Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Корреляты вирулентности лейшманий
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология
Автореферат диссертации по теме "Корреляты вирулентности лейшманий"
министерство здравоохранения республики упбргистдн
^ау'шо исслг:довател:.с;: ш ; гсти' ут эпидемиологии, чл микробиологии и инфекционных заболевании
■уь • <э
На правах рукописи
НАСЫРОВ Фархад Шадыевнч
УДК: 616.993.161-002.8/.9
КОРРЕЛЯТЫ ВИРУЛЕНТНОСТИ ЛЕЙШМАНИЙ
03.00.19 — паразитология
авто реферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
ташкент — 1995
Работа выполнена на кафедре детских инфекционных бол'езней С, мариандского государственного медицинского института им. И. П. Па лова н в научно-исследовг._ел1СК1 инститл ге медицинской паразктол гни им. Л. М. Исаева Министерства здравоохранения Республики Узб* кистаи.
ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ
1. Доктор медицинских наук С. О. ОСИПОВА
2. Член корр. АН РУз, заслуженный деятель наукн РУз, докто ветеринарных наук, профессор и. x. иргашев
3. Академик АН РУз, член корр. РАГ.Ш, заслуженный деятел пауки РУз. доктор ¡медицинских наук, профессор
и. к. мусабаев
ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ:
Институт медицинской паразитологии и тропической .медицины н.м. К. П. Мпрципопского Л13 РФ
Защита состоится «___»_
_1995 г. с / часо!
на заседании Специализированного Совета Д. 087.11.21. в научно исследовательском институте эпидемиологии, микробиологии и инфек ционных заболенаний МГ! РУз по адресу: 700103, г. Ташкент, 133, ул Решетока, 2.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИЭМИЗ МЗ РУз
у -л ^_
Автореферат разослан « /.у > м^р в _1995 года.
Ученый секретарь специализированного сонета доктор медицинских наук
Ш. Ш. ШАВАХАБОВ
ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
- ■ — - Актуальность- проблемы"." Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) включила'лейшманиозы-в число наиболее важных" паразитарных болезней, длят изучения которых создана и осуществляется специальная программа. По данным ВОЗ леЕгаманиозами ежегодно болеют 12" вшт человек." Почти третья"-часть населения земного шара проживает в эндемичной зоне и находится под угрозой
заражениям ........ ~ • - - —..............- " ............ • •"
— - - ЛейшманиозЕг в целом и-кожняй лейшманиоз ■ в частности,"до• сих пор встречаются" в-странах-Центральной Азии." Наиболее активные эндемичные очаги зоонозного кожного лейшманиоза (ЗКЛ) отмечаются в Узбекистане и Туркмении. ..............
В настоящее время в Узбекистане ЗКЛ регистрируется в б областях: Бухарской, Навоийскойу Сурхандарьинской, Кашкадарь-инской, Сырдарьинской и Джизакской, а также в Республике Кара-калпакстан, нанося значительный социально-экономический ущерб. ■....... Кроме борьбы с резервуаром возбудителя" и его-переносчиками в ряде случаев" важное значение" приобретают меры индивидуальной профилактики-," среди" которых*, существенную-роль' играют профилактические прививки вирулентной культуры лейшманий.
Опыт массовых противолейшманиозных-прививок показал их эпидемиологическую эффективность"(Н.Ф.Родякин, 195?, 1964, 1968? В.А.Серебряков и др., 1968; П.Г.Сергиев и-др.; 1970; С. Караходжаева, 1971; В.М.Сафьянова, 1971; Э.Е.Шуйкина и др.,
1992). - ." ' -" ;............... -
------ Для" производства* прививочного" материала требуются све-
жевыделенные, высоковирулентные штаммы возбудителей". Методика отбора, контроля"вирулентности штамма в каждой серии прививочных культур- несовершенна. ■:-------- " •....... ' - ------
С другой'стороны,"остается'недостаточно исследованным их важнейшее свойство - вирулентность, являющееся"мерой пато-генности паразита (Л.Т.Зильбер, 1958т"В.Р.Петровская, 1967) и потому определяющее опасность возбудителя и качество*прививочного материала,"т.е. прогноз'и" профилактику заболевания.
Последние работы (В.М.Сафьянова, 1982 ; 0.И.Келлина,1982; В.Д.Каллиникова и др., 1987; Е.К111гск-Кепаг1с5с, 1976; у.эоиЫезл, 1993 и др.)" дают начала морфогенегическому направлению в понимании и определении вирулентности лейшманий.
Вероятно, приобретение"или утрата вирулентности лейшманиями сопряжена с изменениями в их морфологии и метаболизме.
Продолжением этого нового морфогенетического направления--является настоящее исследование.
Выявление взаимосвязи между , морфологическими, цитохимическими, физиологическими (факторами патогенности) характеристиками лейпманий и их вирулентностью, а такие закономерностей изменений этих характеристик в процессе длительного культивирования in vitro представляется теоретической основой практических работ по стандартизации прививочных штаммов лейшманий.
Исследование лейшманий в . культуре является особенно актуальным ещё и потому, что именно культуральные формы используются как для профилактических прививок, так и для современных биохимических, физиологических, иммунологических, к моле-кулярно-биологических исследовгмий.
Нель и задачи исследования. Цель, исследования - выявить взаимосвязи между морфологическими, физиологическими, цитохимическими характеристиками лейпманий и их вгрулентностыо, закономерности этих характеристик' в пропессе длительного культивирования, разработать на . их основе научно-обоснованные подхода к улучшению - стандартизации прививочных штаммов.
В процессе исследования решались следущие задачи:
- изучить изменения вирулентности штаммов Ь.каjor
в процессе длительного культивирования на искусственных питательных средах в сопоставлении с эталонными штаммами различных видов лейпманий из кризбанка НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН г.Москвы;
- адаптировать метода оценки вирулентности и определения факторов патогенности для различных видов и штаммов лейпманий;
- адаптировать цитохимические метода для исследования различных видив и штаммов лейпманий в культурах;
- изучить факторы патогенности штаммов в процессе длительного культивирования на питательной среде;
- изучить возможности повышения вирулентности лейшманий, сниженную культивированием, путем пассажей . на животных;
• -изучить морфологические, некоторые цитохимические и физиологические параметры, характеризующие понижение in vitro и повшение ' "la"vivo" 'вирулентности лейшманий.
- Научная новизна. Впервые в сравнителном аспекте изучены изменения морфологических, цитохимических и физиологических характеристик различных" видов и штаммов лейшманий в процессе их длительного культивирования in~vitro и"" in viv-o.' .
..... - Выявлена корреляция" важнейшей характеристики паразитов -
вирулентности с их морфологическими, цитохимическими свойствами, а также с факторами, формирующими механизмы их патогеннос-
ти. ■-•.-.. ...... .....
■ На этой основе впервые" предложена"система морфологических, цитохимических и физиологических маркеров вирулентности, которая может быть использована при отборе материала для профилактических прививек против ЗКЛ.
- В результате исследования предложена новая оригинальная схема жизненного цикла лейшманий в культуре. ." • ■
Практическая значимость. Исследования являются итогом 25-летней работы, имеют научно-практическую направленность. Получанные данные важны для понимания патогенеза болезни. Предложены новые морфологические, цитохимические и" физиологические критерии для отбора, пшвивочного материала в профилактике ЗКЛ. Они отличаются- от существующих методов биопроб простотой, надежностью, доступностью и позволяют быстро, на протяжении 2-3 суток (вместо 3-7 месяцев), определить, вирулентность штамма, пригодность его для: производства прививочного препарата и эффективно контролировать его качество. ■ •
Результаты' работы могут быть- использованы в практическом здравоохранении и научно-исследовательских' учреждениях для повышения качества и эффективности профилактики и иммунодиагностики." " ----------------------------- ■------
Предложения выносимые* на защиту:-- - • ■ ■
' I.' Предложена"новая' схема жизненного-цикла лейшманий, согласна которой в процессе развития в культуре на питательной среде имеет место закономерная, последовательная смена либо четырех морфологических форм (темные, просветляющиеся, светлые и метациклические), либо трех (темные, просветляющиеся и светлые) в пределах одной промастиготной стадии. -
2. Потеря вирулентности (авирулентность) в процессе кулъ-
тивирования связана с постепенной утратой способности промасти-гот дифференцироваться в финальные метациклкческие формы.
3. Вирулентность лейпманий в культуре определяется цитохимическими свойствами популяции промастигот задолго, до взаимодей- ; ствия паразитов с организмом ^хозяина и даже до возникновения ме-тациклических фор». Сохранение вирулентности коррелирует с достаточно высоким уровнем диафоразной и пероксидазной активности в , светлых формах, предшествующих метациклическим.
4. Факторы патогенности лейшманий в виде фибринолизина, плазмокоагулазы и дермонекротоксина положительно коррелируют с уровнем вирулентности промастигот в культуре. •
5. Предлагается новая экспресс-методика отбора патогенных, высоковирулентных штаммов лейшманий в качестве дополнительного контроля за степенью вирулентности производственных штаммов лейшманий. -
6. Выявленные цитологические, цитохимические и физиологические корреляты вирулентности могут быть использованы при отборе прививочного материала для профилактических прививок против ЗКЛ.
Внедрение в "практику. Изданы и внедрены в практику здравоохранения методические рекомендации: "Экспресс-мотодцка индикации патогенных, высоковирулентных тпташов лейшманий от непатогенных, авирулентных", утвержденные Министерством здравоохранения Узбекской ССР 25 июня 1985 г.
- Результаты исследований используются на ежегодных циклах повышения квалификации медицинских работников на базе НИИ медицинской паразитологии им.Л.М.Исаева, в преподавании на кафедрах микробиологии,детских инфекционных болезней и инфекционных болезней с курсом эпидемиологии Самаркандского и Бухарского медицинских институтов.
