Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние монохроматического лазерного излучения на культурные и биологические свойства лейшманий

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Влияние монохроматического лазерного излучения на культурные и биологические свойства лейшманий"

оо

СГ? УЗБЕКСКИЙ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННЫЙ

ЦЕНТР ПРИ МИНИСТЕРСТВЕ СЕЛЬСКОГО И ВОДНОГО О. ХОЗЯЙСТВА РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН

е=г

Узбекский ордена трудового красного знамени ^ научно-исследовательский

ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРИИ имени академика К.И. СКРЯБИНА

На правах рукописи УДК: 616.993.162-41-001.2:616.35

ХАЙДАРОВА ГУЛЬСАРА МУСИНОВНА

ВЛИЯНИЕ МОНОХРОМАТИЧЕСКОГО ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА ЖУЛМУРАЛЫШЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЛЕЙШМАНИЙ

(/ 03.00.19- Паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

.САМАРКАНД - 1998 г»

Работа выполнена з Центральной научно-исследовательской лаборатории Самаркандского медицинского института

Научный руководитель: Доктор медицинских наук

СЛ. ШЕСКАКОВСКАЯ

Официальные оппоненты:

1. Доктор бкологииеских наук ЕВШЕВА Н.Х.'

2. Кандида:' медицинских наук БУРИЕЗ А.Б.

Ведущая организация: Научно-исследовательский институт ., кедииичской паразитологу joi.I.U.Исаева.Министерства здравоохранения Реслубдгики Узбекистан

Залита состоится % Lp Г.1,Я ХЭЭ8 г. в fá^ часов на заседании СпешаяизироБак^ого совета К 020.37.01. по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук при Узбекском научно-ис слсдоаательскок институте ветеринарии (704453, Самаркандская .область, лее.Тайляк, УаНКШП.

С диссертацией. можно ознакомиться в библиотеке института.. .-.BTQ-pg^epaT разослан 193 fe г..

Улетай секретарь . - • ." '' í'' /'. " •

Специализированного совета, _ ^ .доктор биологических наук -Ú^^^J^'Cj БУЛХлКОБ

--.^ту:. лгность г.^'---: •, осго.югс? -

неннккн заболевания}.:;.-; человека, os ко:сркх ежегодно & 8Э-;и ciранах мира страдай: до IS :слн -.еяозек. Разработав кещуне-рсднке программа г.о 5opi5e с ваынейш:о-:к паразитозамя человека, включая чейагачиозы. Это прегреши Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) - ТДЗ, программ; 2НЗСКС - PAR МАЗ.

Как известно, лейжоякоэы являются пркродноочагоЕьши ж^еипижли. Б природных очага:-:, уунхгконирувд/х на территории' Узбекистана, рякеии::, Каггхста;:?., государств Закавказья дароко распространен ко>:ньг< лейшманиоз.' Только в Узбекистане ежегодно регистрируется более 1000 случаев заболевания кс.еты:,: лейш:»анисзсм. Учитывая важность•проблемы, предполагается б ближайшие годы разработать и знедркть в практику' здравоохранения эффективные методы лечения и профилактики паразитарных болеэией человека. Важнейшим звеном в снижении заболеваемости, особенно инфекционной и паразитарной, этиологии, являются ые- . ры по их профилактике.

Для успешного решения- поставленных здравоохранением Республики Узбекистан задач по профилактике лейшманиозов необходимы исследования, результатами которых явились бы новые' знания о путях повышении жизнеспособности вакцинных штаммов возбудителя зоонозного кожного лейшманиоза, возможности управления. их вирулентностью, поскольку исследованиями ряда .ученых (Ни Г.В., 1Э81) установлено, что промасткготы лейзманий в значительной степени-изменяют свои кулыуральные к биологические свойства под действием некоторых факторов внешней среды, в том числе физических факторов. Исходя'из вышеизложенных обстоятельств, мы поставили перед собой следувцуй лель. '

Цель и задачи исследования. Целью-настоящей'работы является изучение роста на-искусственной писательной ергдй промасгигот лейшшний, метаболически}-: иэкененкй и'зкрул^ггг-ности паразита при воздействии'гелий-неэнового лазера. ,

■В задачи/исследований входило: I. "Изучить особенности роста на искусственной питательной ' среде -промастигот L.major при воздействии гелий-неоно-

вым лазерам в зависимости от вирулентности mravaioa паразита.

Z. Исследование особенности метаболизма промастигот i.ma'joi подвергнутых воздействию гвлйй-неоноййго лазера на примере активности- некоторых ферментов окислительно-воестановитель-ного обмена (кислой фэсфатаэы, пероксидазы, НлД.Н и ш.ДФ дкгидрогеназ ir уровня содержания фосфолипидов в метке паразита) .

3. Определить степень влияния гелий-неонового лазера на вирулентность промастигот l-aiajor.

Научная новизна. Впервые Изучено влияние гелий-неоис-5ого лазера на культуральные свойства промастигот 1.major эирулэнтных.и авируденткых штаммов*

Установлено, что гелий-неоновый лазер в зависимости от дозы облучения обладаем способностьв как стимулировать, так и подавлять poet промастигот L.major на искусственной питательной среде.

Выявлена способноетьгелий-неонового лазераповьтать вирулентность L.major для белых нелинейных; «шей..

Выявлен цутагенный эффект гелий-неонаэого лазера по атнояенюв к ааразигнческим простейшим на примере L.majpx.

; Показано существенное изменение метаболизма прейласти-гот лейэманий вирулентных и авирулентных этаммов.-

Практическая значимость-, заботы. Облучение культур промастигот 1».major гёлий-неоновым лазером в дозах, стиму-лирущих рост промастигот на искусственной питательной/среде, позволяет получить большой объем биомассы паразита в короткие сроки, что необходимо для получения вакцинного материала.

Облучение культур промастигот L.aaocr увеличивает, вирулентность последних, что позволяет поддерживать в течение длительного времени 'Еак'щ&вде-.штаммы' или: клоны паразита без изиекения его.основных биологических свойств.

Облучение культур паразита L.maj.ar . низкими .дозами гелий-неонового лазера позволяет увеличить время между, пересевами культуры до 2-3.-месяцев'без ущерба для основных.куль-

туральных у. биологических свойств штамма, что -сокращает зат- ' раты на поддержание жизнеспособности необходимых (вакцинных) штаммов лейшманий, и, соответственно, снижает -стоимость вакцинных препаратов.

Положения, выносимые на защиту:

1. Гелий-неоновый лазер'-изменяет характер роста про-ыастигот L.Mjor на искусственной питательной среде.

2. Гелий-неоновый лазер вызывает значительные метаболические изменения -в промастиготах L.major, что способствует повышению вирулентности паразита.

Материалыдиссертапии долряены: на конференции молодых ученых (Самарканд, I98S); с»ашозиуие "Биохимия сельскохозяйственных животных" (Кгзв, 1989); 5 и б научных конференциях ДНИ СамМК (1988, 1989); 7-ом. ыездународном сшпозяуие по микроэлементам (Дубровник, Югославия,,1990); международной конференции "Новое в лазерной-кздицпне к хирургии" (Перэяс-лавль-Залессккй, 1990); на сишозауиэ ЕСОРА (Паргш, Франция, 1990). "

Публикации. По материалам диссертации оцубдиновано Ю работ. Изданы методические рекомендации "Цитохимические показатели нейтрофилов крови в оценке эффективности терапий зоонозного кешного яейдааниоза" (Ташкент, 1991).

Структура диссертации; работа изложена на 131 страницах нашинописи, состоит из введения, 4 глав, обсуддения, выводов и практических рскоаенпдций,~ спис-а лк.зратура, включающего 182 названия работ. Диссертация иллвстрирована 10 рисунками и 9 таблипаш.

СОДЕР2аНйЕ РАБОТЫ.

Материалы и метода. Материалом д#я исследований явились культуры проыастигот L.major 7336 М, 1.tropica 72 25, L.major J5 МБ, 7814 ГЛ, 86 28 Т. Объектом кссгедо-епния сдуашш культуралькнз свойства црои&етагот лейааняй:.

морфодогия, подвижность, обильность роста на искусственной питательной среде, количество, величинами локализация органелл з отдельна взятой клетке паразита, маркируемых цитохимическими (ферментными) маркерами; а также, вирулентность изучаемых сташюв проыастигот по отношений к белым нелинейным мшам.

Характеристика вирулентности штаммов, использованных а настоящей работе. Штаммы ь.-паоог 15 Ж и 4 ГЛ-вирулентны, получены из Ж7/, МП км.Л.М.Исаева МЗ РУз, вирулентность- была подтверждена в указанном НИИ, Штамм Х-та^ог Ь Ш - вирулентный, получен - из НШЭМ -им.Гамалеи АМН с подтвержденной вирулентностью -

Штаммы- I Ш я 2« Т - ¿¿вирулентные, получены из НИИМП ям.Л.Ы.Исаева УЗ РУз.. '

ь.-ггорхса К 25 -авирулентннй, получен кэ пИИЗм. им.Гамалеи (Москва).

Из всех исследованных штаммов приготовили тонкие Мазки на тщательно обезжиренных стеклах. Цитохимическими методами выявляли-липиды (йа Гольдману, 1957); кислуп фосфатазу (по Варстону в модификации руденса и Буйкиса, 1967}; лерокеи-дазу (по Грехе&$у Кноллю,. 1963); активность НАД.Н и НАД.Ф де-гидрогеназ (до Скарпелли, 1967).

Пробирки с культурами промастлгрт лейшманий помещали на расстоянии 2 см от выхода лазерного луча. Предварительно луч гелий-неонового лазера расфокусировали. Время экспозиции • 5» 12 и 25 минут. Для облучения использована отечественная лазерная установка ЛГ-75. Длина волны монохромата 650 км. Мощность на выходе световода"7,5 мВт/кв.см, Культурьь облучали сразу после пересева на свежую ис^сственную среду ЩШ. -Из облученных атйымоВ также приготавливали тонкие мазки и ^¿явлдлй .липкгы, _;сислую фосфотазу,- перохсидазу, активность ¿«¿♦Н к яДД.5 дегищюгеназ.'.

и^ченкые-данные обработаны методом'еаркайионной :..'• е гатиетшш па Стьсд&кту-^кзйру ка персональном ¿ЗМ 1йрнй -Бл 1СС1-С1 "Злектронак" с использованием пакета прикладных программ яри консультативной помочи Щ яагедрг медицинской физики Сама*.

РЕЗУЛЬТАТ! ИСЩПСЗА.^ И ИХ ОБСИЩНКЗ

Интенсивность роста ггооыастигот вирулентных и ариру-лентнкх итаммов на искусственной питательней среде ЭТИ. Логарифмическая фаза роста'вирулентных эташов L.major 4-ГЛ, 15 МБ, 5 Aiii приходится на период с 1 по II сутки, затем устанавливается некоторое динамическое равновесие - так называемое "плато", вслед за которым наступает выраженное снижение интенсивности роста на.искусственной среде. Но и к концу I месяца культивирования число яизых промастигог в культуре прогрессивно снижается и составляет к, концу 2 месяца 6-10 особей в поле зрения. На протяжении-последующих 3-го и 4-го месяцев культивирования численность живых паразито-в еще более снижается и к 5 месяцу мояно видеть. среди клеточного детрита единична? лодвганые проыасгиготы с сохранившейся г-'орфологиеЛ.

Кривая.роста авирулентных зтагл'оз отличается от криыой роста вирулентных штатов. Если при культивировании пронасти-гот вирулентных шта-^'пп к концу второго наста культивирования число лиеьк морфологически полнопенных и подвгсшнх прс-кастягот составило 8-10 особей в лрле эргния, то у аппрулен*-ных атан^ов оно достигает 16 (Р 0,01). На 3-ем месяцг куль-тивиропанкя'- 12-14 авирулентных против 4-6 у вирулентных (Р 0,001) и на 4-ом месяце 4-6 против"единичных процаетнгот d пробг.р:сах с вирулентными атаьйгаж. Даже на 6-ом меся-с ггультквирования среди клеточного детрита, иозно вздеть 1-2_ . глшх пэдвгпэшх прог.:астигот почти-в каддом поле зрения, в го врзыя как в пробирках с.впрулентнкни штаыкакн отмечается полная гибель куль туш.. ' -

Так:::.! образам, напя набйзденшГподтвердили данние-литературу о-более-ивтенсиркоы росте'пронастигот l.major авпрулент!зах штаьеав на среде яш*'.

Интенсивность роста вирулентны* 'я№&зюв--.и авирулентных шташгов .прк .воздействии гелий-неонового лазера, Облучение культур прокастигот"вирулентных и авирулентных.штаиьгар ле'йианий гелий-неоновым монохроматическим лазерным лучом в течение 5 минут, приводит ¿ некоторому. занедленЕЭ накрпле-

s.

ния биомассы паразита, но в течение первых 9 суток культивирования различия носят недостоверный характер. В пик максимального роста с 15 по 17 сутки культивирования численность про-мастигот не отличается от уровня контроля.

Облучение культур промастигот вирулентных и а"грулент-ных штаымоп лейшманий гелий-нконовым монохроматическим лазерным лучом в течение 12 минут приводит к резкому уведичениэ интенсивности роста на искусственной питательной среде ШН. лромз т&го, результаты исследования показали, что чувствительность проыастиготу разных штаммов неодинакова. Так,

4 ГД реагировал максимально (число промастигот в поле срекия увеличилось до 50-60, а иногда попадались поля арония готовь "забитые" живыми подвиянкми промасгиготами), а штамм 15 ,.i¿ г.сказал минимальную чувствительность (до 33-40 прокас-гягот в поле зрения),, в то везмя как кнгпбиружщая активность лазерного, луча при низких дозах облучения била вцразена практически одинаково.

Исследования показали, что при дозе облучения 25 минут во всех изученных штааыах подавляется рост культуры на среде ЖШ. Так, штаьвз 4 ГЛ достигает максимального роста к 5 суткам культивирования, но число прокастигот (кивых, подвижных) составляет только.10-12 в поле зрения, против 20-30 паразитов в поле зрения в необлученных культурах. При облучении в течение 25 минут резко сокращается период логарифма ческой фазы роста лромасткгот с II суток в случае необлучен-ных штаммов и до 5 у облученных, т.е. более чем в 2 раза. -

Таким образом, длительное облучение ( в течение 25 минут) промастигот лейиманий вирулентных и авирулентных штаммов монохроматическим гелий-неоновым лазерным лучом (красный ,пз£т) приводит к резкому угнетении роста паразитов на искусственной питательной среде Ш-.

Наги исследования показали, что гелий-неоновый монохроматический лазерный луч обладает способностью стимулировать прелкфераиии . как вирулентных, так и авирулентных штаммов -дейшааний при культивировании на искусственной -питательной .среде. Кроме того. ГИД способствует повышению жизнеспособности промастигот авирулентных.штаиков. леЯтманий при

Г

длительном культивировании. Так ка, как в случае с промаста-гот'ами вирулентных штатов, промасгкготы авирулентных штатов, облученных ГКЛ, после длительного культивирования хорошо растут при пересеве па свегвую питательную среду.

Морфология промастигот лейнманий при воздействии га-тай-неонового лазера. Исследования показали, что гелкй-неоко-вый монохроматический лазерный луч {ГНЛ) при воздействиичро-мастяготы лейшзнкй in vitro приведи? не только к изменениям интенсивности роста промастигот в культуре, ко и к значительным морфологическим пзменениям паразитов. В частности, было установлено, что при воздействии ГНЛ в течение 25 ь-инут уже на 3-4 сутки после облучения в культуре отмечается значительный полиморфизм, характеризующийся появлением карликовых Сдз 1,9+0,04 «к} и гигантских (до 5,7+0,03 мк) форм паразита. К концу второй недели культивирования морфологические изменения промасткго? составляют 23,4+1,9£ от их общего числа в культуре. По пер? увеличения срока культивирования число их увеличивается к к 25 суткам составляет 76,5+чЗ,0>5 от чпель подвигни* пронасткгот. Следует отмстить, что паразиты изменяются только_б размерах, ко сохраняя? правильную сигарообразную форм;/.

3 культурах авирулентных паразитов вместе с гигантскими и карликовыми параз;:гаии уже на 8-10 сутки культивирования после облучения в течение 25 шнут, появляются мелкие (до 2,1+0,05 мк) округлые паразиты, составляющие 19,7+3, от общего числа кивых паразитов.. К 25 суткам культивирования число морфологически измененных паразитов достигает 33,8^

1,25.

При длительном культилировании, на 2-3 пассатах морфологически измененные прокастиготы не только продолжают появляться в культуре, но их число увеличивается, в основном, за счет не л:-: их шарообразных фор;.!. К 5-6 пас с ал ам их число составило 63,9+3,8л и затем не изменилось-, на протяжения 7-S пассадей.

Снижение времени облучения (экспозиции) до 12 ищут привело к более выраженным морфологическим изменения?! пара-

зитов как вирулентных, 7ак и авирулентных штаммов. Так, в культуре вирулентных штаммов уже к концу первой недели культивирования на искусственной питательной среде появляется 11,6+ 2,1% округлых, аллипсо- и грушевидных паразитов. Обращает на себя внимание большое количество "розеток" - до 6-6 в поле зрения. Причем "розетки" собираются из паразитов,различных ферм и размеров. Иногда "розетки" имеат гигантские формы, сливаясь друг с другом, покрывая все поле зрения.. По мере увеличения срока культивирования увеличивается процент промастигот с необычной формой. В культуре вирулентных штаммов к 25 суткам культивирования грушевидные паразиты Составили' 26,5+2,1% от числа живых подвижных, промастигот. На втором пассаже содержание эллипсовидных и грушевидных промастигот увеличилось до 33.,3*9,ОЙ. На 3 пассате.е культуре появились промастиготы в ■пса« бумеранга, которые составили 13,3*1,7% от числа живых под-зпхных промастигот, но число грушевидных форм несколько сократилось и составило 31,2+2,7%. В "розетках" отмечался резкий полиморфизм паразитов. При длительном культивировании число промастигот в виде бумеранга увеличилось и к' 5 пассажу было максимальным - 24,3+ 3,2%, в то время как. общее число морфологически измененных паразитов в культуре составило.57,3+1,9%. В последующих пассажах (до 7-6 пассажа - срок наблюдения) число морфологически измененных'паразитов колебалось на этом же уровне, что, по'нашему мнению, свидетельствует, не только.о способности лазерного луча'-вызывать мутации простейших, но..и о закреплении этих мутационных,признаков в последующих поколениях паразитов, Аналогичная динамика изменений форм и размеров промастигот. лейшианий под действием ГНЛ наблюдалась и э культурах промастигот авирулентных, 'штаммов.:При их облучении в течекке 12 мицут.-ухе на .8 сутки .культивирования наблюдали появление-круглых '¿орм • промастигот, число.которых с.сс-. -авила 23,7+3,35 от'живых подеизсьых паразитов. Более половины круглых форм' прзмас'тигот (52,3+2,7%) имели'очень мелкие'.-, размеры до. Г.З+у.ОЗ мк. Среди':гз=ых под-винных промастигот встречались единичные Сне' более 3-5 в одном поле .зрения) гу> гантские промастиготы,'-размеры которых составили 5,4^0,09 мк.

По мере увеличения .срока культивирования полиморфизм паразитов нарастал; появились толстые, шарообразные паразиты с короткими жгутиками - их число составляло 11,9+2,7?ь от живых промастигот., Одновременно с этим увеличилось чило розеток. При этом, в отличие от вирулентных штаммов, число розеток в культурах авирулентных штаммов было достоверно большее (Р< 0,01). Ка 2-3 пассажах число морфологически измененных паразитов составило 58,7+1,9%. На каз взгляд, это свидетельствует о большой пролиферативнсй активности мутагенных форм паразита из закреплении морфологических.признаков в; поел едущих поколениях. Подтвервдением.служат данные об увеличении процента »мутантов на 6-6 пассажах до 61,3+1,62. . - ,

Как видно, при облучениикультур! промастигот Ь^юазог ГНЛ в течение 12 минут наблюдается не только максимальное иэ-. ыенение интенсивности роста паразитов■на искусственной питательной среде, но и- пояйляется мутагенное воздействие. Мутагенный эффект ГНЛ по отнояснию к. прскастиготаилейшаний в значительно меньшей степени, но сохранялся при. сокращении времени экспозиции до •& кинут. .

Злияние гелий-неонового.лазерного облучения на виру- лентность прокастиго'т.г леГгшаник. дри::заражении • белых; нелинейных мышей яромастяготами зирулентныхдгтгмэз наблюдалось развитие типичного лейазманиозного процесса, я-именно, через 2-0 недели .после, инокуляции паразитов (0,01 мД;суспензик, содержащей не менее 10 млн тздьых подвижных промастигот) в-кожу уха, животных появлялся .инфильтрат, на"песте'которого к 4-5 неделям, формировался плотный бугорок. На- 3-14 неделях бугорок, как., правило изъязвлялся и с 14-16 недель наблюдалось начало процесса рубпеванкя. Обная длительность лейшманиозно-го процесса.не превышала 22-23 недель.

При инокуляпии белым .н'елинёйНым'мыйам: Юмлннивкх Промастигот авирулентных. ШтаАй,!Ов -на .5-6 - неделе' появлялся . мягкий инфильтрат, на.месте которого к,11-12 неделе формировался точечный, бугорок, который затем рассасывался не иэъязвляясь.

Исследования показали, что при облучении промастигот

авирулентных штаммов Ь.аа^ог гелий-неоновым лазером в течение 12 минут уже на первом пассаже штамш изменяли свою вирулентность, и при инокуляции их в кожу белых нелинейных мышей вели себя.как едабовирулентные. Через 4-5 недель после инокуляции облученными паразитами появлялся мягкий инфильтрат и значительная гиперемия кожи. К II—12 неделе формировался плотный/бугорок, который на.14-15 неделе, изъязвлялся в 79,9+ 1,3% случаев. С 19-20 недели появлялись признаки рубцевания и весь процесс заканчивался в течение 27-28 недель.

После второго пассажа на искусственной питательной среде облученные шташы проявили увеличение вирулентности -процесс изъязвления развился у 89,5+2,7% зараженных животных. Л на третьем пассаже азирулентные, но облученные в течение 12 минут "цзтакмы лейаманий. повели себя как высоковирулентные, з частности, гиперемия и инфильтрат появлялись на 2*1+0,4 неделе, против 2,3+0,5 недель в контрольной группе животных, зараженных вирулентными штаммами Паразита (Р<. 0,01). На 5-6 недеде формировался бугорок, который на 8-9 неделе изъязвлйЛ-ся у 96,8+1,4% животных^' - Длительность процесса, в целом составила 18-19 недель против 18,6+1,3 в контроле (Р< 0,01).

При облучении авирулентных штаммов ГУЛ в течение & и 25 минут вирулентность штаммов практически неизменяется. Инфильтрат формировался в ..те же сроки,, что и яри заражении,' животных протстиготаыи авирулентных необлученных агаммов. Лишь в 7% случаев при инокуляции мышам авирулентных штаммов,, облученных в течение 5 минут, через 16-17 недель наблюдался слабый, процесс изъязвления, завершавшийся к 22-23 неделе.. При инокуляции мышам промастигот.авирулентных штаммов, облученных в течение 25 минуt, только в 1,71+0,5655 случаев на 20-21 неа» деле наблюдалось изъязвление бугорка, которое заверЕилось / •ерез.2-3. недели, т.е. к-23-24 неделе наблюдения..

Следовательно, гелий-неоновый лазер не только изменяет интенсивность.роста прмастйгот. лейшманий. { L.major . ) на искусственной питательной, среде и не .только приводит к иэмв-: нениям форкыи размеров паразита, но и повышает вирулентнос-гь ятаммов ••L.aajor . при облучении а 'течение минут.

Изменение основных культуралъных и биологических свойств промастигот лейшманий под воздействие« гелий-кеоново-го лазерного облучения заставило нас искать механизма этого воздействия..С этой целью нами была изучена динамика активности некоторых ферментов окислительно-восстановительного и энергетического метаболизма эукариотов, в частности кислой фосфо-тазы, целочной фосфотазы, миелоперокскдазы, НАД.Н-дегицроге-назы и уровня содержания фосфолипвдов в промастиготах вирулентных и аЕируленткых штаммов лейшманий, подвергнутых облучении ГКЛ б течение 12 минут.

Активность кислой ¿осхатазы в дромасгиготах лейшманий вирулентных и авирулентных штаммов, облученных и необяучен-кыхТНЛ. Было установлено, что я динамике культивирования промастигот вирулентных штаммов изменяется не только число гранул фермента, но и их размеры и локализация. Если на 7 сутки культизирования в промастиготах необлучеНных вирулентных штаммов КФ выявляется в виде.крупных фиолетовых гранул, плотно окружающих кинетопласт, то на 15.сутки гранулы кап бы "отодвигаются" от.кинетопласта в сторону ядра. При этом, размеры их заметно уменьшаются. К 25 суткам мелкие гранулы КФ полностью "отходят" от кинетопласта и максимально приближаются к ядру, паразита, но не окруказт его кольцом.

После облучения ГКЛ на 7 сутки культивирования гранулы КФ в промастиготах вирулентных штаммов лейшманий значительно меньше в размерах, чем б необлученных штаммах, но локализация их сохраняется вокруг кинетопласта. На 15 сутки гранулы становятся еще мельче и они значительно "отодвигаются" от кинетопласта, почти вплотную приближаясь к ядру. Светлые и очень мелкие гранулы КФ на 25- сутки культивирования"собираются "розеткой" у дцра клетки.

У авирулентных, штаммов КФ достоверно ниже, чем у Бкру-' лентных штаммов. На 15 сутки число гранул достоверно увеличивается по отношении к-7 суткам (? ■■. 0,05), но снова снижается к 25 суткам культивирования.

Таким образом, в промастиготах лейшманий вирулентных и авирулентных штаммов пигохимически выявляетея"активность

кислой фосфатааы изсамыхсильных гидролитических ферментов, являющихся маркером лиэосом. Локализации, число и интенсивность окраски гранул кислой фосфотазы значительно заемся* от "возраста" культур, ее вирулентности. Гелий-неоновый лазерный луч значительно изменяет численность, гранул кислой фссфатйзы в проиастиготах вирулентных штаммов, а локализацию и интенсивность окраски в промастиготах как вирулентных, так и авк-рулентнкх штаммов лейишаний.

Активное гь мелочной ¿осготазы в промастиготах утроен-тных и воздействие гелий-

неонового лазер»..Фермент, щелочной;фосфатазы ;ЩФ)•в:промастиготах вирулентных и авирулвНТНЫХ Штаммов лейшманий выявлялся цитохимичеекк С Ь.аа^ог ). Число гранул также;, как и.КЗ ' изменяется в' зависимости от времени культивирования {возр&ета культура). Так, ка 7 сутки культивирования число гранул составило 13,4+0,34, на 15 сутки оно увеличилось до 16,4+0*3 и на 25 сутки культивирования снизилось до;14*1+1,3. Ни в один из сроков культивирования не Наблюдалось различие достоверного характера (Р.- 0,01). В промастиготах.облученных итам- : мов число' 7 сут^ ^льтивиррй^йй роотавило;

18*4+0,3, что ЦойЪовернд вше* чем в эти *е сроки з необлу-ченных пйаммал ЛеЯймякий (Р<0,05). На 15 сутки культивирования число гранул увеличилось но отношению к 7 суткам культивирования (Р< 0,05) и на 25 снова снизилось, но уже достоверно по" отношению к предыдущему: сроку наблюдения (Р^ 0*05).

Таким образом, в промастиготах вирулентных и ¿вирулентных штаммов - . цигохими'чесни выявляется ансиэность З52лочной ф-осфахазЫч Локализация, -чисдс^гракул фермента, 'ян---.-. тгнси'зно.стЬ окраски значительно варьируйг в'зависимеет/ от . о.рокос .¡сультйвйроваяйя/и. ё^рулентвдети',вгаамов'Г Гелий-нео- . "новый, лазерний. ллч' .зна^.хеяьно йзменяз-г., локализация фермен-'•■ • та, кнхенс^вность окраски его -гранул, с,а'.' влияет--на' интенск-•вность рёа::<"И}!,-а-следовательно, и, на .активность самого фгр-• мента в клетке- паразита,";'". '. • . -.'

ПегокС/даВа" з; кромаО?игэтах• геавайи?. в:-сулек-ных 'г...

авитзулентных зтаммоз при воздействий гелий-неонового лазе-ра. Пероксидазу, также как и ферменты и Щйу выявляли цитохими-чески (по Грехему Кноллю, 1963). •■ .

В промастиготах вирулентных штамиов Ь^та^ог - -15 МБ, 5 Д 4 ГЛ активность перокеидазыне выявлена. Единичные мелкие гранулы темно-коричневого цвета можно ввдеть в единичных паразитах а поздние сроки культивирования, на искусственной питательной среде на 3-4 пассажах.'

3 промастиготах авирулентных штаммов Ь.таЗог I МБ и 23 Е пероксидаза выявлена.».виде оченьгмелких гранул золо-.тистэ-кори'4не*ого пзета.',Число гранул, не превышало-2-3. Во всех случаях гранулы пероксидазы локализовались в непосредст-зенной близости от ядра клетки. На 15 день культивирования пероксздаза исчезает из цитоплазмы паразита^.

3 облученных ГНЛ. штаммах лейашаний число, локализация, интенсивность окраски грзнул персксидазыв промастиготах авирулентных птакмов практически не отличаются от промаетигот вирулентных зтаммов. Отяачие состоит в том, что гранулы, фермента исчезают из гютопяааш паразита на 7-9 сутки культивирования.

Таким образом,; яероксвдаза при цитохимическом методе-исследования выявляется только, в промастиготах авирулентных 'вгсшйаз.".. • ь.ааЗо^ . в незначительном количествена протяяе-» нии короткого периода культивирования на. искусственной питательной среде. '/..'..'."-'.'.•'.".

Лидиды в промастиготах лейзманий вирулентных.и авирулентных щтамм'ов при воздействии ГНЛ. Фосфолипиды ъ промастиготах вирулентных и авирулентных штаммов Ь.ааЗог вняв-ляли иитохимичесхи С по Гольдману, 1957), в виде коричневых гранул,;локализация и численность, величина которых; • в значительной степени зависит от вирулентности штамма,- возраста •культуры и знеэдего; воздействия.л в нашем случае ГНЛ).

Исследования показали, что число гранул фосфолипадов з промастиготах вирулентных ¡ггамаоз леЯЕманйй на 7 сутки культивирования составило 23,2+0,9%, но затем постепенно снижалось - на 15 сутки различие не достоверно СР> 0,01),

на 25 сутки достоверно (Р<0,'01). После облучения ГНЛ на 7 сутки культивирования число гранул в промастиготах вирулентных штаммов было выше, чем в необученных паразитах в эти ке 'сроки культивирования (Р< 0,05). До. мере увеличения срока • культивирования, так же как в необлученных промастиготах, число гранул фосфолилвдов постепенно снижается.

В промастиготах авирулентных Ьтаммов во все сроки культивирования число гранул было ниже такового в промастиготах вирулентных штаммов Ь.таЗог. Облучение ГНЛ привело к достоверному увеличению числа гранул ФЛ в промастиготах авирулентных штаммов в сравнении с необлученными штаммами. В целом число гранул ФЛ в облученных ГШ авирулентных' штаммах лейшманий полностью соответствовало таковому в необлученных вирулентных штаммах Ь.таЗог. . .

Исследования показали, ' что в зависимости от длительности' культивирования изменяется не только количество гранул §Л, но и их локализация и 1штенсивнрсть\щтохккическоЙ реакции. Так, в" промастиготах вирулентных штаммов, интенсивно окрашенных в синий цвет гранулы §Л „-'локализовались между кинето-пластом и основанием жгута (жгутиковым карманом). В то же вреия скопления гранул вблизи ядра имели менее интенсивную, светло-синш окраску. .

Таким образом, цитохимически,удалось выявить наличие фосфолилвдов в цитоплазме промастигот Ь.тг-зог как вирулентных, так и авирулентных штаммов (в последних в меньшем количестве). Облучение ГНЛ приводит к уменьвению содержания фосфолшидов, -а в авирулентных итахиах к их увеличению. 3 соответствии .с этим да допускаек, что -ГНЛ истощает, липидный (энергетический) потенциал прошстигот вирулентных штампов в процессе культивирования на искусственной питательной среде, но' увеличивает лиавдный потенциал промастигот авирулен-вных штаммов. Причина этого явления остается неясной.

■ ' Активность НАД.Н-дегудтзогеназы в 'промастиготах лейш- -маний вирулентных к авирулентных'штаммов, пт>'4 воздействии ГНЛ. „.Лоскояыу НАД.Н-дегидрогеназа является одним кз ферментов энергетического метаболизма эукариотичесйих клеток, ,,

мы этот фермент выявляли цитохимичесаи на мазках из культура паразитов. Ферменты в промастиготах выявляются в виде бордово-коричневых гранул, локализация и численность которых значительно изменялись в зависимости от вирулентности паразита и срока культивирования.

Б промах/тягот зируленгных .штаммов число гранул кента составило 12,7+0,53 на 7 сутки культивирования, на 15 сутки культивирования оно увеличилось незначительно (?>0,05) и восстановилось на 25 сутки культивирования. При воздействии ГНЛ уж§ на 7 сугки культивирования число гранул фермента до-стойаряо увеличилось (Р> 0,01) и продолжало нарастать по мерз увеличения срока культивирования, сначала до 21,9+0,43 и на 25 сутки до 23,0+0,89 (Fv 0,01).

В промастиготах авирулентных штаммов число гранул НйД.й-дегидрогеназы на 7 сутки культивирования составило 18,7+ ' 0,59* что достоверно выше, чей в промастиготах вирулентных 2?аммоз. На 15 сутки культмййрййания число гранул резно увели-. ч:йбсь4 но к 25 суткам несколько снизилось по отношению к 15 йуаtátt г^ультйБированИЯ, ЙО огноаениа к необлученным паразита {? > 0,001). ' .

fe 15 сутки оно-увеличилось достоверно .по отношения, Л 7 eyTtfáu, но й меньЗЭй степени» чей з необлучзнных штаннах. Ка 25 суг'Кй'Культивирования число гранул НАД.Н-дегидрогёназн ■ резйо снизилось до'8,4+0,49, что достоверно ниже, чел во всех предыдаих сериях наблюдения (Р <. 0,001).

Таг-гк* образом, в промастиготах . ь.тазог выявлена активность ЩД.Н-дегидрогеназы,• При этом в промастиготах. авирулегПйЬк гзгакмов гранул фермента значительно больше, чем в промастгйГс?ах вирулентных штаммов. Если в промастиготах вирулентййс згаммоз активность НАД-Н-дегидрогеназы практически не изменяется на всем протяжении культивирования, то в • прокагтяготах авирулентных штаммов она значительно:нарастает ■лс азре зулнткзярозания на. искусственной питательной среде. Зря г^лучеяяа'.дГНЯ 'активность фермента, в промастиготах. виру-, лзнгкых атамхаЗ: L.najor нарастает по мере культивирования,. а- з прамастггэгэрс авирулентных. лтаммог активность -фер-

шента сначала нарастает .по отношению к первым дням культиаи-рования и резко снижается.

заводы ,

1. Гелий-неоновый лазер, з зависимости от дозы облучения, обладает способностью как "активизировать,' так и угнетать рост промастигот вирулентных к авирулентных птакмов 1 ка;сг з культурах на искусственной питательной среде . Еысо-кие дозы. (25 минут) облучения на 70^.'подавляют рост промаст«*-тот и вирулентных, и авируяентных штаммов; .низкие дозы (ке более 5 «¡нут) не вызывают суифсгвведых" изменений культуральных . свойств; умеренные (12. минут) дозы:обладают способностью резко (в 1,5 раза) стимулировать рост промастигот на питательной среде, цри'чеы;::ави|уЯейтныештаммы более.чувстЕигельны к .стимулирующему воздействию гелий-неонойого лазера. - - '

2. Гелий'-неоношй лазер повышает жизнеспособность промастигот вирулентных и авйрулёнтных штаммов при; культивировании на : .среде, -что в 1,5 раза увеличивает продолжительное ть культивирования паразита без изменения основных культуральных и биологических свойств.

3. В-культурах'промастигот вирулентных к авирулентных . звтамыов уже на первом пассаже после облучения гелий-неоновым -лазером¿появляются морфологические изменения, зак-репляюдр!е£8«последущих поколениях-'промастигот, на 3-4 пасса-вах уродливые- формы ".паразита преобладает. над ;айычныии формами лейшыаний,. -что позволяет сделать -вывод о !^утагсннр:< влиянии • гелий-неонового лазера'на промастиготы' ь.пазог . е культуре '■.'.'.-,..-'

- 4. Облучение .гелий-неоновым лазеров культур промастигот-лейшманий .арируяёнгкьЬс здтаммЬв .приводят к появлению . вирулентности, а'-ыалови|улентща-:гштадай&-:К повыпению их ^/рулентности для белых нелинейных мызей. . Дополнительное, облучение - культур -в течение 12 минут приводит к увеличение 'вирулентности на 15,2055 л! генетг-1еско1?у .закреплению признака в легдедугкцих поколениях .паразита. . ; , : . ^ ',

Б.Оптимаяьнаядоза облучения гелий-неоновым лазером '•жеамт'-^а. -метайожизктдикастйгот -т.т&з«г .: 'как' вирулентны^,

так и авирулентных штаммов, о чем свидетельствует изменения уровня содержания в клетке паразита некоторых ферментов (кислой и зелочноЯ фосфатаз, НАД.Н-дегидрогеназы) л вклвчений (фосфолипиды). Характер метаболических изменений зависит от вирулентности паразита. 3 вирулентных штаммах Ь.яааог наблюдается снижение на 20% кислой фосфатазы, на 30% снижается содержание делечной фосфатазы, происходит незначительное изменение содержания НАД.Н-дегидрогеназы и фосфолипидов.

6. В промастиготах авирулентных штаммов наблюдается повышение содержания кисло?, фосфатазы на 40%, на 10% повышается содорг<ание щелочной фосфатазы, на 70% снижается содержание НЛД.'Н-^егиарогеназы и на -3(Й повышается содержание фосфолипидов. Характер метаболических изменений в промастиготах свиде— • тельствует о снижении уровня окислительно-восстановительного и энергетического процессов в промастиготах вирулентных и повидение этих процессов в проглас тяготах авирулентных штаммов.

7. Повышение вирулентности промастигот авирулентных штаммов ь.^а^ог под действием гелий-неонового лазера является следствием способности последнего активизировать энергетические и окислительно-восстановительные пропессы з клетке паразита, что открывает.перспективу использования гелий-неонового лазера в процессах управления вирулентностью паразитических простерших рода .1е1гУзаап1а. .

5. Способность низкоинтенсивного монохроматического гелий-неонового.лазера влиять, на культуральные и биологические свойства промастигот ь.яаЗог , регулировать их мета-

болизм показывает наличие на поверхностной мембране паразита фоторецепторов, способных, улавливать-энергии квантов по крайней мере с длиной волны 630, нм - длина волна квантов красного цвета, генерируемых лазерной установкой-.

\ .ЛРАККЧЕСКЙа ТЕКСМЕНД'АДН!

Облучение культур промастигот ..лейяманий' гелий-неоновым лазером в дозах, стимулирупших рост;.промастигот на искусственной питательной'среде, позволяет получить большой объем биомассы паразита,. в короткие срок::, /что необходимо при

получении вакцинного материала.

Облучение культур лрокасткгот i.aajor увеличига-tет вирулентность последних, что позволяет поддерживать в течение длительного' Бремени вакцинные штаммы или клоны паразита без изменения биологических свойств.

• Метод отличается простотой, эффективностью, надежностью, экономичностью и соответственно снижает стоимость вакцинных препаратов.

Материалы настоящей -работы могут быть использованы в проведении теоретических и практических' занятий на кафедрах микробиологии, инфекционных болезней и биологии университетов и недииичских институтов, что позволяет расширить знания студентов по систематике' и таксономии паразитов, по выявления их ферментных систем.

Результаты проведенных исследований включены в учебно-метсщичеекие рекомендации "Дктохимические показатели нейтрофилов "крови в опенке -эффективности терапии зоокоаного конного лейшканкоза", утвержденных Министерством здравоохранения Республики Узбекистан 28 мая 1930 г.

- СПИСОК НАУЧШХ РАБОТ, ОШьШШШЖ ПО ТЕМЕ ДКССЕРТАЦ/Х

1. Хайдарова Г.Й., Шамсивва H.H. Цитохимический профиль дейз-канкй: фосфат аза и яхпидв //Тез. докл. кау чн. кокф .ЦпИЛ Сам МИ - Самарканд, 1936,- С. 63-5?.

2. Ллескановская С.А., Хайдарова Г.Ы., Шаксиева H.H. Цитохимический профиль лейпмаяий в зггисшшсти от вирулентности штамма // Матер.конф.:"Молодые ученые и специалисты ускорению социально-экономического развития."- Самарканд,

, 1935.- С. 101.

3. Плескановская С.А., Квмадов Н.Ы., ХайдароЕа Г.й. НАД и КАД.Ф-оксвдаза в лимфоцитах, периферической крови :к2ей, зараженных дгташлами лейаманий различной вирулентности // "Биохимия сельскохозяйственных кивотных и продовольственная программа"--Тез.докл.Бсессозн.симпозиум.- Киев, 1953.-С. 60-61.

-4- Хайдарова 'Г-Н., Накалов Н.К. -Влияние лазерных лучей на

хулътуралъные свойства лейхманий //Тез.докл.научн.кснф. ЦН7.Л CavJH - Самарканд, 1969.- С. 48-49. 5. irace elenenta in pronastigotes of Leistaiania raajor treated with helium-neon laser. Khaidarova G.II., Pleskanovskaya S.A., ?.ish Ha-alov K.II. , Kavaa-Ogli A, A. //I3JA-7, Abstracts.-

Zagreb, Yugoslavia. --1S90. - P. 187.

c. -he level of copper, zink and Iron in the organs and tissues

of mices in experimental- cutaneous leishmaniasis. Pleakanov-skaya S. A. ,Kavaz-Ggli A.A., Tsoi C-. G, , Khaidarova G.i.h.Rish лауалсь H.M., Плесканозскач С.А., Хайдароза P.M. Ахтиз-

-осгь и тскглкззгхя некоторых ферментов и включений з

лрзглстяготах лейлмакий вирулентных зтаммов //Созр.пробл.

• :.:?д. паразите*. з Узбекистане. - Самарканд, 1993.-Ч. I -

С. 17-18.

3. Плесканоьская С.А., Накалов Н.М., Хайдароза Г.М. Влияние гелий-неонового лазера на морфологию промастигот //Созр. лребл.^ел.ларазитоя. з Узбекистане.- Самарканд, 1993.Ч. I.- С. 13-20. • Э. Хайцарова 7.М. Влияние гелий-неонозого лазера на рост лейЕманий //Проблемы, биологии и медицины.- 1995.- $ I.-С. 7-Э.

10. Хайлдрээа Г.¡<1.. Изменение уровня содержания липидов- в нейт-роф'/.лах нрозн при экспериментальном кожном лейшманиозе // Проблемы биологии.и медицины.-1997.1(2).- С. 71-72.

ПРИНЯТЫЕ СОНМЩЕНИЯ

ГНЛ - гелий-неоноЕкй лазер

' ЗКЯ - зоонозный кожный лейзманиоз

К5 - кислая фосфатаза

ПО - пероксидаза

.БАД.Н-д — никотинададдинуклеотвд-восстакоЕленная форма дегкдрогенаэа

НДД5.Н - никотинамиддинуклеоткдфосфаг-восстановлеккая ЛФ Ы Т® Л-т Л-и

Среда - среда Нови, Мак-Кила, Никольса

лейкоформулг фосфолипиды ■

-нейтрофилъг

лейкоциты

' ЛИИЙОЕИТЫ

Гэлий-неонли лазернянг лейшманийнинг" культурали хсссалари ва биолсгиясяга таъаири.

Яейамяниозла? одамлзрнинп кенг таряялгян наеаллиги булиб, унинг катижзси!Й! яуненинг 60 ттэалат.тзр-дга 12 и®i г* ятн снам кайэлзганади, су ечбчбйй геоаяй сдая парязлтозларяга кясзг талк-чро программалари гтзлаб ч^карилмокдаким, булар ха?ор-.-:гя согдтгенте спилят халнэро кенг^ТЛ(ТД?) ва ШЕСКО прогрзммаси (PA MAB кятяак.

'вяълумяк-» леЯпмяниозгар тэбиий - учог янфекцияларл хисоблч-нази. Унинг табиий учэгля-ря Узбекистан, Тутжганистон, Казахстан, Заказказьеяа дэзлатляридя учряб, бу ерларпа те'ря лейэмяниози кенг тарк=ггчн. Закятгина Уэбекистоннинг уз ид а тар йили 1000 якин тери ЛвЙ1ЭГЧКЙОЗЙ КПЙД ККЛИНГЯН* Бу'МуЯМЫОНЯНР мухимяиги туфайлн ЧХНЙ Гжяар ичига согликни саклаш- °м'лиётл олзидз одамлар паразятар . хчгчллаклчрини дазолашни чамарали уеуляарини далаб чикиа. зя амалиёт-г» ?ат-5ак. гглл»5П1Н1г амалга ошриш вазифаси турибд'я. -

Аниялзниэича, лейшманийнинг промэе*пго*ааря узянияр биолорпт? за хультурали хоссядаряни', баъщи ташки■мухи» та'1йЯри остнда узгар-?:!рягл (мйсялэн.физик факторлар таъсирй остина). Юкорида бзён килянгзи хоДатни. эътиборгз олиб биз ©лзяяязра-яуяййагп вазяфяни

гРГЙДИК-. '

1. Сунькй муздалда лейггмдагЗ проыастат'йтяаринйнг гелий-неон лазери таъвйрй бетида буяадиган уеиш 'зсуйуййй'Марини урганшл.

2. гелий-неон таъсиои" остида метаболизм жграё-» ж: ^глусиятдярийи огаидданит-к^йтарилиш узгарищининг аЯрпи феризт,-; ляр фчолиятлКи мигслида (кислая фоефотаэа,перокеидаза, НАДЩ

■ за НД12 дегизрэгеняз'з зя липидлар микяорининг-узгаризи) паразит хугайларида килип.

3» ГедпЯ-несн" z-зед тазеири огтидз промаетиготларнинг зяру—

• .се?аах ху555йя«?япря»инг узгаригиня эяиклаи.:'-

Геляй-нёочля' лазер, билан «уряая<гярра!»га- лейшяниЯ промаетяго— . syksaü этхяэдан узидини. тезлязтяряа вкя 'яамайтария .'укямг зээягяга боглик эйаняипг анхкхянси.' •

Гел:гЛ-~еонли лазер бялан одйамяий. промавЛгзтяя^яяя' «урла»—

• г:г^г»нзз улар зярулевтлиРи о:-: стгчдондарни аарарязятяртанаа «эеиех

»aTTTTTf- в

• Садда. паразитар 'з«"кти»;-сафатига лей2дгя"нийлэр мжзлягэ-гвлттй— неоаля лазеряинг мугагенляк. хуьусия?» амякландя-.

Виружетли на авкрулонтаи штеммларнинг лейсманиялврк ?елий-неонли лазер таъеири остидя метаболизм процеесини узггриаи еикк-Л8НЕИ.

¿..тгуос промавгиготлврииинг сукьий муздатда гелий-неонли лазери •тяъсири остидв усишига ияобий таъсир хилувчи дозаеи улзр биомассаси хашини "оширади-яя бундан лейшанияга кзршк вакцина ивляб чикаришт кенг кулламдэ фойдзлвнил мумкин.

MMUffijos- № HBiit3M-asoH uass os otltuis

ÛHAEACTERX3ÏIC3 ÀND BTOXOGÏ OP LBISHMAHZASI3»

Leiainaniaflin ia a widely distributed species of person'a disease»abûvo 12.- million ûè» in 80 countries of world are stiff are d annually upon -¿his di30aaa. In. this connection the internat ianal programs are developed on the fig.lat with, the important person's parasites including, the leishmaniasis.These prograaa are* ÎBR program and PAH UAB aa -.veil.

It's known that leishmaniasis ia natural fooua infec-tion.In native foci functioning o«» Uzbekistan territory,îurS-âanio tan,Kazakhstan,TranseauoeuJian countries are widely distributed the dermal leiafttaaniania^ln Uzbekistan . being registered evei^r year aver 1000" cases- of: dermal leishmaniasis*

Taking into account the• importance of problem,it ia supposed. in the near future to elaborate and inculcate on the practise of health, aoiviaetf theeffective.iaethcrda of treatment and prophylaxiai ot the peraott's parasitical diseases.

It ia established thatpromootigoteaof leishmaniasis to a considerable extent have.. bee$ changing its culture and biologicalcharaot*xiatica ; under the « action * of . some factors oj environment including the ghyaical factors»

Hence . we brought our attention aoûtioneii below problems» ■V. Study the peculiarity of rice on the artificial culture medium -promaatigot I.-ma3or under the influence of the helium-neon laser depending on the virulent strain, of parasite.

2. Investigation the. metabolism of promoatigot L-najor peculiarity being subjected under the influence, of helium-neon laser-, by the . example the activity of some -ferments of oxidation-rediction metabolism,/acid phosphatase,peroxidase, HAL. - and HAS? dehydrogenase, -and the level .of content the phospholipid in parasite - cell/.

3. Determinate , the., degree of influencé of. heliux-neoa laser on the virulence of promoatigot 1-major.

It's established that heluim-neon laaecr depending of the doae of irradiation are passeased of ability for both stimulate and suppress the prcsoatogot I-major rise on the

artificial culture médium.

"It is • xevealed. the ability of helium-neon laser tc --raise "the virulence L-major for the white nonlinear mice.

It • is revealed also the rrrutagenous effect helium-neon laser with respect to parasitic protozoa,after the example of 1-major.

It is shown the actual change of metabolism promastogot LsishmaniasiEvirulent and avirulent strains.

Irradiation ..the culture of. promostigot L-major by heliumneon laser in doses stimulating the rise of promostigot on thé artificial culture, medium,leave gaining the large volume of biomass of /parasite in the shortest .tone that is nace-assxy for -Lr-e .getting "the vaccinal „material.