Y., Noshiro, M., Okuda, K., Ohkawa, H. Expression of rat liver vitamin D3 25-hydroxylase cDNA in Saccharomyces cerevisiae. -FEBS Lett., 1991(6), vol. 280, 2, p. 367-370.

13. Archakov, A.I. and Bachmanova, G.I. Cytochrome P450 and active oxygen. London: Taylor & Francis, 1990.

14. Baim, S.B. and Sherman, F. mRNA structures influencing translation in the yeast Saccharomyces cerevisiae. -Mol.Cell. Biol., 1988, vol. 8, p. 1591-1601.

15. Barnes, H.J., Arlotto, M.P. and Waterman, M.R. Expression and enzymatic activity of recombinant cytochrome P450 17a-hydroxylase in Escherichia coli. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, vol. 88, p. 5597-5601.

16. Barnes, H.J. Maximizing expression of eukaryotic cytochrome P450s in Escherichia coli. -Methods Enzymol., 1996, vol. 272, p. 3-14.

17. Barros, M.H., Nobrega, F.G. YAH1 of Saccharomyces cerevisiae: a new essential gene that codes for a protein homologous to human adrenodoxin. -Gene. 1999, vol. 233, p. 197203.

18. Beckert, V., Dettmer, R., and Bernhardt, R. Mutations of tyrosine 82 in bovine adrenodoxin that affect binding to cytochromes P45011A1 and P45011B1 but not electron transfer. -J. Biol. Chem., 1994, vol.269, p. 2568-2573.

19. Bellamine, A., Gautier, J.-C., Urban, P. and Pompon, D. Chimeras of the human cytochrome P4501A family produced in yeast. -Eur. J. Biochem., 1994, vol. 225, p. 10051013.

20. Bernhardt, R. Cytochrome P450: structure, function and generation of reactive oxygen species. -Rev. Physiol. Pharmacol., 1995, vol. 127, p. 137-221.

21. Bernhardt, R. Electron transfer in mitochondrial steroid hydroxylating cytochrome P450 systems: role of adrenodoxin. In: Biophysics of electron transfer and molecular bioelectronics. Nicolini, C. (Ed.), New York: Plenum Press, 1998, p. 51-66.

22. Bernhardt, R., Muller, A., Uhlmann, H., Grinberg, A., Muller, J.J., Heinemann, U. Structure of adrenodoxin and function in mitochondrial steroid hydroxylation. -Endocr. Res., 1998, vol. 24, p. 531-539.

23. Black, S.D. Membrane topology of the mammalian P450 cytochromes. -FASEB J., 1992, vol. 6, p. 680-685.

24. Black, S.M., Harikrishna, J.A., Szklarz, G.D., and Miller, W.L. The mitochondrial environment is required for activity of the cholesterol side-chain cleavage enzyme, cytochrome P450scc. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, vol. 91, p. 7247-7251.

25. Bligh, H.F.L., Wolf, C.R., Smith, G., and Beggs, J.D. Production of cytochrome P450 reductase yeast-rat hybrid proteins in Saccharomyces cerevisiae. -Gene, 1992, vol. 110, p. 33-39.

26. Brandt, M.E. and Vickery, L.E. Expression and characterization of human mitochondrial ferredoxin reductase in Escherichia coli. -Arch. Biochem. Biophys., 1992, vol.294, 2, p. 735-740.

27. Brandt, M.E. and Vickery, L.E. Charge pair interactions stabilizing ferredoxin-ferredoxin reductase complexes. Identification by complementary site-specific mutations. -J. Biol. Chem., 1993, vol.268, p. 17216-17130.

28. Cauet, G., Dumas, В., Degryse, E., Spagnoli, R. Expression of a bovine Р450цр cDNA in the yeast Saccharomyces cerevisiae. In: Cytochrome P450. 8th International Conference. Lechner, M.C. (Ed.), Paris: John Libbey Eurotext, 1994, p. 583-586.

29. Chashchin, V.L., Vasilevsky, V.I., Shkumatov, V.M., and Akhrem, A.A. The domain structure of the cholesterol side-chain cleavage cytochrome P450 from bovine adrenocortical mitochondria. -Biochim. Biophys. Acta, 1984, vol. 787, p. 27-38.

30. Christianson, T.W., Sikorski, R.S., Dante, M., Shero, J.H., and Hieter, P. Multifunctional yeast high-copy-number shuttle vectors. -Gene, 1992, vol. 110, p. 119-122.

31. Chu, J.W., and Kimura, T. Studies on adrenal steroid hydroxylases. Molecular and catalytic properties of adrenodoxin reductase (a flavoprotein). -J. Biol. Chem., 1973, vol. 248, p. 2089-2094.

32. Chung, B.-c., Guo, I.-C., Chou, S.-J. Transcriptional regulation of the CYP11A1 and ferredoxin genes. -Steroids, 1997, vol. 62, p. 37-42.