- Оказана практическая помощь - здравоохранению Кашкадарьинской, Е&тсарской и Джизакской областей Республики Узбекистан в организации мероприятий-по .профилактике и выявлению, больных ЗКЛ.
. Апробация работы: Материалы диссертации доложены и об- • суждены на:. . „
- I, П, 1У и У съездах Всесоюзного общества протозооло-гов. Баку,- 1971; Киев, 1976; Ленинград, 1987; Витебск, 1992;.
- - заседаниях научного общества эпидемиологов, микробио-.логов, гигиенистов, инфекционистов и паразитологов. Самарканд, .1972; 1974;- 1986; 1993; 1994;
; : " - - научных -ктоферевдиях НИИ медлцикской-паразитология
им.Л.М.Исаева МЗ Республики Узбекистан по проблемам медицинской паразитологииi Самарканд, 1972, 1974, 1975, 1933,. 1987, 1993;
- научной конференции, посвященной 50-летиго Армянского НИИ эпидемиологии, вирусологии и медицинской параэтгологии. Ереван, 1973;
- втором Всесоюзном симпозиуме по факторам патогенности микроорганизмов: химическая природа, биологические функции и генетический контроль. Москва, 1974;
- республиканской научно-практической конференции, посвя-цанной 100-летию со дня рождения Л.Ы.Исаева. Самарканд, 1986;
- научно-практических конференциях Самаркандского государственного медицинского института им.И.П.Павлова. Самарканд, 1988, [990.
Публикации. По материала!* диссертации опубликовано 47 работ.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, б глав, заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа изложена на 186 страницах машинописи, иллюстрирована 12 рисунками и II таблицами. Указатель литературу включает 437 наименований, в том числе 127 иностранных авторов.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материал« и матодг исследования. Исследования проводились на 82 штаммах и сублтаммах видов рода leishaania, из которых 69 принадлежали beiahmaaia major , 2 - Ь.tropica, I - Xi.aexicana amazonensia , 3 - b.brazllienaia и 7 - L. gyanodactyll.
Культуры штаммов Ь.major- были выделена из разных очагов ЗКЛ Узбекистана и Туркменистана. Из них 39, выделены от больных; 17 - из прививной лейшманиомы человека; 8 - от экспериментально зараженных белых мышей; I - от большой песчанки; 4 - от москитов разных видов и 7 - принадлежали L.gymnodaetyli.
Штаммы L.tropica, b.a.araazonensia, L.braillienaig и x.gyw.odactyii получены из криобанка НИИ микробиологии и эпидемиологии им.Н.Ф.Гамалеи РАМН.
Штаммы по вирулентности распределялись тан: высоковиргулент-ных было 56, средне вирулентных - 4, низковирулентных - II, ави-рулентных - 4 и непатогенных (для млекопитающих) - 7. Уровень вирулентности оценивался в соответствии с рекомендациями Г.В.Ни (1969).
Для сохранения вирулентности штаммы KjgA^, ^5А33
L.tropica поддерживались на хомяках в течение 32-33 пассажей; штаммуЬ Ej4, ¿Bjg L.brariliensis соответственно 14 и 16• пассажей не хомяках; штамм LBj^M L.braziliensie еще один пассаж на милах, а штамм H-I42g X.HieEczonensis только на ммг.ах в течение 8 пассажей.
Четыре штамма 5АШ, 9, 52Б l.raajor . и Д>Ву4 L.brazi-liensißgbiTTH пассированы на мышах и хомяках. После они. возвращались в культуру и, начиная со 2 пассажа, опять подвергались исследованию. Штамм 5АШ исследовался только после пассажа на животных, а три остальные до и после пассирования на животных.
Все штаммы лейшманий выделялись и поддерживались на среде мня с обогащающей жидкостью (0,2^ раствор пептона по Ф.И.Шевченко, 1927).
Испытывались яулгтуры в возрасте от б до 25 дней,"инкубированные при 22-23°С, во взвесях густотой от 5 тыс. до 250 млн клеток в I мл при pH суспендировали* среды от 5,0 до 10,0.
Каждую серию взвеси промастигот проверяли на наличие посторонних микроорганизмов. Наиболее четкие результаты при выявлении факторов патогенности были поручены с культурами в возрасте 6-8 суток, с густотой от I до 200 млн в I мл, при pH суспендирования 7,2-7,4.
Для получения достаточного количества биомассы промастигот использовали матрасные колбы емкостью 1,5 л с модифицированной средой ГОН (по прописи З.Е.Шуйкиной, I969j.
Культуры контролировали микроскопией нативных, а также фиксированных и окрашенных препаратов в световом микроскопе МЕИ-3 с фазовокнтрастным устройством КФ-4.
В основу определения факторов патогенности у лейшманий были положены методики, успешно.применяемые в микробиологии, модифицированные нами применительно к яейшманияу. Гиалуронидазная активность определялась по методу Мак-Клина в.модификации Л.Г. Смирновой (1951); фибринолизин - по методике Бауэр-Смородинпева, описанной А.С.Квашниной (I960); плазмокоагулаза - по методике,, описанной Г.В.Выгодчиковым (1950); фактор распространения Дюрен-Рейнальса (ФД-Р) изучался по методике автора (I9234; дермойек-ротоксин внутрикожным методом на кроликах-альбиносах (по W.O. Биргеру, Т957), а токсичность На■белых мъгвах - внутрибрюшинным методом., 'г •'.'.
Из питохимических характеристик лейпманий изучались: ГНК (метод Врале), ДНК-(реакция Фельгена^, общий белок (по Мэзия), ок-рааиваемость Янусов зеленым Б на митохондрии, питохромсксидаза (по Муг), НАД-Н-диафораза (с нёотетразолием по ЕеккеруЧ НДДЗ-Н-диафораза (методом Скарпели), пероксидаза (бензидиновый метод по Леле).
Все цифровве данные подвергали математической обработке на вычислительной мккротехнике. Вычисляли средние величины, их достоверность, взаимные корреляции и достоверность различий показателей оценивали с помощью критериев "ъ "(51.0. Бэхзтц-^Л, 1973).
Считаю приятным долгом выразить свою благодарность доктору биологических наук Каллиниковой В.Д.- и доктору медицинских наук, профессору Вафакулову С.'*., за постоянное внимание и помощь з выполнении данной работы.
Глубокую признательность сохраню в памяти своему первом-/ учителю, профессору Серебрякову В.А., высказавшего многие из тех идей, которые, нашли отражение з нашей работе.
ВИРУЛЕНТНОСТЬ ЛЕЙШАНДО И ЕЕ ИЗШ5КШ
Общая характеристика исследованных штаммов лейзманий по происхождении и уровню вирулентности для белых мышей дана з таблице I.
Все исс^едованьив штаммы, независимо от вида лэйз^ани? и источника выделения, по мере культивирования от пассата к пассажу (на протяжении 20 исследозанннх пассажей) постепенно снижали свою вирулентность для белых мышей, Еызывая все более легкое заболевание с более длительным ткубап-лонным периодом и меньшей долей заразинпизся животных.
Этот путь разные штаммы проходили неодинаково, Ллпь небольшая часть штатов довольно долго сохраняла своо вирулентность на одном, хотя и разном уровне. На б пассаже внсоковкрулент-ные штаммы составляли уже 50%; на 10 пассаже - 155?, причем почти все штаммы проявляли среднюю и низкую вирулентности.% зт 29 пасея*у большинство из них утрачивали вирулентность полностью.
Три старуз аттекуированнные . штаммы Кт, 19АШ, и 55 ¿.иа^ог исследованные на 32-50,122-140, 501-504 пассажах, во всех случаях не проявляли вирулентности в отношении белых мышей.
'•••.,-•.',. ..........' ' .........' ' Таблица I
Обща* характеристика исследованных штаммов лейшманий по происхождению ; - . и уровню вирулентности Для белых мышей
. Еид .- . ! . . . ' !Количество! 1ÜT3MMU . лейшманий 1
лейшманий ;!Источник выделения! штаммов •высокови-!средневи-!ниэкови- !аэирулент-!непатоген-¿Р^лентныеГрулентныеХр^лентные'.ные !ные
■Ii.major ' Больной человек . 39 • 29 I 5 4
- « - . Привитой человек .- Г? I? • - -
и ; Миль... -г. 8 • 8 - : -
.'а Большая песчанка 1 ■ - I - ■ -
. ph.papataei ■ i ' г • I
« _ Ph.andrejevi 2 .' ' - •: 2 ■ -
' — ' " <ш ' . Ph. cauoaaicus. I . - . - I - . -
Ь.т.ашагопеп-Ммиь . ■ ь.tropica Хомяк 1 ' 2 .1 I I . - . -"• ;
X/, braziliensaXoMHK 3 I • 2 . . т ' -
, l.eymnodactyii, ^arpaklensio 4 - . . - - 4 •
' С. Ii ' _." gymnodacfcylus..... caspius 3 - ' • _ ' ■ 3
. Всего 82 66 4 II 4 7 .
Таким образом было показано, что лейшмании" разных видов в -процессе длительного культивирования на питательной' среде ' снижают свою вирулентность. В дальнейшем" проводилось изучение обратного"процесса -'восстановления вирулентности штаммов разного лабораторного хранения в результате пассажей на белых мышах и хомяках. ' ........
В этом плане исследованы четыре штамма лейшаний: Ь.таЗог
и Х,.Ьга2±Иенз1а. .............."......'
