Экспериментальное обоснование применения различных лекарственных форм пробиотиков для коррекции дисбиозов влагалища

Чумаева, Татьяна Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Экспериментальное обоснование применения различных лекарственных форм пробиотиков для коррекции дисбиозов влагалища
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Экспериментальное обоснование применения различных лекарственных форм пробиотиков для коррекции дисбиозов влагалища"

На правах рукописи

ЧУМАЕВА Татьяна Владимировна

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ПРОБИОТИКОВ ДЛЯ КОРРЕКЦИИДИСБИОЗОВ ВЛАГАЛИЩА

03.00.07 - микробиология 03.00.23 - биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 2004

Работа выполнена на кафедре микробиологии медицинского факультета Российского университета дружбы народов и в лаборатории диагностических бактерийных препаратов с коллекцией микроорганизмов Государственного институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича

Научные руководители: кандидат медицинских наук Е.А. Васильева

кандидат биологических наук И.Г. Осипова

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

В.В. Поспелова доктор биологических наук, профессор B.C. Орлова

Ведущая организация:

Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН

Защита состоится - «_»_2004 г в_часов на заседании

диссертационного совета Д 212.203.05 в Российском Университете дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов, по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. б

Автореферат разослан «_»_2004 г

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

доцент О. Б. Гигани

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Проблема послеродовых инфекционных осложнений, вызванных условно-патогенными микроорганизмами (УПМ), имеет огромное значение в акушерско-гинекологической практике настоящего времени (А.С Анкирская и соавт., 1998).

Данные литературы свидетельствуют о том, что различные инфекционные осложнения могут возникать как в послеродовом периоде, так и во время беременности, и также развиваться у новорожденных, а после различных внутриматоч-ных манипуляций и операций создается реальная угроза возникновения острых воспалительных заболеваний матки и придатков (И.Л Бочков и соавт., 1991).

Во время беременности на фоне гормональной перестройки организма происходит качественное и количественное изменение микрофлоры влагалища: увеличивается число УПМ, индуцируется рост грибов рода Candida (A.C Анкирская, 1996; Amsel К. et al, 1983).

Вследствие снижения защитных функций влагалищного биотопа создаются условия для восходящей инфекции половых путей женщины и инфицирования плода, при нарушении иммунобиологических барьеров происходит транслокация УПМ в кровеносное русло, бактериемия с инфицированием внутренних органов (В.М. Бондаренко, 1997).

Одним из основных этиологических факторов возникновения подобных осложнений являются дисбиозы влагалища (В.В. Муравьева, 1997).

Во время беременности дисбиозы влагалища могут вызвать задержку внутриутробного развития в связи с нарушением маточно-плацентарного кровообращения, возникновение хориоамнионита, привести к несвоевременному излитию околоплодных вод, преждевременным родам. В послеродовом периоде опасность развития инфекционных заболеваний у родильниц и новорожденных возрастает во много раз. Дисбиозы влагалища являются значительным фактором риска развития послеродовых гнойно-воспалительных осложнений. Так, частота послеродового эндометрита у родильниц с дисбиозами влагалища увеличивается в 2,2-5,8 раза (Ю.В. Цвелев; 1990, М. Askienazy-Elbhar, 1993).

В настоящее время в акушерстве и гинекологии для коррекции дисбиоти-ческих состояний влагалища используются различные схемы лечения, направленные на восстановление нормальной микрофлоры (Г.Р. Байрамова, 1996; Н.Л. Чер-нышова, 2000; A.I Boek et aL, 1993). Традиционно применяются антибактериальные препараты имидазольного ряда (ПИР) и молочно-кислые пробиотики (би-фидумбактерин, лактобактерин, ацилакт). Однако назначение ПИР не устраняет саму причину заболевания, и в результате рецидивы дисбиозов влагалища встречаются довольно часто (10-15%). Также недостатком этих схем является большое количество побочных явлений или осложнений при применении ПИР, ограничение возможности их использования в первом триместре беременности. Пробио-тики применяются местно в виде аппликаций, при этом их действие часто оказывается неэффективным, т.к. изменения качественного и количественного состава микрофлоры влагалища являются следствием снижения колонизационной резистентности микробиоценоза организма человека в целом. Также исследования по-

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА СПтр«»г t,/) A 09 }

казали, что бактерии, входящие в данные пробиотики, вырабатывают молочную кислоту, которая индуцирует рост грибов рода Candida. Увеличение количественного содержания грибов рода Candida в микробиоценозе влагалища по данным исследований может приводить к серьезным, в том числе диссеминированным, поражениям плода и новорожденного, вплоть до кандидозного сепсиса. В связи с тем, что при беремешюсти увеличивается частота выделения грибов рода Candida, эти препараты неэффективны или оказывают отрицательный эффект (В.М. Коршунов, 1999; АЮ Сергеев, 2000; L. Вгашо, 1997).

В последние годы в медицинской практике применяется споровый про-биотик биоспорин. Препарат используется для коррекции микрофлоры кишечника кишечника при дисбактериозах, в гинекологической практике при лечении бактериального вагиноза и вульвовагинального кандидоза, в хирургии для профилактики развития гнойно-септических осложнений в послеоперационном периоде. Препарат не токсичен, не обладает тератогенными свойствами, разрешен к применению у беременных (В.В. Смирнов, 1992; Л. T. Созаева, 2000).

Биоспорин выпускается в форме лиофилизата и таблеток, применяется per os и вагинально в виде аппликаций. В настоящее время Екатеринбургским Центром военно-промышленных проблем разработана новая лекарственная форма биоспорина — вагинальные суппозитории. Однако эффективность лечебного действия этой лекарственной формы при различных нарушениях микроэкологии влагалища у беременных пе выяснена, также не отработаны схемы применения вагинальных суппозиториев биоспорина в акушерстве и гинекологии.

В связи с этим, все вышеизложенное обусловило актуальность исследования, целью которого явилось экспериментальное обоснование применения про-биотиков в различных лекарственных формах (лиофилизат, суппозитории) для коррекции дисбиозов влагалища и профилактики послеродовых гнойно-септических осложнений в акушерско-гинекологической практике.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Выделение и идентификация штаммов условно-патогенных микробов (УПМ) у беременных с различными формами нарушений микробиоценоза влагалища.

2. Сравнительное изучение адгезивной активности различпых лекарственных форм биоспорина и других пробиотиков, традиционно применяющихся в акушерско-гинекологической практике (бифидумбактерина, лак-тобактерина, ацилакта) на моделях формалинизированных эритроцитов человека и влагалищных эпителиоцитов.

3. Сравнительное изучение антагонистической активности различных лекарственных форм биоспорина и других пробиотиков, традиционно применяющихся в акушерско-гинекологической практике (бифидумбактерина, лактобактерина, ацилакта) в отношении УПМ.

4. Разработка показаний и схем восстановления биотопа влагалища споровым пробиотиком биоспорином в различпых лекарственных формах (лиофилизат, суппозитории).

5. Определение микробиологической эффективности применения

биоспорина в различных лекарственных формах в акушерско-гинекологической практике.

Научная новизна:

1. Разработан способ оценки специфической активности препаратов пробиотиков различных лекарственных форм и производственных штаммов по уровню их адгезивной активности.

2. Впервые изучена в сравнительном аспекте колонизационная активность (адгезивная и антагонистическая) производственных штаммов пробиотиков различных лекарственных форм (лиофилизат, суппозитории). Доказано, что жировая основа суппозитория не влияет на уровень антагонистической активности производственных штаммов, в то время как уровень адгезии снижается вследствие экранирования адгезинов микробов и рецепторов клеток.

3. Впервые экспериментально обоснована и клинически подтверждена эффективность применения биоспорина в лекарственной форме суппозитории, для лечения бактериального вагиноза, вульвовагинального кандидоза и неспецифического вагинита у беременных.

Практическая значимость:

1. Разработанный способ оценки специфической активности препаратов пробиотиков и производственных штаммов по уровню их адгезивной активности, позволяет судить об эффективности и качестве препаратов в различных лекарственных формах. Подана заявка на патент РФ № 108-419 от 27 марта 2003 года: "Способ оценки специфической активности препаратов про-биотиков различных лекарственных форм и производственных штаммов по уровню их адгезивной активности" (МПК7: А61К 35/74).

2. Разработаны схемы и способы лечения бактериального вагиноза, вульвовогинального кандидоза и неспецифического вагинита у беременных, включающие применение различных лекарственных формы спорового про-биотика биоспорина.

3. Предложенные схемы коррекции дисбиозов влагалища у беременных обеспечивают стойкое снижение гнойно-воспалительных осложнений в послеродовом периоде.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Способ оценки специфической активности пробиотиков и производственных штаммов по уровню их адгезивной активности позволяет судить об эффективности и качестве препаратов разных лекарственных форм.

2. Жировая основа суппозиториев не влияет на показатели антагонистической активности производственных штаммов пробиотиков, но вместе с тем экранирует элементы адгезии (адгезины и рецепторы), тем самым опекая уровень адгезивной активности.

3. Экспериментально обоснованные и клинически подтвержденные схемы лечения бактериального вагиноза, вульвовагинального кандидоза и неспецифического вагинита у беременных, включающие применение различных лекарственных форм биоспорина обеспечивают коррекцию дисбиозов влагалища и приводят к стойкому снижению гнойно-воспалительных осложнений

в послеродовом периоде.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на международной научно-практической конференции памяти Г.И. Гончаровой «Про-биотические микроорганизмы — современное состояние вопроса и перспективы использования» (Москва, 2002), на научно-практической конференции НПО "Биомедицинские технологии" (Москва, 2003). Работа апробировала на заседании кафедры медицинской микробиологии 16 марта 2004 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ.

Объем работы, ее структура. Диссертация построена по традиционному плану и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 142 страницах текста компьютерной верстки и иллюстрирована 18 таблицами, 8 рисунками и 2 фотографиями. Список литературы представлен 262 источниками (130 отечественными и 132 зарубежными).

Содержание работы

Материалы и методы исследования

Для решения поставленных задач было обследовано 197 беременных, находящихся на лечении в отделении патологии беременности родильного дома № 72. Исследование проводилось совместно с кафедрой акушерства и гинекологии РМАПО.

Диагностика нарушений микрофлоры влагалища у беременных основывалась на выявлении совокупности ряда клинических признаков и применении необходимых лабораторных методов (аминного теста, определения рН влагалищного отделяемого, микроскопии вагинальных мазков, микробиологическом исследовании). Из общего количества пациентов различные нарушения микрофлоры влагалища были диагностированы у 180 женщин.

При обследовании беременных были выявлены следующие нарушения влагалищного микробиоценоза: бактериальный вагиноз (БВ) и вульвовапшалышй кандидоз (ВВК), а также неспецифический вагинит (ИВ).

Были сформированы три группы больных с БВ, ВВК и НВ по 60 пациенток в каждой. Для каждой нозологии использовали три схемы лечения. В первой схеме лечения ПИР сочетали с применением биоспорина per os и вагинально. Во второй схеме лечения применяли биоспорин per os и вагинально и бифидумбак-терин per os и вагинально. В качестве группы сравнения наблюдались больные, получавшие традиционное лечение ПИР и бифидумбактерином per os и вагинально. Подгруппы беременных, получавших биоспории и бифидумбактерин в лекарственной форме лиофилизат и суппозитории, рассматривались отдельно.

Контрольное обследование производилось на 6-7 сутки после окончания лечения и имело своей целью клиническое и микробиологическое определение эффективности схем лечепия.

Исходя из целей микробиологического исследования, лечение определяли как эффективное при полной элиминации УПМ (S. aureus, S. epidermidis, С albicans, E. coli, P. vulgaris, Streptococcus spp, Enterococcus spp). Неэффективным лечением считалось выявление выше перечислеппых микроорганизмов в высоких

титрах. К осложнениям этиотропной терапии относили выявление грибов рода Candida в любом количестве и аэробных УПМ в большом количестве (¡»104 КОЕ/мл).

Микробиологическое исследование и микроскопия вагинальных мазков осуществлялось в лаборатории диагностических бактерийных препаратов с коллекцией микроорганизмов ыа базе ГИСК им. Л. А. Тарасовича.

Видовую идентификацию микроорганизмов проводили общепринятыми методами, используя номенклатуру Берги и руководства по клинической микробиологии (М.О. Биргер, 1992, Beigey, 1986). Для выделения лактобацилл использовали среду МРС-4, бифидобактерий — среду Блаурокка с азидом патрия, грибов рода Candida — среду Сабуро, стрептококков — элективную жидкую среду для культивирования стрептококков, кишечной палочки - среду Эндо, для выделения стафилококков, энтерококков — солевой агар, протея — агар с мочевиной..

Были выделены клинические штаммы (n=158): S. aureus (n=34), S. Epider-midis (п=10), С albicans (n=30), E. coli (n=52), P. vulgans (n=16), Streptococcus spp (n=8), Enterococcus spp. (n=8).

Выделенные при микробиологическом обследовании штаммы УПМ (п=158), были использованы для последующего экспериментального изучения антагонистической и адгезивной активности биоспорина и кисломолочных пробио-тиков в различных лекарственных формах.

В исследованиях использовались коммерческие серии спорового пробиоти-ка биоспорина, состоящего из двух производственных штаммов В. subtilis 3 и В. lichenifotmis 31, в лекарственной форме — лиофилизат, и новая лекарственная форма биоспорина - вагинальные суппозитории, находящаяся на этапе доклинических испытаний. В работе также использованы коммерческие серии. колибакте-рина, бификола, споробактерина, бактисубтила, бактиспорина, энтерола, бифи-думбахтерина, лактобактерина, ацилакта в различных лекарственных формах.

Была изучена адгезивная активность биоспорина и кисломолочных про-биотиков (бифидумбактерина, ацилакта, лактобактерина) на модели эритроцитов по модифицированной методике В.И. Брилиса и на модели клеток влагалищного эпителия по модифицированной методике Горской (В.И. Брилис, 1986, Е.М. Горская, 1987).

Антагонистическую активность штаммов пробиотиков в отношении клинических штаммов УПМ определяли методом отсроченного антагонизма. В качестве сравнения использовали тест-штаммы (п — 6), применяемые для контроля антагонистической активности пробиотиков (ГИСК им. Л. А. Тарасевича).

Полученные данные обработаны с помощью методов вариационной статистики, позволяющих вычислять параметры достоверной значимости результатов исследования.

Результаты исследования и их обсуждение Обследование беременных до лечения. Дашгые, полученные при гинекологическом обследовании беременных, аминном тесте, рН-метрии влагалищного отделяемого, микроскопия вагинальных мазков, позволили совместно с клиницистами выделить три позолоти (табл. 1).

Таблица 1

Клинические и микробиологические критерии лисбиозов влагалища_

Диагностические критерии Норма Нозологии

БВ ВВК НВ

Влагалищное отделяемое: цвет консис тенция прозрачн. жидкие желтоват, пенистые белый творожист. желтый жидкие

Аминный тест отрицат. положит. отрицат. опфицат.

рН влагалищного отделяемого 5,5 <6,0 4,5-6,0 5,5

Микроскопия вагинальных мазков

лейкоциты лактобациллы грамположит. кокки грамотрицат. палочки «ключевые» клетки грибы рода Кандида 3-5 в п/з» много отсутсгв. отсутств. умеренно много много отсутств. >10 в п/з умеренно едипичн. единичн. отсутств. много <20 в п/з умеренно много единичн.

инуллв. отсутств.

олушв. отсутсгв. отсутсв.

Микробиологическое исследование (в КОЕ/мл)

Ьас1оЬаа11ш врр. <10* 510* 510*

ВШ<1оЬас1сгшт фр. г 10* <10* 510* 510*

Б.аигеш отсутств. ¿10* шсуплв. ¿10*

Б. ер1с1етш1й <102 >10* 5102 ¿10*

Ег^гососсиэ 5рр. <102 ¿10* 5102 ¿10*

ЗиерЮсоссш Брр шсугав. ¿10* 01Су1С1В. ¿10*

P.vulgaí!s отсутств. ¿10* 01СуГС1В. ¿10*

Е.соИ, лактозонег. отсутств. ¿10* 01*.у1С1В. ¿10*

СапсШа $рр. отсутств. 2102 2:10* ¿102

Примечание: п/з* - поле зрения, лактозонсг. ** - лакгозонегативиые

Диагноз «бактериальный вапшоз» ставился на основании жалоб пациенток на обильные, пенящиеся выделения с неприятным запахом, подтвержденных данными гинекологического осмотра, обнаружения щелочной (рН<6,0) реакции влагалищного отделяемого, положительного аминного теста, обнаружения в вагинальном мазке преимущественно грамотрицательных УПМ в большом количестве, «ключевых» клеток, отсутствия лейкоцитов.

