Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Консервирующий и ресуспендирующий раствор с метаболитами углеводно-фосфорного обмена для эритроцитной массы

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Маркова, Наталья Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы исследования

Методы исследования

Глава Ш. РАЗРАБОТКА РЕЦЕПТУРЫ КОНСЕРВИРУЮЩЕГО И РЕ -СУСПЕЩЩРУЩЕГО РАСТВОРА ДЛЯ ЭРИТРОЦИТНОЙ МАССЫ

1. Изучение эффективности различных консервирующих сред.

2. Разработка нового консервирующего и ресуспендирующего раствора для эритроцитной массы •

3. Биологическая характеристика нового консервирующего и ресуспендирующего раствора

Глава 1У. БИОХИМИЧЕСКАЯ И МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕ -РИСТИКА ЭРИТРОЦИТНОЙ МАССЫ, КОНСЕРВИРОВАННОЙ НА НОВОМ РАСТВОРЕ

1. Биохимическая характеристика эритроцитной массы

2. Реологическая характеристика эритроцитной массы

3. Морфологическая характеристика эритроцитной массы.

4, Приживаемость эритроцитной массы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Консервирующий и ресуспендирующий раствор с метаболитами углеводно-фосфорного обмена для эритроцитной массы"

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. В настоящее время в широкую лечебную практику внедряется новая трансфузионная тактика - компонентная гемотерапия. Дифференцированное использование различных компонентов крови в зависимости от их дефицита при тех или иных заболе -ваниях дает возможность не только повысить эффективность гемотерапии, но и более рационально использовать ресурсы донорской крови.

Переливания эритроцитной массы (ЭМ) становятся основным средством при лечении анемических состояний и, по данным В.А.Аг-раненко (1981, 1982); &Ьгчш55 £>. (1980); Но§тап.С:. (1978), должны составлять не менее 80% всех гемотрансфузий.

В связи с этим актуальной проблемой отечественной и зару -беленой практики Службы крови является совершенствование и раз -работка новых эффективных методов выделения и консервирования ЭМ.

В настоящее время в нашей стране применяются в основном че -тыре вида ЭМ: I. ЭМ с небольшим количеством плазмы и лейко-тром -бослоем (гематокритное число такой ЭМ в среднем составляет 0,7 -0,8); 2. Эритроцитная взвесь - ЭМ с гематокритным числом 0,7 -0,8, ресуспендированная в растворе Ц0Ж1К № 8; 3. Отмытая ЭМ (повторное отмывание в 0,9% растворе хлорида натрия с центрифугированием); 4. Размороженная и отмытая ЭМ.

Внедрение в лечебную практику пластикатной аппаратуры и компонентной гемотерапии требует разработки оптимальной програм -мы фракционирования цельной консервированной крови. В рамках этой программы возникает новая проблема консервирования основного компонента крови - ЭМ, остающейся после удаления плазмы (предназначенной для приготовления препаратов) и лейко-тромбо слоя,из которого получают концентраты лейкоцитов и тромбоцитов. Такая ЭМ, обедненная плазмой, лейкоцитами и тромбоцитами, по существу является эритроконцентратом (ЭК), который обладает повы -шенной вязкостью и имеет гематокритное число в среднем во флаконах 0,85, в пластикатных контейнерах - 0,95, вследствие чего необходимо его ресуспендирование перед трансфузией.

ЭК можно ресуспендироватъ в небольшом количестве собствен -ной плазмы. Однако, такой метод уменьшает ее количество, необ -ходимое для приготовления препаратов. Ресуспендирование ЭК в изотоническом растворе хлорида натрия достаточно часто применяется в практике, но срок хранения таких эритровзвесей ограничен. Наиболее эффективно взвешивание ЭК в растворах, содержащих вещества, сохраняющие морфо-функциональную полноценность эритроцитов длительное время с одновременным улучшением его реологических свойств.

Исследования, проведенные в СССР и за рубежом, показали значительные преимущества ЭК, как трансфузионной среды в сравнении с цельной консервированной кровью и ЭМ с гематокритным числом 0,7 (В.А.Аграненко с соавт., 1980, 1981; М.М.Петров с соавт., 1Ш\Нбдтап С. 1978; 1980).

Однако, в широкой практике до 1978 года во всех странах (кроме СССР и ГДР) не использовали ресуспендирующие растворы для консервирования ЭМ. Работы в этом направлении носили характер исключительно лабораторных исследований.

Разработка программ полного фракционирования цельной консервированной крови на компоненты, предполагающих получение значи -тельных количеств ЭК с гематокритным числом 0,85-0,95, выдвига -ет на первый план задачу создания ресуспендирующих растворов.

Существующий в практике Службы крови раствор Ц0Ж1К № 8, разработанный для Ш с гематокритом 0,7 был неприемлш для консервирования и ресуспендирования ЭК. Достаточно указать, что приживаемость эритроцитов, консервированных с этим раствором, сос -тавляет на 21 день хранения 35$ (Тальская И.Н., Воробьева Г.С., 1973 ).

Разработанные в ЦОЛИПК модификации этого раствора с метабо -литами углеводно-фосфорного обмена - ЦОЛИПК № 14 и № 15, несмот -ря на высокие концентрации этих соединений увеличивали приживае -мость эритроцитов в сравнении с Ш с гемато1фйтным числом 0,7 лишь на 5$ на 21 день хранения ( 75$ и 70$ соответственно).

Таким образом, проблема создания нового раствора для ресус -пендирования Ш и, в первую очередь ЭК, остающегося после отде ления плазмы и получения концентратов лейкоцитов и тромбоцитов, является весьма актуальной. При этом важно, чтобы данный раствор был не только ресуспендирующим, т.е. улучшал реологические свойства ЭК и ЗМ, но и консервирующим, т.е. сохранял длительное вре -мя функциональную полноценность эритроцитов.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Разработка нового консервирующего и ресуспен -дарующего раствора для эритроконцентрата и эритроцитной массы, удлиняющего сроки их хранения в функционально-полноценном состоянии с удовлетворительными реологическими свойствами. При этом ставилась задача создания максимально простого по составу раст -вора, доступного для технологического воспроизводства в учреждениях Службы крови и в условиях промышленности.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Исследовать влияние различных отечественных соединений на метаболизм эритроцитов, характеризующихся нетоксичностью, физиологичностью для организма;

2. Провести изучение функциональной полноценности ЭК и ЗМ в различных консервирующих средах;

3. Разработать состав консервирующего и ресуспендирующего раствора для ЭК и Ш;

4. Изучить биохимические, морфологические, электрокинетические, реологические свойства и приживаемость ЭК, консервированного и ресуспендированного в разработанном растворе при хранении во флаконах и пластикатной аппаратуре;

5. Изучить биологические свойства этого препарата.

НАУЧНАЯ НОВИША. Разработана рецептура нового консервирую щего и ресуспендирующего раствора для эритроконцентрата и эритро-цитной массы.

Дана биохимическая, морфологическая, электрокинетическая, реологическая характеристика и исследована приживаемость ЭК и сМ, консервированных и ресуспендированных в новом растворе.

Разработанный раствор не имеет аналогов за рубежом и отличается тем, что не содержит глюкозы и в состав его рецептуры вклю -чен никотинамид. Получена приорететная справка от ВНИИГПЭ № 2950041/ 13 от 3 июля 1980 г.

При оценке функциональной полноценности эритроцитов, консервированных и ресуспендированных в разработанном растворе впервые применен новый научный подход - изучение характеристики гликолиза клеток с применением метода математического моделирования.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ. В результате проведенных биохимичес -ких, морфологических, электрокинетических исследований и прижива -©мости ЭК, консервированного и ресуспендированного в новом растворе , представлены доказательства возможности удлинения его сро -ков хранения с 21 дня до 28 дней во флаконах и до 35 дней - в пластикатных контейнерах. Показано, что в эти сроки реологические показатели ЭК, консервированного и ресуспендированного в этом

- 7 растворе близки к свежезаготовленной крови.

Показано, что Ш с гематокритом 0,7, консервированная и ре-суспендированная в разработанном растворе, сохраняет функциональную полноценность в те же сроки.

