Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Конверсия агропромышленных отходов в богатую белком биомассу микроспорическими грибами

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Конверсия агропромышленных отходов в богатую белком биомассу микроспорическими грибами"

тшшгасий государственный уштазротия

На правр* рукописи

■МАЧАВАРИАНИ Марина Отяровна

УДУ 663.15(088.8)

КОНВЕРСИЯ АГРОПРОШШЕШОаС отходов В БОГАТУЮ БЕЛКОМ БИОМАССУ ШКРОСКО-■ ГШЧЕСХШ1 ГРИБАМИ.

03.00.07 - Микробиология

V

АВТОРЕФЕРАТ диссергацин на соискангз учёней оге^пчп кандидата биологических наук

Тбилиси - 1992

Работа выполнена в Институте биохзиии растений им.С.В.Дур&швдзе АН РГ.

Научный руководитель: кандидат биологических наук, старший

научный сотрудник Л.Квачадзе.

Научг консультант: . доктор биологических наук, академик

АН РГ, профессор Г.И.Квесигадзе.

Официальные аппспгкты: доктор биологических »ау:;, профессор

Г.И.Мосиашвили.

доктор биологически;: наук Г.З.Гршорашвили. :

Ведудая организация: Аграрный университет РГ.

1 с*-

Защита состоится "./5* Лу "1992 г. в /3 часов на заседании Специализированного совета К.057.03.17 Тбилисского государственного университета ш. И.Джавааишвили' (г.Тбилиси, 380043, ул.Угаверситетская 2).

С дчссертадией можно озн ломиться в библиотеке Тбилисского государственного университета им. И.Двавашшили.

Автореферат разослан " /2 ' " 1992 года.

Учёный секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук, доцент

^ ЦИЩАДЗЕ Н.М.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТН

Ait туа ль кос ть иробi змч. В настоящее время болылуи актуальность приобретает проблема восполнения рсз караотапшеге дефицита коргзвого белка. Решение этой сроблемы лишь путём ангенсифк-кадии традиционного сельскохозяйственного производства кормов не представляется реальным, что и обусловило интерес к получении кормового белка, в частности, пз возобковже.лгх целлюлозо-содержащих отходов сельского хозяйства и пицепой промышленности посредством их микробиологической конверсии. Этот путь представляется тем более перспективным, так как позволяет параллечько решать многие задачг сиязанн1'з с охраной окрукашей среди. Бго-конверсия отходов открывает возможность регулируемого производства белковых продуктов опирающегося на прочнув промышленную базу о гараатированншл сырьевым обеспечением, так как оби 1Я масса отходов даче и пределах республики Грузил исчисляйте я сотнями тысяч тонн.

В этой связи особый интерес представляет использование микроскопических грибов, яродуцируюгдях широкий спектр ферментов, способных не только гидрегазовать природную целлюлозу отходов, но и давать целый ряд биологически активных соединений.

Цель и задачи исследования. Цель исследования состоя, i в конверсии целлялозосодеркащих отходов микросколическгми грибами в богатую белком биомассу кормового достоинства.

Для достижения этой цели в настоящей работе поставлены следующие задачи:

1. Изучение химического состава кукурузных кочерыжек, цитрусовой муки и помидорных отжимов.

2. • Подбор штаммов макроскопических грибов - продуцентов деллюлаз ц оптимальных параметров процесса биокошерсии пие-указанных целлюлозосодер»- чос отходов с целью получения богатой белком биомассы.

3. Определение биологической ценности биомасс, подученных при утилизации кукурузных кочерыжек, цитрусовой муки и пэыддор-ннх отуимов.

Научная новизна. Наказана еозиожость биоконвсрсик кукурузных кочерыжек, цитрусовой муки к пемлдорют утесов грг*о-ЙТЛШД'Я м'псрсскопгш'скгс-кт rjptffoVH A.-rporgillus ten .-ve AT-'S'JO,

Spoiotrichum pujverulen-tum ИБР-I И CUaetomiuni tiiepaophile. Предложены схемы утилизации каздого из указанных отходов определённым штаммом гриба, обеспечивающие максимально возможный для данного отхода выход кормового белка.

Апробация работы. Основные результат работы били доложены на II Всесоюзной конференции "Новые источники пищевого белка" (Кобулети, 1986), Всесоюзной конференции "Выделение, очистка и анализ биологически активных соединений" (Сухуми, 1887), Международной конференции "Интербиотехнология" (Братислава, 1989).

Публикации. По полученным в диссертации материалам опубликовано 8 печатных работ.

Структура и объём работы. Диссертация изложена на страницах машинописного текста. Иллюстрирована 9 рисунками и 30 таблицами. Работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов, обсуждения, заключения и выводов. Список литературы включает 155 наименований, из них 75 иностранных.

ЭКСПШШ1ТАЛШЯ ЧАСТЬ Материалы и методы исследования.

Объектом исследования служили высушенные и измельченные неллюлозосодержшие отходы - кукурузные кочерыжки, цитрусовая Mika и помидорные отжимы. Степень помола отходов составляла Зръ-400 микрон.

Для получения белковой биомассы были использованы герыо-срДлькые нетоксичные и непатогенные микроскопические грибы -продуценты целлюлаз из коллекции типовых культур микроорганизмов лаборатории биотехнологии ИБР РГ :

1. мутанткнЙ штамм Aspergillus terreua АТ-490,

2. Sporotriehua pulverulentum ИБР—I,

3. Chaetoaium thermophile.

Общий азот определяли согласно методике Кьелдаля с ис-гользованиеы реактива Несслера (Конарева, 1973), целлюлозу -методой Алдеграфа (Apdegraif , 1969), определение золы про-

родили методом Оболенской (Оболенская и др., 1965). Аминокислотный состав определяли по методу, предложенному Конаревкм (Конарев, 1973). Содержание свободных жирных кислот определяли методом газовой хроматографии, для количественного определения которых липндн выделяли по методу Сюлча (Polch et al., 1957). Фосфор, кальций и каротин определяли по методам, описанным в Инструкции по анализу кормов и растений (IS68).

Общую целлюлазную активность определяли по фильтровальной бумаге (ФБ) (iiaacleia, Reesse, 1954).

Для определения ксиланазной активности использовали I.0JÎ ксялан з 0,05 M Уа-цитратном буфере при pH 5,3. Для прекращения реакции и определения редуцирующих Сахаров в реакционную смесь добавляли 3 мл динитросалициловой кислоты (Bailey, I9S0). Полученный раствор кипятили в течение 5 мин, после чего охлаждали и измеряли интенсивность развивающейся окраски на спектрофотометре при 540 нм C-lillen. , 1959).