При наличии жалоб на гнойные вагинальные выделения, при выявлении преимущественно грамположительных УПМ в сочетании с высоким лейкоцитозом в вагинальном мазке (более 10 лейкоцитов в поле зрения), и клиническими признаками местного воспаления, диагностировали неспецифический вагинит.

Диагноз «вульвоваганальный кандидоз» ставился на основании жалоб паци-

енток на вагинальный зуд, творожистые выделения из половых путей, рН влагалищного отделяемого 5,5, обнаружения грибов рода Candida в вагинальном мазке.

У 8,4±0,5 % беременных с БВ и НВ обнаруживали грибы рода Candida в вагинальных мазках, при этом пациентов относили к БВ или НВ в соответствии с доминирующими симптомами заболевания, что соотносится с литературными данными (Сергеев А.Ю., 2000).

При микроскопическом исследовании вагинальных мазков, у 37,78 % беременных выявлено снижение или исчезновение основных представителей нормальной микрофлоры влагалища - грамположительных палочек, что является показателем наличия лисбиотических нарушений данного биотопа. Грамотрица-тельные УПМ выявлялись у 4?.?~Ю,5 - 49,6±0,7 % пациенток. У этой же части беременных обнаруживались "ключевые" клетки, свидетельствующие о наличии бактериального вагиноза и слущенный покровный эпителий в

большом количестве (у 31,9±1,3 % женщин) (табл. 2).

Таблица 2

Результаты микроскопического исследования

вагинальны х мазков беременных до лечения

Микроскопический объект Содержание в норме (в %) Частота обнаружения (п=197) (в %)

Эпителиальные клетки/ <10 в поле зрения 100 31,9+1,3

Эпителиальные клетки/ >10 в поле зрение отсутствуют • 68,1±0,9

Лейкоциты <10 в поле зрения 100 31,9+0,8

Лейкоциты 10-20 в поле зрения отсутствуют 25,9±1,1

Лейкоцита 21-30 в поле зрения отсутствуют 17,8±0,7

Лейкоциты 31-40 в поле зрения отсутствуют 15,6±0,7

Лейкоциты, все воля зрения OltyiClByiOT 8,9±0,8

Лактобациллы 100 62¿±1,1

Грам(+) кокки единичные 57,(Ж),9

Грам(-) палочки единичные 49,6±0,7

«ключевые» клетки* отсутствуют 33,3*0,8

Грибы рода Кандида отсутствуют 61,9±0,6

Примечание: «ключевые» клетки* - слущенные влагалищные эпителиоциты с адгезированными условно-патогенными микроорганизмами

Грамположительная кокковая флора выявлялась у 57,0±0,9 % женщин, в этих пациенток выявлялся лейкоцитоз (более 10 лейкоцитов в поле зрения) у 68,6±0,7 % беременных, что указывает на наличие неспецифического вагинита. Количество лактобацилл, соответствующих норме, определялись у 62,2±1,1 % па-

циенток. Грибы рода Candida обнаруживались у 41,9±0,5 % беременных с сохранной лактофлорой влагалища, а также с микроскопическими признаками БВ и НВ.

При микробиологическом обследовании беременных с дисбиозами влагалища выявлено, что у 60,0 % женщин лактобациллы отсутствовали либо их количество было ниже нормы. Бифидобактерии отсутствовали у 46,7 % беременных, что свидетельствует о дисбиозе влагалищного биотопа у этой части пациенток. Золотистый стафилококк в высоких титрах (»104 КОЕ/мл), выделяли у 56,7±0,8 % беременных, стрептококк высевали у 61,7±0,9 %, лактозонегативные Exoli - у 63,3±1,1 % беременных, P.vulgaris - в 58,3±1,2 % случаев, энтерококки - в 77,9±0,4 %. Грибы рода Candida выявлялись у 31,7±1,2 % жепщип (таблЗ).

Таблица 3

Результаты микробиологического исследования

влагалищного от деляемого беременных до лечения

Название микроорганизма Содержание м/орг.» в норме (КОЕ/мл) бе Частота обнаружения у ременных (в %) (п= 180)

Отсутств. >1(Р КОЕ/МЛ >104 КОЕ/МЛ

Lactobacillus spp. >10* 26,7±0,8 333±0,4 40,0±0,8

Bifidobacterium spp. >10* 20,0±0,6 33,3±0,4 4б,7±1,1

S.aurtus отсуисп». 26,7±0,2 16,7±0,8 56,7±0,8

S. epidermidis <10* 17,6±0,7 37,ИЮ,4 543±03

Enterococcus spp. отеугаъ. 22,0±0,б 40,0±0,2 38,1±0,4

Streptococcus spp UltyiClB. 38,3±0,7 46,7±0,7 15,1±0,6

P.vulgaris oityitiB. 41,7±0,9 2б,7±1,2 31,6±0,9

Candida spp. UlLyiUIK. 50,0±0,2 183±0,9 31,7±1,2

E.coli, лактозонег. окутав. 36,7±0,1 38,3±0,7 15,1 ±1,1

Примечание: м/орг.* - микроорганизмы

Изучение специфической активности пробиотиков. Специфическая активность пробиотиков разных лекарственных форм в соответствии с Фармакопейными статьями (ФС) оценивается по количеству живых микробов в дозе препарата, по антагонистической активности, или активности кислотообразования.

Однако при этом не учитывается такой важный показатель, как адгезивная активность, который, по мнению многих исследователей, является одним из начальных этапов колонизационной активности (В.И. Брилис, 1990). Не изучено, как жировая основа суппозиториев влияет на уровень адгезивной активности.

Изучение показателей адгезивности на модели эритроцитов у пробиотиков в виде лиофилизата показали, что штаммы, входящие в биоспорин, обладают средним уровнем адгезивной активности (2,6±0,1). Наиболее высокий индекс адге-зивности микроорганизмов (ИАМ) наблюдался у культур, входящих в бифидум-

бактерии (6,8±0,3); препараты лактобактерин и ацилакт обладали средним уровнем адгезивной активности (от 3,3±0,2 АО 2,9±0,1) (рис 1).

У препаратов в форме суппозиториев ИАМ был ниже, чем у лиофилиза-та, причем наиболее высокий показатель адгезии наблюдался у штаммов, входящих в препараты бифидумбактерин и биоспорин (от 1,3±0,3 до 1,4±0,2), наиболее низкий у лактобактерина и ацилакта (1,2±0,1).

Наиболее высокий коэффициент эритроцитов с прилипшими микробами -К (%), определялся у лиофилизированных форм биоспорина и лактобактерина (8б±0,4 %), у бифидумбактерина он составлял 73±0,1 %, у ацилакта - 63±0,2 % (рис 2).

Рис 1. Адгезивная активность споровых и кисломолочных пробиотиков в различных лекарственных формах (ИАМ)

Примечание: Ь —лиофилизат, 8 — суппозитории; лактобакт. — лактобактерин, би-фидум. — бифидумбактерин, биоспор. — биоспорин

При исследовании пробиотиков в форме суппозиториев К(%) также был ниже у всех препаратов по сравнению с лиофилизатом. Наиболее высокий К (%) наблюдался у биоспорина (38±0,3 %), у бифидумбактерина он составлял 34±0,1 %, у лактобактерина — 32±0,1 %, у ацилакта — 24±0,1 %. Таким образом, исследование на модели эритроцитов показало, что компоненты жировой основы экранируют рецепторы эритроцитов и адгезины микробных клеток, и тем самым снижают уровень адгезивной активности у препаратов в форме суппозиториев, что определяется снижением ИАМ и К(%).

Препараты пробиотики в акушерстве и гинекологии применяются традиционно в виде аппликаций, и эффективность их действия во многом зависит от ве-

личины адгезивнои активности штаммов, входящих в их состав, по отношению к эпителиальным клеткам влагалища.

При исследовании адгезивной активности на модели влагалищных эпитс-лиоцитов наиболее высокий уровень НАМ наблюдался у штаммов, входящих в препараты лактобактерин (11,4+0,2), биоспорин (9,2±0,1), и бифидумбактерин (7,9±О,1). Показано, что апилакт обладает средним уровнем адгезивности к эпителиальным клеткам (3,3±0,2). Коэффициент эпителиоцитов влагалища, несущих на своей поверхности микробы, у биоспорина, лактобактерина и бифидумбактерина ровнялся 100 %, у ацилакта составлял 96%, таким образом, показано, что эпителиальные клетки влагалища имеют на своей поверхности рецепторы для адгезии микробов.

Исследования на модели влагалищных эпителиоцитов адгезивной активности пробиотиков в форме суппозиториев показали снижение уровня адгезивности у биоспорина и лактобактерина, при неизменяющемся коэффициенте (К=100 %), что свидетельствует о блокировании адгезинов бактерий компонентами жировой основы. У ацилакта и бифидумбактерина наблюдалось снижение уровня адгезивной активности по отношению к клеткам влагалищного эпителия и коэффициента К (%), что позволяет предположить, что в данном случае происходит блокирование и адгезинов пробиотиков и рецепторов клеток эпителия.

Рис 2. Показатель адгезивной активности (К%) споровых и кисломолочных пробиотиков в различных лекарственных формах

Примечание: Ь - лиофилизат, 8 - суппозитории, лактобакт. - лактобактерин, бифидум. - бифидумбактерин, биоспор. — биоспорин, К% - коэффициент эпителиоцитов влагалища, несущих на своей поверхности микробы

При исследовании антагонистической активности пробиотиков в различных лекарственных формах выявлено, что биоспорин в различных лекарственных формах (лиофилпзат, суппозитории) проявляет высокую антагонистическую активность в отношении УПМ и грибов рода Candida (рис. 3). Бифидумбактерин проявляет выраженную антагонистическую активность по отношению к УПМ (от 17,5 до 24,2 мм).

Исследования показали, что молочнокислые пробиотики (лактобактерин, ацилакт) проявляют различную антагонистическую активность по отношению к УПМ, выделенным из влагалищного отделяемого беременных. Лактобактерин и ацилакт показывают высокую антагонистическую активность (от 16,0 до 21,9 мм) по отношению к штаммам S.aureus, E.coli и P.vulgaris, к штаммам Enterococcus spp. и Streptococcus spp. - от умеренной до высокой (от 9,5 до 17,6 мм).

Лактобактерин, ацилакт и бифпдумбактерин по отношению к грибам рода Candida проявляют низкую антагонистическую активность (в среднем 4-6 мм).

Рис 3. Показатели антагонистической активности споровых и кисломолочных пробиотиков в различных лекарственных формах

Примечание: бифидумб. - бифпдумбактерин, лактобакт. - лактобактерин,

Показано, что форма выпуска пробиотиков ( лиофилизат, суппозитории), используемых в работе, не влияет на показатель антагонистической активности.

Из полученных результатов следует, что при равных показателях специфической активности (антагонистической активности, активности кислотообразова-ния, количества живых микробов в дозе препарата), пробиотики в лиофилизиро-ванной форме, по сравнению с суппозиториями, обладают более высокой адгезивной активностью.

В связи с вышеизложенным, при разработке схем лечения беременных с различными формами дисбиозов влагалища и неспецифическими воспалительными заболеваниями выделены отдельные подгруппы, в схему лечения которых входили пробиотики биоспорин и бифидумбактерин в лекарственной форме суппозитории (табл.4).

Таблица 4

Схемы лечения беремен! ых

ПИР+биоспорин Биоспорин+ ПИР+

бифидумбактерин бифидумбактерин

1 этап: 1 этап: 1 этап:

метрагил биоспорин метрагил

вагинальный гель лиофилизат per os - вагинальный гель

вагинально 2 дозы 2 раза/сутки 1раз/сутки в течение

1раз/сутки в течение 10 суток и 7 суток

7 суток биоспорин лиофилизат вагинально

или вагинально: или

клотримазол 2 дозы 1 раз/сутки на клотримазол

вагинальный крем ночь в виде местных вагинальный крем *

вагинально аппликаций 7суток, вагинально

2 раза/сутки в течение либо биоспорин 2 раза/сутки

7 суток суппозитории 7 суток

2 раза/сутки 10 суток

2 этап: 2 этап:~ 2 этап:

биоеторин бифидумбакгерин бифидумбактерин

лиофилизат pet OS лиофилизат pet os лиофилизат

2 дозы 2 раза/сутки по 5 доз 2 раза/сутки вагинально

10 суток и 10 суток и по 10 доз

биоспорин лиофилизат вагинально 1 раз/сутки на ночь

вагинально: бифидумбактерин 14 суток в виде местных

2 дозы 1 раз/сутки на лиофилизат по 5 доз аппликаций либо

ночь в виде местных 1 раз/сутки на ночь бифидумбактерин

аппликаций 7 суток, 7 суток в виде местных суппозитории 2

либо биоспорин аппликаций либо раза/сутки 14 суток

суппозитории бифидумбактерин

2 раза/сутки 10 суток суппозитории 2

раза/сутки 14 суток

Обследование беременных после окончания лечения. Контрольное обследование производилось на 6-7 сутки после окончания лечения (табл. 5-7).

Таблица 5

Результаты микробиологического исследования влагалищного отделяемого беременных с БВ после окончания лечения_

Название микро- Содер- Содер- Содержа Частота обнаружения после лечения м/орг.» у беременных с разными схемами лечения (в %)

организма жание м/ орг.« жание м/ орг.* яиеу больных ПИР+биоспорин (%) (п=20) биоспорин+ бифидумбакте- рин(%)(п=20) ПШЧбифидум бактерии (%) (п=20)

в норме (КОБ /мл) у боль нш (КОЕ /мл) долече ния (КОЕ/ мл)% суппозитории (п=10) лио-фили- зат (п=10) суппозитории (п=10) лио-фили- зат (п=10) суппозитории (п=10) лио-фили- зат (п=10)

Lactoba- ОТС 95,0 0 0 0 0 10,0 0

cillus spp. >10* <10* 5,0 20,0 10,0 30,0 20,0 70,0 70,0

>10* 0 80,0 90,0 70,0 80,0 20,0 30,0

Bifido- ОТС 90,0 0 0 0 0 20,0 10,0

bacterium >10* <10* 10,0 10,0 10,0 20,0 10,0 20,0 30,0

spp. >ю4 5,0 90,0 90,0 80,0 90,0 60,0 60,0

S.aureus отс 5,0 90,0 100,0 80,0 90,0 50,0 60,0

отс SIO3 20,0 10,0 0 20,0 10,0 20,0 20,0

>104 75,0 0,0 0 0 0 30,0 20,0

S. epider- <10* отс 20,0 70,0 100,0 80.0 100,0 40,0 60,0

midis >10* 80,0 30,0 0 20,0 0 60,0 40,0

Entero- отс. 0 80,0 90,0 70,0 80,0 60,0 70,0

coccus Отс <10» 20,0 20,0 10,0 20,0 20,0 30,0 30,0

spp. >10* 80,0 0 0 10,0 0,0 10,0 0,0

Streptococcus Отс отс >10' 20,0 80,0 100,0 0,0 100,0 0,0 80,0 20,0 90,0 10,0 60,0 40,0 70,0 30,0

spp.

P.vulgaris Ore отс >10» 20,0 80,0 80,0 20,0 100,0 0 80.0 20,0 100,0 0 40,0 60,0 60,0 40,0

Candida отс 60,0 100,0 100,00 80,0 100,0 70,0 70,0

spp Ore <10> 35,0 0 0 20,0 0 30,0 10,0

>104 5,0 0 0 0 0 20,0

E. coll, отс 15,0 80,0 90,0 70,0 80,0 50,0 60,0

лактозо- Ore >10* 85,0 20,0 10,0 30,0 20,0 50,0 40,0

негат. *»

Примечание: м/орг.* - микроорганизмы, лактозонегат. ** - лактозонегатив-

ные

Как показали исследования, у пациенток в группе с БВ наиболее эффективной была схема лечения «ПИР+биоспорин». В микробиологической картине наблюдалось увеличение количественного содержания лактобацилл и бифидобакте-рий. Определялась элиминация S. aureus, S. epidermidis, С. albicans, E. coli, P. vulgaris, Streptococcus spp, Enterococcus spp (табл.5).

