Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Культура IN VITRO лекарственных растений RUTA GRAVEOLENS L. и CODONOPSIS CLEMATIDEA SCHRENK

ВАК РФ 03.00.05, Ботаника

Автореферат диссертации по теме "Культура IN VITRO лекарственных растений RUTA GRAVEOLENS L. и CODONOPSIS CLEMATIDEA SCHRENK"

АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН „ ~ ИНСТИТУТ БОТАНИКИ

Г i О L .1

На правах рукописи

АТАЖАНОВ Дилмурад Магрибжанович

КУЛЬТУРА IN VITRO ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ

RUTA GRAVEOLENS L. И CODONOPSIS

CLEMATIDEA SCHRENK

03.00.05 — ботаника 03.00.23 — биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ташкент 1997 г.

Работа выполнена в лаборатории антэкологии и цитоэм-бриологии растений Института ботаники АН РУз и в лаборатории биотехнологии хлопчатника Узбекского ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского Института селекции и семеноводства хлопчатника им. Г. С. Зайцева УзАСХН.

Научные руководители:

кандидат биологических наук АЗИЗХОДЖАЕВ А., кандидат биологических наук ЭРК.КЕНОВА. Е. М.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук ШОЯКУБОВ Р. Ш., кандидат биологических наук АБУХОВСКДЯ А. П.

Ведущая организация — Ташкентский Государственный

Университет

Защита состоится « ^ » _ 1997 г.

7 ;

в _1___ часов на заседании специализированного Совета

Д 015.05.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук в Институте ботаники АН РУз, по адресу: 700143, ул. Ф. Ходжаева, 32, Институт ботаники АН РУз. Телефон (3712) 62-70-65, Факс (3712) 62-79-38

С диссертацией молено ознакомиться в библиотеке Института ботаники АН РУз.

Автореферат разослан ^¿У-Т^ ^дду г

Ученый секретарь специализированного совета доктор биологических нау;

ХУДАИБЕРДЫЕВ

0К11АЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

Актуальность работы. Попек, выявление и комплексное изучение лекарственных ряс гений о целью получения сырья для медицине г о;"' промышленности является одной из приоритетных.государственных проблем. Известно, что лечебные средства растительного происхождения составляют 38? лекарственных препаратов, внпуспаемых в мире, из них около 70Í дл.г лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Проблема расширения ассортимента и увеличения производства лекарственных препаратов в Республике рассматривается как одна из перспективных, так как из 3000 препаратов, применяющихся в'медицинской практике, лишь 3-5Í производится ч Узбекистане.

Естественная <?лора, являвшаяся основным и сравнительно дешевым поставщиком растительного сырья, в настоящее время не з состояния удовлетворить растущий спрос со стороны фармацевтики. В этой связи поиск новых ретредипвошшх катодов получения лекарственного сырья, в тем числе с использованием методов культуры тканей in

vitro , представляется интересным в практическом и теоретическом плане.

Объекта.',in исследовании послужили: Codonopsis clemátide а Sehrerk- кодонолсис клематисовидны" - ценное лекарственное растение, издавна используемое.в медицине. Кодонопспс является основным компонентом гепатозачитного лекарсиенного сбора (ЛСХ-1 - лекарственного сбора Ходжшатова), разработанного и внедренного в официальную медицину Институтом ботаники АК РУз. Запланирован нарастающий объем промышленного выпуска этого сбора в ближайшие годы, при котором запасы'естественного сырья, вероятно будут испы-тызагь большую нагрузку. 3 этой objísh поиск дополнительных источников сырья вполне оправден; Ruta graveoiens L. - ценное лекарственное растение с широким спектром применения. В.'естественных условиях в Узбекистане она не имеет запасов. Создание же промышленных плантаций тпебуег больших площадей и' материальных вложений. Введение в культуру in vitro и разработка биогехнологического способа получения сырья с непрерывным круглогодичным циклом производства возможны как один из нетрадиционных подходов получения экологически чистой -продукции.

Цель и задачи исследования^ Целью настоящих исследований являлось: введение в культуру, тканей ценных лекарственных растений IÚ£raveplens L. и C.cle:r.atidea Sciireni: . Дня достижения цели ста- . вились следующие задачи: .•

•^.разработка оптимальных условий культивирования, способствующих

л:акс„г;альяо.'.!у накоплении биомассы;

- изучение особенностей развития тканей in vitro в зависимости от Происхождения экс манта;

- установление оптимальных концентраций фитогормоиов, макросодей

и углеводов, обеспечлватах максимальный выход бяомсссы; ^

- проведение сравнительного химического анализа биомассы; полученной in vivo и vitro.

Каучнал новизне. Изучена культура тканей с. clemátides Schrenic К R.gr'AVeolans h, и возможность получения in vitro биомассы, пригодной для использования в практике. Разработаны условия получения стерильных эксплантоа этих растений, оптимизированы состав питательной среды, концентрация макгосслеГ, углеводов, фи-тогорконов, обуславливаем ицдуацц» каллусо-, органогенеза, субкультуру к гап'роклональное размножение. Изучены харсктер роста и развития каллусных клеток k.graveolena L. и C.cleaatidoa üchrenk форсирование органов, динамика роста и развития растений в зависимости от компонентов питательной среды и условий культивирования. Показано, что ткани дикорастущих растений R.gravaoiena Ь.и C.cle-natidea SchrerJc способны к быстрому переходу на органогенегяче-ский путь развития, нежели к соматическому эмбриогенезу. Проведен сравнительный химический анализ R. yraveolenr* L. и С. cleaatidea Schrenic , Bupanieиных in vivo h in vitro . Установлено, что дифференцированные органы«, craveoiena í выращенные методом культуры тканей и естественно произрастающие на грунте растения сохраняют способность биосинтезировать первичные и вторичные метаболиты. Дифференцированные ткани культуры in vitro с. clematidea ochrerik содержат пигменты, липзды и алкалоиды, свойственные рас- ■ тениям выращенным in vivo, и это дает основание полагать, чтс культура in vitro в перспективе пожег слу:::лть источником, физиологически активных лг,пид-пигмвнгных концентратов и алкалоидов.

. Практическая ценность. Разработанный нами биотехнологический способ микроклонйров_ашш способствует бис грому размножению к. кга-veoiens L. и С. olematidea Schrcnk . Способ получения биомассы ценных лекарственных растений в лабораторных условиях да с-г возможность круглогодично получать экологически чистую продукцию, которая послужит дополнительным сырьем для практического испольэования.-

Основные положения, выносимые на-защит:/. ' .

I. Наиболее эффективным методом получения стерильных тканей in vitro К. graveolons 1. И С. clenratidea Schroni: С целью дальней- .

aero кпкроклонирования является иопользовиняе сешш как ыхаг,-ного материала.

2. Характер и интенсивность каллусо- и органогенеза зависят как от.генотипа изучаемого объекта, так и от происхождения эксплан-та.

Специфичность действия фитогормонов на каллусо- и морфогенез обеспечивает регулирование в бяотехнологической системе возможность получения сырья с заданннми параметрами.

3. При подборе оптимального состава питательной среды, температурного и светового режима растений in vitro сохраняют способность синтезировать псе te химические соединения, что и растения in vivo .

Биомасса (каллус и колбочные растения), полученная в условиях in vitro , по многим показателям (липидный состав) идентична к таковым растениям, выращенным в грунте.

Апробация работы и публикации. Материалы диссертации доложены: на конференции молодых ученых,посвященной пятилетию принятия государственного языка (Ташкент, 1994); на научной конференции "Биология ва экологиянинг хозирги замон муаммолари" (Ташкент, 1995); на научной конференции "Актуальные проблемы ботаники" (Ташкент, 1995); на заседании лаборатории антэколопш п цнтоэмбрио-логий растений Института ботаники АН FYs (1996);.па расширенном заседании Отдела экологии я репродуктивной биологии Института ботаники АН РУз (1996)'; на расширенном заседании лабораторий лекарственно-технических растений, химки, алкалоидов и.химии липидов Института химии растительных веществ АН РУз (1996); на расширенном заседании кэфедры ботаники Ташкентского Государственного Педагогического Института ял. Низами (1997) .

По •материалам дЕссёртации опубликовано 6. работ.

Объем-к структура работы. Диссертация изложена на 114 страницах кап'иг.опясного.текстг и состоит из введения, 3 глав, выводов и рекомендаций..Список литературы включает 242 найменования. Работа иллюстрирована 21 таблицами, 4 .графинами, 39 фотографиями.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТУ..: . ГЛАВА I. ОБЗОР JHTEPATJTL! '

Проблеме мпкроклонального размножения и.получения биомассы лекпрстгенп.чх растений посвящено большое, количество исследований.

опубликованных в виде монографических и обзорных работ (Бутенко,-1964; Roinert et al ., 1964; Zenit et al.,. 197?; Fonnesbech , Ponne-sbech ,1930; Kassey , Stasey -, 1981; Tombolato ot al .,1988; Бсспалов ;; др., 1993).

В развитых странах-методы культуры тканей успешно применяются с целью размножения декоративных, лекарственных, исчезающих, эндемичных видов растений, получения безвирусно'го посадочного материала картофеля, цитрусовых и многих других культур, а также для получения природных веществ растительного происхождения (Бутс пк о и др., 1982; Выхристола, Копылов, 1987; Donocq , 1988; За-ntana et al ., 1988; Рогове кий,. Забигайло, 1993 и др.). Млогш.ш исследованиями показано, что успех мккроклональногб размножения . зависит от степени разработки методов биотехнологии ( Вохис ,1985; Cheo , Pool , 1985; Doro , 1988).

Изучение синтеза вторичных метаболитов в культуре тканей ра- ; стений показало, что практически-все классы соединений вторичного обмена (в т.ч. алкалоиды, стероиды, терпеноиды и др.) могут быть синтезированы культивируемы?.?;! клетками растений. Согласно данных литературы к концу 70-х годов было уже' известно бол.ее 100 соединений 12 классов веществ вторичного метаболизма синтезируе- . мых клеточными культурами'( Butcùer , 1977). Отмечено, что для культивируемых клеток растений характерно увеличение спектра синтезируемых соединений специализированного обмена по сравнению о ннтактныш растениями. В ряде se случаев отмечается синтез веществ, не характерных для интактного растения, .например, рутакуль-тин из культуры Ruta ( Wink, Witte , 1983). . ■

• При совершенствовании питательной среды и подборе соответст- ' вующих условий культивирования получены различные штаммы (напри-. -• " мер, в культуре тканей payвольфии змеиной) с-тенденцией к увели-'; чению продуцента-аймалина (Николаева и др., 1983). .

Некоторые культуры в условиях in vitro продуцируют повышен- ' ное количество алкалоидов, например, апоскополамин содержится в больших количествах в экстрактах из культур .некоторых Datura орр,., хотя in vivo этот алкалоид присутствует лишь в следовых количествах ( Cqrduan , 1975). В некоторых, случаях даМ'еревдированные корни, стебли, листья или целые растения in vitro могут синтезировать больше вторичных метаболитов, нежели недифференцированные каллусные клетки ( Thoraas , Street : , I97Q).

Таким образом, использование биомассы, выращенной in vitro ,

представляет большую перспективу для получения экологически чистых вторичных метаболитов (Böhm , 1980; Кислов и др., 1983; Petiarä et.al., 1985; Stafford et al ., 1986; Гохар, Кузовкина, -.1988; Belaizl ot al 1991; Цу тонко и др., 1992; Запрсметов, 1992; Dolaet-Sahjuan et al., 1992;'Загоскина и др., 1993).

ГЛАВА 2.- МАТЕРИАЛ И .МЕТОДИКА КССЛШЮВАКЙ

1,.Рута душистая ( Ruta riraveolen3 ь. ) из семейства рутовых С Rutacaac}- полукусгарнак серовато-зеленого цвета.' Соцветие рыхловатое, щитковидное;- прицветники линейные; чашелистики треугольные, очень острые, 2-2,5 -мм длины; лепестки внезапно суженные в ноготок,.. цельнокрайние или мелко зубчатые, по краю более или менее курчавые, 6-9 мм длины; коробочка с тупыми гнезда!,я, 5-7(9) мм ширины. Завязь верхняя, столбик от.основания 4-5 раздельный. Плод -4-5 гнездкая коробрчка шаровидной формы, 4-5 лопастная; семена темно-бурые, углрватые, почти почковидные. Свежие цветки имеют неприятный. запах,, сухие -,'запах розы. Цветет в июне-июле (Флора СССР, 1943; Гаммерман и др., 1970)'.

В' диком виде руга душистая распространена в Средиземноморье от Канарских островов.до Малой Азии и Ближнего Востока, на территории СНГ произрастает в Юяном Крыму, а в культуре возделывается на Украине, в Молдове, в Прибалтике (Мацку, Крейча, 1970). На территории Узбекистана в диком виде не произрастает.

Рута содержит эфирное масло (0,25-1,27!), флавоноидные соединения, в частности, рутин,.обладающий гипотензивным действием. Применяется как спазмолитическое средство, при судорогах, пневмонии, ревматизме и др. (Земллчскпй, 1951; Акопов, 1986). ■

2. Кодонопоис клематггсовэдный ( Godonopaia cleœatidea Schränk) из семейства КОЛОКОЛЬЧИКОВЫХ ( Sampanulaceae )- МНОГОлетнее травянистое растете, корень толстый веретеновидный; сте-белг> прямой или извилистый, до I м высоты. Цветки верхушечные с цветоносами, покрытыми мелкими, белыми, щетинистыми волосами. Плод - коробочка, сяатая, обратноконячеокая или яйцевидная, раск-рывагацаяея с верхушки тремя створками; семзна-.узкоэллиптнческие, с обоих концов притуплённые,•несколько сплюснутые, гладкие, бледно-бурые', тусклые (Олора СССР, 1957).. .

По данным ресурсоведческях работ кодонопсис клематлсоввдный встречается в Угамсном, Чаткальском, Зэрафшанском, Ферганском и Гиссарском хребтах, Тянь-Шанз, Па-лиро-Алао, Диунгарском Алатау,"

Индия. Иране, Афганистане, на высотах 1100-2300 м над уровнем моря (Флора СССР, 1957;.Ходжиматов и др., 1987).

Надземная часть растения содержит до 0,04-0,08.1 алкалоидов, из когорых внделекы кодонопсен и нодонопсшшн (Матхаликова и др., 1969, 1971; Ханов и др., 1971; Садригдинов, Курмуков, I960; Ход- -жиматов и др., 1987). Алкалоида кодонопсин и кодонопсинян, а такие сумма флавоноидов проявляют желчестимулируючее и гепатозащкг-ное действие (Набяев и др., 1990). В надземной части этого растения содержится до 0,3% эфирного масла, ^лавоноида, витамины груп-? пы А, Д, С (Ходжиматов и др., 1967).

В связи с тем, что целью работы являлась разработка методов мпкроклонального разинетегая изучаемых растений, a также получе- ■ кяе их биомасс« бяотехнологпческям способом, использовали классические методы культуры тканей in vitro и апробированные на-растениях питательные среды по данным Р.Г.Еутенко (1864)п др. многочисленных' исследователей.

В наших исследованиях для получения стерильных проростков использовали.семена, так как они лучше стерилизуются по сравнению ' о другими органами, растений.

Дм выявления наилучшего стерилизатора испытывали диоцид и сулему (0,1$), хлорашн "В" (I-I0Í), перманганат калия (темного окраса), концентрированную серную.кислоту. Дяоцид и сулему испытывали в экспозициях 5,10,15 минут, хлорашн "В" - 10,20,30 минут, перкадганат калия - 5,10,20 минут, концентрированную серную кис- ■ логу - 2-3 минуты. После стерилизации семеня тщательно промывали . 5-10 раз стерильной дистиллированной водой и переносили их на безгормональную питательную среду. Объекты культивировали в фанторо-. статной комнате при освещенности'3-4 тыс.'люкс, с 16-ти часовым '. фотопериодом, при температуре +26*2°С, влажности 70?. Стерильные проростки 15-20-дневного возраста разрезали на экспланты размером 0,5-1 см и высаживали на поверхность агаризованной питательной среда с минеральной основой по Мурасиге и Скугу,.Нич-Няч," В-5 Гам-борга, Уайта.' • •

Питательную среду автоклавировали в течении 30. ми^т. при атмосферном давлении 0,7-0,8 кг/см^. .

' Для индукции каллу со-, рпзогенеза и побегообразования испытывали различные регуляторы роста и их смеси. Дня R.graveoiene L.i 2,4-дихдорфеноксиуксускую кислоту (2,4-Д), rf-нафтилуксусную кисло- '' ту (НТК), > -ивдолилу ноу сную кислоту (ИУК), кинетин, 6-бензиламино-

пурин (ЕАП), гибберелловуи кислоту (ГАз) в концентрациях 0,1, 0,5;, I и 2 мг/л; смесь НТК: кинетин в. соотношениях 1:1; 2:2 мг/л. Для С. clematidea Schrenk ■ : те же фитогормоны, что и для руты в концентрациях 0,15;. 0,75; 1,5 и 3 мг/л, а такяе смесь НУК:кинетин в соотношениях (мг/л): 0,1:1; 0,2:1; 0,4:1; 0,6:1; 0,8:1; 0,25:0,25; Х*Хр 1|2«1|2{ 2*2»

Растения извлекали из колбы, очищали проточной'водой от агар-агара, раскладывали на фильтровальной бумаге и, распрямляя, измеряли длину. Взвешивали- растения на лабораторных весах.

•. Для фотографирования общего вида растений, и их частей использовали фотоаппарат "Зенит", каллусные ткани снимали'с использованием микроснопа ГИС-5 и микрофагонасадки ШЕ-12.

Химический анализ растений был проведен в Институте химии растительных веществ АН РУз под руководством докторов химических наук С.Д^ГусаковоЗ, И.А.Бессоновой,-Д.А .Рахимова и С.Ф.Ариповой, за что приносим им большую благодарность.

Материалом .для исследований липидов руты, произрастающей в открытом-грунте, послужили однолетние облиственные побеги в период массового цветения и в начале плодоношения (I), и 45-дневные растения in vitro ,. выращенные на питательной среде с минеральной основой по !.^расигё-Скугу.

•Биомассу, растений in vitro разделяли на дифференцированную (побеги и листья) (II) и каллусную ткгни (III). Определяли влажность свежей биомассы руты Г и-II и- содержание в. ней рутина. Пигменты-наделяли из части.'биомассы I и II ацетоном. Лнппда из биомассы I и II экстрагировали смесью хлороформ-изопрспанол после предварительной фиксации горячим изъпроглнолом. Фракционирование липидов I и. II осуществляли методом протявоточного распределения и колоночной'хроматографии (КХ). Из общих липидов I и II, глико-липидов и фосфаяипидов I и II выделили .жирные кислоты, которые в виде метиловых зфнров анализировали гязешчдк'оотной хроматографией. (Ш). .-. ' •

-.Определено содержание театральных и полярных липидов, хлоро-флллов 1,а" и "в"-, каротиноидов. и алкалоидов'в дифференцированных ткенях с. clematidea Schrenlc , выраженных методом культуры тканей. Установлены качественный й жирнокислотный .составы нейтральных и полярных липидов, а также наличие главного алкалоида кодонопсина и минорного-кодонопскнина, проецируемых.дикорастущим' растением.

• Сукму алкалоидов 'яз. де^ферещзроБанкых тканей культуры 1л ■vitro, -.выделяли. методом ронае .размотанным -.для дикорастущего ра-

стегая (Матхаликова и др.-, 1969).

ШВА 3. РЕЗУЛЬТАТ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Введение В культуру in vitro н. graveolena X.

При введакия в культуру in vitro руга первым этацам. было получение стерильных проростков. Для этих целей наиболее- удоб -нымк , как и для многих культур, оказались семена, так как при стерилизации они повреждаются меньше, чем другие органы,.

Работы, проведенные по подбору каибадее эффективного стерилизатора показали, что 0,1?? растворы сулемы и диоцзда в''экспозициях от 5 до 15 минут поверхностной стерилизации семян сильно подавляет их всхожесть. При обработке семян 10.« раствором хлорамина и темным раствором перманганата калия добиться полноценной стерилизации семян не удалось. Что же касается концентрированной серной кислоты, то она дала хорошие результаты при стерилизации семян и не оказывала отрицательного влияния йа всХожесть* В.этом' варианте на 3-4 день после, обработки семена дружно прорастали. При использовании этого стерилизатора удается получить около. 90^ стерильных проростков, у. которых рост и развитие.всех-органов, протекает нормально.. На 30-35..дни культивирования проростки достигают длины,.30-40 мм, на них формируются несколько' настоядах листочков, а также корни, Их можно исполЬзовахь для получения экс-план тов в введения в культуру.

