Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Гомеостаз лимфоцитов периферической крови при нелетальных радиационных воздействиях на организм человека

ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Гомеостаз лимфоцитов периферической крови при нелетальных радиационных воздействиях на организм человека"

На правах рукописи

РГ8 ОД

2 г:::.);]•

ШАТИНИНА Наталья Николаевна

ГОМЕОСТАЗ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ НЕЛЕТАЛЬНЫХ РАДИАЦИОННЫХ ВОЗДЕЙСТВИЯХ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА (экспериментально-клиническое исследование)

Специальность: 03.00.01 - радиобиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

г. Санкт-Петербург 1998

Работа выполнена в Центральном научно-исследовательском реттено-радиологическом институте Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор ШУТКО АН.

Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук, профессор А.С.ЯГУНОВ Доктор медицинских наук, профессор Б. АКОЛЫГИН Доктор медицинских наук Р.П.СТЕПАНОВ

Ведущее учреждение: Институт радиационной гигиены ГКЧС РФ

Защита диссертации состоится " ос " 1998 г.

На заседании диссертационного совета (Д 074.23.01) при Центральном научно-исследовательском ренггено-радиологическом институте МЗ РФ (г. Санкт-Петербург, 189646 п. Песочный-2, ул.Ленишрадская,д.70/4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан "Зо " _1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор КОРЫТОВА Л.И.

Актуальность исследования. При радиационных авариях, испытаниях атомного оружия, длительном пребывании человека в условиях повышенного радиационного фона космического или земного происхождения, диагностическом или лечебном применении ионизирующей радиации, ожидаемые нарушения здоровья человека весьма разнообразны. Они проявляются в виде лучевой болезни, лучевых ожогов, катаракт, патологии щитовидной железы, доброкачественных и злокачественных новообразований, снижения эффективности лучевой терапии онкологических больных, гемобластозов, апла-стических анемий, задержки роста и развития, особенно у детей, ухудшения качества жизни пострадавших [Coggon D. et al.,1996; Ivanov V.K., Tsyb

A.F.,1996],

Сопутствующее облучению поражение стволовых клеток, и прежде всего системы кроветворения, во многом определяет тяжесть последствий радиационного воздействия, поэтому для их косвенной оценки считается перспективным использовать изменения клеток крови, как, например, это делают с целью индивидуального прогноза летального исхода острой лучевой болезни [Груздев Г.П.,1988; Maiwald М. et al.,1989; Флидаер Т.М.,1990].

При дозах нелетального диапазона обнаружение прогностической связи гематологических показателей с клиническими проявлениями воздействия радиации на человека встречает значительные трудности и относится к наиболее дискуссионному разделу медицинской радиобиологии, актуально при облучении в предельно допустимых дозах, исключающих по определению возникновение детерминированных последствий в отдаленные сроки после воздействия [Вайнсон АА. и соавт., 1990; Кончаловский М.В. и сотр.,1991; Василенко И.Я.Д991; Ярмоненко С.П.,1996; НРБ,1996].

Математическое моделирование стохастических последствий также продолжает испытывать серьезные трудности в плане экстраполяции наблюдаемых радиационных рисков смертности или частоты онкологических заболеваний к сверхнизким уровням доз и их мощностей. Сложность представляет перекос радиационных рисков между разными популяциями, в частности на детей до 10 лет, а также временная проекция рисков [Jaccfci W. et al., 1989; Shigematsu L et al.,1995; Cohen B.L.,1992;1997],

Наибольшее количество авторов отмечают в отдаленные сроки после воздействия радиации в нелетальных дозах различные нарушения свойств лимфоцитов крови в связи с лучевыми поражениями тимуса, костного мозга, процессов репарации клеточной ДНК и т.д. Несмотря на обширный фактический материал, зависимость названных нарушений от дозы предшествующего облучения не очевидна, и не выявлено связей каких-либо определенных показателей с состоянием здоровья человека в отдаленном пострадиационном периоде, особенно при воздействии малых доз [Гейне В. и соавт.,1982; Шубж

B.М.,1987;1996]. Напротив, регистрируемые через несколько лет после ав1-рии изменения основных популяций циркулирующих лимфоцитов (Т и В кле-

ток) у ликвидаторов оказываются сопоставимыми по величине при существенной (более порядка) разнице поглощенных доз (Беляков И.М. и сотр.,1992]. Иногда, по данным различных авторов [Беляков И.М. и соавт., 1992; Савина Н.П. и соавт., 1995], изменения бывают противоположными по направленности для пострадавших одной категории, а в ряде случаев количественно оцениваются, как не выходящие за пределы колебаний так называемого "нормального" диапазона [Козырева Т.В. и соавт.,1990]. Вместе с тем, можно заключить, рассматривая некоторые источники [Воронцова Т.В. и соавт.,1990; Петров Р.В., Михайленко А.Д.,1990; Аклеев АВ.,1995], что аналогичные описанным для ликвидаторов изменения периферических лимфоцитов могут наблюдаться при компенсаторных и приспособительных реакциях системы лимфопоэза, возникающих в результате патологических состояний и нерадиационного генеза.

В связи с этим представляется, что проблема изучения клинико-лабораторных характеристик лимфоцитов периферической крови в отдаленные сроки после нелетальных воздействий требует совершенствования существующих подходов.

Анализ опыта изучения изменений субпопуляционного состава периферических лимфоцитов после радиационного воздействия показывает, что он ориентирован в основном на оценку иммунных потенций организма, т.е. предусматривает учет субпопуляций клеток, уже достигших иммунной компетентности. При этом доминирующей является тенденция сводить многообразие нарушений лимфопоэтической функции к сдвигам в Т-клеточном звене иммунитета на фоне беглых оценок менее "популярных" показателей, хотя отклонения последних зачастую более выражены и достоверны. Таким образом, упускается возможность более полной оценки лимфопоэтической активности органов лимфоцитопродукции по соотношению циркулирующих клеточных форм с различной степенью зрелости. Распространенное использование средних величин отдельных показателей без учета статистических связей между ними, равно как и случаи построения выводов по результатам определения отдельных клеточных маркеров, не обеспечивающих необходимый уровень информативности [Jackson A. et al.,1990], также не способствуют раскрытию прогностических и диагностических возможностей циркулирующих лимфоцитов в полной мере. Существующие же в настоящее время попытки выделения комплексов наиболее информативных показателей, еще недостаточно успешны [Новиков Д.К.,1987; Аклеев А.В.,1995]. В то же время, согласно точке зрения ряда исследователей, лимфоциты, помимо иммунных, обладают также свойствами, объединенными понятием морфогенетической функции [Бабаева АГ„ 1985; Бабаева А.Г., Зотиков Е:А., 1987]. Последняя, принципиально отличаясь от иммунной функции, проявляется в поддержании лимфоцитами регенерации ряда жизненно важных тканей в физиологических и патологических условиях, возможно, с участием лимфоцитов, находящихся

а ранних стадиях развития [Шутко А.Н.Д985; Бабаева А.Г. и соавт.,1993; 'ябов С.И., Ракитянская И.А.,1997]. Поэтому при анализе таких пострадиа-сионных последствий, как модификация процессов тканевого роста, перспек-ивным представляется хотя бы косвенный учет состояния морфогенетиче-кой функции лимфоцитов, например, путем выявления соотношения их зре-ых и незрелых форм.

Цель исследования: Исходя из изложенного, в данном исследова-вш поставлена цель провести сравнительную оценку состояния системы [имфопоэза в реальных социально-медицинских ситуациях, сопровождающихся изменениями пролиферативного статуса тканей человека в результате [елстального воздействия радиации или модифицирующих рост факторов той природы.

В задачи исследования входило на основании данных клинических и кспериментальных исследований:

-обосновать адекватный метод характеристики лимфопоэза человека ю показателям лимфоцитов периферической крови с учетом степени их дафференцированности;

-охарактеризовать особенности лимфопоэза при наличии в организме еловека доброкачественных и злокачественных опухолей и выявить его тагов ые реакции на лучевое воздействие в виде апробированных терапевтиче-кнх курсов;

-охарактеризовать особенности лимфопоэза у ликвидаторов и у де-ей, длительно проживающих на территориях с повышенным радиационным юном, сложившимся в результате аварии на ЧАЗС;

-оценить меру специфичности отдельных показателей перифериче-ких лимфоцитов для выявления лучевого компонента воздействия, привле-ая в качестве референтных данные для доноров и для лиц с физиологически ибо патологически измененными ростовыми процессами.

Новизна исследования

¡.Впервые исследованы лабораторно-клинические параллели между оставом лимфоцитов периферической крови различной степени зрелости и вменениями пролиферативных процессов в организме, вызванными факторами радиационной и нерадиационной природы.

2.Впервые обоснована информационная целесообразность объедине-шя различных показателей лимфоцитов периферической крови в единый омплекс на основе общности их зависимости от содержания фракции ранних имфоцитов и реакции на лучевое воздействие.

3.Впервые альтернативные состояния предложенного комплекса лассифицированы как признаки компенсаторной активации или, наоборот, ©компенсации в системе лимфопоэтического звена кроветворения. Отдельные показатели комплекса - обоснованы в качестве наиболее информативных

признаков гиперлазий различного происхождения и распространенности (ЕАС-РОК при физиологическом, доброкачественном и злокачественном росте и А-РОК - при гиперплазии щитовидной железы у детей).

4.Впервые продемонстрирована неспецифичность изменений комплекса показателей Е-ГОК, ЕАС-РОК, А-РОК, 0-клеток и РБТ для выявления лучевого воздействия на организм человека, поскольку выявленные изменения обнаружены и в референтных группах (при физиологическом, доброкачественном и злокачественном росте).

5.Впервые обнаружено у взрослых и детей, что показатель Е37-ЮК обладает универсальным свойством реагировать существенным снижением через 0,5-10 лет после острого облучения в средней эффективной эквивалентной дозе на активный костный мозг не более 0,2Гр или при хроническом (5 лет) дополнительном облучении в суммарных дозах 6-9х10'5 Гр.

6.Впервые феномен постлучевого снижения Е37-РОК зарегистрирован также в диапазоне небольшого постлучевого увеличения хромосомных повреждений.

7.На модели односторонней нефрэкгомии у животных впервые получены экспериментальные доказательства осуществления морфогенетической функции лимфоцитов фракцией недифференцированных клеток. Показана активация костномозгового лимфопоэза в логарифмическую фазу роста привитой опухоли, возможность опосредованного замедления роста опухоли в условиях её экранировании за счет подавления кроветворения облучением здоровых участков тела опухоленосителя.