Таблица 6

Результата микробиологического исследования влагалищного отделяемого беременных с ВВК после окончания лечения

Название Со- Со- Со- Частота обнаружения м/opr.* у беременных с

микро- дер- держа держа разными схемами лечения (в %)

организма жание м/ орг.* в ние м/ ние у больных ПИР+биоспорин (%) (п=20) биоспорин+ бифидумбакте-рин (%) (п=20) ПИР+бифидум бактерии (%) (п=20)

норме (КОЕ /мл) орг.* У боль НЫХ (КОЕ /мл) ДО лече иия (КОЕ/ мл)% суппозитории (п=10) лиофи лизат- (п=10) суппозитории (п=10) лиофи лизат (п=10) суппозитории (п=10) лио фили- зат (п=10)

Lactoba- отс 10,0 0 0 0 0 10,0 10,0

cillus spp. >104 ¿lö5 45,0 0 0 30,0 20,0 40,0 30,0

>104 45,0 100,0 100,0 70,0 80,0 50,0 60,0

Bifido- ОТС 0 0 0 0,0 .0,0 0,0 0,0

bacterium >104 <10* 35,0 10,0 0 20,0 10,0 20,0 10,0

spp. >10' 65,0 90,0 100,0 80,0 90,0 80,0 90,0

S.aureus отс 75,0 90,0 100,0 80,0 90,0 80,0 80,0

отс <10* 20,0 10,0 0 20,0 10,0 10,0 20,0

>10* 5,0 0 0 0 0 10,0 0,0

S. epidel-midis <vf отс >102 60,0 40,0 80,0 20,0 100,0 0 80,0 20,0 100,0 0 80,0 20,0 90,0 10,0

Enterococ- отс. 70,0 80,0 90,0 80,0 80,0 80,0 90,0

cus spp. отс SIO5 30,0 20,0 10,0 10,0 20,0 20,0 10,0

>104 0 0 0 10,0 0 0 0,0

Strepto- отс 80,0 100,0 100,0 90,0 100,0 90,0 100,0

coccus отс >10" 20,0 0 0 10,0 0 10,0 0,0

spp.

P.vulgaris отс отс >10* 90,0 10,0 90,0 10,0 100,0 0 100,0 0 100,0 0 90,0 10,0 100,0 0

Candida отс 0 90,0 100,0 80,0 100,0 40,0 30,0

spp отс SIO5 10,0 10,0 0 20,0 0,0 40,0 50,0

>10* 90,0 0 0 0,0 0,0 20,0 20,0

E. coli, отс отс 75,0 90,0 90,0 80,0 80,0 80,0 90,0

лактозоне- >10* 25,0 10,0 10,0 20,0 20,0 20,0 10,0

гат. •«

Примечание: м/орг.* - микроорганизмы, лактозонегат. ** - лактозонегатив-

ные.

Схема «биоспорин+бифидумбактерин» также была клинически эффективной, микробиологически было показано восстановление количественного содержания бактерий нормофлоры, но полной элиминации УПМ не происходило.

У беременных в группе с БВ, получавших традиционную терапию ПИР и

бифидумбактерин, при микробиологическом исследовании количество лактоба-цилл не достигало показателей нормы, также не происходило элиминации УПМ и грибов рода Candida, у двух беременных наблюдались рецидивы ВВК.

Таблица 7

Результаты микробиологического исследования влагалищного отделяемого

беременных с НВ после окончания лечения

Микро орга Содер- Содер жание Содержа Частота обнаружения м/орг.* у беременных с разными схемами лечения (в %)

низм жание м/ орг.* У больных (КОЕ /мл) готе у больных ПИР+биоспо рин(%) (п=20) биоспорин+ бифидумбакге-рин(%) (п=20) ПИР+бифндум бактерии (%) (п=20)

в норме (КОЕ /мл) до лече ПИЯ (КОЕ /мл) суппозитории (1=10) лио- фили- зат (п=10) суппозитории (п=10) лио- фили- зат (п=10) суппозитории (п=10) лио- фили- зат (п=10)

Lactobacil- >104 отс 0 0 0 0 0 0 0

lus spp. <10* >104 15,0 85,0 10,0 90,0 0,0 100,0 20,0 80,0 10,0 90,0 20,0 80,0 20,0 80,0

Bifido >104 отс. 5,0 0 0 0 0 0,0 0,0

bacterium SIO5 25,0 10,0 0 30,0 20,0 30,0 20,0

spp. >104 70,0 90,0 100,0 70,0 80,0 70,0 80,0

S.aureus отс отс. 0 90,0 100,0 80,0 80,0 50,0 60,0

SIO5 10,0 10,0 0 10,0 20,0 30,0 20,0

>104 90,0 0 0 10,0 0,0 20,0 20,0

S. epider- <10" ОТС. 10,0 80,0 100,0 80,0 80,0 40,0 60,0

midis >10* 90,0 20,0 0 20,0 20,0 60,0 40,0

Entero- отс отс. 0 80,0 100,0 60,0 80,0 40,0 40,0

coccus <10* 20,0 20 0 40,0 20,0 40,0 60,0

spp. >104 80,0 0 0 0 0 20,0 0

Strepto- отс отс. 10,0 100,0 100,0 70,0 80,0 60,0 80,0

cocc. spp. >10* 90,0 0 0 30,0 20.0 40,0 20,0

P.vulgaris отс СПС. >102 20,0 80,0 90,0 10,0 100,0 0 80,0 20,0 90,0 10,0 40,0 60,0 60,0 40,0

Candida отс отс. 90,0 100,0 100,0 90,0 100,0 80,0 90,0

spp SIO5 10,0 0 0 10,0 0 20,0 10,0

>104 0 0 0 0 0 0 0

E. coli, отс отс. 20,0 80,0 90,0 80,0 80,0 60,0 60,0

лаггозо- >10" 80,0 20,0 10,0 20,0 20,0 40,0 40,0

негат. *♦

Примечание: м/орг.* - микроорганизмы, лактозопегат. ** - лактозонегатив-

ные.

У пациенток в группе с ВВК наилучшие результаты показало лечение «ПИР+биоспорин» и «биоспорин+бифидумбактсрин», подтвержденное клинически и микробиологически, по окончании лечения грибы рода Candida не высевались (табл. 6).

В группе беременных с ВВК, получавших лечение ПИР и бифидумбакте-рином, исчезновение клинических признаков фиксировалось только у трети пациенток, при микробиологическом исследовании у 80 % беременных высевались грибы рода Candida в количественном содержании более КРКОЕ/мл, при динамическом наблюдении наблюдались рецидивы ВВК.

У пациенток в группе с НВ показали свою эффективность схемы лечения «ПИР+биоспорин» и «биоспорин+бифидумбактерин», при посевах вагинального отделяемого наблюдалась полная элиминация УПМ. В группе беременных с НВ, получавших традиционное лечение ПИР и бифидумбактерином, уровень содержания лакто- и бифидобактерий был снижен у 20 % пациенток, у 40 % беременных, высевались УПМ в высоких титрах (табл.7).

Следует отметить, что клиническое излечение в группах пациенток, применявших препараты в лиофилизированной форме, наступало на 5,0±0,5 суток раньше, чем в группах женщин, применявших препараты в форме суппозиториев.

Во всех трех группах была выявлена меньшая микробиологическая эффективность применения биоспорина и бифидумбактерина в лекарственной форме суппозитории, однако разница была статистически незначимой.

Полученные данные клинико-лабораторного обследования позволяют высоко оценить эффективность лечения беременных с БВ, ВВК и НВ, применявших ПИР с последующим назначением пробиотика биоспорина. Клинический и микробиологический эффект подобной двухэтапной терапии при этих нозологиях составил 97%. В этой группе гнойно-септических осложнений и кандидоза не было выявлено ни у одной пациентки.

Применение биоспорина с последующим назначением бифидумбактерина также было достаточно эффективно, поэтому эта схема может быть рекомендована при непереносимости антибиотиков, как средство антибактериальной терапии при БВ,ВВК и НВ.

Применение новой лекарственной формы биоспорина - суппозиториев, показало, что препарат хорошо переносился пациентками, не вызывал аллергии, других побочных реакций.

Показано, что клиническая и микробиологическая эффективность применения суппозиториев биоспорина ниже, чем лиофилизированной формы био-спорина.

ВЫВОДЫ

1. При гинекологическом, лабораторном, микробиологическом обследовании 197 беременных женщин, у 91,4 % женщин были выявлены различные нарушения микрофлоры влагалища и диагностированы бактериальный вагипоз, вульвовагинальный кандидоз и нсспсцифичсский вагинит.

2. На основе обнаружения связи между выраженностью адгезии и количеством живых бактерий разработан способ оценки специфической активности про-биотиков и производственных штаммов по уровню их адгезивной активности, что позволяет судить об эффективности и качестве препаратов в разных лекарственных формах.

3. Экспериментальное изучение адгезивной активности различных лекарственных форм биоспорина и других пробиотиков, традиционно применяющихся в акушерско-гинекологической практике (бифидумбактерина, лактобакте-рина, ацилакта) на модели формалинизированных эритроцитов человека и влагалищных эпителиоцитов, показало, что пробиотики в лиофилизирован-ной форме, обладают более высокой адгезивной активностью. Снижение показателей адгезивносги (ИАМ, К) у пробиотиков в лекарственной форме -суппозитории свидетельствует о блокировании адгезинов на микробных клетках и рецепторов клеток эпителия компонентами жировой основы.

4. Жировая основа суппозиториев не влияет на показатели антагонистической активности производственных штаммов пробиотиков.

5. При экспериментальном изучении лечебного действия биоспорина in vitro, выявлена высокая антагонистическая активность в отношении условно-патогенной микрофлоры и грибов рода Candida, выделенных из влагалищного отделяемого беременных женщин. В параллельных исследованиях выявлено отсутствие антагонистической активпости кисломолочных пробиотиков лак-тобактерина, ацилакта, бифидумбактерина в отношении грибов рода Candida. Полученные данные свидетельствуют о неэффективности использования лактосодержащих пробиотиков в лечении вульвовагинальных кандидозов.

6. Разработаны схемы коррекции микроэкологических нарушений влагалищного биотопа у беременных различными лекарственными формами спорового про-биотика - биоспорина с целью коррекции дисбиозов влагалища и снижения воспалительных осложнений в послеродовом периоде. Терапия препаратами имидазольного ряда с последующим назначением биоспорина максимально эффективна.

7. Схема лечения «биоспорин+бифидумбактерин» была менее эффективной, однако она может быть рекомендована при аллергических реакциях на химио-терапевтические средства. В данной группе отсутствовали гнойно-септические осложнения у беременных, и в послеродовом периоде.

8. Споровый пробиотик биоспорип в лекарственных формах лиофилизат и суппозитории может быть рекомендован к применению для коррекции различных форм дисбиозов влагалища у беременных и для снижения пюйно-воспалительных осложнений в послеродовом периоде.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Чумаева Т.В., Осилова И.Г., Васильева Е.А., Колгаиова Т.В., Золотарева О-В., Саркисов С.Э. Изучение адгезивной активности пробиотиков различных лекарственных форм, применяемых в гинекологической практике. "Пробиотические микроорганизмы — современное состояние вопроса и перспективы использования" Тезисы международной научно-практической конференции памяти Г.И. Гончаровой. Москва. 2002 г., с 24.

2. Чумаева Т.В., Осипова И.Г., Васильева Е.А., Колганова Т.В., Золотарева О.В., Саркисов С.Э., РУДН, кафедра микробиологии; ГИСК им. Л.А.Тарасевича; РМАПО; Москва, Россия. Изучение адгезивной активности пробиотиков различных лекарственных форм, применяемых в гинекологической практике. СБ.тр. Биомедицинские технологии. Вып.18. М. —2002. -С. 15-18.

3. Осипова И.Г., Созаева Л.Г., Евлашкина В.Ф., Васильева Е.А., Колганова Т.В., Чумаева Т.В., Лукьянова О.Ю. Адгезивная активность пробиотиков, применяемых в гинекологической практике. СБ.тр. Биомедицинские технологии. Вып.1б. М. -2001. -С.19-23.

4. Колганова Т.В., Джарадат Т., Чумаева Т.В., Осипова И.Г., Васильева ЕА, Лукьянова О.Ю., Буданова Е.В., Золотарева О.В., Кульчицкая М.А. К вопросу о воздействии лазерного излучения и пробиотиков на штаммы Exoli, выделенные от людей с заболеваниями мочевыделительной системы. "Пробиотические микроорганизмы- — современное состояние вопроса и перспективы использования" Тезисы международной научно-практической конференции памяти Г.И. Гончаровой. Москва. 2002 г., с 25.

5. Горбунов С.Г., Осилова-И.Г., Созаева Л.Г., Васильева ЕА, Чумаева Т.В. Биоспорин — новый пробиотик для профилактики послеоперационных гнойно-септических осложнений в гинекологической практике. В кн. «Инфекционные болезни. Диагностика, лечение, профилактика». Труды VI Российско-итальянской научной конференции. С-Пб., дек., 2000, с 14-16.

6. Чумаева Т.В., Осипова И.Г., Васильева ЕА, Колганова Т.В., Золотарева О.В., Евлашкина В.Ф. Сопоставление эффективности пробиотиков различных лекарственных форм, используемых в акушерско-гинекологической практике, по степени их антагонистической и адгезивной активности. Журнал «Биопрепараты», вып. 1,2003 г., с 21-24.

7. Осипова И.Г., Колганова Т.В., Васильева ЕА, Чумаева Т.В., Евлашкина В.Ф. К вопросу о комплексном воздействии импульсного инфракрасного лазерного излучения и пробиотиков на штаммы Escherichia coli, выделенные от людей с заболеваниями мочевыделительной системы// Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XX веке: Материалы Всероссийской конференции. -Пермь, 2003.-С293-297.

8. Подана заявка на патент РФ № 108-419 от 27 марта 2003 года: «Способ оценки специфической активности препаратов пробиотиков различных лекарственных форм и производственных штаммов по уровню их адгезивной активности» (МПК 7: А61К 35/74). Патент прошел формальную экспертизу, в настоящее время проводится экспертиза по существу.

Чумаева Татьяна Владимировна (Россия) «Экспериментальное обоснование применения различных лекарственных

форм пробиотиков для коррекции дисбиозов влагалища». Экспериментальное изучение адгезивной активности различных лекарственных форм биоспорина и кисломолочных пробиотиков, применяющихся в акушерско-гинеколоппеской практике, на различных моделях, показало, что пробиотики в лиофилизированпой форме, обладают более высокой адгезивной активностью по сравпению с суппозиториями. Снижение показателей адгезивности у пробиотиков в лекарственной форме -суппозитории свидетельствует о блокировании адгезинов на микробных клетках и рецепторов клеток эпителия компонентами жировой основы. Применение различных схем коррекции дисбиозов влагалищного биотопа у беременных, показало, что терапия препаратами имидазольпого ряда с последующим назначением биоспорина максимально эффективна (при микробиологическом исследовании влагалищного отделяемого выявлено увеличение количества лактобацилл, снижение уровня УПМ, грибов рода Candida). Лечение биоспорином и бифидумбактерином было менее эффективным, однако оно может быть использовано при аллергических реакциях на химиотерапевтические средства. Споровый пробиотик биоспорин в различных лекарственных формах может быть рекомендован к применению для коррекции различных форм дисбиозов влагалища у беременных и для снижения гнойно-воспалительных осложнений в послеродовом периоде.

Tchumaeva Tatiana V. (Russia) "Usage ofprobiotics in the different medicine forms for vaginal disbiosis

treatment. Experimental basis". The study of adhesive activity of die biosporin in different medicine forms and various acidophilus probiotics that are using in obstetric-gynecologic practice, had result, that probiotics in the frozen-dried form has adhesive activity higher than in suppositories form. The decrease of adhesive activity of probiotics in suppositories form is conditioned by the fact that the fat base of suppositories blocks bacterial adhesins and receptors of epithelial cells. The most effective treatment regimen of vaginal disbiosis in pregnant woman was consecutive prescription of imidazole-based medicine first and biosporin next (the microbiological study of vagina has shown the increase of Lactobacillus titre, decrease of uropathogens and Candida titre). The treatment by biosporin first and bifidobacterin next was less effective, but this regimen can be use also if there is the chemical-drug induced allergy in anamnesis. The different medicine forms of spore probiotic biosporin is recommended for treatment of various forms of vaginal disbiosis in pregnant woman as well as for decrease of pyoinflammatory complications during puerperal period.

Напечатано с готового оригинал-макета

Издательство ООО "МАКС Пресс" Лицензия ИД N 00510 от 01.12.99 г. Подписано к печати 18.05.2004 г. Формат 60x90 1/16. Усл.печл. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ 225. Тел. 939-3890,939-3891,928-1042. Тел./факс 939-3891. 119992, ГСП-2, Москва, Ленинские горы, МГУ им. М.В. Ломоносова, 2-й учебный корпус, 627 к.