Удлинение сроков хранения Шив особенности ЭК в функционально-полноценном состоянии позволит в значительной мере повысить лечебную эффективность гемотрансфузий и решить проблему утилизации Ш и ЭК, что в свою очередь должно привести к снижению объ - • емов заготавливаемой крови и большому экономическому эффекту в масштабах всей Службы крови»

ВНВДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. На основании данных о морфофункциональной сохранности эритроцитов в новом консервирующем и ресуспендирующем растворе, а также на основании биологических испытаний сделано заключение об эффективности и безвредности разработанного препарата.

2. По основным положениям диссертации опубликовано 18 научных работ.

3. Материалы диссертации были представлены на 1-ом Всесоюзном Симпозиуме по консервированию крови и ее компонентов (1978), на 1-ом Всесоюзном съезде гематологов и трансфузиологов (1979), на 54, 55 научных сессиях Центрального НШ гематологии и перели -вания крови (1982, 1983), на I и П Европейских Симпозиумах по консервированию крови, Берлин, ГДР, (1977,1981).

4. Получена от Всесоюзного НИИ Государственной и Патентной Экспертизы приорететная справка № 2950041/13, 3 июля 1980 г.

На защиту выносятся следующие положения:

- Новая рецептура консервирующего и ресуспендирующего раствора для эритроконцентрата и эритроцитной массы с научным обоснованием механизма действия отдельных его ингредиентов с целью

- 8 поддержания метаболизма в эритроцитах;

-Морфофункциональная характеристика ЭК и ЭМ, консервированных и ресуспендированных в новом растворе в течение 35 дней хранения;

- Эффективность изучения характеристики гликолиза как нового метода оценки функциональной полноценности консервированных эритроцитов,

ОНЫМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация состоит из введения, 1У глав, заключения и выводов. Она составляет 102 страниц ма -пшнописного текста (без таблиц, рисунков и библиографии), включает 12 таблиц, 20 иллюстраций и 225 библиографических названий (48 отечественных и 177 иностранных).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Маркова, Наталья Александровна

Выводы

1. Разработан новый оригинальный консервирующий и ресуспен-дирующий раствор(НАФ) для эритроконцентрата и эритроцитной мае -сы, включающий соединения отечественного производства - никотин-амид, аденин, двузамещенный фосфат натрия, хлорид натрия. (Авторское свидетельство № 2950041/13, 3 июля 1980 г.).

Научно обоснована рецептура раствора НАФ с направленным действием отдельных его ингредиентов на метаболизм эритроцитов:

- хлорид натрия составляет основу раствора и обеспечивает необходимую изоосмию эритроцитов с окружающей средой и дезаг -регирующее действие ин витро;

- аденин в оптимально подобранной концентрации участвует в синтезе пула аденилатов эритроцитов, сохраняя их жизнеспособность в течение всего срока хранения;

- никотинамид в сочетании с аденином поддерживает интакт-ное состояние мембраны, сохраняет их морфологический и электрокинетический статус, замедляет выход свободного гемоглобина;

- двузамещенный фосфат натрия способствует поддержанию щелочных значений рН и интенсивному включению аденина в метаболизм.

2. Особенности состава отечественных промышленных гемоконсервантов для цельной крови (Глюгицир, Цитроглюкофосфат), содержащих повышенные концентрации глюкозы ( в сравнении с их зару -бежными аналогами) позволили не включать ее в рецептуру НАФ и получить раствор со щелочными значениями рН после автоклавиро-вания, что способствует поддержанию метаболизма в эритроцитах в течение всего периода хранения.

3. Установлены предельно допустимые ером хранения эритро

- 124 концентрата и эритроцитной массы, консервированных и ресуспен -дированных в растворе НАФ в полимерных контейнерах -35 дней, в стеклянных флаконах - 28 дней.

4. Показана сохранность функциональной полноценности красных клеток в установленные предельно допустимые сроки хранения:

- уровень аденозинтрифосфорной кислоты сохраняется в среднем на 80%;

- характеристика гликолиза практически не изменяется;

- процент гемолиза в надетое в среднем составляет 0,430,45%;

- нормальные дискоидные формы клеток сохраняются на 40%;

- электрофоретичеекая подвижность сохраняется близко к исходному уровню, что свидетельствует о поддержании интактного состояния мембраны;

- реологические характеристики сохраняются на уровне све -жезаготовленной крови.

5. Биологические испытания раствора НАФ (пирогенность, анафилактогенность, острая и хроническая токсичность, терато -генность) указывают на отсутствие отрицательных реакций.

- 113 -Заключение

Внедрение в широкую лечебную практику пластикатной аппаратуры и компонентной гемотерапии требует разработки оптимальной программы фракционирования цельной консервированной крови. В рамках этой программы возникает новая проблема консервирования ос-новоного компонента крови - ЭМ или ЭК, остающихся после удаления плазмы (предназначенной для приготовления препаратов) и ЛТС, из которого получают концентраты лейкоцитов и тромбоцитов. ЭК, ввиду его повышенной вязкости (гематокритное число во флаконах в среднем 0,85, в пластикатных контейнерах до 0,95) необходимо ре-суспендировать перед трансфузией.

Переход на программы полного фракционирования цельной консервированной крови на компоненты выдвинул на первый план задачу разработки и внедрения в практику эффективных консервирующих^ре-суспендирующих растворов для ЭК.

Существующий в практике Службы крови ресуспендирующий раствор ЦОЛИПК № 8 для ЭМ с гематокритным числом 0,7 оказался неприемлемым для консервирования и ресуспендирования ЭК, ввиду низкой (35%) приживаемости эритроцитов, консервированных с этим раствором на 21 день хранения (Воробьева Г.С., Тальская И.Н., 1975 ).

Разработанные в ЦОЛИПК модификации этого раствора - растворы ЦОЛИПК № 14 и М5, несмотря на высокие концентрации метаболитов утлеводно-фосфорного обмена увеличивали приживаемость эрит -роцитов лишь на 5$ на 21 день хранения в сравнении с гематокритным числом 0,7 (75$ и 70$ соответственно).

Целью настоящего исследования явилась разработка нового консервирующего и ресуспендирующего раствора для ЭК и ЭМ, удлиняю -ющего сроки их хранения в функционально полноценном состоянии с

- 114 удовлетворительными реологическими свойствами. При этом стави -лась задача создания максимально простого по составу раствора, доступного для технологического воспроизводства в учреждениях Службы крови и в условиях промышленности.

При разработке консервирующего и ресуспендирующего раствора исследовалось влияние ряда соединений, не применявшихся ранее при консервировании ЭМ, на сохранность функциональной полноцен -ности консервированных эритроцитов.

Критериями отбора соединений служили нетоксичность, физио -логичность для организма, а также наличие отечественного их производства. Этим критериям отвечали диоксиацетон, аскорбат натрия, никотинамид, фруктоза, гуанозин и аденин. Основу исследуемых растворов составлял изотонический раствор хлорида натрия (154 мМ).

Был разработан ряд высокоэффективных консервирующих и ресу-спендирущих растворов с включением в их состав вышеперечисленных соединений. Эти консервирующие среды поддерживали жизнеспо -собность консервированных эритроцитов при сохранений кислород -транспортной функции (концентрации 2,3-ДФГ) в течение 21-28 дней в стеклянных флаконах.

Однако, в процессе выполнения работы выявлены и недостатки этих растворов: резкое снижение рН в ЭМ, консервированной в растворе с фруктозой; нестабильность диоксиацетона и аскорбата натрия в процессе длительного хранения гемоконсервантов, отсут -ствие в производстве отечественного препарата гуанозина для внутривенного введения.

Анализ полученных данных по изучению растворов различного состава представлял большой интерес как в теоретическом, так и практическом отношении и явился предпосылкой для обоснования рецептуры консервирующего и ресуспендирующего раствора в соответст

- 115 вш с конечной целью нашего исследования.

Так была показана необходимость введения в состав рецептуры ресуспендирующего раствора аденина - соединения, включающегося в метаболизм эритроцитов и поддерживающего пул аденялатов, тем самым способствуя длительному сохранению их жизнеспособности.

Впервые нами было выявлено благоприятное сочетанное дейст -вие никотинамида и аденина на сохранность некоторых биохимичес -ких показателей консервированных эритроцитов в сравнении со средами, в состав которых был включен один аденин: меньший выход свободного гемоглобина из эритроцитов в надетой, тенденцию к сохранности 2,3-ДФГ и более высоким значениям рН. Мы установили выраженное действие раствора, включающего никотинамид и аденин, на сохранность электрокинетических параметров и на морфологический статус консервированных эритроцитов - показателей наиболее объективно отражающих их жизнеспособность. Кроме того, обоснованием для включения в состав рецептуры никотинамида явилось его низкая коммерческая стоимость и наличие отечественного препарата для внутривенного применения.

Повышенная концентрация глюкозы (33 мМ) в отечественных ге-моконсервантах Глюгицир и Цитроглюкофосфат в сравнении с их за -рубежными аналогами АСД и СРД позволила выдвинуть принципиально новый подход к созданию безглюкозного консервирующего и ресуспен-дирующего раствора. Для длительного поддержания рН близко к ис -ходным значениям и для обеспечения интенсивного включения в об -мен красных клеток крови аденина в состав рецептуры была введе-на щелочная соль - двузамещенный фосфат натрия.

В соответствии с конечной целью наших исследований мы раз -работали состав консервирующего и ресуспендирующего раствора "Эритронаф" (НАФ) для ЭМ и ЭК в следующей конечной концентрации ингредиентов:

Нйкотинамид - 10 мМ - 1,2 г/л

Аденин - I мМ - 0,135 г/л

Двузамещенный фосфат натрия - 5 мМ - 1,8 г/л

Хлорид натрия - 51,3 мМ-3,0 г/л

Дистиллированная вода для инъекций до 1000 мл

Соотношение Ш:раствор = 2:1 рН раствора после стерилизации при 1,2 атм. 30 минут -7,8 - 8,2, раствор бесцветный, соотношение ЭК и ЭМ : раствор = 2 : I.

Проведенные совместно с ВНИИ кровезаменителей и гормональных препаратов исследования по изучению острой и хронической токсичности, анафилактогенности, пирогенности и тератогенности раствора НАФ показали ареактогенность этого раствора.

По литературным данным все ингредиенты, включенные в состав раствора, стабильны в процессе длительного хранения ( до 2-х лет) консерванта при комнатной температуре.

Нами были проведены всесторонние биохимические исследова -*ния ЭК и ЭМ, выделенной из цельной крови, заготовленной в стеклянные флаконы на гемоконсерванте Глюгицир и ЭК, заготовленного в пластикатных контейнерах "Гемакон". ЭК и ЭМ являлись контролем, а ресуспендированная ЭМ и ЭК в растворе НАФ - опытом.

Состояние метаболизма характеризовали общепринятыми биохимическими показателями: концентрацией АТФ, характеризующей жизнеспособность клеток крови; концентрацией 2,3-ДФГ и показателем Рзд, характеризующих способность эритроцитов присоединять кис -лород и отдавать его в тканях. Кроме того, в данной работе для характеристики функциональной полноценности клеток использовали методы измерения концентрации свободного гемоглобина (процента гемолиза) и концентрации ионов калия, свидетельствующие о нарушении интактного состояния мембраны эритроцитов; измерения рН в процессе консервирования - тест, характеризующий состояние трансфузионной среды и интенсивность метаболизма; измерения концентрации метгемоглобина, свидетельствующие о необратимых нарушениях в эритроцитах; в этом разделе исследований мы также применили новый подход к оценке функциональной полноценности эритроцитов, интенсивно развиваемой в отечественной науке - изу -чение характеристики гликолиза эритроцитов.

Было показано, что в опыте (ЭК, выделенный из цельной крови, заготовленной на гемоконсерванте Глюгицир в стеклянных флаконах, и ресуспендированный в растворе НАФ) концентрация АТФ на 28-й день хранения сохранялась на 78 + 4,4%, на 35-й день - на 69 + 9%, в то время как в контроле (ЭК без ресуспендирующего раствора) в эти сроки наблюдения концентрация этого соединения составляла - 33 + 1,7% и 30 + 5% от исходного уровня.

Щелочной рН ресуспендирующего раствора и наличие в его рецептуре никотинамида позволяло длительно сохранить значения рН на уровне свежезаготовленной крови: так, значение рН в опыте на 14 день хранения составляло 7,00 + 0,02, на 28-й - 6^63 + 0,047, на 3:-й - 6,58 + 0,021 в то время как в контроле этот показа -тель составлял 6,72 + 0,015, 6,54 + 0,03 и 6,50 + 0,01 соответственно.

Кислородтранспортная функция лучше сохранялась в ©цыте в сравнении с контролем: так на 14-й день хранения концентрация 2,3-ДФГ составляла 47 + 2,7%, показатель PgQ на 28-й день -18,8 + 0,1 мм рт.ст., в контроле в эти сроки наблюдения значения этих показателей составляли 27 + 1,4% и 14,3 + 1,04 мм рт.ст.

Нарастание концентрации метгемоглобина в' опыте в процессе консервирования было незначительным и составляло на 28-й день хранения I + 0,2, на 35-й день - 1,2 + 0,3% в стеклянных флаконах.

Проведенные исследования по сохранности функциональной полноценности ЭК, ресуспендированного в растворе НАФ в стеклянных флаконах, нашли свое подтверждение и в экспериментах по изуче -нию характеристики гликолиза: показано, что физиологическая колоколообразная форма характеристики гликолиза в опыте изменялась незначительно на 28-35 день хранения, в то время как в контроле вид характеристики начинал изменяться уже на 7-е сутки.

Таким образом, полученные нами данные явились обоснованием для рекомендации 35 дня как предельнодопустимого срока для хранения в стеклянных флаконах ЭК, ресуспендированного в растворе НАФ.

Однако на основании данных по выходу свободного гемоглобина из эритроцитов в надетой предельнодопустнмый срок хранения был снижен до 28 дней. Б эти сроки наблюдения процент гемолиза в опыте составлял 0,46 + 0,05%, а на 35-й - 0,75 £ 0,28%, выход ионов калия в надетой на 28-й день хранения коррелировал с этим показателем и составлял 38 + 1,9 мэкв/л.

В контроле на 28 день наблюдения процент гемолизированных эритроцитов был выше и составлял I + 0,06%.

В ЭК, ресуспендированном в консервирующем растворе без ни-котинамида,процент гемолизированных эритроцитов в этот срок со -ставлял 0,54 + 0,06.

Переход Службы крови на работу с полимерными контейнерами побудил нас провести специальные сравнительные исследования ЭК, консервированного и ресуспендированного в растворе НАФ, в стеклянных флаконах и полимерных контейнерах.

Оказалось, что при хранении в полимерных контейнерах ЭК,

- 119 ресуспендированного в растворе НАФ, процент гемолиза значительно ниже и составлял на 28-й день хранения - 0,146 + 0,05, на 35-й день - 0,40 + 0,1; в стекле этот показатель соответственно составлял 0,46 + 0,05 и 0,75 + 0,28%. Значения рН в опыте также лучше поддерживались при хранении в полимерной аппаратуре и составлял на 35-й день -6,7+ 0,04, 6,5 + 0,025 - в стеклянных флаконах.

Наблюдалась тенденция к лучшему поддержанию концентрации АТФ при хранении опытных образцов в полимерных контейнерах: так, на 35-й день наблюдения АТФ сохранялась на 75 + 10%, в стеклянных флаконах это соединение сохранялось на 69 + 8%.

Таким образом, были установлены определенные преимущества полимерных контейнеров для консервирования ЭК в растворе НАФ.