Научно-практическое значение

1.Полученные результаты подтверждают точку зрения о правомерности выделения «порогового» диапазона доз до 0,2 Гр, в котором наряду с известной микродозиметрической спецификой (доминирование одиночных событий поглощения дозы клеточной мишенью), известной спецификой хромосомных повреждений (адаптивное изменение выхода на единицу дозы), обнаружены и присущие только этому диапазону изменения субпопуляцион-ного состава периферических лимфоцитов, заключающиеся в позднем (от 0,5 до 10 лет) относительном уменьшении пула более дифференцированных Е37-РОК на фоне увеличения пула более ранних А-ЮК.

¿.Представленные экспериментальные доказательства осуществления морфогенетической функции недифференцированными лимфоцитами позволяют связать позднее субпопуляционнос смещение в пуле этих клеток с их участием в восстановлении медленно обновляющихся тканей, получивших минимальные нелетальные повреждения. Данное предположение дополняет существующие версии развития ряда эффектов воздействия малых доз радиации на организм как результат либо прямого радиационного поражения медленно обновляющихся клеток эпителия вилочковой железы [Беляков И.М. и

сотр., 1992], либо радиационной активации противоопухолевого иммунитета Щи в., 1996].

3.Предложен опосредуемый системой лимфопоэза механизм терапевтического эффекта фракционированного тотального (субтотального) облучения тела опухоленосителей в средних эффективных дозах на костный мозг, не превышающих пороговые (0,2 Гр), сущность которого предполагается в отвлечении лимфоцитов, имеющих функцию морфообразования, на репарацию множественных, но нелетальных радиационных повреждений клеток нормальных тканей.

4.Предложен уточненный метод индикации облученности человека в диапазоне доз до 0,2 Гр с использованием показателей относительного содержания незрелых лимфоцитов периферической крови (Е37-РОК и А-РОК).

5.На основе объединения субпопуляций периферических лимфоцитов различной степени зрелости (Е-ГОК, ЕАС-ГОК, А-РОК, О-клетки и РБТ) в единый комплекс разработан универсальный подход к оценке альтернативных состояний (напряжения или истощения) лимфопоэтической функции в переходном процессе, вызванном физиологическим ростом организма, не-оплазиями доброкачественного или злокачественного типа, наличием радиоактивного загрязнения в среде обитания, профессиональным облучением ионизирующей радиацией или облучением с терапевтической целью;

Основные положения, выносимые на шииту

1.Степень неспецифического суммарного влияния факторов аварии на систему лимфопоэза может быть оценена в эквивалентах конкретных её состояний при других патологических ситуациях нерадиационного происхождения по подобию имиджей лимфоцитов периферической крови.

2.Относительное снижение показателя Е37-РОК может служить специфическим индикатором облученности в диапазоне пороговых доз, т.к. оно универсально для контингентов ликвидаторов через 5 и 10 лет после аварии на ЧАЭС, получивших дозу не более 0,2 Гр, детей, постоянно проживающих на загрязненных территориях с дополнительной дозой за 5 лег = 0,001 Гр, а также больных после облучения в эквивалентной эффективной дозе < 0,2 Гр.

3.Биодозиметрическая оценка небольших повышений процента хромосомных аберраций (2-4-кратных фоновому уровню) в отдаленном периоде требует параллельного учета состояния субпопуляционного состава лимфо-идных клеток..

Апробация работы проведена на совместном заседании Проблемной комиссии по радиобиологии и по лучевой терапии и медицинской физики ЦНИРРИ МЗ РФ. Основные положения диссертационного исследования представлены на 5 международных съездах и конгрессах, 11 Всесоюзных :ъездах и конференциях, а также в университете г.Хельсинки (Финляндия) и Центре ВОЗ по Исследованию Воздействия Радиации на человека (Япония).

Результаты работы внедрены в клинику ЦНИРРИ МЗ РФ и 1 JIOT-КЗМИ в виде заявок на изобретения и патентов.

Основные положения диссертации отражены в 38 печатных работах. Из них 10 статей в центральных журналах, 28 тезисов докладов, 3 авторских свидетельства на изобретения и 2 патента.

Объём и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4 глав с обсуждением, заключения, 9 выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Изложена на 125 страницах машинописи, включая 30 таблиц и 30 рисунков. Список литературы включает 281 наименование, в том числе 122 отечественных и 159 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ Клинико-лабораторные методы.

Таблица 1. даёт общее представление об обследованных в работе категориях лиц.

Дозиметрические характеристики.

Дозиметрической информацией для детского контингента служили данные об уровнях загрязненности территорий проживания, почерпнутые из соответствующих справочных источников [Blomqvist L.et al.,1987; Кулландср С., Ларссон Б.,1991; Балонов М.И.,1993]. Для ликвидаторов - учитывали индивидуальные поглощенные дозы, согласно данным сопроводительных документов.

Д ля больных дозы и режимы облучения определялись дозиметрическими протоколами лучевой терапии четырёх типов. I тип: облучение через крупные поля сложной конфигурации на линейном ускорителе электронов ЛУЭ-15М в режиме тормозного излучения, поля в виде мантии "Y" или "Г"-образные, суммарная доза составляла 40 Гр, облучение проводилось 5 раз в неделю - 2 Гр в день [Симбирцева Л.П. и сотр., 1979]; II тип: субтотальное облучение с границами лечебного поля: основание черепа, головки плечевых костей, верхняя треть бедра, с четырех противолежащих прямоугольных полей при фиксированном расстоянии источник - стол, при разовой дозе облучения на средний план больного 1,5 Гр, суммарной 4,5^6,0 Гр [Синицын Р.В. и сотр.,1987]; III тип: субтотальное облучение нижней по-ловины тела от купола диафрагмы до стоп в дозе 1 Гр (0,1 ГрхЮ раз, 3 недели, "Рокус М") или в суммарной дозе 9 Гр (3 ГрхЗ; 1 неделя; ЛУЭ-15М) [Юркова Л.Е. и сотр.,1991]; IY тип: чередование облучения в суммарной дозе 45 Гр через ВФП (фракции по 3 Гр) с ТОТ в суммарной дозе 1 Гр (фракции по 0,1 Гр дважды в неделю) [Мус В.Ф.,1997].

При необходимости производили расчёт средней эффективной эквивалентной дозы на активный костный мозг, используя табулированные

Таблица 1.

ХАРАКТЕРИСТИКА ОБСЛЕДОВАННЫХ КОНТИНГЕНТОВ ЛЮДЕЙ

Контингента! Воз-т, годы Условия обследования Эколого-дозиметрические сведения Число обс-х .шц Место учета

Доноры 30±2,4 Диспансеризация Без ПК*, КА**, ЭК*** 25 BMA им.Кнрова

Взрослые 40±4,6 Поликлинический учёт 27 Кафедра пропед. 1 ЛМИ

S Дети 10±0,4 26 32 детская поликлиника

§ Я » I § i & Дети- эвакуанты 9±0,8 Плановое обследование (5 лет после аварии-) КА (Гомельская, Брянская, Могилевская, Винницкая и др. обл.) 30 Детская обл. больница

э 1 S * Дети - постоянное проживание 11 ±0,4 ЭК (Волосовский р-н Лен. обл.) 56

та « Ликвидаторы 40±1,7 45±1,8 5и 10 лет после аварии - плановое обследование. ПК 85 ЦНИРРИ

Пациенты с неопухолевыми заболеваниями 35±4,3 До терапии Без ПК, КА и ЭК 32

0 1 Доброкачественные опухоли 44±2,5 Без ПК, КА и ЭК 47 t»

§ из ЛГМ 30±1,9 До и после лучевой терапии jj-j-t»«» 50

Рак легкого 56±1,4 33

Рак яичников 52±1,6 57 И

Рак почки 58±1,3 п хжэ***** 56

Всего 524 человека

* -ПК профессиональный контакт с радиацией;

** -КА контакт с радиацией в анамнезе;

-ЭК экологический контакт с радиацией;

. -лт лучевая терапия.;

-хжэ химиожировая эмболизация.

данные о его содержании в теле человека [Cristy М.,1981] и технику расчёта номинальной стандартной дозы [Холин В.В.,1979].

Субпопуляционные характеристики лимфоцитов периферической крови. Выделение мононуклеарных клеток крови в градиенте плотности проводили по [Воушп А., 1968] в модификации [Хейфиц Л.Б., Абалакин В.А.,1973].

Определение процентного содержания общих Т-лимфоцитов проводили методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-ЮК) по [Bach J. et al.,1973] в модификации [Florey M.J., Pletom F.,1976]. У доноров среднее значение М±ст для Е-ЮК составило 53,8±19,5%. Определение стабильных, устойчивых к температуре 37°С Т-клеток (Е37-ГОК) проводили аналогично, заменяя 18-часовое выстаивание при 4°С одночасовой инкубацией при 37°С. В группе доноров М±о для Е37-ЮК составило 19,4±11,3%. Ауторозеткообразующие клетки (А-ЮК), определяли методом [Kuiamochi Т. et al.,1983] с аутологичными эригроцигами человека. Величина М±а для доноров составила 4,12±5,43%. Определение ЕАС-ЮК проводили с помощью варианта метода розеткообразования с эритроцитами барана, сенсибилизированными антителами в присутствии мышиного комплемента по методу [Bianco С. et а1.,1970]. При исследовании контрольной группы доноров получены значения М±ст для ЕАС-РОК=15,5±5,54%. Определение содержания 0-лимфоцигов и лимфоцитов с двойной позитивностью (Е+, ЕАС+) в периферической крови проводили расчетным путем. Для определения расчетного содержания нулевых лимфоцитов в периферической крови использовали разницу между общим количеством лимфоцитов и суммой (Е+ЕАС)-РОК В случаях превышения суммы (Е+ЕАС)-РОК над общих! количеством лимфоцитов разницу классифицировали как расчётную меру лимфоцитов с двойным Т и В фенотипами. При исследовании контрольной группы доноров значения М±ст для 0-клеток у взрослых и у детей составили 30,6±22,91% и 99,86±14,07% соответственно. Клетки с двойной позитивностью встречались более часто у детей, т.к. относительное количество дифференцированных лимфоцитов у последних несколько больше, чем у взрослых [Mendes N.F.et al.,1973; Лопухин Ю.М., 1982; Новиков Д.КД987].

Определение фракции неиммунокомпетенгных лимфоцитов, несущих маркерный фермент концевую дезоксинуклеотадил трансферазу (ТдТ), проводили двумя методами - биохимическим и иммуноферментным с помощью МКАТ. Иммуноферментный метод осуществляли, используя "Сигма диагностик ТдТ-кит" по стандартной процедуре №71. Контрольные значения ТдТ+-клеток составили 0-0,1% от общих мононуклеаров. Биохимическое определение фермента ТдТ осуществляли по методу Окамура [Okamura S.,1980] в модификации [Шутко А.Н. и сотр., 1982]. Контрольные значения активности ТдТ в периферической крови в зависимости от концентрации лимфоцитов колебались от 2 до 11,8 ЕФА в 1 л крови.