33. Clark, B.J., Waterman, M.R. Heterologous expression of mammalian P450 in COS cells. -Methods Enzymol., 1991, vol. 206, p. 100-108.

34. Coghlan, V.M., Vickery, L.E. Expression of human ferredoxin and assembly of the 2Fe-2S. center in Escherichia coli. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, vol. 86, p. 835-839.

35. Coghlan, V.M., Vickery, L.E. Site-specific mutations in human ferredoxin thah affect binding to ferredoxin reductase and cytochrome P450scc. -J. Biol. Chem., 1991, vol.266, p. 18606-18612.

36. Coghlan, V.M., Vickery, L.E. Electrostatic interactions stabilizing ferredoxin electron transfer complexes. Disruption by "conservative" mutations. -J. Biol. Chem., 1992, vol.267, p. 8932-8935.

37. Cosme, J., Johnson, E.F. Engineering microsomal cytochrome P450 2C5 to be a soluble, monomeric enzyme. Mutations that alter aggregation, phospholipid dependence of catalysis, and membrane binding. -J. Biol. Chem., 2000, vol. 275, p. 2545-2553.

38. Crowe, J. and Henco, K. The QIAexpressionist. DIAGEN GmbH, QIAGEN Inc., 1992.

39. Cullin, C., Pompon, D. Synthesis of functional mouse cytochromes P-450 PI and chimeric P-450 P3-1 in the yeast Saccharomyces cerevisiae. -Gene, 1988, vol. 65, p. 203217.

40. Cupp-Vickery, J.R. and Poulos, T.L. Structure of cytochrome P450eryF involved in erythromycin biosynthesis. -Struct. Biology, 1995, vol. 2, p. 144-153.

41. Dai, Y, Rashba-Step, J, Cederbaum, A.I. Stable expression of human cytochrome P4502E1 in HepG2 cells: characterization of catalytic activities and production of reactive oxygen intermediates. -Biochemistry, 1993, vol. 32, p. 6928-6937.

42. Degryse, E., Dumas, В., Dietrich, M., Laruelle, L., and Achstetter, T. In vivo cloning by homologous recombination in yeast using a two-plasmid-based system. -Yeast, 1995, vol. 11, p. 629-640.

43. Dilworth, F.J., Black, S.M., Guo, Y., Miller, W.L., and Jones, G. Construction of a P450c27 fusion enzyme: a useful tool of vitamin D3 25-hydroxylase activity. -Biochem. J., 1996, vol. 320, p. 267-271.

44. Doehmer, J. V79 Chinese hamster cells genetically engineered for cytochrome P450 and their use in mutagenicity and metabolism studies. -Toxicology, 1993, vol. 82, p. 105-118.

45. Duport, C., Spagnoli, R., Degryse, E., and Pompon, D. Self-sufficient biosynthesis of pregnenolone and progesterone in engineered yeast. -Nature Biotech., 1998, vol. 16, p. 186-189.

46. Ellis, S.W., Ching, M.S., Watson, P.F., Henderson, C.J., Simula, A.P. Catalytic activities of human debrisoquine 4-hydroxylase cytochrome P450 (CYP2D6) expressed in yeast. -Biochem. Pharmacol., 1992, vol. 44, p. 617-620.

47. Fujii-Kuriyama, Y., Negishi, M., Mikawa, R., Tashiro, Y. Biosynthesis of cytochrome P-450 on membrane-bound ribosomes and its subsequent incorporation into rough and smooth microsomes in rat hepatocytes. -J. Cell. Biol., 1979, vol. 81, p. 510-519.

48. Eugster, H.-P., Probst, ML, Wurgler, F.E., Sengstag, C. Caffeine, estradiol, and progesterone interact with human CYP1A1 and CYP1A2: evidence from cDNA-directed expression in Saccharomyces cerevisiae. -Drug Metab.Dispos., 1993, vol. 21, p. 43-49.

49. Gasser, R., Negishi, M., and Philpot, R.M. Primary structures of multiple forms of cytochrome P-450 isozyme 2 derived from rabbit pulmonary and hepatic cDNAs. -Mol. Pharmacol., 1988, vol. 32, p. 22-30.

50. Gautier, J.-C., Urban, P., Beaune, P. and Pompon, D. Engineered yeast cells as model to study coupling between human xenobiotic metabolizing enzymes. -Eur. J. Biochem.,1993, vol. 211, p. 63-72.

51. Geren, L.M., O'Brien, P., Stonehuerner, J., Millet, F. Identification of specific carboxylate groups on adrenodoxin that are involved in the interactions with adrenodoxin reducatse. -J. Biol. Chem., 1984, vol.259, p. 2155-2160.

52. Gietz D., Jean A.St., Woods R.A., Schiestl R.H. Improved method for high efficiency transformation of intact yeast cells. -Nucleic Acids Research, 1992, vol. 20, p. 1425.

53. Gluzman, Y. SV40-transformed simian cells support the replication of early SV40 mutants. -Cell, 1981, vol. 23, p. 175-182.

54. Goldstein, J.A., Faletto, M.B., Romkes-Sparks, M., Sullivan, Т., Kitareewan S. Evidence that CYP2C19 is the major (S)-mephenytoin 4"-hydroxylase in humans. -Biochemistry,1994, vol. 33, p. 1743-1752.

55. Gonzalez, F.J., Aoyama, T, Gelboin, H.V. Expression of mammalian cytochrome P450 using vaccinia virus. -Methods Enzymol., 1991, vol. 206, p. 85-92.

56. Gonzalez, F.J. Molecular biology of human xenobiotic-metabolizing cytochromes P450: role of vaccinia virus cDNA expression in evaluating catalytic function. -Toxicology, 1993, vol. 82, p. 77-88.

57. Gonzalez, F.J. and Korzekwa, K.R. Cytochromes P450 expression systems. -Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 1995, vol. 35, p. 369-390.

58. Gornall, A.G., Bardavill, C.J., David, M.M. Determination of serum proteins by means of the biuret reaction. -J. Biol. Chem., 1949, vol. 177, p. 751-766.

59. Graham, S.E., and Peterson, J.A. How similar are P450s and what can their differences teach us? -Arch. Biochem. Biophys., 1999, vol. 369, p. 24-29.

60. Guarente L., Yocum R.R., Gifford P. A GAL10-CYC1 hybrid yeast promoter identifies the GAL4 regulatory region as an upstream site. -Proc. Natl. Acad. Sci. U S A., 1982, vol. 79, p. 7410-7414.

61. Guengerich, F.P., Liebler, D.C. Enzymatic activation of chemicals to toxic metabolites. -Crit. Rev. Toxicol., 1985, vol. 14, p. 259-307.

62. Guengerich, F.P., Shimada, Т., Iwasaki, M., Butler, M.A., Kadlubar, F.F. Activation of carcinogens by human liver cytochromes P-450. -Basic Life Sci., 1990, vol. 53, p. 381-96.

63. Guengerich, F.P., Brian, W.R., Sari, M.-A., and Ross, J.T. Expression of mammalian cytochrome P450 enzymes using yeast-based vectors. -Methods Enzymol., 1991, vol. 206, p. 130-145.

64. Guengerich, F.P., Gillam, E.M.J., Ohmori, S., Sandhu, P., Brian, W.R., Sari, M.-A., Iwasaki, M. Expression of human cytochrome P450 enzymes in yeast and bacteria and relevance to studies on catalytic specificity. -Toxicology, 1993, vol. 82, p. 21-37.

65. Guzov, V.M., Unnithan, G.C., Chernogolov, A.A., and Feyereisen, R. CYP12A1, a mitochondrial cytochrome P450 from the house fly. -Arch. Biochem. Biophys., 1998, vol. 359, p. 231-240.

66. Hamamoto, I., Ichikawa, Y. Modification of a lysine residue of adrenodoxin reductase essential for complex formation with adrenodoxin. -Biochim. Biophys. Acta, 1984, vol. 786, p. 32-41.

67. Hamamoto, I., Kurokohchi, K., Tanaka, S., Ichikawa, Y. Adrenoferredoxin-binding peptide of NADPH-adrenoferredoxin reductase. -Biochim. Biophys. Acta, 1988, vol. 953, p. 207-213.

68. Hanahan, D. Studies on transformation of Escherichia coli with plasmids. -J. Mol. Biol., 1983, vol. 166, p. 557-80.

69. Hansen, W., Garcia, P.D., and Walter, P. In vitro protein translocation across the yeast endoplasmic reticulum: ATP-dependent posttranslational translocation of the prepro-a-factor. -Cell, 1986, vol. 45, p. 397-406.

70. Hanukoglu, I., and Jefcoate, C.R. Mitochondrial cytochrome P-450scc. Mechanism of electron transport by adrenodoxin. -J. Biol. Chern., 1980, vol. 255, p. 3057-3061.

71. Harikrishna, J.A., Black, S.M., Szklarz, G.D., and Miller, W.L. Construction and function of fusion enzymes of the human cytochrome P450scc system. -DNA Cell Biol., 1993, vol. 12, 5, p. 371-397.

72. Hasemann, C.A., Ravichandran, K.G., Peterson, J.A., and Deisenhofer, J. Crystal structure and refinement of cytochrome P450terp at 2.ЗА resolution. -J. Mol. Biol., 1994, vol. 236, p. 1169-1185.

