Механизмы регуляции апоптоза в нейроэндокринной системе гипоталамуса в позднем онтогенезе

Бажанова, Елена Давыдовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Механизмы регуляции апоптоза в нейроэндокринной системе гипоталамуса в позднем онтогенезе
ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Механизмы регуляции апоптоза в нейроэндокринной системе гипоталамуса в позднем онтогенезе"

на правах рукописи

БАЖЛНОВА Елена Давыдовна

МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ АПОПТОЗА В НЕЙРОЭНДОКРИННОЙ СИСТЕМЕ ГИПОТАЛАМУСА В ПОЗДНЕМ

ОНТОГЕНЕЗЕ

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени

« ? / п 'п З ¿о'П

доктора биологических наук ' " '

Санкт-Петербург 2011

4843488

Работа выполнена в лаборатории сравнительной сомнологии и нейроэндокринологии Учреждения Российской Академии Наук Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН.

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Анисимов Владимир Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Неворотин Алексей Иосифович доктор биологических наук, профессор Чумасов Евгений Иванович доктор медицинских наук, профессор Дубовая Татьяна Клиониковна

Ведущее научное учреждение:

Санкт-Петербургская общественная организация "Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН"

Защита диссертации состоится 08 Февраля 2011 г. в 11 часов на заседании Диссертационного Совета Д 001.022.02 при Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины Северо-Западного отделения РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12, тел. (812) 234-68-68.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины Северо-Западного отделения РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12.

автореферат разослан 201 ¿г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета Д001.22.02. доктор медицинских наук

П.А. Дыбан

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

В настоящее время процесс старения привлекает внимание множества исследователей (Zhang et al., 1995; Mattson et al., 1999, 2001; Kim et al., 2001; Beneke and Burkle, 2004). В процесс старения, как известно, вовлечены сложные механизмы, в которых принимают участие самые различные молекулярные системы - иммуномодуляторы, ростовые факторы, гормоны, нейрогормоны, рецепторные и многие другие белки (Cutler, 1991; Browner et al., 2004; Heiser et al., 2004; Holzenberger et al., 2004; Lutomska et a!„ 2008). Согласно некоторым авторам, старение может запускаться 2 механизмами: укорочением теломер и повреждением ДНК (Ding and Shen, 2008), что индуцирует клеточное старение (Eller et al., 2006; Lucassen et al., 1997; Harrigan et al., 2007). Однако и тот, и другой механизмы старения в высокой степени зависят от р53-статуса (Li et al., 2008, Campisi, 2002). Продукт гена-онкосупрессора р53 играет критическую роль в поддержании геномной целостности в клетках млекопитающих. Возможность р53 индуцировать апоптоз - важнейшая функция этого белка-фактора супрессии опухолей, определяющая его роль в старении (Sommers et al., 2005; Sharma et al., 2007). Необратимая остановка пролиферации старых клеток сопровождается р53-зависимой транскрипционной активацией генов-мишеней р53 (Atadja et al, 1995). Активация р53 в старых клетках, по-видимому, происходит в ответ на хромосомные разрывы, ассоциированные с укорочением теломер в стареющих клетках (Harley and Sherwood, 1997). Таким образом, многими авторами показано активное участие апоптоза в старении клеток (Fearnley and Lees, 1991; Fearnley et al.. 1991; Nagai et al., 1993; Yoshiyama et al., 1994; Taglialatelaetal., 1996; Kiatipattanasakul etal., 1996).

Как известно, старение организма во многом зависит от изменения нейроэндокринной регуляции (Olovnikov, 2007). Очевидно, что состояние нейросекреторных клеток на поздних этапах онтогенеза влияет на их морфофункциональную активность и определяет темпы и направление старения органов-мишеней.

на поздних этапах онтогенеза. Имеющиеся литературные данные представлены результатами, полученными в основном на клеточных культурах, т.е. в условиях изоляции однородных клеток (Oshima et al., 1995; Gray et al., 1997; Poot et al., 2004; Dimri et al., 2005; Kimura et al., 2005; Nyunoya et al., 2009). Подобные данные невозможно адаптировать к физиологическим процессам, протекающим в целом организме.

В связи с этим, представляется актуальным исследовать механизмы регуляции апоптоза клеток нейрозндокринной системы при старении. Использование в качестве модели трансгенных мышей даст возможность изучить роль тирозинкиназного рецептара онкопротеина НЕЮ.!пей в регуляции апоптоза нейронов старых животных. Предполагается, что изменение сигнальных каскадов апоптоза при старении является базой для развития новообразований. Известно, что недостаточная активность онкосупрессора р53 является причиной канцерогенеза и, соответственно, сокращения продолжительности и качества жизни индивида (Sommers et al., 2005; Пискунова и др., 2007). Таким образом, очевидно, что выявление механизма р53-зависимого апоптоза и взаимосвязи онкогена HER2/пей с генами, регулирующими р53 (WRN) и транскрипционными мишенями р53 будет иметь большое практическое значение в теоретической и клинической медицине.

Кроме того, представляет глубокий интерес выявление роли другого важного проапоптотического фоктора - TNF-alpha (tumor necrosis factor, фактор некроза опухолей) в регуляции апоптоза при старении. На модели TNF-нокаутных мышей будут исследованы изменения механизмов апоптоза, вызванные отсутствием гена TNF.

Результаты данного исследования будут иметь практическое значение в онкологии и геронтологии.

Цель исследования - изучить молекулярные механизмы регуляции апоптоза клеток нейроэндокринной системы на поздних этапах онтогенеза и выявить морфофункциональные изменения, связанные со старением.

Достижение поставленной цели осуществлялось путем решения следующих задач:

1. изучить адаптивные (Возможности и механизмы стрессорного ответа гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальнок системы при старении.

2. изучить сигнальные пути, приводящие к изменению уровня апоптоза

нейронов мозга при старении.

3. оценить вклад клеточных рецепторов - рецептора эпидермального фактора роста (HER2) и фактора некроза опухолей (TNFa) в реализацию апоптоза нейронов гипоталамуса при старении.

4. изучить возможность модуляции старческого апоптоза нейронов мозга и определить возможные геропротекторы.

5. выявить изменения морфофункционапьной активности клеток нейросекреторной системы гипоталамуса, связанные с активацией генов апоптоза в позднем онтогенезе.

Научная новизна.

Впервые дан комплексный анализ нонапептидергической, NPY- -ергической и моноаминергической систем гипоталамуса на поздних этапах онтогенеза. Выявлена возрастная динамика функциональных и адаптивных возможностей нейросекреторной системы, а также зависимость синтеза вазопрессина и апоптоз-ассоциированных молекул от генотипа животного.

Разработано концептуальное представление об участии апоптоза в инволюционных процессах нейронов мозга. Впервые получены данные, объясняющие механизм регуляции апоптоза нейросекреторных клеток гипоталамуса млекопитающих на поздних этапах онтогенеза. Выявлены гены, активирующие/тормозящие сигнальные пути апоптоза нейронов при старении и определены апоптотические сигнальные каскады гибели нейронов молодых и старых животных. Анализ результатов выявил ряд генов, активация которых характерна для нейросекреторных клеток на поздних этапах онтогенеза, что позволило определить возможные генетические «триггеры старения» в НЭС. Подтверждено наличие caspase-зависимого пути клеточной гибели при старении.

Впервые изучены инволюционные изменения нейронов гипоталамуса ускоренно стареющих мышей линии HEiR2/neu и обнаружены причины низкого уровня апоптоза у этих животных. Впервые показано, что , отсутствие определенных генов, участвующих в канцерогенезе (TNF) (TNF-нокаутные мыши), и сверхэкспрессия онкопротеина НЕЮ.!neu (НЕЯ2/пеи-трансгенные мыши) оказывает определенное влияние на онтогенетическую модель регуляции апоптоза.

Впервые изучено действие иммуномодуляторов (альфа-интерферон, циклоферон) на синтез нейрогормонов и апоптоз-ассоциированных белков в нейросекреторных клетках в позднем онтогенезе. Показано, что участие иммуномодуляторов в регуляции апоптоза зависит от стадии онтогенеза. Основные положения, выносимые на защиту.

1. Гипоталамо-гипофизарная система старых животных находится в состоянии напряжения (включая пептидергическую, NPY-ергическую, моноаминергическую системы), в связи с чем механизмы гипоталамического стрессорного ответа у старых крыс значительно отличаются от реакции молодых животных. На поздних этапах онтогенеза адаптивные реакции протекают тяжелее и с запаздыванием в связи с возрастными нарушениями в нейроэндокринной системе.

2. При физиологическом старении нейросекреторные клетки гибнут путем апоптоза, при этом активируется внешний путь клеточной гибели (caspase-8-зависимый), митохондриальный (изменения экспрессии белков семейства Вс1-2) и р53-зависимый путь, связанный с повреждением ДНК.

3. Индукция апоптоза при старении не зависит от наличия гена TNF.

4. Сигнальные пути апоптоза одинаковы в нейросекреторных центрах молодых мышей, но различаются у старых животных в физиологических условиях и при стрессе.

5. Участие иммуномодуляторов в регуляции клеточной гибели нейронов гипоталамуса зависит от стадии онтогенеза и от вида иммуномодулятора.

6. Сверхэкспрессия HER2/пей достаточна для защиты от возраст-зависимой активации апоптоза в нейросекреторных центрах. Основным механизмом подавления апоптоза у трансгенных мышей является блокирование р53-зависимого каскада, что приводит к снижению синтеза caspase-8 и Вах, дисрегуляции синтеза антиапоптотических белков Вс1-2 и МсМ.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты проведенных исследований позволяют расширить и углубить представления о возрастных изменениях одной из наиболее важных регуляторных систем организма - нейроэндокринной системы, как ее центрального звена (гипоталамо-гипофизарная система), так и периферического (кора надпочечников). Данные, полученные в работе, позволяют выявить роль

отдельных генов в регуляции старения и апоптоза, а также конкретные механизмы гибели нейронов мозга при старении.

Практическая ценность результатов исследования состоит в необходимости учета возрастных особенностей • при использовании иммуномодуляторов и лечебной гипероксигенации в эксперименте и в клинике.

Выявленные в работе закономерности регуляции апоптоза на поздних этапах онтогенеза, особенности протекания инволюционных процессов в нейронах мозга могут быть использованы при изучении курсов физиологии, клнточной биологии, возрастной физиологии, геронтологии и гериатрии в вузах биологического и медицинского профиля, при подготовке аспирантов данных специальностей, а также учтены при использовании в геронтологии, гериатрии и онкологии.

Материалы диссертации включены в курс лекций по физиологии Российского государственного педагогического университета им. Герцена (Санкт-Петербург).

Апробация работы.

Основные результаты исследований доложены и обсуждены на следующих научных конференциях: Международная конференция «Колосовские чтения» (С-Петербург, 1997, 2006), II National Gerontology Congress with international participant (Bucharest, Romania, 1997), World Congress of neurohypophysial hormones (Monreal, Quebec, Canada, 1997), 1-я и 2-я конференции с международным участием "Эндокринные механизмы регуляции функций в норме и патологии", посвященная 75- и 80-летию проф. Колпакова (Новосибирск, 1997, 2002), The 4"' International Congress of Neuroendocrinology (Kitakyushu, Japan, 1998), Genetic and developmental psychoneuroendocrinology, International Symposium (Новосибирск, 1999), Всероссийские конференции с международным участием «Нейроэндокринология» (С.-Петербург, 2000, 2003, 2005, 2010), XXX Всероссийское Совещание по проблемам высшей нервной деятельности, посвящ. 150-летию Павлова (С.-Петербург, 2000), International Conference "Free radicals in the development and functions of CNS. From fetus to aging" (С.-Петербург, 2001), конференция молодых ученых и специалистов (С.Петербург, 2003), VIH Meeting on high pressure biology (Москва, 2003), International Symposium "Neuron differentiation and plasticity - regulation by intercellular signals" (Москва, 2003), the 2nd international Conference on Functional

Genomics of Ageing (Crete, Greece, 2004), научно-практическая конференция «Общество, государство и медицина для пожилых и инвалидов» (Москва, 2004), VII международной научной конференции «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря» (Астрахань, 2004), XIX съезд Физиологического общества им. Павлова (Екатеринбург, 2004), электронная конференция "Информационно-вычислительные технологии в решении фундаментальных научных проблем и прикладных задач химии, биологии, фармацевтики, медицины" (Москва, 2004, 2005, 2008), 1 съезд физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005), V Методологический семинар «Методология и методика научных исследований в области естественно-научного образования» (С.Петербург, 2005), International Summer school in Behavioral Neurogenetics (Москва. 2005), XIII Международное Совещание им. Орбели по эволюционной физиологии (С.-Петербург, 2006), межвузовская конференция молодых ученых «Герценовские чтения» (С.-Петербург, 2006), международная конференция «Свободные радикалы, антиоксиданты и старение» (Астрахань, 2006), the 2nd World Congress on Gender-Specific Medicine (Rome, Italy, 2007), XX съезд Физиологического общества им. Павлова (Москва, 2007), VI European Congress of International Association of Gerontology and Geriatrics (С.-Петербург, 2007), IX Российско-китайский симпозиум «Новые материалы и технологии» (Астрахань, 2007), конференция с международным участием «Нейрохимические механизмы формирования адаптивных и патологических состояний мозга» (С.Петербург, 2008), международный симпозиум «Профессиональное здоровье и качество жизни» (Гавана, Куба, 2009), 12th Internationa! TNF Conference «The TNF superfamily and its interactions with other signaling proteins in infection, autoimmunity, cancer and therapy» (El Escorial, Madrid, Spain, 2009), 1st International Congress on Controversies iri Longevity, Health and Aging (Barcelona, Spain, 2010).

Результаты исследований опубликованы в следующих журналах: «Журнал эволюционной биохимии и физиологии», «Морфология», «Neuroscience Behavior Physiology», «Цитология», «Успехи современной биологии», «Естественные науки», «Mechanisms of ageing and development», «Успехи геронтологии», «Доклады Академии наук», а также в сборнике трудов «Environment and human health: The complete works of International Ecologic

Forum», 2003, St. Petersburg, Russia / Editor in chief G.A. Sofronov. Spb.: SpecLit, 2003. - 864 p.

Публикации. По теме диссертации опубликованы 59 работ, в том числе 21 статья в журналах, рекомендуемых ВАК для публикации материалов докторских диссертаций.

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов и библиографического списка.

Общий объем диссертации 334 страницы с 9 таблицами и 80 рисунками. Список литературы включает 584 публикаций, в том числе 474 иностранных.

В работе использованы следующие сокращения: А-адреналин

АКТГ - адренокортикотропный гормон AT - антитела ЛЯ - аркуатное ядро ВП - вазопрсссин

[ТАКС - гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальная система

ГГНС - гипоталамо-гипофизарная нейросекреторная система

ЗДГ - задняя доля гипофиза

ИА - интерферон-альфа

ИГХ - иммуногистохимический

Инс - инсулин

ИПП- инсулин-подобные пептиды ИР - иммунореактивный КА - катехоламины KJ1 - кортиколиберии

кПВЯ - крупноклеточная часть паравентрикулярного ядра

КС - кортикостерон i

МА - моноамины

мПВЯ - мелкоклеточная часть паравентрикулярного ядра НА - норадреналин

НЗСВ - наружная зона срединного возвышения

HIIY - нейропептид Y

НСК - нейросекреториые клетки

НСЦ - нейросекреторные центры

НЭС - нейроэндокринная система

ОТ - окситонин

ПВЯ - паравентрикулярное ядро

ПДГ - передняя доля гипофиза

ПКГ - переднекомиссуральная группа

СВ - срединное возвышение

СОЯ - супраоптическое ядро

ТГ - тирозин-гидроксилаза

ЦНС - центральная нервная система

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Характеристика экспериментального материала, условий экспериментов и методических приемов исследования

Животные содержались в виварии при естественном освещении в стандартных условиях. Поскольку наркоз вызывает резкий выброс нейрогормонов в кровь, нами для умерщвления животных была применена быстрая декапитация.

Часть экспериментов проведена на крысах-самцах линии Вистар -молодых (3-6 мес.) и старых (14-28 мес.), и крысах в возрасте от 1 до 80 дней постнатальной жизни (всего 160 животных) (иммобилизация, опыт с избегаемым и неизбегаемым стрессом).

Были использованы белые беспородные мыши-самцы - молодые (2 мес) и старые (18 мес), всего 120 мышей (оксидативный стресс, применение ИА).

В исследовании использовали TNF-нокаутных мышей молодых (2-4 мес) и старых (13-18 мес), всего 20 мышей. Мыши данной линии выведены в лаборатории молекулярной иммунологии (зав. лабораторией: член-корр. РАН, д.б.н. проф. Недоспасов С.А.) ИМБ им. В.А. Энгельгардта РАН (Москва) методом генетического нокаута и переведены на генетическую основу C57BL/6 путем возвратного скрещивания (Grivennikov et al., 2005]. Разведение их поддерживалось в НИИ онкологии им. Петрова (С.-Петербург). Панель содержит линию мышей с модифицированным геном фактора некроза опухолей (TNF), подготовленные к тканеспецифической делеции гена. Характеристика линии: у мышей с полной делецией гена TNF нарушена защита от ряда патогенов. Данные мыши представляют собой уникальную панель для изучения роли тканеспецифической продукции цитокинов семейства TNF при врожденном и приобретенной иммунодефиците. Контролем служили мыши дикого типа (линия С57В1/6) (wild type, WT) 4 и 18 мес, всего 20 мышей.

Были использованы мыши самцы: HER2/«e« трансгенные молодые (2 мес) и старые (11 мес). Гомозиготные HERUneu трансгенные мыши получены из Charles River Facility (Hollister, CA), the Italian National Research Center for Aging. Разведение их поддерживалось в НИИ онкологии им. H.H. Петрова (С.Петербург). Мыши данной линии являются ускоренно стареющими (Semenchenko et al., 2004), вследствие множественных функциональных

повреждений и канцерогенеза продолжительность их жизни составляет около 12 мес. Контролем служили мыши дикого типа (линия Swiss-derived outbred mice (SHR), питомник Рапполово, С.-Петербург) 2 и 18 мес. (9 мышей в каждой группе). Всего использовано 60 мышей.

Иммобилизационный стресс.

1. Изучение адаптационных возможностей НЭС у старых и молодых крыс в разное время после стресса

Стрессируемые крысы находились в пластиковых контейнерах соответствующего размера (1 ч). Животных декапитировали сразу и через 1,2,3 сут после стресса.

2. Исследование действия индуктора интерферона (циклоферона) при стрессе

В опыте были следующие группы: интактные мыши; подопытная группа, подвергшаяся иммобилизационному стрессу в пластиковых контейнерах соответствующего размера (1 ч); мыши, получавшие циклоферон per os в 1, 2, 3, 5 сут. один раз в день в дозе 0,154 мг - для молодых, ОД 16 мг - для старых, на 6 сутки эти мыши были подвергнуты иммобилизации; мыши, получавшие циклоферон per os по той же схеме, без стресса. Животных декапитировали через 18 ч после стресса.

Изучение характера локализации NPY-ергических нейронов в гипоталамусе

Кроме интактных взрослых крыс линии Вистар (3 мес), использованы крысы в возрасте от 1 до 80 дней постнатальной жизни и старые животные (28 мес). Для изучения локализации NPY-ергических нейронов в гипоталамусе трем взрослым крысам был введен интрацистернально колхицин (75мкг в 2 мкл) за 2 дня до декапитации. Существование проекций от NPY-ергических нейронов, локализованных в АЯ, к основным пептидергическим НСЦ показано с помощью хирургической изоляции медиобазапьного гипоталамуса (4 взрослых крысы под нембуталовым наркозом в стереотаксическом аппарате по координатам атласа (Сентаготаи Я. и др., 1965), согласно описанию Halasz, Pupp (1965)) за 4 недели до декапитации (Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, Л.Н. Маслова). В результате операции в изолированном участке в связи с гипофизом остаются медиальная часть перивентрикулярных ядер, АЯ, базапьная часть вентромедиального ядра и СВ.

Эксперимент с избегаемым и неизбегаемым стрессом

Установка для стрессорного воздействия состояла из 2 клеток с токопроводящим полом для неизбегаемого стресса (НС) и для избегаемого (ИС). Электрический ток (1 мА, 60 Гц, 1-15 сек) подавали одновременно на обе клетки 60 раз в течение 1 ч, интервалы между включениями тока 15-45 сек. В клетке для ИС крыса могла перейти в безопасный отсек, а в клетке для НС возможности избежать воздействия электрического тока у крысы не было. Переход одной крысы в безопасный отсек камеры отключал ток, подаваемый на пол клетки, где находилась крыса из группы НС, т.е. животные 2 опытных групп получали равное по силе и продолжительности электрокожное раздражение, и единственное различие между ИС и НС состояло в возможности животного контролировать ситуацию. Декапитацию производили через 72 ч после стресса.

Оксидативыый стресс

Как стресс-фактор использовали гипероксию в барокамере (1,5 ч при 2 атмосферах абсолютных кислорода). В качестве протектора повреждений, определяемых возрастом и кислородом, был выбран интерферон-альфа (ИА) (Interferon leucocytic human siccum, 500 МЕ/мл; НПО Биомед, Россия). В опыте были следующие группы: интактные мыши каждого возраста (контроль); мыши, в течение 3 сут получавшие ИА интраназально по 50 мкл 2 р. в день, декапитацию производили на 4 день; мыши, подвергшиеся гипероксигенации; мыши, получавшие ИА в течение 3 сут перед стрессированием. Животных 3-й и 4-й групп декапитировали сразу после стресса.

Определение катехоламинов (КА) (норадреналин (НА), адреналин (А)) в ткани надпочечников

Экстракцию КА производили из замороженной ткани надпочечников. Содержание КА (НА и А) определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии под высоким давлением (Лаборатория университета г. Грац, Австрия) с помощью электрохимических детекторов (Beckman Gold, 5401 и BAS-LC 4В). Конъюгированные КА были определены после гидролиза с сульфатазами 4 типов (Sigma, Munich, Germany).

Радиоиммунный анализ концентрации кортикостерона (КС) в крови

Собранную после декапитации животных кровь центрифугировали, плазму хранили при -20°С. Определение содержания КС в плазме крови

проведено Д.А. Жуковым с помощью РИА [19] в лаборатории медицинской фармакологии (заведующий проф. Е.Р. de Kloet) университета г. Лейден (Нидерланды).

Гистологическая обработка материала

Гипоталамическую область головного мозга с гипофизом фиксировали в 4% параформальдегиде и после рутинной проводки заливали в парафин. Были изготовлены чередующиеся серии фронтальных срезов (5-6 мкм). Для анализа использовались срезы, содержащие супраоптическое, паравентрикулярное, аркуатное ядра (СОЯ, ПВЯ, АЯ), лереднекомиссуральную группу (ПКГ) и срединное возвышение (СВ), отдельно изучали нейросекреторные клетки (НСК) крупно- (кПВЯ) и мелкоклеточной (мПВЯ) части. У части мышей гипоталамическая область мозга после фиксации в 4%-ном параформе, последующих рутинных процедур (вода, сахароза, быстрая заморозка в изопентане) была заморожена при -20°С, и впоследствии на криостате были изготовлены чередующиеся срезы (5-6 мкм).

У мышей HER2 определен вид, число и размер опухолей, после рутинной гистологической проводки и окраски проведено микроскопическое исследование опухолей (окраска гематоксилином-эозином), которые классифицированы согласно international Agency for Research on Cancer Recommendations.

Определение уровня апоптоза в тканях 1. Люминисцентная микроскопия срезов, окрашенных этидия бромидом

Подсчитывали количество клеток с конденсированным хроматином: Для выявления апоптотических клеток на фиксированных срезах тканей был применен метод окраски этидием бромидом (Sigma), который способен встраиваться в дуплексную ДНК, что обеспечивает высокую интенсивность его флуоресценции в УФ свете. Наибольшая плотность флуоресценции регистрируется в клетках с конденсированным хроматином [13, 14], что в условиях высокодифференцированной нейросекреторной ткани соответствует исключительно апоптотическим клеткам.

2. TUNEL-метод

Для сравнения и контроля применен метод детекции апоптоза TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling) с

использованием терминальной дезоксинуклеотидил-трансферазы для выявления разрывов ДНК (кит для TUNEL Sileks, Россия).

Иммуногистохимические (ИГХ) методики

На срезах, содержащие изучаемые ядра, проводили ИГХ реакции с использованием немеченных антител (AT) (Sternberger L. A., Joseph S. A., 1979) к ВП, ОТ и NPY, (Research Diagnostics Inc., USA) любезно предоставленных нам профессором J.A. Dierickx (Бельгия), к KJ1 и тирозин-гидроксилазе (ТГ), которая является первым ферментом в цепи синтеза КА. Для выявления на одном и том же срезе NPY-ергических волокон и ВП- или ОТ-продуцирующих нейронов использовалась двойная ИГХ реакция. В качестве маркера активности нейронов использовали белок c-fos (Lafarga М. et al., 1992; Cai A. et al., 1997), выявляемый с помощью ИГХ реакции с немеченными антителами к c-fos.

Для выявления апоптоз-ассоциированных молекул в НСК проводили: двойную ИГХ реакцию с немечеными поликлональными AT к антиапоптотическим белкам Bcl-2 (BD Biosciences, USA) (визуализация с помощью флюоресцентно меченных вторичных поликлональных AT Су-2; Acris Antibodies GmbH, Germany), и Mcl-1 (BD Biosciences, USA) (визуализация -флюоресцентно меченные вторичные поликлональные AT Су-3; Acris Antibodies GmbH, Germany) и двойную ИГХ реакцию с немечеными поликлональными AT к белку Bcl-2 (BD Biosciences, USA), (визуализация - Су-2), и проапоптотическому белку Вах (BD Biosciences, USA) (визуализация - Су-3).

Выявляли маркеры апоптоза и другие изучаемые белки с использованием следующих AT: поликлональные к Bcl-2, Mcl-1, Вах (BD Biosciences, USA), к FLICE (caspase-8) и caspase-9 (Santa Cruz Biotechnology, USA), к ВП (Sigma Aldrich, USA), к Инс/ИПП-ИР веществу (любезно предоставлены Ю.И. Русаковым, лаб. молекулярной нейроэндокринологии, ИЭФБ РАН), моноклональные к р53 (Sigma Aldrich, USA), C-raf-1 (любезно предоставлены Dr. Papp U.R., Universität Wurzburg, Germany).

In situ гибридизация. Приготовление шаблонов и синтез рибопроб

Рибопробы для детекции ВП, р53 и wrn мРНК мыши были приготовлены с помощью метода in vitro транскрипции с использованием синтетического шаблона. Нешаблонный стренд (non-template strand - NT; NTVMTU8 5'-GTAATACGACTCACTATAGGAGGGAGAGAG) кодирует 18-ти-нуклеотидный промотер для Т7 РНК полимеразы. Соответственный GGG

сиквенс нижней полосы Т7 промотера был замещен на GGA для уменьшения образования абортивных транскриптов и, посредством этого, повышения эффективности синтеза необходимых транскриптов полной длины. Шаблонный стренд (template strand - TS; TSAvpmo 5'-AAGAGGGCCATCTCTGACATGGAG CTGAGACAGTGTCTCCCCTGCGGCCCGGGCGGCAAAGGACGCTGCTTCGG ACCACTCTCTCCCTCC-3') представляет копию ДНК мыши в части ВП мРНК, поэтому он кодирует РНК, которая может быть использована как проба для метода in situ гибридизации. Для WRN шаблонный стренд (template strand - TS; TSwrnmo5'-AAATGTTACTTGTTTCACATTTCTTCCATGTCAGTTTTCCCCCA GGGATTAAAAATGTTACTAGAAAACAAATCAATTCTCTCTCCCTCC-3') представляет копию ДНК мыши в части WRN мРНК. Для р53 шаблонный стренд (template strand - TS; TSwrnmo5'-5'-AGTCTGGGACAGCCAAGTCTGTT ATGTGCACGTACTCTCCTCCCCTCAATAAGCTATTCTGCCAGCTGGCGAAG ACGTCTCTCTCCCTCC-3'1 представляет копию ДНК мыши в части р53 мРНК.

Одноцепочечный регион шаблона был замещен с использованием Klenow Fragment (ехо~) (NEB, USA). Чтобы пометить рибопробу, мы использовали модифицированный NTP, D1G-11-UTP (Roche Applied Science, USA). Рибопробы были созданы с помощью реакции in vitro транскрипции с вышеуказанным шаблоном, как рекомендовано в руководстве по использованию D1G-11-UTP.

Гибридизация была выполнена с использованием дигоксигенин-меченых ВП, р53 и WRN рибопроб на свежих замороженных срезах. Мы использовали стандартный протокол, опубликованный ранее (Glasgow et al., 1999).

Количественное хемилюмшшсцентное иммунное определение в крови 17Р-эстрадиола

Образцы крови изучаемых животных, собранные после декапитации, были центрифугированы, и полученная плазма хранилась при -20°С. Уровень 17р-эстрадиола в плазме крови был определен с помощью анализатора Elecsys 2010 и кита (Roche Diagnostics, USA).

Анализ изображений

Изображения срезов, содержащих изучаемые НСЦ, после выполнения ИГХ реакций, in situ гибридизации, TUNEL и окрашенных этидия бромидом, были получены с помощью микроскопа PFM (WPJ, USA) и цветной видеокамеры camera DIC-E (WPI, USA), Leika DFC 300 FX (Германия),

разрешение 1392x1040 пикселей (увеличение х 40). Для оценки интенсивности экспрессии изучаемых белков и уровня апоптоза использовалась программа VideoTest Software.

Подсчитывали число c-fos-ИР и ТГ-ИР НСК на 5-6 срезах каждого животного в НСЦ, затем вычисляли средние доли клеток для группы мышей. Было подсчитано среднее количество NPY-HP нейронов на 5 срезах АЯ на уровне РЗ.5 по атласу Сентаготаи и др. (1965).

В НСК определяли среднюю максимальную яркость (в относительных единицах, представляющих отношение яркости фона к яркости объекта) Bcl-2-, Mcl-1- и Вах-ИР вещества на 5-6 срезах для каждого животного, отдельно в каждом ядре. Кроме того, подсчитывали число НСК с колокализаиией Bcl-2 и Мс!-1, Bcl-2 и Вах.

Определяли оптическую плотность ИР вещества для каждого антитела отдельно в клетках НСЦ на 5-6 гипоталамических срезах для каждого животного, отдельно в каждом ядре, KJI-, ВП- и ТГ-ИР вещества, содержащихся в НЗСВ, ВП и ОТ в ЗДГ. На основании этого высчитывали среднюю оптическую плотность (выражена в относительных единицах, представляющих отношение яркости фона к яркости объекта) изучаемых белков в НСЦ для группы мышей. Так же производили денситометрию для определения мРНК ВП и мРНК WRN в СОЯ и ПВЯ.

Количество апоптотических клеток подсчитывали на 4-5 срезах, содержащих СОЯ, ПВЯ, и срезах коры надпочечников у каждой мыши с последующим определением среднего количества на группу. Для сравнения, уровень апоптоза был определен с помощью TUNEL. Были получены абсолютные значения (подсчитывалось количество темноокрашенных апоптотических клеток на гипоталамический центр, взятое как среднее на один срез).