И 049 J

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Чумаева, Татьяна Владимировна

ВВЕДЕНИЕ -

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ -121.1 Резидентная микрофлора и ее роль в сохранении колонизационной резистентности -121.2 Механизмы колонизационной резистентности вагинального биотопа -161.3 Дисбиотические нарушения микрофлоры влагалища -201.4 Традиционные принципы коррекции дисбиозов влагалища у беременных -281.5 Споровые и кисломолочные пробиотики в коррекции дис- -29-биозов влагалища

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ -372.1 Материалы -372.2 Методы обследования беременных -432.2.1 Аминный тест -432.2.2 рН-метрия влагалищного отделяемого -432.2.3 Микроскопическое исследование вагинальных мазков -432.2.4 Микробиологическое исследование вагинального биотопа беременных -442.3 Определение уровня адгезивной активности штаммов пробиотиков и штаммов УПМ на различных моделях -452.4 Определение антагонистической активности пробиотиков по отношению к клиническим штаммам УПМ -482.5 Схемы лечения беременных с дисбиозами влагалища -492.6 Критерии оценки эффективности лечения беременных -502.7 Методы статистической обработки результатов -

Глава 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ -523.1 Выбор наполнителя для новой лекарственной формы про- -52-биотика «Биоспорин суппозитории»

3.2 Клинико-диагностическое обследование беременных -583.2.1 Гинекологическое обследование беременных -593.2.2 рН-метрия влагалищного отделяемого -603.2.3 Аминный тест -613.2.4 Микроскопическое исследование вагинальных мазков -623.3 Микробиологическое исследование влагалищного отделяемого беременных -653.4 Изучение специфической активности различных лекарственных форм пробиотиков -713.4.1 Адгезивная активность пробиотиков различных лекарственных форм на модели формалинизированных эритроцитов человека -723.4.2 Адгезивная активность пробиотиков различных лекарственных форм на модели эпителиоцитов влагалища -75

3.4.3 Адгезивная активность УПМ влагалища на модели фор-малинизированных эритроцитов человека -77

3.4.4 Антагонистическая активность пробиотиков различных лекарственных форм по отношению к УПМ влагалища -78

3.4.5 Антагонистическая активность пробиотиков по отношению к уропатогенным E.coli -823.5 Обоснование включения пробиотиков различных лекарственных форм в клинические схемы коррекции нарушений влагалищного микробиоценоза -843.6 Клинико-диагностическое обследование беременных после окончания лечения -853.6.1 Гинекологическое обследование беременных после окончания лечения -863.6.2 Аминный тест -903.6.3 рН-метрия влагалищного отделяемого -903.6.4 Микроскопическое исследование вагинальных мазков -913.7 Микробиологическое исследование влагалищного отделяемого -973.8 Характеристика инфекционно-воспалительных осложнений родов и послеродового периода у беременных с различными формами дисбиозов влагалища после лечения -104

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экспериментальное обоснование применения различных лекарственных форм пробиотиков для коррекции дисбиозов влагалища"

Данные литературы свидетельствуют о том, что различные инфекционные осложнения могут возникать как в послеродовом периоде, так и во время беременности, и также развиваться у новорожденных, а после различных внутриматочных манипуляций и операций создается реальная угроза возникновения острых воспалительных заболеваний матки и придатков (42,45, 337).

Одним из основных этиологических факторов возникновения подобных осложнений являются дисбиозы влагалища. Во время беременности дис-биозы влагалища могут вызвать задержку внутриутробного развития в связи с нарушением маточно-плацентарного кровообращения, возникновение хо-риоамнионита, привести к несвоевременному излитию околоплодных вод, преждевременным родам. В послеродовом периоде опасность развития инфекционных заболеваний у родильниц и новорожденных возрастает во много раз. Дисбиозы влагалища являются значительным фактором риска развития послеродовых гнойно-воспалительных осложнений. Так, частота послеродового эндометрита у родильниц с дисбиозами влагалища увеличивается в 2,25,8 раза (16,122,135).

В настоящее время в акушерстве и гинекологии для коррекции дис-биотических состояний влагалища используются различные схемы лечения, направленные на восстановление нормальной микрофлоры (7,128,163). Применяются антибактериальные препараты имидазольного ряда (ПИР) и мо-лочно-кислые пробиотики (бифидумбактерин, лактобактерин, ацилакт). Однако назначение ПИР не устраняет саму причину заболевания, и в результате рецидивы дисбиозов влагалища встречаются довольно часто (10-15%). Также недостатком этих схем является большое количество побочных явлений или осложнений при применении ПИР, ограничение возможности их использования в первом триместре беременности. Пробиотики применяются местно в виде аппликаций, при этом их действие часто оказывается неэффективным, т.к. изменения качественного и количественного состава микрофлоры влагалища являются следствием снижения колонизационной резистентности микробиоценоза организма человека в целом. Также исследования показали, что бактерии, входящие в данные пробиотики, вырабатывают молочную кислоту, которая индуцирует рост грибов рода Candida. Увеличение количественного содержания грибов рода Candida в микробиоценозе влагалища по данным исследований может приводить к серьезным, в том числе диссеминирован-ным, поражениям плода и новорожденного, вплоть до кандидозного сепсиса. В связи с тем, что при беременности увеличивается частота выделения грибов рода Candida, эти препараты неэффективны или оказывают отрицательное действие (51,111).

В последние годы в медицинской практике применяется споровый пробиотик биоспорин. Препарат используется для коррекции микрофлоры кишечника при дисбактериозах, в гинекологической практике при лечении бактериального вагиноза и вульвовагинального кандидоза, в хирургии для профилактики развития гнойно-септических осложнений в послеоперационном периоде. Препарат не токсичен, не обладает тератогенными свойствами, разрешен к применению у беременных (87).

Биоспорин выпускается в форме лиофилизата и таблеток, применяется per os и вагинально в виде аппликаций. В настоящее время Екатеринбургским Центром военно-промышленных проблем разрабатывается новая лекарственная форма биоспорина - вагинальные суппозитории. Однако эффективность лечебного действия этой лекарственной формы при различных нарушениях микроэкологии влагалища у беременных не выяснена, также не отработаны схемы применения вагинальных суппозиториев биоспорина в акушерстве и гинекологии.

В связи с этим, все вышеизложенное обусловило актуальность исследования, целью которого явилось экспериментальное обоснование применения пробиотиков в различных лекарственных формах (лиофилизат, суппозитории) для коррекции дисбиозов влагалища.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: Экспериментальное обоснование применения пробиотиков в различных лекарственных формах (лиофилизат, таблетки, суппозитории) для коррекции дисбиозов влагалища.

ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Изучить микробиоценоз влагалища беременных.

2. Выбрать оптимальный наполнитель для новой лекарственной формы «Биоспорин суппозитории».

3. Провести сравнительное изучение основных показателей качества (адгезивная, антагонистическая активность) пробиотиков различных лекарственных форм.

4. Разработать схемы коррекции дисбиозов влагалища у беременных.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА: Обоснован способ оценки специфической активности препаратов пробиотиков различных лекарственных форм по уровню их адгезивной активности.

Подана заявка на патент РФ № 108-419 от 27 марта 2003 года: "Способ оценки специфической активности препаратов пробиотиков различных лекарственных форм и производственных штаммов по уровню их адгезивной активности" (МПК7: А61К 35/74).

Подобран оптимальный вариант наполнителя (гидрированный жир с эмульгатором Т-2) для новой лекарственной формы «Биоспорин суппозитории».

Обоснованы оптимальные схемы коррекции дисбиозов влагалища «ими-дазольный препарат+биоспорин» и «биоспорин+бифидумбактерин» с использованием пробиотиков биоспорина и бифидумбактерина в двух лекарственных формах (лиофилизат, суппозитории).

Изучены основные показатели качества (адгезивная, антагонистическая активность) пробиотиков различных лекарственных форм (лиофилизат, суппозитории). Сравнительное изучение специфической активности споровых пробиотиков и пробиотикОв нормофлоры показало, что различные формы пробиотиков не различаются по антагонистическим свойствам, тогда как уровень адгезивной активности препаратов в свечевых формах снижается вследствие экранирования рецепторов эритроцитов (эпителиоцитов) и адге-зинов микробных клеток.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ:

1. Наполнитель гидрированный жир с эмульгатором Т-2, обеспечивающий стабильность препарата на протяжении всего срока годности, включен в регламент производства новой лекарственной формы «Биоспорин суппозитории».

2. Разработанные схемы коррекции бактериального вагиноза, вульвовоги-нального кандидоза и неспецифического вагинита у беременных, включающие применение различных лекарственных форм пробиотиков биоспорина и бифидумбактерина, включены в методические рекомендации кафедры акушерства и гинекологии РМАПО.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ 1. У беременных женщин, находящихся на стационарном лечении в отделении патологии беременности, в 91,4 % случаев выявлены различные нарушения микрофлоры влагалища (бактериальный вагиноз, вульвовагинальный кандидоз и неспецифический вагинит).

2. Разработанные схемы лечения бактериального вагиноза, вульвовагиналь-ного кандидоза и неспецифического вагинита у беременных, включающие применение различных лекарственных форм пробиотиков обеспечивают коррекцию дисбиозов влагалища и приводят к стойкому снижению гнойно-воспалительных осложнений в послеродовом периоде.

3. Оптимальный вариант наполнителя (гидрированный жир и эмульгатор Т-2), обеспечивает сохранение основных показателей качества (антагонистическая активность, адгезивные свойства, количество живых бактерий в дозе препарата) новой лекарственной формы «Биоспорин суппозитории» на протяжении 15 месяцев.

4. Способ оценки специфической активности пробиотиков и производственных штаммов по уровню их адгезивной активности, позволяет оценить эффективность и качество препаратов пробиотиков в разных лекарственных формах.

5. При сравнении адгезивной активности споровых пробиотиков и пробиотиков нормофлоры в лразличных лекарственных форм (лиофилизат, суппозитории) выявлено снижение адгезивной активности у пробиотиков в свечевой форме, при неизменяющемся уровне антагонистических свойств.

Апробация работы. Результаты исследований были доложены на научно-практической конференции НПО "Биомедицинские технологии" (Москва, 2003), на международной научно-практической конференции памяти Г.И. Гончаровой «Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования» (Москва, 2002), на заседаниях кафедры микробиологии медицинского факультета РУДН (Москва, 2000, 2001, 2002, 2003). Работа апробирована на заседании кафедры медицинской микробиологии 16 марта 2004 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ.

1. Чумаева Т.В., Осипова И.Г., Васильева Е.А., Колганова Т.В., Золотарева О.В., Саркисов С.Э. Изучение адгезивной активности пробиотиков различных лекарственных форм, применяемых в гинекологической практике. // "Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования" Тезисы международной научно-практической конференции памяти Г.И.Гончаровой. М., 2002 г., С. 24.

2. Чумаева Т.В., Осипова И.Г., Васильева Е.А., Колганова Т.В., Золотарева О.В., Саркисов С.Э. Изучение адгезивной активности пробиотиков различных лекарственных форм, применяемых в гинекологической практике. // СБ.тр. Биомедицинские технологии. Вып.18. М. -2002. -С.15-18.

3. Осипова И.Г., Созаева Л.Г., Евлашкина В.Ф., Васильева Е.А., Колганова Т.В., Чумаева Т.В., Лукьянова О.Ю. Адгезивная активность пробиотиков, применяемых в гинекологической практике. // СБ.тр. Биомедицинские технологии. Вып. 1 б. М. -2001. - С. 19-23.

4. Колганова Т.В., Джарадат Т., Чумаева Т.В., Осипова И.Г., Васильева Е.А., Лукьянова О.Ю., Буданова Е.В., Золотарева О.В., Кульчицкая М.А. К вопросу о воздействии лазерного излучения и пробиотиков на штаммы E.coli, выделенные от людей с заболеваниями мочевыделительной системы. // "Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования" Тезисы международной научно-практич. конференции памяти Г.И.Гончаровой. М., 2002 г., С. 25.

5. Горбунов С.Г., Осипова И.Г., Созаева Л.Г., Васильева Е.А., Чумаева Т.В. Биоспорин - новый пробиотик для профилактики послеоперационных гнойно-септических осложнений в гинекологической практике. В кн. «Инфекционные болезни. Диагностика, лечение, профилактика». Труды VI Росс.- итальян. научной конференции. С-Пб., 2000, С. 14-1 б.

6. Чумаева Т.В., Осипова И.Г., Васильева Е.А., Колганова Т.В., Золотарева О.В., Евлашкина В.Ф. Сопоставление эффективности различных лекарственных форм пробиотиков, используемых в акушерскогинекологической практике, по степени антагонистической и адгезивной активности// "Биопрепараты" №1(9), март, 2003; С. 17-20.

7. Осипова И.Г., Колганова Т.В., Васильева Е.А., Чумаева Т.В., Евлаш-кина В.Ф. К вопросу о комплексном воздействии импульсного инфракрасного лазерного излучения и пробиотиков на штаммы Escherichia coli, выделенные от людей с заболеваниями мочевыделительной системы// Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XX веке: Материалы Всероссийской конференции. - Пермь, 2003. - С.293-297

Объем и структура работы. Диссертация построена по традиционному плану и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы. Работа изложена на 142 стр. текста компьютерной верстки и иллюстрирована 27 таблицами, и 11 рисунками. Список литературы представлен 231 источником (131 отечественным и 100 зарубежным).

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Чумаева, Татьяна Владимировна

выводы

1. У беременных женщин, находящихся на стационарном лечении в отделении патологии беременности, в 91,4 % случаев выявлены различные нарушения микрофлоры влагалища (бактериальный вагиноз, вуль-вовагинальный кандидоз и неспецифический вагинит).

2. Разработаны две оптимальные схемы коррекции дисбиотических нарушений влагалищного биотопа у беременных (бактериального вагиноза, вульвовагинального кандидоза, неспецифического вагинита) с использованием споровых пробиотиков и пробиотиков нормофлоры в различных лекарственных формах: «имидазольный препа-рат+биоспорин» и «биоспорин+бифидумбактерин».

3. Подобран оптимальный вариант наполнителя (гидрированный жир и эмульгатор Т-2), обеспечивающий сохранение основных показателей качества (антагонистическая активность, адгезивная активность, количество живых бактерий в дозе препарата) при производстве новой лекарственной формы «Биоспорин суппозитории» на протяжении всего срока годности.

4. Разработан способ оценки специфической активности пробиотиков и производственных штаммов по уровню их адгезивной активности, позволяющий оценить эффективность и качество препаратов пробиотиков в разных лекарственных формах.

5. Изучены основные свойства (адгезивная, антагонистическая активность) пробиотиков различных лекарственных форм. При сравнении адгезивной активности двух лекарственных форм споровых пробиотиков и пробиотиков нормофлоры выявлено снижение адгезивной активности у пробиотиков в свечевой форме, при неизменяющемся уровне антагонистических свойств.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время в акушерско-гинекологической практике для коррекции дисбиозов влагалища применяют комбинированные схемы лечения (антибиотики имидазольного ряда, пробиотики). Недостатками применения препаратов имидазольного ряда является чувствительность к ним лакто- и бифидобактерий, вследствие чего происходит дальнейшее угнетение нормального микробиоценоза влагалища. Эти препараты имеют много побочных действий, их нельзя применять в первом триместре беременности (54; 226;238).

Лакто- и бифидосодержащие пробиотики, традиционно используемые в виде аппликаций в акушерстве и гинекологии для восстановления нормальной микрофлоры, обладают низкой адгезивной активностью по отношению к влагалищному эпителию. Кисломолочные пробиотики не проявляют антагонистической активности по отношению к грибам рода Candida, и также могут индуцировать их рост, т.к. штаммы, входящие в эти препараты, вырабатывают молочную кислоту. А так как, по данным литературы, в 71 % случаев у беременных выделяют грибы, эти препараты неэффективны или оказывают отрицательное действие (111; 194).

Пробиотик биоспорин с успехом применяется при лечении дисбиозов кишечника и влагалища, в частности вульвовагинального кандидоза, препарат эффективно используется в хирургии для профилактики и лечения послеоперационных гнойно-септических осложнений, вызываемых патогенными и условно-патогенными микроорганизмами и грибами (80-82;181;71;89).

Препарат выпускается в виде лиофильно высушенной биомассы во флаконах, применяется per os и вагинально в виде аппликаций. В настоящее время разрабатывается новая лекарственная форма биоспорина — вагинальные суппозитории. Однако эффективность лечебного действия этих лекарственных форм при различных нарушениях микроэкологии влагалища у беременных не выяснена, также не отработаны схемы применения вагинальных суппозиториев биоспорина в акушерско-гинекологической практике.