Определение гемииеллюлоэы проводили согласно методике каткевича (Каткевич и др., 1980), лигнин - по методу Коншп и Румпе в мод-.¿икании Комаровой (Комарова и др., 1985).

Биомассы получали глубинным культивированием зышаухазан-¡шх термофильных микроскопических грибов в питательных средах следующего состава (%):

1. для A. terre из АТ-490 и S.pulverulentura ИБР-I: liako-j -0,3; Ki^P04 - 0,2; ligSO^'THgO - 0,05. Целлюлозосодержащие субстраты - 3 —5/е в зависимости

от отхода.

2. для Ch.thermophile : KHgPO^ - 0,68; (HH4)2S04 - 0,13; ligSÛ^-THgO - 0,05; СаС12 - 0,15.

.Целлюлозосодертащие субстраты -4 JS

Исходный pH среда 4,5. Стерилизацию питательных сред проводили при I атл в течение I ч. Культивирование осуществлялось на термостатированной качалке (п=200 об/мин) в 750 мл конических колбах, содержащих 150 мл питательной среды; температура культивирования 40°.

Токсичность полученных биомасс определяли по кожной пробе на кролике, согласно методическим рекомендациям по ветеринарно-санитарной оценке кормов микробиологического синтеза (1984).

Статистическую обработку дэнных проводили по Ракицкому (Ракицкий, 1973).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЭДЕШЕ

I. Химический состав использованных отходов, подбор шгшлюв микроскопических грибов - продуцентов целлюлаз, оптикалыше параметры процессов биоконверсии.

С целью выявления перспективности использования целлюло-зосодерааыих отходов (цитрусовая мука, кукурузные кочерыжки, помидорные отг.ш.ш) в качестве субстратов для микробиологической конверсии бы., изучен их химический состав; полученные данный представлена в Таблице I. Оказалось, что ка-дай из них содержит достаточное количество целлюлозы и может служить источником углерода в питательных средах при глубинном культивировании микроскопических грибов - продуцентов целлюлаз.

Таблица I.

Химически состав использованных отходов {%). I - цитрусовая мука, 2 - помидорные отними, 3 - кукурузные кочерыжки.

Отход Влажнеть Сырой протеин Целлюлоза Геми- деллв- лоза Лигнин Жир Каротин , кг/кг Зола Са Р БЭВ

I 13,3 7,05 17,9 9,8 5.1 3.1 48,0 2,6 0,6 0,10 66

2 7,2 3,86 22,7 1,9 13,8 9,3 7,0 5,0 0,7 0,49 52

з 10,5 4,62 31,1 10,1 16,8 2,0 6,0 1,0 0,8 0,21 54

Согласно этой таблице, по содержанию столь ценного вецес-тва, как каротш-:, яелякуипсл нредиестпешшком витамина А, цитрусовая мука выглядит гораздо предпочтите инее. К тому ке в ней содержится большее количество сырого протеина на фоне пониженного иодер:«лши целлюлозы.

Наряду с отбором субстрата при биоконверсии необходимым является и выоор штамма микроорганизма. Как показывает Таблица основными компонентами изученных субстратов являются целлюлоза, геющеллюлоза и лигнин. Перспективными микроорганизмами для конгч^сир. указанных суб1 греков могут служить микроскопические г; 1С»: - продуценты целлюлаз. *

Учитывал эффективность использовакъя в биотехнологлчески { процессах термофильных микроорганизмов, были подобраны п^сду-центы целлюлаз термофильные нетоксичные п непато"енные микроскопические грибы Aspergillus terreus АТ-490, Sporotn'.chtin pulverulentura ИБР-I и Cliaetomium t jermophile. При этом надо отметить, что /.terreua АТ-490 и Ch.tharmophlle синтезируют эндо^люканазу, _р-глюнози^азу и ксиланазу, a S. pulvertilentum -- эндоглюканазу и ксиланазу.

Оказалось, что оптимальный -возраст посевных культур исследованных микроскопических грибов составлял для A. terreus AT—1ÜÜ 14 суток, для S. pulverulentum ИБР-1 - 12 суток, а для Ch. ther-mophlle - 18 суток.

В Таблице 2 представлено оптимальное процентное содеркагио каждого из использованных субстратов в питательных средах для всех исследования вариантов биоконверсия: при этом продолви-тельность биоконверсин составляла 3 сутки. Следует ответить, что образовавшиеся в результате биоконверсии биомассы существенно отличались по содержанию в них сырого' протеина.

Таблица 2.

Оптимальное содержание субстратов {%) в питательной среде и соответствующее им содержание сырого протеьна {%) в полученных биомассах.

Штамм A.terreus АТ-490 S.pulverulentum ИБР-1 Ch.thermrphile

Субстрат4^ Субстрат Протеин Субстрат Птотеин Субстрат Протеин

Цитрусовая мука 4 15,5 3 13,0 4 ' 9,0

Помидорные отжимы • 5 18,0 4 16,4 4 21 6

Кукурузн»е кочерыжки 3 8,6 5 3,9 4 7,5

2. Динамика процессов биоконверсии.

При оценке перспективности того или иного пути биокспвср-

сли следует пршпмать во внимание не только процентное содерлся-ние сырого протеина в образуемой биомассе, выр^енной на дая;;ом субстрате, но и количество самой бкомасси, та; век малая e¡: i-o-

личина даже при высоком содержании в ней белка ставят вод сомнение возможность её рекомендации в качестве производимой в промышленных масштабах кормовой добавки. Поэтому была исследована динамика накопления биомассы и процентное содержание в ней белка в течение пяти суток при бкоконверсии отходов всеми тремя использованными штаммами микроскопических грибов; соответствующие данные приведены в Таблице 3.

Таблица 3.

Динамика накопления биомассы (г) при биоконвероии целя»-лозосодеряэдшх субстратов в течение пяти суток (графы I) и содержание в них сырого протеина (%, графы 2).