Реакцию бластграисформации лимфоцитов периферической крови проводили согласно [Schutt С. et al.,1987], В группе доноров средние значения М±о спонтанного синтеза и реакции бласпрансформации (РБТ) лимфоцитов на ФГА составили соответственно: 207±90 имп./мин. и 5355±5265 имп./мин. Радиометрию образцов осуществляли на -спектрометре Ликвимат-200 (Picker-Nuclear, USA).

Суммарные характеристики исследуемых в работе параметров представлены в таблице 2.

Являясь частью субпопуляции Е-РОК, фракция Е37-РОК может служить мерой интенсивности процесса "позитивной селекции" [Rothenberg Е.,1990; McPhee D. et al., 1979]. "Нуль-клетки", представляющие естественный компартменг лимфоцитов здоровых людей, включают в основном Т-лимфоциты, утратившие CD2 детерминанты ("шеддинг") и плазмоциты, утратившие в процессе активации В-лимфоцитарные маркеры [Foon К.А. et al., 1982]. Содержание 0-клеток, таким образом, может служить общей мерой утраты Т и В-клеточных маркеров, тогда как Е, ЕАС-РОК и их сумма - мерой дифференцированное™ периферических мононуклеаров. В тех случаях, когда сумма ЕАС и Е-РОК превышает 100%, что наиболее часто встречается у детей, разница может быть отнесена к популяции клеток с двойной позитивностью Т+ и В-ь, наиболее вероятными представителями которых следует считать естественные киллеры [Славина Г.И.,1984].

Дополнительно к данным табл.2, были произведены ориентировочные оценки содержания в периферической крови здорового донора стволовых клеток (CD34+, CD38+), В-клеток промежуточной зрелости (CD19+, CD21-) и ранних претимоцитов (CD2+,CD4+,CD3-CD19-,CD11-). Результаты уточняющих определений с помощью МКАТ на FACStar (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San Jose,CA) сопоставлены со значениями ЮК параллельно для одного и того же образца крови. Определения с МКАТ проводили методикой двойного окрашивания в сочетаниях CD38 и CD34 [Kuzunoki Y.,1995], CD19, CD11, CD3 и CD4 [Bruno L. et al.,1997] и CD3 и CD4 [Kyoizumi S. et al.,1990]. Сопоставительный анализ показал, что недифференцированные клеточные элементы сосредоточены либо во фракции "0-клеток", либо во фракциях Е-РОК, однако в обоих случаях их представительство не определяет прямым образом величину фракций.

Методика проведения экспериментов с животными. Эксперименты проводили на мышах-самцах, линии C57BI/6 и межлинейных гибридах Fl(CBAxC57Bl). Все процедуры на животных, которые могли бы вызвать у них боль или иного рода мучительные состояния, проводились при достаточном обезболивании под местной анестезией или наркозом, согласно требованиям, соответствующим этическим нормам, признанным мировым сообществом и изложенным в "Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных" [1985].

Таблица 2.

СУБПОПУЛЯЦИОННЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КЮВИ ЛЮДЕЙ

Характеристики розеткообразующих субпопуляций лимфоцитов

РОК Степень диф-ки Морфо- дифференцировочные и топографические аналогии Основные клеточные детерминанты и их компоненты ССА» T д т Источник информации

1 2 3 4 5 6г 7

Е+ Общие Т-клетм Постгимические и претимические лимфоциты CD2+.T11 (мобильные и с ограниченной подвижностью рецепторы) LFA-3tec„ gp50. Ki6T BrdlT + Immunology Today; 1989. Immunotech Int.,1994. Глузман Д. Ф. и соавт,1982 Сатрапа 0., Janossy G.,1988. Новиков Д.К.Д987.

А+ Ранние и сгим. Т-хлепо Регулятор иые высокореактивные Т-клетки (прехалперы) CD4+.T4 (70-80%) CD8+.T8 (15-20%) Class II/HIV rec.gp59 Class I rec., gp32, act или aß dimer (аутореаюивные -высокая аффинность к "своему"). Ki67"+ BrdtT+ / Новиков Д.К.,1987. Kuramochi Т. et al.,1983. Глузман Д.Ф. и созвт,1982. Сатрапа D., Janossy G.,1988. RothenbergH.,1990 Лимфоциты. Метода.,1990. Gore S.D.etal., 1991

Е37+ Активированные Т-клетки, кортикальные тимоциты, б ласты с негативно-позитивным типом селекции CD2+.T11 Рецепторы с ограниченной подвижностыо. IÜ674"" BrdU"1"" // Лимфоциты. Методы .,1990. Сатрапа D.,Janossy G.,1988. Глузман Д.Ф. н соавт,1982. Глузман Д.Ф. и соавт,1986. Новиков Д.К., 1987. Rctiienberg Н.,1990.

Продолжение таблицы 2.

1 2 3 4 5 6 7

Зрелые В-клетю Неактивированные клетки CD21+, НВ5, В2 CD19" C3d/EBV rec, CR2),pl40 Ki67~ BrdU" Immunology Today, 1989> Immunotech fat,1994. Глузман Д.Ф. и соавт.,1982. Новиков Д.К.,1987.

ЕАС+ Моноциты БГЛ, ЕК, моноциты - предшественники макрофагов CD11Ь+, Мо1 C3brec.,gpl55/95 Ki67" BrdU" Immunology Today, 1989. Immunotech Int.,1994. Foon K.,Todd R.F.,1986.

Клетки с двойне позитивностью ЕК (Т+) CD2+, Til, CDllb+,Mol, CD8+, T8. LFA-3rec.,gp 50. C3brec,gpl55/95 Class 1 rec.,gp32. Ki67" BrdU" Новиков Д.К. ,1987. Славина Г.И.,1984. Immunotech Int,1994. Глузман Д.Ф. и соавт,1982.

Ни Т, ни Плазмоциты, клетки с утраченными детерминантами. CD19-, CD21-, CD2- DiSanto et al.,1989. Foon К. A., Todd R.F.,1986 Kimpton 1989 Глузман Д.Ф. и соавт,1982. Новиков Д.К.Д987.

Е", ЕАС" клетки или нул! -лимфо- В-клетки промежуточной зрелости CD19+, B4, CD21" gp95 Ki67+ BrdU"1" + Immunotech Int,1994 Сатрапа D., Janossy G.,1988. Глузман Д.Ф. и соавт,1982.

циты Частично коммутированные стволовые клетки CD34+, MylO CD38+, HB7 CD2", CD21", CD1 lb" pll5 p45 K167+ BrdU+ + Новиков Д.К.,1987. Gore S.D. etal.,1991. Immunology Today,1989.

/ и // -рис 3 и 14 в тексте. * - ССА - спонтанная синтетическая активность

Опухолевый штамм, использованный в работе - метастазирующая аденокар-цинома бронха мышей - РЛ-67 [Попова Т.С. и сотр., 1969].

Тотальное или субтотальное облучение мышей проводили на установке РУМ-17 при мощности дозы 0,91 Гр/мин., напряжении 200 кв, силе тока 15 мА, фильтрах 0,5 мм Си+1,0 мм А1 и кожно-фокусном расстоянии 50 см. Фракционированное ТОТ мышей по 1,75 Грх4 раза проводили при этих же условиях согласно [Вошуег I Ег а!.,1981; НеШпад Б. е1 а1.,1982]. Фракционированное ТОТ мышей при мощности дозы 0,05 Гр/мин. проводили на той же установке при напряжении 200 кв, силе тока 9 мА, фильтре 2,0 мм Си и кожно-фокусном расстоянии 97,5 см, СТОТ мышей проводили с использованием специально сконструированных универсальных свинцовых экранов [Шутко А.Н. и сотр. ,1987].

При СТОТ средние дозы на активный костный мозг рассчитывали, используя табулированные данные о процентном содержании костного мозга в скелете мышей [ЕррЕ.К е1 а1.,1959].

Изменения форменных элементов периферической крови оценивали по количеству эритроцитов и лейкоцитов. Для оценки состояния органов кроветворения костный мозг извлекали из бедренных костей подопытных животных и проводили подсчет общего количества ядросодержащих клеток в миелоидной ткани [Бутомо Н.В.,1970].

Спленоциты получали методом [Бабаева А.Г. и соавт., 1993]. Субпо-пуляционный состав лимфоцитов селезенки мышей исследовали с использованием методов розегкообразования, содержание хелперных и супрессорных клеток (1§М+ и клетки) оценивали по [Новиков Д.К.Д987].

При определении активности ТдТ предварительно выделяли фракцию мононуклеаров крови или костного мозга в градиенте плотности веро-графин-фиколл. Клеточные экстракты получали общепринятым методом с помощью ультразвуковой обработки (УРСК-7Н) клеточной суспензии с последующим центрифугированием при 120000g в течение 60 мин. в ультрацентрифуге УПР-1. Супсрнатант служил источником ТдТ, определение которой проводили методом [Шутко АН. и сотр., 1983].

Процессы утилизации (и реутилизации) предшественников синтеза ДНК в нормальных и опухолевых тканях изучали путём прижизненного мониторинга радиоактивности всего тела экспериментальных мышей после введения дезоксиуридина, меченного иодом-125. В качестве детектора использовали пластмассовый сцинтиллятор колодезного типа 854773 (Венгрия) в сочетании с у-спекгрометром фирмы АСЕС (Бельгия). Кроме того, саму ткань опухоли после выделения из организма подвергали прямой радиометрии на у-спектрометре.

Статистическая обработка полученных результатов. Использовали следующие критерии: Меритерий Стьюдента, критерий хи-квадрат Пирсона (или формула Фишера), Б-критерий Фишера, несмещенные оценки дисперсии, ко-

эффициенты вариации, корреляционное отношение т) [Плохинский Н.А., 1961; Урбах В.Ю.,1963], оценки специфичности и чувствительности [Goldsmith J., Kzzyzanovvsky М. ,1996].1

СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ

Предварительные экспериментальные исследования

Экспериментальный раздел работы содержит данные, указывающие на участие незрелых лимфоидных элементов в посттравматической регенерации нормальных тканей, в поддержании злокачественного роста и его опосредованном подавлении в условиях облучения тела опухоленосителя с экранированной опухолью.

Субпопуляционные изменения в лимфоцитах селезенки мышей в период компенсаторной гипертрофии почки

В период компенсаторной гипертрофии почки после односторонней нефрэктомии у мышей спленоцигы оперированного животного (донора) приобретают свойство стимулировать рост ингактной почки при переносе их здоровому реципиенту [Бабаева АГ.,1981]. Обнаружено (рис.1), что по мере постепенного достижения наибольшей выраженности этого свойства (временной «донорский интервал») в спленоцитах оперированного донора нарастает содержание только наименее зрелых фракций лимфоцитов: ТдТ+- клеток и А-РОК.