Независимо от различий в истории штаммов все они, выделенные из животных в культуру на среду НИН' с обогащающей жидкостью, повысили свою'вирулентность по сравнению с ее уровнем до введения животным. По одному штамму Ь.тааЗог и Ь.Ъгаа!-Иепз1з в результате одного пассажа на мышах из средневи-рулентных, а другой штамм ь.шазог' из низковирулентного стали высоковирулентными, а третий штамм Е.таЗог восстановил утраченную вирулентность, хотя лишь до низкого уровня после 25 пассажей на хомяках. ' . "
■ •' Однако, повысив вирулентность в результате пассирования на'животных, все четыре'штамма в процессе дальнейшего культивирования постепенно утрачивали вирулентность, повторяя свою прежнюю историю пребывания в культуре рг общую закономерность снижения вирулентности в процессе длительного культивирования. При этом высоковирулентные субштаммы•утратили свою вирулентность позже, а низковирулентннй субштамм утратил раньше - уже на б • пассаже. ■•••■•■Необходимо отметить, что штаммы Е.палог - , выделенные от человека, были в большинстве высоковирулентндаи, меньшую вирулентность проявили штаммы ь.тазог , выделенные от песчанки, и москитов, а также штаммы ъ.ъгагихепзхз , выделенные от-хомяков.. —
Исследованные нами штаммы лейшманий в процессе длитель-4 нога культивирования"снижали, а к~20-му пассажу в большинстве случаев утрачивали свою вирулентность. Она повышалась или восстанавливалась пассажами на животных и опять снижалась при воз—.
вращении на искусственную питательную среду.........
Следовательно, мы имели в своем распоряжении модели, позволяющие наблюдать изменения вирулентности в- обоих направлениях. Дальнейшие наши исследования посвящены коррелятам этих изменений.
-г 10 -
.. ВИРУЛЕНШОСТЬ И. МОРФОГЕНЕЗ ЛЕШШАНИй
В культурах исследована морфология 31 штамма пяти видов лейшманий: Ь.паЗог, Ь^гор1са, Х.ш.ата2оаепв1в, Ь.ЬгааШ еае1в, Ь.£укпойас-Ьу11 Мы наблюдали морфогенез пара-
зитов, который проходил последовательную смену четырех морфо-типов промастигот.
Первый тип составляли темные- клетки, базофилия" которых была настолько велика, что их структура просматривалась с трудом. Ломимо интенсивной окраски, они-характеризовались активным делением и составляли подавляющее большинство (до 90 и более процентов). - - - :...... . _ .
Второй тип представляли просветляющиеся промастиготы, отличающиеся сниженной-базофилией в заднем конце к'удлиненной заостренной формой клетки, ядро и кинетопласт уже просматривались достаточно четко. Просветление начиналось в первые дни "культивирования (иногда 5-10$),-а позже число просветляющихся форт доходило до "20%.'"Особенностью этих форм является их "более -или-менее-постоянная доля*в -популяции- на протяжении" большей части пассажа*в- культуре, что свидетельствует о промежуточном-характере этих форм. - -" - Третий тип "представляли равномерно св е т л ы е, почти лишенные базофилии, крупные клетки -сигарообразной формы с закругленным задним-концом и ядром в центральной или в'задней позиции. В большинстве тсультур" они имели четкую динамику в пассаже: будучи единичными "в первые *дни, они постепенно нарастали в -числе, достигая максимума к 20-му даю. Они особенно многочисленны у Ь.таЗсг. .....•■'; \ " '
" "Наконец, к четвертому типу относились," так -называемые, м е т а ц и'к "л и -ч е с к*и е промастиготы - мелкие бледные клетки заостренной формы■с длинным жгутом, активным движением, крупным" рыхлым кинетопластом и ядром, сдвинутым в заднюю пози- -цию. Ядро метациклических промастигот либо гомогенно окрашено и имеет колбасовидную форму, либо не имеет четких очертаний и состоит из отдельных, плотно расположенных'зерен. Ыетацикли-ческие промастиготы- составляли неодинаковую "долю в популяции разных штаммов ."Но в целом они либо появлялись-тс концу стационарной фазы роста (13-20 дни),"либо достигали к этому моменту своего максимума, который был особенно высок у некоторых штам-
. -.п -
mob L.major и у всех штаммов Ь.tropica, b.brazilieneia, u L.gyKiodaciyli«,
Описанный четнрехэтапный морфогенез" лейшмангй повторяется заново в каждом из последующих 20 пассажей.
Изучение лейшманий на 6, 10, 20 пассажах показало, что господство темных промастигот характерно для* b.brazilisnsiay b.nuamazonensis, u I.gymnodactyli......., а также для некоторых штаммов L.iaajor , главным образом, аттенуированных, авирулентных. • ' '
Наоборот, преобладанием светлых форм отличаются штаммы L.maior вплоть до 20-го пассажа.
Установлено, что принципиальные различия в морфогенезе лейшманий в культуре касались его последнего этапа - трансформации в финальные метациклические формы. Зта способность завершить полный морфогенез снижалась от пассажа к пассажу достаточно четко' и почти утрачивалась к 20-му пассажу. Дифферен-цировка популяции останавливалась на предшествующих метацикли-ческим светлых промастиготах. '■
Штаммы Ь.иаЛог резко различались по активности мета-циклогенеэа уже на первых этапах' культивирования (2 пассаж); некоторые из них трансформировались в метациклические формы активно (до- 30%) даже н?\ 9 пассаже, а-большинства штаммов уже на 2 пассате содержало-всего 5—10% метациклических форм. Независимо от различий я старте,' все штаммы Ь.major постепенно снижали свой метациклогенез и большинство утрачивало его к 20
пассажу. • .........................
' Та же динамика метациклогенеза- в процессе длительного культивирования наблюдалась и у других изученных видов лейшманий и только у L.gysnodactyli - она была менее выраженной.
■Таким образом, снижение и- утрата метациклогенеза в процессе длительного культивирования" оказались свойственными всем исследованным штаммам и видам-лейшманий." Характерно, что незавершенность морфогенеза в пассаже "идет параллельно снижению вирулентности культур лейшманий. В конце наблюдений, т.е.на 20 пассаже, почти полная утрата метациклогенеза совпадала с потерей вирулентности большинством штаммов-........ - - -
Выделенные от жнеотннх в культуру штаммы'лейшманий в последующих пассажах, наряду со снижением-вирулентности, постепенно ослабляли и утрачивали способность трансформироваться в
метациклические формы. ■ ■ •
Высокая продукция метациклических форм штаммами ¿.шадог, - с одной стороны, положительно коррелировала с юс высокой вирулентностью'и длительностью сохранения, а с другой стороны, низкая продукция метациклических форм совпадала с быстрой утра- . той вирулентности по мере культивирования.' ' '
Было отмечено, что разные штаммы снижали как вирулентность, так и метациклогенез с неодинаковой скоростью. Наблюдалась корреляция и в скорости снижения в процессе культивирования обоих показателей. '
Сравнение четырех культур лейшманий до и после пассажа ка животных показало, что при повышении вирулентности наблюдается положительная корреляция с метаниклогенезом промастигот.
Полученные' нами результаты подтверждают уже описанный ранее морфогенез в пределах пассажа у, L.najor , а также добавляют к изученным в этом отношении (l.aajor, L.donovaiii, L.gyano-'dactyli ) ещё несколько видов: L.tropica, L.n.aaazonensis,
и b.braziliensis . В сумме накопленные наблюдения показывают, что последовательная смена четырех морфотипов промастигот в культуре - общее сеойство жизненного цикла всех лейшманий, в
том числе и непатогенных для человека......
Финалом развития лейшманий в культуре являются метациклические формы, которые, видимо, и являются инфективннми". Однако именно они утрачиваются б процессе аттекуирования к условиям жизни ка искусственной питательной"среде•>Поэтому могло сказать, что жизненный 'цикл лейшманий в культуре может быть как четырех, так и трех этапным - последнее связано с утратой популяцией промастигот вирулентности для позвоночного хозяина. Изменения вирулентности лейшманий в обота направлениях: снижение в процессе культивирования "и повышение после пребывания в позвоночном хозяине положительно коррелирует со степенью кетацкклогенеза промастигот "в культуре; Эта корреляция наблюдается*и в мемитам-ыовых различиях культур лейшманий. Коэффициент корреляции мезду вирулентностью'и процентом метациклических форм.б культурах лейшманий составил':+"0,5+0,09 и является'статистически'значили. Скорее всего эта' связь не"только коррелятивная,"но и причинная, обусловленная инйектишостью метациклических форм лейиыанай;. ' Полученные нами данные позволяют'дополнить-представление
о жизненном цикле лейпманий..: Можно-утверждать', чтов культуре развития лейшманий может происходите либо через четыре морфологических стадии (этапа), либо через-три. Последнее имеет место у старых аттенуированннх, авирулентных штаммов (рис.1.). •
Поскольку жизненный цикл лейшманий рассматривается как их онтогенез (В.Д.Наллиникова,- А.С.Северцо», .1983), сокращение этапов развития в культуре*'выпадение последней стадии диффе-ренцировки у аттенуированных, авирулентных штаммов следует рас-сматриватькак своего рода неотению. -
Таким образом, вирулентность лейтманийимеет под собой морфологическую основу- - полную реализацию их жизненного цикла в культуре с образованием вполне определенного морфотипа' про-мастигот - и е т а ци к г и ч е с к и.х-" форм. Они важнейший коррелят вирулентности всех~ясследованных"видов и являются общим фундаментальным свойством данных- паразитов. ■
.Этот коррелят имеет особое значение потому, что легко обнаруживается и поддается учету, потому может использоваться для прогноза вирулентности лейшманий.
ВИРУЛЕНТНОСТЬ И-ЦШШШШ. 1ЕЙПЗМАЫИЙ--.. -' ...
В 1972 году нами впервые было начатсгцитохимическое исследование ь.ша^ог ' в культуре", Использовались 16 штаммов со сроком культивирования 1-6 лет разной, вирулентности на 7-25 дни
рОСТа. ' - ........ . .
В то время промастиготн лейшманий вг культуре Досматривались как единый морфотип*'Поэтому и полученные цитохимические характеристики относятся к'промастиготам й;иаоог в" целом, без разделения их на темные, просветляющиеся", светлые и метацикли-ческие, а также без строгого учета сроков культивирования.
Отмеченная нами, лишь как попутное наблюдение-, цитохимическая неоднородность промастигот Ь'.шадог . в культуре оказалась неслучайной, а отражающей"происходящий"морфогенез паразита в пассаже на'искусственной'питательной среде.------4 -•-■. ■ .-"Цитохимическая характеристика различных типов лейшманий. В темных*. промастиготах ' РНК выявляется в высокой концентрации, в грануло-глыбчатой, форме. Много ее в кариосоме ядра. НДЦ-Н- и НАДФ-Н-диафоразы выявляются в виде "зерен формазана в среднем 10-15 на клетку, при небольшом их числе четко локализованных вокруг кинетопласта, ядра и между, ними.'
г
б "В
п »
москит культура) /
человек А
/
Рис.1. НОВАЯ СХЕМА ЖИЗНЕННОГО ЦИКЛА ЛЕЖАНИЙ ;
т - старая, классическая схема,
2 - жизненный цтп вирулентного штамма,
3 - жизненный. эдитл ©вирулентного штамма.
, А - ачпстиготняя стадия, Л - промчстиготчая стадия: а- темнне. б-просветгяющиеся. в- светлые, г- метзциклические проматиготы-
Клеточные структ.'р-т: я- ядро, хгут, бз- Назальное -- зер«о жгута, к- кинетопласт.
- Т5-
Пероксздазная активность темных промастигот была невысокой и обнаруживалась не во всех клетках. Способность окислять янус зеленый Б проявлялась в образовании темно-зеленых гранул менее строгой локализации, но чаще расположенных вокруг кинето-
пласта и-ядра. ......
Просветляющиеся формы промастигот характеризуются снижением содержания FHK в клетке, а также с изменением формы ее выявления - в виде зернистости. Как и в темных формах FHK выявляется и в кариосоме ядра.: . .Процесс просветления промастигот' начинается с заднего конца клетки,, постепенно охватывая всю-цитоплазму, наиболее долго. FHK в.высокой концентрации сохраняется между ядром и кинето-пластом. Отмечается заметное снижение, активности НАДФ-Н-диафо-разы при сохранении того же уровня пероксида.зы и окисления януса зеленого Б.
Светлые формы содержат мало fflK, она дисперсна, равномерно распределена по клетке и не'обнаруживается в кариосоме. Активность диафоразы в них повышается и все три фермента проявляют себя так же, как и в темных промастиготах.
Еце беднее FHK метацйклические - формы. Она, как и в светлых промастиготах,. дисперсна, равномерно распределена в клетке и не обнаруживается в кариосоме. Активность всех ферментов значительно снижена, а пероксидаза совсем" не обнаруживается".
Таким образом, основное направление" цитохимических изменений в процессе дифференцировки- культуралвных. промастигот -обеднение клетки ГНК,"нарастание;ее дисперсности от'грануло-глы-бчатой" у темных, к зернистой у просветляющихся и дисперсной у светлых и метациклических'промастигот (таблица 2.). Этот процесс повторяется заново в каждом ■ пассаже■ - ■'■-/• ■
Прежнее мнение' о бедности лейшманий""в культуре ГНК (Д.Х. Хлгатян, 1965; В.Д.Каллиникова, Ф.Ш.Насыров, 1972; sen Gupta " et al.,1953) оказалась верным лишь в отношении "отдельных типов промастигот (светлых и.метациклических)', появляющихся с возрастом культуры, а в начале пассажа лейшмании весьма' богаты fflK.
Темные формы преобладающие в'" начале--пассажа," наряду с богатым содержанием FHK, обладают высокой янус-окисляющей, диа-форазной" и относительно высокой пероксидазной активностью, У просветляющихся промастигот снижается не только содержание FHK, но и активность.диафоразы. Однако у светлых форм она опять повк-
шается на фоне продолжающегося обеднения ТНК. Наконец, особенностью метациклических форм является как крайняя бедность РНК, так и резкое ослабление активности диафоразы, янус-окислягацих ферментов и утраты перокеидазы.
..........■ Таблица 2.
Некоторые тдетохимические характеристики лромастигот лейшмаиий в культуре
. - . ' Морфологические типы промастигот
Цитохимические реакции ! Темные-' J 1Просвет-!Светлые -!Метацик-'ляющиеся!. !лические
! Уровень содержания Бсаше ? в клетке i много ! средне t I мало т i мало
(ШК) .! - Форма. выявления 1 ШК . т J гранул о-. 'глыбча-•тая 'зернис^ 'тая ! 1дисперс- 'ная i ■1 дисперсная 1
Активность НАДФ-Н-диафоразы .10-15 -3 . Ю-15 . 3
Активность перокеидазы 0- 7 .0-7 0-7 0
Способность ОКИСЛЯТЬ' ~ " янус зеленый Б 15 15 ' 15 2-3
'В результате установленочто ыетапиклические формы лейш-маний в культуре не только "физиологический вариант промастигот, но определенный морфотип, имеющий свою цитохимическую характеристику. "ЕЕ особенности - крайняя бедность ТНК, дисперсная форма ее выявления, низкая активность НАДФ-Н-диафоразы, янус-окисляющих ферментов и-отсутствие перокеидазы. И если обеднение промастигот ШК в пассаже приходит постепенно, то окислительные способности резко меняются именно при переходе к метациклическим формам. Так у т.сгиг! ' - (В.Д.Каллиникова и др., 1937) эти особенности могут быть ~ пре-адаптацией .к последующей внутриклеточной амастиготной стадии, которая;отличается слабой диффузной реакцией на НЖ (<5вгае11 - , 1955) и снижением ее синтеза ( 21ар-
воа , 1965). • ; - ....... -
. Наши "исследования; показали, ~что процесс морфогенеза в культуре есть" и''процесс цитохимических преобразований промасти-гот. Семена морфотипов имеет под собой .цитохимическую основу и главным моментом преобразования' является постепенное обеднение ; клеток ШК и нарастание ее дисперсности. Изменения дыхательных
- rv-
ферментов менее существенны при переходе яинвазивные метаиик-лические формы. Качцый из четырех сменяющих-друг, друга морфо-типоз облапает определенной цитохимической характеристикой.
В процессе длительного культивирования, наряду со снижением метациклогенеза, наблюдались и изменения цитохимических параметров этих клеток. Они, в основном,; касались окислительных свойств промастигот. .
От пассажа к пассажу значительно снижалась активность НДДФ-Н-диафоразы (в целом без различия морфотипой) в среднем от 5-15 гранул формазана в клетке на 2 пассаже до 1-5 гранул на" 20 пассаже (рис.2.) разница.статистически достоверна (t = 3,0; Р<0,01).
'Ятаммн b.major ■ , долго остававшиеся высоковирулентнчки, начинали свое пребывание в культуре с более .высокой диафоразной активности, чем штаммы,- быстро утратившие вирулентность.;
Аналогично диафоразной- постепенно снижалась, а к 20 пассажу практически.утрачивалась пероксидазная активность (рис.2.), разнила достоверна ( t= 4,72;, Р<0,001). В целом невысокая, она в начале культивирования была все же выше у штаммов, дольше сохранивших вирулентность.;Крайне низкой она была у старых аттенуи-рованных, авирулентных штаммов I.najor.
Слабая и постепенно совсем утрачиваемая пероксидазная активность объясняет-некоторые прежние'неудачи выявления этого - фермента у лейшманий в культуре,:но.делает ошибочным заключение . о его абсолютном отсутствии (В.Д.Каллйникова, Ф.Ш.Насыров,1972).
В противоположность диафоразе и пероксидазе,'способность проМастигот окислять янус-зеленый Б в процёссе длительного культивирования нарастает (рис.2.), разница статистически достоверна ( t = 7,88;. Р <0,001). Наивысшая степень окисления совпадала с крайне слабой вирулентностью или" ее- утратой. ,
В целом по .активности ферментов, окисляющих" янус зеленый ■Б штаммы и виды лейшманий различались не"очень существенно.
Четыре штамма, изученные в культуре.до и после пассажей на животных, проявили одну и, ту .же закономерность;, наряду с ■ повышением вирулентности и*активизацией метациклогенеза,- они дали также повышение-диа^разной активности.
Пероксидазная активность невысокая У" всех исследованных штаммов до пассажа-на животных, мало изменилась и с повышением вирулентности после пребывания в позвоночном хозяине. 'Лтаммы
Штампы
. 8 5
15 Мб-8 ' 9 N6:
з ме 28 Т !3 10 5г б Эрк
54 Т А К5 3
^25^33
кг
Г9 АШ
Б5
■ - 18 -Вирулентн ость
. 9 \г
Янус
за Лероксидаяа зеленая Е 9 12 9
12
еО
1
Пассажи ^б«*0- - г'в^о" чб «026 .2. 6 10 20
Рис-2. Вирулентность и цитохимические «вменения ■ леЯвманий при длительном культивировании.
практически не различались между собой в этом отношении^
Янус-окисляющая способность после выделения лейшманий от животного в культуру заметно повысилась у' субштаммов Ь.major и L.braziliensia , повысивших свою* вирулентность со средней до высокой; она практически не изменилась у третьего субштамма, повысившего вирулентность гораздо существеннее.
Лейшмании всех четырех .субштаммов, выделенные в культуру из животных, з начале культивирования повышали свою.вирулентность, по мере дальнейшего. культивирования,- -наряду со снижением вирулентности и метапиклогенеза, снижали своп диаЗоразную активность, как и при культивировании до-пассажа на животных.