^хСубстраг Цитрусовая Помидорные Кукурузные

мука отжимы кочерыжки бк

Штамм I 2 I 2 I 2 суют

4,5 7,1 6,0 3,9 3,0 4,6 0

4,6 8,3 6,1 4,8 3,0 5,3 1/3

А.terгeuз 512 Г2,0 6,6 8,5 3,2 7,0 I

А-Г-490 6,4 16,2 8,2 14,0 3,8 8,60 2

6,2 15,5 8,8 18,0 3,7 8,64 о о

5,1 13,0 7,8 16,4 3,6 8,2 4

4,2 10,2 6,5 12,6 3,4 7,9 5

3,4 7,1 4,8 3,9 4,8 4,6 0

3,6 5,4 5,6 5,1 4,5 £/3

3. рх11тоги!еа1ив 3,9 9,3 6,2 11,0 5,7 4,2 I

ИБР-1 4,6 13,6 7,1 16,5 6,2 3,9 2

4,8 13,0 7.1 16,4 6,4 3,9 3

4,5 11,2 6,2 14,8 6,3 3,7 4

3,7 8,0 5,6 II,2 6,1 3,4 5

4,5 7,1 4,8 3,9 3,8 4,6 0

5.1 8,8 5,1 5,6 3,9 4,9 1/3

6,2 11,9 5,6 11,6 4,2 5,7 I

СЬ.'ЪЬегиоркИв 6.0 11,4 6,5 17,0' 4,7 7,0

5,5 9,8 6,9 21,6 £,0 7,5 3

5,0 8,8 6,8 18,7 4.5 7,1 4

4,6 8,2 5,9 15,0 3,9 6,9 5

Представленные в Таблице 3 данные показывают, что максимальное процентное содержите сырого протеина в биомассах, подученных в результате биоконверсии наблюдается в разные сутки как для каздого субстрата в зависимости от культивируемого на нём микроскопического гриба, так и для каздого гриба при конверсии им разных субстратов. В Таблице 4 приведены соответствующие сутки достижения максимальных процентных содержаний сырого протеина в биомассах.

Таблица 4.

Оптимальное вреда (сутки) выращивания макроскопических грибов.

Субстрат A.terreus АТ-490 S.pulverulent um ИБР-I Ch. thermophil e

Цитрусовая мука 2 3 I

Помидорные отжимы 3 2 3

Кукурузные кочерыжки . 3 3 3

Следует отметить, что в эти же дни достигается и машинальное количество биомассы, однако это обстоятельство скорее всего есть результат совпадения, а не какой-то закономерности.

Что касается конверсии кукурузных кочерыжек микроскопическим грибом s.puLverulentum ИБР-I, то в этом случае, несмотря на некоторое уменьшение процентного содержания сырого протеина в биомассе, его абсолютное количество на третий день достигает максимума; в пересчёте на 100 грамм биомассы оно составляло исходно 22 г, а на третий день - 25 г. Следовательно, л в атом случае количество сырого протеина в биомассе растёт, однако опережающий рост количества собственно биомассы скрадывает рост процентного содериаяия в ней сырого протеина. Отсюда становится очевидным, что представляет интерес оценить во времени изменение содержания сырого протеина на ICO г биомассы, а ещё лучше -на 100 г исходного субстрата, так как именно этот показатель должен предета?лягь наибольший практический интерес в смысле оценки эффективности того или иного пути биоконверсии.'По этому показателю приоритет следует отдать процессу биоконверсии помидорных отжимов кикрсскопическш грибом C2i,tber.7iophlle .

Однако данный показатель, при всей своей видимой объективности, не даёг возможности оценить истинную эффективность действия отдельно взятого микроскопического гриба, так как каздый из субстратов содержит неодинаковое исходное количество сырого протеина в субстрате. Поэтому представляет интерес оценить величину отношения абсолютного прироста сн]юго ярогеииа к исходной массе субстрата, т.е. абсолютный прирост сирого протеина на единицу массы субстрата. Очевидно, что эта безразмерная величина мояег служить показателем эффективности процесса биоконвер-С1Ш в смысле синтеза ьшкроскоаическки грибом, сырого протеина при его культивировании в питательной среде, содержащей конкретный субстрат в качестве единственного источника углерода, В Таблице 5 представлены члененные величины данного показателя эффективности для каздого конкретного случая.

Таблица 5,

Величина показателя эффективности процесса биоконвереш целлшозосодержащих субстратов микроскопическими гркбамг.

---------- Субстрат""*""—•— А.кеггоиз а.ри1уега1еиЪ. ИБР-1 Ch.th6nacphl.lo

Цитрусовая ыука 0,160 0,Ш 0,091

Помидорные огзшмн 0,226 0,207 0,271

Кукурузные кочершки 0.С63 0,006 . 0,054

Как видно на этой Таблицы, ш данному показателю наиболее &йфек'»ш!1ш оказывается вновь процесс кошения помидорных о геймов ииарооковнчеекпм грибом сь.*ьемлор]>±1о; еиу кта, немного уступает А,4«зггешз АТ-490, а на третьем месте оказывается з.ииХуе-гиЗ-оагия ИЕР-1. При этоы следует оораг'кть вникание, что вое три «аилучших варианта водучэдш нри исвользованаи в качестве нсгоч-няка углерода поиздорных оташлов. Цитрусовая мука несколько уступай!' по эффекяшаосад' поаддорнин отазмам, я куяшзнне коче-рнхка оказались самым кеэфхекппвньш видом субстрата п сшсле еннтееа на них сырого протеина в процесса бкокоигерсии ъзаоглцо-ваннымн в работе шткроскопичесхжма грибшк. Предотазлккт интерес сравиенва иоказагеаей эффективности, если за 1005» принять ыакск-ияяыгоВ из ивх, т.е. 0,271; Габляца 6 ядлисгрвдгвг огя ведошш.

• Таблица G.

Соотношение показателей эффективности биококверсш по сырому протеину {%) в различных вариантах.

Штамм Субстрат A.terreus АТ-490 S .pulverulent. ИБР-Г Ch.thermophile

Цитрусовая мука 59 41 33

Помидорные отжимы 84 76 100

Кукурузные кочерыжки 23 2,2 20

Как видно из Таблицы 6 наихудший показатель (2,2%) получен при бшкоггверсии кукурузных кочерыжек микроскопическим грибом S.pulverulentum ИБР-1.

Кроме оценки белковой эффективности биоконверсии необходимо уделить особое внимание ещё двум показателям: относительному приросту сырого протеина и показателя того, во сколько раз выросло г;го количество по сравнению с исходным (т.е. "разовый прирост"). В Таблице 7 представлены оба эти показателя.

Таблица 7.

Относительный (графы I) а "разовый", (графы 2) приросты сырого протеина в разных вариантах бпоконверсии при его максимальном содержании в биомассе. (Относительный прирост приведён в процентах).'

Штамм Субстрат A. tcrreua АТ-490 S.pulverul. ИБР-1 Ch.thermophile

I 2 I 2 Г 2

Цитрусовая мука 224,4 3,2 158 2,6 130 2,3

Помидорные отжимы 584 6,8 536 6,4 703 8,1.

Кукурузные кочерыжки 136 2,4 12,6 1,12 117 2,2

В оптимальном по сырому протеину олучае (Cfc.thermophlle, помидорные отяимы) его количество увеличилось в 8 раз относительно исходного, а относительный прирост составил приблизительно 700?'. Б случае самой неэффективной по сирому протеину бкокок-версии (ñ.puivcruientura КБР-I, кукурузные кочерыжки) эти ?л показатели раита Г Л;'; " 12,6,». Следует отызгнт'», что Сй. tiento -

pililo осуществлял конверсию остальных двух субстратов (цитрусовая мука и кукурузные кочерыжки) менее эффективно, чем A.ter-геиа 11-490 и 3 .pulverulentua ИБР-I в случае цитрусовой муки. Как видно, химический состав помидорных о'тжшов оказался для Ch.tbexmophile наиболее сбалансированным в сравнении с двумя остальными субстратами, т.е. высокая эффективность именно этого варианта свидетельствует не сколько о высокой эффективности самого Ch. theraophile, сколько о богатом наборе необходимых для тазнедеягельности этого микроскопического гриба химических веществ в данном субстрате, .. . '

Следует обратить внимание на скорости роста биомасс и количеств содерзащегося в них.сырого протеина на разных стадиях процесса биоконверсии; соответствующие данные приведены в Таблице 8. Эти данные, хотя и являются усреднёнными на каждом отдельном интервале, всё же служат объективными показателями процесса накопления веществ.

Таблица 8.

Скорости роста биомасс (.1(Г®, г/ч) и содержащегося в них сирого протеина (Л0~^, %.в час) при различных вариантах биоконверсии цедлолозосодераацих субстратов, X - цитрусовая мука, к - помидорные отякмы, 3 - кукурузные кочерынки.

^Штшм A.texraua "A'í-490 S.puiverulen. ИБР-I Ch. thsrmoj .l-dle

*бк.xj I 2 3 I О 3 I 2 3

Пе-рвие биомасса 1,3 1,3 о' 2,5 ~ * -' 3,8 7,5 3,8 T ■ X , w

8 часов протеин 15 II 9 ТО 21 - 21 21 3,8

8-24 часа Оюшсг-а протеин ■3,8 23 3,1 23 1,3 16 1 Q 9 5,0 28 3,8 C,fi 19 3,1 39 2,9 5

Вторне сутки биомасса протеин *> С 18 6.7 23 2,5 3 2,9 Л.0 3,8 23 2,1 -0,8 О 3,8 .<-»£ 2,1 5,4

Третья Су1КЯ биомасса ПрОТЫШ -0,8 -3 2,5 17 -0,4 0,2 0,0 6 0 г 0,4 0,8 -г, i -6 1,7 .19 1,3 2,1

Четвёртое сутки биомасса прогони -4,5 -10 -4,2 -7 -0,4 -2 -1,3 -8 -37 -6 -4,2 -2,1 ""j -J'2 -1,7

Шп'ке сугкя . CKOiwoca протеин -3,8 -12 -5,4 -16 • -О.Р -1.2 -3,3 -13 о р О -15 -0,8 -1,7 -2,5 . . 3 -2.S -2,5 -0,8

Как из этой Таблицы на определённых стадиях в каздом

случае наблюдается наиболее интенсивное накопление биокассы, а также содержащегося в ней сырого протеина, хотя эти максимальные значения приходятся порой на разные временные интервалы. Следовательно, интенсивное увеличение биомассы не означает, что С1-оль яе интенсивно происходит на данном этапе возрастание количества в ней сырого протеина, т.е. нет корреляции, хотя знаки скоростей во всех случаях совпадают; исключение составляют лишь третьи сутки бшконверсии кукурузных кочерыжек микроскопическим грибом АЛеггеиа АТ-490.

По процентному содержанию сырого протеина наилучше данные получены при биоконверсии помидорных отжимов грибом СЬдьегио-рМ1е (21,6%). В этом случае скорости накопления биомассы и сырого протеина не так велики, как при биоконверсии этим же грибом цитрусовой муки, но сам процесс накопления биомассы продолжительнее и максимум достигается лишь к копцу третьих суток. Скорость начинающегося на четвёртый день лизиса равна 83 мг/л-ч, в то время как начальная скорость накопления биомассы в этом случае в 3 раза выше.

Все три исследованных в работе микроскопических гриба являются продуцентами ферментов целлюлазного комплекса, секретируя во внеклеточную среду соответствующие ферменты. Следует отметить, что соотношение компонентов этого комплекса для каждого из указанных микроскопических грибов Зависит от внешних факторов и не может быть установлено в каждом варианте биоконверсии на разных её этапах. Вместе с тем очевидно, что их совместное действие на целлюлозу субстратов обеспечивает в питательной среде то количество Сахаров, благодаря которому в микроскопических грибах протекают метаболические процессы.

Согласно Таблице I максимальное количество целлюлозы содержится в кукурузных кочерыжках, а минимальное - в цитрусовой муке. Однако, процесс конверсии кукуруз шк кочерыжек оказался наименее эффективным. Причиной этого может быть больная степень кристалличности целлюлозы кукуруздах кочерыжек и, следовательно, малое содержание в ней аморфных участков.

Е Таблице 9 представленч данные, ялтестрлругапь динамику процесса утилизации целлюлозы попользованных в работе субстратов во ловх изучениях вариантах биоконэпрсия. Согласно этой тсблтце

в наибольшей степени утилизируется целлюлоза цитрусовой муки, при её конверсии грибом АЛеггеиа АТ-490; в этом случае 42,2$ целлюлозы претерпевает гидролиз. В наименьшей степени этот процесс затрагивает целлюлозу кукурузных кочерыиек; в лучшем случае (АЛеггеиа АТ-490) было утилизировано 21,5^ этой целлюлозы .

Таблица 9.

Утилизация целлюлозы в процессе биоконверсии целяюлоэо-содерзадах субстратов различными микроскопическими грибами.

ШТАММЫ бк сутки Цитрусовая мука' Помидорные • отжимы Кукурузные кочерыжки

г % г а! /« г %

0 0,81 100 1,25 100 0,93 100

1/3 0,72 89,4 1,17 93,6 0,90 96,8

I 0,65 80,7" Г, 10 88,0 0,85 91,4

АЛеггеив АТ-490 2 0,52 64,3 0,89 71,2 0,82 87,6

3 0,48 59,6 0,82 65,6 0,78 83,9

4 0,47 58,4 0,79 63,2 0,75 80,6

5 0,47 57,8 0,78 62,4 0,73 78,5

0 0,61 100 1,09 100 1,49 100

1/3 0,59 95,9 1,01 92,7 1,49 100

I 0,54 88,5 0,87 79,8 1,48 99,3

2 0,49 80,3 0,74 68,3 1,48 99,3

3 г.'гуехихе^ит 3 0,45 74,4 0,67 61,5 1,47 98,8

ИБР-1 4 0,43 70,5 0,64 58,7 1,46 98,0

5 0,42 68,8 0,63 57,8 1,46 98,0

0 0,81 100 1,09 100 1,18 100

1/3 0,74 91,3 1,03 94,5 1,16 98,3

I 0,65 80,5 0,90 82,6 1,13 95,8

сь.^егторьие 2 0,60 74,5 0,78 71,6 1,09 92,4

3 0,58 72,0 0,70 64,5 1,06 89,8

4 0,58 71,4 0,66 60,6 1,03 87,3

5 0,58 71,4 0,65 59,6 1,01 85,6

Следует откетигь, что АДеггеиа АТ-490 продуцирует гораздо более активные ферменты цел.те лая кого комплекса.

Для оценки эффективности процесса биоконверсии целлюлозы в белок необходимо знать прирост сырого протеина на единицу массы утилизированной целлюлозы, исхлдно содержащейся в субстрате; в Таблице 10 представлены данные, полученныз в результате расчёта этой величины для каждого случая биоконверсии.

Таблица 10.

Прирост сирого протеина на единицу массы утилизированной целлюлозы.

—Штамм А^еггеиа З.ри1уехи1. СЬ. ^ЬепаорЬИс

Субстрат АТ-490 ИБР-1

Цитрусовая мука 2,48 2,37 2,56

Помидорные отжимы 3,16 2,83 4,19

Кукурузные кочерыжки 1,21 1,42 1,74

По этому параметру наиболее эффективен в случае конверсии помидорных отжимов гриб СЬ^ЬегпшрЫХе; так как единица ь/лсси утилизированной целлюлозы приводит к синтезу 4,19 единиц массы кормового белка. В худших случаях (кукурузные кочершяси) этот показатель варьирует от 1,2 до 1,7.

3. Химический состав биомасс АДеггеоз АТ-490, 3.ри1теги-1еп1;ит ИБР-1 И СЬ. 1ЬегпорЫ1е, выроаенных на цитрусовой муке, помидорных отжимах и кукурузных кочеркдаах.

Из Таблицы 3 видно, что в течение 5 суток биоконверсш каждого из использованных субстратов, в определённые дни достигается максимум процентного содержания сырого протеина в биомассах. Б связи с этим отобранные биомассы в дни максимума по сырому протеину были подвергнуты более тщательному анализу. Полученные данные приведены в Таблице II.

Следует обратить внимание на го, что для объективной оценки изменения содержания основных химических компонентов, определяющих состав субстратов в ходе биоконверсии их в богатую белком биомассу, недостаточно обратиться к значениям, приведении-,: в Таблице I и Таблице II, так как указанные в них проценпше содержания взяты в первом случае от массы исходных субстратов, изначально находившихся в питательной среде, а во втором - от но-

Таблица II,

Химический состав биомасс (%) в момент максимального содержания в них сырого протеина. Субстраты: I - цитрусовая мука; 2 - помидорнне отжимы; 3 - кукурузные кочерыжки. Штаммы: I - А.Ъюгеиа АТ-490, 2 - Б.риХуегиХепЪша ИБР-1, 3 - СЬ. 4ЬегиорЫ.1е.

Субс- Влаж- Сырой Целлю- Жир Каро-

трат ность лооте- лоза тин, Зола Са Р БЭВ Штамм

ин мг/кг

9,5 16,2 8,1 1,89 50 6,17 0,68 0,68 48,7 I

I 9,7 13,0 9,5 2,66 40 5,53 0,78 0,45 58,8 2

9,9 11,9 10,5 2,25 45 5,34 0,61 0,68 51,3 3

8,2 18,0 9,3 4,51 6,0 3,05 0,70 0,47 45,6 I

2 8,9 16,5 10,4 6,69 20 3,10 0,76 0,29 38,2 2

9,6 21,6 10,2 7,39 I? 3,25 0,53 0,68 42,8 3

10,4 8,64 21,6 0,68 4,0 2,72 0,52 0,25 49,0 I

3 10,4 3,86 22,9 6,31 0 2,99 2,18 0,13 51,8 2

10,0 7,50 21,2 1,45 1.0 3,15 0,77 0,48 50,3 3

Таблице. Г2.

Содержание основных химических компонентов в исходных цел-люлозосодораалшх субстратах (иг), внесённая в конверсионные колб!;

Субстрат Нарогии Са Р Жир Зела Штамм

Цитрусовая мука 216,0 163,7 216,0 24,8 18,8 24,8 4,5 3.4 4.5 139 105 139 119 90 119 А^еггеиз АТ-490 З.риЛлгегиХ. ИБР-1 СЬ. ЫгогторЬИе

Помидорные отамы 42,0 33,6 33,6 41,4 33,1 33,1 29.4 23.5 23,5 557 445 445 300 240 240 А.геггеив АТ-490 Б.р и1теги1. ИБР-1 СЬЛЬеггаорЬИе

Кукурузные хочерщж1 18,0 28,8 22,6 22,8 36,5 28,9 6,3 10,1 8,0 61 97 77 47 70 60 А. ter.ro.us АТ-490 Б. ри1угги1. ИГР-1

личества биомасс, которое й отдельных случаях значительно выше. Поэтому необходимо сравнение исходных и конечных количеств пи-тересуших нас компонентов, что и приведено в Таблице 12 и в Таблице 13. Отсутствие в этих таблицах данных по сырому протеину и целлюлозе 'объясняется тей, что изменение содержания этих двух компонентов было подробно обсугщено выше.

Таблица 13.

Содержание основных химических компонентов биомасс в момент максимального количества в них сырого протеина (иг).

Субстрат Каротин • Ю"3 Са Р Яир Зола ill т а м м

Цитрусовая 320 43,5 43,5 121 395 A.terreus АТ-490

мука 192 37,4 21,6 128 265 S.pulvsrulontua ИБР-1

279 37,8 42,2 140 331 Ch.thermophile

Помидорные 52 61,0 41,4 397 263 A.terreua АТ-490

отжимы 142 53,9 20,6 475 220 S.pulverulentuia 1ШР—Х

117 36,6 46,9 510 224 Ch. thermophile'

Кукурузные кочерыжки 15 0 5 19,8 140 38,5 9,5 8,3 24,0 26 404 73 103 191 158 A.terrQua AT-490 S.pulvarulentum ИБР-1 Ch. thermophile

Данные последних двух таблиц представляет соотношения основных гешпескшс компонентов несколько иначе, чем это мохет показаться согласно таблица I и II. Например, в случае бноконверсии ЦНТруссЕОЙ муки .Грибом 3. ри.1уеги1ег^ш» ИЕР-1 видно, что ее ли согласно Таблице I содерганае каротина е исходном субстрате было 48 иг/кг, а в биомассе ато количество вроде бы уменьшилось (40 иг/кг согласно Таблице II), то на самом деле, согласно таблицам 12 я 13, выясняется, что в исходном субстрата, внесенном в бкэконверсиокнуа колбу каротина было 154.10"^ кг, а в'биомасса оказалось 192..Т0-''1 иг кароиша, т.е. на 17,33! больше, чем С.мо изначально. Поэтому необходимо оценить относительное изменение содержания основных химических компонентов в' биоиассах в сразив-нш с их содержание в исходных субстратах, вяоюшнх в яолбн, геи Солее что эта величина но будет зависеть от количества изначально

внесённого субстрата, т.е. будет объективным показателем изменения количеств соответствующих; веществ (Таблица 14).

Таблица 14.

Относительное изменение {%) содержания основных химических компонентов в биомассах в сравнении с их содержанием в целяюяо-оосодержшцкх субстратах.

Субстрат Каротин Са Р Жир Зола Ш гамм

Цитрусовая мука 48.1 17,3 29.2 75,4 98,9 52,4 8G6,7 535,3 837,8 -13,0 21,2 0,3 232,4 194,9 178,7 A.terreus АТ-490 S.pulverul. ИБР-1 Ch.thermophiie

Помидорные отжимы 25,7 322,6 249,1 48,8 62,8 10,6 40,8 -12,3 99,6 -28,8 6,5 14,3 -10,5 8,3 -6,5 A.terreua АТ-490 S.pulverul. ИБР-I Ch.thermophiie

Кукурузные кочерыжки -15,5 -100 -78,1 -13,2 282,0 33,2 50,8 -17,8 200,0 -57,6 314,6 -6,0 118,1 152,5 162,5 A.terreua АТ-490 S.pulverul. ИБР-I Ch.thermophiie

Согласно приведённым в этой Таблице данным наибольший относительный прирост отмечен для фосфора при конверсии цитрусовой муки штаммом Л.terreus АТ-490; в этом случае относительный прирост составил 866,7^, т.е. количество фосфора возросло в 9,7 раза (к одной чести фосфора, изначально бывшей в растворе, добавилось в результате биоконверсии 8,7 частей).

Что касается остальных данных, приведённых в Таблице 14, наибольший интерес, естественно, следует обратить на те случаи, когда конверсия, согласно ранее приведённым данным, протекала наиболее успешно. Это в первую очередь конверсия помидорных отжимов грибом Ch.tberaophile, а затем штаммаш A.terreus АТ-490 и s.pulverulentun КБР-I. Во всех этих случаях наблюдается увеличение содержания каротина, причём наиболее существенно оно в случае s.pulverulentura ИБР-I, хотя и в случае №.thermophiie рост содержания каротина составил почти 25С$, т.е. его,исходное количество увеличилось почти в 3,5.раза. Если учесть, что каротин является предшественником витамина А, который не синтезируется в оргаЕТиаме млекопитающих, то становится очевидно!!; rrnvare».-

пая ценность биомасс, полученных при конверсии помидорных станков. Во всех трёх случаях повышается содержание важного для • организма элемента - кальция. Следует обратить внимание на увеличение вдвое содержания фосфора в случае $.^¿¿"ЛегА*™ ИБР-1, в то врем как для СЬ дьегшорьив этот показатель отрицателен. Вместе с тем, относительное увеличение фосфора очень велико при конверсия цитрусовой муки кавдим из опребованных в работе микроскопических грибов. Возвращаясь к конверсии помидорных отжимов, заметим, что во всех случаях произошло падение содержания золы, в го время как при конверсии цитрусовой муки во всех случаях наблюдается рост её количества. Количество жира уменьшилось в случае кЛеггеиз ЛТ-.490 при конверсии всех трёх типов субстратов, а в случае СЬ.Шл-торШЛе - во всех трёх случаях возросло.

Резюмируя данные последних двух парграфов, следует сказать, что биоконверсии кукурузных кочернжек и цитрусовой муки целесообразнее всего проводить посредством микроскопического гриба АДеггешз АТ-490 (мутантный ютада), а помвдорных отлшмов -грибом С^ДЬегаорМХе.

-1. Аминокгюлотныи состав биомасс и содержание в них якрных кислот.

Результаты исследований показали, что белки отобранных бти&оо содержат все незаменимые и больашстдзо замешинх ама-нокислот.

В Таблице 15 приведены данные по аминокислотному составу биомасс в день, когда наблюдается максимальное содержание б них сырого протеина.

Биомасса, полученная при ноняерспи цитрусовой »луки грибом А. к«1-го1ш АТ-450 превосходит д}?з другие по содержанию Ася а Глу, способатзуюэдх созданию запасов яегкоусвояегюго азота, К тому же эта бяокасса содержит наибольшее количество Про, служа£№го источником азога, потребляемого при синтезе других аминокислот.

Судя по содеркашзо в .биомассах валика, азолейцияа к фенил-аланкна, наибольшей растворимости следует ожидать от цитрусовой муки, подвергшейся конверсии грибом А.ъеггеиа АТ-490. В то аэ время указанная биомасса отличается самым высоким содержание»

в ней лизина и метнонина, в то время как.содержание этих аминокислот е двух других биомассах заметно ниже. Следовательно, последние две биомасса будут легче усваиваться организмом млекопитающего.

Таблица 15.

Аминокислотный состав биомасс {%). I - цитрусовая мука, А. Ьеггеиз АТ-490,' 2 - помидорные отжимы, СЬ.^эгжорЫЛе; 3 - кукурузные кочерыжки, АЛетхеив АТ-490.

Аминокислоты I 2 3 Нормы ФАО

Тре 3,1 2,9 2,9 2,8

Вал 5,6 • 4,7 4,4 4,2

Мет 3,1 2,4 2,8 2,2

Иле 5,1 4,4 4,6 4,2

Лей 6,0 5,4 5,5 4,8

Тир 4,0 3,1 3,3 2,8

Фен 4,9 ■ 3,0 3,3 2,8

Лиз 4,8 4,3 •4,1 4,2

1/2 Цие - - 2,0

Асп 2,9 • 2,8 1.2

Сер 2,4 1,7 0,0

Глу 5,2 6,0 2,8 •

Про 1,8 1.5 0,9

Гли 3,6 1.7 1.8

■ Ала 4,3 2,7 1.4

Гнс 1.8 1.0 0,4

Арг 2,3 1,2 0,9

•

Биологическая ценность биомасс микробного происхождения в значительной степени определяется качественным и количественным составом входящих в них жирных кислот, В Таблице 16 приведены данные по яирнда кислотам, входящим в состав биомасс при указанных вариантах бкоконверснв.

Таблица 16.

Состав жирных кислот биомасс, полученных и рг.жтых вариантах биоконверени: I - цитрусовая мука, А.terreus АТ-490; ?■ - кукурузные кочершкм, .1. 1еггеия АТ-490; 3 - помидорные ОТЖИМЫ, СЬ. ьетпорЫ! е.

Мирные кислоты Содержание (%) от суммы лшгздов

т 2 3

Ненасыщенные 72,1 63,2 76,3

Насыщенные 31,3 31,8 23,7

Как видно из ранее приведённой Таблицы 13, наибольшее процентное содержание кара в биомассах было отмечено при конверсии помидорных отжимов грибом №.-ШеплорЬИе, даиь немного этому показателю уступает биомасса, полученная на том же субстрате грибом З.ри1убги1еп1;ит ИБР-1. Однако следует отметить, что начальное содержание жира в этом субстрате было гораздо выше, чем в остальных двух. Вообще, обращает на себя внимание тот факт, что лишь в одном случае (кукурузные кочерыяки, 5.ри1уеги1еп-кит ИБР-1) процентное содержание аира возросло. Как видно, в остальных случаях культивируемые на субстратах микроскопические грибы в большей степени потребляют лкпиды для обеспечения своей низнедеятельное ги и накопления биомассы.

Согласно Таблице 16, отношение ненасыщенных аирных кислот к носиэдеянш максимально в случае конверсии помидорных отжимов грибом СЬ. 1Ьепяор1111е, хотя и в остальных двух случаях это отношение достаточно велико. У'пт/вня тот факт, что в двух случаях из приведённых вариантов биоконвереш содерхакяе ненасыщенных аиргшх кислот превосходит верхнюю границу их количества, отмеченную для большинства ныне известных, микроскопических грибов (71%), следует заключить, что з?ое три приведённые биомассы вполне могут быть рекомендованы в качестве корневых добавок,

5. Активности внеклеточных целлюлаз и ксиланазы-.

В Таблице 17 представлены данные по активностям целлюлаз я ксиланаз в процессе биоконверсии для наилучших трёх вариантов.

Таблица' 17.

Внеклеточная активность целлплаз (по ФБ) и кспланаз в процессе биокон^ерсии ц^ллюлозосодепкащих субсгпатов микроскопическими грибами А.Ъеггеив АТ-490 И Сь^ЬеппорЬИе.

Штамм Субстрат . Активности, ед/мл

целлюлазная (по СБ) кспланазпая

I 2 3 4 5 I 2 3 4 5

А.Ьеггеш АТ-490 !{итрус. мука 0,04 0,12 0,15 0,10 0,04 5,2 16 ,.2 10,8 6,4 2,5

Сй-Шелл. Помидор, от.лкш 0,ПЗ 0,08 0,12 0,74 0,11 3,0 6,0 9,0 8,5 5,5

А. 10ГГ0ЧГ1 АТ-490 Кукуруз. коче^ш?. 0,0? 0,07 0,10 0,08 0,02 1,5 26,5 25,0 26,0 25,9

Указанные ферментные системы в основном ответственны за степень г"цролиза полисахаридов, входящих в состав утили?ируемых отходов; речь цдёя о суммарной активности ферментов целлюлазого комплекса г. об акгимюсти колланаз. Как видно из представленных донных, обе оцениваемое активности в случае Сь.ШшпорьПе (поми-дорш;е отетли) оказались по величине в промежуточном положении относительно этих же активностей для двух других вариантов. В то ж иреия этот вариант конверсии, как показа!") внае, оказался наиболее ъффектквжм. Принимая во внимание тот факт, ^то речь идёт о шеекдоточных активностях, оказаниез может служить с одной стороны подтверждением сравнительно высокой доступности молекул целлюлозы и гьмвиеллюлозы помидорных отжимов действии данных ферментов, а с другой стополы - подтверждением высокой эффективности, использования продуктов гидролиза этих макромолекул микроскопическими грк-5ы.«в СЬЛЬег.т)ор))11с.

6. Биоконверсия целлюлозосодержаяих субстратов при симоцо-тическом действии микроскопических грибов.

Изучала возкохиюсть симбиоза гопользонашпл: в работе микроскопических грибов при совместном культивировании б пкгатекьикх с|...1да>:, с чо'.'с;кх в качестве единственных источников углерода р'лпг/аоъ П'!!.':-до;лше цитрусовая мука к кукурузние коче-

; л гг. Игогтззм результата бкпа .подучена при впраиилжш: гркс:ов-

A. t err виз AT-430 и s. pulverulent wn Ш-I. В Таблице 18 приведены данные по содержанию сырого прогешп и целлюлозы та различных этапах процесса конверсии цитрусовой муки при симбиоти-ческом действии этой пары микроскопических грибов.

Таблица 18.

Содержание сырого протеина и целлюлоз:; в биомассе при действии A.terreus АТ-490 И S .pulverulentum ИБР—I ча цитрусовую муку.

f сутки Сырой протеин Целлюлоза

• % г/л /О г/л

I 14,4 4,3 • II,В 3,5

2 21,7 7,5 8,3 2,9

3 18,6 6,3 7,3 2,5

4 14,6 4,7 7,1 2,3

В Таблице 19 предетавлены данные, иллюстрирующие динамику изменешш хшического состава биомассы в данном варианте Зиокон-зерсич.

Таблица 19.

Изменение процентного содержания химических компонентов биомассы при выращшании А.Ьеггеиз АТ-490 и Э .ри1уе1и1егииш ИБР-1 на иигрусовой муке.

Время, сутки Влажность Биомасса г/л Сырой протеин Sup Зола Са Р БЭВ

г ± 9,4 10,5 14,4 2,0 7,5 0,81 0,65 49.8

2 10,2 7,9 21,7 2,5 8,7 0,97 0,75 53,3

3 9,3 6,3 18,6 2,6 8,5 1.03 0,51 j 56 ,Г

В других вариантах биоконвереш о'ылл получек* «яомассч с содегяаниа., сырого протеина пе превшающти его содержания ври раздел ж:а культивьровэчни на даг :ом ?1.пе субстрата каадого кэ штаммов, участвующих в ервмьотном действии.

Был проведён микотоксикологический анализ биомасс, предназначенных для кормления с/х животных. Результаты исследований свидетельствуют о нетоксичности биомасс АЛеггешз АТ-490, выращенных на цитрусовой муке и кукурузных кочерыгах, №. торЬИе, выраиешшх на помидорных отжимах.

Что касается содержания в них нуклеиновых кислот, то оно не превышало 2/ь.

Чтобы нагляднее представить результаты проведённых исследований, целе-сообразно суммировать результаты в блок-схему, показывающую количественные соотношения меяду основными веществами, преде газ лявдкми наибольший практический интерес (Рис.1). Знак исходную массу предназначаемою к утилизации отхода, можно при помощи коэффициентов, величины которых раечктаны исходя из результатов нашей работы, оценить Ееличшу биомассы, ког>рая будет получена в результате биоконверсии в каждом конкретном случае, а такяе количество содернащегося в ней кормового белка. Легко расчитагь и го количество целлюлозы, которое будет при этом утилизировано.

Рис.1. Блок-схема процессов биоконверсии.

Таблица 20.

Величины коэффициентов, представленных на рис.1.

Ш х ¿и.Л'Л Отход Коэффициенты

*1 Ь, кэ к4 к5 к6

СЬ. ^егторЫ1е Помидорные отжимы 1,44 0,04 0,23 0,08 0,22 0,36

А^еггеиа АТ-490 Цитрусовая мука 1,43 0,07 0,18 0,03 0,16 0,36

Кукурузные кочерыжки 1,27 0,05 0,31 0,05 0,09 0,16

А.-Ьеггег^ А".-450 "Г Цитрусовая мука 1,33 0,07 .0,18 0,05 0,22 0,34

выводы

1. Изучен 'химический состав целлюлозосодергащих отходов, з частности цитрусовой муки, помидорных отжимов и кукурузша кочерыжек. Установлено, что основными химическими компонентами в отходах являются целлюлоза, гемицеилшоза и лигнин.

2. Отобраны негоксич1ше и непатогенные термофильные микроскопа-ческие грибы Аярег^Шия -1еггеиа АТ-490, ЗрогоЪгЛсЬша ри1уо-rulelltшa ИЕР-1 И Сйае-Ьопйит ^егтаорЫЛе - продуценты целлю-лаз. Установлены оптимальные возрасты посевного материала (14, 12 и 18 суток, соответственно) и концентрации субстратов в питательной среде ( 3-5$ ) в зависимости от штаммов, обеспечивающие накопление максимального количества биомассы и сырого протеина.

3. Изучена динамика накопления биомассы и сырого протеина, а таете утилизации целлюлозы. Выявлено, что максимальное процентное содержание сырого протеина в биомассах, полученных в результате биоконверсии наблюдается в разные сутки ( 1-3 ) в зависимости от штамма и субстрата.

4. Изучен химический состав полученных биомасс. Установлено, что наибольшее количество сырого протеина при биоконверсии помидорных отжимов ( 21,6% ) накапливается в биомассе 0Ьае1;'ош1.ит •июгторМЛе, а в случае цитрусовой муки ( 16,25? ) и кукурузных кочерыкек ( 8,6$ ) при биоконверсип штаммом АзрсгеШиз terгeua АТ-490. Показано, что белки биомасс указанных грибов содержат все незаменимые и большинство заменимых аминокислот, качественно соответствующие нормам ФАО.

5. Разработана блок-схема процессов биоконверсии, по которой, знал исходную массу предназначаемого к утилизации отхода, можно при помощи коэффициентов расчигать количество биомассы, сырого протеина и утилизированной целлюлозы.

основные результаты диссертации представлены в следующих

1. /бликациях:

1. Мачавариани И.О., Яшвили Т.О., Кватадэе Т.О., Берикашвили В. ID. // Биомассы микромицетов, полученные на отходах сельского хозяйства и пищевой промышленности.// Тезисы II Всесоюзной конференции "Новые источники пищевого белка'.' 1986. Кобулети, с. 69.

2. Метревели Э.М., Аладашвили Н.В., Ткешелашвили Т.Я., Мачавариани М.О., Берикаквили В.Ш.// Автолиз белковой биомассы гркба A.terreua АТ-490.// Тезис II Всесоюзчой конференции "Новые источники пищевого белкаГ 1986. Кобулети, о.72.

3. Мачавариани М.О., Кутателадзе Л.Ю., Квачадзе Л.Л.// Образование и характеристика богатой белком биомассы гриба A.niger 228.// Тезисы II Всесоюзной конференции "Новые источники пищевого белка" I98C. Кобулети, с.73.

4. Аладашвили R.B., Гордиенко C.B., Ткешелашвили М.Я., Берикашвили В.Ш., Мачавариани М.О. Долидзе Д.А.// Получение смеси аминокислот автолизом белковой биомассы гриба A.terreua АТ-490.// Всесоюзная конференция "Ьыделение, очистка и а на. из биологически активных соединений". 1987. Тезисы докладов. Сухуми, с.35.

5. Plant waste conversion Ъу mycroaycetes into protein enriched biomaas.// iiachavariani I'..// Syinp.Intertjiot. 1989.Bratislava.

6. Мачавариани M.O., Квачадзе Л.Л. // Образование белка термофильными микромицетами при вырадавалии их на помидорных отхслмах.// Сообщения АН ГССР. 139. 13. 1990. 585-588.

7. Мачавариани М.О., Квачадзе Л.Л. // Образование бел: а термофильными микромицетами при выращивании их на кукурузных ко-черыхках.// Сообщения АН ГССР. 140. В 2. IS90. 401-404.

8. ».¡ачазарлани М.О., Квачадзе Л.Л. - Образование белка термофильными микромицетами при выращивании их на цитрусовой муке.// Извести?. АЛ ЕГ (в печати).