Морфометрия и морфологическое описание наблюдаемых изменений в тканях

После проведения ИГХ реакций проводили кариолометрию ВП- и ОТ-ергических клеток в изучаемых НСЦ и вычисляли объем ядрышек, как показатель интенсивности синтеза нонапептидов. Также определяли долю НСК с одним ядрышком, расположенным в центре ядра, с эксцентрично расположенными и эктопированными ядрышками и многоядрышковыми

ядрами. Показателем интенсивности синтеза глюкокортнкоидов служил объем ядер клеток пучковой зоны коры надпочечников (Автандилов, 1980; Шейбак, 1988). Для характеристики путей транспорта нейрогормонов с помощью микроскопа NU-2 при увеличении 2.5G0 точечной методикой, используя сетку с шагом 1 см, стереологически определяли относительную ширину просвета сосудов НЗСВ и ЗДГ. Кроме того, с помощью световой микроскопии (БИОЛАМ И) сделано морфологическое описание наблюдаемых изменений в структурах гипоталамуса и коре надпочечников ла срезах, окрашенных гематоксилином-эозином.

Статистическая обработка полученных данных

Достоверность различий между группами определяли с помощью t- -критерия Стьюдента (р<0.05) с использованием коммерческой программы Microsoft Excel 5.0а. При обработке результатов эксперимента был использован также корреляционный анализ и коэффициенты вариации (Лакин, 1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ

Морфофункциональная характеристика нейросекреторных центров и их изменения в позднем онтогенезе. Гипоталамическая регуляция функции коры надпочечников у старых и молодых крыс

Нонапептидергическая система гипоталамуса. Результаты проведенного эксперимента с использованием в качестве стресса острой иммобилизации показали наличие различных механизмов адаптации к стрессорным условиям у крыс разного возраста. У молодых крыс ВП освобождается через наружную зону срединного возвышения (НЗСВ) в аденогипофиз, и таким образом участвует в стимуляции стресс-реакции коры надпочечников во время всего изученного периода.

На поздних этапах онтогенеза адаптивные реакции протекают тяжелее, поскольку компенсаторные механизмы уже напряжены в связи с возрастными особенностями. Нами показано более активное состояние НСЦ гипоталамуса у старых контрольных крыс, по сравнению с молодыми. Такое напряжение, наблюдаемое уже у контрольных животных, вероятно, и приводит к неадекватной реакции на стресс старых крыс. Мы выявили, что взаимосоотношения НСЦ у молодых крыс после стресса аналогичны таковому у контрольных старых крыс. Таким образом, по ВП- и ОТ-сннтетической

активности состояние контрольных старых животных можно определить как стрессорное. В связи с этим у животных на поздних стадиях онтогенеза реакция на иммобилизацию происходит с запаздыванием. Наличие даже незначительной задержки в реакции ГГНС и связанное с ней замедление адаптивных процессов снижает выживаемость этих особей в экстремальных условиях.

Изменения NPY-ергической системы гипоталамуса крыс в позднем онтогенезе и ее участие в регуляции нонапептидергических НСЦ. До сих пор неясны многие вопросы, связанные с влиянием на активность нонапептидергических клеток некоторых нейропептидов, выполняющих роль нейротрансмиттеров или нейромодуляторов при передаче сигналов к НСК. Одним из таких нейрохимических регуляторов является нейропептид У (NPY). Известно, что он, являясь антиподом ВП по действию на диурез и Na-урез, снижает системное артериальное давление, возбудимость ЦНС, стимулирует аппетит и подавляет жажду (Gray and Morley, 1986). NPY повышает солевой обмен, участвует в генезе медленноволнового сна и подавляет циркадные ритмы полового поведения (Horvath et al., 1992; Чернышева, 1995). Мало изучена роль NPY в регуляции ВП- и ОТ-ергических НСК, ее развитие в ходе постнатального онтогенеза и становление связей между NPY-ергической системой и гипоталамическими нонапептидергическйми нейронами. В эксперименте с введением колхицина выявлено наличие значительной NPY-ергической иннервации ВП-ергических НСК ПВЯ и, несколько меньшая - СОЯ. Также показана колокализация ВП и NPY в нейронах СОЯ и ПВЯ гипоталамуса. Исследования показали онтогенетическую зависимость NPY-ергической иннервации - у новорожденных крысят и у старых крыс плотность NPY-ИР нейронов была достоверно ниже, чем у взрослых животных. Изучение NPY-ергической системы гипоталамуса старых крыс показало, что у них NPY-ИР нейроны в АЯ не выявляются ИГХ методами, но количество NPY-ИР волокон в ПВЯ достоверно меньше, чем у контрольных взрослых крыс (Рис. 1). Вероятно, это связано с поступлением меньшего количества NPY в ПВЯ из АЯ в результате снижения интенсивности синтеза NPY в клетках АЯ старых крыс при одновременном сохранении этими клетками возможности к его активному выведению.

0,07 -

Я 0.0« ■ ф

§ 0,06. ^ 0,04-S 0,03 ■

1 3 5 7 13 15 17 24 31 64 74 81 В С сутки постнатального онтогенеза

Рис. I. Плотность NPY-ергической иннервации ПВЯ интактных крыс на разных стадиях постнатального развития. В - взрослые животные, С - старые. * -достоверность по отношению к группе взрослых крыс.

Участие катехоламинергических клеток гипоталамуса в регуляции стрессорной реакции организма при старении. Адаптация организма к различным стрессорным ситуациям протекает при активном участии ГГАКС. Одним из факторов, влияющих на активность центрального звена этой системы - пептидергических нейроэндокринных центров гипоталамуса, является катехоламинергическая система мозга. Роль КА в регуляции функции пептидергических НСК СОЯ и ПВЯ до сих пор полностью не выяснена, хотя показано участие КА в формировании стрессорного ответа у крыс (Guillaume et al., 1987; Szafarczyk et al., 1987; Spinedi et al., 1988). У взрослых млекопитающих многократно описана интенсивная КА-ергическая иннервация СОЯ и ПВЯ. Основными источниками этой иннервации считаются адренергические зоны Cl, С2, СЗ продолговатого мозга (Gunningham et al., 1990; Shioda et al., i992), норадренергические клетки Al - вентральной части продолговатого мозга и А2 -медиальной части ядра солитарного тракта (Swanson et al., 1983). Кроме того, известны КА-ергические центры, расположенные в гипоталамусе, такие как перивентрикулярное ядро, АЯ и zona incerta. Показаны проекции от этих центров к ПВЯ и СОЯ (Ginsberg et al., 1994; Wagner et al., 1995). Следовательно, можно предположить, что они участвуют в регуляции функции пептидергических нейросекреторных элементов.

Выявлена ТГ в отдельных пептидергических клетках ПВЯ и СОЯ, причем количество таких клеток увеличивается после стресса (иммобилизация)

у крыс обеих возрастных групп. Состояние КА-центров у молодых и старых крыс было различным, как в контроле, так и при стрессе. У контрольных старых животных в КА-ергических центрах (АЯ и zona incerta) и в пептидергических (ПВЯ и ПКГ) число КА-ергических клеток достоверно больше, чем у молодых крыс (Рис. 2). Как КА-ергические клетки, так и пептидергические НСК гипоталамуса, у старых крыс уже в контроле были активированы по сравнению С молодыми. Возможно, такое состояние напряжения НЭС было причиной возникновения различий в реакции на стресс у животных разного возраста.

У старых животных реакция на стресс отличается меньшей реактивностью ПВЯ, АЯ и НЗСВ при сохранении реакции ПКГ. Таким образом, изменение состояния КА-ергических центров гипоталамуса при стрессе говорит об их активном участии в регуляции стрессорных реакций организма. Разнонаправленные реакции, наблюдаемые в КА-ергических центрах гипоталамуса при стрессорном воздействии, свидетельствуют об их различной функциональной роли в механизме адаптации. Можно заключить, что при старении происходит хроническая активация КА-ергических нейросекреторных гипоталамических элементов, подобно тому как это описано для пептидергических НСК старых контрольных крыс (Бажанова и др., 1996). Таким образом, напряжение пептидергической и КА-ергической систем при старении может выражаться усилением активности синтеза белка пептидергическими клетками и увеличением числа выявляемых КА-ергических клеток, что свидетельствует скорее всего тоже о повышении продукции КА.

zona -1-1- { *

incerta И

АЯ (0 а * ПКГ 1 *

ПВЯ

20 40 60

количество клеток

□ старые крысы

□ молодые крысы

Рис. 2. Количество ТГ-ИР НСК у молодых и старых крыс. * - достоверность различий между молодыми и старыми животными.

В опытах с избегаемым и неизбегаемым стрессом доказано, что дисфункция ГГАКС в старости особенно четко выявляется при нагрузке: у старых животных после избегаемого стресса наблюдалось длительное последействие, вполне сравнимое с результатами, полученными после неизбегаемого в обеих возрастных группах.

Онтогенетические особенности экспрессии апоптоз-ассоциированных молекул в НСК гипоталамуса и коры надпочечников мышей.

В результате наших экспериментов (оксидативный стресс, иммобилизация, применение перед стрессированием животных цитокинов - ИА, экзогенного индуктора интерферона - циклоферона) показано, что при старении в первую очередь снижается функция центрального звена, что, возможно, и приводит в дальнейшем к возрастным изменениям периферического звена эндокринной системы. У интактных старых животных возрастные изменения проявляются изменением функциональной активности НСЦ вследствие потери НСК (увеличение процента апоптоза (Рис. 3, 4А)) с одновременным повышением активности коры надпочечников, имеющем, вероятно, компенсаторный характер.

Полученные нами данные указывают на то, что оксидативный стресс может вызвать развитие апоптоза НСК, и на одной из начальных стадий данного процесса синтезируется белок c-fos (Рис. 4В). Показано, что активность НСК и число апоптотических клеток в СОЯ молодых и старых мышей не изменяется при гилероксии, т.е., вероятно, оксидативный стресс не является специфическим для данного ядра. Однако кислород вызывает увеличение числа c-fos-ИР НСК в ПВЯ животных обеих возрастных групп.

Обнаружено, что НСК гипоталамуса синтезируют Инс/ИПП, выступающий как фактор выживания клеток, однако его содержание снижается в нейронах старых животных, коррелируя с активацией апоптоза (Рис. 5А). По литературным данным, инсулин/ИПП в нейронах, связываясь со своим мембранным рецептором, активирует P13K/Akt-cAMP сигнальный путь, который может переключать внутриклеточные процессы, направляя текущий статус на метаболизм, клеточный рост и пролиферацию или апоптоз (Pertseva, 2005). Предупреждая апоптоз, Инс/ИПП способен индуцировать экспрессию Bcl-2 (Ueno et а I., 1994) и подавлять активацию проапоптотических белков caspase-3 и Bad (Barber et al., 2001; Tseng et a!., 2002). Итак, низкое содержание

Рис. 3. Микрофотография СОЯ старых мышей, окраска бромид этидия (апоптотические клетки), люминисцентная микроскопия, увел. х400.

Рис. 4. 4А Количество апоптотичсских НСК в СОЯ и ПВЯ. По оси У: проценты, М - молодые мыши, С - старые мыши. * - достоверность отличий по отношению к контролю, о - достоверность отличий между молодыми и старыми контрольными животными. То же для рис. 5-9. 4В Количество с-Гоэ-ИР НСК в СОЯ и ПВЯ, По оси У: оптическая плотность.

0,045

■ £ 0,04 л 0,035 I 0,03 £ 0,025

| 0.02

I №s 0,01

; 0.08 [

: 0.04 0,02

. Г1!

соям сояс пвям 11ВЯС

Рис. 5. 5А Количество ипсулин/ИПП-ИР материала в СОЯ и ПВЯ. 5В Количество вазопрессии-ИР материала в СОЯ и ПВЯ.

■ ' ■ ■ " .! * . Ч \ •

а - - ' • " •

» * a, '

Рис. 6. Микрофотография ПВЯ молодых мышей. ИГХ реакция с антителами к МсМ.увел. х400.

Инс/ИПП в изучаемых НСК старых животных изменяет физиологический статус этих клеток, промотируя клеточную смерть. Снижение содержания Инс/ИПП, вероятно, может также приводить к зависимому от возраста уменьшению экспрессии с-Кзв в НСЦ (Рис. 4В). Снижение способности НСК активировать гены предраннего ответа (с-(о5) в ответ на внеклеточные сигналы может быть одной из причин, приводящих к значительной потере нейронов СОЯ и ПВЯ при старении.

Взятые вместе, наши находки поддерживают предположение об апоптозе при старении как конечном пункте генетически программированного плана развития.

Показано, что белок Вс1-2 в нейронах НСЦ старых мышей не препятствует инициации апоптоза. Регуляция апоптоза одинакова в изучаемых НСЦ у молодых мышей (см. предлагаемую нами схему - Рис. 20). Однако пути, приводящие стареющую клетку к гибели, различаются в СОЯ и ПВЯ (в ПВЯ -уменьшение экспрессии Мс1-1 (Рис. 6), Вс1-2, Инс/ИПП, в СОЯ - только Инс/ИПП (Рис. 5А), усиление проапоптотического звена - в СОЯ повышается уровень р53 и Вах, а в ПВЯ - только р53) (Рис. 20). Это свидетельствует о тесной связи старения и апоптоза.

Изучено действие иммуномодуляторов на НСК гипоталамуса в онтогенезе.

Эффект ИА у старых животных проявляется усилением дистрофических процессов и снижением белкового синтеза в СОЯ и ПВЯ (Рис. 5). У молодых мышей не показано влияние ИА на НСЦ, но обнаружено увеличение количества апоптотических клеток в коре надпочечников. Сигнальный каскад апоптоза у молодых мышей при действии ИА идентичен в обоих ядрах, тогда как у старых мышей есть различия между СОЯ и ПВЯ (см. предлагаемую нами схему - Рис. 7). Эти различия могут быть связаны с возрастными изменениями, происходящими в ГГАКС интактных старых животных.

ИГХ исследование содержания ВП показало, что у молодых и старых контрольных мышей в клетках СОЯ ВП экспрессируется несколько интенсивнее, чем в ПВЯ (Рис. 5В). Была обнаружена тенденция к снижению содержания ВП в НСК обоих НСЦ при старении. ИА оказывает супрессорный эффект на синтез ВП, инсулина/ИПП (Рис. 5) и Вс1-2 (Рис. 8) в клетках молодых и старых мышей.

Молодые мыши, СОЯ и ПБЯ

про-каспаза-8

кагааза-э у i j-

каспаза-8

[штерферон альфа

интерферон •альфа

цнтозсраиС AIAF

АП01ГГ03

СОЯ

про-каспазй

I :мгН-

,А«в

(Сгары? шиш

I-1 л

Ш\

каспаза-8

Bax + Bid-

инсулин«-......гВс1-2 j /

шерфер он -альфа

каспаза-9 '¡< 3

каспаза-3

АП0ПТ03

каспаза-8

ннгерфервн -альфа

Рис. 7. Влияние НА на функциональное состояние ИСК и уровень апоптоза у молодых и старых мышей.

0.05 [ 0.04 I 0,03 0,02

О контроль О интерферон

соя м соя с пвям пвя с

Рис. 8. Количество Bcl-2-ИР материала в СОЯ и ПВЯ. По оси У: оптическая плотность.

Обнаружено, что НА не является протектором апоптоза нейронов гипоталамуса при старении, однако введение циклоферона, индуктора эндогенного интерферона, сопровождалось уменьшением уровня апоптоза у молодых и старых животных. Применение иммуномодуляторов перед стрессом снижает уровень апоптоза в НСЦ только у старых животных. Таким образом, участие иммуномодуляторов в регуляции программированной клеточной гибели зависит от стадии онтогенеза.

Участие гена TNF в механизмах апоптоза и старения НСК.

Проведенное исследование позволило изучить программированную клеточную гибель нейронов гипоталамуса TNF-нокаутных мышей, выявить

-23 -

зависимость апоптотического каскада от активации каспаз и оценить адаптивные возможности НЭС в позднем онтогенезе.

Мы показали, что уровень апоптоза НСК гипоталамуса молодых мышей не отличается у животных разных линий (TNF-/-, WT и белых беспородных), также как и динамика апоптоза в позднем онтогенезе (значительное повышение количества гибнущих нейронов, примерно одинаковое в СОЯ и ПВЯ, во всех группах мышей, максим&пьное у белых беспородных мышей) (Рис. 9)....,. ... ,

Й& ¿1

Л1

wtM wtc tnf-.'-M tr,f-/-C mk группы животных

Рис. 9. А Уровень апоптоза в НСЦ. Обозначения: По оси У: проценты, WT -мыши дикого типа (wild type), TNF-/- - TNF-нокаутные мыши, М - молодые мыши, С -старые мыши, МК - молодые белые беспородные мыши, CK - старые белые беспородные мыши, * - достоверность отличий по отношению к молодым животным, «WTC» - достоверность отличий по отношению к старым мышам дикого типа, «TNF-/-С» - достоверность отличий но отношению к старым TNF-нокаутным мышам. То же для последующих рисунков данной главы. В Апоптотические клетки в ПВЯ старой TNF-нокаутной мыши, окраска этидия бромидом, увел. х400.

Различия в уровне caspase-8 в НСЦ, выявленные у молодых мышей разных линий, исчезают с возрастом, поскольку синтез caspase-8 при старении увеличивается во всех группах (Рис. I OA). Отмечено, что в НСЦ старых животных содержание caspase-8 коррелирует с уровнем апоптоза в изученных группах мышей (Рис. 10А). Можно предположить, что в отсутствие TNF активация caspase-8 осуществляется другими факторами, например, через FAS-ligand, 1L-6, р53 и тд. Таким образом, можно заключить, что интенсификация апоптоза при старении не зависит от гена TNF, и апоптоз при старении является каспазо-зависимым.

Не было выявлено активации caspase-9 при старении, влияние возраста либо отсутствовало (TNF-нокаутные мыши), либо выражалось в снижении уровня данного показателя (WT) (Рис. 10В). В настоящее время описаны 2 каспазо-зависимых пути апоптоза, один из них, инициируемый извне, идет

посредством активации caspase-8 рецепторами клеточной поверхности, другой, внутренний, связан с освобождением цитохрома с, последующей активацией APAF1 и, далее, caspase-9 (Madden et al., 2007). Результаты нашего исследования показывают, что при старении в НСК мышей активируется внешний путь клеточной гибели, с участием поверхностно-клеточных рецепторов. Причиной активации данного пути апоптоза может быть любой генотоксический стресс, например, оксидативный - как известно, при старении значительно повышается уровень перекисного окисления липидов (lshii, 2007).

Рис. 10. 10А Содержание caspase-8-ИР материала в НСЦ. Обозначения: «WTM» - достоверность отличий по отношению к молодым мышам дикого типа, «TNF-/-M» -достоверность отличий по отношению к молодым TNF-нокаутным мышам. 10В Содержание caspase-9-ИР материала в НСЦ.

Для определения путей регуляции программированной клеточной гибели мы исследовали экспрессию белков семейства Bcl-2 (Вс!-2, Mci-1, Вах) в НСК. Синтез проапоптотического белка Вах в НСК можно оценить неоднозначно: примерно одинаковый уровень у молодых животных всех линий и значительные отличия при старении (повышение в СОЯ во всех группах, снижение в ПВЯ (WT) или отсутствие изменений (TNF-/-, нелинейные мыши)) (Рис. 11А). Ранее нами было показано, что в активации возраст-зависимого апоптоза имеет значение соотношение Вах с другими членами семейства Bcl-2 (Bcl-2, МсИ) (Бажанова и др., 2006; Молодцов и др., 2006). Несмотря на уменьшение количества проапоптотического белка Вах в ПВЯ, снижения уровня апоптоза не происходит, вероятно, за счет активации каких-либо других белков-индукторов апоптоза (предположительно р53), и интенсивно экспрессирующейся caspase-8.

В отношении антиапоптотического белка Bcl-2 нужно отметить, что изменения его при старении (возрастание в СОЯ и снижение в ПВЯ) наблюдались только у нелинейных мышей (Рис. 11 В). Примерно так же можно

А 0.25 , 0.2 ■ 2 t 0.16 ■ 1 0,1 -0.05 - X i Г X j s. [X «1С ± WV-M X. T DSON j DPVN В 0,06-, 0.05 -£ O.W • £o.03-0.02 -0,01 - Air w- *1 WIM Л mtf W+C M r im ы-ш _L Ii 1

wtM wtC W-/-M W-t-C мк с» группы животных WIM vrtC Inf -IM W-/-C «к ex

0,25 s •»■ i.0,15' nf с «СИ 1 n f «HM «tc r— WM Fl Iх! \ 0,14 l 0.12 • 0.1 -? g o.oe [ 0,06 E 0,04 [ 0,02 D H-t-M Ш I rv. ГП m ffl С1«« Z" mH-C L

wtM wIC trrf-/-M tnW-C Mi группы животных wtM Wtc tnfV-M W-/-C группы животных к ex

Рис. И. Содержание Вах-ИР (IIA), Bcl-2-ИР (HB), Mcl-1-ИР (ПС), ВП-ИР (11D) материала в НСЦ. Обозначения: «wtM» - достоверность отличий по отношению к молодым мышам дикого типа, «TNF-/-M» - достоверность отличий по отношению к молодым TNF-нокаутным мышам.

охарактеризовать и изменения при старении уровня другого антиапоптотического белка, Мс!-1: повышение синтеза в СОЯ старых мышей всех изученных групп и отсутствие изменений (WT, TNF-/-) или даже снижение (нелинейные мыши) в ПВЯ (Рис. 11С). В сравнении с возрастающим при старении уровнем апоптоза НСК это говорит о том, что протекторная функция антиапоптотических белков-членов семейства Вс!-2 на поздних этапах онтогенеза снижается, и эти белки уже не могут уменьшить число гибнущих нейронов (Рис. I1A-C).

Таким образом, одной из причин апоптоза в СОЯ при старении является повышение уровня проапоптотического белка Вах во всех изученных группах животных, в ПВЯ - дисбаланс синтеза белков семейства Вс1-2 (Рис. 11А-С).

Содержание ВП в НСК является важным морфофункциональным критерием НЭС. По нашим данным, уровень ВП у молодых нелинейных мышей значительно выше, чем у TNF-нокаутных и WT животных (Рис. I1D). При старении у белых беспородных мышей количество ВП в НСК гипоталамуса не изменялось. Однако даже повышение содержания данного нейрогормона у старых мышей TNF-/- и WT не позволяет достигнуть уровня ВП у нелинейных животных (Рис. 11D).

В своих исследованиях мы показали отсутствие изменений ВП на поздних этапах онтогенеза у мышей линии SHR (Молодцов и др., 2006), и повышение синтеза его у HER2/neu (Бажанова и др., 2007, 2009) и крыс Wistar (Бажанова и др., 1996). Другими авторами была выявлена активация синтеза ВП у людей после 80 лет и у старых крыс (Fliers et al., 1985). Можно заключить, что экспрессия ВП в гипоталамусе примерно одинакова в разных НСЦ (СОЯ и ПВЯ), и зависит от возраста и генотипа животного.

Таким образом, в нашей работе впервые показана динамика апоптоза НСК в онтогенезе TNF-/- мышей, рассмотрен сигнальный каскад клеточной гибели при отсутствии TNFct, и произведена оценка функционального состояния (уровень вазопрессина) НЭС мышей разных генетических линий. Выявлена интенсификация синтеза ВП при старении у животных обеих линий. Мы показали, что при старении наблюдается активация апоптоза НСК, и отсутствие гена TNF не влияет на активность данного процесса. Результаты проведенного исследования показывают, что при старении в НСК мышей активируется внешний путь клеточной гибели, с участием поверхностно-клеточных рецепторов и caspase-8, а также р53-зависимый путь. Сигнальные пути, опосредующие клеточную гибель в разных НСЦ при старении, различны. Так, в СОЯ Вах играет определяющую роль в индукции апоптоза НСК при старении во всех изученных группах животных. В ПВЯ большее значение имеет снижение антиапоптотической защиты. Таким образом, дисбаланс синтеза белков семейства Вс1-2 играет важную роль в развитии старческого апоптоза.

Участие гена HER2/neu в механизмах апоптоза и старения НСК.

Онкопротеин HER2/w£« играет важную роль во многих процессах, в том числе в канцерогенезе (Sunpaweravong and Sunpaweravong, 2005; Nagy et al., 1999). Онкогенные характеристики HER2/weu связаны с влиянием на различные апоптотические пути в клетках, сверхэкспрессирующих этот белок (Sabbatini et al., 1999; Nagy et al., 1999; Zhou et al., 2000). Целью данного этапа работы было изучить изменения в регуляции процесса апоптоза, вызываемые сверхэкспрессией HER2/we«, в НСК гипоталамуса WLKUneu трансгенных мышей при старении. Мы исследовали экспрессию апоптотических сигнальных белков в сравнении с уровнем апоптоза и функциональной активностью в НЭС.

Кроме того, определяли уровень 17|}-эстрадиола в плазме крови, как одного из возможных антиапоптотических факторов, активных в нейронах.

Мы обнаружили, что при старении у данных мышей не наблюдается активации алоптоза НСК, в отличие от животных дикого типа (Рис. 12-14). Таким образом, впервые было показано, что сверхзкспрессия НЕШ/пеи достаточна для защиты от возраст-зависимой активации апоптоза в НСЦ. Эти находки предполагают, что HER2/neu сверхэкспрессия активирует мощные антиапоптотические механизмы. В поисках причин такой устойчивости к возраст-зависимому апоптозу мы проанализировали экспрессию ряда ключевых апоптоз-регулирующих молекул.

В наших экспериментах показано увеличение экспрессии р53 при старении в нейронах гипоталамуса, коррелирующее с повышением уровня апоптоза, у мышей дикого типа. Однако у старых трансгенных животных уровень апоптоза оставался низким, так же как и синтез р53 (Рис. 15A,C,D). Мы предположили, что возможной причиной подавления возраст-зависимой активации апоптоза может быть супрессия р53-опосредуемого сигнального пути на уровне регуляторов р53. Результаты наших исследований показали, что наиболее уязвимой точкой этого каскада при сверхэкспрессии HER2 является WRN (Рис. 15В). Недостаточная экспрессия WRN может нарушать взаимодействие с р53, тем самым подавлять его синтез и функционирование. Вероятно, это является причиной преждевременного старения и повышенного канцерогенеза данной линии мышей (уровень заболеваемости у старых мышей линии HER2 составляет 100%, наиболее часто встречающейся опухолью у старых мышей HER2 является аденокарцинома, число их на одно животное составляет 4,7). Кроме того, мы предполагаем, что, несмотря на повышение количества белка WRN при старении, функция его значительно снижена, т.к., помимо wild-type WRN, могут экспрессироваться и дефектные формы этого белка.

Выявлено, что регуляция алоптоза в различных ядрах опосредуется разными сигнальными путями. Так, у старых мышей SHR мы наблюдали активацию р53-зависимого пути в СОЯ и ПВЯ (Рис. 15A,C,D). При этом имело место повышение экспрессии caspase-8 в НСЦ старых мышей SHR (Рис. 16D). У трансгенных мышей, очевидно, сверхэкспрессия UERHneu блокировала

Рис. 12. ТиыЕЬ-позитивные клетки в СОЯ и ПВЯ мышей БНЯ и НЕЯ2+/+. А - по оси У: число апоптотических клеток на срез ядер; Обозначения: М - молодые мыши, С - старые мыши, * - достоверность отличий по отношению к контролю, о -достоверность отличий между молодыми и старыми контрольными животными, те же обозначения для последующих рисунков. В - микрофотография ПВЯ старой мыши, увел. х400.

Рис. 13. Клетки, окрашенные бромидом этидия (апоптотические клетки-обведение) в СОЯ и ПВЯ мышей 8НЯ и НЕК2+/+. С - по оси У: доля апоптотических клеток на срез ядер в процентах. О - микрофотография ПВЯ старой мыши, увел. х400.

Рис. 14. Клетки, окрашенные бромидом этидия в ПВЯ мышей ВНЯ и НЕП2+/+. Стрелками отмечены апоптотические клетки; люминисцентная микроскопия, увел. х400. 14с микрофотография ПВЯ старых мышей ПЕЛ2/пеи, 14с1 микрофотография ПВЯ старых мышей вНЯ.

значительное количество всех апоптотических путей, независимо от возраста животного (Рис. 12, 13).

Рис. 15. 15А Содержание р53 мРНК в НСК СОЯ и ПВЯ. 15В Содержание мРНК в НСК СОЯ и ПВЯ, по оси У: проценты. \5С,0 Микрофотография ПВЯ старых мышей БНЯ (С), НЕК2/пеи (Э), увел. х400. ИГХ реакция с антителами к р53.

QSHR OHER2/neu

0,16

0,12

rlf

DSHR □ HER2/neu

СОЯ С ПВЯ M ПВЯ с

СОЯ С ПВЯ М ПВЯ с

Д, сг,

Л-

OSHR QHER2/neu

СОЯ М СОЯ С ПВЯ М ПВЯ С

0,09

0,08

0,07

j 0,06

! 0,05 i

* 0,04 0.03 0,02

соя м соя с

Я М ПВЯ с

Рис. 16. Содержание Bcl-2-ИР (16А), Mcl-1-ИР (16В), Вах-ИР (16С), caspase-8-ИР (16D) материала в НСК СОЯ и ПВЯ, по оси У: оптическая плотность.

Одной из причин повышения уровня апоптоза в ПВЯ старых SHR мышей может быть снижение экспрессии Мс1-1 и Вс1-2 (Рис. 16А, В). С другой стороны, аналогичное снижение уровня Мс1-1 в СОЯ и ПВЯ старых мышей HER2/wew не влияет на устойчивость к апоптозу (Рис. 16В). Очевидно,

причиной этого является супрессия основных апоптотических путей в клетках трансгенных мышей.

Известно, что Вах является ключевым фактором функционального равновесия между выживанием клетки и апоптозом (Sun et ai., 2004). Наше исследование показало, что повышенная экспрессия Вах в СОЯ старых мышей SHR является, возможно, одним из факторов, опосредующих высокий уровень клеточной смерти. Кроме того, мы обнаружили значительное снижение уровня Вах в НСК трансгенных мышей только в ПВЯ. Можно заключить, что это подавление синтеза Вах связано с показанной нами НЕЯ2/яеа-зависимой супрессией р53 и, далее, caspase-8 (Рис. 16C,D).

Анализ интенсивности экспрессии ВП (ВП мРНК) и количества ВП-ИР вещества в НСК как показателя функциональной активности СОЯ и ПВЯ выявил, что активность этих ядер зависит от генетической линии мышей (Рис. 17, 18). Мы выявили, что сверхэкспрессия HER2 вызывает увеличение синтеза ВП в НСЦ, независимо от возраста животного. Кроме того, мы показали, что гипоталамические центры поддерживают постоянный уровень активности при старении у мышей дикого типа, однако эти ядра в состоянии значительно увеличивать секрецию ВП у трансгенных мышей, т.е. дополнительная активность гена HER2/пеи у трансгенных животных влияет на основную функцию НСК.

Таким образом, выявлен сигнальный каскад супрессии апоптоза при HER2/neu сверхэкспрессии (см. предложенную нами сх. - Рис. 19). Основным механизмом подавления апоптоза у трансгенных мышей является блокирование р53-зависимого каскада, что приводит к снижению синтеза caspase-8 и Вах, дисрегуляции синтеза антиапоптотических белков Вс1-2 и Mcl-1. Обнаружена

0,9 0,8 -0,7 0,6 S 0.5 5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 Т J: Л л. pL □ SHR оневгп«

СОЯМ СОЯ С ПВЯ M ПВЯ с

Рис. 17. Уровень синтеза ВП в НСК гипоталамуса. 17а - количество мРНК ВП в СОЯ и ПВЯ. 176 - Количество ВП-ИР материала в СОЯ и ПВЯ.

SON SON wp

* & -a OC b oc

PVN PVtt, ■

* . » *. * ,

i •, •, -. * *

. « '■** ■ ;

• *

с lllv d lllv

Рис. 18. In situ гибридизация для выявления мРНК ВП с использованием меченых дигоксигенином рибопроб в гипоталамусе HER2/neu мышей и мышей дикого типа (SHR). ОС - оптическая хиазма (optic ehiasma), lllv - третий желудочек (III ventricuium). увел. х400. а - количество ВП мРНК в СОЯ молодых мышей SUR; b -количество ВП мРНК в СОЯ молодых мышей 11ER2; с - количество ВП мРНК в ПВЯ молодых HER2 мышей; d - количество ВП мРНК в ПВЯ старых HER2 мышей.

