Микробиологические аспекты воспалительных процессов влагалища и создание лекарственных препаратов для их лечения

Янг, Альбертин

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Микробиологические аспекты воспалительных процессов влагалища и создание лекарственных препаратов для их лечения
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микробиологические аспекты воспалительных процессов влагалища и создание лекарственных препаратов для их лечения"

На правах рукописи

УДК 615.32:618.3:612-083

Янг Альбертин

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ ВЛАГАЛИЩА И СОЗДАНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ИХ ЛЕЧЕНИЯ

03. 00. 07 - Микробиология

15. 00. 01 - Технология лекарств и

организация фармацевтического дела

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1998

Работа выполнена в Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова, и в Московском городском противогерпетическом центре.

Научные руководители:

Заслуженный деятель науки РФ, Лауреат Государственный премии СССР, академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор А.А. Воробьев и кандидат фармацевтических наук, доцент ЛА. Павлова.

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор С .Д. Воропаева Доктор фармацевтических наук, К.С. Гузев

Ведущее учреждение:

Институт вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова РАМН

Защита состоится «16» июня 1998 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 074.05.10 при Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова по адресу: 119881, г. Москва, ул. Большая Пироговская, д. 2/6.

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова по адресу г. Москва, Зубовский пл., д.1.

Автореферат разослан «15» мая 1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук,

доцент А.Ю. Миронов

Актуальность темы: Проблема неспсЦифических вагинитов - одна из актуальных проблем связанных с гнойно-воспалительными процессами в гинекологической практике. Значение этой проблемы обусловлено с широким распространением этой патологии среди женщин репродуктивного возраста и тяжелыми осложнениями болезни- прерыванием беременности, хориоамниотитом, эндометритом, сальпингитом и др. Сложность борьбы с неспецифическими вагинитами заключается в том, что причиной их возникновения являются условнопатогенные микроорганизмы, входящие в состав нормофлоры влагалища. В большинстве случаев, невозможно определить этиологическую значимость определенного вида бактерий. К тому же многие стороны причины развития и патогенеза вагинитов остаются не выясненными.

Развернутое микробиолопгческое исследование, которое часто дает возможность определить нарушения микробиоценоза, применяется редко, вследст-вни сложности и высокой себестоимости. Проблема микробиологической диагностики осложняется также тем, что микробиоценоз влагалища представлен микст-культурой, в которой наряду с резидентной флорой, представленной лактобациллами, выделяются представ1гтели энтеробактерий, стафилококков, стрептококков, а также анаэробная флора.

[Краснопольский В.И., 1997; Прилепская В.Н., 1996; Vinvarsky Y.M., 1994] полагает, что гнойно-воспалительные процессы влагалища являются следствием более глубоких и общих причин, связанных с нарушением функции репродуктивных органов или нарушением микробиоценоза, вызванного эндогенными факторами. .

Принципы подхода к лечению вагинитов изменялись в зависимости от группы бактерий, претендующих на ведущую роль в патологии. Так, была использована парэнтеральная терапия, в которой применяли антибиотики эффективные против факультативных анаэробов: 0-лактамные, аминогликозиды и др. Однако, очень часто, введение этих препаратов способствовало хронизации процессов и частым рецидивам. Введение в практику антибиотиков активных в отношении строгих анаэробов - клиндамицина, линкомицина, препаратов нит-роимидазольного ряда значительно повысило процент излечиваемости вагинитов и снизило число рецидивов. Использовались также лекарственные препара-

ты для местного применения: Однако, несмотря на успехи в лечении вагинитов, они остаются длительно-текущими и трудно поддающимися лечению болезнями.

Это объясняется несколькими причинами: наличием или быстрым приобретением условно-патогенной флорой полирезистентности к антибиотикам и другим противомикробным препаратам, дисбиотическими нарушениями, возникающими под влиянием разнообразных факторов. Следствием этого является замена одного вида возбудителя на другой; неадекватная медикаментозная терапия, а также заболевания, связанные с гормональными нарушениями, иммунодефицитами, которые могут спровоцировать вагинит и т. д.

К хорошо зарекомендовавшим себя препаратам можно отнести: растворы протаргола, “хлорфиллипт”, настойку прополиса, витамины, эубиотики. Эффект действия этих препаратов усиливается при их сочетанном применении. Поэтому поиск новых антибактериальных препаратов для лечения вагинитов относится к числу актуальных задач медицины.

Цель исследования: Изучить антибактериальное и иммунокоррегирующее действие препаратов из лекарственного растительного сырья- “Томатола” и сан-гвиритрина. Разработать составы и технологию вагинальных суппозиториев содержащих сангвиритрин и “Томатол” и оценить их качество.

Задачи исследования:

1. Изучить микрофлору влагалища при гнойно-воспалительных процессах, провести идентификацию и определить этиологически-значимыс виды бактерий.

2. Определить чувствительность микробных изолянтов к антибиотикам и другим антибактериальным препаратам. Установить антибактериальный спектр действия “Томатола” и сангвиритрина.

3. Идентифицировать компоненты, ответственные за антибактериальное действие “Томатола”.

4. Изучить механизм действия “Томатола” и сангвиритрина методом электронной микроскопии.

5. Изучить влияние “Томатола” и сангвиритрина на Т-лимфоциты и полиморфно-ядерные лимфоциты (ПМЯЛ).

6. Разработать составы и технологию вагинальных суппозиториев с “Томатолом” и сангвиритрином.

7. Провести оценку качества полученных суппозиториев и оценить их антимикробное действие.

8. Оценить стабильность полученных препаратов в процессе хранения.

Научная новизна:

- Впервые установлена антибактериальная активность и спектр действия препарата растительного происхождения “Томатола”.

- Выявлены и идентифицированы составляющие “Томатола”, ответственные за антимикробное действие.

- Изучен механизм действия препаратов “Томатола” и сангвиритрина с помощью электронной микроскопии.

- Выявлена иммуномодулирующая активность “Томатола” и сангвиритрина на Т-лимфоциты и клетки фагоцитарного ряда.

- Разработаны составы вагинальных суппозиториев, содержащие “Томатол” и сангвиритрин и оценено их качество.

- Доказано наличие антибактериальной активности разработанных суппозиториев и их стабильность в процессе хранения.

Практическая значимость работы:

- Установлено, что штаммы бактерий, выделенные от больных с длительно-текущими гнойно-воспалительными заболеваниями влагалища, обратившихся в Московский городской противогерпетический центр, полирезистентны к антибиотикам.

- Практически все выделенные штаммы чувствительны к “Томатолу” и сангвиритрину в 93% и 97% случаев соответственно.

- На основании физико-механических, биофармацевтических и микробиологических исследований доказано, что разработанные составы вагинальных суппозиториев стабильны и обладают антибактериальной и фунгицидной активностью.

Внедпение в практику:

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно- исследовательских работ Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова по проблеме Научного Совета РАМН, комплексная тема которой состоит из двух частей: “Микроэкологические и иммунобиологические аспекты гнойновоспалительных заболеваний человека и животных” (№ 01970007154) и “Разработка и изучение новых лекарственных препаратов” (№ 01970007160).

Результаты исследований используются в практической работе лаборато рии микробиологии Московского городского противогерпетического центра, ; также при преподавании микробиологии и иммунологии в Московской меди цинской академии имени И.М. Сеченова.

Апробация работы:

Результаты диссертационной работы и основные положения диссертацш доложены и обсуждены на совместной конференции кафедр микробиологии вирусологии и иммунологии, общей фармацевтической и биомедицинской тех нологии и общей и неорганической химии Московской медицинской академш имени И.М. Сеченова, а также кафедры микробиологии биологического фа культета Московского Государственного Университета имени М.В. Ломоносов; (апрель 1998). Материалы диссертации также доложены на совместной конфе ренции в Московском городском противогерпетическом центре и представлень на конференции молодых ученых Российского университета дружбы народо) (май 1998).

Публикация:

По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ.

Структура и объем работы:

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментально! части (5 глав), заключения, выводов и списка литературы. Материал изложен н; 130 стр. машинописного текста, содержит 38 таблиц и 21 рисунок. Список ис пользованной литературы включает 230 работ, из них 135 русских и 95 зарубеж ных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования:

Для решения поставленных задач проведено обследование 79 женщин 1 возрасте от 17 до 46 лет, страдающих хроническими гнойно-воспалигельныш заболеваниями влагалища, обратившихся в Московский городской противогер пегаческий центр (МГПЦ). У пациентов исследовали качественный и количест венный состав влагалищного отделяемого с помощью бактериологического ме тода.

Для выделения энтеробактерий использовали среду Эндо и Левина. Окси дазо-отрицательные колонии идентифицировали на одноразовых системах АР 20 Е. Оксидазо-положительные грамотрицательные палочки идентифицировал! по схеме ЕШегоШЬе “ох1р11егш”. Для выделения стафилококков использовал!

желточно-солевой агар и молочно-солевой агар. Стрептококки выделяли на кровяном агаре. Видовую идентификацию стафилококков и стрептококков проводили по общепринятым методам, используя номенклатуру Берджи и сведения, обобщенные в руководствах по клинической микробиологии. Дрожжелодобныс грибы выделяли при посеве на среду Сабуро с последующей микроскопией мазков и идентификацией на API 20 С. Для выделения облигатных анаэробных микроорганизмов проводили посевы на гемагаре. Лактобациллы выделяли на среде МРС, а бифидобактерии на среде Блаурокка.

Дополнительными критериями диагностики были оценка микрофлоры при микроскопии вагинальных мазков, окрашенных по Граму, рН-метрия влагалищных выделений и наличие “ключевых” клеток при микроскопии влажных мазков апагхлищного отделяемого.

В работе изучали препараты растительного происхождения: “Томатол” -масляный экстракт мякоти томатов, полученный в лаборатории бактериологии Института физической химии АН РФ и сангвиритрин - представляющий собой сумму алкалоидов циклопентанпергидрофенантренового ряда, полученный экстракцией из травы маклеи (ВИЛАР).

Антибактериальную активность “Томатола” и сангвиритрина изучали на Escherichia coli (штамм АТСС 25922), Staphylococcus aureus (штамм АТСС 6538-Р), дрожжеподобных грибах Candida albicans (штамм АТСС 885-653) а также на выделенных от больных штаммах бактерий.

Антибактериальную активность “Томатола”, сангвиритрина, вспомогательных веществ и изучаемых лекарственных форм проводили с применением метода диффузии в агар. Минимальную подавляющую концентрацию “Томатола” определяли методом серийных разведений в бульоне.

Динамику действия “Томатола” и сангвиритрина на популяцию бактерий в зависимости от времени воздействия изучали на тест-штаммах Е. coli и St. aureus. Влияние “Томатола” и сангвиритрина на фагоцитарную активность проводили на беспородных белых мышах, с использованием Staphylococcus aureus (штаммы АТСС 6538-Р). Электронно-микроскопическое изучение действия “Томатола” и сангвиритрина проводили с использованием штаммов Escherichia coli (штамм АТСС 25922), Staphylococcus aureus (штамм АТСС 6538-Р) и Candida albicans (штамм АТСС 885-653). Для определения иммунологических показателей использовали экспресс-метод розеткообразования. Исходным материалом служила кровь обследованных. Для определения состояния кислородозависимой бактерицидности был применен метод В.Е. Пигаревского с расчетом среднего цитохимического показателя.

Идентификацию суммы органических кислот и суммы каротиноидов Е “Томатоле” и в его лекарственной форме (суппозиториях) проводили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) и УФ-спектрофотометрии. Методами высокоэффективной хроматографии (ВЭЖХ) и титрования определяли количественное содержание суммы каротиноидов и суммы органических кислот i “Томатоле”. Для идентификации и количественного определения сангвиритрина в субстанции и в лекарственной форме применяли цветные реакции, ТСХ и УФ-спектрофотометрию.

Суппозитории готовили методом выливания. В качестве основы использовали твердый жир марки А (ВФС 41-1117-81). Это продукт неполной гидрогенизации растительных масел (в основном- пальмоядрового), широко используется в фармацевтической и кондитерской промышленностях. В качестве поверхностно-активных веществ применяли моноглицеродистиллят (МГД-ТУ 10-0402-42-89), эмульгатор №1 (ФС 42-15-96-81), эмульгатор Т-2 (ФС 42-173-72) и твин-80.

Определение средней массы суппозиториев и отклонений от нее, температуры плавления лекарственной формы, времени полной деформации суппозиториев проводили по Государственной Фармакопеей XI изд (ГФ XI). Определение динамики высвобождения органических кислот “Томатола” и сангвиритрина из суппозиториев проводили по модифицированным методикам диализа через полупроницаемую мембрану.

Для определения общей микробной загрязненности и наличия санитарнопоказательных микроорганизмов в лекарственной форме пользовались стандартными методиками, изложенными в ГФ XI.

Все вспомогательные вещества и реактивы соответствовали нормативнотехнической документации.

Все полученные данные были обработаны программой STATISTICA foi Windows (Stat Soft, Inc. 1996).

Результаты исследования:

I. Характеристика микообиоценоза больных с неспецифическими гнойновоспалительными процессами влагалища

Микроскопическое исследование мазков влагалищного содержимого показало, что у 40% обследованных женщин отсутствовали явные признаки воспаления. Примерно у такого же количества больных наблюдались признаки вос-

паления средней степени, а у остальных обследованных наблюдалась выраженная воспалительная реакция.

Определение кислотности показало, что у 70% больных кислотность влагалищного содержимого снижена ( pH- 5,5-6), у 30% обследованных находилась в пределах нормы (pH- 4,5-4,8).

Гарднереллы в мазках были определены у 36,7% обследованных. Их присутствие определяли по “ключевым” клеткам, характерными признаками которых было наличие мелких грамвариабельных бактерий на клетках эпителия.