.Для изучения способности различных оргакоЕ к каллу со-, побеге- и корнеобразованию экспланты листьев, корней, междоузлий и узловых участков стебля отдельно высаживали на питательные средн.

С целью подбора, оптимальной среды для. каллу с о- и морфогенё-' ■ за испытывали различные питательные среда, такие как Мураси£е- . Скуга, Уайта, Кич-Бич, 3-5 Гамбурга. Среда Уайта в присутствии -. ,- ■ фитогормонов способна индуцировать каллусогекез с формированием, меристемных участков, но'значительно слабее других питательных •■• сред. Лучший результат по индукции, кагиусогекеза отмечается лрл использовании среды ¡¿урасиге-Скуга, в.связи с этим дальнейшие- . .исследования проводили на этой среде.

Экспланты руты в зависимости от происхождения'(корки, листья,' мездоузлия, узловые участки стебля)" в присутствии фигсгорыояоз проявляют различную способность к каллусо-, побего- и корнеобра-•зованию. При культивировании отрезков листьев руты происходят

счень слабое образование'каллусной массы (рис.1а). Интенсивное каллусообразование наблхдается из тканей стебля, при этом каллу-сные клетки очень рыхте,. бледно-зеленой окраски. Ка 30-40-Й день от начала культивирования на каллуснкх-..клетках формируются мери-стемные участки ярко-зеленого отгёнка, лз которых позже образу. втся элементы проводящей системы побега. Такие участки наблпдапт-сяв нескольких местах на поверхности каллусной массы. Постепенно начинают формироваться побеги, на которых образуются листья. ■ При- первой и-второй-субкулызфах из массы каллусяых клеток также начинают прорастать побеги. Необходимо отметить, что на наллус-ных клетках руты доминирует процесс побегообразования. 7 основания. образующихся побегов отрастают небольшие нитевидные корни (рис.16). При культивировании эксплантов корня наблюдается активный процесс каллусогенеза. Каллусы бледно-желтого цвета, из которых в редких случаях прорастают побеги, а также небольшие корпи нитевидной формы (рисЛв). При пересадке в питательную среду отрезков стебля с узлом на пораненном участке образуется небольшое количество каллу с них клеток, .из которых интенсивно начинают образовываться корни, а йз узла - активно отрастает.побег. Таким образом, при использовании.в качестве экспланта отрезков стебля с узлом удаётся получить наилучшие результаты в плане мякрокло-нального размножения и накопления биомассы (рис.1г).

• 3.2. Влияние фитогормонов на индукцию каллу согенеза, побего- и корнеобразование а.. вгауео1епз ь.

Как' отмечено- выше; экспланты стеблевого происхождения, в частности, .участки стебля'с узлом, оказалась наиболее удобными для постановки .различных опытов,-в'этой связя исследования по оптимизации фитогормонов и других элементов питательной среды проводили, с использованием этих- эксплантов.

Исследования показали, что при использовании 2,4-Д (0,1 мг/л) усиливается образование побегов, затормаживается образование, каллусов., образуются небольшие' корни. При увеличении концен-. трации 2,,4-^Д. отмечалось- многочисленное образование адвентивных . побегов по'краям раневой поверхности. Новообразование побегов. прЬисходило по типу реституции, т.е. шло-восстановление органов на раневой поверхности. - -

Такой не эффект действия'на экспланты стебля с узлом наблю-.. дали, три использовании КУК. При концентрации. НУК 0,5 и I мг/л о:

Рис.1. Культура ткаш различных эксплантов руты душистой

а) листья, б) стебли, в) корни, г) одноу.зловые участки стебля

¿.¡¡.¿..¿¡¿Шм'.Л мг.й^

г

% V'.V

"Ж М"у--,............ ., ..,

& . • ;¿.-а, •■•■•.■■■■

• ■■■■■ л V . .

•' I ■ л;

Р1Гс.-2а.-Пядук1п1я каллусогенеза у руты из эксаланга стебля с узлом б) ,в) Органогенез в культуре каллусной ткани руты

эксплалта отрастало большое количество хорошо разветвленных в • с&шствешшх.побегов, которые на 35-40 день культивирования достигали высоты 65-85 мм. Наиболее активный рост, (до 95-115 мм) их. отмечен при концентрации 0,1'ыг/л. У основания побегов формировалась каллусная ьасса различной формы и окраски от желтого до коричневатого оттенков (рис. 2а,б,в). Высокая концентрация КУК и 2,4-Д (2 мг/л) подавляет побегообразование и приводит к актив- ' ному каллусообраэованию.

При использования низких концентраций 'ЛУК (0,1 мг/л) .отме- ' чены слабые темпы побегообразования, каллусогенез'и рнзогенез были полностью подавлены. При увеличении же концентрации ИУК до 1-2 мг/л рост побегов резко активизировался и на 40 день культивирования они достигали высоте 105 г.:м. При этом у основания побегов наблюдалось образование каллусов и небольших корней.

Из цятокининов в наших исследованиях были испытаны кинегин и ЕАП. Как показали результаты исследований цктокишшы в различ-' них концентрациях подавляли образование каллусных клеток. Кинетин в концентрации I мг/л стимулировал побегообразование из участков стебля с узлом. При этом высота побегов на 35-40 день куль-' тявирования достигала 50-70 мм.

Использование ГАз (0,1-2 от/л) слабее стимулировало ростовце процессы, в результате чего на 40 день культивирования длина побегов достигала 25-40 мм. В этих, вариантах процессы каллусо- и ризогенеза были подавлены.

В целях подбора наиболее эффективного стимулятора ростовых процессов у эксплангов в культуре in vitro испытано совместное действие ауксинов и цитокининов. При добавлении в среду, смеси кинетика и КУК в различных концентрациях образование побегов прсис--ходило достаточно слабо, высота их достигала 50.мм. Смеси фптого-рмонов заметно стимулируют образование каллусов и отрастание мно-* гочисленных корней. .

Анализ действия фитогормонов показал, что наиболее активный • рост побегов из эксплантов руты вызывает применение 0,1 мг/л НУК в среде Мурасиге-Скуга.

3.2:1. Действие нитратов на рост и развитие R. gravoo-lena L. в культуре in vitro

• Исследования показали, что содержание дю3 и ин^ио^ в среде Мурасиге-Скуга существенно влияет на рост и развитие побега,

выросшего кз экспланта.(отрезка стебля с узлом). При низких концентрациях нитратов в присутствии фитогормона НУК (0,1 мг/л) на-блвдается медленный рост побегов. Постепенное повышение концентрации 2-х видов нитратов ( ЛЮд-1200-1500 мг/л; NH^IIO^ -Ю0С-1200 мг/л) способствует усилению роста побегов. При этом стебель становится более толсты?.!, листовые пластинки более крупные. По интенсивности роста побегов лучший результат наблвдается при таких концентрациях нитратов, которые обычно содержатся в среде Мурасиге-Скуга, т.е. iCIO^ -1900, нн^но^-1650 мг/л. Повышение же концентрации их до 2-2,5'г/л подавляло интенсивность роста растений (рнс.З)

3.3. Влияние углеводов на каллусогенез и побегообразование R. graveolens L.

В предварительных исследованиях было показано, что индукция иаллусогенйэа и рост побегов из эксплантов лучше происходят в среде с глюкозой. Специально проведенные исследования по влиянию глюкоза на динамику роста растений руты показали, что при низкой концентрации глюкозы'(10 г/л) они растут значительно медленнее, чем при более высоких концентрациях, индукция кгллусогенеза из раневых участков стебля более слабая, формирующиеся листочки относительно мелкие. Из испытанных концентраций глюкозы наиболее оптимальней для интенсивного кгллусообразованля и роста побегов является 30 г/л. При этом формируются мощные побеги Темно-зеленого цвета с .крупными листочками. Повышение концентрации глюкозы в .2 раза (60 г/л) отрицательно действует на интенсивность роста растений руты in vitro- (рис.4). . ' ■

При замене, глюкозы на сахарозу наблвдается. иная картина органогенеза. .Прл высевэ-одноузловых участков стебля в среду с различной концентрацией сахарозы отмечалось слабое-действие на индукцию каллусогенеза. Растения руты во.'всех вариантах сахарозы были относительно- слабо развиты« с. Мелкими листьями бледно-зеленого- цвета.- . . ','.'.••..'■•■•.

.3.4.• Пийроклональ'ное•• размножение R.graveolens L. in .vitro

' Как показано вше, интенсивный .реет побега из одноузловых участков стебля.и соответственно максимальное накопление биомассы руты удается получить -на среде Мураонге-Скуга с.0,1 мг/л НУК-

ч. •а

КЗ

га

■БО

го.

I --

мьщ-ат, ■

ваонФ '¡Со

угса т/А' (а

1Ш0 мц

№00 ьщ Шс *чя уи нес

£0

—А

+0 -А

ср&аи вунъгаивфвИвнш

Рис. 3. Влияние нитратов на'рост растений рутй

аммгмсг ЛОф

гяюкш ф

ищоза ео ф

июлем ю ф

сага/нцо )о ф

Ша/мца ¡¡о г/л

сахарыа ю 1/ц . старуа ее г/л

сроки лумти^/>о!ания/Лиг/. Рис. 4. -Влияние углеводов на рост.растегий руты'-

л SO г/л гл.'скозп. Однако при агом развивается слабые норм. Для гяяроклопаяьного размножения и пересадки в грунт неоохсд;н.;н растения с более развитой корневой системой. Проведению в связи с 8там асследопаияя показали, что повкаепко концентрации HVK до 2 иг/л э среде .\<урасаге-Скут'а усиливает рост кчрне:) in vitro со 8качя?вльн»сл подавлением роота побега. Такой соот;л; сред« cnvoof-отвует получение посадочного материала в грунт. Vuai* спо-

соб переоацнн pactекш! в грунт с 'последу«.тм получопцен псг^.-иь-ио развитых растений.

Танга обрз'ом, для гакрокло.иал&ного размножм^л in vitro необходимо кульипкро.ч^ть одноузловяо участки стряся * «ряде Кураоиге-Скута с 2 мг/л НТК, 8 для получения биоетосы in vitro ммшо использовать эту же среду, но с 0,1 мг/л Ш. 3 гк$л»ят I показана динамика накопления биомассы руты

■ .. Таблиц?! I

Динамике накопления.биомасси н. gravoolano L. in vitro

Дни : нульгавлроваиия 1 ; Вес сирой нас-Г •' cu, 'кг j Боздз'шн.о-су- ¡ J xofí ВЕС, MP ! t усушки

• 20. - .203,9 22,1. 10,83

.. . 30 V 713,6 69,3 9,61

"40- .921,3 93,2 • 10, XI

1 50 1С73,0 . 100,8 9,39

■ 1ИРС.5' 41.63' 4.82

3.6. Введение 3 культуру ' in vitro 0. clewatldea Sóbrenle

. ■.. Как и в исследованиях с рутой, стерильные яророогки кодоно-- всиса легко получить при обеззараживании семян серной кислотой.

Через 15-20 дней после посева семян были получены проростки, ко' торне делили на онспланты размером 0,5-1 см и высаживали на гга-'-та т ель ну и среду ¡«Гурасяге-Скуга с различными фи'тогормснамй. Па 30-35 дни.культивирования обнаружено,, что экспланты различных органов ксдонопсиса прся-угяют неодинаковую реакцию к каллусо-, no6ei J- и.корнеобразеваняю. ;v . . , •■■ '

При куль титровании эксплантов листьев кодонопсиса в среде - ЭДрасиге-Скугя'с фЛгогЬрионаия НТК и кшшгином в-концентрации .1 мг/л. на месте среза ллст!ел отмечается образование-каллусов1небо-■ льшоЗ величины бурой окрасил. На1 эяи каллусах г единичных случаях омго-г ' сь образовзяие побегов (риа.5а), При посадке эксплап-

то:з корне!'. такг;с отмечался небольшой рост каллускых клеток зеленого цнета. В.последующем от них отрастали небольшие корни, покрытие тоненькими KopuprjJMH волосками, незначительная чисть их давала побеги (рпс.Бб). Относительно интенсивное каллусообра;зо-вапае нпйл.»',;аетоя-прп куяьтивгроваии'й'эксплантов стеблей. При длительном култои .зпрувяклп на каллусах темно-бурого цвета отмечается ппгонсивпсе побегообразование. Такие кадлусные клетки.хорошо субнуль тНЕН&уятся. Образовавшиеся побеги на каллусах имеют нобсш.ыоГ. разл'ср (10-20 мм), рнзогегез не наблюдается (рис.5в).

Наиболее актплпоо образование побегов наблюдается при посадке л питательную сроду одпоузловнх участков стебля. На 30 день кулыикфовиния гисота побегов достигала 45-70 мм. Побега развет-влешша с хорошо сформированными листьями,, по краям, срезов некоторых эксплапгов образовывались каллусы, окраска которых варьировала от бледно-зеленого до корячнеааго-бурого оттенков. Процесс образования корней не наблюдался (ркс.5г)» .• - . '

. 3.7. Влияние фитогормон'ов на индукцию, каллусогенеза, побеге- и корнеобразозание с,' clemátides dciu't¡¡¡i£

Проведенные исследования на узловых эксплантах стеблей показали, что из аукопноь - 2,4-Д в'различных концентрациях усиливает каллусообразодание. Из каллусов на 30-40 дни культпЕированля начинается отрастание многочисленных коротких корней,- однако подавляется реет побегов-. ' ' - . '-• .

• Добавление в питательную',среду ЛУК также усиливает процесс -каллусообразозання (рис.6а),. При. высоких'концентрациях ПУК'отмечается слабый.ризогзиез, но сравнительно активнее идет образование адвентивных побегов по"краям раневой поверхности'(10-60.мм).

Цх шеление ЛУК'в различных концентрациях несколько усиливает рост побегов а появление' 'дорааП. на одноузлов'ых-участках стеб-, лей кодокопспса. Использование гг.нетина з среде блокирует .обра- . зование корней, хотя и .наблюдается. индукщш 'кслдусов-зеленовато-бурой окраски. При ьтом образовывались ■•адвентивные побеги по; типу реституции,- выпота которых is 30-40 день- культкзиррванин достигала 12-45 им. Побеги были ветвистыми,; на..них сформировались листочки различной величины. Аналогичная ь-артина наодадалась и при введении в питательную среду БАП. (рис.-Об).

Опыты по изучению действия ГАз. показали, что этот фптогор-MOtt при низких•концентрациях рейдирует только формирование-поба-

Рис.5. Культура ткани раз летних, эксплантов кодонопсиса клема-тисовидного'

а) листья, б) корнл, в) стебли, г) одноузловие участки стебля

. Рис.6а; Индуктшя ксллусогенеза из экспланта стебля .кодонодсиса

б) Органогенез из каллусннх.тканей кодонопсиса '

в) Рост побэгсв из одноузловых участков стебля кОдокопсиса •

•гов из узла стеблей; повышение его концентрации до 1,5 мг/л способствует побегообразованию,', но добеги при этом достигают небольших размеров (10-35 мм). При дальнейшем повышении концентрации ГАз до 3 мг/л происходит образование ¡.;одних- побегов с крупными . мясистыми'лис'точиами ярко-зеленого цвета. На. 40 день культивирования высота-побегов достигает' 80-100 мм (рис.бв). Из основание . эксплантов образуются I или несколько корне;» покрытцх голень ими корневыми,врлоскаыи. Процесс каллусогенеза не наблюдается.

• При изучении комбинированного действия ауксинов и цитокшш-нов на поведение .эксплантов в культуре in vitro показало, что при низких концентрациях ЛУК я кинетина отмечалось активное образование каллуской массы. Повышение концентрации обоих фитогор-ыоиов соответственно приводило к активному побегообразованию, побеги были хорошо разветвленными и загущенным!, высота их на 3540 день культивирования достигала 50-60 ми. При этом каллусоге-нез шел довольно активно, от некоторых каллусов отрастали длинные нитевидные кори.

Полученные результаты показывают, что из фитогормонов наиболее элективным для выхода биомассы была ГАз. в концентрации . 3 мг/л.

. . 3.7.1. Действие нитратов на рост растеньиц с. cle-natidea-SohrenJf in vitro

Различные концентрации нитратов в среде'существенно влияют, на рост и. развитие растений.кодонопсйса. Кодонопсис в отличии от руты интенсивней растет при значительно низких концентрациях нитратов в среде; Очень низкие концентрации нитратов ( юто,- 600, NH^HOj-400 мг/л), приближенные к среде Уайта, не способствуют активному росту побегов. Наиболее оптимальной дозой нитратов для '. роста pacreroiii кодонопсиса .оказались 1000 шг/л .шо^ я 800 мг/л jlil^uOj .когда- рост, к 50 дню культивирования составлял в среднем 115 мм. Дальнейшее-узе-тачание концентрации нитратов в среде значительно подавляло интенсивность роста побегов (рис.7).

3.8.'Влияние углеЕОДОВ на каллусогенез'И побегообразование О. cXeaatldea ¿ichrenic

Изучение-действия углеводов на каллусогенез и побегообразование коярнопзиса дало такие яе результаты как к ^ испытаниях с рутой. зе£с?в:тз на индукцию каллусообразованкя и рост по-

US

m

sa

(ä

чо

го

8 i

I (контроль)

Цт

Шкщ щщ

йкщ щщ

2КУ0. -

елщ ■ ft¡y%

1900пф есб.иф

ЧООнЦв

toût&ii иъскф

iOíO^i/a ■ 1500щ'л aootuif»

¿5W>*fJ3

■гооолр

L.

га

So i

Рис.

to so

Cfexu «w¿*nvfv/o ti vu В f&tu)

й-ияшге нитратов ка рост расгедей кодонопсиса

2 г&ота юцл 'jj грехом ' goy,i

§ »мша зо ф

j> tmieaa to y¿¡

veatapota 1<>Ф

$ сакараа 20 V*

$ confio» 30 ¿й

v¡t¡c.mofoxt fO'/л

рис. 8. Влияние углеводов' на ü

Сроки ку/!ьти6иро(аяцр

рост растений кодонопйиса

бегов aq 73лгаяс участков стебля оказывает глвкоз? в кокцентра« ■ пая 30 г/л (рлс.8).

•Однако, в отличие от руты, индукция каллусогенезь происходит почта одинаково,, как на среде с глюкозой и .сахарозой.

3.9. Млкрогигоиальяо? размножение с. olematidea Sohren* ' .in vitro

Как было показано в-подразделе 3.7. лучшему развитии n^dera из одноузловш: участков стебля: способствует применение 3 мг,л ГАз в составе ерзда Цурасигё-Снуга, при этом уасгвльяца имея? ' 1-2 развитых корня, Одпно^ше корни плохо укореняются прч пересадка в грунт. Высота побега ля основной фактор да посадочного материала пег.е.чд наличие развитей корневой системы, s гтой связи изучение различных композиций регуляторов роста показало, что применение 1,2 мг/л ШК способствует появлению большом по^тгчес— тва корней. При этом' высота''.побегов составляет- 50-60 мм. . .

Разработан способ дересадкч растеньиц в грунт с лссхедущям Пелучояием. нормально развитых растений. Тсли.м образом, для мия-рокленального размножения кодояопснса in vitro , неоохедьмо культивировать одноузловые участта-стебля в кодафицкровакиой среде Цурасиге-Скуга I MPj -1000 мг/л, ми4ио3.-800 кг/л', с 1,2 кг/л Ш п 3/3 глюкозы), а для лолучензя биомассы in vitro - на этой же среде с 3 мг/л.Газ., В таблице 2 показана.дяламлкя какогления бпо-массн •яедонопсиса. По носим раечетрм при боемождости одной лаборатории молао .получить 64. тыс. раотений-регенеронтов за месяц, я 770 'тыс. за год, или IGQ-IG5 кг гколагичесни частой биомассы. .-.'■'• -'.... . . : . , • Таблица 2

Динамика накопления бйомасси c*cießia.tid©B з chronic in vitro

'•.-. Дни . ' - ' . культивирования' , Бес сыро" мао-I 01?, мг '' | Воэдучшо-су- ; ! хой' вес,' мг 1 % усушки

/ ' 20 .' . ' ' 308,5 .41,2 , ;« '.13,35

: 30 - 393,2 46,9 ,11,90

• 40 . ■ П2Э;6,; ' .116,8 ' 10,34

50 . ... . 2463,2 265,1 10,74

39.87 5.43

2С - • ■ • .

3,5., ,3.10. Сравнительная характеристика .растзняй руты к кодокспскса in vivo и in vitro по химическому ссс-. тану

й. graveoleno L ..Исследования показали,..что по содержанию суммы пигментов в м'г/г. (абсолютно сухое вещество) в био-

массе I и II руга шеет близкое значение (7,5 и 7,33 мг/г), при этом в культуре in vitro , по сравнению с in vivo , наблюдает-, ся меньше хлорофдллов и больше карогиноидов и ксантофиллов. Содержание рутина в мг/г а.с.в. з биомассе II почти в 1,5 раза выше, чем в биомассе I, Выход липидов из биомассы-культуры in vitro составил в среднем 10,7% а.с.в. по сравнению с 8,7?! а.с.в. из.биомассы интакгного растения. Общие-липкда биомасс I и II, шлея одчнаковыс наборы горных кислот с близкой степенью кенаснще-ниостм, существенно различаются по содержанию кислот - 18:2 и 1«:3. -.'.

К настоящему-времени из растений руты душистой вдавлено более 25 алкалоидов, относятся к производным фурано- и дигидро-фуранохинслина. Многие иг них обладают физиологической активностью (Кодак и íp., I97C; Кузовкпна и др., 1980). В гликолкпэдах биомасс I и II алкалоиды, качественно не обнаружены, в -полярных' липидах образцов I и. II они дрису тствовшш в .следовых количест-. вах. .' - ••■-■•

ИсследовШае пекпз&яо, что листья с примесью мелких стеблей, соцветий и розеток, биомассы I ездерхат 0,5?'суммы алкалоидов от массы.сухсго сырья, огебль а дкздерзншроьаннне-ткани ..

биомассы-II - 0,1л-.

. C.olcmatldea Schrenk . В составе тканей- кодоновевев' вырацек-кого in vitro р нейтральных лкладах обнаружили углеводороды-,;' •; слоякые эфиры кирзых кислот, с фитостеролама и'алкф-зтическиш -спиртами, •гряяцплтлидершш, свободныз- жирные кислоты,'.мирные спирты, трктер1 енолы, отеролы и минорные кекцентифицйровачные соединения. В составе гтако- и. фосфолиппдов присутствовали., главным образом, компоненты характерные для фотссиатетлческкх тканей растений.. '• Липидн тканей кадононсиса, особенно полчрвне лигшды, обогащены ненасыщеннкмй яирннмг. кислотами. Среди них преобладает -кис. лога lflj'3 ь'присутствует кислота 16:КЗ-транс). Кислота 18:2 на- • ходится почти в равкнх'количествах в составе нейтральных и полярных липидов, к'ислотн 18:1 - больше и нейтральных лнпвдах-.'

• Из литературы известно, что надземная часть кодонопоиса кле-матисовидного, собранная в Катнедарьинской области и с Дарвазско-го хребта в период бутонизации и начала цветения, содершг разное количество алкалоидов (0,08% и 0,065$ соответственно), кз которых выделены два основания кодонопсин и кодонопсинин (Матхали-кова, 1970; Магхаликова и др., 1969; 1971).

Количественным анализом установлено, что в растениях, взращенных in vitro, содержится 0,127/5 суммы алкалоидов от массы воздушно-сухого веса растения. В культуре in vitx-окодопопсис синтезирует больше азотистых оонований, че.\| дикорастущее растение. Питательная среда также ссдор-тсаля алкалоида в небольших количествах. Этот Факт, по-видимому, объясняется ди$фузлей водорастворимых алкалоидов в питательную среду и подтверждает способность тканей кодонопспса сохранять секреторную Функцию в кульгуралыщх условиях.

Таким-образом, из результатов следует, что дифференцированные ТКГ.НИ культуры in vitro R.grevoolena 1. И o. clerautidoa Schrent содержат пигменты, лициды, алкало;:ды, свойственные фото-оинтетическим. тканям in vivo. Это дает основание полагатт^, что культура in' vitro в перспективе мояет слукить источником физиологически' активных липид-лягментшх концентратов л алкалоидов,

• • ' в и з о д ы

1. Установлено, что наиболее оптимальным способом получения стерильных проростков Ruta graveolene I. и Codonopoio olemati-dea Schrenk является введение в культуру In vitro се;..ян.

Показана возможность получения первичной каллусноЯ гкшш на модифицированной среде Мурасиге-Скуга. , .

2. Интенсивность каллусообразования, а также особенности ка-ллусной ткани (цвет, морфология, колено генная) в значительной' . Степана зависят от происхождения экспланта.

3. Отмечено избирательное действие ауксяноз и цитокининов на процессы каллусо- и побегообразования. При культивировании и субкульгазировании, каллуспых клеток H.eraveol«ns 1. Я с. clematis , dea Schrenk доминирует морфогенез с образованием нормальных.г.о-.бегев. • ' . ' '.'<.'■

4. Как у R. graveoleno i. » гак и у C.clematidea Schrenk наиболее высокой органоген«пгаской способностью in vitro характеризуются ткани, получоы.'ше из участка стебля-с узлом.

5. Установлены оптимальные уровни нитратов, углеводов и гсгормонов, добавление которых в питательную среду .обеспечивает максимальное накопление биомассы 'R.grnvoolena L. и С. clemátides Solirank . . . i '

6..Растения.R.graveolensU, выращенные методом in vitro , по химическому содержанию (в количественном и качественном выражении) близки к таковым растениям, выращенным. In vivo. . По содержит» хе нейтральных липидов и рутина растения, выращенные in vitro , несколько богаче ингантных растений. Растения С. cleaa-tidea Schrer.k , выращенные in vitro , по содержанию пигментов, липидов и алкалоидов близки к таковым растениям, собранным в естественной флоре..

РЕКОМЕНДАЦИИ

1. На основании количественного и качественного анализа биомассы . руты и кодоноисиса, полученной in vitro , считаем целесообразным использовать метод биотехнологии з широком масштабе.

2. При введении в культуру in vitro рекомендуем использовать семена с целью получения стерильного материала-.

3. В качестве гжснланта при введении л культуру целесообразно использовать одноузловые участки стебля.

4. Для повышения продуктивности сырья руты рекомендуем использовать НУК в .концентрация 0,1 мг/я, а кодоноисиса - ГАз в концентрации 3 мг/л. '

5. -Наибольшее накопление биомассы и продуктов первичного и вторичного метаболитов отмечены у руты на 30 день п кодонопсиса на 50 день Культивирования, которые и рекомендуем! для использования в, практике. ■

По .материалам диссертации опубликованы следующие работы: ;

1. Атажанов ДД1, In vitro кодонопсис экмаси.//Узбекистон Респу-бликаоининг Давлат тили дацидаги ^онунжяг 5 .йилигига' багиш-

. лантан ёш. олимларнинг илмий аняумани: Тез.докл. Ташкент;. 1994. -0.41-42. ■ ' . . : ■

2. Атажанов Д.М. in vitro ' рута' экмаси.//там же. -0.-43-44.

3. Атажанов Д.М., Зрккенова Е.М., Азийходжаев А. Культура in vitro различных эксплангов ру.ты душистой.//Научн.конф."Биология ■ ва экологиянинг хозирги замон муаммолари": Тез.докл. Ташкент 1995. Т.2. С.23. '

4. Атаяанов Д.И., Сохабаева М.Д., Эрккенова Е.М. Культура кодоно-псяса in vitro .//Узб.баол.з. 1995. И 4/5. С.51-53.

5. Асилбекова Д.Т., Русакова С.Д., Глушенхова А.И,, Арипова С.Ф., Азизходкаев А., Атаканоз Д.М. Липлды, пигменты и алкалоиды Со-donopalB clsmatidea Schränk . выращенного in vitro .//Научн. конф."Актуальные проблемы ботаники": Тез.докл. Ташкент,1995. •С.50, .

6. Асилбекова Д.Т., Исакова С.Д., Глушенкова А.И., Арипова С.Ф., Атажанов Д.ГЛ. Химический состав Codonopolo clematldea, вкра-.иенного in vitro .// Хамия природ.соединен. 1996. ß 4. С.

537-540 ■

АТАМОЗ ДЙЛМУОЩ МАГЭИБ1АН0ВИЧ

ДОРЙВОР УОШШПАР HUÎA GRAVEOLEJI3 I,« ЗА CODOü'OP-зи С1'ЕЫА.ТВ)ЬА 3CHREMIC IN VITRO ДА ЗКМАСй

(Ьлчнитда доривор усикликлар Rute graveoleno »a Со-

donopsie clepat.i-Леа дарни In vitro да акмаои ва еукъий ша,-

роигда. уларии дориюрлкк хусусиятиии саклаб ц'олгдн холда биологик массасин:! олив ма^сад цилиб цуйилгак. Курсатидганки, бу нккала усимлик in vitro да окияоини о'лиш учун куса^олаигаа /р/глардаи фоДдалании яхея натижа бвради. Суньий ипроитда. jfcit-мликлар биомаосасиии к/проц олии ^симликни цшЧон аьзосиий зкк&-да устириш билая боглиц зкаи, яъни поячвни к^зи билан олингаи циоиики ишлатип иккала >оимликда ^ам те зла $кЯгадак усиилик jjo— сил б/ливига ¿а уни фаол усииига эришилади,

¡\ар бир дортор ^оимликкк сунъиЯ озуцада яхии риямланип учук фитогормоилар, нитратлар, углвводларки штимал ми^дори ур-' ганилди. ?.. graveolena ' • ■ • учун Д/р&скге-Скуга озуч&~ сида нитратлар ии^дори : Kiio-j - 1900 иг/л ia WH^'Oj 165U кг/л, углвводлардан - глпг.оза 30 г/л, Лктэгэрмонлардаи -нафтилу*суо кислоглси 0,1 иг/л,C.oleaatidea . . . учун Нам osyfjaAa i<N03 - lOCü sa HH^BOj - ÖoO иг/л, г лек osa 30 г/л, гиббврел ккслотасн^ мг/д.

Изланивлар натижаеяд» иккала усимяих учун микроклонал к?-паятириш увлуби ишлаб чщилган.

In vitro ia in vivo да устирилган усимликларнк кимэаий курв&ткичлари ургакклгак, Натижада, И. gravnclens да. иккала варситда устирилган усииликлар уртасида купгииа кимовяй бвлги-лар иик,яом1й *а ви^аг) билан квекин фар v лиги хурсатилгйи.

щ vitro .устирилган ?.еимлихларда нвйтрал липидлар sa ■ рутин годдаси купроц синтез булар экан.

С. cl ema tide а да щк иккала иароитда /сг&н

/оимлихлар к/пгина кнкг >ий моддалар мицдлри билан бир бирига Щпы *уради, с. eïeiaatid&a .. . . '•.' устеликларда .in "vitro-да алкалоид. ;.моддале.р ниебман-купроц синиз 6/ лади. : , -

Аиалий тадцицотлар натижасида H. gr&veoleaa 'за Codo-nopeie clematidea -, . ¿сикликлагшинг т«зкор-купаПтирчм ус/ллари-Щ ярятилиши 6ч дяризор усимликларни технологи*.«адал усулда ' уотирияаииг açoçn булипи мумкйи. -. ; - . ' ..' ' ' .

ATAZIUHOV DILwUIiAD КШШ2ЛЛ?Г0У1СН

cul/hvatioh m vitro op medlcilîab PLANTS RUT A GlttVKOLWtë i. a1id с0201юр31ч cliîllatidëa зспяькк

The aim of this woric was to study culture in vitro of medicinal planta Codonopoie clematidea iiohronk and Iluta eraveolene i.. and to obtain bioinaso, containing purposive» substances, ïho investigations иada anowd that both for C.clematidea jchren* nr.d Г veolen.q L. the beat result for getting sterile seedlings io achieved in the cane of lise of aeedo. It is also shown that jntenoity Qf accumulation of biomane depends on expiant and it io determined that tissues, got froc, the part of a :3tem with a noue, are characterized by the highest organogenetical ability in vitri in both objecta.

Рог each culture the optimal levelo of nitrates,- carbons, phy-tohorroonoa, supplying raximura accumulation of biomaas are iienti-fied. l'or li, graveolena beat concentrations are-1900 ng/1 KliO^ and 1650 rag/1 ТЩ^КС^,. from carbons - glucose in concentration 30 e/1, from phytohormones - 1-llai»hthylacetic acid in concentration 0,1 ng/1, for C. cle.-natl'lea - 1000 rng/1 UJO^; UOO mg/1 llH^HOy, 30 g/1 Glucoao; gibberallic acid in concentration 3 mg/1.

.1 compering 'chemical analysis of planta grown in vitro and growing in natural conditions was wade.

It 10 identified thfit in -II, graveolena L, between plants got in vitro and in vivo there are no special difference"» in chei.iical content { in ivalitatlve or quantitative expeooion)s ao for the content of ne.vtral lipids tnd rutin, the planta gro"in in vitro are somehow richer of those Browing in natural conditions.

Planto of C. clematidea iichrenk, grown i<i vitro in content of pigaenta, lipida and alcaloids are very close to the planta, got in vivo.

On the booio of experiaen+al data techniqiee of multiplication of П. graveolena I». and C. clematidea ¿Schrenk were develo-' ped. They may become the basis of a technology of accelerated multiplication of theee valuable raedioinal plants.