В Рис. 19. А Сигнальный каскад апоптоза при физиологическом старении, В Сигнальный каскад апоптоза при старении ИСК трансгенных мышей НЕЯ2/пеи.

возможная причина подавления р53-опосредуемого апоптоза у HER2-трансгенных мышей - низкая экспрессия гена ШШ, регулирующего синтез р53. Важным фактором, принимающим участие в повышении выживания клеток гипоталамуса трансгенных животных, является 17р-эстрадиол, уровень которого в плазме крови не снижается при старении. Результатом всего этого является повышенное выживание ИСК старых трансгенных мышей HER2/иeг/. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Старение является сложным многофакторным процессом, ассоциированным с широко распространенными изменениями в экспрессии

генов во многих тканях млекопитающих. Среди множества причин старения чаще всего называют свободнорадикальное окисление (Gupte et al., 20)0), повреждение ДНК вследствие оксидативного стресса или других причин, укорочение теломер (Olovníkov, 1996; Eller et al., 2006; Ding and Shen, 2008). Все это может активировать р53 в стареющих клетках, что было изучено на тканях, клетки которых способны к размножению в течение жизни особи (Edwards et al., 2007). Однако молекулярные механизмы старения постмитотических нейронов в условиях in vivo оставались до сих не изученными. Каждый этап онтогенеза требует своих «триггеров» и имеет свои «точки начала». Механизмы инициации инволюционных изменений до сих пор являются предметом дискуссии.

Результаты наших исследований пептидергической и катехоламинергической систем гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы показывают, что старческие изменения начинаются в первую очередь в центральных регуляторных органах (нейросекреторные центры гипоталамуса), и далее уже распространяются на периферическое звено, что обуславливает нарушения стрессорного ответа и адаптации у животных на поздних этапах онтогенеза.

Вазопрессин, один из основных нейрогормонов, играет важную роль во многих реакциях организма. Мы показали, что старые животные в состоянии поддерживать уровень синтеза вазопрессина, сравнимый с таковым у молодых, но это является результатом морфофункционального напряжения стареющих нейросекреторных клеток. Более того, синтез вазопрессина зависит от генотипа животного, так, он значительно повышен у старых HER2/пей трансгенных и TNF-нокаутных мышей.

Нами был подробно изучен механизм реализации старческих изменений в нейросекреторных клетках гипоталамуса. Мы выявили, что при физиологическом старении у мышей происходит значительная потеря нейронов крупноклеточных нейросекреторных центров (супраоптическое и паравентрикулярное ядра), и эти нейроны гибнут путем апоптоза. Ранее подобные данные были получены различными авторами при изучении патологического старения. Так, показано повышение апоптоза нейронов фронтальной коры и гиппокампа у больных болезнью Альцгеймера и допамин-продуцирующих нейронов в стриатуме и substantia nigra при болезни Паркинсона (Mattson et al., 1999, 2001), мотонейронов спинного мозга у

больных боковым амиотрофическим склерозом (Kim et al., 2001) и т.д. Выявленные нами сигнальные пути апоптоза нейронов мозга при старении отличаются от таковых у молодых животных (см. предлагаемую нами схему -Рис. 20). Также показана тесная связь сигнального каскада апоптоза с генотипом животного.

Рис. 20. Сигнальные пути апоптоза в различных ПСЦ при старении.

Таким образом, рассмотрены возможные пути реализации апоптоза нейронов гипоталамуса на поздних этапах онтогенеза и выявлены основные закономерности клеточной гибели у животных при различных воздействиях и использовании иммуномодуляторов. У старых животных в реализации апоптоза участвуют внешний путь активации (через сазра$е-8), митохондриальный путь (изменения экспрессии белков семейства Вс1-2) и р53-зависимый путь, связанный с повреждением ДНК. На основании полученных данных можно заключить, что наиболее важное значение на поздних этапах онтогенеза приобретает р53-зависимый путь, и блокада этого каскада приводит к нарушению возраст-зависимой активации апоптоза и снижению продолжительности жизни.

выводы

1. В нейроэндокринной системе при старении происходит массовая элиминация клеток путем апоптоза. В первую очередь изменяется функция центрального звена эндокринной системы, что является одной из причин возрастных изменений периферических эндокринных органов. Сохранившиеся нейроны супраоптического и паравентрикулярного ядер вынуждены поддерживать синтез нонапептидов на уровне физиологических потребностей, и в связи с этим находятся в состоянии функционального напряжения. Экспрессия нейромодуляторных пептидов, таких как нейропептид У и инсулин/инсулиноподобные пептиды, в нонапептидергических нейронах гипоталамуса при старении снижается.

2. Экспрессия про- и антиапоптотических белков в супраоптическом и паравентрикулярном ядрах молодых мышей одинакова, несмотря на то, что эти центры играют разную роль в регуляции функций организма. У старых мышей в изучаемых нейросекреторных центрах усиливается экспрессия проапоптотических белков р53 и caspase-8, снижается содержание инсулина/ инсулиноподобных пептидов (фактора выживания клеток). Однако в паравентрикулярном ядре, кроме того, уменьшается экспрессия Мс1-1 и Вс1-2, а в супраоптическом - усиливается экспрессия проапоптотического белка Вах, т.е. при старении сигнальные каскады и уровень апоптоза в супраоптическом и паравентрикулярном ядрах различаются.

3. Инактивация гена TNF in vivo (TNF-нокаутные мыши) не влияет на синтез сигнальных белков апоптоза в нейросекреторных клетках. При старении наблюдается активация апоптоза нейросекреторных клеток TNF-нокаутных мышей по caspase-8-зависимому пути, и отсутствие гена TNF не влияет на активность данного процесса.

4. Повышенная экспрессия онкопротеина HER2/neu вызывает усиление синтеза вазопрессина в нейросекреторных центрах трансгенных мышей. При старении у трансгенных мышей синтез вазопрессина увеличивается не только по отношению к мышам дикого типа, но и по сравнению с молодыми трансгенными мышами.

5. Экспрессия гена синдрома Вернера WRN, регулирующего синтез и функциональную активность онкосупрессора р53, в нейросекреторных клетках при физиологическом старении увеличивается, что приводит к интенсификации

синтеза р53 и, как следствие, высокому уровню апоптоза.

6. Сверхэкспрессия HER2 у трансгенных мышей блокирует экспрессию WRN при старении, выраженную у старых мышей дикого типа. Низкий уровень WRN не приводит к активации р53 и таким образом подавляет последующий каскад апоптоза: показана супрессия синтеза проапоптотических белков Вах и caspase-8. Как следствие, у трансгенных мышей при старении не происходит активации апоптоза нонапептидергических нейронов гипоталамуса. Сверхэкспрессия тирозинкиназного рецептора HER2 блокирует сигнальный путь р53, влияя как на белки, регулирующие р53, так и на р53-зависимые белки.

7. Иммуномодуляторы (интерферон-альфа и индуктор эндогенного интерферона - циклоферон) снижают активность вазопрессинергических нейронов. Так, интерферон-альфа оказывает супрессорный эффект на синтез вазопрессина, инсулина/ инсулиноподобных пептидов и Вс1-2, циклоферон снижает экспрессию Вах и Вс1-2 у молодых и старых мышей. Экзогенный интерферон-альфа не является протектором апоптоза нейронов гипоталамуса при старении, напротив, индукция эндогенного интерферона введением циклоферона снижает апоптоз во всех изученных группах. Введение интерферона-альфа и циклоферона перед стрессом снижает уровень апоптоза в ядрах гипоталамуса только у старых животных, т.е. участие иммуномодуляторов в регуляции гибели нейронов гипоталамуса зависит от стадии онтогенеза и от вида иммуномодулятора.

8. При старении в активации апоптоза участвуют внешнерецепторный путь (через caspase-8), митохондриальный (изменения экспрессии белков семейства Вс1-2) и р53-зависимый путь, связанный с повреждением ДНК. В тканях, где экспрессия р53 конституитивно снижена (трансгенные мыши со сверхэкспрессией онкогена HER2/«ew), повышения апоптоза при старении не происходит. Низкий уровень апоптоза на поздних этапах онтогенеза является критическим для особи, и животные этой линии имеют значительно меньшую по сравнению с диким типом продолжительность жизни. Высокий канцерогенез у старых HER2/пей трансгенных мышей также является следствием супрессии р53-зависимого пути клеточной гибели.

ОСНОВНЫЕ РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Баженова Е.Д., Данилова О.А., Черниговская Е.В., Бажанов И.А. Соотношение вазопрессин- и окситоцин-продуцирующей активное™ различных ядер гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. - 1997. - Т. 33, № 2. - С. 199-204.

2. Баженова Е.Д., Гриневич В.В., Данилова О.А., Черниговская О.В. Изменение окситоцин(ОТ)-эргических нейросекреторных клеток (НСК) в добавочных крупноклеточных нейроэндокринных ядрах (ДЯ) гипоталамуса у крыс при старении // Морфология. - 1997. - Т. 111, N 2. - С. 44-46. Перевел, и опубл. в Neurosci Behav Physiol. 1998. 28(4):354-356, Bazhanova E.D., Grinevich V.V., Danilova O.A., Chernlgovskaya E.V. 3. Age-related changes in oxytocinergic neurosecretory cells in the acccssory magnocellutar neuroendocrine -nuclei of the hypothalamus in rats.

3. Бажанова Е.Д., Черниговская E.B., Данилова O.A. Гипоталамическая регуляция функции коры надпочечников у старых и молодых крыс // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. - 1998. - Т. 34, № 2.- С. 233-239.

4. Бажанова Е.Д., Черниговская Е.В., Данилова О.А., Бажанов И.А. Характеристика ядрышкового аппарата иейросекреторных клеток гипоталамуса у крыс разного возраста при острой иммобилизации животных // Цитология,-1998.- Т\ 40, № 4,- С. 248-255.

5. Черниговская Е.В., Бажанова ЕД., Thibault J., Данилова О.А.. Участие моноамйнергических клеток гипоталамуса в регуляции стрессорной реакции организма при старении. // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. - 1999. - Т. 3S, № 1С. 48-52.

6. Бажанова Е.Д. Роль апоптоза в развитии нервной системы млекопитающих // Усп. Совр. Биол. -1999-Т. 119,№4,- С. 368-374.

7. Черниговская Е.В., Ямова Л.А., Бажанова Е.Д., Глазова М.В. Развитие NPY-ергической системы гипоталамуса крыс в ходе поегнатального онтогенеза и ее участие в регуляции нонапептидергичсских иейросекреторных центров. // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. - 2000. - Т. 36, № 5, С. 461-464.

8. Bazhanova E.D., Chernigovskaya E.V., Danilova O.A. Different pathways of neurohormonal hypothalamic control of the adrenal cortex function in young and old rats // Mech Ageing Dcv 2000 Sep 29; 118(3):91 -102.

9. Бажанова Е.Д., Жуков Д.А., Порта С., Данилова O.A. Влияние избегаемого и неизбегаемого стресса на уровни катехоламинов в надпочечниках и кортикостерона в плазме крови у молодых и старых крыс. // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. - 2002. - Т. 38, № 2, С. 181-184.

10. Бажанова Е.Д., Д.Л. Теплый. Влияние интерферона-альфа на гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальную систему мышей при старении // Журн. эволюц. биохимии и физиолоти. - 2003. - Т. 39, № 5, с. 482-487.

11. Бажанова Е.Д., А.Н. Москвин, Г.Б. Белостоцкая, А.Г. Таранухин, Д.Л. Теплый. Реакция гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы на оксидативный стресс у мышей разного возраста // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. - 2004. - Т. 40, № 1, 72-76.

12. Баженова Е.Д., Д.Л. Теплый. Участие интерферона-альфа в регуляции апоптоза клеток гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы старых мышей при оксидативном стрессе И Морфология. - 2004. - Т. 125, N 1. - 23-26. Перевед. и опубл. в Neurosci. Behav. Physiol. 2005. 35(4):375-378, Bazhanova E.D., Teplyi D.L. Involvement of interferon-alpha in the regulation of apoptosls of cells of the hypothalamo-hypophyseal-adrenocortical system of aged mice in oxidative stress.

13. Баженова Е.Д.. Участие интерферона-альфа в регуляции апоптоза // Журн. эволюц. биохимии и физиологии.-2005.-Т.41,№2,101-106. ' "

14. Абатнина Ю.В., Баженова Е.Д., Теплый Д.Л. Роль витамина Е в регуляции апоптоза при патологии и старении // Усп. геромтол. - 2005. - вып. 17. - С. 2933.

15. Молодцов В.Н., Е.В. Сенченков, Е.Д. Баженова. Апоптоз и экспрессия вазопрессина, инсулина и Вс1-2 в нейросекреторной системе старых мышей // Жури, эволюц. биохимии и физиологии. - 2006. - Т. 42, № 3, с. 283-288.

16. Абатнина Ю.В., Е.Д. Бажанова, Д.Л. Теплый. Апоптоз нейросекреторных клеток гипоталамуса при стрессе у мышей на разных этапах онтогенеза // Морфология. - 2005. - Т. 127, N 3. - С. 27-29. Перевед. и опубл. в Neurosci Behav Physiol. 2006. 3б(5):527-530. Abatnina Y.V., Bazhanova E.D., Tepiyi D.L. Apoptosis of hypothalamic neurosecretory celts in stress mice at different stages of ontogenesis.

17. Бажанова Е.Д., B.II. Молодцов, К.И. Павлов. Изменения экспрессии апоптоз-ассоциированпых молекул в нейросекреторных клетках гипоталамуса мышей при старении // Морфология. - 2006. - Т. 130, N 6. - с. 35-39. Перевед. и опубл. в Ncurosci Bchav Physiol. 2008. 38(1):43-47. Bazhanova E.D., Molodtsov V.N., Pavlov K.I. Aging-related changes in the expression of apoptosis-associated molecules in neurosecretory cells of the mouse hypothalamus.

18. Бажанова Е.Д., B.H. Молодцов, И.Г. Попович, В.Н. Анисимов. Возрастные особенности экспрессии белков-маркеров апоптоза у трансгенных мышей HHR2Ineull Морфология. - 2007. - Т. 131, N 3. - с. 22-25.

19. Бажанова Е.Д., В.Н. Молодцов, И.Г. Попович, В.Н. Анисимов Регуляция аноигоза нейросекреторных клеток гипоталамуса у трансгенных мышей HER-2/пеи в онтогенезе//Успехи геронтологии. - 2007. - т. 20, №4. - С. 31-35.

20. Бажанова Е.Д., И.Г. Попович. Регуляция апоптоза нсйросскрсторных клеток гипоталамуса 'ITJF-нокаутных мышей при старении // Докл.Акад.наук. - 2008. -420 (6). -С. 839-841.

21. Бажанова Е.Д., Павлов К.И., И.Г. Полович, В.Н. Анисимов. Онтогенетические особенности регуляции апоптоза нсйросскрсторных клеток гипоталамуса у TNF-нокаутных мышей // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. - 2009. - Т. 45,№5.-С. 518-523.

ТЕЗИСЫ.

1. Черниговская Е.В., Бажанова Е.Д., Данилова О.А. Особенности стрссс-реакции гипоталамо-гипофизарной нейроэндокринной системы в старости. Мат. Ш Междупар. Колф. Колосовские чтения-97, СПб. - 1997. - С. 93-94.

2. Bazhanova, E.D.: Hypothalamic monoaminergic system changes in aging. Abstr. of II National Gerontology Congress, Bucharest, Romania, 1997. - P. 245-246.

3. Bazhanova E., E. Chernigovskaya, O. Danilova. Stress reaction of vasopressin and tyrosine hydroxylase immunoreactive (1R) structures in young and old rats. World Congress of neurohypophysial hormones, Monreal, Quebec, Canada. - 1997. - P. 53.

4. Бажанова Е.Д., Черниговская E.B., Данилова О.А. Возрастные аспекты пептидергической и моноаминергической гипоталамической регуляции адренокортикалыюй функции в стрессориых условиях. Мат. Конф. с междупар. уч. "Эндокринные механизмы регуляции функций в норме и патологии", посвященная 75-летию проф. Колпакова; Новосибирск. - 1997. - С. 17-18.

5. Bazhanova Е., D. Zhukov, S. Porta and О. Danilova. Stress reaction of adrenal medulla catecholamines (CA) and blood corticosterone (C) in young and old rats. 4 Internal. Congress of Neuroendocrinology, Kitakyushu, Japan. - 1998. - P. 50.

6. E.V. Chernigovskaya, Yamova L.A., Bazhanova E.D., Glazova M.V., Taranukhin A.O. Interaction between NPY-producing cells and vasopressinergic centers of hypothalamus during rat postnatal ontogenesis. Genetic and developmental psychoneuroendocrinology, lnternat. Symposium, Новосибирск. - 1999. - С. 122.

7. Баженова Е.Д., А.Г. Таралухин, В.Б. Косткин. Влияние а-интерфероиа на количество c-fos-иммунореактивных (ИР) нейросекреторных клеток (ИСК) гипоталамуса при стрессе у молодых и старых мышей. Тез. докл. V Всероссийск. конф. «Нейроэндокринология-2000», СПб. - 2000. - С. 17.

8. Баженова ЕД., А.Г. Таранухин Влияние оксидативного стресса на количество c-fos-иммунореактивных (ИР) нейросекреторных клеток (ИСК) гипоталамуса старых мышей. XXX Всеросс. Совет, по проблемам высшей нервной деятельности, посвящ. 150-летию И.П. Павлова, СПб. - 2000. - С. 176-177.

9. Bazhanova E.D., D.L. Teplyi. The effect of oxydative stress to c-fos immunoreactive neurosecretory cells in young and old mice. International Conf. "Free radicals in the development and functions of CNS. From fetus to aging", SPb. -2001. - P. 88.

10. Бажанова Е.Д.. Состояние гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы старых мышей при действии интерфероиа-альфа. 2 коиф. с междунар. уч., посвященная 80-летию проф. Колпакова "Эндокринная^ регуляция физиологических функций в норме и патологии", Новосибирск. - 2002. - С. 20.

11. Bazhanova E.D., V.N. Molodtsov, E.V. Scnchenkov, A.N. Moskvin. The cffect of hyperbaric oxygen on the induction of c-fos and bcl-2 in hypothalamic cells in young and old mice. Abstr. of VIII Meeting on high pressure biology, M. - 2003. - P. 3.

12. Molodtsov V., E. Senchencov, E. Bazhanova. The level of apoptosis and bcl-2 expression in hypothalamic magnoccllular neurosecretory ccntcrs in young and old mice under a different influences. Abstr. of Intemat. Symposium "Neuron differentiation and plasticity - regulation by intercellular signals", M. - 2003. - P. 5455.

13. Senchencov E., V. Molodtsov, E. Bazhanova. The effect of interferon alpha to level of apoptosis and bcl-2 expression in neuroendocrine system in young and old mice. Abstr. of International Symposium "Neuron differentiation and plasticity - regulation by intercellular signals", M. - 2003. - P. 56-57.

14. Молодцов B.H., E.B. Сенчснков, Е.Д. Баженова. Регуляция апоптоза клеток гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы мышей при старении. Тез. докл. Всероссийской конф. с междунар. участием «Нейроэндокринология-2003», СПб.-2003.-С. 120-122.

15. Bazhanova E.D.. The level of insulin-like immunoreactivc (IR) material in mouse hypothalamus in aging. Abstr. of 2 International Conf. on Functional Genomics of Ageing, Crete, Greece. - 2004. - P32.

16. Абатнина Ю.В., Е.Д. Бажанова, Д.Л. Теплый. Влияние витамина Е на апоптоз клеток нейросекреторных центров гипоталамуса мышей при старении. Мат. науч.-практич. конф. «Общество, государство и медицина для пожилых и инвалидов», М. - 2004. - С. 7.

17. Ю.В. Абатнина, Е.Д.Бажанова, Д.Л. Теплый. Особенности действия циклоферона на апоптоз клеток нейроэндокринных центров гипоталамуса на поздних этапах онтогенеза. Мат. VII междунар. Науч. Конф. «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря». Астрахань. - 2004. - С. 53-54.

18. Бажанова Е.Д., Г.Б. Белостоцкая. Уровень инсулина и Bcl-2 в крупноклеточных ядрах гипоталамуса старых мышей. Мат. VII междунар. Науч. Конф. «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря», Астрахань. - 2004. - С. 54-55.

19. Сенченков Е.В., В.Н. Молодцов, ЕД. Бажанова. Онтогенетические изменения синтеза вазопрсссина в нейросекреторных клетках гипоталамуса при различных воздействиях. Тез. докл. XIX съезда Физиол. общества им. Павлова, 2004, Екатеринбург, Россия, Ч. 1, Российский физиологический журн. им. Сеченова. -2004. -Т. 90, №8. -С. 195.

20. Бажанова Е.Д., Молодцов В.Н., Сенченков Е.В., Белостоцкая Г.Б. Синтез вазопрессина в нейросекреторных клетках гипоталамуса мышей при старении. Мат. электронной конф. "Информационно-вычислительные технологии в

решении фундаментальных научных проблем и прикладных задач химии, биологии, фармацевтики, медицины ИВТ11-2004 ", 2004. - М. - С. 42.

21. Баженова Е.Д., Павлов К.И., Боткина К.Ю., Белостоцкая Г.Б. Динамика синтеза апоптоз-ассоциированпых белков Вах и Мс1-1 в пейросекреторпой системе молодых и старых мышей. Мат. электронной конф. "Информационно-вычислительные технологии в решении фундаментальных научных проблем и прикладных задач химии, биологии, фармацевтики, медицины ИВ'П 1-2005 2005.-М.-С. 35.

22' Баженова Е.Д., Сснчеккоя Е.В., Молодцов В.Н. Экспрессия апопто^-ассониированных белков Вс1-2 и Вах в нсйросскреторных клетках мышей при старении. Тез. докл. Всеросс. Конф. с междунар. уч. «Нейроэндокринология-2005», СПб. -2005. -С. 18-19.

23. Абаткина Ю.В., Д.Л. Теплый, Е.Д. Бажанова, Г.Б. Белостоцкая. Влияние циклоферона на апоптоз клеток нсйросскреторных центров гипоталамуса при стрессе. Тез. докл. Всеросс. Конф. с междунар. уч. «Нейроэндокринология-2005»,СПб.-2005.-С. 7.

24. Бажанова Е.Д., К.И. Павлов, К.Ю. Боткина. Онтогенетические особенности регуляции апоптоза нейросекреторных клеток гипоталамуса при различных воздействиях. Науч. труды 1 съезда физиологов СИГ, Сочи, Дагомыс. - 2005. -С. 371.

25. Pavlov K.I., E.D. Bazhanova. Change of synthesis proapoptotic protein Bax in neurosecretory system of TNF-/- micc in ageing. International Summer school in Behavioral Neurogenetics, 2005. - M. - P. 76-77.

26. Павлов К.И., Молодцов B.H., Бажанова Е.Д. Онтогенетические особенности регуляции апоптоза у мышей erbb2+/+. Мат, XIII междунар. совещ. по эволюционной физиологии памяти акад. Орбели, СПб. - 2006. - С. 163.

27. Бажанова Е.Д., Молодцов В.Н., Анисимов В.Н Экспрессия апоптоз-ассоциированных молекул у мышей erbb2+/+ в онтогенезе. Мат. Международн. конф. по функциональной морфологии «Колосовские чтения-2006», 2006, СПб. Морфология, 2006. - Т. 129, Вып. 2. - С. 18.

28. Бажанова Е.Д., В.Н. Молодцов, И.Г. Попович, В.Н. Анисимов. Влияние сверхэкспрессии тирозинкиназного рецептора MER2/neu на регуляцию апоптоза нейросекреторных клеток при старении. Мат. Междунар. Конф. «Свободные радикалы, антиоксиданты и старение», Астрахань. - 2006. - С. 29-32.

29. Bazhanova E.D., V.N. Molodtsov, V.N. Anisimov. Tyrosine kinase receptor HER2/neu overexpression influences on apoptosis regulation of aged neurosecretory cells. Abstr. of the 2 World Congress on Gender-Specific Medicine, Rome, Italy, 2007. - A64-65.

30. Павлов К.И., И.Г. Попович, В.Н. Анисимов, Е.Д. Бажанова. Возрастные изменения синтеза белков апоптоза Мс1-1 и Вах в гипоталамусе TNF-нокаутных мышей. Тез. Докл. XX съезда Физиол. Общества им. Павлова, М. - 2007. - С. 366.

31. Bazhanova E.D., K.l. Pavlov, I.G. Popovich, V.N. Anisimov. The participation of Bcl-2 family in apoptosis regulation in neuroendocrine system of aged TNF-knockout mice. Abstr. of VI European Congress of International Association of Gerontology and Geriatrics, SPb. - 2007. - P. 19-20.

32. Бажанова Е.Д., ДЛ. Теплый, Ю.В. Абатнина. Особенности апоптоза нонапептидергических нейронов гипоталамуса при воздействии циклоферона на молодых и старых мышей. IX Российско-китайский симпозиум «Новые материалы и технолог ии», Астрахань. - 2007.

33. Степанова И.А., К.А. Макарова, И.Г. Попович, Е.Д. Бажанова. Роль тирозинкиназного рецептора HER2 в регуляции апоптоза нейросекреторных клеток при старении. Конф. с междунар. уч. «Нейрохимические механизмы формирования адаптивных и патологических состояний мозга» СПб. - 2008.

34. Баженова Е.Д., Степанова И.Л., Макарова К.А.,Белостоцкая Г.Б., Попович И,Г. Сравнительное определение уровня апоптоза в нейросекреторных центрах КЖ2!пеи мышей в онтогенезе с помощью двух независимых методов. Мат. электронной конф. "Информационно-вычислительные технологии в решении фундаментальных научных проблем и прикладных задач химии, биологии, фармацевтики, медицины ИВТН-2008", М.-2008.

35. Bazhanova E.D., I.G. Popovich. Apoptosis regulation in neurosecretory cells of hypothalamus of aged TNF-knockout mice. 12 International TNF Conf. The TNF supcrfamily and its interactions with other signaling proteins in infection, autoimmunity, cancer and therapy, F.I Rscorial, Madrid, Spain. - 2009.

36. Баженова ЕЛ., К.Д. Хрестик, Д.Л. Теплый. Некоторые аспекты старения нейросекреторных клеток гипоталамуса. Междунар. симпозиум «Профессиональное здоровье и качество жизни» Куба. - 2009. - С. 10-13.

37. Бажанова Е.Д., Молодцов В.Н., Хрестик К.Д., Анисимов В.Н., Теплый Д.Л. Механизмы регуляции р53-сигнального пути апоптоза нейросекреторных клеток гипоталамуса при старении. Тез. докл. Всеросс. Конф. с междунар. уч. «Нейроэндокринология-2010», СПб. - 2010. - С. 25-26.

38. Теплый Д.Л., Азизова Ю.В., Бажанова Е.Д. Некоторые особенности регуляции апоптоза клеток нейросекреторных центров гипоталамуса мышей линии BALB-c в условиях водной депривации. Тез. докл. Всеросс. Конф. с междунар. уч. «Нейроэндокринология-2010», СПб. - 2010. - С. 133-134.

39. Bazhanova E.D.. Signal apoptotic pathways in hypothalamic neurons in aging. 1 International Congress on controversies in longevity, health and aging, Barcelona, Spain.-2010.-P2-3.

Подписано в печать 11.11.2010. Формат 60x88/16. Гарнитура "Times New Roman" печать ризографическая. Объем: 2,5 печ. л., тираж 100, № заказа 332.

Отпечатано в типографии ООО «ЮТАС» 196105, Санкт-Петербург, ул Рощинская, д.36, пом.23 тел./факс (812) 388-03-21, e-mail: 3880321@mail.ru

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Бажанова, Елена Давыдовна

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Старение и морфофункциональные изменения гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы

1.1.1. Современные представления о процессе старения

1.2. Морфофункциональная характеристика гипоталамо-гипофизарно-нейросекреторной системы (ГГНС) и ее изменения на поздних этапах онтогенеза

1.2.1. Основные нейросекреторные центры (НСЦ) гипоталамуса

1.2.2. Нейрогемальные отделы ГГНС

1.2.3. Изменения гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы (ГГАКС) при старении

1.3. Стрессорный ответ организма и его регуляция

1.3.1. Развитие стресса у взрослых животных

1.3.2. Стресс у животных на поздних этапах онтогенеза 49 1.4. Роль апоптоза в развитии нервной системы млекопитающих

1.4.1. Роль апоптоза в развитии нервной системы в эмбриональный и ранний постнатальный периоды

1.4.2. Апоптоз нейронов взрослых животных

1.4.3. Роль апоптоза в процессе старения

1.4.4. Экспрессия апоптоз-ассоциированных молекул в НСК гипоталамуса мышей при старении

1.4.5. Участие интерферона-альфа в регуляции апоптоза

1.4.5.1. Механизм действия интерферона-альфа

1.4.5.2. Участие иммуномодуляторов в регуляция апоптоза на поздних этапах онтогенеза

1.4.6. Участие интерферона-альфа в регуляции апоптоза клеток ГГАКС старых мышей при оксидативном стрессе

1.5. Участие гена TNF в механизмах апоптоза и старения НСК

1.5.1. Структура рецепторов TNFa

1.5.2. Биологическое действие TNFa. Участие TNFa в патогенезе различных заболеваний

1.5.3. Роль TNFa в регуляции апоптоза

1.6. Участие гена HER2/neu в механизмах апоптоза и старения НСК

1.6.1. Возрастные особенности экспрессии белков-маркеров апоптоза у трансгенных мышей HER2/«ew 2. Материалы и методы

2.1. Характеристика экспериментального материала, условий экспериментов и методических приемов исследования

2.1.1. Эксперименты с иммобилизационным стрессом

2.1.2. Эксперимент с колхицином (изучение характера локализации нейропептида Y (ТЧРУ)-ергических нейронов в гипоталамусе)

2.1.3. Эксперимент с избегаемым и неизбегаемым стрессом

2.1.4. Оксидативный стресс 121 2.2. Методы

2.2.1. Определение катехоламинов (КА) (норадреналин (НА), адреналин (А)) в ткани надпочечников

2.2.2. Радиоиммунный анализ (РИА) концентрации КС в крови

2.2.3. Гистологическая обработка материала

2.2.4. Иммуногистохимические (ИГХ) методики

2.2.5. In situ гибридизация. Приготовление шаблонов и синтез рибопроб

2.2.6. Определение уровня апоптоза в тканях

2.2.6.1. Люминисцентная микроскопия срезов, окрашенных этидия бромидом

2.2.6.2. TUNEL

2.2.7. Количественное хемилюминисцентное иммунное определение в крови 17(3-эстрадиола

2.2.8. Анализ изображений 132 3. Результаты

3.1. Морфометрические показатели нейросекреторных клеток гипоталамуса крыс разного возраста. Изменения данных показателей при действии острой иммобилизации

3.2. Кариолометрический анализ ВП- и ОТ-продуцирующей активности различных ядер ГГНС

3.3. Участие моноаминергических клеток гипоталамуса в регуляции стрессорной реакции организма при старении

3.4. NPY-ергическая система гипоталамуса крыс в ходе постнатального онтогенеза, ее связь с нонапептидергическими НСЦ

3.4.1. NPY-ергическая система АЯ взрослых интактных крыс и животных, получавших интрацистернальную инъекцию колхицина

3.4.2. Развитие NPY-ергической системы гипоталамуса крыс в ходе постнатального онтогенеза

3.4.3. Анализ изменений в ПВЯ и СОЯ, вызванных изоляцией медиобазального гипоталамуса у взрослых крыс

3.5. Уровень катехоламинов в надпочечниках и кортикостерона плазмы крови у молодых и старых крыс при разных видах стресса избегаемый, неизбегаемый)

3.6. Параметры морфофункциональной активности ГГАКС в разные сроки после стресса у старых и молодых крыс

3.7. Уровень апоптоза и экспрессия апоптоз-ассоциированных молекул в ИСК гипоталамуса и коры надпочечников мышей при старении

3.7.1. Уровень апоптоза в сравнении с морфологическими данными и экспрессией с-Аээ

3.7.2. Изменение экспрессии белков семейства Вс1-2, инсулина/ИПП и ВП в НСЦ гипоталамуса при старении и стрессе

3.7.3. Использование экзогенного индуктора интерферона (циклоферона) при иммобилизационном стрессе у мышей на разных этапах онтогенеза

3.8. Морфофункциональные изменения НСЦ ТОТ-нокаутных мышей при старении

3.8.1. Интенсивность апоптоза ИСК ЮТ-нокаутных мышей

3.8.2. Динамика синтеза сазраэе-З и сазразе-9 в НСЦ ЮТ-нокаутных мышей

3.8.3. Уровень экспрессии белков семейства Вс1-2 (Вс1-2, Мс1-1,

Вах) в НСК гипоталамуса ЮТ-нокаутных мышей

3.8.4. Содержание ВП в НСК гипоталамуса ЮТ-нокаутных мышей

3.9. Морфофункциональные изменения НСЦ НЕЮ/пей трансгенных мышей при старении

3.9.1. Уровень канцерогенеза НЕЮ/пей трансгенных мышей

3.9.2. Уровень апоптоза НСК мышей HER2/neu

3.9.3. Экспрессия р53 в НСЦ НЕЮ./пей трансгенных мышей

3.9.4. Содержание WRN мРНК в НСЦ ШЖИпеи трансгенных мышей

3.9.5. Содержание белков семейства Вс1-2 в НСЦ НЕЮ/пеи трансгенных мышей

3.9.6. Экспрессия caspase-8 в НСК ЧЕКИ пей трансгенных мышей

3.9.7. Экспрессия с-Raf-l в гипоталамусе мышей НЕЮ.!пей

3.9.8. Содержание ВП в НСК трансгенных животных

3.9.9. Уровень 17р-эстрадиола в плазме крови трансгенных мышей 203 4. Обсуждение

4.1. Характеристика ядрышкового аппарата НСК гипоталамуса у крыс разного возраста при действии острой иммобилизации

4.2. Соотношение ВП- и ОТ-продуцирующей активности различных ядер гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы

4.3. Участие моноаминергических клеток гипоталамуса в регуляции стрессорной реакции организма при старении

4.4. Развитие NPY-ергической системы гипоталамуса крыс в ходе постнатального онтогенеза и ее участие в регуляции нонапептидергических НСЦ

4.5. Влияние избегаемого и неизбегаемого стресса на уровни катехоламинов в надпочечниках и кортикостерона в плазме крови у молодых и старых

4.6. Гипоталамическая регуляция функции коры надпочечников у старых и молодых крыс

4.7. Онтогенетические особенности экспрессии апоптоз-ассоциированных молекул в НСК гипоталамуса и коры надпочечников мышей

4.8. Экспрессия белков семейства Вс1-2, инсулина/ИПП и ВП в НСЦ гипоталамуса при старении и стрессе

4.9. Влияние экзогенного индуктора интерферона (циклоферона) на развитие стрессорного ответа НСК мышей разного возраста

4.10. Регуляция апоптоза у Т№-нокаутных мышей при старении

4.11. Регуляция апоптоза в НСЦ ШЖИпеи трансгенных мышей при старении

Введение Диссертация по биологии, на тему "Механизмы регуляции апоптоза в нейроэндокринной системе гипоталамуса в позднем онтогенезе"

Актуальность темы.

В настоящее время процесс старения привлекает внимание множества исследователей (Zhang L. et al., 1995; Mattson M.P. et al., 1999, 2001; Kim J.M. et al., 2001; Beneke S. and Burkle A., 2004). В процесс старения, как известно, вовлечены сложные механизмы, в которых принимают участие самые различные молекулярные системы - иммуномодуляторы, ростовые факторы, гормоны, нейрогормоны, рецепторы и многие другие белки (Cutler R.G., 1991; Browner W.S. et al., 2004; Heiser D. et al., 2004; Holzenberger M. et al., 2004; Lutomska A. et al., 2008). Согласно некоторым авторам, старение может запускаться 2 механизмами: укорочением теломер и повреждением ДНК (Ding S.L. and Shen С.Y., 2008), что индуцирует клеточное старение (Eller M.S. et al., 2006; Lucassen P.J. et al., 1997; Harrigan J.A. et al., 2007). Однако и тот, и другой механизмы старения в высокой степени зависят от р53-статуса (Li К. et al., 2008, Campisi J., 2002). Продукт гена-онкосупрессора р53 играет критическую роль в поддержании геномной целостности в клетках млекопитающих. Возможность р53 индуцировать апоптоз - важнейшая функция этого белка, делающая его фактором супрессии опухолей, и определяющая его роль в старении (Sommers J.A. et al., 2005; Sharma A. et al., 2007). Необратимая остановка пролиферации старых клеток сопровождается р53-зависимой транскрипционной активацией генов-мишеней р53 (Atadja P. et al, 1995). Активация р53 в старых клетках, по-видимому, происходит в ответ на хромосомные разрывы, ассоциированные с укорочением теломер в стареющих клетках (Harley C.B. and Sherwood S.W., 1997). Таким образом, многими авторами показано активное участие апоптоза в старении клеток (Fearnley J.M. and Lees A.J., 1991; Nagai M.A. et al., 1993; Yoshiyama Y. et al., 1994; Taglialatela G. et al, 1996; Kiatipattanasakul W. et al., 1996).

Как известно, старение организма во многом зависит от изменения нейроэндокринной регуляции (Olovnikov A.M., 2007). Очевидно, что состояние нейросекреторных клеток на поздних этапах онтогенеза влияет на их морфофункциональную активность и определяет темпы и направление старения органов-мишеней.

В то же время практически не изучены инволюционные изменения нейронов мозга, генетические «триггеры» старения и пути утилизации стареющих клеток. Не определены молекулярные механизмы клеточной гибели на поздних этапах онтогенеза. Имеющиеся литературные данные представлены результатами, полученными в основном на клеточных культурах, т.е. в условиях изоляции однородных клеток (Oshima J. et al., 1995; Gray M.D. et al., 1997; Poot M. et al., 2004; Dimri G. et al., 2005; Kimura M. et al., 2005; Nyunoya T. et al., 2009). Подобные данные невозможно адаптировать к физиологическим процессам, протекающим в целом организме.

В связи с этим, представляется актуальным исследовать механизмы регуляции апоптоза клеток нейроэндокринной системы при старении. Использование в качестве модели трансгенных мышей даст возможность изучить роль тирозинкиназного рецептора онкопротеина HER2/weH в регуляции апоптоза нейронов старых животных. Предполагается, что изменение сигнальных каскадов апоптоза при старении является базой для развития новообразований. Известно, что недостаточная активность онкосупрессора р53 является причиной канцерогенеза и, соответственно, сокращения продолжительности и качества жизни индивида (Sommers J.A. et al., 2005;

Пискунова Т.С. и др., 2007). Таким образом, очевидно, что выявление механизма р53-зависимого апоптоза и взаимосвязи онкогена HER2/«ew (рецептор эпидермального фактора роста) с генами, регулирующими р53 (WRN) и транскрипционными мишенями р53 будет иметь большое практическое значение в теоретической и клинической медицине.

Результаты данного исследования будут иметь практическое значение в онкологии и геронтологии.

Достижение поставленной цели осуществлялось путем решения следующих задач:

1. изучить адаптивные возможности и механизмы стрессорного ответа гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы при старении.

2. изучить сигнальные пути, приводящие к изменению уровня апоптоза нейронов мозга при старении.

3. оценить вклад клеточных рецепторов — рецептора эпидермального фактора роста (HER2) и фактора некроза опухолей (TNFD) в реализацию апоптоза нейронов гипоталамуса при старении.

4. изучить возможность модуляции старческого апоптоза нейронов мозга и определить возможные геропротекторы.

5. выявить изменения морфофункциональной активности клеток нейросекреторной системы гипоталамуса, связанные с активацией генов апоптоза в позднем онтогенезе.

Научная новизна.

Впервые дан комплексный анализ нонапептидергической, NPY-ергической и катехоламинергической систем гипоталамуса на поздних этапах онтогенеза. Выявлена возрастная динамика функциональных и адаптивных возможностей нейросекреторной системы, а также зависимость синтеза вазопрессина и апоптоз-ассоциированных молекул от генотипа животного.

Разработано концептуальное представление об участии апоптоза в инволюционных процессах нейронов мозга. Впервые получены данные, объясняющие механизм регуляции апоптоза нейросекреторных клеток гипоталамуса млекопитающих на поздних этапах онтогенеза. Выявлены гены, активирующие/тормозящие сигнальные пути апоптоза нейронов при старении и определены апоптотические сигнальные каскады гибели нейронов молодых и старых животных. Анализ результатов выявил ряд генов, активация которых характерна для нейросекреторных клеток на поздних этапах онтогенеза, что позволило определить возможные генетические «триггеры старения» в НЭС. Подтверждено наличие каспазозависимого пути клеточной гибели при старении.

Впервые изучены инволюционные изменения нейронов гипоталамуса ускоренно стареющих мышей линии HER2/neu и обнаружены причины низкого уровня апоптоза у этих животных. Впервые показано, что отсутствие определенных генов, участвующих в канцерогенезе (TNF) (TNF-нокаутные мыши), и сверхэкспрессия онкопротеина HER2/new (НЕ112/пеи-трансгенные мыши) оказывает определенное влияние на онтогенетическую модель регуляции апоптоза.

Основные положения, выносимые на защиту.

3. Индукция апоптоза при старении не зависит от наличия гена

TNF.

6. Сверхэкспрессия НЕЮ.!пей достаточна для защиты от возраст-зависимой активации апоптоза в нейросекреторных центрах. Основным механизмом подавления апоптоза у трансгенных мышей является блокирование р53-зависимого каскада, что приводит к снижению синтеза сазразе-8 и Вах, дисрегуляции синтеза антиапоптотических белков Вс1-2 и Мс1-1.

Теоретическая и практическая значимость.

Результаты проведенных исследований позволяют расширить и углубить представления о возрастных изменениях одной из наиболее важных регуляторных систем организма - нейроэндокринной системы, как ее центрального звена (гипоталамо-гипофизарная система), так и периферического (кора надпочечников). Данные, полученные в работе, позволяют выявить роль отдельных генов в регуляции старения и апоптоза, а также конкретные механизмы гибели нейронов мозга при старении.

Практическая ценность результатов исследования состоит в необходимости учета возрастных особенностей при использовании иммуномодуляторов и лечебной гипероксигенации в эксперименте и в клинике.

Выявленные в работе закономерности регуляции апоптоза на поздних этапах онтогенеза, особенности протекания инволюционных процессов в нейронах мозга могут быть использованы при изучении курсов физиологии, клеточной биологии, возрастной физиологии, геронтологии и гериатрии в вузах биологического и медицинского профиля, при подготовке аспирантов данных специальностей, а также учтены при использовании в геронтологии, гериатрии и онкологии.

Апробация работы.

Основные результаты исследований доложены и обсуждены на следующих научных конференциях: Международная конференция «Колосовские чтения» (С-Петербург, 1997, 2006), II National Gerontology Congress with international participant (Bucharest, Romania, 1997), World Congress of neurohypophysial hormones (Monreal, Quebec, Canada, 1997), 1-я и 2-я конференции с международным участием "Эндокринные механизмы регуляции функций в норме и патологии", посвященная 75- и 80-летию проф. Колпакова (Новосибирск, 1997, 2002), The 4th International Congress of Neuroendocrinology (Kitakyushu, Japan, 1998), Genetic and developmental psychoneuroendocrinology, International Symposium (Новосибирск, 1999), Всероссийские конференции с международным участием «Нейроэндокринология» (С.-Петербург, 2000, 2003, 2005, 2010), XXX Всероссийское Совещание по проблемам высшей нервной деятельности, посвящ. 150-летию Павлова (С.-Петербург, 2000), International Conference "Free radicals in the development and functions of CNS. From fetus to aging" (С.-Петербург, 2001), конференция молодых ученых и специалистов (С.Петербург, 2003), VIII Meeting on high pressure biology (Москва, 2003), International Symposium "Neuron differentiation and plasticity - regulation by intercellular signals" (Москва, 2003), the 2nd International Conference on Functional

Genomics of Ageing (Crete, Greece, 2004), научно-практическая конференция «Общество, государство и медицина для пожилых и инвалидов» (Москва, 2004), VII международной научной конференции «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря» (Астрахань, 2004), XIX съезд Физиологического общества им. Павлова (Екатеринбург, 2004), электронная конференция "Информационно-вычислительные технологии в решении фундаментальных научных проблем и прикладных задач химии, биологии, фармацевтики, медицины" (Москва, 2004, 2005, 2008), 1 съезд физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005), V Методологический семинар «Методология и методика научных исследований в области естественно-научного образования» (С.-Петербург, 2005), International Summer school in Behavioral Neurogenetics (Москва. 2005), XIII Международное Совещание им. Орбели по эволюционной физиологии (С.-Петербург, 2006), межвузовская конференция молодых ученых «Герценовские чтения» (С.-Петербург, 2006), международная конференция «Свободные радикалы, антиоксиданты и старение» (Астрахань, 2006), the 2nd World Congress on Gender-Specific Medicine (Rome, Italy, 2007), XX съезд Физиологического общества им. Павлова (Москва, 2007), VI European Congress of International Association of Gerontology and Geriatrics (С.-Петербург, 2007), IX Российско-Китайский симпозиум «Новые материалы и технологии» (Астрахань, 2007), конференция с международным участием «Нейрохимические механизмы формирования адаптивных и патологических состояний мозга» (С.Петербург, 2008), международный симпозиум «Профессиональное здоровье и качество жизни» (Гавана, Куба, 2009), 12th International TNF Conference «The TNF superfamily and its interactions with other signaling proteins in infection, autoimmunity, cancer and therapy» (El Escorial,

Madrid, Spain, 2009), 1st International Congress on Controversies in Longevity, Health and Aging (Barcelona, Spain, 2010).

Структура и объем диссертации.

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Бажанова, Елена Давыдовна

6. ВЫВОДЫ

1. В нейроэндокринной системе при старении происходит массовая элиминация клеток путем апоптоза. В первую очередь изменяется функция центрального звена эндокринной системы, что является одной из причин возрастных изменений периферических эндокринных органов. Сохранившиеся нейроны супраоптического и паравентрикулярного ядер вынуждены поддерживать синтез нонапептидов на уровне физиологических потребностей, и в связи с этим находятся в состоянии функционального напряжения. Экспрессия нейромодуляторных пептидов, таких как нейропептид Y и инсулин/инсулиноподобные пептиды, в нонапептидергических нейронах гипоталамуса при старении снижается.

3. Инактивация гена TNF in vivo (TNF-нокаутные мыши) не влияет на синтез сигнальных белков апоптоза в нейросекреторных клетках. При старении наблюдается активация апоптоза нейросекреторных клеток TNF-нокаутных мышей по caspase-8-завиеимому пути, и отсутствие гена TNF не влияет на активность данного процесса.

7. Иммуномодуляторы (интерферон-альфа и индуктор эндогенного интерферона - циклоферон) снижают активность вазопрессинергических нейронов. Так, интерферон-альфа оказывает супрессорный эффект на синтез вазопрессина, инсулина/инсулиноподобных пептидов и Вс1-2, циклоферон снижает экспрессию Вах и Bcl-2 у молодых и старых мышей. Экзогенный интерферон-альфа не является протектором апоптоза нейронов гипоталамуса при старении, напротив, индукция эндогенного интерферона введением циклоферона снижает апоптоз во всех изученных группах. Введение интерферона-альфа и циклоферона перед стрессом снижает уровень апоптоза в ядрах гипоталамуса только у старых животных, т.е. участие иммуномодуляторов в регуляции гибели нейронов гипоталамуса зависит от стадии онтогенеза и от вида иммуномодулятора.

8. При старении в активации апоптоза участвуют внешнерецепторный путь (через сазразе-8), митохондриальный (изменения экспрессии белков семейства Вс1-2) и р53-зависимый путь, связанный с повреждением ДНК. В тканях, где экспрессия р53 конституитивно снижена (трансгенные мыши со сверхэкспрессией онкогена НЕКИпеи), повышения апоптоза при старении не происходит. Низкий уровень апоптоза на поздних этапах онтогенеза является критическим для особи, и животные этой линии имеют значительно меньшую по сравнению с диким типом продолжительность жизни. Высокий канцерогенез у старых НЕЯ2¡пей трансгенных мышей также является следствием супрессии р53-зависимого пути клеточной гибели.

5. Заключение

Показано, что морфологические перестройки и у старых, и у молодых крыс ведут к повышению функциональной активности НСК, но достигается это, помимо увеличения объема ядрышек, у молодых - увеличением доли многоядрышковых клеток при уменьшении количества клеток с эксцентричными ядрышками, у старых, наоборот, снижением числа многоядрышковых клеток. Выявлена зависимость соотношения функциональной активности ВП- и ОТ-синтезирующих систем от возраста животного и времени после иммобилизации. Показано, что взаимосоотношения НСЦ у молодых крыс после стресса аналогичны таковому у контрольных старых крыс. Таким образом, по ВП- и ОТ-синтетической активности состояние контрольных старых животных можно определить как стрессорное. В связи с этим у животных на поздних стадиях онтогенеза реакция на иммобилизацию происходит с запаздыванием. Наличие даже незначительной задержки в реакции ГГНС и связанное с ней замедление адаптивных процессов снижает выживаемость этих особей в экстремальных условиях.

Выявлена ТГ в отдельных пептидергических клетках ПВЯ и СОЯ, причем количество таких клеток увеличивается после стресса у крыс обеих возрастных групп. Состояние КА-центров у молодых и старых крыс было различным, как в контроле, так и при стрессе. У старых животных реакция на стресс отличается меньшей реактивностью ПВЯ и АЯ и НЗСВ при сохранении реакции ПКГ. Таким образом, изменение состояния КА-ергических центров гипоталамуса при стрессе говорит об их активном участии в регуляции стрессорных реакций организма. Разнонаправленные реакции, наблюдаемые в КА-ергических центрах гипоталамуса при стрессорном воздействии, свидетельствуют об их различной функциональной роли в механизме адаптации. Как КА-ергические клетки, так и пептидергические НСК гипоталамуса, у старых крыс уже в контроле были активированы по сравнению с молодыми. Возможно, такое состояние напряжения НЭС было причиной возникновения различий в реакции на стресс у животных разного возраста.

В опытах с ИС и НС доказано, что дисфункция ГГАКС в старости особенно четко выявляется при нагрузке: у старых животных после ИС наблюдалось длительное последействие, вполне сравнимое с результатами, полученными после НС в обеих возрастных группах.

Показано, что при старении в первую очередь снижается функция центрального звена, что, возможно, и приводит в дальнейшем к возрастным изменениям периферического звена эндокринной системы. У интактных старых животных возрастные изменения проявляются изменением функциональной активности НСЦ вследствие потери НСК (увеличение процента апоптоза) с одновременным повышением активности коры надпочечников, имеющем, вероятно, компенсаторный характер.

Обнаружено, что НСК гипоталамуса синтезируют Инс/ИПП, выступающий как фактор выживания клеток, однако его содержание снижается в нейронах старых животных, коррелируя с активацией апоптоза. Показано, что белок Вс1-2 в нейронах НСЦ старых мышей не препятствует инициации апоптоза. Регуляция апоптоза одинакова в изучаемых НСЦ у молодых мышей. Однако пути, приводящие стареющую клетку к гибели, различаются в СОЯ и

ПВЯ (в ПВЯ большое значение имеет снижение антиапоптотической защиты (уменьшение экспрессии Мс1-1, Вс1-2, Инс/ИПП), в СОЯ - только Инс/ИПП, и кроме того, усиливается проапоптотическое звено - повышается уровень Вах). Это свидетельствует о тесной связи старения и апоптоза.

Полученные данные указывают на то, что оксидативный стресс может вызвать развитие апоптоза НСК, и на одной из начальных стадий данного процесса синтезируется белок с-Бэб. Показано, что активность НСК и число апоптотических клеток в СОЯ молодых и старых мышей не изменяется при гипероксии, т.е., вероятно, оксидативный стресс не является специфическим для данного ядра. Однако кислород вызывает увеличение числа с-Аэз-ИР НСК в ПВЯ животных обеих возрастных групп.

Изучено действие иммуномодуляторов на НСК гипоталамуса в онтогенезе. Эффект ИА у старых мышей проявляется возрастанием морфофункциональной активности НСК ПВЯ гипоталамуса. У молодых мышей не показано влияние ИА на НСЦ, но обнаружено увеличение количества апоптотических клеток в коре надпочечников. Протекторное действие ИА при стрессе проявляется более активно и на более ранней стадии апоптоза у молодых мышей. Эти различия могут быть связаны с возрастными изменениями, происходящими в ГГАКС интактных старых животных. Так, сигнальный каскад апоптоза у молодых мышей при действии ИА идентичен в обоих ядрах, тогда как у старых мышей есть различия между СОЯ и ПВЯ. Также обнаружено, что ИА не является протектором апоптоза нейронов гипоталамуса при старении и оказывает супрессорный эффект на синтез ВП, инсулина/ИПП и Вс1-2 в клетках молодых и старых мышей. Введение циклоферона перед стрессом не влияет на количество апоптотических клеток, за исключением ПВЯ старых животных, где происходит ингибирование апоптоза по Вс1-2 независимому пути.

Таким образом, участие иммуномодуляторов в регуляции программированной клеточной гибели зависит от стадии онтогенеза.

Проведенное исследование впервые позволило определить возрастную динамику апоптоза в гипоталамической НЭС TNF-/- мышей, выявить зависимость апоптотического каскада от активации каспаз и оценить адаптивные возможности НЭС в позднем онтогенезе.

В изученных группах животных (TNF-нокаутные, мыши дикого типа) при старении интенсифицируется гибель нейронов крупноклеточных НСЦ, т.е. можно заключить, что отсутствие гена TNF не влияет на возраст-зависимую активацию апоптоза. Дисбаланс синтеза белков семейства Вс1-2 играет важную роль в развитии старческого апоптоза. В индукции апоптоза принимает активное участие caspase-8, синтез которой с возрастом увеличивается у TNF-нокаутов и у мышей WT. При старении у мьтшей WT наблюдается снижение синтеза caspase-9 в НСЦ, тогда как у нокаутных мышей отсутствуют изменения данного показателя. Результаты нашего исследования показывают, что в НСК старых мышей активируется внешний путь клеточной гибели, с участием поверхностно-клеточных рецепторов.

Таким образом, мы показали, что при старении наблюдается активация апоптоза НСК по easpase-8-зависимому пути, и отсутствие гена TNF не влияет на активность данного процесса. Выявлена интенсификация синтеза ВП при старении у животных обеих линий.

Тирозинкиназный рецептор НЕИ2/«ем играет важную роль во многих процессах, в том числе в канцерогенезе. Онкогенные характеристики \ШЮ.!пеи связаны с влиянием на различные апоптотические пути в клетках, сверхэкспрессирующих этот белок. Целью данного этапа работы было изучить изменения в регуляции процесса апоптоза, вызываемые сверхэкспрессией HER2/«ей, в НСК гипоталамуса HER2/пей трансгенных мышей при старении. Мы исследовали экспрессию апоптотических сигнальных белков в сравнении с уровнем апоптоза и функциональной активностью в НЭС. Кроме того, определяли уровень 17Р-эстрадиола в плазме крови, как одного из возможных антиапоптотических факторов, активных в нейронах.

Выявлено, что регуляция апоптоза в различных ядрах при старении опосредуется разными сигнальными путями. У трансгенных мышей, очевидно, сверхэкспрессия \\ЕК2/пеи блокировала значительное количество всех апоптотических путей, независимо от возраста животного.

Мы обнаружили, что при старении у данных мышей не наблюдается активации апоптоза НСК, в отличие от животных дикого типа (Рис. 80). В

Рис. 80. Сигнальный каскад апоптоза при физиологическом старении (А) и при старении НСК трансгенных мышей НЕ112/пеи (В).

Таким образом, впервые было показано, что сверхэкспрессия НЕЮ./пей достаточна для защиты от возраст-зависимой активации апоптоза в НСЦ. Выявлен сигнальный каскад супрессии апоптоза при НЕЯ2/пеи сверхэкспрессии (Рис. 80). Как показано в наших исследованиях, основным механизмом подавления апоптоза у трансгенных мышей является блокирование р53-зависимого каскада, что приводит к снижению синтеза сазразе-8 и Вах, дисрегуляции синтеза антиапоптотических белков Вс1-2 и Мс1-1 (Рис. 80). Обнаружена возможная причина подавления р53-опосредуемого апоптоза у НЕ112-трансгенных мышей - низкая экспрессия гена регулирующего синтез р53. Важным фактором, принимающим участие в повышении выживания клеток гипоталамуса трансгенных животных, является 17Р-эстрадиол, уровень которого в плазме крови не снижается при старении. Кроме того, у НЕ112 мышей, независимо от возраста, интенсифицируется синтез ВП, являющегося активным митогеном. Результатом всего этого является повышенное выживание НСК старых трансгенных мышей НЕК2/пеи.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Бажанова, Елена Давыдовна, Санкт-Петербург

1. Автандилов Г.Г. Введение в количественную патологическую морфологию. - М., 1980. - 216 с.

2. Агроскин Л.С., Папаян Г.В. Опыт цифровой телевизионной цитофотометрии // Цитология. 1988. - Т. 30, №4. - С. 503-510.

3. Акмаев И.Г. О новом пути центральной нервной регуляции углеводного гомеостаза // Пробл. эндокринологии 1990. - Т. 36, N4. - С. 12-18.

4. Андреева Л.И., Иванова Л.И., Титова М.В., Петрова B.C. Биохимические механизмы апоптоза // Программированная клеточная гибель, под ред. B.C. Новикова, СПб, Наука, 1996. 276 с. - С. 51-71.

5. Аутеншлюс А.И., Шкунов А.Н. Антитела к антигенам микобактерий у больных туберкулезом легких // Проблемы туберкулеза. 2004. — Т. 11. - Р. 3739.

6. Багров Я.Ю., Красновская И.А. Химическая характеристика гипоталамических нейрогормонов, их биосинтез и механизм действия / Нейроэндокринология. СПб.: РАН, 1993. - Ч. 1. - С. 89-100.

7. Бадалян Л.О. Невропатология. М.: Просвещение, 1982. - 349с.

8. Бажанова Е.Д., Жуков Д.А., Данилова O.A. Различие в реакции старых и молодых крыс на иммобилизационный стресс // Журн. эвол. биохим. физиол. -1994. Т. 30, № 4. - С. 541-546.

9. Бажанова Е.Д. Морфофункциональные изменения гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы крыс при старении // Автореф. дисс. на соискание ученой степени канд. мед. наук. 1996. - 21 с.

10. Бажанова Е.Д., Данилова O.A., Черниговская Е.В. Реакция на стресс нонапептидергических гипоталамических центров у старых и молодых крыс // Морфология. 1996. - Т. 110, N5. - С. 30-33.

11. Бажанова Е.Д., Данилова O.A., Черниговская Е.В., Бажанов И.А. Соотношение вазопрессин- и окситоцин-продуцирующей активности различных ядер гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы // Ж. эвол. физиол. биохим. 1997. - Т. 37, №2. - С. 42-46.

12. Бажанова Е.Д. Старение и морфофункциональные изменения гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. 1995. - Т. 31, N1. - С. 92-102.

13. Бажанова Е.Д., Черниговская Е.В., Данилова O.A. Гипоталамическая регуляция функции коры надпочечников у старых и молодых крыс // Журн. эвол. биохим. физиол. 1998. - Т. 38, № 1. - С. 31-35.

14. Бажанова Е.Д., Теплый Д.Л. Влияние интерферона-альфа на гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальную систему мышей при старении // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. 2003. - Т. 39.-№ 5.- С. 482-487.

15. Бажанова Е.Д., Москвин А.Н., Белостоцкая Г.Б., Таранухин А.Г., Теплый Д.Л. Реакция гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы на оксидативный стресс у мышей разного возраста // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. 2004. - Т. 40, № 1, 72-76.

16. Бажанова Е.Д., Молодцов В.Н., Павлов К.И. Изменения экспрессии апоптоз-ассоциированных молекул в нейросекреторных клетках гипоталамуса мышей при старении // Морфол. 2006. - Т. 130, N6. - С. 35-39.

17. Бажанова Е.Д., Молодцов В.Н., Попович И.Г., Анисимов В.Н. Регуляция апоптоза нейросекреторных клеток гипоталамуса у трансгенных мышей НЕЯ-2/пеи в онтогенезе // Усп. геронтол. 2007. - Т. 20, № 3. - С. 31-35.

18. Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., Креминская В.М. Лечение сахарного диабета и его осложнений. Руководство для врачей. М.: Медицина, 2005. — 512 с.

19. Бережков Н. В. Ядерные тельца в гепатоцитах крыс: Динамика появления и формирования при старении и функциональных воздействиях // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1992. - Т. 113, N2. - С. 203-208.

20. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 2002.

21. Боголепова И.Н, Амунц В.В., Ореховская Н.С, Малафеева Н.И. Некоторые закономерности структурных изменений коры и подкорковых образований мозга человека в процессе старения // Ж. невропатол. и психиатр. 1985. - Вып. 7. - С. 965—968.

22. Борисова Е.А. Кровоснабжение комплекса гипоталамус-гипофиз // Нейроэндокринология. СПб.: РАН, 1993. - Ч. 1. - С. 212-229.

23. Вартапетов Б.А. и др., 1984 Вартапетов Б.А., Бондаренко Л.А., Трандофилова Г.М. Влияние длительного стресса на систему гипофиз-надпочечники-гонады у кроликов разного возраста // Физиол. журн. 1984. Т. 30,N2.-С. 243-245.

24. Верхратский Н.С., Мороз Е.В., Магдич Л.В., Диденко С.О., Харази Л.И. Система регуляции секреции стероидных гормонов при стрессе в старости // Сб. научн. тр. "Геронтология и гериатрия". Киев, 1986. - С. 32-38.

25. Верхратский Н С, Диденко С.О., Магдич Л.В. и др. Особенности контроля лимбической системой секреции кортикостероидов и тестостерона в старости // Вопр. геронтол. Киев. 1988. - С. 15—20.

26. Верхратский Н.С., Диденко С.О., Харази Л.И. Регуляция инкреции кортиколиберина и кортикотропина в старости // Физиол. журн. 1990. - Т. 36, N5.-0. 76-81.

27. Виноградова Е.П., Жуков Д.А. Обратная связь в системе «стимул-реакция» определяет особенности стресса // Рос. физиол. журн. 2001. - Т. 87, №3.-С. 319-330.

28. Виру А.А. Гормональные механизмы адаптации и тренировки. Л.: Наука, 1981.- 155 с.

29. Владимирская Е.Б. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста / Биологические основы противоопухолевой терапии. М, Агат-Мед, 2001. -110с.-С. 5-33.

30. Волянский Ю.Л., Колотова Т.Ю., Васильев Н.В. Молекулярные механизмы программированной клеточной гибели // Усп. Совр. Биол. 1994. -Т. 114, Вып. 6.-С. 672-692.

31. Гарбузенко Д.В. Механизмы компенсации структуры и функции печени при ее повреждении и их практическое значение // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2008. - Т. 6. - С. 14-21.

32. Гончарова Н.Д., В.Ю. Маренин, Т.Э. Оганян, A.B. Шмалий. Стресс, старение, гипоталамо-гипофизарно-адреналовая система и надежность антиоксидантной ферментной защиты // Успехи геронтологии. 2008. - Т. 21, N4. - С.548-554.

33. Гоуфман Е.И. Клеточная организация паравентрикулярных ядер гипоталамуса крысы // Арх. анатомии, гистологии и эмбриологии. 1990. - Т. 98,N6.-С. 46-52.

34. Грантынь В.А. Функциональная морфология медиобазального гипоталамуса при различных вариантах изменения гормонального баланса: Автореф. канд. дисс. Л., 1978.

35. Давтян Т.К., Испандарян Ж.Г., Гаолян A.A. Апоптоз и его модуляция вирусами // Нейрохимия. Т. 21, № 3.-2004.-С. 165-182.

36. Данилова O.A. Развитие системы гипоталамус-гипофиз в онтогенезе крыс и гистохимия нейросекрета // Нейросекреторные элементы и их значение в организме. М., Л., 1964. - С. 153-158.

37. Данилова O.A. Морфофункциональные основы нейроэндокринной регуляции коры надпочечников и половых желез (онтогенетические аспекты): Дисс.докт. биол. наук. Л., 1983. - 437 с.

38. Данилова O.A., Држевецкая И.А., Коровина A.M. Возрастные особенности реакции гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системыкрыс на физическую нагрузку // Пробл. эндокринологии. 1983. - Т. 29, N 4. -С. 67-71.

39. Данилова O.A., Черниговская Е.В., Беленький М.А. Возрастная динамика реакции гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы крыс на изменение уровня кортикоидов в крови // Физиол. журн. СССР им. И.М. Сеченова. 1988. - Т. 74, N1. - С. 130-136.

40. Дильман В. М. Большие биологические часы. М.: Знание, 1982. - 208 с.

41. Дильман В.М. Нейроэндокринный механизм развития, старения и главных неинфекционных болезней человека: история проблемы, настоящее и будущее // Сб. науч. тр. "Геронтология и гериатрия". Киев, 1986. -С. 101-106.

42. Држевецкая И.А., Серебрякова A.A. Онтогенетические особенности гипоталамической регуляции гипофизарно-адреналовой системы у крыс // Нейроэндокринные системы адаптации. Ставрополь, 1974. - Вып. 1. - С. 1620.

43. Еремина С.А., Белякова Е.И. Адренергические механизмы стресса // Изв. Сев.-Кавк. науч. центра высш. шк. Естеств. н. 1988. - N4. - С. 109-118.

44. Жуков Д. А. Психогенетика стресса. Поведенческие и эндокринные корреляты генетических детерминант стресс-реактивности при неконтролируемой ситуации. СПб., 1997.

45. Згурский A.A. Эндогенная стрессовая реакция как возможный механизм старения//ДАН СССР. 1981. - Т. 261. - С. 233-235.

46. Зеленина Н.В., Марьянович А.Т., Цыган В.Н. Гуморальная регуляция апоптоза // Программированная клеточная гибель под ред. Новиков B.C. -СПб., 1996.-276 с. С. 89-103

47. Иванова Г.В. Морфофункциональная характеристика медиального мамиллярного ядра гипоталамуса человека при старении и некоторых патологических состояниях // Нарушение эндокринного и иммунного гомеостаза при важнейших заболеваниях. JL, 1985. С. 67—71.

48. Комаревцева И.А. Онтогенез эндогенных опиоидов в мозговых структурах // Ворошиловгр. мед. ин-т. Ворошиловград, 1989. - С. 6. Деп. в Укр. НИИНТИ 10.11.89. № 2519-Ук 89.

49. Кольман Я., Рем К.-Г. Наглядная биохимия. М.: Мир, 2000. - 469 с.

50. Красновская И.А., Стабровский Е.М., Смородина И.П. Влияние экзогенных нонапептидных гормонов на функциональное состояние коры надпочечников и щитовидной железы у крыс // М. 1990. - 11 с. Деп. в ред. ж. Пробл. эндокринологии.

51. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1990. - 352 с.

52. Лемб М. Биология старения. М.: Мир, 1980. 208 с.

53. Майнот К.С. О бессмертии и развитии смерти. Новые идеи в биологии. -СПб., 1914. №3. С. 104.

54. Межиборская H.A. Ультраструктурные проявления старения нейронов мамиллярных ядер // ДАН УССР. Сер. Б. Киев, 1980. - С. 76—79.

55. Метальников С.И. Проблемы бессмертия в современной биологии. -Петроград, 1917. 64 с. цит.: Биология старения.

56. Мечников И.И. Этюды оптимизма. М.: Наука, 1964. - 339 с.

57. Молодцов В.Н., Е.В. Сенченков, Е.Д. Бажанова. Апоптоз и экспрессия вазопрессина, инсулина и Вс1-2 в нейросекреторной системе старых мышей // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. 2006. - Т. 42, № 3. - С. 283-288.

58. Мороз Е.В. Особенности функционального состояния коры надпочечников у старых крыс при иммобилизационном стрессе // Физиол. журн. 1982. - Т. 28, N 6. - С. 752-755.

59. Мяделец О. Д. Пролиферация, дифференцировка и апоптоз кератиноцитов эпидермиса крыс в постнатальном онтогенезе // Онтогенез. 1995. - 26, N1. - С. 62-67.

60. Никитин В.Н, Нестеренко Г. А., Ставицкая Л.И. Гипоталамо-гипофизарно-адреналовая система в онтогенезе в норме и при экспериментальном продлении жизни // Геронтология и гериатрия. Киев, 1981.-С. 63—70.

61. Никитин В.Н., Гринченко Е.С, Дружинина М.Н. и др. Эндокринная ситуация при экспериментальном продлении жизни // Физиол. ж. (Киев). -1984.-Т. 30.-С. 8-16.

62. Новиков И.С., Булавин Д.В., Цыган В.Н. Молекулярные механизмы инициации клеточной гибели // Программированная клеточная гибель / ред. B.C. Новикова, СПб, 1996. С. 30-50.

63. Новожилова А.П., Плужников H.H., Новиков B.C. Механизмы клеточной смерти: проблемы и перспективы // Программированная клеточная гибель, под ред. B.C. Новикова, СПб, Наука, 1996. С. 9-30.

64. Одинак М.М., Вознюк И.А., Цыган В.Н., Пахомов В.Ю. // Программированная клеточная гибель, под ред. B.C. Новикова, СПб, Наука, 1996.-С. 176.

65. Пелевин Ю.М., Зеленская Т.М. Ультраструктура нейросекреторных клеток СОЯ гипоталамуса белых крыс при ноцицептивных воздействиях и старении // Нейрофизиология. 1989. - Т. 21. - С. 389—396.

66. Перехрестенко В.А., Пелевин Ю.М. Синаптическая организация супраоптических ядер гипоталамуса белой крысы в условиях болевого стресса // Тез. докл. Всес. конф. "Стресс и иммунитет (психонейроиммунология)". Л., 1989. С. 191-192.

67. Пискунова Т.С., Юрова М.Н., Забежинский М.А., Анисимов В.Н. Поли(АБР-рибоза)полимераза отношение к продолжительности жизни и канцерогенезу // Усп. Геронт. - 2007. - Т. 20, N2. - С. 82-90.

68. Поленов А.Л. Морфофункциональная организация нейросекреторных клеток гипоталамуса / в кн. Нейроэндокринология. Под ред. Поленова А.Л. СПб.: РАН, 1993. Ч. 1. - С. 31-70. - 398 с.

69. Поленов А. Л., Константинова М.С., Гарлов П.Е. Гипоталамо-гипофизарный нейроэндокринный комплекс / в кн. Нейроэндокринология. Под ред. Поленова А.Л. СПб.: РАН, 1993. - Ч. 1. - С. 139-187. - 398 с.

70. Поповиченко H.B. Роль гипоталамической нейросекреторной системы в приспособительных реакциях организма. Киев: Наукова думка, 1973. 127 с.

71. Прочуханов P.A., Ростовцева Т.И. Количественный гистоэнзиматический анализ аденогипофиза и коры надпочечников на ранних этапах инволюции // Бюл. экспер. биол. и мед. 1977. - Т. 84. - С. 602—609.

72. Пунина Е.О., Беляев A.A., Паук В.Н., Агроскин JI.C., Гриф В.Г. Использование автоматического анализатора изображений для исследования хромосом растений // Цитология. 1994. - Т. 36, № 8. - С. 888-892.

73. Робу А.И. Стресс и гипоталамические гормоны. Кишинев: Штиинца, 1989.-219 с.

74. Ройтберг Г.Е., Кондратова Н.В. Оценка показателей углеводного и липидного обмена у мужчин и женщин с различными аллелями гена фактора некроза опухолей альфа // Профилактическая медицина (Профилакт. забол. укреп, здор.) 2004. - № 4. - С. 7-11.

75. Самуилов В.Д. Биохимия программируемой клеточной смерти (апоптоза) у животных // Соросовский образовательный журнал. Т. 7, N10. - 2001. -С.18-25.

76. Сентаготаи Я., Флерко Б., Меш Б., Халас Б. Гипоталамическая регуляция передней части гипофиза. Будапешт: AHB, 1965. - 355 с.

77. Смольникова М.В., Прокофьев В.Ф., Сизякина Л.П., Шемшура А.Б., Ольховский И.А., Коненков В.И. Аллельные варианты генов IL-4, IL-10 и TNFa при ВИЧ-инфекции // Цитокины и воспаление. 2002. - № 1. - С. 29-32.

78. Смородина И.П., Константинова М.С. Моноаминергические структуры гипоталамуса в условиях хронического стресса // Пробл. эндокринол. 1985. -Т. 31, N4.-С. 49-51.

79. Ступина А.С, Квитницкая-Рыжова Т.Ю., Межиборская H.A., Шапошников В.М. Структурные и ультраструктурные основы адаптации при старении // Геронтология и гериатрия. 1981. - С. 44—50.

80. Ступина А.С, Межиборская H.A., Квитницкая-Рыжова Т.Ю. Структурные основы нарушения нейрогормональной регуляции при старении // Геронтология и гериатрия. Киев, 1986. - С. 17—21.

81. Ступина A.C., Квитницкая-Рыжова Т.Ю., Межиборская H.A., Терман А.К., Бережков Н.В. // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1989. - Т. 97. - С. 25.

82. Танин С.А., Ступина А.С, Мартыненко O.A. Старение нервных клеток // Физиологические механизмы старения. 1982. - С. 44—50.

83. Теплый Д.Л. Влияние витамина Е на нейроэндокринные клетки гипоталамуса белых крыс // Цитология. 1990. - Т. 48, № 12. - С. 1161-1167.

84. Теплый Д.Л. Нейрофизиологические эффекты витамина Е. Астрахань: АГУ. 2008. - 309 с.

85. Филаретов A.A., Филаретова Л.П., Богданов А.И. Роль ПВЯ в обеспечении параметров реакции на гипофизарно-адренокортикальную систему, на стрессор // Физиологический журнал СССР им. Сеченова.- 1986.Т. 72.-№10.- С. 1373-1377.

86. Филаретов A.A., Данилова O.A. Кора надпочечника // Нейроэндокринология. СПб.: РАН, 1994. - Ч. 2. - С. 125-152. - 307 с.

87. Фролькис В.В., Безруков В.В., Мурадян Х.К. Гипоталамическая регуляция биосинтеза РНК и белка при старении // Физиол. ж. СССР. 1978а. -Т. 24. - С. 627-633.

88. Фролькис В.В., Валуева Г.В., Вержиковская Н.В. Взаимодействие гипоталамо-гипофизарной системы и щитовидной железы в различные возрастные периоды // Бюл. экспериментальной биологии // 19786. №8. - С. 133-137.

89. Фролькис В.В. Старение. Нейрогуморальные механизмы. Киев: Наукова думка, 1981а. - 320 с.

90. Фролькис В.В. Старение и витаукт. Адаптация и дизадаптация // Геронтология и гериатрия. Киев, 19816. - С. 5—15.

91. Фролькис В.В. Старение и увеличение продолжительности жизни. Л., Наука, 1988а. -239 с.

92. Фролькис B.B. Нейрогормонапьные соотношения в старости // Эндокринные механизмы старения и возрастной патологии. Киев, 19886. - С. 4—15.

93. Фролькис В.В. Стресс-возрастной синдром // Физиол. ж. (Киев). 1991. -Т. 37.-С. 3—11.

94. Харази Л.И. Особенности изменения уровня моноаминов в отделах гипоталамуса при стрессе у взрослых и старых крыс // ДАН УССР.Б. 1989. - N 6.-С. 79-81.

95. Хмельницкий O.K., Ступина Ф.С. Морфология эндокринной системы при атеросклерозе и старении. Л.: Медицина, 1989. - 247 с.

96. Чернецова Л.Ф. Иммунореактивность онкологических больных и принципы иммунокорригирующей терапии при хирургическом лечении опухолевых заболеваний // Автореф. дисс. на соискание ученой степени докт. мед. наук. 2006. - 39 с.

97. Черниговская Е.В., Данилова O.A., Беленький М.А. Характеристика нейросекреторных центров гипоталамуса крыс, связанных с регуляцией функции коркового вещества надпочечников // Пробл. эндокринологии. 1988. -Т. 34, N1.-С. 60-64.

98. Чернышева М. П. Гормоны животных. Введение в физиологическую эндокринологию: учебное пособие. СПб.: "Глаголь", 1995. - 296 с.

99. Шаляпина В.Г., Ракицкая В.В. Адренергические структуры мозга в регуляции гипофизарно-адренокортикальной системы / Катехоламинергические нейроны. Л.: Наука, 1979. - С. 117-126.

100. Шаляпина В.Г., Ордян Н.Э., Пивина С.Г., Ракицкая В.В. Нейроэндокринные механизмы формирования адаптивного поведения // Физиол. журн. им. Сеченова. 1995. - Т. 81, N8. - С. 94-100.

101. Шейбак Т.В. Морфо-функциональный анализ нейрогипофиза, щитовидной железы и коры надпочечников у гипофизэктомированных крыс при стрессе и введении гипоталамических нонапептидов // Автореф. дисс. на соиск. степ. канд. биол. наук, JL, 1988. 19 С.

102. Эфендиева В.А. Глюкокортикоидная реакция коры надпочечников крыс различных возрастных групп в восстановительном периоде после мышечной нагрузки // Изв. АН АзССР.Сер. биол. н. 1987. - N 2. - С. 123-127.

103. Хансон К.П. Апоптоз современное состояние проблемы // Известия АН, биологическая серия. - 1998. - № 2. - С. 134-141.

104. Abe М. Rat model of HTLV-I infection-ultrastructural study of HAM rat disease. // Hokkaido Igaku Zasshi. 1994. - V. 69, N6. - P.1399-1408. Japanese.

105. Aggarwal В., Pocsik E. Cytokines: from clone to clinic // Arch. Biochem. Biophys. 1992. -V. 292. - P. 335-345.

106. Alema' G.S., Maccari S., Micci M.A., Patacchioli F.R. Hippocampal serotonin in the regulation of the hypothalamo-pituitary-adrenocortical axis (HPAA) stress response // Pharmacol. Res. Commun. 1988. - Vol. 20, N 5. - P. 429-430.

107. Alroy I., Yarden Y. The ErbB signaling network in embryogenesis and oncogenesis: signal diversification through combinatorial ligand-receptor interactions // FEBS Letters. 1997. - V. 410. - P.83-86.

108. Andersen L., 1990a Andersen L. Electron microscopy and morfometry of nuclei in rat neurosecretory cells with stimulated and supressed secretion // Acta anat. 1990. Vol. 138, N 3. - P. 220-223.

109. Andersen L. Number, volume and size distribution of nucleoli in rat neurosecretory cells with supressed and stimulated secretion // Acta anat. 19906. -Vol. 137,N4. -P. 311-315.

110. Atadja P., Wong H., Garkavtsev I., Veillette C., Riabowol K. Increased activity of p53 in senescing fibroblasts // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. - V. 92, N18. — P.8348-8352.

111. Armstrong W.E., Hatton G.I. Morphological changes in the rat supraoptic and paraventricular nuclei during the diurnal cycle // Br. Res. 1978. - Vol. 157. - P. 407413.

112. Armstrong W.E., Warach S., Hatton G.I., McNeill T.H. Subnuclei in the rat hypothalamic paraventricular nucleus: a cytoarchitectural horseradish peroxidase and immunocytochemical analysis //Neuroscience. 1980. -N 5. - P. 1931-1958.

113. Arai Y., Murakami S., Nishizuka M. Androgen enhances neuronal degeneration in the developing preoptic area: apoptosis in the anteroventral periventricular nucleus (AVPvN-POA) // Horm. Behav. 1994. - V. 28, N4. - P.313-319.

114. Arai T., Kida Y., Harmon B.V., Gobe G.C. Comparative alterations in p53 expression and apoptosis in the irradiated rat small and large intestine // Brit. J. Cancer. 1996. - V. 74, N3. - P.406-412.

115. Asahara H., Hasunuma T., Kobata T., Inoue H., Muller-Ladner U., Gay S., Sumida T., Nishioka K. In situ expression of protooncogenes and Fas/Fas ligand in rheumatoid arthritis synovium // J. Rheumatol. 1997. - V. 24, № 3. - P. 430-435.

116. Aschoff A., Jantz M., Jirikowski G.F. In-situ end labelling with bromodeoxyuridine~an advanced technique for the visualization of apoptotic cells in histological specimens.// Horm. Metab. Res. 1996. - V. 28, N7. - P. 311-314.

117. Atabasides H., Tsiapalis C.M., Havredaki M. Poly(A) polymerase specifically implicated in the mechanism of chemotherapeutic drug action during cell apoptosis // Int. J. Biol. Markers. 2000. - V. 15, N 1. - P. 10-14.

118. Bao A.M., Swaab D.F.Gender difference in age-related number of corticotropin-releasing hormone-expressing neurons in the human hypothalamic paraventricular nucleus and the role of sex hormones // Neuroendocrinology. 2007. -V. 85, N1. - P.27-36.

119. Baker R.A., Herkenham M. Arcuate nucleus neurons that project to the hypothalamic paraventricular nucleus: neuropeptidergic identity and consequences of adrenalectomy on mRNA levels in the rat // J. Comp. Neurol. 1995. - V. 358. - P. 518-530.

120. Bave U., Aim G.V., Ronnblom L. The combination of apoptotic U937 cells and lupus IgG is a potent IFN-alpha inducer // J. Immunol. 2000. - V. 165. - P. 3519-3526.

121. Bazhanova E.D., Chernigovskaya E.V., Danilova O.A. Different pathways of neurohormonal hypothalamic control of the adrenal cortex function in young and old rats // Mech. Ageing Dev. 2000. - V. 118, N3. - P. 91-102.

122. Bellinzona M., Gobbel G.T., Shinohara C., Fike J.R. Apoptosis is induced in the subependyma of young adult rats by ionizing irradiation //Neurosci. Lett. 1996. -V. 208, N3. - P.163-166.

123. Beneke S., Burkle A. Poly(ADP-ribosyl)ation, PARP, and aging // Sci. Aging Knowledge Environ. 2004. - Y. 49, re9.

124. Bergquist J., Josefsson E., Tarkowski A., Ekman R., Ewing A. Measurements of catecholamine-mediated apoptosis of immunocompetent cells by capillary electrophoresis // Electrophoresis. 1997. - V. 18. - P. 1760-1766.

125. Blake L.M. Aging, stress, and affective disorders // Semin. Clin. Neuropsychiatry. 2001. - V. 6, № 1. - P. 27-31.

126. Blander G., Kipnis J., Leal J.F., Yu C.E., Schellenberg G.D., Oren M. Physical and functional interaction between p53 and the Werner's syndrome protein // J. Biol. Chem. 1999. - V. 274, N41. - P.29463-249469.

127. Blandini F., Martignoni E., Melzi d'Eril G. V., Biasio L., Sances G., Lucarelli C., Rizzo V., Costa A., Nappi G. Free plasma caecholamine levels in healthy subjects: a basal and dynamic study // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1992. V. 52. № 1. P. 9-17.

128. Bodey B., Bodey B. Jr., Kaiser H.E. Dendritic type, accessory cells within the mammalian thymic microenvironment. Antigen presentation in the dendritic neuro-endocrine-immune cellular network // In Vivo. 1997. - V. 11. - P. 351-370.

129. Bolon B., Dorman D.C., Bonnefoi M.S., Randall H.W., Morgan K.T. Histopathologic approaches to chemical toxicity using primary cultures of dissociated neural cells grown in chamber slides // Toxicol. Pathol. 1993. - V. 21, N5. - P. 465-479.

130. Bondy C.A., Whitnall M.H., Brady L.S., Gainer H. Coexisting peptides in hypothalamic neuroendocrine systems: some functional implications // Cell, and Mol. Neurobiol. 1989. - V. 5, N4. - P. 427-446.

131. Bonfoco E., Zhivotovsky B., Rossi A.D., Aguilar-Santelises M., Orrenius S., Lipton S.A., Nicotera P. BCL-2 delay apoptosis and PARP cleavage induced by NO donors in GT1-7 cells //Neuroreport. 1996. - V. 8, N1. - P. 273-276.

132. Botchkina G.I., Morin L.P. Organization of permanent and transient neuropeptide Y-immunoreactive neuron groups and fiber system in the developing hamster diencephalon . // J. Compar. Neurol. 1995. - V. 357. - P. 573-602.

133. Brambilla E., Negoescu A., Gazzeri S., Lantuejoul S., Moro D., Brambilla C., Coll J.-L. Apoptosis-related factors p53, Bcl2, and Bax in neuroendocrine lung tumors // Amer. J. Pathology. 1996. - V. 149, N6. - P. 1941-1952.

134. Brennan F. X., Ottenweller J. E., Seifu Y., Zhu G., Servatius R. J. Persistent stress-induced elevations of urinary corticosterone in rats // Physiol. Behav. 2000. -V. 71, № 5. - P. 441-446.

135. Brodish A., Odio M. Age-dependent effects of chronic stress on ACTH and corticosterone responses to an acute novel stress //Neuroendocrinology. 1989. - V. 49,N5.-P. 496-501.

136. Bridges Т.Е., Hillhouse E.W., Jones M.T. The effect of dopamine on neurohypophysial hormone release in vivo and from the rat neural lobe and hypothalamus in vitro // J. Physiol. (Lond.) 1976. - V. 260. - P. 647-666.

137. Bristow M.R. Tumor necrosis factor and cardimyopathy // Circulation. -1998.-V. 97,N14.-P. 1340-1341.

138. Brosh R.M.Jr., Karmakar P., Sommers J.A., Yang Q., Wang X.W., Spillare E.A., Harris C.C., Bohr V.A. p53 Modulates the exonuclease activity of Werner syndrome protein // J. Biol. Chem. 2001. - V. 276, N37. - P.35093-35102.

139. Browner W.S., Kahn A.J., Ziv E., Reiner A.P., Oshima J., Cawthon R.M., Hsueh W.C., Cummings S.R. The genetics of human longevity // Am. J. Med. -2004.-V. 117,N.ll. -P.851-860.

140. Brownell S.E., Conti B. Age- and gender-specific changes of hypocretin immunopositive neurons in C57B1/6 mice // Neurosci Lett. 2010. - V. 472, N1. -P.29-32.

141. Budihardjo I., Oliver H., Lutter M., Luo X., Wang X. Biochemical pathways of caspase activation during apoptosis // Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 1999. - V. 15. P.269-290.

142. Caffe A.R., Van Ryen P.C., Vand Der Woude T.P., Van Leeuwen F.W. Vasopresin and oxytocin systems in the brain and upper spinal cord of Macaca fascicularis // J. Comp. Neurol. 1989. - V. 287, N3. - P. 302-325.

143. Cai A., Lehman M.N., Lloyd J.M., Wise P.M. Transplantation of fetal suprachiasmatic nuclei into middle-aged rats restores diurnal Fos expression in host //Am. J. Physiol. 1997. - V. 272, N1 Pt 2. - P. R422-428.

144. Calza L.,- Giarino L., Velardo A. et al Influence of aging on the chemical organization of the rat paraventricular nucleus // J. Neuroanat. 1990. - V. 3. - P.215-231.

145. Campard P.K., Crochemore C., Rene F., Monnier D., Koch B., Loeffler J.P. PACAP type I receptor activation promotes cerebellar neuron survival through the cAMP/PKA signalling pathway // DNA Cell Biol. 1997. - V. 16, № 3. - P. 323-333.

146. Campisi J. Between Scylla and Charybdis: p53 links tumor suppression and aging // Mech Ageing Dev. 2002. - V. 123, N6. - P.567-573.

147. Candolfi M, Zaldivar V, De Laurentiis A, Jaita G, Pisera D, Seilicovich A. TNF-alpha induces apoptosis of lactotropes from female rats // Endocrinology. -2002. V. 143, N9. - P. 3611-3617.

148. Caspersson T.O. Cell groth and cell function. A cytochemical study. New-York: Norton, 1950.

149. Caston-Balderrama A., Nijland M.J., McDonald T.J., Ross M.G. Central Fos expression in fetal and adult sheep after intraperitoneal hypertonic saline // Am. J. Physiol. 1999. - V. 276, N2 Pt 2. - P. H725-735.

150. Chang Y.M., Kelliher K.R., Baum M.J. Maternal odours induce Fos in the main but not the accessory olfactory bulbs of neonatal male and female ferrets // J. Neuroendocrinol. 2001. - V. 13, N6. - P. 551-560.

151. Chinnaiyan A.M., O'Rourke K., Yu G.L., Lyons R.H., Garg M., Duan D.R., Xing L., Gentz R., Ni J., Dixit V.M. Signal transduction by DR3, a death domain-containing receptor related to TNFR-1 and CD95 // Science. 1996a. - V. 274, N5289.-P. 990-992.

152. Choudhury S.R. and Ray P.K., 1990; Choudhury S.R., Ray P.K. Ultrastructural features of presumptive vasopressinergic synapses in the hypothalamic magnocellular secretory nuclei of the rat // Acta anat. 1990. - V. 137, N3. - P. 252-256.

153. Chrest F.J., Buchholz M.A., Kim Y.H., KwonT.K., Nordin A.A. Anti-CD3-induced apoptosis in T-cells from young and old mice // Cytometry. 1995. - V. 20, N1.-P. 33-42.

154. Chung Y.H., Shin C.M., Joo K.M., Kim M.J., Cha C.I. Region-specific alterations in Insulin-like growth factor receptor type I in the cerebral cortex and hippocampus of aged rats // Brain Res. 2002. - V. 946, N2. - P. 307-13.

155. Cizza G., Pacak K., Kvetnansky R. et al. Decreased stress responsivity of central and peripheral catecholaminergic systems in aged 344/N Fischer rats // J. Clin. Invest. 1995. - V. 95. - P. 1217-1224.

156. Colicos M.A., Dixon C.E., Dash P.K. Delayed, selective neuronal death following experimental cortical impact injury in rats: possible role in memory deficits // Brain Res. 1996. - V. 739, N1-2. - P. 111-119.

157. Colucci W.S. Apoptosis in the heart // New Engl. J. Med. 1996. - V. 335. P.1224-1226.

158. Corssmit E.P., Metz J. de, Sauerwein H.P., Romijn J.A. Biologic responses to IFN-alpha administration in humans // J. Interferon Cytokine Res. 2000a. V. 20, N 12. P. 1039-1047.

159. Corssmit E.P., Endert E., Sauerwein H.P., Romijn J.A. Acute effects of interferon-alpha administration on testosterone concentrations in healthy men // Eur. J. Endocrinol. 20006. - V. 143. - P. 371-374.

160. Corasaniti M.T., Amantea D., Russo R., Piccirilli S. et al. 17beta-Estradiol Reduces Neuronal Apoptosis Induced by HIV-1 gpl20 in the Neocortex of Rat // Neurotoxicology. 2005. - V. 26, N5. - P. 893-903.

161. Costelli P., Carbo N., Tessitore L., Bagby G.J., Lopez-Soriano F.J., Argiles J.M., Baccino F.M. Tumor necrosis factor-alpha mediates changes in tissue protein turnover in a rat cancer cachexia model // J. Clin. Invest. 1993. - V. 92, N6. -P.2783-2789.

162. Couzin J. Research on aging. Gene links calorie deprivation and long life in rodents // Science. 2004. - V. 304, N5678. - P. 1731.

163. Cunningham E.T., Bohn M.C., Sawchenko P.E. Organization of adrenergic inputs to the paraventricular and supraoptic nuclei of the hypothalamus in the rat // J. Comp. Neurol. 1990. - V. 222, N4. - P. 651-667.

164. Cutler R.G. Antioxidants and aging // Am. J. Clin. Nutr. 1991. - V. 53, N1 Suppl. - P.373S-379S.

165. D'Amours D., Desnoyers S., D'Silva I., Poirier G.G. Poly(ADP-ribosyl)ation reactions in the regulation of nuclear functions // Biochem J. 1999. - V. 342, NPt 2. -P. 249-268.

166. Danifos J. Zavertose kwasu askorbinowego w korse nodnerczy szczurow (samik) mlodich i starych // Ann. VNCS. 1982. - Bd 34. - S.103—107.

167. David M., Petricoin E. Ill, Benjamin C., Pine R., Weber M.J., Larner A.C. Requirement for MAP kinase (ERK2) activity in interferon and interferon □stimulated gene expression through STAT proteins // Science. 1995. - V. 269. - P. 1721-1723.

168. David S. Cell Injury / in: Essentials of Rubin's Pathology, Strayer Emanuel Rubin. 2009. Lippincott Williams & Wilkins.

169. Davis E.C., Popper P., Gorski R.A. The role of apoptosis in sexual differentiation of the rat sexually dimorphic nucleus of the preoptic area // Brain Res. 1996. - V. 734, N1-2. - P. 10-18.

170. De Boer S.F., Slangen J.L., van der Gugten J. Stress-related plasma catecholamine and corticosterone responses: modification by coping factors and benzodiazepine drags //Neuroend. Lett. 1988. - V. 10. - P. 228.

171. Deng M., Zhao J.Y., Ju X.D., Tu P.F., Jiang Y., Li Z.B. Protective effect of tubuloside B on TNFa-induced apoptosis in neuronal cells // Acta Pharmacol. Sin. -2004. V. 25, N10. - P.1276-1284.

172. Denovan-Wright E.M., Ferrier G.R., Robertson H.A., Howlett S.E. Increased expression of the gene for alpha-interferon-inducible protein in cardiomyopathy hamster heart // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2000. - V. 267. - P. 103-108.

173. Dent G.W., Smith M.A., Levine S. The ontogeny of the neuroendocrine response to endotoxin // Brain Res. Dev. Brain Res. 1999. - V. 117, N1. - P. 21-29.

174. Dey B.R., Furlanetto R.W., Nissley P. Suppressor of cytokine signaling (SOCS)-3 protein interacts with the insulin-like growth factor-I receptor // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - V. 278. - P. 38-43.

175. Didier M., Bursztajn S., Adamec E., Passani L., Nixon R.A., Coyle J.T., Wei J.Y., Berman S.A. DNA strand breaks induced by sustained glutamate excitotoxicity in primary neuronal cultures // J. Neurosci. 1996. - V. 16, N7. - P. 2238-2250.

176. Dimri G., Band H., Band V. Mammary epithelial cell transformation: insights from cell culture and mouse models // Breast Cancer Res. 2005. - V. 7, N4. -P.171-179.