Все вышеизложенное обусловило актуальность исследований, целью которых являлось экспериментальное обоснование применения различных лекарственных форм биоспорина в сравнении с кисломолочными пробиоти-ками, традиционно применяемыми в медицинской практике для коррекции микробиоценоза влагалища беременных и определении его роли в снижении частоты гнойно-воспалительных осложнений в акушерстве и гинекологии.

Работа проводилась в лаборатории диагностических бактерийных препаратов с коллекцией микроорганизмов ГИСК им. Л.А.Тарасевича совместно с кафедрой акушерства и гинекологии РМАПО на базе родильного дома при ГКБ № 72.

Стабилизация бактериальных культур в производстве лекарственных форм пробиотиков является необходимой технологической стадией, обеспечивающей сохранение биологической активности (количества живых бактерий в дозе препарата) на протяжении регламентированного срока годности.

В предварительных исследованиях по выбору наполнителя для новой лекарственной формы «Биоспорин суппозитории» было изучено влияние наполнителей: Витепсола Н-15, масла какао, гидрированного жира с эмульгатором Т-2 на стабильность препарата.

Исследование стабильности экспериментальных серий суппозиториев биоспорина показало, что стабилизирующий эффект, необходимый для сохранения регламентированной биологической активности препарата на протяжении 15 месяцев (не менее 109 КОЕ/суппозиторий в течение всего срока годности), наблюдался только у серий препарата, приготовленных на основе гилрированного жира с эмульгатором Т-2.

На основании полученных данных в качестве наполнителя для производства новой лекарственной формы «Биоспорин суппозитории» был выбран гидрированный жир с эмульгатором Т-2. В дальнейших исследованиях были использованы серии «Биоспорин суппозитории», приготовленные по выбранной технологии.

Для решения поставленных задач обследовано 197 беременных женщин во 2-ом и 3-ем триместре беременности. Из общего количества различные нарушения микрофлоры были диагностированы у 180.

Диагностика нарушений микрофлоры влагалища у беременных основывалась на выявлении совокупности ряда клинических признаков и применении необходимых лабораторных методов и включало в себя рН-метрию вагинального отделяемого, аминный тест, микроскопическую характеристику мазков, окрашенных по Граму и бактериологическое исследование влагалищного отделяемого (181;45;54).

При проведении рН-метрии выявлено, что у беременных с БВ происходит существенное ощелачивание влагалищного отделяемого (в среднем 6,22±0,032), по сравнению с ВВК и НВ. Это соответствует многочисленным литературным данным, где механизм смещения рН-среды в щелочную сторону при БВ, объясняется практически полным исчезновением лактобацилл (54, 208, 207). В результате уменьшается концентрация молочной кислоты и увеличивается в видовом и количественном отношении популяция строгих анаэробных бактерий. А именно продукты метаболизма анаэробов, способствуют ощелачиванию рН влагалищного секрета.

Постановка аминного теста, согласно шкале предложенной Кира Е.Ф., показала, что максимальная интенсивность (+++) выявлена у 17,3 % пациенток с БВ (54).

При микроскопическом исследовании вагинальных мазков, в группе беременных с БВ, «ключевые клетки» выявлялись в 98,3±0,7 % случаев. Количество лактобацилл было резко снижено до 6,6±0,3 %. Количество лейкоцитов менее 10 в поле зрения отмечалось у 95,0±0,2 % женщин. В этой группе отмечалось преобладание грамотрицательной флоры (до 80 %). Грампо-ложительные кокки выявлялись у 73,3±0,8 % беременных.

У пациенток с ВВК грибы рода Candida определялись в 100 % случаев. Число лейкоцитов в вагинальном мазке было повышенным, у 20,0±0,1 % больных отмечалось количество от 10 до 20 лейкоцитов в мазке. Количество лактобацилл было снижено незначительно (до 93,3±0,3 %). Кокковая флора выявлялась у 10,0-15,0 % беременных.

Наибольшее количество лейкоцитов в поле зрения определялось у пациенток с НВ (от 10 до 20 лейкоцитов - 18,3±0,1 %, от 21 до 30 - 26,7±0,3 %, от 31 до 40 - 28,3±0,6 %, все поле зрения - у 23,3±0,2 %). Количество лактобацилл в этой группе было близким к норме (95,5±0,3 %). Грамположитель-ные кокки определялись в 100,0 % случаев, Грамотрицательные палочки - в 63,3 и 81,7 % случаев соответственно.

Микробиологическое исследование видового состава микрофлоры влагалища пациенток группы с БВ показало отсутствие или снижение количества лакто- и бифидобактерий, которые являются представителями нормальной микрофлоры и увеличение числа видов различных представителей условно-патогенной флоры. Золотистый стафилококк в высоком титре выделялся у 95% больных, стрептококки - в 80 %, лактозонегативную кишечную палочку - в 85 % случаев. У 1 пациентки были обнаружены грибы рода Candida в высоком титре.

При анализе видового и количественного состава микрофлоры влагалища у беременных с ВВК грибы рода Candida обнаруживались в 100 % случаев, причем в высоком титре они выявлены у 90,0 % пациенток. Лактобациллы и бифидобактерии высевались у всех пациенток, в высоком титре - в 55,0 % и 65,0 % соответственно. Таким образом, исследование показало, что при ВВК также наблюдается снижение количества лакто- и бифидобактерий (до <103 КОЕ/мл), но не такое значительное, как при БВ. Условно-патогенные микроорганизмы (стафилококки, лактозонегативные кишечные палрочки, стрептококки) выявлялись в количестве более 104 КОЕ/мл у 5-25 % больных.

При обследовании группы с НВ S.aureus высевался у всех больных, причем у 90 % - в высоком титре. Стрептококки обнаруживали у 90,0 % пациенток, лактозонегативная E.coli - у 80,0 % больных. Представители нормальной микрофлоры влагалища определялись у 85,0 и 70,0 % пациенток соответственно.

В итоге проведенного микробиологического исследования влагалищного отделяемого было выделено 158 штаммов УПМ для последующего экспериментального изучения антагонистической и адгезивной активности биоспорина и кисломолочных пробиотиков в различных лекарственных формах, традиционно применяемых в акушерско-гинекологической практике.

В настоящее время получили развитие работы по изучению и внедрению в практику медицины пробиотиков из живых культур аэробных спороб-разующих бактерий: биоспорин, споробактерин (80-82;95;91). Доказано, что показатели антагонистической активности биоспорина в виде лиофильно высушенной массы и у таблетированных форм статистически достоверно одинаковы (95). В связи с тем, что суппозитории биоспорина являются новой лекарственной формой препарата, следовало изучить влияние компонентов свечевой основы биоспорина на показатели антагонистической активности.

Была исследована антагонистическая активность пробиотиков биоспорина, лактобактерина, ацилакта, бифидумбактерина в виде лиофильно высушенной массы во флаконах и в суппозиториях, в отношении УПМ.

В результате исследований выявлено, что споровый пробиотик биоспорин в различных лекарственных формах (лиофилизат, суппозитории) проявляет высокую антагонистическую активность в отношении УПМ (21,6±0,3-27,1 ±0,5 мм) и грибов рода Candida (28,2±0,4 мм), и, следовательно, может использоваться при лечении вульвовагинального кандидоза у беременных. Исследования по изучению антагонистической активности были подтверждены результатами микробиологических исследований влагалищного отделяемого у беременных с различными нарушениями влагалищного микробиоценоза до и после лечения споровым пробиотиком биоспорином.

Бифидумбактерин проявляет выраженную антагонистическую активность по отношению к УПМ (17,14±0,3-24,2±0,1 мм).

Исследования показали, что молочнокислые пробиотики (лактобактерин, ацилакт) проявляют разную антагонистическую активность по отношению к УПМ влагалища. По отношению к штаммам S.aureus, E.coli и P.vulgaris лактобактерин и ацилакт показывают высокую антагонистическую активность (от 16,0±0,4 до 21,9±0,6 мм), по отношению к штаммам Entero-coccus spp. и Streptococcus spp. - от умеренной до низкой (от 9,5±0,2 до 17,57±0,6 мм). Антагонистическая активность лактобактерина, ацилакта и бифидумбактерина по отношению к грибам рода Candida была низкой и составляла в среднем 4-6 мм. Таким образом, проведенная работа подтвердила данные клинических исследований о неэффективности использования лакто-содержащих пробиотиков в лечении вульвовагинальных кандидозов (109).

В работе показано, что форма выпуска пробиотиков (лиофилизат, суппозитории), не влияет на показатель антагонистической активности.

У беременных с дисбиозами влагалища часто выявляются воспалительные заболевания мочевыводящей системы, вызываемые условно-патогенными эшерихиями. В настоящее время в урологической практике для лечения пиелонефритов и циститов, вызванных УПМ, применяются различные пробиотики.

Была изучена антагонистическая активность споровых пробиотиков по отношению к уропатогенным E.coli in vitro.

В исследовании были использованы коммерческие серии пробиотиков производства России (биоспорин, бактиспорин, споробактерин). В качестве препаратов сравнения были взяты колисодержащие пробиотики (колибакте-рин, бификол), кисломолочный пробиотик лактобактерин, препарат энтерол и споровый пробиотик бактисубтил производства Франции.

Выявлена высокая антагонистическая активность биоспорина, колисо-держащих пробиотиков и лактобактерина в отношении уропатогенных штаммов E.coli.

Пробиотические препараты в акушерстве и гинекологии применяются традиционно в виде аппликаций, и эффективность их действия во многом зависит от величины адгезивной активности штаммов, входящих в их состав, по отношению к эпителиальным клеткам влагалища.

Было доказано, что штаммы, входящие в пробиотики (биоспорин, лактобактерин, бифидумбактерин, ацилакт), лекарственная форма - лиофилизат, обладают различным уровнем адгезивности к эритроцитам и к эпителиоци-там влагалища. Однако, как жировая основа препаратов влияет на такой важный показатель колонизационной активности, как адгезивность, не было изучено. В связи с вышеизложенным целью нашего исследования было изучение влияния лекарственной формы биоспорина на уровень адгезивной активности.

В сравнительном исследовании адгезивной активности пробиотиков различных лекарственных форм (лиофилизат, суппозитории) показано, что наиболее высокий показатель адгезивности пробиотиков в виде лиофилизата по отношению к эритроцитам наблюдался у культур, входящих в бифидум-бактерин (6,8±0,3). Препараты лактобактерин, ацилакт и биоспорин обладали средним уровнем адгезивной активности (от 3,3+0,1 до 2,6±0,2), причем у биоспорина она была ниже.

Наиболее высокий коэффициент прикрепления микробов к одному эритроциту (К) определялся у штаммов, входящих в пробиотики лактобактерин и биоспорин (86±0,4 %), наиболее низкий у ацилакта (63±0,2 %). Уровень адгезивной активности (ИАМ), определяемый на модели эритроцитов, у препаратов другой лекарственной формы - суппозиториев, был ниже, чем у лиофилизированных форм. Наиболее высокий ИАМ наблюдался у штаммов, входящих в препараты бифидумбактерин и биоспорин (от 1,3±0,1 до 1,4±0,2), наиболее низкий у лактобактерина и ацилакта (1,2±0,1). К (%) также был ниже у всех препаратов.

Следовательно, на модели эритроцитов показано, что компоненты жировой основы блокируют рецепторы эритроцитов и адгезины микробных клеток, и тем самым снижают уровень адгезивной активности у препаратов в форме суппозиториев, что доказывается достоверным снижением ИАМ и К.

Также исследовали адгезивную активность пробиотиков в виде лиофилизата на модели влагалищных эпителиоцитов. Исследования адгезивной активности пробиотиков в лекарственной форме - суппозитории, показали снижение уровня ИАМ и К у лактобактерина и биоспорина, при неизменяющемся коэффициенте (К=100%), что также свидетельствует о блокировании адгезинов на микробных клетках компонентами жировой основы. У ацилакта и бифидумбактерина наблюдалось снижение уровня адгезивной активности по отношению к клеткам влагалищного эпителия и коэффициента К, что позволяет предположить, что в данном случае происходит блокирование и адгезинов пробиотиков и рецепторов клеток эпителия.

Из полученных результатов следует, что при равных показателях специфической активности активности (антагонистической активности, активности кислотообразования, количества живых микробов в дозе препарата), пробиотики в лиофилизированной форме, по сравнению с суппозиториями, обладают более высокой адгезивной активностью и имеют преимущество перед суппозиториями.

Были проведены исследования по изучению адгезивной активности условно-патогенных микроорганизмов и грибов рода Candida по отношению к формалинизированным эритроцитам человека. В исследовании использовались УПМ и грибы рода Candida, выделенные из влагалищного отделяемого беременных с различными нарушениями микроэкологии влагалища. Исследования показали, что наибольшую адгезивную активность по отношению к эритроцитам человека проявляют E.coli: индекс адгезивности микроорганизма равен 22,34±0,25, при К, равном 100%. Высокой адгезивностью обладают штаммы S.epidermidis, P.vulgaris, S.aureus и Streptococus spp. (от 6,62±0,2 до 11,47±0,63), при этом коэффициент адгезии также равен 100 %. Штаммы C.albicans и Enterococcus spp. обладают низкой адгезивной активностью (ИАМ - от 1,71±0,06 до 1,98±0,18). Коэффициент К% определяется в пределах от 49,33±2,22 до 66,67±3,56.

Пробиотик биоспорин в лекарственной форме - суппозитории является новым и удобным в применении препаратом для местного использования в акушерско-гинекологической практике по сравнению с флаконной формой. Однако при экспериментальном исследовании адгезивной активности биоспорина и кисломолочных пробиотиков в лекарственной форме - суппозитории, выявлено, что жировая основа суппозитория блокирует адгезины эпителиальных клеток, при этом адгезивность штаммов, входящих в препараты, уменьшается в 1,5-2 раза. Возможно предположить, что клиническая эффективность суппозиториальных форм пробиотиков будет ниже, чем при применении флаконных форм. Поэтому при разработке схем лечения беременных с различными формами дисбиозов влагалища выделены отдельные группы беременных, в схему лечения которых входили суппозитории биоспорина и бифидумбактерина. При совместной с клиницистами-гинекологами разработке схем лечения, мы также включили в лечение перо-ральное применение пробиотиков биоспорина и бифидумбактерина для коррекции микробиоценоза кишечника, т.к. по мнению ряда ученых дисбиоти-ческие процессы влагалища это следствие нарушения всей колонизационной резистентности организма.

Для коррекции дисбиозов влагалища у беременных использовали три схемы лечения.

Схема 1: «ПИР+биоспорин» Препарат имидазольного ряда: метра-гил/вагинальный гель вагинально 1 раз в сутки на ночь в течение 7 суток, либо клотримазол/вагинальный крем вагинально 2 раза в сутки в течение 7 суток. По окончании приема назначали биоспорин лиофилизат per os по 2 дозы 2 раза в сутки, в течение 10 суток, и вагинально биоспорин лиофилизат по 2 дозы 1 раз в сутки в виде местных аппликаций. В каждой группе 10 пациенток применяли вагинальные суппозитории биоспорина, по 1 суппозиторию 2 раза в сутки, в течение 10 суток.

Схема 2. «Биоспорин+бифидумбактерин»: биоспорин в виде лиофилизата, по 2 дозы 2 раза в сутки в течение 10 суток, в течение 10 суток, и вагинально применяли биоспорин в виде лиофилизата по 2 дозы 1 раз в сутки в виде местных аппликаций. В каждой группе 10 пациенток применяли вагинальные суппозитории биоспорина, по 1 суппозиторию 2 раза в сутки, в течение 10 суток. Бифидумбактерин в виде лиофилизата применяли per os по 5 доз 2 раза в сутки, в течение 10 суток, и бифидумбактерин в виде лиофилизата вагинально - по 5 доз 1 раз в сутки в виде местных аппликаций. В каждой группе 10 пациенток применяли вагинальные суппозитории бифидумбактерина, по 1 суппозиторию 2 раза в сутки, в течение 14 суток.

Схема 3. «ПИР+бифидумбактерин»: Препараты имидазольного ряда: клотримазол/вагинальный крем вагинально применяли 2 раза в сутки в течение 7 суток, либо метрагил/вагинальный гель вагинально - 1 раз в сутки на ночь в течение 7 суток. По окончании приема использовали бифидумбактерин в виде лиофилизата per os по 5 доз 2 раза в сутки, в течение 10 суток, и бифидумбактерин в виде лиофилизата вагинально - по 5 доз 1 раз в сутки в виде местных аппликаций. В каждой группе 10 пациенток применяли вагинальные суппозитории бифидумбактерина, по 1 суппозиторию 2 раза в сутки, в течение 14 суток.

