Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Консервативный конформационный эпитоп в стержневом регионе гемагглютинина вирусов гриппа А филогенетически близких подтипов H1, H2, H5 и H6

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Липатов, Александр Серафимович

Список употребляемых сокращений

I. Введение 5 П. Обзор литературы

ПЛ. Общее строение вириона вируса гриппа и функции вирусных 10 белков

П.2. Гемагглютинин вирусов гриппа А, его структура и функции

II.2.1. Рецептор связывающий сайт 20 П.2.2. Пептид слияния

11.2.3. Участок нарезания гемагглютинина (протеолитисеский сайт)

11.2.4. Антигенная структура гемагглютинина 27 П.З. Изменения гемагглютинина в процессе адаптации вирусов гриппа к новому хозяину (на примере адаптации к легким мышей)

Ш. Материалы и методы

III.1. Вирусы

Ш.2. Клетки

Ш.З. Моноклональное антитело С

Ш.4. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)

Ш.5. Нейтрализация инфекционности вирусов в культуре клеток

Ш.6. Пассирование вируса в легких мышей

111.7. Титрование инфекционности вирусов на куриных эмбрионах

111.8. Титрование инфекционности вирусов на мышах

111.9. Получение радиоактивно меченых вирусспецифических белков 48 для реакции радиоиммунопреципитации

ШЛО. Получение вирусспецифических белков, радиоактивно меченых в пульс - чейз условиях. 111.11. Радиоактивное мечение вирусспецифических белков в присутствии туникамицина

ШЛ2. Реакция радиоиммунопреципитации (РИП)

111.13. Электрофорез белков в полиакриламидном геле

IIL14. Определение нуклеотидной последовательности гена НА

111.15. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей 56 генов НА

111.16. Сравнение аминокислотных последовательностей НА 56 различных штаммов и анализ локализации замен на 3-мерной структуре НА подтипа НЗ

111.17. Пассивная иммунизация мышей МКА С179 и 56 экспериментальная инфекция

IV. Результаты

IV.1. Взаимодействие МКА С179 с вирусами гриппа подтипа Н5 и Н6 58 IV.1.1. Нейтрализация вирусов подтипов Н5 и Н6 моноклональным антителом С179 в культуре клеток IV. 1.2. Распознавание НА подтипов Н5 и Нб МКА С179 в реакции радиоиммунопреципитации (РИП) IV.1.3. Влияние созревания НА подтипа Н6 на его распознавание МКА 60 С179 в РИП

IV. 1.4. Взаимодействие МКА С179 с НА подтипа Н6, меченным в присутствии туникамицина, в РИП rV.1.5. Сравнение аминокислотных последовательностей участков, распознаваемых МКА С179, в НА подтипов HI, Н2, Н5, и Нб IV.1.6. Потенциальные сайты гликозилирования в НА подтипов HI, 69 Н2, Н5 и Нб

IV.2. Адаптация птичьего штамма вируса гриппа A (H5N2) к легким 69 мышей.

IV.2.1. Репродукция вируса в легких мышей в ходе адаптации.

Вирулентность адаптированного варианта Mal.dk/PA/84-MA IV.2.2. Антигенные свойства НА вирусов Mal.dk/PA/84 и 73 Mal.dk/PA/84-MA. Резистентность к а- и р-ингибиторам гемагглютинации

IV.2.3. Анализ первичной структуры НА вирусов Mal.dk/PA/84 и 74 Mal.dk/PA/84-MA

IV.2.4. Реакции in vitro МКА С179 с адаптированными к мышам вариантами птичьих штаммов с подтипами НА Н5 и Н2 IV.3. Эксперименты in vivo по профилактике и лечению летальной бронхопневмонии мышей, вызванной вирусами гриппа Hl, Н2 и Н5 подтипов, моноклональным антителом С

1У.3.1. Профилактический эффект МКА С179 при инфекции, 79 вызываемой вирусом гриппа А человека с НА подтипа Н

IV.3.2. Профилактический и лечебный эффекты МКА С179 при 80 инфекции, вызываемой вирусом гриппа птиц с НА подтипа Н

IV.3.3. Профилактический и лечебный эффекты МКА С179 при 81 инфекции, вызываемой вирусом гриппа птиц с НА подтипа Н

V. Обсуждение

VI. Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Консервативный конформационный эпитоп в стержневом регионе гемагглютинина вирусов гриппа А филогенетически близких подтипов H1, H2, H5 и H6"

Поверхностный гликопротеид гемагглютинин (НА) является основным антигенным компонентом вирусов гриппа. Вируснейтрализующие антитела, индуцированные гемагглютинином, составляют основу гуморального иммунитета, защищающего организм человека от гриппозной инфекции [Murphy and Webster, 1990]. Антигенная структура гемагглютинина подвержена постоянным изменениям в результате селективного давления иммунной системы организма-хозяина. Это приводит к селекции вариантов вируса, способных избегать нейтрализующего эффекта антител и преодолевать специфическую иммунную защиту человека. Этот же механизм, названный антигенным дрейфом, снижает эффект от противогриппозной вакцинации, основанной, главным образом, на применении цельных и субъединичных инактивированных и живых вакцин [Kilbourne, 1987]. В ситуации же, приводящей к появлению пандемических штаммов вируса гриппа, когда вирус с новым антигенным подтипом НА попадает в человеческую популяцию (антигенный шифт) [Murphy and Webster, 1990; Webster et al., 1992], существующие вакцины могут оказываются неэффективными. Эти факты говорят о необходимости поиска новых подходов для создания вакцин и противогриппозных препаратов с широким спектром активности [Kilbourne, 1999]. Одним из таких подходов может быть поиск и характеризация консервативных антигенных и нейтрализующихся детерминант в молекуле гемагглютинина вируса гриппа, и приготовление соответствующих антител. Такие консервативные детерминанты могли бы входить в состав противогриппозных вакцин, а антитела использоваться для экстренной пассивной иммунизации при противоэпидемических мероприятиях.