'Автор выражает глубокую признательность проф. Кнуугала Сакари и проф. Шигематзу Итзузо за предоставление рабочих мест в лабораториях медицинской генетики Университетского госпиталя в г.Хельсинки (Финляндия) и лаборатории иммунологии отдела радиобиологии НИИ Радиационной Биологии и Медицины в г.Хиросиме (Япония). Автор благодарит проф. Лидию Петровну Симбирцеву за обсуждение вопросов патогенеза ЛГМ и механизма реализации лечебного эффекта системной лучевой терапии, проф. Валентина Евгеньевича Комара за проведение совместных исследований и предоставление данных о состоянии хромосомных аберраций у части обследованных ликвидаторов и д.б.н. Ирину Евгеньевну Воробцову за предоставление образцов крови и анамнестических сведений о части обследованных ликвидаторов в ходе выполнения совместных исследований.

ИЗМЕНЕНИЯ В СУБПОПУЛЯЦИОННОМ СОСТАВЕ СПЛЕНОЦИТОВ МЫШЕЙ В ПЕРИОД ФОРМИРОВАНИЯ ИХ МОРФОГЕНЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ, ВЫЗВАННОЙ КОМПЕНСАТОРНОЙ ГИПЕРТРОФИЕЙ КОНТРЛАТЕРАЛЬНОЙ ПОЧКИ ПОСЛЕ ОДНОСТОРОННЕЙ НЕФРЭКТОМИИ2,

Рис.1

*- заштрихованы зоны контрольных значений М±ш;

V - середина "донорского интервала"

Субпопуляцшшные изменения лимфоцитов при росте злокачественной

опухоли у мышей

Показано (табл.3), что в период максимальных темпов прироста биомассы привитой метастазирующей опухоли РЛ-67 у мышей Р1[СВАхС57В1] в логарифмической фазе её роста имеет место увеличение незрелых клеток (лимфобластов и ТдТ'-лимфоцитов) в костном мозге и периферической крови. При замедлении темпа прироста опухолевой массы (после смены лога-

2 Представленные данные выполнены в ходе выявления совместных исследований с в.н.с. Института морфологии человека АМН к.б.н. Н.В.Юдиной, за что автор приносит ей глубокую благодарность.

рифмической на линейную фазу роста), обусловленном ослаблением неоан-гиогенеза [Уашаига Н., Ма^игазда Т.,1979], появляются признаки недостаточности продукции ранних лимфоцитов.

Таблица 3

Динамика активности ТдТ мононуклеаров костного мозга и количества

Время после прививки опухоли (сутки) Контроль Фазы роста опухоли

Логарифмическая Линейная

610,5 14±1,3 22±0,8 29±0,7

0 11±0,7 27±0,5

Концентрация лимфоб ластов в крови, х109/л 0,38± 0,13 1,11±0,3/ 1,37±0,49 0,09±0,09 0,06±0,06*

1,26±0,36* 0,0710,05*

Активность ТдТ костного мозга, ЕФА 0,09+ 0,04 0,31±0,07* 0,05±0,02 н/о н/о

'-отличие от контроля с р<0,05 н/о - не определяется

Опосредованное замедление роста экранированной опухоли у животных при облучении тела опухоленоептеля

Прямой радиометрический анализ клиренса меченого урвдина из тела мышей-опухоленосителей и радиометрия ткани опухоли указывают на активный перенос в опухоль и реутилизацию в ней нуклеинового материала в процессе роста. Более 60% всей метки, находящейся в теле животного, сосредоточивается в ограниченном объёме злокачественной ткани опухоли на 3040 сутки развития новообразования. Такой высокий градиент не может быть обеспечен равновесным объёмом метки между гуморальной средой и клетками опухоли и, следовательно, осуществляется активно клеточными посредниками, вероятнее всего циркулирующими лимфоцитами, распадающимися в ткани опухоли по типу голокриновой секреции (она же "позитивная селекция" и "интерфазная гибель лимфоцитов") [Шутко А.Н. и сотр., 1982; 1985].

При облучении тела мышей-опухоленосителей р1(СВАхС57В1) в различающихся средних дозах на активный костный мозг, зарегистрировано опосредованное замедление роста опухоли РЛ-67 как при её экранировании, так и при тотальном облучении тела (рис.2б). Результаты параллельной регистрации общего количества ядросодержащих клеток в облученном бедре мышей-опухоленосителей указывают на прямую количественную связь феномена опосредованного замедления опухолевого роста со степенью пострадиационной миелодепрессии (2а).

ИЗМЕНЕНИЕ СКОРОСТИ РОСТА ОПУХОЛИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТЕПЕНИ ПОСТЛУЧЕВОЙ МИЕЛОДЕПРЕССИИ

Рис.2

О - контрольные опухоленоситеда; в- СТОТ мышей-опухоленосителей (средняя доза на активный костный мсог 5,5 Гр; экран бедра с привитой опухолью в лапе); А - ТОТ мышен-опухолоносителей (средняя доза на активный костный мозг 6,5 Гр); -t - стрелки указывают время облучения после перевивки опухоли.

Полученные данные согласуются с разнообразными сведениями об ускорении роста перевиваемых опухолей незрелыми лимфоидными клетками [Gabizon A., Trainin N., 1980], о наличии таких клеток в тканях [Blazar В.A. et. al.,1980; Рябов С.И., Ракигянская И.А.,1997], об усилении ангиогенной активности селезеночных лимфоцитов при росте опухоли Pavel L.E. et al.,1988], дорастании опухоли после облучения только из зон, где возникает реваскуля-ризация [Yamaura H.,Matsuzawa Т.,1979], со сведениями о корреляции изменения массы человека, вызванного голоданием, с содержанием в крови ТдТ^-лимфоцигов [Duncan J.L. et al.,1984], об участии созревающих клеток, относимых к Т+-индукгорам, в продукции бурстобразующих единиц, пролиферации остеокластов, фибробластов и синтезе коллагена у человека [Reinherz E.L., Schlossman S.F.,1980], о резком транзишрном увеличении ТдТ+-лимфоцитов в периферической крови и в различных органах новорожденных в период максимального постватального роста [Sasaki R. et al.,1980] и о значительно большем, чем у взрослых, количестве ТдТ+ и CD4+ лимфоцитов в

развивающемся эмбрионе, который, как известно, не нуждающется в собственной иммунологической защите [СаНогеШ & е1 а1.,1984; К)шр(оп W.G. е1 а!., 1989].

Совокупность полученных в работе экспериментальных данных дополняет свидетельство литературы о причастности клеток, находящихся на промежуточных стадиях дифференцировки, к осуществлению лимфоцитами морфогенетической функции, т.е. в поддержании ими процессов регенерации различных эпителиальных и паренхиматозных тканей, в том числе опухолевых [Бабаева А.Г , 1985; БабаеваА.Г., Зотиков Е. А.,1987].

Основные лабораторно-клинические исследования

Особенности лимфоцитов периферической крови при изменениях пролиферативпого статуса тканей в организме нерадиационного генеза

Анализ субпопуляций лимфоцитов периферической крови людей показал, что относительное содержание фракций ЕАС-РОК, А-РОК и уровень реакции бласттрансформации суммарной фракции лимфоцитов на ФГА, количественно связаны с концентрацией в крови клеток, несущих маркерный фермент ранних стадий дифференцировки лимфоцитов - ТдТ (рис.3).

СВЯЗЬ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КЮВИ С ВЕЛИЧИНОЙ ЦИРКУЛИРУЮЩЕЙ ФРАКЦИИ ТдТ-ПОЗИТИВНЫХ ЛИМФОЦИТОВ

Рис.3.

По данным обследования больных до терапии: ® - рак яичников; V- рак лёгкого; 0-ЛГМ.

Зона М±т заштрихована

ТлТ—«рг*м,У.

Полученные результаты согласуются с данными литературы о том, что фракция ЕАС-РОК, в варианте использования эритроцитов барана, может содержать, помимо В-лимфоцитов, еще и фракцию ранних Т-лимфоцкгов [Глузман ДФ. и соавт.,1982; й а!.,1988]. В то же время статисти-

чески не выявлено зависимостей от концентрации ТдТ1^-лимфоцитов таких показателей как относительное содержание Е37-ЮК, 0-лимфоцитов (ни Т, ни В), общих Т-лимфоцигов (Е-РОК) и уровня спонтанного синтеза нуклеиновых кислот в общей фракции лимфоцитов.

Все показатели, для которых была выявлена коррелятивная связь с ТдТ+-лимфоцитами, а также сумма (ЕАС+Е)-РОК обнаруживали однотипные изменения после стандартных курсов терапии (рис.4). Сущность этих изменений состояла в том, что их направленность зависела одинаковым образом от величины каждого из показателей до воздействия.

РЕАКЦИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ НА ТЕРАПИЮ

У БОЛЬНЫХ ЛГМ

Рис.4.

По оси абсцисс - значения показателя во время 1с. По оси ординат - разница Л между средними значениями показателей М в точках! 1 и ^ (М|-Мф) - О или в точках^и ^ (^-Мц) -10 - время перед началом терапии; ^ - время сразу после окончания терапии; время через 2 недели после терапии. Заштрихованные зоны: М±ст п"'; * - достоверность различий р £0,05.

Как следует из рассмотрения рис.4, при больших значениях показателя, преобладал вариант ингибиции, при малых - отсутствие изменений или

тенденция к увеличению показателя. Подобные изменения оказались типичными для других нозологий (рак яичников, легкого, почки), что видно из рис.5, построенного для ключевого показателя ЕАС-ЮК.

ЗАКОНОМЕРНОСТЬ РЕАКЦИИ ЕАС-РОК НА ТЕРАПИЮ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ИСХОДНЫХ ЗНАЧЕНИЙ ПОКАЗАТЕЛЯ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ НОЗОЛОГИЯХ

Таким образом, общность группы показателей ЕАС-ЮК, А-РОК, (ЕАС+Е)-РОК и РБТ на ФГА (по зависимости их от содержания ТдТ1-лимфоцитов (рис.3) и по однотипности их изменений после терапии (рис.4 и 5) позволила выделить данные показатели во взаимосвязанное семейство и представить его в виде единого комплекса.

ПРИНЦИП ПРОСТРАНСТВЕННОЙ ОРГАНИЗАЦИИ КОМПЛЕКСА ВЗАИМОЗАВИСИМЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ В

ГРАФИЧЕСКИЙ ИМИДЖ

§ +201-

Рис.5.

ЕАС-РОК,%

Ч хЮ3 РБТ,нмп'инн

1

Рис.6.

Е-.ЕАС-С.) , Е+МС+(%)

: .]_1_1_I_I_I_I__!_1-

60 50 40 30 20 10 0 10

На рис.6 показан принцип наглядного изображения комплекса из пяти показателей, четыре из которых имеют общую точку собственных нулевых значений с исходящими из неё тремя симметричными горизонтальными и одной вертикальной осями. Такое построение позволяет наглядно представить четыре показателя в виде тетраэдра. В свою очередь нулевая точка тетраэдра располагается на независимой горизонтальной шкале для пятого показателя, в качестве которого использовано количество нуль-лимфоцитов, являющееся производным от показателя суммы (Е+ЕАС)-РОК. Конкретные значения пяти показателей комплекса образуют пространственный имидж, индивидуальный или групповой в зависимости от того, используются индивидуальные или средние значения показателей. При оценке имиджа принимается во внимание его величина и положение на оси для 0-клеток.