При бактериологическом обследовании было выделено 293 штамма бактерий и грибов, относящихся к 38 видам. Видовое соотношение выделенных штаммов указано в табл. 1.

Из полученных данных следует, что большинство выделенных штаммов (35,2%) относились к факультативным анаэробам (за исключением лахто и бифидобактерий). Лакто и бифидобактерии состаьляли 32,1% от общего числа микробных изолянтов.

Было установлено, что только у 26% обследованных пациентов, количество лактобактерий приближалось к обычной их концентрации наблюдаемой в норме и состагаяло 105-107 КОЕ/мл. У остальных больных их содержание было снижено (титр 102-104 КОЕ/мл), а у 24% обследованных лактобактерии практически не выделялись. Обращает на себя внимание редкое выделение в очень малых концентрациях аэробных видов лактобактерий. Бифидобактерии были выделены примерно у 50% больных, их количество в среднем составляло 102-103 КОЕ/мл.

Ведущее место в наших исследованиях, по частоте выделения занимали разные виды стафилококков. Всего было выделено 58 штаммов, что составляет 19,8% от общего количества.

Наиболее часто и в больших количествах (103-105 КОЕ/мл) обнаруживался St. epidennidis (34 штамма -14,8%). St. aureus выделялся значительно реже (5,%). Все исследуемые штаммы отличались ярко-выраженными признаками-гемолитической активностью, наличием плазмокоагулазы, лецитиназы, ферментацией маннита.

Штаммы бактерий относящихся к роду Streptococcus, были выделены в 5 случаях (1,7% общего количества). Почти все они относились к негемолитическим. Часто высевались Enterococcus - 7 изолянтов (2,7% общего числа).

Из энтеробактерий наиболее представительной группой оказалась Escherichia coii. Всего было выделено 13 штаммов (4,5%). Почти все выделенные штаммы имели свойства характерные для вида.

Таблица 1

Частота выделения и степень обсеменения микроорганизмов от больных

Вид микроорганизмов n Количество T 1 % к числу i Степень обсеме-|

штаммов i штаммов » нения

Staphylococcus aureus h 1S—+- 5.0 Т зломо4

St. epidermidis 43 ! 14,8 ! 102-1,5.10s

Enterococcus faecalis 5 ! 2,0 ! з.ю2-ю4

Enterococcus faecium 2 ! 0,7 ! ю2~ю3

Streptococcus, haemolyticus 2 ! 0,7 | 7.102

Str. non haemolyticus з ! 1,0 ! -

Escherichia coli 13 i 4,5 ! З.102-4.103

Hafnia alvei 2 ! 0,7 1

Klebsiella pneumonia i ! 0,3 ! -

Acinetobacter cloacea з ! 1,0 1 2.102-3,8.102

Proteus mirabilis i ! 0,3 1

Bacillus cereus l ! 0,3 ! -

Micrococcus luteus 2 1 0,7 1

Serratia fonticola l ! 0,3 1

Pseudomonas shigelloides l ! 0,3 ! бо

Ps. putida l ! 0,3 ! ю6

Ps. pseudomonalli l ! 0,3 1

Ps. passimobilis i ! 0,3 ! 40

Ps. aeruginosa l ! 0,3 ! ю4

Ps. fluorescens l ! 0,3 ! 2,5. Ю4

Ps. неопределенны з ! 1,0 )

Candida albicans 13 ! 4,5 ! ю5

C. guillermondii l ! 0,3 ! ю3

C. krusei 2 ! 0,7 ! 1,8. ю3

C. tropicalis з ! '■ 1,0 ! 2.103

Lactobacteria spp. 57 ! 19,5 ! юМо8

Bifidobacteria spp. 37 ! 12,6 ! ю2-юб

Clostridium spp. l ! 0,3 ! ю3

Gardnerella spp. 22 ! 7,5

Peptococcus spp. 7 ! 2,4 !

Peptostreptopcoccus spp. 4 ! 1,4 ! -

Bacteroides spp. 24 ! 8,2 1

Veillonella spp. 2 ! 0,7 ! -

Mobuluncus spp. 3 1 1,0 1

Neisseria gonorrhoeae 2 ! 0,7 ! 2,2.103 I

неопределенны 12 ! 4,1 1 1 “

К редко выделяемым видам можно было отнести Klebsiella pneumonia (0,3%), Proteus mirabilis (0,3%), Acinetobacter cloaceae (1,0%), Hafnea alvei (0,7%).

Они высевались в основном у лиц с выраженными воспалительными яилении-ми. Штаммы бактерий, относящиеся к роду Pseudomonas отличались большим разнообразием видов. Из 9 случаев обнаружения бактерий этого рода было идентифицировано 7 различных видов.

Дрожжеподобные грибы рода Candida выделялись в 6,5% случаев. Ведущее положение занимали С. albicans (13 штаммов), идентифицированы были также С. tropicalis, С. krusei и С. guillermondii.

Анаэробную группу бактерий наиболее часто представляли различные виды Bacteroides и Gardnerella (8,2% и 7,5% от общего количества). Представители родов Peptococcus, Peptostreptococcus, Veilonnella и Mobuluncus выделялись значительно реже.

Анализ микробиоценозных ассоциаций бактерий выделенных при вагинальных исследованиях показал, что в среднем, из материала выделяли по 4 вида ассоциантов. Однако при статистическом анализе было установлено, что отдельные ассоциации микробов сопровождались определенными видами бактерий. Так, строгие анаэробы в количествах превышающих нормобиоз (J О3-104 КОЕ/мл) в 85-90% сопровождались дефицитом лакто и бифидобактерий. Наиболее часто анаэробные ассоциации сопровождали St. epidermidis и негемолитические стрептококки. Количество лейкоцитов в мазках показывало почти полное отсутствие воспалительной реакции. Увеличение лейкоцитоза наблюдалось при повышении количества ассоциантов до 103 КОЕ/мл, особенно это относилось к представителям рода Enterobacteriaceae. Примерно такая же картина наблюдалась у больных в мазках которых были обнаружены “ключевые клетки”. Видовой состав был более разнообразным и иногда включал до 3х различных видов. В 60% случаев количество лейкоцитов составляло 1-2 клетки в поле зрения, что говорит о невыраженное™ воспалительной реакции. При наличии нескольких ассоциантов и повышении их количества более чем 103-104 КОЕ/мл, наблюдалось резкое обострение воспалительной реакции- количество лейкоцитов у таких больных составляло 30-50 клеток в поле зрения.

В тех случаях, когда от больных были выделены различные виды грибов рода Candida, изменения микробиоценоза имело другой характер. Достаточно низкий титр лактобактерий (104-105 КОЕ/мл) наблюдался только у 25-30% обследованных, количество ассоциантов составляло 3-4 вида, и в подавляющем большинстве, они относились к факультативным анаэробам. Облигатные анаэробные бактерии выделялись крайне редко. Во многих случаях было достаточно трудно определить вид ведущего микроорганизма, так как в количественном отношении ассоциации часто превосходили род Candida и их количество со-

сташшло 105-108 КОЕ/мл. Дрожжеподобные грибы высевались не более чек 103 КОЕ/мл. Наличие С. albicans без сопутствующей флоры (за исключение», лактобактерий) наблюдали только в одном случае. Воспалительные процессь вызванные грибами рода Candida носили умеренный характер.

Дальнейший анализ ассоциации где ведущую роль в поддержании воспалительной реакции могли играть бактерии рода Staphylococcus, Escherichia Pseudomonas, Proteus, Klebsiella и др. не выявил никаких закономерностей. Активность воспалительного процесса зависела от числа выделяемых видов, количества бактерий определенного вида и степени количественного изменения резидентной микрофлоры.

Определение соотношения между количеством лактобактерий и наличие?* других видов в количествах способных вызвать воспалительный процесс, показало, что почти полное отсутствие или очень низкий титр лактобактерии чащ< наблюдается при наличии большого количества облигатных анаэробов, в тол числе и гарднерелл. Из факультативных анаэробов при низком пире лактобактерии чаще выделялись St. epidermidis, Streptococcus, Micrococcus, Pseudomonas Для бактерий из семейства Enterobacteriaceae, грибов рода Candida и St. aureu это не было определяющим признаком и они высевались в достаточно большш количествах при нормальном или несколько сниженном титре лактобактерий.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлены изменения в микробиоценозе влагалища при хронических гнойно-воспалительны.' процессах, которые согласуются с данными литературы.

2. Антибактериальная активность ‘Томатола” и сангвишггоина in vitro

Результаты изучения антимикробной активности “Томатола” показали чтс препарат имеет достаточно выраженное инактивирующее действие на стандартные тест-штаммы (табл. 2). При сравнении антибактериальной активности различных серий “Томатола”, была доказана практически полная идентичность го активности. Дальнейшие эксперименты показали, что антимикробная активность “Томатола” связана с его водорастворимыми фракциями.

Полученные данные показывают, что активность 20% раствора водное вытяжки соответствует 0,05% раствору сангвиритрина.

При определении минимально-подавляющей концентрации “Томатола” у его водного извлечения на лабораторные и клинические штаммы микроорганизмов было установлено, что их различие незначительно. Это свидетельствуе] о полном переходе антимикробного фактора в водную фазу.

Таблица 2

Оценка антибактериальной активности “Томатола”

Исследуемые вещества

Культуры микроорганизмов St. aureus I Е. coli i С. albicans Зоны задержки роста, мм

“Томатол” Масляный остаток Водное извлечение

Г 39±0.2 і 1 1 36±0,2 35±0,2

100% ! 34±0,2 ! 35±0,6 30±0,1

50% ! 30±0,4 | 32±0,1 28±0,6

40% ! 28±0,б ! 30±0,4 24±0,6

30% і 25±0,3 і 24±0,2 20±0,2

20% і 19±0,2 I 20±0,1 18±0,1

10% I ! — —

5% і I » — і — —

1% Т 23±0,6 Т 26±0,2 г 32±0,6

0,5% ! 20±0, і ! 24±0,5 30±0,4

0,1% ! 18±0,4 ! 21±0,8 26±0,7

0,05% ! 15±0,2 ! 18±0,2 19±0,3

0,01% ! 13±0,4 1 16±0,5 16±0,1

0,001% 1 1 —

Сангвиритрин водный раствор

Контроль (вода)

Дальнейшими экспериментами было доказано, что в отношении клинических штаммов значение минимальной подавляющей концентрации сохраняется и составляет 0,3г “Томатола” (разведение водной вытяжки в соотношении 1:8).

Антимикробный фактор “Томатола” стабилен, что было доказано изучением антимикробной активности “Томатола” при его хранении (t=5±2°C) в плотно укупоренных склянках оранжевого стекла.

Изучение динамики действия “Томатола” на тест-штаммы Е. coli и St. aureus показало, что максимальная гибель бактерий наблюдается в первые два часа, в дальнейшем этот процесс замедлялся. Полное исчезновение популяции происходило через 8-10 часов.

В процессе определения антимикробного фактора “Томатола”, было установлено, что pH его водных вьпяжек составляет 3,0-3,3 и не меняется при изучении этого показателя у разных серии средства. С помощью методов ТСХ и прямого титрования в водной фракции “Томатола” выявлено наличие комплекса органических кислот, среди которых превалируют винная, лимонная, янтарная (табл. 3). С наличием этих кислот связана, по видимому антимикробная активность препарата. Их содержание в среднем составило 4,87+0,19%, что укла-

дывается в допустимые погрешности титрометрического метода анализа. Анализ содержания карогиноидов показал, что содержание ликопина составило

4,5±0,25%, р-каротина - 0,5±0,01%.

Таблица 3

Идентификация органических кислот в “Томатоле”

№ Т~ Раствор, наносимый на линию | старта Т *ш* 1 1 1 ) Примечание 1 1

1 ТРаствор винной кислоты (1%) 1 1 Т 0,70 1 > 1 1 Посторонних пя-! тен, характери! зующих продукты

2 1 Раствор лимонной кислоты (1%) ! 0,86 1 разложения или

3 1 Раствор янтарной кислоты (1%) ! 0,94 1 посторонние при-

4 « Водная вытяжка из “Томатола” 1:10 1 1 1 0,70; 0,86; 0,94 I 1 1 меси не обнару-1 жено

♦ЯГ - отношение расстояния от стартовой линии хроматогрммы до центра пятна данного вещества в любой момент времени к расстоянию, пройденному за-тоже время фротом растворителя.

Сравнительное определение чувствительности к антибиотикам, “Томатолу” и сангвиритрину проводилось на штаммах бактерий, выделенных от больных с длительно текущими воспалительными процессами, проходившими курсы лечения общепринятыми препаратами.

Из полученных данных следует, что процент устойчивых изолянтов для общепринятых антибиотиков колеблется от 33 до 76%. Максимальное число устойчивых штаммов (50-70% от числа обследованных) было выявлено в отношении таких антибиотиков как неомицин, пенициллин, ристомицин, новобиощш, метициллин. Следует отметить, что более половины выделенных видов бактерий были устойчивых к таким антибиотикам как доксициклин, цефтазидин, цефу-роксин считающихся высокоактивными в отношении условно-патогенных бактерий и широко рекомендуемых для использования при гнойно-воспалительных процессах влагалища.

Заслуживает особого внимания тот факт, что более 30% выделенных стафилококков были устойчивы к метициллину. Известно, что устойчивые к этому антибиотику штаммы обладают широким спектром устойчивости к другим группам антибиотиков, особенно к полусинтетическим пенициллинам и цефа-лоспоринам. Подобное широкое распространение метициллиноустойчивых стафилококков необходимо учитывать при бактериологических обследованиях и при определении стратегии лечения.