Молекулярные исследования антигенной структуры НА показали, что участки, взаимодействующие с антителами, расположены главным образом в НА1-глобулярном домене [Wiley and Skehel, 1987]. Аминокислотные последовательности данных сайтов чрезвычайно вариабельны и различаются не только между подтипами гемагглютинина, но и внутри одного подтипа. С другой стороны, в НА2-субъединице НА были обнаружены консервативные, детерминанты [Graves et al., 1983; Laver et al., 1980; Raymond et al., 1986; Verhoeyen et al., 1980]. Эти данные позволяют предположить, что консервативные антигенные сайты в молекуле НА могут индуцировать антитела с широкой перекрестнонейтрализующей активностью.

Данное предположение было подтверждено исследованиями Y. Okuno и соавт. [Okuno et al., 1993; 1994], которые получили и охарактеризовали моноклональное антитело (МКА) к НА подтипа Н2, обладающее нейтрализующей активностью в отношении штаммов вирусов гриппа подтипов Н2 и HI. Показано, что данное МКА (С 179) распознает конформационный эпитоп в стержневом регионе молекулы НА, консервативный у вирусов гриппа А подтипов Н2 и HI.

Известно, что вирусы гриппа птиц с подтипом НА Н5 и Н6 филогенетически близки к штаммам HI и Н2 подтипов [Air, 1981; Nobusawa et al., 1991]. В данной работе вирусы гриппа HI, Н2, Н5 и Н6 подтипов были исследованы в реакциях с МКА С179. Так же в экспериментах на животных были изучены протективный и терапевтические эффекты этого антитела при летальной бронхопневмонии, вызванной адаптированными к мышам штаммами вируса гриппа с подтипами гемагглютинина HI, Н2 и Н5.

Целью настоящей работы было исследование консервативного эпитопа в стержневом регионе гемагглютинина вирусов гриппа А, общего для филогенетически близких подтипов, и выявление в экспериментах на животных профилактического и лечебного действия моноклонального антитела С179, распознающего этот эпитоп.

Для достижения поставленной цели в ходе исследования решались следующие задачи:

1. Сравнительное исследование взаимодействия моноклонального антитела С179, распознающего консервативный эпитоп в стержневом регионе гемагглютинина, с гемагглютининами подтипов HI, Н2, Н5 и Нб и выявление структурных основ и особенностей его взаимодействия с гемагглютининами разных подтипов.

2. Получение и характеризация высокопатогенного для мышей, пневмовирулентного варианта вируса гриппа птиц подтипа Н5.

3. Изучение влияния адаптации вирусов гриппа птиц подтипов Н2 и Н5 к млекопитающим на структуру конформационного эпитопа в стержневом регионе гемагглютинина и его распознавание моноклональным антителом С179.

4. Определение эффективности моноклонального антитела С179 для защиты и лечения экспериментальной бронхопневмонии, вызванной у мышей вирусами гриппа с подтипами гемагглютинина Н1, Н2 и Н5.

Научная новизна и практическая ценность работы.

В результате исследования вирусов гриппа А подтипов Н5 и Н6 в реакциях с МКА С179 обнаружен общий конформационный эпитоп в стержневом регионе НА, аналогичный описанному ранее для вирусов подтипов Н1 и Н2. Показано, что взаимодействие МКА с гемагглютинином штаммов Н1, Н2 и Н5 подтипов нейтрализует инфекционность вирусов. Для вирусов подтипа Н6 показано, что гликозилирование молекулы НА влияет на распознавание МКА С179 конформационного эпитопа и препятствует их нейтрализации.

Для моделирования гриппозной инфекции на мышах получен и охарактеризован адаптированный к мышам вариант непатогенного птичьего штамма с подтипом гемагглютинина Н5. Изучен процесс адаптации непатогенного вируса гриппа птиц к млекопитающему. Определены изменения в НА, сопровождающие преодоление межвидового барьера и приобретение вирулентности для нового хозяина.

Показано, что адаптация вирусов гриппа А птиц с подтипами НА Н2 и Н5 к млекопитающим, приводит к изменениям в аминокислотной последовательности одного из участков конформационного эпитопа в стержневом регионе НА, не влияя на его распознавание МКА С179 и нейтрализацию вирусов.

В экспериментах на животных показано, что применение МКА С179 эффективно для профилактики и лечения летальной бронхопневмонии, вызываемой вирусами гриппа А подтипов HI, Н2 и Н5.

Поскольку вирусы гриппа с подтипом Н2 могут рассматриваться в качестве вероятного донора гена НА для возможного нового пандемического штамма [Webster et al., 1992; Shafer et al., 1993; Govorkova and Smirnov, 1997; Makarova et al., 1999], а вирус подтипа H5 вызвал локальную вспышку среди людей с высоким процентом летальности в 1997 г. [Jong de et al., 1997; Claas et al., 1998; Subbarao et al., 1992], исследования вирусов этих подтипов представляют интерес в практическом аспекте. Полученные данные демонстрируют наличие консервативного перекрестно-нейтрализующегося эпитопа в НА подтипов HI, Н2 и Н5 и показывают эффективность МКА к нему для профилактики и лечения экспериментальной инфекции, вызванной штаммами этих подтипов. Поиск других таких консервативных детерминант может быть одним из перспективных направлений в создании профилактических и лечебных противогриппозных препаратов с широким спектром активности.

Положения, выносимые на защиту. 1. Гемагглютинин вирусов гриппа А, HI, Н2, Н5 и Н6 подтипов, содержит общий, консервативный конформационный эпитоп в стержневом регионе, который распознается МКА С179. Для вирусов гриппа HI, Н2 и Н5 подтипов данный эпитоп является нейтрализующим. Гликозилирование молекулы НА подтипа Н6 влияет на распознавание эпитопа и препятствует нейтрализации вирусов этого подтипа МКА С179.

2. Серийное пассирование непатогенного вируса гриппа птиц с подтипом НА Н5 в легких мышей приводит к его адаптации и приобретению вирулентности. Процесс адаптации сопровождается постадийными изменениями первичной структуры НА и его антигенности.

3. Адаптация вирусов гриппа птиц Н2 и Н5 подтипов к млекопитающим приводит к изменению первичной структуры одного из участков конформационного эпитопа в стержневом регионе НА.

4. Применение МКА С179 эффективно для профилактики и лечения экспериментальной летальной бронхопневмонии у мышей, вызванной адаптированными вариантами штаммов вируса гриппа подтипов HI, Н2 и Н5.

П. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Липатов, Александр Серафимович

VI. ВЫВОДЫ.

1. Обнаружен общий конформационный эпитоп в стержневом регионе гемагглютинина у вирусов гриппа А подтипов Н5 и Н6, аналогичный описанному ранее для вирусов подтипов HI и Н2 и распознающийся моноклональным антителом С179. Для вирусов гриппа подтипов Hl, Н2 и Н5 данный эпитоп является нейтрализующим.

2. У вирусов с НА подтипа Н6, гликозилирование молекулы гемагглютинина влияет на распознавание конформационного эпитопа МКА С179 и препятствует нейтрализации вируса.

3. Адаптирован к мышам и охарактеризован пневмовирулентный вариант штамма вируса гриппа А птиц с подтипом гемаг-глютинина Н5.

4. Определены нуклеотидные последовательности гена гемаг-глютинина и первичная структура гемагглютинина вирусов A/Mallard duck/Pensylvania/10218/84 (H5N2), его адаптирован-ного к мышам варианта A/Mallard duck/Pensylvania/10218/84-MA (H5N2) и штамма A/Mallard duck/ Alberta/211/85 (H6N2). Данные помещены в Генбанк под номерами AF100179, AF100180 и AFI00181.

5. Обнаружены аминокислотные замены, локализованные в участке А (аминокислоты 318-322 в НА1 субъединице) общего нейтрализующего эпитопа в стержневом регионе гемагглютини- на вирусов гриппа птиц подтипов Н2 (Thr3i8—>Пе) и Н5 (Ьеиз2о—>Рго), как результат адаптации к новому хозяину.

6. В экспериментах на животных показана высокая эффективность моноклонального антитела С179 для защиты и лечения летальной бронхопневмонии, вызванной вирусами гриппа с подтипами гемагглютинина Н1, Н2 и Н5.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Липатов, Александр Серафимович, Москва

1. Ашмарин И.П. Вычисление LD50 при малом числе подопытных животных. // ЖМЭИ.-1959. -с. 102.

2. Говоркрва Е.А., Смирнов Ю.А. Молекулярные основы и механизмы адаптации вирусов гриппа к репродукции в легких мышей. // Вопр. Вирусол. -2000. -Том 45 (принят в печать).

3. Корн Г., Корн Т. Справочник по математике для научных работников и инженеров /Ред. Аранович И.Г. -Наука: Москва; 1978. -с. 138.

4. Смирнов Ю.А., Говоркова Е.А., Кизина A.A., Ямникова С.С., Львов Д.К. Штамм вируса гриппа А/Япония/1/57(Н2Ш) для моделирования инфекции у мышей. // Авторское свидетельство № 1735363 от 22.01.1991.

5. Смирнов Ю.А., Говоркова Е.А., Кизина A.A., Ямникова С.С., Львов Д.К. Штамм вируса гриппа A (H2N3) птиц для моделирования инфекции гриппа. // Патент № 20213 54 от 15.10.1994.

6. Шилов A.A., Руднева И.А., Обросова-Серова Н.П., Чайка О.В., Синицын Б.В. Адаптация вируса гриппа к новому хозяину: генетическая изменчивость вирусагриппа человека в процессе адаптации к мышам. // Вопр. Вирусологии. -1984. Том 29. -с.410-417.

7. Шилов А.А., Синицын Б.В., Руднева И.А. Роль гемагглютинина в процессе адаптации вируса гриппа к новому хозяину и приобретении им вирулентных свойств. //ДАН СССР. -1991. -Том 318. -с.995-999.

8. Шилов А.А., Синицыи Б.В. Изменения в гемагглютанине при адаптации вируса гриппа к мышам и их роль в приобретении вирулентных свойств и устойчивости к сывороточным ингибиторам. // Вопр. Вирусологии. 1994. -Том 39. -с.153-157.

9. Жирнов О.П., Ксенофонтов А.Л., Кленк Х-Д. Матриксный белок Ml вируса гриппа А имеет сходство с ингибиторами протеаз. // ДАН России. -1999. -Том 367. -с.690-693.

10. Air, G.M. Sequence relationships among the hemagglutinin genes of 12 subtypes of influenza A virus. //Proc.Natl.Acad. Sci. USA. -1981. -Vol.78, -p.7639-7643.

11. Anders, E.M., Hartley, C.A. and Jackson, D.C. Bovine and mouse serum P inhibitors of influenza A viruses are mannose-binding lectins. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. -1990. -Vol.87, -p.4485-4489.

12. Anonimous. Influenza A H9N2. // Weekly Epid. Rec. -1999. No. 15. 16 Apr.

13. Barbey-Morel, C.L., Oeltmann, T.N., Edwards, K.M. and Wright, P.F. Role of respiratory tract proteases in infectivity of influenza A virus. // J.Infect.Dis. -1987. -Vol.155, -p. 667-672.

14. Baudin, F., Bach, C., Cusack, S. and Ruigrok, R.W. Structure of influenza virus RNP. I. Influenza virus nucleoprotein melts secondary structure in panhandle RNA and exposes the bases to the solvent. //EMBO J. -1994. -Vol.13, -p.3158-3165.

15. Beaton, A.R. and Krug, R.M. Transcription antitermination during influenza viral template RNA synthesis requires the nucleocapsid protein and the absence of a 5' capped end. //Proc.NatI.Acad.Sci. USA. -1986. -Vol.83, -p.6282-6286.

16. Bentz, J., Ellens, H. and Alford, D. An architecture for the fusion site of influenza hemagglutinin. // FEBS Lett. -1990. -Vol.276, -p. 1-5.

17. Bosch, F.X., Orlich, M., Klenk, H-D. and Rott, R. The structure of the hemagglutinin, a determinant of the pathogenicity of influenza viruses. // Virology. -1979. -Vol.95, -p. 197-207.

18. Bouloy, M., Plotch, S.J. and Krug, R.M. Globin mRNAs are primers for the transcription of influenza viral RNA in vitro. //Proc.Natl.Acad.Sci. USA. -1978. -Vol.75, -p.4886-4890.