Лечение беременных с различными формами дисбиотических нарушений влагалищного биотопа проводилось на базе кафедры акушерства и гинекологии РМАПО (роддом № 72). Контрольное обследование производилось на 6-7 сутки после окончания лечения и включало в себя исследование рН влагалищного отделяемого, аминный тест, микроскопию вагинальных мазков и микробиологическое исследование.

Аминный тест и определение рН-метрии влагалищного отделяемого проводились только у пациенток с БВ (в связи со специфичностью этих исследований для данной нозологии). Положительные результаты аминного теста (100 % исчезновение "рыбного" запаха), наблюдался в первой группе больных. У беременных, принимавших лечение биоспорином и бифидумбак-терином, положительные результаты отмечались в 90,0 % случаев у пациенток, принимавших препараты в лекарственной форме - «лиофилизат», и в 80 % - в лекарственной форме - «суппозитории». В группе беременных с традиционным лечением метрагилом и бифидумбактерином положительный аминный тест наблюдался только в 70,0% случаев, что доказывает меньшую эффективность традиционной схемы лечения.

При определении рН-метрии влагалищного отделяемого понижение рН влагалищного содержимого до нормы (4,5-5,4) наблюдалось в группах «ПИР+биоспорин» и «биоспорин+бифидумбактерин». Тогда как в группе пациенток с традиционным лечением у 20 % беременных в подгруппе «лиофилизат» и у 30 % в подгруппе «суппозитории» определялось щелочная реакция среды.

При микроскопическом обследовании больных с БВ, нормализация микробного пейзажа была максимальной в группе пациенток, получавших лечение ПИР и биоспорином. Количественное содержание лактобацилл возросло до 100,0±0,2 у беременных, принимавших биоспорин в лекарственной форме - «лиофилизат» и 90,0±0,1 % в лекарственной форме - «суппозитории». Значительно уменьшилось количество грамположительных кокков - до 10,0± 0,1 %. Грамотрицательные палочки выявлялись у 10,0±0,1 % беременных только в подгруппе «суппозитории». Грибы рода Candida и «ключевые» клетки в этой группе не были выявлены. Эти данные доказывают микробиологическую эффективность лечения комплексом - ПИР+биоспорин.

При микроскопическом исследовании вагинальных мазков в группе «биоспорин+бифидумбактерин» выявлено увеличение количества лактобацилл у 90,0±0,1 % пациенток в обеих подгруппах. Количество грамположительных кокков составляло 10,0±0,1 % в подгруппе «лиофилизат» и 20,0±0,1 % в подгруппе «суппозитории», грамотрицательных палочек - 30,0±0,1 % и 40,0±0,1 % соответственно. «Ключевые клетки» были обнаружены в этой группе пациенток у 10,0±0,1 % беременных. Грибы рода Candida не были обнаружены. Полученные данные показали меньшую эффективность данной схемы лечения.

В группе пациенток, получавших традиционное лечение ПИР и бифидумбактерином, лактобациллы выявлялись в подгруппе «лиофилизат» у 50,0±0,4 % пациенток, в подгруппе «суппозитории» - у 40,0±0,2 %. Грамположительные кокки определялись в 30,0±0,3 % в подгруппе «лиофилизат», в 40,0±0,4 % случаев - в подгруппе «суппозитории». Грамотрицательные палочки обнаруживались у 20,0 % беременных в обеих подгруппах. Количество «ключевых клеток» уменьшилось до 20,0 %. В этой группе после лечения у 30 % пациенток выявлялись грибы рода Candida.

Микроскопическое обследование пациенток с ВВК показало, что в группе «ПИР+биоспорин» результаты лечения были максимально эффективны. Грибы рода Candida не были выявлены у обеих подгрупп.

В группе «биоспорин+бифидумбактерин» грибы рода Candida в обеих подгруппах "лиофилизат" и "суппозитории" не обнаружены.

При обследовании в группе «ПИР+бифидумбактерин» грибы семейства Candida обнаруживались в 30,0±0,4 % и 40,0±0,1 % случаев соответственно.

Таким образом, из полученных данных видно, что при традиционной терапии у беременных не наблюдалось полной элиминации грибов рода Candida.

Исследования вагинальных мазков у пациенток с НВ показали, что в группе беременных, принимавших лечение ПИР и биоспорином, лактобациллы выявлялись у 100,0 % пациенток. Менее 10 лейкоцитов в поле зрения обнаруживали у 100 % беременных в подгруппе «лиофилизат», и у 90 % в подгруппе «суппозитории». Грамположительные кокки определялись после лечения только в 10,0 % в подгруппе «лиофилизат», тогда как до лечения они обнаруживались в 100,0 % случаев. Грибы рода Candida отсутствовали в вагинальном мазке в 100 %. Это доказывает эффективность применения имидазольного препарата в комплексе с пробиотиками.

В группе «биоспорин+бифидумбактерин» лактобациллы обнаруживались у 100,0 % беременных в подгруппе «лиофилизат», и в 90,0 % случаев в подгруппе «суппозитории». Грамположительные кокки определялись у 10,0 % беременных в обеих подгруппах. У 10,0% пациенток в подгруппе «лиофилизат» и у 20,0 % в подгруппе «суппозитории» количество лейкоцитов в поле зрения было повышенным (от 10 до 20 в п.зр.).

В группе пациенток, получавших традиционное лечение метронидазо-лом и бифидумбактерином, грамположительные кокки выявлялись у 40,0 % пациенток. В этой группе у значительной части пациенток сохранялся высокий лейкоцитоз — у 40,0-50,0 % женщин соответственно, что свидетельствует о неэффективности данной схемы лечения.

При микробиологическом исследовании влагалищного отделяемого пациенток с БВ выявлено, что в группе «ПИР+биоспорин» после завершения терапии лактобактерии в высоких титрах высевались в 90 % у пациенток, получавших биоспорин в лекарственной форме - лиофилизат, и в 80 % случаев — в лекарственной форме суппозитории, бифидобактерии - в 90 % в обеих подгруппах. Золотистый стафилококк высевался в подгруппе «суппозитории» в количестве <103 КОЕ/мл у 10 % беременных. Кишечная палочка, стрептококки и грибы рода Candida не были обнаружены или найдены в низких титрах.

В группе «биоспорин+бифидумбактерин» лактобациллы обнаруживались в высоких титрах (>104) у 80 % пациенток, получавших пробиотики в лекарственной форме - лиофилизат и у 70 % беременных из подгруппы суппозитории, бифидобактерии — у 90 % и 80 % соответственно. S.aureus в л количестве <10J КОЕ/мл высевался у 10 % (лиофилизат) и у 20 % (суппозитории), стрептококки - у 10 % (лиофилизат) и у 20 % (суппозитории), кишечная палочка — у 30 % пациенток. Грибы рода Candida обнаруживались в подгруппе "суппозитории" в низких титрах в 20 % случаев.

В группе больных, получавших традиционное лечение метронидазолом и бифидумбактерином, лактобактерии в высоких титрах высевались у 30 % (подгруппа - лиофилизат) и у 20 % беременных (подгруппа - суппозитории), бифидобактерии — у 60 % беременных. Золотистый стафилококк обнаруживался в высоких титрах в подгруппе «лиофилизат» в 20 %, в подгруппе "суппозитории" - в 30 % случаев, стрептококки - в 30 % (подгруппа - лиофилизат) и в 40 % (подгруппа - суппозитории), кишечная палочка - в 40 % (подгруппа - лиофилизат) и у 50 % случаев (подгруппа - суппозитории). Грибы рода Candida в количестве <104 КОЕ/мл высевались у 20 % женщин в подгруппе «лиофилизат».

Как показали исследования, у пациенток в группе с БВ наиболее эффективной была схема лечения «ПИР+биоспорин». Схема «биоспо-рин+бифидумбактерин» также была клинически эффективной, микробиологически было показано восстановление количественного содержания бактерий нормофлоры, но полной элиминации УПМ не происходило.

У беременных в группе с БВ, получавших традиционную терапию ПИР и бифидумбактерин, при микробиологическом исследовании количество лактобацилл не достигало показателей нормы, также не происходило элиминации УПМ и грибов рода Candida, у двух беременных наблюдались рецидивы ВВК.

Как показало исследование, у пациенток с ВВК наилучшие результаты показало лечение «ПИР+биоспорин» и «биоспорин+бифидумбактерин», подтвержденное клинически и микробиологически, по окончании лечения грибы рода Candida не высевались.

В группе беременных с ВВК, получавших лечение ПИР и бифидумбак-терином, исчезновение клинических признаков фиксировалось только у трети пациенток, при микробиологическом исследовании у 80 % беременных высевались грибы рода Candida в количественном содержании более Ю3КОЕ/мл, при динамическом наблюдении наблюдались рецидивы ВВК.

Как показали исследования, у пациенток в группе с НВ показали свою эффективность схемы лечения «ПИР+биоспорин» и «биоспорин+бифидумбактерин», при посевах вагинального отделяемого наблюдалась полная элиминация УПМ. В группе беременных с НВ, получавших традиционное лечение ПИР и бифидумбактерином, уровень содержания лакто-и бифидобактерий был снижен у 20 % пациенток, у 40 % беременных, высевались УПМ в высоких титрах.

Полученные данные клинико-лабораторного обследования позволяют высоко оценить эффективность лечения беременных с БВ, ВВК и НВ, применявших ПИР с последующим назначением пробиотика биоспорина. Клинический и микробиологический эффект подобной двухэтапной терапии составил 97%. В этой группе гнойно-септических осложнений и кандидоза не было выявлено ни у одной пациентки.

Применение новой лекарственной формы биоспорина - суппозитории, показало, что препарат хорошо переносился пациентками, не вызывал аллергии, других побочных реакций. Показано, что клиническая эффективность применения суппозиториев биоспорина ниже, чем лиофилизированной формы биоспорина.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Чумаева, Татьяна Владимировна, Москва

1. Анкирская А.С. Бактериальный вагиноз. Акушерство и гинекология. 1996, №2, с. 13.

2. Акопян Т.Э., Емельянова А.И., Кравченко Н.Ф. с соавт. Профилактика осложнений после кесарева сечения у пациенток с БВ .//Тезисы докладов VI Российского национального конгресса «Человек и Лекарство», 19-23 апреля 1999 г. М. -1999. -с.269.

3. Алмагамбетов К.Х., Горская Е.М., Бондаренко В.М. Транслокация кишечной микрофлоры и ее механизмы. ЖМЭИ, 1991, № 10, с. 27-32

4. Анкирская А.С., Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р., Муравьева В.В. Бактериальный вагиноз: особенности клинического течения, диагностика и лечение. РМЖ, т. 6, 5 (65), 1998, с.84-86.

5. Астахов И.И. Тезисы докладов IV Всероссийского съезда эпидемиологов и микробиологов. М., 1978, с. 181-183.

6. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л., 1962.

7. Байрамова Г.Р. Клинические особенности и эффективность различных методов терапии бактериального вагиноза// Автореф.дис.канд.мед.наук.-М., 1996.-25 с.

8. Борисов Ил., Шопова Е. Клинико-микробиологические находки у женщин с заболеваниями влагалища//Акуш.и гинек.-1996. -35, №1-2. -С.22-23. 10. Брилине Т.А. Адгезия лактобацилл влагалища и половые гормоны //Автореф.дис.канд.мед.наук.- М., 1990,- 22 с.

9. П.Брилис В.И. Адгезивные свойства лактобацилл //Автореф. дис.канд.мед.наук. -Тарту. -1990. 25 с.

10. Брилис В.И., Брилене Т.А., Ленцнер Х.Б., Ленцнер А.А. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов //Лаб. Дело. -1986. -№ 4. -с.210-212.

11. Бондаренко В.М., Петровская В.Г. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры. Вестник РАМН. 1997, № 3, с.7-11.

12. Бухарин О.В., Валышев А.В. Факторы персистенции кишечной микрофлоры при дисбиозе. Вестник РАМН, 1997, № 3, с. 23-26.

13. Башмакова М.А., Кошелева Н.Г., Калашникова Е.П. Инфекция и бактериальная колонизация урогениталий у беременных, влияние на течение беременности, плод и новорожденного ребенка. Акушерство и гинекология. 1995, № 10, с. 56-61.

14. Бондаренко В.М., Боев Б.В., Лыкова Е.А. Воробьев А.А. Дисбактерио-зы желудочно-кишечного тракта. Росийский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 1998, т.8, № 1, с. 66-67.

15. Бондаренко А.В., Бондаренко Вл.М., Бондаренко В.М. Пути совершенствования этиопатогенетической терапии дисбактериозов Журн.микробиологии. 1998, № 5, с. 45-48.

16. Бочков И.А., Овчарова И.М. (ЦНИИ эпидемиологии МЗ РФ) Бактериальная колонизация и сукцессия у новорожденных детей в аспекте проблемы госпитальной инфекции. ЖМЭИ, 1991, № 8, с. 98-103.

17. Бочков И.А., Крави М., Цейтлина А.И., Кайтмазов А.Х., Шевчук Е.С., Барсукова Т.С. Микробная колонизация и сукцессия на слизистой оболочке зева у новорожденных детей при совместном с матерью пребывании в акушерском стационаре. ЖМЭИ, 1991, № 9, с.32-36.

18. Бондаренко В.М., Учайкин В.Ф., Мурашова А.О. Дисбиоз. Современные возможности профилактики и лечения. М., 1995.

19. Бондаренко В.М., Горская Е.М. Медицинские аспекты микробной экологии. М., 1986, выпуск 6, с. 23-26.

20. Войгишина Л.Г., Чаплинский В.Я., Вьюницкая В.А. Применение спо-рообразующих бактерий в лечении больных дисбактериозами.//Врачебное дело. -1991. -№6. -с.73-75.

21. Высоцкий В.В. Биологические основы адгезивных свойств микроорганизмов (обзор).//Медицинские аспекты микробной экологии. Выпуск 7/8. -1993/1994. -М. -ч.1. -с.42-52.

22. Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М., Шендеров Б.А. Дис-бактериозы актуальные проблемы медицины. Вестник РАМН, 1997, № 3, с.4.

23. Гилье Ш.Л. Лечение бактериального вагиноза клиндамицином.//ЗП1 И1. -1994. -№1. -с.7-11.

24. Горская Е.М. Адгезия микробов к эпителиальным клеткам кишечни-ка.//Антибиотики и микроэкология человека. -М. -1087. -с.79-82.

25. Горская Е.М. Механизмы развития микроэкологических нарушений в кишечнике и новые подходы к их коррекции.//Диссертация в форме научного доклада на соискание ученой степени доктора медицинских наук. -М. -1994. -53 с.

26. Горшевская Э.В., Фурманова Ю.А. Применение биоспорина в лечении гнойной-раны.//Клин.хирургии. -1992. -№3. -с.311-332.

27. Грачева Н.М., Гаврилов А.Ф., Аваков А.А. Новый отечественный препарат споробактерин в лечении больных острыми кишечными инфекция-ми.//Мед.аспекты микробной экологии. -М. -1994. -Вып.7/8. -ч.2. -с.214-216.

28. Гончарова Г.И., Семенова Л.П., Лянная A.M., Козлова Э.П., Донских Е.Е. Бифидофлора человека, ее нормализующие и защитные функции Антибиотики и медбиотехнология, 1987, т. XXXII, № 3, с. 179-183.

29. Грачева Н.М., Гаврилов А.Ф., Соловьева А.И., Смирнов В.В., Сороку-лова И.Б., Резник С.Р., Чудновская Н.В. Эффективность нового препарата биоспорина при лечении острых кишечных инфекций. Журн. микробиологии., 1996, № 1, с.25.

30. Голбрайт М., Гремиллион Д.Г. Репродуктивное здоровье. Т. 2. Редкие инфекции., под ред. Кейта., пер. с англ., М., 1988, с. 307-332.

31. Дронова О.М. Антибиотики и микроэкология человека и животных. М., 1988, с. 40-41.

32. Джозов М.Р., Шмид Дж.П. Бактериальный вагиноз. Обзор методов лечения и возможных клинических показаний для терапии. 3111111. 1996, № 5, с.24-28.

33. Диагностика, клиника и лечение дисбактериоза кишечника у детей: методические рекомендации. М., 1990.

34. Затула Д.Г., Резник С.Р. Влияние метаболитов споровых сапрофитных бактерий на организм человека и животных. -Киев: Наук.думка. -1973. -119с.

35. Златкина А.Р. Современные подходы к коррекции дисбиоза кишечника. Рос.журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1999, № 3, с. 45-48.

