Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Механизмы гибели клеток в экстремальном состоянии и подходы к их коррекции

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Механизмы гибели клеток в экстремальном состоянии и подходы к их коррекции"

АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ИНСТИТУТ БИОХИМИИ

•*\ г» -ч

'чу ол

О На правах рукописи

УДК. 616—001:616—008.

ШНЕЙВАЙС Владимир Борисович

МЕХАНИЗМЫ ГИБЕЛИ КЛЕТОК В ЭКСТРЕМАЛЬНОМ СОСТОЯНИИ И ПОДХОДЫ К ИХ КОРРЕКЦИИ

03.00.25 — Клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискаиие ученой степени доктора биологических наук

Ташкент — 1993

Работа выполнена в Узбекском научно-исследовательском институте гематологии и переливания крови Министерства здравоохранения Республики Узбекистан (директор Я. Д. Сахибов)

Научные консультанты: академик АН Республики Узбекистан, доктор медицинских наук, профессор К- А. Зуфаров

доктор медицинских наук, профессор Я- Д. Сахибов

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор А. А. Турдыев доктор биологических наук, профессор К. Н. Нишанбаев доктор медицинских наук, профессор М. М. Махкамова

Ведущее учреждение — Институт физиологии и биофизики

АН Республики Узбекистан

Защита диссертации состоится «_»_1993 г.

в -- час. на заседании специализированного Совета

Д 015.16.21 по защите диссертации на соискание ученой степени доктора наук при Институте Биохимии АН РУз. (700143, Ташкент-143, проспект X. Абдуллаева, 56).

Автореферат разослан «_»_1993 г.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биохимии АН РУз.

Ученый секретарь специализированного совета д. б. н.

БУРХАНОВ С. А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕГКСТИКА РАБОТИ АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Недостаточность научных 'знаний о. прг^-':~.наз п механизмах развития клеточных обратима и необратимых повреждений в экстремальных-ситуациях /шок, кровопотеря, острая сердечная недостаточность,острая эндогенная интоксикация н т.д./ серьезно сдерживает разработку новых, .патогенетически обоснованных методов борьбы с этими состояниями. Актуальность проблемы обуславливается широкой распространенностью в современной жизни критических ситуаций и крайне высокой летальностью,' их-сопровся-тегоей.

Экстремальные ситупии, и в частности, шок;-как типовой патологический процессприводят к нарупенкю аункзйй практически всех систем организма, однако, особо вакное значение имеют изменения со стороны нейроэндокршшой, сердечно-сосудистой системы и метаболизма. В зависимости от причин, степень включения нейроондо-криняых механизмов в патогенез процесса различна, однако, даже в случаях, когда они не играют инициальной роли, их значение дос- • таточно велико/Пермяков 1989/.В то ке гремя, как указывает' проф» Г.С.Левин,/1991/, признавая важность неПро-зкдскринных механизмов в патогенезе кровопотери и щона, следует отметить,что кликг— цист, как правило, встречается с теми фазами- процесса, в которЕпс ведущая роль принадлежит расстройствам гёмод.тнаь'лки в микроцир» куляцчл. Вызванное перераспределением сердечного выброса резкое ухуятание кровоснабжения многих органов и тканей сказывается на • их специфических функциях, приводит к разбалапсирокшностп процессов анаболг.зпа и катаболизма в организме, накоплен™ токсическая продуктов обмена и усугубления гипоксии - одного'из осиои-янх факторов патогенеза экстремальных состояний,

Молекулярные механизма быстркх трансформаций клеток при экет--рег.ально;.! воздействии, рассг/атригавгаеся улту как результат птт-токеллзпг-! г^кребями кишечника и их топстеечл, тоздеЯсгеяя гио-,, -■-оот'ггтандилов, средксколекуллп-гыг пеп?;;Г,о"а п кислых • Iгхг-I."-т-1, витимо, следует связывать с дябо споср-ецо-

окислительно" деструкции пл^гок, стюботеоряд™-чогрзнанием г\г».'лЗроп, лпппдов. бзлкоз ~ нуя/зл^свих к:'> -ог стругтув/Аазносьси 1989,1990; Владимиров 1991; !■(■ ■

гит ;-'р, 1992( :*зСог.1 Т9Г5, о 5: -X. 19137/,

- 2 - ' -

Исследования этих механизмов долгое время сдергивалось представлениями о-йевозмомюсти активации окислительных процессов npi дефиците кислорода. Даже такие авторитета, как Владимиров а Ар-чаков/1972/,считали,чю иерекисная гипотеза некроза клеток "удовлетворительно объясняет многие случаи гибели клеток /креме иле-ИЦИ/и .

■ .Анализ основных факторов токсемии при экстремальных состояниях позволяет выдвинуть положение о ведущей ци.тотоксичёской рол: активных <рорм кислорода, ооусдавливающих ингибировайие энзимати-ческих центров е цепях переноса электрона, повреждение клеточное энергетики и сист-ел внутриклеточной дезинтоксикации и развити< необратимых шполигических .процессов.

В качестье средства, способного коррегировать чрезмерную акти-вацшо радккалоойразования при гипоксии и.-ишемии /способного быт: лоьушкаыи ¡радикалов кислорода или ах производим/, а также к переносу электронов.,по дыхательной- цепи при повреждении. эаектроно-транспортных систем в этих .условиях, были■ использованы азотсодержащие производные 1,4-наХтохкнона, синтезированные е виде.донор-но-акцепторных автокомплексов с внутримолекулярном переносомОза-ряда /Дрегерис, 1980-1962/,Па структурным-и .функциональным.с?ой-ствам эти соединения можно рассматривать как аналоги лабильного внутримембранногй переносчика электрона- убИхинона /Левин 1991/.

Следует подчеркнуть, что' до сих лор нет -безусловных морфологических и биохимических критериев необратимого повреждения - клетки /Демур&в и др. 1985, NiaäicU* et al. Г987/.

Среди факторов; наиболее вероятно ответственных' за ишеми-ческое и гкпоксгическое повреждение клетки- ацидоз-,энергетически! дефицит, избыток ионов'.кальция, разрушение мембран, очень мал( внимания уделяется прямому повреждение хроматина. ■ Структурна) организация хроматина в этот период отражает • функцйонир'овани( генетического аппарата, интенсивность, процессов, определямци: метаболизм-Есей клетки /Танина .1950/, Использование компьютерны: автоматизированных методов анализа образа ядра и клетки позволяет получить информацию,не -достижимую при традиционных-визуальных методах исследовании. Подобные подходы к изучению- интер^аз-ного хроматина при экстремальных'воздействиях на клетку - нам ш встречались. ■ ' - ■

ЦЕЛЬ К ЗАДАЧИ КСС&ЕДОЕАШ'Л. Целью исследогония является определение' роли токсических форм кислорода в пгтогенсзе илтер^азноЯ табели клеток и экстремальных ситушшж /геморрагический и гис-дерально-ишекический шок, экспериментальны;; инфаркт миокарда/ и разработка методов патогенетически обоснованно* зачпти клетки в этих ситуациях. '

В сеязн с 'указанно?! • целью ставятся следугаив задачи:

1. Провести >/ор:|олог»ч5ско'е йзуче.чве печени,сердца и полиадор}неядерных лейкоцитов кряри в- динамике, раз вития, впсцер&льно-иперп-ческого и геморрагического атака.

2. Провести мор.£рлогнческое изучение эу;-сктш.костп , ноенх комплексных к^оЕсзаменителёГ; при лечении гисиерольно-итегического я геморрагического соков.

3< -Изучить'показатели' перекаского■ окисления винилов в крови, гкзнях'и■ дрякциях • органелл клеток печени на этапах шока.

'Изучить вдгянае яое1"?-азотсодермвдх производных I ;4-Н8']тохи-вона цп. дыхательные-цен«, митохондрий.

5. Изучить вдегшие аоькх хенскон на клслород-з&Енсямые характеристики йггонктирувднх клеток.

5. Изучить антиокислитзльную и антираднкальную.активность производных 1 ,,4-на'4Яохинонй н гомогенных и' мшсроготерогенчых системах окисления и при СЕооодно-'рпдпкзльном- окислении липицов мп-грхондркЗ и макросом. ' . ■

7. Исследовать способность производных 1,4-няугох1;но.на к; зывдте иггер'разнсго хрскатяна изолированных гепатоцитсв при индукции зкясленгл и урсузтрчч меток печени в экстремальных ситуациях.

3. Изучить злакни* и£>р.их- производных Г,4-на;.тохп:гона на течение эгсперймситряыгоРо коро.'шрос.кклхззионного инфаркта миокарда.

НАУЧНАЯ- НОВИЗНА ТАВОТЬ', .Одним-йз. путей- псгврезгдения кле'ток в экстремпяьник ^ситуациях является ' дитатоксическое воздействие продуктов изт'рэ-ччнного метаболизг'.а 1<ак самой клетки, так и все- ' го организма в результате'нарушений вегетативных аункцяй /гисто-гоксип/-. Проведенные «ссяедовркия позволили уотановить- ранее не- • язвсстёый. Зактг резкого усиления сюбодн'ерадикального окисления зрл' -развитии двух .ввдов экспериментального шока •' вврпергльно-иябмнчес.чаго- и -гетюдадаческога. Впервые бфто проведено тщэт.ель-тое-- сэдостаязёняе' гястэлогическпх, моррометричесннх, бко^яияео-

1шх и биохимических показателей развития необратимых шгеточшс повреждена;! и показана роль свободнорадикального окисления з этих процессах. •

Получены новые результаты,развивающие и углубляющий гипотезу, разрабатываемую в течение рада лет в лаборатории о роли нарушения транспорта электронов е митохондриях в результате блокад; эндогенными токсическими продуктами терминальных звеньев дыхательно;: цепи /Ленин 1391/.

■ Впервые' обнаружены перестройки структуры ядеркого хроматшн щи развитии иска,' указывающие на нарушения регул яти белковогс синтеза, осуществляемого на генетическом уровне г. пригодядие [ срыву это!; регуляции и кнтер^азной .гибели клеток» С помощью вы-сокоразреващей компьютерной цитофотоыетрим получены ранее не известные %акты корелляции структурных нарушений пмтер^ьзногс хроматина клеток печени на этапах шока и ядер изолированию: ге-патоцитов, помещенных в среду, генерирующую активнее радикаль кислорода.

Обнаружены свойства восстанавливать потребление кислорода >ш-тохондраями печени рядом новых производных 1,4~нЕа,тох1!кона"/1р1 (.-.окаде- одного, двух или всех трех комплексов переноса дыхательной цепи. Впервые показано,' .что, ' наряду с донорно-ькцеиторной активностью, позволяющей этим соединениям кодифицировать дыхательную цепь митохондрий,эти соединения проявляв виракекные ан-тиоксидантние свойства как в гомогенных и микрогетерогенных химических системах окисления, так и при пер.екисноы окислении ли-пидов митохондрий и микросом печени. Впервые было обнаружено, что ряд соединений этого класса в ферментативных цепях окиоленш проявляет антиоксидантную активность более высокую, чем активность редераых антиоксидантов - ионола и ыенадиона. Впервые проведена оценка уроЕня секреции активных форм кислород* изолированными одиночными фагоцитирующими ¡слетками- нейтро^'лап а макрофагами и 'обнарукена возмоявость регуляции зто» актикюс« новыми производными 1,4-вафтохинона.

Обнаружен ранее неизвестный вид фармакотерапевтического действия новых производных 1,4-нафтохшона: "антиинфарктогеннсе" пр! экспериментальной .коронароокклюзии.

Впервые обнаружено значительное удлинение срока перенлвшш

олщ.ованних гепатоциров при добавлении'в питательную среду не-|?6рЫХ производных 1,4-Н8$ТСШШ0Н8, '•

ТЕОРЕТИЧЕС;М V, ФАКТИЧЕСКАЯ-ЦЕННОСТЬ РАШШ. . Демонстрируя вовлечение радикалов кислорода, почти в каждый шаг информации клетки, при шоке я сходных процессах, полученные ¡зультаты углубляй и подтверждают оксярадикальную теорию пято-;неза, патофизиологии и терапии экстремальных 'состояний, ¡следование спосббстнует дальнейшему обоснованию-самог.о термина 1еобрэтимо.сть" как понятию относительному,- злвиеякему от урошя !зе!!тея наук!!. . .

Определённую нн^ормэцию в теорию насильственной штерйазной •[бели клетки при экстремальных состояниях вносят полученные ре^-гльтатн о роли кислородных-радикалов в повреждении генетическо-з аппарата клетки на этапах шока.

Полученные в работе результаты распиряют теоретические пред-гавления о высокой биологической активности новых автокомплбк-1ых соединен^:- азот-содергащях производных 1,4-на']тохинона ,де-энстрирукт, что их положительный э^ект обусловлен не какими-то четными свойствами, а имеют в основе»единый Механизм, вналогич-функционированию в биомембранах природного ко4 а кто ра-у б ихино-а. '••'.'•'

Высокая эффективность производных 1Д-нэфтохинонп при лечении кспер.иментального инфаркта миокарда подтверждает правильность редполагаемых механизмов цитолиза при экстреМаль/шх. состояниях позволяет разрабатывать патогенетически ббоснозвэниу» терйпях.. Полученные в работе результаты являются теоретической .основой азвития исследований по созданию новых комплексных' многофункциональных кровозамещащих средств, наиболее элективных в- тер- ■' пнальных ситуациях, когда ни восстановление доставки-к клеткам ислорода, ни введение субстратов окислений не. в .состоянии реа-кмаровать клетку. •.-• - ■'

Практическая ценность работы связана с созданием прогрэ?,»! на-, узионпой терапии экстремальных состояний, созданием нозих кожзаменителей полифункционального действия, ^ективних в /кли-ике и в экспериментах на животных. Разработан новый кровезаме-итель "сукцинасол",а также способ, профилактики и лечения ишёми-[еских повреждений с помощью "сукцинасола", в. частности ' получе-

. '•• ■• . - ß -

на .приоритетная справка на спосаб профилактики острой почечнс недостаточности с использованием этого кровозаменителя /Шибунс-кая и др; 1991/.

В процессе выполнения данной работы били разработаны скршшн говые методы оценки биологической активности новых химическ соединений с использованием современных методов компьютерно мор1ометрии, спектроф отом е т рл и, хемилюмянесценции. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Мате риалы диссертации доложены на: на кон.;,open ции "Современные'вопросы детоксикацпи" /Андижан 1988/;на заседа ниях научного общества гематологов 'и трансфузиологов /Ташкент 1987- ISS3/; на. заседании.научного общества патофизиологов /Таи кент, 1988,1590/; на У1 ,Всес. совещании по проблемам автоматизации анализа изображений /Пущино,1991/; на У1 Всес.съезде патофизиологов /Кийшев, Л98Э/1 "tía III съезде гематологов Узбекистан! /Ташкент,1390/; на III и. 1У Бсес. конференции "Биоантиоксидант' /Москва,1989,1992/; на Международном съезде патофизиологов /Москва,1991/.■

0ЁШ1 И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 197 страницах .мавднописного текста и состоит из введения, обзора литературы» материалов и методов исследования, шести глав, содержащих результаты собственных исследований с их анализом, заключения i выводов. Текст иллкстрврог-ан 23 таблицами и 63 дисункаш. Указа? тель литературы Еключает 368 работ /191 на русском и 177 на иностранных языках/.

МАТЕРИАЛЫ К шода imBíiCUAÍCU.. СОСТАВ КОМПЛЕКСНЫХ m,,0K0FРЕКТОР ОБ.

В' работе использованы несколько новых полифункиионалышх кровезаменителей, разрабатываемых лабораторией в течение ряда лет. Исслёдован новый комплексный гемокорректор КГК-1,включающий коллоидный препарат реополиглюкин /450 мл/л/, лактасол /450мл/л/-средство,. влияющее на состав и количество экстрацеллкмярной жидкости и коррелирующее кислотно-осноЕное состояние /КОС/,осмодиуретик маннит /25г/л/и поставщик богатых энергией соединениЛ-нат-рйй янтарнокисрый /5г/л/, Согласно нашим исследованиям, включенные в состав,НТК ингредиенты совместимы в фармацевтическом и фармакологическом отношении.

В. качестве средств,' способных не только восстанавливать сис-

темную гемодинамику, водно-электолитный. баланс, КОС но в контролировать молекулярные механизмы цитолиза, мы изучили ряд кровезаменителей, в состав которых вводились азот-содержящие производные 1,4-нгм.тохинона, условно обозначенные нами как автокомплексы /АК/. 1'ыли исследованы свойства следующих молекулярных автокомплексов -АК-40, AK-II2, АК-49, AK-I35, AK-I72, AK-I73, АК-174, AK-I76, синтезированные в Латвийском Университете. Формулы соединения приведены в таблице I, Гемокорректор, состоящий из КГК-1 и автог.смплекса AK-IG5 /25мг/л/ был условно назван КГК-2. В некоторых опытах мы использовали комплексный гемокорректор,сос-тсици;' из КГК-1 и молекулярного автокомплекса АК-49 /25мг/л/. Этот кровезаменитель мы обозначили как ГСГЯ-3. ЕКСЦЕГ'АЛЫЮ-№ШХГКИ1 ШОК /Blllií/ воспроизводили пережатием'верхней брыжеечном артерии /ВЕЛ/ на 2 часа и последующей поэтапной ревяскуляризянис.': /Губаев, 1969; 1^иеПваЯс, Губаев 1969/.

. в работе использовали 7Q кроликов-самцов породы гашшилла мао~ сон /2,6 Т 0,25/ кг.

Цродолтетельность жизни укготнмх после окклюзии и полной ре-гаскуляризацп:! EFA колебалась от 60 до 90 мин. Воздействие ¡ш организм кн;уз ионными средами , разработанными в лаборатории» производили после снижения /Л до 20-25 мм Н , в среднем через 60 мин после реваскуляризации.

Г£.'.,СГВАПГ1ЕС;{}!/] ИСК у кроликов воспроизводили по модифицированному методу Уиггерса. В работе использовали 78 кроликов - самцов по{оды шиншилла массой /2,7 + 0,4/ кг. Гипотензшо поддерживали до наступления так называемо!! "необратимой" фазы шока. Состояние "необратимости констатировали на основании критериев, разработанных про:. Левиным с сотр. /1991/ : спонтанная решвдзия 1/3 выпущенной крови и падение рН артериальной крови ниже 7,2.

ыетош в;с;л с:;зещекпя koí снагогенного ишагкта миокарда.

Габота пшолнена на 51 белоч крысе-самце массой 150-200 г. Экснерккентачьный инфаркт миокарда/ЭГД/ вызывали перевязкой нисходящей ветви левой ко;онарноИ артерии под гексеналовым наркозом щи искуственном дыхании. Через 5 мин после перевязки животным опытно" группы /21/ вводили 0,1$ раствор препарата AK-I35 'в дозе 7 !.т/кг внутрнбрв'линно или 2 мг/кг внутривенно.

Хиеотип". контрольно!"; группы /20/ вводили соответствующий объ-

|ц «»си ив мгаямамгавм и |

£4

г\/п

скяАммгмйв .

С-- Е |й ■ -ъвЗД&Д) «ль}««.- /лксо I вкис-Л^ни«,- X ■■ «»'члч.) I

О • ® .си.

АК - 112

-в | -7

6,1 в 10 | 2,0 9 10

«г=Х40- Эдем &аз ■ я з*. м а «в» «5 гл «*» лих»* кг я ж 10 % «а 0 я са ь-^глжвияпьге^лш^

О '

оЛ

А:< - 49

1г

-7 1 -81

1| в ю ч,о « 10 I

снч

^.'.аяеоши!

в .С»,

ЙК - 40 »««¡о«*»

ь ««пя а» о» якст&ав «а «¡дЫашп м »

I о . I

а С1 ЛК - 172 I

^СИ.-^НС! |

а,з » ю

6,0 * 10

-7!

I I

-3 I

1,з « ю I а,з » ю !

л* - 173

кн-<^-сааАго.н2о|

_7

I 3,4 » ю

СН

Ч

АК - 135 II I

| -5| -3

I I 4,0 »10 I 4,1 > 10 I

1

.1 "Т 1

Ни «ахяягйа в«« ва:

1,1 » 10 2,С * 10~Е|

^э5 ' • ¡1 -и

»х-/-. : | 4,8 " 10

!к I

* 10

Таблица 1-, Химические формулы и штиокислителышл активност азот-содержащйх йроизшдных ТИ-иафтохкноня.

'ем физиологического ра'стЕОрп. Для сравнения йсследоЕлли 10 ин-тактных крыс. До операции, через 5,- 10 мин и через 7 суток после воспроизведения ЭИМ регистрировали ЭКГ.Крыс декапитироваля через I час и 7 суток под гексеналовым наркозом, массу некроза миокарда оценивали метолом весовой планиметрии к морфометряческя па 7-е сутки Э1"1. Активность цитохромоксядазы выявляли на свежезамороженных срезах по Боскину и Левинсону /1957/,

методы элеютснноизсроскопичесш исследований.

Фиксацию и приготовление препаратов для электронно-микроскопического исследования прогодили общепринятыми методага, разработанными для изучаемых органов и тканеИ /печень, сердце, кровь/. Кусочгл печени фиксировали 2,5$ раствором глутарового альдегида на какодилатном буфере /рН-7,4/ в течение двух часов, отмывали в том же буфере с сахарозой и дофиксировали в течение 1,5 часов осмиевой кислотой. Кусочки залигали в эпон. Резку материала производили на ультратоме у.ирмы lkb. Сначала получали rfasyfomtae срезы, которые окраанвали метиленоЕыМ сгжж - азуром1 - Зуйсин'ом, а затем готовили ультратонкие срезы, Ш'Л'растироВаЛй Ш. уранил-ацетатом и цитратом свища и исследовали на электронных микроскопах ЭЕМ-1С0Л и ПЗ!.:- 100.

К0Л1ПЕСТБИт! ЭЛЕСГР ОШОйЖОСКОГПГЧЕСИш АНАЛИЗ ИПОХОНДРИЙ ГЕПАТОЦКТОВ И КАРДШ.ШГГОВ. -

Учитывая особую роль митохондрий в. механизме трансформации гепатоцита и кзрдиомицита при шоке,-был проведен стереологичес-кик анализ этих органелл /'ifeibel et ai.I969/. Подсчитывали числа про]илей митохондрий на площади среза клетки /Ы/,определяли среднюю площадь митохондрий в процентах от изучаемой площади /5щ/, сбгег.шую плотность митохондрий /V,/, отношение удлиненных структ-тур к общему количеству митохондрий на площади центрального сре-г за гепатоцита /К/ и отнопение числа повременных митохондрий к общему их числу на площади /800 кв. шел/ среза кррдиомиоодта А /• Статистические результаты обрабатывались методом оценки достоверности разности по критерию Стьюдентй,-К0!.'3!1СГЕГНА.и 13 !Т Oi ОТ OvETF ИЯ, ЬШГОЙ/МШШЕСЯИЙ АНАЛИЗ ШАГОВОГО ОБРАЗА КЛЕТКИ. '..."'

Для термометрических исследований' отйечатки печени или маз#я\ гепатоцитов после фиксации спирт-форма л иной окрааиЕали по- Фель- .'.'

гену-. Оптико-структурный анализ хроматина ядер включал: сканирование ядер на автоматизированном пироскопе "ЫОРФОКЕАНТ" /КАРЛ ЦЕ«С,Ш1А/, математическую обработку цифровых матриц изображения ядер /образа ядра/ с целью накопления морцометрических и статистических характеристик /Агаджанян и др.1905/. ППхИЗШШОЕ ИЗУЧЕНИЕ ККСЛОГОДЗАВИСИГ.ОЙ АКТИВНОСТИ ФАГОЦИШ'УЮ-

ш клеток.

I.Iff* клеток /лейкоциты или перитонеальные макрофаги/ наноси ли на дно пластиковых чашек Петри и располагали на термостатиру-емом столике автоматизированного компьютерного цитофотометра.

После осаздения клеток на дне чашечки, распластывание на которой активирует "респираторный взрыв", добавляли 100 мкл раствора нитросинего тетразолия /НСТ/- 0,02 мг/мя, и при температуре 37°С в течение 35—15 мин измеряли комплекс морфометричес-ких показателей, характеризующих содержание и структуру гранул диформазана, образующихся по мере восстановления НСТ. Измерения првводили каадые 20 сек в автоматическом режиме на приборе "ШР-40КВАНГ''. Выходные параметры, измерявшиеся системой, пригодятся в таблице 2.

Таблица 2.

Параметры, характеризующие-, образ ядра или ¡слетки. ГЕОМЕТРИЧЕСКИЕ PEKIM - ИЕГИЖГР КЛЕТКИ AREA - ПЛОЩАДЬ КЛЕТКИ . Р2А - ДОРМ: АКТОР Д1АМ - ДИАМЕТР КЛЕТКИ ' АКЕАС - ПЛОЩАДЬ Щ1Т0Ш1АЗШ NUAR, - ПЛОЩАДЬ ЯДРА •АВШД-. ЯДЕГНО—ШРАЗМЕННОЕ ОТНОШЕНИЕ

ОПТИЧЕСКИЕ ОД - ОПТИЧЕСКАЯ ПЛОТНОСТЬ • . 5ОД - ИНТЕГРАЛЬНАЯ ОПТИЧЕСКАЯ ПЛОТНОСТЬ КЛЕТКИ •&0Д7 - ИНТЕГРАЛЬНАЯ ОПТИЧЕСКАЯ ПЛОТНОСТЬ ЯДРА СОДЦ - -ИНТЕГРАЛЬНАЯ ОПТИЧЕСКАЯ ПЛОТНОСТЬ ЦИТОПЛАЗМЫ ■ ' . / ТЕКСТУРНА

МЕА//2 - КОНДЕНСАЦИЯ ВЕЩЕСТВА В КЛЬ*ГШ2 Д1&Р2'- ДИСПЕРСЮОГЬ БЕШЕСТВА В КЛЕТКЕ

- 1Г -

"'.5егек- геткг ОШШОСГЬ вецества В структуре клетки /ядра/ 1,5ЕНОЯД-'СГЩШ ДЛИНА XOFÄ

меамр - сгшш шш'.туда хорд

дном - даакгсш рлспш;кгаш хорд по длине

да1.р - дкспегсил ашшд хорд

Компьютерны:5 анализ' образов клеток предусматривал корректировку сканограмкн, нормирование длин хорд на суммарную длину сканограьь мы и нормирование амплитуд на значение (Jona. 1

гепатощгш изолировали поRösberg et al. /1975/. ОПГЕДЕЛГЖЕ продуктов ПЕГЕКШЮГ'О оккшиш ЛЯ1ШВ.

Псроксидсцип митохондрий проводили в не.;ерментативной /Fe++/ аскорбат/ и-^ермеятативноГ. /Ре++/НАД!Н//Ц№/ системах.

Количество гидроперекисей жирных кислот и флюоресцирующих оснований пидра в гомогенатзх печени определяли noCsalany & Ayas 1976,Rooknagel ,1966.

Антирпдикальную активность липидов, выделенных по'методу Фолча определяли по /Лукин, 1976/.

Для исследования не^ерментативного и ферментативного Керекис-ного окисления липидов микросом был использован метод ингибировя-ния хемилтшесценция /Сайопав ot el, 1987/.

Количество супероксида определяли по его реакции с нитроскним тетразолием /IIСТ/ во сатана вливающимся до.дицормазана. Концентрацию нерастворимого дирормазана определяли турбидиметрячески по Auolsir , 1985, используя двухлучевой регистрирующий спектрофотометр C1-I8.

Хймилплшесценцию /ХЛ/ измеряли в пластиковых кюветах в хеми-лгминометре ХЛ1ЯЦ-01.Рабочая камера термостатировалась при 37°С. Хинони в различных концентрациях вводили в этаноле, эквивалентные количества этанола добавляли в контрольные пробы. ПОЛЯГОШ*; КЧЕКЮВ исследование дыхательно;: шяушюстя иктохояд-I ;'Л печени, проводили ранее описаниумл методами /Тремасова ,1987/ летим,I9F9/. При проведении пнгкгЧгге]пого гшглпга буля пепользе-гпны сг.едуп:г." пиггЗгдорд переноса электронов: готсиоп-2'тЛ, ов-т'-.мнцин A-I пт./пп, 1 м'!.

-12-

ГКЗУЛЫАТЦ ИССЩОВАН^ И ИХ ОЕСУлДШЕ УЛЬТРАСТРУКГУРА [МШ И СЕРДЦА ЗКШЕРИДММЬКиХ ¿УЮТНЫХ В ДИ-НШМ ВПЩЕРАЛЩО-Щ'Е^ГЧЁСКОГО И ГЕЮРРАПЛЕСКОГО ШОКОВ И ПОСЛЕ ЛЕЧЕНИЯ НОВВД КРОВЕЗАШИТЬШ.М.

В печени при висцерально-ишемическом шоке отмечаиись грубые микроднркуляторние расстройства и деструктивно - некротические поражения паренхимы. Четко были выражены признаки нарушения реологических свойств крови, сладаирование эритроцитов, очаговые кровоизлияния, отмечалось резкое увеличение числа полимор^ноя-дерких лейкоцитов /Ш^/, часто формирующих агрегаты. Выражены признаки активации, истощения и токсического повреждения ШШ и звездчатых ретикулоэндотелиоцитов /ЗР/ и их предшественников.

Во всех отделах печеночной дольки под электронным микроскопом обнаруживались только светлые гепатоцити с резко обедненной рибосомами цитоплазмой и полностью лишенные гликогена. Зернистая эндошазматическая сеть редуцирована, остающиеся цистерны- ф.раг-ментировани и Еакуолизированы.Одновременно отмечалась резкая гиперплазия гладкой эндоплазматической сети.

.Наблюдались глубокие изменения всей популяции митохоидрй[; -выявлялись только мелкие, органелли, с просветленным г.атриксом и небольшим числом укорочешшх*кркст. Кор^окетрические исследош-ния митохондрий гепатоцитов, проведенные в кнтеркедиа^ных зонах дольки, позволили установить сниление в 2 ¡аза общего числа ор-ганелл, числа вытянутых профилей в 16 раз и объемной плотности митохондрий в клетке на 35>" /см. таблицу 2/.

Описанные ультраструктурные изменения послужили исходным фоном, позволяющим оценить эффективность комплексных геыжорректо-ров. Инфузия КГК-1 способствовала восстановлению структур гемо-циркуляторного русла в печени, исчезали признаки внутрисосудис-того свертывания, агрегации и сладжирования клеток крови, их адгезии к стенка^ эндотелия.

В миокарде рри ВИШ резко выраа^ены признаки гемодинаыических нарушений: адгезии клеток кроЕИ к стенкам микрососудов, агрегация эритроцитов, тромбоцитов и капиллярные стазы,обнажение суб-эндотелиальногб слоя, появление агрегатов 1ЫЛ.

Наиболее глубокие нарушения отмечается со стороны митохондрий кардиомиоцитов, происходящих на ф-оне резкого снижения и,

участками, полного исчезновения из цитоплазмы гранул гликогена. Злектронно-микроскопически наблюдается просветление матрккса, эбразовпние "мешковидных" вакуолей на одном из полисов-этих ор-ганелл. Часто отмечается повратдение наружной мито.хонд] иальноЯ мембраны, разрывы в структура г.-ембран крист. Зол ее чем в ¿0 раз по сравнению с контролем возрастало количество явно поврежденных органелл /см.табл.З/.Одноврсг.-снпо в клетках '.■иокарда, в отличие от гепатоцитов происходило увеличение средне;'. площади митохондрий и пх объемной плотности;

С восстановлением проходимости микроииркулятэрного русла миокарда после пн;узин КГК-1 уменьшались изменения в .эндотелиоци-тах, исчезали признэкл внутрисосудистого свертывания, стазы крови. Все эти положительные влияния гемокорректбра КГК-1, видимо, !.'о;шо объяснить удачным совмещением в составе этого препарата плззмозаменителя газодинамического действия реополлглюкина, а таюте соединений,влияющих'на годно-электролитный обмен,диурез а дезинтоксикацию. В то яе время использование КГК-1 не оказывало достаточно э ^ективного воздействия на структуру гепатоцитов и кардиомиоцитов.

Признаки, свойственные "шоковой клетке"' и характеризующие- так называемую "необратимую" ¿азу шока./повреждение хроматина, резкое набухание и погребение мембран митохондрий /см. табл.3/,деградация компонентов пластического обеспечения клетки, чрезмерная активация структур микросомального''окисления, отсутствие гликогена/, не устраняются после инфузии этого полифункционального' кровезаменителя.

Более элективным оказался кровезаменитель КГК-2; под его влиянием значительно улучшились реологические свойства крови и состояние микрогемопиркуляпши, так же как'это имело место при лечении КГК-1. Однако, наряду с этим,появился положительны}: эффект в отнопении клеток паренхимы. Так, в гепатоцитах периферических и '■ клтермедиарных зон печеночной дольки появились 'вытянутые митохондрии с хороню развитыми кристами, коэффициент К возрос в 10 раз,' в сеязи с чем увеличилась и средняя площадь профиля митохондрий в гепатоцитах /см. табл.Б/. - ' . '

Включение в состав комплексного гемокорректора соединения АК-135, положительно отразилось и на структуре кардиомиоцитов.

Таблица 3.

ПОКАЗАТЕЛИ УЛЬТГАСГРУКТШЮ!! ОРГАНИЗМ и'.!'! ¡.ГГОХОВДГ-К.; ГЕПАТОЩГГОВ И КАРДШ.ВД1ТОВ ПРИ ВИ1Л И ПОСЛЕ КШУСГЛ 1ТСВЮА!,Е«ГгаШ;,Д!*м/.

: ШХИОД : ГШАТОцИТЦ

:ИССЯЩ>ЬА11. :Д',количест.:Д„,отн.плоц. .см. : :

: КОНТРОЛЬ : Б1,7 + 9,7 :0,217+ 0,024 : 0,266+0,027: 37,0+9,0 :

: [Ж : 41,3 + 6,2Х:0,1297 0,010х:0,17370,032х: 2,3+0,4х :

: КГК-1 : 55,2 * 8,8 :0,131+ 0,010 : 0,166*0,027 : 2,9*0,35 :

: КГК-2 : 53,7 + 6,8 :0,164*0,013хх:0,191*0,031 : XXX 24,0*5,1хх: XXX

: ПШ'Щ

:ИССЛЕДОВАН, : А',количеет.:5П1,отн.пло1:!. : У>,см .сг.;. : К',%

: КОНТРОЛЬ : 83,9 +17,8 :0,207+ 0,05 :0,259*0,089 : 3,0*1,0 :

: ШОК : 92,6+18,9 :0,520+ 0,097х:0,475+0,С45х: 67,0*6,0х :

: КГК-1 : ВО,8 +15,2 :0,702+0,0973х:0,466*0,025х: XX '62,0*7,0х :

: КГК-2 : 88,1 +17,8 :0,258+0,011хх:0,318+0,03хх: XXX XXX 28,0*9,0**? X XX

_ - .. _ _____________________ ________ . .

Примечание, х-достоверность /р<0,05/ различия по отношению к контролю, хх- то же по отношению к данншл до пн$узии, ххх-то же по отношению к данным до ин£узш КГК-1 я КГК-2.

'.Оказывая благоприятное воздействие .на циркуляторное русло, аналогично JCTK-I, гемокорректор КГК-2 способствовал значительно лучшему сохранению структуры митохондрий и сократителышх структур гардиомиоцитов. Показатель К , характеризующий повреждение всей популяции митохондрий.снижался по сравнению с его значением перед лечением а после инфузии КГК-1, хотя и превосходил данные контроля /см.таблицу 3/.Четко отмечались признаки восстано глеиил и со стороны средней, плоцади профиля и удельной плотности митохондрий. D части клеток миокарда появлялись гранулы гликогена.

Вторая модель экстремальною воздействия, использованная в наших исследованиях была острая крогопотеря и геморрагический шок, исследованный в динамике его развития я после лечения двумя кре-гезаменителями.

В терг,',кналыюй/"необрат1,1'.о.,1"/чазе геморрагического шока деструктивные изменения в печени и сердце оказались полностью сходны.-,и с выявляемыми при ВГ.Ш. Так, появлялись локальные участки некроза в центрах долек и интрлмедиарных отделах печеночных пластинок; эта '¡аза характеризуется г^раяенними признаками ЛВС-синдрома. В сердце мышечные волокна набухшие, отечные, во многих волокнах, особенно в субэндокардиальних зонах, плохо различима поперечная испорченность. .

Под электронным микроскопом, выявляются глубокие нарушения ультра структуры митохондрий, эндоплазм, этической сети и ядер гепа~ TOUI1TOB и кардном;1,оцитов.

У .тавотных, получивших пнфузкк FITP в смеси с автокомплекенш производным 1,4-нафтохинона наряду с восстановлением проходимости микрососудов, обнаруживались признаки восстановления и улучшения меточного метаболизма. Отмечено.увеличение числа митохондрий в гепатоцитах,госстановление структурной организации этих органелл в клетках миокарда.

ГОЛЬ ПЕГШ'.СЯСП) СККШГОИ Л/оЭДОВ В ПАТОПЖЗЕ ГОКА нами изучалась на модели висцерально-иаешческого яока.Уже в стадии юс-мии кспечнрка отмечено 50й увеличение содержания первичных продуктов ПОЛ в крови; в терминальной стадии процесса уровень гидроперекисей втрое превосходил нормальную величину. Концентрация конечннх продуктов ПОЛ /пифф.овн основания/ к контту опыта также возрастала более чем в два раза.

Лечение комплексный гемокорректором КГК-1 лишь незначительно уменьшало уровень свободнорадикального окисления в крови. КГК-2, включающее антиокевдант АК-135 более эффективно влияло на уровень начальных а конечных продуктов ПОЛ в сыворотке.

Результаты определения содержания гидроперекисей жирных кислот и флюоресцирующих основании Шиффа в лшшдах, выделенных из гомогенатов печени в исходном состоянии, при ишемии и "необратимом" шоке приведены в таблице 4.

лечение комплексным гемокорректором КГК-1 не приводило к существенному снижению уровня и первичных и конечных продуктов ПОЛ /см.табл.4/, в липидах, выделенных из гомогената печени, что указывает на ограниченные возможности коррекции клеточного метаболизма этим гемокорректороы.

Значительное накопление продуктов ПОЛ"в печени при развитии ЕИШ мокет указывать на существенную роль кислородных радикалов в генезе. "шоковых" трансформаций клеток печени, приводящих к цитолизу и некрозу ткани. Аргументы в пользу этого заключения могут быть получена при исследовании кинетики и накопления продуктов ПОЛ не только в цельной ткани, но и в микросомах и митохондриях, клеток печени- основных продуцентах кислородных радика; "В внутри' клетки. ■ , "

Комплексный гемокор ректор'КЗ'К-2, отличамцийся от И'К-1 только наличием производного 1,4-на(}тохинона,оказывал значительно более выраженное ингибирувдее воздействие на процессы ПОЛ в печени. Содержание в гомогенате гидроперекисей жирных кислот в два раза уменьшалось по сравнению с"необратимо:;" стадией шока и было несколько ниже чем на начальной стадии процесса - стадии ишемии кишечника /сы.табл.4/.

Активация свободнорадикального окисления отмечается и при исследовании гомогенатов сердца /табл.4/. Уровень первичных продуктов ПОЛ в гомогенате сердца значительно нарастал ухе после двухчасовой ишемии кишечника-содержание гидроперекисей равнялось /1,08 + 0,17/ед/мг.липвда, т.е.значительно превышало контрольный уровень /0,68 0,12/ед/мг. липида. Нарастания флюоресцирующих оснований шифф^ на этом этапе мы на обнаружили /см.табл.4/,видимо ^ еще сохраняют свою эффективность защитные аитиокеидант.чне •системы клеток сердца.В терминальной стадии иока отмечается рез-

Таблица 4.

СОДЕРЖАНИЕ ПРОДУКТОВ ПОЛ В Г0ШГЕ11АТЕ ПЕЧШ1 'НА ЭТАПАХ ВИСЦЕРАЛЬН0-ИШЕ!/34ЧЕСК0Г0 ШОКА И ЕГО ЛЕЧЕНИЯ'

Гидроперекиси■

Период • :

исследован.: ДЕ /г сирой: ; ткани I

Шиадовы основания'

: О/г сырой■: ткани ■!

ДЕ ьт/ОЛ ; мг/ОЯ ;

Контроль -.12,63 + 0,38 :0,56 + 0,16 : 2,36 + 0,12:0,28-+ 0,10 :

Ишемия :16,82 + 1,52 :0,76 + 0,11 : 4,68 + 0,56:0,46 + 0,14*:

Ш.о к

хх хх хх хх

:31,86 + 1,36 :1,36 + 0,24 :14-,62 + 1,41:1,26 + 0,20.:

КГК- 1 :26,80 + 1,48 :1,12 + 0,26 :12,78 7- 0,86:1Д4 +0,14-:

XX XX XX XX

КГК - 2 :15,37 + 1,06 :0,72 + 0,14 : 5,62 + 0,36:0,58 + 0,15 :

ПОКАЗАТЕЛИ ПОЛ В ТКАНЯХ СЕРДЦА В ДИНАШКЕ ШШ

: Период : '.исследован.: ' Гидроперекиси : ДЕ / мг липидов : Ши^фови основания : - 0 / мг липидов :

: Контроль : . ' 0,6Й + 0,12 г 0,36 + 0,08' -:

с • И1иег.:ия ■ ■: 1,08 + 0,17х 0,41 + 0,12 ' :

Шок : 1,98 7 0,22х : 0,90 + 0,10х 1 :

КГК-1 : 1,68 7 0,13х г 0,86 +-0,12 ' :

КГК-2

1,02 + 0,12 х

XX

0,42 + 0,03-х

Примечание: х - достоверность /р<0,05/ различия по отношения к контроля.

хх - достоверность /р<0,05/ различия по отношение к предыдущему этапу..

itoe нарастание содержания и начальных и конечных продуктов ПОЛ в сердце /см.табл.4/, содержание гидроперекисей достигало значений /1,98 + 0,22/ед/мг,липида', а оснований шиффа /0,90 +0,Ю/ус ед., то есть происходило почти трехкратное нарастание продукте ПОЛ. Влияние комплексного гемокорректора КГК-1 оказалоср мало э-фективным в отношении процессов ПОЛ в сердце, при лечении же ¡но ка кровезаменителем КГК-2 содержание и первичных и вторичных нр дуктов ПОЛ снижалось до уровня, соответствующего стадии ишемии Активация ПОЛ крови представляется нам ванным фактором патогенеза шока, поскольку перекиси лкпидов повреждают как сам сосудистое русло, так и органы и ткани,перф.узируеше кровью /Не агав et al. 1986, Wang et al. ,1990/.

количественный цштотоилтктатоШ анализ xfomatkha ядер гена

ТОЦИТОВ НА ЭТАПАХ ШОКА И ПОСЛЕ ЛЕЧЕНИЯ ПОШЛ'. ШШВгШШШШ Нам представлялось чрезвычайно важным ,для выяснения роли свс боднорадикальных процессов в развитии цитолиза сопоставить ин тегральные показатели ИОЛ в ткани печени и возможности накоплс ния продуктов свободнорадикального окисления с характеристикой тонких структурных повреждений хроматина отдельных гепатоцитов, поскольку именно на этом уровне возможна манифестация некро: клетки. Результаты кногопараметрического анализа ядер ¡слеток пс чени при развитии шока приводятся в табл.5.

Нарастание признаков дегенерации ядерных структур происходи..' параллельно с активацией свободнорадикалышх процессов,что мок< свидетельствовать о существовании между ними цнтофизиологическ!

связи, ......

Для изучения возможной роли свободнорадикального окисления процессах быстрой иекротизации гепатоцитов при шоке были пров дены морфометрические исследования изолированных гепатопито подвергнутых воздействию окислительной системы Ге+ АД£+аскорба Учитывая сходство временных и структурных характеристик ядер п свободнорадикальном окислении с характеристиками хроматина кл ток печени при развитии эндотоксического шока, мо;шо предпол жить ведущую роль в гибели клеток за процессами окислительной струкции.

В той же системе изучалось защитное действие производных I, нафтохинона иа хроматин изолированных гепатоцитов.'Изучались с единения АК-40, АК-49, АК-135, AK-I74 к АК-112.Результаты когт

югерной мор1сметрии хроматина изолированных гепатоцитов приводятся в таблице 5.

ГЕШ1ЯЦШ ДШТЕлШЫХ и ОКИСЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ в КЛЕТКАХ НОШИ! аэот-содшлмдаш производными 1,4-1ШТ0ШЮПА.

Целью дальнейших исследований било детальное изучении элект-роно-акцепторних свойств АК-135 и ряда новых соединений этого ряда путем изучения дыхательной активности митохондрий печени в услогипх ингибиторного анализа, и антиокиолителышх свойств этих соединении на нескольких моделях окисления клеточных структур.

Для -установления места ыслючешш различных АК в дыхательную пепь митохондрии проведен ингибиторныП анализ, позволивший определить способность'различных автокомплексов к шунтированию заблокированных участков.редокс-цепи.

Оказалось, что исследуемые соединения мокно разделить на четыре группы по их шунтирующей способности.

I группа- АК-135, 172, 174- вещества, шунтирующие 3 заблокированных участка дыхательно", цепи- ротеноком, аитимицином а и цианидом-, 2 группа- АК-49, 173-А - вещества, шунтирующие два участка цепи, ингибированних ротеноном и анткшщином А; 3 группа - АК-174-А , АК-90-А - вещества, шунтирующие I участок цепи-ро-тенонопы;5,; 4 группа- 'АК-123, 112- вещества, не обладающие шунти-руюшеН способностью. ,

ты

I - АК-49; 2 - АК-40; 3 - АК-173; 4 - АК-135; 5 - АК-172;

6 - витамин К3; 7 - викасол; 8 - ионол,

T<£jimit S.

СРЕИНИс ЗНАЧЕНИЯ ln-250) ИОНОКЕТРИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ ХРОМЙТИНЙ •ЯНЕР ГЕПАТОЦИТОВ НА ЭТАПАХ ЕОКА И ЕГО .ЛЕЧЕНИЯ

Этапа пак» ! !

—------->! Контроль ! Ишеии«

Пграметри\/! !

1 □ к КГК - 1 !

КГК

istxsaiisfcuatsstssei

НЕЙ

1

45,0,i 4,5!56,3 t 8,3!40,9ill,2!25,90i4,40! ЗВ,413,70

5 0 1

35,20+3,70!57',30*3,80!3l,4i3,40124,7 + 5,20! 30,94i7,04

структура хропйткна ядер изолированных ГЕПдтоаитвв :

ПО« ВЛИЯНИЕМ СВОБОДНОРАДИКАЯЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ I

f£Scas*a9acis«3t8itsas3css«sss«8»:stss:sKte>esass:sse«sii3M*(t«<:sstssx

¡ВЛИЯНИЕ СВОБОЯНОРАШАЛЬНОГО окисл.

I

КОНТРОЛЬ

! I

исхоа ! 2ч ! 24ч ! 0,5ч

* I

¥кзя1в;||яз,2>все{в1:кз»з jssssxBca

49,3 i ¡48,3 t ¡37,9 t ■ ¡77,0 ♦ ' t I t .

5,4 I 3,8 1 13/9 ! 7,7

I !

Параметр

AREA

MKM

1 4

1,5ч

«tsisssi;ixtn:«::

i

41,4 ♦ 134,5 ♦

12,8 I 12,7 I

2ч

taitüis*

29,3 ♦ 4,9

SOHN

ОТН.РД.

71,4 ♦ 4.1

I - I

69,4 + I 57,7 + . ! 79,3

I : I

7,4 i 23.1 ' I 5,9

! 1

I

55,7 + ! 40,1 +

1.4

I

ia,3

. 22,8 7,8

ВЛИЯНИЕ fiK <5«10 ноль) НА СТРУКТУРУ ХРОЙАТИНА ЯДЕР ИЗОЛИРОВАННЫХ ГЕПАТОЦИТОВ ПОДВЕРГНУТЫХ СВОБОДНОРАДИКАЯЬНОНУ ОКИСЛЕНИЯ

ЕВЖВВВВВВ STXSK

: 1 1 КОНТРОЛЬ . АК-135 АК-49 1 I АК-40 АК-174 AK -112

! 1локааат. . ИСХОД 2ч

Jsiiiatse ЗГX3IX3I :вЕ1тсхг

1. AREA 49,3 i £ • 79,9 + 40,0 +. !ЗА,4 ♦ 74,5 t 49 3 +

t ИКИ ' 1 • 5,4 13/9 5,7 j 12,8 12,7 4 9

t' SOCK • ■ 71,4 ♦ - . 22,8 ♦ 37,7 70.3 * 1 25,7 ± 70,1 i 72 8 i

lOTH.fa. 1. М 7,8 . 25,1 5,9 1 1,6 I 8,3 7 8

ва»в>|Е>ввввв,ввввввв1авЕ«(зе)ввввввз1взЭ1В1эе(в

На рисЛ приводятся показатели ингибироЕанил ■ ПОЛ митохондрий исследованными производными I,4-нафтохйнопа и ' ионола в.' НАД'А'Н-зависишх системах окисления. Обращает на себя вникание' очень высокая эффективность соединений АК-49 и АК-40 в системе окисления, связанной с активацией редуцирующих .хиноли 4ер- ' ментов цепи переноса электрона. '

Соединения с внутримолекулярным переносом заряда / АК-49, АК-40 / при неферментативном окислении митохондрий лишь незначительно уступали по АОА рспернсму онтиоксиданту ионолу. Под влиянием редуктазных ферментных комплексов митохондриальных- цепей переноса электронов отмечается резкое нарастание антиокислительной активности большинства исследованных автокоиплексов, а■ соединения АК-40 и АК-49 оказались более эффективными, чем ионол и менадион.

Влияние производных I,4-нафтохинона на ПОЛ микросом печени оказалось сходным с влиянием на ПОЛ митохондрий. РЕГУЛЯЦИЯ ШКУЮРОДЗАГЖСКШХ Ш;0ЦЕСС0В В НЕ/ЛТОФИЛАХ И МАКРОФАГАХ НОВиШ ПГОКЗВОДНШ! 1,4 -1 LA'i Т 0XJ И ЮНА.

Активная деятельность фагоцитирующих клеток /полиморфноядерь ных лейкоцитов и. макрофагов/ в конечном итоге сводится к генерации ологогенного потенциала, проявляющегося гиперпродукцией и гиперсекрецией лизосомальных гидролаз, эйкозаноидов и биооксидан-тов, обуславливающих повреждения эндотелия, микроциркуляции, деструкцию матрикса соединительной ткани в. зоне повреждения.

Все изученные производные можно разделить на три группы:

1. Соединения,ингибирующие НАД>Н-оксвдазу. К ним относятся автокомплексы AK-II2 и АК-49; AK-II2 оказалось более слабым ингибитором, тогда как АК—19 очень сильно влияло на радикалообразбва-ние перитонеальными макрофагами. Уже в концентрации 2.10 моль подавление было полным.

2. Соединения,активирующие НАДФН-оксидазу. Такое действие оказывали менадион, вккасол, и автокомплексные соединения AK-I73, АК-40. В исследованных концентрациях менадион и викасол оказывали резко активирующее влияние,нарастающее по мере повышения концентрации препаратов. Характерным для АК-40 и AK-I73 было наличка на кривой "точки перегиба", по достижении которой эффективность активации начинает снижаться.

3. Соединение, которое в зависимости от дозы либо активирует,д*>

бо'ингибирует генерацию кислородных радикалов.' Это Еещество ЛК-135, которое в концентрации до 2хЮ5 активировало оксидазную активность фагоцитов,а в больший, концентрациях, оказывало ингибиру-щее воздействие.

Способность перитонеальных макрофагов -продуцировать руперок-сидный анион-радикал оценивалась по массе восстановленного клеткой нитросинего тетразолия /диформазана/ в соответствии с формулой:

М = 0Д.ЛКЕА/&

где М- масса диформазана, е - коэффициент экстинкции /б = 30С00 ммоль / см/. Среднее значение массы диформазана оказалась равным на клетку /1,07 +,0,35/Гмоль/кл., хотя отдельные метки образовывали до /8,6 - 9,4/£моль/кл. диформазана. Скорость накопления диформазана отдельными клетками, рассчитанная по формуле:

V = с1(НСТН2)/<и = АхМ^Д;

составляла в среднем /0,53 + 0,15/хЮ"3*моль/кл. сек.,хотя у наиболее активных клеток эта скорость достигала /2,1 - 3,8/хЮ~3 *моль/кл.сек.

В наших исследованиях методами компьютерной цитофотометрш: проводился многопараметрический анализ 'показателей структуры /геометрических и оптических/ лейкоцитов- периферической крови экспериментальных животных /крысы/ на этапах геморрагического шока и после лечения кровезаменителями КГК-2 и КГК-З.Дабл.7/.

Подготовка животных к опыту существенно не елиялэ на актис-ность радикалообразования полиморфноядерными лейкоцитами, однако после кровопотери эта активность в среднем гозрастала почти в три раза.'Максимальный уровень секреции супероксида гранулоцпта-ш приходится на стадию обратимого шока, когда масса диформазана, секретируемого отдельной меткой,в среднем составляла 6,15 коль/ кл., в то время как в контроле эта масса равнялась 0,87 моль/кл. КГК-2 стабилизировал радикалообразогание леГкоцптов пергДеркчсс-кой кров'л на уровне 2,09 моль/кл, а КГ'К-5 на еще более ккзкои уровне - 1,^6 моль,«л.

Под влиянием факторов сока в клетках увеличив-елось содоржнг.' крушпгх глнбок окраденпнх вецеств /показатель увеличш-з-

ся до значений 9,22 огн.ед после кровопотери, а «а ''необратимо1. "

Таблица 7.

ОПТИЧЕСКИЕ И ГЕ01ЖГРИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ СТРУКТУРЫ ГРАНУЛОЦИТОВ НА ЭТАПАХ ГЕГ.ЮРРАПЖСКОГО ШОКА И ПОСЛЕ ИЩ.УЗИОННОк ТЕРАПИИ

Параметр Этап шока НСТН-2 *моль/кл. ШР-2 ! 502>/У 1 5(ЗС

I.Контроль 0,87 + 0,14 : 5,95 + 0,54:130,69+19,60:12,07 + 0,98

2.И сход • • • 0,95 + 0,16 : 6,13 + 1,12:129,19+12,23:16,74 Т 1,56

З.Крогопотеря 2,14 + 0,89 9,22 + 1,70: 99,40+11,67:13,21 Т 1,28

1,Обрат, шок 5,15 + 0,40 8,39 + 1,68:101,22+22,38:16,06 т 2,33

¡.Необрат, шок 1,47 * 0,45 13,11 Т 2,11: 72,43*15,28:26,51 Т 7,47

..Лечен. КГК-2 2,09 + 0,92 6,88 Т I,87:114,21*13^12:13,06 Т 5,50

.Лечен. КГК-3 1,-36 + 0,31 6,26 + 1,28:126,20+ 6,28:18,31 Ч 2,61

К /П Х1ЯМ , желе тля

I 10,2 7 1,4 16,6 + 2,4 : 47,7 + 8,4 : 1,3 + 0,1

) 11,1 + 1,2 26,4 * 6,1 48,5 + 6,2 1,5 + 0,1

1 12,8 + 1,3 29,2 + 8,4 65,2 + 12,1 1,4 + 0,07

11,6 + 2,9 37,0 + 6,2 45,7 + 8,3 1,9 Т0,13

15,1 + 1,7 60,0 + 12,1 72,3 + 10,1 1,9 Т 0,1

10,7+3,0 17,9 + 3,6 53,8 Т 9,1 1,4 ~ 0,1

9,5 + 1,9 15,2 * 2,П 42,3 + 4,2 1,4 + 0,СЬ :

- 24 -

стадии шока достигал значений 13,11 отн.ед./.

ЛЕЧЕНИЕ ЭКСПВДШГГАШТОГО ИНФАРКТА ШОКАРДА НОБЫГЛИ ПРОИЗВОДИЛИ-!

I ■,4-НАФТОХШОНА; -

Мы изучили антинекрозогенное дейстЕие автокомплексного соединения АК-135 при экспериментальном инфаркте миокарда/ЭНЭД/у крыс, уч1ргквая, что указанное соединение является и активным акцептором электрона и эффективным антиоксидантом.

Планиметрический анализ массы некроза сердца выявил антинекрозогенное действие соединения АК-135.Так масса некроза леченных животных била на 4.1% меньше, чем у контрольных /табл. 8/.

Морфологическое исследование миокарда подтвердило, что зона некроза у животных с ЭЙД при коррекции препаратом АК-135 существенно меньше, чем в контроле. У контрольных животных на 7-е сутки ЭШ отмечались обширные уча спей погибших мышечных клеток, в последующем наблюдалась их резорбция и формирование йибробласти-ческлх .гранулем. У леченных животных среди учасков некротизиро-ваннрй ткани имелись островки из отдельных кардиомиоцитов с сохраненными ядрами и-саркоплазмой. В этих клетках активность цито-хромоковдазы была наиболее высокой.Активность этого фермента повышалась также в кардиомиоцитах, прилегающих к зоне некроза, и градиентно понижалась по мере удаления от'зоны инфаркта.

' Возможность активации восстановительных процессов с пог/ощью производных I»4-нафтохинона, а такке возможность предотвращения повторных, рецидивирующих очагов ишемии оценивалась путем гистологического и электронномикроскопического исследования отдален-нйх о-? зоны инфаркта участков сердца. Лишь в участках, прилегающих к области некроза, отмечались признаки интерстициалыюго I периваскулярного отека, гетерогенность кардиомшэцитов с деструктивными признаками в некоторых из них. В более отдаленных участ-' ках отек практически отсутствовал, венулы и капилляры без изменений, не отмечалось стаза и агрегации клеток крови. Основная ' масса мышечных волокон с хорош сохраненной поперечной исчерчен-ностью, Лишь изредка встречаются мелкие очаги пересокращения.

' Исследования ПОЛ свидетельствуют, что при ЭШ у крыс уже на ранней стадии нарастает уровень спонтанной хемилшинесцснции сы-■ Воротки крови /на 50?!. контрольного уровня/.

Ингибнрующее влияние препарата на скорость образования его-

- 25 -

'. ' " ■ . • Таб.тща 8.

йшьшшз ПРЕПАРАТА АК-125 на шш2атш1 экг, гллссу .НЕКРОЗА

н показатели хешшшесшцж /хл/ ¡пи зкм у ж

--

Покчза-;

ЧСС.мпн

Контрольная АК-135» 2ст/кт внутривенно АК-135, 71,т/кт : таугрдйрэтлко %

до спер. : ЗИМ г до опер. : 3121 до опер» зга :

О,''.в

Р,кв

Т,пв

Т,мз

----г--:--:—---—

О :0.10*0.03: О -.0,10*0,03: --;-;----—;„

о

0,32*0,12:0,12*0,0о:0,09*0,03:0,00+0,03:0,1370,04:0,18+0,05: -:---:----:---—:--------;---;

О :0,05*0,01:0,03+0,01:0,08*0,03:0,05+0,05:

--—:---:--:--г—-• :-

О

Масса нсцроза

0,01+0,01:0,13*0,02:0,02*0,01:0,13*0,02:0,0570,05:0,14*0,01: ---;--;---....--_____-;

15,7*1,7 : 9,63*1,92 Г<0,05 : 8,13*1,75 Р<0,01 : : : ' :

:Идхенсивность:Светосу^в:4Л:Светосум,!аХЛ:Коз^;:11циент : I :бь1стр.всп. ХЛ:медл.всп. ХЛ: за 10.мин. ншгибирова- : л : условн. ед. : услош. ед.: условн; ед.: ния,ЭХЛ,% £

Контроль : 6,4 + 2,3 : 86 Ч- 5 : 480 * 15 ':19,8 т.1,4 :

-------:-;--г

I чае. ЭШ : 12,3 * 2,1 х: 35 т 12 х: 686 * 34 х:42,4

"ХХГ

-хх:----хх:---

Леч.АК-135 : 7,3 % 2,4 х: 92 т 10 х: 320 * 30 х:32,1 Т 2,8 я:

-------:-----------:—г---——:•--——:-

7 сут.ЭИМ : 14,8 + 3,1 х: 211 7 15 х: 608 * 23.х:24,0 ? 3,6 :

"ХХ-

Леч.АК-135 : 10,6 + 2,4 х: 132 + 12 х: 560 ** 33 :£?,£ * 2,5

Примечание: х - достоверность /р<0,05/ различия по ошзтшш к контролю. . ■ . . '

хх - достоверность /р«0,05/ различия сто отае-гедк» :: предыдущему ятапу» . '

32*30 : 372*28 : 372*14 : 335*20 : 376Г28 г 407*12 ;

бодных радикалов указывает, на значимость влияния анткрадикаль-hlec свойств соединения AK-I35 на антирадикальные свойства липидов сыворотки. Последние мы изучали, методом элект^охемилюминес-ценции.Через X час-после коронароаккдюзии антирадикальная активность . липидов сиворотки увеличивалась до /42 + 3,6//$ по сравнению с /19,8 + 1,49/% в контроле. Лечение препаратом AK-I35 несколько уменьшало уровень АРА'липидов на этом сроке - до /32 + 3,1/%.

На седьмые сутки ЭШ антирадикальная активность липидов сыворотки составляла /24 + 3,6/2, у интактных животных /19,3 +1,7/'/!>, у леченных АК-135'/27,6 + 2,Ь/% /см. табл.8/.

Таким образом, применение автокомплексного соединения 1,4-нафтохшона оказало благоприятное действие на течение 31M и позволило предотвратить некроз значительной части -кардиомионитоп.

ВЫВОДЫ

I» Морфологические изменения в тканях печени и сердца на "необратимых" стадиях niojca характеризуются грубыми микроциркуляторны-ми расстройствами и распространенны™ некрозами паренхимы. В обоих органах резко выраженными становятся признаки активации и самодеструкции фагоцитирующих клеток - нейтрофилов и (.¡акрофя-гов - основных клеточных продуцентов онион-радйкалов кислорода. Г Ультраструктурные нарушения гепатоцитов и кардиомиоцитов при висцерально-лшемическом и геморрагическом иоках неспецифичны и сходны как по_локализации повреждений, так и по времени их развития. Во всех случаях и в гепатоцитах и в кардиомиоцптах формируются глубокие структурные повреждения митохондрий, становящихся в этих условиях основными внутриклеточными генераторами анион - радикалов кислорода.

3. Однотипность ультраструктурных повреждений указывает на нзли-, чйе единого цитотоксического агента, способного к одновременному ■ повреждению различных клеточных компонентов. Сопоставление роли активных форм кислорода в некротизации клеток в различных экстремальных ситуациях - геморрагически;: шок, висцералыю-ииеми-ческий шок, острая сердечная недостаточность, позволяет сделать вывод об их универсальном цитотоксвческом предназначенги. .4, Среди факторов шока Еелика роль свободнорадикального окисления в их влиянии на структуру хроматина клеток. Индуюдия генной активности на ранних стадиях экстремального воздействия сменяет-

сп деградацией х^цатина и параллельно развивающейся самодеструкцией клеток. Включение жестких механизмов разрушения- хромосом путем их окислительной деградации, вероятно, имеет общебиологическое значение.

5. Выявлена высокая биологическая активность нового класса химических соединении- азот-содержащих производных 1,4-нафтохинона, синтезированных в виде донорно-акцепторных '. автокомплексов с внутримолекулярным переносом заряда. Отмечено .функциональное сходство указанных соединений с природным хиноном - коэнзимом О /убихиноном/. Производные 1,4-нафтохинона оказались 'способными к ьосстановленшо переноса электрона по дыхательной цепи митохондрий, в условиях блокады отдельных звеньев этой цепи,

6. Азотсодержащие производные I,4-нафгохинона являются высокоэффективными антиоксидантами, проявлявшими свои свойства как в гомогенных и микрогетерогенных средах, так и при окислении липидов митохондрий и микроеом при не;] ерментативном и ферментативном окислении. В последнем случае некоторые производные проявляли более высокую антиокислительную активность, чем реперные аНТИОКСИДа Н'ГЫ.

7. Новые производные 1,4-нафтохинона обладают способностью регулировать чушшкональную активность фагоцитирующих клеток /лейкоцитов "и макрофагов/. В зависимости от структуры, аэот-содержа-цие производные 1,4-наг.тохинона стимулируют, ингибируют или оказывает кониентрациоппо-зависимое влияние на генерацию супероксида итпп: клеткаши

8. Установлена ранее неизвестная способность производных 1,4— нафтохинона к защите генетического аппарата ¡слеток от окислительно;': деструкции, определены концентрационные и временные показатели антиокислителыюй активности в отношении ДНК при спонтанном и индуцированном оклслснии изолированных гепатоцитов.

9. Обнаружен ранее неизвестный вид фармакологического действия-азот-содеркащих производных 1,4-нафтохинона при коронароокклюзин -"антшш^арктогенное";э ..-¡ективность соединений подтверждает правильность предполагаемых механизмов цитолиза при экстремальных состояниях и патогенетическую обоснованность терапии.

10.Включение производных Т,4-н&ртохинона в состав средств инфу-а ионной терапии открывает возможность создания, подифушашональ-

пого кровезаменителя, оказывающего благоприятное воздействие на все основные механизмы,развития шокового процесса, способного к регуляции транспорта электродов по дыхательной цепи и активной защите клеточных структур от окислительной деструкции. Использование такого кровезаменителя Предотвращает, развитие "необратимых" ./для других методов лечения/, повреждении гепатоцитов и кар-диомиоцигов. •."'.-■

ПУШЩШЩ НО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ .

1.- Зуфаров K»Âi, Йнейвайс В.Б.-Реакция-митохондрии печени белых крыс На действие электромагнитного ноля.//Цитология. -1970,-T.I2, J2. - C.I46-I5I.

2. Зуфаров К.А*,ШнйпваСс В.Б.,Шишова Е.К. Ультра структура стенки синусоида печени,//Архив АГЭ. - 1970. - Т.58, ЯЗ. - С.6&-74.

3» ШнеЕвайс В.Б..Эшанходжаев Д.Ю. Ранние морфологические сдвиги в печени при интоксикациях 11оо1ороргэническиы пестицидом "бо-лстар"»// -Деп.ЕКНИГЙ. М253-63. 4»- Лерин Г.С.., Шнеййагс В.Е., Губа ев С.А. Ультраструктурные критерий дётоксикации при лечении токсического шока гемо-•корректо'грамм. //Совр. вопр. детоксикации: Тез.докл.конфер. -Андижан, Î9S8. - C.I5-I6. "

Б, Экспериментальная терапия инфаркта миокарда соединением, являющимся искусственным акцептором электронов. /Г.С. Левин, А.ГЛСурмуков,Ц.Л. Каменецкая, O.A. Ермишина, В.Б. Шнейвайс // Мед. .ж, Узбек. - 1988. - №2. - С.56-60.

6. ' Шнейва'Р.с BiB., Каменецкая Ц.Л. Хемилюшнесцентные характе-

ристики .витамина-Кд /менадиона/ и викасола. //Вопросы гематологии и транс4узиологии: Сб.науч.тр.ННИГмПК. - Ташкент,1Р89,-' С.102-Х06.

7. . ШнейЕаКс В.Б., Завгородняя C.B., Дрегерис ЯЛ. Антиокспдант-- нне и мембранопротекторные свойства молекулярных.автокомп-

ле'ксов - производных 1,4-на4тохинона.//Всесоюзн. кожи "Био-■ аНтиоксидант": Тезисы докл. - Москва, 1989. - T.I - С.235.

8. Шн'ейЕапс В.Е., Губаев С. А. Ультра структура печени при вис-церальяо-шаемическок шоке.// Актуальные вопросы гематологии

'л- транс(1узиологии: Сб.науч.тр.НШГлПК.-Ташкент, 1969.-0.7G-82, S. Шейвайс В.Б., Губаев С.А. Ультраструктура миокарда при .'•ишемии и репер'-узии кишечника.// Функционально-мотаболическпе аспекты патологии внутренних органов:Сб.науч.тр. ТагаГосМИ -: Таикент, 1989. - C.I46-I5I,

10. Пнейвайс В,Б» Производные 1,4-паф'гохшюна - новые корректоры регуляции гекбранних процессов при шоке./7 Нарушение !.:охаш:з~ мои регуляция и их коррекция: Тсзпсы докл. 1У Всзс, съезда , патофизиологов. - Кишинев, 1989. - С.567.

11. Амплов К.С., Шченрайс В.Б, Нарушение регуляции свободнорадикального огаслсяяя липидов в. дшзшке вксдерально-дсомпчбо-гого шока. // Нарушение механизмов регуляции и их коррекция. Тезисы докл.ТУ Ссео. съезда патоЛизиологов.-Кг'лцшев, 1939. --С.702.

12. К механизму ан'.ийгрегацпениой активности производных 1,4-цеФ» тохинсна. /Г.С. Левин, И.Б. Калмыкова, В.Б. ШеВгайс, Ц.Л.Ка-менецкая, Л .Я. Дрегерие //1-армакол. н токсикол. - ISS9.-T.5I» ;,"5. - С.37-41.

13. Амплов К.С., Шабунская С.С.,.ШяеПаайс В.Б'. Роль перекиснсго окисления липидов в трансформации сердечно-сосудистой системы з легких при цоке. // Мекоргагаше и иегсастегяше взаимосвязи при заболеваниях неспецйфической природы: Сб. азуч.тру-дов ТаиГосШ; - Ташкент, 1590, - С.21-25.

14. Левгл Г.С., Шаейвай.с В.Б., Губаев С.А. Оценка эМекгаваостя икфузионных сред по данные электронис-сткр оскотгчсохпх исследований. // Гемат. и траксф.уз. - 1990, ЛЮ. - 0,34-36.

¿о. Шлейвайс В.Б;'. Роль свободных радикалов кислорода в формировании "шоковой" печени.// Могорганные и м.еясистемнке взаимосвязи при заболеваниях не специфической природы: Сб. науч.. тр. ТашГосГ.Щ. - Ташкент, 1990. - 0.143-156.

16. Шнейвойс В.Б., Амилов К.С. Трансформация макрофагов под влиянием циркулирующих в крови шоковых токсинов.//Новое и гематологической трансфузии: ¡.¡атДП съезда гематологов Узбекистана - Ташкент, 1990. - С.72-73.

17. !ПвеЬвайс В.Б., Лмилов К.С. Роль перекненого окисления лиип— дов в патогенезе висцерально-ашсмического шока. //Волр» кед. химии. - 1991. - Т.37, ]?3, - С.33-35.

10. Шнейвайс В .Б., Левая Г.С. Изучение регуляйии пктигкссти сагоццтпругчц^х клеток методами многопаракетрд-'еского е.нглпза изображений. //Груды У1 Всес. совещания но проблемам автоматизации анализа изображений. Пугдино, 1991. - 0.4.

19. Антпродика.лыше свойства производных Л,4-наатохинона, /ВЛ Шне"-Еа?с, Г.С.Леыш, ЯЛиДрегерис, А.Я.Друлле, Я.Я.Догпн // Некоторке протеин диагностики и лечения заболеваний систег крови: Сб.науч.ур, НИИГиПК. - Ташкент, 1931. - СЛ03-Ю9.

20. Амллов К.С,, Шпе/'.шйс В.Е. К npo3.4ei.ie* разработки шедзионш средств для коррекции кислород-зависимой мембранотоксичнос-ти. // Вопроси' диагностик и лечения заболеваний системы кр;с яр:- Сб.науч.тр.. НИИГпПК.'- Таикегсг, 1992. - 0.6-1,0.

21. ШнейваКс В»Б. ¡¿югопараметрический струстуртйГ, анализ пз< брахений интерфазнох-о хроматина ядер гепатоцитов при рази тии Бисисрально-ииемического коко. // Вопросы диагностики 1 лечения заболеваний системы крови: Сб.науч.тр.НЖТкПК - Та;

. кент, 1992. - 0.70-33. ■ . '■ .

22. Влияние азот-содеркрщих производных 1,4~нафтохинонв на пер I KB.tm.oe окисление митохондрий./ ВЛ;.Шнейва!1с, А.Я.Друлле, П.! Дрегерис» Г.С.Левин //''Бонр.мед.хям.. - ~ ]?6. - 0.37-4.'

23. Шнейвяйс В.Б., Друлле А.Я., Дрсгер.ис Я.Я. Влияние азот-соде; зшйчх производных 1,4нт-.{.тохипо.на на '. кисдосодзавискмые пет; боличестсие згарйягсрвсггки периго'-'ейлыфх. аккрс^егор. // Де: 1МЖТЙ. Х-2364 - 92.

- 31 -

ХУЛОСА-

Экстремал ^олагда туцикнл'арнинг нобуд булнш мсхшшзии, ва уни тузатиш нули.

■ Экстрёмал .^олатда ту^имал'аршигг нобуд булга мехоназш

физиологии улиа ^олатага тузраганда бундай улш сабабла-ри ичида куп булшшшгига -}$арамнй. кам ургаиилган.

Диссертацияда У8ай:вонларнииг таЕрибавии шароитидаги шделаДа уткир инфаркт, Еисцерал ишемик ва геморрагии шоклгрда ;,:игар, врак'ва ту^г.аларининг улимйда кислороднинг цитотокстс ьч~ .¿ектшш.бош роли исботи келтирилган. Ксшьютерли цптафоти\'.ат~ рик методи билан биринчи булиб шок ша;,оитида -китар ту^имаеидн-ги хроматиннннг' »зро^атланишида оксигея табиати исботлянган.

Ту^иыаларнн нормал э^олга 1$айтариб будмайдиган карохатланиши-да, пгу о^олатдан 1ут1$ариш. учун 1,4-пафтахинон асосцда ишлаб че-1$арилган азот модцаларига бой булган бириккалар /к4он урнпди инь-латувчи сую^чиклар/ 1$улланшшшй та^сил зтилган.

Витамин. К ва коэнзиы 0 ларнинг аналоги булган бу бирикмалар-нинг ю^ори са1ла'13'дорлиги анш^ланган.

. Бу бирикмалар нафас занкирй оркали-электронларни утказшыи тяклаш 1$ебилиятига, фйгоцитар ту^ишлар активлигини ошнрлш ва турли субстратлар оцсШущнишида, шу муиладан ДНК хромосоми ва мембрана липидларшинг самарадорли анткоксидант эканлнг-и курса-тилган.' .

Ту^маларнинг ультраструктураси! еэ хрокатишшнг узгаркасли-гида янгн кровозаме'нителларНи /¡рн урнида ишлотилувчи сушушк-ларни/ фо»!дали эканлиги кашф зтилган. •

■Тавсия зтилган механизмлар коронараоклюзисн миойард инфарк-типи даволащца нхш натижага эга эканлиги билан псботланган.

- 3?. -SliilMARY*

THE MECHANISMS OF CELL DEATH IN EXTREME SITUATIWi AND [JEW APPROACHES TO THEIRS CORRECTIONS. The role of oxygen radicals in cell necrosis in terminal stag o-F hemorrhagic, vi'scera-ischeaic shock and infarct of mioca has been shown not only in its cytophysiol ogy but in its th Pipy too. It was shown that transition to irreversibility is ch racterised Uy new qualitative damages caused by energy gener tion disorders and drastic changes in the chromatin structur Eeing pxigen radicals involved in every one putative pathway pathogenesis of extreme situations the antioxidant drugs, ere ting alternative electcrcn transfer ways are to be consider as the goal of therapy. Preventation of cell necrose is possib using derivatives of 1,4—naphthoquinone.Hitrogen-containing su stances, of 1 ,'4-napht.oquinone synthesized in the form of done acceptor autocomplexes, may serve as aritioxidative agents and modificatory of , the respiration chain. It was shown that ant oxidant properties of same investigated compounds exceeded th of synthetic antioxidant ionol and natural antioxidants. Usii computer analysis of digitized data from scanning microphotone ry the preservation activity of the compounds on the liver ce chromatin infrastructure was shown.

Two combined hemocorrectcrs have been -developed for tne trea msmt of shock terminal phases. The effaktiveness of these infi si en solutions was evaluated in the study of the liver and my< cardiuss alt.rastcro.cture in experimental animals during irsE? dsvi lopment of shocks and thuirn treatments. It was shown that combination of known agents (Rheopol yglucin, lactasol, mannitc arid sodium succinate) -Favourably influenced the structure' of t( al crocir culati on bod, but did not affect met ¿-.hot ic disorder'.-. t> pical '-for a "shack cell". Inclusion into the combined her-ocoi roitcr .of a molecular -«¡itoconplesi, a derivative of 1 .'l-nsphtoqi inenrj, lias sigut f i cant 1 y promoted thn pre«!pr«atioii and recover of thfj'li vtr . am! inyoe.-srdiiiiri colls.