19. Brown, E.G. Increased virulence of a mouse-adapted variant of influenza A/FM/1/47 virus is controlled by mutations in genome segments 4, 5, 7, and 8. // J.Virol. -1990. -Vol.64. -P.4523-4533.

20. Bukrinskaya, A.G., Vorkunova, N.K., Kornilayeva, G.V., Narmandbetnova, R.A. and Vorkunova, G.K. Influenza virus uncoating in infected cells and effect of rimantadine. //J.Gen.Virol. -1982. -Vol.60, -p.49-59.

21. Bullough, P.A., Hughson, F.M., Treharne, A C., Ruigrok, R.W., Skehel, J.J. and Wiley, D.C. Crystals of a fragment of influenza haemagglutinin in the low pH induced conformation. //J.Mol.Biol. -1994. -Vol.236, -p. 1262-1265.

22. Bullough, P.A., Hughson, F.M., Skehel, J.J. and Wiley, D.C. Structure of influenza haemagglutinin at the pH of membrane fusion. // Nature (London). -1994a. -Vol.371. -p.37-43.

23. Carroll, S.M. and Paulson, J.C. Differential infection of receptor-modified host cells by receptor-specific influenza viruses. // Virus Res. -1985. -Vol.3, -p. 165-173.

24. Caton, A.J., Brownlee, G.G., Yewdell, J.W. and Gerhard, W. The antigenic structure of the influenza virus A/PR/8/34 hemagglutinin (HI subtype). // Cell. -1982. -Vol.31, -p.417-427.

25. Colman, P.M. Influenza virus neuraminidase: enzyme and antigen. // The influenza viruses,-1989, -p. 175-218.

26. Compans, R.W., Content, J. and Duesberg, P.H. Structure of the ribonucleoprotein of influenza virus. //J.Virol. -1972. -Vol.10, -p.795-800.

27. Connor, R.J., Kawaoka, Y., Webster, R.G. and Paulson, J.C. Receptor specificity in human, avian, and equine H2 and H3 influenza virus isolates. // Virology. -1994. -Vol.205, -p.17-23.

28. Daniels, R. S., Downie, J. C., Hay, A.J., Knossow, M., Skehel, J.J., Wang, M.L. and Wiley, D.C. Fusion mutants of the influenza vims hemagglutinin glycoprotein. // Cell. -1985. -Vol.40, -p.431-439.

29. Deshpande, K.L., Fried, V.A., Ando, M. and Webster, R.G. Glycosylation affects cleavage of an H5N2 influenza virus hemagglutinin and regulates virulence. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. -1987. -Vol.84, -p.36-40.

30. Duff, K.C., Gilchrist, P.J., Saxena, A.M. and Bradshaw, J.P. Neutron diffraction reveals the site of amantadine blockade in the influenza A M2 ion channel. // Virology. -1994. -Vol.202, -p.287-293.

31. Endo, Y., Carroll, K.N., Ikizler, M.R. and Wright, P.F. Growth of influenza A virus in primary, differentiated epithelial cells derived from adenoids. // J.Virol. -1996. -Vol.70, -p.2055-2058.

32. Frace, M.A., Klimov, A.I., Rowe, T., Black, R.A. and Katz, J.M. Modified M2 proteins produce heterotypic immunity against influenza A virus. // Vaccine. -1999. -Vol.17, -p.2237-2244.

33. Garten, W., Bosch, F.X., Linder, D., Rott, R. and Klenk, H-D. Proteolytic activation of the influenza virus hemagglutinin: The structure of the cleavage site and the enzymes involved in cleavage. // Virology. -1981. -Vol.115. -p.361-374.

34. Gething, M.J., White, J.M. and Waterfield, M.D. Purification of the fusion protein of Sendai virus: Analysis of the NHi-terminal sequence generated during precursor activation. //Proc.Natl.Acad.Sci. USA. -1978. -Vol.75, -p.2737-2740.

35. Gething, M.J. and Sambrook, J. Cell-surface expression of influenza haemagglutinin from a cloned DNA copy of RNA gene. // Nature (London). -1981. -Vol.293, -p.620-625.

36. Gitelman, A.K., Kaverin, N.V., Kharitonenkov, I.G., Rudneva, I.A. and Zhdanov, V.M. Changes in the antigenic specificity of influenza hemagglutinin in the course of adaptation to mice. //Virology. -1984. -Vol.134. -P.230-232.

37. Goto, H. and Kawaoka, Y. A novel mechanism for the acquisition of virulence by a human influenza A virus. //Proc.Natl.Acad.Sci. USA. -1998. -Vol.95, -p. 10224-10228.

38. Gottschalk, A. The chemistry of virus receptors. // The viruses. / Eds. F.M. Burnet and W.M. Stanley. -Academic Press, New York, 1959. -p. 51-61.

39. Govorkova, E.A., Smirnov, Yu.A. Cross-protection of mice immunized with different influenza A (H2) strains and challenged with viruses of the same HA subtype. // Acta Virol. -1997. -Vol.41. -P.251-257.

40. Graves, P.N., Schulman, J.L., Yong, J.F. and Palese, P. Preparation of influenza virus subviral particles lacking the HA1 subunit of hemagglutinin: unmasking of cross-reactive HA2 determinants. // Virology. -1983. -Vol.126, -p. 106-116.

41. Hartley, C.A., Jackson, D.C. and Anders, E.M. Two distinct serum mannose-binding lectins function as J3 inhibitors of influenza virus: identification of bovine serum j3 inhibitor as conglutinin. //J.Virol. -1992. -Vol.66. -P.4358-4363.

42. Hartley, C.A., Reading, P.C., Ward, A.C., and Anders, E.M. Changes in the hemagglutinin molecule of influenza type A (H3N2) virus associated with increased virulence for mice. // Arch.Virol. -1997. -Vol.142. -P.75-88.

43. Hay, A.J., Kennedy, N.C., Skehel, J.J. and Appleyard, G. The matrix protein gene determines amantadine-sensitivity of influenza viruses. // J.Gen. Virol. -1979. -Vol.42. -p.189-191.

44. Hay, A.J., Wolstenholme, A.J., Skehel, J.J. and Smith, M.H. The molecular basis of the specific anti-influenza action of amantadine. // EMBO J. -1985. -Vol.4, -p.3021-3024.

45. Helenius, A. and Marsh, M. Endocytosis of enveloped animal viruses. // Membrane Recycling, CIBA Foundation Monographs Symposium. -Pittman Books, Ltd., London, 1982. -Vol.92, -p. 59-76.

46. Hirst, G.K. The agglutination of red cells by allantoic fluid of chick embryos infected with influenza virus. // Science. -1941. -Vol.94, -p.22-23.

47. Hirst, G. K. Studies on the mechanism of adaptation of influenza virus to mice. // J.Exp.Med. -1947. -Vol.86. -P.357-366.

48. Holsinger, L.J. and Lamb, R.A. Influenza virus M2 integral membrane protein is a homotetramer stabilized by formation of disulfide bonds. // Virology. -1991. -Vol.183. -p.32-43.

49. Huang, R.T.C., Wahn, K, Klenk, H-D. and Rott, R. Fusion between cell membrane and liposomes containing the glycoproteins of influenza virus. // Virology. -1980. -Vol.104, -p.294-302.

50. Huang, R.T., Rott, R. and Klenk, H-D. Influenza viruses cause hemolysis and fusion of cells. //Virology. -1981. -Vol.110, -p.243-247.

51. Jennings, P.A., Finch, J.T., Winter, G. and Robertson, J.S. Does the higher order structure of the influenza virus ribonucleoprotein guide sequence rearrangements in influenza viral RNA? // Cell. -1983. -Vol.34, -p.619-627.

52. Johansson, B.E. and Kilbourne, E.D. Immunization with dissociated neuraminidase, matrix, and nucleoproteins from influenza A virus eliminates cognate help and antigenic competition. // Virology. -1996. -Vol.225, -p. 136-144.

53. Jong de, J.C., Claas, E.C.J., Osterhaus, A.D.M.E., Webster, R.G. and Lim, W.L. A pandemic warning? // Nature. -1997. -Vol.389, -p.544.

54. Katz, J.M., Naeve, C.W. and Webster, R.G. Host-cell mediated variation in H3N2 influenza viruses. //Virology. -1987. -Vol.156. -P.386-395.

55. Kawaoka, Y., Yamnikova, S., Chambers, T.M., Lvov, D.K. and Webster, R.G. Molecular characterization of a new hemagglutinin, subtype H14, of influenza A virus. // Virology. -1990. -Vol.179, -p.759-767.

56. Kawaoka, Y., Naeve, C.W. and Webster, R.G. Is virulence of H5N2 influenza viruses in chickens associated with loss of carbohydrate from the hemagglutinin? // Virology. -1984. -Vol.139, -p.303-316.

57. Kawaoka, W. and Webster, R.G. Evolution of the A/chicken/Pennsylvania/83 (H5N2) influenza virus. //Virology. -1985. -Vol.146, -p.130-137.

58. Keil, W., Niemann, H., Schwarz, R.T. and Klenk, H-D. Carbohydrates of influenza virus. V. Oligosaccharides attached to individual glycosylation sites of the hemagglutinin of fowl plague virus. //Virology. -1984. -Vol.133, -p.77-91.

59. Khatchikian, D., Orlich, M. and Rott, R. Increased viral pathogenicity after insertion of a 28S ribosomal RNA sequence into the haemagglutinin gene of an influenza virus. //Nature (London). -1989. -Vol.340, -p.156-157.

60. Kilbourne, E.D. Influenza. // Plenum Publishing Co.; New York. 1987.

61. Kilbourne, E.D. What are the prospects for a universal influenza vaccine? // Nature Medicine. -1999. -Vol.5, -p.l 119-1120.

62. Klenk, H-D., Rott, R., Orlich, M. and Blodorn, J. Activation of influenza A viruses by trypsin treatment. // Virology. -1975. -Vol.68, -p.426-439.

63. Klenk, H-D. and Rott, R. The Molecular biology of influenza virus pathogenicity. // Adv.Virus Res. -1988. -Vol.34, -p.247-281.

64. Klimov, A., Prosch, S., Schafer J. and Bucher, D. Subtype H7 influenza viruses: comparative antigenic and molecular analysis of the HA-, M-, and NS-genes. // Arch. Virol. -1992.-Vol.122.-p.143-161.

65. Kornfeld, R. and Kornfeld, S. Assembly of asparagine-linked oligosaccharides. // Annu. Rev. Biochem. -1985. -Vol.54, -p.631-664.

66. Krizanova. O. and Rathova. V. Serum inhibitors of myxoviruses. // Curr. Top. Microbiol. Immunol. -1969. -Vol.47, -p.125-151.

67. Krug, R.M. Priming of influenza viral RNA transcription by capped heterologous RNAs. // Curr.Top.Microbiol.Immunol. -1981. -Vol.93, -p.125-149.

68. Maeda, T. and Ohnishi, S. Activation of influenza virus by acidic media causes hemolysis and fusion of erythrocytes. // FEBS Lett. -1980. -Vol.122, -p.283-287.

69. Maeda, T., Kawasaki, K. and Ohnishi, S. Interaction of influenza virus haemagglutinin with target membrane lipids is a key step in virus-induced hemolysis and fusion at pH 5.2. //Proc.Natl.Acad.Sci. USA. -1981. -Vol.78, -p.4133-4137.

70. Makarova, N.V., Kaverin, N.V., Krauss, S., Senne, D. and Webster, R.G. Transmission of Eurasian avian H2 influenza virus to shorebirds in North America. // J.Gen.Virol. -1999. -Vol.80, -p. 1367-1371.

71. Marsh, M. and Helenius, A. Adsorptive endocytosis of Semliki Forest virus. // J.Mol.Biol. -1980. -Vol.142, -p.439-454.

72. Marsh, M. and Helenius, A. Virus entry into animal cells. // Adv. Virus Res. -1989. -Vol.36, -p. 107-151.

73. Martin, K. and Helenius, A. Nuclear transport of influenza virus ribonucleoproteins: the viral matrix protein (Ml) promotes export and inhibits import. // Cell. -1991. -Vol.67, -p. 117-130.

74. Martin, J., Wharton, S.A., Lin, Y.P., Takemoto, D.K., Skehel, J.J., Wiley, DC. and Steinhauer, D.A. Studies of the binding properties of influenza hemagglutinin receptor-site mutants. //Virology. -1998. -Vol.241, -p.101-111.

75. Matlin, K.S., Reggio, H., Helenius, A. and Simons, K. The infective entry of influenza virus into MDCK-cells. // J. Cell Biol. -1981. -Vol.91, -p.601-613.

76. Matlin, K.S., Reggio, H., Simons, K. and Helenius, A. The pathway of vesicular stomatitis entry leading to infection. // J.Mol.Biol. -1982. -Vol.156, -p.609-631.

77. Munk, K., Pritzer, E., Kretzschmar, E., Gutte, B., Garten, W. and klenk, H.D. Carbohydrate masking of an antigenic epitope of influenza virus haemagglutinin independent of oligosaccharide size. // Glycobiology. -1992. -Vol.2, -p.233-240.

78. Murphy, B.R. and Webster, R.G. Orthomyxoviruses. // Virology, 2nd ed. / Eds. B.N. Fields and D.M. Knipe. -Raven Press: New York; 1990. -p. 1091-1152.

79. Murty, K.G., Webster, R.G. and Jones, I.M. Localization of RNA polymerases on influenza viral ribonucleoproteins by immunogold labeling. // Virology. -1988. -Vol.164, -p.562-566.

80. Naeve, T. and Williams, D. Fatty acids on the A/Japan/305/57 influenza virus hemagglutinin have a role in membrane fusion. //EMBO J. -1990. -Vol.9, -p.3857-3866.

81. Nagai, Y. Protease-dependent virus tropism and pathogenicity. // Trends in Microbiol. -1993. -Vol.1, -p.81-87.

82. Nakamura, K. and Compans, R.W. Effects of glucosamine, 2-deoxyglucose, and tunicamycin on glycosylation, sulfation, and assambly of influenza viral proteins. // Virology. -1978. -Vol.84, -p.303-319.

83. Neirynck, S., Deroo, T., Saelens, X., Vanlandschoot, P., Min Jou, W. and Fiers, W. A universal influenza A vaccine based on the extracellular domain of the M2 protein. // Nature Medicine. -1999. -Vol.5, -p. 1157-1163.

84. Nermut, M.V. Further investigation on the fine structure of influenza virus. // J.Gen.Virol. -1972. -Vol.17, -p.317-331.

85. O'Neill, R.E., Talon, J. and Palese, P. The influenza virus NEP (NS2 protein) mediates the nuclear export of viral ribonucleoproteins. // EMBO J. -1998. -Vol.17. -p.288-296.

86. Ohuchi, M., Orlich, M., Ohuchi, R., Simpson, B.E.J., Garten, W., Klenk, H-D. and Rott, R. Mutations at the cleavage site of the hemagglutinin alter the pathogenicity of influenza virus A/chick/Penn/83 (H5N2). //Virology. -1989. -Vol.168, -p.274-280.

87. Ohuchi, M., Cramer, A., Vey, M., Ohuchi, R., Garten, W. and Klenk, H.D. Rescue of vector-expressed fowl plague virus hemagglutinin in biologically active form by acidotropic agents and coexpressied M2 protein. // J. Virol. -1994. -Vol.68, -p.920-926.

88. Okuno, Y., Isegawa, Y., Sasao, F. and Ueda, S. A common neutralizing epitope conserved between the hemagglutinins of influenza A virus HI and H2 strains. // J.Virol. -1993. -Vol.67, -p.2552-2558.

89. Okuno, Y., Kubota, R., Nakagawa, N. and Itoh, M. HI, H2, H5 and H9 subtypes of influenza A virus have a common neutralizing epitope. // in Xlth International Congress of Virology. Sydney, Australia. -1999. Abstract book, -p.264-265.

90. Orlich, M., Khatchikian, D., Teigler, A. and Rott, R. Structural variation occurring in the hemagglutinin of influenza virus A/Turkey/Oregon/71 during adaptation to different cell types. // Virology. -1990. -Vol.176, -p.531-538.

91. Orlich, M., Linder, D. and Rott, R. Trypsin-resistant protease activation mutants of an influenza virus. //J. Gen. Virol. -1995. -Vol.76, -p.625-633.

92. Ovcharenko, A.V. and Zhirnov, O.P. Aprotinin aerosol treatment of influenza and paramyxovirus bronchopneumonia of mice. // Antiviral Research. -1994. -Vol.23, -p. 107118.

93. Oxford, J.S. and Hockley, D.J. Orthomyxoviridae. // Animal Virus Structure, -1987. -p.213-232.

94. Palese, P. and Compans, R.W. Inhibition of influenza virus replication in tissue culture by 2-deoxy-2,3-dehydro-N-trifluoracetylneuraminic acid (FANA): mechanism of action. // J.Gen.Virol. -1976. -Vol.33, -p. 159-163.

95. Palladino, G., Mozdzanowska, K., Washko, G. and Gerhard, W. Virus-neutralizing antibodies of immunoglobulin G (IgG) but not of IgM or IgA isotypes can cure influenza virus pneumonia in SCID mice. // J.Virol. -1995. -Vol.69, -p.2075-2081.

96. Philipp, H.C., Schroth, B., Veit, M., Krumbiegel, M., Kerrmann, A. and Schmidt,

97. M.F.G. Assessment of fusogenic properties of influenza virus hemagglutinin deacylated by site-directed mutagenesis and hydroxylamine treatment. // Virology. -1995. -Vol.210. -p.20-28.

98. Plotch, S.J., Bouloy, M. and Krug, R.M. Transfer of 5'-terminal cap of globin mRNA to influenza viral complementary RNA during transcription in vitro. // Proc. Natl.Acad.Sci. USA. -1979. -Vol.76, -p. 1618-1622.

99. Qian, X.Y., Alonso, C.F. and Krug, R.M. Two functional domains of the influenza virus NS1 protein are required for regulation of nuclear export of mRNA. // J.Virol. -1994. -Vol.68.-p.2433-2441.

100. Qiu, Y. and Krug, R.M. The influenza virus NS1 protein is a poly(A)-binding protein that inhibits nuclear export of mRNAs containing poly(A). // J.Virol. -1994. -Vol.68, -p.2425-2432.

101. Qiu, Y., Nemeroff, M. and Krug, R.M. The influenza virus NS1 protein binds to a specific region in human U6 snRNA and inhibits U6-U2 and U6-U4 snRNA interactions during splicing. //RNA. -1995. -Vol.1, -p.304-316.

102. Raut, S., Hurd, J., Cureton, R.J., Blandford, G. and Heath, R.B. The pathogenesis of infections of the mouse caused by virulent and avirulent variants of an influenza virus. // J.Med.Microbiol. -1975. -Vol.8. -P. 127-136.

103. Raymond, E.L., Caton, A.J., Cox, N.J., Kendal, A.P. and Brownlee, G.G. The antigenicity and evolution of influenza HI hemagglutinin from 1950-1957 and 1977-1983: two pathways from one gene. // Virology. -1986. -Vol.148, -p.275-287.

104. Reading. P.C., Morey, L.S., Crouch, E.C. and Anders, M.E. Collectin-mediated host defense of the lung: evidence from influenza virus infection of mice. // J. Virol.1997. -Vol.71, -p.8204-8212.

105. Roberts, P C., Lamb, R.A. and Compans, R.W. The Ml and M2 proteins of influenza A virus important determinants in filamentous particle formation. // Virology.1998. -Vol.240, -p. 127-137.

106. Robertson, J.S., Schubert, M. and Lazzarini, R.A. Polyadenylation sites for influenza virus mRNA. // J. Virol. -1981. -Vol.38, -p.157-163.

107. Robertson, J.S., Naeve, C.W., Webster, RG, Bootman, J.S., Newman, R. and Schild, G.C. Alterations in the hemagglutinin associated with adaptation of influenza B virus to growth in eggs. // Virology. -1985. -Vol.143, -p. 166-174.

108. Rogers, G.N., Paulson, J.C., Daniels, R.S., Skehel, J.J., Wilson, I.A. and Wiley, D.C. Single amino acid substitution in influenza hemagglutinin change receptor binding specificity. //Nature (London). -1983. -Vol.304, -p.76-78.

109. Rogers, G.N. and Paulson, J.C. Receptor determinants of human and animal influenza virus isolates: differences in receptor specificity of the H3 hemagglutinin based on species of origin. // Virology. -1983. -Vol.127, -p.361-373.

110. Rohm, C., Horimoto, T., Kawaoka, Y., Suss, J. and Webster, R.G. Do hemagglutinin genes of highly pathogenic avian influenza viruses constitute unique phylogenetic lineages? // Virology. -1995. -Vol.209, -p.664-670.

111. Rohm, C., Zhou, N., Suss, J., Mackenzie, J. and Webster, R.G. Characterization of a novel influenza hemagglutinin, HI 5: criteria for determination of influenza A subtypes. // Virology. -1996. -Vol.217, -p.508-516.

112. Rott, R., Orlich, M., Klenk, H-D., Wang, M.L., Skehel, J.J. and Wiley, D.C. Studies on the adaptation of influenza viruses to MDCK cells. // EMBO J. -1984. -Vol.3. -p.3329-3332.

113. Rott, R. and Klenk, H-D. Pathogenicity of influenza virus in model system. // Options for the Control of Influenza. / Eds. A.P. Kendal and P. Patriarca. -A.R. Liss, New York, 1986. -p.53-62.

114. Sagawa, H., Ohshima, A., Kato, I., Okuno, Y. and Isegawa, Y. The immunological activity of a deletion mutant of influenza virus haemagglutinin lacking the globular region. //J.Gen.Virol. -1996. -Vol.77, -p. 1483-1487.

115. Schafer, J.R., Kawaoka, Y., Bean, W.J., Suss, J., Senne, D. and Webster, R.G. Origin of the pandemic 1957 H2 influenza A virus and the persistence of its possible progenitors in the avian reservoir. // Virology. -1993. -Vol.194, -p.781-788.

116. Scherle, P.A. and Gerhard, W. Functional analysis of influenza-specific helper T cell clones in vivo. T cells specific for internal viral proteins provide cognate help for B cell responses to hemagglutinin. // J.Exp.Med. -1986. -Vol. 164. -p. 1114-1128.

117. Schulze, I.T. The structure of influenza virus. II. A model based on the morphology and composition of subviral particles. // Virology. -1972. -Vol.47, -p. 181-196.

118. Sha, B. and Luo, M. Structure of a bifunctional membrane-RNA binding protein, influenza virus matrix protein Ml. // Nature Struct.Biol. -1997. -Vol.4, -p.239-244.

119. Shapiro, G.I. and Krug, R.M. Influenza virus RNA replication in vitro: synthesis of viral template RNAs and virion RNAs in the absence of an added primer. // J. Virol. -1988. -Vol.62, -p.2285-2290.

120. Skehel, J.J. and Waterfield, M.D. Studies on the primary structure of the influenza virus hemagglutinin. //Proc.Natl.Acad.Sci. USA. -1975. -Vol.72, -p.93-97.

121. Skehel, J.J. and Hay, A.J. Nucleotide sequences of the 5' termini of influenza virus RNAs and their transcripts. // Nucleic Acids Res. -1978. -Vol.5, -p. 1207-1219.

122. Sleigh., M.J., Both, G.W., Underwood, P.A. and Bender, V.J. Antigenic drift in the haemagglutinin of the Hong Kong influenza subtype: correlation of amino acid changes with alterations in viral antigenicity. // J.Virol. -1981. -Vol.37, -p.845-853.

123. Slepushkin, V.A., Katz, J.M., Black, R.A., Gamble, W.C., Rota, P.A. and Cox, N.J. Protection of mice against influenza A virus by vaccination with baculovirus expressed M2 protein. // Vaccine. -1995. -Vol.15, -p.1399 -1402.

124. Smirnov, Y.A., Kuznetsova, M.A. and Kaverin. N.V. The genetic aspects of influenza virus filamentous particle formation. // Arch.Virol. -1991. -Vol.118, -p.279-284.

125. Steinhauer, D.A., Wharton, S.A., Wiley, D.C. and Skehel, J.J. Deacylation of the hemagglutinin of influenza A/Aichi/2/68 has no effect on membrane fusion proerties. // Virology. -1991. -Vol.184, -p.445-448.

126. Sugrue, R. J. and Hay, A. J. Structural characteristics of the M2 protein of influenza A viruses: evidence that it forms a tetrameric channel. // Virology. -1991. -Vol.180. -p.617-624.

127. Sweet, C. and Smith, H. Pathogenicity of influenza virus. // Microbiol.Rev. -1980. -Vol.44. -P.303-330.

128. Verhoeyen, M., Fang, R., Min Jou, W., Devos, R., Huylebroeck, D., Saman, E. and Fiers, W. Antigenic drift between the haemagglutinin of the Hong Kong influenza strains A/Aichi/2/68 and A/Victoria/3/75. //Nature. -1980. -Vol.286, -p.771-776.

129. Ward, A.C. and de Koning-Ward, T.F. Changes in the hemagglutinin gene of the neurovirulent strain A/NWS/33. // Virus Genes. -1995. -Vol.10. -P. 179-183.

130. Ward, A.C. Virulence of influenza A virus for mouse lung. // Virus Genes. -1997. -Vol.14, -p. 187-194.

131. Watowich, S.J., Skehel, J.J. and Wiley, D C. Crystal structures of influenza virus hemagglutinin in complex with high-affinity receptor analogs. // Structure. -1994. -Vol.2. -p.719-731.

132. Webster, R.G., Bean, W.G., Gorman, O.T., Chambers, T.M. and Kawaoka, Y. Evolution and ecology of influenza A viruses. // Microbiol.Rev. -1992. -Vol.56, -p.152-179.

133. Weis, W.I., Brown, J.H., Cusack, S., Paulson, J.C., Skehel, J.J. and Wiley, D C. Structure of the influenza virus hemagglutinin complexed with its receptor, sialic acid. // Nature (London). -1988. -Vol.333, -p.426-431.

134. White, J., Kartenbeck, J. and Helenius, A. Fusion of Semliki Forest virus with the plasma membrane can be induced by low pH. // J.Cell Biol. -1981. -Vol.87, -p.264-272.

135. White, J., Helenius, A. and Gething, M.J. Haemagglutinin of influenza expressed from a cloned gene promotes membrane iiision. // Nature (London). -1982. -Vol.300. -p.658-659.

136. White, J., Killian, M. and Helenius, A. Membrane fusion proteins of enveloped animal viruses. // Quart. Rev. Biophys. -1983. -Vol.16, -p. 151-195.

137. Whittaker, G., Bui, M. and Palese, P. The role of nuclear import and export in influenza virus infection. // Trends Cell Biol. -1996. -Vol.6, -p.67-71.

138. Wiley, D.C., Wilson, I. A. and Skehel, J.J. Structure identification of the antibody-binding sites of Hong Kong influenza haemagglutinin and their involvement in antigenic variation. //Nature (London). -1981. -Vol.289, -p.373-378.

139. Wiley, D.C., Skehel, J.J. The structure and function of the hemagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus. // Annu. Rev. Biochem. -1987. -Vol.56, -p.365-394.

140. Wilson, I.A., Skehel, J.J. and Wiley, D.C. Structure of the haemagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus at 3 angstroms resolution. // Nature (London). -1981. -Vol.289, -p.366-373.

141. Winter, G., Fields, S. and Brownlee, G.G. Nucleotide sequence of the haemagglutinin gene of a human influenza virus Hi subtype. // Nature. -1981. -Vol.292. -p.72-75.

142. Wrigley, N.G., Skehel, J.J., Charlwood, P.A. and Brand, C.M. The size and shape of influenza virus neuraminidase. // Virology. -1973. -Vol.51, -p.525-529.

143. Yasuda, J., Nakada, S., Kato, A., Toyoda, T. and Ishihama, A. Molecular assembly of influenza virus: association of the NS2 protein with virion matrix. // Virology. -1993. -Vol.196, -p.249-255.

144. Zebedee, S.L., Richardson, C.D. and Lamb, R.A. Characterization of the influenza virus M2 integral membrane protein and expression at the infected-cell surface from cloned cDNA. //J.Virol. -1985. -Vol.56, -p.502-511.

145. Zebedee, S.L. and Lamb, R.A. Influenza A virus M2 protein: monoclonal antibody restriction of virus growth an detection of M2 in virions. // J.Virol. -1988. -Vol.62. -p.2762-2772.

146. Zhirnov, O.P. and Bukrinskaya, A.G. Two forms of influenza virus nucleoprotein in infected cells and virions. // Virology. -1981. -Vol.109, -p.174-179.

147. Zhirnov, O.P., Ovcharenko, A.V. and Bukrinskaya, A.G. Proteolytic activation of influenza WSN virus in cultured cells is performed by homologous plasma enzymes. // J.Gen.Virol. -1982. -Vol.63, -p.469-474.

148. Zhirnov, O.P. and Bukrinskaya, A.G. Nucleoproteins of animal influenza viruses, in contrast to those of human strains, are not cleaved in infected cells. // J.Gen.Virol. -1984.-Vol.65.-p. 1127-1134.

149. Zhirnov, O.P., Ovcharenko, A.V. and Bukrinskaya, A.G. Suppression of influenza virus replication in infected mice by protease inhibitors. // J.Gen.Virol. -1984. -Vol.65. -p.191-196.

150. Zhirnov, O.P. The host origin of influenza A viruses can be assessed by the intracellular cleavage of the viral nucleocapsid protein. // Arch.Virol. -1988. -Vol.99. -p.277-284.

151. Zhirnov, O.P. Solubilization of matrix protein Ml/M from virions occurs at different pH for orthomyxo- and paramyxoviruses. // Virology. -1990. -Vol.176, -p.274-279.

152. Zhirnov, O.P. and Grigoriev, V.B. Disassembly of influenza C viruses, distinct from that of influenza A and B viruses requires neutral-alkaline pH. // Virology. -1994. -Vol.200, -p.284-291.

153. Zhirnov, O.P., Konakova, T.E., Garten, W. and Klenk, H. Caspase-dependent N-terminal cleavage of influenza virus nucleocapsid protein in infected cells. // J.Virol. -1999. -Vol.73, -p.10158-10163.

154. РОССЯИГ « {■ « ГОСУДЛРС rtitMifrfL