На рис. 7а показаны два групповых имиджа для доноров и лиц из группы "поликлинического" контроля (реконвалесцентов). Они практически идентичны и использованы в дальнейшем в качестве референтных для сопоставления с имиджами датах групп.

ТИПЫ ИМИДЖА ДЛЯ ГРУПП КОНТРОЛЯ (а), БОЛЬНЫХ ЛГМ(б), РАКОМ ЛЁГКОГО (в) И РАКОМ ЯИЧНИКОВ (г)

1АССА)

30

20 «

10

Рис.7.

* - над имиджами гипотига (слева), нормотипа (середина) и гипертипа (справа) указаны их процентные представительства в группах с той или иной нозологией.).

У больных со злокачественной патологией обнаружена большая по сравнению с донорами дисперсия признаков, что дало основание статистически разделить больных в пределе одной нозологии на субгруппы, каждая из которых характеризуется одним из трёх типов имиджа: нормо-, паю- или ги-псрпшы. Структуры общих групп больных лимфогранулематозом, раком легкого и раком яичников (рис.7 б,в,г) оказались близки, т.к. процентное представительство в них лиц, имеющих нормотип имиджа было достоверно снижено по сравнению с группой доноров в 2-3 раза (р=0,05-0,02). Очевидно, что соответствующие представительства лиц с аномальными гипер- или пт-потипами имиджа в каждой из изученных групп онкологических больных увеличены. Соотношения различных типов имиджа внутри групп указаны в процентах на рис.7. Случаи гипертипа имиджа статистически значимо преобладают по сравнению с донорами во всех трёх группах (р=0,004-0,05).

Анализ рис.8 показывает, что гилергип имиджа характерен для детского организма и для взрослых, у которых имеются доброкачественные опухоли. Поэтому превалирование пшертипа имиджа в группах онкологических больных до лечения скорее является отражением состояния ускоренной пролиферации тканей, нежели наличия собственно злокачественного процесса.

ТИПЫ ИМИДЖА ДЛЯ ДОНОРОВ, ПАЦИЕНТОВ С ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫМИ ОПУХОЛЯМИ И ДЕТЕЙ ИЗ ГРУППЫ КОНТРОЛЯ

ЕАС(Ч)

30

Рис.а

Анализ сущности гипотипа имиджа показал, что ему статистически значимо сопутствуют неблагоприятные диагностические признаки, такие как Ш-ГУБ стадии и Б-синдром (так называемая интоксикация) при ЛГМ (р=0,007), наличие категории ТЗс при раке яичников (р=0,02) и М категории при раке легкого (р=0,04) по ТЭДМ классификации опухолей

Существенное увеличение среди больных лиц с гипотипом имиджа лимфоцитов периферической крови (р=0,014) происходит в результате выполнения курса вдггостатической терапии (рис.9).

ОБЩИЙ ТИП ОТВЕТА У БОЛЬНЫХ ЛГМ НА ЛУЧЕВУЮ ТЕРАПИИ

ЕЛСРУ

Рис.9.

При этом у больных ЛГМ до начала лечения имеет место почти полная утрата пула ТдТ-лимфоцитов, при Б-скндроме (Ш-ГУБ ст.), хотя количество их на ранних стадиях ЛГМ (П и ША), как правило, увеличено (рис. 10).

Режимы с большей средней эффективной дозой на активный костный мозг, например 5,7 Гр через ВФП, вызывали образование большего количества дополнительных гшюпшов имиджа по сравнению со СТОТ в средней эффективной дозе на активный костный мозг ~3,9 Гр, хотя режим ВФП применялся чаще при сравнительно ранних стадиях (1НПА) ЛГМ, а СТОТ использовала преимущественно в ситуациях Ш-ГУБ стадий (р=0,037).

ТдТ-АКТИВНОСТЬ В ЛИМФОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КЮВИ ПАЦИЕНТОВ С ЛГМ

ДО И ПОСЛЕ ЛЕЧЕНИЯ

Рис.10.

1.Клинический контроль -Д- пациенты с неопухолевыми заболеваниями;

2.Больные ЛГМ И-Н1А ст.;

3.Больные ЛГМ,Ш-1УБ ст. © - средние значения до лечения; • - индивидуальные значения после лечения через 37±3 суток после ВФП (2) или через 15±2 суток после СТОТ (3); О - через 58±9 суток после ВФП (2) или через 50±9 суток после СТОТ (3). *ЕФА -единицы ферментативной активности = 1 нмоль субстрата на 108 клеток.

Выявленные лабораторно-клинические параллели позволили классифицировать гипотип имиджа, как характеризующий состояние неспецифического (для радиации) дефицита лимфоцито продукции. По сравнению с гипертипом имиджа, характеризующим неспецифическое напряжение лимфопоэза физиологического либо компенсаторного характера, гипотип представляется как более негативный и характеризует более позднюю фазу неспецифической реакции системы лимфопоэза на продолжительное воздействие неблагоприятных эндогенных факторов (злокачественная пролиферация) или интенсивного цитостатнческого воздействия экзогенного происхождения (лучевая терапия).

Особенности лимфоцитов периферической крови у детей при длительном проживании в экологических условиях, измененных в результате радиационной аварии па ЧАЭС.

Согласно системе оценок лимфопоэтического статуса, разработанной в предыдущем разделе, групповые имиджи обследованных детей, постоянно проживающих на загрязненных территориях, или детей, эвакуированных с территорий, прилегающих к ЧАЭС, следует классифицировать как имиджи гипотипа - т.е. указывающие на признаки истощения (дефицита) лимфоцито-продукции (рис. 11).

ТдТ-«ггаяостъ ЕФЛЬ*

-ч.

ГО.М

2

й < стадиями)

1 г о

копиром

Шст*дм

(«И«)

ч а

• ЩШ Я СТЩШ \ | ■

сг» )

СТОТ

(4*3-т-»*» ЧГГ.)

КбЯГЖСПО дмфиццм

»10*/*

ТИПЫ ИМИДЖА ДЕТЕЙ, ПРОЖИВАЮЩИХ НА ЗАГРЯЗНЁННЫХ ТЕРРИТОРИЯХ ПОСЛЕ АВАРИИ НА ЧАЭС

ЕАС<%> 40

Д щ циншиииг ы идмщГмтп щцмицдп

20

0

10

Е-ДАС"<%)

80

70

50

30

20

10

О

10

Рис.11

С учетом того, что процентное представительство детей с диагнозом гиперплазия щитовидной железы оказалось неравнозначным в группах контроля, эвакуангов и постоянно проживающих (увеличивалось от 0 до 60 и 100% соответственно), возникновение гипотипа имиджа можно было бы связывать с наличием в группах данной патологии. Естественно, частота встречаемости гиперплазии щитовидной железы (ГПЩЖ) в исследованных группах не отражала истинной частоты для соответствующих больших когорт детей-мигрантов или постоянно проживающих на загрязненных территориях Ленинградской области. Более того, радиационно-экологическая характеристика территорий проживания не позволяла рассматривать возможные среднегодовые дозы облучения (¿0,17 тЗв) хотя бы как приближающиеся к пределу годовой дозы (ПГД), принятому для населения равным 1 тЗв (НРБ-96). Три группы (без ГШЦЖ, с ГПЩЖ 0-1 или 1-И степени) были сформированы независимо от места проживания детей. В результате (табл.4.) в группе без ГПЩЖ оказались преимущественно дети клинического контроля (68%), в группе с ГПЩЖ 0-1 степени - дети, постоянно проживающие при плотности загрязнения 1,49 Ки/км2 (78%) и в группе с ГПЩЖ 1-Й степени - дети, проживающие при 0,98 Ки/км2 (57%). Если воспользоваться параллелью между плотностью загрязнения территории проживания и среднекумулятивной дозой для населения, как это допускается в некоторых-ситуациях [Шубик В.М.,1996], то усмотреть связь между степенью ГПЩЖ и дополнительным радиационным воздействием на детей не удаётся. Поэтому наиболее формальным объяснением причины возникновения гипотипа имиджа у обследованных детей на фоне ГПЩЖ является хронический стресс, вызванный комплексом факторов аварии. Тем не менее, выявленный гипотип имиджа пострадавших детей обладает особенностью, отличающей его от уже

рассмотренных в предыдущем разделе. Один из показателей детского имиджа лимфоцитов периферической крови (А-ГОК) аномально велик и может рассматриваться в качестве признака для групповой индикации состояния гиперплазии щитовидной железы у детей, проживающих на загрязненных территориях.

Таблица 4

Группы детей без ГПЩЖ и с ГГТЩЖ различной степени, сформированные независимо от места проживания детей

Условия проживания (доза) Группы, количество детей в них

Без ГПЩЖ ГПЩЖ 0-1 ст. ГПЩЖ 1-П ст.

Бегуницы (1,49 Ки/км2)* 0 25 (78%)** 6(14%)

Сельцо (0,98 Ки/км2)* 0 1 (3%) 24 (57%)**

Дети мигранты (?) 12 (32%) 6 (19%) 12 (29%)

Незагрязненные территории (контроль) 26 (68%)** 0 0

X 38(100%) 32 (100%) 42 (100%)

■по данным на 1991 год. **- достоверное преобладание в группе с р<0,001

На рис.12 показана связь двух показателей комплекса (0-лимфоцигов и А-ГОК) со степенью гиперплазии щитовидной железы.

СВЯЗЬ ПОКАЗАТЕЛЕЙ О-ЛИМФОЦИТОВ И А-ГОК СО СТЕПЕНЬЮ КЛИНИЧЕСКИХ ПРОЯВЛЕНИЙ ДИСФУНКЦИИ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У ПОСТРАДАВШИХ ДЕТЕЙ

ю

0-клеткиЛ4

60

50 40

0-3«

А

п-42

Л-РОКЛ4

ш

Без ГПЩЖ ГПЩЖ 0-1 ст. ГПШЖ1-П ст

Рис.12.