36. Казесалу Р.Х., Сааг Х.В., Пейль П.Х. Об анаэробной микрофлоре влагалища беременных на первом и втором триместре беременно-сти./Антибиотики и колонизационная резистентность//Труды Всесоюз.ин-та антибиотиков. -М. -1990. -вып.Х1Х.-с.47-53.

37. Карки Т.В., Ленцнер Х.П., Ленцнер А.А. Количественный состав лак-тофлоры и методика его определения //ЖМЭИ. -1994. -№ 4. с. 16-18.

38. Кашковская Н.В. Экспериментально-клиническое обоснование применения биологических микробных препаратов в гинекологии и стомотоло-гии //Автореф.дис.канд.биол.наук. -М., -1992. -17 с.

39. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз //Акуш.гинек. -1990. -№ 8. -с. 10-13.

40. Кира Е.Ф. Лечение бактериального вагиноза //Акуш.гинек. 1993. -№ 5. -с.39-42.

41. Кира Е.Ф., Кочеровец В.И., Поспелова В.В., Ханина Г.И. Применение эубиотиков для лечения бактериального вагиноза //Антибиот.химитер.1994. -№39. -с.31-35.

42. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз // Санкт-Петербург. 2000, 363 с.

43. Колуканов И.Е.,Чайка Н.А. Гарднереллез (Научный обзор). Санкт-Петербург. 1994. 41 с.

44. Костючек Д.Ф. Особенности гнойно-септической инфекции после аборта: Вопросы патогенеза, клиники, дифференциальной диагностики и лечения на современном этапе: Авт. дис. д. мед. наук. Л., 1988. -39 с.

45. Кубанова А.А., Аковбян В.А., Федоров С.М. Состояние проблемы бактериального вагиноза.//ЗППП. -1996. -№3. С.23-26.

46. Кочеровец В.И. Методические рекомендации по микробиологической диагностике заболеваний, вызванных неспорообразующими анаэробными бактериями. М., 1986.

47. Корнева Т.К. Дисбактериоз кишечника у проктологических больных: микробиологические аспекты. Рос.журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1999. № 3, с.76-79.

48. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз. Акушерство и гинекология. 1999, № 5, с.69-76.

49. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз (клиника, диагностика, лечение).1995, дисс. на соискание ученой степени д.м.н., С.-Пб, 1995;

50. Лыкова Е.А. Причины и значения микроэкологических нарушений пищеварительной системы. Антибиотики и химиотерапия. 1997, Т.39, №7, с.131-134.

51. Лизько Н.Н. Дисбактериозы экстремальных состояний. Антибиотики и медбиотехнология, 1987, т. XXXII, № 3, с. 34-38.

52. Ларсен В. Микрофлора родовых путей в норме //Репродуктивное здоровье: Пер. с англ.: Т.1: Общие инфекции: -М.: Медицина, 1988. -С. 1745.

53. Ленцнер А.А. Лактобациллы микрофлоры человека //Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук. -Тарту, -1973.

54. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.П., Микельсаар М.Э. и др. Лактофлора и колонизационная резистентность //Антибиотики и медицинская биотехнология.-1987. -№ 3. с. 173-179.

55. Ленцнер А.А. Актуальные проблемы микроэкологии влагалища //Научная конференция «Гнойно-воспалительные заболевания и осложнения в акушерско-гинекологической практике». Материалы. Л., - 1991. -№ 9. -с.72-73.

56. Летучих А. А. Кольпиты: Патогенез, классификация, диагностика: Со-общ. 1. //Акушерстсво и гинекология. -1985. № 2. -С.61-66.

57. Литяева Л.А. Бактериоскопическое и бактериологическое исследование влагалищного содержимого беременных женщин //Лаб. дело. 1991. -№ 9. - с.72-73.

58. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.П. Аутофлора человека в норме и патологии и ее коррекция. Горький, 1988, с. 10-14.

59. Ларсен Б. Репродуктивное здоровье. Т.1. с. 17-44.

60. Литяева Л.А. Бактериологические исследования микрофлоры кишечника беременных женщин группы риска. Клин.лаб.диаг., 1993, № 4, с.67-69.

61. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.П., Микельсаар М.Э., Тюри М.Э., Брилене Т.А., Брилис В.И., Левков Л.А. Лактофлора и колонизационная резистентность. Антибиотики и медбиотехнология. 1987, т. XXXII, № 3, с. 173-179.

62. Марцишевская Р.Л., Шибалова И.П. Исследование вагинального отделяемого.//Лаб.дело. -1990. -№6. -С.38-43.

63. Минкина Г.Н., Манухин И.Б., Студеная Л.Б. Вагиниты.//Вестник акушера-гинеколога. -№ 4. -М. -1992. -С.35-43.

64. Муравьева В.В. Микробиологическая диагностика бактериального вагиноза у женщин репродуктивного возраста.// Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. -М. -1997.

65. Марков Н.И., Вербец А.А., Смирнова Т.В. Бактериальная диагностика и лечение кишечного дисбактериоза у больных с колитами, холециститами, язвенной болезнью. Метод, рекомендации. Днепропетровск, 1977.

66. Микробиологическая диагностика дисбактериозов. Методические рекомендации. Киев, 1986.

67. Микельсаар М.Э. Антибиотики и колонизационная резистентность. Труды института. М., 1990, выпуск XIX, с. 26-35.

68. Минушкин О.Н., Елизаветина Г.А. Иванова Л.М., Власова М.Н. Диагностика, лечение и профилактика дисбактериоза и хронических заболеваний кишечника. Методические рекомендации. М., 1991.

69. Мельникова В.М., Беликов Г.П., Щербакова Э.Г., Блатун Л.А., Расту-нова Г.А. Проблемы химиопрофилактики и химиотерапии эндогенной инфекции и дисбактериоз. Вестник РАМН, 1997, № 3, с. 4-8.

70. Микроэкология влагалища. Коррекция микрофлоры при вагинальных дисбактериозах. Уч. пос. М., 1999, с. 11-13;

71. Несвижский Ю.В., Воробьев А.А., Белоносов С.С., Лобанов В.Е., Иноземцева Л.О., Гаспарян С.А. Анализ простых межмикробных взаимоотношений в микробиоценозе толстой кишки человека. Вестник РАМН, 1997, №3, с.2-5.

72. Осипова И.Г. Некоторые аспекты механизма защитного действия коли-бактерина и споровых эубиотиков и новые методы их контроля.// Авто-реф. дис. канд. биол. наук.- М., 1997.- 25 с.

73. Осипова И.Г., Сорокулова И.В., Терешкина Н.В., Григорьева Л.В., Изучение безопасности бактерий рода Bacillus, составляющих основу некоторых пробиотиков ЖМЭИ, 1998 г., № 6, стр. 3-6.

74. Осипова И.Г. Методическое пособие по применению спорового про-биотика биоспорина. 2001, 25 с.

75. Перетц Л.Г. Значение нормальной микрофлоры для организма человека. М., 1955.

76. Подопригора Г.И. Иммунные и неспецифические механизмы колони-зационнной резистентности .//Антибиотики и колонизационная резистентность/Груды ВНИИ антибиотиков .- М. -1990. -вып.Х1Х. -С. 15-25.

77. Поспелова В.В., Рахимова Н.Г., халенева М.П. с соавт. Новые сферы применения микробных биопрепаратов для коррекции бактериоценоза организма человека.//Иммунобиол. препараты. -М. -1989. -С.142-152.

78. Прилепская В.Н., Пикуза В.В. Современные достижения и перспективы в диагностике и лечении генитального кандидоза.//Тез.докл. 1 Всероссийского съезда акушеров-гинекологов и педиатров. -Челябинск. -1992. -с.88.

79. Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р. Современные представления о бактериальном вагинозе.//Вест.Рос.ассоц.акушеров-гинекологов. -1996. -№ 3. -С.40-42.

80. Проданчук Н.Г. Потратий В.К. Актуальные вопросы клинической биологии в неинфекционной клинике. М., 1988. Ч. 1, с. 220-222.

81. Применение бактерийных биологических препаратов в практике лечения больных кишечными инфекциями: диагностика и лечение дисбакте-риоза кишечника. Методические рекомендации. М., 1986.

82. Петровская В.Г., Марко О.П. Микрофлора человека в норме и патологии. М., 1976.

83. Резник С.Р., Смирнов В.В., Вьюницкая В.А. Перспективы использования бактерий рода Bacillus в качестве основы лечебно-профилактических препаратов.// Колонизационная резистентость. -М. -1989. С.302-303.

84. Раевский К.К., Добрынин В.М., Кочеровец В.И., Кацалуха В.В., Добрынина И.А. Совершенствование методов микробиологической диагностики дисбактериозов. Вестник РАМН, 1997, № 3, с.54-58.

85. Румянцев В.Г. Дисбактериоз кишечника: клиническое значение и принципы лечения. Рос.журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопрок-тологии. 1999, № 3, с.68-72.

86. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследованиям под ред. БиргераМ.О., М., 1982.

87. Созаева Л.Г. Коррекция дисбиоза влагалищного биотопа споровым пробиотиком биоспорином. Автореф-.канд.мед.наук. М., 1999.

88. Савичева A.M., Башмакова М.А. Микробиоценозы влагалища и их ре-гуляция.//Тез.докл.науч.конф.: «Дисбактериозы и эубиотики». -М. -1996. -С.ЗЗ.

89. Смирнов В.В., Косюк И.В. Адгезивные свойства бактерий рода Bacillus компонентов пробиотика.//Микробиол.ж. -1997. -59 № 6. -С.36-43.

90. Смирнов В.В., Резник С.Р., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически активных веществ. -Киев: Нау-кова думка. -1983. -278 с.

91. Смирнов В.В., Резник С.Р., Сорокулова И.Б. Дискуссионные вопросы создания и применения бактериальных препаратов для коррекции микрофлоры теплокровных.//Микробиол.Журн. -1992. -№ 6. -С.82-94.

92. Соколова К.Я., Соловьева И.В., Попова Е.В. Федотова М.Н. Новые подходы к изучению и оценке микробиоценозов влагали-ща.//Респ.сб.науч.тр. «Аутофлора человека в норме и патологии и ее коррекции». -1988. -С.5-10.

93. Соловьева И. В. Характеристика микрофлоры влагалища женщин в норме и патологии // Автореф. дис. кан. мед. наук. М., 1987 -17 с.

94. Сорокулова И.Б. Перспективы применения бактерий рода Bacillus для конструирования новых биопрепаратов. Антибиотики и химиотерапия. -1996. -41 № 10. С.13-15.

95. Стародубцева Н.В. Диагностика бактериального вагиноза и микробиологические рекомендации по его рациональному лече-нию.//Сб.науч.тр.Уральского НИИ дерматологии и венерологии. -Екатеринбург. -1995. -С.22-28.

96. Созаева Л.Г. и соавт. Опыт клинического применения препарата «биоспорин» у больных с бактериальным вагинозом. Сборник с. 21

97. Смолянская А.З. Дисбактериозы инфекционные процессы смешанной этиологии. Антибиотики и медбиотехн. 1987, т. XXXII, № 3, с. 45-47

98. Соловьева Н.В. Микрофлора влагалища в норме и патологии. Горький, 1986.

99. Смирнов В.В., Резник С.Р., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии — продуценты биологически активных веществ. Киев, 1982.

100. Соловьева Н.В., Беляев Е.И., Соколова К.Я., Федотова М.И. Медицинские аспекты микробной экологии. М., 1991, с. 191-196.

101. Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Кандидоз. Природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, лабораторная диагностика, клиника и лечение. М., Триада-Х, 2000, 472 с.

102. Тюрин М.В. Антибиотики и микроэкология человека и животных. М., 1988, с. 175-178.

103. Тамм А.О., Вия М.П., Микельсаар М.Э., Сигур У.Х. Метаболиты кишечной микрофлоры в диагностике дисбиозов кишечника. Антибиотики и медбиотехнология. 1987, т. XXXII, № 3, с.58-63.

104. Торганова Е.Н., Абдуллаева С.А., Бойченко М.Н. Бактериальный ваги-ноз. Журнал микробиологии, 1999, № 4., с. 100-104.

105. Тейлор-Робинсон Д., Хей П.Е. Патогенез бактериального вагиноза и возможные причины возникновения заболевания. 31ИIII, 1998, № 3, с.45-47.

106. Тейлор-Робинсон Д. Бактериальный вагиноз. Осложнение вне беременности. ЗППП, 1993, № 3, с.30-33.

107. Хэй Ф., Морган Д., Айсон К.А., Лэймонт Р.Ф., Тэйлор-Робинсон Д. Скрининг в отношении бактериального вагиноза во время беременности. Материалы III Международного симпозиума по вагинитам/вагинозам, Мадейра, Португалия, январь, 1994.

108. Холодова М.Н. Микрофлора кишечника новорожденных при различных видах родоразрешения и ее коррекция. М., 1990.

109. Цвелев Ю.В., Кочеровец В.И., Кира Е.Ф. Вопросы антибактериальной терапии инфекционных осложнений в неинфекционной практике. М., 1987, с.189-190.

110. Цвелев Ю. В., Кира Е.Ф., Кочеровец В. И. Неспецифический вагиноз: Дисбактериоз или воспаление влагалища? Диагностика и лечение // Вопросы антибактериальной терапии инфекционных осложнений в не инфекционной клинике. -М. : -1987. -С.189-190.

111. Цвелев Ю. В., Кочеровец В. И., Кира Е.Ф. Анаэробная инфекция в акушерско-гинекологической практике.//СПб: Питер. -195.-313 с.

112. Цвелев Ю. В., Кира Е.Ф. Бесспорное и спорное в проблеме гнойно-воспалительных заболеваний придатков матки //Акушерство и гинекология. -1990. -№ 9. С. 72-76.

113. Чернышева Н.А., Мельникова К.И., Финкель М.П., Изотова З.Б. Опыт применения препарата сухого бифидумбактерина у новорожденных групп риска с целью профилактики острых кишечных инфекций. ЖМЭИ, 2000, № 5, с. 28-30.

114. Шендеров Б.А., Манвелова М.А., Степанчук Ю.Б., Скиба Н.Э. Пробио-тики и функциональное питание. Антибиотики и химииотерапия, 1997, т. 42, №7, с.71-75.

115. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора человека и некоторые вопросы микроэкологической токсикологии. Антибиотики и медбиотехнология, 1987, т. XXII, № 3, с. 164-170.

116. Шептулин А.А. Синдром избыточного роста бактерий и «дисбактериоз кишечника»: их место в современной гастроэнтерологии. Рос.журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1999, № 3, с.57-61.

117. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека Рос.журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии, 1998, т.8, № 1, с.43-47.

118. Шендеров Б.А. Антибиотики и колонизационная резистентность. Труды института. М., 1990, с. 5-15.

119. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. М., 1998, т.1, с. 156;

120. Эпштейн-Литвак Р.В. Дисбактериоз кишечника: справочник по микробиологическим и вирусологическим исследованиям под ред. Биргера., М., 198., с. 229-235.

121. Aquilar GL, Blumenkrantz MS, Egbert PR, McCulley Jp. Candida endophthalmitis after intravenous drug abuse. Arch Ophthalmol 1979,97 (1), 96-100.

122. Adeniyl-Jones C., Groves D.J., Mannethu A., Righer J. Hemophillus vaginalis bacteriemia//Canad. Med. Assoc. J. -1980. -Vol. 122, M 4. -P. 424-426.

123. Amsel R., Totten P.A., Spiegel C.A. et al. Nonspecific vaginitis: diagnostic criteria and microbial and epidenuologic associations //Amer. J. Mod. -1983. -Vol.74, №1. -P. 14-22.

124. Askienazy-Elbhar M. Le diagnostic bacteriologique des vaginoses bacteri-ennes en pratique de ville //Rev. Fr. Gynecol. Obstet. -1993. Vol. 88, №.3. pt. 2. - P.203-206.

125. Bacterial Vaginosis: New Perspectives. -S. 1.: The Updjon Company, 1993. 32p.

126. Bacterial vaginosis. Conferencepioceedings //Amer. J. Obstet. Gynecol.-1993. -Vol. 169. № 2, pt.2. -P.441-482.

127. Bartlett J.G., Onderdonk A.B., Drude E. Et al. Quantitative bacteriology of vaginal flora//J.Infect.Dis. -1977. V. 136. № . -P.271-275.

128. Bartlett J.G. Polk B.F. Bacterial flora of the vagina: Quantitative study //Rev. infect.Dis. -1984. -Vol. 6. suppl. 1. P. 567-572.

129. Bergey,s Manual of Systematic Bacteriology:Vol.l. /Ed. N. R. Krieg, H. G. Holte- Baltimore etc.: Williams & Wilkins . 1986. -P. 965-1600.

130. Berrebi A. Antlotiques et vaginoses bacteriennes. Hospital de la Grave, Tou-louse.//Fr. Gynec. Obstet. -1993. Voi. 88. N 3. pt2. P. 215-217.

131. Blackwell A., Barlow D. Clinic diagnosis of anaerobic vaginosis (nonspecific vaginitis): A practical guide //Brit. J. Vener. Dis. 1982. - Vol.58, N 6. - P. 387-393.

132. Branco L, Pitta ML, Bernardes L, Galrinho A, Agapito AF, Ramos JM, Quininha J, Figueiredo L, Bento L, Mata A. A review of infectious endocarditis que to Candida. Rev Port Cardiol 1997, 16 (12), 967-74, 955

133. Brand G.M. Galask R.P. Trimetilamine: The substance mainly responsible for the fishy odor often associated with bacterial vaginosis //Obstet. Gynecol. -1980. Vol. 68. N.5.-P. 682-685.

134. Canestrelli M., Piantelli G. Vaginite e vaginosi. Due periodi a con-fronto.//Minerva Gnecol. -1993. 45 (10). - P.479-483.

135. Carson H.J., Lapoint P.G., Monif G.R.G. Interrelationships within the bacterial flora of the female genital tract//Infec. Deseases Obstet. and Gynecol. -1997. -5, № 4. -C.303-309.

136. Christmas NJ, Smiddy WE. Vitrectomy and systemicfluconazole for treatment of tndogenous fungal endophthalmitis. Ophthalmic Surg Lasers 1996, 27(12),1012-8.

137. Creger RJ, Weeman KE, Jacobs MR, Morrissey A, Parker P, Fox RM, Lazarus HM. Lask of utility of the lysis-centrifugation blood cultur method for detection of fungemia in immunocompromised cancer patients. J Clin Microbiol 1998,36(1), 290-3

138. Chen К. C., Amsel R., Eschenbach D.A., Holmes K.K. Biochemical diagnosis of vaginitis: determination of diamines in vaginal fluid //J. Infect. Dis. -1982. -Vol. 145.№ 1. -P. 337-345.

139. Chow A.W., Persival-Snilth R., Baslett K.H. et al. Vaginal colonization with Escherichia coli in healthy women//Am. J. Obstet. Cynec.-1986.-V. 154, -№. 2 P. 225-232.

140. Clare P., Kurtzer T. The role of bacterial vaginosis in the development of pe-ripartim infection //Abstract book therd international symposium on vaginitis/vaginosis. -Funchal, 1997. -168. -№4. -C.303-307.

141. Deitch EA, Marini JJ, Huzebu JS. Suppurative Candida phlebitis of a peripheral vein. J Trauma 1980, 20 (7), 618-20

142. Doi O, Tacada Y, Yamauchi Y, Ogawa T. Systemic candidiasis with DIC and Candida endophthalmitis in a postoperativt neonant. Aust Paediatr J 1989, 25 (6). 372-5

143. Edwards JE, Jr., Foos RY, Montgomerie JZ, Guze LB, Ocular manifestations of Candida septictmia review of seventy-six cases of hematogenous Candida endophthalmitis. Medicine (Baltimore) 1974, 53 (1), 47-75

144. Ekenna O, Sherertz RJ, Bingham H. Natural history of bloodstream infections in a burn patient population the importance of candidemia. Am J Infect Control 1993,21 (4), 189-95

145. Elliott JH, O'Day DM, Gutow GS, Podgorski SF, Acrabawi P. Mycotic endophthalmitis in drug abusers. AM J Ophthalmol 1979, 88(1), 66-72

146. Elijovich F, Grassi DG, Costa JA, Dominguez MP. Tricuspid candidiasis endocarditis surgically treated. Medicina (B Aires) 1977, 37 (2), 168-72

147. Eschenbach D. Bacterial vaginosis: Emphasis on upper genital tract complications /VObstet. Gynecol. Clin. North Amer. -1989. -Vol. 16, N. 3. -P. 593610

148. Eschenbach D. History and review of bacterial vaginosis.//Am Jm Obstet Gynecol. -1993. -V.169 (2 Pt2). -C.441-445

149. Eschenbach D.Hilliers S., Critchlow C. et al. Diagnosis and clinical manifestation of bacterial vaginosis //Amer. J. Obstet. Gynecol. -1988. -Vol. 158. N 5.-P. 819-828.

150. Fernandez Guerrero ML, Gadea I. The treatment of Candida-induced endocarditis. The arguments for a medical-surgical focus. Rev Clin Esp 1994, 194 (11), 989-91

151. Fernandez Navarro JM, Verdeguer Miralles A, Ruis Soler JG, Ferris Torta-jada J, Esquembre Menor C, Castel Sanchez V. Systemic candidiasis in children with cancer. An Esp Pediatr 1989, 31 (5), 455-60

152. Ferreira RP, Yu B, Niki Y, Armstrong D. Detection of Candida antigenuria in disseminated candidiasis by immunobloting. J Clin Microbiol 1990, 28 (5), 1075-8

153. Fraser VJ, Jones M, Dunkel J, Storfer S, Medoff G, Dunagan WC. Can-didemia in a tertiary care hospital epidemiology, risk factors, and predictors of mortality see comments. Clin Infect Dis 1992, 15 (3), 414-21

154. Fuller R. Probiotics in human medicine.//Gut. -1991. -V.32 №4. -C.439-442.

155. Gardner H.L., Dukes C.D. Haemophilus vaginitis. -//Am.J. Obstet. Gynecol. -1955.-69. -C.962-976.

156. Gibbs R.S. Chorioamnionnitis and bacterial vaginosis.//Am/ J. Obstet. Gynecol. -1993. -8. -169(2 Pt 2). -C.460-462.

157. Girmenia C, Martino P, Cassone A, Breacthrough candidemia during antifungal treatment with fluconazole in patients with hematologic malignancies letter, comment. [see comments]. Blood 1996, 87(2), 838-9

158. Gilbert HM, Peters ED, Lang SJ, Hartman В J. Successful treatment of fungal prosthetic valve endocarditis case report and review see comments. Clin Infect Dis 1996, 22 (2), 348-54

159. Go vender L. et al. Bacterial vaginosis and associated infections in pregnancy .//Int J. Obstet. Gynecol. -1996. -V. 55 (1). C.23-28.

160. Guida V., Guida R. Inpostansia dos Bacillus sporuladosaerobios em gastro-enferologia.//Rev.Bras. Med. -1978. -V.35. №35, 12. C. 702-707.

161. Hay P.E., Margan D.J., Ison C.A. Vaginosis. The third international symposium on vaginitis.//Madeira. -1994. -C.33-42.

162. Heikkinen J., Vuopala S. Anaerobic vaginosis: treatment with tinidazole vaginai tablets./Gynecol.J. -1990. -28. C.98-100.

163. Hill G.B. The microbiology of bacterial vaginosis//Am J Obsty Gynecol. -1993. -169(2Pt2). -C.450-454.

164. HllllerS.L. Diagnostic microbiology of bacterial vaginosis // A»er. J. Obstet. Gynecol. -1993. -P.455-459.

165. Hoist E. Brandbcr. A. Treatment of bacteial vaginosis in pregnancy with a lactate gel // Scand. Infect. Dis. -1990. -Vol. 22. № 5. -P. 625-626.

166. Jahn G. Bialasiewicz A.A. Blenk H. Evaluation of plasmids in tetracycline resistant stains of Neisseria go-norrhoeae and Ureaplasma urealytlcum in a case of severe iritis //Enrop. J. Epidemiol. -1986. -Vol. 1. № 4. -P. 294-300.

167. Kent H.L. Epidemiology of vaginitis //Amer. J. Obstet. Gynecol. -1991.-Vol. 165. № 4. pt. 2. -P. 1168-1175.

168. Klebanoff S.J. Hillier S.L., Eschenbach D. A., Waltersdorph A.M. Control of the microbial flora of the vagina by H20 generating Lactobacill //J. Infect. Dis. 1991.-Vol. 164, № 1.-P.94-100.

169. Knowles S., Choudhury Т., Shear N.H. Metronidazole hypersensitivity .//Ann. Pharmacother. -1994. -V.28(3). -C.325-326.

170. Koksalan H., Esen N., Cagatay M. et al. Gardnerella vaginalisin izolas-yonu.//Mikrobivol. Bui. -1993. -27(3). C.191-195.

171. Korn A.P., Bolan G., Padian N. et al. Plasma cell endometritis in women with symptomatic bacterial vaginosis.//Gynecology. 1995 85 (3). -c.387-390.

172. Krohn M.A., Hillier S. L., Eschenbach D.A. Comparison of methods for diagnosing bacterial vaginosis among pregnant vvomon //J. Clin. Microbiol. -1989. -Vol. 27. № 6. -P. 1266-2171.

173. Larson P.G. Vaginal flora in health and disease/ Clin. Obstet. Gynecol., 36 (1).- 107.-1993.

174. Larsen P.G., Galask R.P. Vaginal microbial flora composition and infuences of host physiology .//Ann/ Inter. Med. -1982. -96. -C.926.

175. Ledger W.J. Historical review of the treatment of bacterial vaginosis.// Am. J. Obstet.Gynecol.//1993. -169(2Pt2). -C.474-478.

176. Lefevre J.C. Donnees bacteriologiques recentes de la physiopathologie au traitement.//Rev. Fr. Gynecol. Obstet. -1993. -88(3 Pt2). -C.207-210.

177. Lee M.-L.T., Ross R.A., Onderdonk A.B. Application of in vitro and in vivo to the study of microflora//Microb. Ecol. Health and Bisease. -1995. -8 №1. -C.xxxi.

178. Lee M.-L.T., Ross R.A., Onderdonk A.B. In vitro interactions of vaginal isolates of lactobacilli with other members of vaginal flora// Microb. Ecol. Health and Bisease. -1995. -8 №1. -C.xxxi.

179. Lyons T.P., Fallon R.I. The probiotic concept coming of age.//World Bio-technol. Rpts. -San Francisco. -1986. -Nov. C.69-86.

180. Luc R.C. La importancia del B.subtilis en la terapentica intestimal.//Medic. cLinica. -1958. -Tom 31. -№8. -P.420-424.

181. Mardh P.A. Definition et epidemiologic des vaginoses bacteriennes.//Rev. Fr. Gynecol.Obstet. 1993. -88(3 Pt 2). -C.195-197.

182. Martius J., Eschenbach L.F. The role of bavterial vaginosis as a cause of amniotic fluid in prematurity a review.//Arch. Gynecol. Obstet. -1996. -247. -C.l-13.

183. McGregor J.A., French J.I., Seo K. Premature rupture of membranes and bacterial vaginosis.//Am.J.Obstet.Gynecol. -1993. -169(2 PT2). -C.463-466.

184. Mead P.B. Epidemiology of bacterial vaginosis.//Am.J.Obstet.Gynecol. -1993. -169(Pt2). -C.446-449.

185. Millier S., Krohn M.A., Watts D.H. et al. Microbiologic Efficacy of intrav-aginal clindamycin cream for the treatment of bacterial vaginosis.// Ob-stet.Gynecol. -1990. -76. -3. -C.407-413.

186. Moran D.J., Payne A. Subclinical Intra-amlotic infection with Gardnerella vaginalis associated with preterm delivery //Brit. J. Obstet. Gynecol. 1989. - Vol. 96, № 4. - P. 489-490.

187. Naher A., Rahman K.M., Hassan M.M. et al. Studies on the anaerobic (bacterial) vaginosis among the Bangladeshi women of reproductive age group.//Med. Res. Counc. Bull. -1994. -Vol.20(3). -C.129-138.

188. Nagy E., Petterson M., Mardh P.A. Antibiosis between bacteria isolated from the vagina of women with and without sings of bacterial with joghurt// Acta Obstet.Gynecol.Surv. -1993. -V.72. -№ l. -P.17-19.

189. Narcio M.L. Bacterial vaginitis and vaginosis.//Ginecol. Obst. Med. -1996. -Vol.64. C.437-438.

190. Overman В.A. The vaginal as an ecologic system. Current in standing and clinical applications. // J. Nurse Midwifery. -1993. Vol. 38, № 3. - P. 146-151.

191. Perera J. Microbiological patterns in vaginitis.//Ceylon Med. J. -1994. -39(2). C.91-94.

192. Pheifer T.A., Forsyth P.S., Durfee M.A. et al. Nonspecific vaginitis. Role of Hoemophilus vaginalis and treatment with metronidazole.// N. Engl. J. Med. -1978. -298. -C. 1429-1434.

193. Piot P., Van Dyck E, Goldts P. et al. A placebo-controlied, double-blind comparison of tinidazole and triple sulfonamide crean for treatment of nonspecific vaginitis.//Am J. Obstet. Cynecol. -1983. -147. -C.85-89.

194. Priestley G.J. Bacterial vaginosis. //Brit.J.Clin.Practice. -1996. -Vol.50. -№6. -C.331-334.

195. Pulkkinen P., Saranen M., Kaaja R. Ametronidazole combined with nystatin (vagitories) in the prevention of bacterial vaginosis after initial treatment with oral metronidazole.//Gynecol Obstet Invest. -1993. -36(3). -C. 181-184.

196. Reed B.D. Eyler A. Vaginal infection: Diagnosis and management.// Am.Fam. Phys. -1993. 47(8). -C. 1805-1816.

197. Riduan J.M., Hjllier S.L., Utomo B. et al.Bacerial vaginosis and prematurity in Indonesia: association in early and pregnancy .//Am. J. Obstet. Gynecol. -1993.-169(1). C.175-178.

198. Riviere H. Gardnerella vaginalis in a newborn infant contaninatvor or infec-tion.//Annal. Biol. Clin.(Paris). -1996. -V.54 №8. -P.333-334.

199. Roy S., Sharma M., Ayagari A. et al. A quantitative microbiological study of bacterial vaginosis.//Indian J. Med. Res. -1994. V.100. -C. 172-176.

200. Saharan S.P., Surve C., Raut V. et al. Diagnosis and prevalence of bacterial vaginosis.//J.Postgrad Med. -V. 39 (2). -C.72-73.

201. Schmidt H., Hansen J.G. A wet smear criterion for bacterial vagino-sis.//Scand J. Prim. Health. Care. -1994. 12(4). -C.233-238.

202. Sjoberg S. Hakansson. Endotoxin in vaginal fluid of women with bacterial vaginosis.//Obstet. Cynecol. -1991.-77. -C.265.

203. Soper D.E. Bacterial vaginosis and postoperative infections.//Am J Obstet Gynecol. 1993. -169(2 Pt 2). - C.467-469.

204. Sorokulova I.B. Translocation of exogenons microflora throngh mucons membranes of wham-bloaded.//IUMS Congress: Bacteriology, Mycology. -Osaka.-1990. -C.l50-151.

205. Spiegel C.A., Amsel R., Eschenbach D. Anaerobic bacteria in non specitic vaginitis.//N. J. Med. -1978. -298. -C.1429.

206. Sweet R. New approaches for he treatment of bacterial vaginosis.//Am J Ob-stes Gynecol. -1993. -169(2 Pt 2). -C.479-482.

207. Taylor-Robinson A.W., Borriello S.P., Taylor-Robinson D. Identification and preliminary characterization of a cytoxin isolated from Mobiluncus spp.//Int.J. Exp.Pathol. -1993. -74(4). -C.357-366.

208. Van der Waaij D. Antibiotic choice: The importance of colonization resis-tance.//N.Y.:Acadlmic Press. -1983. -298 C.

209. Vermeulen G.M., Bruinse H.W. N.H. Bacteriele vaginosis; pathofysiologie en behandeling //Diaconessen inrichting, afd. Gynaecologie, M. Ned. Tijdschr Geneeskd. -1994 138 (21). -p.1055-1058.

210. Watts D.W., Krohn M., Hillier S.L., Eschenbach D.A. Bacterial vaginasis a a risk factor for post cesarean endometritis.//Obstet.Gynecol. -1990. -75. -C.52.

211. Wei H., Kan E. Bacillus cereus «Cercobiogen» as a growth promoter of Bi-fidobacterium.//Rec/advanc. In germbree res. -Tohai. Univers. Press. -1981. -C.475-480.

212. Zana J. Les vaginoses bacteriennes: quel risque pourb la m'ere et l'enfant?//Rev Fr Gynecol Obstet / -1993. 88 (3 Pt 2). - P.211-214

Информация о работе

Чумаева, Татьяна Владимировна
кандидата медицинских наук
Москва, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Экспериментальное обоснование применения различных лекарственных форм пробиотиков для коррекции дисбиозов влагалища - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы