Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярная генетика гомозиготной бета-талассемии в Таджикистане

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Молекулярная генетика гомозиготной бета-талассемии в Таджикистане"

/стерство Образования Республики Таджикистан Таджикский Государственный Университет

На правах рукописи УДК 616.155.194.125-055

НАСЫРОВА ФИРУЗА ЮСУФОВНА

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ГЕНЕТИКА ГОМОЗИГОТНОЙ ^-ТАЛАССЕМИИ В ТАДЖИКИСТАНЕ

специальность 03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Душанбе — 1997

г-аоота выполнена в Институте физиологии растений и генетики А Республики Таджикистан.

Официальные оппоненты:

Академик Российской Академии сельскохозяйственных наук, Ак< демик Академии наук Республики Таджикистан, член Ныо-Йоркска Академии наук, заслуженный деятель наукж Республики Таджикисти профессор АЛИЕВ Г. А..

доктор химических наук, заведующий лабораторией химия приро; ных соединений им. К. Т. Порошина Института химии им. Никлтив АН Республики Таджикистан БУРИЧЕНКО В. К.

доктор медицинских наук, профессор ВЯЛУШКИН В. Я.

Ведущее научно-исследовательское учреждение: Институт Ак;

шерства, Гинекологии и Педиатрии Министерства Здравоохранени Республики Таджикистан.

Защита состоится « 6 » 1997 г. в ч. на зас<

дании Диссертационного совета Д 065.01.06 по присуждению учено степени доктора биологических наук в Таджикском госуниверситек ло адресу: 734025 г. Душанбе, пр. Рудаки, 17.

С диссертадией можно ознакомиться в библиотеке Таджикског госуниверситета.

Автореферат разослан « ^ 1997 г.

к. о. Ученого секретаря Диссертационного совета доктор биологических наук,

профессор ту' / БОБОДЖАНОВ В. А

ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Попжиооой информации о роли наследственности в патологии человека очень обилен. По данным мировой литературы около 200<> форм генетически обусловленной патологии являются причиной примерно 5% ^аболенаемости только а раннем детском возрасте, а суммарное количеств госпитализаций п педиатрические клиники по поводу такой патологии достигает 30% и 6or.ee. Кроме того, роль наследственных фактороэ оказывается очень большой п происхождении целого ряда распространенных заболевании. Все эго побуждает к развертыванию широкого фронта меднко - генетических исследований, имеющих в настоящее время не только теоретическое, но н практическое значение.

Современной медицинской генетике присущ различный характер исследований - ог молекулярной организации. генетического материала до популяционно -географического изучения наследственной патологии.

Стремительное развитие молекулярной биологии и молекулярной генетики за последние голы привело к достижению больших успехоп н изучении генетических болезней человека. Наиболее яркие результаты были получены при анализе причті (І-талассемки - гетерогенной группы наследственных анемии, обусловленных нарушением экспрессии р 'Г.:о5н1!Ор.ого гена. В настоящее гремя п мировом популяшш выявлено боя;-,; Ь!0 точечные мутации и крупных делении, затрагивающих Р -глобннопин ген, грнчгм для каждой пораженкой популяция характерен сііоіі спектр р - тазгссемігчгсжк мутздгЯ. Отсюда стлїіошпм очєр.пііой важность всесторонней харг.гстсристки ч\т ■..-«£» г. популяция*; для целді

рз^тботкн методо» диагностики и профилактики болезкеіі , наиболее подходящих для данного региона.

Геногсогрзфичсскимн несгедоланиямії (ї-таліссемнн п оыпшек Советском Союзе обнаружили. чго ато забодспзиис сстрсчтегси но многн < реї іюнал юга территории СССР, захватывая республики Закавказіл I! Средней Ліні:, которые в недалеком прошлом относились к сйт-ісіям широкого распространения иапярни. Наиболее изученной с молекулярно- генетических позиций является азербаііджа?;ск:!іі (1-гадассемия. Гели частота носнгельства дефектных геноа при этом заболевании к среднем и мире составляет около 3 "о, то п Ліеро^Іід;к«нс она допчіает 20%. К нзегоящем) И|ЧМСШ1 В ЭТОЙ рсепуб.ІіШС- “і! ^Ти‘>>И»:!рООаНО четыре МЛ гаиии, ОДНЙ 1П

которые ( I VS 1- 110) гр'.іводит к р*-тадассемии, а три другие - к (і“ - таласссмии: нонсенс - мутация в кодокс 39, делецнк G на границе кодонов 82/ 83 и деления двух, нукдео гидов ( -ЛЛ) в кодоне 8.

Медицинская генетика как наука в Таджикистане зародилась и продолжает развиваться благодаря вкладу академиком Г».Я. Астаурова, П.П. Бочкова и В.И. Иванова, профессоров А.И. Щурен кокой и А.М.ГІулатова.

В Таджикистане р-талассемия впервые была ошісана еще в 1%5 году. Дальнейшее изучение гетерознготней формы |) -талассемии, благодаря работам профессоров F..K. Гиктерз, Е.Ф. Гарькавцевой, С.Х. Хакимово» и других исследователей обнаружена значительная пестрота клиники и іематологических особенностей заболевании Можно предполагать, ’ что в данном регионе ji-тнлассемня определяется ракитными мутациями Р-глобинового гена.

Таким образом , выявление и оценка мутации р- глобинового гена о конкретных популяциях необходимы для характеристики заболевания в данном регионе, а также для разработки методов прспатальнои ДНК - диагностики, лечения и профилактики в современно!! медицинской практике. В связи с этим ними был предложен комплексный подход в изучении ( на уровне белка и ДНК) такого рода болезней. Эти подходы были реализованы в ходе молекулярно - генетического исследования талассемии, выявленной в Таджикистане. Актуальность qjroro исследования для данной популяции обусловлена прежде всего достаточно высокой частотой распространения данного заболевания в отдельных районах республики. Мо'ккулирио - генетическая характеристика талассемии в данном регионе ранее не проводилась, и не было определенных данных о причинах, лежашик в осмосе этих случае» заболевания. .

Цель м задачи исследооашы, Целью настоящей работы является молекулярно - генетическая характеристика гомозиготной Jl -талассемии в Таджикистане. В связи с этим решались следующие задачи:

1. Разработка и практическая реализация комплексного подхода в молекулярно - генетических исследованиях дефектов экспрессии генов человека.

2. Определение особенностей биосинтеза глобиповых белков « клетках

крови исследуемых больных. ■

з

3, Изучение биосинтеза глобнповых белков в клетках костного мозга

больных. .

4. Сопоставление данных о дисбалансе синтеза глсбиноиых белков в эрнтрондных клетках крови к костного мозга.

’* 5. Изучение на молекулярном уровне структуры р-глобннопых генов у

больных.

6. Определите рестрикционных гаплогипов Р- глобннового кластера

у больных.

7. Оценка происхождения и распространения обнаруженной в данном регионе мутации.

Научная исзсгспа и пряктп'їескїя ценипсть р:і£оіьі. Впервые пропедсно молекулярно - геиегнческск исследование талзсссиші и Таджикистане, а также изучение синтеза гдобнновык белков в рстнкулоцитах крови н а метках костною хкыа у больных гомозиготной Р* талассемисГг из Таджикистана. Во всех исследованных'случаях выявлена р * -гглзссемкя , гдссінтез [і- ї лобииового белка сохранен, хотя и сильно подавлен.

, ‘Показано, что а отличие от гомозиготно!} [1- талшссмин других

популяций, в данном регионе наиболее представленной является р>*- талассемня с резким угнетением синтеза р - глобинового Редка (в/р> 10).

. Сопоставление дтнпых по синтезу глобинов в клсткпх КОСПІОГО ІіЮТа II

п ретикуяоцчтах кропи больных показало, что а некоторых случаях дисбаланс синтеза в обоих типах клетоі. одинаков. В других случаях дисбаланс в клетках _ костного мозга меньше, чем в клетках крови, что указывает на иссгабнльп ль [! глобиновой мРШС, частично деградирующей в процессе созревания клсюк. Выявлены случаи гомозиготном [1 «талзекмии с нестабильными у -гл 'бшшвьши белками.

С помощью прямого секьеннреваиия ямплифкикроваш^'го участка П-глебнноиого гена больного гомозиготной р-таїїаесемиеіі из Таджикистана и обоих аллелях і сіп был» выяплена точмякм мутіиім О - С. н последнем нуклеотиде пер пою

экзош, а также точкоиая тамепа С - О и промоторнои области is позш(;;и (- 42 ), ft результате кот срой потикает полый иотенциалыши сайт мепшнропиния { Ср G ).

Полученные результаты имеют значепи*; д.чч ношшапнл патогене ка ^ -талассс.инн, Т'ьыпл-чшэй и Таджикистане. Кроме тога, они piicm.ipiimr предстаилсиия

о iercpoi4:iniocrn данною заболсиаиия и но.Ил'лягог выянцгь и сиенмп. др>1 но мутации Р'Г«обшю1»ь;.\ генои при !> -таласссчим, л vauxe аиклздииамг методические ислосы для нрошадыш'н диагпоошкн, лечения и профилактики Р -тилиссемии. ' -- .

Aiipisuamiu рлСопт. Мшериаль; днесер ищии 5ьшн до.кгАецн на юбилейной республиканской научно-теоретической конференции молодых ученых it aici(itani:crivi Таджикистана, поег./^ешюй бИ-легиы комсомола (i'Jiij, на юбИНвГшои республиканской III У*ШО-ТСС(М CU'teCW’il КО|И|:СРО«|1У1И МОЛОДЫХ y'WHUA.

и енециалистоиТаджикнстана. uo л!:л';еипоЛ 60-лспшТаджикистана (I9S5>, на конференции республиканского Отделен!;;, общестча генеппгон и селскцнонерчо им. li.Il. Инчплоиа (1989), ну ?-ii конференции бнохимпкои Средней Азии и Казахстана (Ташкент, 1991), на 2-si научной конференции биохимического общества Республики Таджикистан " Проблемы бколимип'- (Душанбе, 19У(<), па конфетницах и научных Семинарах Института молекулярной генетики РАН (Москва, 1987, 1993) и Института физиологии растеши! и генетики.ЛИ Республики р Таджикистан (Душанбе, 1987, 1!Ж>). \

S Ьб.кш.чнпш. По материалам диссертации опублнкошшо 2!) работ.

Структура к обьсм рабош. Диссертация состоит из ш>еде<‘ия, обзора литератур).!, описания материала it методой исследования, цчлоления и оосуадешы полученная результате!:, эаоаоченил, иигодон и списка . цитированной лшературы (204 ссылок ). Работа изложена па 25 5 <лр.

’.'uuinuoiniciioro текста ц включает 32 рнсутка и Нтаблиц.

ЭКСШСГШШПЧЛЫШ! ЧАСТЬ

Экспериментальна*’ часть состоит из описании материалом и методой, коюрыс были использованы в данной работе, а также полученных результатов.

МЛТКі’ИЛЛИ МСТОДМ ІІСО'ІГ.Д()ІІЛ

Крзп?і»я •■і.'і гг.;і’Кііс,чя інк;і »<іс.,і;м/.іл".іічи\ к. Пнішсігім -

бо.дьиис гомозигот іюіі р - тппассмшсй из Ті'.л.м'кі'сг іки п козрлсчс от 3 ;ю І < леї таджикской и узбеке,:оіі национальностей, поаугшміїші; п сіациоіиф Детскою Сом;ппчеа;ого Отделения Республиканской Клшигіескоіі больницы >і 3 г. ДуішіпОс.

Опрс/н-л^чіс ЕІЇїР. Проводили в гемошізятах методом щелочном ;>-.ч(Л гурашн* ію РгіЬї (Ікі!.-..

л . ЭПС.Проф<';1.:1 ІИ’ССКОІ І>

Опрсдслс*:і;-: оьущгстялади методом ' '

р.т«леятиі на .інгтат-нсашлстюй пленке отскегпсннсго >ірошк>дст«ч {М;ігс!іі;о-Ио\те, ІУҐ>5). ■ - ,

СіШІСІ ГЛпбнітмх 'слі.ЧІ-І Г> рстїягу.'иііуігах крови вольных проголили тк>

методу Кап, 196!!, используя растнгр ' ИЧпсйциїм 57000 мКк/мМ, ЛтегсІк.ш при

4 „

лосіопішом гтерол-цшмшт н течении і •кісо:;.

Пмлелетее гло&шпямч іч.чі'г е-'ущесдатчли по ««йоду СІегр, ТТог.ю і;іь;>6;'іцііп кчстки і. роям охлііжл.члл її т[і; »);>;.>; тр::лт,и хсладічлч (’пгпюйопчсским 'расті-орим. з.леч лмэпролчщ». Для отдг сц;;ч іс-.ч. н очмспя» іл<чГі;П!иік>іч> бачка к оспстлсшк'чу лнзаіу дпліівляя: сСЧе'.іо.і 1:'А рлстзсра гиг ноіі кі:с"оп.і ;"!’и~чс.

3:іп’ч (*глок промыкаяи нескс1 >.«т> р;л N0-'н о '.ті р -; ; «ргм.

Ппсдсшгс ?*(Яї.-а г.:гк>і,::"л**і Т<одгпг'Ю апгга. Сіипіл

гяобгшопих боякоя п г_нгт:;а? копної.» і.ома .< «лаз’-:.* дрог-! даклоіо

иаішонт». нсг.ользум газр-согаши.:!: у;:р'>іц:;!;;і,.л і'.'.ріи;,/ ( Доторскоо

с;і;ідсіслі.стг.о Л? 1505190 ).

Гслі,-4 .тлі.тр:!:;:;:! ня сі-,»і.і С,-ЇЛ п; >:.;с:.лл:і млолу \rVoos}, 1975 с

исііольчовйіііїсч колонки ( 2 х 100 см ), ур,;г!ї;осг;!іЄііі!о.'і 0,05 2А трис-'ІСі., pH 7,4. Фракции, содержащие гемоглобин, были ои:-едиі’сі!!л послі чего глобіні С-г і о< .г.клєг, промыт и высуши;.

Хроматографический акаліп . сюггезкроканиых глобиповых белков проводили при комнатной температуре по методу Clegg, 1966 в модификации ДимборскоП(І979), используя СМ-целлюлозу-ЗЗ (Whatman). Элюцию глобиноных цепеіі «роводнлн линейным градиентом концентрации двузамещенного фосфата натрия (от

0,005 до О.ОЗМ при pH 6,7), приготовленным на 8М мочевине и 0.5М дитиоэритрите. Собирали фракции по 1мл и определяли в каждой оптическую плотность при 280им на сиектро<]ютометре СФ-16. Из каждой фракции отбирали аликвоты по 0,5 мл и вносили п кюветы с 5мл сцинтиллятора “григазол", приготовленного на основе п- ксилола (Осгсрман, 1983). Радиоактивность измеряли вециппшяяционном счсгчике Mark -2.

Выделение Д1ІІС и) крови нроиоднлн как описано у С. Mathew, 1984.

Электрофоре» рссгріютироааішоГі пюмішіі ДШС проводили в горизонтальном 0,8% агарозном теле толщиной Змм с использованием трие-боратного буфера. Денатурацию и нейтрализацию проводили но методике Studenski, 1984.

ГііГірндизаїцію в геде проводили по методу Studenski, 1984.

Полимеразная ценная реакция. Использовали термостабильную ДНК-полнмеразу in Thermus 'ihcrmophuas, любезно предоставленную Е.И.Шнарцсм из Института ядерноіі физики АН РФ, (Гатчина), Ленинградская область. Амплификацию проводили по вазелиновым маслом в 50 мкл раствора. Далее проводили огясиг - 2мин при 55”С, реакцию - Змин при 68”С, денатурацию - 1мин при 92°С. В качестве затравок использовали олигонуклеотиды: 51 - ACTTAGACCTCACCCTGTGG - З1 и второй праймер на позицию 387 - 36S до середины второго экзоиа {! - июбнноиого гена: 51 -СіДСіСАС'ГТГСТГОССАТСАО - З1, соответствующие поло-кениям 232-250 н 368-387 Р-глобиноаого гена. Результаты амплификации аиализироиалп в 8% НАЛ Г.

Дит-гнбрндшацпх. После удаления верхнею слоя вазелинового масла 1,5 мкл амшшфицироиашюго материала наносили на нейлоновый фильтр “Zetaprobe” фирмы ”Шо-КасГ’(С1ПА). Денатурацию и нейтрализацию, предгнбридизацига и гибридизацию с зондом проводили по Маниатнсу. Количество олигоиуклеотидного зонда орали из расчета 10' ими/ мин х мл. Отмывка фильтров проводилась но Манна гису, 1984.

Определите рсстрнкшонных піплсптоя (ї-глоСиноііого кластери с помощью лчплифякйнш. Праймеры для амплификации полиморфных саіітоп піобшіепого кластера Сили разрабЬтапы’п любезно предоставлены д. Л. В. Лукькнпнко, д. Г. Я. Соловьспым in Гематологического научного центра Российской академії)! медицинских паук. Для построения гаплотипов использовали полиморфные сайты f find 11 f п yA - н уа- генах, сайгн I line М d (і - гене и 5' - области ф(1- гена и сайт Avail п fl - пюбинопом fane.. Фрагменты, содержащие полиморфные сайты рестрикции, амплифнцировали с использованием праймероп, описанных нише. 30 циклоп ПЦР проводили 8 стандартных условиях. После завершения ІЩР к 20 мкл амплифициропаннсго материала добавляли 10 сд. рсстрнктазы Hind 111 или Иіпс 11 и проводили гидролиз 2 часа при 37° С. К !0 мій гндролітт а добавляли 2 мкл 6 х краски ' и аналнзирооалн с- помощью электрофореза ( 30 - 40 гит при 25 В/ см ) размер рестрикционных фрагментов п 8% ПААГ. .

, . РЕЗУЛЬТАТЫ

СИНТЕЗ ГЛОС1ШОШХ КЕЛЇСОІЇ Й РІГППСУЛОЦИТАХ КРОПИ ПОЛМІМХ ГОМОЗИГОТНОЙ (І -ТЛЛЛССЄМИЕЙ SO ТЛДаСіГКИСГЛІЇЛ

Пи рис.- !(Л) представлено ярочатографіїпсское разделение

J ". ' ' -

лолипептидных цепей гяобннопого Сіслка, синтезированного іі рстикулоцптах кропи із норме. Каг пидно из рпсуика, включение радиоаетг.сиостк в « »' н р -глобішонне фракции примерно одинокого, т. е. си:і;~і гяг.Гг-ч;о:;:,;ч пенсії соалансиропан. U таблица 1 прчп?д;;;д -,и.шое соотношение синтеза «-;:(> ■ глсбинс», рашюг 1,1. -

Совершенно иная картина іпбшодается у болы«иг гомозиготной р -,таласгемней. На рис. 1(Б) п качестве примера д:жм результат хроматографического разделения гло^икозых белко» у больного JC. Видно, что включение радиоактивности во фракцию р - пюбннового белка существенно меньше, чем r< a - пик. Соотношение нососиитерированных глобиноных. цепей разно 6.5 ( см, табл. ! ), что говорит о.резком утогении синтеза (3 - глобинов. Увеличение синтеза фетальных у -цепей в качестве компенсации уменьшает дисбаланс цепей , но не устраняет его полностью, т.к. по всех случпк отг.оцієічіі' a t р +■ у значительно больше единицы , В данном примере соотношение « / [S + у - 2. Кривые сптиігскок плотности, приведенные на рисунке,

дают иредсганг.епиз о соопгошсшш пгошшовы:; белков, которое и конечном счете устанавливается в зрелых эритроцитах,

15 таблице I суимчр08а:1и результаты «сслсдоп-шич г;:пб-!иоиг»х бгпкэт* в роп1ку:;оц]и;:л кроан б2ли|:,>л с гопознготиок [5 - та’и.сссмийй. Чаегь детек («яг тадхикскоГ: пышемалььосчк, другая - у>(5скс»;ой. Л»а;ьп 1‘,иампхти,-сс1с|1.\ />и:и!1лч ПОК21ЯЯ. чю»сс пмдаенгы С)глм от рАчстсем.шх брахеи. Во «ссхсСи:ед;'>;1;,.!н!Ыл. случаях ока’ыяась Ц * -тслпссочкя, при когироа тичз !5- кепк си.хргнги, хог,; а рако сшпьси. Срздн продета ил г.’щмх случаев данного -мОо.'.сьзмт шаОлк'длетс;} гекргоешммлъ в соотношении евнюг с - к [’> - игн’.’п. Т.!к'к;'.к Степан. уп!лс;!»з счь;гла р -глоиннои рлтянпна , то ко этому параметру можно условно р.одслни, иссх бсямаи на две группы: I группа )чу;;о-чала Солышз с .умеренны»* )(мгтснмсм спнггза р - пюошюг.ого белка (к I р < 10); вто??..: ;ру;ш& - & резким епшлмкзд; ашгем !> - глобиног.ого бел ка («/(!> Ю). _ .

Ге1).:ы»:и 1'”!;пм дс\ч;1 о к С« ах«^,£ пчгл.‘ю*»гс.и к[>о:,н (ьм<,л<як

!и»и!:'иг )кп- !*пп»!с«!ч;и> “IV11. т Г""НМ Гсгн;:-.^ л л'мп,) 1 Л; им» М,!П- ! л . м-Щ. 1!Ь!- *пгц НК И^Г

1 }и;-‘ „ . »;т* 5 И 0, 5 , : 1 Г. •/>

К. 7 \лГ. к; •> л ■** а, . 1 3 4 I ?

!: л V 0 *;■' о Л<' •о» 7 - ^ о 1 .гч

V ч \-*Л г* -О Г ь ч <1 кО 1 : ^ <'■>

1-х \ V-.- м <• л Л П у С ., * ,, 7. » » :

*‘г^.'гс < - 1 > -» » ЙЛ

м И 5 ■>. г •», ?,4 4 7 *; }<•» У1 * л

- ,,, А 1 \ ' 3 6 1 и г> :> *■> г,' ' ? ^ 1

'\. 1.1 1а,» л? 1,7 5, 5 э. 6 * :•> 1.4 11, 0 о

г ■ ! '. .й ‘.'V 1. ? ** ч л И >.4 , 1<| 17,4 Л Ь

ш и 1 1 > ь л г 2 -о.о ■> Г»

г П 0 7 -1 .? Ч 7 Л т х и ? >»

’*Л 1 Г, '

!

t

/V

/*Д

J М ч

V! \\

/V /'; і

г-(/ ҐҐ\}і };

‘ 'Ы

Л

I £'• V

/'Л*

«.V

4--»

S А-

•,^ і*- ч ч

' ,Л/ч.

h

I \

V\ s

: V\ { ,

о >‘Лі і’’

, v • чі> і П

J

; \

J і\\/і U

ч- '.v

‘ .я', ч’.--iCV. І*ІЧІ д ьіСл^ЛПлі.) *.'v;T ІР*1 *i « "1''^*

tС}znvcr^i:i: n.::: f- r v-'' kl :::: u'

■ -, ..-нуд 6<с~і7-’н.;Л,г~;з;c;-.y- »*j с:.,.:,л:.к;,.ш,їу. ; .".Vr !r;’ •; r.-.-'if;.;

j і / \

?.■■■ v •i/\\

M

"4',

/ ■;, / .* у ■,

. j і

і Г

/Л

Г і

гП ■

и-

і

Д

У’ \ ї ^

/ ;•

.'Л

л

)С п К

/ і і; : !

■ V 1 ■

> м і * V, . / и W

•:'■} ^ \ fx rJ v\

О W Ч.кг^/ \1с;>

VIb?p*iUi‘"a —SiCrf-Л“ ••:.'c.:,Ui. pao.Вsa-r.or;;oc-.i:iс-ии>э о лан,б-гепсглс-По ос" ордали? слс^-^лдсік;злго;.:>о ;-с~ j 2G0!i;.i ««.По о:;,;; а<5сц.ісс «нсй-Г-ч і^-зггцгії.

VS

В первую группу било включено 4 детей' с умеренным угнетением синтеза р -цепей.Как видно из представлешюП таблицы, содержание гемоглобина F ( Hb F ) у всех больных широко варьирует и колеблется в пределах от 5%доТ.0%. Фракция НЬА, - в пределах нормы к составляет в среднем 2%. Обследование родителей п этой ipynne бальных обнаружило повышенный уровень lfbAt, который составлял в среднем 4, 68% и нормальное содержание IlbF ( 2% ). Эти данные говорят о том, что родители больных были гетерозигогами по р-таласссмни. Соотношение ноиосшоелфованных а- н (1 -глобинопых ценен, определенных по мсиоченйю 11? - лейцшш, колебалось от 3,4 до 7,8.

0 качестве компенсации наблюдается стимуляция фетальных у - цепей, что уменьшает дисбаланс цепей, ко не устраняя его полностью, т.к. по вссх случаях соотношение оф+у больше единицы. Ib даннон группы пыдсг.яется случай с бомьноП 30. Содержание lJbF и крона этой пациентки рш .:о 5, 0%. Данный показатель не является типичным для гомозиготной |5 - тияассемш» и можно было бы предполагай, сочетание у больной гетерозиготной р -Timacce.Mim со '.структурно.'- .аномальным гемоглобином.. Но электрофоретический аналиа гемолшата кропи больной не обнаружил какого - либо аномального гемоглобина. Исследование синтеза цепей вммшло резкое угнетение

СШПС-JLl р -ГЛОбГ,НОВОГО белка, ЧТО ЦОДТВерЗДаЛО Предположение O' ГО.МОЭДГОГНОЙ

форме |1 - талассеини, т.к. « /■ {) = 7,8. По iiTOpyis группу ноли,и дети с сильным угнетением 'синтеза' • р -глобинов. Содержание libF, » данной группе больных колебалось в пределах от 10 до 76%. Уровень. НЬА, достигал 5,6% у больной Я. н 7.0% • у больной X. У остальных больных этой группы его содержание колебалось в пределах 1C сожалению не у всех; этих больных удалось обследовать родителей. Но у обследованных обнаружилось полышеиие фракции ДЬА2, а содержание НЬР'быао и пределах нормы. Соотношение е/р' цепей в этой группе больных варьирует от 10 до 22.

Следует отметит ьда данной группы больную I’. с небольшим увеличением содержания ИЬР ( 10 % ), что редко наблюдается при гомозиготой р -таяассеиши. Электрофоретический анализ гемолюати кропи данного больного t;ijo»v, как и «случае

1 о-.>.н.1ы«1 К), t ^ нгриой vj'yiyiu.i. не iiciiuupa.i.'i соч^<ашш }'»•галиссе.ннн е «ноЛйлиним

гем(>1лобиьом. К'л.шичесмк: данные и носчедоашше сишсза (лобиноьпх бепко» (а / (1

- 1 /,4 ) дали основание для иосгановкн д н и ном гомоэлгогиом |! -галассешт. iiui.ooji/e сильный диебепше цепей отмечается у больных Ш. ( к/ Р - 20 ) и К. ( а / |!~ 22). Стимуляции у -ueneii также полностью не компенсирует угнетение р - цепей, г. к. ал/шо'пеаке к/ р ;-у бояшюедшжцы. - , . . .

.ИЗУЧЕНИЕ СИНТЕЗА. ГЛОБ1ШОШХ ЦЕПЕЙ В КЛЕТКАХ КОСТНОГО

МОЗГА БОЛЬНЫХ

' На основе отработанного метода изучения синтеза глобинов п клетках костного мозга кроликов как модельной системы, был проведен анализ синтеза Ъюбинопых белков п клетках костного мозга больных гомозиготной р -таласссмией. Почти по всех случаях гемоглобин подвергался очистке путем гель - фильтрации на сефгдексе О - 75. При анализе гсль-фнльтрацни гемоглобина больных гомозиготной Р-таллссемней наблюдался по многнх случаях пик неглобнновых белков, идущих игре;, пиком гемоглобина. С целью изоапления от этих фракций и осуществлялась гель -фильтрация на сефэдексе в - 75. Особо нужно отметить случай с больной X., где псглобшювые белки представлены значительной по размеру фракцией. На ркс. 1(В) представлена картина гель - фильтрации данной больной. Как видно из рисунка, отмечается довольно значительное включение радиоактивной метки яо фракцию, идущую перед гемоглобином. В некоторых случаях пик свободных а-цепей невелик (больные Ш, Ю, Р, 1С.). В случаях же с Сольем».:» X. ц МН., особенно у последнего, пик свободных «-цепей дояодмто существемгли. В дальнейшем снмтсзироианны? глобиноиие белки после очистки из ссфадейсе С - 75 либо без нее были подвергнуты .хроматографии па СМ - целлюлозе -52 (\VUaim3n).

На рис. !(Г) представлено хроматографическое разделение цепей глобшювого белк.', синтезиросаишго'метками кос глот ?'сзга и норме. Соотношение а - и [5 -глоП.-"с^ а ^егнкулоцитах кропи данного пациента равно!,2, а о клетках костною мозга - 1,0. Это говорит о том, что синтез глобиновых белков в норме сбалансировал как в костном мозге, так и в кроли. В таблице 2 дано соотношение

* <-инте:а глобинов о рстлкулоцигах и костио - мозговом пунктате иа < допанны* больных. Е некоторых случаях препараты гемоглобина из кос того мозга были подвергнуты очистке на ссф.зцексе О - 75. Как г.идно из таблиц! I еинтл глобшюя у больных ГОКОЗИ!отпой (1 - галасссмией сильно изменен. V двух больных Н. и Ю. соошошение глобинопых белков в метках костною мозп1 и а регику-годитах примерно одинаково, т.е. в данных случаях чаб.и'А’^’.ет^ч одинаковая степень дисбаланса как п ретикулоцитах, так и п кличках коен'ою уоз1а. Па рис. '(Д) представлена картина хроматографии глобинов из гоешо- мо.гочых пункта юч больной гомозигот ной |1 -

талассемией Ю. Анализ гемоглобина костного мозга больной Ю. при помощи гель -фильтрации на сефадексе G - 75 выявил значительный по размеру пик свободных а -ценен. Если при сравнении данные по соотношению к - и р - глобшювых белкой о решкулоцчтах ( 7,8 ) и п клетках костного мозга ( 8, 1 ) почти сходны, то можно предположить, что образующиеся р -гпобш-.овые м(Ч ПС стабильны. Кроме того, » случае больной JO. нужно отметить, что наблюдайся значительный синтез у - Депсй я клетках костного мозга и крови (соотношение -у I р +7 , равное 0,8 и 0,7 ), и то же врсчя содержание гемоглобина F в крови невелико llbF-= 5%). Ссжостаикенне псех этих данных косвенно указывает на нестабильность у -'глобшкших белков.^ Возможно другое объяснение данного явления , а цмешю, что дефект и структуре у - цеип препятствует обр.воианшо четвертичной структур!-:.' I? таком случае такие цепи, которые не входят и состав if;.шглобнпа, деградируют и клетки, что служит причиной их нестабильности. Сильный дисбаланс 'глобинов наблюдается у больного гомозиготно» |1 - тида^семией М. И. Соотношение « - и (U гиобнноа в ретикулощпгах больного М. И. ранио 10, й п клетках костного мозга оно различается в зависимости от очистки образца на сефадексе G * 75. Без гопь - фильтрации а/ р равно 10, 4, а после того как образец был подвергнут дополнительной очистке на сефадексе G - 75 это соотношение снижено до 7; Если зги данные сопоставить с результатами гель -фнльтрамин гемоглобина на сефадексе G - 75 этого больного, то можно сказать, </то с данном случае мы освободились от пула свободных а - цепей. Насколько наш материал очистился от примеси неглобшювых белков на сефадексе G - 75 можно судить по величгь.е соотношения 7 / р. В длиной случае эта величина но ьсех трех образцах примерно одинакова, что указывает на то, что материал исходно не был сильно загрязнен негдобшюпьшн фракциями^ Интересен с нашей точки зрения случай с больной X. Соотношение повоеютянроклшых а - и (1 - глобиноаых белкой б ретикулоцнтах крови раыю 13,2, что указывает на резхпн дисбаланс син теза цепей ( см. таблицу 2 ). Это соотношение рапно 4 в образцах костного мозга. Испиглио, что эго связано с нестабильностью (1 - мРШС После очистки материала на сефадексе С - 75 дисбаланс синтеза е1це более снизился (а / р - 1,2), по - водимому, за счет удаления из образца свободных а - цепей, образующих в данном случае довопьао значительный по размеру пул. Для данной больной, но - видимому, скорость деградации с - цепей не сильно превышает таковую для Р - цепей, отсюда в гемоглобиновой молекуле « - и Р - глобиновые цепи имеют одинаковую степень радиоактивности. Избыток же а -цепей, образующихся при синтезе, приводит к возникновению пула свободных а -

ценен, iforopi.ii: упепичиплсгся но мере сочрсмпня пясток и пакоппеиич в них сшпсзиропаннмх rcMOi.noGnnoni.ix молекул. Па рис. 1(Е) представлена каргнна хромнгог рафическото разделении глоСнноных белков, синтезируемых «.челкам» костного мозга болыюй гомозиготной р - талассемиси Я. В крови больной соотношение я - н () - глобинов достигает 14, 0, что указывает на резкий дисбаланс цепей.

' Т»5ли*1а 2

Омр^чслс^ио гннгс^з щией п клотг.чх и коетного жига Садмнлл

Пнинаи пь к ньл, Оора^им п:я1:»г Гели-фллмрация ил О - 75 а/р у т/Р у/р+у

') (нлрМй) 0,( 1.» кропь ' 1Л 0,9 0,3 0,2

к. м. + 1,0 0,9 ..0,2 . 1

К. 60 1,5 крепь ' " ■3,4 2,2 0,5 0,3

к. м. ' .■ V и’ 0,5 0 3

Ю. к 4 гроьь 7,8 1,7 3<5 . 0.8

К. М. ’ . 8Т2 2,6 X 1 - 0, 7

М. И. 33 4,7 КрОПЬ 10 2,2 . -э.л 0,8

* X. м. 10,4 2,3 А7 ' 0,8

к. м. 7 0, К ' 5, 5 0,8

. X. ээ 7 Кр01’1. к. м. 13,2 Л 3,1 2,6 .«Л 7 3,2 0,5 0,8 п ■> ’ ’ Л 4

$0 5, С-\ 1:. м. V м . + и 13, 1 » 4 ■> с • 0. 7 О, М

К 10 4 17.4 3,6 1,7 Л *>

К. XI. + 5,8 0,6 7, В 0,9

К. 32 4 2 крепь - 22 2 И,1 0,9

к. м. ¥ 13,-4 1,8 . 3,4 0 ,К

III. 70 5 К}х>^ь ' - ' 20 2,« 6,6 0,9

к. м. 10,5 1.6 3.6 0. 8

D образцах костного мозга, не прошедших гель - 'фильтрацию на сефадексе, соотношение а / р близко к данным в ретнкулоцитах (13,1). В том случае, когда материал прошел дополнительную очистку на сефадексе G - 75, данная величина снизилась до 9,1, i.e. величина пула свободней а - ценен, от которых мы освободились, была значительной. Любопытно, что соотношение .« -/ не и - глобннопых белков приближаете» к единице, особенно, 1» опыте посте гель - фильтрации материала на сефадексе (а I не « = 1,0). Данное соотношение говорит о больших компенсаторных возможностях организма. .Необходимо также -обратить внимание на величину соопюшстй •у / р. Подылая разница в значениях этой величины до и «осла очистки материала на сефадексе G - 75 гоиорнт о том, что исходный материал был'загрязнен неглобиноиыми бейками, от которых удалось избавиться гель- фильтрацией.: ,

Как и в случае больной 10., на наш взгляд: интересна больная I*. с точки зрения невысокого уровня гемоглобина Г в крови ( Hb F = 10,0%')-В образцах крови данной больной наблюдается резкий дисбаланс сннтсаа глобинових цепей ( «7 Р равно 17,4 ). При анализе глобинов костного мозга в препаратах, очищенных на сефадексе G -75, эта величина уменьшена бодее чем в три раза (а I (\ раглю 5,8 ). Таким образом, пул свободных с< - целей у данной бодьноП довольно значительный. О отличие от больной Ю„ также с невысоким фетальным 'гемоглобином в крови ( Hb F — 5,0% ) в данном случае исключена возможность того, что на хроматограмме .у - пюбинопын пик загрязнен неглобшювыми белками,. т.к. анализ глебнпеш в клетках костною мозга осущгсмтялся после гель - фильтрации гемоглобина на сефадексе Q - 75, Необходимо обратить внимание на величину соотношения у / [) + у равное 0,6 » ретнкулоцитах ч

0,0 в клетках костного мозга. Это'гоиорнт о.там, чго синтез у - uene.'i идет очень активно, хотя значение гемоглобина F ь крови, невелико (lib F = 10.0% ). lie рои ша н с данном случае, как и у больном 10., у больно!: Р. можно предположить нестабильность у - цепей. Либо и н этом случаа можно говорить о дефекте в структуре цепи, препятствующем образованию четвергачной структуры"гемсгаобтюи. • ...

' ' - I ' ' , ' '

Наблюдается резкое угнетение синтеза [1 - глобинопом цепи ло сравнит» с о - глобином у больного ]Ц. Соотношение и - и fl - глоб.шосых белкой очень высоко (« / J1 = 20), Исследование синтез глобинових цепей в препаратах костного моль, ье прошедшего дополнительную очистку на сефадексе G - 75, показало, что данная иешнииа вдяое уменьшилась (о / (1,-10 )- Вероятно, с этом спучле, как к с больной X.,

можно і’рг/іполо'Аіпт„ чю п»«сет моею ііссізЗндьіюсті. ;І - ,vV5.‘;r, r. ом не нгюкэчена р.озчо’.даси. зіч jwj:ietn:4 ччса fl- г.чоСииом.ми(яячч ц.:і.'ігГ,шоі U'hi фр'-чтчн.

і’ ІС. iKiCi:rv>,;r<;rci 5: ..-.«at Л дксСзг- use Grii-оз u

р.'п;ку."ощпял грозч бо.и,::сп> (a / (J = ?.2). К сСрглч'л костпягр цоіга это шмпіпііна,* ;.м>:«ьигпа моо.-(<і / ? - ІЗ, '). Вдашісч гяучаа }V..n;-' ":чі йм*очйїіччі нч індексе G - 75. Позі ому '.;о;; но j.. ііо r.Go,""!.!'c а - дру;л:: і.о - таки

зіі.ічигсі-ч-ніі:!. ьроі'с топі. . ■ ■ •о.’под.іліігсотерхі нсстаїч-імілсл V - ».іи(».иоі»,

т.к. coomoiiiciii'i y ! \'і + у і»! pop и рг;?!:о 0, 9, а я кпгіках : оснісго >.озгл - 0,S, что укззпоягт на і>кті''«і-:К С! нг*» у - ьчехмиег.их ,>•«* «чу. р-ганки

гемсгде&чіч іт р»пг« .*2;». t. і’. »»с ґ.чгчі, ичі.«ч\ ^:ясг.:й>, ;/ ч'ч., « с ос о.орость Л'грпдпит* іі7?мго*гпмх .t - цсгсіі достаточно виссч з, i a ;:гм rn ••y.:rc, к’йиок их так вкінк, что пуд с:іс5одшлх к - цесеіі образуете-.. чго •.мдпо :п разгесиі п ссотвоійсниях СМИТЄЗЛ « - (І [! - ГПОр.П'™» В pci іікулеї! гг:п и ч пргпрат.-х глобппояш бсякол костного модга поег.-е очистки гм ссфадекса G - 7J.

тесшговашіс «утациГ; г;г.л‘одо:>2 :нс;імл'::5'з:'.гкоП ЛЛШЛП'ї-ПКЛЦ1*і; ГТС^Іігг-'ПДЦіАЯ «Г.ГШГЛЛ І’ЕЛКЦІїЯ і

ІІсколму jtc-і дм Titvj.vY''. '• кл-гку.-іг-рчоГі p. - r.rwocan;!!.

^ГІгрпьгГі оснсм'ї и:: :пучсп..ч «■enrm»-'! «ijtr.aj ;і s n<\i::r*r; «vf/n считэч»: репсппе* -Kcnpsvoii нстсуі.' ГїГ'рзіі ПС'Д'К'І і:г. rr.y«ti? к-.годс». >:.'.ч‘с;/<’;;с-:т.-чі!!с<

ТССїК[»}чг:йих ксгр.-зйлнм !С:’Л. ОС; > о/’.*!',,! и>гігг-! с і^л: :я

«jiart.-rvf-rr;;;::, 7..,. .1 ,t <.ч-.--!!;гг,;'.уіпг;ч'і і с.~" ' ч. .Г!,г:5.

К пр: мегодзч oTitCv—fc j: ;№aOT,rne4»~J-»»”cc< «•» =.• С>;-1 :лs:v1 vтч с

»ллргспукяіяуіитсл^і зс«да"л, граіічсрїа'іі.'.чпи.; гч:«!М'| ітзгіїч. а ти1 .г -.і;'*,\:ое i'jKEC;iiijso:‘;.n;-o пролуі.тсо пс.-<п»ч-рч:ной і:-чі«?5 рслчціш ( ПЦІ* ). Сочдзиік мегола спс:п:фичссі:о;( .'ir.ui !И'|чікзц;:!: vliro ( ПЦР } сд;ііі*;о оозмо : ні.і" нря-'с-.’

пь!делеіп:е фрагментов гс'ізммоіі Д'.ІК. Сі:еаіі'}їйчіюгті. ямядиф':эт«!т при этом определяется структурой двух синтетмчгсь-пг. очигску:гя:от.чдср - праіімероз, ісомплсчснтар-і.их дчум протизопадгкч'кым і.ч*пяч ДНІС. а :• амплифнг'.иі'чідіннюго фрагмента - раїст'^'-чнем »!еязду дгу'. а прі»'і:.ч*рі“.:;, м:ог"Л1;?с>'?гч!Ь1' с ДИК.

До последнего дремени для амплифшсашш ДИК использовали ДИК -полимеразу І Е. сої і ( фрагмент І-Слеіюші ). И настоящее иремя ее заменили на термос габилькут Д і (К - полимеразу Тііептшз асціагісиз ішіі (Іістюріїіііи. О юг фирмсігг обладает сяопстноаі тсрмостабшзыюсти, благодаря чему о і падает необходимость ею добавления и каждом цикле амплификации. При проведении ІІЦІ’и наших исследованиях мы ни юл їло кали термосгабнльную ДИК - полимера )у из Т'илптх ІІіегторІїіІиз. ' ' .

О настоящее нреыя известно, что большинстно пзиестных мутациїі, приводящих к- |} - талассемин, у человека ліжалнзоианц в обласні г)і - глобшюпою гена ог района ТАТА - бокса до начала второго шнроиа. Исходя из эюго выбор фрагмелгои, подлел.'зших амгшифпкашш, опроделается наибольшей частотой мутационных нарушении, сводгтпеїнм.іх именно этим районам р - глобиноного гена.

' Перииіі аміїлнфицирошішьіґі фрагмент шелючал область ТАТЛ - бокса н нерньиі зкзон вместе с началом перлого нитрона; мутации и пределах этого фрагменте и ТЛТА -боксе, в 17- м кодоне, а тагле на границе терлого экзона и ишрона, приводят к тяжелим формам [1 - талассешш. Второй фрагмент, иыбраикый дня амплификации, частично перекрывал першії интрон и заканчивался вблизи границы нгорого экзона и нторого ннтрона. Используя тфмостабнльнум ДНК - полимеразу мы избирательно иронмплнфнцнг'оііали 5 1 - конец р - гяобкноаого гена Сильного їомознгопіоіі Р -таяассешш из Таджикистана ( позиции - 115, -» 387 ). Но сути этого подхода с номощыо двух з-праточных олигонуклеотидов, .находящихся и начале и конце выбранного участка гена, при использовании термостабіїльноіі ДИК - полимеразы мы осуществили избирательную амплификацию данного участка. При этом в течении 3-х часовой реакции нам удалось синтезировать значительные количества ішіересуюіцето нас фрагмента ДИК. Для этих цеяеі: нами были выбраны и качестве затравок 19 - 20-‘ілетіиеолімонуклеотидьі. Праймером для амплификации на нромоторную область {Ї -глобинового гена с позиции -ІІ5 до начиная огечег с саіііа инициации

ір.іцскриічнік, была синтезирована следующая носледоьаіелмюсіь: 5і-

Л<."П.'АОАСС’ГСЛСССЮ ГСО - 3'. Вторым, нртіімером на пошцто 387 до 368 (до середины нторого экзона) была последонательсность: 5‘-

ЬАСК 'АСІ І'І С П'СіС'СЛТСіАСі - т1, Амплифичированныи материал п дальнейшем ііо.чи.'р! ли нр.чгому секчениронании) с исисльзонаннеч ісрмостабильноіі Тас} -

і

полимеразы па методике. )ї результате пропеденкон работы осущссгпдено определение иериіічисш структуры дачного участе р - глобинового геиа. По сранпешпо с нормшіьними р - глобииовыми послсдорятельиостямкі в данном случае выягадст» у одного больного ( С. Д. ) точковая замена С- О в промоторной области в позиции -42, в. результате коюрой возникает новий потенциальный сайт метшшропання СрО. Теоретически, он, будучи модифицирован, може г снижать уропень экспрессии глобинопого їчгіс.а. Эта область гена бша проанализирована наиболее тщательно с использованием метода Максаыа к Гилберта и метода Сэнгсра. Дальнейшее секремнрощшке р - глобішоїюго гена обнаружило у данного же больного известную мутацию 1\'3 - 1 ( - I ) с заменой О - С ( последний иуклеотчд первого экзона ), Несомненно, данная мутация иьпыпает заболевание к описана ранее у гуписшн арабского происхождения. На рис. 2(А) представлен радиоавтограф, полученный в ходе одного ш опытов но секпешфованіїіо р - глобинового гена больного гомозиготной р - тадассемисіі С. Д. по методу Сэнгера. Стрелкой указан нуклеотид С, который оказался на месте нуклеотида О, имеющегося в этом положении в нормальном

ІСІІ-. * ■ . " ■ , . ■

Среди исследованных 30 больных [І - талясссмией нз Таджикистана выявленная мугання обнаружена только в одном случае. Можно предполагать, что в Данной популяции Р - талассемия характеризуется своим набором мутапкй, ведущих к Зііболенаїм ’п. . ■

Г>ЫЧ проведен КЦатСЛЬПЫ)) ЯНОЛІП ССММ1 ДГ.ННОГО бОЛЬНОГО ГОМОЗИГОТНО’'!

Р - талзссемисй С. Д. Выяснилось, что семья пробаида явллетея ииходцамп из Кофарннхонского раігога Тлд-.гикистана. Годится:! пробаі:да явля:отся гетерозиготами по р - тадасссг.чш, па что указапаст повышенный уровень НЬЛ, в кропи. Генеалогический анализ спидвтсяьегвопал, что родители пробазда состояли в родстве. Определение гемоглобинопых фракций у 2 других детей из данной семьи показал, что НЬР. у них сильно увеличен при нормальном количестве НЬЛ 3. и таблице 3 суммиропаніч результаты гематологического и биохимического исследований крони -члено'в семьи лробанда. Как видно из таблицы, содер.качке гемоглобина у членов семьи снижено, особенно у дезочки с МЬР = 22%, что указывает- на анемичность осей семьи. Гематологический анализ крови членов семьи также свидетельствует о галаСсемнн. В

пользу ЭТОГО ГСЭТрЭТ ДД!ШІЛС ІК> СІІ5и»(!іі;0 СОЭ, ЧТО и сі,о<о очередь ведет к мнкроцнтоэу клеток, а так^Ь сплжпмю іш<;п;іт';;:.ч СЮ. Биохимический анализ гсмоглобшюАМХ <}'Р»кц::Г! оС'іі;;рг„;ііл п<м ш>ешіс ПЬЛ. харлпсрпсс для геїсрочнго: іісіі ферми )'• - тал.^седшн то;і.'.і;о у ро;яис;ісіі. Удотеіі же его содерханне остается ь иор.чг при сішьиом уьсяичеиим содержаінш І!Ь1?. М»л предномагагм, чго у сибсов ироПаида мо;::т> диагностировать малую [І - таллссєішію г о-інос,пально млгкіш клніі)(Чсскі:м течением. ... . ...

, ' •(.•"«.а» з

лі о...*? чж і.-’и. гсу.;:» а С. Д.

<ї;іс»ії4 1'>Д 1ІІ. ii.il. СГ.1 СКЇО со:: Гснаіо І С'Ы*У ИЬЛДП* ИМ* 1

ССМьМ 1X1 '\ДС и;»л (гЛг) (т) е-> . У/.?/1 ел. ГОЦіІІІ.І О) 09

Ш'рМ;» 120- т 3>3,0 о,.ч>и* 32*3(1 «<М;>2 39 0.2-1,3 2,1-3,5 і>> | 1.5 ]

І..Р- Ш5 50 1,7(. 0,К5 25 3) — *1 16 . 5/-» 1,8' І 52,7 з

(їіоі.Ч •

0!ГЦ УІМ ИЛ дп • 0,77 ?:> 32 * ЗА _ 7 0 ,,

| МЯ і у. ту З.Я7 ■ 2(> з<> *2 „ • 3,7

С<ХП (>;1 1^75 и 3,05 0,Х2 21 - 34 ;<о 2-І . 3,1 22

іох.г. І97Н ПК М Л «Л ?** •и V» АО •> X ,п.„,

теєшроилшіе мутлцт'1 с яомозныо дот-гнкрядіізацмп

Дій .естіфоеаши муїТіЦиЯ |> -таласссміш в Таджикистане нами были выбраны аллелъспашфичсские олі!їчшу*у>Еотнди ; (ДСО) шиболеа

распространенных в районе Средиземноморья мутацйй,' коюрда прпиодят к заболссаншо. При анализа 4В больных р - талассс.мксії из Азербайджана было обнаружено, что мутации [V - глобинового гена распространяются с различной частотой (см. таб. 4). Так ках наиболее изученной с молекулярно - гсисгическнх позиции и СИГ является р -талассемия, обнаруженная в Азербайджане, нами были выбраны кадди в качестве ЛСО-зовдоа иа мутации, наиболее распространенные в этоП республике.

<'"•< ,41* «<<Г>Г**С ІНЧ Г,., |> я І’<1 1 М\Ч 11 •. им ;1 |і ч п

У"<‘ :»■ \Д

Г/К »- Г п> Ыч*'мт'ч О» \ ' ■’»

1 - їм и - Л

г."; і.л. Г-С ...

Л!,і!іГ.>іі‘,їіН!ііро:і::и!іМіі материал Омд нроангуїнзнросач мсгслом дог - пглрлд'лза'ши е АСО на слсдуїгчцнг •) шиссиїї.» мутации: 1. !\3 і - 1 К) ( О - А ) » ПО ію.'юч.-єііііл г.гріюго кяірскз, обнаруженная її Л’(србай,исаие ЛіїмСорскоіі н соазт. 2. Сд-інг рамхм ■ с’і!гг;,.чіа;!і!;і » !: «мои.: ( деления дс.нуклеопуу АД ), і-едуїца"; !' р" -типу галассеміш, оСімрухсшкіг! г. Азербайджане ІЛьариек к с<л:яг. 3. ЇГенсодс - мутиш:я и 39 колоно, їі!ЛЗ(.ії'г>іоиіЯч {1° -та‘іі!сес?.::!>0. ■!. 1У.Ч * - Г» { Т - С ), сбчарул:\.:'!с;я в Ту;;!і>і!!. Срсдм 35 таллссекі.ишлх хромосом »Т:уГ*«і:С»:С>і1 ІГСну.’ІЯЦіШ ЦИ СД!П ІП !1:03.111!!ЫХ мутации пг Смли обнаружены, т. к. п;;ч г;1<?^чгд.*1Э.-«ним с АСО - го!>дд*л і Оі:;ю гюло.'хшеяького сигнала. і'с! рис. 2(їі) і:родст«Улг?.'и рсзу.'іілатм дет - ги'орлднзин,;:’,: :іг.!Шіі:фіні;!роп:іні!!лл <;>;У!гм<шіеа р - ггсйиаясто гсііс больных тадлссолнісіі >п Т;:д::сі!к!!ст:пї,’і іі гстгрозигог « адпі'-ьеіігіииричсс:;!!.-.!» олііголу;;дсоті:дш.іі.ш зондами (Кі мугацшо 1УН - і (* 1 ) О - С. іїодю, что гибридизация прошла с N і ( паш беді.поіі гомозіїгогноіі [ї - 'Піліісссмпеіі - С.Д. ). Под N 7 - огс», N 8 - мать, N 9 - сестра Сольного. По р'лулотатгм дот - гибридизации домі, также является То?.юіш-отоі>. Однако сс ісліпш’їгскад характеристика резко отличается от больного 5р«ы. Биохимическое исследование ее >'рс":: оСнлружіиіо небольшое увеличение НЬ і' ( 22 ?'о), ■по і:е япдисічл характерним для гсмозііготіюіі [і - тяяассекші. Мы предполагаем , что у нее йожііо диагностировать млую Р - таласссмшо с мягким течением болезми. Пычывагт ссмиешіг. почему ДШС матері: не піОридіпсіїллап, с мутантным зондом. Од:ю’і іа гозг/оиаімх гсрсиіі объяснения этих результатов дот - шоріщіплнті лолясіся следующее: у матерії еоіможіія протмхссикая делецгл н одном из гіллслеіі [і -г.'іобииового гена, поэтому се ДН!С и ДНК се больной дочери не гнСрндиэустся с мутантным зсіїдсм па точковую мутацию у отца семейства. IJor.cc тщательней исследование данного явления не представийЬс!, гозможшм.

митлнт ковндь

слтсслтс

■> с

м>

--

я*-'':■» *7> і :.7■ 6/Я - ~

ь?Ф?їі

«*ДЗы>* і»Л'^ <** а -«и

2 з Ч 5? 6

SAl.fPI.ES:

О©

@®

0©

©@

ЛОРІ'АЬ

РКОЗЕ

.я

й 'Л-д^

* . ’ ' ’ ,-' I ^‘ч/ * . ч' • ■ я

с .а ,Ь; з х }}-_/'•

КиїАїП!

РКОВЗ

г---5;'.

V.: г -

*' ’ КО

Г5>

О

Рис. 2 (А). Результаты .Прямого секвекирсвания р - глсбинового гена. Стрелкой показана замена нуклеотида О на С в позиции П'ЯНІ). • ' .

(Б). Результаты ЯЗТ-ГВбриднзацш! с олі!гонуклгот;;лнь!.\і зондом на мутациго:1\’3-1(-!) О-С. _ , .

(В). Анализ р*ст£#К.У'ионных гаилоткпо:; Р -глобішового кластера больных гомозиготной р-талассемигй нз Таяклкистагз.

Но результатам дот - гибридизации с АСО - зондами на мутации, распространенные п Азербайджане, мм предполагаем, ч го таджики опюсяю» кдруюи

этническом популяции и р - тапассемнн здесь должна характеризован с:: другими

___

наборами мутации. И, деиспшгедыю, дальнейшее секвеиироианне р - 1 лсбиномм'о гена больного гомочигетюи Р - талассемнеи на Таджикистана выявило другую мутацию, а именно IУЗ I - ( - I ) с заменой й -С.'

оигедклкпш; рестрпкционных глплотппоз р - гдопипокого КЛАСТЕРА С ПОМОЩЫО ЛМПДИФИКЛЦИМ

. Изучение структуры ДИК кластера р -глоииподих гонов человека показало, что п ДНК имеются характерные места (. сайты ) для расщепления некоторыми рестрикционными эндонуклеазами, которые вследствие мосонуклеогндних замен могут присутстпоиап. или отсутствовать , т. е . бить полиморфными. Данное распределение полимерных сайточ кдоль П - глобпнопого кластера исгюль^уегся » хачестпе маркеров аллелей Р - глобшюоых плюр и характеризует определенный гаплотип. В работах Анюнаракнсл и соаит. и Оркина н соавт. (1985) гшерные била высказана мысль о том, что некоторые мутации п области Р - глобиноиого гена приводят к Р - талассемпи и тесно сцеплены с определенными гашютипгмн. Последующие исследования показали сцеплешгость 22 гаилотлпов с 25 мутациями п области р - глобтю1ВДГО гена и выявит наиболее частью мутации з различных этнических группах. В настоящее время известно, что ь каждой конкретно» полул.'Цки различные р -таласссмическчр мутгцил а солылсн или меньшей степени связаны с определенными ДНК - гагтогичами и их можно определить по сумме нескольких полиморфных сайтов рестрикции. Исследование Р -талассешш в Средиземноморье выяпило. что Я5"/« мутации спязакы с одним гаплотипом и связаны е кроссинговором а 5' - фланкирующей области р - глобпнопого гена, который счигаегея районом повышенной активности в рекомбинациях.

До настоящего времени сцепк(| сцепденкости гаплотипз с мутациями в таджикской популяции не провод’илось. В связи с этим, перед нами была поставлена задача определения гашюшпа а сочетания с мутацией для решения вопроса происхождения и распространения мутаций в таджикской популяции.

Для ra:»sOTi!ftCP » длшіоіі • популяціні гиіаліґтртчиш 3 полкмоі'фймх

с:..',ю:> рсс-;р;ікціііі йде-:!;, Р-гооокиокого «гетер;*: Ніікі ПІ а у - ivu; Іііїх! ПІ у лі сі;с: Піпс І1 а і> Г> - ген;; Ні ас 11 ь 3V; - гене н Л'.' і ! 1 і! в-іа:г. При посгроскші

г^ш:..ч;т.ов нршто стазі» ь так +. сели caiir ргсгргікіум nfHsjyicvrycr п ?«:•»’ сели ои о:сутствусг. С jjov.os4t.to излимерезпаіі . і:;іі!іо;: р .•;<.* •« ч ;>ссір<:кціпі

-.J ііііирччиїиіого матерпаль памп б;їло tioiuna.iO. ч:о nv.;i;c

кн.ичлат :ro Gojiu-.oro С» Д. і: ’укіізз сго сс:.і-.-іі ps Ui.c’fciTpuw.^Oifiiue

г.іп .о гіші і: ( т - + + + + ) ;і (- - + -і- і- + } - ;v;:: міu crm<і».і І1:лс! 1 П (у ;

Нл.іі ЇМ (-/ Ніле Н fi); Я^іЛ 1 (|l);Ava 1! (р ), cooiL-tncrt опію. Зі» гліїлоті'.пьі огліі-ілются павші ».і дкстзлькзілу y. ЇНаїі ПІ - поли-мор-’,чому саііту, расі;у.:ол;е:шо,иу »3 5!-кс>и«« £-П;сЗ;и;сго.ч>їЄаа,. »гїоСіііо иодігсрждяю иссколько раз її пооьіісиьгьіх bKcnvpsiv.sa‘fas о і»«ї»г<ушаіасм иіугрсшісго ко;ітроля. Гсіспо:і;гоп!ость по (у 0 > ІііпЗ !П • водглхрфлзиу сзйту, «ролтно, сішанз с рскомииісапиоіііімц coSmtkjv, іфаиюяияші;и кххху 7 ц у л- гдобішовмин гсагми на одііоіі пз мутантних хромосом (р;;.2.(Г0* . : . '

В таблице 5 ^ги№уосд«;.>л {’'Иупзлтли f.ius.na }>;ст}ї«»:цзониих г.і::л.>пі:юв р-глобнкоього кластер у foa;.r{««^гласгсмпі;'. г,і Тздїа.иксто’.а. Над К

1 оЗозі-гчея СияьпоЯ гомдакготкой р-т»г.;сс’.г,г,іі С. Д, ' .

. • • _ ■ ■ і ■ ■ , • '

Плявдсшіоя нами wyrcmw G • СIVS і «(- J)yasww Gv-л оап&шау

-.уінсцеа apu5-:coro ирвлслоздіїнь-., по бід:а?;;г-и;:.-.-;.е^сгрлмп-і^.'Л)

І J ■ЗІ>;!І.’/.ІІІ : (т--- -і- + 4 -I ) дяя і.‘ЛНЧ!Орф'іиХ CtiltCa КІГ.І П їії«.і Пі

«у ); Пігиі ПІ (у л); Kins 11 (<‘> р ); Ніас І і (3’ $ Р);ІііпГ( 3і 6 }; ІІг! Л ! (|^Av5 Н

<р,>: С.і;а Ні { 3! ;! ), соогсігтетх^ико.

- ' V "

- - - s

s.ii'.-ju CiTUi-tu;ciu:«T\ г/оілгсзшоз ^-гдо^5:ію?*ого r.9;:'5*»iwx ?-т*ллгсїлїї:і*1 \vi

ТА/і,іЛІі*»1<ТГЛИЛ [*■ *}- aO/tiic.wалл^л^сгчь, -ист.{

N* \н''\:ігюп и;г.ии ) Тгр$ 1! 1 v л 1(тг,с ' 1 »і> 0 »1::к!І 3і ■'} ** Лч.4 {! р

! 4 - . +

«; f .

К> ч- ♦ . f 4 .

}f •+ + - + - 4- + .

V ■і- -І.-... .+ - V * V

ОБСУЖДЕНИЕ

. Первым этапом молекудярио - генетического исследования таласеемни яплясття анализ новосннтезировашшх глоошюпыч беггчоа п ретнкулоцитах крови больных. Методической основой данного «сюда является хроматографическое разделение цепей гдобикового белка. предложенный Клеггом и сот>т. в модификаци.'! Лимборскон и соааг. (1978). Результат этого nulntnп у больных талаесемнеП показал):, что иснользоаание данного метода может в значительной степени прояснить картину заболевания, особенно в случаях трудных для диагностик».

• •; Проведенные нами исследования ешггсза гясбииозых цепей ю

рст.чкулоцитоп крови больных гомозиготной р-талассемнеи кз Таджикистана выявили пперогснность но стежчш угнетения синтеза [)-иепи. У всех обследованных больных оказалась {1 “'-талассемии, при которой синтез [!-цспей сохранен, хотя и резко снижен. Одиаг.о степень угнетения синтеза (1-глобпкоа различна у разных больных и но этому параметру всех больных мы уелоино разделили на две группы : 1 группа ш;л:очалл больных с умеренным снижением синтеза ji-rjiooii/iOHcro белка (х'[1 < 1C): 2 группа ■■ с резким угнетением синтеза' р-глоСнноного белка (c/[i>10). Соотношение цовосинтонроьанпых и- к [)-глобиповь;х цепей а 1 группе, определенное яо включению Н’-л^ицина, колебалось от 3,4 до 7, S. Аналогичные исследования "i-талассемни проведены н ряде зарубежных популяций, в частности, о Италии, Греции. США. ft негритянских популяциях США преобладает |Г-талисс?мия с умеренным снижение»; сш:тс?а (’-глобтю», характеризуют.!,"'::: сравнительно мягким кл:тмчески.\: течением болезни. Соотношение а- и [1-глоба:гоп колебалось в пределах от 2, 7 до 4,5'Fiiecim.i;~!,]V74). Во ссех случаях увеличение сснтезс у-глоб.чнеиых целей снижало дисбаланс и - п не « - глобчпои (а/[} +у— 2,0), а у :п:ш;к больных соотношение с/'Р + у варьировало от I, 7 до 4, 0. !ia счет синтеза у - цепей у больных уесянчкзасчсч содержание Hl> F. Его содержание в популчцин США состашшю 20 - 5S%, а п крота больных, обследованных нами эта величине колебалась в более шнроккх пределах (.Ь -Н0%). . -

Гетерогенность относительно содержания. р - глоСюкягсгс белка оппог.иа

• * ’

также п итальянской популяции, где внутри р * - талассемии 5iir.it рыделены дзе группы : с умеренным снижением синтеза р - глобикоп (р/0 ~ 4, 8) н резким - (e/}J-!5) (Marks, (971). Позже, при белее тщательном нзученнч новоскотезироваппых

глобинопых балков в Неаполе работами Пепг и сопит. были уточнены эш группы, а кроме того^идслемы три различных Г011О1 ипа: р" / (Г с полним о/суилииом сшпша [1 - пени, [>7 [>* с соотношением к/ [5- 12,5 и 7[1 \ где дисбаланс тобиновыхцелей «/(}>(. (Роро, 19.40).

Р.ЮОГЫ но биохимическому и ыодекулирно - I сиетическому изучению гомотгозмоЛ р - талассемнн в странах СЛГ проведены, в основном , п Азербайджане и Туркмении. В Тукмеиин из 4 больных юмозшотпои р -та.пассемией выявлен лишь однч с р‘- тпдасесмнеи (а /(5 —7, 2 ), у остальных 3 Г'.олып-'.ч было выявлена р ” - тллаесемня, где синтез (! - глобинопых цепей полностью отсузетиошш (Мазурова, 19М). Исследования гомозиготной 0 -тапассемин п Азербайджане показали, что более I/ 3 случаев заболеосиад представлены р * - талаессмиеь (Дергуноиа,1982, Мовсум-Задс, 1984). Более

Т!ДаТеЛЫ!Ое 1>Зуче1Ше СШПМа ГЛОбшЮВЫЯ бСЛХОВ » ДаНИрИ ПОПУЛЯЦИИ ПОЗВОЛИЛО

выделит;, внутри (1 + - талассемки три группы, .характеризующихся различной ; степенью угнетения р - цепи: в в первую группу Вошло 4 пациента с небольшим снижением синтеза (3 - глобина (ге /р -• 3, 1 - 3, 9) ;/ во вторую группу вошло 3 больных с умеренным угнетением (а /р = 5, 5 ) И только у 2 исследованных больных синтез р - глобииовых. белков резко угнетен (а/р >12), которые сошли в третью группу (Дергунов'дД982). Если сравнить эш данные с нашими результатами, то можно сказать, что и популяции АзербаГдасана преобладает Р + -тлл.;ссемм;: с небольшим угнегеплем сшпсэа Г* - глобпговых цепей.

Т:'.к к,ц; и наших гсе-леддаашмх группы с небольшим и умеренным угиетошед; сшисю {1 - глебчна ьредот;'!злемм лишь 2 случаями каждая. мы

о.>1.ед:«»‘1ка г*’.;-г»е о «-.иу грУ'^’л. Группа бсаьмих с сильным угнечсичсм

си.иез;. [’• - п.обнио» г. н.'лг.гм «со.едомлп-.и была более представительной ( 6 из И> Сольных )• Соогнои:еи;;г к 1-.\ ксаей я этой грувис Сольных парьировало от 10 до 22. что указывало и;> резкий дисбаланс гаобаноз. В наших исследованиях не било обнаружено ш. одного случая с [10 - талассемией. Эго, однако, не означает, ч го данная форма заболевания отсугсвует на территории республики, так как еще в 1978 г. бьт описан Сольной из Таджикистана с (Г-талаесемией (Ли1!борская,1979). Тем не менее, по ~ видимому, этот тип талассемки здесь встречается значительно реже, чем в других популяциях. '

Дпа случаи гомозиготной -тал.к’Семіш с реГюлыннм увеличением !Ibi: а кропи были обнаружены нами у боль.чых и !0. Этот гемоглобін: состапляп у них 5 н 10%, соогнетстнснно. При семеґаюм анализе би.чо обнаружено, что со/ири.'анио другого минорного компонента гемоглобина, а именно ИЬА, :і крої:!*, матерей этих больных было увеличено { *1, 2 н 7, 2, соогистствонче >. Данные іієличічіьі характерны дня классической і гтерозиго'пюіі формі.! f> - талассемпн. И литера гуре описаны несколько сходных, случае» гопсзиготноіі [і - талао.-емни с небольшим увеличением 1!Ь Г. Так, при исследовании и Средиземноморье было выявлено, что его содержание ходебалось в пределах 7,5% (\VeaUicr.’.i!,iy80, Gallo, 1’>7*?). При хроматографическом разделении глобшюп, оказалось, что соотношение к /р равнялось 2 и 3,5. При <>oj:ve тщательном биохимическом исследовании, к такай иеследо'.алпм семьи больных, было ш,милено, чю у одною ні Сольных с соотношением rs /р =3,5 било сечегаипи аллелей голой [> * и р ° - талассемич (\Veatherall,1980). В нашем нселедоиаиии у больных Р. и 10. угнетение [> -глобипового белка было более сильное, чем у больных из Средиземноморья. Соотношение « ф достигало 7, 8 у больноіі 10. и 17, 4 - у Р. Обращало на себя пннманне то, что происходил акткинын синтез у - глобиион п зритроидных шістках обеих больных (у /!' + "!' ранное 0. 8 и 0, 7 у больной 10. л О,У и О, (> - у Р. ), причем как в клетках костного мозга , так ;r п ретнкулоцигах крови. Соотношение этих данных с низким содержанием lib F в кроли косвенно указывает на то, что и данных случаях возможна нестабильность у - цепей- Пр:: анализе глобннон костного ntn™ у болкиоіі Г*, Оыла исключена иозмолиссчь того, что на хроматограмме у - глобиносая фракция загрязнена неглошшооымн белками, т. к. от них мы освободились гель - фильтрацнеи гемоглобина на сефадсксе G - 75. Необходимо отметить, что ц неггорнях болезни данных деух больных 30. и Р. есть указания на то, что аисмая иыяилена у них с рождения. Изнестно, что переключение работы фетальных у - глобиновыл гечои на нзрослые (1 - глобшюоью гепы заканчивается на 35 неделе после рождения ребенка, т. е. при рождении ИЬ F составляет основную фракцию гемоглобина крсви. Можно предположить, что у дачных больных наряду с талассеыиеи была анемия новорожденных, связанная с нестабильностью у - глсбиновых цепей. В литературе описан случай нестабильного гемоглобина у новорожденных близнецов, который вызывал гемолитическую анемию, проходившую с возрзегом (Lee-I’otter, 1975). В

ноиом нчрмнтс lib Г Сына обнаружена замена триЛтофана па глицин в 130 положений у - цепи. Этот вариант би>л назван Hb Pools и описан jcait первый ьесгаскльный гемоглобин, в котором аномалии в молекуле локализованы п у -цени. Л обычных случаях {! - талассемнп стимуляция синтеза у - ценен снижает дисбаланс н смягчает течение болезни. В наших же случаях с больными Ю. к Р. .пою не происходило из - за предполагаемой нестабильности у - цепи и клиническая картина их заболевания характеризовалась более тяжелой анемией. Ik)ir.-.o;:.na. на наш взгляд, it другая причина такого резкого угнетения синтеза глсбогоз. Вероятно, что дефект а структуре у - цепи препятствует образованию чствгрм:чг.оя структуры. Если данное предположение верно, то и этом случае такие или;, не входящие в состав гемоглобина деградируют в клетки, что в свою очередо делает эти у-дспв нестабильными. Для подтверждения наших предположений было необходимо исследовать первичную структуру гемоглобина. Кроме того, тестирование зи нестабильность гемолобиноаых фракций крови этих пациентов более точно охарактеризовали бы нам эта случаи заболевания , но гяжемая, прогрессирующая пиемия привела к быстрому летальному исходу Сольных, что не дало пш возможности проверять наше предположение о нестабильности у - цепи.

13 некоторых других случаях нашего исследования нам удалось ту'шгь си)п« гкобниоеых цепсГ: п клетках костного мозга наших больных. Анализ препаратов гсмоглобнпов из костного мозга обнаружил разные результаты. Оказалось, что у некоторых (Зольных в клетках дайной ткани наблюдается такое х:е угнетение синтеза р - глобипового белка как в ретнхулоаитах, а п других случаях - синтез глобньоаых белков в клетках костного мозга более сбалансирован, чем с клетках крови. По разнице дисбаяянсов о клетках кропи и костного мозга больных гомозиготной р - талассемией можно раздыить на две группы. К первой группе относятся больные: Н., М., Н., Я., Ю.. у которых соотношение а /р , а также а ф +у по своим значениям примерно одинаковы как а клетках крови, так и в препарата^ костного мо:;га. Сходные

’ Ф

результаты быЛ|! получены п^и исспедовашш емтега глобтеов у Сольчых гомозиготной tl - тальссемней in Израиля, где наблюдался почти одинаковый /дисбаланс белков как в клчтхах костного мозга, таг и п ретнкулоцнтах кр^ни (Shory,!971).

. Друга* группа больных включала лаииеитои с различными по своим значениям соотношениями « /[$ и а /р +у а клетках к рези и в препаратах костного мозга ( больные X., 11!.. К. ). В данной группе больных в ретикулоцнтач крови наблюдался существенны» дисбаланс синтеза глобннопш оелкоо( a/R = 13. 2; 20; 22 у X., ИГ., К. - соотв<;тстаетк> ). Соотношение ноагсинтезеропанных белков п препаратах костпого мозга значительно мшыис. чем в ргтикулоцитах крови («/[5 в клетках костного мозга у X. = 4,0, у LU. = 10,5. у 1C. = 13, 4). Одно из возможных объяснении этому явлению может заключатьла п юм, что у этих больных Р - глобшюгая м!'ПК обладает нестабильностью и деградирует но мере созревания эрнгроидных клегок, отсюда в ргтикудоцитах крсаи ее количества меньше, чем а костном мозге. Возможно другое объяснение, а имение: у - и '• -глпСинопые фракции материала из костного мозга могут быть зафязнеьы неглобмиовымк белками, "что создзсс енечятпемие мсиыисго дисбаланса. Если у больного Ш. разность дисбалансов может быть объяснена за счет эш решения пика р - целей костного мозга иеглоОннопыми фракциями { т. к. гель -фильтрация гемоглобина на ссфлдексе О - 75 у пето ;:о ироаадн.час1.), то » случае больных X. п . К. препарат гемоглобина костного мозга был предварительно очищен гель - фнлырафнеи . Так ка;с соотношение ноиосш: тезированных глоба.човыхцепей в клетках костного мозга больного 1C. во много раз меньше, чем н ретику поцитах кропи, то весьма иероятно, на ишн взгляд, нестабильность [! -глобшювон м1’ИК. То же самое возможно верно и дня больной X. C*Jcr::oi:ic««ic «

- и р - гпебчиовм* г.ослс гель - фильтрации гемолтэта на ссфадсксс <3-75 сше более снизилось у данной больной ( « / ■ р -- I, 2 }, по- видимому, за счет удаления м! образца свободных с - ценен, образующих з диннок случае довольно значительный но размеру пул. Предположение о нестабильной Р - глобнновой мРШС, возможно, также ззграо и в случае больного Ш., хотя здесь не исключена ВерОЯТНОСТЬ того, ЧТО В ДШ1НОИ! случае, как уже fPBOptLIOCb, ЭТИ peiyjIbrilTU могут быть обусловлены загрязнением неглобиповымк фракциями у - я. fl - глобинов КОСТНОГО мозга. .. . . . ’ ’’ ; ' . ' •

Сходные результаты g рззиой степени дисбаланса в кропн и костном ' мозге были получены при изучении синтеза глсбпновых белков пра р - тадассемкн рядом других ави,р:ь (Sch wart, 1970, Clegg.1972, SagI <0,1982, Ga!io,197<>.

Musunieci.198!). При исслед’Лй.ития синтеза гяобинозых бйлхпв у больных

Mnrcjnie,v.nnr.oii (J - тил-лсем.а:сй и; Ur;ui;m покатюэ,‘что содержание lib F г. 5 случаях из 12 Сило небольшой (до 15-і), в оет-ольньк - о но колебалось or 25^. до ‘.’.7,4. О'ОПІСЧІМИав ГЛСбіШОВІІЧ б«Ш1! и рстіжулскі-.тах у йл.ьиык С HCl.'UCOIWI содержанию’ і lb Г кглебзлось и пределах. or 2. і до З, S в случет; а І і< и до 2. З - <■- І)\ +•/ . У препаратах костного мозга эти соотношения «nwu бд:і<ки к единице (Ga’.io, 5979). , ' '

Р. расою Фридмана И соает. было иройсдоьо срзшіенне сшпизи гяобшювих ueneii в ретжулощітах s: клсттіа костного мозга у двух амсракасцео, грека н іігііг:і.зица, болыых го.иозаготлоГ: fi - гзлассскисн (pj'icJn:a:i,!972).

Синтез г.тс0;!1!Озых белкоа поклчіл. ч~о eoorjiciueuiw с / [і у іісех 4 .больных ;i )>сті!«.улон>ігил колебалось в предела* 4., a « ф +v - a пределах 2. В препаратах костио! о мозга синтез глобииови:; белкоа, как: показал» наследования , был более сбалансирован. Та;е, соотношение с7 (5 в клетках коспіого хо^га было б пределах 2,3, а «/(> >у - 1.5. , . ■ ■ . . ■ .

Иселедопааие сшггеза гдабановых белкой у больных гомспііготііоґі (5

- тг--ласес..і:іоі: id Ит.ілаи сСііару;;:іг.та, "что с случаях .[>v - тглагссмил ссотііошс;іі:є

я і у оо u.Uic!: клст.;ах костного мо;і»'е:.і ь рстнкулоцитах. При р + -чглассемли

•еіінтаз г; - н \> - гдооиііоз/'каї: яиіалали исслсдгвашм, болїї cGaaa:i;>spd3r/it n

:;.icu:a\ кос і лого ;,:озга, чем в'крэвн (MttsumccU'/Sl). Пояу'тетяде ,"аш;і.;е гптори

oow.c;.>:ic<t той, что |> - глобииоиыг игии синтезируются пргнмуїцссзпс.шэ п

vjwpwKtta юипа’ч костного ієозгі. а у - t;cnn -.билео яктнмо п регикулоципл.

Дрчп.'м исслспозггсадлш было предположено, .что Содсо сб;с: ;s-.:ирозмии ;5

ciucvu глг-Г);;:юе!.!.'. иглкоь np;t fl - талассемни « кнегках косі пою мозга

о0:.яеі..:етс:; либо іі-стаб;:лиіоетчкї [і - гдобшмзоіі иІЧІІС, либо ко-шеигаториым

::

угнетением c:htcjc а - цглгй в kos-яюм мозге. Предполагают также, что ретіїкулоіїипі крота способны с;игтезз;рояагь к - гкобішм вбольшей стс;:;<!И, чем у- тли (> - цеп;:. ІЬбтлточіїьіс « - гпобішогате белки, і;с езязаннне с £> -іш 7 -цеплми из&і;ратсльі;о подвгргиюгет денсгв.іго протеол;;т;ічееі:ііх і^ермешо;; :t, тахим образом, смягчается дисбаланс цепе,! после их'Синтеза (Вал';, 1969). Это возможно вследствие к», что с;?обод;!Ы1.' с - і;еі>и не гг..5.^'і;!Зі;рОиаі:и и одку моя^хупяриую йояфіїгургцкіо и то итсяя кг.і: к - цел;;, с;иза!ьл;а с <} - ішл у -пеням;' с іечсґлобшюпие форми Л или І?ста-і07.ягся, таїїи** обрлхм, pc?»:fT«:iti«<;

К !Г1СГЄОГ.ІІГ>і,'<’СКИ\! (jiOp'ieiir.'!.\!.

Таким образом, ссчц ана.ч-П синтеза глоОш<С!;:.1.\ цепей в пери^с-ричсл'ом крог.и споссбсгь-ег уючналпо дн^ию-гинсн п г.:л'!г,'.еиию радарных фирм з.иассезда:, го исс:;едог.л:1).о от jr-.ru шебнноз я к>ипка.\ кое того гозга почо: аег боле'.: }1 гг.блешм оие.'.пт;, некоторые биохимические

харак1ер:'сихи габолсаапих. Изучсакс ме-легулярно - «еьекшеекпч варили:о» () -талассемои предо гачдост бочынон м иерее, так как нм основе пол-,члшыг. данных можно идалытнне.ч и«кнгпрдел«шо ра^рг-батыгать чопу: меюлы диап.ос!:!»» к лгчения. Кроме того, ксследспаниг мо>х1суляр!1:>!\ ме.<а:шзчо» «мтогенгм I: копирлиы'; случаях забояеоаши моя»г,чать поиу.ч» нпборуацн’а об осоСая'ост

ЭХСПрСССШ! ГЛСС|1!К<НЫХ |ЧЯ№» 1> ЛОР'ЛСГ.

Могюсулдрии? дефппы над |) - таласссм..н !П\ че:.м дое;агоч1ю хорошо. !С ластокщему ьргчеии нзпссгпс» бо.чге 100 ратгаых мугацан [! -гоэбпнозсто гона, лрлеедчит к р.пгит>о дгошою зи<к<:х<',:н,“1. 2нмя:слыыН генетический полиморфизм 1’> - таласссми:! сЗ^сяаачкпа;ген налнчаел! г> одной и той же по::ул;ап;',1 разнообразных муганнД )! -глоблиосоп) юаа. Таи, при игекдоиатш 2>: гомгедногоих бояшис аз Испгашк »>/>::.• кно ? различных мутации р - глсбнно::ого ген,'!, а при аналдзе -Г; Сол>,::;.!\ г. Тур;;:»: - 9 ра !.:и;них ?|)тачг,;'[. Мо!’,с::улярпо - гснетичсск-ис исследования р - тадассомн.ч о ЛзерблГд'л.чшс. где частот заболевания особенно велика и достигает 20% о отдельных регионах, обнаружило а данном пспулящш наличие нескольких «!ут;н;!<н. пркподчщих к заболеванию. При нееяедо-гашш 4Х Г* -

г.ч,!а:се-1;<еи •:« •' зсбаНдл^на оыло обнаружено, что частом встрсчаемоста му пиши - деченш; дчнуклсогпда АЛ и 8 кодоне £) - глобнноиого гена рааг.а ЗУ>«, ню г.чияегся наиболее часто пстречагощсПся. Ота доэди обуглаалплает тип "-ы.чассоинн, едамгая рамку считыиаш'я, спа пизипает почти нс.чедлгннос по-,кленке терл-тмрующсго кодона ндаким оСралог.^дслает невозможным синтез зрелого |1 - глобина. Интересно,что данная мутацая была обнаружена п гал'-кн.сс!соа популяции (Колесникова, Бобоходжасп,!052). При обслелопапчл ?(< галлтсон т Гнссарскою района Тиджнглсталт с «само .выявления р -

1 тнаесемичест ччт.шнп удпух ро^стиешшхов I* одного неродственного икдкпнда б!па обнаружена деления 4 пар осмоэашш и *11 - 42 кодонах р •глобнноиого гена. Доения 2 нуклеотидов а кодоне р - глсб|*чсвого ге.ча эясрсыс была оплсана а

IV,<| г. н турецкой семье. Позднее она была обнаружена у больного (Т -

' ’ ' ' , зо ■ \ • . •' '

тлч2ссе.мііеіі в Ливане. В данных работах было показано.'что эта *'утаці[я сцеплена с 4 пшлотипоы. Сцеплениость данной мутации с этим типом Гагшотипз считается характерным для Средиземноморья. К сожзаснкю, а таджикской популяции тип гаплотипа не был определен. 3 связи с этим лрсдстаилясгс» сложным говорить о происхождении >1 распространении дашіріі мутации в Таджикистане. Данная делеция широко распространена п Китае,' Индии и Юго - Восточной Азии, у жителей Средней Азии она описана впервые. Акторы данного исследования делают предположение о том, что V таджиков эта мутация может оказаться достаточно часгой. , ;..

Средг другие наиболее часто "истрсчаадцихся ‘ мутаций . (5 -глобпиоиого гена в Азербайджана можно наделить мутацию в - Ап 40 -м положении малого шггроча (Ли.мборская.ШТ). В дгдьнеПидем этими авторами било проведено, тестирование"., дгішоіі • муггЦнп при использовании ОЛКГОНуЮ1СОЛ5ДПЫУ зондов с пемощыд,'.^гнбридіпацкоіших методов (Федорой,! 9У1)- Оказалось, что среди больных из Азербайджана частота этой мутации нсеелавс ( около 2 аЛ ), то.уи как р соседней, турецкой популяции она встречается з 42. 5% сяучаез. 1 ,с г/'. , . . , ■ .

* ГТрсоедеинойианл тссткровише р~талассешш в Таджикистане на мутации, характерные для .Средиземноморья ж;,'дали положительного сигнала. Вероятно, ;го тад;кш:г; отпосятся к другой этнической группе и р - таласеемия здесь будет характеризоваться другими наборами .мутации. , . ■

Проледишая расш»фро?.ка участка р. - глобшгового гена у больного из Таджикистана даст , возможность провести срашісішс его с уже расшифрованными генами из друтах популядмй. Прямое секпенироьзшю [) -глобинового гена по Сэнгеру у больных гомозиготной р - тлламемиеіі из Таджикистана обнаружило точкозую замену С - О о промоторноіі области в позиции -42. В результате этой замены познакам повый потенциальный сайг мгтилироаания СрО. Теоретически, он, будучи модифнцнросан, можег снижать уроаесь экспрессии глабтюэого гека. Дальнейшее ссквенирооанис {Ї -глобикезого гена обпаруаоїдо у данного же больного известную мутацию ІУ5 1 -(І)сзаменой С-С( последний нукдеотадперзогоэкзонз).

Несомненно, данная нутация вызывает заболевание и описана ранее у тунисцев арабского происхождения, в Китае и Индии. В работе Видауда и соавт.

данная мутация была описана у 24 -х летней девушки от смешанного брака ( маті, -туниска, отец - ливанец ). У больной были диагностированы черты мягкой |>* -талассечин. При биохимическом анализе кропи пациентки пияпили, что уронень НИ 1 составлял 85%, НЬ Л - 11%, ІІЬ Л, - 4%. Генеалогический аналои установил, что і:..циентха несет наследственный ген р* - талассемми в ассоциации о ранее не описанным типом гаплотипа 22 Р - тллассемиіінои хромосомі,і от ее отца и ген (Г

- талассемин с средиземноморским гаплотипом 1 - ог .матеря. В работе было отмечено, что кроме замены Arg iiaThr в 30 кодоне данная мутация приводит к нарушению сплайсинга первого нитрона, т. к. нарушает консенсуальную последовательность допорного 5' - сайта сплайсинга этого нитрона ( IVS I )- У описанного больного из Туниса уровень процессируемоіі мРПК был снижен на 98%, т. е. данная мутация G - С в позиции -1 фактически уничтожает ( на 1№ % ) использование нормального 5! - сайта сплайсинга. Описанная мутация у тунисцев арабского происхождения скоплена с другими рестрикционными гаплотипами (+ ---•++ + -»-) для полиморфных сайтов I line І1 ( 5і є): Hind 1 U ( у °); Hind 111 (у л); 1 line 11 ( 4» p ); Hinc 11( 3і i|- p); і linf 1 ( 3' 5 ); Hgi Л 1 (p ); Ava 11 (|S >; Bam If 1 ( З' П ), соответственно.

С помощью полимеразном цепкой реакции и рестрикции амилифицнрованного материала было показано, что изучаемые [5 - глобиновыс кластеры больного гомозиготной р -таласссмисй имеют разные рострикцноиные гаплотилы - ( + - + + + ) и ( - - + + +)-для полиморфных рестрикционных сайтов Mind 111 (у °); Hind 111 (у А ); Hinc II (tj; (і); Пінс II ( З* ф D V Av= (Р ). соответственно. Эти гяпяст::^л оишчаются только по дистальному у ° Hind III-полиморфному сайту, расположенному на 5' - конце j) - глобшювого кластера, что было подтверждено несколько раз в независимых экспериментах с использованием внутреннего контроля. Гетерозиготності, по (у °) Hind III - полиморфному сайту, вероятно, связана с рекомбинационным событием, произошедшим между 7 ° - II у л - глобиновыми гонамн на одной из мутантных хромосом.

Выявленная в нашем исследовании ассоциация мутации G - С IVS -1-(- I) с другим гаплотипом по сравнению с Тунисом, не противоречит гипотезе, согласно которой мы предполагаем моноцелричность возникновения данной мутации и ее дрейф по популяциям. Возможно, изменение ассоциированного с неіі пшлоткпи связано с рекомбинациями внутри кластера 3 - глобиновых генов.

Полученное нами данное позполнлн нь.ека^їі. точку 'зрешм о тон, •и>» таджикская нону;ыци.1 гскроісіша и х«ракіс|<інусгсм а.онмн шоор-'ми

мушинії {ї - ГЛииИНОЮ.НО ГОНУ. .

ООмаружешк: мучац-.ш О - С » !\'Б - і (-П в Тгд/ї;к«сист:и:е «кіяскк 5-

о.іі по счету открытий данной мутації» «осле Кнтар, Индии, Лі»»...ід »і Туінісл. ,'Іругиии слонами, даші:г.; мутацті обнаружена в 5-і н различных <іонулаіі,і!;:х. ’Тог факт, чю данный тип мутанті сочетается с различными гаплогніюми н каждой огдедмю ішгоіі і» ^піл іюпулиіии предполагает, чю мутяші» іачиїїиіз :.нп .іонно п них. ї. о. нсзаьмммо. Креме того, іімаїшо аюі рм-м [> -і лоо.шоного гена ииляе-тса скччо)ч>да 'гор^чсГі іо*<м)м “ доя «іу іаціь:.

Ярчснио гетерогенности можно также объясним, таким яплгннем как миграции іипіупациіі. Ииіерссно н этом случае мисіше автором по іісслсдопаїшю молекулярні,п осію;» [і -1 алассемни в Ливане (С1іеІіаЬ,Ш7). Изиестно, чю Ліпіан -■ло ііс-Счмьиіое гоеударетло, расположенное на берегу Средиземного моря. її течении МНОГИХ ПСКОВ оте государство НМІПО много связсіі со многими цикиліпацпкм». Г> настоящее время популяция Ливана - это результат смешения мпоіич згвпюіі. Эи> смешение различных этносов отразилось на гснетичссксн К.фІС му-ГІІЦіііІ р - ЧаїаСССМіІіІ.

ІІП0і;О,;5 ПЇК1Ч-5ПНО С ООНУруЖСітоІІ ІІЯМН МутЙЧШІ Іі 1<1Д&ККСК0Г( :.онуллії;'.і. ми предікшіаг;.!, чго территория Тадаил-ксг»на, а в прошлом :ш) госудтро ьч> было г.тш'слышь: по сиосіі территории, н іаюьц как- и Лпиап а ІСЧЄІІІШ ДОІІ! >14 нгиог, Рмло своего рОД.І ~ІІСрсІфССТКОЧ“ і-схлу ЗапУДОМ II Иооюком. Тісішкіііі ІІ&імкиіі путь проводит через .згу тсрріпор;го, кромг того есісс'ііісшіа.ч мі!іт>лі«а тодеіі (фітела к тому, что в пасто.;,’.цеє прем.і населенно по своеіі структуре пренмуиісгтьснни гетерогенно. Гсиетіічсскиіі соеїчш популяции іпходнтся под иочдейпянсм Г-ИСІПНИХ шшяшііі, обусловленным М11грацііеіі II притоко:.! гсноз. Кроме того, происходила г.нугртіопуляц'лонная мінраі;:ія існ.и,. В течение отпоен гелмю длительного времени более приспособленные н более активные члены нопулапнн мигрировали из нзолотой а города и индусіриа’іьньїе центры. Для обозначения переноса генов из одіпй попуишши п другу іо часто пряменлегея термин “миграция". [! -таяагсемнческне мутации мигрировали вместе с субч.ч|\.-1чиичм1> лани ли группы и различимо оолаети страны. і!о:яому чистота (5

- т^іасесмии с»і'.-[е:с!!!.сгчусі не , ,;лл-о о продогламщемсн селекінтіом о кюре и.і

М.ЗЛЯрШО, :u' КНГЖО об ИХ (ЦЮПСХОЖДСГат ОТ ГОИОТИЧССКИХ 1Ю11)ЛМЦИИ.

Т!»..!1М оораюм, апде’н. P'i,bi.ni4.r«iUi mincicM аыдеклем ИС!ОГ«"‘ЛМ1\ ;l[H4'.i:CCO:i i.Ony.'lt'UIIO/IKoii ШМСМЧШЧПЛИ. i VlfC I il'IOCVoc cr.l\tci IX >

>«*AV'v i!Oiivji‘:mi>iMii tatCAc voieito объяснить с.чсдмоншч образом. Он.» ••loa.ct

- r\ ’ '

oip:i«c;ui> оСчиум неюр'чо tuix популяции с <>;nioii cioponu. С друз oil- такое сходсию mo'»:ci c!-i!;''uc:\!.o u;o»;in. о iiup;uijiuii.uoii изменчивоеut герофоцча популицпй под n.'iiitunicM iJiiOi'.itiiix условии. Гс'иетчссг-.ое рлдюоортне Mytaniiii n поиунчгши Таджикистана - si и результат Konicpi ei'uim i сноп ti лроцесге mmi рщип населении.

Cw.ci i'o муi л1;!к у гадки шп к (|р:;Гч>1! 'ю'а'и.) об-,,-снизь следу .щам o6paio;i. Тлглч1чн и араСш опюенгся к р.пимч ai hoc.im. Однако т<>,ч»mat, как изпестно, додо-.' i'pi.4"i находились я ccicrjiie арабкою xir".S;ira и, почому. uoin.v.Mio му-.атт у утих iupoa,oo «wee I wince Щ'онсхо "'деии','. Ho,

iot факт, 4io гннтинис муынно сцснлсим с разными i':irmoiiniavu cajpee cccro (oiiopiiro'ict.:, 4 io музадни гозтнит исзлиисиы» n каждой озде.и.т'и иенулшпн it гак начинаемой “i оричеи зечке* рекомбинации iuiyip<« клпегера (i - глсишюного

ГС1Ы.

t':icuii!!|i;>onKa данной мутации м се обнаружение n Таджикистане имеет как icopeinnecKtm интерес, так и практическую значимое».. С одной ciopoFibi, м\> исследование гтляетея иажшдм этапом а испо.з ьзонапин молскулярпо

- генетически* подходов для анализа популяции, о чаепюсгн для пенки

(аджиксгои nonyim.С .,ругои стороны, зная о 1ЦЩ1Ч1Ш д.чн/юи мутации и таджикской копуляции, можно применять предношенные нами методы быстрого тестирования дчх целей нрепагалыюи диагностики, чго имеет ьлжпос значение для профилактики ззого змтке.зого генетческот заболевания.

ВЫВОДЫ

1. 15 настоящей работе сформулирован общий методологический подход молекулярно-тепегмческого изучения р-талаессиин в Таджикистане, основанный ,iu исследовании разных уровней генной экспрессии.

I

2. Ппериые пропиленное исследование синтеза глобинових бедкон в резнкулоцн тах кроим и и клетках костного мозга у больных гомочигогнон [i - талэссемпеи m Тадяснкиеьчма позволило вшшмть. что осмсянои формой данного зиГмленлж"; п

республике является р* - талассемня, где синтез р - глобкновых цепей сохранен,

ксгх it резко подавлен. .. ;

3. Вьш.лена гетерогенность заболевания на молекулярном уровне, позволившая выделить две группы больных, характеризующихся умеренным и резким угнетением синтеза Р - глобннсвогобелка.

4. Поыпаио путем сопостазления данных по синтезу глобиновых цепей в клетках коспюго мозга и в ретикупоцитах крови, что у половишл пациентов дибаланс синтез’' белков в обоих типах клеток одинаков.

5. Исходя из экспериментальны:*. дачных, о иекьшем дисбалансе синтеза п'.обшювых цепей в клетках костного мозга по сравнению с клетками кропи у ряда нацистов, пыеказано мнение о нестабильности у них р - глобпнозой мРНК.

, „ .. м содержанием lib F в

6. Виявлемм случаи гомозиготной р - талассемии с низки

кроин (5-10% ) при значительном дисбалансе синтеза с - и Р - глобиновых цепей и выраженной продукцией у - глобнновых. цепей б клетка* хостпого мозга и ротикулоцнтах крош;. Высказано предположение о том, что у данных больных наряду с Р^-таласесмисй имеется нестабильность 7-глобииотдх белкон.

7. Разработан упрощенный карнант метода исследования синтеза глобнпон в

клетках костного мозга для определения генетических дефектов у больных Tan;icceM!iei(. ’ •' .

£. В результате анализа первичной структуры р - глобинового гена в обоих аллелях гена больного гомозиготной р - таласссмлси обнаружена гочкопая мутация G - С в последнем нуклеотиде пеього эхзона.

9. Дальнсйтш.й анализ данного участка р - гдоСшюкого гена выявил точковую замену С - G в яромоторной области в позиции ( -42 ), в результате которой нозннкает новый потенциальный сайт метилирования (Ср G ).

10. С помощью полимеразной цепной реакции и рестрикции, амшшфнцировашюго материала было проведено гаплотипированис дайной мутации. Оказалось, что данная мугация в таджикской популяции сцеплена с другим типом гаплогипа, ".то говорит о независимом, автохтонном происхождении мут;пиг«.

11. Обнаружение дну* типов мутаций о Таджикистане может помочь » разработке методов их быстрого тестиронани» для ucneii пр.'.наталькой дт-.i нчоики. что

имеет плжиое значение в плане профилактики такого тяжелого сенспиескот заОолеиания, ках талассемия.

CIIMCOIC ПУБЛИКАЦИЙ ПО TICME ДИССЕРТАЦИИ

I. Ню |)ori:i ФЛО., Алиеч К.Л. Биосинтез ци:е« гемоглобина человека при г» la.vjvimt И ДЛИ Твдж.ССР. - 1984. - Т.27, .Чз К. - С.470-477.

’. Насырова Ф.Ю. Анализ синтеза гемоглобина у больных Р-тзласссмнеи Н Тез. укладов PI ГПС молод, учен., посвящен. 60-лет Тадж.ССР. - i‘J85. - С.43.

I. Насырона ФЛО. Исследование Р-галассемки о Таджикистане // Тез. докладов ГНТК молод, учен., посвящен. Aft-лег ЛКСМ Тадж-иа. - 19X5. - Cui.

I. Насырова Ф.Ю.. Мирукилова А.М., Лш:кина Л.Л., Рыжова П.В., Лимборская С.А. Изучение особенностей экспрессии глобтюиых генои в клетках кропи больных ГОМОЗИГОТНОЙ P-T;lJKlCCev!lieii // Молекулярная генетики, микробиология, оирусология. - 1987. №8. - С.31-36.

5. Насыроиа Ф.Ю. Изучение гетерогенности биосинтеза глобшюаых белков у больных гомозиготной Р-таяасссмией из Таджикистана. - Автореферат дисе. канд. бнол. наук. Москва, 1987, - 17 с.

6. Насырона О.Ю., Мнракилова А.М., Рыжова И.Б., Лимборская С.А. Гетерогенность сш/теза глобиновых белков в клетках костного мозга Сольных гомозиготной р-талассемией из Таджикистана // Молекулярная генетика, микробиологии, вирусология. - 1988. - № 10. -С.М-<10.

/. Пасырова ФЛО., Лимборская С.Д. Способ определения генетических .тестов в клетках костного мозга человека Н Авторское свидетельство 1505190

(Приоритет от 06.06.R8).

Н. Иасыропа Ф.Ю., Раджабоз Х.М, Алиев К.А. Исследование Д111С эукариот методом “ геномной дактилоскопии" II Тез. докладов Респубп. коиф. Тадж. отделения Всесоюзн. Общества геиетиков и селекц. Им. II.И.Вавилова. - 1989. -0.41-42.

9. Пасырова Ф.Ю. Анализ молскулярио-генстнческих прнчин Р-талассемяи И Известия АН Тадж.ССР. - I990.-J£ I.-C.I0-20.

10. Насырова ФЛО., Рзджабов Х.М., Алиев К.А. Молекулярная генетика и медицина: возможности и перспективы // Здравоохранение Таджикистана. - 1990. -№6. -C.8-II.

11. Насырова Ф.Ю., Просняк М.М., Салимова З.Б., Насырова Л.Ю., Лимборская

С.А. Анализ гнпервариабельных участкоо ДНК человека п популяции Чадхнкистана // Тез. докладов I Всесоюзной конф. “Геном человека1', Москва. -1990. -С.175-176. ,

12. Nasyrovu I'.Yu., SalimovaZ.B. DNA “Fingerprinting": A new method of eucariotic genome identification // Тез. докладов Междунар. симпозиума молод, учен. “ Регуляния метаболизма", Варна, Болгария. - 1990. - С.50.

13. Насырова Ф.Ю., Раджабов Х.М., Салимова З.Б. Геномная дактилоскопия: новый метод выявления генетического портрета человека // Известия АН Тадж.ССР. Деп. в ВИНИТИ. - J991, № 4857-В91. - 8с.

М. Пасырона Ф.Ю., Миракнлова А.М., Рыжова К.Б, Особенности экспрессии

і лоошювых генов у Сольных р-талассемксй из Таджикистана // Тез. докл. 5 конф. биохимиков Средней Азии и Казахстана, Ташкент. - 1991. - С.ЗІ5.

(5. 1Іасирова Ф.Ю., Мкракнлова Л.М., Рыжова И.Б. Гетерогенность синтеза цепей гдобимойого белка в клетках крови Сольных гомозиготной р-таласссмисіі из Таджикистана // Сб. работ кафедры дсіск. болгяіеіі №2 ТГМИ “Актуальные ионросы наюл. новорожден, и детей ран. воз[>“.- 1991. - С. 121-130.

1(>. ! !с.сырова Ф.Ю., Федоров Л.П., Лимборская С.А. Молекулярный анализ \>-іа.ііассс.мнп б Ч'ад’-кикистане // Тез. докладов Бсесоюз». конференции Всссомзн. Обшесгва генетиков и сслскц. им.ІІ.ІІ.Вавнлова , Минск - 1992. - С.15'.).

і 7. Nasyrova I".Yu.. Feaorov A.N.. Rasulov A., Limborska S.A. Molecular analysis of itio fi-Thalasscmia in 2 Soviet populations // 17 [mwnat. Genet. Congress, USA. - 19 )5.

1X. Nasyrova F.Yu., Fedorov A.N., Limbor.ika S.A. IVS 1 (G-T) in combination with -■•12 (T G> in the promoter region of fl-riobin gene in patient from Tajikistan /7 ll<vno"!obin. - 19S3. - V.I7, # 3

19. Насырова Ф.ІО. Мо.тскулярчо-гене'гический анализ Р-тал ассем ни в Таджикистане // Ге’., доуп. 1 конф. Ассошіаціш ‘Жияцяпы науки Таджикистана". -! 996. - С.ЗН.