Из рис. 12 следует, что помимо увеличения О-лимфоцнтов, что согласуется с групповой принадлежностью детей с ГПЩЖ к гипотипу (в соответствии с рис. 11), состоянию гиперплазии железы также сопутствует и увеличение показателя А-РОК. Это увеличение показателя противоречит ожидаемому его кооперативному уменьшению в составе гипотипа имиджа. Обнаруженная особенность имиджа детей, подвергшихся воздействию факторов аварии, а именно возрастание А-РОК, может быть аналогичным возрастанию этого показателя в ситуациях компенсаторного роста тканей, а именно в условиях экспериментально созданной компенсаторной гипертрофии почечной паренхимы (рис.1), в некоторых ситуациях при злокачественном росте (рис.7), а также при наличии доброкачественных опухолей у пациентов (рис.8). Если принять во внимание сообщение о 2,5-кратном достоверном максимуме выхода состояний гипотиреоидизма при самых низких дозах облучения у пострадавших от взрыва атомной бомбы в Нагасаки (10-490 шЗв) и существенном снижении уровня тироксина Т4 даже у проживающих на территориях Японии всего лишь с удвоенным радиационным фоном через 40 лет после аварии [Nagataki S. Et al.,1994; Shigematsu I. et al.,1995], то логично объяснять данные рис.12 существованием компенсаторного механизма возникновения ГПЩЖ у обследованных детей Ленинградской области. Поскольку причиной гипотиреодизма могут быть аутоиммунные тиреоидиты [Поверенный AM. и соавт.,1996], изменение показателей А-РОК (рис.12) возможно отражают также и аутоиммунные нарушения.

Однозначная негативная трактовка совокупности данных, полученных в условиях постоянного проживания детей на территориях с 24-кратным превышением фонового уровня радиации, невозможна в свете очень тщательного исследования Коэна о снижении заболеваемости раком легкого у постоянно проживающих на ряде территорий США в условиях 3-4-кратного превышения среднефонового уровня радона {Cohen В.L.,1997]. В то же время, у детей, более чувствительных к радиационному воздействию [Балева Л. С. и сотр.,1997), несомненно имеет место некая системная реакция, приводящая к общему дефициту лнмфощшшродуквдш, на фокс которого сохраняется и даже увеличивается уровень ранних субпопуляций лимфоцитов в периферической крови ("сдвиг влево"), по крайней мере в случаях, сопровождающихся гиперплазией щитовидной железы.

Особенности лимфоцитов периферической крова у ликвидаторов в отдаленном периоде после аварии

Принимая комплексные факторы аварии, включая персистирующий стресс [Новиков B.C., Смирнов B.C., 1995] в качестве обобщающей причины изменения имиджа по варианту ослабления лимфоцнтопоэза в детских группах эвакуантов и постоянно проживающих на загрязненных территориях, бы-

ло логичным ожидать обнаружение соответствующих характеристик периферических лимфоцитов у ликвидаторов. Как следует из данных рис.13 среди обследованных одновременно с детьми через 5 лет после аварии 40 ликвидаторов статистически значимо преобладал не гипотип, а гипергип имиджа (у 55% обследованных, р=0,03), и только в датой группе обследованных (на 10 год после аварии) 45 ликвидаторов, доминировал гипотип имиджа (62%; Р=0,01).

ТИПЫ ИМИДЖЕЙ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У ЛИКВИДАТОРОВ

АВАРИИ НА ЧАЭС

£АЦЧ>

Так как на 5 и 10 год после аварии обследовались разные континген-ты, то можно лишь констатировать превалирование у ликвидаторов имиджей гипер- или пшотипов без утверждения возможности смены первого на второй. Тем не менее, существование медленно развивающегося во времени переходного процесса со сменой фаз активации на ингибицию лимфоцигопро-дукции исключить невозможно. Интересно отметить, что в гипопше имиджа ликвидаторов через 10 лет появляется признак, объединяющий их с детским контингентом проживающих на загрязненных территориях - увеличение содержания А-ЮК ("сдвиг влево"). Так как увеличение А-РОК обнаруживается и у ликвидаторов 10 года с нормотипом имиджа, можно предположить, что увеличение А-ЮК имеет место на наиболее ранних стадиях формирования дефицита лимфоцитопродукции. Поскольку гипотип имиджей ассоциируется с наиболее "продвинутыми" случаями злокачественного процесса, а также с

состояниями после активной цитостатической терапии, полученные данные свидетельствуют в пользу постепенного усугубления последствий ликвидации аварии на уровне системы лимфоцитопродукции в промежутке между 5 и 10 годами.

Анализ тех случаев, когда имелась информация об индивидуальных дозах, не позволил обнаружить достоверной связи между персональной принадлежностью к типу имиджа и величиной полученной дозы. Рассмотрение 18 случаев через 5 лет после аварии показало, что у части ликвидаторов с гипертипом имиджа средняя доза составила 19,3+1,8 бэра, а у ликвидаторов с преимущественно нормотипом имиджа (при небольшой доле типов гипои-мвджа) - средняя доза была 14,4±1,7 бэр (р=0,06). На 10 год после аварии у ликвидаторов с нормотипом доза составила 13,3±3,8 бэра, а гипотипу имиджа сопутствовала доза 21,5±1,83 бэра (р=0,09; п=12). Можно лишь заключить, что среди лиц с аномальными типами имиджа средняя доза имеет тенденцию к повышению по сравнению с теми ликвидаторами, у которых зарегистрирован нормотип имиджа.

Итак, наиболее характерной особенностью среди всех обследованных ликвидаторов (п=85) явилось повышение, по сравнению с донорами, вариабельности значений показателей, формирующих имидж, и, соответственно, увеличение процента его аномальных гипер- или гипотипов. Обнаружение у ликвидаторов аномальных состояний лимфоцитопоэза, аналогичных тем, которые имели место у лиц из групп расширенного клинического контроля (при процессах физиологического, доброкачественного или злокачественного роста), можно рассматривать как позднее следствие совокупности факторов аварии, дестабилизирующих лимфоцигопоэз.

В отличие от пострадавших детей, преобладание гипотипа имиджа у ликвидаторов оказалось возможным не к 5, а к 10 году после аварии, несмотря на то, что среднегрупповые суммарные дозы радиации у ликвидаторов были значительно выше, чем у детей. С учетом одноразового характера облучения профессионалов оба типа дестабилизации лимфоцитопоэза у них (на 5 и 10 году после аварии) можно объяснять вероятным повреждением медленно обновляющихся эпителиальных клеточных структур тимуса согласно существующим данным и точке зрения [Беляков И.М. и соавт.,1992]. Однако ввиду сведений о наличии в костном мозге лимфоцитов со специфическими для Т-клеточного ряда функциями и маркерами CD5 и CD7 [Gore S. et al.,1991], повреждаемой факторами аварии мишенью могли служить и герминативные структуры, расположенные вне тимуса. Общим для ликвидаторов через 10 лет после аварии и постоянно проживающих на загрязнённых территориях детей,, явилось наличие в гипотипах имиджей признака "сдвига лимфопоэза влево" - аномального возрастания А-РОК. Как уже обсуждалось ранее подобный "сдвиг" у детей мог быть связан с гиперпластическими процессами в щитовидной железе.

Из 2-х оставшихся за пределами комплекса и поэтому ещё нерассмотренных показателей Е37-РОК и СС наибольший интерес представляет показатель Е37-ГОК. Показатель СС обладал переходными свойствами. От него зависели некоторые параметры комплекса, например РБТ (т|=0,42±0,18; р=0,03) и активность ТдТ (л=0,49±0,22; р=0,04). В то же время и показатель Е37-ГОК зависел от уровня спонтанного синтеза (г]=0,38±0,13; р=0,009) (рис.14).

ЗАВИСИМОСТИ СОДЕРЖАНИЯ СУБПОПУЛЯЦИЙ ТдТ+-ЛИМФОЦИТОВ И Е37-РОК ОТ СПОНТАННОГО СИНТЕЗА ДНК В ОБЩЕЙ ФРАКЦИИ ЛИМФОЦИТОВ КЮВИ

Рис.14.

По данным обследования до терапии больных с доброкачественными опухолями (О) и злокачественными новообразованиями (О).

50 ¡00 !И 100 250 300 350 кмпУм«»

Слотгаимм ыслюченм 'Н-тишцши* ■ ДНК лимфоците»

Тем не менее, анализ показателя СС не позволил прийти к однозначному заключению о его информацконной ценности в сфере задач исследования. Более определенные результаты были получены для показателя Ё37-РОК.

Среди ликвидаторов с известной дозой (п=30 человек) существенное (в 4 раза) снижение процентного содержания Е37-ЮК в составе лимфоцитов крови было найдено лишь у той части лиц, для которых средняя коллективная доза была мала, составляя 8,8 бэра (максимальный предел М+3<р=20бэр). У лиц, отнесённых к группе с большим средним значением дозы 24,2 бэра (минимальный предел М-Зсг=18,4 бэра), показатель Е37-ЮК не выходил за пределы нормального уровня.

У детей, проживающих на загрязненных Сб137 территориях в течение 5 лет при среднегодовой дозе 0,11-0,17 мЗв по данным 1991 г. (всего 56 человек), показатель Е37-ЮК также оказался достоверно сниженным по

Е37-КЖ,%

сравнению с уровнем, определенным для детей из группы поликлинического контроля (п-26 человек) н даже по сравнению с уровнем Е37-ЮК у детей, эвакуированными из зоны аварии (п=30 человек).

Таким образом, снижение относительного содержания Е37-ЮК было обнаружено только при постоянном проживании с очень низким уровнем суммарных доз (примерно 0,001Гр за 5 лет) или при кратковременном облучении до 0,2Гр (рис.15).

СОДЕРЖАНИЕ Е37-РОК В СОСТАВЕ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ДОЗАХ ОБЛУЧЕНИЯ В ГРУППАХ ЛИКВИДАТОРОВ (О) И ДЕТЕЙ, ПРОЖИВАЮЩИХ НА ЗАГРЯЗНЁННЫХ ПОСЛЕ АВАРИИ ТЕРРИТОРИЯХ (•)

Рис.15.

На оси ординат отложены контрольные значения для взрослых и детей -постоянно проживающих (А) и детей-мигрантов (В)

Преходящее снижение процентного содержания Е37-РОК выявлено также и в том случае, если вместо показателя дозы использовали показатель частоты хромосомных аберраций в делящихся на стадии метафазы лимфоцитах у 35 обследованных на 10 год после аварии ликвидаторов.

Аналогичное снижение Е37-ЮК воспроизведено в условиях контролируемой дозы при проведении лучевой терапии методом субтотального облучения нижней половины тела (рис. 16). Если средняя эффективная доза на активный костный мозг составляла <0,2Гр, то эффект снижения показателя регистрировали достоверно в отличие от случаев, когда средняя эффективная доза на активный костный мозг была оценена в 2,9 Гр (рис. 16).

При этом снижение показателя Е37-РОК при облучении в малой дозе было зарегистрировано только в поздние сроки, по крайней мере, не ранее, чем через 6 месяцев после окончания облучения.

ИЗМЕНЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ Е37-ЮК В КРОВИ ПАЦИЕНТОВ, ОБЛУЧЕННЫХ СУБТОТАЛЫЮ В СРЕДНЕЭФФЕКТИВНЫХ ДОЗАХ НА АКТИВНЫЙ КОСТНЫЙ МОЗГ < 0,2Гр (О) ИЛИ з 2,9 Гр (О)

ЕЗГ-РОК,'/,

4 .

01 I...............

-го о « «о 110 160 200 2*0 2И

Вреш пос«е овдучени», сути»

О некоторой избирательности феномена позднего снижения Е37-РОК для радиационного воздействия свидетельствует то, что значения этого показателя в ситуациях клинического контроля (первичные больные с доброкачественными опухолями, ЛГМ, раком легкого и яичников до лечения) выше или равны значениям физиологической нормы. Выявление феномена снижения Е37-ЮК при мощности дозы 0,11-0,17 мЗв/год у детей косвенно свидетельствует о чрезвычайно малом пороге его возникновения, не превышающем 1мЗв за 5 лет постоянного проживания. Верхняя граница воспроизведения феномена по результатам проведенного анализа случаев кратковременного облучения при ликвидации аварии или субтотального облучения, выполненного с терапевтической целью, составляет примерно 0,2Гр (0,23в).

Таким образом, на трех контингентах лиц, подвергнутых воздействию радиации (ликвидаторы, дети с загрязнённых территорий и онкологические больные после лучевой терапии), были получены сходные данные, указывающие на перспективность использования показателя Е37-РОК в отдаленном периоде для индикации факта облученности организма в дозах =0,001-0,23в. Статистическая оценка чувствительности и специфичности та-

кого определения облученности организма в этом дозовом диапазоне показывает, что они могут достигать 87 и 82% соответственно.

Согласно НРБ-96 в указанном диапазоне доз могут проявляться как стохастические, так и детерминированные эффекты. Поскольку феномен снижения Е37-РОК исчезает при дозах >0,2 Гр, он может быть отнесен к категории пороговых и классифицирован в данной работе как адаптивный. Подтверждением адаптивного характера феномена служит сравнение индивидуальных соотношений процентного содержания Е37-ЮК и А-РОК в исследованных группах лиц (табл.5).

Таблица 5

Среднегрупповые соотношения некоторых субпопуляций лимфоцитов в периферической крови обследованных людей

Показатели Т37-ЮК(%) А-РОК(%) Е37-РОК/ А-РОК

Группа необлученных людей

Доноры (8) 19,4±4,0 4,1211,92 4,711.07

Пациенты с доброкачественными опухолями (19) 29,0±4,05 8,0211,81 3,6110,57

Дети - контрольная группа (26) 14,2±1,2 5,8210,7 2,4210,24

Пациенты с диагнозом рак яичников (56) 18,211,93 10,0Ю,98 1,82Ю,46

Пациенты с диагнозом лимфогранулематоз (50) 15,2±1,96 10,511,09 1,4510,21

Пациенты с диагнозом рак легкого (32) 28,312,86 5,9310,88 4,77Ю,5

Дети-мигранты из загрязненных территорий (30) 18,5*2,3 3,8410,76 4,810,63

Группа облученных в дозе >0,2Гр

Пациенты после лучевой терапии в дозе 2,9 Гр( 11) 18,б±3,83 12,212,21 1,5210,36

Ликвидаторы аварии на ЧАЭС, доза 23,40,5 сГр (17) 1,7110,39 12,1812,57 1,71*0,39

Группа облученных в дозе ¿0,2Гр

Пациенты после лучевой терапии в дозе < 0,2Гр (15) 8,211,34 19,212,7 0,4210,157

Ликвидаторы аварии на ЧАЭС, доза 8,9±1,6 сГр 7,212,08 7,712,47 0,9311,3

Дети - жители территорий с загрязненностью 0,95 Ки/км 2 (23) и 1,49 Ки/км2 (33) 8,0410,99 6,79Ю,94 14,711,41 11,211,17 0,55ЮД17 0,6010,134

Адаптационные сдвиги в субпопуляционном составе лимфоцитов после воздействия малых {8-10 сГр) доз постулированы Спитковским Д.М. с соавторами [1992; 1994]. Однако авторы имели ввиду в основном краткосрочные изменения состава лимфоцитов.

Биологический смысл и медицинские последствия обнаруженного позднего адаптивного сдвига влево в незрелом звене Т-клеточного ряда после воздействия малых доз требует специального изучения. Отмечаемые у ликвидаторов, жителей загрязненных территорий и пациентов после лучевой терапии поздние, прогрессирующие во времени дистрофические и деструктивные изменения эндотелия микроциркуляторного русла, изменения коллагеновых фибрилл в фибробластах стромы [Галахин К.А и соавт.,1995; Томсинский Ю.Я.,1997], могут быть следствием длительного ослабления ангиогенных и коллагенсинтезирующих потенций специализированной лимфоидной субпопуляции. Клетки субпопуляции Е37-РОК, будучи ДНК-синтезирующими (рис. 14), должны быть отнесены к ранним лимфоцитам [Сатрапа D., Janossy G.,1988], Они частично погибают внутри тимуса [Глузман Д.Ф. и соавт.,1982] и, следовательно, вовлечены в процесс негативной селекции. Вовлеченность другой части этой субпопуляции в процесс позитивной селекции на периферии весьма вероятна [Rothenberg Н.,1990]. Цитоиммуннофгоиологическим эквивалентом положительной селекции может быть выполнение ранними клетками морфогенетической функции, поскольку осуществление такой функции может протекать по типу голокриновой секреции в процессе клеточного распада [Шутко АН., 1985]. Компенсация поздних изменений, описанных для медленно обновляющихся тканей [Воробьёв E.H., Степанов Р.П.,1985; Беляков И М. и соавт.,1992], может осуществляться при участии ранних лимфоцитов, выполняющих функцию морфообразования в отношении эндотелиальных структур при нерадиационной патологии [Бабаева А.Г., Зотиков Е.А.,1987; Рябов С.И., Ракитянская И.А., 1997]. С учетом перечисленных обстоятельств недостаток Е37-РОК в крови при малых дозах радиации может быть следствием усиленного их выхода в ткани и соответственно компенсаторного возрастания субпопуляции А-РОК, находящейся на предшествующем этапе дифференцировки.

ВЫВОДЫ

1.В условиях эксперимента на животных процессы компенсаторного увеличения биомассы нормальных тканей и роста перевитой опухоли коррелируют с содержанием в костном мозге, селезёнке и периферической крови недифференцированных форм лимфоцитов (ТдТ4", А-РОК, лимфобластов) и могут быть подавлены опосредованно - радиационной ингибицией лимфопоэтиче-ского звена кроветворения.

2.В общей популяции лимфоцитов крови человека показатели процентного содержания ТдТ+-лимфоцитов, ЕАС-РОК, О-лимфоцитов, А-ГОК и РБТ коррелятивно связаны и представляют собой единый функциональный комплекс или при графическом изображении - имидж.

3.Среди онкологических больных (ЛГМ, рак легкого, яичников) и ликвидаторов аварии на ЧАЭС имеет место повышенная вариабельность показателей лимфоцитов периферической крови по сравнению с донорами, что позволяет статистически выделить субгруппы лиц с величинами коррелятивно связанных показателей комплекса выше, ниже либо равными среднему донорскому диапазону взрослых, т.е. с гипер-, паю- и нормотипами имиджей.

4.Нормотип имиджа лимфоцитов периферической крови присущ в основном донорам и реконвалесцентам (76 и 81% случаев). Гипертип имиджа - типичен доя развивающегося в детском возрасте организма (85-100%), распространён при клинических состояниях у больных с доброкачественными опухолями у взрослых (89%) или при процессе злокачественного роста, но в основном на ранних стадиях его развития (53-44%). Гипотип имиджа (21-43% случаев) статистически связан с поздними стадиями злокачественного процесса и индуцируется лучевой терапией (до 60%).

5.После цитостатической терапии при всех исследованных нозологиях основные показатели комплекса испытывают изменения, направленность которых одинаковым образом зависит от типа имиджа до воздействия.

6.Среди обследованных пострадавших только ликвидаторы спустя 5 лет после аварии имели преимущественно гипертип имиджа (55% случаев), тогда как у ликвидаторов через 10 лет после аварии, детей, постоянно проживающих на загрязненных территориях Ленинградской области и у детей, эвакуированных из контролируемых зон, преобладал гипотип имиджа лимфоцитов периферической крови (62%, 72% и 44% случаев соответственно).

7.0собеююстью гипотипа имиджа у ликвидаторов через 10 лет после аварии и у постоянно проживающих на загрязненных территориях детей является возрастание одного из показателей - А-РОК, которое в детском возрасте коррелирует с наличием гиперплазии щитовидной железы.

8.Показатель Е37-РОК в отдалённом периоде (0,5-10 лет) после краткосрочного облучения взрослых в условиях аварии, лечения в радиологической клинике или в результате постоянного проживания детей в условиях повышенного радиационного фона претерпевает адаптивное снижение при дозах воздей-

диапазоне 0,001-0,2 Гр (Зв), но сохраняется на контрольном уровне при дозах свыше 0,2 Гр (Зв).

9.Преходящий характер снижения Е37-ГОК в диапазоне пороговых доз воспроизводится у ликвидаторов при замене параметра физической дозы воздействия на биодозиметрический параметр процентного содержания хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1.Предлагается универсальная методика и оборудование для стандартизации радиобиологических экспериментов при субтотальным и локальным облучении экспериментальных животных. // Авторское свидетельство №1362336,1987,- "Экран из свинца для формирования полей облучения участков тела лабораторных животных" (соавт. Шутко А.Н., Масарский Л.И.).

2.Предлагается методика уточненного определения облученности человека в дозах порогового диапазона. // Заявка №971166659 на патент с приоритетом от 9.10.1997-"Способ биологической индикации радиационного воздействия", (соавт. Шутко А Н., Комар В.Е., Ильин Н.В., Корытова Л.И.).

3.Предаагается методика лечения хронического гломерулонефрита у человека "Способ лечения хронического гломерулонефрита, осложнённого нефро-тическим синдромом". //.Авторское свидетельство №1364340 с приор, от 17.06.86 (соавт. Рябов С.И., Ракитянская И. А, Шутко А.Н.)

4.Предлагается механизм возникновения системного синдрома при ЛГМ и его прогнозирование. // Авторское свидетельство № 1166364.- "Способ ранней диагностики системного синдрома у больных лимфогранулематозом",1985. (соавт. Шутко АН., Симбирцева Л.П., Шуст В.Ф., Лубоцкая Л.С., Екимова Л.П.).

5.Предлагаются показания для выбора схем применения СТОТ в различных суммарных дозах при раке яичников. // Патент №2078598 на изобретение "Способ лечения злокачественных опухолей яичников", 1997. (соавт. Юркова Л.Е., Винокуров В.Л., Шутко А.Н.).

6.Предлагается обоснование оптимальных схем последовательного локального и тотального облучения тела при раке легкого. //Мед. радиология>1982.-6,-с.25-32 (соавт. Шутко А.Н.).

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации:

1.КДНТ - позитивный лимфоцит как общее звено в обеспечении роста нормальной и опухолевой ткани. // Тез. доклада 1 Городской конф. молодых ученых и специалистов. Л., 1980, с.34-35 (соавт. Шутко А.Н., Лубоцкая Л.С., Екимова Л.П.).

2.Рост и метастазирование опухоли РЛ-67 и ее реакция на облучение.// Тез. доклада Городской конф. молодых ученых и специалистов.-Л. -1980,с.72-74 (соавт. Шутко А.Н., Ундалова Л.Г.).

3. Способ лечения радиорезистентной метастазирующей опухоли в эксперименте.// Тез. доклада Городской конф. молодых ученых и специалистов. Л., 1980, с.74-75 (соавт. Шутко А.Н.).

4.0 нуклеиновом обмене в экстраклеточном пространстве тимоцигов и его ранней радиационной модификации. // Тез. доклада Всес. симп. "Механизмы радиационного поражения и восстановления нуклеиновых кислот" Пущино, 1980, с.84-85 (соавт. Шутко А.Н., Лубоцкая Л.С., Екимова Л.П.).

5. Экстраклеточные нуклеиновые кислоты как фактор, модифицирующий лучевое повреждение нормальной лимфоидной ткани и ее опухолевого гомолога. // Тез. доклада II Всес. симп. "Радиобиологические основы лучевой терапии"-4.II, Л., 1980, с. 105-111 (соавт. Шутко А.Н., Лубоцкая Л.С., Екимова Л.П.).

6.Метод сочетанной лучевой терапии опухоли в эксперименте. // В кн." I Республиканский съезд онкологов и рентгенологов Казахстана", Алма-Ата, Казахск. НИИ онкологии и радиологии, 1981, с.472-473 (соавт. Шутко АН.).

7.Трофическая функция лимфоцитов, как возможный резерв улучшения результатов лучевой терапии опухолей. // Мед. радиология, 1981, б, с.39-44 (соавт. Шутко А.Н., Лубоцкая Л.С., Екимова Л.П.).

8.Прогностическое значение показателей периферической крови у больных лимфогранулематозом. // Тез. доклада Всес. симп. "Диагностика и лечение лимфом", Л., 1981, с. 230-231 (соавт. Филатова А.М.).

9.Концевая дезоксинуклеотидил трансферам лимфоцитов крови больных лимфогранулематозом в процессе его развития и лучевой терапии. // Тез. доклада VIII Всес. научн. конф. "Восстановительные и компенсаторные процессы при лучевых поражениях", Л., 1982, с.237-238 (соавт. Шутко А.Н., Симбирцева Л.П., Шуст В.Ф., Лубоцкая Л.С., Екимова Л.П.).

10. Экспериментальный анализ условий сочетания локального облучения опухоли с тотальным облучением тела. // Мед. радиология, 1982, 6, с.25-32 (соавт. Шутко А.Н.).

11.0 роли некоторых субпопуляций лимфоцитов в развитии гломе-рулонефригов. // Тер. архив, 1983,6, с.35-38 (соавт. Ракигянская И.А., Лубоцкая Л.С., Шутко А.Н.).

12..Роль концевой дезоксинуклеотиднл трансферазы в стимуляции синтеза ДНК лимфоцитов под влиянием ФГА. // Цитология, 1983, 25, 10, с. 1112-1115 (соавт.: Шупсо А.Н., Ракигянская И. А.).

13.Концевая дезоксинуклеотиднл трансфераза как компонент в реакции стимуляции лимфоцитов. // Тез. Всес. симп. "Медиаторы иммунного ответа в эксперименте и клинике", Горький, 1983, с. 12 (Соавт.: Шутко А.Н., Ракигянская И. А).

14. Лимфоциты крови как прогностический критерий при лучевой терапии рака пищевода. // Матер. XI Всес. съезда рентгенологов и радиологов, Таллин, Москва, Обнинск, 1984, с. 71-72.

15.К оценке непрямого противоопухолевого эффекта цотостатиче-ской терапии лимфогранулематоза. // Матер. IV Всес. конф. "Современные возможности клинической химиотерапии злокачественных новообразований", Вильнюс, 1984, с. 179-180 (соавт.: Шутко АН., Симбирцева Л П., Шуст В.Ф.).

16.Pathogenctifische Bedentung der TdT- posihiven Lymphozyten bei der Lymphogralomatoze.//Radiobiol. Radiother., 26,1985, n.3, 311-315 ( Sutko A.N., Simbirseva L.P., Syst V.F., Lubockaja L.S., Ekimova L.P.).

17.Костномозговое кроветворение в дистанционном действии радиации. // Тез. доклада Всес. конф. "Восстановительные и компенсаторные процессы при лучевых поражениях", Л., 1986, с. 162-163 (соавт. Шутко А Н.).

18.0бщие и местные компенсаторные реакции организма при экспериментальной опухоли и эффективность лучевой терапии. // Тез. доклада Всес. конф. "Восстановительные и компенсаторные процессы при лучевых поражениях - Л. - 1986- с. 233-234.

19.Индекс стимуляции лимфоцитов периферической крови и эффективность лучевой терапии.// Клиническая медицина, 1986, №2, с. 105-110 (Рябов С.И., Ракигянская И. А., Шутко АН.).

20.Возможиость лучевого лечения экспериментального метастази-рукяцего рака по мере его развития. // Тез. Всес. конф. "Актуальные вопросы экспериментальной и клинической рентгено-радиологии", 1988, с. 293-295.

21."Универсальный свинцовый экран". // Всес. конф. "Проблемы производства и применения изотопов и источников ядерного излучения в народном хозяйстве СССР, Л., 1989, с. 16 (соавт.: Шутао А.Н., Массарский Л.).

22.Изменения первичных лимфоидных органов при хроническом гломерулонефрите. // Клиническая медицина, 2, 1989, с. 58-60 (соавт.: Раки-тянская И.А., Шутко А.Н.).

23 .Ингибирующее действие тотального облучения тела в нетуморо-цидной дозе на рост экспериментальной аденокарциномы бронха мышей. // Мед радиология, 1990,10, с. 14 (соавт. Шутко АН.).

24.Лимфоциты с терминальной дезоксинуклеотидил трансферазой в про ли ф сратив но м процессе. // Сб. научн. трудов, Вопр. экспер. и клинич.

рентгено-радиЬлогии, Л., ЦНИРРИ, 1991, с.56-61 (соавт. Шугко АН., Теерен-хови Л.).

25. Субтотальное облучение тела при поздних стадиях рака яичников.// Стандартизация методов лучевой терапии. Тез. Всес. научн. конф., Л., ЦНИРРИ, 1991, с.81-82 (соавт. Винокуров В. Л., Юркова Л.Е., Екимова Л.П., Шутко А.Н., Перелетов О.Н.).

26.Лимфопоэз в процессе терапии ЛГМ различными видами цитоста-тических воздействий.// Стандартизация методов лучевой терапии. Тез. Всес. научн. конф., Л., ЦНИРРИ, 1991, с.9-10 (соавт. Шутко А.Н., Шуст В.Ф.).

27. Экспериментальное обоснование применения тотального, либо субтотального лучевого воздействия в качестве адьювантного компонента схем лучевого лечения опухолей. // III съезд онкологов БССР, Тез. доклада, Минск, НИИ онкологии и мед. радиологии, 1991, с.309-311 (соавт. Шутко АН.).

28. Концепция лимфообразовательной функции и ее значение для практики.//. Доклады Московского общества естествоиспытателей природы. Сб. трудов "Проблемы адаптации биологических систем к экспериментальным факторам"-М., МГУ, 1991, с.62-65 (соавт. Рябов С.И., Ракигянская И.А., Шутко А.Н.).

29. Субпопуляционные изменения лимфоцитов селезенки мышей после операции односторонней нефрэкгомии.// Доклады Московского общества естествоиспытателей природы. Сб. трудов "Проблемы адаптации биологических систем к экспериментальным факторам"-М., МГУ.-1991, с.72-76 (соавт. Шутко А Н., Бабаева АГ., Юдина Н.В., Рябов СИ, Ракитянская И.А.).

30. Цезий 137 - зависимая аномалия лимфопоэза у детей, постоянно проживающих на загрязненной в результате аварии на ЧАЭС территории Северо-Запада. // Современные достижения медицинской радиологии. Тез. доклада научн. конф. к 75-летию ЦНИРРИ, СПб, 1993, с.343-345 (соавт. Шутко А.Н., Екимова Л.П., Васильева М.Ю.).

31. Кинетика субпопуляций лимфоидных клеток в селезенке мышей в ранние сроки после односторонней нефрэкгомии. // Архив патологии, №1, 1993, с.63-65 (соавт. Бабаева А.Г., Шутко А.Н., Юдина Н.В., Рябов С.И. Ракитянская И. А.).

32. Late-displastas of peripheral - blood lymphocytes in various groups of persons suffered following the Chernobyl accident. // 2-nd Int. Conf. "Radiobiol. Consequences of nuclear accidents", Book of abstr., Moscow, 1994, p.251 (Sutko A.N., Ekimova L.P., Vasilyeva M.U., Fomina E.V.).

33. Реакции лимфопоэза человека на пролонгированное облуче-ние.//Мед. радиология, 39,6,1994,с.34-38 (соавт. Шутко А.Н., Корытова Л.И., Васильева М.Ю., Екимова Л.П., Тееренхови Л.)

34. Опыт классификации соматических ресурсов онкологических больных в радиологической клинике.//Тез. докл. науч. конф., посвящ. 100-

летаю открытия лучей Рентгена, ЦНИРРИ, СПб, 1995, с. 172-174. (соавт. Шутко АН., Екимова Л.П., Юркова Л.Е., Ильин Н.В., Мус В.Ф., Шумский И. А.).

35. Опыт индивидуализированного применения системной лучевой терапии в комбинированном лечении больных раком яичников III-IY стадий. Там же - с. 180-181 (соавт. Юркова ЛЕ., Винокуров В.Л., Шутко А.Н.)

36. Lymphocytes of slightly exposed in terms of patterns of expected diseases.// Int. Conf. on Radiation and Health Beer Sheva, Israel, November, 1996, p.19 ( Sutko A.N., Vasilyeva M.U., Ekimova L.P., Komar V.E.).

37. Поздние субпопуляционные отклонения в периферических лимфоцитах человека после облучения в малых дозах III съезд по Радиационным исследованиям. Тез. доклада Пущино, 1997, т.1, с.50-51 (соавт. Шутко АН., Комар В.Е., Васильева М.Ю., Екимова Л.П.

38. Системные реакции в лимфопоэзе как модификатор эффективности лечения больных раком почки. I межд. конгресс "Слабые и сверхслабые поля и излучения в Биологии и Медицине".-Тез. Докладов, СПб, 16-19.6.1997.-с. 128-129 (соавт. Шутко А.Н., Шумский И. А).