Цитохимические исследования.показали; что в процессе длительного культивирования метаболические возможности промастигот не остаются постоянными. От пассажа к пассажу происходит количественное изменение их дыхательной активности: снижение НДЦФ-Н-диафоразной, пероксидазной и повышение янус-окисляющей активности. Видимо, в процессе культивирования происходит не только снижение окислительной активности, лейшманий, сколько перестройка их'энергетического обмена. Нарастание,-янус-окисляющей активности промастигот может быть компенсацией падения диафоразной и пероксидазной активности. 1
Вирулентность лейшманий в культуре оказывается тесно связанной с энергетическими характеристиками промастигот. Е& падение в процессе культивирования и повышение после пассажа на.животных связаны не только с метациклогенезом, но и с уровнем активности этих 4ерментов во всей популяции, промастигот. -, - - ■
И если активность диафоразы'и пероксидазы важна для морфогенеза. лейшманий и сохранения'вирулентности; то ян.ус-окисляю-щая способность- скорее связана с адаптацией паразитов я условиям культивирования. ••
Корреляция вирулентности с активностью диафоразы и пероксидазы, обнаруженная-у L.major, Ь.tropica, Ь.т.ащагоаепзХз, L.braailiensis , видимо, является общим свойством лейшманий.
Наконеп, цитохимические исследования показывают, что длительно культивированные авиру.тентные-штаммы, по крайней мере, L.major , неоднородны и, видимо, неодинаковы по своим вирулентным потенциям.
ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ ЛЕЙЗМАНИЯ
Нами были исследованы, ранее почти не изученные факторы патсгенности лейтманий разных штаммов и видов: штаммы I.major разной вирулентности и происхождения (59), а также х.tropica
(2), l.m.amazonensis (D, L.braziliensie (I)
и непатогенные лейшмании для млекопитающих L.gyjmodactyli (7).
У лейтманий разных видов, происхожжения, возраста м вирулентности, во взвесях разной густоты не удалось обнаружить гиалуронида'зу. Неоднократные попытки ее обнаружения путем длительного культивирования с добавлением разных конпент-рапий (от 0,1% до ЗЗЙ) гиалуроновой кислоты также окончились неудачей. Дву- и пятикратное пассирование на белых мышах шести татаму.ов с разным уровнем вирулентности и происхождения не обеспечили формирование у испытанных штаммов способности вырабатывать гиалуронидазу.
Проведенные исследования дают основание считать, что либо лейшмании, в том числе и вирулентные, вообь.э не имеют гиалу-ронидазы,' либо она свойственна амастиготной стадии, но очень быстро утрачивается в культуре при переходе в промастигЗную стадию, либо у промастигот активность этого фермента так низка, что использованиве нами методики не позволяют ее выявить.
Фибр и н оли з и н обнаружен у всех изученных видов лейшманий, кроме непатогенных для человека. Он тесно связан с вирулентностью и особенно характерен для высоковирулентных штаммов, x.major • Фибринолизйн-позитивные штаммы особенно часты среди выделенных от больного (81%) и гораздо реже у выделенных от привитых людей .(18$)-'и экспериментально зараженных белых мкпей (43%). '
У штаммов средней вирулентности фибринолитическая активность "не выявляется или "обнаруживается лишь, в единичных случаях, '". а у низковирулентных й авирулентных штаммов она отсутствует. • Степень фибринодитической активности была различной и
опенивалась но интенсивности реакции фибринолизиса от •"+" до "■! i n-" и. времени ее наступления. -Среди штаммов, выделенных от . . больтк.фибринсти^ чащевстречалась,
и0: и более чем в половине случаев (9' из 16), была резко выражена; - ; (++++) й выявлялась уже через 2-Л2 часов. Оба фибрино^изин-по- •
зитивннх -штамма, выделенные от привитых людей и три штамма, выделенные от мышей, обладали активностью на (+, -м- и +++), проявившуюся чирез 24, 48 и 72 часов. У высоковирулентного штамма L.m.amazonensis фибринолитическая активность огенивалась на (++) и проявилась через 72 часа. У средневирулентних штаммов L.tropica, L.brazilieneie активность была умеренной (++) и проявилась через 48 часов.
В процессе культивирования на 2 пассаже 83Й высоковирулентных штаммов обладало фибринолитической активностью (рис.З, I). Но уже начиная с 3 пассажа, доля фибринолизин-позитивных штаммов снижалась до 67$ и далее к.8 пассажу до 20%. Вце более резко падает интенсивность фибринэлитичёсной активности, на втором пассаже она составляет в среднем 3 креста, на пятом - 1,8; . на восьмом - 0,2 (рис. 3,2).
Из полученных данных можно сделать следущие выводы:
- на первых 5-6 пассажах максимальную фибринолитическую • активность (++++) проявляют только штаммы, выделенные от боль--ных людей; - -- ■ ■ ...... .......
- все штаммы лейпшакий в'культуре постепенно снижают ее; ■ - - -'фибринолитическая активность утрачивается зсеми штаммами, начиная сII "пассажа; ...... •--..-.---
- среди штаммов i.major фибринолизин продуцируют только высоковирулентные гатамш. ......-.-...-...-.
Изшегти фибрянслизин-отрицательных штаммов x.najor, пассированных на белых мышах четыре -высоковирулентных уже после двукратного пассирования приобрели фибринолитические свойства. ■ Из двух низковирулентннх,'один приобрел: фибринолитическую активность после пяти пассажей, которые однако во всех случаях были слабо выраженными....................... ~ "
Плазмоко а т у л е з а ' обнаружена только у штаммов .i.major • и у непатогенных для человека лейпшаний. Она не Еыявлена у L.tropica, L.braziliensia, I.ln.amazonensis. ' "
У b.major этот фермент чаще выявлялся Т-высоковирулентных штаммов■(55%); Среди них особо активны штаммы, выделенные от больных (71%), принтом интенсивность"реакции и-быстрота ее проявления были различны. Однако эти количественные "показатели активности не были связаны со степенью--вирулентности штаммов.
- Изменения плазмокоагулазной активности штаммов . b.najor в процессе длительного культивирования представлена на рисунки 4.
I I ' ' ' .........'"........Г"
г ю го зо
П а с с а ж и
Рис-3, Изменения фибринолитической активности лейшманий. в процессе длительного культивирования.
Степень активности ■t. ю w
% штаммов
CE -
У плазмокоагулазнс-негативных штаммов1лейшманий ее активность была воспроизведена путём культивирования на питательной среде с добавлением разных концентраций (10-20%) человеческой и кроличьей плазмы. Приобретенные таким путем плазмокоагулирую-щяе свойства, будучи резковыраженными (++++), оказались нестойкими и были утреченн после нескольких.пассажей на обычную питательную" среду ТОГ." • ........
Шесть олазыокоагулазо-отрицательных штаммов L.major были-пассированы на белых ышах; у трех плазмокоагулирувщие свойства появились после двух; у остальных - после пяти пассажей . Однако приобретенная активность у всех штаммов была слабо выраженной.
5 актор распространения Дюран-Рей-нальса (ЗД-Р) обнаружен у всех исследованных штаммов, в том числе и непатогенных, но степень его выраженности, оцениваемая по величине коэффициента.диффузии, у разных штаммов была различна".
Установить'какие-либо закономерности по степени ьыражен-ности ВД-Р у разных видов й штаммов не удалось. Также не-обнаружено его связи с вирулентностью лейшманий в процессе длительного культивирования. -
Пассирование штаммов лейшманий на белых мышах также не привело к закономерным изменениям выраженности этого фактора.
Т о к с и г е н н о с т ь взвесей промастигот .лейшманий для белых мыаей методом внутркбршинного введения обнаружить не удалось ни у одного из 13.штаммов ь.ваЗог и I.tropica даже в тех случаях, когда мышам вводили по 100 млн особей промастигот. •
/ При внутрикожной пробе она проявилась у всех изученных „• видов лейшманий. Большинство штаммов'содержит д~е р м о н е к-р о т т к с и н, который особенно характерен для высоковирулентных штаммов b»eajor ' ;'чаще *он_ наблюдался у штаммов, выделенных от-больных (85Й), реже у привитых людей (47Я) и еще реже - от мывейЧРШ. У авирулентных и непатогенннх штаммов дермонекро-токсин не-был выявлен ни разу. Характер и выраженность кожных проявлений усиливается с увеличением испытуемой дозы промастигот.
- Дермонекротические свойства лейшманий постепенно ослабев вали с увеличением длительности-культивирования (рис.5.). В целом это подтвердилось и при подробном специальном изучении ;:нли-
Л 1
' X й) с <и
о
—I—
ш
Но"
—Г"
30
40
50
Примечание:
1 - (+) гиперемия;
2 - (++1 гиперемия и инфильтрат;
3 - (-н-И гиперемия, инфильтрат и некроз.
"во"
7 О
"во"
шг
—(— (00
"но"
го ш
«20
Рис. Изменения дбрмоквкротоксическкх^свойств Лейшманий в провдссе длительного йультивирования.
видуальной динамики культивирования 14 штаммов четырех видов лейшманий (1.иа^ог, Ь.п1.атагопвпл1в, Ь.ЪгааШепзХа, Ь.куипо-
аао*у11)« " . ..........
• ■ Не было отмечено воостановления некротических'свойств ни у одного из утративших их штаммов лейшманий. Пятикратное пассирование на белых мцшах шести , штаммов с разной" выраженностью дермонекротических свойств не вызывало их сколько-нибудь заметного усиления. ...... '
В результате проведенных исследований мы пришли к заключению, что многие известные для болезнетворных бактерий фактора патогенности свойственны и паразитическим жгутиковым простейшим - лейоманида. Это фибринолитическая, плазмокоагулазная активность, дермонекроюксин.; и ЗД-Р. Однако в отличие от бактерий обнаружить у лейшманий в культуре гиалуронидазную активность не удалось. Даже двух-,и пятикратное пассирование штаммов на белых мылах, добавление к питательной среде разной концентрации (0,1-33/5) гиалуроновой кислоты кончились неудачей. Это свидетельствует о том, что ВД-Р и фермент гиалуронидаза не идентичны. В то же время попытка воспроизвести у лейшманий плазмокбагулазу путем добавления в среду 10-20% человеческой или кроличьей плазмы, дали положительный результат.
Набор факторов патогенности у разных видов лейшманий неодинаков. Непатогенные для человека лейшмании отличаются от патогенных'отсутствием фибринолитической активности.
• Обнаружена положительная корреляция 'вирулентности лейшманий в'культуре с некоторыми из изученных факторов патогенности. По мере культивирования* наряду" со снижением и утратой вирулентности, происходит ослабление трех факторов патогенности: фибринолитичеекой,-:плазмокоагулазной активности и дермонекроток-сина; Раньше других ослабляется фибринолитическая активность, более постепенно и менее характерно снижается плазмокоагулазная активность. Дернонекротоксин снижается неравномерно на разных
этапах культивирования; -•'""•" — ............ -
Онижение"активности этих факторов выражается как в снижении доли штаммов,"-обладающих ими; так и в ослаблении степени
активности на разных этапах культивирования......
В отличие ст них ФД-Р нарастает по мере культивирования, свойственен всем штаммам и обнаруживается постоянно, изменяя лишь свою степень. Изложенное в равной степени относится ко всем
видам исследованных лейшманий. -
Таким образом,.три фактора патогенности фибринолитическая плазмокоагулазная активность и дермонекротоксин находятся в положительной коррелятивной связи как друг с другом,- так и с вирулентностью, параллельно с которой они изменяются в процессе культивирования.
И наконец, необходимо отметить тот факт, что у вида Х.таЗог фибринолизин продуцируют только высоковирулентные штаммы, а дермонекротоксин обнаруживается у всех вирулентных штаммов, что важно для использования »тих коррелятов при отборе прививочного материала в профилактических прививках против ЗКЛ.
Проверка на ймбринолитичес^ую активность и дермонекротоксин должна подвергаться каждая генерация прививочного штамма,' иными словами, каждая серия выпускаемого прививочного материала. Даже слабо выраженная фибр*1нолитическая активность, оцениваемая на (+) и наличие*дермонекротоксина давт гарантию высокой виру-, лентности культуры, а отсутствие является' основанием для браковки данной серга прививочного тотериала.- ..........
Следовательно,: к цитологическим и -цитохимичееким корре- ' лятам вирулентности лейшманий добавляются "физиологические свойства промастигот в культуре,' связаннее с характером й степенью вызываемого ими-патологического процесса. " • ■ — В итоге проведенных исследований установлена, что щтанш лейшманий в процессе культивирования -понижали свою вирулентность и повышали- ее з результате пребывания-в позвоночномхозяине. На основе этих моделей удалось выявить определенные коррелята вирулентности лейшманий. ----Г
- Важнейшая из них - мое£ол0гия паразитов," образование "в конце каждого пассажа - инфективных "» ел а~ц я к"яи -ч е с - * к и х промастигот, трансформация" в которые ослабевает -параллельно снижению вирулентности и активизируется с"ее повшением. Утрата метациклогенеза и . вирулентности в процессе длительного культивирования означает возможность неодинакового- онтогенеза « культуре, незавершенность которого (дифференпировка только до-светлых промастигот); является признаком утраты вирулентности. -- Помимо морфологической оснот^-вирулентностБЛейтманий имеет под собой" и цитохимический фундамент - определенную цитохимическую характеристику всей популяции. Цитохимические преобразования сопровождают не только морфогенез лейшманий а пределах
каждого' пассажа от темных проиастигот до метациклинвских, но- и отражают изменения метаболических возможностей популяции в про^ цессе культивирования. Вирулентность связана со степенью активности ИДЦФ-Н-диафоразн и пароксвдазы, которая увеличивается с повшением вирулентности и снижается с ее уменьшенном.
Лайдаачдаг обладают ^акявивш^ среди
бактерий факторами патогенности как бибринолизин, плазиокоагу-лаза, дернонекротоксин и Первые" три положительно коррели-
руют'с вирулентностью промастигот в культуре, изменяясь параллельно ей в обоихналравления*. . " . " ' :. — ■ .: Вакимобраэок.с вирулентностью лейшманий в культуре коррелируют морфологйческиэ,цктохимические, атакже физиолого-?исжшичзс|Мвсврйс^; проиастигот.; ;'•• '"
Эти корреляте вирулентности обнаружены нами у всех изу- . ченных 'патогэнных" видон лейпшаний, поэтомуихможно считать универсальными спутниками вирулентности лейпшаний вообще, отражающими гагфундаментагтыше свойстваV
Из выявленных коррелятов с вирулентностью наиболее тесно связаны метацикдическиеформы, НДДФ-Н-диафораза, фибринолизин и дермонекротоксинв популяцки проиастигот . '
Эти корреляты позволяют" быстро и адекватно-оценить вирулентность культурлейшаний; пригодность" их" в качестве прививочного материала для' профилактических прививок против ЗЮГ и
даже прогнозировать эти качества." ' ......
Использование установленных коррелятов в этих целях доступно; экономично,"не: трдбувт'специальных условий, реактивов, дорогостоящей, аппаратура и позволяет получить ответ о вирулентности ^паразита в течение:2-3 суток вместо 3-7 месяцев (биопроба
на мызах). ..... ...............
; Предлагаемые тесты контроля за качеством штамма и готового прививочного материалатгротив ЗКЛ позволят полностью исключить испольаование для прививок культур, утративших вирулентность, что,' как известно; приводит к снижению прививаемости.
Длительное культивирование авирулентных штаммов отличается минимальной выраженностью всех коррелятов;-тем не менее у некоторых из них сохраняются метациклические формы в той или. иной степени,активность диафоразы, штазмокоагулазьг и другие факторы." Видимо это является основой сохранения вирулентных потенций и обратимости ее утраты.
ВЫВОДЫ...
1. Лейшмании патогенных для человека видов ( ь.major, ь. tropica, X.m.amazonensis, L.braziliensis ' непатогенного
( L.gynnodactyli ) в каждом пассаже культургпроходят повторяю-' щутася смену морфотипов промастигот: темные, просветляющиеся, . светлые и метациклические, представляющую этапы онтогенеза этих видов. ■
2. Эта штодкффёренцировка в культуре сопровождается цитохимическими изменениями промастигот, прежде всего касающимися HIK и дыхательных ферментов (НАДФ-Н-диафоразы и пероксидазы). Каждый морфотип имеет свою цитохимическую характеристику. Главное направление этих изменений - постепенное снижение РНК в клетке и резкое ослабление (и частичная утрата) дыхательных ферментов у' финальных м'.тациклических форл. * -
3. В процессе длительного культивирования эта" дифференци-розка лейшманий изменяется - снижается способность трансфорш- ' роваться в финальные к с га цикл^е ск:;е шорда и к 20 пассажу она утрачивается и -жизненный цикл становится не -полным.' Он может быть з культуре двояким,"Т.е.- проходить четыре или три стадия.
4. Ослабление и утрата метациклогенеза тз процессе длительного культивирования идет параллельно снижению и утрате вирулентности. При восстановлении вирулентности-после пасса~л на гпзсттяс, кетацкклогенез итакка активизируется.■Положительно коррелируя с иг .«ечениями вирулентности в обоих-направлениях, кета-циклические формы являются важнейшими-ее коррелятами.-
5. Второй коррелят вирулентности-лейшманий - достаточно высокий уровень НАДФ-Н-диафоразной и пероксидазной' активности в морфотипах популяции промастигот, предшествующих метациклическим формам. Активность этих ферментов-снижается^ в процессе длительного культивирования параллельно падению-вирулентности и параллельно эй повышается после пребывания паразитов в организме позвоночного хозяина. - 1 • - - - • - ..--••
• - 6. Лейзг/ании обладай? тг'гими известными -для бактерий факторами патогенности как фкбр;:нолизкн, плазмокоагулаза,' дер-монекротоксин, ФД-Р, но не сод-эр-гат тиалурокидазы. Набор факторов патогенности у рагнетс видов лейзканий неодинаков. ''.....
7. Падение вирулентности от пассажа"я пасзажу в культуре совпадает с ослаблением грех факторов патогенности: флбриполи-
-за,- ,
зина, плазыокоагулазы и дерионекротоксина - представляющих три фиэиолого-биохимических коррелята вирулентности лейшманий. ......
8. Морфологические (метациклические формы), цитохимические (активность диафоразы и перокеидазы) свойства и'"агрессивные" способности (фибринолизин, плазмокоагулаза, дермонекротогг-син) промастигот положительно коррелируют с вирулентностью всех изученных видов лейшманий. .........
9. Полученные результаты показывают, что высоковирулепт-ные штаммы лейшманий должны удовлетворять следующим требованиям:
а) иметь высокое содержание метацинлических фор.) (7-10% и более); " "
б) проявлять высокий уровень диафоразной активности (в среднем 10-15 гранул формазана на клетку);
в) обладать фибринолитической активностью достаточной в (+) степени; ;" •
г) проявлять дермонекротический эффект (+++) в кожной пробе на кроликах. *
Выявление установленных коррелятов - новый метод определения вирулентности лейшманий в культуре, который может быть рекомендован при отборе штаммов для профилактических прививок как более быстрый, более адекватный и экономичный, чем испытание вирулентности на мшах.
ПРАКТШЕСКИЕ РЕКОМШДДДШ
Нами впервые проведены целенаправленные комплексные исследования морфологических, цитохимических, физиологических и биохимических характеристик различных, видов и штаммов промастигот лейшманий в процессе длительного культивирования.
Доказана корреляция некоторых из них с вирулентностью. На основе полученных'данных разработан и рекомендован в практику здравоохранения оригинальный экспресс-метод индикации патогенных, высоковирулентных штаммов лейлманий от непатогенных, авирулентных на основе определения фибринолизина и дермонекро-токсина.
Метод отличается простотой, эффективностью, надежностью и позволяет получить ответ о вирулентности штаммов в течение 2-3 суток вместо 3-7 месяцев (биопроба на мышах).
Таким образом, разработаны теоретические.основы и впервые предложены для практики здравоохранения новые критерии (морфо-
логические, цитохимические и физиолого-биохимические) для быстрого и адекватного отбора прививочного материала для профилактики зоонозного кожного лейшманйоза. *
Материалы настоящей работы могут быть использованы в проведении теоретических и практических занятий на кафедрах микробиологии, инфекционных болезней и биологии университетов и медицинских институтов, позволят расширить исследования по систематике и таксономии паразитов, по выявлении ферментных ' систем - материальной основы вирулентности.
СПИСОК
опубликованных научных работ по теме диссертации
I. Юсупоз К.А., Насыров Ф.Ш., Рокотян И.Т. К вопросу о "факторах патогенности" штаммов ъ.tropica major //Матер.первого съезда Всесоюз.общ.протозоол. - Баку, 1971.--С. 177-178.
. 2. Юсупов К.А.,"Насыров Ф.Ш. Цитохимическое изучение стрн-гомонас онкопельти в культуре: Т-.з. докл. науч. конф. по парази-тол. - Самарканд-Тайляк, 1971.- С. 23-30........
3. Юсупов К.А., Насыров Ф.Ш. Некоторзе вопросы цитохимических исследований лиофильно-высуиенных свободчоживупгас амеб: Тез.докл.науч.конф. по параэитол. - Самарканд-Тайляк, 197I. -С. 30-31. ■ .....- . "
■ 4. Юг.упов К.А., Насыров Ф.Ш., Щеткин В.Ю. Цитохимическое исследование лиофилизированных промастигот "tropica na'jor. //Науч.-практ.конф. по мед.паразитол.: Тез.докл. - Самарканд, 1971. -С. 246-248. • " -" " ■ "
"5. Каллиникова В.Д., Насыров Ф.Ш., Юсупов К.А: К вопросу о цитохимии промастигот Ъ.tropica na.lor //Науч.-практ.конф. по мед.паразитол.: Тез.докл. - Самарканд, 1971.- С. "212-214.
6. Каллиникова В.Д., Насгрпов Ф.Ш. Цитохимическое изучение лейшманий в культуре //Цитология.- 1972. -XIУ, - V 2.- С. 219226. ' " ' • - ......... " -
7. Юсупов H.A., Насыров Ф.Ш.," Рокотян И.Т. Основные факторы патогенности лейшманий //Мед.паразитол. - 1972, - № 6. -С. 732-735.......... "" "" " ....................- ■.......
8." Насыров Ф.Ш." Факторы патогенности и некоторые цитохимические характеристики лейшманий У/Сб, науч.-исслед.работ ЦНИЛ мед^ВУЗ Узбекист.- Ташкент-Самарканд.- I973.-4.I.-Ü. 63-65.
.....- 32 - • ч
9. Насыров Ф.Ш. К вопросу о цитохимических аспектах вирулентности штаммов L. tropica major //Актуальн.пробл.мед. паразитол. - Самарканд. - 1973.- № I.-C. 162-166.
10. Юсупов К.А., Насыров <5.III. К вопросу о биосинтезе факторов патогенности у промастигот лейшманий //Краевая инфек. патол. и науч. основы сниж. и ликвид.инфек .бол. - Ереван, 1973.-Вып.У!.- С. 282-233. ' " ...... ..........
11. Насыров Ф.Ш. Вирулентность гатаммовкожного лейшмани-оза, выделенных в городе Термезе //Тр.маподнх ученых медиков Узбекистана,- Ташкент, 1973. Вып.Ш.- С: 326-327.
12. Серебряков В.А., Насыров Ф.Ш.у Юсуио?, К.А., Рокотян И.Т., Каллиникова В.Д. Возможности оценки вирулентности штаммов L.tropica major в опытах in vitro У/Паразитология.-1973. -ТЖ.- У 5. -С. 385-388.
13. Насыров Ф.М., Юсупов К.А. Вирулентность и факторы патогенности лейшманий из Нижнесурхандарьинского очага кожного лейшманиоза //Паразитология.- 1974. -Т.УЩ.- № I. -С. 77-80.
14. Насыров Ф.Ш.уЮсупов К.А.", Джабаров Л.Н. Характеристика штаммов, выделенных от больных кожным лейшманиозом сельского типа в городе Термезе //Мед.паразитол. - 1974. - 1 6.-С. 653-655.• - ■ 1; ' ......
15. Насыров Ф.Ш. О возможности приобретения культурами лейшманий некоторых факторов патогенности: Тез. П Всесогаз.сим-поз. Факторы патогенности микроорганизмов: хим. природа, биол. функши и генетич. контроль. - М., 1974. -С. 33-34.
16. Насыров Ф.Ш. К вопросу приобретения культурами X,.tropica major свойств по продуцированию ферментов гиалурони-дазы и штзмокоагулазы.//Бол.сельхоз.животных. - Ташкент, 1974. - Т.ХХП. -С. 65-63. ;
17. Насыров Ф.Ш; Индуцированный биосинтез факторов патогенности у штаммов 1.tropica oajor //Мед.журнал Узбекистана -1975. - * 6. -С: 65.
.18. Серебряков В.А., Насыров Ф.Ш. О. взаимосвязи некоторых факторов патогенности у штаммов L.tropica major //Акгуальн.пробл.мед.паразитол. - Самарканд, 1975. -Вып.П. -С. 130-132.- ......
19. Насыров Ф.Ш. G длительности сохранения фибринолитичес-кой и плазмокоагулазной активности у промастигот X..tropica major //Актуальн.пробл.мед.паразитол. -Самарканд, 1975. -
Вып. П. - С. 132-137.20. Насыров Ф.Ш. К вопросу"о возможности оценки вирулентности штаммов лейшманий в культуре //Матф. П Всесовз. съезда протозоол. - Киев, 1976. -Ч.П. - С: 67-69. - .....
21. Насыров Ф.Ш., Турсунов С.С. Вирулентность и фактора -.. патогенности штаммов лейшманий из Нижнезарайпвнского очага кожного лейшманиоза //Матер.П. Всесоюз. съезда протозоол. -Киев, 1976. - Ч.П. -С. 69-70,22.- Насыров Ф.Ш., Турсунов С.С. Характеристика тптаммов лейшманий'из Нижнезарафшанского очага кожного лейшманиоза' • //Актуальн.вопр.мед.паразитол. - Ташкент, 2977. -С. 47-48. - -
23. Насыров Ф.1Я. О возможней связи цитохимической1 характеристики штаммов тейшманий с их вирулентностью: Тез.докл.респ. конф.молодых ученых и спец.//Актуальн.пробл.в обл.общ.,естест. и тех.наук - Ташкент, 1978.-Ч.П. -С. 223-230. ; -
24." Насыров О возможности' биосинтеза-факторов пато- * генкости у лейшманий //Актуальн. вопр.мед .паразитол. - Ташкент," 1979. -С. 40-43.-. ' ". ^v-;—--'- г
25. Насыров Ф.Ш. . Турсунов С.С." "Вирулентность и привива- ' емость штаммов X.tropica najcr " и их фибринолитическая активность: Тез.докл. "Вклад .молодых учен, в практ.здравоохр.Узбе- . кист."- Ташкенту 1979;. -С. 231-232. -"V?; : :...... ""
"26. Юсупов К.А.," Рокотян-И.Т.,"НасБфов Ф.Ш. Микрофлора изьязвившихся лейтматасм //Совр.пробл.протозоол.: Матер, к I ; съезду Всесоюз.общ.протозоол. - Вильнюс,-1982. -С." 407. ' \
" 27. Насыров Ф.Ш. К вопросу о токсигенности штаммов лейпь : маний //Соврем.пробл.паразитол.: Тез'.юбкл.конф.посв. 60-летию НИИ мед.паразитол.им.Л.М.Исаева - Самарканд, 1983. -C.I.58-160. ';
28. Насыров Ф.Ш. Сопутствующая"микрофлора изъязвившихся -' прививных лейшманиом //Актуальн.вопр.мед.паразитол. и троп.мед. - Баку, 1933. -Внп.Ш. -С. 181-133. " •' ■;..... ' " • "•.-•*•'
29. Джаксим А.К., Насыров Ф.Ш., Низамов Б.Б., Халилова И.С. ,' ГоликВ.И. К вопросу о вирулентности штаммов Ь.major
из природаых очагов Узбекистана //Вопр.мед.паразитол. в Узбекистане: Сб.науч^тр. - Ташкент; .1984. -С. 3-7.-; .....
30. Юсупов К.А.-, Насыров ФЛ., Турсунов О.С.г Рохотян И.Т. Экспресс-методика индикации патогенных,"высоковирулентных штампов лейшманий от непатогенных, авйрулентних. Методические рекомендации. - Ташкент,. 1985. 10 С.:- ' . , .-•..*.
31. Насыров Ф.1. Факторы патогенности лейшманий //Соврем, пробл.протозоол.: Тез.докл. 1У съезда ВОПР. - Л., 198Г7. -C.I75.
32. Насырова P.M., Насыров Ф.Ш." Морфологические характеристики ' i.najor на различных.; стадиях развития в культуре , //Соврем.пробл.протозоол.; Тез.докл.. 1у съезда ВОПР. JI., 1987. -С. 217. '■:■•''•■■■ ''А-;."-\ ■
33. l^pcyHOB С,С., Насыров Ф.Ш. Факторы патогенности усовершенствованных прививочных препаратов для зоонозного кожного лейвманиоза //Актуальн.пробл.мед.паразитол. и троп, мед.: Сб.науч.тр. - Баку, 'Т^^-Вып^^-С./^-^!.-^^ /
34. Насыров'Ф Л., Насырова P.M., Джаксим АЖ., ТУрсунсв С.С., Низамов В.Б. Изучение вирулентности штампов лейшманий, выделенных"в г.Мубареке Кашкадарьинской области //Актуальн. , 'направ.совр.клинико-эксперим.мед.: Тез.дою:. У науч.конф, -
Самарканд, 1988. -С.. 63-64. ;
35. Насырова P.M., Калинникова В.Д., Насыров Ф.Щ., Са-фьянова В.М. Изменение морфогенеза лейшманий в процессе длительного культивирования //Доклады АН СССР.- 1983. -Т.301. -Я" I. -С. 213-217. ■-■■-■
38. Насыров $.1., "Насырова P.M. ; Джаксим А.К., Халилова И.С. Некоторые цитохимические характеристики i.major на различных стадиях развития;в культуре //Актуальн.вопр.мед. паразитол.:- Сб.науч.тр.- Ташкент, 1988. -С. 15-16.
37".' Насыров Ф.Ш. К вопросу" о факторе Дюран-Рейнальса у различных"видов лейщманий //Актуальн.вопр.мед.паразитол. а Узбекистане: Сб.науч.тр.. - Ташкент, 1989. -С. 5-7."
38. НасыровФ.Ш.", Насырова P.M., Алимова Г.Х.,-Хасансва М.З. Морфогенез лейшманий в культуре //Пробл.теорет. и практ. . мед.: Тез.докл.науч.конф., посвяй?.-.60-летию СамМИ - Самарканд, 1990. -С. 335-336. ; - ;
39. Насыров Ф.И. Вирулентность и некоторые цитохимические изменения лейшманий //Актуальн.вопр.мед.паразитол.: Сб.науч.тр.-Тадкент, 1991. -С. 6-7. —
- 40. Насыров Ф.Ш.," Насырова P.M. К Bonpocjr o фибркнолити-ческой активности-различных видов лейшманий //Актуальн.вопр.мед. паразитол.: Сб.науч.тр. - Ташкент, 1991. -С.. 8-9.
41. Насырова P.M., Насыров;Ф.Ш. Цитохимические изменения лейшманий: при длительном культивировании //Цитология. - 1992.-Т.ХХХ1У. 4. -С. 105.
42.' Касироз й.П. Некоторые факторы патогеаность у агатов разшас видов лейшманвй // Цитология. - 1992. - ТЛН1Х. - * 4. -С. 105.
43. Ззфакулод C.Ï., Насирсв Ф.В., Нзсырова Р.а., Шетшя B.D. Морфогенез лекдаанкй при длительном нудьтввироватш // Совр.дробл. мгд.пзразитол.в Узбекистане Ч К 70-«летвю НИИ Ш ит:.Л.«.Исаева). -Самарканд, 1933. - Ч. I. - С. 16-17.
44. Насадов О.Ш., Кас^рова Р.И., Калашникова З.Д., Сафышова В.Ц. Вирулентность, метацкклогенез и дыхательное фермента дейшмв-нпй, выделенных в культуру от лабораторных хпвотшлс // Паразитология. - 1993. - Т. 27. - К 4. - С. 301-306.
45. lîasirov ï.Sh., Каз1гота H.îi. Eorpbologioal an4 oytoohe-nioal oharactorietica of différent a tassa of Lsishnaaioa« develop-nent In culture // Рго^гаегее a&d Abstraet» of the Yth Buropeon
ticoUotyg-i-aa of P-ïcasitoiogy« - Budapest,, Huasary. - 1388« — P. 116« "y..-:- ": ,.
4-5. Hoairova Н.Ы., Jîaairov T«Sh., Kalltaliara T.jD. Soaa oy-tocheaieal aspeçt3 oibaiaîi^salas rtruloace // Bulletin de la Société française de раГйгл£о1ос1э. Ашз4^ 1990« - T. 8. - Suppla-jnent Ht 1» - Рсг1з, Août 20-'4- ¿liguai. - 171»
47. Kallinikova T.D., IT-.siroVQ R.U., Hesirov P.Sîi., Safропота Т.Н. Moxphogeneeie wad virulence of LeiDhmaia Eojor in the proosse of long-tera cultiration ]t Arcb.îrotistsnfei. - 1932. -Bd. 141. - S. 327-334»
«.Щ.НЬсировшшг "ЛЕЙШМАНШЛЛР ВИРУЛЕЕГЛИШНИНГ КОРРЕЛЛТЛАРИ.. -но иди елынй ипташт кдскача хулосаси
Марказий Осиё ыамлакатларида лейшманиозлар хднузгача муам-т бушб колькмда. Зоонозли хери лейшаниозининг авжига чшдан • учоцлари Узбекиссокда хрм ыавзсулдир. Охирги йилларда. зоонозли тери лейшаниози билан кураиишда узининг эпидемиологии самарадор-лиотни курсатган лейшманияларнинг етиштирилган вируленти билан про-филактик эмлаш утяазищ ыу^ш а^ашятга эта булиб колмокда.
Ушбу твяширишлар идиий-амалий йуналишда булиб, леашаниялар-нивг беш тури шташларининг варулентлкги ь.иаЗог, Ь.Ъгсрзса, ь. ■ пе^.оапа епагопепа1з, Х,.Ъгая111вгш1з, Ь.2утапос1аоуотиришда ургашш ва унинг сезгир, тез, содда лейшыанидлар стташлзрининг ЕЕрулентлигиш аницдаш имкошитини яратиб бераатган усулларни ш-лаб чтуиз мацсадзда унинг паразитлар морфогенеза, цитохимияси ва патогешшн ошллари билан богликдагини аникдашга баришлангандир.
Утказилган текшириш нилари. натккасида лейшманияларнинг усти-рии, яшаш циклининг узга хос ажойиб мувдаршсаои тавсия кдапшган булиб, у пассаяда промастяготларшшг учта ёки туртта морфологии тшшдан иборзтдар. Биршгш марта катта хщщда сукъий шароитида узок; муддатда етиштиришнингутказиш жараёнида лейшаниялар метаб-олизминенг здолати С НАДФ-Н-диафо раз а, аероксидаза, янус-кук Б-нинг оксвдлаш цобшшяти), патогешшк омиллари, фибринолизин, плаз-шкоагулаза,. дерданекротоксин, Дюран-Рейнальс факторининг тарк.а-лиш ва бошиэлар текншрилган ва уларнинт- вирулентлиги билан бог- • лвдшги аншуинган.
Щунинг асосада лейшаниялар вирулентлигининг янги морфологик, . цатохимик ва физиоло-биохимик (патогенлик ошшлари) коррелятлари тавсия 1силинган. * Лейшаниялар. устириш вирулентлигини аниклаш учун курсатнлган коррелятларни шлатиш маълум булган биологик усуллар-дан узининг оддийлиги, ишончлиги, лэмма учун тушинарли ва осонли— та билак фарв; килади ва щташшшг вирулентлигини 3-7 ой урнига ' 2-3 кунда аниндашга, унинг эмлаи учун препарат ишлаб чиадршга ва сифатини . текшриб тургига имконият яратада. .
37
Kaeirov F.Sh. The subject : Correlates of leishmania Virulence Summary
Leishmaniasis is still a problem in countries of Central Asia-There are active endemic foci of zoonotic cutaneous leishmaniasis in Uzbekistan too. For struggle against zoonotic cutaneous leishmaniasis in recent years essential role is referred to prophylactic inoculations with virulent leishmania culture which proved its epidemiologic effectiveness.
The present study has scientific-practical specifity and ia.devoted to investigation of strain virulence in fire leishmania species L.major, L.tropica, l.mexicma amazbnensis, l.braziliensis, l.gymnodactyli in culture and indication of possible connection, of it with morphogenesis,' cytochemistry and connection of it also, with factors of pathe~ene parasites, in order to work out the. sensitive, rapid, acceptable methods of indication Leistuiania strain virulence. - > 1 " . .; ,;V ". •. • * .
The results obtained suggest a new original scheme of Leishmania life cycle in culture which consists of. four, or three morphologic pro^iaetigote types in passage. For the first time there was investigated metabolism state (HADF-H-diaphoraae, peroxidase, oxidation ability of Yanus-green B), pathogene factors (fibrinolysin, spreading factor Dursn - Beynals etc.) of Leishmania in the course of culture growing and their correlation to virulence were revealed on basis of vaot material.
Subsequently there was recommended new-morphological, çytoche-inical and physiological-biochemical (pathogene factors) correlates of leishmania virulence. Application of established correlates for evaluation Leishmania virulence culture differ from existing bio- -test methods according to its simplicity, reliability and it is possible during 2-3 days instead of 3-7 months to.detect strain-virulence, its fitness for producing inoculation material and to control its quality. . • ''-....'
- Насыров, Фархад Шадыевич
- доктора медицинских наук
- Ташкент, 1995
- ВАК 03.00.19
- Сравнительное изучение биологических свойств LEISHMANIA MAJOR , L.TURANICA и L.GERBILLI IN VITRO, разработка регламента их культивирования
- Влияние монохроматического лазерного излучения на культурные и биологические свойства лейшманий
- Лейшмании рептилий (фауна, экология, систематика)
- Анализ первичной структуры миникальцевых кинетопластных ДНК лейшманий
- Характеристика первичной структуры дивергентной области максикольцевой кинетопластной ДНК низших трипаносоматид Leptomonas seymouri и Leptomonas collosoma