177. Ding H.F., Lin Y.L., McGill G., Juo P., Zhu H., Blenis J., Yuan J., Fisher D.E. Essential role for caspase-8 in transcription-independent apoptosis triggered by p53 // J. Biol. Chem. 2000. - V. 275. - P. 38905-38911.

178. Ding S.L., Yu J.C., Chen S.T., Hsu G.C., Shen C.Y. Genetic variation in the premature aging gene WRN: a case-control study on breast cancer susceptibility // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2007. - V. 16, N2. - P. 263-269.

179. Ding S.L., Shen C.Y. Model of human aging: recent findings on Werner's and Hutchinson-Gilford progeria syndromes // Clin Interv Aging. 2008. - V. 3, N3. -P.431-444.

180. Djordjevic-Markovic R., Radic O., Jelic V., Radojcic M., Rapic-Otrin V., Ruzdijic S., Krstic-Demonacos M., Kanazir S., Kanazir D. Glucocorticoid receptors in ageing rats // Exp. Gerontol. 1999. - V. 34, № 8. - P. 971-982.

181. Dubois-Dauphin M., Tribollet E., Dreifuss J.J. Distribution of neurohypophysial peptides in the guinea pig brain. 2. An immunocytochemical study of oxytocin // Brain Res. 19896. - V. 496, N1-2. - P. 66-81.

182. Duncan M.J., Franklin K.M. Expression of 5-HT7 receptor mRNA in the hamster brain: effect of aging and association with calbindin-D28K expression // Brain Res. 2007. - V. 1143. - P.70-77.

183. Dunn A J., Berridge C.W. Is corticotropin-releasing factor a mediator of stress responses? // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1990. - V. 579. - P. 183- 191.

184. Eaton M.J., Cheung S., Moore K.E., Lookingland K.J. Dopamine receptor-mediated regulation of corticotropin-releasing hormone neurons in the hypothalamic paraventricular nucleus // Brain Res. 1996. - V. 738. - P. 60-66.

185. Egle A., Villunger M.K., Bock J., Gruber B.A., Greil R. Modulation of Apo-1/Fas (CD95)-induced programmed cell death in myeloma cells by interferon-D2 // Eur. J. Immunol. 1996. - V. 23. - P. 3119-3126.

186. Einhorn S., Femberg J.O., Grander D., Lewensohn R. Interferon exerts a cytotoxic effect on primary human myeloma cells // Eur. J. Cancer Clin. Oncol. -1988.-V. 24.-P. 1505-1510.

187. Eller M.S., Liao X., Liu S., Hanna K„ Backvall H., Opresko P.L., Bohr V.A., Gilchrest B.A. A role for WRN in telomere-based DNA damage responses // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. - V. 103, N41. - P.15073-15078.

188. Eilam R., Malach R., Segal M. Selective elimination of hypothalamic neurons by grafted hypertension-inducing neural tissue // J. Neurosci. 1994. - V. 14, N8. - P. 4891-4902.

189. Epel E.S. Psychological and metabolic stress: a recipe for accelerated cellular aging? // Hormones (Athens). 2009. - V. 8, N1. - P.7-22.

190. Eriksson B.K., Larsson E.G., Skogseid B.M., Lofberg A.M., Lorelius L.E., Oberg K.E. Liver embolizations of patients with malignant neuroendocrine gastrointestinal tumors // Cancer. 1998. - V. 83, N11. - P. 2293-2301.

191. Everitt A.V. Hormonal basis of aging: anti-aging action of hypophysectomy // Regulation of neuroendocrine aging. Basel, 1988. - P. 51—60.

192. Ferlin-Bezombes M., Jourdan M., Liautard J., Brochier J., Rossi J.-F., Klein B. IFN-a is a survival factor for myeloma cells and reduces dexametazone-induced apoptosis // J. Immunol. 1998. - V. 161. - P. 2692-2699.

193. Fearnley J.M., Lees A.J. Ageing and Parkinson's disease: substantia nigra regional selectivity//Brain. 1991. -V. 114, NPt 5. -P.2283-2301.

194. File C.E., Piantodosi C.A. Oxygen toxicity // Problem in Respiratory Care. -1991.-V. 4, №2. P. 150-167.

195. Fjallskog M.L., Granberg D.P., Welin S.L., Eriksson C., Oberg K.E., Janson E.T., Eriksson B.K. Treatment with cisplatin and etoposide in patients with neuroendocrine tumors // Cancer. 2001. - V. 92, N 5. - P. 1101-1107.

196. Fisher M., Trimmer P., Ruthel G. Bergmann glia require continuous association with Purkinje cells for normal phenotype expression // Glia. 1993. - V. 8, N3. - P. 172-182.

197. Fliers E., Swaab D.F., Pool C.W., Vewer W.H. The vasopressin and oxytocin neurons in the human supraoptic and paraventricular nucleus; changes with aging and in Senile dementia // Brain Res. 1985. - V. 342. - P. 45-53.

198. Fontana R.J. Neuropsychiatry toxicity of antiviral treatment in chronic hepatitis C//Dig. Dis. 2000. - V. 18, N 3. - P. 107-116.

199. Fritisch P., Richard Le Nayor H., Denis S., Menetrier F. Kinetics of radiation-induced apoptosis in the cerebellum of 14-day-old rats after acute or during continuous exposure // Internat. J. Radiat. Biol. 1994. - V. 66, N1. - P.lll-117.

200. Fulda S., Debatin K.M. Targeting apoptosis pathways in cancer therapy // Curr. Cancer Drug Targets. 2004. - V. 4, 7. - P. 569-576.

201. Fyhr I.M., Lindberg C., Oldfors A. Expression of Bcl-2 in inclusion body myositis // Acta Neurol Scand. 2002. - V.105, N5. - P.403-407.

202. Gaillet S., Lachuer J., Malaval F., Assenmacher I., Szafarczuk A. The involvement of noradrenergic ascending pathways in the stress-induced activation of

203. ACTH and corticosterone secretions is dependent of the nature of stressors // Exp. Brain Res. 1991.-V. 87, № l.-P. 173-180.

204. Garsia B., Obregon M.J. Growth factor regulation of uncoupling protein-1 mRNA expression in brown adipocytes // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2002. - V. 282, N1.-P. 105-12.

205. Gassmann M., Casagranda F., Orioli D., Simon H., Lai C., Klein R., Lemke G. Aberrant neural and cardiac development in mice lacking the ErbB4 neuregulin receptor//Nature. 1995. - V. 378. - P. 390-394.

206. Geelen G., Charib C., Corman B. Changes in hypothalamo-neurohypophysial vasopressin content in aging rats //Neuroendocrinology. 1990. - V. 52, Suppl. N1. -P. 135.

207. Gerozissis K. Brain Insulin: regulation, mechanisms of action and functions. // Cell. Mol. Neurobiol. 2003. - V. 23, N4-5. - P. 873-874.

208. Ghosh P.M., Mikhailova M., Bedolla R., Kreisberg J.I. Arginine vasopressin stimulates mesangial cell proliferation by activating the epidermal growth factor receptor // Am. J. Physiol. Renal Physiol. 2001. - V. 280, N6. - P. F972-979.

209. Ghosh P.M., Bedolla R., Thomas C.A., Kreisberg J.I. Role of protein kinase C in arginine vasopressin-stimulated ERK and p70S6 kinase phosphorylation // J. Cell Biochem. 2004. - V. 91, N6. - P. 1109-1129.

210. Gilad G. M., Li R., Wiatt R. J., Tizabi Y. J. Effects of genotype on age-related alterations in the concentrations of stress-hormones in plasma andhypothalamic monoamines in rats // Reprod. Fértil. Suppl. 1993. - V. 46. - P. 119130.

211. Gillies G., Linton E.A., Lowry B.J. Corticotropin releasing activity of the new corticotropin-releasing factor is potentiated several times by vasopressin // Nature. 1982. V. 299. - P. 355-356.

212. Girotti A.W. Lipid hydroperoxide generation, turnover, and effector action in biological systems // J. Lipid Res. 1998. - V. 39, N8. - P. 1529-1542.

213. Gongora R., Stephan R.P., Zhang Z., Cooper M.D. An essential role for daxx in the inhibition of b lymphopoiesis by type i interferons // Immunity. 2001. - V.14, N6. P. 727-737.

214. Gore A.C., Oung T., Yung S., Flagg R.A., Woller M.J. Neuroendocrine mechanisms for reproductive senescence in the female rat: gonadotropin-releasing hormone neurons // Endocrine. 2000. - V. 13, N3. - P. 315-323.

215. Grasso A.W., Wen D., Miller C.M., Rhim J.S., Pretlow T.G., Kung H.J. ErbB kinases and NDF signaling in human prostate cancer cells // Oncogene. 1997. - V.15.-P. 2705-2716.

216. Gray M.D., Shen J.C., Kamath-Loeb A.S., Blank A., Sopher B.L., Martin G.M., Oshima J., Loeb L.A.The Werner syndrome protein is a DNA helicase // Nat. Genet. 1997. -V. 17, N1. -P.100-103.

217. Gray T.S., Morley J.E. Neuropeptide Y: anatomical distribution and possible function in mammalian nervous system // Life Science. 1986. - V. 38, № 5. - P. 389-401.

218. Gross A. Bcl-2 family members and the mitochondria in apoptosis // Genes and development. 1999.-V. 13.-P. 1899-1911,

219. Gunningham E.T., Bohn M.C., Sawchenko P.E. Organisation of adrenergic inputs to the paraventricular and supraoptic nuclei of the hypothalamus in the rat // J. Compar. Neurol. 1990. - V.292. - P.451 -467.

220. Gupte A.A., Morris J.K., Zhang H., Bomhoff G.L., Geiger P.C., Stanford J.A. Age-related changes in HSP25 expression in basal ganglia and cortex of F344/BN rats // Neurosci. Lett. 2010. -V. 472, N2. - P.90-93.

221. Halasz B., Pupp L. Hormone secretion of the anterior pituitary gland after physical interruption of all nervous pathways to the hypophysiotrophic area // Endocrinology. 1965. - V. 77, N3. - P.553-562.

222. Hall E.D., Smith S.L., Oostveen J.A. Inhibition of lipid peroxidation attenuates axotomy-induced apoptotic degeneration of facial motor neurons in neonatal rats // J. Neurosci. Res. 1996. - V. 44, N3. - P. 293-299.

223. Halpin D.M.G., Kemp D., Forsling M.L., Cameron I.R., Treacher D.F. The effects of hypoxia on the diurnal rhythmicity and pulsaivity of vasopressin, renin and aldosterone secretion in elderli men // J. Endocrinology. 1992. - Vol. 135, Suppl. -P. 54.

224. Harari D., Yarden Y. Molecular mechanisms underlying ErbB2/HER2 action in breast cancer // Oncogene. 2000. - V. 19. - P. 6102-6114.

225. Harley C.B., Sherwood S.W. Telomerase, checkpoints and cancer // Cancer Surv. 1997. - V. 29. - P.263-284.

226. Harper A. J., Buster J. E., Casson P. R. Changes in adrenocortical function with aging and therapeutic implications // Semin. Reprod. Endocrinol. 1999. - V. 17,№4.-P. 327-338.

227. Harrigan J.A., Fan J., Momand J., Perrino F.W, Bohr V.A., Wilson D.M. 3rd. WRN exonuclease activity is blocked by DNA termini harboring 3' obstructive groups // Mech. Ageing Dev. 2007. - V. 128, N3. - P.259-266.

228. Hassan A.H.S., von Rosenstiel P., Patchev V.K., Holsboer F., Almeida O.F.X. Exacerbation of apoptosis in the dentate gyrus of the aged rat by dexamethasone and the protective role of corticosterone // Experimental Neurology. -1996.-V. 140.-P. 43-52.

229. Hatton G.I., Walters J.K. Induced multiple nucleoli, nuclear margination, and cell size changes in supraoptic neurons during dehydration and rehydration in the rat // Br. Res. 1973. - Vol. 59. - P. 137-154.

230. Haura E.B., Cress W.D., Chellappan S., Zheng Z., Belper G. Antiapoptotic signaling pathways in non-small-cell lung cancer: biology and therapeutic strategies // Clin. Lung Cancer. 2004. - V. 6, N2. - P. 113-122.

231. Heim M.H., Kerr I.M., Stark G.R., Darnell J.E. Jr. Contribution of STAT SH2 groups to specific interferon signaling by the Jak-STAT pathway // Science. -1995.-V. 267.-P. 1347-1349.

232. Heiser D., Labi V., Erlacher M., Villunger A. The Bcl-2 protein family and its role in the development of neoplastic disease // Exp. Gerontol. 2004. - V. 39, N8. -P.1125-1135.

233. Hertmann A. Hunot S. Caspase-3: A vulnerability factor and final effector in apoptotic death of dopaminergic neurons in Parkinson's disease // PNAS. 2000.- V. 97,N6.-P. 2875-2880.

234. Hockenbery D.M. Bcl-2 in cancer, development and apoptosis // J. Cell Sci. Suppl. 1994.-V. 18-P. 51-55.

235. Hoffman E., Phelps C.L., Khachaturian S., Sladek J.R. Neuroendocrine projections to the median eminence // Current Topics Neuroendocrinol. Berlin etc.; Springer-Verlag, 1986. V. 7. - P. 161-196.

236. Holman S.D., Collado P., Skepper J.N., Rice A. Postnatal development of a sexually dimorphic, hypothalamic nucleus in gerbils: a stereological study of neuronal number and apoptosis // J. Compar. Neurol. 1996. - V. 376, N6. - P. 315325.

237. Holson R.R., Scallet A.C., Ali S.F., Sullivan P., Gough B. Adrenocortical, -endorphin and behavioral responses to graded stressors in differentially reared rats // Physiol, and Behav. 1988. - Vol. 42, N 2. - P. 125-130.

238. Holzenberger M., Kappeler L., De Magalhaes Filho C. IGF-1 signaling and aging // Exp Gerontol. 2004. - V. 39, N11 -12. - P. 1761 -1764.

239. Hsu H.K., Peng M.-T. Hypothalamic neuron number of the old female rats // Gerontology. 1978. - V. 24. - P. 434—440.

240. Hsu H., Huang J., Shu H.B., Baichwal V., Goeddel D.V. TNF-dependent recruitment of the protein kinase RIP to the TNF receptor-1 signaling complex // Immunity. 1996. - V. 4, 4. - P.387-396.

241. Hsu J.J., Kamath-Loeb A.S., Glick E., Wallden B., Swisshelm K., Rubin B.P., Loeb L.A. Werner syndrome gene variants in human sarcomas // Mol. Carcinog. 2010. -V. 49, N2. - P. 166-174.

242. Hu S., Peterson P.K., Chao C.C. Cytokine-mediated neuronal apoptosis // Neurochem. Int. 1997. - V. 30, № 4.5. . p. 427-431.

243. Hu Y., Ding L., Spencer D.M., Nunez G. WD-40 repeat region regulates Apaf-1 self-association and procaspase-9 activation // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273,N50.-P. 33489-33494.

244. Hu Y., Benedict M.A., Ding L., Nunez G. Role of cytochrome c and dATP/ATP hydrolysis in Apaf-1-mediated caspase-9 activation and apoptosis // EMBO J. 1999. - V. 18, N13. - P.3586-3595.

245. Hui H., Fernando M.A., Heaney A.P. The alpha(l)-adrenergic receptor antagonist doxazosin inhibits EGFR and NF-kappaB signalling to induce breast cancer cell apoptosis // Eur. J. Cancer. 2008. - V. 44, № 1. - P. 160-166.

246. Hundley J.E., Koester S.K., Troyer D.A., Hilsenbeck S.G., Subler M.A., Windle J.J. Increased tumor proliferation and genomic instability without decreased apoptosis in MTV-ras mice deficient in p53 // Mol. Cell Biol. 1997. - V. 17, N2. -P. 723-731.

247. Iannone V. Stress und Krankheit // Raum und Zeit. 1990. - V. 9, N4. - P. 6062.

248. Ikeda H., Hirato J., Akami M., Matsuyama S., Suzuki N., Takahashi A., Kuroiwa M. Bcl-2 oncoprotein expression and apoptosis in neuroblastoma // J. Pediatr. Surg. 1995. - V. 30, N6. - P. 805-808.

249. Ikeda H., Hirato J., Akami M., Suzuki N., Takahashi A., Kuroiwa M., Matsuyama S. Massive apoptosis detected by in situ DNA nick end labeling in neuroblastoma // Amer. J. Surg. Pathol. 1996. - V. 20, N6. - P. 649-655.

250. Imam H., Eriksson B., Lukinius A., Janson E.T., Lindgren P.G., Wilander E., Oberg K. Induction of apoptosis in neuroendocrine tumors of the digestive system during treatment with somatostatin analogs // Acta Oncol. 1997a. - V. 36, № 6. - P. 607-614.

251. Imam H., Gobi A., Eriksson B., Oberg K. Interferon-alpha induces bcl-2 proto-oncogene in patients with neuroendocrine gut tumor responding to its antitumor action // Anticancer Res. 19976. - V. 17, № 6D. - P. 4659-4665.

252. Impallomeni M., Yeo T., Rudd A. et al Investigation of anterior pituitary function in eldrly patients over the age of 75 // Quart. J. Med. 1987. - V. 63. - P. 505—515.

253. Ishii N. Role of oxidative stress from mitochondria on aging and cancer // Cornea. 2007. - V. 26. - № 9 Suppl 1. - P. S3-9.

254. Israels L.G., Israels E.D. Apoptosis // Oncologist. 1999. - V. 4, N4. - P.332-339.

255. Ivanov V.N., Nikolic-Zugic J. Transcription factor activation during signal-induced apoptosis of immature CD4(+)CD8(+) thymocytes. A protective role of c-Fos // J Biol Chem. 1997. - V. 272, N13. - P.8558-8566.

256. Iwata M., Koshinaga T., Okabe I., Kurosu Y., Esumi M. Biological characteristics of neuroblastoma with spontaneous tumor reduction: a case report // J. Pediatr. Surg. 1995. - V. 30, N5. - P. 722-723.

257. Jacks T. Lessons from the p53 mutant mouse // J. Cancer Res. Clin. Oncol. -1996. V. 122, N6. - P.319-327.

258. Jourdan M., Zhang X.G., Portier M., Boiron J.M., Bataille R., Klein B. IFN-a induced autocrine production of IL-6 in myeloma cell lines // J. Immunol. -1991. -V. 147. P. 4402-4407.

259. Jourdan M., Vos J. de, Mechti N., Klein B. Regulation of Bcl-2-family proteins in myeloma cells by three myeloma survival factors: interleukin-6, interferon-alpha and insulin-like growth factor 1 // Cell Death Differ. 2000. - V. 7. -P. 1244-1252.

260. Juiius M., Maroun C., Haughn L. Distinct roles for CD4 and CD8 as coreceptors in antigen receptor signalling // Immunology Today. 1993. V. 14. - P. 177-182.

261. Kagotani Y., Hashimoto T., Tsuruo Y., Kawano H., Daikoku S., Chihara K. Development of the neuronal system containing neuropeptide Y in the rat hypothalamus // Int. J. Dev. Neuroscience. 1989a. - V. 7, № 4. - P. 359-374.

262. Kagotani Y., Hisano S., Tsuruo Y., Daikoku S., Chihara K. Vasopressin-deficient paraventricular magnocellular neurons of homozygous Brattleboro rats synthesize neuropeptide Y // Neuroscience Lett. 1990b. - V. 112, № 1. - P. 37-42.

263. Kalsbeek A., Fliers E., Hofman M.A., Swaab D.F., Buijs R.M. Vasopressin and the output of the hypothalamic biological clock // J. Neuroendocrinol. 2010. -V. 22,N5.-P. 362-372.

264. Kan H., Xie Z., Finkel M.S. TNF-alpha enhances cardiac myocyte NO production through MAP kinase-mediated NF-kappaB activation // Am. J. Physiol. -1999. V. 277, N4 Pt 2. - P.H1641-H1646.

265. Kasckow J., Xiao C., Herman J.P. Glial glucocorticoid receptors in aged Fisher 344 (F344) and F344/Brown Norway rats // Exp. Gerontol. 2009. - V. 44, N5. - P.335-343.

266. Karunagaran D., Tzahar E., Beerli R.R., Chen X. et al. ErbB-2 is a common auxiliary subunit of NDF and EGF receptors: implications for breast cancer // EMBO J.- 1996.-V. 15.-P. 254-264.

267. Kaufman J.M., Deslypere J. P., Girt M., Vermeulen A. Neuroendocrine regulation of pulsative luteinizing hormone secretion in elderly men // J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 1990. - V. 37. - N 3. - P. 421—430.

268. Kaur M., Sharma S., Kaur G. Age-related impairments in neuronal plasticity markers and astrocytic GFAP and their reversal by late-onset short term dietary restriction // Biogerontology. 2008. - V. 9, N6. - P.441-454.

269. Keck M. E., Hatzinger M., Wotjak C. T., Landgraf R., Holsboer F., Neumann I. D. Ageing alters intrahypothalamic release patterns of vasopressin and oxytocin in rats // Eur. J. Neurosci. 2000. - V. 12, № 4. - P. 1487-1494.

270. Keino H., Masaki S., Kawarada Y., Naruse I. Apoptotic degeneration in the arhinencephalic brain of the mouse mutant Pdn/Pdn // Brain Res. Dev. Brain Res. -1994,-V. 78,N2.-P. 161-168.

271. Kerr J.F.R. Apoptosis: A basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics // Br. J. Cancer. 1972. - V. 26. - P. 239-256.

272. Kjaer A., Larsen P.J., Knigge U., Moller M., Warberg J. Histamine stimulates c-fos expression in hypothalamic vasopressin-, oxytocin-, and corticoliberin-releasing hormone-containing neurons // Endocrinology. 1994. - V. 134, N1. - P. 482-491.

273. Kiatipattanasakul W., Nakamura S., Hossain M.M., Nakayama H., Uchino T., Shumiya S., Goto N., Doi K. Apoptosis in the aged dog brain. Acta Neuropathol (Berl). 1996 92(3):242-248.

274. Kim J.M., Chung Y.H., Shin C.M., Kim M.J., Lee K.W., Cha C.I. Spatial and temporal distribution of Bax in rat spinal cord during normal aging // Neurol Res. -2001.-V. 23, N1. P.83-86.

275. Kimura M., Cao X., Skurnick J., Cody M., Soteropoulos P., Aviv A. Proliferation dynamics in cultured skin fibroblasts from Down syndrome subjects // Free Radic Biol Med. 2005. -V. 39, N3. - P.374-380.

276. Ko L.J., Prives C. p53: puzzle and paradigm // Genes Dev. 1996. - V. 10, N9. - P.1054-1072.

277. Kononen J., Honkaniemi J., Alho H., Koistinaho J., Iadarola M., Pelto-Nuikko M. Fos-like immunoreactivity in the rat hypothalamic-pituitary axis after immobilization stress //Endocrinology. 1992. - V. 130, N5. - P. 3041-3047.

278. Kubo T., Nonomura T., Enokido Y., Hatanaka H. Brain-derived neurotrophic factor (BDNF) can prevent apoptosis of rat cerebellar granule neurons in culture // Brain Res. Dev. Brain Res. 1995. - V. 85, N2. - P. 249-258.

279. Kudielka B. M., Schmidt-Reinwald A. K., Hellhammer D. H., Schurmeyer T., Kirschbaum C. Psychosocial stress and HPA functioning: no evidence for a reduced resilience in healthy elderly men // Stress. 2000. - V. 3, № 3. - P. 229-240.

280. Kulig E., Camper S.A., Kuecker S., Jin L. et al. Remodeling of hyperplastic pituitaries in hypothyroid us-subunit knockout mice after thyroxine and 1713-estradiol treatment: role of apoptosis // Endocr. Pathol. 1998. - V. 9, N3. - P. 261274.

281. Kumari S.R., Alvarez-Gonzalez R. Expression of c-jun and c-fos in apoptotic cells after DNA damage // Cancer Invest. 2000. - V. 18, N8. - P. 715-721.

282. Kvetnansky R., Dobrakovova M., Oprsalova Z., Jezova D. Stress-circulating catecholamines and ACTH // Neuroend. Lett. 1988. - V. 10, N4. - P. 214.

283. Kyprianou N., Isaacs J.T. Expression of transforming growth factor-beta in the rat ventral prostate during castration-induced programmed cell death // Molecul. Endocrinol. 1989. - V. 3, N10. - P. 1515-1522.

284. Lachuer J., Gaillet S., Barbagli B., Buda M., Tappas M. Differential early time course activation of the brainstem catecholaminergic groups in response to various stresses //Neuroendocrinology. -1991. V. 53, № 5. - P. 589-596.

285. Lafarga M., Berciano M.T., Martinez-Guijarro F.J., Andres M.A., Mellstrom B., Lopez-Garcia C., Naranio J.R. Fos-like expression and nuclear size in osmotically stimulated supraoptic nucleus neurons // Neuroscience. 1992. - V. 50, N4. - P. 867-875.

286. Larsen P.J., Sheikh S.P., Mikkelsen J.D. Osmotic regulation of neuropeptide Y and its binding sites in the magnocellular hypothalamo-neurohypophysial pathway // Brain Res. 1992. - V. 573, № 2. - P. 181-189.

287. Lechner H., Amort M., Steger M.M., Maczek C., Grubeck-Loebenstein B. Regulation of CD95 (APO-1) expression and the induction of apoptosis in human T cells: changes in old age // Internat. Arch. Allergy and Applied Immunol. 1996. -V.110,N3.-P. 238-243.

288. Lewis J., Wesselingh S.L., Griffin D.E., Hardwick J.M. Alphavirus-induced apoptosis in mouse brains correlates with neurovirulence // J. Virol. 1996. - V. 70, N3.-P. 1828-1835.

289. Li Y.W., Halliday G.M., Joh T.H., Geffen L.B., Blessing W. Tyrosine hydroxylase-containing neurons in the supraoptic and paraventricular nuclei of the adult human // Brain Res. 1988. V. 461. - P. 75-86.

290. Li Y., Kong L., Yang Y., Li K. Mutant TNFalpha Negatively Regulates Human Breast Cancer Stem Cells from MCF7 in Vitro // Cancer Biol. Ther. 2007. -V. 6, №9. - P. 1480-1489.

291. Li K., Casta A., Wang R., Lozada E., Fan W., Kane S., Ge Q., Gu W., Orren D., Luo J. Regulation of WRN protein cellular localization and enzymatic activities by SIRT1 -mediated deacetylation // J. Biol. Chem. 2008. - V. 283, N12. - P.7590-7598

292. Lim H.H., De Lano F.A., Schmid-Schonbein G.W. Life and death cell labeling in the microcirculation of the spontaneously hypertensive rat // J. Vase. Res.- 2001. V. 38, N3. - P. 228-236.

293. Liu H., Chang D.W., Yang X. Interdimer processing and linearity of procaspase-3 activation. A unifying mechanism for the activation of initiator and effector caspases // J Biol Chem. 2005. - V. 280, N12. - P. 11578-11582.

294. Liu F.J., Barchowsky A., Opresko P.L. The Werner syndrome protein functions in repair of Cr(VI)-induced replication-associated DNA damage // Toxicol. Sci. 2009. - V. 110, N2. - P.307-318.

295. Lo M. J., Kau M. M., Cho W. L., Wang P. S. Aging effects on the secretion of corticosterone in male rats // J. Investig. Med. 2000. - V. 48, № 5. - P. 335-342.

296. Lutomska A., Lebedev A., Scharffetter-Kochanek K., Iben S. The transcriptional response to distinct growth factors is impaired in Werner syndrome cells It Exp. Gerontol. 2008. - V. 43, N9. - P.820-826.

297. Madden S.D., Donovan M., Cotter T.G. Key apoptosis regulating proteins are down-regulated during postnatal tissue development // Int. J. Dev. Biol. 2007. - V. 51,№5.-P. 415-423.

298. Makarenko I.G., Meguid M.M., Gatto L., Goncalves C.G., Ramos E.J., Chen C., Ugrumov M.V. Hypothalamic 5-HTlB-receptor changes in anorectic tumor bearing rats // Neurosci. Lett. 2005. - V. 376, N2. - P.71-75.

299. Malik U.R., Makower D.F., Wadler S. Interferon-mediated fatigue // Cancer. 2001. - V. 92, N Suppl. 6. - P. 1664-1668.

300. Mandavilli B.S., Rao K.S. Accumulation of DNA damage in aging neurons occurs through a mechanism other than apoptosis // J. Neurochem. 1996. - V. 67, N4.-P. 1559-1565.

301. Marrack P., Kappler J., Mitchell T. Type I interferons keep activated T cells alive // J. Exp. Med. 1999. - V. 189, N 3. - P. 521-530.

302. Martin G.M. Genes, rates of aging, and duration of human life // Am. J. Med.- 2004. V. 117, N11. - P.882-883.

303. Marx C., Bornstein S.R., Wolkersdorfer G.W. Cellular immune-endocrine interaction in adrenocortical tissues // Eur. J. Clin. Invest. 2000.- V. 30, N Suppl 3. P. 1-5.

304. Mattson M.P., Pedersen W.A., Duan W., Culmsee C., Camandola S. Cellular and molecular mechanisms underlying perturbed energy metabolism and neuronal degeneration in Alzheimer's and Parkinson's diseases // Ann. NY Acad. Sci. 1999. -V. 893. -P.154-175.

305. Mattson M.P., Duan W., Pedersen W.A., Culmsee C. Neurodegenerative disorders and ischemic brain diseases // Apoptosis. 2001. - V. 6, N1-2. - P.69-81.

306. Matuoka K., Takenawa T. Downregulated expression of the signaling molecules Nek, c-Crk, Grb2/Ash, PI 3-kinase pi 10 alpha and WRN during fibroblast aging in vitro // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - V. 1401, N2. - P.211-215.

307. McCubrey J.A., May W.S., Duronio V., Mufson A. Serine/threonine phosphorylation in cytokine signal transduction // Leukemia. 2000. - V. 14, P. 1. -P. 9-21.

308. McEwen B. S. Effects of adverse experiences for brain structure and function // Biol. Psychiatry. 2000. - V. 48, № 8. - P. 721-731.

309. McLaughlin B.A., Hartnett K.A. Caspase 3 activation is essential for neuroprotection in preconditioning // PNAS. 2003. - V. 100, N2. - P.715-720.

310. McLornan D., Percy M., McMullin M.F. JAK2 V617F: A Single Mutation in the Myeloproliferative Group of Disorders // Ulster Med. J. 2006. - V. 75, N2. -P.112-119.

311. Melcangi R.C., Cavarretta I., Magnaghi V., Ciusani E., Salmaggi A. Corticosteroids protect oligodendrocytes from cytokine-induced cell death // Neuroreport. 2000. - V. 11, N18.-P. 3969-3972.

312. Messi E., Zanizi M., Martini L. Aging does not influence the ultrashort feedback control of GnRH in vitro // Acta endocr. 1990. - V. 122. - P. 329-335.

313. Meurisse M., Gonzalez A., Delsol G., Caba M. et al. Estradiol receptor-alpha expression in hypothalamic and limbic regions of ewes is influenced by physiological state and maternal experience // Horm. Behav. 2005. - V. 48, N1. - P. 34-43.

314. Mieites J. Changes in neuroendocrine control of anterior pituitary function during ageing //Neuroend. 1982. - V. 34. - P. 151—156.

315. Minami R., Muta K., Ilseung C., Abe Y., Nishimura J., Nawata H. Interleukin-6 sensitizes multiple myeloma cell lines for apoptosis induced by interferon-alpha // Exp. Hematol. 2000. - V. 28, N 3. - P. 244-255.

316. Missale C., Govoni S., Croce L., Bosio A., Spano P.F., Trabucchi M. Changes of -endorphin and met-enkephalin content in the hypothalamus-pituitary axis induced by aging // J. Neurochem. 1983. - V. 40, N1. - P. 20-24.

