Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Механизмы и роль освобождения поверхностного белка ActA во взаимодействии Listeria monocytogenes с эпителиальными клетками

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Сапенко, Татьяна Петровна

Глава 1. ВВЕДЕНИЕ.

Глава 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1.Общие сведения о Listeria monocytogenes.

2.2. Особенности биологии и экологии листерий и их значение в распространении листериоза.

2.2.1. Общая характеристика и таксономия листерий.

2.2.2. Биология возбудителя.

2.3. Механизмы взаимодействия листерий с эукариотической клеткой.

2.4. Механизмы активной инвазии в непрофессиональные фагоциты.

2.5. Функции белка ActA во взаимодействии L.monocytogenes с эпителиальными клетками.

Глава 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Использованные штаммы, плазмиды и клеточные линии.

3.2. Микробиологические методы.

3.2.1. Условия культивирования.

3.2.2. Приготовление и трансформация компетентных клеток E.coli плазмидной ДНК

3.2.3. Приготовление и трансформация компетентных клеток L.monocytogenes плазмидной ДНК.

3.3. Молекулярно - генетические методы.

3.3.1. Выделение хромосомной ДНК L.monocytogenes.

3.3.2. Приготовление грубых лизатов Listeria spp. для проведения ПЦР.

3.3.3. Приготовление лизатов из колоний.

3.3.4. Выделение плазмидной ДНК для E.coli.

3.3.5. Выделение плазмидной ДНК для L.monocytogenes.

3.3.6. Полимеразная цепная реакция.

3.3.7. Осаждение продукта ПЦР для последующего анализа.

3.3.8. Рестрикционный анализ, дефософолирирование, лигирование ДНК.

3.3.9. Электрофорез в агарозном геле.

3.3.10. Выделение фрагментов ДНК из агарозного геля.

3.4. Биохимические методы.

3.4.1. Разделение освобождённых белков и белков клеточной стенки L.monocytogenes методом электрофореза в системе Лэммли.

3.4.2. Приготовление бактериального иннокулята для заражения эукариотических клеток.

3.4.3. Определение эффективности процесса внутриклеточного вхождения листерий (инвазии), внутриклеточного размножения и межклеточного перемещения.

3.4.4. Обработка эукариотических клеток гепариназой.

3.4.5. Обработка бактерий гепарином.

Глава 4. РЕЗУЛЬТАТЫ.

4.1. Изолирование мутантного штамма с нарушенным процессом освобождения белка ActA.

4.2. Присутствие белка ActA во фракциях мембранных и освобождённых белков L. monocytogenes.

4.3. Изменение подвижности освобождённой формы белка ActA по сравнению с мембрано-связанной формой.

4.4. Определение сайта протеолитического расщепления белка ActA при его переходе из мембрано-связанной в освобождённую форму.

4.5. Анализ мутации, нарушающей сайт протеолиза белка ActA.

4.6. Анализ роли металлопротеазы Мр1 в процессе освобождения белка ActA

4.7. Изучение роли освобождённой формы белка ActA в процессе внутриклеточного проникновения, размножения и межклеточного перемещения L.monocytogenes в эпителиальных клетках.

4.8. Роль освобождённой формы белка ActA во взаимодействии с гепаран-сульфат протеогликанами.

4.9. Роль белка системы врождённого иммунитета TagL в защите макроорганизма от инвазии L. monocytogenes, опосредованной белком ActA.

Глава 5. ОБСУЖДЕНИЕ.

Глава 6. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Механизмы и роль освобождения поверхностного белка ActA во взаимодействии Listeria monocytogenes с эпителиальными клетками"

Интенсивные исследования в области биологии и генетики патогенных бактерий позволили достигнуть к настоящему времени значительного прогресса в области изучения взаимоотношений внутриклеточных бактериальных паразитов и эукариотических клеток. Был установлен целый ряд механизмов, позволяющих бактериям проникать и успешно размножаться внутри клеток, а также распространяться по тканям и органам млекопитающих, приводя к развитию тяжелых заболеваний. Эффективность функционирования этих механизмов обеспечивается продукцией бактериями факторов патогенности белковой природы, которые прямо взаимодействуют со специфическими рецепторами эукариотических клеток, влияя на сигнальные системы и внутриклеточные процессы (Белый Ю. Ф., 1996; Бондаренко В.М., 1999, 2001; Ермолаева А. и др., 2005). Изучение молекулярных механизмов активности факторов патогенности имеет как фундаментальную, так и практическую значимость, т.к. является основой для разработки новых подходов к созданию вакцинных препаратов и терапии инфекционных заболеваний.Типичным представителем группы факультативных внутриклеточных паразитов и удобной моделью для изучения внутриклеточного паразитизма является грамположительная бактерия Listeria monocytogenes, возбудитель тяжелого заболевания человека и домашних животных - листериоза (Тартаковский И.С. и др., 2002; Vazquez-Boland et al., 2001).Листерии попадают в эпителиальную клетку в результате активной инвазии или захватываются макрофагами, разрушают фагосому и выходят в цитоплазму, где эффективно размножаются. Внутриклеточное перемещение листерии осуществляется благодаря полярной полимеризации эукариотического актина на одном полюсе бактериальной клетки. Листерии обладают значительным набором факторов патогенности, осуществляющих сложные взаимодействия с эукариотическими клетками. Установление структуры и механизмов активности факторов патогенности необходимо для разработки диагностических и терапевтических средств контроля заболевания вызываемого листериями - листериоза.Одним из важнейших факторов патогенности листерии является белок ActA, который, по-видимому, можно отнести к числу бифункциональных факторов патогенности. Установлено, что белок ActA, обладающий функцией полимеризации эукариотического актина, является необходимым и достаточным фактором для осуществления внутриклеточного перемещения бактерии (Cossart, Sansonetti, 2004). Недавние результаты продемонстрировали, что белок ActA так же может быть вовлечен в индукцию "фагоцитоза" при взаимодействии листерии с эпителиальными клетками (Suarez et al., 2001). Однако до настоящего момента молекулярные механизмы, лежащие в основе бифункциональности белка ActA, не установлены.В исследованиях, осуществленных in vitro, белок ActA был обнаружен во фракциях мембрано-связанных и освобождённых белков (Kocks et al., 1992; Ermolaeva et al., 2004). С бактериальной мембраной белок ActA связан через карбоксильный трансмембранный домен, а механизм его освобождения до настоящего времени оставался неизвестным. Показано, что поверхностно-связанный белок ActA необходим для осуществления внутри и межклеточного перемещения возбудителя (Cossart, Bierne, 2001). Роль же освобожденной формы белка ActA в вирулентности листерий до настоящего времени не изучалась.Цель работы: установить механизмы освобождения поверхностного белка ActA и роль его освобожденной формы в процессе проникновения, внутриклеточного размножения и межклеточного перемещения L. monocytogenes в эпителиальных клетках.В соответствии с поставленной целью в процессе выполнения диссертационной работы предстояло решить следующие задачи: - установить механизм перехода белка ActA из мембрано-связанной формы в освобождённую; - получить мутантный штамм L. monocytogenes, продуцирующий только мембрано-связанную форму белка ActA; - изучить влияние мутаций, нарушающих освобождение белка ActA, на основные стадии процесса проникновения, внутриклеточного размножения и межклеточного перемещения L. monocytogenes в эпителиальных клетках; - установить специфичность взаимодействия белка ActA с поверхностными рецепторами эукариотических клеток и роль этого взаимодействия в процессе внутриклеточного проникновения, размножения и межклеточного перемещения L.monocytogenes.Научная новизна и практическая значимость работы: -Впервые установлено, что освобождение белка ActA связано с протеолизом мембранного домена, который происходит между гистидином в положении 582 и треонином в положении 583. -Впервые произведена сайт-специфическая замена гистидина в положении 582 в последовательности ActA на пролин и продемонстрировано, что данная замена нарушает освобождение белка. -Установлено, что процесс протеолитического расщепления трансмембранного домена белка ActA не зависит от рН среды и отличается от протеолиза этого белка, осуществляемого металлопротеазой Mpl. -Впервые показано участие освобожденной формы белка ActA в процессе инвазии листерий в эпителиальные клетки, а также продемонстрировано, что для процесса внутриклеточного перемещения данная форма белка ActA не является необходимой. - Подтверждена гипотеза о белке ActA как бифункциональном факторе патогенности и продемонстрировано, что изменение функции белка может быть следствием изменения его локализации. -Показано, что взаимодействие освобожденной формы белка ActA листерий с поверхностными гепаран-сульфат протеогликанами эукариотических клеток уменьшает уровень инвазии возбудителя. -Установлено, что сигнальные пути, активируемые в результате взаимодействия белка ActA с поверхностными рецепторами эукариотической клетки, являются одной из мишеней активности протеогликан-узнающих белков системы врожденного иммунитета.Полученные результаты могут быть использованы в дальнейших исследованиях факторов вирулентности L. monocytogenes, при создании новых диагностических и терапевтических препаратов.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Сапенко, Татьяна Петровна

Глава 6. ВЫВОДЫ Выводы:

1. Впервые установлены механизмы освобождения поверхностного белка ActA и показана роль освобожденной формы этого белка в инвазии Listeria monocytogenes в эпителиальные клетки.

2. Впервые показано, что освобождение мембрано-связанного белка ActA осуществляется путем протеолиза трансмембранного карбоксильного домена. Протеолиз происходит между аминокислотами гистидин в положении 582 и треонин в положении 583.

3. Установлено, что процесс протеолитического освобождения белка ActA не зависит от рН среды и не связан с активностью металлопротеазы Mpl.

4. В опытах in vitro впервые показано, что освобожденная форма белка ActA необходима для эффективной инвазии L.monocytogenes в эпителиальные клетки, однако не является необходимой для внутриклеточного размножения листерий и непосредственного перемещения из клетки в клетку.

5. Установлено, что освобождённая форма белка ActA взаимодействует с гепарансульфат протеогликанами, находящимися на поверхности эукариотических клеток, и это взаимодействие влияет на процесс активной инвазии листерий в эпителиальные клетки.

6. Впервые показано, что процесс активной инвазии, опосредуемый белком ActA, ингибируется в присутствии эукариотического белка TagL.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Сапенко, Татьяна Петровна, Москва

1. Бондаренко В.М. "Острова" патогеныости бактерий. Жури, микробиол. 2001,4, 67-74.

2. Бондаренко В.М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса. Журн. микробиол. 1999, 5: 34-39.

3. Бондаренко В.М. Общий анализ представлений о патогенных и условно патогенных бактериях. Журн. микробиол. 1997, 4: 20-26.

4. ГОСТ Р. 51921 Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes. Госстандарт России,2002.

5. Ермолаева С.А. Генетические механизмы вирулентности Listeria monocytogenes. Генетика. 2001, 37: 286-293

6. Ермолаева С.А. Тартаковский И.С. Регуляция экспрессии факторов вирулентности у Listeria monocytogenes. Журн.микробиол. 2001,3:106110

7. Зайцева Е.А., Сомов Г.П. Влияние температур на адгезивные свойства листерий. Журн. микробиол. 2006, 3: 20-23.

8. Сахаров П.П., Гудкова Е.И. Листереллезная инфекция. Медгиз.1959.

9. Armstrong,B.A., and C.P.Sword. Electron microscopy of Listeria monocytogenes-infected mouse spleen.J.Bacteriol. 1996,91:1346-1355.

10. Banerjee, M., Copp, J., Vuga, D., Marino, M,. Chapman, Т., van der Geer, P., and Ghosh, P. GW domains of the Listeria monocytogenes invasion protein InlB are required for potentiation of Met activation. Mol Microbiol 2004, 52:257-271

11. Beckerle, M.C. Spatial control of actin filament assembly:lessons from Listeria.Cell 1998,95:741-748

12. Belyi Y.F. Intracellular parasitism of microorganisms. 1996. Springer-Verlag GmbH&Co.KG.

13. Bielecki, J.,P.Youngman,P.Connelly, and D.A.Portnoy. Bacillus subtilis expressing a haemolysin gene from Listeria monocytogenes can grow in mammalian cells. Nature 1990,345:175-176

14. Borezee, E., Pellegrini, E., Beretti, J.L., and Berche, P. SvpA, a novel surface virulence-associated protein required for intracellular survival of Listeria monocytogenes. Microbiology 2001,147: 2913-2923

15. Braun, L., S. Dramsi, P. Dehoux, H. Bierne, G. Lindahl, and P. Cossart. InlB: an invasion protein of Listeria monocytogenes with a novell type of surface association. Mol.Microbiol. 1997, 25:285-294

16. Brundage, R.A., Smith, G.A., Camilli, A., Theriot, J.A., and Portnoy, D.A. Expression and phosphorylation of the Listeria monocytogenes ActA protein in mammalian cells. Proc Natl Acad Sci USA 1993,90: 1189011894

17. Cabanes, D., Dehoux, P., Dussurget, O., Frangeul, L., and Cossart, P. Surface proteins and pathogenic potential of Listeria monocytogenes. Trends Microbiol 2002,10: 238-244

18. Cabanes, D., Dussurget, O., Dehoux, P., and Cossart, P. Auto, a surface associated autolysin of Listeria monocytogenes required for entry into eukaryotic cells and virulence. Mol Microbiol 2004,51: 1601-1614

19. Camilli, A., L.G.Tilney, and D.A.Portnoy. Dual roles of PI-PLC in Listeria monocytogenes pathogenesis.Mol.Microbiol. 1993,8:143-157

20. Chakraborty,T. The molecular mechanisms of actin-based intracellular motility by Listeria monocytogenes. Microbiol.SEM1996, 12:237-244

21. Cicchetti,G., P.Maurer, and C.Koks. Actin and phosphoinositide binding dy the ActA protein of the bacterial pathogen Listeria monocytogenes.iB\o\.Chem. 1999,274:33616-33626

22. Collins M.D., Wallbanks S., Lane D.J., Shah J., Nietupski R., Smida J.,

23. Dorsch M., Stackebrandt E. Phylogenetic analysis of the genus Listeria based on reverse transcriptase sequencing of 16S rRNA. Int. J. Syst. Bacteriol. 1991, 41: 240-246

24. Cossart, P. 1995. Actin-based bacterial motility. Curr.Opin.Cell Biol. 7:94101.

25. Cossart, P. and Bierne, H. The use of host cell machinery in the pathogenesis of Listeria monocytogenes. Inf Immun 2001,13:96-103

26. Cossart P.,Kocks C. The actin-based motility of the facultative intracellular pathogen Listeria monocytogenes. Molecular Microbiol. 1994, 13:395-402

27. Cossart, P. and Sansonetti, P.J. Bacterial invasion: the paradigms of enteroinvasive pathogens. Science 2004,304:242-248

28. Cossart, P., Pizarro-Cerda, J., and Lecuit, M. Invasion of mammalian cells by Listeria monocytogenes: functional mimicry to subvert cellular functions. Trends Cell Biol 2003,13: 23-31

29. Darji, A., Bruder, D., zur Lage, S., Gerstel, В., Chakraborty, Т., Wehland, J., and Weiss, S. The role of the bacterial membrane protein ActA in immunity and protection against Listeria monocytogenes. J Immunol 1998,161: 2414-2420

30. Dumont J. & Cotoni L. Bacille semblable a celui du rouget du pore rencontre dans le L.C.R. d'un m6ningitique. Ann. Inst. Pasteur 1921,35: 625-633

31. Dziarski, R. Peptidoglycan recognition proteins (PGRPs). Mol. Immunol. 2004,40:877-886

32. Ermolaeva, S., Novella, S., Vega, Y., Ripio, M.T., Scortti, M., and Vazquez-Boland, J.A. Negative control of Listeria monocytogenes virulence genes by a diffusible autorepressor. Mol Microbiol 2004,52: 601611

33. Ermolaeva, S., and Vazquez-Boland, J.A. Unpublished results

34. Farber J.M., & Peterkin P.I. Listeria monocytogenes, a food-borne patyhogen. 1991. Microbiol. Rev 2005, 55: 476-511

35. Fielder F. Biochemistry of the cell surface of Listeria strains: a locating general view. Infection 1988, (suppl 2): S92-S97

36. Fradelizi J., Noireaux V., Plastino J., Menichi В., Louvard D., et al. ActA in human zyxin harbour Аф2/3-independent actin-polymerization activity.Nat.Cell Biol. 2001,3:699-707

37. Gaillard,J.-L., P.Berche, J.Mounier, and S.Sansonetti. In vitro model of penetration and intracellular growth of Listeria monocytogenes in the human enterocyte-like cell line Caco-2.Infect.Immun. 1987,55:2822-2829

38. Gedde,M., D.E.Higgins, L.G.Tilney, and D.A.Portnoy. Role of listeriolysin о in cell-to-cell spread of Listeria monocytogenes .Infect.Immun. 2000,68:999-1003

39. Gelius,E., Persson, C., Karlsson, J. and Steiner, H. A mammalian peptidoglycan recognition protein with N-acetylmuranoyl-L-alanine amidase activity. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003,306:988-994

40. Gellin B.G., Broome C.V. Listeriosis. JAMA. 1989,261: 1313-1320

41. Gregory, S.H., Sagnimeni A.J., and Wing E.J. Expression of the inlAB operon by Listeria monocytogenes is not required for entry into hepatic cell's in vivo.Infect.Immun. 1996, 64:3983-3986

42. Gregory,S.H., and Wing E.J. Neutrophil-kupffer cell interaction: a critical component of host defenses to systemic bacterial infections. J.of Leukocyte Biol. 2002, 72:239-248

43. Ho, S.N., Hunt, H.D., Horton, R.M., Pullen, J.K., and Pease, L.R. Site-directed mutagenesis by overlap extension using the Polymerase chain reaction. Gene 1989,77: 51-59

44. Kajava,A.V. Structural diversity of leucine-rich repeat proteins. J.Mol.Biol. 1998,277:519-527

45. Kaufmann S.H.E. Immunity to intracellular bacteria. Annu. Rev. Immunol. 1993,11: 129-163

46. Kibardin, A.V., Mirkina, I.I., Korneeva, E.A., Gnuchev, N.V., Georgiev, G.P. and Kiselev, S.L. Molecular cloning of a new mouse gene tag L containing a lysozyme-like domain. Doklady Biochem. 2000,372:103-105

47. Kingdom,G.C., and C.P.Sword. Effects of Listeria monocytogenes hemolysin on phagocytic cells and lysosomes. Infect. Immun. 1970,1:356362

48. Kiselev, S.L., Kustikova, O.S., Korobko, E.V., Prokhortchouk., E.V., Kabishev, A.A., Lukanidin, E.M. and Georgiev, G.P. Molecular cloning and characterization of the mouse tag7 gene encoding a novel cytokine. J. Biol. Chem 1998,273:18633-18639

49. Kocks, С., E. Gouin, M. Tabouret, P. Berche, H. Ohayon, and Cossart, P. Listeria monocytogenes-induced actin assembly requires the actA gene product, a surface protein. Cell 1992, 68:521-531

50. Kreflt, J., and Vazquez-Boland, J.A. Regulation of virulence genes in Listeria. Int J Med Microbiol 2001,291: 145-157

51. Kreflt, J., Dumbsky, M., and Theiss, S. The actin-polymerization protein from Listeria ivanovii is a large repeats protein, which shows only limitedamino acid sequence homology to ActA from Listeria monocytogenes. FEMS Microbiol Lett 1995, 126: 113-122

52. Lasa,I., P.Dehoux, and P.Cossart. Actin polymerization and bacterial movement.Biochim.Biophys.Acta 1998,1402:217-228

53. Laurent, V., T.P. Loisel, B. Harbeck, A. Wehman, L. Grobe, B.M. Jockusch, J. Wehland, F.B. Gertler, and M.F. Karlier. Role of proteins of the Ena/VASP family in actin-based motility of Listeria monocytogenes. J.Cell Biol. 1999,144:1245- 1258

54. Lecuit, M., S. Dramsi, C. Gottardi, M. Fedor-Chaiken, B. Gumbiner, and P. Cossart. A single amino acid in E-cadherin responsible for host specificity towards the human pathogen Listeria monocytogenes. EMBO. J. 1999,18:3956-3963

55. Leimeister-Wachter,M., E.Domann, and T.Chakraborty. Detection of a gene encoding a phospatidylinositol-specific phospholipase С that is co-ordinately expressed with listeriolysin in Listeria monocytogenes. Mol.Microbiol. 1991,5:361-366

56. L0, D., Tynan, W., Dickerson, J., Mendy, J., Chang, H.-W., Scharf, M.,

57. Byrne, D., Brayden, D., Higgins, L., Evans, C., and O'Mahony, D. J.

58. Peptidoglycan recognition protein expression in mouse Peyer's Patch follicleassociated epithelium suggests functional specialization. Cell. Immunol. 2003,224:8-16

59. Loisel,T.P., R.Boujemaa, D.Pantaloni, and M.-F.Carlier.

60. Machesky, L.M.I997.Cell motility: complex dynamics at the leading adge.Curr.Biol. 1999,7:R164-R167

61. Machesky,L.M. Rocket-based motility a universal mechanism? Nat.Cell Biol. 1999,1 :E29-E31

62. Mead P.S., Slutsker L., Dietz V., McCaig L.F., Bresee J.S., Shapiro C., Griffin P.M., Tauxe R.V. Food-related illness and death in the Unites States. Emerg. Infect. Dis. 1999, 5: 607-625

63. Mengaud, J., C.Braun-Breton, and P.Cossart. Identification of phosphatidylinositol-specific phospholipase С activity in Listeria monocytogenes: a novel type of virulence factor?Mol.Microbiol. 1991,5:367-372

64. Milohanic, E., Jonquieres, R., Cossart, Berche,P., and Gaillard, J.-L. The autolysin Ami contributes to the adhesion of Listeria monocytogenes to eukaryotic cells via its cell wall anchor. Mol Microbiol 2001, 39:12121224

65. Nyfelt A. Etiologie de la mononucleose infectieuse. C. R. Soc. Biol. 1929,101: 590-59175.0'Sullivan, D.J., and Klaenhammer, T.R. High- and low-copy-number Lactococcus shuttle cloning vectors with features for clone screening. Gene 1993,137: 227-231

66. Pandiripally, V.K., Westbrook, D.G., Sunki, G.R., and Bhunia, A.KSurface protein pi04 is involved in adhesion of Listeria monocytogenes to human intestinal cell line, CaCo-2. J Med Microbiol .1999, 48: 117-124

67. Pfeuffer,T., Goebel W., Laubinger J., Bachmann M., and Kuhn M. LaXpl80, a mammalian ActA-binding protein, identified with the yeast two-hybrid system colocalizes with intracellular Listeria monocytigenes. Cell.Microbiol. 2000, 2:101-114

68. Pistor,S., T.Chakraborty, U.Walter, and J.Wehland. The bacterial actin nucleator protein ActA of Listeria monocytogenes contains multiple binding sites for host microfilament proteins. Curr.Biol. 1995,5:517-525

69. Portnoy D.A. Innate immunity to a facultative intracellular bacterial pathogen. Curr. Opn. Immunol. 1992,4: 20-24

70. Portnoy, D.A., Auerbuch, V., and Glomski, I.J. The cell biology of Listeria monocytogenes infection: the intersection of bacterial pathogenesis and cell-mediated immunity. J Cell Biol 2003, 158: 409-414

71. Purdy, G.E., Hong, M., and Payne, S.M. Shigella flexneri DegP facilitates IcsA surface expression and is required for efficient intercellular spread. Infect Immun 2002,70: 6355-6364

72. Raveneau, J., C.Geoffroy, J. -L.Beretti, J. -L.Gaillard, J.E.Alouf, and P.Berche. Reduced virulence of a Listeria monocytogenes Phospholipase-deficient mutant obtained by insertion into the zinc metalloprotease gene. Infect.Immun. 1992, 60:916-921

73. Robbins, J.R., A.I. Barth, H. Marquis, E.L. de Hostos, W.J. Nelson, and J.A. Theriot Listeria monocytogenes exploits normal host cell processes to spread from cell to cell. J Cell Biol 1999,146:1333-1350

74. Seeliger H.P.R. Listeriosen. Springer-Verlag KG, Berlin 1958

75. Seeliger H.P.R. Listeriosis history and actual development. Infection. 1988,16: S80-S84

76. Shen, Y., M. Naujokas, M. Park, and K. Ireton. InlB dependent internalization of Listeria is mediated by the met receptor tyrosine kinase. Cell 2000,103:501-510

77. Sun, A.N., Camilli, A., and Portnoy, D.A. Isolation of Listeria monocytogenes small-plaque mutants defective for intracellular growth and cell-to-cell spread. Infect Immun 1990,58: 3770-3778

78. Surette, M., Miller, M., and Bassler, B. Quorum sensing in Echerichia coli, Salmonella typhimurium, and Vibrio harveyi: A new family of genes responsible for autoinducer production. Proc Natl Acad Sci USA 1999,96: 1639-1644

79. Vazquez-Boland J. -A., Dominguez-Bernal G., Gonzalez-Zorn В., Kreft J., Goebel W. Pathogenicity islands and virulence evolution in Listeria. Microb. Inf. 2001, 3: 571-584

80. Vazquez-Boland J. -A., C.Kocks, S.Dramsi, H.Ohayon, C.Geoffroy, J.Mengaud, and P.Cossart. Nucleotide sequence of the lecithinase operon of Listeria monocytogenes and possible role of lecithinase in cell-to-cell spread. Infect.Immun. 1992,60:219-230

81. Vazquez-Boland J. -A., Kuhn M., Berche P., Chakraborty Т., Domingues-Bernal G., Goebel W., Gonzales-Zorn В., Wehland J., and Kreft J. Listeria pathogenesis and molecular virulence determinants. Clin.Microbiol. 2001,14:584-640