73. Helvig, C., Capdevila, J.H. Expression and characterization of proteins containing fused rat P450 2C11 and rat or bacterial NADPH-P450 reductase domains. In: 12th International symposium on microsomes and drug oxidations, 1998, p. 227.

74. Higashi, Y., Fujii-Kuriyama, Y. Functional analysis of mutant P450(C21) genes in COS cell expression system. -Methods Enzymol., 1991, vol. 206, p. 166-173.

75. Hill, J.E., Myers, A.M., Koerner, T.J., and Tzagoloff, A. Yeast/E.call shuttle vectors with multiple unique restriction sites. -Yeast, 1986, vol. 2, p. 163-167.

76. Hovland, P., Flick, J., Johnston, M., and Sclafani, R.A. Galactose as a gratuitous inducer of GAL gene expression in yeasts growing on glucose. -Gene, 1989, vol. 83, p. 57-64.

77. Imai, Y., Uno, Т., Nakamura, M. Characterization of rabbit liver P450IIE1 synthesized in transformed yeast cells. -J. Biochem. (Tokyo), 1990, vol. 108, p. 522-524.

78. Iwahashi, J., Furuya, S., Mihara, K., and Omura, T. Characterization of adrenodoxin precursor expressed in Escherichia coli. -J. Biochem., 1992, vol. 111, p. 451-455.

79. Kawajiri, K., Watanabe, J., and Hiyashi, S.-I. Genetic polymorphysm of P450 and human cancer. In: Cytochrome P450. Proceedings of the 8th International conference. Lechner, M.C. (Ed.), Paris: John Libbey Eurotext, 1994, p. 555-558.

80. Kedzie, K.M., Philpot, R.M., and Halpert, J.R. Functioanl expression of mammalian cytochromes P450IIB in the yeast Saccharomyces cerevisiae. -Arch. Biochem. Biophys., 1991, vol. 291, l,p. 176-186.

81. Kido, Т., and Kimura, Т. The formation of binary and ternary compexes of cytochrome P450scc with adrenodoxin and adrenodoxin reductase.adrenodoxin complex. The implication in ACTH function. -J. Biol. Chem., 1979, vol. 254, p. 11806-11815.

82. Knopp, D.R. Handbook of analytical derivatization reaction. N.Y.: p. 480.

83. Krynetski, E.Yu., Drutsa, V.L., Kovaleva, I.E., and Luzikov, Y.N. High yield expression of functionally active human liver CYP2D6 in yeast cells. -Pharmacogenetics, 1995, vol. 5, p.103-109.

84. Lacour, Т., Dumas, B. A gene encoding a yeast equivalent of mammalian NADPH-adrenodoxin oxidoreductases. -Gene, 1996, vol. 174, p. 289-292.

85. Laemmli, U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. -Nature, 1970, vol. 227, p. 680-685.

86. Lambeth, J.D., Seybert, D.W. and Kamin, H. Ionic effects on adrenal steroidogenic electron transport. The role of adrenodoxin as an electron shuttle. -J. Biol. Chem., 1979, vol. 254, p. 7255-7264.

87. Lambeth, J.D., Seybert, D.W. and Kamin, H. Phospholipid vesicle-reconstituted cytochrome P-450scc. Role of the membrane in control of activity and spin state of the cytochrome. -J. Biol. Chem., 1980a, vol. 255, p. 138-143.

88. Lambeth, J.D., Kamin, H., and Seybert, D.W. Phosphatidylcholine vesicle reconstituted cytochrome P-450scc. Role of the membrane in control of activity and spin state of the cytochrome. -J. Biol. Chem., 1980b, vol. 255, p. 8282-8288.

89. Lambeth, J.D. Cytochrome P-450scc. Cardiolipin as an effector of activity of a mitochondrial cytochrome P-450. -J. Biol. Chem., 1981, vol. 256, p. 4757-4762.

90. Lambeth, J.D., Kitchen, S.E., Faroqui, A.A., Tuckey, R., and Kamin, H. Cytochrome P-450scc-substrate interactions. Studies of binding and catalytic activity using hydroxycholestrols. -J. Biol. Chem., 1982a, vol. 257, p. 1876-1884.

91. Lambeth, J.D., Seybert. D.W., Lancaster, Jr, J.R., Salerno, J.C., and Kamin, H. Steroidogenic electron transport in adrenal cortex mitochondria. -Mol. Cell. Biochemistry, 1982b, vol. 45, p. 13-31.

92. Lambeth, J.D. and Kriengsiri, S. Cytochrome P-450scc-adrenodoxin interactions. Ionic effects on binding and regulation of cytochrome reduction by bound steroid substrates. -J. Biol. Chem., 1985, vol. 260, p. 8810-8816.

93. Lambeth, J.D. Cytochrome P-450scc a review of the specificity and properties of the cholesterol binding site. -Endocrine Res., 1986, vol. 12, p. 371-392.

94. Landt, O., Zirpel-Giesebrecht, M., Milde, A., and Hahn, U. Imroving purification of recombinant ribonuclease Tl. -J. Biothechnology, 1992, vol. 24, p. 189-194.

95. Lecain, E., Chenivesse, X., Spagnoli, R., and Pompon, D. Cloning by metabolic interference in yeast and enzymatic characterization of Arabidopsis thaliana sterol Л7-reductase. -J. Biol. Chem., 1996, vol.271, p. 10866-10873.

96. Li, H., Poulos, T.L. Structural variation in heme enzymes: a comparative analysis of peroxidase and P450 crystal structures. -Structure, 1994, vol. 2, p. 461-464.

97. Luzikov, V.N., Novikova, L.A., Whelan, J., Hugosson, M., and Glaser, E. Import of the mammalian cytochrome P450(scc) precursor into plant mitochondria. -Biochem. Biophys. Res. Commun., 1994, vol. 199, p. 33-36.

98. Manzella, L., Barros, M.H., Nobrega, F.G. ARH1 of Saccharomyces cerevisiae-. a new essential gene that codes for a protein homologous to the human adrenodoxin reductase. -Yeast, 1998, vol. 14, p. 839-46.

99. Matocha, M.F., and Waterman, M. Discriminatory processing of the precursor forms of cytochrome P-450scc and adrenodoxin by adrenocortical and heart mitochondria. -J. Biol. Chem., 1984, vol. 259, p. 8672-8678.

100. Monier, S., Van Luc, P., Kreibich, G., Sabatini, D.D., Adesnik, M. Signals for the incorporation and orientation of cytochrome P450 in the endoplasmic reticulum membrane. -J. Cell. Biol., 1988, vol. 107, p. 457-70.

101. Muchmore, D.C., Mcintosh, L.P., Russell, C.B., Anderson, D.E., and Dahlquist, F.W. Expression and nitrogen-15 labeling of proteins for proton and nitrogen-15 nuclear magnetic resonance. -Methods Enzymol., 1989, vol. 177, p. 44-73.

102. Muller, A., Muller, J.J., Muller, J.A., Uhlmann, H., Bernhardt, R., Heinemann, U. New aspects of electron transfer revealed by the crystal structure of a truncated bovine adrenodoxin, Adx(4-108). -Structure, 1998, vol. 6, p. 269-280.

103. Murakami, H., Yabusaki, Y., & Ohkawa, H. Expression of rat NADPH cytochrome P-450 reductase in S. cerevisiae. -DNA, 1986, vol. 5, p. 1-10.

104. Murakami, H., Yabusaki, Y., Sakaki, Т., Shibata, M. & Ohkawa, H. A genetically engineered P450 monooxygenase: construction of the functioanl fused enzyme betweenrat cytochrome P450c and NADPH-cytochrome P-450 reducatse. -DNA, 1987, vol. 6, p. 189-197.

105. Murakami, H., Yabusaki, Y., Sakaki, Т., Shibata, M. & Ohkawa, H. Expression of cloned yeast NADPH-cytochrome P450 reductase gene in Saccharomyces cerevisiae. -J. Biochem., 1990, vol. 108, p. 859-865.

106. Oeda, K., Sakaki, Т., Ohkawa, H. Expression of rat liver cytochrome P-450MC cDNA in Saccharomyces cerevisiae. -DNA Cell Biol., 1985, vol. 4, p. 167-175.

107. Ogishima, Т., Okada, Y., Omura, T. Import and processing of the precursor of cytochrome P-450(SCC) by bovine adrenal cortex mitochondria. -J. Biochem., 1985, vol. 98, p. 781-791.

108. Omura, Т., Sanders, E, and Estabrook, R.W. -Arch. Biochem. Biophys., 1966, vol. 117, p. 660-673.

109. Omura, Т. Localization of cytochrome P450 in membranes: mitochondria. In: Handbook of experimental pharmacology. Vol. 105. Cytochrome P450. Schenkman, J.B. and Greim, H. (Eds), Berlin, Heidelberg: Springer-Verlag, 1993, p. 61-69.

110. Omura, Т., & Sato, R. The carbon monooxide-binding pigment of liver microsomes: I. Evidence for its hemoprotein nature. -J. Biol. Chem., 1964, vol. 239, p. 2379-2385.

111. Ou, W.J., Ito, A., Morohashi, K., Fujii-Kuriyama, Y., Omura, T. Processing-independent in vitro translocation of cytochrome P450(SCC) precursors across mitochondrial membranes. -J. Biochem., 1986, vol. 100, p. 1287-1296.

112. Palma, P.N., Moura, I., LeGall, J., Van Beeumen, J., Wampler, J.E., Moura, J.J. Evidence for a ternary complex formed between flavodoxin and cytochrome c3: 1H-NMR and molecular modeling studies. Biochemistry, 1994, vol. 33, p. 6394-6407.

113. Penman, B.W., Reece, J., Smith, Т., Yang, C.S., Gelboin, H.V. Characterization of a human cell line expressing high levels of cDNA-derived CYP2D6. -Pharmacogenetics, 1993, vol. 3, p. 28-39.

114. Pfanner, N. Mitochondrial import: crossing the aqueous intermembrane space. -Current Biology, 1998, vol. 8, p. R262-R265.

115. Pikuleva, I.A., Bjorkhem, I., and Waterman, M.R. Expression, purification and enzymatic properties of recombinant human cytochrome P450c27 (CYP27). -Arch. Biochem. Biophys., 1997, vol. 343, p. 123-130.

116. Pikuleva, I.A., Cao, C., and Waterman, M.R. An additional electrostatic interaction between adrenodoxin and P450c27 (CYP27A1) results in tighter binding than between adrenodoxin and P450scc (CYP11A1). -J. Bio. Chem., 1999, vol. 274, p. 2045-2052.

117. Pikuleva, I. A., Tesh, K., Waterman, M.R., Kim, Y. The tertiary structure of full-length bovine adrenodoxin suggests functional dimers. -Arch. Biochem. Biophys., 2000, vol. 373, p. 44-55.

118. Pompon, D. cDNA cloning and functional expression in yeast Saccharomyces cerevisiae of p-naphtoflavone-induced rabbit liver P450 LM4 and LM6. -Eur. J. Biochem., 1988, vol. 177, p. 285-293.

119. Pompon, D., Louerat, В., Bronine, A. and Urban, P. Yeast expression of animal and plant P450s in optimized redox environments. -Methods Enzymol., 1996, vol. 272, p. 5164.

120. Pompon, D., Urban, P., De Berardinis, V., Truan, G. Yeast as a versatile tool for functional expression of P450s and associated redox environment. Proceedings of the FEBS Advanced Course on Cytochrome P450. Croatia, 1998, p. 92-105.

121. Porter, T.D. and Coon, M.J. Cytochrome P450. Multiplicity of isoforms, substrates, and catalytic and regulatory mechanisms. -J. Biol. Chem., 1991, vol. 266, p. 13649-13472.

122. Porter, T.D. and Coon, M.J. Expression of mammalian P450s in Escherichia coli. Methods Enzymol., 1991a, vol. 206, p. 108-116.

123. Poulos, T.L. Finzel, B.C., Gunsalus, I.C., Wagner, G.C., and Kraut, J. The 2.6A crystal structure of Pseudomonas putida cytochrome P450. -J. Biol. Chem., 1985, vol. 260, p. 16122-16130.

124. Poulos, T.L. Finzel, B.C., and Howard, A.J. Crystal structure of substrate-free Pseudomonas putida cytochrome P450. -Biochemistry, 1986, vol. 25, p. 5314-5324.

125. Poulos, T.L. Finzel, B.C., and Howard, A.J. High-resolution crystal structure of cytochrome P450cam. -J. Mol. Biol., 1987, vol. 195, p. 687-700.

126. Prough, R.A., Burke, M.D., and Mayer, R.I. Direct fluorometrie methods for measuring mixed-function oxidase activity. -Methods Enzymol., 1978, vol. 52C, p. 372-377.

127. Ravichandran, K.G., Boddupalli, S.S., Hasemann, C.A., Peterson, J.A., and Deisenhofer, J. Crystal structure of hemoprotein domain of P450BM-3, a prototype for microsomal P450"s. -Science, 1993, vol. 261, p. 731-736.

128. Ronne, H. Glucose repression in fungi. -Trends in Genetics, 1995, vol. 11, 1, p. 12-16.

129. Sagara, Y., Takata, Y., Miyata, Т., Нага, Т., Horiuchi, Т. Cloning and sequence analysis of adrenodoxin reductase cDNA from bovine adrenal cortex. -J. Biochem., 1987, vol. 102, p. 1333-1336.

130. Sagara, Y., Нага, Т., Ariyasu, Y., Ando, F., Tokunaga, N., Horiuchi, T. Direct expression in Escherichia coli and characterization of bovine adrenodoxins with modified amino-terminal regions. -FEBS Lett., 1992, vol. 300, p. 208-212.

131. Sagara, Y., Wada, A., Takata, Y., Waterman, M.R., Sekimizu, K., and Horiuchi, T. Direct expression of adrenodoxin reductase in Escherichia coli and the functional characterization. -Biol. Pharm. Bull., 1993, vol. 16, 7, p. 627-630.

132. Sakaguchi, M., Mihara, K., Sato, R. A short amino-terminal segment of microsomal cytochrome P-450 functions both as an insertion signal and as a stop-transfer sequence. -EMBO J., 1987, vol. 6, p. 2425-2431.

133. Sakaki, Т., Oeda, K., Miyoshi, M., Ohkawa, H. Characterization of rat cytochrome P450mc synthesized in Saccharomyces cerevisiae. -J. Biochem, 1985, vol. 98, p. 167-175.

134. Sakaki, Т., Shibata, M., Yabusaki, Y., Murakami, H., & Ohkawa, H. Expression of bovine cytochrome P450cl7 cDNA in Saccharomyces cerevisiae. -DNA, 1989, vol. 8, p. 409-418.

135. Sakaki, Т., Shibata, M., Yabusaki, Y., Murakami, H., & Ohkawa, H. Expression of bobine cytochrome P450c21 and its fused enzymes with yeast NADPH-cytochrome reductase in Saccharomyces cerevisiae. -DNA Cell Biol., 1990, vol. 9, p. 603-614.

136. Sakaki, Т., Akiyoshi-Shibata, M., Yabusaki, Y., Ohkawa, H. Organella-targeted expression of rat liver cytochrome P450c27 in yeast. -J. Biol. Chem., 1992, vol. 267, 23, p. 16497-16502.

137. Sakaki, Т., Kominami, S., Takemori, S., Ohkawa, H., Akiyoshi-Shibata, M., Yabusaki, Y. Kinetic studies on a genetically engineered fused enzyme between rat cytochrome P4501A1 and yeast NADPH-P450 reductase. -Biochemistry, 1994, vol. 33, p. 4933-4939.

138. Sakaki, Т., Kominami, S., Hayashi, K., Akiyoshi-Shibata, M., Yabusaki, Y. Molecular engineering study on electron transfer from NADPH-P450 reductase to rat mitochondrial P450c27 in yeast microsomes. -J. Biol. Chem., 1996, vol. 271, p. 26209-26213.

139. Sakaki, Т., Sawada, N., Takeyama, K., Kato, S., Inouye K. Enzymatic properties of mouse 25-hydroxyvitamin D3 1 alpha-hydroxylase expressed in Escherichia coli. -Eur. J. Biochem., 1999, vol. 259, p. 731-738.

140. Sambrook, J., Frtsch, E.F., Maniatis, T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. N.Y.:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.

141. Sanger, F., Nicklen, S. and Coulson, A.R. DNA sequensing with chain-terminating inhibitors. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1977, vol. 74, p. 5463-5467.

142. Scheller, U., Juretzek, Т., and Schunck, W.-H. Generation of the cytosolic Domain of microsomal P450 52A3 after high-level expression in Saccharomyces cerevisiae. -Methods Enzymol., 1996, vol. 272, p. 65-75.

143. Seaton, B.L. and Vickery, L.E. Expression of human ferredoxin in Saccharomyces cerevisiae: mitochondrial import of the protein and assembly of the 2Fe-2S. center. -Arch. Biochem. Biophys., 1992, vol.294, 2, p. 603-608.

144. Sengstag, C., Eugster, H.P. and Wurgler, F.E. High promutagen avtivating capacity of yeast microsomes containing human cytochrome P450 1A1 and human NADPH-cytochrome P450 reductase. -Carcinog., 1994, vol. 15, p. 837-843.

145. Sevrioukova, I.F., Li, H., Zhang, H., Peterson, J.A., Poulos, T.L. Structure of a cytochrome P450-redox partner electron-transfer complex. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1999, vol. 96, p. 1863-1868.

146. Sherman, F. Getting started with yeast. In: Methods in Enzymology, vol. 194. Guide to yeast genetics and molecular biology. Guthrie, C. and Fink, G.R. (Eds), San Diego, California: Academic Press, Inc., 1991, pp. 3-20.

147. Shibata, M., Sakaki, Т., Yabusaki, Y., Murakami, H., and Ohkawa, H. Genetically engineered P450 monooxygenases: construction of bovine P-450cl7/yeast reductase fused enzyme. -DNA Cell. Biol., 1990, vol. 9, p. 27-36.

148. Stader J. Gene expression in recombinant Escherichia coli. In: Gene expression in recombinant microorganisms. Smith, A. (Ed.), N.Y.: Marcel Deldacer, Inc., 1995, p. 1-51.

149. Stormo, G.D., Schnider, T.D. and Gold, L.M. Characterization of translational initiation sites inE.coli. -Nucl. Acids Res., 1982, vol. 10, p. 2971-2996.

150. Suhara, K., Takemori, S., Katagiri, M. Improved purification of bovine adrenal iron-sulfur protein. -Biochim. Biophys. Acta, 1972, vol. 263, p. 272-278.

151. Suhara, K., Nakayama, K., Takikawa, O., Katagiri, M. Two forms of adrenodoxin reductase from mitochondria of bovine adrenal cortex. -Eur. J. Biochem., 1982, vol. 125, p. 659-64.

152. Sutter, T.R. & Loper, J.C. Disruption of the Saccharomyces serevisiae gene for NADPH-cytochrome P450 reductase causes increased sensitivity to ketoconazole. -Biochem. Biophys. Res. Commun., 1989, vol. 160, p. 1257-1266.

153. Suzuki, K., Kimura, T. Enzymatic reduction of non-heme iron protein (adrenodoxin) by reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate. -Biochem. Biophys. Res. Commun., 1965, vol. 20, p. 373-379.

154. Tanaka, M., Haniu, M., and Yasunobu, K.T. The primary structure of bovine adrenodoxin. -Biochem. Biophys. Res. Commun., 1970, vol. 39, p. 1182-1188.

155. Tuls, J., Geren, L.M., Lambeth, J.D., Millet, F. The use of a specific fluorescence probe to study the interaction of adrenodoxin with adrenodoxin reductase and cytochrome P450scc. -J. Biol. Chem., 1987, vol.262, p. 10020-10025.

156. Turko, I.Y., Adamovich, T.B., Kirillova, N.M., Usanov, S.A. and Chashchin, Y.L. Cross-linking studies of the cholesterol hydroxylation system from bovine adrenocortical mitochondria. -Biochim. Biophys. Acta, 1989, vol. 996, p. 37-42.

157. Uhlmann, H., Beckert, V., Schwarz, D. and Bernhardt, R. Expression of bovine adrenodoxin in E.coli and site-directed mutagenesis of /2Fe-2S/ cluster ligands. -Biochem. Biophys. Res. Comm., 1992, vol. 188, 3, p. 1131-1138.

158. Uhlmann, H., Kraft, R., and Bernhardt, R. C-terminal region of adrenodoxin affects its structural integrity and determines differences in its electron transfer function to cytochrome P-450. -J. Biol. Chem., 1994, vol. 269, p. 22557-22564.

159. Urban, P., Cullin, C., Pompon, D. Maximaizing the expression of mammalian cytochromes P450 monooxygenase activities in yeast cells. -Biochimie, 1990, vol. 72, p. 463-472.

160. Varadarajan, R., Szabo, A. & Boxer, S.G. Cloning, expression in Escherichia coli, and reconstitution of human myoglobin. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985, vol. 82, p. 56815684.

161. Vickery, L.E. Molecular recognition and electron transfer in mitochondrial steroid hydroxylase systems. -Steroids, 1997, vol. 62, p. 124-127.

162. Vonrhein, С., Schmidt, U., Ziegler, G.A., Schweiger, S., Hanukoglu, I., Schulz, G.E. Chaperone-assisted expression of authentic bovine adrenodoxin reductase in Escherichia coli. -FEBS Lett., 1999, vol. 443, p. 167-169.

163. Wada, A. and Waterman, M.R. Identification by site-directed mutagenesis of two lysine residues in cholesterol side chain cleavage cytochrome P450 that are essential for adrenodoxin binding. -J. Biol. Chem., 1992, vol.267, p. 22877-22882.

164. Warburton, R.J. and Seybert, D.W. Limited proteolysis of bovine adrenodoxin reductase: evidence for a domain structure. -Biochem. Biophys. Res. Commun., 1988, vol. 152, p. 177-183.

165. Waterman, M.R., Jenkins, C.M., Pikuleva, I. Genetically engineered bacterial cells and applications. -Toxicology Lett., 1995, vol. 82/83, p. 807-813.

166. Williams, P.A., Cosme, J., Sridhar, V., Johnson, E.F., McRee, D.E. Mammalian microsomal cytochrome P450 monooxygenase: structural adaptations for membrane binding and functional diversity. -Mol. Cell., 2000, vol. 5, p. 121-31.

167. Wittekindt, N.E., Wurgler, F.E., and Sengstag, C. Functional expression of fused enzymes between human cytochrome P4501A1 and human NADPH-cytochrome P450 oxidoreductase in Saccharomyces cerevisiae. -DNA Cell Biol., 1995, vol. 14, 4, p.273-283.

168. Yasumori, Т., Murayama, N., Yamazoe, Y., Abe, A., Nogi, Y., Fukasawa, Т., Kato, R. Expression of a human P-450IIC gene in yeast cells using galactose-inducible expression system. -Mol. Pharmacol., 1989, vol. 35, p. 443-449.

169. Zhang, Y., Pernecky, S.J. Cumene hydroperoxide-supported demethylation reactions catalyzed by cytochrome P450 2B4 lacking the NH2-terminal sequence. -Biochem. Biophys. Res. Commun., 1999, vol. 258, p. 32-38.

170. Zuber, M.X., Simpson, E.R., and Waterman, M.R. Expression of bovine 17a-hydroxylase cytochrome P-450 cDNA in nonsteroidogenic (COS1) cells. -Science, 1986, vol. 234, p. 1258-1261.