317. Minami R., Muta K., Ilseung C., Abe Y., Nishimura J., Nawata H. Interleukin-6 sensitizes multiple myeloma cell lines for apoptosis induced by interferon-alpha// Exp. Hematol. 2000. V. 28. N 3. P. 244-255.

318. Mohaghegh P., Hickson I.D. DNA helicase deficiencies associated with cancer predisposition and premature ageing disorders // Hum. Mol. Genet. 2001. -V. 10, N7. - P.741-746.

319. Molina P.E. Noradrenergic inhibition of TNF upregulation in hemorrhagic shock // Neuroimmunomodulation. 2001a. - V. 9, N3. - P. 125-133.

320. Molina P.E. Opiate modulation of hemodynamic, hormonal, and cytokine responses to hemorrhage // Shock. 20016. - V. 15, N6. - P.471-478.

321. Molina P.E., Bagby G.J., Stahls P. Hemorrhage alters neuroendocrine, hemodynamic, and compartment-specific TNF responses to LPS // Shock. 2001. -V. 16, N6. - P.459-465.

322. Molnar J., Holeczy E., Marton J. Hypophysial trophic hormone response to adrenalectomy and ether stress in rats, bearing anterior pituitary tissue in third ventricle of the brain // Endocr. exp. 1990. - V. 24, N3. - P. 341-350.

323. Moro A., Perea S.E., Pantoja C., Santos A., Arana M.D., Serrano M. IFNalpha 2b induces apoptosis and proteasome-mediated degradation of p27Kipl in a human lung cancer cell line // Oncol. Rep. 2001. - V. 8. - P. 425-429.

324. Muftuoglu M., Oshima J., von Kobbe C., Cheng W.H., Leistritz D.F., Bohr V.A. The clinical characteristics of Werner syndrome: molecular and biochemical diagnosis // Hum. Genet. 2008. - V. 124, N4. - P.369-377.

325. Müller U., Stephan D., Philippsen P., Steinmetz M. Orientation and molecular map position of the complement genes in the mouse // MHC EMBO J. -1987a. V. 6, N2. - P.369-373.

326. Müller U., Jongeneel C.V., Nedospasov S.A., Lindahl K.F., Steinmetz M. Tumour necrosis factor and lymphotoxin genes map close to H-2D in the mouse major histocompatibility complex // Nature. 19876. - V. 325, N6101. - P.265-267.

327. Multani A.S., Chang S. WRN at telomeres: implications for aging and cancer // J. Cell Sei. 2007. - V. 120, NPt 5. - P.713-721.

328. Muskhelishvili L., Hart R.W., Turturro A., James S.J. Age-related changes in the intrinsic rate of apoptosis in livers of diet-restricted and ad libitum-fed B6C3F1 mice // Amer. J. Pathol. 1995. - V. 147, N1. - P. 20-24.

329. Muzylak M., Maslinska D. Neurotoxic effect of vincristine on ultrastructure of hypothalamus in rabbits // Folia Histochem. Cytobiol. 1992. - V. 30, N3. - P. 113-117.

330. Nagai M.A., Marques L.A., Torloni H., Brentani M.M. Genetic alterations in c-erbB-2 protooncogene as prognostic markers in human primary breast tumors // Oncology. 1993. - V. 50, N6. - P.412-417.

331. Nagy P., Jenei A., Damjanovich S., Jovin T.M., Szolosi J. Complexity of signal transduction mediated by ErbB2: clues to the potential of receptor-targeted cancer therapy // Pathol. Oncol. Res. 1999. - V. 5, N4. - P. 255-271.

332. Narayanan S. Laboratory markers as an index of aging // Ann. Clin. Lab. Sei. 1996,-V. 26, N1. - P. 50-59.

333. Nehlin J.O., Skovgaard G.L., Bohr V.A. The Werner syndrome. A model for the study of human aging // Ann. NY Acad. Sci. 2000. - V. 908. - P. 167-179.

334. Nolan C. J., Bestervelt L. L., Mousigian C. A., Maimansomsuk C. A., Yong C., Piper W. N. Chronic ethanol consumption depresses hypothalamic-pituiary-adrenal function in aged rats // Life Sci. 1991. - V. 49, № 25. - P. 1923-1928.

335. Oberg K. Interferon in the management of neuroendocrine GEP-tumors: a review// Digestion. 2000a. - V. 62, Suppl 1. - P. 92-97.

336. Oberg K. State of the art and future prospects in the management of neuroendocrine tumors // Q. J. Nucl. Med. 20006. - V. 44. - P. 3-12.

337. Odio M., Brodish A. Age-related adaptation of pituitary-adrenocortical responses to stress //Neuroendocrinology. 1989. - V. 49, N4. - P. 382-388.

338. Odio M.R., Brodish A. Glucoregulatory responses of adult and aged rats after exposure to chronic stress // Exp. Gerontol. 1990. - V. 25, N2. - P. 159-172.

339. Olivetti G., Abbi R., Quaini F., Kajstura J., Cheng W., Nitahara J.A., Quaini E., Di Loreto C., Beltrami C.A., Krajewski S., Reed J.C., Anversa P. Apoptosis in failling human heart // New Engl. J. Med. 1997. - V. 336, N16. - P.l 131-1141.

340. Oliver F.J., Collins M.K.L., Lypez-Rivas A. Overexpression of a heterologous thymidine kinase delays apoptosis induced by factor deprivation and inhibitors of deoxynucleotide metabolism // J. Biol. Chem. 1997. - V. 272, N16. - P. 10624-10630.

341. Olovnikov AM. Telomeres, telomerase, and aging: origin of the theory // Exp. Gerontol. 1996. - V. 31, N4. -P.443-448.

342. Olovnikov A. Lunasensor, infradian rhythms, telomeres, and the chronomere program of aging // Ann. NYAcad. Sci. 2005. - V. 1057. - P. 112-132.

343. Olovnikov A.M. Hypothesis: lifespan is regulated by chronomere DNA of the hypothalamus // J. Alzheimers Dis. 2007. - V. 11, N2. - P.241-252.

344. Oshima J., Campisi J., Tannock T.C., Martin G.M. Regulation of c-fos expression in senescing Werner syndrome fibroblasts differs from that observed in senescing fibroblasts from normal donors // J. Cell Physiol. 1995. - V. 162, N2. -P.277-283.

345. Opresko P.L., Calvo J.P., von Kobbe C. Role for the Werner syndrome protein in the promotion of tumor cell growth // Mech. Ageing Dev. 2007. - V. 128, N7-8. - P.423-436.

346. Orgel L.E. The maintenance of the accuracy of protein synthesis and its relevance to aging // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1963. - V. 49. - P. 517-521.

347. Overmier J. B., Seligman M. E. Effects of inescapable shock upon subsequent escape and avoidance responding // J. Comparative and Physiol. Psychology. 1967. - V. 63.-P. 28-33.

348. Palin K., Moreau M.L., Orcel H., Duvoid-Guillou A., Rabié A., Kelley K.W., Moos F. Age-impaired fluid homeostasis depends on the balance of IL-6/IGF-I in the rat supraoptic nuclei // Neurobiol. Aging. 20096. - V. 30, N10. - P.1677-1692.

349. Palkovits M. Hypothalamic regulation of food intake // Ideggyogy Sz. 2003. -V. 56,N9-10.-P. 288-302.

350. Palmer J.N., Hartogensis W.E., Patten M., Fortuin F.D., Long C.S. Interleukin-1 beta induces cardiac myocyte growth but inhibits cardiac fibroblast proliferation in culture // J. Clin. Invest. 1995. - V. 95, N6. - P.2555-2564.

351. Paneda C., Arroba A.I., Frago L.M., Holm A.M., Romer J., Argente J., Chowen J.A. Growth hormone-releasing peptide-6 inhibits cerebellar cell death in aged rats //Neuroreport. 2003. - V. 14, N12. - P. 1633-1635.

352. Pardue M.L. In situ hybridization / Hanes, B.D. & Higgins, S.J., eds., Nucleic acid hybridization, a practical approach; IRL Press, Oxford, 1985. P. 19851791985202.

353. Pearson P.L., Anderson L.L., Jacobson C.D. The prepubertal ontogeny of neuropeptide Y-like immunoreactivity in the male Meishan pig brain // Brain Res. -1996.-V. 91,№ 1.-P. 41-69.

354. Pellucciari C., Bottone M.G., Schaack V., Manfredi A.A., Barni S. Etoposide at different concentrations may open different apoptotic pathways in thymocytes // Europ. J. Hystochemistry. 1996. - V. 40, N4. - P. 289-298.

355. Persoons J.H., Moes N.M., Broug-Holub E., Schornagel K., Tilders F.J., Kraal G. Acute and long-term effects of stressors on pulmonary immune functions // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1997. - V. 17, N2. - P. 203-208.

356. Petersen S.L., Wang L., Yalcin-Chin A., Li L., Peyton M., Minna J., Harran P., Wang X. Autocrine TNFalpha signaling renders human cancer cells susceptible to smac-mimetic-induced apoptosis // Cancer Cell. 2007. - V. 12, № 5. - P. 445-456.

357. Peterson R.P. Magnocellular neurosecretory centers in the rat hypothalamus // J. Сотр. Neurol. 1966. - V. 128, N2. - P. 181-185.

358. Petkov V.D., Milanov S., Kagan V., Petkov V.V. Hormone and end products of lipide peroxidation in the blood. Its level as indications of biological aging // Докл. Болг. АН. 1989. - V. 42. - P.95—98.

359. Phaneuf S., Leeuwenburgh C. Cytochrome с release from mitochondria in the aging heart: a possible mechanism for apoptosis with age // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Сотр. Physiol. 2002. - V. 282, N2. - R423-R430.

360. Phelps CJ., Carlson S.W., Gallagher M.J., Sladek C.D. Vasopressin in aged rats: longitudinal studies of vasopressin excretion in Sprague-Dawley and Fisher 344 strains // Neurobiol. Aging. 1989. - V. 10. - P. 215—231.

361. Pilling D, Akbar AN, Girdlestone J, Orteu CH, Borthwick NJ, Amft N, Scheel-Toellner D, Buckley CD, Salmon M. Interferon-beta mediates stromal cellrescue of T cells from apoptosis // Eur. J. Immunol. 1999. - V. 29, N 3. - P. 10411050.

362. Plaznik A.K., Kostowski W. Mechanismi neuroprzekaznikowe w stresie i ich zwiazek z patomechanizem depresjii; badania przedkliniczne // Psychiat. pol. 1989.- V. 23, N 4. P. 322-327.

363. Plett P.A., Gardner E.M., Murasko D.M. Age-related changes in interferonalpha/beta receptor expression, binding, and induction of apoptosis in natural killer cells from C57BL/6 mice // Mech. Ageing Dev. 2000. - V. 118. - P. 129-144.

364. Plotsky P. M., Thrivikraman K. V., Meaney M. J. Central and feedback regulation of hypothalamic corticotropin-releasing factor secretion // Ciba Found Symp. 1993. - V. 172. - P. 59-84.

365. Pollack M., Phaneuf S., Dirks A. and Leeuwenburgh C. The role of apoptosis in the normal aging brain, skeletal muscle, and heart // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2002.- V. 959.-P. 93-107.

366. Poot M., Jin X., Hill J.P., Gollahon K.A., Rabinovitch P.S. Distinct functions for WRN and TP53 in a shared pathway of cellular response to 1-beta-D-arabinofuranosylcytosine and bleomycin // Exp. Cell Res. 2004. — V. 296, N2. -P.327-336.

367. Possel H., Noack H., Augustin W., Keilhoff G., Wolf G. 2,7-Dihydrodichlorofluorescein diacetate as a fluorescent marker for peroxinitrite formation // FEBS Lett. 1997. - V. 416, № 2. - P. 175-178.

368. Radziszewska E., Piwocka K., Bielak-Zmijewska A., Skierski J., Sikora E. Effect of aging on UVC-induced apoptosis of rat splenocytes // Acta Biochim. Pol. -2000. V. 47. - P. 339-347.

369. Rahman M.M., Lucas A.R., McFadden G. Viral TNF Inhibitors as Potential Therapeutics // Pathogen-Derived Immunomodulatory Molecules, edited by Padraic G. Fallon. 2009 Landes Bioscience and Springer Science.

370. Ramos E.J., Romanova I.V., Suzuki S., Chen C., Ugrumov M.V., Sato T., Goncalves C.G., Meguid M.M. Effects of omega-3 fatty acids on orexigenic and anorexigenic modulators at the onset of anorexia // Brain Res. 2005. - V. 1046, N1-2. - P.157-164.

371. Rand R., Kos W., Swaab D.F., Van Zweiten E.J. Age related changes in vasopressin production sites in fresh brain slices of senescent rat brains // Neuroend. Lett. 1988. - V. 10. - P. 269.

372. Rapp U.R., Rennefahrt U., Troppmair J. Bcl-2 proteins: master switches at the intersection of death signaling and the survival control by Raf kinases // Biochem. Biophys Acta. 2004. - V. 1644, N2-3. - P. 149-58.

373. Ravid R., Kos W., Swaab D.F., Van Zweiten E.J. Age related changes in vasopressin production sites in fresh brain slices of senescent rat brains // Neuroend. Lett. 1988. - V. 10, N4. - P. 269.

374. Ray P.K., Choudhury S.R. Vasopressinergic axon collaterals and axon terminals in the magnocellular neurosecretory nuclei of the rat hypothalamus // Acta anat. 1990. - V. 137, N1. - P. 37-44.

375. Real M.A., Heredia R., Davila J.C., Guirado S. Efferent retinal projections visualized by immunohistochemical detection of the estrogen-related receptor beta inthe postnatal and adult mouse brain // Neurosci. Lett. 2008. - V. 438, N1. - P.48-53.

376. Rechard L., Hervonen H. Ultrastructural changes in the neurohypophysis of the aged male rat // Cell Tiss. Res. 1982. - V. 226. - P. 51—62.

377. Reed J.C. Bcl-2 and the regulation of programmed cell death. // J. Cell Biol. -1994.-V. 124, N1-2. P. 1-6.

378. Reuss S., Hurlbut E.C., Speh J.C., Moore R.Y. Immunohistochemical evidence for the presence of neuropeptides in the hypothalamic suprachiasmatic nucleus of ground squirrels // Anat. Rec. 1989. - V. 225, N4. - P. 341-346.

379. Reymond M.J. Age-related loss of the responsiveness of the tuberoinfundibular dopaminergic neurons to prolactin in the female rat // Neuroend. -1990.-V. 52.-P. 490-996.

380. Rhodes C.H., Morrell J.I., Pfaff D.W. Immunohistochemical analysis of magnocellular elements in rat hypothalamus: distribution and numbers of cells containing neurophysin, oxytocin and vasopressin // J. Comp. Neurol. 1981. - V. 198, N1,-P. 45-64.

381. Ronca F., Chan S.-L., Yu V.C. l-(5-Isoquinolinesulfonyl)-2-methylpiperazine induces apoptosis in human neuroblastoma cells, SH-SY5Y, through a p53-dependent pathway // J. Biol. Chem. 1997. - V. 272, N7. - P. 4252-4260.

382. Robak A., Szteyn S. The topography and cytoarchitectonics of the nuclei of supraoptic and preoptic areas in insectivores // Folia Morphol. (Warsz.). 1989. - V. 48,N1-4.-P. 201-218.

383. Rosa Santos S.C., Dumon S., Mayeux P., Gisselbrecht S., Gouilleux F. Cooperation between STAT5 and phosphatidylinositol 3-kinase in the IL-3dependent survival of a bone marrow derived cell line // Oncogene. 2000. - V. 19, N9.-P. 1164-1172.

384. Ross J.S., Fletcher J.A., Bloom K.J., Linette G.P., Stec J., Symmans W.F., Pusztai L., Hortobagyi G.N. Targeted Therapy in Breast Cancer The HER-2Ineu Gene and Protein // Mol. Cell Proteom. 2004. - V. 3. - P. 379-398.

385. Rothe M., Sarma V., Dixit V.M., Goeddel D.V. TRAF2-mediated activation of NF-kappa B by TNF receptor 2 and CD40 // Science. 1995. - V. 269, N5229. -P. 1424-1427.

386. Ruddle N.H., Waksman B.H. Cytotoxicity mediated by soluble antigen and lymphocytes in delayed hypersensitivity. II. Correlation of the in vitro response with skin reactivity // J. Exp. Med. 1968a. - V: 128, N6. - P. 1255-1265.

387. Ruddle N.H., Waksman B.H. Cytotoxicity mediated by soluble antigen and lymphocytes in delayed hypersensitivity. 3. Analysis of mechanism // J. Exp. Med. -19686. V. 128, N6. - P.1267-1279.

388. Ruddle N.H., Waksman B.H. Cytotoxicity mediated by soluble antigen and lymphocytes in delayed hypersensitivity. I. Characterization of the phenomenon // J. Exp. Med. 1968b.-V. 128, N6. - P.1237-1254.

389. Rusin M., Zajkowicz A., Butkiewicz D. Resveratrol induces senescence-like growth inhibition of U-2 OS cells associated with the instability of telomeric DNA and upregulation of BRCA1 // Mech. Ageing Dev. 2009. - V. 130, N8. - P.528-537.

390. Sabbatini P., McCormick F. Phosphoinositide 3-OH Kinase (PI3K) and PKB/Akt Delay the Onset of p53-mediated, Transcriptionally Dependent Apoptosis // J. Biol. Chem. 1999. - V. 274. - P. 24263-24269.

391. Sakagami H., Kondo H. Molecular cloning and developmental expression of a rat homologue of death-associated protein kinase in the nervous system // Brain Res. Mol. Brain Res. 1997. - V. 52, № 2. - P. 249-256.

392. Samples S.D., Dubinsky J.M. Aurintricarboxylic acid protects hippocampal neurons from glutamate excitotoxicity in vitro // J. Neurochem. 1993. - V. 61, N1. -P. 382-385.

393. Sanceau J., Hiscott J., Delattre O., Wietzerbin J. IFN-beta induces serine phosphorylation of Stat-1 in Ewing's sarcoma cells and mediates apoptosis via induction of IRF-1 and activation of caspase-7 // Oncogene. 2000. - V. 19. - P. 3372-3383.

394. Sanchez A., Alvarez A.M., Benito M., Fabregat I. Apoptosis induced by transforming growth factor-beta in fetal hepatocyte primary cultures: involvement of reactive oxygen intermediates // J. Biol. Chem. 1996. - V. 271, N13. - P. 74167422.

395. Sapolsky R.M„ Krey L.C, Mc Ewen B.S., Rainbow T.C Do vasopressin-related peptides induce hippocampal corticosterone receptors? Inplications for aging //J.Neurosci. 1984. - V. 4. - P. 1479—1485.

396. Sapolsky R.M., Krey L.C., McEwen B.S. The neuroendocrinology of stress and ageing: the glucocorticoid cascade hypothesis // Endocr. Rev. 1986. - V. 7. - P. 284-301.

397. Sarkar F.H., Li Y. Cell signaling pathways altered by natural chemopreventive agents // Mutat. Res. 2004. - V. 555, N1-2. - P. 53-64.

398. Sasaki M., Kumazaki T., Takano H., Nishiyama M., Mitsui Y. Senescent cells are resistant to death despite low Bcl-2 level // Mech. Ageing Dev. 2001. - V. 122,N15.-P. 1695-1706.

399. Scaccianoce S., Di Sciullo A., Angelucci L. Age-related changes in hypothalamo-pituitary-adrenocortical axis activity in the rat // Neuroend. 1990. - V. 52.-P. 150-155.

400. Scaffidi C. et al., 1999; Scaffidi C., Kirchhoff S., Krammer P.H., Peter M.E. Apoptosis signaling in lymphocytes // Curr. Opin. Immunol. 1999. - V. 11, N3. - P. 277-285.

401. Schechter R., Abboud M. Neuronal synthesized Insulin roles on neural differentiation within fetal rat neuron cell cultures // Brain Res. Dev. Brain Res. -2001.-V. 127, N1,-P. 41-49.

402. Schelman W.R., Andres R.D., Sipe K.J., Kang E., Weyhenmeyer J.A. Glutamate mediates cell death and increases the Bax to Bcl-2 ratio in a differentiated neuronal cell line // Brain Res. Mol. Brain Res. 2004. - V. 128. - P. 160-169.

403. Schimchowitsch S., Moreau C., Laurent F., Stoeckel M.E. Distribution and morphometric characteristics of oxytocin- and vasopressin-immunoreactive neurons in the rabbit hypothalamus // J. Comp. Neurol. 1989. - V. 285, N3. - P.304-324.

404. Schindowski K., Leutner S., Muller W.E., Eckert A. Age-related changes of apoptotic cell death in human lymphocytes // Neurobiol. Aging. 2000. - V. 21. - P. 661-670.

405. Schipper H., Brawer J. R., Nelson J. F., et al Role of the gonads in the histologic changes in the arcuate nucleus // Biol. Reprod. 1981. - V. 26. - P. 413— 419.

406. Schlessinger J. Cell signaling by receptor tyrosine kinases // Cell. 2000. - V. 103.-P. 211-225.

407. Schluter G., Boinska D., Nieman-Seyde S.C. Evidence for translational repression of the SOCS-1 major open reading frame by an upstream open reading frame // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - V. 268. - P. 255-261.

408. Selemon LD., Sladek Y.R. Diencephalic catecholamine neurones (A-ll, A-12, A-13, A-14) show divergent changes in the aged rats // J. CoTp. Neurol. 1986. - V. 254.-P. 113—124.

409. Selye H. Stress in health and disease. Boston, London: Butter-worths, 1976. -180 p.

410. Selye H., Tuchweber B. Stress in relation to aging and disease // Hypothalamus, pituitary and aging. Springfield, 111., 1976. P. 553—569.

411. Semenchenko G.V., Anisimov V.N., Yashin A.I. Stressors and antistressors: how do they influence life span in HER-2/neu transgenic mice? // Exp. Gerontol. -2004. -V. 39, N10. P. 1499-1511.

412. Sharov V.G., Sabbah H.N., Shimoiama H., Goussev A.V., Lesch M., Goldstein S. Evidence of cardiocyte apoptosis in myocardium of dogs with chronic heart failure // Am. J. Pathol. 1996. - V. 148, N1. - P. 41-49.

413. Shay J.W. and Wright W.E. Senescence and immortalization: role of telomeres and telomerase // Carcinogenesis. 2005. - V. 26, N5. -P.867—874.

414. Shen J., Loeb L.A. Unwinding the molecular basis of the Werner syndrome // Mech. Ageing Dev. 2001. - V. 122, N9. - P.921-944.

415. Shioda S., Shimoda Y., Nakai Y. Ultrastructural studies of medullary synaptic inputs to vasopressin-immunoreactive neurons in the supraoptic nucleus of the rat hypothalamus // Neurosci. Lett. 1992. - V. 148. - P. 155-158.

416. Simonian N.A., Getz R.L., Leveque J.C., Konradi C., Coyle J.T. Kainate induces apoptosis in neurons // Neuroscience. 1996a. - V. 74, N3. - P.675-683.

417. Simonian N.A., Getz R.L., Leveque J.C., Konradi C., Coyle J.T. Kainic acid induces apoptosis in neurons // Neuroscience. 19966. - V. 75, N4. - P. 1047-1055.

418. Slotkin T.A., McCook E.C., Seidler F.J. Cryptic brain cell injury caused by fetal nicotine exposure is assotiated with persistent elevations of c-fos protooncogene expression // Brain Res. 1997. - V. 750, № 1-2. - P. 180-188.

419. Smolen A.J. Image analytic techniques for quantification of immunohistochemical staining in the nervous system // Meth. Neurosci. 1990. - N3. - P. 208-229.

420. Solerte S.B., Bossolo P.A., Dalzano M. et al. ACTH-secreting system in ageing //Neuroend. Lett. 1988. - V. 10, N4. - P. 277.

421. Sommers J.A., Sharma S., Doherty K.M., Karmakar P., Yang Q., Kenny M.K., Harris C.C., Brosh R.M. Jr. p53 modulates RPA-dependent and RPA-independent WRN helicase activity // Cancer Res. 2005. - V. 65, N4. - P.1223-1233.

422. Soory M. Hormone mediation of immune responses in the progression of diabetes, rheumatoid arthritis and periodontal diseases // Curr. Drug Targets Immune Endocr. Metabol. Disord. 2002. - V. 2,1. - P.13-25.

423. Sortino M.A., Condorelli F., Vancheri C., Canonico P.L. Tumor necrosis factor-alpha induces apoptosis in immortalized hypothalamic neurons: involvement of ceramide-generating pathways // Endocrinology. 1999. - V. 140, N10. - P.4841-4849.

424. Spangelo B.L., Judd A.M., Call G.B., Zumwalt J., Gorospe W.C. Role of the cytokines in the hypothalamic-pituitary-adrenal and gonadal axes // Neuroimmunomodulation. 1995. - V. 2, N5. - P.299-312.

425. Spillare E.A., Robles A.I., Wang X.W., Shen J.C., Yu C.E., Schellenberg G.D., Harris C.C. p53-mediated apoptosis is attenuated in Werner syndrome cells // Genes Dev. 1999.-V. 13,N11.-P.1355-1360.

426. Spinedi E., Johnston C.A., Chisari A., Negro-Vilar A. Role of central epinephrine on the regulation of corticotropin-releasing factor and adrenocorticotropin secretion//Endocrinol. 1988. V. 122. P. 1977-1983.

427. Stahl N. et al., 1995 Stahl N., Farruggella T.J., Boulton T.G., Zhong Z., Darnell J.E. Jr., Yancopoulos G.D. Choice of STATs and other substrates specified by modular tyrosine-based motifs in cytokine receptors // Science. 1995. V. 267. P. 1349-1352.

428. Sternberger L.A., Joseph S.A. The unlabeled antibody method: contrasting color staining of paired pituitary hormones without antibody removal // J. Histochem. Cytochem. 1979. - V. 27, N12. - P. 1424-1429.

429. Stevenson H.S., Fu S.W., Pinzone J.J., Rheey J., Simmens S.J., Berg P.E. BP1 transcriptionally activates bcl-2 and inhibits TNFalpha-induced cell death in MCF7 breast cancer cells // Breast Cancer Res. 2007. - V. 9, № 5. - R60.

430. Strehler B.L. Time, cells and aging. New York, London: Academic Press, 1962.

431. Stoica G.E., Franke T.F., Moroni M., Mueller S. et al. Effect of estradiol on estrogen receptor-alpha gene expression and activity can be modulated by the ErbB2/PI 3-K/Akt pathway // Oncogene. 2003. - V. 22, N39. - P. 7998-8011.

432. Sun W., Winseck A., Vinsant S., Park O.H., Kim H., Oppenheim R.W. Programmed cell death of adult-generated hippocampal neurons is mediated by the proapoptotic gene Bax // J. Neurosci. 2004. - V. 24, N49. - P.l 1205-11213.

433. Sunpaweravong S., Sunpaweravong P. Recent developments in critical genes in themolecular biology of breast cancer // Asian J. Surg. 2005. - V. 28. - P. 71-75.

434. Swaab D.F., Fisser B., Kamphorst W., Trost D. The human suprachiasmatic nucleus; neuropeptide changes in senium and Alzheimer disease // Basic and Appl. Histochem. 1988. - V. 32. - P.43—54.

435. Swaad D.F., Goudsmit E. Vasopressin and oxytocin in the rat and human brain in relation to sex and age // Abstr. 11th Annu. Meet. Eur. Neurosci. Assoc., Zurich, 1988. Oxford, P. 121.

436. Swanson L.W., Sawchenko P.E. Hypothalamic integration: organisation of paraventricular and supraoptic nuclei // Ann. Rev. Neurosci. 1983. - V. 6. - P. 269324.

437. Szafarczyk A., Malaval F., Laurent R., Gibaud R., Assenmacher I. Further evidence for a central stimulatory action of catecholamines on adrenocorticotropin release in the rat // Endocrinology. 1987. - V. 121. - P. 883-892.

438. Taglialatela G., Gegg M., Perez-Polo J.R., Williams L.R., Rose G.M. Evidence for DNA fragmentation in the CNS of aged Fischer-344 rats //Neuroreport. 1996. - V. 7, N5. - P.977-980.

439. Takaesu G., Kang JS, Bae GU, Yi MJ, Lee CM, Reddy EP, Krauss RS. Activation of p38alpha/beta MAPK in myogenesis via binding of the scaffold protein JLP to the cell surface protein Cdo // J. Cell Biol.- 2006. -V. 175, N3. P. 383-388.

440. Takano T., Kubota Y., Wanaka A., Usuda S., Tanaka M., Malbon C.C., Togyama M. A-adrenergic receptors in the vasopressin-containing neurons in the paraventricular and supraoptic nucleus of the rat // Brain Res. 1989. - V. 499, N1. -P. 174-178.

441. Taylor T., Wondisford F.E., Blaine T., Weintraub B.D. The paraventricular nucleus of the hypothalamus has a major role in thyroid hormone feedback regulation of thyrotropin synthesis and secretion // Endocrinology. 1990. - V. 126, N1.-P. 317-324.

442. Tilders F.J.H., De Goey D.C.E., Berkenbolsch F., Dijkstra H. Response specificity of the hypothalamus and pituitary // Neuroend. Lett. 1988. - V. 10, N4. -P. 223.

443. Theodoropolous T.T., Papolla M.A. Aging of the neuroendocrine system: Impaired neuropeptide control of thyroid stimulating hormone // Age. 1990. - V. 13, N2. - P.37—38.

444. Trembleau A., Bloom F.E. Enhanced sensitivity for light and electron microscopic in situ hybridization with multiple simultaneous non-radioactive oligodeoxynucleotide probes // J. Histochem. Cytochem. 1995. - V. 43. - P. 829841.

445. Tracey D., Klareskog L., Sasso E. H. Salfeld JG, Tak PP. Tumor necrosis factor antagonist mechanisms of action: a comprehensive review // Pharmacol. Ther. 2008. - V. 117, N2. - P. 244—279.

446. Trodella L., Balducci M., Gambacorta M.A., Mantini G. Epoetin alfa in radiotherapy // Tumori. 1998. - V. 84, N 6 Suppl 1. - P. 15-19.

447. Tseng Y.H., Ueki K., Kriauciunas K.M., Kahn C.R. Differential roles of insulin receptor substrates in the anti-apoptotic function of insulin-like growth factor-1 and insulin // J. Biol. Chem. 2002 - V. 277. - P. 31601-31611.

448. Ubol S., Tucker P.C., Griffin D.E., Hardwick J.M. Neurovirulent strains of Alphavirus induce apoptosis in bcl-2-expressing cells: role of a single amino acid change in the E2 glycoprotein // Proc. Natl Acad.Sci.USA. 1994. - V. 91, N11. - P. 5202-5206.

449. Ugrumov M.V. Magnocellular vasopressin system in ontogenesis: development and regulation // Microsc. Res. Tech. 2002. - V. 56, N2. - P.164-171.

450. Uvnas-Moberg K., Brucelius G., Alster P., Bileviciute I., Undeberg T.I. Oxytocin increases and a specific oxytocin antagonist decreases pain thresthold in male rats // Acta Physiol, scand. 1992. - V. 144, N4. - P. 487-488.

451. Vallina E., Garcia Diez A., Gallego M., Villaverde P., Rippe M.L., Arribas J.M. A case of pulmonary sarcoidosis induced by interferon alfa treatment in a female patient with hepatitis C // An. Med. Interna. 2000. - V. 17. - P. 538-539.

452. Vanags D.M., Porn-Ares M.I., Coppola S., Burgess D.H., Orrenius S. Protease involvement in fodrin cleavage and phosphatidylserine exposure in apoptosis//J. Biol. Chem. 1996. - V. 271,N49. - P. 31075-31085.

453. Van Eekelen J. A., Rots N. Y., Sutanto W., de Kloet E. R. The effect of aging on stress responsiveness and central corticosteroid receptors in the brown Norway rat // Neurobiol. Aging. 1992. - V. 13, № 1. - P. 159-170.

454. Vanden Berghe W., Vermeulen L., De Wilde G., De Bosscher K., Boone E., Haegeman G. Signal transduction by tumor necrosis facor and gene regulation of the inflammatory cytokine interleukin-6 // Biochemical Pharmacology. 2000. - V. 60, N8.-P. 1185-1195.

455. Van Haarst A. D., Oitzl M. S., de Kloet E. R. Facilitation of feedback inhibition through blockade of glucocorticoid receptors in the hippocampus // Neurochem. Res. 1997. - V. 22. - P. 1323-1328.

456. Vial T., Choquet-Kastylevsky G., Liautard C., Descotes J. Endocrine and neurological adverse effects of the therapeutic interferons // Toxicology. 2000. -V. 142.-P. 161-172.

457. Vigas M. Neurotransmitters and proteohormones during stress in man // Synapt. Transmitt. and Recept.: 6th Gen. Meet. Eur. Soc. Neurochem., Prague, 1-6 Sept., 1986. Praha, 1987. - P. 565-569.

458. Vinatier D., Dufour P., Tordjeman-Rizzi N., Prolongeau J.F., Depret-Moser S., Monnier J.C. Immunological aspects of ovarian function: role of the cytokines // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 1995. - V. 63, N2. - P.155-168.

459. Vince J.E., Wong W.W., Khan N., Feltham R., Chau D„ Ahmed A.U.,

460. Wagner C.K., Eaton M.J., Moore K.E., Lookingland K.J. Efferent projections from the region of the medial zona incerta containing A13 dopaminergic neurons: a PHA-L anterograde tract-tracing study in the rat // Brain Res. 1995. - V. 677. - P. 229-237.

461. Wakerley J.B., Ingram C.D. Regulation of oxytocin pulse frequency in the suckled rat // Recent Progress Posterior Pituitary Horm., 1988: Proc. Satell. Symp. Posterior Pituitary Horm., Hakane, 14-16 July, 1988. Amsterdam etc., 1988. - P. 49-56.

462. Walski M., Celary-Walska R., Borowicz J. Studies on the hypothalamus and secretory nuclei of rat in the remote period following clinical death // J. Hirnforsch. -1991a. V. 32, N6. - P.687-698.

463. Walski M., Celary-Walska R., Borowicz J. Ultrastructure of phagocytizing cells of the rat hypothalamic neurosurgery nuclei in a remote period after the sustained clinical death // J. Hirnforsch. 19916. - V. 32, N6. - P.699-706.

464. Wang Z., Xu Y., Tang J., Ma H., Qin J., Lu C., Wang X., Hu Z., Wang X., Shen H. A polymorphism in Werner syndrome gene is associated with breast cancer susceptibility in Chinese women // Breast Cancer Res Treat. 2009. - V. 118, N1. -P.169-175.

465. Warner H.R. Current status of efforts to measure and modulate the biological rate of aging // J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 2004. - V. 59, N7. - P.692-696.

466. Watschinger B., Sayegh M.N., Hancock W.W., Russell M.E.Up-Regulation of Endothelin-1 mRNA and Peptide Expression in Rat Cardiac Allografts With Rejection and atherosclerosis // Am. J. Pathol. 1995, - V. 146, N5. - P.1065-1072.

467. Weese-Mayer D.E., Silvestri J.M., Lin D., Buhrfiend C.M., Lo E.S., Carvey P.M. Effect of cocaine in early gestation on striatal dopamine and neurotrophic activity // Pediatr. Res. 1993. - V. 34, N3. - P. 389-392.

468. Wilcox B.J., Rasking M.A., Ko G.N., Baskin D.G., Pascualy M., Dorsa D.M. Localisation of 3H-prazosin binding sites in the supraoptic and paraventricular nuclei of the human hypothalamus // Neuroendocrinology. 1990. - V. 51, N3. - P. 315319.

469. Wilson J.X. Antioxidant defense of the brain: a role of astrocytes // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1997. - V. 75. - P. 1149-1163.

470. Worum I., Fulop T.I., Csongor J. et al Interrelation between body composition and endocrine system in healthy elderly people // Mech. Aging and Develop. 1984. - V. 28. - P. 315—324.

471. Wu H., Tschopp J., Lin S.C. Smac Mimetics and TNFalpha: A Dangerous Liaison? // Cell. 2007. - V. 131, № 4. - P. 655-658.

472. Yamagata M. Hydroxylases involved in vitamin D metabolism are differentially expressed in murine embryonic kidney: application of whole mount in situ hybridization // Endocrinology. 2001. - V. 142. - P. 3223-3230.

473. Yang P., Peairs J.J., Tano R., Zhang N., Tyrell J., Jaffe G.J. Caspase-8-mediated apoptosis in human RPE cells // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2007. - V. 48,№7.-P. 3341-3349.

474. Yeh W.C., Hakem R., Woo M., Mak T.W. Gene targeting in the analysis of mammalian apoptosis and TNF receptor superfamily signaling // Immunol. Rev. -1999.-V. 169-P. 283-302.

475. Yin X.M., Oltvai Z.N., Veis-Novack D.J., Linette G.P., Korsmeyer S.J. Bcl-2 gene family and the regulation of programmed cell death // Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 1994. - V. 59. - P. 387-393.

476. Yokouchi Y., Sakiyama J., Kameda T., Iba H., Suzuki A., Ueno N., Kuroiwa A. BMP-2/-4 mediate programmed cell death in chicken limb buds // Development. -1996. V. 122, N12. - P. 3725-3734.

477. Yoshiyama Y., Yamada T., Asanuma K., Asahi T. Apoptosis related antigen, Le(Y) and nick-end labeling are positive in spinal motor neurons in amyotrophic lateral sclerosis // ActaNeuropathol (Berl). 1994. - V. 88, N3. - P.207-211.

478. Zbuzek V., Fuchs A-R., Zbuzek V.C, Wu W. Neurohypophyseal aging: Differential changes in oxytocin and vasopressin release, studised in Fisher 344 and Sprague-Dawley rats //Neuroend. 1988. - V. 48. - P. 619—626.

479. Zhang L., Kokkonen G., Roth G.S. Identification of neuronal programmed cell death in situ in the striatum of normal adult rat brain and its relationship to neuronal death during aging // Brain Res. 1995. - V. 677, N1. - P.77-179.

480. Zhang M., Tracey K.J. Tumor necrisis factor. In: Thompson A.W., er. The cytokine handbook, 3rd ed. New York. Academic press, 1998. P.515-548.

481. Zhang Y., Chong E., Herman B. Age-associated increases in the activity of multiple caspases in Fisher 344 rat organs // Exp. Gerontol. 2002. - V. 37. - P. 777789.

482. Zhong J., J.Troppmair and U.R. Rapp. Independent control of cell survival by Raf-1 and Bcl-2 at the mitochondria // Oncogene. 2001. - V. 20. - P. 4807-4816.

483. Zhou T., Edwards C.K.3rd, Mountz J.D. Prevention of age-related T cell apoptosis defect in CD2-fas-transgenic mice // J. Exptl Med. 1995. - V. 182, N1. -P. 129-137.

484. Zhou B.P., Hu M.C., Miller S.A., Yu Z., Xia W., Lin S.Y., Hung M.C. HER-2/neu blocks tumor necrosis factor-induced apoptosis via the Akt/NF-kappaB pathway // J. Biol. Chem. 2000. - V. 275, N11. - P. 8027-8031.

485. Российская академия наук Институт эволюционной физиологии и биохимии имени И.М.Сеченована правах рукописи052011505561. БАЖАНОВА Елена Давыдовна

486. МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ АПОПТОЗА В НЕЙРОЭНДОКРИННОЙ СИСТЕМЕ ГИПОТАЛАМУСА В ПОЗДНЕМ ОНТОГЕНЕЗЕ0303.04 клеточная биология, гистология, цитология

487. Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук1. Санкт-Петербург 20111. ОГЛАВЛЕНИЕ1. Стр.1. Введение 91. Обзор литературы 18

488. Старение и морфофункциональные изменения гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы 1811.1. Современные представления о процессе старения 18

489. Участие гена TNF в механизмах апоптоза и старения НСК15.1. Структура рецепторов TNFa15.2. Биологическое действие TNFa. Участие TNFa в патогенезе различных заболеваний15.3. Роль TNFa в регуляции апоптоза

490. Участие гена HER2/neu в механизмах апоптоза и старения НСК16.1. Возрастные особенности экспрессии белков-маркеров апоптоза у трансгенных мышей HER2/«ew 2. Материалы и методы

491. Морфометрические показатели нейросекреторных клеток гипоталамуса крыс разного возраста. Изменения данных показателейпри действии острой иммобилизации 135

492. Кариолометрический анализ ВП- и ОТ-продуцирующейактивности различных ядер ГГНС 137

493. Участие моноаминергических клеток гипоталамуса в регуляции стрессорной реакции организма при старении 146

494. Уровень катехоламинов в надпочечниках и кортикостерона плазмы крови у молодых и старых крыс при разных видах стрессаизбегаемый, неизбегаемый) 157

495. Параметры морфофункциональной активности ГГАКС в разныесроки после стресса у старых и молодых крыс 161

496. Вах) в НСК гипоталамуса ЮТ-нокаутных мышей 18638.4. Содержание ВП в НСК гипоталамуса ЮТ-нокаутных мышей 189

497. Характеристика ядрышкового аппарата НСК гипоталамуса укрыс разного возраста при действии острой иммобилизации 205

498. Соотношение ВП- и ОТ-продуцирующей активностиразличных ядер гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы 208

499. Участие моноаминергических клеток гипоталамуса в регуляции стрессорной реакции организма при старении 210

500. Развитие NPY-ергической системы гипоталамуса крыс в ходе постнатального онтогенеза и ее участие в регуляциинонапептидергических НСЦ 214

501. Влияние избегаемого и неизбегаемого стресса на уровни катехоламинов в надпочечниках и кортикостерона в плазме крови у молодых и старыхкрыс 218

502. Гипоталамическая регуляция функции коры надпочечников устарых и молодых крыс 220

503. Онтогенетические особенности экспрессии апоптоз-ассоциированных молекул в НСК гипоталамуса и коры надпочечников мышей 224

504. Экспрессия белков семейства Вс1-2, инсулина/ИПП и ВП в НСЦ гипоталамуса при старении и стрессе 232

505. Влияние экзогенного индуктора интерферона (циклоферона) на развитие стрессорного ответа НСК мышей разного возраста 238

506. Регуляция апоптоза у Т№-нокаутных мышей при старении 239

507. Регуляция апоптоза в НСЦ ШЖИпеи трансгенных мышей при старении 2435. Заключение 2516. Выводы 2577. Литература 260

508. Список принятых сокращений1. А адреналин

509. АКТГ адренокортикотропный гормон АТ - антитела АЯ - аркуатное ядро ВП - вазопрессин

510. ГГАКС гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальная система

511. ГГНС гипоталамо-гипофизарная нейросекреторная система1. ЗДГ задняя доля гипофиза1. ИА интерферон-альфа1. ИГХ иммуногистохимический1. Инс инсулин

512. ИПП инсулин-подобные пептиды ИР - иммунореактивный КА - катехоламины КЛ -кортиколиберинкПВЯ крупноклеточная часть паравентрикулярного ядра КС - кортикостерон МА - моноаминымПВЯ мелкоклеточная часть паравентрикулярного ядра НА - норадреналин

513. НЗСВ наружная зона срединного возвышения1. НПУ нейропептид У

514. НСК нейросекреторные клетки

515. НСЦ нейросекреторные центры

516. НЭС нейроэндокринная система1. ОТ окситоцин

517. ПВЯ паравентрикулярное ядро

518. ПДГ передняя доля гипофиза

519. ПКГ переднекомиссуральная группа1. СВ срединное возвышение1. СОЯ супраоптическое ядро1. ТГ тирозин-гидроксилаза

520. ЦНС центральная нервная система1. ВВЕДЕНИЕ1. Актуальность темы.

521. Результаты данного исследования будут иметь практическое значение в онкологии и геронтологии.

522. Цель исследования изучить молекулярные механизмы регуляции апоптоза клеток нейроэндокринной системы на поздних этапах онтогенеза и выявить морфофункциональные изменения, связанные со старением.

523. Основные положения, выносимые на защиту.

524. Индукция апоптоза при старении не зависит от наличия гена1. TNF.

525. Сигнальные пути апоптоза одинаковы в нейросекреторных центрах молодых мышей, но различаются у старых животных в физиологических условиях и при стрессе.

526. Участие иммуномодуляторов в регуляции клеточной гибели нейронов гипоталамуса зависит от стадии онтогенеза и от вида иммуномодулятора.

527. Теоретическая и практическая значимость.

528. Практическая ценность результатов исследования состоит в необходимости учета возрастных особенностей при использовании иммуномодуляторов и лечебной гипероксигенации в эксперименте и в клинике.

529. Материалы диссертации включены в курс лекций по физиологии Российского государственного педагогического университета им. Герцена (Санкт-Петербург).1. Апробация работы.

530. Madrid, Spain, 2009), 1st International Congress on Controversies in Longevity, Health and Aging (Barcelona, Spain, 2010).

531. Публикации. По теме диссертации опубликованы 59 работ, в том числе 21 статья в журналах, рекомендуемых ВАК для публикации материалов докторских диссертаций.

532. Структура и объем диссертации.

533. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов и библиографического списка.

534. Общий объем диссертации 334 страницы с 9 таблицами и 80 рисунками. Список литературы включает 584 публикаций, в том числе 474 иностранных.1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

535. Старение и морфофункциональные изменения гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы11.1. Современные представления о процессе старения

536. Авторы придавали большое значение накоплению в нервных клетках меланиноподобных веществ и липофусцина.

537. По мнению Никитина с соавторами (Никитин В.Н. и др., 1981), для позднего онтогенеза типична дисгармония в эндокринном статусе организма. Это подтверждает и Грантынь (Грантынь В.А., 1978).

538. Telomeres continue to shorten leading lo ond fusion«, M2 growth nrmst/apoptosls1. Oioontric chromosomo

539. Tolomoraso activation Totomero homeostasis

540. Рис. 1. Укорочение теломер при старении (Shay J.W. and Wright W.E., 2005).

541. Морфофункциональная характеристика гипоталамо-гипофизарно-нейросекреторной системы (ГГНС) и ее изменения на поздних этапах онтогенеза12.1. Основные нейросекреторные центры (НСЦ) гипоталамуса

542. Гипоталамус сложно организованный, филогенетически древний отдел промежуточного мозга, подразделяемый на нейроэндокринный (вырабатывающий нонапептиды, либерины и статины) и неэндокринный отделы.

543. НСК, вырабатывающие либерины и статины пептидной природы (аденогипофизотропные нейрогормоны), НСК, вырабатывающие моноамины (МА) и секретирующие их в портальный кровоток. Все 3 группы НСК формируют гипоталамо-гипофизарный нейроэндокринный комплекс.

544. Наиболее ростральная группа клеток переднекомиссуральная группа (Г1КГ) (Peterson R.P., 1966). Поскольку эта группа клеток отделена от основной части ПВЯ промежутком около 50 мкм шириной, другие исследователи

545. Так как нейрогемальные отделы интересуют нас в связи со стрессом, рассмотрим структуры, связанные с регуляцией АКТГ и коры надпочечников.

546. Рис. 4. Микрофотография НЗСВ крысы, ИГХ реакция с антителами к ОТ, ув.х200.

547. Нонапептидергическая система.

548. Функции ВП сложны и многогранны. Можно отметить его участие в регуляции водно-солевого обмена, изменении артериального давления,формировании стресс-реакции организма (Багров Я.Ю. и Красновская И.А., 1993).

549. ОТ играет важную роль в регуляции репродуктивной функции организма (Wakerley J.B. and Ingram C.D. 1988), участвует в регуляции функционального состояния коры надпочечников и щитовидной железы (Красновская И.А. и др., 1990; Taylor T. et al., 1990).

550. Для всех НСК показано наличие колокализованных пептидов, которые освобождаются вместе с основными пептидами и модулируют синтез и секрецию последних (обзоры: Bondy С.A. et al., 1989; Ceccateli S. et al., 19896).

551. У старых животных в отдельных ядрах отмечается появление НСК с дистрофическими изменениями, формирование клеток-теней и нейронофагия, чего не наблюдается у крыс моложе 12 мес (Хмельницкий O.K. и Ступина Ф.С., 1989).

552. В старости снижается количество опиоидов в гипоталамусе (Missale С. et al., 1983), а это нарушает действие стресс-лимитирующей системы.

553. Выявлена дегенерация супрахиазматического ядра в ходе старения (Real М.А. et al., 2008). Так, количество ВП-НСК в этом ядре у старых животных снижается на 36% (Swaab D.F. et al., 1988; Kalsbeek A. et al., 2010).

554. В области мамиллярных ядер старческие изменения выражены в меньшей степени (Поленов A.JL, 1993; Иванова Г.В., 1985). В латеральных мамиллярных ядрах, перифорникальном ядре старых крыс плотность нейронов падает на 7.3% (Межиборская H.A., 1980).

555. Грантынь (Грантынь В.А., 1978) показал изменения гистоферментных реакций при старении в первую очередь в НЗСВ и предположил, что напоздних стадиях онтогенеза на первый план выступают нарушения транспорта нейрогормонов в портальный кровоток.

556. Показано, что при старении в гипоталамусе человека происходит относительное увеличение размеров капиллярных петель по сравнению со зрелым возрастом, снижается густота расположения НСК (Solerte S.B. et al., 1988).

557. Таким образом, при изучении гипоталамуса старых животных на свето оптическом и электронно-микроскопическом уровнях выявляется неоднородность морфологических изменений, вызванная гибелью одних и активацией других клеток.

558. В аденогипофизе стареющих животных выявлено незначительное снижение активности всех исследованных ферментов (Прочуханов Р.А. и Ростовцева Т.И., 1977).

559. Старческие изменения коры надпочечников. При старении как функциональные, так и морфологические изменения в различных зонах коры надпочечников проявляются неравномерно.

560. Функция сетчатой зоны, продуцирующей андрогены, с возрастом в климактерическом периоде снижается, раньше у женщин. В сетчатой зоне отмечается незначительное снижение морфометрических показателей.

561. С помощью гистохимических методов установлено снижение количества аскорбиновой кислоты в надпочечниках, в пучковой зоне в наибольшей степени, что является показателем повышения секреторной активности надпочечников (ОапИЬз I., 1982).

562. Стрессорный ответ организма и его регуляция13.1. Развитие стресса у взрослых животных

563. Поскольку у интактных старых животных адаптационная система уже напряжена, способность структур мозга к срочной адаптации при стрессе оказывается ограниченной (Odio М. and Brodish А., 1990).

564. Обычно интенсивность воздействий, падающих на организм в течение жизни, существенно не изменяется: не возрастает, но и не снижается. Следовательно, при старении эти воздействия, становясь относительно более сильными, вызывают стрессорную реакцию.

565. Роль апоптоза в развитии нервной системы млекопитающих

566. Рассмотрим исследования, относящиеся к апоптозу нервных клеток на ранних этапах онтогенеза, у взрослых особей, а также у животных на поздних стадиях онтогенеза.14.1. Роль апоптоза в развитии нервной системы в эмбриональный и ранний постнатальный периоды

567. Начиная же с 21-х суток тестостерон индуцировал клеточную гибель нейронов, причем в основном у самцов.

568. О необходимости наличия в клетках развивающейся нервной ткани генов- ингибиторов апоптоза, в частности Вс1-2, во время раннего1. Cespase-8,-10 <

569. Caspase-imla pendent Cell Death.1. Smae1. Caspase-71. TNF-a1. TNF-a1. AP0-3L/ TWEAK1. APO-2L7 TRAIL1. Signaling1. Gas2

570. Pfo-Apopto<lc Pro-Suivival1. DNA Repalr

571. Cell Shrinkage MemDfane BiebOIng1. AD1 (cad';

572. DNA Fragmentation Chromatin Condensation-Y1. Apoptosts

573. Рис. 7. Сигнальный путь апоптоза (www.cellsignal.com). постнатального периода сообщают многие авторы (Dubois-Dauphin M. et al., 1994; Dubois-Dauphin M., 1996; Taglialatela G. et al., 1996).

574. Другой причиной канцерогенеза может быть сверхэкспрессия Вс1-2 -гена-ингибитора апоптоза, что показано при исследовании туморогенеза нейробластомы (1кес1а Н. е1а1., 1995; 1996).

575. Рис. 8. Участие Инс/ИПП и ИА в регуляции апоптоза.

576. Survival Factors: Growth Factors, Cytokines, etc.

577. Death Stimuli: Survival Factor WithdrawalL

578. DNA damage Genotoxic Stress

579. Рис. 9. Участие белков семейства Вс1-2 и каспаз в регуляции апоптоза (www.cellsignal.com).

580. STAT« KMBütE VIA SH2 DOMAIN

581. RA3-MAPK PATHWAY PI -3 К PATHWAY AU PATHWAY1. FEEDBACK INHIBITION1. Nucleus•Ш'1. DNA

582. EnhanDed gene transcription

583. Рис. 10. Участие цитокинов в регуляции функций клетки (Jak/STAT-путь) (McLornan D. et al.,2006).1. H4-AC1 НЗ-К4теЗ

584. Существуют и противоположные данные, свидетельствующие об отсутствии влияния ИА на экспрессию Bcl-2 (Marrack Р. et al., 1999; Pilling D. et al., 1999), Bcl-xl, или отрицающие участие STAT1 в пути передачи сигнала от ИА к ДНК (Marrack Р. et al., 1999).

585. Некоторые авторы сообщают, что на поздних этапах онтогенеза апоптоз не имеет характерных признаков, наблюдающихся у молодых животных, например, отсутствует лестничная фрагментация ДНК, нет снижения экспрессии Bcl-2 (Radziszewska Е. et al., 2000).

586. Рис. 12. Механизмы участия И А и кислорода в регуляции апоптоза.

587. Участие гена TNF в механизмах апоптоза и старения НСК

588. Рис. 13. Положение гена TNF на хромосоме (Электронная библиотека генов, www.ncbi.nlm.nih.gov).

589. Reduced apoptosis protection

590. Translation of anti-apoptotic factors1.KI1.K -PI1. Activation1. Survival1. Death

591. Рис. 14. TNF-индуцированный апоптоз (Scheuner D. et al., 2006).

592. TNFa (кахектин) является негликозилированным белком с молекулярной массой 17-18 кБа; секретируется в основном активированными макрофагами и моноцитами (Gross А., 1999), Т-лимфоцитами, эндотелиальными и гладкомышечными клетками, нейтрофилами.

593. Тример TNFa связывается с рецепторами TNFa на опухолевых клетках и денатурирует их.

594. TNF. В синергизме с IL-2 TNFa усиливает продукцию Т-клетками IFN (Juiius М. et а1., 1993).

595. Кроме того, TNFa индуцирует продукцию других провоспалительных цитокинов: IL-1, IL-6, IFN, GM-CSF, обладающих синергидным с TNFa действием (Aggarwal В. and Pocsik Е., 1992).

596. Смольникова М.В. с соавторами (Смольникова М.В. и др., 2002) показали, что TNFa играет особую роль в патогенезе СПИДа, вызывая репликацию вируса иммунодефицита человека и горизонтальное распространение инфекции.

597. TNFa принимает участие также в реализации эндотоксического шока. Разработка препаратов, способных модулировать выработку и/или действие TNF, представляет интерес в плане создания новых лекарственных препаратов.

598. Одним из кандидатов на роль такого препарата может быть ТЫР-связывающий белок вируса натуральной оспы (УАКУ-СгшВ) (Гилева И.П. и др., 2006).

599. Установлено, что изменение в продукции ЮТа оказывает значительное влияние на тяжесть воспалительного процесса у больных хроническими болезнями органов дыхания (Корытина Г.Ф. и др., 2004)

600. Второй путь связан с нарушением целостности мембраны митохондрий. Считается, что цитохром с, выходящий из митохондрии через поры, является существенным фактором активации каскада каспаз (Ни У. е! а1., 1998,1999).

601. И третий путь связан с белком р53, который вызывает остановку клеточного цикла и/или инициирует апоптоз в клетках после повреждения

602. Нарушение электронного транспорта в дыхательной цепи. При транспорте электронов до молекулярного кислорода Ог, 1-5% электронов•утеряется в дыхательной цепи, что способствует образованию О " и вызывает запуск апоптоза;

603. Изменение проницаемости мембран митохондрий, при котором ряд белков, в том числе цитохром с и некоторые каспазы могут поступать в цитозоль и быть причиной запуска механизмов апоптоза (падение митохондриального трансмембранного потенциала);

604. Нарушение окислительного фосфорилирования и образования1. АТФ;

605. Падение асимметрического распределения протонов на внешней стороне митохондриальной мембраны;

606. Изменение окислительно-восстановительного потенциала;

607. Выделение цитохрома с в цитозоль как фактора активации caspase-9 и -3;

608. Выделение APAF как активатора caspase-9;

609. Выделение одновременно с цитохромом с аденилаткиназы-2 из митохондриального межмембранного пространства в цитоплазму через специальные каналы внешней мембраны MTX, которые открываются с участием определенных белков (Давтян Т.К. и др., 2004).

610. Участие гена HER2/neu в механизмах апоптоза и старения НСК

611. Сверхэкспрессия HER2/neu (ErbB2), часто обнаруживаемая во многих типах человеческого рака, является плохим прогностическим признаком для пациентов (Nagy Р. et al., 1999). Онкогенный потенциал сверхэкспрессии

612. HER2/neu соотносится с доступностью для формирования гетеродимеров, которые обеспечивают усиление и пролонгирование клеточного сигналинга через ряд сигнальных путей, зависящих в первую очередь от партнера по димеризации (Ross J.S. et al., 2004).

613. Рецепторы семейства ErbB, кроме ErbB2, обладают возможностью связывать большое число лигандов с характерными признаками эпидермального фактора роста.

614. Формирование гетеродимеров ErbB2/ErbBl ведет к предпочтительной активации Р13К-пути, что приводит к фосфорилированию различных белков, способствующих выживанию клетки, и повышенной трансляции белков

615. ЕС.Г like ligandb: EGF, TGFa, amphiivgulinheregulin likeligands: hcregulin-l, -2, -3

616. EGF and herefiulin-like 1 ¡sands. HB-EGF, epiregulin, betaceJlulin

617. Рис. 17. Схема димеризации белков семейства erbB2 (Nagy et al., 1999).1. EGF/TGF «ti-Cellul in1. NDF|i

618. Характеристика экспериментального материала, условий экспериментов и методических приемов исследования1. Крысы Вистар

619. Трансгенные мыши \\¥Ж21пси

620. Использован мозг интактных взрослых крыс линии Вистар (3 месяца), крыс в возрасте от 1 до 80 дней постнатальной жизни, а также старых животных в возрасте 28 месяцев. Всего в работе было использовано 40 животных.

621. Для изучения характера локализации NPY-ергических нейронов в гипоталамусе трем взрослым крысам был введен интрацистернально колхицин (75мкг в 2 мкл) за 2 дня до декапитации.

622. Кроме того, подсчитывали количество клеток, интенсивно прореагировавших с антисывороткой к ВП, на 50 НСК каждого ядра гипоталамуса. Те же измерения производили в ОТ-ергических НСЦ. Полученные результаты выражали в процентах.

623. Было подсчитано число ТГ-ИР клеток на 5-6 срезах мозга каждого животного в АЯ, перивентрикулярной области, в zona incerta, а также в СОЯ,

624. ПВЯ и ПКГ. На основании этих подсчетов высчитывалось среднее число ТГ-ИР клеток на один срез каждого изученного нейросекреторного ядра.

625. Было подсчитано среднее количество NPY-ИР нейронов на 5 срезах АЯ на уровне Р3.5 по атласу Сентаготаи Я. и др. (1965).

626. Рибопробы для детекции ВП, р53 и WRN мРНК мыши были приготовлены с помощью метода in vitro транскрипции с использованием синтетического шаблона. Для приготовления шаблона 2 олигоДНК (IDT DNA,

627. То же для WRN шаблонный стренд (template strand - TS; TSwrnmo5'-AAATGTTACTTGTTTCACATTTCTTCCATGTCAGTTTTCCCCCAGGGATTA AAAATGTTACTAGAAAACAAATCAATTCTCTCTCCCT CC-3'} представляет копию ДНК мыши в части WRN мРНК.

628. То же для р53 шаблонный стренд (template strand - TS; TSwrnmo5'-5'-AGTCTGGGACAGCCAAGTCTGTTATGTGCACGTACTCTCCTCCCCTCAAT AAGCTATTCTGCCAGCTGGCGAAGACGTCTCTCTCCCTCC-3') представляет копию ДНК мыши в части р53 мРНК.

629. Депарафинированные и дегидратированные срезы гипоталамуса и надпочечников обрабатывали р-ром этидия бромида, промывали в р-ре Рингера и с помощью люминисцентного микроскопа PFM (WPI) подсчитывали число апоптотических клеток.22.6.2. TUNEL

630. Для определения концентрации KJI, ВП и ТГ, содержащихся в НЗСВ, ВП и ОТ в ЗДГ был использован метод цифровой телевизионнойцитофотометрии (Агроскин JI.C. и Папаян Г.В. 1988, Пунина Е.О. и др., 1994,i

631. Подсчитывали число c-fos-ИР ИСК на 5-6 срезах каждого животного в СОЯ и ПВЯ. На основании этих подсчетов высчитывалось среднее число c-fos-ИР клеток в НСЦ каждого животного, затем вычисляли средние доли клеток для группы мышей.

632. Уровень апоптоза был определен также с помощью TUNEL. Были получены абсолютные значения (подсчитывалось количество темноокрашенных апоптотических клеток на гипоталамический центр, взятое как среднее на один срез).

633. Морфометрические показатели нейросекреторных клеток гипоталамуса крыс разного возраста. Изменения данных показателей при действии острой иммобилизации

634. Кариолометрический анализ.

635. ИСК с центральным ядрышком.

636. Изменения количества ВП- и ОТ-НСК с центральным ядрышком после иммобилизации примерно одинаковы в обеих возрастных группах -наблюдается тенденция к увеличению процента данных клеток к концу эксперимента, наиболее выраженная в ОТ-НСК молодых животных.

637. ИСК с эксцентричными и эктопированными ядрышками.

638. При действии стресса у молодых крыс выявлено увеличение процента многоядрышковых ВП- и ОТ-НСК (табл. 5, 6). У старых животных, в противоположность молодым, обнаружено снижение числа таких НСК на 2-3 сутки после стресса (табл. 5, 6).

639. Можно отметить, что изменения объема, положения и числа ядрышек во всех исследованных НСЦ в каждой возрастной группе были однонаправленными.

640. Кариолометрический анализ ВП- и ОТ-продуцирующей активности различных ядер ГГНС

641. Рис. 20. Микрофотография СОЯ крысы. ВП-ергические НСК, Обозначения: А старая, В - молодая крыса, звездочки - многоядрышковые клетки, стрелки - клетки с эксцентричным ядрышком. ИГХ реакция с антителами к ВП, ув.хЮОО.

642. У контрольных старых крыс, по сравнению с молодыми, наблюдаются еще и различия между ПКГ и СОЯ. Сразу после стресса добавляются различия между кПВЯ и СОЯ. Далее никаких изменений на протяжении исследуемого периода не происходит.

Информация о работе

Бажанова, Елена Давыдовна
доктора биологических наук
Санкт-Петербург, 2011
ВАК 03.03.04

Диссертация

Механизмы регуляции апоптоза в нейроэндокринной системе гипоталамуса в позднем онтогенезе - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы