Диссертации » Биологические науки » Радиобиология

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Комбинированные схемы лечения метастазирующих опухолей мышей
ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Комбинированные схемы лечения метастазирующих опухолей мышей"

9 1 г ■■■ ::

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

МЕДИЦИНСКИЙ РАДИОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

На нраиах рукописи

ФЕДОРОВСКАЯ Елена Олеговна

КОМБИНИРОВАННЫЕ СХЕМЫ ЛЕЧЕНИЯ МЕТАСТАЗИРУЮЩИХ ОПУХОЛЕЙ

МЫШЕЙ:

ЗНАЧЕНИЕ ИНДУКТОРОВ ИНТЕРФЕРОНА

03.00.01 — Радиобиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Обнинск — 1992

Д;;гсортгл1:;г,11нлп рзСота пыпзлпсиа в Медицинском радиологическом научном центре РАМН.

Научный руководитель: доктор биологических наук профессор А. М. Поверенный.

Официальные оппоненты: доктор биологических паук профессор А. Г. Коноплянников, доктор биологических наук Н. С. Сергеева.

Ведущая организация: Научно-исследовательский институт экспериментальной диагностики и терапии опухолей ОНЦ РАМН.

Защита диссертации состоится « /3 » октября 1992 г. в 11 час. на заседании специализированного совета Д 001.11.01 в Медицинском радиологическом научном Центре РАМН (249020, г. Обнинск Калужской области, ул. Королева, 4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Медицинского радиологического научного Центра РАМН.

Автореферат разослан « » августа 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицписких наук

В. А. Куликов

...... .А*

"" ' ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

актуальность проблемы. В течение последних десяти лет онкологи цытаются использовать для предотвращения диссемина-ции разливе комбинации модуляторов биологических реакций, среди которых наиболее перспективными оказались интерфероны и индукторы интерферонов. Перспективность- комбинированного применения интерферонов и индукторов интерферонов с облучением опухолей связана, с одной стороны, с радиопротекторным действием этих веществ на организм в целом (Семина с соавт., 1974* 1976), а, с другой стороны, с их антипролиферативным . действием на опухолевые клетки и одновременной активацией иммунокомпетентных клеток. В совместных работах, проведенных в институте медицинской радиологии АМН СССР и Институте химической физики АН СССР под руководством А. М. Поверенного и И.И. Пелевиной, показано, что все индукторы синтеза интерферона значительно повышают эффективность лучевой терапии и химиотерапии опухолей у животных. Показателями к применению индукторов совместно с облучением и другими противоопухолевыми агентами являются необходимость стимуляции системы натуральных киллеров в организме, большой размер опухоли, наличие метастазов и высокая степень гетерогенности клеточной популяции опухоли. Важным фактором в усилении ответа опухоли на комбинированное воздействие оказывается использование облучения на пике интерферона в сыворотке крови (Леонидзе с соавт., 1986; Каракулов с соавт., 1985; 1лгоУБкН et а1, 1989). Все эти факты свидетельствуют о необходимости разработки комбинированных схем радиотерапии метастазирупцих опухолей с использованием индукторов интерферона.

Наряду с изучением известных индукторов интерферона актуален поиск новых веществ, обладающих иммуномодулирупцей способностью. Новым классом веществ, существенно изменяющим иммунологический статус организма, согласно исследованиям Галабова и Мастиковой (1982), а также Григорян с соавторами (1988), оказались коронарорасширяще вазодилататоры (дипири-дамол, папаверин, кордарон, а такое препараты метилксантино-вого ряда). В литературе встречаются работы о различных воздействиях этих препаратов на опухолевые клетки. Так, па-

паверин изменяет экспрессию поверхностных антигенов в культуре человеческой нейробластомы, а дилиридамол подавляет пролиферацию человеческих лейкозных культур (1Л.оо1воп, Ш-со1боп, 1976, мабао et а1., 1986). Способность вазодилата-торов к модулированию ответа иммунной системы, непосредственное воздействие на опухолевые клетки, а также хороший уровень изученности фармакологических и токсикологических свойств, делают эти препараты потенциально ценными для клинической онкологии. Вопрос о воздействии коронарорасши-рянцих препаратов на диссеминацию опухолей важен и с точки зрения их взаимодействия с противораковыми агентами у онкологических больных с сопутствующими заболеваниями сердечнососудистой системы.

Выяснение оптимальных схем, доз и способов введения препаратов в различных моделях метастазирования является первым этапом в изучении противоопухолевых свойств индукторов интерферона, необходимых для разработки комбинированных схем лечения с йспользованием локального облучения и химиотерапии. цель работы. Целью настоящей работы.явилось исследование в моделях искусственного и спонтанного метастазирования влияния индукторов интерферона и вазодилататоров на диссеминацию опухолей легочной карцинош Льюис, рака молочной железы, аде-нокарциномы Са 755, а также эффективности и оптимальных схем их воздействия в сочетании с локальным облучением и цикло-фосфаном для осуществления противоопухолевых и антиметастатических воздействий в комбинированных схемах лечения опухолей

Для достижения указанной цели были поставлены следующие конкретные задачи: ;

1. В моделях спонтанного и искусственного метастазирования ЛКЛ оценить антиметастатическую эффективность индукторов интерферона поли И:Ц,- тилорона, нового антивирусного препарата арбидола и вазодилататоров дипиридамола, папаверина, кордарона, кофеина. Подобрать оптимальные схемы лечения и способы введения препаратов для получения максимальных антиметастатических эффетов при минимальной токсичности используемых доз.

2. Исследовать эффективность воздействия индуктора интерферона поли И:Ц и вазодилататора дипиридамола в модели

- з -

рака молочной келезы(РШ) мышей с преимущественным ме.тастази-рованием в печень.

3. Оценить эффективность индукторов интерферона и ва-зодапататоров при локальном облучении ¡радиочувствительной опухоли ЛКЛ, перевитой внутримышечно. Выяснить оптимальные сроки введения индукторов интерферона перед'облучением для получения максимальных противоопухолевых и ангаштастатичес-ких эффектов.

4. В моделях искуственного и спонтанного метастазирования ЛКЛ и аденокарциномы Са755 у мышей оценить эффективность взаимодействия отдуктора. интерферона поли Н:Ц и вазо-дилататора дипиридамола с хикиотерапевтическим препаратом циклофосфаном.

научная новизна. в работе впервые:

- описаны антиметастатические эффекты нового антивирусного препарата арбидола, вазодилататоров дипиридамола, папаверина, кордарона. Установленно, что дппирндакол п папаверин в

. терапевтических дозах существенно подавляют метастазирование разной органной тропности;

- подобраны оптимальные схв).и лечения, способы введения препаратов, обеспечивающие максимальные антшетастатическсе еф-фекты при минимальной токсичности используемых доз;

- показано, что все исследованные препараты э^фектпЕЕЦ только в подавлении метастазирования и не оказывают достоверного влияния на первичную опухоль. При этом достоверно лучшее еф-фекты получены в моделях искусственного метастазирования, что свидетельствует о воздействии индукторов интерферона именно на диссеминирущие клетки и механизмы диссеминации;

- получены данные об аддитивном подавлении метастазирования при комбинированном использовании поли И:Ц, дппиридаглола п арбидола с локальным облучением. Принципиально вагным для достиеэния лечебного эффекта являются время введения препаратов до облучения и количество суток, прошедпих после перевивки опухолевых клеток, что было показано в моделях радиочувствительной опухоли ка^цинош Льшс;

- обнаружено усиление цитотоксичности циклофосфана.при комбинированном ведении поли И:Ц и дипиридатла в моделях искусственного и спонтанного метастазирования ЛКЛ и аденокар- • 1щномы Са755 у мышей.

теоретическая и пракотшская знАЧШрсть работы. Полученные результаты могут быть использовании в качестве теоретической и экспериментальной основы принципиально новых' схем воздействия на процесс дассеминации опухолей и дальнейшего целенаправленного поиска профилактических мероприятий по предотвращению метастазирования. При этом необходимо учитывать, что все индукторы интерферонов не оказывают существенного влияния на первичную опухоль, т.е. не могут полностью, прекратить ее развитие, но весьма эффективны в подавлении метастазирования опухолей с разной органной тропностыо. Впервые установленные факты усиления антиметастатического действия при комбинированном применении индуктороЕ интерферона и локального облучения подтверждают гипотезу радиационного киллинга и открывают возможность использования индукторов интерферона поли И:Ц, дипиридамола, нового антивирусного препарата арбидола и тилорона в онкологической практике как им мунопрофилактических, избирательно действующих терапевтических средств.

Данные об усилении цитотоксичности циклофосфана в моделях искусственного и спонтанного метастазирования имеют два практических аспекта. Во-первых, возрастание 'биологической активности циклофосфана, вызванное взаимодействием с дипиридамолом, может быть использовано при лечении онкологических больных пожилого возраста с сопутствующими сердечнососудистыми заболеваниями. Во-вторых, индукторы интерферона, в частности стандартный препарат поли И:Ц, действуют в качестве иммуномодуляторов, существенно уменьшая иммунодепрес-сирующее влияние циклофосфана и, в силу этого, усиливая антиметастатические эффекты этого цитотоксического препарата.

В целом, совокупность полученных экспериментальных и теоретических результатов позволяет рекомендовать применение нетоксичных доз дипиридамола и поли И:Ц в современных схемах лечения онкологических больных для профилактики метастазирования. Однако наиболее ценным, по нашему мнению, результатом данной работы является установление аддитивного эффекта подавленна метастазирования в случае комбинирования индукторов интерферона с локальным облучением опухолей. Этот факт, наряду с известным общим радиопротекторным и противострес-сорным воздействием индукторв интерферона на организм и усй-

лением ответа опухоли на облучение, указывает на перспективность использования этих препаратов именно в лучевой.терапии опухолей.

Апробация. Результаты работы опубликованы в центральных отече^' ственшх журналах и доложены на Всесоюзном совещании "Применение индукторов интерферона в онкологии и радиологии" (1989, -Кемерово), а также на конференции молодых ученых НИИМР РАМН • " (19У0 г.).

Диссертационная работа апробирована на научной конференции лабораторий радиационной биохимии, химфармпрепаратов, по-лирадиомодификации и радиационной иммунологии 7 февраля 1992 г. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 139 страницах машинописного текста и состоит из введения (8 стр.), обзора литературы (32 стр.), изложения материалов и методов (6 стр.), результатов собственных исследований и их обсуждения ■ (62 стр.), заключения (5 стр.) и выводов (2 стр). Работа иллюстрирована 17 таблицами и 8 рисунками. Список литературы Еключает 204 источников, из которых 48 принадлежат отечественным и 156 - зарубежным авторам.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

животные. Работа выполнена с использованием более 2000 самцов мышей линии С57В1/6 и 300 самкок линии А/эн 2-3-х месячного возраста. Животных получали со станции Столбовая и поддерживали в виварии НИИ медицинской радиологии АМН СССР.

опухоли. В экспериментах использовали следующие перевиваемые опухоли: легочная карцинома Льюис(ЛКЛ), анаплазиро-ванная аденокарцинома Са755, полученные из Банка опухолевых штаммов ОНИ АМН СССР, а также штамм высокометастазирующего в печень ВНС линии мышей А/зн, любезно предоставленный группой метастазирования ОНЦ АМН СССР под руководством В.М. Сенина (Афанасьева, Сенин, 1986). Все опухоли различались по степени злокачественности и способности к метастазированию.

МОДЕЛИ МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ. ДЛЯ 0Ц6НКИ ВЛИЯНИЯ ИЙДУКТОрОВ

интерферона на метастазирование были использованы внутривенный и внутримышечный способы перевивки опухолевых клеток. Внутримышечный способ перевивки опухолевых клеток вызывал

Спонтанное метастазирование из первичного опухолевого узла, а внутривенный - искусственное образование метастазов. В случае внутримышечной перевивки в наружную часть левого бедра вводили 2 х Ю6 опухолевых клеток в 0.2 мл среда 199 или физиологического раствора. При внутривенной перевивке опухолевые клетки в количестве 2 х Ю5 в 0.3 мл среда 199 или физиологического раствора вводили в хвостовую вену без гепарина, т.к. гепарин при таком способе перевивки может существенно изменять уровни метастазирования (СогеИк, 1988). Используемая при этом концентрация опухолевых клеток является максимально возможной, поскольку большее количество ввденных клеток вызывает тромбозы и гибель животных.

МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНТЕНСИВНОСТИ МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ. В случае внутривенной перевивки опухолевых клеток ЛКЛ и адено-карциномы Са755 животных забивали на 16 Д9нь, а в случае внутримышечной перевивки - на 22 день. Затем препарированные у животных легкие помещали на сутки в раствор Буэна и подсчитывали количество метастазов на поверхности легких под лупой при 8-кратном увеличении. Индекс печени и индекс легких определяли по нарастанию массы печени за счет роста метастазов в опытных и контрольных грушах как отношение массы печени или лекгих к массе тушки животного. Достоверность от- • личий между группами по уровню метастазирования и степень поражения органов проверяли по ^критерию Стьюдента и и-кри-терию Вилкинсона (Гублер, Генкин, 1963)

ТЕРАПИЯ И ХИМИОТЕРАПИЯ МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ. В М0Д8ЛЯХ . экспериментального метастазирования оценивались терапевтические эффекты интерферониндуцирувдих препаратов поли И:Ц, тилорона и арбидола, а также вазодилататоров дипиридамола, папаверина, кордарона и кофеина.

поли И:Ц (полирибозил ионозиновая полирибозил цитеди-новая кислота, Calbi.ooh.em, Швейцария) вводили парентерально -по 50 мкг на мышь массой 20 г в 0.2 мл физиологического рас^ твора один раз в 6 дней. Используемая концентрация, согласно литературным данным, является максимальной для иммуномодуля-ляции и минимальной в отношении токсичности (Егео1юу, 1989).

' Тилорон (2,7-бис/2-даэтиламиноэпокси/-9-флуорен) вводили перорально в I Ж-ном растворе крахмала по 3.1 мг на мышь массой 20 г.

Арбидол - новый противовирусный препарат с интерферон-индуцирущими свойствами,^синтезированный в НЙ1ШР АМН СССР под руководством профессора Ф.А.Трофимова,вводили перорально в I 5&-ном растворе крахмала по 4.1 мг на мышь массой 20 г, в соответствии с рекомендуемой терапевтической дозой

Дшшридамол. (УЕВ, ГДР, в ампулах) вводили перорально в дозах 250, 500, 1000 мкг на мышь массой 20 г в 0.2 мл во-, да. Для внутривенных введений использовали дозы 250 д 500 мкг в 0.3 мл физиологического раствора.

Папаверин(в ампулах, отечественный) вводили перорально

в дозах 200, 400 и.1000 мкг на мышь массой 20 г в' 0.2 мл вода.

Кордарон (в таблетках, Югославия) вводили порораль-

но по 100 и 500 мкг на мышь массой 20 г в 0.2 мл I. S-ного

• i

раствора крахмала.

Кофеин (бензоат Na-соль.в ампулах, отечественный) вводили перорально по I мг на мышь массой 20 г. Все дозы вазо-дшштаторов .выбирались согласно литературным данным для обеспечения''Максимальных инт^рферониндуцирукцпх свойств при минимальной' токсичности препаратов (Galabon, Mastikowa 1982, 1984, Григорян с соавт., *1988).

Для оценки влияния на метастазирование срока начала лечеяйл относительно времени перевивки опухолевых клеток препараты . вводили как до перевивки, так и спустя 1-7 суток после перевивки опухолей.

Для оценки комбинированного действияхиндукторов интерферона и химиотерапевтических агентов был выбран циклофос-фан, широко использумый в химиотерапевтических схемах для лечения карцином легких и РМЖ. Циклофосфан вводили парентерально по 0,45 мг на мышь массой 20 г на I, 2, 10 и II сутки после перевивки.

локальное облучение опухоли. Для оценки модифицирующего влияния индукторов интерферона на радиационное воздействие использовали локальное облучение опухоли. Животных облучали в дозе 30 Гр( аппарат "Луч",' 60Со, Р = 6,0 сГр/сек) в специальных плексиглассовых контейнерах с фиксацией конечности. Эффекты комбинированного воздействия локального облучения и индукторов интерферона на солидную опухоль оценивали по индексу роста, который определяли по отношению объемов

- а -

опухоли до и горсле-' воздействия лечейия, а также по времени удвоения объема опухоли в ходе лечения. Объемы опухолей рас-считнвили по трем диаметрам опухоли, которые измеряли на 7, II» '15 и 19 сутки. Полученные цифровые данные обрабатывали методами вариационной статистики (Гублер,Генкин, 1963, Урбах,

1972).'" ' .

« - *

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние индукторов интерферона на -метастазирование. Было исследовано влияние различных классов индукторов интерферона на метастазирование легочной карциномы Льшс и рака молочной железы с преимущественным метастазированием в печень. Было обнаружено, что все индукторы интерферона существенно: подавляют метастазирование (табл.1,2), и, практически, не оказывают влияние на рост опухоли (без облучения) и токсического действия на организм в целом (не отмечается потери веса, ди-арреи, гибели животных, получавших индукторы интерферона).

Влияние поли И:Ц на метастазирование. В моделях искус. * ственного и спонтанного метастазирования ЛКЛ при использовании поли И:Ц было установлено, что.эффективность лечения метастазирования тем выше, чем раньше оно было начато. В тоже время, подавление уровеВя метастазирования в модели с внутривенным введением опухолевых клеток достоверно (р < 0,01) выше по сравнению со спонтанной моделью диссеминации (табл.1 и 2). Представляет особый интерес тот факт, что в обеих моделях наиболее эффективным оказалось введение поли И:Ц за сутки до перевивки опухолевых клеток. При начале лечения на 5-е и, особенно, на 8-е сутки после введения опухолевых клеток эффективность подавления значительно снижалась. Таким образом, наиболее эффективным оказывается превентивное лечение,' начатое за сутки до перевивки опухоли, или, по крайней мере, в минимальные сроки (1-2 суток) после попадания в организм опухолевых клеток. Представляло интерес исследовать эффективность поли И:Ц в случае рака молочной железы мышей с лимфогенным метастазированием преимущественно в печень. В табл. 3 приведены данныо об интенсивности метастазирования в печень рака молочной железы после в/м перевивки ЗхЮ7 опухолевых клеток для двух независимых опытов.

ТАБЛИЦА I

Антиметастатическая активность поли И:Ц, дипиридамола, тилорона и арбидола прз внутримышечном введении клеток ЛКЛ (начало лечения через сутки после перевивки ОКЛ)

ВАРИАНТ ОПЫТА КОЛ-ВО МЕТАСТАЗОВ В ЛЕГКИХ

I опыт 2 ОПЫТ

КОНТРОЛЬ ( вода) 0,2 мл В/О шш р.о. 21,5 * 1,1 ( 26 ) 33,0 1 2,4 ( 8 )

ПОЛИ И:Ц 50 мкг на мышь, в/б 13,3 1 1,8* ( 8 ) 15,7 1 3,6** ( 7 )

ДИПИРИДАМОЛ 500 мкг на шшь, р.о. 15,6 1 2,4* ( 8 ) 19,7 1 3,0** ( Ю )

ТИЛОРОН 3,1 иг на мышь, р.о. 11,8 1 1.4*** ( ю ) 18,4 ± 2,1** ( 7 )

АРБИДОЛ р.о. 4,1 иг на шшь 13,5 ± 1,6** ( Ю ) 16,0 ± 5,1*** ( 5 )

Примечете: в скобках указано количество животных в группе.

* - различив с контролем достоверно при р < 0,05 »*; Р < 0,01

- р < 0,001

Влияние тилорона п арбидола на мвтаотазкрование. Влияние тилорона и нового противовирусного препарата арбидола на метастазирование опухолей представлено в табл I и 2. Видно, что изученные нами индукторы интерферона практически не уступают в эффективности подавления метастазирования ЛКЛ в легкие поли И:Ц, выгодно отличаясь от этого препарате по степени токсичности. В наших опытах продемонстрировано, что наиболее действенным оказалось введение тилорона за сутки и

ТАБЛИЦА 2

Антиметастатическая активность поли И:Ц, дипиридамола, тилорона, арбидола при внутривенном введении ОКл (начало лечения через сутки после реревивки ОКл)

ВАРИАНТЫ ОПЫТА КОЛ-ВО МЕТАСТАЗОВ В ЛЕГКИХ

I ОПЫТ 2 ОПЫТ

КОНТРОЛЬ (0,2 мл воды р.о., в/б ) 24,4 ± 1,2 ( '37 ) 14,0 ± 2,6 ( 14 )

ПОЛИ И:Ц (50 мкг на мышь, в/б) ^ *** 5,6 ±1,1 ( II ) 3,4 1 2,4 . ( 14 )

ДИПИРЦЦАМОЛ (500 мкг на мышь, р.о.) *** 6,5 ± 1,6 ( 9 ) * 1 6,5 ± 2,1 ( 9 ) .

ТИЛОРОН (4,1 мг на мышь, р.о.) *** 8,0 ± 1,3 ( 22 ) * 6,5 1 2,2 (Ю )

АРБВДОЛ 3,1 мг на шль, р.о. *** 6,0 * 1,1 (15 ) 2,3 1 1,6 ( Ю )

Примечание: обозначения соответствуют табл. I.

через сутки после перевивки опухолевых клеток. Уровни ме-тастазирования уменьшались в 5 раз по сравнению с контролем. При начале лечения на 5-е сутки в модели с внутривенной перевивкой опухоли антиметастатические эффекты уменьшались вдвое. При начале лечения на 8-е сутки.уровни метастазирования составляли около 75 % и достоверно не отличались ' от контроля. Так же как и при использовании для лечения метастазирования поли И:Ц в модели спонтанного метастазировании эффект подавления образования метастазов был существенно меньше (уровень метастазирования составлял менее 40 % от контроля) при введении тилорона за I сутки до и после перевивки опухоли. При начале введения препарата через 8 суток после перевивки отличие уровней метастазирования в опытных и контрольных

Таблица 3

Влияние поли И:Ц и дапиридамола на метастазирование РМЖ

в печень

л

ВАРИАНТ ОПЫТА опыт I опыт 2

масса печени индекс печени масса печени индекс -печени

КОНТРОЛЬ (вода) 1,9 ± 0,2 ( ю ) 8,6 ± 1,0 1,6 ± 0,05 ( 12 ) 8,8 ± 1,1

дп • 500 мкг на мышь 1,4 ± 0,2 (■13 ) р < 0,05 6,1 ± 0,8 . р < 0,05 1,3 ± 0,2 ( 13 ) р ^ 0,05 6,2 ± 1,0 р < 0,05

ПОЛИ И:Ц 50 мкг/ на мышь 1,5 ± 0,1 ( 13 ) р ^ 0,05 6,4 ± 1,8 р < 0,05 1,3 ± 0,2 ( 13 ) р ^ 0,05 6,6 ± 1,0 р ^ 0,05

Примечание: в скобках указано количество животных в группах.

группах было недостоверным. Текла образом, отличный по химической структуре от поли И:Ц индуктор интерферона - тилорон оказался весьма эффективным в подавлении метастазирования только при начале лечения в первые дни после перевивки.

Аналогичные закономерности в подавлении метастазирования как при внутривенном, так и при внутримышечном способах перевивки опухолевых клеток получены для нового противови-.русного препарата - арбидола. Однако по сравнении с поли И:Ц, и тилороном антиметастатическое действие арбидола в модели искусственного метастазирования вдвое меньше. В общих же чертах наблюдается сходное ухудшение терапевтического ёффекта в отношении подавления метастазирования при более поздних сроках лечения.

Влияние интерферониндуцируюащх доз вазодилататоров на метастазирование . После обнаружения интерферониндуцирущнх свойств дипиридамола, кордарона, папаверина, а также кофеина представляло интерес изучить их противоопухолевые и противоме-

ТАБЛИЦА 4

Влияние папаверина, кордарона, дипиридамола и кофеина на метастазирование ЛКЛ у мшей при внутривенном и внутримышечном способах перевивки ОКл ( лечение через сутки после перевивки опухоли)

ВАРИАНТ ОПЫТА КОЛИЧЕСТВО МЕТАСТАЗОВ В ЛЕГКИХ

в/в перевивка ОКл в/м перевивка ОКл

КОНТРОЛЬ (0.2 мл воды) 27,9 ± 2,1 ( Ю )* 40,1 ± 2,7 ( Ю )

ПАПАВЕРИН (0.4 мг/мышь перорально) 8,1 * 1,1*" ( II ) 16,0 ± 1,4*** ( 13 )

КОРДАРОН ( 0.1 мг/мышь перорально) 6,1 ± 1,0"* ( ю ) 16,9 ± 4,2*** ( 8 )

ДИГШРИДАШЛ ( 0.5 (¿г/мышь) 7,1 1 2,1*** ( 9 ) 20,1 ± «,7** ( ю )

КОШМ ( 2 мг/шшь) 20,1 1 2,4 ( 9 ) 30.7 * 2.2* ( 8 )

Примечание: в скобках указано количество животных в группе.

различие^ контролем достоверно при р < 0,05 *** Р < 0,01

- р < 0,001

тастатические свойства. Данные о антиметастатических эффектах этих препаратов представлены в табл. I, 2 и 4. Все препараты, кроме кофеина, обладали антиметастатическими эффектами, срав-ниинми с таковыми у поли И:Ц. В модели рака молочной железы с лиафогенно-гематогеннша иотастазированиеы преимущественно в печень, ранее использованной при изучении поли И:Ц (табл.3),

показано, что дипиридамол в нетоксической дозе (12,5 мг/кг) дает выраженный антиметастатический эффект в отношении этой опухоли.

Испытание других вазодилататоров в моделях искусственного и спонтанного метастазирования, которые использовались в интрферониндУцирувдих дозах, показало (табл. 4), что папаверин и кордарон, имеющие совершенно другую химическую структуру, также обладают антиметастатическим действием. Кофеин подавлял метастазирование гораздо в меньшей степени по сравнению с другими вазодилататорами (табл. 4). Антиметастатическое действие дипиридамола, кордарона и папаверина в наших опытах установлено впервые. Влияние комбинированного применения локального облучения и индукторов интерферона, а также других иммуномодуляторов на метастазирование. На рис. I и 2 представлены данные по комбинированному действию локального облучения и препаратов поли И:Ц и дипиридамола (при введении препаратов за 20 ч перед облучением, которое проводили на 7 сутки после перёвиБки опухолевых клеток) на объем опухоли, выраженный через индекс роста. Все препараты вводили за 20 ч до облучения, так как пики максимальной индукции интерферона после их введения животным для поли И:Ц лежат в пределах 8 - 24 ч (Levy et al., 1981; Ершов. 1989), а для дипиридамола и арбидола - в пределах 20 - 48 ч (Григорян с соавт., 1989). Все отличия по индексу роста в группах с сочетанным действием локального облучения и индукторов интерферона достоверны (Р < 0,05). отнсительно эффектов в группах с раздельным воздействием радиации и индукторов интерферона. Все перечисленные препараты вводили однакратно на 6 сутки, но, как нами было установлено, индукторы интерферона при такой схеме лечения лишь в незначительной степени понижают уровень метастазирования. Однократное облучение в дозе 30 Гр на 7 сутки после перевивки опухолевых клеток также дает некоторое понижение уровня метастазирования в легких. Данные о комбинированном действии радиации и индукторов интерферона поли И:Ц, арбидола и коронарорасширяющего препарата дипиридамола на метастазирование ЛКЛ ( облучение на 7 сутки после перевивки) представлены в табл. 5,. Из табл.- 5 видно, что локальное облучение и все испытанные индукторы интерферона при раз-

5 10 15 20

Рис. 4. Подавление роста опухоли ЛКЛ комбинированным действием радиации и поли И:Ц. 1 - контроль; 2 - локальное облучение (30 Гр) на 7 сутки после перевивки ОКл; 3 - поли И:Ц на 6 сутки после перевивки ОКл; 4 - поли И:Ц + облучение;

По-оси ординат: индекс роста опухоли

По оси абсцис: Еремя после перевивки 0кл (сутки)

Рис. 5. Подавление роста опухоли ЛКЛ при комбинированном действии радиации и дипиридамола.

1 - контроль, 2 - локальное облучешга (30 Гр) на 7 сутки после перевивки ОКл, 3 - ДП на 6 сутки послеперевивки ОКл, 4 - ДП + облучение По оси ординат: индекс роста опухоли По оси абсцисс: время после перевийки ОКл (сутки)

ТАБЛИЦА ¡3

Комбинированное действие локального облучения и индукторов интерферона поли И:Ц, дипиридамола и арбидола на метастази-

рование ЛКЛ (лечение на 6 сутки после перевивки ОКл)

ВАРИАНТ ОПЫТА кол-во метастаЪв В ЛЕГКИХ Антиметастатический эффект (в % контроллю)

КОНТРОЛЬ (0,2 мл воды ) 32,8 ± 2.3 ( 9 ) "

КОНТРОЛЬ-ОБЛУЧЕНИЕ 22,1 ± 1,0** ( 7 ) 32,6 4 5,2**

ПОЛИ И:Ц-(на 6 день О.ОЬмг) 19,8 ± 1,0** ( 8 ) 39,6 ± 5,2**

пили И:Ц + ОБЛУЧЕНИЕ 8,4 ± 1,3** ( 9 ) 74,4 4 6,3** (72,2 ± 7,3)

Д11 (на бдень 0.5МГ) 22,4 1 1,5** ( 8 ) 31,7 ♦ 6,2**

ДП + ОБЛУЧЕНИЕ 11,6 ± 1,5** ( Ю ) 64,6 ♦ 8,7** (64,3 ± 8,1)

АРБИДОЛ ( на 6 день 4.1мг) 24,8 ± 1,1* ( 6 ) 24,4 ± 5.3 *

АРБВДОЛ + ОБЛУЧЕНИЕ ' 9,4 ± 3,5 ( 6 ) 71,0 ± 19,2** (57,0 ± 7,4)

Примечание: в третей графе в скобках приведши величины ожидаемых аддитивных эффектов.

дельном применении оказывают достоверное антиметастатическое действие, подавляя диссеминацшо в легкие от 24 %, в случае поли И:Ц, до 40 % - в случае арбидола. Комбинированное воздействие локального облучения с индукторами интерферона дает выраженный аддитивный эффект подавления метастазирования от 65 Ж в случае дипиридамола, до 70-75 % в случав арбидола и поли И:Ц. Наблюдаемое нами аддитивное взаимодействие факторов позволяет резко повысить эффективность лечения метастазирующих опухолей путем комбинации локального облучения и одного из индукторов интерферона. При этом представляется обоснованным предположение о том, что & основе

ТАБЛИЦА 6

Комбинированное действие локального облучения и индукторов интерферона поли И:Ц, дипиридамола и арбидола на метастазирование ЛКЛ ( лечение начинали на 10 сутки)

ВАРИАНТ ОПЫТА КОЛ-ВО МЕТАСТАЗОВ В ЛЕГКИХ Антиметастатический эффект (в % к контролю)

КОНТРОЛЬ (0,2 мл воды) 24,3 ± 1,9 ( Ю )

ОБЛУЧЕНИЕ _ (локально 30 Гр II сутки) 19,5 ±1,7 ( 8 ) 19,8 ± 10,4

поли И:ц (0,05 мг на 10 сутки) 20,6 ±1,9 ( 9 ) 15,2 ± 11,1

ПОЛИ И:Ц + ОБЛУЧЕНИЕ 16,8 ± 2,1* ( 8 ) 30,9 ± 11,9* (35,0 ± 15,8)

ДИПИРИДАШЛ(на 10 сутки 0.5 мг) 20,1 ± 2,3 ( Ю ) 17,3 ± 12,4

ДП + ОБЛУЧЕНИЕ 17,3 * 4,2 ( 8 ) 28,8 ± 14,1 (37,1 ± 16,2)

АРБВДОЛ (на 10 сутки 4»1мг) 20,3 ± 4,4 ( 7 ) 16,5 ± 14,1

АРБВДОЛ + •ОБЛУЧЕНИЕ 17,5 * 4,7 1 ( 7 ) 28,0 ± 14,5 (36,3 ± 16,2)

Примечание: в третей графе в скобках указаны величины ожидаемых эффектов при аддитивном взаимодействии факторов.

* - различие с контрролем достоверно при р < О,ОБ

аддитивности действующих факторов лежат принципиально разные механизмы их воздействия на опухоль: прямое поражение опухолевых клеток в случае облучения и косвенное - в случае индукторов-интерферона. Первостепенное значение для эффективного воздействия на метастазирование имеют сроки введения препаратов и локального облучения после перевивки опухоли.

Так, при начале лечения на 10-е сутки после перевивки опухолевых клеток, когда объем опухоли более 1,5 см3 при размере диаметра лапы с опухолью 8.5 + 0.5 мм, получены достоверные эффекты сочетанного действия локального облучения и препаратов поли И:Ц, но не для дипиридамола и арбидола (табл. 6). Из таблицы 7 видно, что введение индукторов интерферона за 4, 24 и 48 ч перед облучением обеспечивает практически одинаковый аддитивный эффект, при комбинировании с локальным облучением животных.

ТАБЛИЦА 7

Влияние сроков введения индукторов интерферона

перед облучением на метастазирование МЛ (локальное облучение на 7 сутки после перевивки ОКл)

ПРЕПАРАТЫ И ОБЛУЧЕНИЕ УРОВЕНЬ МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ В ЛЕГКИЕ (в % к контролю)

за 48 ч за 24 за 4 ч

ОБЛУЧЕНИЕ в дозе 30 Гр 67, 3 ± 9,0 ( 27 )

ПОЛИ И:Ц 0,05 мг/мышь 60,3 ± 12,3*( 15 )

ПОЛИ И:Ц + . ОБЛУЧЕНИЕ 23,5 ± 6,5* ( 12 ) 25,5 ± 12?§ ( 19 ) 25,4 ± 14,Е* ( 16 )

ДИПИРВДАМОЛ 0,5 мг/мышь . 68,2 ± 14,5*(19 )

ДИПИРВДАМОЛ + ОБЛУЧЕНИЕ 40,7 ± 9,5* ( 16 ) 35,4 ± 12?Е ( 19 ) 36,6 ± 15,Е* ( 12 )

АРБИДОЛ 4,4 мг/мышь 70,6 ± 13,1 ( 18 )

АРБВДОЛ + ОБЛУЧЕНИЕ * 30,6 ± 12,6 ( 12 ) » 28,7 ± 20,6 ( 12 ) * 29,3 ± 12,4 ( 16 )

*

- различие с контролем достоверно при р < 0,05 *» _

- различие с контролем достоверно при р < .0,01

Существенное подавление метастазирования при сочетан-ном действии индукторов интерферона и локального облучения

опухоли явлется фактом, подтверждающим гипотезу об усилении радиационного киллинга под действием индукторов интерферона.'

Можно предположить, что индукторы интерферона активируют нормальные киллерные клетки, которые легче опознают поврежденные во время локального облучения опухолевые клетки, что и приводит к подавлению не только роста опухоли, но и метастазов.

Таким образом, разные по химической структуре, но обладающие способностью индуцировать синтез интерферона соединения при комбинированном применении с локальным облучением аддитивно подавляют метастазирование.

Совместное действие индукторов интерферона и циклофэс-Фана. В свете ранее полученных результатов особый интерес представляло изучение комбинированного действия интерфероно-генных доз дапиридамола и одного из наиболее часто употребляемых при лечении карданом молочной железы и легкого ци-тостатика циклофосфана на метастазирование ЖЛ и Са755, а также сравнить эти результаты с сочетанным действием поли И:Ц. Поли И:Ц и дипиридамол вводили на 3 и II сутки после перевивки опухолевых клеток, а циклофосфан на 2 и 10 сутки. Следует отметить, что во всех опытах комбинированное использование циклофосфана с поли И:Ц и дипиридамолом существенно уменьшало массу нарастания метастазов в легких (отличия достоверны не только от контроля, но и от группы с применением одного циклофосфана). Отличие результатов комбинированного действия циклофосфана с поли И:Ц от циклофосфана с дипиридамолом в моделях искусственного и спонтанного метастазирования вероятно связано с воздействием на разные этапы метастазирования. Дипиридамол в большей степени эффективен в искусственной модели метастазирования (достоверный (р < 0,05) синергический эффект с циклофосфаном ). Аналогичные результаты были получены в модели с внутривенной перевивкой опухолевых клеток Са755.

ВЫВОДЫ

I. В моделях метастазирования ЛКЛ, РМЖ-П и Са755 установлено, что индукторы интерферона поли И:Ц, тилорон, ар-бидол и вазодилататоры дипиридамол, папаверин и кордарон обладают выраженными антиметастатическими эффектами, но не оказывают достоверного влияния на рост самих опухолей.

2. Эффективность подавления метастазирования индукторами интерферона зависит от срока начала лечещя после перевивши ОКл. Максимальное антиметастатическое действие индукторов интерферона наблюдается в случав начала ле*рния за сутки до и после перевивки опухоли.

3. Новый противовирусный препарат арабидол в интерферо-ногенной дозе (0,2 г/кг) в спонтанной и искусственной моделях подавляет метастазирование ЛКЛ, причем максимальные аффекты подавления метастазирования (до 55 X) достигаются при начале лечения через сутки после перевивки опухоли.'

4. Вазодилататор дипиридамол в интерфероногенной дозе

( 25 г/кг) существенно снижает метастазирование разной органной тропности, причем его антиметастатическое действие сравнимо со стандартным индуктором интерферона поли И:Ц.

5. В спонтанной и искусственной моделях метастазирования ЛКЛ показано, что отличные по химической структуре от дипиридамола вазодилататоры папаверин и кордарон такта вызывают значительное (до 70 %) подавление метастазирования. ^

6. В моделях метастазирования ЛКЛ и Са755 при внутривенном и внутримышечном способе перевивки опухолевых клеток показано усиление цитотоксического действия циклофосфана при комбинации с поли И:Ц и дипиридамолом.

7. В модели метастазирования ЛКЛ установление аддитивное действие комбинированного применения локального облучения с поли И:Ц, арбидолом и дипиридамолом на подавление дис-семинации. Эффективность подавления метастазирования существенно зависит от сроков начала терапевтического воздействия и времени облучения после введения препаратов.

8. Выявленные в моделях спонтанного и искусственного метастазирования достоверные эффекты подавления диссемина-ции опухолей разной органной тропности требуют разработки и клинической апробации комбинированных схем лечения>онкологических больных с использованием локального облучения и индукторов интерферона.

Список работ, опубликованных по тепе диссертации

I.Федоровская Е.О., Афанасьев Г.Г., Пелевина И.И., Григорян С.С., Ершов Ф.И., Поверенный A.M. Подавление метастазирования карциномы Льюис у мышей вазодилататором курантилом, индуциру-

вдим интерферон. // Бюл. эксп. биол. и мед. - 1989. - Ii. -I. С. 82 - 85.

2. Федоровская Е.О. Григорян С.с. ..Индукторы интерферона и метастазирование..// - В сб.: Индукторы интерферона и другие иммуномодуляторы в радиобиологии и онкологии. - Обнинск. - 1989. - С. 43 - 47.

3. Олейникова О.М., Федоровская Е.О. Особенности реакции опухоли при сочетанном действии индукторов интерферона. // Индукторы интерферона и иммуномодуляторы в радиологии и онкологии. - Обнинск.-1989. - С. 28 -»35.

4. Федоровская Е.О., Афанасьева A.B., Сенин В.К., Поверенный А.М. Влияние сердечного вазодилататора дипиридамола на дассеминацию высокометастазирувдего рака молочной гелезы. //'Вестник ВОНЦ АМН CCCP/'-^N. I. - 0. 16 - 19. '

5. Федоровская Е.О. Индуктороы интерферона и метастазирование. // - Всесоюзное конференция "Индукторы интерферона и другие иммуномодуляторы в радиологии и онкологии".- 1989.-Кемерово.

Вся экспериментальная часть опубликованных результатов выполнена лично диссертантом. Соавторы перечисленных работ участвовали в обсуждении полученных результатов; Григорян С.С. были предоставлены данные о интерферониндуцирупцих дозах вазодилататоров; эксперименты с использованием саркомы-37 выполнены с участием Олейниковой О.М.; эксперименты с PMS, метастазируедей в печень, выполнены с участием Сенина В.М. и Афанасьевой А.В, предоставившими диссертанту ату модель метастазирования.

Подписано к печати 26.0Б.92. Заказ 1747 Объем I ' п.л. Тира« 100 экз.

Обнинская городская типография г.Обнинск, ул. Комарова, 6

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Федоровская, Елена Олеговна

Оглавление

Список сокращений.

Введение.

Глава I. Механизмы метастазирования и современные терапевтические подходы к лечению и предотвращению метастазирования.

1.1. Гетерогенность опухолевых клеток.

1.2. Механизмы метастазирования опухолевых клеток----19.

1.3. Молекулярно-биологические исследования метастазирования

1.4. Современные терапевтические подходы к лечению и предотвращению метастазирования.

1.5. Использование модуляторов биологических реакций в лечении метастазирующих опухолей.

1.6. Индукторы интерферона в экспериментальной и клиниче ской онкологии.

1.7. Вазодилататоры - новый класс индукторов интерферона.

1.8. Комбинированное использование индукторов интерферона с радиацией и химиотерапией.

Глава II. Материалы и методы исследования.

Глава III. Результаты исследования и их обсуждение.

3.1. Модели экспериментального метастазирования.

3.2. Исследовавние антиметастатической активности поли И:Ц.

3.3. Влияние тилорона и противовирусного препарата арбидола на метастазирование мышиных опухолей.

3.4. Влияние на метастазирование мышиных опухолей вазодилататоров, способных индуцировать синтез интерферона.

3.5. Влияние на метастазирование ЛКЛ комбинированного действия локального облучения и индукторов интерферона.

3.6. Влияние на метастазирование мышиных опухолей комбинированного воздействия циклофосфана с поли И:Ц и дипиридамолом.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Комбинированные схемы лечения метастазирующих опухолей мышей"

актуальность проблемы. Прогресс в лечении опухолевых заболеваний невозможен без поиска новых методов и препаратов, подавляющих метастазирование. Несмотря на высокий уровень современной хирургической техники, определенные успехи в радиотерапии и химиотерапии опухолей, больные часто погибают от метастазов (Балицкий, Шмалько, 1987). Большие надежды, возлагаемые на лечение онкологических больных иммунологическими методами, пока не оправдались. В настоящее время очевидно, что только комбинирование радиотерапии или хирургического удаления опухоли с агентами, подавляющими метастазирование, может быть эффективным и обеспечивать полное излечение онкологических заболеваний или длительную ремиссию.

В течение последних десяти лет онкологи пытаются использовать для предотвращения диссеминации различные комбинации модуляторов биологических реакций, среди которых наиболее перспективными оказались интерфероны и индукторы интерферонов. Перспективность комбинированного применения интерферонов и индукторов интерферонов с облучением опухолей связана, с одной стороны, с радиопротекторным действием этих веществ на организм в целом (Семина с соавт., 1974, 1976), а, с другой стороны, с их антипролиферативным действием на опухолевые клетки и одновременной активацией иммунокомпетентных клеток. В совместных работах, проведенных в Институте медицинской радиологии АМН СССР и Институте химической физики АН СССР под руководством А. М. Поверенного и И. И. Пелевиной, показано, что все индукторы синтеза интерферона значительно повышают эффективность лучевой терапии и химиотерапии опухолей у животных. Показателями к применению индукторов совместно с облучением и другими противоопухолевыми агентами являются необходимость стимуляции системы натуральных киллеров в организме, большой размер опухоли, наличие метастазов и высокая степень гетерогенности клеточной популяции опухоли. Важным фактором в усилении ответа опухоли на это комбинированное воздействие оказывается использование облучения на пике интерферона в сыворотке крови (Леонидзе с соавт., 1986; Каракулов с соавт., 1985; Lvovskii et al, 1989). Все эти факты свидетельствуют о необходимости разработки комбинированных схем радиотерапии остаточной метастатической опухоли с использованием индукторов интерферона.

Наряду с изучением известных индукторов интерферона актуален поиск новых веществ, обладающих иммуномодулирующей способностью. Новым классом веществ, существенно изменяющим иммунологический статус организма, согласно исследованиям Галабова и Мастиковой (1982), а также Григорян с соавторами (1988), оказались коронарорасширяюще вазодилататоры (дипири-дамол, папаверин, кордарон, а также препараты метилксантино-вого ряда). В литературе встречаются работы о различных воздействиях этих препаратов на опухолевые клетки. Так, папаверин изменяет экспрессию поверхностных антигенов в культуре человеческой нейробластомы, а дипиридамол подавляет пролиферацию человеческих лейкозных культур (Nicolson, Ni-oolson, 1976, Masao et al., 1986). Однако механизмы противоопухолевого воздействия авторами этих работ не связывались с интерферониндуцирующей активностью тестируемых препаратов. Способность вазодилататоров к модулированию ответа иммунной системы, непосредственное воздействие на опухолевые клетки, а также хороший уровень изученности фармакологических и токсикологических свойств, делают эти препараты потенциально ценными для клинической онкологии. Вопрос о воздействии ко-ронарорасширяющих препаратов на диссеминацию опухолей важен и с точки зрения их взаимодействия с противораковыми агентами у онкологических больных с сопутствующими заболеваниями сердечно-сосудистой системы.

Выяснение оптимальных схем, доз и способов введения препаратов в различных моделях метастазирования является первым этапом в изучений противоопухолевых свойств индукторов интерферона, необходимых для разработки комбинированных схем лечения с использованием локального облучения и химиотерапии. цель работы. Целью настоящей работы явилось исследование в моделях искусственного и спонтанного метастазирования влияния индукторов интерферона и вазодилататоров на диссеминацию опухолей легочной карциномы Льюис, рака молочной железы, аде-нокарциномы Са 755, а также эффективности и оптимальных схем их воздействия в сочетании с локальным облучением и цикло-фосфаном для осуществления противоопухолевых и антиметастатических воздействий в комбинированных схемах лечения опухолей

Для достижения указанной цели были поставлены следующие конкретные задачи:

I. На моделях ЛКЛ, метастазирующей гематогенным путем в легкие, аденокарциномы Са755 и метастазирующего в печень лим-фогенно-гематогенным путем РМЖ исследовать закономерности образования метастазов при внутривенной и внутримышечной трансплантации опухолевых клеток.

2. В моделях спонтанного и искусственного метастазиро-вания ЖЛ оценить антиметастатическую эффективность индукторов интерферона поли И:Ц, тилорона, нового антивирусного препарата арбидола и вазодилататоров дипиридамола, папаверина, кордарона, кофеина. Подобрать оптимальные схемы лечения и способы введения препаратов для получения максимальных антиметастатических эффетов при минимальной токсичности используемых доз.

3. Исследовать эффективность воздействия индуктора интерферона поли И:Ц и вазодилататора дипиридамола в модели РМЖ мышей с преимущественным метастазированием в печень.

4. Оценить эффективность индукторов интерферона и вазодилататоров при локальном облучении радиочувствительной опухоли ЖЛ, перевитой внутримышечно. Выяснить оптимальные сроки введения индукторов интерферона перед облучением для получения максимальных противоопухолевых и антиметастатических эффектов.

5. В моделях искуственного и спонтанного метастазиро-вания ЖЛ и аденокарциномы Са755 у мышей оценить эффективность взаимодействия индуктора интерферона поли И:Ц и вазодилататора дипиридамола с химиотерапевтическим препаратом циклофосфаном. научная новизна. в работе впервые:

- описаны антиметастатические эффекты нового антивирусного препарата арбидола, вазодилататоров дипиридамола, папаверина, кордарона. Установление, что дипиридамол и папаверин в терапевтических дозах существенно подавляют метастазирование разной органной тропности;

- подобраны оптимальные схемы лечения, способы введения препаратов» обеспечивающие максимальные антиметастатические эффекты при минимальной токсичности используемых доз;

- показано, что все исследованные препараты эффективны только в подавлении метастазнрования и не оказывают достоверного влияния на первичную опухоль. При этом достоверно лучшие эффекты получены в моделях искусственного метастазнрования, что свидетельствует о воздействии индукторов интерферона именно на диссеминирующие клетки и механизмы диссеминации;

- получены данные об аддитивном подавлении метастазнрования при комбинированном использовании поли И:Ц, дипиридамола и арбидола с локальным облучением. Принципиально важным для достижения лечебного эффекта являются время введения препаратов до облучения и количество суток, прошедших после перевивки опухолевых клеток, что было показано в моделях радиочувствительной опухоли карциномы Льюис;

- обнаружено усиление цитотоксичности циклофосфана при комбинированном ведении поли М:Ц и дипиридамола в моделях искусственного и спонтанного метастазнрования ЛКЛ и аденокар-циномы Са755 у мышей.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Полученные результаты могут быть использованны в качестве теоретической и экспериментальной основы принципиально новых схем воздействия на процесс диссеминации опухолей и дальнейшего целенаправленного поиска профилактических мероприятий по предотвращению метастазнрования. При этом необходимо учитывать, что все индукторы интерферонов не оказывают существенного влияния на первичную опухоль, т.е. не могут полностью прекратить ее развитие, но весьма эффективны в подавлении метастазнрования опухолей с разной органной тропностью. Впервые установленные факты усиления антиметастатического действия при комбинированном применении индукторов интерферона и локального облучения подтверждают гипотезу радиационного киллинга и открывают возможность использования индукторов интерферона поли И:Ц, дипиридамола, нового антивирусного препарата арбидола и тилорона в онкологической практике как им-мунопрофилактических, избирательно действующих терапевтических средств.

Данные об усилении цитотоксичности циклофосфана в моделях искусственного и спонтанного метастазирования имеют два практических аспекта. Во-первых, возрастание биологической активности циклофосфана, вызванное взаимодействием с дипиридамолом, может быть использовано при лечении онкологических больных пожилого возраста с сопутствующими сердечнососудистыми заболеваниями. Во-вторых, индукторы интерферона, в частности стандартный препарат поли М:Ц, действуют в качестве иммуномодуляторов, существенно уменьшая иммунодепрес-сирующее влияние циклофосфана и, в силу этого, усиливая антиметастатические эффекты этого цитотоксического препарата.

В целом, совокупность полученных экспериментальных и теоретических результатов позволяет рекомендовать применение нетоксичных доз дипиридамола и поли М:Ц в современных схемах лечения онкологических больных для профилактики метастазирования. Однако наиболее ценным, по нашему мнению, результатом данной работы является установление аддитивного эффекта подавления метастазирования в случае комбинирования индукторов интерферона с локальным облучением опухолей. Этот факт, наряду с известным общим радиопротекторным и противострес-сорным воздействием индукторв интерферона на организм и уси

- 11 лением ответа опухоли на облучение, указывает на перепек тивность использования этих препаратов именно в лучевой те рапии опухолей.

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Федоровская, Елена Олеговна

- 115 -ВЫВОДЫ

1. В моделях метастазирования ЛКЛ, РМЖ-П и Са755 установлено, что индукторы интерферона поли И:Ц, тилорон, ар-бидол и вазодилататоры дипиридамол, папаверин и кордарон, обладают выраженными антиметастатическими эффектами, но не оказывают достоверного влияния на рост самих опухолей.

2. Эффективность подавления метастазирования индукторами интерферона зависит от срока начала лечения после перевивки ОКл. Максимальное антиметастатическое действие индукторов интерферона наблюдается в случае начала лечения за сутки до и после перевивки опухоли.

3. Новый противовирусный препарат арабидол в интерферо-ногенной дозе (0,2 г/кг) в спонтанной и искусственной моделях подавляет метастазирование ЛКЛ, причем максимальные эффекты подавления метастазирования (до 55 %) достигаются при начале лечения через сутки после перевивки опухоли.

4. Вазодилататор дипиридамол в интерфероногенной дозе 25 г/кг) существенно снижает метастазирование разной органной тропности, причем его антиметастатическое действие сравнимо со стандартным индуктором интерферона поли И:Ц.

5.В спонтанной и искусственной моделях метастазирования ЛКЛ показано, что отличные по химической структуре от дипиридамола вазодилататоры папаверин и кордарон также вызывают значительное (до 70 %) подавление метастазирования.

6. В моделях метастазирования ЛКЛ и Са755 при внутривенном и внутримышечном способе перевивки опухолевых клеток показано усиление цитотоксического действия циклофосфана при комбинации с поли й:Ц и дипиридамолом.

- 116

7. В модели метастазирования ЛКЛ установленно аддитивное действие комбинированного применения локального облучения с поли И:Ц, арбидолом и дипиридамолом на подавление диссеминации. Эффективность подавления метастазирования существенно зависит от сроков начала терапевтического воздействия и времени облучения после введения препаратов.

8. Выявленные в моделях спонтанного и искусственного метастазирования достоверные эффекты подавления диссеминации опухолей разной органной тропности требуют разработки и клинической апробации комбинированных схем лечения онкологических больных с использованием локального облучения и индукторов интерферона.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящей работе с использованием моделей спонтанного и искусственного метастазирования ЛКЛ, метастазирующей гематогенным путем в легкие, а также аденокарциномы Са755 и рака молочной железы с преимущественным метастазированием в печень экспериментально исследованы закономерности образования метастазов при использовании для лечения разных классов индукторов интерферона. Оценена антиметастатическая эффективность, подобраны оптимальные схемы лечения и способы введения таких индукторов интерферона как поли И:Ц, тилорон, новый антивирусный препарат арбидол и вазодилататоров дипиридамола, папаверина и кордарона. Впервые установлено, что арбидол, дипиридамол, папаверин и кордарон в нетоксических дозах подавляют метастазирование опухолей разной органной тропности. Выявленные в работе оптимальные схемы лечения позволяют получать максимальные антиметастатические эффекты при минимальной токсичности используемых доз указанных препаратов .

Важным для практической онкологии результатом является то, что все без исключения исследованные препараты эффективны только в подавлении диссеминации и не оказывают достоверного влияния на солидные опухоли. При этом следует заметить, что достоверно лучшие терапевтические эффекты получены на моделях искусственного метастазирования. Последнее обстоятель-тельство свидетельствует о том, что действие индукторов интерферона направлено именно на диссеминирующие клетки и приводит к уменьшению пула "стволовых" клеток, дающих начало метастазным узлам в легких.

При исследовании эффективности воздействия индуктора интерферона поли И:Ц и вазодилататора дипиридамола в модели рака молочной железы мышей, метастазирующего в печень лимфо-генно-гематогенным путем, установлено, что указанные препараты способны подавлять метастазирование разной органной тропности.

ЛКЛ оказалась удобной моделью для оценки комбинированного воздействия локального облучения и индукторов интерферона на метастазирование. Причина этого связана с высокой радиочувствительна и отвечает на интерферон. В указанной модели впервые обнаружен эффект усиления подавления метастазирования и торможения роста опухоли при воздействии не позже 7-8 суток после перевивки ОКл, т.е. до возникновения микрометастазов. При начале лечения на 10 сутки после перевивки ЛКЛ комбинированое воздействие вызвало достоверное понижение метастазирования только при использовании поли 1/1 :Ц, но не дипиридамола или арбидола.

При введении поли И:Ц и арбидола за 4, 24 и 48 ч до локального облучения опухоли в дозе, вызывающей некоторое уменьшение количества пролиферирующих клеток, достоверных различий в степени подавления метастазирования не наблюдается. Вместе с тем, при введении мышам за 48 ч до облучения дипиридамола наблюдается достоверное увеличение метастазирования по сравнению с введением этого препарата за 4 и 24 ч до облучения. Иными словами, сроки введения препаратов перед облучением играют важную роль для реализации терапевтического эффекта по таким показателям как рост опухоли, время удвоения ее объема. Наиболее критичным срок введения препарата перед облучением является для поли И:Ц. Вместе с тем, величина антиметастатического эффекта, как правило, не коррелирует с этим временным показателям.

Существенное подавление метастазнрования при комбинированном действии индукторов интерферона и локального облучения опухоли является фактом, подтверждающим гипотезу об усилении радиационного киллинга ОКл под действием индукторов интерферона. Главной причиной аддитивного подавления метастазнрования при комбинировании индукторов интерферона и радиации может быть существенное уменьшение пролиферирующих "стволовых" клеток опухоли и включение индукторами интерферона системы естественных киллеров.

В моделях искусственного и спонтанного метастазнрования ЛКЛ и Са755 было показано усиление антиметастатических эффектов при комбинированном использовании поли П:Ц и дипиридамола с циклофосфаном. Вероятно индукторы интерферона, в частности стандартный индуктор поли И:Ц, действуют в качестве иммуномодуляторов, существенно уменьшая иммунодепрессиру ющее влияние циклофосфана, что, в свою очередь, приводит к уменьшению "стволоеых" метастазирующих клеток. Этот факт наиболее наглядно подтверждается в экспериментах с искусственным метастазированием, когда введение циклофосфана не только не уменьшает уровень метастазнрования, а приводит к существенному увеличению количества метастазов и массе их нарастания в легких. Так как при внутривенном введении опухолевых клеток мы косвенно можем оценить число потенциальных "стволовых" клеток, дающих начало метастазам в легких, то можно заключить, что сочетанное применение циклофосфана с индукторами интерферона имеет более эффективное воздействие на метастазирование, приводящее к уменьшению метастазирую

- 114 ших " стволовых" клеток, чем раздельное применение этих препаратов.

Таким образом, полученные факты диктуют необходимость включения в современные комбинированные схемы лечения метас-тазирующих опухолей индукторов интерферона, с одной стороны, как средств, значительно подавляющих метастазирование разной органной тропности, с другой - существенно усиливающих воздействие радиации и химиотерапии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Федоровская, Елена Олеговна, Обнинск

1. Архипов С. А . Роль макрофагов и Т лимфоцитов в механизме ингибирующего влияния опухоли на процесс метастазирования. // - Автореф. дис. на соискание уч. ст. канд. биол. наук. - Новосибирск. - 1987.

2. Балаж А., Блажек И. Эндогенные ингибиторы. // Москва, Мир - 1982.

3. Балицкий К. П., Шмалько Ю. П. Стресс и метастазирование злокачественных опухолей. /7 Киев, Наук. Думка. - 1987.

4. Григорян С. С., Ершов Ф. И., Поверенный А. М. Коронаро-расширяющие препараты новый класс индукторов интерферона. //- Вопр. вирусол. 1988. N. 1. - С. 204 -207.

5. Григорян С. С., Поверенный А. М., Ершов Ф. й. Сосудорасширяющие препараты новый класс индукторов интерферона. // -В сб.: Индукторы интерферона и другие иммуномодуляторы в радиологии и онкологии. - Обнинск. - 1989. - С. 13-15.

6. Гублер Е. В., Генкин А. А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях.//-Л.: Медицина. 1973.

7. Дейчман Г. И. Современные концепции иммунологических взаимоотношений опухоли и организма. // В кн.: Опухолевый рост - как проблема биологии развития. - М.- 1979. - С. 208 -226.

8. Ершов Ф. И., Григорян С. С. Характеристика индукторов интерферона. // В сб.: Индукторы интерферона и другие иммуномодуляторы в радиобиологии и онкологии. - Обнинск. - 1989.- С. 2 6.

9. Жданов В. м., Ершов Ф. И. ИНдукторы интерферона. // М.- 1982. С. 156.

10. Леонидзе Д. Л., Афанасьев Г. Г., Поверенный А. М., Пелевина И.И. Радиосенсибилизирующее действие индукторов синтеза интерферона. // Радиобиология. - 1986. -Т. 26, - N. 2. - С. 227 - 231.

11. Леонидзе Л. Д. Совместное действие индукторов синтеза интерферона, радиосенсибилизирующих и противоопухолевых агентов на солидные опухоли. // Радиобиология. - 1987. - Т. 27,-N. 5. - С. 231 - 234.

12. Леонидзе Д. Л. Изменение эффективности действия облучения на опухоли индукторами синтеза интерферона и другими им-муномодуляторами. // Автореф. дис. на соискание уч. ст. канд. биол. наук. - Обнинск. - 1987.

13. Калхиахилидзе К. А., Кристин Т. К. // Мол. генетика, микробиол. и вирусол. Механизмы действия индукторов интерферона у ЖИВОТНЫХ. - 1987. - N. 6. - С. 44-46.

14. Козлов А. М., Сафьина З.П. Частота, сроки и тип метастазирования различных перевиваемых опухолей мышей. // Бюл. эксп. биол. и мед. 1978. - Т. 86, - N. 12. - С. 715 -718.

15. Кулинский В. П., Климова А. Д., Филипович И. В. Меха-ханизмы радиопротекторного действия аденозина // Радиобиология. - 1988. - Т. 28. - С. 230 - 234.

16. Олейникова О. М., Федоровская Е.О. Особенности реакции опухоли при сочетэнном действии индукторов интерферона и радиации. // В сб.: Индукторы интерферона и другие иммуномодуля-торы в радиологии и онкологии. - Обнинск. - 1989. - С. 28 - 35.

17. Пелевина И. И., Тапонайнен Н.Я., Леонидзе Д. Л., Готлиб В. Я., Афанасьев Г. Г. Клеточные механизмы радиосенсибилиза -ции опухолей химическими соединениями. // Инфрмац. бюл.

18. Науч. Совета АН СССР по проблемам радиобиологии. 1985. - Т. 31. - С. 37 - 40.

19. Сейц И. Ф., Князев П. Г. Молекулярная онкология. // -Л.: Медицина. 1986. - С. 352.

20. Сенин В. М., Иванов А.В., Афанасьева А.В., Бунцевич А.М Новые органно-метастазирующие перевиваемые опухоли мышей и их использование для изучения влияния лазерного излучения на процесс диссеминации. /./ Вестник АМН СССР. - 1984. - N. 5. -С. 85 -91.

21. Федоровская Е. 0., Афанасьев Г.Г., Пелевина И. И., Григорян С.С., Ершов Ф. И., Поверенный А. М. Подавление метастазирования карциномы Льюис у мышей вазодилататором курантилом индуцирующим интерферон. // Бюл. эксп. биол. и мед. - 1989- N. 1. С. 82 - 85.

22. Федоровская Е. 0., Григорян С.С. Индукторы интерферона и метастазирование. // В сб.: Индукторы интерферона и другие иммуномодуляторы в радиобиологии. - Обнинск. - 1989. - С. 43 -48.

23. Федоровская Е.О., Афанасьева А. В., Сенин В. М., Поверенный А. М. Влияние сердечного вазодилататора дипиридамола на диссеминацию высокометастазирующего рака молочной железы. // -Вестник ВОНЦ АМН СССР. 1990. - N. 1. - С. 16 - 19.

24. Фонталин А.К., Певницкий Е.А. Ингибирование циклофое-фаном пролиферации В-келеток. // Бюл. зксп. биол. и мед. -1984 N. 2 - С. 43 - 46.

25. Adamson R.H. Antitumor activity of tilorone hydrochloride aganst some rodent tumors: preliminary report. // J. NCI. -1982. - Y. 46. - P. 413 - 434.

26. Allen S., Pine S., Erlichman 0. A phase II trial of 5-fluorouracil and folic acid plus dipyridamole in patients with metastatic colorectal cancer. // Proc. Amer. Soc. Clin. Oncol. 1987. - V. 6. - P. 95.

27. Baldwin R. W. Immunotherapy of cancer. // Cancer Chtmother. Am. - 1981. - Y. 3. - P. 1155 - 1162.

28. Barbacid M. Oncogenes and human cancer: corse or consequence? // Carcinogenesis. - 1986. - V. 7. - P. 1037 -1042.

29. Best L.C., McGuire M. В., Jonts P. В. B. et al. Mode of action of dipyridamople on human platelets. // Tromb. Res. -1979. - Y. 16. - P. 367 - 379.

30. Bishop M.J. The molecular genetic of canser. // -Science. 1987. - V. 235- P. 305 - 311.

31. Blass К. E., Block H. U., Forser W. and Poniche K. Dipyridamole: a potent stimulator of prostacycline (PGI2) biosynthesis. // Br. J. Pharmac. - 1980. - Y. 68,- N.I. - P. 71 -73.

32. Bossi V. Catabolism and toxicity of interferons. // DrugsExeptl. Res. 1982. - V. 8, -N. 6. - P. 683 -689.

33. Cameron D. J., Bitterbury M. and Mayeski J. Ability of cancer patients macrophages to kill autologous tumour targets. Effect of prostaglandin inhibitors on cytotoxicity. // Cancer. - 1984. - V. 53- - P. 2053 - 2057.

34. Celada A., Cray P.W., Binderknecht E. and Schreiber R.D. Evidence for a gamma-interferon receptor, that regulates macrophage tumoricidal activity. // J. Exp. Med. - 1984. -Y. 160, - N.I. - P. 55 -74.

35. Chen Т. C., Howell S. B. Mechanisms of synergy between N-phocphoacetil-L-aspartate and dipyridamole in human ovarian carcinoma cell line. // Oancer Res. 1985. - Y. 45, - N. 8. -P. 3588 - 3594.

36. Crimstead I.A., Thorsrud A. K., Icllum E. Marker polypeptides distinguishing between cancer cell clons with high and low potential for spontaneous metastasis in murine fibrosarcoma cells. /'/ Cancer Res. - Y. 48. - P. 572 - 577.

37. Crutchely D. J., Ryan U. S. and Ryan J. W. Effects of aspirin and dipyridamole on the degradation of adenosine diphosphate by cultered ctlls derived from bovin pulmonary artery. // J. Clin. Invest. - 1980. - Y. 66. - P. 29 - 35.

38. Dawicki D. D., Agarwal K.C. and Parks R. E. Ir. Role of adenosine uptart and metabolism of blood ces in the antiplatelet actions of dipyridamole dilazep and nitrobensyl-thioinosine. // Diochtm Pharmacol. - 1985. - Y.34, - N.I.1. P. 3965 3972.

39. Dickinson A. M., Proctor S. J., Jacobs E. et al. Nature killer activity in childhood acute lyphoblastic leukemia in remission. // Br. J. Hematol. - 1985. - V. 59, - N 2. - P. 45- 53.

40. Didisheim P. and Owen 0. A. Effect of dipyridamole (Persantin) and its derivitives on thrombosis and platelet function. // Thromb. Diath. Haemorrh. - 1969. - V. 42. - P. 267 -275.

41. Doll R. Progress against Cancer: Are we wining the War? // Acta oncol. - 1989. - V. 28, - N.5. - P. 611 -621.

42. Dritschilo A., Mosman K., Gray M., Streevalson T. Potetiation of radiation injury by interferon. // Amer. J. Oncol. - 1982. - V. 5. - P. 79 - 82.

43. Peldman M., Eisenbaoh L. Whot makes a tumor cell metastatic? // Sceintific Amer. - 1988. - V. 256, - N. 11. - P. 60 -65.

44. Fialkow P. I. Clonal origin of human tumors. // Am. Rev. Med. - 1979. - V. 30. - P. 135 - 176.

45. Fidler I.J. Metastasis: Quantitative analisis of distribution and fate of tumor emboli labeled with I-iodo-2-dezoxyyridine. // J. NCI. - 1970. - V. 45. - P. 773- 782.

46. Fidler I. J. The relationship of embolic homogeneity, num- ber, size and viability to the incidence of experimental metastasis. // Eur. J. Cancer. - 1973. - V. 9. - P.00"3 —00<7 l—t—^l i-. £. | «

47. Fidler I. J. In vitro studies of cellular-mediatedimmunostimulation of tumor growh. // J. NCI. - 1973. - V. 50.- P. 1307 1312.

48. Fidler I. J. Rational and. methods for use of nude mice to study the biology and therapy of human cancer metastasis. // -Cancer Metastasis Rev. 1986. - P. 29 - 49.

49. Fidler I. J, Aukerman S. L. The heterogeneouse nature of metastatic neoplasms: Relevans to biotherapy. // In: Principles of cancer biotherapy. - Raven Press. - New York. - 1987. P. 21 - 47

50. Fidler I. J., Balch C. M. The biology of cancer metastasis in implications for therapy. // Gurr. Probl. Surg.- 1987. V. 24. - P. 130 - 209.

51. Pidler I. J., Hart J. R. Biological and experimental consequences of the zonal composition of solid tumors. //' -Cancer Res. 1986. Y. 41. - P. 3266 - 3267.

52. Pidler J. J., Hart J. R. Biological diversity in metastatic neoplasms: origins and implications. // Science . -Y. 217- P. 998 - 1003.

53. Pidler I.J., Poste G. Macrophage-mediated destruction of malignant tumor cells and new strategic for the therapy of metastatic disease. // Springer Semin. Immunopathol. 1982. Y. 5 - P. 161 - 174.

54. Fitzgerald G. A. Dipyridamole. // New Engl. J. Med. -1987. - V. 31b. - P. 1247 - 1257.

55. Fleishman L.F., Chahwala S. В., Cantley I.Ras-transform-ed cells: Altered levels of phosphatidylinositol 4-5-biphos-phate and catabolites. // Science. - 1986. - V.231. - P. 407 - 410.

56. Folkman J., Klagbern M. Angiogenic factors. // Science.- 1987. Y. 235. - P. 442 - 447.

57. Fodstad 0., Kjonniksen I., Aamdal S. et al. Extrapulmonary, tisue-speoific metastasis formation in nude mice injected with FEMX-1 human melanoma cells. // Cancer Res. - 1988. - V. 48. - P. 4382 - 4388.

58. Foon K. P., Sherwin S. A., Abrams P. G. et al. Treatment of advanced non-Hogkings lymphoma with recombinant leukocyte alpha-interferon. // New Engl. J. Med. - 1984. - V. 311. P. 1148 - 1152.

59. Frost P., Kerbel R. S. On the possible epigenetic mechanisms of tumor cell heterogenety. // Cancer Metastasis Rev. - 1984. - 7. 2 . - P. 375 - 378.

60. Galabov A.S., Mastikova M. Dipyridamole is an interferon inducer. // Acta Virol. - 1982. - V. 25- - P. 137-147.

61. Gasic G. J. Role of plasma platelets and endothelial cells in tumor metastasis. // Cancer Metastasis Rev. 1984. - Y. 3 - P. 99-116.

62. Giavazzi R., Campbel D. E., Jessup I. M. et al. Metastatic behavior of tumor cells isolated from primary and metastatic human colorectal carcinomas implanted into different sites in nude mice. // Cancer Res. - 1986. Y.4b. - P. 1928 - 1923.

63. Glosgow L. A., Kern E. R. Effect of interferon administration on pulmonary osteogenic sarcomas in experimental murine model. // J. NCI. - 1981 V. 67. - P.207 -- 210.

64. Gould M.K, Kakria E.G., Borden R. and Olsen S. Radiosenseti-satin of human bronchiogenic carcinoma cells by interferon-^. // Interferon - 1983. - V. 4. - P. 123-128.

65. Gorelik E. L. Augmentation of antimetastatic effect ofant icoagulantmdrugs by immunostimulation in mice. // Cancer Res. - 1987. - V. 48. - P. 809 - 814.

66. Gorelik E. L., Bere W. W., Herberman К. B. Role of Ж-cells in the antimetastatic effect of anticoagulant drugs. // Cancer Res. - 1988. - T. 33. - P. 87 - 94

67. Goustin A. S., Leof E. В., Shepley G. D. et all. Growth factor and cancer. // Cfncer Res. - 1984 V. 46. - P. 1015- 1029.

68. Grem J. L., Fisher P.H. Augmentation of 5-fluorouracil cytitoxcicity in human colon cancer cells by dipyridamole. //- Cancer Res. 1985. - V. 45, - N. 7. - P. 2967 - 2972.

69. Grem J. L. and Fisher P. H. Enhancement of 5-fluorouracil 's anticancer activity by dipyridamole. // -Pharmac. Ther.- 1989. V. 40. - P. 349 - 371.

70. Gresser J.,Bourali-Mayry C. Inhibition by Inf-preparations of a solid malignant tumor and pulmonary metastasis in mice. // Nature (New Biolog.)• - V.236. -P. 78-79.

71. Grinevich Yu. A., Umansky V. Yu., Kamenets L. Ya. et al. The lymphocyte activity of adenosine deaminase and enzymes of AMP metabolism in mamarey carcinogenesis: The effect of tliymostimulin. // Neoplasma. - 1984. - V. 31. - P. 21 -29.

72. Eagen S. H., McCiary G. A., Joroiim L. et al. Expression of M-ras correlates with metastatic potential evdence for direct regulation of metastatic phenotype in NIH3T3 ctlls. // Mol. Biol. Cell. - 1987. - V. 7. - P. 830 -847.

73. Eisenbach L., Segal S., Feldman M. MHC inbalance and metastatic spread in Lewis lung carcinoma. // Intern. J. of Cancer. - 1983. - V. 32. P. 113 - 120.

74. Errichetti A. M., Holden A., Ansell J. Managment of oralanticoagulant therapy: Experience with anticoagulati in clinic. // Arch. Int. Mtcl. - 1984. - V. 144- P. 1966 - 1968.

75. Ershov F. I. Interfron: Induction and production. // -Sov. Med. Rev. Yirol. 1987. - V. 1. - P. 229 - 268.

76. Evans R. Regulation of T- and B- lymphocyte responses to mitogens by tumor associated macrophages: The dependency on the stage of tumor growth. // J. Leukocyte Biol. - 1984. -Y. 35. - P. 549 - 559

77. Harriet P. B. Ciclic nycleotides in clinical pharmacology. // Trends. Pharm. Sci. - 1983. -V. 4, -N. 4. - P. 218 - 221.

78. Hard F., Dvorak M. D. Thrombosis and cancer. // Human phatology. 1987.- V. 18, -N. 3. - P. 275 - 284.

79. Harker L.A., Radath R. A. Mechanism of action of dipyridamole. // Tromb. Res. - 1983. - Y. 4. - P. 39 - 46.

80. Hasday J. D., Sitrin R. G. Dipyridamole stimulates urokinase production and supress procoagulant activity of rabbit alveolar macrophages: a possible mechanism of antithrombotic action. // Blood. - 1987. - Y.69. - P. 660 -667.

81. Henriksson R., Grankvist K. Interactions between anticancer drugs and other clinicaly used pharmacevticals. // -Acta oncol. 1989. - V. 28, - N. 24. - P. 451 -462.

82. Herberman R. B. Desingn of clinical trials with biological responce modifiers. // Cancer Treat. Rep. - 1989.-Y. 69. ~ P. 1161 - 1164.

83. Higano C., Livingstone R. Methotrexate and oral dipyridamole in the treatment of refractory solid tumors: a phase I -II study. // Proc Am. Soc. Clin. Oncol. - 1987. - Y.6. - P. 85 - 94.

84. Ногак Е., Darling D.L., Tarin D. Analisis of organ-specific effects on metastatic tumor for formation by studies in vitro. // J. NCI. - 1988. - Y. 76. - P. 913 - 922.

85. Ноге M., Meltzer P., Trent J. Enhanced expression of epi- dermal growth factor receptor correlates with alterations cancer. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. - Y. 83. - P. 5141 - 5144.

86. Hort J. R., fidler I.J. Role of organ selectivity in determination of metastatic partems of B16 melanoma. // Cancer Res. - 1981. - Y. 41. - P. 1281 - 1287.

87. Hu P., Wang R. Y., Hsu Т. C. Clonal origin of metastasis in B16 melanoma: A cytogenetic study. // J. NCI. - 1987. -Y.78. -P. 155 - 163.

88. Jaheid R. I., Krim M. Biological responce modifiers and cancer therapy. // In: Interferons: Biology, clinical fields and effects on hematologic neoplast. - Chiao J. W. ed. - New York, Basel. - 1988. - P. 197 - 267.

89. Jessup J. H., LeGrue S. J., Kachan et al. Induction of supressor cells by a tumor derived suppressor factor. // -Cell Immunol. 1985. -Y. 93. - P. 9 - 25.

90. Jones P. A., DeClerck Y. A. // Cancer Metastasis Rev. -1982. - Y. 1. - P 289 - 319.

91. Kahan B. W. Experimental metastasis of embrional carcinoma cell lines to specific leations. // Cancer Res. - 1987. - Y.47. - P. 6315 - 6323

92. Kardamahis D., Gillies H.E., Souhami R. C., Beweley P.C. Recombinant human interferon alpha-26 enhancerr the radio-sensitivity of smal cell lung cancer. // Anticancer res. -1989- - Y. 9, - N. 4. - P. 1041 - 1044.

93. Kaufman H. E., Centifanto Y. M., Ellison E. D. et al. // Tilorone hydrochloride: human toxicity and interferon stimulation. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1984. - Y. 37. - P. 357 - 360.

94. Killion I. J. Reduced tumorogenicity of A 10 adenocarcinoma cells in the presence of immunogenic A 10 tumor cells. /'./ Cancer Immunol. Immunother. - 1978. - Y. 4. P. 115 - 119.

95. Kojima Т., Suzuki N., Sugano J., Hagata J. Enhancement of an antitumor effects of interferon by dipyridamole in esteblishment human malignat melanom cell lins. // Intern. J. Cancer. -1990. - Y.45, - N. 5. - P. 853.

96. Koo Y. J., Pamy L.C. and Hue G. Inhibition of mamary tumor growth combined treament with cyclophosphamide and poly A:Y acid. // Cancer Res. - 1982.- Y. 42 - P. 4706 - 4711.

97. Krown S. E. Interferons and interferon indueters in cancer treatment. // Semin. Oncol. - 1986. - Y. 13 - P. 207 -217.

98. Krown S.E., Kerr K., Stewart W.E. Phase I trials of poly (I,С) complecs in advansced cancer. // J. Biol. Resp.Mo-dif. - 1986. - Y. 4 - P. 643 - 649.

99. Kruger R.R., Mauer G. D. Tilorone hydrochloride: an orally active antiviral agent. // Science. - 1970. - Y. 169 -P. 1213 -1214

100. McCeroy P. A., Philip R.B. Relative potencies of dipyridamole and related agents inhibitors of cyclic nucleotide phosphodiestherases: posible explanation of mechanism of inhibition of platelet fanction. // Life Sci. - 1975. - V. 17.- P. 1479 1493.

101. McBride 0. W., Swan D.S. Santos E. et al. Localization the normal allele of T24 human bladder carcinoma oncogene to chromosome 11. // Nature. -1982. - V. 300. - P. 773 - 774.

102. Masoti G., Pogesti L., Galanti G., NeriSerner G. G. Sti-mulasion of prostocycline by dipyridamole. // Lancet. -1979. - Y. 111 . - P. 1412.

103. Malcolm S.M. Combining chemotherapy with biological response modifiers in treatment of cancer. // J. of the NCI. -1988. - Y. 18, - N. 18. - P. 1445 - 1451.

104. Masao H., Eys Т., Tsumo N. et al. Inhibition effect of dipyridamole on the growth of variens human hematologic malignant cell lines. // Cancer Res. - 1986. - Y.33. - P. 51 -57.

105. Medina D., Hepner G. Cell mediated " immunostimulation" induced by mamory tumor viruse free Balb/C mamary tumors. //- Nature. 1973. - V. 242. - P. 329 - 331.

106. Megvison 0. Influence of implantation site on formation of metastasis. // Cancer Metastasis Rev. - 1983. V. 2. - P. 295 - 206.

107. Miller R. E., Miller R. P., Wilburn D. et al.Dominance of a tumor subpopulation line in mixed, heterogeneous mouse mamary tumors. // Cancer res. - 1988. - V. 48. - P. 5747 -5753.

108. Mills D. 0. The role cyclic nucleotides in platelets. //' In: Cyclic nucleotides: Part II.: Physiology and Pharma-macology. Kebatian J.W., Nathausun J.eds - 1987. - Springer -Yerllag. - Berlin. - P. 723 -761.

109. Moy P. M., Hobms E. C., Colyb H. Depression of natural killer cytotoxic activity in lymphocytes infiltrating pulmonary tumors. // Cancer Res. - 1985. - Y. 45. - P. 57 - 60.

110. Naitio S., von Eschenbach A. C., Giavazzi R. et al. Growth and metastasis of tumor cells isolated from a human renal all carcinoma implanted into different organs of nude mice. // Cancer Res. - 198b. - Y. 46. - P. 4109 - 4115

111. Weal D., Bennet M.K., Hall R.R. et al.Epidermal growth-factor receptors in human bladder: Comparison of invasive and superficial tumours. // Lancet. - 1985. - V. 1. - P. 366 -368.

112. Neilsen-Kudsk P., Pedersen A. K. Parmocokinetics of dipyridamole. // Acta Pharmocol. Toxicol. - 1982. - Y. 44.1. P. 391 399.

113. Nelson J.A., Drake S. Potentiation of methotrexate to-xcity by dipyridamole. // Cancer Res. - 1989- - Y. 44. -P. 2493 - 2493.

114. Nelson L., Nelson C., Peterson P.P. et al. A rational for the treatment of metastatic neuroblastoma. // J. NCI.1976. Y. 57. - P. 727 - 729

115. Neta R., Openlieim J.J. Radioprotektion with citokines--leaning from nature to oope with radiatin damage. /'/ Cancer cells. 1991. - V. 3, - N. 10. - P. 391 - 409.

116. Neta R. S. N., Vogel J. D., Sipe G.G. et al. Comparison of in vivo effects of human recombinant 11-1 end human recombinant 11-6 in mice. // Limphokine Res. - V. 7. - P. 403 - 411•

117. NetlandP.A., Zetter B.P. Metastatic potential of B1b melanoma cells alter in vitro selection for organ specific adherence. // - Cell Biol. - 1985. - V. 101. - P. 720 -724.

118. Nioolson G.L. All instability, diversification and progression to the metastatic phenotype: Prom oncofetal expression. // Cancer Res. - 1987. - V. 47. -P. 1473 - 1487.

119. Nicolson G. L. Metastaic tumor cell attachment and invasion assay utilyzing vascular endotelial cell monolayer. /'/- J. Histochem. Cytochem. 1982. - V. 30. - P. 214 -220.

120. Nicolson G. L., Dulski. K., Basson J. C. et al. Pre-tential organ attachment and invasion in vitro by B16 melanoma cells selected for differing metastatic colonization and invasive properties. // Metastasis Rev. - 1986.- V. 5. P. 29-49.

121. Nicolson G. L., Dulski К. M. Organ specificity of meta-satic tumor colonization is related to organ-selective growgh properties of malignant cells. // Int. J. Cancer. -1986. - V. 38. - P. 289 - 294.

122. Okawa H., Inada M., Suzuki M., Yata J. Immunoregulato-ry funcions of neoplastic lymphoid cells and their humoral products. // Cancer. - 1985. - Y. 56. - P. 309 - 317.

123. Oldham R. К., Smalley R. Y. The role of interferon in the treatment of oanoer. // In: Interferon: Research, clinical applications and regulatory Considerations. Zoon К. C. et al. eds. Elsevier, - New York. - 1984. - P. 219 - 227.

124. Ootsugama A., Tanaka К., anooka H. Evidence by cellular moaaicism for monoclonal metastasis of spontaneous mouse mamary tumors. // J. NCI. - 1987. - V.78. - P. 1223 - 1227.

125. Paget S. The distribution of secondary growth in cancer of breast. // Lancet. - 1889. - У.1. - P. 571 - 573.

126. Painder P. B. Effect of coffeine on DNA synthesis in irradiated and unirradiated mamalian cells. // J. Mol. Biol. - 1980. - Y. 143- - P. 289 -301.

127. Parker C. W. Role of cyclic nucleotides in regulatinglymphocytes. // Amer. N.Y. Acad. Sci. - 1979. - V. 332. - P. 255 - 261.

128. Pospisil M., Netikova J., Pipalova I., Kosubik A. Enchancement of radioprotective effectivness of adenosine monophosphate by dipyridamole. // Stud, biophys. - 1989. - Y. 132, - N. 3. - P. 203 - 208.

129. Poste G., Fidler H. The patogenesis of cancer metastasis. /V Nature. - 1980. - Y. 283. - P. 139 - 146.

130. Poste G., Tzeng J., Doil J. et al. Evolution of tumor cell heterogenity during progressive growgh of individual lung metastasis. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1982. - Y. 79. -P. 6574 - 6578.

131. Prechn R. T. The immune reaction as a stimulator of tumor growth. // Sience. - 1972. - Y. 176. - P. 170 - 171.

132. Prindull G. Minimal residual noeplastic disease concept, pathogenesis and supplementary therapeutic possibilites.

133. Cancer Treatment Rev. - 1986. - Y. 13.- P. 177 - 194.

134. Quesada J. R. Alpha-interferons for inducation of remission in hairy-cell leukemia. // N. Engl. J. Med.1984. V. 310. - P. 15 - 18.

135. Radel S., Zikan Y. Synthetic interferon inducers. Correlates in pharmacostructures. // Drags of the futhere.1985. Y.10. - P. 215 - 225.

136. Raz A. Regional emergency of metastasis heterogency of metastasis heterogenety in a growing tumor. // Cancer Left.- 1982. Y.17• - P. 153 - 160.

137. Reem G. H., Yen A. H. Regulation by interleukin-2 of interleiikin-2 reseptors and gamma-interferon synthesis by human thymocytes: Augmentation of interleukin-2 reseptors by interleukin-1. // -J. Immunol. 1985. - V. 134. - P. 953 -958.

138. Remic S. 0.» Grem J.L., Fischer P. H. et al. A phase I trial of 5-fluorouracil and dipyridamole. // Proc. Amer. Ass. Cancer Res. - 1987- - Y. 8. - P. 417 - 425.

139. Roos H., Pfleger K. Kinetics of adenosine uptake by erythrocytes and influence of dipyridamole. // Mol. Pharmae.- 1972. Y. 8. - P. 324 - 329.

140. Ross R., Raines E.W., Bowen-Pope D. P. The biology of platelet-dirived growth factor. // Cell. - 1986. - Y. 146. -P. 155 - 169.

141. Roth J. A., Restrepo C., Schuderi P et al. Analisis of antigenic expression by primary and autologeus metastatic human sarcomas using murine monoclonal antibodies. // Cancer Res. - 1984. - V. 44. - P. 5320 - 5325.

142. Samid D., Preideman R.M. Transcripthional regulation ofras by interferon. // In: Interferons of oell growth. ~ Freideman et al. ed. - New York. - 1986. - P. 413 - 422.

143. Sancburg I.R., Shebert G. Y., Farndaon J. R. et al. Epidermal-growth-faotor receptors and estrogen reseptors in human breast cancer. // Lancet. - 1985. - Y. 1. - P. 364 -366.

144. Sanibaldi A. R., Lowe G. 0., Barbenel J. C. et al. A comparision of spontaneous platelet aggregation in whole blood with platelet rich plasma: additional evidence for the role of ADP. // Thromb. Haemost. - 1987. - Y. 51. - P.115 - 118.

145. Schiller I.H., Borden E.C. Antiproliferative and clinical antitumor effects of interferons. // In: Leukolysins and Cancer. - Rauson J. H. ed, - Ortaldo. - The Havana Rress. -1988. - P. 273 - 302.

146. Schwartz J., Alerts D., Einspahp P. et al. Dipyridamole potentiation of FUDR activity against human colon cancer in vitro and patients. // Proc. Amer. Soc. Clin. Oncol. 1987- -Y. 6. - P. 83

147. Shipley Q., Stanley J., Steel A. Tumor size dependency in the radiation response of the lewis lung carcinoma. // -Cancer Res. 1975. - V. 35. - P. 2488 - 2493.

148. Sloane B. P., Horn K.Y. Cystein protenase and metastasis. // Cancer Metastasis Rev. - 1984. - V. 3. - P. 249 - 265.

149. Smalley R. Y., Oldham R. K. Chemical Inducers of lym-phokines. // New York, - Raven Press. - 1987. - P. 223 -245 .

150. Strander H., Einhorn S. Effect of human leukocyte interferon on the growth of human osteosarcoma. // Int. J. Cancer. 1977- - Y. 19. - P. 4686 - 4691 .

151. Straer D.R., Garter W. A., Brodsky J. et al. Clinical studies with mismatched double-sauded RNA. // Texas Rep. Biol.Med. - 1982. - Y. 41. - P. 663 - 671.

152. Stringfellow D. A. Induction of interferon with low molecular weight compaunds: fluorene ester, ethers (tilorone) and pyrimidinones. /./ Methods Ensymol. - 1981. - Y. 78. - P. 262 - 284.

153. Stevenson H.C., Abrams P.G., Schoenberg C. S. et al. Immunomodulatory effects of poly (I,C)-LC in cancer patients. // J. Biol. Resp. Modif. - 1985. - Y. 4. - P. 650 - 655.

154. Stewart W. E. II The interferon system. // - Springer -Yerlag. - Berlin - New York. - 1979. - P. 324 - 359.

155. Takagi S., Kitagama S., Takeda A. et al. Nateral killer interferon system in patients with pre-leukemic states. // -Br. J. Haemotol. 1984. - Y. 58. - P. 71 -81.

156. Talmadge J.E. Therapeutic potential of cytokines: A comparison of preclinical and studies. // Prog. Exp. Tumor Res.- 1988. Y. 32. - P. 154-173.

157. Talmadge J. E., Benediet K., Madsen J. et al. Development of biological diversity and susceptibility to chemotherapy in murine cancer methastases. // Cancer Res. -1984. - V. 44. - P. 3801-3805.

158. Talmadge J.E., Zbar B. Clonality of pulmonary metastasis from the bladder 6 sublins of B16 melanoma stadied by sonthern hybridisation. // J. NCI. - 1987. - Y.78. - P. 315- 320.

159. Talmadge J. E., Meyers К. M., Prirur D. I., et al. Role of Natural killer cells in tumor grouwgh and metastasis

160. Bl/6 normal and being mice. //' J. NCI. - 1980. - V. 65.- P. 229 223.

161. Talmadge J. E., Wolman S. R., Fidler I.J. Evidence for the clonal origin of spontaneous metastasis. // Scienc. 1982. - Y.217. - P- 361 - 363

162. Talpaz K., McCredie I. Leukocyte interferon-induced meyeloid cytoreduction in chronic myelogenous leukemia. // N. Engl. J. Med. - 1983. - V. 62. - P. 689 - 692.

163. Terranova Y. P., Hijanen E. S., Martin G. R. Basement membrane and the invasive activity of metastasis tumor cells. // J. NCI. - 1986. - Y. 77. - P. 311 - 316.

164. Tonew E., Indulen M. K., Dzeguza D. R. Antiviral activity of dipyridamole and its derivatives against influenza virus A. // Acta Virol. - 1982. - Y. 26. - P. 125 - 129.

165. Torrence P. F., Be Clercq E. Interferon inducers: general survey and classification. // Methods Enzymol. - 1981.- Y. 78. P. 291 - 299.

166. Tubiana M., Courdi A. Cell proliferation kinetics in human solid tumors: relation to probability of metastatic dissemination and long-term survival. // Radiother. and Oncology. - 1989. - Y. 15- ~ P. 1 - 18.

167. Van Damme I., De Ley M., Van Snick I. Inducers of lymfo-kines. // J. Immunol. -1987. - V. 139. - P. 1867 - 1872.

168. Van Lamsweerde A.-L., Henry N., Vaes G. Metastatic he-terogenety of cells from Lewis lung carcinoma. // Cancer Res. - 1983. - V. 43. - P. 5314 - 5320.

169. Vilcek J., Henriksen-Destetano D., Siegel D. et al. Regulation of INF-garnma induction in human peripheral blood cells by exogenously and endogenously produced interleukin-2.

170. J. Immunol. - 1985. - V. 135. - P. 1851 - 1856.

171. Voliners H. P., Birchmeier W. Monoclonal antibodies inhibit the adhesion of mouse В 16 melanoma cells in vitro and block lung metastasis in vivo. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1983. - V. 82. - P. 3729 - 3733

172. Young N. J., Gill P.G. Monocyte antibody dependent cellular cytotoxicity in cancer patients. // Cancer Immunol. Immunother. - 1984. - Y. 18. - P. 54 - 58.

173. Young J. D., Jarvis S. M. Nucleoside transport in animal cells. // Biosci. Rep. - 1983. - V. 3. - P. 309 - 322.

174. Wayhom C., Tomas M., Lagarde A. et al. Genetic evidence for progressive selection and overgrowgh of primary tumors by metastatic cells subpopulations. // Cancer Res. -1988. - Y. 48. - P. 6109 - 6114.

175. Willson J., Fischer P.H., Tutsch K. et al. Dipyridamole modulates methotrexate cytotoxity: resalts of clinical trial based upon inhibition of nucleoside salvage. // Proc. Amer. Clin. Oncol. - 1987. - Y. 6. - P. 36.

Информация о работе
  • Федоровская, Елена Олеговна
  • кандидата биологических наук
  • Обнинск, 1992
  • ВАК 03.00.01
Диссертация
Комбинированные схемы лечения метастазирующих опухолей мышей - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно
Автореферат
Комбинированные схемы лечения метастазирующих опухолей мышей - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации
Похожие работы