При исследовании ЭМ (гематокрит 0,7), консервированной и ресуспендированной в растворе НАФ в стеклянных флаконах, наблюдали несколько иную биохимическую характеристику в сравнении с ЭК (гематокрит 0,9), ресуспендированном в НАФ: концентрация АТФ на 28-й день хранения составляла 70 + 1,8% , в то время как кисло -родтранспортная функция в этот срок наблюдения оставалась близкой к свежезаготовленной крови - концентрация 2,3-ДФГ сохранялась на 50 + 1,2%, показатель Р^ составлял 23,0 + 1,04 мм рт.ст. (аналогичные значения наблюдали в свежезаготовленной крови на гемокон-серванте Глюгицир), значения рН, измеренные при 25°С на 28-й день хранения также идентичны свежезаготовленной крови на гемо -консерванте Глюгицир и составляли 7,00 + 0,15 на 28 день хранения. Однако, в этот срок хранения наблюдали большой процент ге-молизированных эритроцитов - 0,7 + 0,02 и метгемоглобина -1,8 + 0,2%.

На оснований проведенных детальных биохимический исследова

- 120 ний можно было заключить, что предельнодопустимым сроком для хранения ЭК и ЭМ, консервированных и ресуспендированных в растворе НАФ в стеклянных флаконах является 28 дней, в полимерный аппаратуре - 35 дней.

Известно, что эффективность гемотрансфузионной терапии в значительной мере зависит от реологических свойств трансфузион -ных сред.

Мы изучили следующие реологические показатели: ^ -предел текучести, характеризующий усилия, необходимые для гидродинамической дезагрегации эритроцитов ( для свежезаготовленной крови этот показатель равен 0,05-0,06 2Ц|2 ) и £ - вязкость крови, определяемую при скорости сдвига при I сек"^ ( для свежезаготовленной крови этот показатель равен 20-25 сантипуз). Для исключения влияния показателя гематокрита на предел текучести рассчитывали стабилизированный показатель - коэффициент агрегации-А (Аграненко В.А. с соавт., 1980).

Нами было показано, что в опыте (ЭК, выделенный из цельной крови, заготовленной на гемоконсерванте Глюгицир, консервированной и ресуспендированной в растворе НАФ) предел текучести увеличивался в 2,6 раза к 35 дню хранения, а в контроле (ЭК на Глюги-цире без ресуспендирующего раствора) - в 5 раз. Расчет коэффициента агрегации-А показал, что на 35 день в опыте он не превышал величины в свежезаготовленной крови, тогда как контрольные эритроциты обладали к концу хранения (35 день) когезионными силами в 5 раз большими, чем в свежезаготовленной крови. Такая же тенденция наблюдалась и в структурной вязкости эритроцитов ( сС ); расчетный коэффициент X во всех пробах был выше, чем в контроле.

Реологические параметры в опыте улучшались за счет оптимального гематокрита, присутствия в составе рецептуры раствора^ сое

- 121 о V сз динении, влияющих на сохранность функциональных свойств эритроцитов, и основы раствора - хлорида натрия в изотонической кон -центрадии (154 мМ), который, как известно, ин витро обладает дезагрегирующим действием. В данном случае следует также ука -зать, что сохранение низкого коэффициента взаимодействия между эритроцитами в изученном нами растворе по сравнению с контролем может быть объяснено прежде всего лучшей сохранностью как формы эритроцитов, так и их поверхности.

Мы провели детальные морфологические исследования поверхностной архитектоники эритроцитов с помощью сканирующего микроскопа и изучили электрокинетические свойства консервированных эритро -цитов, так как в настоящее время показано, что поверхностный электрокинетический заряд является одним из наиболее чувстви -тельных физико-химических показателей интактного состояния мембраны эритроцитов.

При исследовании морфологии эритроцитов во все сроки наблюдения выявлено благоприятное воздействие комплексного влияния никотинамида и аденина в растворе НАФ на сохранность нормального статуса эритроцитов в сравнении с ЭК, ресуспендированным в растворе АФ без никотинамида (аденин - №аС1 - двузамещенный фосфат натрия): так, в предельный срок наблюдения (28 день) в опыте в НАФ количество дискоидных форм оставалось на высоком уровне (41,5 + 3%) в сравнении с опытом в АФ (20 + 2%) и контролем (ЭК на Глюгицире без ресуспендирующих растворов) (3 ±0,8%),

Количество сферических эритроцитов с отростками в опытной эритровзвеси в НАФ составляло (3,0 + 0,5%) в сравнении с эритро-взвесью в АФ (7,5 + 0,8%) и контролем (10,5 + 2,7%).

При исследовании электрокинетических свойств также было обнаружено выраженное воздействие сочетанного действия никотин амида и аденина: на 28 день хранения электрофоретическая под

Т —Т вижность в опыте с НАФ составляла - 1,098+0,003 мкм/см/в /сек ,

•—'Т «—Т в то время как в опыте в АФ - 0,993+0,002 мкм/см/в /сек , в

Т «—т контроле этот показатель был равен 0,826+0,004мкм/см/в /сек .

Данные, полученные в этом разделе исследований, могут служить дополнительным подтверждением гипотезыЛ.а8опиЬМ.^ (1972) о включении никотинамида в пиримидиновый пул нуклеотидов, что способствует сохранению метаболических систем ГМШ, основная функция которого состоит в сохранении интактного состояния мембраны эритроцитов.

Однако, остается открытым вопрос о непосредственном влия -нии этого соединения на мембрану эритроцита, так как по нашим данным уже в день заготовки ЭК, консервированного и ресуспен -дированного в растворе НАФ, количество дискоидных форм было значительно (на 10-20%) выше в сравнении с ЭК, ресуспендирован-ном в растворе АФ.

Проведенные нами детальные и всесторонние исследования ин витро сохранности функциональной полноценности ЭК, консервированного и ресуспендированного в растворе НАФ, а также биологические испытания этого раствора в соответствии с требованиями

Фармкомитета Минздрава СССР побудили нас провести исследования ят ин виво 24-часовой приживаемости эритроцитов, меченных Сг> в опыте и контроле на 8 здоровых донорах-добровольцах. В результате показано, что приживаемость ЭК, ресуспендированного в растворе НАФ во флаконах составляет на 28 день хранения 81 +3,2%, в то время как в контроле 49+5,7.

Внедрение в практику Службы крови разработанного нового консервирующего и ресуспендирующего раствора НАФ в значительной степени будет способствовать широкому и эффективному применению эритроконцентрата и эритроцитной массы в лечебных учреждениях.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Маркова, Наталья Александровна, Москва

1. Аграненко Б.А. Принципы компонентной гемотерапии - Пробл. гематол. и перелив, крови, 1978, 23, 1!з 6, с.3-10

2. Аграненко В.А. Компоненты и препараты крови В кн: Справочник по переливанию крови и кровезаменителей / под ред. акад. O.K.Гаврилова - М., Медицина, 1982, с.61-62

3. Аграненко Б.А. Консервирование и криоконсервироваяие крови. Там же, МгМедицина, 1982, с. 42-60

4. Аграненко В.А. Компоненты консервированной крови в хирургии.-Вестник хирургии им. И.И.Грекова, 1982, № 10, с.63-67

5. Аграненко В.А., Виноград-Винкель Ф.Р., Суворова И.А. и др. Сравнительная характеристика эритроцитной массы и цельной крови, заготовленных на разных гемоконсервантах. Пробл.гематол. и перелив, крови, 1976, № 8, с.37-41.

6. Аграненко В.А., Г0лубева В.Л., Виноградова И.Л. и др. Изменение кислородтранспортной функции эритроцитов в процес -се хранения крови, консервированной разными методами.-Пробл. гематол. и перелив.крови, 1977, В 8, с.24-29.

7. Аграненко В.А., Маркова H.A., Суворова И.А. и др. Новый ре-суспендирующий и консервирующий раствор для эритроцитной массы.- Пробл. гематол. и перелив, крови, 1982, № 10,с.19-24.

8. Аграненко В.А., Маркова H.A., Тибилова H.H. и др. Восстановление полноценности консервированной крови после длительного хранения. Гематология и трансфузиология, 1983, № 10,с. 53-54.

9. Аграненко В.А., Штраусе Д., Маркова H.A. и др. Консервирование эритроконцентрата, обедненного лейкоцитами и тромбоцита-, ми (Методы получения и трансфузиологические преимущества).

10. Пробл. гематол. и перелив, крови, 1980, № 9, с. 15-19.

11. Акимова Р.Н., Булгакова Т.А.влияние этилового спирта на сохраняемость эритроцитов. В кн: Современные пробл.гематол. и перелив.крови. М., i960, т.35, с.293-300

12. Атауллаханов Ф.И. Регуляция метаболизма в эритроцитвх. Дис. . докт. физчмат.наук. -М., 1982, 296 с.

13. Атауллаханов Ф.И., Пичугин A.B. Модификация люциферин-люци-феразного метода определения концентрации АТФ в эритроци -тах. Биофизика, 1981, т.26, № I, с. 86-88.

14. Бабский Е.Б., Зубков A.A., Косицкий Г.И., Ходоров Б.И. Физиология человека, изд. 2-е М., Медицина, ,1972.

15. Бойтлер Э. Нарушения метаболизма эритроцитов и гематологическая анемия. М., Медицина, 1981.

16. Борзова Л.В. Электрофоретическая подвижность клеток пере -ферической крови у здоровых лиц и при некоторых гематоло г гических заболеваниях: Автор, дис. . канд.мед.наук, -М., 1976.

17. Бушова Б., Грубишко М., Опыт применения эритроцитной массы.-Пробл. гематол. и перелив.крови, 1974, 7, с.54.

18. Васильев П.С., Карасева И.П. Стабилизация белковых систем крови углеводами и разведением. В сб; Современные проблемы гематологии и переливания крови, 1952, }& 26, с.54-65.

19. Виноград-Финкель Ф.Р., Аграненко В.А. В кн: Руководство по общей и клинической трансфузиологии / Под ред.акад. В.Б.Петровского / - М., Медицина, 1979, с. 62-99.

20. Виноград-Финкель Ф.Р., Гинзбург Ф.Г., Леонтович В.А. Длительное консервирование эритроцитной массы. В кн: Современные проблемы гематологии и переливания крови -М., 1954, 29, с.198-206.

21. Виноград-Финкель Ф.Р., Олдурова C.B., Применение лимонной кислоты в качестве стабилизатора при длительном консерви -ровании. Пробл.гематол. и перелив.крови, 1961, 10,с. 43-45.

22. Волошина М.С. Экспериментальное изучение натриевой соли сахарной кислоты, как стабилизатора при консервировании крови. Автор, дис. . канд.мед.наук Киев, 1978, 20 с.

23. Гинзбург Ф.Г. Применение дисахаридов и многоатомных спиртов для хранения эритроцитной массы. В кн: Современные проблемы гематологии и переливания крови - M., 1946, в. 2223, с. 211-220.

24. Гинзбург Ф.Г., Сухова А.Г., Тальская Й.Н. Влияние добав -ления инозина и аденина на сохранность эритроцитной взвеси. В кн: Вопросы биофизики, биохимии и патологии эритроцитов. ~М., Наука, 1967, с. 310-315

25. Гутник Р.Б. 0 возможности применения бесцитратной эритроцитной взвеси для полного замещения крови животных. Эк-сперим. хирургия, 1963, № 5, с.90-92.

26. Дервиз Г.В. и Бялко Н.К. Уточнение метода определения ге -моглобина, растворенного в плазме крови.- Лаб. дело, 1966, № 8, с. 461-464.

27. Зайдель А.Н. Оценка ошибок измерений. 1967, Ленинград, изд. "Наука" АН СССР, 88 с.

28. Кассирский И.А., Алексеев Г.А. Клиническая гематология. -М., Медицина, 1970.

29. Козинец Г.И., Ряполова И.В., Шишканова З.Г. и др. Морфо -логическая характеристика эритроцитов переферической крови здоровых людей ( Сканирующая электронная микроскопия).-Пробл. гематол. и перелив, крови, 1977, № 7, с. 19-21.

30. Костин Г.М. Изменение реологических свойств крови при ост -рых отравлениях. Автор.дис. . канд.мед.наук - М.,1977.

31. Малер Г., Кордес Ю. Основы биологической химии М., Мир, 1970.

32. Мельникова В.Н., Михнович Е.П., Кузьмин В.А. и др. Сравнительная оценка функциональных свойств•эритроцитов различ -ных гемотрансфузионных сред. Пробл. гематол. и перелив, крови, 1977, № 6, с. 11-17.

33. Мешкова Н.П., Алексахина Н.В. Раздельное определение кис -лоторастворимых фосфорных соединений. Успехи биол.химии,1954, 2 с. 277-291.

34. Михнович Е.П. Влияние различных плазмозамещающих растворов на вязкость плазмы, реакцию оседания и морфологию эритроцитов ih lira. Пробл.гематол. и перелив, крови, 1976, № 2, с. 53-56.

35. Олдурова C.B. Усовершенствованные консерванты с лимонной кислотой. Пробл. гематол. и перелив, крови, 1967, № 4, с. 14

36. Олдурова C.B., Суворова И.А., Сухова А.Г. и др. Сравнительная характеристика крови, заготовленной на консервантах12 и 76. Пробл. гематол. и перелив.крови, 1975, Ш I, с. 40-44.

37. Петров М.М. Актуальные вопросы консервирования и перелива -ния крови в свете представлений а реологических свойствах эритроцитов и микроциркуляции (Обзор литературы) Мед. реф. журнал, 1979, № 6, с. 24-29.

38. Пётров М.М., Тимченко Н.В., Юхимук Л.Н. Процесс микроагрегации в гемотрансфузионных средах, консервированных на цитро-глюкофосфате и глюгицире, и пути снижения его интенсивности.

39. Пробл. гематол. и перелив, крови, 10, с. 37-42.

40. Рапопорт С.М. Медицинская биохимия. М., Медицина, 1966.

41. Северин С.Е. Биохимические основы благоприятного действия глюкозы при консервировании крови. Биохимия, 1946, 2, с. 139-148.

42. Сухова А.Г. Консервирование эритроцитной взвеси в присутствии инозина с аденином и желатины для удлинения сроков ее хранения. Автор, дис. . канд.биол.наук:, М., 1967, 21 с.

43. Тальская И.Н., Бурдыга Ф.А., Сухова А.Г. Посттрансфузионная выживаемость эритроцитной взвеси, консервированной на растворе Ц0ЛШ1К Jß 8, обогащенной инозином, аденином и желати -ной. Пробл. гематол. и перелив, крови, 1967, ХП (4),с. 14-17.

44. Тальская И.Н., Воробьева Г.С. Посттрансфузионная выживае -мость эритроцитов после 21 дня хранения. В кн: Белорусский респ. съезд гематологов и трансфузиологов 2-й. Материалы, Минск, 1973, с. 198-200.

45. Тальская И.Н., Шитикова М.Г. Оценка биологической полноценности консервированной крови путем определения выживаемости5Тэритроцитов, меченных Сп Медицинская радиология, 1963, В 10, с. 3.

46. Терехов Н.Г., Петров М.М. Клиническое применение консервированных эритроцитов.- Киев "Здоров'я", 1983, 144 с.

47. Тибилова H.H. Восстановление .функциональной полноценности консервированных эритроцитов, утраченной в процнссе хранения. -Автор, дис. . канд. биол. наук.- М., 1976, 20 с.

48. Тибилова H.H., Голубева В.Л., Черненко Г.Т. и др. Биохими -ческие механизмы восстановления (омолаживания) эритроцитов.-Гематология и трансфузиология, 1983, й I, с. 18-21.

49. Федоров Н.А., Васильев П.С., Карасева И.П. и др. Сравни -тельное изучение различных рецептур консервирования, крови (Изотонические глюкозоцитратные консервирующие среды).

50. В сб: Современные проблемы гематологии и переливания крови, 1946, № 22,23, с. 45-80.

51. Akerblom 0., de-Verdier C.-H., Garby L. et al. Late addition of inosine to stored ACD-adenine blood. Effects on erythrocyte viability and metabolism. Folia Haematol., 1969, Bd.9I, S.142-150.

52. Astrup P. ,Engel K., Saveringjiaus J.M. The influence of temperature and pH on the oxygen dissociation curve of hemoglobin of human blood. Scand.J.Clin.Invest., 1965, v. 17, p.515-517.

53. Ataullakhanov, Vitvitsky V.M., Zhabotinsky A.M. et al. The regulation of Glycolysis in Human Erythrocytes. The Dependence of Glycolytic Flux on the ATP Concentration. Eur. J.Biochem., 1981, 115, p.359-365.

54. Bakker J.C., Beutler E., Collins J.A. et al. What in the Clinical Importance of Alterations of the Hemoglobin Oxi-gen Affinity in Preserved Blood-Expecially as Produce by Variations of Red Cell 2,3-DPG Content Vox. Sang, 1978, v.34 (2), p.III-127.

55. Bapat J.B., Baxi A.J., Bhatia H.M et al. Role of Various Anticoagulants in the Preservation of Red Cell Enzimes. Indian J.Med. Res., 1974, v.62 (7), p.I046-I050.

56. Bartlett G.R.% Biology of Free and Combined Adenine Distribution and Metabolism. Transfusion, 1977, v. 17 (4), p. 339-350.

57. Baumgarten K., Indikation zur Transfusion von Ery three yten-konzentraten.-Infusiontherapie, 1977»v.4 (2).S.I0I-I04.

58. Benesch R., Benesch R.E. The effect of organic phosphates from human erythrocytes on allosteric properties of hemoglobin. Biochem.Biophys. Res.Commun., 1967, v.26(2), p.162-167.

59. Benesch R.E., Benesch R. The mechanism of interaction of red cell organic phosphates with hemoglobin. Adv.Protein Chem., 1974, v.28, p.211-217.

60. Bergmann H. Blutbestandteile -Therajie : Diffenentialindika-tion zur Erythrozytengabe. Infusions therapie, 1980, Bd 7 (4) S. 184-189.

61. Berndsen G., Strauss D., Cherkashina U.A. Einfluss von Dihyd-roxyazeton auf StoffWechselparameter bei 25°C.-und 4°C. -Lagerung Polia Haematol., 1978, Bd 105, S.420-436.

62. Bensinger T.A., Zuck T.P. Trisodium Ascorbate Phosphate, a Stabilized of Ascorbic Acid, Promotes 2,3 Diphosphoglyce-rate Maintenance. Transfusion, 1976, v.l6 (5), p.518.

63. Bensinger T., Chillar R. and Beutler E. Prolonged mainenance of 2r3*DPG in liquid blood storage. J.Lab.Clin.Med., 1977, v.89, p.498-:502.

64. Beutler E., Duron 0. Effect of pH on preservation of red cell ATP.- Transfusion, 1965, v.5, pI7-2I.

65. Beutler E. and Duron 0. The presrvation of red cell ATP. The effect of phosphate. Transfusion, 1966, v.6, p.124-128.

66. Beutler E. and Wood L. The in vivo regeneration of red cell 2,3-diphoglyceric acid (DPG) after transfusion <£ stored blood.- J.Lab. and Clin.Med., I969, v.74, p.300-307.

67. Beutler E. Experimental Blood Preservatives for Liquid Storage. In: The Human red cell in vitros/Ed.T.J.Greenwalt, G.A.Ja-miesson. Grune and Strattca Hew York, London, 1974» p.189-216.

68. Beutler E., Dyment P., Matsumoto F. Hereditary nonspherocytic hemolytic anemia and hexokinase deficiency. -Blood, 1978, 51,, 5, 935-940.

69. Beutler E. and West C. The storage of Hard-Packed Red Blood Cells in Citrate-Phosphate-Dextrose (CPD) and CPD-Adenine (CPDA-I). Blood, 1979, v.54 (I), p.280-284.

70. Beutler E. and YiXlacorte D. Spectrin Extract ability in Blood Storage. Transfusion, 1981, v.21 (I), p.96-99.

71. Blaisdell F., Lim R., and Stallone R. Mechanism of pulmonary damage following traumatic shock. Surg.Gynecol.Obstet., 1970, 130, 15-17.

72. Boo£aV., Pessina G.P., Paulesu L. , Pacini A. et al. Studies of factors, regulating the ageing of human erythrocytes.

73. The role of pH and of divalent cations. -Int.J.Biochem., 1979, v.IO, 19-24.

74. Brake J.M., Deindorfer F.K. Preservation of red blood cells 2,3-diphosphoglycerate in stored blood containing dihydroxy-acetone. Transfusion, 1973, v.13, p.84-87.

75. Card T., Monandas H.A., Perkins S.B. Deformability of stored red blood cells. Relationship to degree of packing.-Transfusion, 1982, v.22 (2), p.96-100.

76. Chance B. and Salkovitz J. Intracellular oxygen requirement.-In: Preservation of Red Blood Cells. National Academy of sciences, 1973, p.73-84.

77. Chanutin A., Curnish R.R. Effect of organic, and inorganic phosphates on the oxygen equilibrium of human erythrocytes. Arch.Biochem.Biophys., I967, v.121 (I), p.96-109.

78. ChemtcbS., Gibb W., Bard H. Relationship of- 2,3-diphospho-glycerate mutase in various mamals. BidLNeonate, 1980, v«38j,p.36-39»

79. Collins J.A. The causes of progressive pulmonary insuffiency in surgical patients. J.Surg.Res., I969, 9, 685.

80. Dawson R.B., Kochalaty W.F. et al. The hemoglobin function of blood stored at 4°C in Red cell metabolism and function/ Ed.Brewer G.J., Plenum Press., New-York, 1970, p.305.

81. Dawson R.B., Loken M.R. and Crater D.H.Hemoglobin function in stored blood. IX Preservation with pH to maintain red blood cell 2,3-DPG (function) and ATP (viability). -Transfusion, 1972, v.I2, p.46,0.

82. Dawson R.B. Blood Storage XXV Ascorbic Acid (Vitamin C) and Dihydroxyaceton (DHA) Maintanance of 2,3 DPG for six weeks in CPD-Alenine. Transfusion, 1977, v.17 (3), p.248-254.

83. Dawson R.B., Levine L., Zuck T. et al. Bipod Preservation XXVII. Fructose and Mannose Maintain ATP and2,3-DPG. Transfusion, 1978, v.I8 (3), p.347-352.

84. Dawson R.B., Hershery R.I., Myers C.S. et al. Blood preservation XLIV. 2,3-DPG maintenance by dehydroascorbate better than D-asccrbic acid. Transfusion, 1980, v.20, p.231-236.

85. Dawson R.B., Meyer D.R., Hedian K.A. et al. Blood Preservation XXXIV. DHA Maintains 2,3-DPG and its adverse effect on

86. ATP with Extra Phosphate.-Transfusion, 1980, 20 (3), p.3II-3I5.

87. Dawson R.B., Meyer D.R., Sisk L.D. et al. Blood Preservation 50: Red cell 2,3-IPG maitenance in CPD-adenine stored bloodby several mechanisms.- In: The Red Cell: Fifth Ann.Arbor Conference, 1981, 150 Fifth Avenue New York U. J., p.643-662.

88. Dawson R.B. Historical perspective in Blood Storage and Preservation. A technical Workshop by American Association of Blood Bante, 1982, p. 1-7.

89. Drapkin D.G. Spectrome^ric studies. XV Hydration of macrosized crystals of human hemoglobin and osmotic concentration in red cells. J.Biol.Chem., I950v 185, p. 231-245.

90. Duhm J. Effects of 2,3 diphosphoglycerate and other organic phcgjhate compounds on oxygen affinity and intracellular pH of human erythrocytes. Pflugers Arch., 1971, v.326, p.341.

91. Duhm J. The effect of 2,3-BPG and other organic phosphates on the Daman equilibrium and the oxygen affinity of human blood in Oxygen affinity of hemoglobin and red cell acid-base status./Ed.Rorth M., Astrup P., 1972, p.583, Munksgaard, Copenhagen.

92. Duhm J., Gerlash E. Metabolism and function of 2,3-BPG in

93. Red Blood cell. In the Hum^n Red Cell in Vitro /Ed.T.J.Green-wait, G.A.Jamisson-Grune and Stratton, New-York, Londoniyi 1979, p.III-148.

94. Fabre C., Cazin P., Allary M. et al. Studies on stored blood: morphological behavior. International congress JSR-JSBT, 1982, p276.

95. Gansoni A.M., Reuff U., StampeD. et al. Mikroaggregate in 'gelagerten Blut. Anaesthesest, 1978, Bd 272, S.II5-II8.

96. Gansoni A.M., StampaD., Koerner K. et al. Das buffucoat-freie Erythrozytenlchzentrat. Eckpfeiler eines Blutomponentenprog-ramms. Übersichten.- Deutsche Medizinishe Wochenschrift, 1978, 39, I526-I53I, 1-5.

97. Gervin A.S., Mason K.G., Buckman B.F. The effect of Agitation cf Stored Human Blood on Microaggregate Pormation.-Transfusion, 1978, V.I8, (I), p.73-78.

98. Gibson J.G., Reed S.B., McManus T.J. et al. A citrate phosphate dextrose solution for the preservation of human blood.-Amer.J.Clin.Pathol., 1957, v.28, p.569.

99. Greenwalt T. A new type of phosphoric acid compounds isolated from blood with some remarks on the effect of L-glyceric acid. J.BioLChem., 1925, v.6 (3), p.339.

100. Greenwalt T.J.:and Lao O.F. Evalution of Toluidine Blue for Measuring Erythrocyte Membrane Loss during in Vivo Ageing-Brith. Journal of Haematologie, 1978, v.39, p.545-550.

101. Halbhuber K.J., Feurstein F.R., Stibenz D. et al. Sialin-sauregehalt und JgG- Bindung der Glykolax konservierten Erythronten.- Folia Haematol., 1979, Bd 106(3), S382-388.

102. Habbhuber K.y Stibenz D., Feherstein H. et al. Defined* rearrangement of the membrane of banked erythrocytes.-Acta biol. med.germ., 1981, Bd 40, v.4 (5).S.419-421.

103. Hamasaki N., Ideduchi H., Ykehara Y. Regeneration of 2,3 -Biphosphoglycerate and ATP in stored, Erytrocytes by Phospho-enolpyruvate: A New Preservative for blood storage.- Transfusion, 1981, 21(4), 391-396.

104. Haradin A.R., Weed R. J., Reed C.F. Changes in physical properties of stored erythrocytes. Relatioship to survival in vivo.-Transfusion, 1969, v.9 (5), p.229-237.

105. Kegedüs E., Harsanyi V. andHollan S. The effect of Increasing Glucose in CPD on Quality of stored Blood.-Folia Haemat., 1980, Bd 107 (6), S.928-323.

106. Högman C.F., Hedlund K., Akerblom B. et al. Red Blood Cell Preservation in Protein-Pocr Media. I. Leucocyte Enzymes as a Cause of Hemolysis.- Transfusion, 1978, v.18 (2), p.233-241.

107. Högman C.F., Hedlund K., Zetterström H. Clinical usefulness of red cells preserved in protein-,poor mediums. New Engl. J.Med., 1978, v.299, p.377-381.

108. Högman C.L. New trends in blood component preservation ISBT News letter Bulletin de la sits, 190, 4.

109. Högman C.F., Azzo E., Hedlund K. Red Blood Cell preservation in Protein-Poor Media. 2. Studies of Changes in Red Cell Shape during storage. Haemqtologia, I98\ 13 (1-4), p.15 -144.

110. Högman C.F., Hedlund K., Sahleström L. III. Protection against in vitro Hemolysis. YacSang., 1981, v.41, p.274-281.

111. Högman C.F., Hedlund K., C.-ä de Verdier Red Cell preservation in a SAGM-Medium also containing dihydroxyacetone. International congress ISH-ISBT, I98E, p.280.

112. Jacob H.S., Jandl J.Ha Effect of sulfhydryl inhibition on red blood cells. II. Glutation IX regulation of the hexose monophosphate pathway.- J.Biol.Chem., 1966, v.241, p.42-43.

113. Kopriva C.J., Ratliff J.L., Fletcher N. et al. Biochemical and Haematological Changes Associated with Massive Transfusion of ACD-Stored Blood in Severely Injured Combat Casualties.-Annals of Surgery., 1972, v.I76 (5), pI44£I57.

114. K03Saberg ¿.Reversible enzymatic synthesis of diphosphopyrich-ne nucleotide and inorganic pyrophosphate.-J.Biol.Chem., 1950, v.I82, ET2, p.779-793.

115. Kurokawa J. The effect of vitamin E on preservation c£ blood J.Vitaminol (Kyoto, 1970, v.16, p.180-189.

116. La Celle. Alteration of deformability of erythrocyte membrane in stored blood-transfusion, 1969, v.9 (5),p.238-245.

117. Laborit H., Baron 0., Lamothe C. et al. Variations du 2,3-diphosphoglycerate (2,2-DPG) globulaire au cours du choc hémorragique du lapin et sous l'action d'ageiits activateurs de la^LycolyseT- Agressologie, 1978» v.I3, p.233-241.

118. Loutit J., Mollison P., Young M. Citric acid-sodium-citrate-glucose mixtures for blood storage.-Q.J.Exp.Physiol., 1943, v.32, p.183-202.

119. Lux S.E., John K.M., Ukena T.E, Diminished spectrum extraction from ATP-depleted human erythrocytes. Evidence relating spectrin to changes in erythrocytes shape and deformability. Jt Clin.Invest., 1978, v.6I, p.815-818.

120. Mayer K. Transfusion of blood and blood components.-Crit. Care Med., 1974, v.2, p.II8-I22.133* Mc Conn Rita, Derrick J»B. The Respiratory Function of Blood. Transfusion and Blood storage.-Anasthesiology, 1972, v.36 (2), P.II9-I27.

121. Mijovic V., Brozovic H., Hughes S. et al.- Leukocyte-depleted blood: a comparison of filtration techniques.-Transfusion, 1982, v.23,(I), p.30-33.

122. Millner W.V. and Wilson M.J. Effect of centrifugation on erythrocytes.-Vox sang., 1974, v.I4, p.278-282.

123. Millner L.V., Butcher IC. Transfusion reactions reported after transfusions of red blood cell and of whole blood.-Transfusion, 1978, v.I8,(4), p.493-495.

124. Modern Problems of Blood Preservation/Ed by W.Spielman and S.Seidl.Gustav Fischer Verlag.Stiittgart, 1970.

125. Mohondas N., Jacobs M.S., blark M.R. et al. CorrelationreaCbetween reduced red cell deformability and in vivcKcell cells survival in rabbits.-Blood, v.58 (5), p.37 (33 th-Annual Meeting of American society of hematology).

126. Moore G.L. Changes in erythrocyte membranes during cold storage of whole blood. Vox.Sang., 1972, v.22, p.481-487.

127. Moore G.L., Harrison J.H., Ran D.C. The relationship between Hemoglobin function and membrane integrity in erythrocyte during cold storage.-Transfusion, 1972, v.12 (3),p.175-179.

128. Moore G.L., Ledford M.E., Brooks D«E. The Distribution and Utilization of Adenine in Red Blood Cells During 42 Days of 4°C. Storage.- Transfusion, 1978, v.I8 (5),p.533-545»

129. Mourad IT. Effect of prolonged storage on erythrocyte enzymes." Transfusion, 1969, v.9 (3), p.141-142.

130. Murphy I.R. Erythrocyte metabolisms I.The equilibration14of glucose.- C between serum and erythrocytes.-J-Lab» Clin.Med., I960, v.55., p.281-285.

131. Nakao M., Nakao T., Tatibana M. et al. Effect of inosine and adenine on adenosine triphosphate regeneration and shape transformation in long-stored erythrocytesr-Biochem. Biophys.Acta, 1959, v.32 (2), p.564-565.

132. Overview of Blood/Ed. by C.Bishop, 1976, p.3> p.81-82.

133. Peck C.C., Moore G.L. Adenin in Blood Preservation. CRC. Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences, 1985, p.175-212.159« Pegels C.C. Statistical effects of varying blood life span from 14 to 28 days. Transfusion, 1978, v.I8, p.189-195.

134. Polesky H. The Emily Cooley lecture: Leucocyte-poor blood, a study in the evalution of component therapy. Ins A Seminar on Blood Component/Ed.Myhre B.A., Washington, AABB, 1977, p. 55«

135. Pollock T.W., Rosato E.F., Delivoria Papandopoulos Mand Miller L.D. In vivo effect of dihydroxyacetone on oxygen-hemoglobin affinity in Rhesus Monkeys. - J.Surg.Res., 1976, v.20, p.509-5H.

136. Prankard T.A. The Effect of Cuanosine.-J.Lancet, 1955, v.I, p.469-475.

137. Rapoport S.M., Essays Biochem., 1968, v.4, p.69.

138. Rapoport S.M. Control Mechanism of res cell glycolysis1.: The human red cell in vitro/Ed. T.S.Greenwalt, G.A.Jamies-son Grune and Stratton, New York, London, 1974, p.I53-I7&

139. Red Cell Preservation and survival.- Ins Preservation of

140. Red Blood Cells. Published National Academy SEiences. Washington, 1973.

141. Reiss R.F., Katz A.J., Microaggregate Content and flow Rates of Packed Red Blood Cells. Transfusion, 1977, v.17 (5), p.484-493.

142. Robertson M. Transfusion with preserved red blood cells. Brit. Med.J., 1918, v.I., p.691-695.

143. Rosa R., Najean Y., Prehu M. et al. Total deficiency of red celldiphosphoglycerate mutase (DPGM) Blood, 1977, V.50, p.84-88.

144. Saint Blancatd J., Allary M., Carpentier A.et al. La charge energetique desnucleotides adenyliques: son interet pour detemiinor la validite de sangs conservas.- Ann.pharm.frans., 1974, v.32 (6), p.359-366.

145. Sandler S. Recent Advances in the Practice and Technology of Blood Transfusion and Technology of Blood Transfusion- Hematology Update (Primary Care) 1980, v.7, №3,347-367.

146. Scheven, Ungen E., Rumpel E. et al. Forward und verform bewertung konservierter Erythrozyten.- Folia Haematol., 1980, Bd 107 (I-.S.89-103.

147. Schiffer C.A.Some aspects of recent advances in the use of blood cell component.- Brit. J.Haematol., 1978, v.39, p.28£L

148. Schmidt P.J. Red cells for transfusion.- Hew England Journal of Medicine, 1978, 299, I4H-I4I2.

149. Shape* A.W. , Tague L.L., Y/ellch M.E. et al. 2,3-diphosphoglycerate in red cells stored in acid-citrate-dextrose and citrate-phosphate-dextrose. Implications regarding delivery of oxygen. J.Lab.and Clin.Med., 1971, v.77., p.430-438.

150. Schieldsc.E. Studies on Stored Whole Blood. II Use of Packed Red Blood Cells.- Transfusion, I9&9, v.9 (1-, p.1-4.

151. Scliields C.E. Effect of Plasma Removal on Blood Stored in ACD with Adenine. Transfusion, 1971, v.II (3), p. 134-138.

152. Simon E.R. Adenine and purine nucleosides in human red cell preservation. A review.-Transfusion, 1967, v.7,p.395-401.-145185. Simmons R.L., Collins I.A., Heister-Kamp C.A. et al.

153. Cogulation disoders in combat casulties. I. Acute changes after wounding* II. Effect of massive transfusion} Ill.Post-resustative changes. Ann.Surg., 1969» I69> 4-55.

154. Snyder E.L., Root R.K., Hezzey A.et al» Effect of microag-"gregate blood filtration on granulocyte concentrates in vitro.- Transfusion, v.25 (I), p.25-50.

155. Snyder E.L., Hezzey A., Joyner R. et al. Stability of red cells antigens during prolonged storage in citrate-phosphate-dextrose and a new preservative solution.- Transfusion, 1985, v.25 (2), p.165-166.

156. Smith B.D., La Celle. Parallel Decrease of Erythrocyte Membrane Deformability and Spectrin Solubility at Low pH.-Blood, 1979, v.55 (I), p.15-19.

157. Snivasfcava S.K., Villacorte D., Beutler E. Correlation between adenylate metabolising enzymes and adenine nucleotide levels of erythrocytes during blood storage in various media. Tranfusion, 1972, v.12 (5), p.190-197.

158. Sohmer P.R. and Ben Dawson. The significance of 2,3-DPG in Red Blood Cell Transfusion- In: Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences, 1979, Issue 2, CRC Press, p.1-86.

159. Solis R.T., Goldfinger D., Gribbs M. et al. Physical charac-terisitc of microaggregates in stoced blood. Transfusion, 1974, 14,-558.

160. Strauss D. Bewertung der international üblichen Blutstabili-satozen für eine effektive Erythrozytensubstitution. Folia Haematol., 1978, Bd. 105, S.407-419.

161. Strauss D. and de-Verdier. Preservation of Red Blood Cells with Purines and Nucleosides. III. Synthesis of Adenine, Guanine, Hypoxantine Nucleotides. Folia Haematol, 1980,1. Bd 3, S.434-453.

162. Strumia M.M., Strumia P.V. Preservation c£ blood for transfusion. IX The effect of increased pH and addition of ino-sine on the red cell function. J.Lab.Clin.Med., 1972, v.79, p.863-866.

163. Technical Manual American Association of Blood Banks/Ed. P.Kidman, 8th ed., 1981, 39-41.

164. Tibilova N.IT., Markova N.A. Prospects of packed red cells rejuvenation. Probleme der Hamatology, Transfusion and Transplantation, 1982, v.9» S.I-56.

165. Tomoda A., Tanishima K., Tanimoto K. et al. Met-form hemoglobin in long-term stored AOD blood.Vox Sang., 1980, v.38 (4), p.205-209.

166. Torelli L. La dihydroxyacetone dans le traitement de l'oedeme cerebral. Agressologie, 1969, v.10, p.177-181.

167. Tsuboi K.K. Limiting roll of adenine nucleotide in the glycolysis of the human erythrocyte. J.Biol.Chem., 1965, v.240 (2), p.582-587.

168. Valeri G.R. and Zaroulis C.G. Rejuvenation and freezing of outdated human red cells. Ins Hemoglobin and Red Cell Structure and Function v2. Advances in Experimental Medicine Biology Series/Ed.Brever C.Phenum, New-York, 1972, 457.

169. Valeri C.R. Viability, Function and Rejuvenation of Previos-ly Frozen Washed Red Blood Cells.- In: Preservation of Red Blood Cells. Published National Academy of Sciences, 1973» p.265-299.

170. Valeri C.R. Blood Banking and the Use of Frozen Blood Produc-cts. CRC Press, Inc., 1976, p.30-31,39.

171. Verdier de C.-H., Hogman C.F., Garby L. et al. Storage of human red cells. II The effect pH and of the addition of adenine. Act.Physiol.Scand., 1964, v.60, p.I4I-I46.

172. Verdier de C.-H, Garby L., Hjelm et al. Adenin in Blood preservation. Posttransfusion viability and biochemical changes, Transfusion, 1964, v.4, p.331-338.

173. Walker W.H., Beraud L., G.Scholz et al. Ablood bag systemfor optimal preparation of blood component.- International congress ISH-ISBT, 1982, p.279.

174. Weed R.L., La Celle P.L., Udkow M. Structure and function of the red cell membrane} changes during storage. In: The human Red Cell in vitro, 1974, p.65-89.

175. Wilson J., Ratliff N., Mikat E. et al. Leucocyte changes in pulmonary circulation. Chest., 1971» 39» 369.

176. Zucher H. and Borelli G. Vilcous metamorphosis produced by chilling and by clotting.- Thromb.Diath. Haemorrh., I960,' 4, 424.