Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Латексная тест-система для экспресс-диагностики лептоспирозной инфекции у собак

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шкарлат, Павел Евгеньевич

ВВЕДЕНИЕ.стр.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.стр.

1.1. Краткая справка о лептоспирозе.стр.

1.2. Инфицированность собак лептоспирозом в мире.стр.

1.3. Этиология и эпизоотология лептоспироза собак.стр.

1.4. Роль собаки как источника возбудителей лептоспироза в эпидемическом и эпизоотическом процессах.стр.

1.5. Клиническая картина лептоспироза собак.стр.

1.6. Методы диагностики лептоспироза.стр.

1.7. Реакция латекс-агглютинации в диагностике инфекционных заболеваний и обзор латексных диагностикумов.стр.

ГЛАВА II. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.стр.

2.0. Материалы, методы исследований и место выполнения работы.стр.

2.1. Характеристика используемых штаммов лептоспир и их культивирование.стр.

2.2. Получение противолептоспирозных гипериммунных сывороток.стр.

2.3. Выделение иммуноглобулинов при помощи ПЭГ-4000 и ПЭГ-6000.стр.

2.4. Выделение иммуноглобулинов при помощи ионообменной хроматографии.стр.

2.5. Идентификация иммуноглобулинов в иммуноэлектрофорезе.стр.

2.6. Сенсибилизация полимерных латексных носителей.стр.

2.7. Постановка и учёт результатов реакции латекс-агглютинации.стр.

2.8. Определение стабильности, специфичности и чувствительности АЛД с культурами лептоспир.стр.

2.9. Животные, используемые в исследованиях.стр.

2.10. Экспериментальное инфицирование белых мышей.стр.

2.11. Экспериментальное инфицирование золотистых хомячков.стр.

2.12. Экспериментальное инфицирование собак и исследование биоматериала.стр.

2.13. Клинические испытания и методика расчета значимости тестсистемы в диагностике лептоспироза собак.стр.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.стр.

3.1. Выделение и очистка противолептоспирозных иммуноглобулинов и определение их иммунохимической чистоты.стр.

3.2. Определение оптимальных условий сенсибилизации ПЛН полученными иммуноглобулинами.стр.

3.2.1. Определение стабильности ПЛН в электролитах.стр.

3.2.2. Определение оптимальной концентрация карбодиимида.стр.

3.3. Результаты определения чувствительности, стабильности и специфичности АЛД с культурами лептоспир.стр.

3.4. Результаты испытаний АЛД с вакцинным препаратом, содержащим лептоспирозный компонент.стр.

3.5. Результаты испытаний АЛД с экспериментально инфицированной лептоспирами кровью и мочой собак.стр.

3.6. Результаты испытаний АЛД с образцами биоматериала от инфицированных животных.стр.

3.6.1. Результаты испытаний АЛД с кровью экспериментально инфицированных мышей.стр.

3.6.2. Результаты испытаний АЛД на моделях экспериментально инфицированных собак.стр.

3.6.3. Клинические проявления лептоспироза у экспериментально инфицированных собак.стр.

3.6.4. Результаты испытаний АЛД с кровью экспериментально инфицированных собак.стр.

3.6.5. Результаты исследования гематологических показателей крови экспериментально инфицированных собак.стр.

3.6.6. Концентрация иммуноглобулинов в сыворотке крови экспериментально инфицированных собак.стр.

3.6.7. Результаты клинических испытаний и расчёта значимости тест-системы в диагностике лептоспироза собак.стр.

ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.стр.

ГЛАВА V. ВЫВОДЫ.стр.

ГЛАВА VI. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.стр.

ГЛАВА VII. ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Латексная тест-система для экспресс-диагностики лептоспирозной инфекции у собак"

Собака - друг человека. По данным ООН в настоящее время в мире насчитывается более 500 миллионов собак, большинство из которых живет среди людей. В связи с этим возрастает опасность распространения заболеваний, общих для человека и собак. К таким болезням относят и лептоспироз, который является одной из наиболее распространенных зооантропонозных, природно-очаговых инфекций, поражающих домашних, диких и сельскохозяйственных животных, а так же человека.

Лептоспирозная инфекция широко распространена среди домашних собак. На территории нашей страны у 27,9% этих животных установлена инфицированность лептоспирами. Среди них ведущее место принадлежит лептоспирам серогруппы Canicola (86.5%) и Icterohaemorrhagiae (12,3%), значительно реже от собак выделяют лептоспиры серогрупп Pomona, Tarassovi, Javanica и Grippotyphosa (Ю.Г.Малахов и др., 1992, 2001).

Клинический полиморфизм и особенности биологии и антигенной структуры лептоспир, представленных более чем 200 серологическими вариантами и объединенными в 23 серологические группы, создают определенные трудности в диагностике лептоспирозной инфекции. Помимо этого, данное заболевание у собак имеет сходную клиническую картину с пироплазмозом, гепатитами, нефритами, различными патологиями ЖКТ, может протекать бессимптомно или латентно и лишь появление выкидышей и мертворожденного потомства может служить указанием на лептоспироз. Поэтому при лептоспирозе нередки диагностические ошибки и только ссылки на историю болезни и соответствующую эпизоотическую обстановку могут в определенной степени ориентировать ветеринарного врача.

Следует подчеркнуть, что ещё не до конца выяснены вопросы диагностики и клинического проявления стертых форм лептоспироза и лептоспироносительства, лечения и санации организма собак от лептоспир. До сих пор основные исследования ориентированы на сельскохозяйственных животных, имеющих промышленное значение, а исследования в области изучения заболеваемости мелких домашних животных недостаточны. Особое значение диагностика лептоспироза собак приобретает в период, когда в городах появляется тенденция к увеличению их количества.

Из лабораторных методов диагностики лептоспирозной инфекции до настоящего времени приоритетными являются бактериологический и серологический. Однако выделение культуры лептоспир требует длительного времени проведения (до 3-х месяцев) в связи с медленным размножением (время генерации лептоспир составляет 13-14 часов) (В.С.Киктенко, 1971) и определенных навыков работы, т.к. контроль за размножением и идентификация возбудителей до серогруппы проводится в реакции перекрёстной микроагглютинации (Ю.Г.Чернуха, Ю.В.Ананьина и др., 1987; S.Faine, 1982), результаты которой учитываются в темном поле зрения микроскопа.

Обнаружение антител в сыворотке крови инфицированных животных в РМА является поздним методом диагностики и представляет интерес лишь в случае ретроспективного анализа, поскольку увеличение титров происходит только через 1-2 недели после заражения (Ю.Г.Чернуха, Ю.В.Ананьина и др., 1987). Помимо этого для серологической диагностики лептоспироза требуется поддержание набора живых эталонных культур лептоспир, что не всегда возможно в условиях стандартной лаборатории.

В связи с этим большую актуальность представляет вопрос совершенствования и создания новых методов диагностики лептоспироза у собак. Эти методы должны обеспечить экспресс-диагностику заболевания, достоверное выявление больных животных и животных носителей, а так же быть доступными для широкой практики.

К числу таких методов относится реакция латекс-агглютинации (РЛА). Диагностические препараты, созданные на основе полимерных латексных носителей (ПЛН), находят широкое применение в диагностике различных заболеваний с целью обнаружения антител (Ат) или антигенов (Аг) в различных субстратах.

В ряде стран осуществляется коммерческий выпуск латексных диагностикумов. Известны диагностические препараты, созданные на основе ПЛН для индикации в РЛА возбудителей эшерихиоза (Sam W. С., 1992), стрептококкоза (Ajello G.W. et al., 1987), стафилококковой инфекции (Shumacher-Perdreau F. Et. al, 1987), синегнойной инфекции (Анциферова Н.Г. с соавт., 1986) и др.

Относительно низкая стоимость анализа, простота и быстрота выполнения, точность и визуальный учёт результатов делают РЛА незаменимой в качестве экспресс-метода индикации микроорганизмов.

Цель исследования.

Разработка диагностической тест-системы на основе антительных латексных диагностикумов (АЛД) для быстрого обнаружения антигенов лептоспир и одновременно установления их серогрупповой принадлежности.

Основные задачи исследования.

1. Изыскать оптимальные условия и режимы приготовления АЛД, обеспечивающие высокую активность, чувствительность, специфичность и стабильность тест-системы;

2. Разработать тест-систему на основе АЛД для диагностики лептоспирозной инфекции у собак, вызванной лептоспирам серогрупп Сагпсо1а и 1с1егоИаетоггИад1ае;

3. Оценить разработанную тест-систему с целью возможности обнаружения лептоспир и их антигенов в культурах микроорганизмов и биологических жидкостях инфицированных животных;

4. Дать оценку эффективности тест-систем в условиях клинических испытаний для диагностики спонтанного лептоспироза у собак.

Научная новизна.

Отработаны условия ковалентного связывания противолептоспирозных 1дС с карбоксильными функциональными группами полистирольных ПЛН, активированных водорастворимым карбодиимидом (ВРК).

Впервые на основе данной методики получена чувствительная и стабильная диагностическая тест-система для обнаружения антигенов лептоспир непосредственно в биологических жидкостях животных и одновременного установления серогрупповой принадлежности возбудителей, не прибегая к использованию стандартных и трудоемких методов.

В условиях эксперимента показана возможность выявления антигенов лептоспир в первые дни инфекционного процесса, что наряду с простотой постановки РЛА и быстротой получения результатов (5 мин), позволяет рекомендовать использование этой тест-системы для ранней диагностики лептоспироза.

Практическая значимость.

На разработанную диагностическую тест-систему для выявления антигенов лептоспир Российским агентством по патентам и товарным знакам выдан Патент на изобретение №2177617 от 27.12.2001 по заявке № 2000113121/14(01413) от 29.05.2000.

Комиссионные испытания в ГУ Центральной научно-методической ветеринарной лаборатории подтвердили целесообразность использования данной тест-системы для экспресс-диагностики лептоспироза собак в практике ветеринарных лабораторий.

На базе фирмы ЗАО «Научно-производственный ветеринарный звероводческий центр» выпущена опытная партия тест-системы, которая успешно применена в технологических целях при изготовлении поливалентной вакцины, содержащей лептоспирозный компонент.

Результаты проведённых исследований используются в ходе лабораторных занятиях со студентами медицинского факультета РУДН по теме «Патогенные спирохеты».

Положения, выносимые на защиту. 1. Использование в работе метода сенсибилизации ПЛН противолептоспирозными иммуноглобулинами путём ковалентного связывания аминогрупп иммуноглобулинов с карбоксильными функциональными группами на поверхности частиц ПЛН, активированными водорастворимым карбодиимидом, позволяет получить антительный латексный диагностикум максимальной активности.

2. На основе полимерных латексных носителей разработана тест-система для диагностики лептоспирозной инфекции у собак, вызванной спирохетами вида L.interrogans серогрупп Canicola и Icterohaemorrhagiae.

3. Приготовленная латексная тест-система обладает высокой чувствительностью, стабильностью, серогрупповой специфичностью и позволяет выявлять лептоспиры гомологичных серогрупп в исследуемом материале в количестве 10б микробных кл/мл и более. Показана возможность использования латексной тест-системы в технологических целях при изготовлении вакцин.

Апробация диссертационного материала.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 30-летию Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности, Щелково, 2000; на Всероссийской научной конференции «Биомедицинские технологии», Москва, в 2000, 2001, 2003 годах; на семинарах кафедры микробиологии медицинского факультета РУДН, Москва, 2000, 2001; на VI Международном Ветеринарном Иммунологическом Симпозиуме (International Veterinary Immunology Symposium), Uppsala, Sweeden, 2001; а так же на ежегодной конференции Общества Клинических Микробиологов (The Society of Clinical Microbiologists) Национального Университета Ирландии (National University of Ireland), Galway, 2002.

По результатам исследований опубликовано 9 научных работ и получен патент на изобретение.

Структура и объем работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, трёх глав собственных исследований: объектов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения результатов, а так же выводов, списка литературы и приложений. Работа изложена на 122 странице печатного текста, включает 11 таблиц и 9 рисунков. Список использованной литературы включает 176 наименований, из них 77 - иностранных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Шкарлат, Павел Евгеньевич

ГЛАВА V. ВЫВОДЫ

1. Разработана тест-система на основе полимерных латексных носителей, сенсибилизированных противолептоспирозными иммуноглобулинами, для экспресс-диагностики лептоспирозной инфекции у собак.

2. Установлено, что суспензия полистирольного латексного носителя с диаметром микросфер 2,0±0,1 мкм с карбоксильными функциональными группами на поверхности, активированными водорастворимым карбодиимидом в концентрации 0,1-0,4%, пригодна для получения высокоактивных и стабильных диагностикумов, несущих на своей поверхности молекулы противолептоспирозных иммуноглобулинов.

3. Получены данные о высокой чувствительности и специфичности диагностикумов, сенсибилизированных противолептоспирозным 1дС в концентрации 1,4 мг/мл. Использование таких диагностикумов в реакции латекс-агглютинации позволяет выявлять лептоспиры гомологичных серогрупп в исследуемом материале при концентрации 106 микробных кп/мл и более.

4. Установлено, что предложенная тест-система позволяет выявлять антигены лептоспир в крови инфицированных собак в первые дни болезни (4-8 сутки после заражения).

5. Показана возможность использования антительных диагностикумов в технологических целях для стандартизации вакцинных препаратов, содержащих лептоспирозный компонент.

6. В условиях клинических испытаний при диагностике спонтанного лептоспироза у собак подтверждена высокая диагностическая чувствительность (94,28%) и специфичность (94,23%) разработанной тест-системы.

Приношу сердечную благодарность моим научным руководителям и консультантам: доктору медицинских наук, профессору Волиной Е.Г., доктору биологических наук Верховскому O.A., а так же кандидату биологических наук Яшиной Н.В. и доктору медицинских наук, профессору Далину М.В. за оказанную помощь и поддержку при выполнении данной работы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шкарлат, Павел Евгеньевич, Москва

1. Амосенкова Н.И. Основной и дополнительный резервуары патогенных лептоспир в условиях большого города. Автореф. канд. биол. наук, Л., 1955.

2. Ананьин В.В. Лептоспирозы людей и животных. ~М., 1971.

3. Ананьина Ю.В. К характеристике патогенных свойств лептоспир: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1974.

4. Ананьина Ю.В., Чернуха Ю.Г. Лептоспирозы: Тез. докл. VII Всесоюзн. конф. Киев, 1979. С.28-30.

5. Ананьина Ю.В. Проблема экологии патогенных лептоспир: Дис. на соиск. уч. степ. докт. мед. наук. М., 1993.

6. Ананьина Ю.В., Самсонова А.П. Межвидовое и внутривидовое разнообразие лептоспир: филогенетические, таксономические и экологические аспекты. // Вестник акад. мед. Наук -2000. -№1 -С.18-21.

7. Анциферова Н.Г., Александрова И.А., Александров А.Д., Мороз А.Ф. Разработка методов латекс-агглютинации для диагностики синегнойной инфекции. //ЖМЭИ 1986. - №4. - стр14.

8. Антонов Б.И. (под общ. ред.) Лабораторные исследования в ветеринарии. // М.: Агропромиздат. 1991.

9. Асеева В.Г., Падюков М.Н. Латексагглютинация и коагуляция для диагностики инфекционных заболеваний. // ЖМЭИ 1994. - №3 -стр. 107-113.

10. Ахмедов И.Б. Роль домашних животных в эпидемиологии лептоспирозов в Азербайджанской ССР. Автореф. канд. мед. наук, Баку, 1971.

11. Ахмедов И.Б., Кабардиев С.Ш. Эффективность антибиотиков и некоторых химиопрепаратов при лептоспирозе. // Труды Даг.НИВИ, Т. 12, 1981, с. 28-32.

12. Баранов А.Е. Для любимой собаки. М., 1991.

13. Безденежных И.С. Лептоспирозные заболевания в городе Южно-Сахалинске и окрестностях. Автореф., Томск, 1954.

14. Бернансовская Е.П. Лептоспиры и лептоспирозы в Украинской ССР. Автореф. док. мед. наук, Киев, 1975.

15. Бернасовская Е.П., Лан A.C., Назарова О.Г. и др. Иктерогеморрагический лептоспироз на Украине // Сб. н. тр. "Актуальные проблемы лептоспироза". М., 1979,с. 74-75.

16. Бернасовская Е.П., Серебрякова Т.Л. Комплексные подходы к иммунодиагностике лептоспироза. // Зоонозные инф-и., тез. докл. -Киев. -Черновцы. 1985.

17. Борисов Л.Б., Смирнова A.M. Фрейдлин И.С. и др. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. // М.: Медицина. 1994.

18. Бровкина А. Н. Разработка диагностических тест-систем для ускоренной индикации энтеробактерий с помощью реакции латекс-агглютинации. // Диссертация на соиск. уч. степ. канд. биол. наук,-М.-1999.

19. Верховский O.A., Технология получения и характеристика моноклональных антител к иммуноглобулинам классов G и М свиньи. // Диссертация на соиск. уч. степ. канд. биол. наук.-М,-1991.

20. Верховский O.A., Лисицина A.A., Федоров Ю.Н. Количественная характеристика иммуноглобулинов сыворотки крови собак в норме и при патологии. //Ж. Сельскохозяйственная биотехнология, 1996, 4, с. 103-109.

21. Верховский O.A., Федоров Ю.Н., Лисицина A.A., Клюева Т.Ю. Уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови собак при демодекозе и дерматитах. //Ж. Ветеринария, 1998, 6, с.33-38.

22. Власова Н.П., Фоменко A.C. К определению количества лептоспир в жидких питательных средах. // Сб. н. тр. "Актуальные проблемы лептоспироза". М., 1979,с.З.

23. Волина Е.Г., Левина Л.Ф., Соболева Г.Л. Фосфолипазная активность и вирулентность лептоспир. // ЖГЭМИ ЧССР, 1986 -т.ЗО -№2 -с. 165-171.

24. Волина Е.Г. Серология и биологическая характеристика возбудителей лептоспироза. // Дис. на соиск. уч. степ, доктора мед. наук. М., 1988.

25. Волина Е.Г., Саруханова Л.Е, Левина Л.Ф., Соболева Г.Л., Арутюнова Г.А. Изучение гемолитической активности лептоспир на плотных питательных средах. // ЖГЭМИ ЧССР, 1988 -№1 -с.81-88.

26. Волина Е.Г., Киктенко B.C. Выделение, идентификация и видовая дифференциация возбудителей лептоспироза (Методические рекомендации). // М., 1989 14с.

27. Волина Е.Г., Слугин И.В., Верховский O.A., Яшина Н.В., Шкарлат П.Е., Прокопов Н.И., Грицкова И.А. Способ приготовления лептоспирозного латексного диагностикума для постановки реакции латекс-агглютинации. // Патент РФ № 2177617. -2001.

28. Волина Е.Г., Саруханова Л.Е., Шкарлат П.Е. Биохимические и генетические аспекты патогенности лептоспир. // Ж. Аграрная Россия, 2002, №2, с.42-47.

29. Воробьёва З.Г., Фокина E.H. Экспериментальные основы реакции латекс-агглютинаци. //ЖМЭИ №2. - 1992, стр.60-62.

30. Горбачев E.H., Вербов Р.Л., Артюхов А.И. ИФА и РЛА: применение для диагностики ротавирусного гастроэнтерита. // Вопросы вирусологии. Т.34. - №1. — 1989. - стр. 109-113.

31. Горшанова Е.О., Салихов Ю.С. Некоторые показатели цветной реакции агглютинации (РА) на лептоспироз // Тр. Даг. НИВИ, т. 12, 1981.

32. Голубева И.В., Килессо В.А. и др. Энтеробактерии. // М.: Медицина. 1985.

33. ГОСТ 25386 91. Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики лептоспироза. Гос. комитет СССР по стандартам,1992.

34. Гущин В.Н., Щуплико А.Н., Рейнальдо Эспино Эрена. Эпизоотия лептоспироза canicola у крупного рогатого скота. // Сб. н. тр. "Актуальные проблемы лептоспироза". М., 1979,с. 82.

35. Данилин В.Т. Патологоанатомические изменения при иктерогеморрагическом лептоспирозе собак. Автореф. канд. вет. наук, Л., 1954.

36. Дас Субхаш Чандра. Этиологическая структура лептоспироза в Народной Республике Бангладеш. Автореф. дисс. канд. мед. наук, М., 1993.

37. Демина A.A., Ильина Т.В. Специфические латекс-препараты в этиологической диагностике гнойных бактериальных менингитов. //ЖМЭИ. -1985. -№11. -стр. 3-6.

38. Дранкин Д.И., Годлевская M.B. и др. Лептоспироз. Изд-во Саратовского Университета, 1988.

39. Джанков И.Т. Лептоспироз животных. Минск: Урожай, 1985.

40. Ерохин Е.П., Тартаковский И.С., Радченко О.В., Лукин Ю.В. и др. Метод пассивной агглютинации полимерных дисперсий для диагностики легионеллеза. //ЖМЭИ. М., - №11. -1991. - стр. 42.

41. Kiktenko V.S. The classification of Leptospirae.// WHO, 15-th inform, exch. in Leptospirosis. Geneva, 1968.

42. Киктенко B.C. Очаги лептоспирозной инфекции в природе // Лептоспирозы, Казань, 1971, с. 148-150.

43. Киктенко B.C., Ежов Г.И., Волина Е.Г., Левина Л.Ф., Саруханова Л.Е., Хисамов Г.З. Лептоспироз. // М.: Изд-во УДН, 1985.

44. Киндрас Т.М. Материалы по эпизоотологии лептоспироза сельскохозяйственных животных // Материалы к 16-ой н. конф. ЛВИ, 1970, с.7-8.

45. Киндрас Т.М., Ефремов М.П. Эпизоотическая вспышка лептоспироза среди служебных собак специализированного питомника // Сб. тр. ЛВИ, вып. 107, 1990, с. 50-53.

46. Коротич A.C. Болезни собак. Штуттгартская болезнь // Частная эпизоотология.-Сельхозгиз, М., 1940, с. 589-591.

47. Крутиков В.М. Экспериментальный лептоспироз Помона, Гриппотифоза, Иктерогеморрагия у собак // Материалы конф. "Зоонозы бруцеллез, лептоспироз и другие", Ставрополь-на-Кавказе, 1966, с. 210-233.

48. Лаврова М.Я. Условия формирования и эпидемического проявления очагов лептоспирозов. Автореф. докт. биол. наук, М., 1967.

49. Любашенко С.Я. Лептоспироз животных. М., 1948, с. 179.

50. Любашенко С.Я. Некоторые вопросы проблемы лептоспирозов животных. // Лептоспирозы. Труды 3-ей Всесоюзн. конф. по лептоспирозам человека и животных. М., 1962, с. 180-189.

51. Любашенко С.Я., Корнелаева P.E. Зависимость качественного и количественного состава белков сыворотки крови телят от введенной лептоспирозной вакцины и стрептомицина. // Материалы симп. по лептоспирозу, М., 1972, с. 140-141.

52. Лю Чжун-Фу. Разработка тест-системы на основе ПЦР для диагностики лептоспирозов в очагах тропического пояса. Автореф. дисс. канд. мед. наук, М., 1996.

53. Малахов Ю.А., Панов B.C., Самохвалов А.Г1, Соболева ГЛ., Соловьева B.C. Поствакцинальный иммунитет при лептоспирозе у сельскохозяйственных животных. // Сб.н.тр. НКИВП, М.,1984,с.14.

54. Малахов Ю.А. Лептоспироз животных. М., "Агропромиздат", 1992.

55. Малахов Ю.А., Панин А.Н., Соболева ПЛ. Лептоспироз животных. Ярославль: ДИА-пресс, 2001.

56. Мартынов Ю.В., Самсонова И.М., Блинковский A.M. Новый подход в диагностике менингококовой инфекции: латекс-эритроцитарная агглютинация. // Бюл. Экспер. Биол. И мед. М., - 1990. - №4. - стр.369-371.

57. Мельницкая Е.В., Дремлюга В.И., Кондратенко В.Н. Антигенный эритроцитарный диагностикум для определения инфицированности собак лептоспирами. // Ветеринария, №5, 1990.

58. Мусаев М.А. Лептоспироз крупного рогатого скота. Сельхозгиз,1959.

59. Ниманд Х.Г., Сутер П.Ф. Болезни собак, практическое руководство для ветеринарных врачей. // М. Аквариум 1998.

60. Новикова Л.С. Результаты проверки диагностической ценности реакции микроагглютинации с убитым натигеном при лептоспирозе. // Ветеринария. -1960. -№1. -С.77.

61. Новикова В.Н. К использованию реакции преципитации в геле для диагностики лептоспирозов. // Вопросы эпидемиологии, микробиологии и иммунологии. Труды (Томский НИИ вакцин и сывороток). -Томск, 1964. -т. 15. -с.340-343.

62. Ондзе Урбен Боско Тест-система на основе полимерных микросфер для лабораторной диагностики инфекционного бронхита кур.: Автореф. дис. канд. вет. наук. М., 2002.

63. Полоцкий Ю.Е., Семенович В.Н., Комарова Д.В. и др. Клинико-морфологическая характеристика лептоспироза. // Архив патол., вып. 5, 1983.

64. Перадзе Т.В., Халонен П. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций. // М.: Медицина. 1985.

65. Прокопов Н.И., Грицкова И.А., Черкасов В.Р., Чалых А.Е. Синтез монодисперстных функциональных полимерных микросфер для иммунодиагностических реакций. // Успехи химии, -(65)2, 1996.

66. Рейнальдо Эспино Эрена. Эпизоотическая ситуация по лептоспирозу в республике Куба. // Сб. н. тр. "Актуальные проблемы лептоспироза". М., 1979,с. 102-103.

67. Рыбакова H.A. Лептоспироз у людей и животных в северной зоне Нечерноземья России, (эпизоотология и эпидемиология). Автореф. канд. биол. наук, Нижний Новгород, 1994.

68. Рыбакова H.A., Токаревич Н.К., Сочнев В.В., Тарасевич Н.В. Серо-эпидемиологический мониторинг за зооантропонозами. //in

69. Тез. докл. междунар. юб. симп.: "Идеи Пастера в борьбе с инфекциями" (6-10 июня 1995г.), Ин-т им. Пастера, СПб, Россия, 1995, с. 138.

70. Салихов Ю.С., Горшанова E.H. Значение водоемов в эпизоотологии лептоспироза. // Тр. Даг. НИВИ, т. 12, 1981, с. 32-39.

71. Самсонова А.П. Разработка тест-системы на основе ПЦР для изучения гостальной персистенции лептоспир и диагностики лептоспирозов. Автореф. дисс. канд. мед. наук, М., 1995.

72. Семенович В.Н., Стоянова H.A. Состояние иммунодиагностики лептоспироза. // "Актуальные проблемы инфек. патологии", СПбНИИЭМ им. Пастера, 4.2, 1993, с.56.

73. Сергеев A.A. Иммуноферментный анализ при лептоспирозной инфекции. Автореф. канд. мед. наук, М., 1988.

74. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. // М.: Колос. 1995.

75. Симонян Г.А. Ветеринарная гематология. М.: Колос, 1995.

76. Соболева ГЛ., Рождествина Л.А. Превентивная и лечебная активность поливалентной сыворотки против лептоспироза. // Сб. н. ст. НКИВП, М., 1986 (87), с. 63-65.

77. Солошенко И.З. Лептоспироз промысловых и домашних животных. // В кн.: Лептоспирозы людей и животных. Под ред. В.В.Ананьина. М.: Медицина, 1971, с. 222-249.

78. Стоянова H.A. Иммунологические показатели при лептоспирозах и серологическая диагностика. Автореф. канд. биол. наук, М., 1961.

79. Стоянова H.A., Попова E.H., Семенович В.Н., Сергейко Л.М., Удалова !Г.В. Лептоспирозная инфекция в Ленинграде. // Тр. ин-та эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, т.60, 1983, с. 105.

80. Стоянова H.A., Дайтер А.Б. Лептоспироз в вопросах и ответах. Л., 1991.

81. Стоянова H.A., Сергейко Л.М., Волкова Г.В., Руссальчук В.В., Кунина Т.Д., Семенович В.Н. Клиника и эпидемиологические особенности лептоспироза в Санкт-Петербурге. // "Актуальные проблемы инфек. патологии", СПбНИИЭМ им. Пастера, ч.2, 1993.

82. Терских В.И. Бескомплементные лизоны (лептоспиролизины). //ЖМЭИ. -1935. Т.XIV.

83. Токаревич К.Н., Дайтер А.Б. Зооантропонозные инфекции на Северо-Западе // Тр. ин-та эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, т.60, 1983, с. 4-14.

84. Трифонов В.Д. Гистохимический иммуноферментный анализ и реакция латекс-агглютинации в иммунодиагностике адено- и герпесвирусных инфекций. // Труды МАТХТ,- 1990.

85. Тыщенко И.П. Ультраструктурный анализ компонентов реакции латекс-агглютинации. // Ветеринария. М., - №7-8. - 1992. - стр. 26-29.

86. Уорд А. М., Уичер Дж. Е. Иммунохимия в клинической лабораторной практике. // М.: Медицина. -1981.

87. Урбан В.П. Эпизоотология. Краткий справ, вет. врача. М.,"Агропромиздат", 1990, с. 19-38.

88. Урбан В.П., Сочнев В.В., Сисягин П.Н., Кузин А.И. и др. Научно-обоснованная система противолептоспирозных мероприятий для северного экономического района (эпизоотология, эпидемиология, прогнозирование, меры борьбы). Горький, 1990.

89. Фёдоров Ю.Н., Верховский А.О., Слугин И.В. Основы иммунологии и иммунопатологии собак. // М.: 2000.

90. Фримель Г. (под общ. ред.) Иммунологические методы. // М., Медицина, 1987.

91. Харитонова A.B. Тест-системы для индикации антител к капсульным полисахаридам менингококков на основе полимерных микросфер (латексов).: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1997.

92. Чайка H.A. Реакция агглютинации латекса. //Л., 1979.

93. Чайка H.A. Применение реакции агглютинации латекса для диагностики паразитарных болезней. // Мед. паразитол,- М. -1982. №2. - с. 65-72.

94. Чайка H.A., Горбачёв E.H., Применение реакции агглютинации сенсибилизированного латекса для диагностики вирусных инфекций. // Вопросы вирусологии. 1985. - №5. - стр.516-523.

95. Чернуха Ю.Г., Ананьина Ю.В., Евдокимова O.A., Чехович A.B. Эпидемиология, диагностика, клиника и профилактика лептоспироза. Методические рекомендации. М., 1987.

96. Черняк В.З. Патологоанатомическая диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. М., Л., "Сельхозиздат", 1957, с. 286.

97. Черняк В.З., Романов H.A. Множественное отложение извести в тканях организма собак при так называемой "Штуттгардской болезни". //Тр. воен. вет. научно-исслед. учрежден. РККАЛ., т.11, 1931, с. 163.

98. Щекотуров В.Л. Характеристика природных очагов лептоспироза в различных ландшафтах севера России (на примере Вологодской области) Автореф. канд. вет. наук, СПб., 1991.

99. Яшина H.B. Иммунохимические реагенты на основе окрашенных микросфер полистирольного латекса. // Диссертация на соиск. уч. степ. канд. биол. наук. -М. -1997.

100. Arimitsu J., Haritani K., Ishiguro N., Kobayashi S. Detection of antibodies to leptospirosis in experimentally infected dogs using the microcapsule agglutination test.// British vet. journal vol .145, №4, 1989, p. 356-361.

101. Alexander A., Evans L., Lambert W., Baker M., Barer H., Jager R. Who. 1966. V. 108. P. 45-49.

102. Avesani V., Cambiaso C., Guarin J.L., Lick A., Delmee M. A Particles Counting Immunoassay for the Direct-Detection of Clostridium-Difficile Serogroup Specific Antigen in Fecal Specimens.// J. of Med. Microbiol.,- 1994,- Vol. 40,- lss.4,- pp. 270- 274.

103. Baber M.D., Stuart R.D. Leptospirosis canicola. A case treated with penicillin.// Lancet, №2, p.594.

104. Bagohi P., Birnbaum S.M. Effect of pH on the Adsorption of Immunoglobulin G on Anionic Polyvinyltoluene Model Latex Particles.// J. Colloid. And Interface Sei., 1981, - V.83,-N2,- pp. 460-478.

105. Bangs L.B., Ph.D. Diagnostic Application of Latex Technology-Theory & Practice.// Bangs Laboratories, Inc., Carmel IN, 1997.

106. Bangs L.B., Med. Diagn. Applic. of Latexes Course.// Orlando, 1989.

107. Bansal K., Jochi K., Chandra U., Latex Agglutination Test.// Acta Virol.- 1989,- V.32, N3,- pp. 275-277.

108. Böhmer L. Sampling Plans for the Assessment of Salmonella Contamination.// Fleischwirtschaft. 1998,- N4. p.342-343.

109. Bishop L, Standberg J.D., Adams R.G., Brownstein D.G., Patterson R. Chronic Active Hepatitis in dogs associated with leptospires.//Am. j. vet. Res., vol 40, № 6, 1979, p. 839-844.

110. Brede H.D. Leptospirosen im Kolner 1950.// Z. Immun.-Forsh, 1951, №109, p. 1.

111. Brown K., Miegel J., Scottmeier K.D. Detection of Pneumococci in Blood Cultures by Latex Agglutination.// J. Clin. Microbiol., -1984,-V.19,- N 5, pp.649-650.

112. Campbell A.M.G., Macrae J., Manderson W.G., Summer K.C., Broom J.C. Canicola fever in Bristol. Clinical, bacteriological and epidemiological notes on six human causes.// Brit. med. j., v.1, 1950.

113. Conjeni B.L., Igel H.J., Platt M.S. Evaluation of Latex Particle Agglutination kit in Pneumococcal Disease.// Pediatr. Infect., 1984,-V.3,- pp. 417-419.

114. Droge P., Vick K.-P. Ein Beitrag zur Hundeleptospirose statistik in den jahrein 1974/1975.// Kleintier-Prax., №22, 1977, s. 35-38.

115. Ellis W., O'Brein I., Neill S., Bryson D. Vet. Microbiol. 1992. V. 11. №3. P.293-299.

116. Faine S. Guidelines for the control of leptospirosis. WHO offset publ. №67, Geneva, 1982.

117. Gella E., Serra J., Gener J. Latex Agglutination Procedures in immunodiagnosis.// Pure and Applied Chemistry, 1991, - Vol.63,-lss.8,- pp. 1131-1134.

118. Greenberg D.N., Ascher D.P., Yoder B.A. Sensitivity and Specificity of rapid Diagnostic Test for Detection of Group B Streptococcal Antigen in Bacteremic Neonates.// J. Of Clin. Microbiol., 1995,vol. 33, Iss. 1, - pp. 193-198.

119. Hartman E.G. Epidemiological Aspects of Canine leptospirosis in the Netherlands.//Zbl. Bakt. Hyg. A258.1984, p.350-359.

120. Hartman E.G., Houter M. van der, Donk J.A. van der, Frik J.F. Humoral immune response of dogs after vaccination against leptospirosis measured by an IgM specific ELISA.// Vet. Immunol. lmmunopathol.,№7, 1984, p.245-254.

121. Haunz E.A., Cardy J.D. Canicola fever. Report of nine cases in one family, with abstract of world literature.// Arch. Intern. Med., №89, 1952, p.978.

122. Hirschberg N., Vaughn J. Veterinary Medicine and small animal clinician. 1973, 68: No.1, 67, 70-72, 74.

123. Hofer (cited by Renk, W.) Leptospirose beim Hund.// Kleintier-Prax. 17, 1972.

124. Horschi F., Kutsehmann K. Die leptospiroses inltuation bei Hunden in der D.D.R.// Mh. Vet.-Med., №29, 1974,1.241-243.

125. Hodfild S. G., Lane A. A Novel Coloured Latex Test for the Detection and Identification of More Than One Antigen.// Immunol. Methods, 1987, -V.97,-p. 153.

126. Hoopwood V., Warnock D.W., Milne J.D. et al. Evaluation of a New Slide Latex Agglutination Test for Diagnosis of Vaginal Candidosis.// Eur. J. Clin. Microbiol., 1987 - V.6, - N4, - pp. 392- 394.

127. Jaks W., Stettner W., Willinger H., Awad-masalmed M. Klinische und serologische Untersuchungen zur Leptosrirose des Hundes im Räume Wien.// Prakt. Tierarzt., №57, 1976,1. 282-286.

128. Johnson R. The biology of parasitic Spirochaetes.// London, Acad. Press. -1976.

129. Klarenbeek A., Schuffner W.A.P. Het voorcomen van een afwijkend Leptospira-ras in Nederland.// Ned. Tijdrchr. Geneesk., v. 77, 1933,

130. Klarenbeek A. Klinische Statistik der leptospirosen des Hundes.// Zbl. Bakt., v. 142, 1938, I.83.

131. Klarenbeek A., Winsser J. De leptospirosen bij de kleine huisdieren. Een statistisch en experimentell onder zoek.// Tijdschr. Diereneesk, v.65, 1938,1.

132. Kondo A., Idava T., Ueno K. Quantitative Immunoassay of Clostridium Difficle Enterotoxin by Latex Photometrie Immunoassay System.// Methods of Immunoassay and Immunochemistry,- 1991-pp. 243-245.

133. Kondo A., Kawano T., Higashitani K. Immunological Agglutination Kinetics of Latex-Particles with Covalently Immobilized Antigens// J. of Fermentation and Bioengeneering.- 1992. Vol. 73. - Iss. 6. - pp.435-439.

134. Leptospirosis in humans in the United States 1974-1978.// J. Infect. Dis., vol. 140, №6, 1979, p. 1020-1022.

135. Leptospiroses in man. British Isles, 1982 Lept. Reference Laboratory and Communicable Disease Surveillance Centre (PHLS).// British Med. j., vol. 287, №5, 1983, p. 1365-1366.

136. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L. & Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent.// Journal of Biological Chemistry. 193, 1951, 265-275)

137. Marien F., Branton G., Perolat P.// Infect. Immun. 1997 -Vol.65 -№2 -P.729-738/

138. Me Intyre W.I.M., Montgomery G.L. Renal lessions in leptospira canlcola infection in dogs.//J. Path. Bakt., №64, 1952, p.145-160.

139. Meyer K.F., Eddie B., Stuart-Anderson B. Canine, murine and human leptospirosis in California.// Proc. soc. exp. BioL, N.J., 1938, p. 17.

140. Meyer K.F. Canicola fever: a professional hazard.// J. Amer. Vet. med. Ass., №93, 1938, p.332.

141. Meyer K.F. Canine ieptospirosis in the United States.// J. Aimer. Vet. med. Ass., №95, 1939, p.710.

142. Navarro C.E.K., Kociba G.I., Kowalski J.l. Serum biochemical changes in dogs with experimental L. Interrogans serovar icterohaemorrhagiae infection.// Am. J. Veter. Res., vol. 42, №7, 1988 p.1125-1129.

143. Newman G.P. Studies of canine leptospirosis. 1. Evaluation of laboratory diagnostic procedures. 2. Serologic determenation of incidence of latent infection in the Lansing, Michiiganarea.// Am. J. Vet. Res., 1950, №11, p. 405-411.

144. Nakamura M., Ohshima H., Kondo T. Aggregation Behavior of Antibody-Carrying Latex-Particles.// J. of Colloid and Interface Science,-1994,-Vol.154,- lss.2,- pp.393-399.

145. Ocusa N. Immunoassay Making Use of Latex Agglutination.// J. Coll. & Pol. Sei., 1996, - N5 - pp. 342-347.

146. Ogden D.M. Immunoassay for Antibodies Binding Platelets.// J. Coll. & Pol. Sei., 1997, - N3 - pp. 241-251.

147. Okell C.C., Dalling T., Pugh L.P. Leptospiral jaundice in dogs (yellows).//Vet. j., №81, 1925, p.3.

148. Okell C.C., Dalling T. Vaccine treatment of canine leptospiral jaundice.//J. Path. Bact., №29, 1926, p.131.

149. Parikh G., Higgens T., Latex Bead Rosetting Method for Cell Surface Antigen.// J. Immunol. Meth. 1982,- Vol 53,- N3,- pp.367-372.

150. Renk W. Leptospirose beim hund.// Kleintier-Prax. 17, 1972,1. 153-162.

151. Rosenberg H.D. Canicola fever. Review with report of two new cases.//Amer. J. Med., №11, 1951, p.75.

152. Ryu E. An international survey of leptospira agglutinin of dogs by RMAT.// Int. J. Zoonoses, 1976, №3, p.33-60.

153. Sackett L. David, William MC Rosenberg, JA Muir Gray, R. Brian Haynes, W. Scott Richardson. Evidence-Based Medicine: What it is and what it isn't. BMJ 1996; 312: 71-2.

154. Sam W.C. Latex Agglutination Assay for Detection of Cholera Toxin and E.coli Heat-Labile Toxin.// J. Of Clin.Microbiol., 1992, -V.30, - №9, - pp.2518-2520.

155. Severin W.P.J. Latex Agglutination in the Diagnosis Meningococcal Meningitis.// J. Clin. Path., 1972, - V.25 - pp. 1079- 1082.

156. Shumacher-Perdreau F., Peters G. Commercial Latex Slide-Agglutination Test for Rapid Detection of Staphylococcus aureus.// Eur. J. Clin. Microbiol., 1987,- V.6, N2, - pp. 215-216.

157. Schmidt W., Klein M. Ein Latex-Agglutinationtest zur Typenbestimmung von Enteroviren// Arch. Ges. Virusforcsh. 1973.-N3.-s. 213-220.

158. Stalheim O.H.V. Chemotherapy of renal leptospirosis in swine.// Am. J. Vet. Res., №28, 1967, p.161-166.

159. Stuart R.D. Canine leptospirosis in Glasgow.// Vet. Ree., №58, 1946.

160. Taylor P.L., Hanson L.E., Simon J. Seroligical, pathologic and immunologic features of experimentally induced leptospiral nephritis in dogs.//Am. J. Vet. Res., №31, 1970, p. 1033-1049.

161. Smits H.L., Van der Hoorn M.A., Goris M.G., Gussenhoven G.C., Yersin C., Sasaki D.M., Terpstra W.J., Hartskeerl R.A. Simple latex agglutination assay for rapid serodiagnosis of human leptospirosis. //J. Clin. Microbiol. 38:1272-1275 (2000).

162. Thiermann A.B. Incidence of leptospirosis in the Detroit rat population.//Am. J. Trap. Hyg., №26, 1977, p. 970-974.

163. Thiermann A.B. Canine leptospirosis in Detroit.// Am. J. Vet. Res., vol.41, №10, 1980, p.1659-1661.

164. Turner L. Leptospirosis. II Serology.// Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. -1968. -Vol. 62.

165. Uhlenhuth P., Zinmermann E. Hunde als Trager der Spirochäten vom weiltypus.// Dtsh. med. wschr., №62, 1936,1.891.

166. Venkataraman K., Nedunchelliyan S., Ramadass P., Ramkrishna J. Immune response in dogs with experimental leptospirosis.// Indian Journal of Comparative Microbiology, Immunology and Infectious Diseases. 1994, 15: 1-2, 21-25; 16 ref.

167. Vunnam R.R., Leong K.W. Method for coupling antibody to latex substance and its use in immunoassay.// Amer. Chem. Soc. 1996. Vol.3. -№5. - p. 154-156.

168. Watson A.D.G., Wannan G.S., Porges W.L. et al. Leptospiral agglutinis in dogs in Sydney.//Aust Vet. G., №56, 1976, p.425-426.

169. Weihe W.H., Ein Fall von akuter Leptospirose von Hund und Mensch in einer Versuchstierhaltung.// Deutsche-Tierarztliche-Wochenschrift. 1984, 91:6, 227-230; 24 ref.

170. Williams H.R., Murphy W.J., Me Groan J.E., Starr I.E., Ward M.K. An epidemic of canicola fever in man with the demonstration of1.canicola infection in dogs, swine and cattle. Clinical and epidemiological studies.// Amer. j. Hyg., №64, 1956, p.46

171. Wolff J.W. Ecological factors in relation to the etiologi of Weil's diesease and mud fever in the Netherlands.// Acta Leidensia, №32, 1963, p.309-314.

172. Wolff J.W. The relation of animal hosts of parasitic leptospires in the Netherlands with human leptospirosis.// Trap. Georg. Med., №1, 1965.

173. Yanagawa R., Shinagawa M., Takashima I. Serological studies of Leptospiras by immunodiffusion.// Zentral bl. Bakteriol 1974 ;228(3):369-77).

174. You-chu Liu, Guand-Jiao Dong, Yun-chi Zhao. Preparation of Diazotizied Polystyrene Latex and its use in Agglutination Assay.// J.Immunol.Methods, 1989, - V.124, -pp.159-163.