Так же необходимо учитывать, что применение такого высокоэффективного препарата как ципрофлоксацин может не привести к положительному результату и еще более осложнить дисбиотические явления, т.к. согласно нашим данным, 1/3 выделенных штаммов были устойчивы к этому препарату. Наиболее эффективным в наших исследованиях оказался, несмотря на длительный срок применения в медицинской практике, гентамицин: 70% выделенных штаммов были чувствительны к нему. Чувствительность бактерий к препаратам этой же группы (неомицину и канамицину) составила 51% и 43%, соответственно.

По нашим данным, определение чувствительности к лекарственным препаратам “Фарматекс”, “Бетадин”, “Полижинакс”, которые являются в последнее время наиболее часто рекомендуемыми для лечения кольпитов, показало, что количество чувствительных к ним штаммов составляет 48-53%.

Данные, полученные при изучении чувствительности различных видов грибов рода Candida (С. albicans, С. krusei и С. tropicalis) к различным лекарственным формам, содержащим клотримазол, показали различные результаты в зависимости от происхождения и видовой принадлежности штамма (табл. 4).

Таблица 4

Сравнительная оценка антибактериальной активности препарата клотримазола,

__________________________caj inn И{жгри_н^ _________________________

Лекарственные Т n Т Культуры микроорганизмов

I |----------------------------------,---------------,-----

препараты i i С. albicans (АТСС) i С. albicans т С. tropicalis i С. krusei

! j__________________________________!_J_____________I_____

! i Зоны задержки роста в мм

Точрто л Уб ±0 Т :ТЭШХ:Т““3[^Г”Т"30±0,3”'

~Сангвир!ггр_и_н Т _12Т_37±0i5_~~~__|___33^ю23 "Г 30±0,2 "^_J2±0,4 '

Таблетки по 0,1 гТ 7 Т 19+0,2 Т 19+0,4 Т 16±0,2 "I" 12±0,3

клотр!мазола [ ! ! ! !

^^11]^а_Полфа)____1___!___________________1___________j__________________j_____

Кремы 1% клот- I 8 I 20±0,4 > 1б±0,5 i 12+0,3 i 10±0,2

римазола (Фирма ! ! ! I !

Лолфа)____________1___L___________________1___________1_____________I__________

Раствор 1% 17 1 23±0,2 Т 21+0,3 Т 20±0,5 Т 15+0,4

клотримазола ] ] j ] |

_(Ф)Ц52ла_Полфа^__j___|___________________[___________J__________________[_____

Из полученных данных следует, что все лекарственные препараты активно подавляли рост контрольного тесг-штамма, при этом зона задержки роста составляла 23,5±0,2 мм. Чувствительность изолянтов, выделенных от больных, была иной. Из данных табл. 4 следует, что активность различных препаратов в отношении клинических штаммов рода Candida снижалась по сравнению с тест-культурой на 20%- 50%. В наших исследованиях большей активностью обладала

лекарственная форма в виде раствора, так как к этой форме лекарственного препарата устойчивых изолянтов выявлено не было. Наименьшей активностью обладал клотримазол, входящий в состав различных мазевых основ.

Изучение антимикробного спектра “Томатола” и его антибактериальной активности показало, что этот препарат обладает широким спектром действия по отношению к различным видам бактерий и дрожжеподобным грибам. Число чувствительных к “Томатолу” штаммов составляло 93%, что намного превышает этот же показатель у других использованных антибактериальных препаратов. Активность “Томатола” при анализе размеров зон задержки роста для различных видов микроорганизмов характеризовалась значительным постоянством (табл. 5).

Таблица 5

Антимикробная активность “Томатола” к штаммам выделенных от больных

Штаммы (род) 1 Количество штаммов (n) Зоны задержки роста (X+m)

Staphylococcus 45* h 20+0,3

Streptococcus 9 20±0,1

Enterobacteria 14 22+0,2

Pseudomdnas 8 14±0,1

Candida 15 21±0,6

Serratia 1 -

Bacillus 1 -

Micrococcus 1 -

Clostridium 1 -

Bacteroides 3 21±0,5

Acinetobacter 3 19±0,6

Neisseria 2 23±0,5

Итого 1 160 h 20±0,3

Из данных табл. 5 следует, что “Томатол” обладает выраженной антибактериальной активностью независимо от родовой принадлежности штамма. Об этом свидетельствует средние диаметры зон задержки роста (20,3 мм) и малые значения ошибки определения. Несколько лучшие результаты получены по отношению к сем. Еп1егоЬас1епасеае. Меньшая активность препарата наблюдалась в отношении р. Р.чеиботогш (14 мм), что вероятно, связано с присущей для этого рода природной устойчивостью. Активность “Томатола” против облигатных анаэробов ничем не отличалась от других видов бактерий. Одними из самых чувствительных к “Томатолу” оказались кандиды (21 мм), при этом эффективность действия препарата превосходила действие раствора клотримазола, который в настоящее время считается одним из самых надежных препаратов для

борьбы с кандидозами.

Спектр действия и чувствительность к сангвиритрину различных видов полирезистентных штаммов микроорганизмов была такой же как к “Томатолу” (Табл. 6). При этом процент чувствительных штаммов составил 97%, диаметры зон задержки роста для микробов определенного вида отличались стабильностью размеров, различие по чувствительности отдельных видов составило от 42 до 13%. Однако, в отличие от “Томатола”, сангвиритрин проявлял более низкую активность против грамотрицательных бактерий (зоны 13-15мм). Эффект его действия на облигатные анаэробы был значительно ниже.

Проведенными исследованиями выявлено, что как “Томатол”, так и сангвиритрин обладают значительной антимикробной активностью. Доказано, что антимикробный фактор “Томатола”, являющийся суммой органических кислот, стабилен.

Таблица 6

Антибактериальная активность сангвиритрина

Штаммы (род) Т Количество штаммов (п) Зоны задержки в мм (X±m)

Staphylococcus 21 27±0,7

Streptococcus 7 310,3

Enterobacter 11 15±0,5

Pseudomonas 8 13+0,3

Serratia 1 -

Bacillus 1 -

Micrococcus 1 -

Clostridium 1 -

Bacteroides 3 14+0,2

Acinetobacter 3 13±0,1

Candida 12 21+0,5

Итого 69 19±0,2

3. Электоонно-микгюскопическое изучение действия “Томатола” и сангви-

Электронно-микроскопическое изучение механизма действия сангвиритрина и “Томатола” позволило установить, что контакт препаратов с клетками микробов вызывал изменения ультраструктуры бактерий несовместимые с их жизнедеятельностью. Так, действие сангвиритрина на клетки стафилококков характеризовалось нарушениями процесса деления и постепенной деструкцией клеточной стенки. Более значительные деструктивные процессы происходили в цитоплазме и оценивались нами как внутриклеточный лизис и дезинтеграция нуклеоида. В клетках кишечной палочки также наблюдались подобные процес-

сы, приводящие к исчезновению большей части цитоплазматического содержимого и нитей дезоксирнбонуклеотида. Candida albicans после контакта с сангви-ритрином изменяла свою форму, увеличившаяся клеточная стенка занимала большую часть клетки и теряла характерную структуру, цитоплазма превращалась в гомогенное образование в которой нельзя было различать отдельные структуры.

Эксперименты по изучению антимикробного механизма действия “Томатола” показало, что ультраструктурные изменения микроорганизмов вне зависимости от вида характеризовались однотипными изменениями. Глубокие деструктивные процессы наблюдались в цитоплазме. Она была локализована в центральной части клетки, рибосомальные гранулы и элементы нуклеоида не выявлялись. Большинство бактерий имели вид разбухших мешочков, лишенных цитоплазмы. В дальнейшем у таких структур клеточная стенка лизировалась и они исчезали.

4. Влияние “Томатола” и сангвиритоина на Т-лимФопиты и полиморфноядерные лимфоциты

Сангвиритрин оказывал влияние на фагоцитарную активность и переваривающую способность (табл. 7).

Таблица 7

Показатели фагоцитоза после введения сангвиритрина

Доза 1 Фагоцитарные показатели

препарата і г 1 п ФАЛ Т ФЧ Г Г М±ш 1" р< Tn Т Mini і р< і п ПЗФ T M+m T P<

Контроль ; ю Г54,5±0,5Т - TlO Г 4,410,1 Т - Т 10 T 30,8±1,2~Г -

0,125 і 10 ! 57,5±0,7 і 0,001 ! 10 1 4,6+0,1 ! 0,001 і 10 j 39,2±1,6 j 0,001

0,25 I 10 ! 71,0+2,3! о.ооі! ю ! 4,5±о,і ! о.ооі ! ю 1 46,5±0,9 ! 0,001

0,5 і ю ! 74,5±1,S 1 0,001 ! 10 ; 5,4±0,1 ! 0,001 і 10 ! 59,59±0,9! 0,001

Усиление фагоцитирующей активности зависело от концентращш препарата. Наиболее эффективной была доза 0,25 мг/мл при которой активность возрастала на 19%. Использование более низких или высоких концентраций сангвиритрина не вызывало подобного эффекта. Переваривающая способность не зависела от концентрации и увеличивалась на 18% с повышением дозы в два раза.

При действии “Томатола” на фагоцитоз наблюдали увеличение фагоцитарной активности прямо-пропорционально концентрации препарата на 28% -35% (табл. 8). Заметного увеличения переваривающей способности при всех используемых дозах не зарегистрировано. Фагоцитарные показатели перитонеаль-

ных фагоцитов после 3 часов контакта увеличивались на 15%-22%. После 1,5 часовой экспозиции, показатели завершенности фагоцитоза, при действии как и

“Томатола” так и сангвирігтрина, увеличивались незначительно.

Таблица 8

__________________________________________________________________________

Доза \ Через 1,5 часа

препарата Ґ 1 Фагоцитарные показатели

І ФАЛ Г ФЧ Т ПЗФ

і п і M±ni і р< і п і М±ш і р< п М±т і V О.

Контроль 1 6 24,8±0,7 1 1 у*- 1 л ^ ( | ^ і і 6 і 2,1±0,1 і і 6 h47,0±5,4T

6,25 ! б 34,8+1,7 ! о,ооі ! 6 ! 2,з±о,о ! 0,05 ! 6 54,1±3,2 ! 0,05

12,5 ! 6 54,0+4,3 ! о,ооі! 6 ! з,ою,4 ! 0,05 ! 6 50,0±4,3 ! 0,01

25 ! 6 64,4+8,4 ! о.ооі ! 6 ! 4,9±о,б ! о,оо1 ! 6 51,0±2,0 ! 0,05

Через 3 часа

Контроль і 6 і 25,1+2,3 і і 6 1 2,3+0,1 і і 6 52,8±1,5 і

6,25 ! 6 41,3±1,4 ! 0,001 ! 6 ! 2,2+0,0 ! 0,05 і 6 51,8±2,9 ! 0,05

12,5 ! 6 68,8±2,7 ! 0,001 ! 6 ! 4,9+0,4 ! 0,001 ! 6 56,8±4,1 ! 0,05

25 ! б 81,0±1,6 j_o,ooi ! 6 ! 5,8±о,з ! 0,001 ! 6 64,2±2,lJ_ 0,001

Изучение бактерицидное™ фагоцитирующих клеток по состоянию кислородозависимых систем (ЦПА-НСТ тест) показало, что сангвиритрин не только стимулирует рецепторы нейтрофилов но и повышает качественные характеристики эффективности фагоцитарных реакций (Рис. 1).

Концентрация сакгвиркгрина

: В Н Ш НСГ ІШ ТЛ

Рис: 1. Влияние сангвирігтрина на активности Т-лимфоцитов и ПМЯЛ in vitro.

Как и сангвиритрин, “Томатол” также оказывал влияние на иммуноком-пстентные клетки. Однако его эффект на изучаемые клетки имел некоторые особенности. Так “Томатол” практически не оказывал влияния на розеткообразующую активность Т-лимфоцитов. Правда, в ряде случаев отмечалось некоторое усиление активности Т-лимфоцитов, эти индивидуальные отличия исчезали при усреднении результатов опытов. Наиболее заметное активирующее влияние “Томатола” наблюдали в отношении рецепторного аппарата нейтрофилов. Усиление активности нейтрофилов зависело от концентрации препарата и составляло от 57% при максимальных концентрациях (10"1) до 46% при минимальных (10‘4). Изменение НСТ-ЦПА теста практически не наблюдалось (Рис. 2).

Установлено, что иммуностимулирующая активность сангвиритрина и “Томатола была более выражена при низкой исходной активности фагоцитарных клеток. Из приведенных данных можно сделать заключение, что оба исследуемые препарата как сангвиритрин, так и “Томатол” обладают активирующим влиянием на процессы фагоцитоза и иммуностимулирующим действием.

О 0.0001 0.001 0.01 0.1

Концентрация Томатола"

Рис: 2. Влияние “Томатола” на активности Т-лимфоцитов и ПМЯЛ in vitro.

5. Разработка технологии суппозиториев с “Томатолом” и сангвиритоином. Выбор суппозиториев как лекарственной формы проводили на основании особенности строения поверхности влагалища, характера воспалительного процесса, физико-химических свойств лекарственных веществ и перспективности

данной лекарственной формы при лечении воспалительных заболеваний влагалища.

Расчет дозы “Томатола” и сангвиритрина проводили на основании минимально-подавляющей концентрации. С целью получения систем, устойчивых как во время технологического процесса, так и хранения, а также для более равномерного распределения активного начала по слизистой в влагалище, в состав суппозиторной массы вводили поверхностно-активные вещества (ПАВ): МГД, твин-80, эмульгаторы №1 и Т-2 в количестве 2%.

Анализ композиций проводили по антибактериальной и фунгицидной активности, по внешнему виду и при микроскопии.

Кроме того, принималась во внимание и стабильность смесей в расплавленном виде. Если эмульгаторы № 1 и Т-2 способствовали лучшему высвобождению “Томатола" и образованию однородной массы, то твин-80 и МГД инактивировали его. Сангвиршрин практически одинаково хорошо высвобождался из суппозиторной массы, однако наилучшее высвобождение отмечалось в случае введения эмульгатора Т-2.

Для изучения характера взаимодействия лекарственных веществ с используемым ПАВ, использовали в качестве дисперсионной среды растительные и минеральные масла и глицерин. Из всех исследуемых составов, только соевое масло при смешивании с “Томатолом” образовывало устойчивую суспензионную систему. При использовании МГД и твин-80 образовались крупные агломераты, не исчезающие со временем. С эмульгатором № 1 и Т-2 образовались однородные кристаллы. Однородную взвесь удалось получить в случае взаимодействия сангвиритрина с соевым и оливковым маслами при соотношении 1:3-1:5.

На основании этих результатов были выбраны следующие составы суппозиториев:

Томатол - 10 частей Масло оливковое — 20 частей Эмульгатор №1-2 части Твердый жир — 68 частей

Сангвиритрин — 0,3 части Масло оливковое — 0,9 части Эмульгатор №1-2 части Твердый жир — 96,8 части

Томатол - 10 частей Масло оливковое — 20 частей Эмульгатор Т-2- 2 части Твердый жир — 68 частей

Сангвиритрин — 0,3 части Масло оливковое — 0,9 части

Томатол - 10 частей Масло соевое — 22 части Твердый жир — 68 частей

Эмульгатор Т-2 - 2 части Твердый жир — 96,8 части

Суппозитории готовили по следующей схеме: 1) Подготовка лекарственных, вспомогательных веществ и оборудования, 2) подготовка суппозиторной массы (диспергирование лекарственных веществ в маслах, диспергирование полученной смеси в расплаве твердого жира), 3) формирование суппозиториев и упаковка суппозиториев.

6. Опенка качества полученных суппозиториев

Оценка качества полученных суппозиториев проводили по их антибактериальной и фунгицидной активности с одной стороны, а с другой по следующим показателям: средняя масса и отклонение от нее, внешний вид, температура плавления, время полной деформации, перекисное число, наличие и содержание лекарственных веществ в суппозитории, кинетика высвобождения активного вещества из суппозиториев, микробная чистота, стабильность.

Полученные суппозитории имели равномерно окрашенный вид с ровной блестящей поверхностью. Средняя масса полученных суппозиториев составляла: для суппозиториев с “Томатолом” 3,05±0,14 и 3,04±0,13; для суппозиториев с сангвиритрином 2,98+0,12 и 2,97±0,11 соответственно для эмульгаторов №1 и Т-2. Средняя масса суппозиториев “Томатол”-соевое масло-твердый жир составляла 3,04±0,11.

Температура плавления суппозиториев и время полной деформации не выходили за пределы требований ГФ XI изд (табл. 9).

Таблица 9

Оценка качества полученных суппозиториев

Наименование Т Температура Т I плавления С) ! Время полной деформации (мин) Перекисное число (П.Ч)

Состав 1 Т 36,6+0,2 Т 7,2+0,3 г 0,52

Состав 2 1 36,8+0,2 ! 7,6+0,4 0,48

Состав 3 1 36,2+0,2 ! 6,5+0,4 0,50

Состав 4 ! 36,4+0,2 ! 8,0+0,3 0,046

Состав 5 ; зб,5+о,2 : 1 1 8,3+0,5 0,045

Количественное определение суммы органических кислот “Томатола” в суппозиториях проводили методом титрования. Содержание органических кислот составляло 0,0113410,0007, ликопина-0,01135+0,0008. Количество сангви-ритрина в суппозиториях (по методике с применением УФ спектрофотометрии, при длине волны 470+2 нм) составляло 0,0998+0,005. Результаты исследований, приведенные в табл. 10 свидетельствуют о сохранении антибактериальной и фунгицидной активности лекарственных веществ в суппозиториях.

Таблица 10

Антибактериальная активность суппозиториев с “Томатолом” и сангвиритрином

Состав Культуры микроорганизмов

В. subtilis 1 Е. соїі і P. aeruginosa і S. aureus Г С. albicans

Зоны задержки роста в мм

N 1 Г 26,8 ±1,9 f 33,5 ±1,2 Г 22,5 ±1,9 Т 25,2 ±1,5 Г 28,0 ±1,2

N 2 ! 27,2 ±1,1 1 1 36,3 ±1,2 ! 23,0 ±0,7 ! 26,7 ±0,9 ! 28,1 ±1,4

N 3 | 22,4 ±1,3 ! і 27,7 ±0,9 ! 20,8 ±1,9 ! 24,6 ±1,0 ! 24,6 ±0,9

N 4 ! 27,3 ±0,6 і і 35,1 ±1,1 і 22,1 ±0,9 ! 33,1 ±1,2 ! 363 ±0,9

N 5 1 25,2 ±0,7 і і 33,3+1,2 ! 26,1 ±1,1 ! 32,1 ±0,8 ! зз,і ±і,з

Изучение кинетики высвобождения лекарственных веществ из суппозиториев свидетельствует о пригодности эмульгаторов №1 и Т-2 для получения суппозиториев с “Томатолом” и сангвиритрином, так как за единицу времени, высвобождается достаточное количество активного вещества, обладающее высоким антибактериальным действием (табл. 11).

Таблица 11

Кинетика высвобождения лекарственных веществ из суппозиториев “Томатола” и сангвиртрина на тест-штаммы Е. Coli

Время, часы Г Наименование композиции

Состав 1 Т Состав 2 Г Состав З Т Состав 4 Г Состав 5

I------------1____________і______________і_____________і-----------

і Диаметр окрашенной зоны, мм

1 —1 г- 1 - 1 12,1+0,5 Г 12,2±0.3 Т - “

2 ! 11,2+0,4 ! 14,5±0,5 ! 13,1±0,4 ! 12,4+0,4 14,3±0,5

3 ! 14,4±0,3 ! 17,3+0,4 ! 15,2±0,5 ! 15,4+0,3 15,2±0,5

4 ! 15,2±0,3 і 19,1+0,7 ! 18,5+0,6 I 17,2+0,8 18,1+0,4

5 ; 17,4±0,5 j 20,2±0,4 і 21,3±0,4 ! IS,2+0,7 21,2±0,9

6 ! 20,1+0,6 ! 24,5±0,1 ! 24,6±0,7 ! 20,2+0,6 24,5+0,1

12 j 20,6+0,7 і 24,8±0,3 і 26,1+0,4 і 27,6+0,5 26,8+0,3

24 ! 21, 1±0,3 1 26,3±0,2 ! 30,0+0,2 ! 31,1±0,3 29,4±0,6

J_________ I I

Микробная обсемененность суппозиториев с “Томатолом” и сангвиритрином, т.е содержание микробов в 1г лекарственной формы соответствовала требованиям ГФ XI изд, так как в 1 грамме содержалось менее 20 бактерий и не было обнаружено грибов.

Стабильность полученных суппозиториев с “Томатолом” и сангвиритрином изучали в течение 12 месяцев (срок наблюдения) при хранении их при температуре (1=5±2°С) в упаковке из поливинилхлоридной пленки.

Данные хроматографических исследований свидетельствовали об отсутствии посторонних примесей и продуктов разложения лекарственных веществ в суппозиториях в процессе хранения. Такие показатели качества, как температура плавления, время полной деформации, перекисное число и содержание действующих веществ в процессе хранения практически не изменяются, не происходит также изменения антибактериальной активности.

Таким образом, изучение микробного пейзажа влагалища при вагинозах и вагинитах показало, что превалирующая при этом микрофлора в значительной своей части не чувствительна к антибиотикам и противобактериальным препаратам. Это дало основание изучить в качестве новых антибактериальных препаратов природного происхождения. “Томатол” и сангвиритрин оказывали широкое антибактериальное действие на клинические штаммы бактерий и грибов, а также иммуностимулирующее действие на клетки иммунной системы. На основе “Томатола” и сангвиритрина разработаны состав и технология получения суппозиториев, изучены свойства лекарственной формы в процессе производства и хранения. Сделано заключение о их эффективности и целесообразности дальнейшего изучения для клинического применения при вагинитах и вагинозах.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Микробиологическое обследование больных с воспалительными заболеваниями нижнего отдела женских половых органов показало значительные видовые и количественные нарушения микробиоценоза влагалища, характерные как для вагинитов, так и для вагинозов.

2. Штаммы бактерий, выделенные от больных характеризующиеся высокой полирезистентностью к антибиотикам, в 93% были чувствительны к “Томатолу” и 97% к сангвиритрину.

3. Установлено, что антибактериальная активность “Томатола” связана с комплексом органических кислот, состоящим из смеси лимонной, янтарной и винной кислот в количестве 4,87±0,19%.

4. Электронной микроскопией показано, что действие сангвиритрина основано на деструкции нуклеоида с последующим лизисом цитоплазматического содержимого клетки. Органические кислоты, входящие в состав “Томатола”, приводят к нарушению функции мембранных белков с последующим набуханием микробной клетки и исчезновением цитоплазматических структур.

5. Применение “Томатола” приводит к повышению функциональной способности ПМЯЛ, что проявляется в увеличении числа фагоцитарно-активных

ШгГОК и повышению их поглотительной способности. Действие “Томатола” связано с активацией мембранных рецепторов нсйтрофилов.

6. В экспериментах in vitro показано, что сангвиритрин блокирует рецепторы Т-лимфоцитов, не нарушая их жизнедеятельности, а также увеличивает переваривающую способность нейтрофилов, стимулируя образование перекиси водорода.

7. Показана возможность создания вагинальных суппозиториев антибактериального и фунгицидного действия с “Томатолом” по 0,3 г и сангвиритрином по 0,01г на основе твердого жира с включением эмульгаторов №1 и Т-2. На основании биофармацевтических исследований выбраны составы и разработана технологическая схема их получения.

8. Методом ТСХ доказана сохранность сангвиритрина и органических кислот в процессе получения суппозиториев. Содержание органических кислот в суппозиториях, определяемое титрометрически составило, 0,01134+0,0007 г.; сангвиритрина, определенное методом УФ-спектрофотометрии при Х=470± 2 нм- 0,0998±0,005. Методом ВЭЖХ доказана стабильность ликопина и определено его содержание в суппозиториях — 0,01 г.

9. Суппозитории с содержанием “Томатола” и сангвиритрина по своим фармакологическим, физическим и физико-химическим свойствам удовлетворяют требованиям ГФ XI изд. Доказана стабильность суппозиториев в процессе хранения (t=5±2'C) в течение 12 месяцев.

Список опубликованных работ по материалам диссертации:

1. Изучение антибактериальной активности масляного экстракта из мякоти томатов. (Соавт.: Воробьев А.А., Селезнев А.С., Павлова JI.A. и др.). Материалы VII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. М.: 1997, с. 283.

2. Экспериментальная оценка антибактериальной активности Масляного экстракта мякоти томатов. (Соавт.: Воробьев А.А., Селезнев А.С., Павлова J1.A. и др.). ЖМЭИ. М.: 1998, № 6.

3. Изучение и идентификация антибактериального фактора “Томатола” . (Соат.: Воробьев АА, Павлова JI.A,, Селезнев А.С. и др.). Антибиотики и химиотерапии. М., 1998.

4. Характеристика микробиоценоза больных с неспецифическими гнойновоспалительными процессами влагалища. (Соавт.: Воробьев А.А., Селезнев А.С.,

Семенова Т. Б. и др.). Пятый Российский Национальный Конгресс “Человек и лекарство”. М.: 1998, с. 190.

5. Изучение антимикробного действия “Томатола” на условно-патогенные бактерии, выделенные от гинекологических больных. (Соавт.: Воробьев А.А., Селезнев А.С., Семенова Т.Б. и др.). Пятый Российский Национальный Кон-1ресс “Человек и лекарство”. М.: 1998, с. 190.

6. Изучение иммуномодулирющей активности препаратов сангвиритрина и “Томатола”. (Соавт.: Воробьев А.А., Селезнев А.А., Павлова Л.А. и др.). Пятый Российский Национальный Конгресс “Человек и лекарство”. М.: 1998, с. 248.

7. Сравнительное изучение качества препаратов для интравагинального введения. (Соавт.: Павлова Л.А., Шоболов ДЛ., Грецкая Т.Н. и др.). Пятый Российский Национальный Конгресс “Человек и лекарство”. М.: 1998, с. 663.

8. Изучение влияния вспомогательных веществ на антибактериальное действие “Томатола”. (Соавт.: Ершова Н.Н., Павлова Л.А., Селезнев А.С. и др.). Пятый Российский Национальный Конгресс “Человек и лекарство”. М.: 1998, с. 673.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Янг, Альбертин

Введение.

I. Обзор литературы

1. Нормальная микрофлора влагалища и факторы влияющие на неё

2. Неспецифические воспалительные процессы влагалища и причины их возникновения

3. Принципы лечения неспецифических гнойно-воспалительных процессов влагалища

4. Применение в лечебной практике антисептических и антиоксидантных средств

5. Формы готовых лекарственных препаратов для местного лечения вагинозов

II. Материалы и методы исследований

2.1. Краткая характеристика веществ и материалов используемых в работе

2.2. Методы бактериологического анализа исследуемого материала

2.3. Методы определения антибактериальной активности "Томатола", сангвиритрина и антибиотикочувствительности выделенной флоры "in vitro"

2.4. Методика электронного микроскопического изучения действия "Томатола" и сангвиритрина

2.5. Методика изучения действия "Томатола" и сангвиритрина на фагоцитарные реакции и иммунокомпетентные клетки

2.6. Методы идентификации действующих веществ "Томатола" в субстанции и в суппозиториях

2.7. Методы идентификации и количественного определения сангвиритрина в субстанции и в суппозиториях

2.8. Методы исследования физико-механических, физико-химических и биофармацевтических свойств полученных суппозиториев

2.9. Методика контроля микробного обсеменения готовых лекарственных форм

III. Результаты собственных исследований

3.1. Характеристика микробиоценоза больных с неспецифи ческими гнойо-воспалительными процессами влагалища

3.2. Антибактериальная активность "Томатола" и сангвиритрина и антибиотикочувствительность выделенной флоры

3.3. Определение антибактериального фактора "Томатола"

3.4. Электронно-микроскопическое изучение действия "Томатола" и сангвиритрина

3.5. Изменение фагоцитарных реакции перитонеальных фагоцитов под влиянием "Томатола" и сангвиритрина

3.6. Изучение иммуномодулирующего действия

Томатола" и сангвиритрина

3.7. Разработка состава и технология вагинальных суппозиториев с "Томатола" и сангвиритрина

3.8. Оценка качества изготовленных суппозиториев

3.9. Исследование стабильности "полученных суппозиториев с "Томатолом" и сангвиритрином в процессе хранения

Введение Диссертация по биологии, на тему "Микробиологические аспекты воспалительных процессов влагалища и создание лекарственных препаратов для их лечения"

Актуальность темы: Проблема неспецифических вагинитов - одна из актуальных проблем связанных с гнойно-воспалительными процессами в гинекологической практике. Значение этой проблемы обусловлено широким распространением этой патологии среди женщин репродуктивного возраста и тяжелыми осложнениями болезни- прерыванием беременности, хориоамниотитом, эндометритом, сальпингитом и др. Сложность борьбы с неспецифическими вагинитами заключается в том, что причиной их возникновения являются условно-патогенные микроорганизмы, входящие в состав нормофлоры влагалища. В большинстве случаев, невозможно определить этиологическую значимость определенного вида бактерий. К тому же многие стороны причины развития и патогенеза вагинитов остаются не выясненными.

Развернутое микробиологическое исследование, которое часто дает возможность определить нарушения микробиоценоза, применяется редко, вследст-вии сложности и высокой себестоимости. Проблема микробиологической диагностики осложняется также тем, что микробиоценоз влагалища представлен микст-культурой, в которой наряду с резидентной флорой, представленной лак-тобациллами, ' выделяются представители энтеробактерий, стафилококков, стрептококков, а также анаэробная флора.

В различные периоды изучения данной проблемы отдельные группы бактерий претендовали на роль ведущих- сначала это были стафилококки, потом большое внимание стали уделять энтеробактериям. В последнее время важное значение придают анаэробной микрофлоре, хламидиям и микоплазмам. Вместе с тем, большинство авторов полагает, что гнойно-воспалительные процессы влагалища являются следствием более глубоких и общих причин, связанных с нарушением функции репродуктивных органов или нарушением микробиоценоза, вызванного эндогенными факторами.

Принципы подхода к лечению вагинитов изменялись в зависимости от группы бактерий, претендующих на ведущую роль в патологии. Так, была использована парэнтеральная терапия, в которой применяли антибиотики эффективные против факультативных анаэробов: р-лактамные, аминогликозиды и др. Однако, очень часто, введение этих препаратов способствовало хронизации процессов и частым рецидивам. Введение в практику антибиотиков активных в отношении строгих анаэробов - клиндамицина, линкомицина, препаратов нит-роимидазольного ряда значительно повысило процент излечиваемости вагинитов и снизило число рецидивов. Использовались также лекарственные препараты для местного применения. Однако, несмотря на успехи в лечении вагинитов, они остаются длительно-текущими и трудно поддающимися лечению болезнями.

Это объясняется несколькими причинами: наличием или быстрым приобретением условно-патогенной флорой полирезистентности к антибиотикам и другим противомикробным препаратам, дисбиотическими нарушениями, возникающими под влиянием разнообразных факторов. Следствием этого является замена одного вида возбудителя на другой; неадекватная медикаментозная терапия, а также заболевания, связанные с гормональными нарушениями, имму-иодефицитами, которые могут спровоцировать вагинит и т. д.

В последнее время, в лечении вагинитов наблюдается тенденция к поиску новых препаратов антибактериального действия, которые бы наряду с достаточно высокой активностью, незначительно влияли на резидентную микрофлору и в тоже время способствовали созданию условий для нормализации микробиоценоза. К хорошо зарекомендовавшим себя препаратам можно отнести: растворы протаргола, "хлорфиллипт", настойку прополиса, витамины, эубиотики. Эффект действия этих препаратов усиливается при их сочетанном применении. Поэтому поиск новых антибактериальных препаратов для лечения вагинитов относится к числу актуальных задач медицины.

Цель исследования; Изучить антибактериальное и иммунокоррегирующее действие препаратов из лекарственного растительного сырья- "Томатола" и сангвиритрина. Разработать составы и технологию вагинальных суппозиториев содержащих сангвиритрин и "Томатол" и оценить их качество.

Задачи исследования:

1. Изучить микрофлору влагалища при гнойно-воспалительных процессах, провести идентификацию и определить этиологически-значимые виды бактерий.

2. Определить чувствительность микробных изолянтов к антибиотикам и другим антибактериальным препаратам. Установить антибактериальный спектр действия "Томатола" и сангвиритрина.

3. Идентифицировать компоненты, ответственные за антибактериальное действие "Томатола".

4. Изучить механизм действия "Томатола" и сангвиритрина методом электронной микроскопии.

5. Изучить влияние "Томатола" и сангвиритрина на Т-лимфоциты и полиморфно-ядерные лимфоциты (ПМЯЛ).

6. Разработать составы и технологию вагинальных суппозиториев с "Томатолом" и сангвиритрином.

7. Провести оценку качества полученных суппозиториев и оценить их антимикробное действие.

8. Оценить стабильность полученных препаратов в процессе хранения.

Научная новизна:

- Впервые установлена антибактериальная активность и спектр действия препарата растительного происхождения "Томатола".

- Выявлены и идентифицированы составляющие "Томатола", ответственные за антимикробное действие.

- Изучен механизм действия препаратов "Томатола" и сангвиритрина с помощью электронной микроскопии.

- Выявлена иммуномодулирующая активность "Томатола" и сангвиритрина на Т-лимфоциты и клетки фагоцитарного ряда.

Разработаны составы вагинальных суппозиториев, содержащие "Томатол" и сангвиритрин и оценено их качество.

Практическая значимость работы:

- Практически все выделенные штаммы чувствительны к "Томатолу" и сангвиритрину в 93% и 97% случаев соответственно.

Положения, возвинутые автором на защиту: 1) результаты исследований по составу микрофлоры влагалища, 2) антимикробная и иммуностимулирующая активность "Томатола" и сангвиритрина, 3) физико-химические и биофармацевтические исследования по разработке составов и технологии суппозиториев с "Томатолом" и сангвиритрином для лечения воспалительных процессов влагалища.

Настоящая работа является частью комплексного исследования и выполнялась совместно с кафедрами микробиологии и технологии готовых лекарственных форм ММА имени И.М. Сеченова и московским городским противо-герпетическим центром.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Янг, Альбертин

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

2. Штаммы бактерий, выделенные от больных характеризующиеся высокой полирезистентностью к антибиотикам, в 93% были чувствительны к "Томатолу" и 97% к сангвиритрину.

3. Установлено, что антибактериальная активность "Томатола" связана с комплексом органических кислот, состоящим из смеси лимонной, янтарной и винной кислот в количестве 4,87±0,19%.

4. Электронной микроскопией показано, что действие сангвиритрина основано на деструкции .нуклеоида с последующим лизисом цитоплазматического содержимого клетки. Органические кислоты, входящие в состав "Томатола", приводят к нарушению функции мембранных белков с последующим набуханием микробной клетки и исчезновением цитоплазматических структур.

5. Применение "Томатола" приводит к повышению функциональной способности ПМЯЛ, что проявляется в увеличении числа фагоцитарно-активных клеток и повышению их поглотительной способности. Действие "Томатола" связано с активацией мембранных рецепторов нейтрофилов.

7. Показана возможность создания вагинальных суппозиториев антибактериального и фунгицидного действия с "Томатолом" по 0,3 г и сангвиритри-ном по 0,01г на основе твердого жира с включением эмульгаторов №1 и Т-2. На основании биофармацевтических исследований выбраны составы и разработана технологическая схема их получения.

8. Методом ТСХ доказана сохранность сангвиритрина и органических кислот в процессе получения суппозиториев. Содержание органических кислот в суппозиториях, определяемое титрометрически составило, 0,01134±0,0007 г.; сангвиритрина, определенное методом УФ-спектрофотометрии при Х,=470± 2 нм- 0,0998+0,005. Методом ВЭЖХ доказана стабильность ликопина и определено его содержание в суппозиториях — 0,01 г.

9. Суппозитории с содержанием "Томатола" и сангвиритрина по своим фармакологическим, физическим и физико-химическим свойствам удовлетворяют требованиям ГФ XI изд. Доказана стабильность суппозиториев в процессе хранения (t=5±2°C) в течение 12 месяцев.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Нормальной микрофлоре влагалища принадлежит значительная роль в функционировании органов малого таза, а ее нарушение часто приводит к тяжелым последствиям. В виду того, что микробиоценоз влагалища не ограничивается одними лактобациллами, в этом биотопе возникают сложные взаимоотношения между различными группами микроорганизмов. Эти отношения чаще имеют симбиотический характер, однако в следствии нарушения видового и количественного соотношения они могут приобретать антагонистический характер. В результате нарушения микроэкологии влагалища и в следствии экзо-и эндогенных воздействия около 50% обратившихся в лечебное учреждение женщин страдают неспецифическими гнойно-воспалительными процессами. В настоящее время имеется большой выбор антибиотиков и схем лечения подобной патологии. Однако не смотря на достаточно разнообразный арсенал лекарственных средств, проблема неспецифических воспалительных процессов влагалища остается далеко от разрешения.

В наших исследованиях было установлено, что у 67% женщин страдающих длительно текущими неспецифическими воспалительными процессами влагалища, наблюдается различной степени тяжести нарушения микробиоценоза. Из чего можно сделать заключение, что дисбиотические нарушения являются одной из ведущих причин воспалительных процессов.

Штаммы бактерий выделенные в ходе исследования отличались значительным разнообразием и чаще относились к факультативным анаэробам. Наиболее часто высевались стафилококки и бактерии кишечной группы. В следствие того, что от одного больного высевались примерно 3-4 ассоцианта, было достаточно сложно определить ведущую роль одного из этих видов. Исключение составляли, несмотря на их количественное содержание, такие бактерии как Candida, Pseudomonas, Proteus, Escherichia, Klebsiella.

Общим свойством всех выделенных изолянтов была полирезистентность. Выделенные штаммы бактерий были устойчивы в 60-70% случаев к наиболее часто используемым в практике антибиотикам. Полученные данные говорят о том, что использование антибиотиков при неспецифических воспалительных процессах влагалища может приводить к хронизации процесса и угрозе последующих рецидивов.

Учитывая эти обстоятельства, следует признать целесообразным комплексное лечение, включающее не только антибактериальное и фунгицидное, но и противовоспалительное, репаративное и иммуностимулирующее действие, которое не только бы устраняло этиологический фактор, но и создавало бы условля для нормального развития нормофлоры. В полной мере этому требованию, по нашему мнению, удовлетворяют комплексные препараты биологически активных веществ и лекарственного растительного сырья.

В экспериментах, исследовали такие препараты как "Томатол" - экстракционный препарат получаемый экстракцией органическими растворителями высушенной мякоти томата, содержащий сумму каротиноидов и сангвиритрин -экстракционный препарат из растений Рарауегасеае, являющийся суммой би-сульфатных алкалоидов сангвиринарина и хелеритрина. Можно ожидать не только антимикробное влияние этих препаратов, но и другие фармакологические эффекты, так как в их состав входят различные соединения.

Исследование показало, что оба препарата обладают выраженным антибактериальным эффектом и имеют широкий спектр действия. Экспериментально установлено, что практически все штаммы бактерий, как и лабораторные, так и клинические чувствительны к этим препаратам независимо от вида. С помощью физико-химических методов, установлено что основным антимикробным компонентом "Томатола" является сумма органических кислот. Электронная микроскопия позволила установить механизм действия изучаемых препаратов, который у сангвиритрина по нашему мнению связан с деструкцией нуклеоида, а у "Томатола" с разрушением мембранных структур. Можно предположить обладая подобными механизмами действия изучаемые препараты не могут вызывать селекцию устойчивых популяции, так как известно, что к ДНК и мембранотропным антибиотикам резистентных штаммов образуются меньше, чем к другим препаратам.

Установлено, что кроме антибактериального действия "Томатол" и сангвиритрин обладают иммуностимулирующей активностью, это было доказано в экспериментах на клетках крови человека и животных. Эксперименты показали, что этот эффект у обоих препаратов, связано с активацией фагоцитарной системы. Однако если сангвиритрин стимулировал фагоцитарную и переваривающую активность, то действие "Томатола" заключалось в повышении количества захваченных фагоцитам бактерий. Так как фагоцитарная система является одним из участников местного иммунитета, использование препаратов вызывающих ее активацию должно привести к более эффективному терапевтического результату. Известно, что у хронических больных неспецифическими воспалительными процессами наиболее часто оказывается снижена функция макро-фагальной системы.

Вместе с установленными антибактериальными и иммуностимулирующими действиями, "Томатол" по нашему мнению должен обладать еще радом эффектов. Это предположение основано в том, что в состав препарата в большом количестве входят каротиноиды, которым в последнее время придают большое значение, в связи с их антиоксидантным действием. Установленным фактом является то, что каротиноиды нейтрализуют действие образующихся в результате "окислительного взрыва" свободных радикалов и предупреждают процессы перекисного окисления липидов, которой в следствиях хронического воспаления превращается в основной механизм деструкции клеток организма, тем самым снижается способность тканей к регенерации. Так же установлено, что каротиноиды способствую восстановлению в тканях межклеточных связей. Это свойство представляет большой интерес в связи с тем, что можно использовать "Томатола" при лечении генитальных инфекций, вызванных вирусом простого герпеса. Одним из условий трансформации клеток этим вирусом, является нарушение структуры бляшек адгезии, что приводит к не ориентированному росту.

Разработка технологии получения суппозиториев содержащих сангвирит-рин и "Томатол" показала, что для данной лекарственной формы большое значение имеет состав веществ входящих в их композиции. Было установлено, что введение в состав суппозиторной массы поверхностно-активных веществ как моноглицеродистиллята и твин-80, в значительной степени ингибировало антибактериальную активность и отрицательно влияло на физико-химические и физико-механические свойства препаратов. Использование эмульгаторов N 1 и Т-2 способствовали лучшему высвобождению "Томатола" и сангвиритрин. В выбранной дисперсионной среде (соевое масло и оливковое масло) только эти ПАВ дали хорошие результаты.

Оценка качества полученных суппозиториев показала что полученные суппозитории удовлетворяют требований ГФ XI изд. Изучение кинетики высвобождения показало, что за единицу времени, высвобождается достаточное количество вещества для того что бы обладать антимикробным действием.

Стабильность полученных суппозиториев с "Томатолом" и санпшрнгрн-ном изучали в течение 12 месяцев (срок наблюдения) при хранении их при температуре (1=5±2°С) в упаковке из полившшлхлоридной пленки. Данные хроматографических исследований свидетельствовали об отсутствии посторонних примесей и продуктов разложения лекарственных веществ в суппозиториях в процессе хранения. Такие показатели качества, как температура плавления, время полной деформации, перекисное число и содержание действующих веществ в процессе хранения практически не изменяются, не происходит также изменения антибактериальной активности.

Таким образом, изучение микробного пейзажа влагалища при вагинозах и вагинитах показало, что превалирующая при этом микрофлора в значительной своей части не чувствительна к антибиотикам и противобактериальным препаратам. Это дало основание изучить в качестве новых антибактериальных препаратов природного происхождения. "Томатол" и сангвиритрин оказывали широкое антибактериальное действие на клинические штаммы бактерий и грибов, а также иммуностимулирующее действие на клетки иммунной системы. На основе "Томатола" и сангвиритрина разработаны состав и технология получения суппозиториев, изучены свойства лекарственной формы в процессе производства и хранения. Сделано заключение об их эффективности и целесообразности дальнейшего изучения для клинического применения при вагинитах и вагинозах.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Янг, Альбертин, Москва

1. Авакян А.Г., Степанян Е.Г., Тарасова Е.О./Содержание органических кислот в плодах томатов и томатном соке в зависимости от биологических особенностей сорта.//Госагропром Арм. ССР.:1987.- №12. - с. 29-33.

2. Айрапетян A.A., Акопян Г.С., Дилбарян A.C. И др. Бактерицидное, дезинфицирующее и токсическое действие виннокаменной кислоты.//Сб.: Актуальные вопросы краевой инфекционной патологии. вып. 8.- 1988. - с. 5-7.

3. Акопян Т.Э. Бактериальный вагиноз и бактериальный кандидоз у беременных (диагностика и лечение). Дисс. канд. мед. наук. М.:1996. - 141с.

4. Ананикян П. П. Мази из малочнокислой бактерии штамма 317/402 и продуктов их метаболизма//Актуальные вопросы акушерства.- Ереван: 1987.- с. 1017.

5. Анарбаева P.M. Разработка составов, технологии и исследование суппозиториев для гинекологической практики: Дисс. канд.фарм.наук. М.:1992. - 150 с.

6. Анисимова Е.В., Гуляев А.Е., Карлинский М.В. и др. Система выбора антибиотиков при инфекции с внутриклеточной локализацией возбудителя, хим-фарм. журнал.- 1997,- №. 31.- с. 11-12.

7. Анкирская A.C. Бактериальный вагиноз//Акушерство и гинекология. -1995. № 6. -с. 13-16.

8. Антимикозный тампон с высоким выделением действующего начала. Заявка ФРГ № 320 4124 МКИ А 61 К 31/41.

9. Антонова J1.B. Острые воспалительные заболевания придаток матки (этиология, клиника, диагностика, терапия). Дис. д-ра мед. наук. М.: 1990. -340 с.

10. Ахрарова JI.M., Кизыма J1.M. /Лактобактерии как средство восстановительных процессов самоочищения влагалища при вульвовагините.//Тезисы докладов IX Всесоюзного съезда дермато- венерологов (23-27 сент.). М.: 1991. -с. 35-37.

11. Бабаев И.А., Алиев А.М. Комплексонометрическое определение сангви-ритрина в лекарственных препаратах//Фармация. Алма-Ата: 1985. - с. 109-110.

12. Бабин В.Н., Домарадский И.В., Дубин A.B., Кондракова O.A. Биохимические и молекулярные аспекты симбиоза человека и его микрофлоры. Рос. хим. ж. (Ж. Рос. О-ва им. Д.И. Менделеева). 1994г.- т. 38.- №. 6. - с. 15-18.

13. Бабин В.Н., Домарадский И.В., Дубин A.B., Кондракова O.A. Новые подходы к разработке лекарственных средств. Фармация, М.:1995, №5. с. 15-18.

14. Байрамова Г. Р. Клинические особенности и эффективность различныхметодов терапии бактериального вагиноза: Автореф. дис. канд. мед. наук. М.: 1996. - 25с.

15. Баклаенко Н.Г., Прилепская В.И. Лечение вульвовагинитов препаратом "Клион- Д" //Новые возможности лечения гинекологических заболеваний. Мат. Симпоз. 25 мая 1984, М.: 1984. с. 6-9.

16. Бакрадзе М.М. Экспериментальное и клиническое изучение нового вагинального противозачаточного препарата "трацептин". Автореферат дисс. канд. мед. наук, Тбилиси: 1974. 19 с.

17. Биоантиоксидант: междунар. симпоз. в рамках междунар. выст. "Медицина и охрана здоровья. Медтехника и аптека". Под ред. Н.М. Сторожок. Тюмень: 1997. 247 с.

18. Бодия В.М. Исследования и разработка технологии получения полиэти-леноксикдов и суппозиториев на их основе: Авторефер. дисс.канд. фарм. наук. Харьков: 1982. 18 с.

19. Бодяжина В.И., Сметник В.П., Тумулович Л.Г. Неоперативная гинекология. Руководство для врачей. М.: Медицина, 1990. 543 с.

20. Бодяжина В.И., Жмакин К.Н., Кирюшенков А.П. Акушерство: Учебник для студентов мед. институтов. Курск: 1995. 496 с.

21. Бухарцева Е.В., Кивманта Шуб. Т.А. Микробная загрязненность суппозиториев; возможность их деконтаминации, хим-фарм. журнал. 1995.- Т. 29. - № 11.- с. 61-63.

22. Быков A.C., Бычканова С.А., Селезнев A.C. Электроно-микроскопическое изучение действия сангвиритрина на микроорганизмы в опытах "in vitro "/Антибиотики. 1983. Т. 28. -№.6-- с.421-424.

23. Васильев М.М., Тулайнова И.К., Нарзыкулов P.M. Лечение метронидазо-лом больных вагинитом/Вестник дерматологии и венерологии. М.: 1990. Ni 6. - с.65-68.

24. Вершинин А.О., Камнев А.Н. Механизмы противоопухолевой активности каротиноидов. Вопрос мед. химии. 1996. - т 2/3. - с. 275-277.

25. Виртанен С., Виртанен Р. К вопросу о микрофлоре влагалища и прямой кишки при кольпитах./Акуш. и гинекол. М.:1974. - № 4. - с. 68-71.

26. Вишняк Г.Н., Щербина Л.Г., Вернадская Г.П. Лечение язвенно-некротических стоматитов сангвиритрином/Клиническая стоматология. Ташкент. 1985. - с.13-14.

27. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1988. - 52 с.

28. Волков И.М. Методы и средства предупреждения беременно-сти//Фельдшер и акушерство 1991. - N° 10. - с. 54-57.

29. Воропаева С.Д., Гуртовой B.JL, Кулаков В.И. Применение антибиотиков в акушерстве и гинекологии. М.: Русфармамед 1990. 140 с.

30. Воспаление. Руководство для врачей./Под ред. В.В. Серова, B.C. Паукова. -М: Медицина, 1995. 640 с.

31. Государственная Фармакопея СССР XI издания: в 2-х т. М.: Медицина. - 1990

32. Гонский Я.И., Корда М.М., Клищ И.Н. и др. Коррекция диметилсуль-фоксидом и а-токоферолом нарушений окислительных процессов при остром хроническом поражении печени. 1996. - Т. 43. - с. 330-333.

33. Гончарова ГИ., Грачева Н.М., Бевз Н.И. и др. О лечебно-профилактических свойствах мякого сырья "Айболит"/Медицинские аспекты микробной экологии/. М.: 1992. с. 86-87.

34. Гусакова-Федорова H.H., Селезнева Е.Д. Лечение эрозий шейки матки облепиховым маслом.//Акуш. и гин. 1985. - № 5. - с. 57-58.

35. Гуськова Т.А., Пушкина Т.В., Радкевич Т.П. Возможность развития дис-бактериоза при использовании лекарственных средств различных фармакологических групп. Хим- фарм. журнал. -1997. Т. 31. - № 7. - с. 10-11.

36. Деминов О.Н., Бондарев Н.Э., Кира Е.Ф. Применение эубиотиков в акушерстве и гинекологии.//Материалы 12- й научной конференции молодых ученых и специалистов академии. Спб. 1992.- 44 с.

37. Дерешин А.Т. Системно-структурный подход к сексуальным нарушениям при хронических воспалительных заболеваниях внутренних гениталий у женщин. Пятигорск: 1992. с. 31.

38. Дорофейчук В.Г., Петрова Н.З. Антимикробные вещества растительного происхождения.//Современные направления создания и оценки качества готовых лекарственных препаратов антибиотиков и антимикробных веществ: Тез. докл. всес. конф. М.: 1990. - с.57-58.

39. Достижения в области фармацевтического и химико-токсикологического анализа. Сб. под ред. Арзамасцева А.П. М.: 1991. 153 с.

40. Жукова О.С. Иммунокоррекция в комплексной терапии воспалительных заболеваний внутренних половых органов женщин: Автореф. дис.докт. мед. наук./Киев НИИ педиатрии, акушерства и гинекологии им. П. М. Буйко. Киев: 1988. 38 с.

41. Заболевания передаваемые половым путем 333 миллиона новых излечимых случаев в 1995г. Пресс-релиз ВОЗ. 25.08.95. ЗППП 1995. - № 5. - с. 81-82.

42. Ивченко В.Н., Мельчик В.М Применение метронидазола и его аналогов в хирургии: обзор.//Клинич. хирургия. 1983. - №. 1. - с. 45-48.

43. Камия Тэциро, Хара Кэедзи. Пат. № 61-125410, Япония.//Кокай токке кохо. Сер. 3 /2/. - 1987. - № 9. - с. 101-106.

44. Капитанов А.Б. Биологические проблемы старения и увеличения продолжительности жизни. М.: Наука, 1988. 52 с.

45. Капитанов А.Б., Пименов А.М Каротиноидов как антиоксидантные модуляторы клеточного метаболизма.//Успехи современной биологии. 1996. -Вып. 2. -Т. 116. - с. 179- 190.

46. Кейт Л.Г., Бергер Г.С. Причины инфекционных заболеваний органов малого таза.// Репродуктивное здоровье. Общие инфекции. М.: Медицина, 1988. -с. 270-293.

47. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз.//Акуш. и гин., М.: 1990. № 8. - с. 10-12.

48. Кира Е.Ф. Лечение бактериального вагиноза.//Акушерство и гинекология. М.: 1993. №5.- с.39-41.

49. Кира Е.Ф., Кочерова В.И., Поспелова В.В., Ханина Г.И.//Применение Эубиотиков для лечения бактериального вагиноза./Антибиотики и химиотерапия. М.:1994. Т.39. - № 2-3.- с. 31-35.

50. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз (клиника, диагностика и лечением/Автор. дисс. докт. мед. наук. М.: 1995. 44 с.

51. Кирющенков А. Бактериальный вагиноз и генитальный канди-доз.//Клиническая лекция. Журнал врач. № 11.- 1993.- с. 11-13.

52. Копылова И.Е., Маслова Г.А., Перельсон М.Е. Количественное определение сангвиритрина в траве маклеи денситометрическим методом.//Химико-фармацевтический журнал. 1981. - №2. - с. 67-69.

53. Копылова И.Е., Маслова Г.А., Перельсон М.Е. Применение хроматоспек-трофотометрического метода для количественного определения сангвиритрина в траве маклеи.//Химико-фармацевтический журнал. 1980. - №1. -с. 58-62.

54. Коршиков Б.М., Макарова Г.В. Лекарственные свойства сельскохозяйственных растений. Минск: Уражай. - 1985. - с. 22-25.

55. Красильников А.П. Справочник по антисептике. Мн.: Выш. школа, 1995. - 367 с.

56. Крохмаль Г.Ю. Профилактика нарушений функций репродуктивной системы женщин, индуцируемых эколого-профессиональными факторами. Автор, дис. канд. мед. наук. Ростов: 1994. 23 с.

57. Кулаков В.И., Воропаева С.Д., Анкирская A.C. Облигатно-анаэробные микроорганизмы при акушерско-гинекологической патологии. Вестн. Рос. АМН. М.: 1996. -с. 26-29.

58. Кучма З.Н. Видовой состав и чувствительность к антибиотикам микрофлоры влагалища беременных.//Акушерство и гинекология. 1986. - № 8.- с. 53-54.

59. Ларсен Б. Микрофлора половых путей в норме.//Репродуктивное здоровье. Общие инфекции. М.: Медицина, 1988. - Т. 1. - гл. 1.- с. 17-45.

60. Ленцнер A.A., Ленцнер Х.П. Защитная функция лактофлоры влагалища и возможности ее усиления.//Тез. докл. научн. конф. "Дисбактериозы и эубиоти-ки". -М.,' 1996. с. 22-26.

61. Лемецская Г.И., Максимов Р.Г., Вичканова С.А. и др. Сангвиритрин как лечебное средство при заболеваниях слизистой оболочки полости рта. "Лекарственные растения."//Т. 14. Фармакология и мимиотерапия. М.: 1971. -269 с.

62. Летучих A.A. Неспецифический кольпит.//Акушерство и гинекология. М.:1976.-№4. с. 64-66.

63. Летучих A.A. Лечение и профилактика кольпитов.//Акуш. и гин.- 1985. -№ 7. с. 65-72.

64. Летучих A.A. Кольпиты: патогенез, классификация и диагностика.//Акуш. и гинекол. М.-1985. - № 2. - с. 61-64.

65. Лечебные суппозиториев для ректального и вагинального введения, Патент США № 4698359 МКИ А 61 31/915 МКИ 514/396.

66. Мазурик М.Ф., Щербань А.Д., Мазурик С.М. Применение молочной кислоты в лечении инфицированных ран.//Клиническая хирургия. 1982. - № 1. - с. 43-45.

67. Малевис К.И., Русакович П.С. Результаты клинической апробации поли-фитового масла "Кызыл-май" при лечении заболеваний шейки матки и влага-лища./Материалы международной научно-практической конференции. Минск:1996. с. 27-28.

68. Малевич К.И., Русакевич П.С. Лечение и реабилитация при гинекологических заболеваниях. Минск: Высшейщая школа. - 1994. - 368 с.

69. Медведев Б.И., Казачкова Э.А., Тарасова Л.Б. Эндовагинальные аппликации димексида и трихопола в комплексном лечении больных тубовариальными заболеваниями // Здравоохранение Туркменистана. 1990. - № 1.-е. 42-46.

70. Международная Фармакопея : в 3-х т. М.: Медицина. - 1981.

71. Муравьева В.В. Микробиологическая диагностика бактериального вагино-за у женщин репродуктивного возраста.//Автореф. дисс. канд. биол. наук. М.:1997. 17с.

72. Навашин С.М. Проблема биотехнологии физиологически активных веществ. /Успехи в области изучения и производства антибиотиков/ М.: 1990. с. 47-56.

73. Наширова Д.К., Абдуллин И.М., Визель А.А. Антибиотиков в клинической практике. Казань: 1997. 304 с.

74. Нитроимидазолы с трихимонацидной активностью и содержание их в фармацевтических препаратах. Патент США № 4463012 МКИ А 61 К 31/415.

75. Основа для суппозиториев. Патент США № 4 368 185, МКИ А 61 К 9/02.

76. Основа суппозитория. Патент Японии № 60-30650, МКИ А 61 К 9/02.

77. Основа для суппозиториев. Патент Японии № 54-157820, МКИ А 61 К 9/02.

78. Патент ФРГ 4400375 МКИ 6 А 61 К 9/12

79. Патент США 5/64406 МКИ 5 А 61 КЗ 1/40 31/44

80. Патент Швейцария 68 70 61 МКИ 6 А 61 К 009/22

81. Патент России 920 15 278/13 МКИ 6 С 12 Р 13/00

82. Патент России 2040269 МКИ 6 А 61 К 35/7Э

83. Патент России 2040270 МКИ 6 А 61 К 35/78

84. Патент России 205 49 28 МКИ 6 А 61 К 7/40

85. Патент США 5328701 МКИ 5 А 61 К 33/00, 33/10

86. Патент США 5091171 МКИ 5 А 61 К 23/30, 31/70

87. Патент США 5110603 МКИ 5 А 61 К 9/20

88. Патология влагалища и шейки матки./Под ред. В.И. Краснопольского. -М.: Медицина, 1997. 272с.

89. Перетц Л.Г. Значение нормальной микрофлоры для организма человека. М., Медгиз, 1955.

90. Петровская В.Т., Марко О.П.//Микрофлора человека в норме и патоло-гии./М.: Медицина, 1976.

91. Прилепская В.Н, Баклаенко Н.Г, Ильина Г.А. Клион-Д в терапии вульво-вагинитов различной этиологии.//Гнойно-септические заболевания в акушерстве и гинекологии. М.: 1985. - с. 106-107.

92. Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р. Современные представления о бактериальном вагинозе // Вестник Российской ассоциации акушеров- гинекологов. -1996. № 3. - с. 40-42.

93. Прилепская В.Н., Анкирская A.C., Байрамова Г.Р. и др. Вагинальный кандидоз. М.: научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, 1997. с. 39-42.

94. Применение суппозиториев для ректального и вагинального введения, Патент США № 4698359 МКИ А 61 31/915 МКИ 514/396.

95. Регистр лекарственных средств России.- М.: Инфармхим, 1993. 1006 с.

96. Регистр лекарственных средств России.- М.: Инфармхим, 1994. 496 с.

97. Регистр лекарственных средств России.- М.: Инфармхим, 1995. 496 с.

98. Регистр лекарственных средств России.- М.: Инфармхим, 1996. 398 с.

99. Савельева Г.М., Антонова Л.В., Прозоровская К.Н. Значение иммунологических исследований в акушерстве и гинекологии.//Ташкент: Медицина, 1981.

100. Савельева Г.М. Акушерство и гинекология: учеб. пособие для студентов медицинских вузов. М. 1997. 358 с.

101. Савичева A.M., Башмакова М.А. Микробиоценозы влагалища и их регу-ляция.//Тез. докл. науч. конф. "Дисбактериозы и эубиотики". М.: 1996. - с.33-35.

102. Савченко A.B., Капралов Н.В. Оценка эффективности полифитового масла "Кызыл-май", как стимулятора желудочного кислотообразова-ния.//Материалы международной научно-практической конференции. Минск:1996. с. 20-21.

103. Саркисян Р.Г., Хондкарян А.Э., Антонова С.А. и др. Применение Кли-он-Д в акушерко-гинекологической практике // Журн. эксп. и клинич. медицины. 1988. - Т. 28. - № 1. - с. 90-93.

104. Саядян О.Б., Акунц К.Б., Леценко О.Л. и др. Использование молочнокислых бактерий для профилактики и лечения воспалительных заболеваний у беременных и родильниц.//Акуш. и тин. 1984. - № 9. - с. 53-55.

105. Сергеев А.В., Вакулова Л.А., Шашкина М.Я. и др. Медико-биологические аспекты каротиноидов.//Вопр. мед. химии. 1992. - Т. 38. - с. 810.

106. Сергеев А.В. Иммунофармакология и механизм действия неспецифических противоопухолевых иммуномодуляторов: Дис.д-ра мед. наук. М.: 1987.

107. Сметник В.П., Тумилович Л.Г. Неоперативная гинекология. Руководство для врачей. Спб СОТИС, 1995. - 224 с.

108. Смиридинова Н.А., Фойгиль А.Г., Фомкина М.Г. и др. Сангвиритрин -цитотоксические свойства, хим-фарм журнал. 1997. - Т. 30. - № 6. - с. 44-46.

109. Смолянская А.З., Гончарова Г.И. и др. Современные аспекты дисбакте-риоза и его бактериологическая диагностика. Лаб. дело. 1984. - № 3.- с. 167170.

110. Современные аспекты использования вспомогательных веществ в фармацевтической технологии // Под ред. А.И. Тенцовой. М.: ВНИИМИ, 1981.

111. Современные проблемы получения лекарственных препаратов. Ленинград: 1990

112. Соловьева И.В. Характеристика микрофлоры влагалища женщин в норме и патологии./Авторефер. дис. канд. мед. наук. М.:1987.

113. Способ получения и применения скользящих суппозиториев. Патент Великобритании № 8224268, МКИ А 61 К 9/02, НКИ А 5 В.

114. Стеценко Е.В. Профилактика развития инфекционных раневых осложнений, вызванных эндогенной и экзогенной микрофлорй. Автор, дис. канд. мед. наук. М.: 1994. 18 с.

115. Суппозитории, содержащие болеутоляющие, жаропонижающие или противовоспалительные средства. Патент США № 0750423, А 61 К 9/00, НКИ 424/16.

116. Теохаров Б.А., Летучих A.A. Этиология и особенности клинического течения неспецифических кольпитов./Акуш. и гинекол. М.:1975. - № 5. - с. 3437.

117. Третий Международный симпозиум "Вагиниты/Вагинозы" Акушерство и гинекология. 1994.- № 5. - с. 62-63.

118. Троян З.А., Ротко А.Г. Органические кислоты томатов и томатного сока.// Извещение вузов пищевой технологии. 1983. - № 4. - с. 21-23.

119. Тюрин М.В., Шендеров Б.А., Рахимова Н.Г. и соавт. Антибиотикорези-стентность и антагонистическая активность лактобацилл: Дис. канд. мед. наук. М.: 1990. 146 с.

120. Фармацевтические препараты для назального и вагинального применения. Патент США № 4659696 МКИ А 61 К 37/02 МКИ 514/15

121. Хабибулина В.И., Корченко Н.Я., Коросталев С.А. и др. Включение ß-каротина в различные курсы химиотерапии лимфолейкоза № 1210.

122. Цагарейшвили Г.В. и Башура Г.С. Поверхностно-активные веществ, высокомолекулярные соединения и дисперсные системы, применяемые в фармации. Тбилиси: Мецниереба, 1980.

123. Цвелев Ю.В., Кочеровец В.И. Дифференциальная диагностика и лечение неспецифических воспалительных заболеваний влагалища.//Методические рекомендации. М.: ГВМУ МО РФ, 1994. - 16с.

124. Цвелев Ю.В. Практический справочник акушера-гинеколога. М.: Медицина. 1997. 247 с.

125. Цвелев Ю.В., Либих Р.Ф., Кира Е.Ф. Актуальные вопросы диагностики и терапии воспалительных заболеваний женских половых органов.//Тез. докл. 19-й науч. сессии, посвящ. Памяти проф. Отта Д.О. Ленинград: 1990. - с. 132133.

126. Цвелев Ю.В., Кочеровец В.И., Кира Е.Ф. Анаэробная инфекция в аку-шерско-гинекологической практике. Спб. М.: 1995. 105 с.

127. Шмелев A.A. Условно-патогенная микрофлора цервикального канала м содержимого влагалища у женщин, страдающих не вынашиванием при бсрс-менности.//Профилактика перинатальной патологии. Ленинград: 19S5. с. SS-96.

128. Шмелев A.A. Ранняя диагностика и лечение неспецифических бактериальных инфекций нижних отделов гениталий в профилактике привычного невынашивания.// Методические рекомендации для врачей. Казань: 1989. - 8 с.

129. Эриашвили В.М. Создание дифильных основ и разработка способов получения суппозиториев: Дисс. докт. фарм. наук. Тбилиси: 1991. - 324 с.

130. Alexander M., Newmark H., Miller R.G. // Immunol. Lett.- 1985. V. 9.-p. 221-224.

131. Amsel R., Totten P.A., Spiegel C.A. et al. Non specific vaginitis. Diagnostic criteria and microbial and epidemiologic associations // Am. J. Med. 1983. -V. 74.-N.l. -p. 14-22.

132. Andersch В., Forssman L. Et al. // Gynec. Obstet. Invest.- 1986. -V. 21. N l.-p. 19-25.

133. Askienazy M., Henry- Suchet J. // Gynecologies 1987.- V. 38,- N. 6,- p. 435-439.

134. Avonts D., Piot P. T soc. Geneesk. 1987. V. 43.- N 2. - p. 8.

135. Baldwin W.W., Tseng M., Landey M. E. Bacteroides species Mawtance of Laboratory strains. APPC. Environ. Microbiol. 1981.- V. 41.- N.l. p. 325-326.

136. Barlett J.G., Onderdonk A.B., Drude E. et all. Quantitative bacteriology of vaginal flora // J. Infect. Dis. -1977. 136. - N.4.- p. 271-275.

137. Bartlett J.H., Moon N.E., Goldstein P.R. et al. Cervical and vaginal bacterial flora: Ecologic niches in the female lower genital tract. // Am. J. Obstet. Gynecol. -1978. N. 130. - p. 658-661.

138. Behe Charanjit, Unowsky Joel. Hoffman. Rectal dosage form // Пат. 47600, США. Заявл. 5. 08. 85. Опубл. 26. 07. 88.

139. Benz J., Koppel R., Zemer R., Benz-Bauman B. Kolpitis und zytologischer krebsobstrich // Ther. Umsch.-1985.-Bd 42. N. 3.-p.l67-171.

140. Benzinger D.P., Edelson Y. Absorption from the vagina // Drug Metab. Rev. 1983. - V. 14. -N 2. - p. 152-154.

141. Blackwell A., Fox A. Et al. // Lancet.- 1983.-V. 2.- N. 8364.- p. 1379-1382.

142. Bocke A.J., Dekker J.H., Van Eijk J.t. et al. Effect of lactic acid suppositories compared with oral metronidazole and placebo in bacterial vaginosis'* a randomised ;linical trial // Genitourin. Med.- 1993.-V. 69. p. 388-392.

143. Brand J.M., Galask R.P. Triniethylamine the substcncc mainly responsible tor he fishy odor often associated with bacterial vaginosis // Obstct. Gynecol. 1'Ш> -V. 68. - N. 5. - p. 682-685.

144. British Pharmacopeia 1993. London: Her Majesty's Stationery Ollicc, I'W.v n 2 v.

145. Brown W.J. Microbial ecology of the normal vagina. // In The human Vagina ed. E.S.E. Hafez and T.N. Evans). Elsevier / North-Holland Biomedical Press, Amsterdam. -1978. p. 407-422.

146. Chen K.C.S., Amsel R., Eschenbach D.A., Holmes K.K. Biochemical liagnosis of vaginitis: determination of diamines in vaginal fluid //J/ infect. Dis.1982. V. 145. - N. 3. - p. 337-345.

147. Conn P.F., Lambert C., Land E.J. et all. // Free Rad. Res. Commun. 1992.-V. 16. p. 401.

148. Conn P.F., Schald W., Truscott T.G. // J. Photochem. Photobiol Pt. B. Biology. 1991. -Y. 11. p. 41.

149. Conner S.W. Antibacterial proprieties of tomato extracts. // Can. J. Research, F.: 1946. -V. 24. p. 467-475.

150. Corbishley C.M. Microbial flora of the vagina and cervix. J. Clin. Pathol. -1977. N. 30. - p. 745-749.

151. Doherty James, Zimmerman Morris, Ashe Bunnie M. Cephalosporin derivatives as anti- inflammtory agents: 4891370, США. Заявл. 14. 12. 81. Опубл. 02. 01. 90

152. Eschenbach D.A Bacterial vaginosis. Emphasis on upper genital tract complications // Obstet Gyn., Clin. Nort. Am., 1989.- V. 16.- N.3.- p. 593-610.

153. Eschenbach D.A., Davie P.R., Williams B.L. et al. Prevalence of hydrogen peroxyde- producing Lactobacillus species in normal women and women with bacterial vaginosis // J. Clin. Microbiol. 1989. - V. 27. - N 2. - p. 251-256.

154. Faro S., Martens M., Vaccato M. et al. Vaginal flora and pelvia inflammatory disease. // Am. J. Obstet. Gynecol. 1993. Aug.- V. 169.- N. 2. p. 470-474.

155. Friederich E. // Amer. J. Obstet. Gynec.- 1985,- V. 185.- N. 3.- p. 247-251.

156. Galask R.P. Vaginal colonization by bacteria and yest // Am. J. Obstet. Gynecol. 1988. -V. 158. -N. 4. - p. 993-995.

157. Galask R.P., Larsen B. and Ohm M.J. Vaginal flora and its role in desease entities. Clin. Obstet. Gynecol. -1978. N. 19. - p. 61-65.

158. Gardner H., Dukes J. // Ibid.-1955.-V. 69.- N. 5,- p. 962-976.

159. Goeman J. et all. / L' epidemiologic des maladies sexuellement transmissibles dans les pays en développement a l'ere du Sida. Annal. Soc. Belge. Med. Trop., 1991.-N. 71.-p. 81-113.

160. Gorbach S.L., Menda K.B., Thadepalli H. Et al. Anaerobic microflora of the cervix in healthy women.// Am. J. Obstet. Gynecol. 1973. -V. 117. N. 1053.

161. Gorieswell В., Ladwig С., Gardenr H., Dukes C. // Obstet. And Gencc.-1969. -V. 33. N. 2.- p. 195-199.

162. Gugger E.T, Erdman J.W. // Abstr. Of Second Int. Conf. "Antioxidant vitamins and beta-carotene in desease prevention". Berlin, 1994. p. 53.

163. Hammann R. A reassessment of microbial flora of the female genital tract, with special reference to the occurrence of Bacteroides species. // J. Med. Microbiol., 1982. -V. 15. N. 293.

164. Hayme U.B. Sexual transmitted deseases in adult, non-pregnant women // Curr. Opin Obstet. Gynecol. -1993.-Vol.5.- N. 4.- p.521-526.

165. Hill G.B. Anaerobic flora of the female genital tract. In anaerobic Bacteria: Selected topics. New-York 1980. p 39-50.

166. Hill G.B. The microbiology of bacterial vaginosis // Am. J. Obstet. Gynecol.1993. V. 169. -N.2. -p. 450-454.

167. Hill G.B., Eschenbach D.A. and Holmes K.K. Bacteriology of the Vagina // Am. J. Obstet Gynec. 1991. V. 170. N. 2. - p. 24-39.

168. Holmes K.K. Mycoplasma hominis in non-specific vaginitis. Sex Trans Dis. 1983. -V. 10. -N. 271.

169. Holst E/ Bacterial vaginosis: microbiological and clinical findings // Eur. J. Clin. Microbiolo. 1987. - V. 6. - N. 5.- p. 536-541.

170. Ison C.A., Dawson S.G., Hilton J. et al. Comparison of culture and microscopy in the diagnosis of gardnerella vaginalis infection // J. Clin. Pathol. -1982. -V. 35. N. 6. - p. 550-554.

171. Jesowska L., Wolak A., Gruszevcki W.I. et al.// Biochim. Et boiphys. Acta.1994.-V. 1194. p. 143.

172. Jones B.M., al-Fattani M., Gooch H. The termination of amines in the vaginal secretions of women in the health and desease // Int. J. STD AIDS. 1994. -V. 5. - N. 1. - p. 52-55.

173. Kaplan L., Lan J., Stein E. // Clin. Physiol. Biochem. 1990. - V. 8,- N 1. -p. 1-10.

174. Kira E.F. Bacterial vaginosis: New method of treatment // Infections in obstetrics and gynaecology / 4 th Europeen Conference of ESIDOG. Programm and Abstracts. Oslo, Norway: S. n, 1994. Abstr.

175. Lang E. Antibiotikatherapie ein practischer Leitfaden 5 // Auflage, Medizinische Information Leitschriften Wien 1984.- 134 s.

176. Lefevre J.C., Jean M., Averous S., Viraben S. Et all. Etiologie de la Vaginose bacterienne ( vaginite non specifique ) // J. Gynecol. Obstet. Biol. Reprod.-1985vol.14.- N. 16- p. 703-708.

177. Levision M.E., Corman L.C., Carrington E.R. et al. Quantitative microflora of the vagina. Am. J. Obstet. Gynecol. 1977. -V. 127. -N. 80.

178. Lingood C., Thomason J., Hill G. Бактериальный вагиноз: местное интра-вагинальное лечение клиндамицина фосфатом, Obstet. Gynecol., 1990. N. 76. -p. 118-121.

179. Majeroni B.A. New concepts in bacterial vaginosis // Am. Fam. Physician. -1991. V. 44. - N. 4 - p. 1215-1218.

180. Maneksha S. Comparison of Povidone- Iodine (Betadine) vaginal pessaries and Lactic Asie pessaries in the treatment of vaginitis // J. int. Med. Re. 1974. - V. 2.- N 3. - p. 236-239.

181. Mardh P., Taylor- Robinson D. Bacterial Vaginosis. Stockhohn, 1984.

182. Mardh P.A. The*vaginal ecosystem // Am. J. Obstet. 1991. V. 165. - N. 4. -p. 1163-1168.

183. Matsuda S. Chemotherapy inthe treatment of infections. Basis and proper use of antibiotics // Acta Obstet. Gynaecol. Jap. 1989. - V. 41.- N. 8. - p. 1045-1051.

184. Mc.Comack W.M., Hayes C.M., Rosner C.M. et al.//Vaginal colonization with corynebacterum vaginalae (Haemophilus vaginalis). J. Infect. Dis. 1977. -V. 136. -N. 740.

185. Mc.Comack W.M., Rankin J.S., Lee Y.H. Localization of genital mycoplasmas in women.// Am. J. Obstet. 1972. -V. 112. -N. 920.

186. Mead P.B. Epidemiology of bacterial vaginosis. // Am. J. Obstet. Gynecol. 1993 Aug.,Pt. 2.- p. 446-449.

187. Meheus A. et Piot P. /Epidemiologie des maladies sexuellement transmissibles dans les pays en développement. Annal. Soc. Belge. Med. Trop., 1983.- N. 63.- p. 87110.

188. Meheus A. et Piot P. /Lutte contre les maladies sexuellement transmissibles dans les pays en développement. Annal. Soc. Belge. Med. Trop., 1983.- N. 63.- p 281-311.

189. Miller G., Salzer H. Therapie und Prophylaxie des uns pezifischen Fluor vaginalis mit einer Lacto- bazillusvakzine //Wien. Klin. Wehr. 1983. - V. 5.- N. 11. - p. 371-374.

190. Niederer R.R., Zulliger H.W. Medicated suppository. Пат. 4698359, США. Заявл. 31. 05. 85. Опубл. 06. 10. 87.

191. Nurenberger L. Die Erkrankunger der Scheide. // In: Stoekel W. Handbuch der Gynäkologie. München.- 1930.- Bd. 5,- S.ll.

192. O. Dowd T.C., West R.R., Winterburn P.J., Hewlins M.J. Evaluation of arapid diagnostic test for bacterial vaginosis // Br. J. Obstet. Gynaecol. 1996. - V. 103. - N. 4. - p. 366-370.

193. Osborne N.G., Wright R.C., Grubin L. // Genital bacteriology: A comparative study of premenopausal women with postmenopausal women. 1979. -V. 135. N. 195.

194. Pahlson C., Larson P.G. The ecologicaly wrong vaginal lactobacilli // Med. Hypotheses. -1991. V. 36. - N. 2. - p. 126-130.

195. Palozza P., Krinsky N.I., MurakoshiM. et al. Meth. Enzimol. 1992. V. 213. p. 403.

196. Perera J. Microbiological patterns in vaginitis. // Department of Microbiology, Faculty of Medecine, Colombo.- Ceylon. Med. J. 1994 Jun.-V. 39. N. 2.- p. 91-94

197. Puppeis G.J., Garritsen H.S.P., Kummer J.A., Greve J. // Cytometry. 1993. -V. 14. p. 251.

198. Rao B., Savage E.W., Chuah S.K./ et al. Cefmenoxime therapy for gynecologie and obstetrie infections // Obstet. Gynecolo. 1985. V. 66.- N. 3. - p. 377-383.

199. Reed B.D., Eyler A. Vaginal infections: diagnosis and management // Ann. Arbor. Am. Fam. Physician (University of Michigan Medical School). 1993 Jun.- V. 47.- N. 8. - p. 1805-1818

200. Riordan T., Macaulay M.E., James J.M et al. A posoperative study of genital infections in a family- planing clinic. Microbiological findings and their association with vaginal symptoms. // Epidemiol. Infect. 1990. - V. 104. - N. 1. - p. 47-53.

201. Robbie M.D., Sweet R.L. Metronidazole use in obstetricts and gynecology // Am. J. Obstet. Gynec. 1983. - v. 145. -N. 7. - p. 865-881.

202. Rotter M.L. Higienic Hand Disinfection // Infection Contr. 1984.- N.l. -p. 18-22.

203. Schnadig V.J., Davie K.D., Shafer S.K. et al. The ecologist and bacterioses of the vaginal- ectocervical area. Clues commas and confusion // Acta cytol. 1989. - V. 33. -N. 3. - p. 287-297.

204. Shunichi N., Koinatsu Y., Vesugi T. Studies on pharmaceutical drug design for suppositiries. I. Effects of physico-chemical properties of surfactants and polymers on emusion- type bases // Chem. And Pharm. Bull. 1982. V. 30. - N. 8. - p. 29002905.

205. Smith A.R.B., Hasker L. And Warrell D.W. The role of pudental nerve damage in the aethiology of gemine stress incontinence in women // Br. J. Obstet. Gynaecol.-1989.-N. 96.-p. 29-32.

206. Spiegel C.A., Amsel R., Eschenbach D. Et al. Anaerobic bacteria in nonspecific vaginitis. N. Engl. J. Med. 1980. -V. 303. -N. 601.

207. Spitgbart H. The importance of anaerobic vaginal flora for infections in gynecology // Obst. And gynec.-1985.-V. 33.- N. 1- p. 53-55.

208. Spitzbart H., Holtorff I., Engel S. Vulvitis- Kolpitis/-Leipzig, 1981.

209. Spitzbart H., Mende H., Reich W. // Ibid.- 1986.- Bd. 108, N. 13.-S.794-798.

210. Systeme d'information de gestion MST par districts, Abidjan, 1995.

211. Taylor E., Blackwell A.L., Barlow A.L., Phillips I. Gardnerella vaginalis anaerobes and vaginal discharge. Lancet i. 1982. -V. 1376.

212. Thomason J., Gelbart S., Scaglione N. Bacterial vaginosis: current review with indications for asymptomatic therapy // Am. J. Obstet. Gynecol. 1991. - V. 165. -N. 1. - p. 1210-1217.

213. Thomason J., Gelbart S., Wilkoski L.M. et al. Proline aminopeptidase as a rapid diagnostic test to confirm bacterial vaginosis // Obstet. Gynecol. 1988. - V. 71. - N. 4. - p. 607-611.

214. United States Pharmacopeia XXII / United States Pliannacopeial convention, inc. 2067 p.

215. Vaginal tablets in gynecology. Vidal. - Editions du vidal, 1991. - 226 p.

216. Vinvarsky Y.M. and Kira E. F. Clinical and immunological particularities of bacterial vaginosis // Abstracts book Third International Symposium on Vaginitis/Vaginosis. Funchal, Portugal: S. n, 1994. - Abstr. 49.

217. Watt B., Goldare M.J., Loudon N., Annat. D.J. et al. Prevalence of bacteria in vagina of normal young women. Br. J. Obstet. Gynecol. 1981. -V. 88. -.N. 588.

218. Wilson C.A. Local treateinent for bacterial vaginosis // Brit. Med. J. 1987. -V. 295. - N. 6603. -p. 886.

219. Zimmer S., Scliiek R., Krachnert U. Cytology of bacterial vaginosis // Zentralbi-Gynacol. 1991. - V. 113. - N. 3. - p. 161-165.

Информация о работе

Янг, Альбертин
кандидата биологических наук
Москва, 1998
ВАК 03.00.07

Диссертация

Микробиологические аспекты воспалительных процессов влагалища и создание лекарственных препаратов для их лечения - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы